KR101513237B1 - 로즈마리 유래의 베르베논을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 베르베논 (verbenone)을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물 또는 피부 색소 침착 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물에 관한 것이다.

Description

로즈마리 유래의 베르베논을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물 {Cosmetic composition containing verbenone from rosemary for improving skin whitening as an effective component}

본 발명은 베르베논을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 베르베논 (verbenone)을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물 또는 피부 색소 침착 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물에 관한 것이다.

사람의 피부색은 표피에 존재하는 색소세포인 멜라닌 세포에서 생성하는 피부멜라닌, 헤모글로빈이나 카로티노이드 등의 색소의 유무 및 피부의 두께와 반사도 등에 영향을 받는다. 이 중 피부색을 결정하는데 가장 중요한 요소인 멜라닌 색소는 인체에 정상적으로 존재하는 아미노산의 일종인 티로신(Tyrosine)이 멜라닌 세포 내에 존재하는 효소인 티로시네이즈(Tyrosinase)에 의해 도파(DOPA)되고, 계속되는 일련의 복잡한 산화과정을 통해 최종적으로 흑갈색의 중합체인 멜라닌을 생성하게 된다. 멜라닌 합성은 자외선 노출, 멜라노마(melanoma), 색소과다침착증(hyperpigmentation disease) 등의 요인에 의하여 합성이 촉진된다. 또한, 멜라닌 색소의 생합성은 티로시나제(tyrosinase) 효소를 비롯하여 여러 효소들에 의하여 조절되고 있으며, 그 중 티로시나제는 티로신(tyrosine)을 기질로 하여 L-도파퀴논(L-dopaquinone)으로 전이되는 초기 생합성과정 이후 디하이드록시인돌(dihydroxyindole)의 산화에 작용한다.

따라서, 티로시나제 활성 억제제를 찾는 연구가 미백제의 개발에 있어서 중요한 부분을 차지하고 있으며, 현재 계속 알려지고 있는 티로시나제 저해제로 하이드로퀴논(hydroquinone), 4-하이드록시아니졸(4-hydroxyanisole), 아스코르빈산 (ascorbic acid) 유도체, 코지산(kojic acid), 아젤라인산(azelaic acid), 코르티코스테로이드(corticosteroid), 레티노이드(retinoids), 알부틴(arbutin), 카테킨(catechin) 등이 있으나, 이들의 안전성과 경제성 등의 문제점으로 사용에 있어서 어려움이 있다. 이에 따라 최근에는 천연식물을 이용한 미백원료, 기능성 식품, 기능성 화장료 등 각 분야에서 인공물질이 아닌 천연물을 이용한 연구가 활발히 진행되고 있다.

한편, 한국등록특허 제10-1236946호에서는 식물성 추출물을 포함하는 아토피 피부염 완화용 화장료 조성물이 개시되어 있고, 한국공개특허 제1993-0021190호에서는 피부 화장료 조성물이 개시되어 있으나, 본 발명에서와 같이 로즈마리 유래의 베르베논을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물에 관해서는 밝혀진 바가 없다.

본 발명은 상기한 종래 문제점을 해결하기 위한 것으로, 본 발명에서는 α-MSH (α-melanocyte stimulating hormone)를 처리한 흑색종 세포인 B16F10 세포에서 로즈마리 유래의 베르베논을 처리한 결과, 멜라닌 형성 관련 단백질인 TRP-1, TRP-2, 티로시나제, MITF의 발현 양이 모두 베르베논 농도 의존적으로 감소함을 확인할 수 있었고, 멜라닌 함량이 감소되는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 베르베논 (verbenone)을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 베르베논을 유효성분으로 함유하는 피부 색소 침착 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물을 제공한다.

본 발명에 의하면 로즈마리 유래의 베르베논을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물, 또는 피부 색소침착 질환의 치료 및 개선용 약학 조성물을 제조할 수 있다. 또한, 본 발명의 화장료, 약학 조성물은 멜라닌 생합성 과정에 핵심적으로 작용하는 효소인 티로시나제 활성을 효과적으로 저해하고, B16F10 멜라노마 세포의 멜라닌의 생합성을 억제하여 피부 미백 효과, 피부 색소 침착 질환의 치료, 예방, 개선 효과가 매우 탁월하다.

도 1은 멜라닌 함량에 대한 로즈마리 정유 (α-Pinene) 및 플로랄 (1,8-Cineole, Linalool, Camphor, 4-Terpineol, Verbenone)의 유효성분의 효과를 나타낸다.
도 2는 버섯 티로시나아제 활성의 저해에 대한 베르베논의 효과를 나타낸다.
도 3은 B16F10 세포에서 티로시나아제 저해 활성에 대한 베르베논의 효과를 나타낸다. α-MSH, α-MSH 20 nM; Ver, 베르베논.
도 4는 B16F10 세포에서 멜라닌 함량에 대한 베르베논의 효과를 나타낸다. α-MSH, α-MSH 20 nM; Ver, 베르베논.
도 5는 베르베논을 처리한 B16F10 펠렛의 색깔을 나타낸다. (1) α-MSH 20 nM만 처리; (2) α-MSH 20 nM + 베르베논 0.625 mM 처리; (3) α-MSH 20 nM + 베르베논 1.25 mM 처리; (4) α-MSH 20 nM + 베르베논 2.5 mM 처리.
도 6은 B16F10 세포에서 멜라닌 형성 관련 단백질의 발현에 대한 베르베논의 효과를 나타낸다. 베르베논, 0.625 mM, 1.25 mM, 2.5 mM; KA, 코지산 200 μM.

본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 베르베논 (verbenone)을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 구현 예에 따른 피부 미백용 화장료 조성물에서, 상기 베르베논은 바람직하게는 로즈마리 (rosemary, Rosmarinus officinalis) 유래일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 로즈마리 플로랄 워터(floral water) 유래일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 플로랄 워터는 에센셜 오일을 추출하는 과정에서 부산물로 생기는 것으로 하이드로졸(Hydrosol)이라고도 한다.

본 발명에 있어서, '미백'이라 함은 피부의 과다 색소 침착을 억제, 저해 또는 완화시키는 것을 말한다. 피부의 과다 색소 침착은 주근깨, 기미, 자외선 노출 후 과다 색소 침착, 염증 후 과다 색소 침착, 노인흑색점, 갈색 반점 또는 검버섯 등을 포함한다.

본 발명의 일 구현 예에 따른 피부 미백용 화장료 조성물에서, 상기 피부 미백은 티로시나아제 단백질 발현 또는 멜라닌의 생성을 억제함으로써 나타날 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 일 구현 예에 따른 피부 미백용 화장료 조성물에서, 상기 베르베논의 함량은 조성물 총 중량에 대해 0.0001% 내지 10%로 함유될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 일 구현 예에 따른 피부 미백용 화장료 조성물에서, 상기 화장료 조성물은 피부 미백 효과를 갖는 화장품 및 세안제 등에 다양하게 이용될 수 있는데, 특히 피부외용연고, 크림, 유연화장수, 영양화장수, 팩, 에센스, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어트리트먼트, 젤, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 파운데이션, 영양에센스, 선스크린, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클렌저로 이루어지는 군으로부터 선택된 제형을 갖는 피부 미백용 화장료 조성물일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형은 형광물질, 살진균제, 굴수성 유발물질, 보습체, 방향제, 방향제 담체, 단백질, 용해화제, 당유도체, 일광차단제, 비타민, 식물 추출물 등을 포함하는 부형제를 추가로 함유할 수 있다.

상기와 같이 피부 미백용 화장료 조성물을 의약품 또는 화장품으로 제형화할 경우, 활성 성분에 대한 담체로 작용하는 피부에 적용가능한 공지의 부형제를 포함할 수 있다. 의약품으로의 제형화시에는 [Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA]에 개시되어 있는 내용을 참조할 수 있으며, 화장품으로 제형화시에는 [International cosmetic ingredient dictionary, 6th ed., The cosmetic, Toiletry and Fragrance Association, Inc., Washington, 1995]에 개시되어 있는 내용을 참조할 수 있을 것이다.

또한, 본 발명은 베르베논 (verbenone)을 유효성분으로 함유하는 피부 색소 침착 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 구현 예에 따른 피부 색소 침착 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물에서, 상기 베르베논은 바람직하게는 로즈마리 (rosemary, Rosmarinus officinalis) 유래일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 로즈마리 플로랄 워터(floral water) 유래일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 일 구현 예에 따른 피부 색소 침착 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물에서, 상기 피부 색소 침착 질환은 멜라닌 색소의 합성 증가로 피부에 국소적으로 발생하고, 기미, 주근깨, 흑색점, 모반, 약물에 의한 색소 침착, 염증 후 색소 침착, 및 피부염에서 발생하는 과색소 침착에서 선택된 하나 이상의 질환일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 일 구현 예에 따른 피부 색소 침착 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물에서, 상기 피부 색소 침착 질환의 치료 및 예방은 티로시나아제 단백질 발현 또는 멜라닌의 생성을 억제함으로써 이루어질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 일 구현 예에 따른 피부 색소 침착 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물에서, 상기 베르베논의 함량은 조성물 총 중량에 대해 0.0001% 내지 10%로 함유될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 일 구현 예에 따른 피부 색소 침착 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물에서, 상기 피부 색소 침착 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물은 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제 제형인 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

또한, 본 발명은 베르베논 (verbenone)을 유효성분으로 함유하는 피부 미백 개선 또는 예방용 식품 조성물 또는 음료 조성물을 제공한다.

본 발명의 상기 베르베논을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 베르베논을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 베르베논은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양의로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 구체적인 예로, 상기 베르베논을 이용하여 농산물, 축산물 또는 수산물의 특성을 살려 변형시키는 동시에 저장성을 좋게 한 가공식품을 제조할 수 있다. 이런 가공식품에는 예를 들어, 과자, 음료, 주류, 발효식품, 통조림, 우유가공식품, 육류가공식품, 국수 등을 포함한다. 과자는 비스킷, 파이, 빵, 캔디, 젤리, 껌, 시리얼(곡물푸레이크 등의 식사대용품류 포함) 등을 포함한다. 음료는 탄산음료, 기능성이온음료, 쥬스(예를 들어, 사과, 배,포도, 알로에, 감귤, 복숭아, 당근, 토마토쥬스 등), 식혜 등을 포함한다. 주류는 청주, 위스키, 소주, 맥주,양주, 과실주 등을 포함한다. 발효식품은 간장, 된장, 고추장 등을 포함한다. 통조림은 수산물 통조림(예를 들어, 참치, 고등어, 공치, 소라 통조림 등), 축산물 통조림(쇠고기, 돼지고기, 닭고기, 칠면조 통조림 등), 농산물 통조림(옥수수, 복숭아, 파인애플 통조림 등)을 포함한다. 우유가공식품은 치즈, 버터, 요구르트 등을 포함한다. 육류가공식품은 돈까스, 비프까스, 치킨까스, 소세지, 탕수육, 너겟류, 너비아니 등을 포함한다. 밀봉포장생면 등의 국수를 포함한다. 이 외에도 상기 조성물은 레토르트식품, 스프류 등에 사용될 수 있다.

또한, 상기 베르베논을 이용하여 기능성식품, 건강식품 또는 건강보조식품을 제조할 수 있다. 기능성식품, 건강식품 또는 건강보조식품은 영양 기능 외에도 생리활성 성분을 포함하여 생체조절 기능을 제공하는 식품을 의미하고, 본 발명의 베르베논은 피부 미백 예방 또는 개선 효과를 가지므로 기능성식품, 건강식품 또는 건강보조식품 등의 제조에 이용될 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

재료 및 실험방법

1. 재료

제주도 서귀포 표선면에 위치한 ㈜어반파머스 농장에서 재배 생산한 로즈마리 (Rosmarinus officinalis) 줄기와 잎을 2012년 여름에 채취하여 건조 후 사용하였다. 또한 모든 시약들은 시그마 케미컬 (St. Louis, MO, USA)과 인비트로젠 깁코 (Grand Island, NY, USA)에서 구입하여 사용하였다.

2. 멜라닌 함량 측정법

멜라닌 생성 세포로는 마우스에서 얻은 흑색종의 일종인 B16F10 멜라노마 세포를 이용하였다. 배양된 B16F10 세포에 α-MSH (α-melanocyte stimulating hormone, 20 M)를 처리한 다음(대조군) 1일 후, 2.5, 1.25, 0.625 mM 농도의 베르베논 (verbenone)과 2 mM 농도의 알부틴 (arbutin, 양성 대조구)을 가하여 각각 1일, 2일간 배양하였다 (실험군). 배양세포는 PBS로 2회 씻고 1500 rpm으로 5분간 원심분리하여 수확하였다. 세포 침전물에 300 ㎕의 10% DMSO가 함유된 1 N NaOH를 넣고 80℃에서 1시간 동안 처리하여 멜라닌을 용해시켰다. 멜라닌 함량은 다음과 같은 식으로 산출하였다.

멜라닌 함량 (%) = A / B x 100

A : 처리 그룹의 OD₄₉₀ 값

B : 비처리 그룹의 OD₄₉₀ 값

3. 버섯 티로시나제 저해능 측정법

1 M 인산염 버퍼 (pH 6.8) 60 ㎕, 시료액 10 ㎕, 500 U/㎖ 버섯 티로시나제 20 ㎕를 차례로 가한 다음 실온에서 5분 동안 둔 후, 1 mM L-티로신 수용액 60 ㎕을 가하여 반응을 시작하였다. 반응은 37℃에서 30 분간 배양 시켰으며, 490 nm에서 흡광도를 측정하였다. 버섯 티로시나제 저해능 (mushroom tyrosinase inhibition activity)은 다음과 같은 식으로 산출하였다.

버섯 티로시나제 저해능 (%) = ( B - A ) / A x 100

A : 처리 그룹의 OD₄₉₀ 값

B : 블랭크 대조구 OD₄₉₀ 값

4. B16F10 세포에서의 티로시나제 저해능 측정법

배양된 세포를 티로신-EDTA를 처리하여 수확한 다음 500 ㎕ 세포용해용 버퍼 (1% 트리톤 X-100 및 0.1 mM PMSF을 포함하는 10 mM 인산나트륨)를 첨가한 다음 초음파 처리 (sonication)한 후, 얼음 상에서 30 분간 세포를 용해시켰다. 다시 13000 rpm에서 30 분간 원심분리하고 얻어진 세포용액을 사용하여 티로시나아제 활성을 측정하였다.

5. 웨스턴 블럿 분석

B16F10 (5x10³ 세포/㎖) 세포에 α-MSH를 20 nM 처리하고, 24 시간 후 베르베논을 0.625, 1.25, 2.5 mM의 농도로 처리하여 72 시간 동안 배양하였다. 배양한 세포를 수확하여 PBS로 3회 세척하고 500 ㎕의 용해 버퍼를 첨가하여 초음파 처리 후 30 분 동안 용해시킨 후, 12,000 rpm, 4℃에서 30 분간 원심분리하여 상층액을 얻었다. 단백질의 농도는 BSA (bovine serum albumin)를 표준물질로 사용하여 정량하였다. 동량의 용해물 (lysate)을 12% SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis)에 45 mM에서 변성 분리하고, 150 V에서 80 분간 막에 트랜스퍼하였다. 그리고 막의 블럭킹 (blocking)은 5 % 스킴 밀크가 함유된 TTBS (TBS+0.1 % Tween 20) 용액에서 밤새 배양을 실시하였다. 멜라닌형성 (melanogeneis) 관련 단백질과 액틴의 1차 항체를 1:1000 비율로 사용하여 상온에서 3시간 동안 진행하였다. 2차 항체로는 항-토끼 IgG와 항-마우스 IgG를 1:5000으로 희석하여 이용하였으며, 반응은 상온에서 1시간 동안 진행하였다. 그 후 막을 TTBS로 3회 세척하여 ECL 기질과 1~3분간 반응 후 X-레이 필름에 감광하였다.

실시예 1. 제주산 로즈마리의 미백활성 성분 선정

제주산 로즈마리 정유(essential oil)와 플로랄 워터로부터 미백활성 소재를 발굴하기 위해 흑색종 세포주인 B16F10 세포에 제주산 로즈마리 정유 (α-Pinene)와 플로랄 워터 (1,8-Cineole, Linalool, Camphor, 4-Terpineol, Verbenone)에 함유된 주요 성분 6 종을 농도별로 처리하여 72 시간이 지난 후 B16F10 세포의 멜라닌의 함량 변화를 490 nm에서 측정하였다. 실험 결과 대조군인 알부틴 (arbutin)에 비해 베르베논이 가장 높은 멜라닌 함량 감소를 나타내었으며, 이에 아직 보고가 되지 않았던 베르베논에 초점을 맞추어 이후 실험을 진행하였다 (도 1).

실시예 2. 베르베논의 미백 효능

① 버섯 티로시나제 저해능 ( Mushroom tyrosinase inhibition assay )을 통한 미백효능 측정

제주산 로즈마리의 성분의 스크리닝 (screening)을 통하여 선택한 베르베논의 버섯 티로시나제 효소 억제 활성을 측정하였다. 대조군으로 사용한 코지산 (kojic acid)을 200, 400, 800 μM 농도를 처리하였을 때, α-MSH 20 nM에 의해 증가한 티로시나아제 활성을 억제하는 효과를 농도 의존적으로 나타내었으나, 베르베논 2.5, 5 mM 처리군에서는 억제효과가 나타나지 않았다 (도 2). 즉, 베르베논은 티로시나제의 효소 억제제로서 작용하지는 않는다는 것을 알 수 있다.

② 티로시나제 저해 분석 ( Tyrosinase inhibition assay )을 통한 미백효능 측정

흑색종 세포인 B16F10 세포에서 베르베논에 의한 티로시나제 억제 효능을 확인하기 위해 B16F10 세포에 α-MSH를 하루 동안 처리하여 티로시나제의 증가를 유도하고, 베르베논을 0.625, 1.25, 2.5 mM 농도로 처리하고 각각 24 시간, 48 시간이 지난 후 티로시나제 활성을 측정하였다. 그 결과 베르베논이 B16F10 세포에서 티로시나제를 억제하는 것을 확인하였다 (도 3).

이 결과와 상기 시험관내 (in vitro) 버섯 티로시나제 저해 분석 결과를 종합해 볼 때, 베르베논은 티로시나제의 효소 억제제로서 작동하기보다는 세포에서 티로시나아제의 발현을 억제함으로써 미백효과를 나타내는 것으로 분석된다.

③ 멜라닌 함량 분석을 통한 미백효능 측정

B16F10 세포에서 멜라닌의 함량을 감소시키는 것을 확인하기 위해 B16F10 세포에 α-MSH를 처리하여 멜라닌의 증가를 24 h 동안 유도한 후, 베르베논을 0.625, 1.25, 2.5 mM 농도로 처리하고 각각 24 시간, 48 시간이 지난 후 멜라닌의 함량을 확인하였다. 그 결과 베르베논이 B16F10 세포에서 농도 의존적으로 멜라닌의 함량을 감소시키는 것을 확인하였다 (도 4). 또한, 세포 펠렛의 색을 확인하였을 때 역시 농도 의존적으로 펠렛의 색이 감소하는 것을 확인할 수 있었다 (도 5).

④ 웨스턴 블럿을 통한 멜라닌 형성 관련 단백질 측정

베르베논의 미백 효과에 대한 기작을 확인하기 위하여 멜라닌 형성 관련 단백질인 TRP-1, TRP-2, 티로시나제, MITF의 발현을 웨스턴 블럿을 통하여 확인하였다. B16F10 세포에 베르베논과 대조군인 코지산을 각각 처리하여 72 시간 후 세포 내에 기존에 있던 멜라닌 형성 관련 단백질인 TRP-1(tyrosinase-related protein 1), TRP-2(tyrosinase-related protein 2), 티로시나제, MITF(microphthalmia-associated transcription factor)의 발현 양이 모두 베르베논 농도 의존적으로 감소함을 확인할 수 있었다 (도 6B). 또한 α-MSH를 20 nM 24시간 처리 후 베르베논과 코지산을 각각 처리한 후 확인하였을 때 베르베논 처리군에서 농도 의존적으로 멜라닌 형성 관련 단백질의 수준이 감소하는 것을 확인할 수 있었다 (도 6A).

Claims (13)

1. 베르베논 (verbenone)을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 베르베논은 로즈마리 (rosemary) 유래인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
3. 제1항에 있어서, 상기 피부 미백은 티로시나아제 단백질 발현 또는 멜라닌의 생성을 억제함으로써 나타나는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
4. 제1항에 있어서, 상기 베르베논의 함량은 조성물 총 중량에 대해 0.0001% 내지 10%로 함유되는 것을 특징으로 피부 미백용 화장료 조성물.
5. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부외용연고, 크림, 유연화장수, 영양화장수, 팩, 에센스, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어트리트먼트, 젤, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 파운데이션, 영양에센스, 선스크린, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클렌저로 이루어지는 군으로부터 선택된 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
6. 베르베논 (verbenone)을 유효성분으로 함유하는 피부 색소 침착 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물.
7. 제6항에 있어서, 상기 베르베논은 로즈마리 (rosemary) 유래인 것을 특징으로 하는 피부 색소 침착 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물.
8. 제6항에 있어서, 상기 피부 색소 침착 질환은 멜라닌 색소의 합성 증가로 피부에 국소적으로 발생하고, 기미, 주근깨, 흑색점, 모반, 약물에 의한 색소 침착, 염증 후 색소 침착, 및 피부염에서 발생하는 과색소 침착에서 선택된 하나 이상의 질환인 것을 특징으로 하는 피부 색소 침착 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물.
9. 제6항에 있어서, 상기 피부 색소 침착 질환의 치료 및 예방은 티로시나아제 단백질 발현 또는 멜라닌의 생성을 억제함으로써 나타나는 것을 특징으로 하는 피부 색소 침착 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물.
10. 제6항에 있어서, 상기 베르베논의 함량은 조성물 총 중량에 대해 0.0001% 내지 10%로 함유되는 것을 특징으로 하는 피부 색소 침착 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물.
11. 제6항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 피부 색소 침착 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물은 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제 제형인 것을 특징으로 하는 피부 색소 침착 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물.
12. 베르베논 (verbenone)을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 식품 조성물.
13. 베르베논 (verbenone)을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 음료 조성물.

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