KR20200053931A - 색소 침착 모델 세포용 세포배양액, 이를 이용한 색소 침착 모델 세포, 색소 침착 모델 세포 제조방법, 색소 침착 모델 세포를 이용한 피부 미백 물질 스크리닝 방법 및 피부 미백용 조성물 - Google Patents

색소 침착 모델 세포용 세포배양액, 이를 이용한 색소 침착 모델 세포, 색소 침착 모델 세포 제조방법, 색소 침착 모델 세포를 이용한 피부 미백 물질 스크리닝 방법 및 피부 미백용 조성물 Download PDF

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Abstract

여드름 유발균을 배양하여 분리한 세포를 피지선 세포에 처리하여 배양한 세포배양액, 상기 세포배양액을 멜라닌 생성세포에 처리하여 제조되는 색소 침착 모델 세포, 상기 색소 침착 모델 세포 제조방법, 상기 색소 침착 모델 세포를 이용한 피부 미백 물질 스크리닝 방법 및 상기 스크리닝 방법에 따라 스크리닝된 물질을 유효 성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물을 제공한다.

Description

색소 침착 모델 세포용 세포배양액, 이를 이용한 색소 침착 모델 세포, 색소 침착 모델 세포 제조방법, 색소 침착 모델 세포를 이용한 피부 미백 물질 스크리닝 방법 및 피부 미백용 조성물 {Culture media of cell for hyperpigmentation model cell, hyperpigmentation model cell using the same, manufacturing method of the hyperpigmentation model cell, screening method of candidate material for skin-whitening and composition for skin-whitening}
본 기재는 색소 침착 모델 세포용 세포배양액, 이를 이용한 색소 침착 모델 세포, 상기 색소 침착 모델 세포의 제조방법, 상기 색소 침착 모델 세포를 이용한 피부 미백 물질 스크리닝 방법 및 상기 스크리닝 방법으로 스크리닝된 물질을 유효 성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물에 관한 것이다.
기존에는 신규 미백 물질을 개발함에 있어 후보 물질을 멜라닌 생성 세포인 멜라노사이트(melanocyte)에 직접 처리한 후 멜라닌 생성을 억제하는지 확인하거나, 멜라노사이트에 자외선을 조사하고 후보 물질이 이때 발생하는 멜라닌 생성 신호를 차단하는지 여부를 확인하는 방법을 사용해 왔다. 하지만 실제 피부에서 멜라노사이트는 단독으로 존재하지 않고, 다른 주변의 세포나 미세 환경으로부터 직접 또는 간접적으로 물리적 또는 화학적인 영향을 받아 멜라닌을 생성하게 되는데, 멜라노사이트만으로는 이러한 실제 피부 조직 상태를 재현할 수 없다.
또한 기미, 점, 흑자, 검버섯과 같은 피부 과색소침착증은 그 발생 요인이나 기전이 자외선에 의한 멜라닌 생성 증가와 다르며, 비록 자외선에 의해 그 증상이 악화되는 경향이 있으나 자외선과 같은 자극이 없는 경우에도 멜라닌 생성과 분산이 계속적으로 증가한다. 따라서 기존의 자외선 조사 방법을 기초로 개발한 미백 물질의 경우, 실제 임상에서는 인간 피부 과색소침착증 억제 효과를 나타내지 않는 경우가 많다. 게다가 피부 과색소침착증을 연구하기 위해 피검자의 과색소침착 부위의 피부를 생검하여 사용하는 것은 그 비용과 노력이 매우 많이 들고 인간 피부 조직을 얻기도 쉽지 않을 뿐만 아니라, 자외선 조사 모델과 달리 피부 과색소침착증의 동물 모델도 구하기가 어렵다.
이에, 인간 피부 조직 구조, 특히 피부 과색소침착증을 나타내는 인간 피부 조직 구조와 매우 유사하면서도 간편하게 미백 물질을 스크리닝할 수 있는 시스템 및 스크리닝 방법에 대한 요구가 존재한다.
한편, 최근들어 피지선의 활성과 연관이 있는 피부 질환을 경감 또는 제거하려는 시도가 다방면에서 계속되고 있는데, 가장 흔하게 경험할 수 있는 여드름 흉터 질환의 경우, 여드름 자체를 제거하는 쪽에 초점을 맞추어 연구가 집중되고 있을 뿐, 여드름 제거 후 색소침착과 같은 흉터를 제거하는 쪽에 초점을 맞추어 연구가 진행되는 경우는 매우 드문 실정이다. 여드름은 모낭 내 과도한 피지 침착 및 염증반응에 의해 유도되며 유발 원인으로는 호르몬, 식습관, 흡연, 스트레스, 미생물 감염 등이 있는데, 그 중에서도 특히 여드름 유발균의 모낭 내 증식이 주요한데, 실제로 염증성 여드름의 68% 내지 79%에서 여드름 유발균인 Propionibacterium acnes가 발견되고 있다. Propionibacterium acnes는 혐기성 미생물로서 모낭 내에서 주로 증식하므로 Propionibacterium acnes가 직접적으로 접촉하는 피부세포는 피지선세포(sebocyte)와 각질형성세포 (keratinocyte)라 볼 수 있다. 여드름이 발생한 사람들은 여드름 발생 당시의 염증반응에 대한 피부 고민이 크지만, 여드름 발생 후 색소 침착에 대한 피부 고민도 많은데, 전술한 것처럼 여드름 발생 후 색소 침착에 대한 문제를 해결하려는 노력은 아직까지 많이 부족한 실정이다.
일 구현예는 여러 피부 미백 후보물질 중 색소 침착 현상을 완화시킬 수 있는 피부 미백 물질을 스크리닝하기 위해 사용되는 색소 침착 모델 세포용 세포배양액을 제공하려는 것이다.
다른 일 구현예는 상기 세포배양액을 멜라닌 생성세포에 처리하여 제조되는 색소 침착 모델 세포를 제공하려는 것이다.
또 다른 일 구현예는 상기 세포배양액을 멜라닌 생성세포에 처리하는 단계를 포함하는 색소 침착 모델 세포 제조방법을 제공하려는 것이다.
또 다른 일 구현예는 상기 색소 침착 모델 세포에 피부 미백 후보물질을 처리하여 티로시나아제(tyrosinase) 또는 티로시나아제 관련 단백질 2(tyrosinase related protein 2)의 발현 정도를 확인하는 단계를 포함하는 피부 미백 물질 스크리닝 방법을 제공하려는 것이다.
또 다른 일 구현예는 상기 스크리닝 방법에 따라 스크리닝된 물질을 유효 성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물을 제공하려는 것이다.
일 구현예에 따르면, 여드름 유발균을 배양하여 분리한 세포를 피지선 세포에 처리하여 배양한 색소 침착 모델 세포용 세포배양액을 제공한다.
상기 여드름 유발균은 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)일 수 있다.
상기 여드름 유발균을 배양하여 분리한 세포는 생균 상태의 세포일 수 있다.
다른 일 구현예에 따르면, 상기 세포배양액을 멜라닌 생성세포에 처리하여 제조되는 색소 침착 모델 세포를 제공한다.
또 다른 일 구현예에 따르면, 상기 세포배양액을 멜라닌 생성세포에 처리하는 단계를 포함하는 색소 침착 모델 세포 제조방법을 제공한다.
또 다른 일 구현예에 따르면, 상기 색소 침착 모델 세포에 피부 미백 후보물질을 처리하여 티로시나아제(tyrosinase) 또는 티로시나아제 관련 단백질 2(tyrosinase related protein 2)의 발현 정도를 확인하는 단계를 포함하는 피부 미백 물질 스크리닝 방법을 제공한다.
또 다른 일 구현예에 따르면, 상기 피부 미백 물질 스크리닝 방법에 따라 스크리닝된 물질을 유효 성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물을 제공한다.
일 구현예에 따르면, 여드름 유발균을 배양하여 분리한 세포를 피지선 세포에 처리하여 배양한 색소 침착 모델 세포용 세포배양액을 멜라닌 생성새포에 처리하여 제조된 색소 침착 모델 세포를 이용하여, 여러 후보물질 중 어떤 물질이 피부 미백에 가장 우수한 효과가 있는지를 용이하게 스크리닝할 수 있고, 이를 통해 피부 미백 효과가 우수한 피부 미백용 조성물을 제공할 수 있다.
도 1 및 도 2는 각각 독립적으로 멜라닌 생성 효소의 단백질 발현 정도를 나타낸 사진 및 그래프이다.
도 3은 멜라닌 생성 세포 배지와 피지세포 배양액을 섞어서 배양 후, lysis buffer를 이용하여 세포를 깨고, 단백질과 분리된 멜라닌을 정량한 사진 및 그래프이다.
이하, 본 발명의 구현예에 대하여 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 구현예에 한정되지 않는다.
본 명세서에서 "피부"라 함은, 동물의 체표를 덮는 조직을 의미하는 것으로서, 얼굴 또는 바디 등의 체표를 덮는 조직뿐만 아니라, 두피와 모발을 포함하는 최광의의 개념이다.
피부의 색소형성세포(멜라노사이트; melanocyte)는 피부색을 결정하는 멜라닌(melanin)을 만드는 세포로서, 피부의 진피와 표피의 경계선 역할을 하는 기저막 위에 위치한다. 발생학적으로 색소형성세포는 뉴럴 클러스트 세포(neural-crest cells)에서 출발하여 멜라노사이트 줄기 세포(Melanocyte stem cell), 전구 세포인 멜라노블라스트(melanoblast)를 거쳐 피부로 이동하면서 최종적으로 멜라닌을 생성할 수 있는 색소 세포인 멜라노사이트로 분화한다고 알려져 있다.
이렇게 분화한 색소형성세포는 피부 속에서 혼자 존재하는 것이 아니라 그 위에 위치한 각질형성세포인 케라티노사이트(keratinocyte)와의 결합 및 아래에 위치한 진피에 있는 섬유아세포의 영향을 받아 멜라닌을 생성하게 된다. 멜라노사이트에서 만들어진 멜라닌은 세포 돌기(dendrite)를 통해 주변에 있는 각질형성세포로 이동하여 피부 표면에 넓게 분산됨으로써 자외선과 같은 유해 인자로부터 피부를 보호하고 피부색을 나타낸다. 정상 피부는 자외선과 같은 자극이 왔을 때 평소보다 많은 멜라닌을 생성하고 멜라닌의 분산을 증가시켰다가, 그러한 자극이 소멸되면 멜라닌 생성과 분산을 다시 낮은 수준으로 되돌린다.
앞서 살펴본 바와 같이, 색소형성세포가 피부 속 다른 세포들이나 주변 미세 환경의 물리적, 화학적 요인으로부터 복합적인 영향을 받아 멜라닌을 생성하는 실제 피부 조건을 반영하지 못하는 기존의 방법에 의해 개발된 미백 물질, 그 중에서도 특히 자외선 조사 방법에 의해 개발된 미백 물질은 피부 과색소침착증 개선에 있어 임상적으로 낮은 효과를 나타내는 경우가 많다. 피부 과색소침착증은 다양한 발생 원인과 특이적인 기작에 의한 피부 흑화이기 때문에 이를 효과적으로 개선할 수 있는 미백 물질을 개발하기 위해서는 실제 피부와 유사한 실험 모델을 만들고, 이를 이용하여 미백 물질을 개발하는 것이 필요하다.
본 명세서에서 층, 막, 영역, 판 등의 부분이 다른 부분 "위에" 있다고 할 때, 이는 다른 부분 "바로 위에" 있는 경우뿐만 아니라 그 중간에 또 다른 부분이 있는 경우도 포함한다. 반대로 어떤 부분이 다른 부분 "바로 위에" 있다고 할 때에는 중간에 다른 부분이 없는 것을 뜻한다.
본 명세서에서 별도의 정의가 없는 한, "조합"이란 혼합 또는 공중합을 의미한다. 또한 "공중합"이란 블록 공중합 내지 랜덤 공중합을 의미하고, "공중합체"란 블록 공중합체 내지 랜덤 공중합체를 의미한다.
이하 일 구현예에 따른 색소 침착 모델 세포용 세포배양액에 대해 설명한다.
일 구현예에 따른 색소 침착 모델 세포용 세포배양액은 여드름 유발균을 배양하여 분리한 세포를 피지선 세포(sebocyte)에 처리하여 배양한 배양액이다.
피부 상에서 여드름 유발균이 직접적으로 접촉하는 피부 세포는 피지선 세포 또는 각질형성세포(keratinocyte)라 할 수 있으므로, 여드름 유발균에 영향을 받은 피지선 세포가 분비하는 물질이 색소형성세포의 색소 형성을 유도하여 궁극적으로 색소 침착을 야기한다고 볼 수 있다. 따라서, 여드름 유발균을 배양하여 분리한 세포를 피지선 세포에 처리하여 배양한 세포배양액을 멜라닌 생성세포(색소형성세포)에 처리할 경우, 전술한 피지선 세포가 분비하는 물질이 색소형성세포가 색소, 즉 멜라닌을 형성하는 과정을 제어하는지 여부에 대한 확인이 가능해져, 이를 여드름에 의한 색소 침착을 개선하는 소재 발굴에 용이하게 활용할 수 있다. 이 때, 상기 색소형성세포는 인간, 마우스, 기니아피그, 닭과 같은 조류 및 돼지로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상에서 유래한 세포를 포함할 수 있다.
예컨대, 상기 여드름 유발균은 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)일 수 있다.
예컨대, 상기 여드름 유발균을 배양하여 분리한 세포는 생균 상태의 세포일 수 있다.
다른 일 구현예에 따르면, 상기 세포배양액을 멜라닌 생성세포에 처리하여 제조되는 색소 침착 모델 세포를 제공한다.
또 다른 일 구현예에 따르면, 상기 세포배양액을 멜라닌 생성세포에 처리하는 단계를 포함하는 색소 침착 모델 세포 제조방법을 제공한다.
또 다른 일 구현예에 따르면, 상기 색소 침착 모델 세포에 피부 미백 후보물질을 처리하여 티로시나아제(tyrosinase) 또는 티로시나아제 관련 단백질 2(tyrosinase related protein 2)의 발현 정도를 확인하는 단계를 포함하는 피부 미백 물질 스크리닝 방법을 제공한다.
상기 피부 미백 물질 스크리닝 방법은 피부 미백 효과가 있는 물질, 구체적으로 자외선에 의한 피부 흑화 개선 효과가 있는 물질뿐만 아니라 특히 여드름이 생긴 이후 발생한 기미, 점, 흑자 또는 검버섯과 같은 피부 과색소침착증에 개선 효과가 있는 물질을 효과적으로 스크리닝할 수 있다.
본 발명자들은 여드름에 의해 과색소침착증을 나타내는 피부에서 멜라닌 생성효소인 티로시나아제(tyrosinase) 및 티로시나아제 관련 단백질 2(tyrosinase related protein 2)의 발현이 증가하며, 구체적으로 티로시나아제 또는 티로시나아제 관련 단백질 2의 발현은 피부 세포 중에서도 여드름 유발균에 영향을 받은 피지선 세포배양액이 멜라노사이트에 처리되었을 때 증가함으로써, 멜라노사이트의 멜라닌 생성에 영향을 준다는 것을 밝혔다. 즉, 본 발명자들은 여드름 유발균은 피지선 세포에 영향을 주고, 상기 영향을 받은 피지선 세포는 색소형성세포인 멜라노사이트에 영향을 주어, 멜라닌 생성에 관여하는 티로시나아제 및 티로시나아제 관련 단백질 2의 발현이 증가됨을 밝혀, 여드름 유발균과 피부 과색소침착증 간에 밀접한 관련이 있음을 확인하였다.
이에 일 구현예에 따른 색소 침착 모델 세포에 특정 후보 물질을 처리하고, 티로시나아제(tyrosinase) 또는 티로시나아제 관련 단백질 2(tyrosinase related protein 2)의 발현 정도를 확인하여, 상기 티로시나아제(tyrosinase) 또는 티로시나아제 관련 단백질 2(tyrosinase related protein 2)의 발현이 감소할 경우, 상기 특정 후보 물질이 피부 미백 효과가 있는 물질, 특히 여드름에 의한 피부 과색소침착증 개선에 효능이 있는 물질임을 효과적으로 예상할 수 있다.
기존에는 천연물, 그 추출물 또는 화학 합성 물질과 같은 후보 물질을 멜라노사이트에만 직접 처리하여 미백 효능 유무를 평가하였다. 이러한 기존의 방법에 의하는 경우, 세포 배양액에 희석한 후보 물질을 세포에 직접 처리해야 하며, 크림이나 로션과 같이 실제 사용하는 제형에 후보 물질을 적용한 상태로는 멜라노사이트에 처리할 수 없다. 따라서 기존의 방법으로는 임상 실험을 실시하여야만 비로소 후보 미백 물질을 포함한 제형이 임상적으로 실제 미백 효과가 있는지를 확인할 수 있다. 나아가, 피부색소 침착의 원인은 매우 다양하기 때문에, 피부색소 침착의 원인이 되는 주요 요소가 여드름 유발균이 아닐 경우, 여드름 유발균에 의한 피부색소 침착에 대해서는 피부 미백 효과가 거의 없어, 이를 피부 미백 물질로 분류해야 하는지에 대해서도 의견이 나뉘는 문제가 있었다. 반면, 일 구현예에 따른 피부 미백 물질 스크리닝 방법은 여드름 유발균을 배양하여 분리한 세포를 피지선 세포에 처리하여 배양한 세포배양액을 멜라닌 생성세포에 처리하여 색소 침착 모델 세포를 별도로 제조한 후, 여기에 피부 미백 후보물질을 처리함으로써 여드름 유발균에 의한 색소 침착 개선 효과 유무를 평가할 수 있음은 물론, 후보 물질을 함유하는 크림이나 로션과 같은 제형을 사용하여 그 피부 미백 효과 유무를 평가할 수도 있다. 이와 같이 본 발명에 따른 피부 미백 스크리닝 방법은 실제 피부와 유사한 생리적, 화학적 특징을 가지며, 실제 사용하는 제형을 사용하여서도 그 미백 효과에 대한 평가가 가능하고, 무엇보다 여드름 유발균에 의한 피부 색소 침착 문제를 해결하는 데 특화되어 있으므로, 실제 임상적으로 여드름에 의한 피부 색소 침착을 개선할 수 있는 물질을 보다 짧은 시간 안에 적은 비용으로 효율적이고 간편하게 선별할 수 있게 한다.
또 다른 일 구현예에 다르면, 상기 피부 미백 물질 스크리닝 방법에 따라 스크리닝된 물질을 유효 성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물을 제공한다. 앞서 살펴 본 바와 같이 상기 색소 침착 모델 세포에서, 티로시나아제(tyrosinase) 또는 티로시나아제 관련 단백질 2(tyrosinase related protein 2)의 발현을 감소시키는 물질은 피부 미백 효과, 구체적으로 여드름에 의한 피부 과색소침착증 개선 효과가 있는 물질이라고 판단할 수 있으므로, 이를 유효 성분으로 포함하는 조성물은 피부 미백 효과, 구체적으로 여드름 유발 피부 과색소침착증 개선 효과를 나타낼 수 있다.
상기 피부 미백용 조성물은 화장료 조성물, 약학 조성물 또는 식품 조성물을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 "화장료"는, 미용 기능뿐만 아니라, 미용 기능 외에 추가적으로 의학적 기능을 가질 수 있는 모든 물질을 의미할 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형은 특별히 제한되지 않으며, 목적하는 바에 따라 적절히 선택할 수 있다.
예를 들면, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 세정제, 토닉, 정발제, 영양화장수, 에센스, 세럼, 트리트먼트, 컨디셔너, 샴푸, 로션, 양모제 또는 염모제 등의 화장료 조성물, 수중유(O/W)형, 유중수(W/O)형 등의 기초 화장료로 제형화될 수 있다. 예컨대, 상기 조성물은 스킨로션, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 마사지크림, 영양크림, 모이스쳐 크림, 핸드크림, 연고, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 로션, 연고, 겔, 크림, 패취 및 분무제로 구성된 군으로부터 선택된 하나의 제형을 가질 수 있다. 또한, 상기 조성물은, 각각의 제형에 있어서 상기한 필수성분 이외에 다른 성분들은 기타 외용제의 종류 또는 사용목적 등에 따라 당업자가 어려움 없이 적합하게 선정하여 배합할 수 있다. 예컨대, 자외선 차단제, 헤어 컨디셔닝제, 향료 등을 더 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물은 화장품학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 함유할 수 있다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀) 및/또는 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적 방법에 따라 제조될 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시태양에서, 상기 화장료 조성물에 추가적으로 점증제를 함유할 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 점증제는 메틸 셀룰로스, 카르복시 메틸 셀룰로스, 카르복시 메틸 하이드록시 구아닌, 하이드록시 메틸 셀룰로스, 하이드록시에틸셀룰로스, 카르복시 비닐 폴리머, 폴리쿼터늄, 세테아릴 알콜, 스테아릭산, 카라기난 등을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 카르복시 메틸 셀룰로스, 카르복시 비닐 폴리머, 폴리쿼터늄 중에서 1종 이상을 사용할 수 있으며, 가장 바람직하게는 카르복시 비닐 폴리머가 될 수 있다.
본 발명의 일 실시태양에서 상기 화장료 조성물은 필요에 따라 적절한 각종의 기제와 첨가제를 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 발명자에 의해 용이하게 선정될 수 있다. 필요에 따라 허용 가능한 첨가제를 함유할 수 있으며, 예를 들면, 당업계에 통상적인 방부제, 색소, 첨가제 등의 성분을 추가로 포함할 수 있다.
방부제는 구체적으로 페녹시에탄올(Phenoxyethanol) 또는 1,2-헥산디올 (1,2-Hexanediol) 등이 될 수 있고, 향료는 인공향료 등이 될 수 있다.
그리고, 본원 발명의 일 실시태양에서 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함할 수 있다. 이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한제, 정제수 등을 들 수 있다.
또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하다.
나아가 일 구현예에 따른 화장료 조성물은 상기 기술한 바와 같이 약학적 조성물로 사용할 수 있을 뿐만 아니라, 건강기능식품으로도 사용할 수 있다. 예컨대, 식품의 주원료, 부원료, 식품 첨가제, 기능성 식품 또는 음료로 용이하게 활용할 수 있다.
상기 "식품"이란, 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서, 식품, 식품 첨가제, 기능성식품 및 음료를 모두 포함하는 것을 말한다.
상기 식품용 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합체, 기능성 식품 등이 있다. 추가로, 특수영양식품(예, 조제유류, 영, 유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예, 라면류, 국수류 등), 빵류, 건강보조식품, 조미식품(예, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예, 스낵류), 캔디류, 쵸코렛류, 껌류, 아이스크림류, 유가공품(예, 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예, 과실음료, 채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료(예, 라면스프 등)를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 식품, 음료 또는 식품첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다.
또한, 상기 "기능성 식품" 또는 "건강기능성 식품"이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물 공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체내조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미하며, 구체적으로는 건강 기능성 식품일 수 있다. 상기 기능성 식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 기능성 식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.
상기 건강보조식품의 종류로는 이에 제한되지는 않으나, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료 형태일 수 있다.
본원 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 이하, 본원 발명을 실시예에 의해 상세히 설명하기로 한다. 그러나 이들 실시예들은 본 발명을 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
(실시예)
시험예: 멜라닌 생성 효소의 단백질 발현 정도 확인 및 멜라닌 정량
Propionibacterium acnes(P. acnes, ATCC 6919)를 BHI 배지에 접종한 후, 37℃ 혐기상태에서 72시간 내지 96시간 동안 배양하고 배양액을 수거하였다. 수거한 배양액을 원심분리(4℃, 5000 xg에서 10 분)하여 균을 침전시킨 후, 상기 침전된 균을 phosphate-buffered saline(PBS)로 두 번 씻어준 다음, 최종 농도 1 X 1010 CFU/ml이 되도록 P. acnes 생균 stock을 만들어 -80℃에 동결보존하였다. 피지선세포는 100-mm plate에 2 x 106 cells로 깔아준 뒤, 1일 내지 2일 후 serum이 없는 피지선세포 배양액으로 바꾸어주었는데, 이 때 1 X 108의 P. acnes 생균을 처리하거나 11 mJ/cm2 UVB를 조사하였다. 24시간 후, 배양액을 수거하고 원심분리(4℃, 2000 xg에서 5 분)하여 균을 침전시켜 제거하고 상층액을 0.22 ㎛ filter로 여과하여 -80℃에 보관하였다.
또한, 6-well plate에 인간 정상 멜라닌 생성 세포를 2 X 105 cells로 깔고, 다음날 멜라닌 생성 세포 배지와 피지세포 배양액을 1:1로 섞어서 well 당 2 ml 씩 처리하였다. 3일 배양 후 각 well 당 세포 수를 측정하고, lysis buffer를 이용하여 세포를 깬 후 멜라닌과 단백질을 분리하여 멜라닌 정량과 Western blotting을 수행하였다. 멜라닌 정량은 단백질을 분리하고 남은 cell pellets을 1N NaOH에 녹여 ELIZA leader를 사용하여 475 nm에서 흡광도를 측정하는 방법으로 상대적인 양을 구하였다. 분리한 단백질에서는 멜라닌 생성 효소인 티로시나아제(tyrosinase)와 티로시나아제 관련 단백질 2(tyrosinase related protein 2; TRP2)에 특이적인 항체를 활용하여 상대적인 단백질 발현량을 측정하고, GAPDH의 발현량으로 보정하였다. 멜라닌 생성 효소인 티로시나아제 및 티로시나아제 관련 단백질 2의 발현량 및 멜라닌 정량 결과를 도 1 내지 도 3에 나타내었다.
도 1 내지 도 3으로부터, 여드름 유발균에 영향을 받은 피지선 세포양액을 색소형성세포인 멜라노사이트에 처리할 경우, 상기 멜라노사이트로부터 멜라닌 생성 효소인 티로시나아제 및 티로시나아제 관련 단백질 2의 발현이 증가함을 확인할 수 있으며, 이를 활용하여 별도의 색소 침착 모델 세포를 만들어 놓을 경우, 여드름 유발균에 의한 색소 침착을 개선하는 데 효과가 있는 물질을 상기 색소 침착 모델 세포를 사용하여 유효하고 간단하게 스크리닝할 수 있음을 알 수 있다.
이상에서 본 발명의 바람직한 실시예들에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리 범위는 이에 한정되는 것은 아니고 다음의 청구 범위에서 정의하고 있는 본 발명의 기본 개념을 이용한 당업자의 여러 변형 및 개량 형태 또한 본 발명의 권리 범위에 속하는 것이다.

Claims (7)

  1. 여드름 유발균을 배양하여 분리한 세포를 피지선 세포에 처리하여 배양한 색소 침착 모델 세포용 세포배양액.
  2. 제1항에서,
    상기 여드름 유발균은 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)인 색소 침착 모델 세포용 세포배양액.
  3. 제1항에서,
    상기 여드름 유발균을 배양하여 분리한 세포는 생균 상태의 세포인 색소 침착 모델 세포용 세포배양액.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 세포배양액을 멜라닌 생성세포에 처리하여 제조되는 색소 침착 모델 세포.
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 세포배양액을 멜라닌 생성세포에 처리하는 단계를 포함하는 색소 침착 모델 세포 제조방법.
  6. 제4항의 색소 침착 모델 세포에 피부 미백 후보물질을 처리하여 티로시나아제(tyrosinase) 또는 티로시나아제 관련 단백질 2(tyrosinase related protein 2)의 발현 정도를 확인하는 단계를 포함하는 피부 미백 물질 스크리닝 방법.
  7. 제6항의 스크리닝 방법에 따라 스크리닝된 물질을 유효 성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물.
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