KR20200058301A - 등수국 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 조성물 - Google Patents

등수국 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 등수국(Hydrangea petiolaris) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 화장료 조성물 및 식품 조성물에 관한 것으로, 상기 등수국 잎 추출물 또는 이의 분획물은 항산화 효과 및 피부 세포 보호효과를 가지므로, 화장료 조성과 식품 조성물의 유효성분으로 이용이 가능하다.

Description

등수국 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 조성물{An anti-oxidative composition comprising an extract of Hydrangea petiolaris or a fraction thereof as an active ingredient}
본 발명은 등수국(Hydrangea petiolaris) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 화장료 조성물 및 식품 조성물에 관한 것이다.
최근 현대인들은 과도한 스트레스와 불규칙한 생활습관 뿐만 아니라 환경오염, 유해물질의 노출 등에 의해 각종 질병들에 시달리고 있다. 이러한 질병을 만들어내는 원인 중 하나로, 활성산소의 중요성이 대두되고 있다. 생체 내에서 에너지 생산을 위한 산화과정 중에 상당량의 활성산소들이 생산되며, 이들 활성산소는 생체 내 제거 기작에 의해 대부분 소멸되게 된다. 하지만 자외선이나 흡연, 음주, 스트레스 등에 노출될 경우 활성산소가 과량으로 혹은 만성적으로 발생된다. 활성산소는 불안정하고 반응성이 높아 여러 생체물질과 쉽게 반응하려는 성질을 가지고 있다. 이로 인해 적정량의 활성산소는 체내에 침입한 세균, 바이러스 등을 제거하는 생체 방어 기능을 가지고 있지만, 과량의 활성산소는 체내 세포분자들을 공격하게 되어 손상된 세포들로 인해 각종 질병들이 발생하게 된다.
이러한 활성산소를 제거하기 위해 BHA(butylated hydroxyanisole) 및 BHT (Butylated Hydroxytolune) 등의 많은 합성 항산화제가 개발되어 기능성식품 및 화장품 등에 사용되어 왔으나, 안전성 문제로 인하여 식품 및 화장품에는 제한적으로 사용되어 왔다(Korean J Food Preserv, 2012, 19(3), 393-399). 이로 인해 보다 안전하면서 효과가 뛰어난 천연 항산화제를 찾으려는데 많은 관심이 쏠리고 있는 실정이다.
대한민국 특허공개공보 제10-2014-0082555호
이러한 배경 하에서, 본 발명자들은 항산화 효과를 나타내면서 부작용이 적은 천연물을 찾고자 예의 연구 노력한 결과, 등수국 잎의 추출물과 분획물이 우수한 DPPH(1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl) 자유라디칼(free radical) 소거 효과, ABTS(2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid)) 자유라디칼 소거 효과, 산화적 스트레스로부터 피부세포 보호 효과 및 항산화 효과를 가지는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 목적은 등수국(Hydrangea petiolaris) 잎 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 등수국(Hydrangea petiolaris) 잎 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 하나의 양태로 본 발명은 등수국(Hydrangea petiolaris) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 용어 “등수국(Hydrangea petiolaris)”는 범의귀과의 덩굴식물으로, 가지에서 땅위로 나와 있는 뿌리를 내려서 암벽과 나무줄기를 타고 20m 정도 자란다. 주로 울릉도·제주도·일본의 해안, 산지에서 자라며, 제주도에서는 해발 1,700 m 이하의 숲속이나 계곡의 바위 또는 수간에 붙어 자란다. 꽃은 6~7월에 피고, 가지 끝에 달리는 지름 14-25 cm의 산방상 취산꽃 차례를 이루며, 가장자리의 중성화에 꽃잎 같은 3-4개의 꽃받침잎이 있으며 가장자리에 톱니가 있고 지름 3㎝정도이다. 안쪽의 양성화는 꽃받침잎과 꽃잎이 각각 5개, 수술은 15-20개, 암술대는 2-3개이며 자방은 2-3실이다. 열매는 삭과로서 구형이나 뒷부분이 편평하게 잘린 모양이고 절두이며 9-10월에 갈색으로 익는다. 잎은 마주나고 넓은 달걀 모양 또는 원형이며 끝이 뾰족하고 밑은 둥글거나 심장저로서 가장자리에 톱니가 있다. 잎자루의 길이는 3~9cm이다. 종자와 삽목번식을 통하여 증식이 이루어지며 종자를 이끼 위에 파종·육묘하면 다량의 묘목을 얻을 수 있다.
본 발명에서 상기 화장료 조성물은 등수국을 건조 및 파쇄하여 분말화한 것을 추출에 적용할 수 있고, 등수국의 잎, 줄기, 뿌리, 꽃 또는 이들 모두를 포함할 수 있으며, 구체적으로는 잎을 사용할 수 있다.
본 발명에서 용어, "추출물"은 추출 처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다.
본 발명에서 추출물의 건조는 채취한 식물로부터 유용한 성분들이 파괴되지 않는 범위에서 공지의 방법으로 진행될 수 있고, 예를 들어 음지에서 자연건조의 방법으로 진행될 수 있다. 또한, 파쇄 또는 분쇄는 이후 추출과정에서 식물의 유용한 성분들이 충분하게 추출될 수 있을 정도로 파쇄 또는 분쇄하여 분말화할 수 있다. 상기 건조와 파쇄 또는 분쇄 공정은 필요에 따라서 순서를 뒤바꿔서 진행하거나 반복하여 실시할 수 있다.
본 발명의 추출에 있어서, 상기 추출하는 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다.
본 발명에서 등수국(Hydrangea petiolaris)은 추출물은 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 추출하여 수득될 수 있다. 또한, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올 일 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "분획물"은 여러 다양한 구성 성분들을 포함하는 혼합물로부터 특정 성분 또는 특정 성분 그룹을 분리하기 위하여 분획을 수행하여 얻어진 결과물을 의미한다.
본 발명에서 상기 분획물을 얻는 분획 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 수행될 수 있다. 상기 분획 방법의 비제한적인 예로는, 등수국(Hydrangea petiolaris) 추출물에 소정의 용매를 처리하여 상기 추출물로부터 분획물을 얻는 방법을 들 수 있다.
본 발명에서 상기 분획물을 얻는 데에 사용되는 용매의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 상기 분획 용매의 비제한적인 예로는 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올, 헥산(Hexane), 에틸아세테이트(Ethyl acetate), 클로로포름(Chloroform), 디클로로메탄(Dichloromethane) 또는 이들의 혼합용매를 들 수 있다.
본 발명의 일 실시예에서는 등수국 잎을 건조 및 파쇄한 후 70%(w/v) 에탄올로 3회 반복 추출하여 등수국 잎의 에탄올 추출물을 얻었으며, 이를 n-헥산(n-hexane, Hex), 에틸아세테이트(ethyl acetate, EtOAc), n-부탄올(n-butanol, BuOH), 물(water, H2O) 순서로 순차적으로 분획하여 총 4개의 용매 분획층인 노르말 헥산, 에틸아세테이트, 노르말 부탄올, 잔여 물층의 분획물을 제조하였다.
본 발명에서, 상기 분획물은 n-헥산 분획물, 에틸아세테이트 분획물, n-부탄올 분획물 또는 물 분획물이다.
또한, 상기 등수국 잎의 에탄올 추출물과 상기 추출물의 n-헥산(n-hexane, Hex), 에틸아세테이트(ethyl acetate, EtOAc), n-부탄올(n-butanol, BuOH), 물(water, H2O) 분획물이 DPPH 자유 라디칼(free radical)을 소거와 ABTS+ 자유라디칼(free radical)을 소거함으로써 항산화 효과가 있음을 확인하였다. 특히, 등수국 에탄올 추출물의 에틸아세테이트(ethyl acetate, EtOAc)과 n-부탄올(n-butanol, BuOH) 분획물이 DPPH 자유 라디칼(free radical)을 소거와 ABTS+ 자유라디칼(free radical) 소거 활성이 우수한 것을 확인하였다. 또한, 인간 HaCaT 세포에서 과산화수소로 유도된 산화적 스트레스에 대한 피부 세포 손상을 억제하여 피부 세포보호 효과가 있음을 확인하였다.
본 발명에서, 상기 등수국 추출물의 에틸아세테이트 분획물은 피부 세포 또는 피부 보호 효과를 가진다.
본 발명은 이러한 실험 결과에 기초하여 제공되는 것으로, 본 발명의 항산화용 화장료 조성물은 등수국 추출물, 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함함을 특징으로 한다. 상기 등수국 잎 추출물과 이의 분획물은 기능성 화장품 원료로 응용이 가능하며, 천연식물을 사용함으로써 합성원료들로 야기되는 부작용, 안정성 면을 해결할 수 있다.
또한 본 발명에서 "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.
또한, 본 발명의 일 실시예에서는 항산화 효과가 가장 좋았던 에틸아세테이트 분획물에서 MPLC 및 오픈컬럼을 통해 분리 및 구조동정을 진행한 결과, 상기 에틸아세테이트 분획물에서 6가지 종류의 화합물을 분리하였으며, compound 1은 에피카테킨(epi-catechin)으로, compound 2는 히페린(hyperin)으로, compound 3은 쿼시트린(quercitrin)으로, compound 4는 아프제린(afzelin)으로, compound 5는 1-O-파라-쿠마로일-베타-D-글루코피라노사이드(1-O-ρ-coumaroyl-β-D-glucopyranoside)로, compound 6은 아시아틱산(asiatic acid)으로, compoun 7은 코로솔릭산(corosolic acid)으로 동정되었다.
따라서, 상기 등수국 추출물 또는 이의 분획물은 에피카테킨(epi-catechin), 히페린(hyperin), 쿼시트린(quercitrin), 아프제린(afzelin), 1-O-파라-쿠마로일-베타-D-글루코피라노사이드(1-O-ρ-coumaroyl-β-D-glucopyranoside), 아시아틱산(asiatic acid) 및 코로솔릭산(corosolic acid)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 화합물을 포함할 수 있다.
상기 화합물들은 DPPH 자유 라디칼(free radical)을 소거와 ABTS+ 자유라디칼(free radical)을 소거함으로써 항산화 효과가 있음을 확인하였으며, 인간 HaCaT 세포에서 과산화수소로 유도된 산화적 스트레스에 대한 피부 세포 손상을 억제하여 피부 세포보호 효과가 있음을 확인하였다. 따라서, 상기 화합물들은 항산화 효과 또는 피부세포보호 효과를 가진다.
이상과 같이, 본 발명의 등수국 잎 추출물, 이의 분획물 및 이로부터 분리된 화합물들은 항산화용 화장료 조성물에 매우 유용하게 이용할 수 있다.
본 발명에서, 용어, "항산화"는 산화를 억제하는 작용을 의미하는 것으로, 인체는 산화촉진물질(prooxidant)과 산화억제물질(antioxidant)이 균형을 이루고 있으나 여러 가지 요인들에 의하여 이런 균형상태가 불균형을 이루게 되고 산화촉진 쪽으로 기울게 되면, 산화적 스트레스(oxidative stress)가 유발되어 잠재적인 세포손상 및 병리적 질환을 일으키게 된다. 이러한 산화적 스트레스의 직접적 원인이 되는 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS)은 불안정하고 반응성이 높아 여러 생체물질과 쉽게 반응하고, 체내 고분자들을 공격하여 세포와 조직에 비가역적인 손상을 일으키게 된다. NO, HNO2, ONOO-와 같은 활성 질소종(reactive nitrogen species, RNS), ROS와 같은 활성산소는 체내에서 세포를 산화시켜 파괴시키며, 그에 따라 각종 질환에 노출되게 된다.
상기 항산화는 세포 내 대사 또는 자외선의 영향으로 인한 산화적 스트레스에 따라 반응성이 높은 자유 라디칼(free radical) 또는 활성 산소종 (Reactive oxygen species, ROS)에 의한 세포의 산화를 억제하는 기능을 의미하며, 자유 라디칼 또는 활성 산소종을 제거하여 이로 인한 세포의 손상이 감소되는 것을 포함한다.
본 발명의 항산화용 화장료 조성물은 유효성분인 등수국 추출물 또는 이의 분획물 이외에, 항산화 효과를 상승 또는 보강시킬 수 있도록 항산화 효과가 있다고 알려진 화합물이나 천연 추출물을 포함할 수 있다.
한편, 본 발명의 항산화용 화장료 조성물에 있어서, 그 유효성분은 항산화 활성을 나타낼 수 있는 한 용도, 제형, 배합 목적 등에 따라 임의의 양(유효량)으로 포함할 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 99.99 중량 % 범위 내에서 포함될 수 있다. 여기서 "유효량"이란 항산화 효과를 유도할 수 있는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.
본 발명의 항산화 화장료 조성물은 다양한 형태로 제조될 수 있는데, 예컨대, 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 구체적으로, 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 마사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 립스틱, 메이크업 베이스, 파운데이션, 프레스파우더 및 루스파우더로 이루어진 군으로부터 선택되는 제형을 가질 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 항산화용 화장료 조성물은 그 유효성분 이외에 화장료 제제에 있어서 수용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 여기서 "화장료 제제에 있어서 수용 가능한 담체"란 화장품 제제에 포함될 수 있는 이미 공지되어 사용되고 있는 화합물 또는 조성물이거나 앞으로 개발될 화합물 또는 조성물로서 피부와의 접촉시 인체가 적응 가능한 이상의 독성, 불안정성 또는 자극성이 없는 것을 말한다. 상기 담체는 본 발명의 항산화용 화장료 조성물에 그것의 전체 중량에 대하여 약 1 중량 % 내지 약 99.99 중량 %, 바람직하게는 조성물의 중량의 약 5 중량% 내지 약 99 중량 %로 포함될 수 있다. 그러나 상기 비율은 본 발명의 화장료의 제조되는 제형에 따라 또한 그것의 구체적인 적용 부위(얼굴이나 손)나 그것의 바람직한 적용량 등에 따라 달라지는 것이기 때문에, 상기 비율은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다.
한편, 상기 담체로서는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료 등이 예시될 수 있다. 상기 담체로서 사용될 수 있는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료로 사용될 수 있는 화합물/조성물 등은 이미 당업계에 공지되어 있기 때문에 당업자라면 적절한 해당 물질/조성물을 선택하여 사용할 수 있다.
다른 하나의 양태로 본 발명은 등수국(Hydrangea petiolaris) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에서, 등수국(Hydrangea petiolaris) 추출물 또는 이의 분획물, 항산화, 피부세포보호 효과, 상기 분획물에서 분리된 화합물에 대한 설명은 전술한 바와 같다.
본 발명의 식품 조성물은 환제, 분말, 과립, 침제, 정제, 캡슐 또는 액제 등의 형태를 포함할 수 있으며, 본 발명의 등수국(Hydrangea petiolaris) 추출물 또는 이의 분획물을 첨가할 수 있는 식품의 종류에는 별다른 제한이 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있다.
상기 식품 조성물에는 등수국(Hydrangea petiolaris) 추출물 또는 이의 분획물 이외에도 다른 성분을 추가할 수 있으며, 그 종류는 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, 통상의 식품과 같이 여러 가지 생약 추출물, 식품학적으로 허용되는 식품보조첨가제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있으며, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에서 용어, "식품보조첨가제"란 식품에 보조적으로 첨가될 수 있는 구성요소를 의미하며, 각 제형의 식품을 제조하는데 첨가되는 것으로서 당업자가 적절히 선택하여 사용할 수 있다. 식품보조첨가제의 예로는 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등이 포함되지만, 상기 예들에 의해 본 발명의 식품보조첨가제의 종류가 제한되는 것은 아니다.
상기 천연 탄수화물의 예는 포도당, 과당 등의 단당류; 말토스, 수크로스 등의 이당류; 및 덱스트린, 시클로덱스트린 등의 다당류와, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이 있으며, 상기한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴 등), 스테비아 추출물(레바우디오시드 Ａ, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에는 건강기능식품이 포함될 수 있다. 본 발명에서 사용된 용어 "건강기능식품"이란 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 말한다. 여기서 기능성이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어날 수 있다.
유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품의 제조 시에 본 발명의 유효성분은 원료 조성물 중 1 내지 50 중량%, 바람직하게는 5 내지 10 중량%의 양으로 첨가될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하로도 사용될 수 있다.
상기 건강기능식품은 이너뷰티 푸드(inner beauty) 형태로 섭취함으로써 더욱 우수한 항산화와 피부세포보호 효과를 갖는 장점을 가진다. 상기 이너뷰티(inner beauty)는‘먹는 화장품 또는 뷰티푸드’로 일컬어지는 이너뷰티 푸드로, 피부에 좋은 여러 가지 성분을 몸속으로 흡수시켜 피부 체질을 건강하게 바꾸는 식품을 지칭하며, 피부 타입에 맞는 화장품을 고르듯 피부 컨디션과 라이프스타일을 고려해 개개인에게 맞는 이너뷰티 푸드를 선택하여 섭취할 수 있다. 보다 구체적으로는 상기 화장료 조성물을 포함하는 화장품과 상기 등수국(Hydrangea petiolaris) 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 이너뷰티 푸드를 혼용할 경우, 화장품만 사용하는 것에 비해 항산화 및 피부보호 효과가 월등히 높아져 더욱 효과적이다.
본 발명에 의해, 등수국 잎 추출물 또는 이의 분획물을 함유하는 항산화 효과 및 피부 세포 보호효과를 갖는 화장료 조성물의 제조가 가능하다.
도 1은 본 발명의 등수국 잎의 에탄올 추출물 및 이의 용매별 분획물을 제조하는 방법을 개략적으로 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명의 등수국 잎의 에탄올 추출물 및 이의 용매별 분획물의 농도의존적 DPPH 자유라디칼 소거 효과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 등수국 잎의 에탄올 추출물 및 이의 용매별 분획물의 농도의존적 ABTS+ 자유라디칼 소거 효과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 등수국 잎 에틸아세테이트 분획물의 인간 HaCaT 세포에 대한 세포생존율을 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 등수국 잎 에틸아세테이트 분획물의 인간 HaCaT 세포에서 과산화수소로부터 유도된 산화적 스트레스에 대한 피부 세포 보호효과를 나타낸 그래프이다.
도 6은 본 발명의 등수국 잎 에틸아세테이트 분획물로부터 화합물들을 분리한 방법을 개략적으로 나타낸 분리도이다.
도 7은 본 발명의 등수국 잎 에틸아세테이트 분획물로부터 분리한 화합물의 DPPH 자유라디칼 소거 효과를 나타낸 그래프이다.
도 8은 본 발명의 등수국 잎 에틸아세테이트 분획물로부터 분리한 화합물의 ABTS+ 자유라디칼 소거 효과를 나타낸 그래프이다.
도 9는 본 발명의 등수국 잎 에틸아세테이트 분획물로부터 분리한 화합물의 인간 HaCaT 세포에 대한 세포생존율을 나타낸 그래프이다.
도 10은 본 발명의 등수국 잎 에틸아세테이트 분획물로부터 분리한 화합물의 인간 HaCaT 세포에서 과산화수소로부터 유도된 산화적 스트레스에 대한 세포보호효과를 나타낸 그래프이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명의 구성 및 효과를 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
<실험예 1> 등수국 잎 추출물 및 분획물 제조
본 발명에 사용된 시료인 등수국(Hydrangea petiolaris) 잎은 2018년 1월에 제주생물자원(주)로부터 구입하여 사용하였다. 건조 및 분쇄된 등수국 잎 120 g을 분쇄한 후 70%(v/v) 에탄올(EtOH) 20 L에 넣고 실온에서 24 시간 동안 교반하였다. 침출시킨 시료를 감압 여과 장치를 이용하여 여액만 취하였으며, 이와 같은 방법으로 분리한 잔사에 대하여 동일한 조건으로 2회 더 반복 실시하였다. 이후 여과하여 얻어진 여액은 40℃ 이하의 수욕 상에서 회전 농축기(rotary evaporator)로 농축하여 70% 에탄올 추출물 38.5 g을 수득하였다.
상기 수득한 70% 에탄올 추출물 30.0g을 증류수 1 L에 현탁시키고, 분별 깔때기를 이용해 극성순서에 따라 순차적으로 분획하여 n-헥산(n-hexane, n-Hex.), 에틸아세테이트(ethyl acetate, EtOAc), n-부탄올(n-butanol, n-BuOH) 및 물(water, H2O) 순서로 총 4개의 용매 분획 층을 얻었다(도 1). 상기 생성된 분획물들은 각각 감압 농축하여 분말 형태의 등수국 잎 분획물로 준비하였다.
<실험예 2> 등수국 잎 추출물 및 분획물의 DPPH 라디칼 소거 활성 실험
2-1. 실험방법
상기 실험예 1에서 수득한 등수국 잎 70% 에탄올(EtOH) 추출물 및 4가지 용매 분획물의 자유 라디칼(free radical) 소거활성을 측정하기 위하여, Blois 방법 (Blois, M.S., Nature, 1958, 181;1199-1200)을 응용한 DPPH 라디칼 소거 활성 실험을 수행하였다. 이때, DPPH는 0.2 mM 농도가 되도록 에탄올에 용해시켜 사용하였다.
구체적으로, 등수국 잎 에탄올 추출물 및 이의 n-헥산(n-Hex.) 분획물, 에틸아세테이트(EtOAc) 분획물, n-부탄올(n-BuOH) 분획물, 물(H2O) 분획물 시료를 각각 3.125 ㎍/mL, 6.25 ㎍/mL, 12.5 ㎍/mL, 25 ㎍/mL, 50 ㎍/mL 및 100 ㎍/mL의 농도별로 DMSO:EtOH(1:1) 용매를 이용하여 희석하여 준비하였다.
이후, 96웰(well) 플레이트(plate)에 0.2 mM DPPH 용액 180 ㎕와 상기 희석하여 준비한 각각의 시료용액 20 ㎕를 혼합하여 상온에서 20분간 반응시킨 후, 분광광도계(spectrophotometer)를 이용하여 515 nm에서 흡광도를 측정하였다.
소거율(%)은 하기 수학식 1에 의해 계산하였으며, 각 시료가 DPPH를 50% 저해할 때의 농도(SC50; Scavenging concentration of 50%)를 구하였다. 각 시료는 3회 반복실험을 실시하여 평균값을 구하였다. 이때 활성을 비교하기 위한 항산화제로는 vitamin C를 사용하였다.
<수학식 1>
자유라디칼 소거능(%) =
Figure pat00001
A : 시료를 첨가한 반응용액의 515 nm에서 흡광도
B : 시료만의 515 nm에서 흡광도
C : 시료를 첨가하지 않은 반응용액의 515 nm에서 흡광도
2-2. 실험결과
실험결과를, 아래의 표 1과 도 2에 나타내었다.
시료 SC50 (㎍/mL)
EtOH 25.0
n-Hex. 66.2
EtOAc 16.8
n-BuOH 18.0
H2O 87.8
Vitamin C 6.9
표 1과 도 2에 나타나 있듯이, DPPH 자유 라디칼 소거 활성은 상기 추출물 및 분획물 모두에서 나타났으며, 특히 에틸아세테이트(EtOAc) 분획물과 부탄올(n-BuOH) 분획물에서 DPPH SC50값이 각각 16.8 ㎍/mL과 18.0 ㎍/mL로 자유 라디칼 소거 활성이 우수함을 확인하였다(표 1 및 도 2).
<실험예 3> 등수국 잎 추출물의 ABTS + 라디칼 소거 활성 실험
3-1. 실험방법
상기 실험예 1에서 수득한 등수국 잎 70% 에탄올(EtOH) 추출물 및 4가지 용매 분획물의 자유 라디칼(free radical) 소거활성을 측정하기 위하여, ABTS+ radical cation decolourisation assay 방법 (Re R, Pellegrain N, Proteggente A Pannala A, Yang M, Rice-Evans C., Free Radical Biol. Med., 1999, 26;1231-1237)을 응용한 ABTS+ radical 소거활성 시험을 수행하였다.
이때, ABTS는 7.0 mM 농도가 되도록 증류수로 용해시키고 potassium persulfate는 2.45 mM 농도가 되도록 증류수로 용해시켜 최종농도로 혼합하여 실온인 암소에서 16시간 동안 방치하여 ABTS+ radical을 형성시킨 후 사용하였다.
구체적으로, 등수국 잎 에탄올 추출물 및 이의 n-헥산(n-Hex.) 분획물, 에틸아세테이트(EtOAc) 분획물, n-부탄올(n-BuOH) 분획물, 물(H2O) 분획물 시료를 각각 3.125 ㎍/mL, 6.25 ㎍/mL, 12.5 ㎍/mL, 25 ㎍/mL, 50 ㎍/mL 및 100 ㎍/mL의 농도별로 DMSO:EtOH(1:1) 용매로 희석하여 준비하였다.
이후, 700 nm에서 ABTS+ 용액의 흡광도 값이 0.78±0.03이 되게 EtOH로 희석하여 준비하였다.
96웰(well) 플레이트(plate)에 상기 희석하여 준비한 ABTS+ 용액 180 ㎕와 상기 희석하여 준비한 각각의 시료용액 20 ㎕를 혼합하여 상온에서 20분간 반응시킨 후, 분광광도계(spectrophotometer)를 이용하여 700 nm에서 흡광도를 측정하였다.
소거율(%)은 하기 수학식 2에 의해 계산하였으며, 각 시료가 ABTS+ radical을 50% 저해할 때의 농도(SC50; Scavenging concentration of 50%)를 구하였다. 각 시료는 3회 반복실험을 실시하여 평균값을 구하였다.
이때 활성을 비교하기 위한 항산화제로는 BHT와 vitamin C를 사용하였다.
<수학식 2>
자유라디칼 소거능(%) =
Figure pat00002
A : 시료를 첨가한 반응용액의 700 nm에서 흡광도
B : 시료만의 700 nm에서 흡광도
C : 시료를 첨가하지 않은 반응용액의 700 nm에서 흡광도
D : 시료와 ABTS를 모두 첨가하지 않은 반응용액의 흡광도
3-2. 실험결과
실험결과를 아래의 표 2와 도 3에 나타내었다.
시료 SC50 (㎍/mL)
EtOH 11.4
n-Hex. 33.6
EtOAc 7.1
n-BuOH 8.8
H2O 57.7
BHT 7.2
Vitamin C 7.2
표 2와 도 3에 나타나 있듯이, ABTS+ 자유 라디칼 소거 활성은 상기 추출물 및 분획물 모두에서 나타났으며, 특히 에틸아세테이트(EtOAc) 분획물과 부탄올(n-BuOH) 분획물에서 ABTS+ radical의 SC50값이 각각 7.10 ㎍/mL과 8.8 ㎍/mL로 양성 대조군인 비타민 C 그리고 BHT(Butylated hydroxytoluene)와 비슷한 자유 라디칼 소거능을 보였다(표 2 및 도 3).
<실험예 4> 등수국 잎의 에틸아세테이트 분획물의 피부 세포 독성 평가
4-1. 실험방법
실험예 1에서 제조한 등수국 잎 에틸아세테이트 분획물의 세포 독성을 측정하기 위하여 인간 HaCaT keratinocyte를 이용하여 세포 생존율을 측정하였다. 생존율 측정은 MTT 분석법을 이용하여 측정하였다. 인간 HaCaT 세포는 1% Penicillin-streptomycin과 10% fetal bovine serum (FBS)이 함유된 DMEM 배지를 사용하여 37℃, 5% CO2 항온기에서 배양하였다.
구체적으로, 등수국 잎의 에틸아세테이트(EtOAc) 분획물을 2.5 ㎍/mL, 5 ㎍/mL, 10 ㎍/mL, 20 ㎍/mL의 농도로 무혈청 배지를 이용하여 희석하여 준비하였다. 상기 배양된 인간 HaCaT 세포를 96 well plate에 3×104cells/well로 분주하여 혈청배지와 함께 24시간동안 배양하였다. 그 후 무혈청 배지로 교환한 뒤 준비된 시료를 처리하여 24시간 동안 배양한 뒤에 MTT 시약을 이용하여 세포의 생존율을 평가하였다(도 4). 이때, 대조군으로는 무혈청 배지를 사용하였으며 (-)로 나타내었고, (-)와 비교하여 시료의 농도별 세포생존율을 측정하였다.
4-2. 실험결과
실험결과를 아래의 표 3과 도 4에 나타내었다.
농도(㎍/mL) 세포 생존율(%)
실시예 (-) 100.0
2.5 90.9
5 88.2
10 84.3
표 3과 도 4에 나타나 있듯이, 등수국 잎 에틸아세테이트 분획물은 10 ㎍/mL까지 세포독성이 나타나지 않음을 확인하였다.
<실험예 5> 등수국 잎의 에틸아세테이트 분획물의 피부 세포 보호 효과
5-1. 실험방법
상기 배양된 인간 HaCaT 세포를 96 well plate에 3×104cells/well로 분주하여 24시간동안 배양하였다. 배양된 인간 HaCaT 세포에 DPBS로 희석한 과산화수소(H2O2) 4mM을 처리하여 30분 동안 배양하였다. 이후 과산화수소(H2O2)를 제거하고 DPBS로 세척한 뒤 등수국 잎 에틸아세테이트 분획물을 무혈청 배지를 이용하여 희석한 2.5 ㎍/mL, 5 ㎍/mL, 10 ㎍/mL의 농도로 처리하였다. 이를 24시간 동안 배양한 뒤 MTT 시약을 처리하고 흡광도를 측정하여 세포생존율을 계산하였다. 세포생존율 계산에서는 과산화수소를 처리하지 않은 경우를 (-), 과산화수소를 처리하고 시료를 처리하지 않은 경우를 (+)로 하였다. 시료를 처리한 것(실시예)을 실험군으로 하고 (-)와 비교하여 시료의 농도별 세포생존율을 측정하였다.
5-2. 실험결과
실험결과를 아래의 표 4와 도 5에 나타내었다.
처리농도(㎍/mL) 세포 생존율(%)
실시예 (-) 100.0
(+) 65.0
2.5 67.8
5 70.8
10 84.9
상기 표 4에 나타나 있듯이, 등수국 잎 에틸아세테이트 분획물의 과산화수소로 유도된 산화적 스트레스에 대한 인간 HaCaT 세포의 보호효과를 측정한 결과, 시료의 처리 농도가 높아질수록 농도의존적으로 세포생존율이 증가하는 것을 확인하였다. 이는 사람의 정상 피부 각질 세포에서도 산화적 스트레스에 의한 피부 세포손상을 억제하여 피부 세포 보호 효과를 가지는 것을 의미한다. 따라서, 등수국 잎 에틸아세테이트 분획물이 피부 손상을 억제 또는 개선하므로, 피부 세포 보호용 화장품 개발에 이용할 수 있다. 또한, 산화적 스트레스에 대한 항산화 효과가 있는 것으로 해석되며, 이를 이용한 기능성 화장품 소재개발에 유용하리라 사료된다.
<실험예 6> 등수국 잎 에틸아세테이트(EtOAc) 분획물로부터 화합물 분리 및 구조 동정
상기 실험예 1에서 수득한 등수국 잎 용매 분획물로부터 화합물을 분리하고 구조를 동정하기 위해, 등수국 잎의 에틸아세테이트(EtOAc) 분획물을 선택하고 이로부터 생리활성 화합물(compound)을 분리하고 구조를 동정하였다.
상기 실험예 1에서 수득한 에틸아세테이트(EtOAc) 분획물 5.0 g을 극성에 따라 순차적으로 세분화하기 위하여 MPLC(medium pressure liquid chromatography)를 수행하였다. 에틸아세테이트 분획물 5.0 g을 메탄올(MeOH) 7mL, DMSO 3mL에 녹이고 0.45 ㎛ PVDF filter를 이용해 여과한 후 주입하였으며 컬럼(column)은 역상 실리카겔(C18)을 사용하였다. 기울기 용리법을 이용해 메탄올(MeOH):물(H2O)(10→50%, 100분), 메탄올(MeOH):물(H2O)(50→100%, 20분), 메탄올(MeOH)(100%, 10분)의 용매 조건들로 극성 비율을 순차적으로 낮추면서 각각 40 mL씩 용출시켜 총 48개의 분획물(fraction, Fr.)을 얻었다. 상기 MPLC 분획물 중 Fr.19로부터 compound 1(64.5 mg)을 얻었으며, Fr.27로부터 compound 2(117.5 mg), Fr.36로부터 compound 3 (104.1 mg), Fr.41로부터 compound 4(100.7 mg), Fr.48로부터 compound 7을 각각 얻었다.
또한, Fr.12-Fr.15(329.6 mg)을 클로로포름(CHCl3):메탄올(MeOH) = 2.5:1의 용매 조건으로 세파덱스 LH-20 컬럼 크로마토그래피(Sephadex LH-20 column chromatograpy)를 수행하여 compound 5(5.1 mg)을 얻었고, Fr.46-Fr.47(141.8 mg)을 클로로포름(CHCl3):메탄올(MeOH) = 15:1의 용매 조건으로 세파덱스 LH-20 컬럼 크로마토그래피(Sephadex LH-20 column chromatograpy)를 수행하여 compound 6(5 mg)을 얻었다.
상기와 같이 에틸아세테이트(EtOAc) 분획물로부터 총 7개의 활성 화합물을 분리하여 1H-핵자기공명 스펙트럼(1H NMR spectrum) 및 13C-핵자기공명 스펙트럼(13C-NMR spectrum)을 측정하여 구조를 동정한 결과, compound 1은 에피카테킨(epi-catechin)으로, compound 2는 히페린(hyperin)으로, compound 3은 쿼시트린(quercitrin)으로, compound 4는 아프제린(afzelin)으로, compound 5는 1-O-파라-쿠마로일-베타-D-글루코피라노사이드(1-O-ρ-coumaroyl-β-D-glucopyranoside)로, compound 6은 아시아틱산(asiatic acid)으로, compoun 7은 코로솔릭산(corosolic acid)으로 동정되었다(표 5).
Compound 1 Compound 2 Compound 3
epi-catechin hyperin quercitrin

Figure pat00003
Figure pat00004
Figure pat00005
Compound 4 Compound 5 Compound 6
afzelin 1-O-ρ-coumaroyl-β-D-glucopyranoside asiatic acid

Figure pat00006
Figure pat00007
Figure pat00008
Compound 7
corosolic acid

Figure pat00009
<실험예 7> 등수국 잎 에틸아세테이트(EtOAc) 분획물로부터 분리한 화합물의 DPPH 라디칼 소거 활성 실험
7-1. 실험방법
상기 실험예 6에서 수득한 화합물들에 대하여 자유 라디칼(free radical) 소거활성을 측정하기 위해 Blois 방법 (Blois, M.S., Nature, 1958, 181;1199-1200)을 응용한 DPPH 라디칼 소거 활성 실험을 수행하였다. 이때, DPPH는 0.2 mM 농도가 되도록 에탄올에 용해시켜 사용하였다.
구체적으로, 등수국 잎에서 분리한 화합물인 Compound 1(epi-catehin), Compound 2(hyperin), Compound 3(quercitrin), Compound 4(afzelin), Compound 5(1-O-ρ-coumaroyl-β-D-glucopyranoside), Compound 6(asiatic acid), Compound 7(corosolic acid)을 DMSO:EtOH(1:1) 용매를 이용하여 3.125 μM, 6.25 μM, 12.5 μM, 25 μM, 50 μM, 100 μM 농도로 희석하여 준비하였다.
이후, 96웰(well) 플레이트(plate)에 0.2 mM DPPH 용액 180 ㎕와 상기 희석하여 준비한 각각의 시료용액 20 ㎕를 혼합하여 상온에서 20분간 반응시킨 후, 분광광도계(spectrophotometer)를 이용하여 515 nm에서 흡광도를 측정하였다. 소거율(%)은 상기 수학식 1에 의해 계산하였으며, 각 시료가 DPPH를 50% 저해할 때의 농도(SC50; Scavenging concentration of 50%)를 구하였다. 각 시료는 3회 반복실험을 실시하여 평균값을 구하였다. 이때 활성을 비교하기 위한 항산화제로는 BHT와 vitamin C를 사용하였다.
7-2. 실험결과
상기 실험결과를 아래의 표 6과 도 7에 나타내었다.
시료 SC 50 (μM)
Compound 1 45.9
Compound 2 35.0
Compound 3 51.6
Compound 4 54.9
Compound 5 >100
Compound 6 >100
Compound 7 >100
BHT 62.1
Vitamin C 31.2
표 6과 도 7에 나타나 있듯이, DPPH 자유 라디칼 소거 활성은 Compound 1 - 4에서 나타났으며, 모두 대조군인 BHT보다 우수한 활성을 나타냈다. 특히, Compound 2에서 DPPH radical의 SC50값이 35.0 μM로 대조군인 Vitamin C와 활성이 비슷함을 확인하였다(표 6 및 도 7).
<실험예 8> 등수국 잎 에틸아세테이트(EtOAc) 분획물로부터 분리한 화합물의 ABTS + 라디칼 소거 활성 실험
8-1. 실험방법
상기 실험예 6에서 수득한 화합물들에 대하여 자유 라디칼(free radical) 소거활성을 측정하기 위해, ABTS+ radical cation decolourisation assay 방법 (Re R, Pellegrain N, Proteggente A Pannala A, Yang M, Rice-Evans C., Free Radical Biol. Med., 1999, 26;1231-1237)을 응용한 ABTS+ radical 소거활성 시험을 수행하였다. 이때, ABTS는 7.0 mM 농도가 되도록 증류수로 용해시키고 potassium persulfate는 2.45 mM 농도가 되도록 증류수로 용해시켜 최종농도로 혼합하여 실온인 암소에서 16시간동안 방치하여 ABTS+ radical을 형성시킨 후 사용하였다.
구체적으로, 등수국 잎에서 분리한 화합물인 Compound 1(epi-catehin), Compound 2(hyperin), Compound 3(quercitrin), Compound 4(afzelin), Compound 5(1-O-ρ-coumaroyl-β-D-glucopyranoside), Compound 6(asiatic acid), Compound 7(corosolic acid)을 DMSO:EtOH(1:1) 용매를 이용하여 3.125 μM, 6.25 μM, 12.5 μM, 25 μM, 50 μM, 100 μM 농도로 희석하여 준비하였다.
이후, 700 nm에서 ABTS+ 용액의 흡광도 값이 0.78±0.03이 되게 EtOH로 희석하여 준비하였다. 96웰(well) 플레이트(plate)에 상기 희석하여 준비한 ABTS+ 용액 180 ㎕와 상기 희석하여 준비한 각각의 시료용액 20 ㎕를 혼합하여 상온에서 20분간 반응시킨 후, 분광광도계(spectrophotometer)를 이용하여 700 nm에서 흡광도를 측정하였다. 소거율(%)은 상기 수학식 2에 의해 계산하였으며, 각 시료가 ABTS+ radical을 50% 저해할 때의 농도(SC50; Scavenging concentration of 50%)를 구하였다. 각 시료는 3회 반복실험을 실시하여 평균값을 구하였다. 이때 활성을 비교하기 위한 항산화제로는 BHT와 vitamin C를 사용하였다.
8-2. 실험결과
상기 실험결과, 아래의 표 7과 도 8에 나타내었다.
시료 SC 50 (μM)
Compound 1 28.5
Compound 2 15.1
Compound 3 83.5
Compound 4 38.8
Compound 5 >100
Compound 6 >100
Compound 7 >100
BHT 43.1
Vitamin C 48.7
표 7과 도 8에 나타나 있듯이, ABTS+ 자유 라디칼 소거 활성은 Compound 1 - 4에서 나타났으며, 특히 Compound 1, 2, 4에서 ABTS+ radical의 SC50값이 각각 28.5 μM, 15.1 μM, 38.8 μM로 대조군인 BHT와 Vitamin C보다 우수한 ABTS+ 자유 라디칼 소거능을 보였다(표 7 및 도 8).
<실험예 9> 등수국 잎에서 분리한 화합물의 세포독성 평가
9-1. 실험방법
실시예 6에서 수득한 화합물의 세포 독성을 측정하기 위하여 인간 HaCaT keratinocyte를 이용하여 세포 생존율을 측정하였다. 생존율 측정은 MTT 분석법을 이용하여 측정하였다. 인간 HaCaT 세포는 1% Penicillin-streptomycin과 10% fetal bovine serum (FBS)이 함유된 DMEM 배지를 사용하여 37℃, 5% CO2 항온기에서 배양하였다.
구체적으로, 등수국 잎의 Compound 1 - 6을 50 μM, 100 μM의 농도로 무혈청 배지를 이용하여 희석하여 준비하였다. 상기 배양된 인간 HaCaT 세포를 96 well plate에 5×103 cells/well로 분주하여 혈청배지와 함께 24시간동안 배양하였다. 그 후 무혈청 배지로 희석한 시료를 처리하여 24시간 동안 배양한 뒤에 MTT 시약을 이용해 세포의 생존율을 평가하였다. 이때, 대조군으로는 무혈청 배지를 사용하였으며 (-)로 나타내었고, (-)와 비교하여 시료의 농도별 세포생존율을 측정하였다.
9-2. 실험결과
상기 실험결과, 아래의 표 8과 도 9에 나타내었다.
농도(μM) 세포 생존율(%)
실시예 (-) 100.0
Compound 1 50 94.7
100 95.9
Compound 2 50 61.4
100 50.0
Compound 3 50 107.3
100 83.6
Compound 4 50 64.5
100 63.1
Compound 5 50 96.4
100 97.7
Compound 6 50 59.2
100 19.9
표 8과 도 9에 나타나 있듯이, 등수국 잎 Compound 1, 3, 5는 100 μM까지 세포독성이 나타나지 않음을 확인하였다.
<실험예 10> 등수국 잎에서 분리한 화합물의 세포 보호 효과
10-1. 실험방법
상기 배양된 인간 HaCaT 세포를 96 well plate에 5×103 cells/well로 분주하여 24시간동안 배양하였다. 배양된 인간 HaCaT 세포에 DPBS로 희석한 과산화수소(H2O2) 6 mM을 처리하여 30분 동안 배양하였다. 이후 과산화수소(H2O2)를 제거하고 DPBS로 세척한 뒤 Compound 1, 3, 5를 무혈청 배지를 이용하여 희석한 50 μM, 100 μM의 농도로 처리하였다. 이를 24시간 동안 배양한 뒤 MTT 시약을 처리하고 흡광도를 측정하여 세포생존율을 계산하였다. 세포생존율 계산에서는 DPBS만 처리한 경우를 (-), 과산화수소와 DPBS를 처리한 경우를 (+)로 하였다. 시료를 처리한 것(실시예)을 실험군으로 하고 (-)와 비교하여 시료의 농도별 세포생존율을 측정하였다.
10-2. 실험결과
상기 실험결과, 아래의 표 9 과 도 10에 나타내었다.
농도(μg/mL) 세포 생성율(%)
실시예 (-) 100.0
(+) 59.9
Compound 1 50 104.3
100 136.2
Compound 3 50 78.6
100 84.7
Compound 5 50 52.7
100 50.7
상기 표 9에 나타나 있듯이, 과산화수소로 유도된 산화적 스트레스에 대한 인간 HaCaT 세포에 대해 등수국 잎에서 분리한 Compound 1, 3, 5를 이용하여 세포 보호 효과를 측정한 결과, compound 1은 50 μM, 100 μM의 농도에서 각각 44.4%, 76.3%의 세포 보호 효과가, compound 3은 50 μM, 100 μM의 농도에서 각각 18.7%, 24.8%의 세포 보호 효과가 있는 것으로 확인되었다. 이는 사람의 정상 피부 각질 세포에서도 항산화 효과가 있는 것으로 해석되며, 이를 이용한 기능성 화장품 소재개발에 유용하리라 사료된다.

Claims (10)

  1. 등수국(Hydrangea petiolaris) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 화장료 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 등수국 추출물은 물, C1-C4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것인 화장료 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 상기 알코올은 에탄올인 것인 화장료 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 분획물은 n-헥산 분획물, 에틸아세테이트 분획물, n-부탄올 분획물 또는 물 분획물인 것인 화장료 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 등수국 추출물의 에틸아세테이트 분획물은 피부세포 보호 효과를 갖는 것인, 화장료 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 등수국 추출물 또는 분획물에서 분리된 화합물은 에피카테킨(epi-catechin), 히페린(hyperin), 쿼시트린(quercitrin), 아프제린(afzelin), 1-O-파라-쿠마로일-베타-D-글루코피라노사이드(1-O-ρ-coumaroyl-β-D-glucopyranoside), 아시아틱산(asiatic acid) 및 코로솔릭산(corosolic acid)로부터 선택된 하나 이상인 것인, 화장료 조성물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 마사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 립스틱, 메이크업 베이스, 파운데이션, 프레스파우더 및 루스파우더로 이루어진 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것인, 화장료 조성물.
  8. 등수국(Hydrangea petiolaris) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 식품 조성물.
  9. 제8항에 있어서, 상기 식품 조성물은 건강기능식품인 것인, 식품 조성물.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 건강기능식품은 이너뷰티 푸드(inner beauty food)인 것인, 식품 조성물.
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KR20140082555A (ko) 2012-12-24 2014-07-02 재단법인 홍천메디칼허브연구소 수국 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물
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