KR20200028412A

KR20200028412A - 보존 용액

Info

Publication number: KR20200028412A
Application number: KR1020207003439A
Authority: KR
Inventors: 테렌스 사이먼 코빗; 말고시아 야르몰로비치; 클레어 랜케스터; 예레미 피터 앨런 롯지; 올루순 올라레와주; 데이비드 존 포츠
Original assignee: 오르건 프리저베이션 솔루션스 리미티드
Priority date: 2017-07-14
Filing date: 2018-07-13
Publication date: 2020-03-16
Also published as: US11172674B2; IL271919B; US20200221689A1; BR112020000781A2; PL3651576T3; PE20210039A1; CA3068361A1; JP2020527601A; GB2571803B; EP3651576B1; IL271919A; CN110868854A; CL2020000099A1; US20220087251A1; WO2019012299A1; AU2018300228A1; EP3651576C0; ES2966887T3; GB2571803A; GB201811566D0

Abstract

본 발명은 세포, 조직 및/또는 기관의 보존을 위한 보존 용액을 개시하며, 상기 용액은 (i) 주사용 증류수; (ii) 적어도 하나의 당류; (iii) pH 완충 특성을 갖는 적어도 하나의 성분; (iv) 칼슘 수송 차단 특성 또는 항-칼슘 작용 활성을 갖는 임의의 적어도 하나의 성분; (v) 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 또는 아스피린; 및 (vi) 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 또는 글루타민을 포함하고, 아세트아미드가 부재하거나, 및/또는 아스피린이 존재하면 글루타민이 부재하고, 글루타민이 존재하면 아스피린이 부재한다.

Description

보존 용액

본 발명은 혈액 공급이 없는 상태에서 세포를 생존 가능하게 유지하는 보존 용액 또는 냉장 보존 용액; 이식, 수술, 실험 및 시험관 내에서 세포, 조직 및/또는 기관의 손상을 방지하기 위한 그 사용 방법; 그 보존, 플러시 또는 플러시 보존, 처리 방법; 그 제조 방법, 및 그 용액을 포함하는 부분 키트에 관한 것이다.

보다 구체적으로, 본 발명은 살리실산 및/또는 글루탐산; 및 이들의 염을 포함하는, 본 명세서에 기술된 보존 용액 또는 냉장 보존 용액에 관한 것이다.

장기 이식은 현재 신장, 간, 심장, 폐, 췌장 및 내장에 대해 가능하다. 회수 시, 이식 장기는 보존 용액으로 혈관을 통해 플러싱된다(flushed). 이 용액은 장기 온도 감소, 세포 팽창 방지, 무산소 라디칼 제거, pH 조절, 허혈성 손상 감소, 장기가 신체 밖에서 유지될 수 있는 안전 시간 연장 및 재관류시 장기 회복을 용이하게 하도록 설계된다.

중요한 플러시 용액은 1967년 Belzer와 1969년 Collins에 의해 도입된 후, Euro-Collins(EC), Marshall(1976), Bretschneider(Isemer et al 1988 참조) 등으로 수정되었다. 모든 용액 중에서 가장 성공적인 위스콘신 대학 용액(UW)은 1988년 Belzer와 그의 동료들에 의해 도입되었다. 개선된 플러시 보존 및 냉장 보존이 여전히 필요하다. 압도적인 증거는 고품질의 이식편(graft)이 더 나은 즉각적인 기능과 더 긴 기능적 이식편 수명을 모두 제공한다는 것을 보여준다.

단지 인산 나트륨과 수크로오스만을 포함하는 간단한 플러시 용액이 1982년 Andrews and Coffey와 1983년 Coffey and Andrews에 의해 허혈성 손상으로부터 신장 세관의 형태를 보호하기 위해 제시되었다.

국제 특허 출원 번호 WO 02/41696(Potts, Lodge)은 혈액 공급이 없는 상태에서 세포를 보존하기 위한 플러시 보존 용액을 기술하는데, 상기 용액은:

주사용 증류수;

단당류, 이당류, 삼당류 또는 다당류와 같은 적어도 하나의 당류;

pH 완충 특성을 갖는 적어도 하나의 성분(즉, pH 완충제);

칼슘 수송 차단 특성 또는 항-칼슘 작용 활성을 갖는 적어도 하나의 성분(즉, 칼슘 수송 차단제);

글루타민과 같은 임의의 아미노산; 및

아스피린과 같은 혈액 응고를 방지하기 위한 임의의 트롬복산 억제제;

를 포함한다.

따라서, 공학적으로 생성된 세포, 조직 및 기관을 포함하여, 세포, 조직 및 기관의 연장된 보존을 가능하게 하고, 간, 신장, 소장 및/또는 췌장, 사지, 몸 전체 또는 실험에서의 이식과 같은 따뜻한 또는 차가운 모든 허혈 상황을 포함하여, 이식 및 수술에서 개선된 융통성, 효과 및 재관류를 제공하는, 상업적으로 개선되며 실용적이며 효과적인 보존 용액에 대한 요구가 여전히 남아 있다.

본 발명자들은 WO 02/41696의 종래 기술 용액에서, 아스피린(아스피린은 아세틸 살리실산의 일반적인 명칭임)이 살리실산을 생성하기 위해 분해되는 반면, 글루타민은 글루탐산으로 분해된다는 것을 발견하였다.

아스피린의 분해는 살리실산과 아세트산을 생성하고, 글루타민의 분해는 글루탐산과 암모니아를 생성할 것이다. 더욱이, 본 발명자들은 아세트산 및 암모니아가 세포, 조직 및 기관에 잠재적으로 손상을 줄 수 있고, 그들 모두가 보존 용액의 저장시 증가될 수 있는 유해한 악취를 발생시킬 수 있기 때문에, 보존 용액에서 바람직하지 않다는 것을 발견하였다.

또한, 본 발명자들은 시간이 지남에 따라 아세트산 및 암모니아가 WO 02/41696의 종래 기술 용액에서 함께 반응하여 아세트아미드를 형성할 수 있음을 발견하였다. 아세트아미드는 피부 자극제로 인식되며, 간을 손상시킬 수 있는 유해 물질로 인식된다.

따라서, 아스피린을 살리실산으로 대체 및/또는 글루타민을 글루탐산 또는 그의 염으로 대체함으로써, 각각 생성된 아세트산 및/또는 암모니아의 양이 최소화되거나 완전히 제거될 수 있다. 예들에서, 보존을 위해 본 발명에 따른 용액의 사용은 비교 용액과 비교할 때, 보존 동안 세포 및 조직의 손상을 감소시키는 것으로 입증되었다.

종래 기술의 용액에서, 아스피린은 항-염증성 트롬복산 억제제로서 첨가된다. 본 발명자들은 아스피린이 생략되고 살리실산이 첨가되면, 살리실산은 항-염증 특성(즉, 항-염증성임)을 가진다는 것을 발견하였다. 또한, 종래 기술의 용액에서, 글루타민은 에너지를 제공할 수 있는 지지 분자로서 첨가된다. 본 발명자들은 글루타민이 생략되면, 글루탐산으로 대체될 수 있으며, 이 경우 글루탐산은 세포, 조직 및/또는 기관에 대한 대체 에너지 기질로서 작용함을 발견하였다.

또한, 본 발명자들은 본 발명의 신규한 용액이 더 이상 아스피린 및/또는 글루타민의 분해에 대한 어떠한 염려도 없게 하며, 대체 성분들, 예를 들어 살리실산 및/또는 글루탐산의 양이 결과적으로 감소될 수 있음을 발견하였다.

따라서, 본 발명의 제 1 양태에 따르면, 혈액 공급이 없는 상태에서 세포, 조직 및/또는 기관의 보존을 위한 보존 용액이 제공되며, 상기 용액은:

(i) 주사용 증류수;

(ii) 적어도 하나의 당류, 예컨대 단당류, 이당류, 삼당류 또는 다당류;

(iii) pH 완충 특성을 갖는 적어도 하나의 성분;

(iv) 칼슘 수송 차단 특성 또는 항-칼슘 작용 활성을 갖는 임의의 적어도 하나의 성분;

(v) 유리 형태(free form) 또는 염 형태의 살리실산, 또는 아스피린; 및

(vi) 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 또는 글루타민;

을 포함하고,

아세트아미드가 부재하거나, 및/또는 아스피린이 존재하면 글루타민이 부재하고, 글루타민이 존재하면 아스피린이 부재한다.

"부재하다" 또는 "실질적으로 부재하다"라는 용어는 약리학적 활성 농도 이하; 또는 당 업계에 공지된 통상적인 방법으로는 검출될 수 없음을 의미하는 것으로 당업자에 의해 이해될 것이다. 이러한 방법에는 비색 분석법 및 GCMS가 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다.

추가 조건으로, 아스피린 및 글루타민 중 하나만 존재하면, 다른 것의 분해 생성물이 부재하고, 즉 아스피린이 존재하면 암모니아가 부재하고; 글루타민이 존재하면 아세트산이 부재한다.

유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 또는 아스피린(v)은 적절하게 혈액 응고를 방지하는 역할을 한다. 바람직하게는, 보존 용액은 혈액 응고를 방지하기 위해 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 또는 아스피린(v)의 소정 양을 포함한다.

유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 또는 글루타민(vi)는 에너지 기질로서 적합하게 작용한다. 바람직하게는, 보존 용액은 에너지 기질로서 작용하기 위해 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 또는 글루타민(vi)을 포함한다.

본 발명의 한 특정 양태에서, 본원에 기술된 보존 용액은:

(v) 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 또는 아스피린; 및

(vi) 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 또는 글루타민;을 포함하고,

여기서, 아세트아미드가 부재하거나, 및/또는 아세트산과 암모니아 중 적어도 하나가 부재한다.

본 발명의 추가 양태에 따르면, 세포, 조직 및/또는 기관의 보존을 위한 보존 용액이 제공되며, 상기 용액은:

(i) 주사용 증류수;

(iii) pH 완충 특성을 갖는 적어도 하나의 성분;

(v) 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 또는 아스피린; 및

여기서, (v)가 아스피린이면 (vi)는 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산이고, (vi)가 글루타민이면 (v)는 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산이다.

바람직하게는, 보존 용액은 본원에 기재된 바와 같이 (i) 내지 (vi)의 혼합물을 포함함으로써, 아세트아미드가 부재하는 상기 보존 용액을 제공한다. 예를 들어, 아스피린 및 글루타민 중 하나가 존재하고 아세트아미드가 부재하거나, 및/또는 아세트산과 암모니아 중 하나가 존재하고 아세트아미드가 부재하거나, 또는 아스피린과 글루타민 모두, 그리고 아세트산과 암모니아 모두가 부재하고, 아세트아미드가 부재한다.

본 발명의 일 양태에서, 혈액 공급이 없는 상태에서 세포, 조직 및/또는 기관의 보존을 위해 본원에 기술된 보존 용액이 제공된다.

본원의 실시 예에서, 본원에 기술된 보존 용액을 포함하는 제조된 보존 용액이 제공되며, 여기서 아세트아미드는 부재하며, 예를 들어 아스피린 및 글루타민 중 하나가 존재하고 아세트아미드는 부재하거나, 및/또는 아세트산과 암모니아 중 하나가 존재하고 아세트아미드가 부재하거나, 또는 아스피린과 글루타민 모두, 그리고 아세트산과 암모니아 모두가 부재하고, 아세트아미드가 부재한다.

제조된 보존 용액은 예를 들어 UV 광이 부재하는 무산소 조건 하에서, 저장을 위해 포장될 수 있다. 본원에 기술된 제조된 보존 용액은 멸균되고 UV 광이 부재하는 무산소 조건 하에서, 저장하기 위해 포장된다.

본 발명의 일 양태에 따르면, 보존 용액은 플러시(flush) 보존 용액이다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 보존 용액은 냉장 보존 용액이다.

일 실시 예에서, (v)는 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산이고; 및

(vi)는 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 또는 글루타민이고;

아스피린이 부재하면, 바람직하게는 아스피린 및 아세트아미드가 부재하거나, 및/또는 아세트산 및 아세트아미드가 부재한다.

다른 실시 예에서, (v)는 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 또는 아스피린이고; 및

(vi)는 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산이고;

글루타민이 부재하면, 바람직하게는 글루타민 및 아세트아미드가 부재하거나, 및/또는 암모니아 및 아세트아미드가 부재한다.

다른 실시 예에서, (v)는 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산이고; 및

(vi)는 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산이고;

글루타민 및 아스피린이 부재하면, 바람직하게는 아세트아미드가 추가로 부재하거나, 및/또는 아세트산, 암모니아 및 아세트아미드가 부재한다.

본 발명의 바람직한 보존 용액에서, 아스피린은 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산으로 대체되고, 글루타민은 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산으로 대체되어, 아스피린 및 글루타민 모두가 용액으로부터 실질적으로 부재하는데, 바람직하게는 아세트아미드가 추가로 부재하거나, 및/또는 아세트산, 암모니아 및 아세트아미드가 부재한다.

본 발명의 다른 실시 예에서, 다음을 포함하는 본원에 기술된 보존 용액이 제공된다:

(v) 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 및/또는 아스피린; 및

(vi) 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 및/또는 글루타민;

여기서, 아스피린이 존재하면 글루타민이 부재하고, 글루타민이 존재하면 아스피린이 부재하고; 및/또는 아스피린 및/또는 아세트아미드 및/또는 아세트산이 존재하면, 존재하는 살리실산의 양이, 예를 들어 존재하는 임의의 아세트산 및 임의의 아세트아미드의 양들의 합에 의해 결정되는 바와 같이, 아스피린으로부터의 분해에 기인할 수 있는 양을 초과하고; 및/또는

글루타민 및/또는 아세트아미드 및/또는 암모니아가 존재하면, 존재하는 글루탐산의 양은, 예를 들어 존재하는 임의의 암모니아 및 임의의 아세트아미드의 양들의 합에 의해 결정되는 바와 같이, 글루타민으로부터의 분해에 기인할 수 있는 양을 초과한다.

특히, 본 명세서에 기술된 보존 용액은 다음을 포함하여 제공된다:

(vi) 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 및/또는 글루타민;

단, (v)가 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 및 아스피린일 경우, (vi)가 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산 및 글루타민이고;

다만, 아스피린이 존재하면 글루타민이 부재하고, 글루타민이 존재하면 아스피린이 부재하고; 및/또는

여기서, 아스피린 및/또는 아세트아미드 및/또는 아세트산이 존재하면, 존재하는 살리실산의 양은, 예를 들어 존재하는 임의의 아세트산 및 임의의 아세트아미드의 양들의 합에 의해 결정되는 바와 같이, 아스피린으로부터의 분해에 기인할 수 있는 양을 초과하고; 및/또는

본 명세서에서 다음을 포함하는 것으로 기술된 바와 같은 보존 용액이 제공되며:

(v) 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 및 선택적으로 추가적인 아스피린; 및

(vi) 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 및/또는 글루타민;

아세트아미드가 부재하거나, 및/또는 아스피린이 존재하면 글루타민이 부재하고, 글루타민이 존재하면 아스피린이 부재하고; 또는

아스피린 및/또는 아세트아미드 및/또는 아세트산이 존재하면, 존재하는 살리실산의 양은, 예를 들어 존재하는 임의의 아세트산 및 임의의 아세트아미드의 양들의 합에 의해 결정되는 바와 같이, 아스피린으로부터의 분해에 기인할 수 있는 양을 초과하고; 및/또는

본 명세서에서 다음을 포함하는 것으로 기술된 바와 같은 보존 용액이 추가로 제공되며:

(vi) 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 및/또는 글루타민;

단, (v)가 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산이고 아스피린이 부재하는 경우, (vi)는 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 및 글루타민이다.

본 발명에 따르면, 다음을 포함하는 것으로 기술된 보존 용액이 제공되며:

(vi) 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산 및 글루타민.

(v) 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 및 아스피린; 및

(vi) 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 및/또는 글루타민.

(v) 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 및 아스피린; 및

(vi) 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산 및 글루타민.

(v) 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 및 아스피린; 및

(vi) 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 또는 글루타민.

(v) 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산; 및

(vi) 유리 형태 또는 염 형태 및 글루타민의 글루탐산.

(vi) 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 및 선택적으로 추가적인 글루타민;

아세트아미드가 부재하거나, 및/또는 아스피린이 존재하면 글루타민이 부재하고, 글루타민이 존재하면 아스피린이 부재하고;

또는 글루타민 및/또는 아세트아미드 및/또는 암모니아가 존재하면, 존재하는 글루탐산의 양은, 예를 들어 존재하는 임의의 암모니아 및 임의의 아세트아미드의 양들의 합에 의해 결정된 바와 같이, 글루타민으로부터의 분해에 기인할 수 있는 양을 초과하고; 및/또는

아스피린 및/또는 아세트아미드 및/또는 아세트산이 존재하면, 존재하는 살리실산의 양은 예를 들어 존재하는 임의의 아세트산 및 임의의 아세트아미드의 양들의 합에 의해 결정되는 바와 같이, 아스피린으로부터의 분해에 기인할 수 있는 양을 초과한다.

본 발명의 이러한 양태에 따르면, 다음을 포함하는 것으로 기술된 보존 용액이 제공되며:

단, (vi)가 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산이고 글루타민이 부재하는 경우, (v)는 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 및 아스피린이다.

(v) 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 및 아스피린; 및

(vi) 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 및 선택적으로 추가적인 글루타민.

(vi) 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산 및 글루타민.

(v) 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 및 아스피린; 및

(vi) 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 및 글루타민.

(v) 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 또는 아스피린; 및

(vi) 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산 및 글루타민.

(v) 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 및 아스피린; 및

(vi) 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산.

의심의 여지를 없애기 위해, 본원의 세포, 조직 및 기관에 대한 언급은 공학적으로 생성/조작된 세포, 조직 및 기관을 포함하는 것임을 당업자는 이해할 것이다.

본 발명의 일 양태에서, 칼슘 수송 차단 특성 또는 항-칼슘 작용 활성을 갖는 적어도 하나의 성분이 본 발명의 보존 용액에 존재한다.

본 발명의 다른 양태에서, 칼슘 수송 차단 특성 또는 항-칼슘 작용 활성을 갖는 성분은 본 발명의 보존 용액에 존재하지 않는다.

본 발명의 보존 용액의 일 양태에서, 혈액 응고를 방지하기에 충분한 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산의 양은 0.5mmol/L 미만, 예를 들어 약 0.025 내지 0.3mmol/L 미만이다. 대안적으로, 혈액 응고를 방지하기에 충분한 살리실산의 양은 유리 형태 또는 염 형태의 약 0.025 내지 약 0.275mmol/L, 바람직하게는 약 0.25mmol/L의 살리실산이다.

대안적으로, 아스피린은 존재한다면 약 0.3mmol/L 내지 약 1.0mmol/L, 예를 들어 0.5mmol/L의 양으로 적절하게 존재한다.

본 발명의 보존 용액의 다른 양태에서, 유리 형태 또는 염 형태로 존재하는 글루탐산의 양은 20mmol/L 미만이다. 대안적으로, 존재하는 글루탐산의 양은 유리 형태 또는 염 형태의 약 2 내지 약 15mmol/L, 바람직하게는 약 2 내지 약 12mmol/L, 바람직하게는 약 3mmol/L의 글루탐산이다.

대안적으로, 글루타민은 존재한다면 약 15mmol/L 내지 약 30mmol/L, 예를 들어 대략 20mmol/L의 양으로 적절하게 존재한다. 대안적으로, 존재하는 글루타민의 양은 약 2 내지 15mmol/L 미만이다.

동일하거나 상이할 수 있는 살리실산 및/또는 글루탐산의 염은 약리학적으로 허용되는 염, 즉 모 화합물의 원하는 약리학적 활성을 갖는 염일 것이다. 특히, 이러한 염은 세포, 조직 및/또는 기관에 무독성일 것이다. 이러한 염은 일반적으로 살리실산 및/또는 글루탐산에 존재하는 산성 양성자가 금속 이온, 예를 들어 알칼리 금속 이온 또는 알칼리 토금속 이온으로 대체될 때 형성될 것이다. 단지 예로서, 알칼리 금속 염은 나트륨 또는 칼륨 등을 포함한다. 단지 예로서, 알칼리 토금속 염은 칼슘 또는 마그네슘 등을 포함한다.

플러시 용액은 이들 성분으로만 구성될 수 있으며, 이 경우, 보편적인 세포 유형의 보존 및 기능화, 특히 단순 세포 시스템의 보존에 적합하고, 대안적으로 이는 특히 장기 또는 살아있는 조직과 같은 복잡한 세포 시스템의 보존에서, 작은 또는 큰 동물뿐만 아니라, 특히 간, 신장, 소장 및/또는 췌장과 같은 인간 장기에 대해, 세포의 원하는 유형 또는 기능의 보존에 특히 적합한 하나 이상의 추가 치환기들과 함께 제공될 수 있다.

본 발명의 이러한 양태에 따르면, 다음의 조합을 포함하는, 간, 신장, 소장 및 췌장 보존을 위한 보존 용액이 제공된다:

(i) 주사용 증류수;

(ii) 이당류;

(iii) pH 완충 특성을 갖는 적어도 하나의 성분;

(iv) 적어도 하나의 칼슘 수송 또는 채널 차단제;

(v) 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 또는 아스피린; 및

(vi) 불투과성 격리(sequestering) 음이온, 무기 용질, 무산소 라디칼 및 콜로이드 삼투에 효과적인 성분, 및 상기 정의된 임의의 선택적 추가 성분과 함께; 상기 정의된 바와 같은 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 또는 글루타민.

다음의 조합을 포함하는, 간, 신장, 소장 및 췌장 보존을 위한 보존 용액이 추가로 제공되며:

(i) 주사용 증류수;

(ii) 수크로오스;

(iii) Na₂HP0₄ 및 NaH₂P0₄;

(iv) 딜티아젬;

(v) 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 또는 아스피린; 및

(vi) 락토비온산, KOH 및 NaOH, 글루타티온 및 알로푸리놀 및 PEG, 및 상기 정의된 바와 같은 임의의 선택적 추가 성분과 함께; 상기 정의된 바와 같은 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 또는 글루타민.

본 발명의 보존 용액은 독성 암모니아 및 아세트산의 부재로 인해, 보존 동안 손상이 감소되고, 보존 기간을 연장할 수 있는 가능성을 가지기에, 기존의 용액을 개선하는 측면에서 많은 이점을 갖는다. 이에 더하여, 이러한 용액을 상업적으로 실행 가능할 수 있는 관련 편의성 및 비용 영향과 함께 특정 원하는 용액을 생성할 수 있는 키트가 제공될 수 있다.

본 발명은 본원에 정의된 보존 용액이 실험에 기초하여, 그리고 근원적인 보존 메커니즘을 합리화하려는 시도없이, 보편적으로 허용/인정될 수 있는 것으로 밝혀졌다.

본 발명의 보존 용액의 모든 성분은 적용 가능한 경우, 국가 또는 국제 약전 순도 표준을 충족시킨다. 주사용 증류수는 전형적으로 멸균 전에 정제 및 탈-이온화된다.

당은 수크로오스, 라피노스 및 만니톨 및 이들의 조합으로부터 선택된다. 바람직한 당류는 수크로오스이다. 당류는 약 50mmol/L 내지 약 150mmol/L, 예를 들어 약 100mmol/L의 양으로 존재할 수 있다.

pH 완충제는 인산 나트륨 완충제, 인산 칼륨 완충제 등, 바람직하게는 Na₂HP0₄, NaH₂P0₄, K₂HP0₄, KH₂P0₄ 등; 및 이들의 조합으로부터 선택된다. pH 완충제는 약 15mmol/L 내지 약 75mmol/L, 예를 들어, 약 15mmol/L 내지 약 20mmol/L 또는 약 40 내지 약 70mmol/L의 양으로 존재할 수 있다.

본 발명의 보존 용액은 바람직하게는 원하는 범위의 약학적으로 허용되는 물리적 특성을 준수하도록 제형화된다. 바람직하게는 용액의 pH는 6.5-7.8, 보다 바람직하게는 6.5-7.0, 가장 바람직하게는 6.8-7.0 범위이다. pH는 일반적으로 실온, 예를 들어 약 20 ℃에서 측정된다.

선택적으로 첨가된 칼슘 수송 차단제 또는 항-칼슘 활성제는 임의의 공지된 칼슘 수송 또는 채널 차단제, 예컨대 니카르디핀, 딜티아젬, 베라파밀, 니솔디핀, 클로르프로마진 또는 트리플루오로페라진; 및 이들의 조합물 및 이들의 대사물(metabolites)로부터 선택된다. 바람직하게는 칼슘 수송 또는 채널 차단제는 니카르디핀 및/또는 딜티아젬; 또는 이들의 대사물이다. 칼슘 수송 또는 채널 차단제는 약 0.0005 mmol/L 내지 약 1.0 mmol/L, 예를 들어 약 0.005 mmol/L의 양으로 존재할 수 있다. 칼슘 수송 또는 채널 차단제가 니카르디핀이면, 니카르디핀은 약 0.0005 mmol/L 내지 약 1.0 mmol/L, 예를 들어 약 0.005 mmol/L의 양으로 존재할 수 있다. 칼슘 수송 또는 채널 차단제가 딜티아젬이면, 딜티아젬은 0.0005 mmol/L 내지 약 1.0 mmol/L, 예를 들어, 약 0.022 mmol/L의 양으로 존재할 수 있다.

이러한 이론에 제한되지 않고, 일반적으로 허용되는 약리학적 및 생리학적 활성에 기초하여 기능별 성분을 참조할 수 있지만, 의심의 소지를 없애기 위해, 열거된 성분은 그에 해당하는 부가적인 또는 상이한 기능을 제공할 수 있으며, 이는 그것의 제한 사항으로 보지 말아야 한다. 열거된 것과 동등한 기능적 균등물이 본 발명의 범위 내에 있는 고려될 수 있다.

다른 성분들이 보존 용액에 존재할 수 있다. 달리 지시되지 않는 한, 다른 성분은 전형적으로 소량으로, 예를 들어 최대 1mmol/L의 범위로 존재할 것이다.

바람직하게는, 본 발명의 보존 용액은 하기로부터 선택된 하나 이상의 추가 성분을 포함한다:

세포 내로 주로 불투과성인 적어도 하나의 음이온, 바람직하게는 불투과성 격리 음이온; 및

콜로이드 삼투 특성(즉, 콜로이드 삼투)을 갖는 적어도 하나의 성분.

불투과성 격리 음이온은 바람직하게는 락토비오네이트 또는 락토비온산을 포함한다. 불투과성 격리 음이온이 존재하면, 이는 약 15mmol/L 내지 약 75mmol/L, 예를 들어 약 15mmol/L 내지 약 20mmol/L 또는 약 40mmol/L 내지 약 70 mmol/L의 양일 수 있다.

콜로이드 삼투는 바람직하게는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), (젤로푸신(Gelofusine)과 같은) 숙시닐화된 젤라틴, 피콜(Ficoll)(다당류) 및 전분 생성물; 및 이들의 조합으로부터 선택된다. 콜로이드 삼투 특성을 갖는 성분이 존재하면, 약 0.5 mmol/L 내지 약 3.0 mmol/L, 예를 들어 약 0.75 mmol/L 내지 약 1.33 mmol/L, 예를 들어 약 1.0mmol/L 및 20,000 MW일 수 있다 .

대안적으로 또는 추가적으로, 본 발명의 보존 용액은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 성분을 포함할 수 있다:

무기 또는 유기 용질;

칼슘 킬레이트 특성을 갖는 성분 또는 성분들(즉, 칼슘 킬레이터); 및

철 킬레이트 특성을 갖는 성분 또는 성분들(즉, 철 킬레이터).

바람직하게는, 무기 또는 유기 용질은 무기 용질을 포함하고, 양이온 및/또는 음이온, 예를 들어 Na⁺, K⁺, Cl^-, OH^-등으로부터 선택된 전해질 등 및 이들의 조합이다. 본 발명의 바람직일 양태에서, 용질은 무기 용질, 예컨대 NaCl이다. 무기 또는 유기 용질이 존재하면, 이는 약 15mmol/L 내지 약 75mmol/L, 예를 들어 약 15mmol/L 내지 약 20mmol/L 또는 약 40mmol/L 내지 약 70mmol/L의 양일 수 있다.

바람직하게는, 칼슘 킬레이트는 시트레이트 또는 EGTA(에틸렌 글리콜-비스(β-아미노에틸 에테르)-N,N,N',N'-테트라 아세트산)를 포함하고, 철 킬레이트는 EDTA(에틸렌 디아민 테트라 아세트산)를 포함한다.

대안적으로 또는 추가적으로, 본 발명의 보존 용액은 다음으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함할 수 있다:

글루탐산, 및/또는 글루타민에 더하여, 적어도 하나의 (추가의) 아미노산;

무산소 라디칼 또는 무산소 라디칼의 생성에 효과적인 적어도 하나의 성분;

에너지 공급 시스템의 적어도 하나의 성분, 또는 에너지 공급 시스템 또는 케톤체에 영향을 미치는 적어도 하나의 성분; 및

동결 보호 작용을 갖는 적어도 하나의 성분.

바람직하게는, 추가의 아미노산은 글리신 및 n-아세틸시스테인 및 이들의 조합으로부터 선택된다. 추가적인 아미노산 성분이 존재하면, 약 1mmol/L 내지 약 30mmol/L, 바람직하게는 약 3mmol/L 내지 약 12mmol/L, 예를 들어 약 10mmol/L의 양일 수 있다.

바람직하게는, 무산소 라디칼 억제제는 알로푸리놀 및 환원된 글루타티온, 보다 바람직하게는 이들의 조합으로부터 선택된다. 무산소 라디칼에 효과적인 성분이 존재하면, 이는 약 0.2 mmol/L 내지 약 5 mmol/L, 예를 들어 약 3 mmol/L 내지 약 5 mmol/L의 양일 수 있다. 일반적으로, 본원에 정의된 무산소 라디칼 억제제의 양은 무산소 라디칼 억제제의 총량을 지칭한다. 예를 들어, 무산소 라디칼 억제제가 알로푸리놀 및 환원된 글루타티온의 조합을 포함하는 경우, 조합된 무산소 라디칼 억제제의 양은 약 0.2 mmol/L 내지 약 5 mmol/L의 양일 수 있다.

바람직하게는, 에너지 공급 시스템 성분은 아데노신을 포함한다. 에너지 공급 성분이 존재하면, 이는 최대 약 20mmol/L, 예를 들어 약 5 내지 약 20mmol/L, 예컨대 약 5mmol/L의 양일 수 있다.

바람직하게는, 케톤체는 베타-하이드록시 부티레이트를 포함한다.

동결 보호제는 용액에 존재할 때 0 ℃ 이하의 온도에 노출된 용액에서 얼음 결정 형성을 감소시키거나 억제할 수 있는 화합물이다. 따라서, 동결 보호제의 사용은 세포, 조직 또는 기관이 약 -20 ℃ 내지 약 4 ℃의 온도에서 저장될 수 있게 한다. 바람직하게는, 동결 보호제는 글리콜, 예컨대 프로필렌 글리콜, DMSO, 당류, 탄수화물, 지질, 자일로만난과 같은 당지질, 당 단백질, 단백질 또는 폴리펩티드 또는 폴리올; 또는 이들의 조합으로부터 선택된다. 동결 보호제가 존재하면, 이는 약 5 내지 약 100 mg/mL의 양일 수 있다.

대안적으로 또는 추가적으로, 본 발명의 보존 용액은 다음 중에서 선택된 특정 기능을 위한 추가 성분을 포함할 수 있다:

세포 내 신호 전달 시스템의 적어도 하나의 성분, 또는 이 시스템을 변형시키는 적어도 하나의 성분, 바람직하게는 단백질 키나제 억제제 또는 칼모듈린 억제제; 및

막 안정화 작용을 갖는 적어도 하나의 성분, 바람직하게는 라놀라진 등.

바람직하게는, 당 성분(ii)은 50-150mmol/L의 범위, 예를 들어 대략 100mmol/L의 양으로 존재하고;

pH 완충제 성분(iii)은 15-75mmol/L의 범위, 예를 들어 대략 15-20 또는 40-70mmol/L의 총량으로 존재하고;

불투과성 격리 음이온은 15-75 mmol/L의 범위, 예를 들어 대략 15-20 또는 40-70 mmol/L의 총량으로 존재하고;

무기 또는 유기 용질 성분은 15-75 mmol/L의 범위, 예를 들어 대략 15-20 또는 40-70 mmol/L의 총량으로 존재하고;

추가 아미노산 성분은 5-30 mmol/L의 범위, 바람직하게는 5-12 mmol/L, 예를 들어 대략 10 mmol/L의 양으로 존재하고;

무산소 라디칼에 대해 효과적인 성분은 최대 5mmol/L의 범위, 예를 들어 대략 3-5mmol/L의 총량으로 존재하고;

에너지 공급 성분은 최대 20 mmol/L의 범위, 예를 들어 5 mmol/L의 양으로 존재하고;

콜로이드 삼투 특성을 갖는 성분은 0.5-3.0 mmol/L의 범위, 예를 들어 대략 0.75-1.33 mmol/L, 예컨대 1.0 mmol/L 및 20,000 MW의 양으로 존재하고;

칼슘 수송 차단 특성(iv)을 갖는 성분이 존재하면, 칼슘 수송 차단제는 예를 들어 니카르디핀 또는 딜티아젬일 수 있다. 니카르디핀은 0.0005-1.0 mmol/L의 범위, 예를 들어 0.005 mmol/L의 양으로 존재하고; 딜티아젬은 0.0005-1.0 mmol/L의 범위, 예를 들어 0.022 mmol/L의 양으로 존재할 수 있다.

특정 성분이 2 종 이상으로 존재하면, 상대적인 양은 중요하거나 중요하지 않을 수 있다. 무산소 라디칼에 대해 효과적인 바람직한 성분은 대략 3mmol/L의 환원 글루타티온, 및 0.35 내지 0.4, 더욱 바람직하게는 0.4mmol/L의 알로푸리놀이다.

바람직한 무기 또는 유기 용질 성분은 다음과 같은 전해질을 포함한다:

Na⁺ 15-150 mmol/L, 예를 들어 30 mmol/L

K⁺ 0-25 mmol/L, 예를 들어 15 mmol/L

Cl^- 0-100 mmol/L

OH^- 0-75mmol/L

바람직하게는 본 발명에 따른 용액은 자외선이 부재하는 상태에서 무산소 조건하에 제조 및 저장된다.

성분들(i)-(vi)를 포함하는 정의된 용액이 장기간 동안 저장될 수 있고, 임상 사용에 필요한 추가 성분(예를 들어 헤파린)이 사용 직전에 첨가될 수 있는 것에서 특히 유리하다. 본 발명의 용액의 장점은 바람직하지 않은 분해 생성물의 생성없이, 용액이 장기간 동안 저장될 수 있다는 점이다. 보다 구체적으로, 용액은 아세트산 및 암모니아 중 하나 또는 둘 다의 생성없이, 및 아세트아미드의 생성없이, 저장될 수 있다.

대안적으로, 용액은 각각 살리실산 및 글루탐산의 몰 당량 미만의 양으로, 아세트산 및 암모니아 중 하나 또는 둘 다의 생성, 및/또는 아세트아미드의 생성과 함께, 저장될 수 있다.

본원에 정의된 본 발명의 보존 용액은 바람직하게는 특정 기능을 위한 추가 성분과 함께 기본 성분들(i)-(vi)을 포함한다. 장기 보존에 사용하기 위한 용액은 특히 단순 세포 시스템을 보존하기 위한 것보다 더 복잡하지만, 그럼에도 불구하고 용액은 비교적 간단할 수 있음을 발견했다.

바람직하게는, 신장, 간 및 췌장과 같은 복부 기관; 및 장 및 소장 등을 위한 보존 용액은 불투과성 격리 음이온 성분으로부터 선택된 적어도 하나의 성분; 및 콜로이드 삼투 특성을 갖는 성분; 보다 바람직하게는 다음으로부터 추가적으로 선택된 하나 이상의 성분들과 함께, 본원에 정의된 성분들(i)-(vi)을 포함한다:

무기 또는 유기 용질 성분;

추가의 아미노산 성분;

무산소 라디칼에 효과적인 성분; 및

에너지 공급 성분.

바람직하게는, 간, 신장, 소장 및 췌장 보존을 위한 보존 용액은 다음의 조합을 포함한다:

(i) 주사용 증류수;

(ii) 이당류;

(iii) pH 완충 특성을 갖는 적어도 하나의 성분;

(iv) 적어도 하나의 칼슘 수송 또는 채널 차단제;

(v) 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 또는 아스피린; 및

(vi) 불투과성 격리 음이온, 무기 용질, 무산소 라디칼 및 콜로이드 삼투에 효과적인 성분, 및 상기 정의된 임의의 선택적 추가 성분과 함께; 상기 정의된 바와 같은 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 또는 글루타민;

더 바람직하게는

(ii) 주사용 증류수;

(ii) 수크로오스;

(iii) Na₂HP0₄ 및 NaH₂P0₄;

(iv) 딜티아젬 또는 니카르디핀;

(v) 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 또는 아스피린; 및

(vi) 락토비온산, KOH 및 NaOH, 글루타티온 및 알로푸리놀 및 PEG, 및 상기 정의된 바와 같은 임의의 선택적 추가 성분과 함께; 상기 정의된 바와 같은 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 또는 글루타민; 보다 바람직하게는 물내 부피(volume in water)로 구성될 때, 여기서 정의된 임의의 추가 성분과 함께, 하기에 주어진 성분 종류, 보다 바람직하게는 열거된 특정 유형의 조합, 및 실질적으로 하기에 열거된 양의 조합을 포함한다:

단, (v)가 아스피린이면, (vi) 글루타민이 아니고;

가장 바람직하게는, 물내 부피로 구성될 때, 여기서 정의된 임의의 추가 성분과 함께, 실질적으로 하기에 열거된 양을 포함한다:

단, (v)가 아스피린이면, (vi)는 글루타민이 아니다.

또한, 놀랍게도, 본 발명에 따른 보존 용액의 성분들 효과는 특정 성분을 그의 주요 분해 생성물로 대체함으로써 개선된다는 것을 발견하였다. 이러한 이론에 제한되지 않고, 그러한 분해의 부산물은 보존 용액을 개별적으로 또는 조합하여 사용하는 동안, 원치 않는 독성 효과를 발휘할 수 있는 것으로 보인다. 예를 들어, 아세트산과 암모니아는 간에 손상을 줄 수 있는 아세트아미드를 형성한다. 이 독성 효과를 제거함으로써, 보존 용액의 유효성이 향상된다.

따라서, 본 발명에 따른 발견은 특정 치환기가 모든 세포 유형에 필수적인 주요 세포 기능을 보존하는데 필수적이며, 이들은 본원에 정의된 바와 같이 성분들(i) 내지 (vi)로 확인되었다. 이러한 용액이 단순 조직 또는 세포 시스템을 보존하는데 매우 효과적이거나 만족스러울 수 있지만, 비통상적이거나 보다 복잡한 세포 기능을 필요로 하거나 제공하는 기관 또는 세포 시스템을 보존하는 것이 요구되는 경우, 그것이 근육, 전기, 특정 막 활동, 에너지 공급 등의 기능을 제공하든, 그 요구되는 기능을 보존하도록 특히 지향된 치환기를 포함시킬 필요가 있다.

따라서, 본 발명은 특히 간, 신장, 소장 및 췌장 보존을 위해 본원에 정의된 보존 용액을 제공한다.

용액은 약학적으로 허용 가능한 조건 하에서 간단한 혼합물에 의해 당 업계에 공지된 방법에 의해 적합하게 제조된다. 바람직하게는, 성분들이 결정되고 원하는 몰 농도로 포함된다.

다양한 변경들이 용액의 효과에 특이적이거나 비특이적일 수 있고, 그 변경량이 유체의 효능에 영향을 미치지 않는다면, 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 간주될 것임을 이해해야 할 것이다. 반복 실험에 의해 많은 양의 검증을 필요로 하는 성분 유형의 선택 또한 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 간주된다.

본 발명의 추가의 양태에서, 보존 용액을 제조하는 방법이 제공되는데, 이는 만약 있다면, 콜로이드 삼투 특성을 갖는 성분 및 불안정한 성분, 예컨대 아스피린 또는 글루타민을 제외하고, 임의의 추가 성분들과 함께, 성분들 (i) 내지 (vi)를 순차적으로 물에 첨가하는 단계; 혼합물을 용해시키는 단계; 만약에 있다면 콜로이드 삼투 특성을 갖는 성분을 첨가하고, 용액을 거의 최대 부피까지 만드는 단계; 및 마지막으로 pH를 조절하여 최대 부피를 만들고, 살균하고, 0-4 ℃로 냉각시키는 단계를 포함한다. 용액은 저장될 수 있는데, 이는 필요하다면 사용 직전에 임의의 불안정한 성분(예를 들어, 아스피린 및/또는 글루타민)을 후속적으로 첨가할 수 있다. 본 발명의 이러한 양태에 따른 방법은 바람직하게는 감소된 온도, 보다 바람직하게는 0 내지 12 ℃, 가장 바람직하게는 0 내지 4 ℃의 범위에서, 제조된 저장용 용액을 무산소 조건 및 UV 광이 부재하는 상태에서 포장하는 단계를 포함할 수 있다.

추가의 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 방법에 의해 수득된 보존 용액이 제공된다.

본원의 실시 예에서, 성분들(i) 내지 (vi)을 물에 첨가하는 단계를 포함하는 방법에 의해 수득된 보존 용액이 제공된다.

본 발명의 다른 양태에서, 여기에서 정의된 보존 용액을, 혈액 공급이 없는 상태에서 세포를 보존하기 위하고, 특히 기관, 살아있는 조직 및 세포의 손상을 방지하기 위한 플러시 보존 용액 또는 냉장 보존 용액으로 사용하는 방법이 제공된다. 상기 용액은 작거나 큰 동물 또는 포유류, 특히 인간 세포, 조직 및 기관에 사용하기에 적합하다.

용액은 심장 박동 또는 비-심장 박동 기증자로부터 장기를 포함하는 이식에서, 따뜻하거나 차가운 허혈, 전 사지 또는 전신 보존의 임의의 상황을 포함하는 수술에서, 살아있는 조직에 대한 실험에서, 또는 공학적으로 생성된 세포, 조직 및 기관 등의 배양 및 보존에서 사용될 수 있다. 바람직하게는, 용액은 혈관 시스템을 통해 세포, 조직 또는 기관, 사지 또는 전신과 접촉하게 되는 플러시 용액으로서 사용되고, 선택적으로는 플러시된 세포, 조직 및 기관의 저장을 위한 보존 용액으로서 추가적으로 기능한다. 이 용액은 저체온 정체 저장 및 저체온 기계 관류 시스템 둘 다에서 세포, 조직, 기관의 장기 보존에 적합한다.

따라서, 본 발명은 특히 간, 신장, 소장 및 췌장 보존에 대해 본원에 정의된 보존 용액을 제공한다.

본 발명의 다른 양태에서, 세포들, 특히 살아있는 세포, 조직 또는 기관의 플러시, 보존 또는 플러시 보존하는 방법이 제공되며, 이에 의해 세포, 조직 또는 기관은 본원에 정의된 바와 같은 용액과 접촉하게 된다.

본 발명의 이러한 양태에 따르면, 간단한 저체온 저장을 위해 세포들, 특히 살아있는 세포, 조직 또는 기관의 플러시, 보존 또는 플러시 보존 방법이 제공되며, 이에 의해 세포, 조직 또는 기관은 다음을 포함하는 보존 용액과 접촉하게 된다:

(i) 주사용 증류수;

(iii) pH 완충 특성을 갖는 적어도 하나의 성분;

(v) 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 또는 아스피린; 및

(vi) 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 또는 글루타민;

아세트아미드가 부재하거나, 및/또는 아스피린이 존재하면 글루타민이 부재하고, 글루타민이 존재하면 아스피린이 부재하고; 보다 구체적으로, (v)가 아스피린이면, (vi)는 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산이고, (vi)가 글루타민이면, (v)는 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산이고;

이에 의해, 세포, 조직 또는 기관이 용액으로 플러싱되고, 정상 위치(locus)로부터 제거되고, 일반적으로 0 내지 12 ℃ 범위의 온도로 냉각되어 저장된다.

본 발명의 이러한 양태에 따르면, 아세트아미드가 부재하면, 아세트산 및 암모니아 중 적어도 하나가 부재한다.

본 발명의 일 양태에 따르면, 상기 방법은 살아있는 세포, 조직 또는 기관의 플러시 보존을 포함한다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 상기 방법은 살아있는 세포, 조직 또는 기관의 냉장 보존을 포함한다.

본 발명의 이러한 양태에 따른 바람직한 방법에서, 아스피린은 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산로 대체되고, 글루타민은 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산으로 대체되어, 아스피린 및 글루타민 모두가 용액에 실질적으로 부재하고, 바람직하게는 아세트아미드가 추가로 부재하거나, 및/또는 아세트산, 암모니아 및 아세트아미드가 추가로 부재하고, 보다 구체적으로는 (v)가 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산이고, (vi)는 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산이다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 간단한 저체온 저장을 위하여, 세포들, 특히 살아있는 세포, 조직 또는 기관을 보존하는 방법이 제공되며, 이에 의해 세포, 조직 또는 기관은 다음을 포함하는 보존 용액과 접촉하게 된다:

(i) 주사용 증류수;

(iii) pH 완충 특성을 갖는 적어도 하나의 성분;

(v) 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 또는 아스피린; 및

(vi) 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 또는 글루타민; 및 동결 보호 특성(즉, 동결 보호제)을 갖는 적어도 하나의 성분;

아세트아미드가 부재하거나, 및/또는 아세트산 및 암모니아 중 적어도 하나가 추가로 부재하고; 보다 구체적으로, (v)가 아스피린이면, (vi)는 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산이고, (vi)가 글루타민이면, (v)는 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산이고;

이에 의해, 세포, 조직 또는 기관이 용액으로 플러싱되고, 정상 위치로부터 제거되고, 일반적으로 -20 ℃ 내지 12 ℃ 범위의 온도로 냉각되어 저장된다.

상기 방법은 단순 저체온 저장을 위한 것일 수 있으며, 이에 의해 세포, 조직 또는 기관이 용액으로 플러싱되고, 정상 위치로부터 제거되고, 바람직하게는 일반적으로 0 내지 12 ℃ 범위의 온도로 냉각되어 저장된다. 또한, 동결 보호제가 존재하면, 조직 또는 기관은 약 -20 ℃ 내지 약 4 ℃의 온도에서 저장될 수 있다. 또한, 용액은 기관을 통해 능동적으로 플러시될 수 있다. 세포, 조직 또는 기관은 신장과 간과 같이 현재 실시되는 기간을 초과하는 연장된 기간, 예를 들어 48 시간 이상의 기간 동안 저장될 수 있음을 발견하였다. 추가적으로 또는 대안적으로, 상기 방법은 세포들, 특히 조직 또는 기관의 보존을 위한 것이며, 이에 의해 세포, 조직 또는 기관은 플러싱되고 저체온 상태로 되고, 침지 또는 관류에 의해 보존 용액과 접촉된다.

바람직하게는, 본 발명의 방법은 본 발명에 따른 용액의 생물학적 유효량을 세포, 조직, 기관 또는 기증자에게 유효 속도 또는 유효 농도로 투여하여, 그 기능을 유지 또는 향상시키는 것을 포함한다. 바람직하게는, 상기 방법은 특정 세포, 조직 또는 기관 기능, 예를 들어 세포 대사 및/또는 일시적으로 정지시키는 특정 기능, 예컨대 근육 활성, 필수 세포 성분 등, 및/또는 담즙 또는 소변 등의 형태의 배설물의 분해 또는 배설 기능을 보존하는 방법이다.

허혈은 장기를 통한 혈류의 중단으로 인해 야기되는 상황이다. 그 결과는 산소와 영양분 부족; 및 이산화탄소와 기타 폐기물의 축적 때문이다. 그것은 추울 때보다 더 큰 체온 손상을 야기시키는데, 이는 이식 장치를 플러싱하고 냉각시키는 이유이다. 장기 기증자는 외상을 빈번하게 겪었고, 따라서 기증자 장기는 외상의 결과로 따뜻한 허혈 기간에 노출되었을 수 있다. 플러시 전에, 실험적으로 따뜻한 허혈 기간을 추가하면, 이러한 상황을 모방할 수 있다. 본 발명의 용액은 그러한 따뜻한 허혈로부터 보호하는 이점이 있다.

바람직하게는, 플러시 관류는 300 mmHg 이하, 더욱 바람직하게는 대기 내지 200 mmHg 범위, 보다 바람직하게는 160 mmHg 이하, 더욱 바람직하게는 100 mmHg 이하, 가장 바람직하게는 50 mmHg 이하의 압력에서 수행된다.

본 발명의 이러한 양태에 따른 방법은 본원에 정의된 보존 용액의 사용을 포함한다.

본 발명의 추가의 양태에서, 부분 키트가 제공되는데, 이는 특정 목적을 위한 하나 이상의 용액의 제조에 사용하기 위한 것이며, 범용 보존 용액으로서 기능하도록 하기 위해, 제 1 부분에서, 성분들 (i) 내지 (vi)를 가지며, 하나 이상의 추가 부분에서, 본원에서 정의된 추가 성분들의 하나 이상으로부터 선택된 개별 성분들과 선택적으로 함께 하는 보존 용액을 포함한다.

일 실시 예에서, 부분 키트는 제 1 부분에서, 상기 정의된 성분들 (i) 내지 (vi)를 가지며, 이들 중 하나 이상의 불안정한 성분들이 부재하며 사용 직전의 첨가를 위해, 하나 이상의 추가 부분에서, 개별적으로 제공되는 보존 용액을 포함한다.

본 발명의 일 양태에 따르면, 상기 키트는 본원에 정의된 바와 같은 성분들(i)-(vi)을 갖는 플러시 보존 용액을 포함한다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 상기 키트는 본원에 정의된 바와 같은 성분들(i)-(vi)을 갖는 냉장 보존 용액을 포함한다.

본 발명은 이제 실시 예 및 첨부 도면을 참조하여, 비-제한적인 방식으로 설명된다:
도 1은 보존 용액에서 아스피린의 안정성을 나타낸다: 선행 기술 용액에서 아스피린 및 살리실산의 농도를 측정하기 위해 HPLC 방법이 개발되었다. 아스피린은 저장 동안 살리실산 및 아세트산으로 빠르게 가수 분해된다. 8 주 후에, 어떠한 모 화합물도 남아 있지 않다.
도 2는 이전의(종래 기술) 제형과 대비하여, 개선된 보존 용액(본 발명의 용액)의, 신장 보존 후 혈청 크레아티닌을 도시한다. 보다 낮은 혈청 크레아티닌은 장기의 감소된 손상을 나타낸다.
도 3은 체외에서 72 시간까지의, 본 발명의 보존 용액에서의 돼지 신장의 생체 외 보존을 예시한다. 실질(parenchyma)은 정상적인 사구체와 세관과 함께 잘 보존된다. H & E 염색, 40 배 확대.

실시 예 1

1.1 본 발명에 사용된 플러시 보존 용액

본 연구에 포함된 보존 용액은 표 1, 2, 3 및 4에 제시되며, 양은 mmol/L로 제공된다. 용액(SOLS)은 물로 반쯤 채워진 플라스크로 제조되었는데, 여기에 락토비오네이트, KOH, 인산 나트륨, 글루타민 또는 글루탐산, 수크로오스, 아스피린 또는 살리실산, 알로푸리놀 및 딜티아젬 중 임의의 또는 전부가 순차적으로 첨가되고 용해되었다. 이어서, 콜로이드(PEG)를 첨가하고 용액을 거의 최대 부피까지 만들었다. NaOH를 첨가하여 pH를 설정하면, 용액은 최대 부피로 된다. 모든 용액을 여과로 멸균하고, 4 ℃에서 유리 병에 보관하였다. 환원된 글루타티온을 제조 동안 또는 사용 직전에 첨가하였다. 공급원은 상기한 바와 같거나 WO 02/41696에 개시된 바와 같다.

비교

이전의 제형은 WO 02/41696에 기재 및 개시되며, 본원의 표 1에 제시한 바와 같다. UW는 표준 오리지널 상용 용액이다(viaSpan/BELZER UW, DU PONT PHARMA).

비교 보존 용액의 조성

비교 보존 용액의 조성이 표 1에 제시되어 있다:

[표 1]

본 발명의 냉장 보존 용액의 조성

본 발명의 냉장 보존 용액의 조성은 표 2에 제시되어 있다:

[표 2]

감소된 양의 (v) 및/또는 (vi)를 갖는 본 발명의 냉장 보존 용액의 조성

감소된 양의 (v) 및/또는 (vi)를 갖는 본 발명의 냉장 보존 용액의 조성이 표 3에 제시되어 있다:

[표 3]

감소된 양의 (v) 및/또는 (vi)를 갖는 본 발명의 냉장 보존 용액의 조성

감소된 양의 (v) 및/또는 (vi)를 갖는 본 발명의 냉장 보존 용액의 조성이 표 4에 제시되어 있다:

[표 4]

실시 예 2

비교 용액 및 본 발명의 플러시 보존 용액이 하기 시스템에서 연구되었다.

2.1.1 종래 기술에 기술된 플러시 보존 용액에 의해 생성된 독성 대사 산물의 생성 및 영향

국제 특허 출원 WO 02/41696에 기술된 플러시 보존 용액은 저장하자마자, 세포/조직/기관에 독성이 있을 가능성이 있는 대사 산물을 저장 동안에 생성하는 것으로 밝혀졌다. 예를 들어, 도 1은 8 주 동안 용액을 저장하면, 아스피린의 100 %가 살리실산으로 변환되고, 등 몰량의 해로운 아세트산이 생성됨을 보여준다. 원래 0.5mM 아스피린을 함유하는 용액에서, 이는 0.5mM 아세트산, 30mg/L의 형성을 초래한다. 아세트산은 염증 등을 일으키는 공지된 자극물이며, 인간 조직을 손상시킨다.

추가의 예로서, 종래 기술 용액에서 암모니아의 존재는 비색 분석에 의해 보여졌다. 암모니아 분석 키트(ab83360)는 암모니아 및 암모늄의 연구 및 높은 처리량 분석에 적합한 빠르고 간단하고 민감하며 신뢰할 수 있는 분석을 제공한다. 이 분석에서, 암모니아 및 암모늄은 OxiRed 프로브와 반응하여, 색(λmax = 570 nm)을 발생시키는 생성물로 변환되는데, 이는 판 판독기(plate reader)에 의해 쉽게 정량화될 수 있다. 이러한 키트는 1 nmol(-20 μM)의 총 암모니아와 암모늄을 검출할 수 있으며, 이는 NADPH 기반 분석으로 암모니아를 측정하는 것보다 훨씬 민감한다. 이러한 프로토콜을 사용하여, 종래 기술 용액은 약 2.6mM 암모니아를 함유하고 있음이 입증되었다. 이것은 암모니아의 알려진 독성보다 몇 배나 크며, 300μM은 인간 세포에 독성이 있는 것으로 알려져 있다(Heeneman et al, Journal of Immunological Methods (1993) 166, 1, p85-91). 대조적으로, 본 발명의 용액에서, 암모니아는 실질적으로 부재하며, 낮은 분석 정량화 레벨 이하이며, 2nmol 미만이다.

암모니아 독성은 세포에 의한 칼륨 섭취를 방해함으로써 발생할 수 있다. 이는 모든 기관과 조직에 유해한 영향: pH, 막 전위 및 대사의 변화를 초래할 수 있다(Dasarathy, S., Mookerjee, R.P., Rackayova, V. et al. Metab Brain Dis (2017) 32: 529. https://doi.org/10.1007/sl 1011-016-9938-3). 생체 내에서, 암모니아는 일반적으로 간 우레아 사이클에 의해 해독될 것이다. 그러나, 그것은 냉장 보존 동안 세포의 대사 활성이 의도적으로 억제되기 때문에, 보존 용액의 저장 또는 사용 중에 일어날 수 없다. 이는 종래 기술 용액에서 암모니아가 보존 기간 동안 유지되고, 재관류시 세포 손상의 상당한 가능성이 있음을 의미한다. 본 발명의 용액에서, 암모니아는 존재하지 않으며, 이 손상은 발생할 수 없다.

원래 20mM 글루타민 또는 대략 2.6mM 암모니아 및 0.5mM 아스피린 또는 최대 0.5mM 아세트산을 함유하는 용액에서, 이는 최대 0.5mM 아세트아미드, 30mg/L의 형성을 초래한다. 아세트아미드는 인간 조직에 손상을 주는 것으로 알려져 있다.

2.1.2 본 발명의 플러시 보존 용액에서의 독성 대사 산물의 부재

아스피린이 부재하는 본 발명의 용액들 SOL 1.1, SOL 1.2, SOL 2.1, SOL 2.2, SOL 3.1 및 SOL 3.2에서, 아세트산은 보관 후에도 실질적으로 부재하며, 낮은 분석 정량화 레벨 이하이다.

아스피린이 사용 직전에 첨가되는 본 발명의 추가 용액에서, 아세트산은 사용 기간 동안 실질적으로 부재하거나 감소된 수준에 있다.

글루타민이 부재하는 본 발명의 용액들 SOL 1.1, SOL 1.3, SOL 2.1, SOL 2.3, SOL 3.1 및 SOL 3.3에서, 암모니아는 보관 후에도 실질적으로 부재하며, 낮은 분석 정량화 레벨 이하이며, 2nmol 이하이다.

글루타민이 사용 직전에 첨가되는 본 발명의 추가 용액에서, 암모니아는 사용 기간 동안 실질적으로 부재하거나 감소된 수준에 있다.

또한, 아스피린 또는 글루타민 또는 둘다 부재하는 본 발명의 모든 용액들 SOL 1.1, SOL 1.2, SOL 1.3, SOL 2.1, SOL 2.2, SOL 2.3, SOL 3.1, SOL 3.2 및 SOL 3.3에서, 아세트아미드는 보관 후에도 실질적으로 부재한다.

2.2 돼지 이식 모델

보존 용액의 품질을 실제로 평가하기 위해, 테스트 용액을 사용하여 이식의 임상 결과를 평가하는 전체 동물 모델을 채용할 필요가 있다. 돼지 모델이 이것에 가장 적합하다. 간단히 말해, 임상 시험 계획서는 장기(간, 신장, 소장 또는 췌장)의 회수, 시험(발명) 중인 플러시 보존 용액 또는 대조군 용액(비교), 및 이식(고려중인 장기에 따라 타가-이식 또는 자가-이식)을 수반한다. 수증자의 장기 기능 및 전반적인 건강 상태는 임상적으로 적절한 시간 동안 수술 후 모니터링된다.

다음 표는 수증자 동물에서 이식된 장기의 기능을 평가하는 데 사용되는 측정치를 나타낸다. 또한, 동물의 전반적인 건강과 복지가 모니터링된다(체중, 음식 소비 등). 연구가 끝나면 동물을 희생시키고 조직학적 분석을 위해 주요 장기를 수집한다.

크레아티닌은 신장 기능과 직접 관련된 주요 혈액 마커이다. 제 기능을 하는 신장은 낮은 농도의 크레아티닌을 유지한다. 높은 수치는 제대로 기능하지 않는 신장을 나타낸다. 이식 후, 혈청 크레아티닌은 상승할 것으로 예상되며, 신장 기능이 회복되는 경우에만 정상 수준으로 다시 떨어진다. 상승의 크기는 보존 손상의 크기를 나타낸다. 크레아티닌 수치가 정상으로 회복되는 속도는 신장이 정상 기능으로 얼마나 빨리 회복되는지를 나타낸다. 이것 자체는 장기가 얼마나 잘 보존되었는지를 나타내는 주요 척도이다. 도 2는 본 발명의 보존 용액이 종래 기술의 용액보다 현저히 더 나은 결과를 내고 있다는 최근 연구를 나타낸다. 피크 크레아티닌이 현저히 더 낮고, 신장 기능은 정상으로 훨씬 빨리 회복된다. 이는 본 발명의 용액에서 조직 손상이 상당히 감소되었음을 나타내는 증거이다.

조직학(Histology)

조직학이 UW(위스콘신 대학교)(Belzer UW® 냉장 용액으로 상업적으로 시판됨) 또는 본 발명의 보존 용액으로 최대 72 시간 동안 관류된 동물의 복부 기관(간, 신장, 췌장 및 소장)으로부터 수집된 조직 샘플에 대해 수행되었다. UW와 같은 표준 비교 용액은 일반적으로 약 12-24 시간까지 조직을 보존할 수 있다. 헤마톡실린 및 에오신에 의해 착색된(stained) 조직 샘플(도 3)은 최대 72 시간 동안, 본 발명의 보존 용액에 의해 샘플의 정상적인 형태 및 우수한 보존을 보여주었다. 세포질 함량의 보다 우수한 보유(retention)가 보이고, 핵 고스팅(nuclear ghosting)도 UV 그룹에서 존재하였는데, 이는 본 발명의 보존 용액에서는 존재하지 않았다. 추가적인 핵 고스팅이 48 및 72 시간에 UW 샘플에서 명확해졌는데, 이는 본 발명의 샘플의 보존 용액에서는 존재하지 않았다. 이는 본 발명의 보존 용액이 연장된 보존 시간에 걸쳐 훨씬 감소된 세포 손상을 주었다는 증거이다.

Claims

혈액 공급이 없는 상태에서 세포, 조직 및/또는 기관의 보존을 위한 보존 용액으로서,
(i) 주사용 증류수;
(ii) 적어도 하나의 당류;
(iii) pH 완충 특성을 갖는 적어도 하나의 성분;
(iv) 칼슘 수송 차단 특성 또는 항-칼슘 작용 활성을 갖는 임의의 적어도 하나의 성분;
(v) 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 또는 아스피린; 및
(vi) 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 또는 글루타민;
을 포함하고,
아세트아미드가 부재하거나, 및/또는 아스피린이 존재하면 글루타민이 부재하고, 글루타민이 존재하면 아스피린이 부재하는 보존 용액.
제 1 항에 있어서, 만약 (v)가 아스피린이면, (vi)는 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산인 보존 용액.
제 1 항에 있어서, 만약 (vi)가 글루타민이면, (v)는 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산인 보존 용액.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용액이 플러시 보존 용액인 보존 용액.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용액이 냉장 보존 용액인 보존 용액.
전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 아스피린이 부재하는 보존 용액.
제 6 항에 있어서, (v)는 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산이고; (vi)는 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 또는 글루타민이고; 아스피린이 부재하거나, 및/또는 아세트산 및/또는 아세트아미드가 부재하는 보존 용액.
전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 글루타민이 부재하는 보존 용액.
제 8 항에 있어서, (v)는 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 또는 아스피린이고; (vi)는 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산이고; 글루타민이 부재하거나, 및/또는 암모니아 및/또는 아세트아미드가 부재하는 보존 용액.
전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 아스피린 및 글루타민이 부재하는 보존 용액.
제 10 항에 있어서, 아세트아미드가 부재하거나, 및/또는 아세트산 및 암모니아가 부재하다는 조건으로 하여, (v)는 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산이고; (vi)는 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산인 보존 용액.
제 10 항에 있어서, 아세트아미드가 부재하거나, 및/또는 아스피린과 글루타민이 부재하는 보존 용액.
전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 칼슘 수송 차단 특성 또는 항-칼슘 작용 활성을 갖는 적어도 하나의 성분이 존재하는 보존 용액.
제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 칼슘 수송 차단 특성 또는 항-칼슘 작용 활성을 갖는 적어도 하나의 성분이 부재하는 보존 용액.
전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산의 양이 0.5mmol/L 미만인 보존 용액.
제 15 항에 있어서, 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산의 양이 약 0.025 내지 약 0.275mmol/L인 보존 용액.
제 9 항에 있어서, 만약 존재하면, 아스피린이 약 0.3mmol/L 내지 약 1.0mmol/L의 양으로 존재하는 보존 용액.
전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 존재하는 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산의 양이 20mmol/L 미만인 보존 용액.
제 18 항에 있어서, 존재하는 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산의 양이 약 2 내지 약 12mmol/L인 보존 용액.
제 11 항에 있어서, 만약 존재하면, 글루타민이 약 15mmol/L 내지 약 30mmol/L의 양으로 존재하는 보존 용액.
전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 당류는 수크로오스, 라피노스 및 만니톨로부터 하나 이상 선택되는 보존 용액.
제 21 항에 있어서, 상기 당류는 수크로오스인 보존 용액.
전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, pH 완충제는 인산 나트륨 완충제, 인산 칼륨 완충제 등으로부터 선택되는 보존 용액.
제 23 항에 있어서, pH 완충제는 Na₂HP0₄, NaH₂P0₄, K₂HP0₄, KH₂P0₄ 등 및 이들의 조합으로부터 선택되는 보존 용액.
전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 칼슘 수송 차단제 또는 항-칼슘 활성제는 니카르디핀, 딜티아젬, 베라파밀, 니솔디핀, 클로르프로마진 또는 트리플루오로페라진 중 하나 이상과 같은 임의의 공지된 칼슘 수송 또는 채널 차단제로부터 선택되는 보존 용액.
제 25 항에 있어서, 상기 칼슘 수송 차단제 또는 항-칼슘 활성제는 니카르디핀 및/또는 딜티아젬인 보존 용액.
전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 보존 용액은 세포 내로 거의 불투과성인 적어도 하나의 음이온을 포함하는 보존 용액.
제 27 항에 있어서, 세포 내로 거의 불투과성인 음이온이 불투과성 격리 음이온인 보존 용액.
제 27 항에 있어서, 상기 불투과성 격리 음이온은 락토비오네이트 또는 락토비온산을 포함하는 보존 용액.
전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 보존 용액은 콜로이드 삼투 특성을 갖는 적어도 하나의 성분을 포함하는 보존 용액.
제 30 항에 있어서, 콜로이드 삼투 특성을 갖는 성분은 폴리에틸렌 글리콜(PEG), (젤로푸신과 같은) 숙시닐화된 젤라틴, 피콜(다당류) 또는 전분 생성물을 포함하는 보존 용액.
전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 보존 용액은 무기 또는 유기 용질을 포함하는 보존 용액.
제 32 항에 있어서, 상기 무기 또는 유기 용질은 예를 들어 Na⁺, K⁺, Cl^-, OH^-등 및 이들의 조합으로부터 선택된 양이온 및/또는 음이온을 포함하는 전해질인 보존 용액.
제 32 항에 있어서, 상기 무기 용질은 NaCl인 보존 용액.
전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 보존 용액은 칼슘 킬레이트 특성을 갖는 적어도 하나의 성분을 포함하는 보존 용액.
제 35 항에 있어서, 칼슘 킬레이트 특성을 갖는 성분은 시트레이트 또는 EGTA(에틸렌 글리콜-비스(β-아미노에틸 에테르)-N,N,N',N'-테트라 아세트산)를 포함하는 보존 용액.
전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 보존 용액은 철 킬레이트 특성을 갖는 적어도 하나의 성분을 포함하는 보존 용액.
제 37 항에 있어서, 철 킬레이트 특성을 갖는 성분은 EDTA(에틸렌 디아민 테트라 아세트산)를 포함하는 보존 용액.
전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 보존 용액은 글루탐산, 및/또는 글루타민에 더하여, 하나 이상의 (추가의) 아미노산을 포함하는 보존 용액.
제 39 항에 있어서, 추가의 아미노산은 글리신 또는 n-아세틸시스테인, 또는 이들의 조합인 보존 용액.
전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 보존 용액은 무산소 라디칼 또는 무산소 라디칼의 생성에 효과적인 적어도 하나의 성분을 포함하는 보존 용액.
제 41 항에 있어서, 무산소 라디칼 또는 무산소 라디칼의 생성에 효과적인 성분은 알로푸리놀 및 환원된 글루타티온, 또는 이들의 조합으로부터 선택되는 보존 용액.
전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 보존 용액은 에너지 공급 시스템의 적어도 하나의 성분을 포함하거나, 에너지 공급 시스템 또는 케톤체에 영향을 미치는 적어도 하나의 성분을 포함하는 보존 용액.
제 43 항에 있어서, 상기 에너지 공급 시스템의 성분은 아데노신을 포함하는 보존 용액.
제 43 항에 있어서, 상기 케톤체는 베타-하이드록시 부티레이트를 포함하는 보존 용액.
전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 보존 용액은 근육에서 교차결합 작용 시 가역적으로 작용하는 성분을 포함하는 보존 용액.
제 46 항에 있어서, 근육에서 교차결합 작용 시 가역적으로 작용하는 성분은 부탄-디온-모녹심인 보존 용액.
전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 보존 용액은 세포막 내로 및 세포 막으로부터 단백질의 삽입 및 제거에 영향을 미치는 적어도 하나의 성분을 포함하는 보존 용액.
전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 보존 용액은 세포 내 신호 전달 시스템의 적어도 하나의 성분을 포함하거나, 이 시스템을 변형시키는 적어도 하나의 성분을 포함하는 보존 용액.
제 49 항에 있어서, 세포 내 신호 전달 시스템의 성분 또는 이 시스템을 변형시키는 성분은 단백질 키나제 억제제 또는 칼모듈린 억제제인 보존 용액.
전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 보존 용액은 막 안정화 작용을 갖는 적어도 하나의 성분을 포함하는 보존 용액.
제 51 항에 있어서, 막 안정화 작용을 갖는 성분은 라놀라진인 보존 용액.
전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 보존 용액은 동결 보호 작용을 갖는 적어도 하나의 성분을 포함하는 보존 용액.
제 53 항에 있어서, 동결 보호 작용을 갖는 성분은 당지질인 보존 용액.
전술한 항들 중 어느 한 항에 따른, 간, 신장, 소장 및 췌장 보존을 위한 보존 용액으로서,
(i) 주사용 증류수;
(ii) 이당류;
(iii) pH 완충 특성을 갖는 적어도 하나의 성분;
(iv) 적어도 하나의 칼슘 수송 또는 채널 차단제;
(v) 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 또는 아스피린; 및
(vi) 불투과성 격리 음이온, 무기 용질, 무산소 라디칼과 콜로이드 삼투에 효과적인 성분, 및 상기 정의된 임의의 선택적 추가 성분과 함께; 상기 정의된 바와 같은 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 또는 글루타민;
의 조합을 포함하는 보존 용액.
전술한 항들 중 어느 한 항에 따른, 간, 신장, 소장 및 췌장 보존을 위한 보존 용액으로서,
(ii) 주사용 증류수;
(ii) 수크로오스;
(iii) Na₂HP0₄ 및 NaH₂P0₄;
(iv) 딜티아젬;
(v) 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 또는 아스피린; 및
(vi) 락토비온산, KOH 및 NaOH, 글루타티온 및 알로푸리놀 및 PEG, 및 상기 정의된 바와 같은 임의의 선택적 추가 성분과 함께; 상기 정의된 바와 같은 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 또는 글루타민;
의 조합을 포함하는 보존 용액.
전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용액이 6.5 내지 7.8 범위의 pH를 갖는 보존 용액.
제 57 항에 있어서, 상기 용액이 6.5 내지 7.0 범위의 pH를 갖는 보존 용액.
제 57 항에 있어서, 상기 용액이 6.8 내지 7.0 범위의 pH를 갖는 보존 용액.
전술한 항들 중 어느 한 항에 따른 보존 용액을 포함하는, 간, 신장, 소장 및 췌장 보존을 위한 보존 용액.
특히 기관, 살아있는 조직 및 세포에 대한 손상을 방지하기 위해, 제 1 항 내지 제 60 항 중 어느 한 항에 따른 보존 용액을, 혈액 공급이 없는 상태에서 세포를 보존하기 위한 플러시 용액, 보존 용액 또는 플러시 보존 용액으로 사용하는 방법.
제 61 항에 있어서, 상기 용액이 플러시 보존 용액인 방법.
제 61 항에 있어서, 상기 용액이 냉장 보존 용액인 방법.
제 61 항 내지 제 63 항 중 어느 한 항에 있어서, 심장 박동 또는 비-심장 박동 기증자로부터 장기를 포함하는 이식에서, 따뜻하거나 차가운 허혈, 전 사지(whole limb) 또는 전신 보존의 임의의 상황을 포함하는 수술에서, 살아있는 조직에 대한 실험에서, 또는 공학적으로 생성된 세포, 조직 및 기관, 사지 또는 전신의 배양 및 보존에서의 사용을 포함하는 방법.
제 61 항 내지 제 62 항 중 어느 한 항에 있어서, 보존 용액은 혈관계를 통해 세포, 살아있는 조직, 기관, 사지 또는 전신과 접촉하게 되고, 선택적으로는 플러시된 세포, 조직 및 기관의 저장을 위한 보존 용액으로서 추가적으로 작용하는 방법.
제 61 항 내지 제 63 항 중 어느 한 항에 있어서, 저체온 정적 저장 및 저체온 기계 관류 시스템 둘 다에서, 세포, 조직, 기관의 연장된 보존을 포함하는 방법.
제 61 항 내지 제 64 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 기관은 간, 신장, 소장 및/또는 췌장인 방법.
특히 살아있는 세포, 조직 또는 기관에서, 간단한 저체온 저장을 위한 세포들의 보존 방법으로서, 상기 세포, 조직 또는 기관이,
(i) 주사용 증류수;
(ii) 적어도 하나의 당류;
(iii) pH 완충 특성을 갖는 적어도 하나의 성분;
(iv) 칼슘 수송 차단 특성 또는 항-칼슘 작용 활성을 갖는 임의의 적어도 하나의 성분;
(v) 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 또는 아스피린; 및
(vi) 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 또는 글루타민;
여기서, 아세트아미드가 부재하거나, 및/또는 아스피린이 존재하면 글루타민이 부재하고, 글루타민이 존재하면 아스피린이 부재하고;
를 포함하는 보존 용액과 접촉하게 되고;
이에 의해, 상기 세포, 조직 또는 기관이 용액으로 플러싱되고, 정상 위치(locus)로부터 제거되고, 일반적으로 0 내지 12 ℃ 범위의 온도로 냉각되어 저장되는 방법.
제 68 항에 있어서, 상기 방법은 살아있는 세포, 조직 또는 기관의 플러시 보존을 포함하는 방법.
제 68 항에 있어서, 상기 방법은 살아있는 세포, 조직 또는 기관의 냉장 보존을 포함하는 방법.
제 68 항 내지 제 70 항 중 어느 한 항에 있어서, (v)는 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산인 방법.
제 68 항 내지 제 71 항 중 어느 한 항에 있어서, 아스피린이 부재하는 방법.
제 68 항 내지 제 72 항 중 어느 한 항에 있어서, (vi)는 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산인 방법.
제 68 항 내지 제 72 항 중 어느 한 항에 있어서, 글루타민이 부재하는 방법.
제 68 항 내지 제 74 항 중 어느 한 항에 있어서, (v)는 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산이고; (vi)는 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산인 방법.
제 68 항 내지 제 74 항 중 어느 한 항에 있어서, 아스피린 및 글루타민이 부재하는 방법.
제 68 항 내지 제 76 항 중 어느 한 항에 있어서, 칼슘 수송 차단 특성 또는 항-칼슘 작용 활성을 갖는 적어도 하나의 성분이 존재하는 방법.
제 68 항 내지 제 76 항 중 어느 한 항에 있어서, 칼슘 수송 차단 특성 또는 항-칼슘 작용 활성을 갖는 적어도 하나의 성분이 부재하는 방법.
특히 살아있는 세포, 조직 또는 기관에서 간단한 저체온 저장을 위한 세포들의 플러시, 보존 또는 플러시 보존 방법으로서, 상기 세포, 조직 또는 기관은,
(i) 주사용 증류수;
(ii) 적어도 하나의 당류;
(iii) pH 완충 특성을 갖는 적어도 하나의 성분;
(iv) 임의로 칼슘 수송 차단 특성 또는 항-칼슘 작용 활성을 갖는 적어도 하나의 성분;
(v) 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 또는 아스피린; 및
(vi) 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 또는 글루타민; 및 동결 보호 특성을 갖는 적어도 하나의 성분;
여기서, 아세트아미드가 부재하거나, 및/또는 아스피린이 존재하면, 글루타민이 부재하고, 글루타민이 존재하면, 아스피린이 부재하고;
를 포함하는 보존 용액과 접촉하게 되고;
이에 의해, 상기 세포, 조직 또는 기관이 용액으로 플러싱되고, 정상 위치로부터 제거되고, 일반적으로 -20 ℃ 내지 8 ℃ 범위의 온도로 냉각되어 저장되는 방법.
제 79 항에 있어서, (v)는 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산인 방법.
제 79 항에 있어서, 아스피린이 부재하는 방법.
제 79 항 내지 제 81 항 중 어느 한 항에 있어서, (vi)는 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산인 방법.
제 79 항에 있어서, 글루타민이 부재하는 방법.
제 79 항 내지 제 86 항 중 어느 한 항에 있어서, (v)는 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산이고; (vi)는 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산인 방법.
제 79 항에 있어서, 아스피린 및 글루타민이 부재하는 방법.
제 79 항 내지 제 82 항 중 어느 한 항에 있어서, 칼슘 수송 차단 특성 또는 항-칼슘 작용 활성을 갖는 적어도 하나의 성분이 존재하는 방법.
제 79 항 내지 제 82 항 중 어느 한 항에 있어서, 칼슘 수송 차단 특성 또는 항-칼슘 작용 활성을 갖는 적어도 하나의 성분이 부재하는 방법.
제 79 항 또는 제 84 항에 있어서, 상기 방법은 세포들, 특히 조직 또는 기관의 보존을 위한 것이며, 이에 의해 세포, 조직 또는 기관은 플러싱되고, 저체온 상태로 되고, 침지 또는 관류에 의해 보존 용액과 접촉하게 되는 방법.
제 79 항 또는 제 85 항에 있어서, 생물학적 유효량의 보존 용액을 세포, 조직, 기관 또는 기증자에게 유효 속도 또는 유효 농도로 투여하여, 그 기능을 유지 또는 향상시키는 것을 포함하고, 상기 방법은 특정 세포, 조직 또는 기관 기능을 보존하거나, 및/또는 특정 기능을 일시적으로 정지시키기 위한 것인 방법.
제 79 항 또는 제 89 항에 있어서, 플러시 관류는 300mmHg 까지의 압력 하에서 수행되는 방법.
제 79 항 또는 제 89 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 보존 용액은 제 1 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 것인 방법.
제 1 항 내지 제 60 항 중 어느 한 항에서 청구된 보존 용액을 포함하는 부분 키트로서, 이는 제 1 부분에서, 성분들 (i) 내지 (vi)를 가지며, 하나 이상의 추가 부분에서, 청구항 제 17 항 내지 제 60 항에서 정의된 추가 성분들의 하나 이상으로부터 선택된 개별 성분들과 선택적으로 함께 하거나; 또는 제 1 부분에서, 상기 정의된 성분들 (i) 내지 (vi)를 가지며, 이들 중 하나 이상의 불안정한 성분들이 부재하고 사용 직전의 첨가를 위해, 하나 이상의 추가 부분에, 개별적으로 제공되고, 상기 키트는 특정 목적을 위한 하나 이상의 플러시 용액의 제조에 사용하기 위한 것이며, 범용 플러시, 보존 또는 플러시 보존 용액으로서 기능하는 부분 키트.
제 92 항에 있어서, 상기 보존 용액이 플러시 보존 용액을 포함하는 부분 키트.
제 92 항에 있어서, 상기 보존 용액이 냉장 보존 용액을 포함하는 부분 키트.
제 1 항 내지 제 60 항 중 어느 한 항에 따른 보존 용액을 제조하는 방법으로서, 이는 성분들 (i) 내지 (vi)를 순차적으로 물에 첨가하고, 있는 경우(if any) 불안정한 성분 및 콜로이드 삼투 특성을 갖는 성분을 제외하고, 임의의 추가 성분을 첨가하는 단계; 혼합물을 용해시키는 단계; 있는 경우 콜로이드 삼투 특성을 갖는 성분을 첨가하고, 용액을 거의 최대 부피로 만드는 단계; 및 마지막으로 pH를 조절하여 최대 부피로 만들고 살균 및 냉각하는 단계를 포함하는 방법.
제 95 항에 있어서, 상기 용액은 UV 광이 부재하는 상태에서 무산소 조건하에 제조 및 저장되는 방법.
제 95 항 또는 제 96 항에 있어서, 상기 용액은 임의의 불안정한 성분이 부재하는 상태에서 제조 및 저장되고, 사용 직전에 이러한 불안정한 성분이 후속적으로 첨가되는 방법.
제 97 항에 있어서, 상기 용액은 암모니아 및 아세트산 둘 다의 생성없이, 그리고 아세트아미드와 같은 이의 반응 생성물의 생성없이, 저장되는 방법.
제 95 항 내지 제 98 항 중 어느 한 항의 방법에 의해 수득된 보존 용액.
전술한 항들 중 어느 한 항에 따른 성분들 (i) 내지 (vi)를 물에 첨가하는 단계를 포함하는 방법에 의해 수득된 보존 용액.
혈액 공급이 없는 상태에서 세포, 조직 및/또는 기관의 보존을 위한 보존 용액으로서, 상기 용액은,
(i) 주사용 증류수;
(ii) 적어도 하나의 당류;
(iii) pH 완충 특성을 갖는 적어도 하나의 성분;
(iv) 칼슘 수송 차단 특성 또는 항-칼슘 작용 활성을 갖는 임의의 적어도 하나의 성분;
(v) 유리 형태 또는 염 형태의 살리실산, 및/또는 아스피린; 및
(vi) 유리 형태 또는 염 형태의 글루탐산, 및/또는 글루타민;
을 포함하고,
아스피린이 존재하면 글루타민이 부재하고, 글루타민이 존재하면 아스피린이 부재하고; 및/또는 아스피린 및/또는 아세트아미드 및/또는 아세트산이 존재하면, 존재하는 살리실산의 양은, 예를 들어 존재하는 임의의 아세트산 및 임의의 아세트아미드의 양들의 합에 의해 결정되는 바와 같이, 아스피린으로부터의 분해에 기인할 수 있는 양을 초과하고; 및/또는
글루타민 및/또는 아세트아미드 및/또는 암모니아가 존재하면, 존재하는 글루탐산의 양은, 예를 들어 존재하는 임의의 암모니아 및 임의의 아세트아미드의 양들의 합에 의해 결정되는 바와 같이, 글루타민으로부터의 분해에 기인할 수 있는 양을 초과하는 보존 용액.
첨부된 설명을 참조하여 본 명세서에 기술된 보존 용액, 용도, 방법 또는 부분 키트.