BR112020000781A2

BR112020000781A2 - soluções de preservação

Info

Publication number: BR112020000781A2
Application number: BR112020000781-1A
Authority: BR
Inventors: Simon Terence Corbitt; Malgosia Jarmolowicz; Clare Lankester; Jeremy Peter Alan Lodge; Oluseun Olarewaju; David John Potts
Original assignee: Organ Preservation solutions Limited
Priority date: 2017-07-14
Filing date: 2018-07-13
Publication date: 2020-07-14
Also published as: EP3651576B1; CA3068361A1; KR20200028412A; AU2018300228A1; GB201811566D0; US20220087251A1; WO2019012299A1; US11172674B2; PL3651576T3; JP2020527601A; GB2571803B; US20200221689A1; CL2020000099A1; EP3651576C0; CN110868854A; IL271919A; EP3651576A1; PE20210039A1; GB2571803A; ES2966887T3

Abstract

É descrita uma solução de preservação para a preservação de células, tecidos e/ou órgãos, em que a dita solução compreende: (i) água para injeção; (ii) pelo menos um sacarídeo; (iii) pelo menos um componente com propriedades de tampão de pH; (iv) opcionalmente, pelo menos um componente com propriedades de bloqueio de transporte de cálcio ou uma atividade de ação anticálcio; (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal, ou aspirina; e (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, ou glutamina; desde que acetamida esteja ausente e/ou se aspirina estiver presente, glutamina esteja ausente e se glutamina estiver presente, aspirina esteja ausente.

Description

“SOLUÇÕES DE PRESERVAÇÃO” CAMPO DA INVENÇÃO

[0001] A presente invenção refere-se a uma solução de preservação ou uma solução de preservação de armazenamento a frio para manter viáveis as células sem um suprimento sanguíneo, seu uso para evitar danos às células, tecidos e/ou órgãos em transplantes, cirurgias, experimentos e in vitro, um método para preservação, preservação por lavagem ou lavagem, um método para tratamento, um método para sua preparação e um kit de partes compreendendo a solução.

[0002] Mais particularmente, a presente invenção refere- se a uma solução de preservação ou uma solução de preservação de armazenamento a frio, como aqui descrito, que compreende ácido salicílico e/ou ácido glutâmico; e seus sais.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[0003] O transplante de órgãos está agora disponível para rim, fígado, coração, pulmão, pâncreas e intestino. Na recuperação, um órgão de transplante é liberado através de sua vasculatura com uma solução de preservação. Esta solução foi projetada para facilitar a redução da temperatura do órgão, evitar o inchaço das células, remover os radicais livres de oxigênio, controlar o pH, reduzir os danos isquêmicos, prolongar o tempo seguro pelo qual os órgãos podem ser mantidos fora do corpo e facilitar a recuperação do órgão por reperfusão.

[0004] Importantes “soluções de lavagem foram introduzidas por Belzer em 1967 e Colliis em 1969, posteriormente modificadas para Euro-Collins (EC), Marshall (1976), Bretschneider (ver Isemer et al 1988) e outras. A solução da Universidade de Wisconsin (UW), a mais bem-sucedida de todas as soluções, foi introduzida em 1988 por Belzer e seus colegas. Permanece a necessidade de preservação aprimorada por lavagem e preservação de armazenamento a frio. Evidências impressionantes indicam que um enxerto de alta qualidade fornece melhor função imediata e uma vida útil mais longa do enxerto. Uma solução simples de lavagem contendo apenas fosfato de sódio e sacarose foi demonstrada por Andrews e Coffey em 1982 e por Coffey e Andrews em 1983 para proteger a morfologia dos túbulos renais contra danos isquêmicos.

[0005] O pedido de patente internacional nº WO 02/41696 (Potts, Lodge) descreve uma solução de preservação por lavagem para a preservação de células na ausência de um suprimento de sangue, em que a dita solução compreende:

[0006] água para injeção;

[0007] pelo menos um sacarídeo, como um monossacarídeo, dissacarídeo, trissacarídeo ou polissacarídeo;

[0008] pelo menos um componente com propriedades de tampão de pH (isto é, um tampão de pH);

[0009] pelo menos um componente com propriedades de bloqueio de transporte de cálcio ou uma atividade de ação anticálcio (isto é, um bloqueador de transporte de cálcio);

[0010] opcionalmente, um aminoácido, como glutamina; e

[0011] opcionalmente, um inibidor de tromboxano para evitar a coagulação do sangue, como a aspirina.

[0012] Consequentemente, permanece a necessidade de uma solução melhorada de preservação comercialmente viável e eficaz, que permita a preservação prolongada de células, tecidos e órgãos, incluindo células manipuladas, tecidos e órgãos, o que proporciona maior versatilidade, eficácia e reperfusão em transplantes, em cirurgias, incluindo qualquer situação de isquemia quente ou fria, como transplante de fígado, rim, intestino delgado e/ou pâncreas; membro inteiro, corpo inteiro ou em experimentação.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0013] Foi constatado que a aspirina (aspirina é o nome comum do ácido acetilsalicílico) na solução da técnica anterior do documento

WO 02/41696 degrada para produzir ácido salicílico, enquanto a glutamina se degrada para ácido glutâmico.

[0014] A degradação da aspirina produzirá ácido salicílico e ácido acético, enquanto a degradação da glutamina produzirá ácido glutâmico e amônia. Além disso, contatou-se que tanto o ácido acético quanto a amônia são indesejáveis em uma solução de preservação, pois são potencialmente prejudiciais para as células, tecidos e órgãos; e mais prováveis de gerar odores nocivos, que podem aumentar com o armazenamento da solução de preservação. Além disso, foi constatado que com o tempo, o ácido acético e a amônia podem reagir juntos na solução da técnica anterior do documento WO 02/41696, para formar acetamida. A acetamida é reconhecida como irritante para a pele e é reconhecida como substância perigosa que pode danificar o fígado.

[0015] Assim, ao substituir aspirina por ácido salicílico e/ou substituindo glutamina por ácido glutâmico, ou sais dos mesmos, a quantidade de ácido acético e/ou amônia gerada, respectivamente, pode ser minimizada ou removida completamente. Em exemplos, é demonstrado que o uso da solução da invenção para preservação reduz os danos às células e tecidos durante a preservação quando comparado a soluções comparativas.

[0016] Na solução da técnica anterior, a aspirina é adicionada como um inibidor anti-inflamatório do tromboxano. Constatou-se que, se a aspirina for omitida e adicionado ácido salicílico, o ácido salicílico terá propriedades anti-inflamatórias (isto é um anti-inflamatório). Além disso, na solução da técnica anterior, a glutamina é adicionada como uma molécula de suporte que pode fornecer energia. Foi constatado que, se a glutamina for omitida, ela pode ser substituída pelo ácido glutâmico, que atuará como um substrato de energia alternativa para as células, tecidos e/ou órgãos.

[0017] Além disso, constatamos que, uma vez que a nova solução da presente invenção não representa mais nenhuma preocupação com a degradação da aspirina e/ou glutamina, as quantidades dos componentes de substituição, por exemplo, o ácido salicílico e/ou o ácido glutâmico podem consequentemente ser reduzidos.

[0018] Portanto, de acordo com um primeiro aspecto da invenção, é fornecida uma solução de preservação para a preservação de células, tecidos e/ou órgãos, na ausência de um suprimento de sangue, em que a dita solução compreende: (ii) água para injeção; (iii) pelo menos um sacarídeo, como um monossacarídeo, dissacarídeo, trissacarídeo ou polissacarídeo; (iv) pelo menos um componente com propriedades de tampão de pH; (v) opcionalmente, pelo menos um componente com propriedades de bloqueio de transporte de cálcio ou uma atividade de ação anticálcio; (vi) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal, ou aspirina; e (vii) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, ou glutamina;

[0001] desde que acetamida esteja ausente e/ou se a aspirina estiver presente, a glutamina está ausente e se a glutamina estiver presente, a aspirina está ausente.

[0002] O termo “ausente” ou “substancialmente ausente” deve ser entendido pelo versado na técnica como abaixo de uma concentração farmacologicamente ativa; ou nenhum detectável por métodos convencionais conhecidos na técnica. Tais métodos devem incluir, mas não se limitar, ao ensaio colorimétrico e GCMS.

[0003] Como condição adicional, se apenas uma das aspirinas e glutamina estiver presente, o produto de degradação da outra não estará presente, ou seja, se houver aspirina, a amônia não estará presente; e se a glutamina estiver presente, o ácido acético não estará presente.

[0004] O ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal ou aspirina, (v) serve adequadamente para evitar a coagulação do sangue. Adequadamente, a solução de preservação compreende uma quantidade de ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal ou aspirina (v) para impedir a coagulação do sangue.

[0005] O ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal ou glutamina, (vi) serve adequadamente como substrato energético. Adequadamente, a solução de preservação compreende uma quantidade de ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal ou glutamina (vi) para servir como substrato energético.

[0006] Em um aspecto particular da presente invenção, a solução de preservação como aqui descrita compreende:

[0007] (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal, ou aspirina; e

[0008] (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, ou glutamina;

[0009] desde que a acetamida esteja ausente e/ou pelo menos um de ácido acético e amônia esteja ausente.

[0010] De acordo com um aspecto adicional da presente invenção, é fornecida uma solução de preservação para a preservação de células, tecidos e/ou órgãos, em que a dita solução compreende: (ii) água para injeção; (iii) pelo menos um sacarídeo, como um monossacarídeo, dissacarídeo, trissacarídeo ou polissacarídeo; (iv) pelo menos um componente com propriedades de tampão de pH; (v) opcionalmente pelo menos um componente com propriedades de bloqueio de transporte de cálcio ou uma atividade de ação anticálcio; (vi) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal,

ou aspirina; e (vii) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, ou glutamina;

[0001] em que se (v) for aspirina, (vi) é ácido glutâmico, na forma livre ou sal, e se (vi) for glutamina, (v) é ácido salicílico, na forma livre ou sal. Preferencialmente, a solução de preservação compreende uma mistura de (i) a (vi) como aqui descrito, proporcionando assim a dita solução de preservação da qual a acetamida está ausente. Por exemplo, uma dentre aspirina e glutamina está presente e a acetamida está ausente e/ou um dentre ácido acético e amônia está presente e a acetamida está ausente, ou as duas dentre aspirina e glutamina estão ausentes e as duas dentre ácido acético e amônia estão ausentes, e a acetamida é ausente.

[0002] Em um aspecto da invenção, é fornecida uma solução de preservação como aqui descrita para a preservação de células, tecidos e/ou órgãos, na ausência de um suprimento de sangue.

[0003] Nas modalidades do presente documento, é fornecida uma solução de preservação preparada compreendendo uma solução de preservação como aqui descrita, em que a acetamida está ausente, por exemplo, uma dentre aspirina e glutamina está presente e a acetamida está ausente e/ou um dentre ácido acético e amônia está presente e a acetamida está ausente, ou ambas aspirina e glutamina, e ambos ácido acético e amônia estão ausentes, e acetamida está ausente.

[0004] A solução de preservação preparada pode ser embalada para armazenamento, por exemplo, sob condições anóxicas, na ausência de luz UV. A solução de preservação preparada aqui descrita é estéril e embalada para armazenamento em condições anóxicas na ausência de luz UV.

[0005] De acordo com um aspecto da invenção, a solução de preservação é uma solução de preservação por lavagem.

[0006] De acordo com outro aspecto da invenção, a solução de preservação é uma solução de preservação de armazenamento a frio. Em uma modalidade, (v) é ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal; e

[0007] (vi) é ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, ou glutamina;

[0008] desde que aspirina esteja ausente, de preferência, aspirina e acetamida estejam ausentes e/ou ácido acético e acetamida estejam ausentes. Em outra modalidade, (v) é ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal ou aspirina; e

[0009] (vi) é ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal;

[0010] desde que glutamina esteja ausente, de preferência, glutamina e acetamida estejam ausentes e/ou amônia e acetamida estejam ausentes.

[0011] Em outra modalidade, (v) é ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal; e

[0012] (vi) é ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal;

[0013] desde que glutamina e aspirina estejam ausentes, de preferência, acetamida esteja adicionalmente ausente e/ou ácido acético, amônia e acetamida estejam ausentes.

[0014] Em uma solução de preservação preferencial da invenção, a aspirina é substituída por ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal e glutamina é substituída por ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, de modo que tanto a aspirina quanto a glutamina sejam substancialmente ausentes da solução, de preferência, acetamida esteja adicionalmente ausente e/ou ácido acético, amônia e acetamida estejam ausentes.

[0015] Em outra modalidade da invenção, é fornecida uma solução de preservação como descrita no presente documento compreendendo:

[0016] (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal e/ou aspirina; e

[0017] (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal e/ou glutamina;

[0018] desde que se aspirina estiver presente, glutamina esteja ausente e se glutamina estiver presente, aspirina esteja ausente e/ou em que se aspirina e/ou acetamida e/ou ácido acético estiverem presentes, a quantidade de ácido salicílico presente exceda aquela que pode ser atribuída à degradação a partir da aspirina, por exemplo, como determinado pela soma das quantidades de qualquer ácido acético e de qualquer acetamida presente; e/ou

[0019] em que se glutamina e/ou acetamida e/ou amônia estiverem presentes, a quantidade de ácido glutâmico presente exceda aquela que pode ser atribuída à degradação a partir da glutamina, por exemplo, como determinado pela soma das quantidades de qualquer amônia e de qualquer acetamida presente.

[0020] Em particular, é fornecida uma solução de preservação como aqui descrito que compreende:

[0021] (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal e/ou aspirina; e (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal e/ou glutamina; desde que (v) seja ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal e aspirina e/ou

[0022] (vi) seja ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal e glutamina;

[0023] desde que se aspirina estiver presente, glutamina esteja ausente e se glutamina estiver presente, aspirina esteja ausente; e/ou

[0024] em que se aspirina e/ou acetamida e/ou ácido acético estiverem presentes, a quantidade de ácido salicílico presente exceda aquela que pode ser atribuída à degradação a partir da aspirina, por exemplo,

como determinado pela soma das quantidades de qualquer ácido acético e de qualquer acetamida presente; e/ou

[0025] em que se glutamina e/ou acetamida e/ou amônia estiverem presentes, a quantidade de ácido glutâmico presente exceda aquela que pode ser atribuída à degradação a partir da glutamina, por exemplo, como determinado pela soma das quantidades de qualquer amônia e de qualquer acetamida presente.

[0026] Também é fornecida uma solução de preservação como aqui descrito que compreende:

[0027] (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal, e, de modo opcional, adicionalmente aspirina; e

[0028] (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal e/ou glutamina;

[0029] desde que se acetamida estiver ausente e/ou se aspirina estiver presente, glutamina esteja ausente e se glutamina estiver presente, aspirina esteja ausente; ou

[0030] em que se aspirina e/ou acetamida e/ou ácido acético estiverem presentes, a quantidade de ácido salicílico presente exceda aquela que pode ser atribuída à degradação a partir da aspirina, por exemplo, como determinado pela soma das quantidades de qualquer ácido acético e de qualquer acetamida presente; e/ou

[0031] em que se glutamina e/ou acetamida e/ou amônia estiverem presentes, a quantidade de ácido glutâmico presente exceda aquela que pode ser atribuída à degradação a partir da glutamina, por exemplo, como determinado pela soma das quantidades de qualquer amônia e de qualquer acetamida presente.

[0032] É ainda fornecida uma solução de preservação como aqui descrito que compreende:

[0033] (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal e, de modo opcional, adicionalmente aspirina; e

[0034] (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal e/ou glutamina; desde que: quando (v) for ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal e aspirina estiver ausente, (vi) seja ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal e glutamina.

[0035] De acordo com a invenção, é fornecida uma solução de preservação como aqui descrito que compreende:

[0036] (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal e, de modo opcional, adicionalmente aspirina; e

[0037] (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal e glutamina.

[0038] De acordo com a invenção, é fornecida uma solução de preservação como aqui descrito que compreende:

[0039] (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal e aspirina; e

[0040] (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal e/ou glutamina.

[0041] De acordo com a invenção, é fornecida uma solução de preservação como aqui descrito que compreende:

[0042] (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal e aspirina; e

[0043] (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal e glutamina.

[0044] De acordo com a invenção, é fornecida uma solução de preservação como aqui descrito que compreende:

[0045] (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal e aspirina; e

[0046] (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, ou glutamina.

[0047] De acordo com a invenção, é fornecida uma solução de preservação como aqui descrito que compreende:

[0048] (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal e

[0049] (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal e glutamina.

[0050] De acordo com a invenção, é fornecida uma solução de preservação como aqui descrito que compreende:

[0051] (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal e/ou aspirina; e

[0052] (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, e, de modo opcional, adicionalmente glutamina; desde que se acetamida estiver ausente e/ou se aspirina estiver presente, glutamina esteja ausente e se glutamina estiver presente, aspirina esteja ausente;

[0053] ou em que se glutamina e/ou acetamida e/ou amônia estiverem presentes, a quantidade de ácido glutâmico presente exceda aquela que pode ser atribuída à degradação a partir da glutamina, por exemplo, como determinado pela soma das quantidades de qualquer amônia e de qualquer acetamida presente e/ou

[0054] em que se aspirina e/ou acetamida e/ou ácido acético estiverem presentes, a quantidade de ácido salicílico presente exceda aquela que pode ser atribuída à degradação a partir da aspirina, por exemplo, como determinado pela soma das quantidades de qualquer ácido acético e de qualquer acetamida presente.

[0055] De acordo com esse aspecto da invenção, é fornecida uma solução de preservação como aqui descrito que compreende:

[0056] (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal e/ou aspirina; e

[0057] (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, e, de modo opcional, adicionalmente glutamina;

[0058] desde que: quando (vi) for ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal e glutamina esteja ausente, (v) seja ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal, e aspirina.

[0059] De acordo com a invenção, é fornecida uma solução de preservação como aqui descrito que compreende:

[0060] (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal e aspirina; e

[0061] (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, e, de modo opcional, adicionalmente glutamina.

[0062] De acordo com a invenção, é fornecida uma solução de preservação como aqui descrito que compreende:

[0063] (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal e/ou aspirina; e

[0064] (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal e glutamina.

[0065] De acordo com a invenção, é fornecida uma solução de preservação como aqui descrito que compreende:

[0066] (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal e aspirina; e

[0067] (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal e glutamina. De acordo com a invenção, é fornecida uma solução de preservação como aqui descrito que compreende:

[0068] (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal, ou aspirina; e

[0069] (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal e glutamina.

[0070] De acordo com a invenção, é fornecida uma solução de preservação como aqui descrito que compreende:

[0071] (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal e aspirina; e

[0072] (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal.

[0073] Para evitar dúvidas, será entendido pelo versado na técnica que a referência no presente documento a células, tecidos e órgãos deve incluir células, tecidos e órgãos manipulados.

[0074] Em um aspecto da invenção, pelo menos um componente com propriedades de bloqueio de transporte de cálcio ou uma atividade de ação anticálcio está presente na solução de preservação da invenção.

[0075] Em outro aspecto da invenção, o componente com propriedades de bloqueio de transporte de cálcio ou uma atividade de ação anticálcio está ausente da solução de preservação da invenção.

[0076] Em um aspecto na solução de preservação da invenção, a quantidade de ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal, suficiente para evitar a coagulação do sangue, é menor que 0,5 mmol/l, por exemplo, de cerca de 0,025 a menos que 0,3 mmol/l. Alternativamente, a quantidade de ácido salicílico suficiente para evitar a coagulação do sangue, é de cerca de 0,025 a cerca de 0,275 mmol/l, de preferência, cerca de 0,25 mmol de ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal.

[0077] Alternativamente, aspirina, se presente, está adequadamente presente em uma quantidade de cerca de 0,3 mmol/l a cerca de 1,0 mmol/l, por exemplo, 0,5 mmol/l. Em outro aspecto na solução de preservação da invenção, a quantidade de ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, presente é menor que cerca de 20 mmol/l. Alternativamente, a quantidade de ácido glutâmico presente é de cerca de 2 a menos que 15, ou de cerca de 15 a menos que 20, como de cerca de 2 a cerca de 12 mmol/l, de preferência, cerca de 3 mmol/I| de ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal.

[0078] Alternativamente, glutamina, se presente, está adequadamente presente em uma quantidade de cerca de 15 mmol/l a cerca de 30 mmol/l, por exemplo, aproximadamente 20 mmol/l. Alternativamente, a quantidade de glutamina presente é de cerca de 2 a menos que 15 mmol/l.

[0079] Os sais de ácido salicílico e/ou ácido glutâmico, que podem ser iguais ou diferentes, serão sais farmacologicamente aceitáveis, ou seja, sais que possuem a atividade farmacologicamente desejada do composto parental. Em particular, esses sais devem ser não tóxicos a células, tecidos e/ou órgãos. Tais sais serão geralmente formados quando um próton ácido presente no ácido salicílico e/ou ácido glutâmico for substituído por um íon metálico, por exemplo, um íon de metal alcalino ou um fon alcalino-terroso. Apenas a título de exemplo, sais de metais alcalinos incluem sódio ou potássio e similares. Apenas a título de exemplo, os sais de metais alcalino-terrosos incluem cálcio ou magnésio, etc. A solução de lavagem pode consistir apenas nesses componentes, caso em que é adequada para preservação de tipos e funcionamento de células universais, em particular para preservação de sistemas celulares simples; alternativamente, pode ser fornecida em conjunto com um ou mais substituintes adicionais especificamente adequados para o preservação de um tipo ou função celular desejada, em particular na preservação de sistemas celulares complexos, como órgãos ou tecidos vivos, mais particularmente para animais pequenos ou grandes, mais particularmente órgãos humanos, como fígado, rim, intestino delgado e/ou pâncreas; e tecido vivo.

[0080] De acordo com esse aspecto da invenção, é fornecida uma solução de preservação para preservação do fígado, rim, intestino delgado e pâncreas, que inclui uma combinação de (i) água para injeção; (ii) um dissacarídeo; (iii) pelo menos um componente com propriedades de tampão de pH; (iv) pelo menos um bloqueador de canal ou de transporte de cálcio; (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal, ou aspirina; e (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, ou glutamina, como anteriormente definido no presente documento; juntamente com um àânion sequestrante impermeabilizante, solutos inorgânicos, componentes eficazes contra radicais livres de oxigênio e um osmótico coloidal, e quaisquer componentes adicionais opcionais, como definido anteriormente no presente documento.

[0081] É ainda fornecida uma solução de preservação para preservação do fígado, rim, intestino delgado e pâncreas, que inclui uma combinação de (i) água para injeção; (ii) Sacarose; (iii) Na2HPO, e NaH2PO; (iv) diltiazem; (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal, ou aspirina; e (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, ou glutamina, como definido anteriormente no presente documento; juntamente com ácido lactobiônico, KOH e NaOH, glutationa e alopurinol e PEG, e quaisquer componentes adicionais opcionais como definido anteriormente no presente documento.

[0082] A solução de preservação da presente invenção possui várias vantagens em termos de melhoria das soluções existentes, com danos reduzidos durante a preservação, devido à ausência de amônia e ácido acético tóxico, e à possibilidade de prolongar os períodos de preservação, além do fornecimento de um kit para criar uma solução específica desejada, com as conveniências associadas e implicações de custo que tornarão essa solução comercialmente viável. A presente invenção descobriu que a solução de preservação aqui definida é universalmente aceitável, com base em experiências e sem tentar racionalizar o mecanismo de preservação subjacente.

[0083] Todos os componentes da solição de preservação da presente invenção atendem aos padrões de pureza nacionais ou internacionais da Farmacopeia, quando aplicável. A água para injeção é normalmente purificada e deionizada antes da esterilização. Um sacarídeo é selecionado dentre sacarose, rafinose e manitol; e combinações dos mesmos. Um sacarídeo preferencial é a sacarose. Um sacarídeo pode estar presente em uma quantidade de cerca de 50 mmol/l a cerca de 150 mmol/l, por exemplo, cerca de 100 mmol/l. Um tampão de pH é selecionado a partir de um tampão de fosfato de sódio, um tampão de fosfato de potássio e similares, de preferência, Na2HPO,a, NaH2POa, KaHPOa, KH2PO, e similares; e combinações dos mesmos. Um tampão de pH pode estar presente em uma quantidade de cerca de 15 mmol/l a cerca de 75 mmol/l, por exemplo, de cerca de 15 mmol/l a cerca de 20 mmol/| ou de cerca de 40 a cerca de 70 mmol/l.

[0084] A solução de preservação da invenção é preferencialmente formulada para atender a uma faixa desejada das propriedades físicas farmacopeticamente aceitáveis. Preferencialmente, a solução tem um pH na faixa de 6,5 a 7,8, mais preferencialmente 6,5 a 7,0, mais preferencialmente 6,8 a 7,0. O pH é geralmente medido à temperatura ambiente, por exemplo, cerca de 20 ºC.

[0085] Um bloqueador de transporte de cálcio ou agente de atividade anticálcio opcionalmente adicionado é selecionado a partir de qualquer bloqueador conhecido de transporte ou canal de cálcio, como nicardipina, diltiazem, verapamil, nisoldipina, clorpromazina ou trifluorperazina; e suas combinações e seus metabólitos. De preferência, um bloqueador de transporte ou canal de cálcio é a nicardipina e/ou diltiazem; ou seus metabólitos. Um bloqueador de transporte ou canal de cálcio pode estar presente em uma quantidade de cerca de 0,0005 mmol/I a cerca de 1,0 mmol/l, por exemplo, cerca de 0,005 mmol/l. Quando o transporte de cálcio ou o bloqueador de canais é nicardipina, a nicardipina pode estar presente em uma quantidade aproximada de 0,0005 mmol/l a 1,0 mmol/l, por exemplo, cerca de 0,005 mmol/l. Quando o transporte de cálcio ou bloqueador de canal é diltiazem, o diltiazem pode estar presente em uma quantidade de 0,0005 mmol/l a cerca de 1,0 mmol/l, por exemplo, cerca de 0,022 mmol/l.

[0086] Sem se limitar a essa teoria, é feita referência aqui a componentes por função, com base na atividade farmacológica e fisiológica comumente aceita; no entanto, para evitar dúvidas, os componentes listados podem contribuir com função adicional ou diferente da atribuída, e isso não deve ser visto como uma limitação do mesmo. Além disso, equivalentes funcionais aos listados podem ser considerados dentro do escopo desta invenção. Outros componentes podem estar presentes na solução de preservação. Outros componentes, a menos que indicado de outra forma, estarão tipicamente presentes em pequenas quantidades, por exemplo, na faixa de até 1 mmol/l.

[0087] De preferência, a solução de preservação da invenção compreende um ou mais componentes adicionais selecionados a partir de:

[0088] pelo menos um àânion que é amplamente impermeável às células, de preferência é um àânion sequestrante impermeabilizante; e

[0089] pelo menos um componente com propriedades osmóticas coloides (é um osmótico coloidal).

[0090] Um àânion sequestrante impermeabilizante compreende preferencialmente lactobionato ou ácido lactobiônico. Quando um ânion sequestrante impermeabilizante está presente, ele pode estar em uma quantidade de cerca de 15 mmol/| a cerca de 75 mmol/l, por exemplo, de cerca de 15 mmol/l a cerca de 20 mmol/l a ou cerca de 20 mmol/l ou de cerca de 40 mmol/l a cerca de 70 mmol/l.

[0091] Um osmótico coloidal é de preferência selecionado a partir de polietilenoglicol (PEG), gelatina succinilada (como na Gelofusina), Ficoll (um polissacarídeo) e um produto de amido; e combinações dos mesmos. Quando um componente com propriedades osmóticas coloides está presente, ele pode estar em uma quantidade de cerca de 0,5 mmol/l, cerca de 3,0 mmol/l, por exemplo, cerca de 0,75 mmol/l, cerca de 1,33 mmol/l, como, cerca de 1,0 mmol/l, e 20.000 PM. Alternativa ou adicionalmente, a solução de preservação da invenção pode compreender um ou mais componentes selecionados a partir de:

[0092] solutos inorgânicos ou orgânicos;

[0093] um — componente ou componentes com propriedades quelantes de cálcio (isto é, um quelante de cálcio); e

[0094] um — componente ou componentes com propriedades quelantes de ferro (isto é, um quelante de ferro).

[0095] De preferência, um soluto inorgânico ou orgânico compreende um soluto inorgânico e é um eletrólito que inclui cátions e/ou ânions, por exemplo, selecionados a partir de Na”, K”, CI, OH' e similares; e combinações dos mesmos. Em um aspecto preferencial da invenção, o soluto é um soluto inorgânico, como NaCl. Quando um soluto inorgânico ou orgânico está presente, pode estar em uma quantidade de cerca de 15 mmol/l a cerca de 75 mmol/l, por exemplo, de cerca de 15 mmol/| a cerca de 20 mmol/l ou de cerca de 40 mmol/l a cerca de 70 mmol/l.

[0096] De preferência um quelante de cálcio compreende citrato ou EGTA (etileno glicol-bis(B-aminoetil éter)-N,N,N' N'-ácido tetra acético) e um quelante de ferro compreende EDTA (ácido etileno diamina tetra acético).

[0097] Alternativa ou adicionalmente, a solução de preservação da invenção pode compreender um ou mais componentes selecionados a partir de:

[0098] um ou mais (adicionais) aminoácidos, além do ácido glutâmico e/ou glutamina;

[0099] pelo menos um componente eficaz contra os radicais livres de oxigênio ou a produção de radicais livres de oxigênio;

[0100] pelo menos um componente do sistema de suprimento de energia ou que influencia o sistema de suprimento de energia ou um corpo de cetona; e

[0101] pelo menos um componente que possui uma ação crioprotetora.

[0102] De preferência, um aminoácido adicional é selecionado a partir de glicina e n-acetilcisteína, e uma combinação dos mesmos. Quando um componente aminoácido adicional está presente, ele pode estar em uma quantidade de cerca de 1 mmol/l a cerca de 30 mmol/l, preferencialmente de cerca de 3 mmol/l a cerca de 12 mmol/l, por exemplo cerca de 10 mmol/l.

[0103] Os inibidores de radicais livres de oxigênio preferenciais são selecionados entre alopurinol e glutationa reduzida, mais preferencialmente uma combinação dos mesmos. Quando um componente eficaz contra radicais livres de oxigênio está presente, pode estar em uma quantidade de cerca de 0,2 mmol/| a cerca de 5 mmol/l, por exemplo, de cerca de 3 mmol/l a cerca de 5 mmol/l. Geralmente, uma quantidade de inibidores de radicais livres de oxigênio aqui definida refere-se à quantidade total de inibidores de radicais livres de oxigênio. Por exemplo, quando os inibidores de radicais livres de oxigênio compreendem uma combinação de alopurinol e glutationa reduzida, uma quantidade dos inibidores combinados de radicais livres de oxigênio pode estar em uma quantidade de cerca de 0,2 mmol/| cerca de 5 mmol/l, etc., um sistema de fornecimento de energia composto pela adenosina. Quando um componente de suprimento de energia está presente, ele pode estar em uma quantidade de até cerca de 20 mmol/l, por exemplo, de cerca de 5 a cerca de 20 mmol/l, como cerca de 5 mmol/l.

[0104] De preferência, um corpo cetônico compreende beta-hidróxi butirato.

[0105] Crioprotetores são compostos que, quando presentes na solução, podem reduzir ou inibir a formação de cristais de gelo em soluções expostas a temperaturas abaixo de O ºC. Assim, o uso de um crioprotetor permite que as células, tecidos ou órgãos sejam armazenados a uma temperatura de cerca de -20 “ºC a cerca de 4 “C. De preferência, um crioprotetor é selecionado de um glicol como propilenoglicol, DMSO, um sacarídeo, um carboidrato, um lipídeo, um glicolipídeo como xilomanano, uma glicoproteína, proteína ou polipeptídeo ou um poliol; ou uma combinação dos mesmos. Quando um crioprotetor está presente, ele pode estar em uma quantidade de cerca de 5 a cerca de 100 mg/ml.

[0106] Alternativa ou adicionalmente, a solução de preservação da invenção pode compreender componentes adicionais para uma função específica selecionada dentre:

[0107] pelo menos um componente do sistema de transdução de sinal intracelular ou que modifique esse sistema, preferencialmente um inibidor de proteína quinase ou um inibidor de calmodulina; e

[0108] pelo menos um componente que possui uma ação estabilizadora da membrana, preferencialmente ranolazina, e similares. De preferência, um componente sacarídeo (ii) está presente em uma quantidade na faixa de 50 a 150 mmol/l, por exemplo, aproximadamente 100 mmol/|;

[0109] o componente tampão de pH (iii) está presente em uma quantidade total na faixa de 15 a 75 mmol/li, por exemplo, aproximadamente 15 a 20 ou 40 a 70 mmol/l;

[0110] o ânion sequestrante impermeabilizante está presente em uma quantidade total na faixa de 15 a 75 mmol/l, por exemplo, aproximadamente 15 a 20 ou 40 a 70 mmol/l;

[0111] o componente soluto inorgânico ou orgânico está presente em uma quantidade total na faixa de 15 a 75 mmol/l, por exemplo, aproximadamente 15 a 20 ou 40 a 70 mmol/l;

[0112] o componente aminoácido adicional está presente em uma quantidade na faixa de 5 a 30 mmol/l, preferencialmente 5 a 12 mmol/l, por exemplo, aproximadamente 10 mmol/l; o componente eficaz contra os radicais livres de oxigênio está presente em uma quantidade total na faixa de até 5 mmol/l, por exemplo, aproximadamente 3 a 5 mmol/l;

[0113] o componente de suprimento de energia está presente em uma quantidade na faixa de até 20 mmol/l, por exemplo, 5 mmol/l;

[0114] o componente com propriedades osmóticas coloides está presente em uma quantidade na faixa de 0,5 a 3,0 mmol/l, por exemplo, aproximadamente 0,75 a 1,33 mmol/l, como 1,0 mmol/l e 20.000 PM;

[0115] quando o componente com propriedades de bloqueio de transporte de cálcio (iv) está presente, o agente bloqueador de transporte de cálcio pode ser, por exemplo, nicardipina ou diltiazem. À nicardipina pode estar presente em uma quantidade na faixa de 0,0005 a 1,0 mmol/l, por exemplo, 0,005 mmol/l; e diltiazem pode estar presente em uma quantidade na faixa de 0,0005 a 1,0 mmol/l, por exemplo, 0,022 mmol/l.

[0116] No caso de certos componentes presentes como 2 ou mais tipos, as quantidades relativas podem ser críticas ou não críticas. Um componente preferencial eficaz contra os radicais livres de oxigênio é aproximadamente 3 mmol/l de glutação reduzida e 0,35 a 04, mais preferencialmente 0,4 mmol/| de alopurinol.

[0117] Um componente soluto inorgânico ou orgânico preferencial compreende eletrólitos como a seguir:

[0118] Na* 15 a 150 mmol/l, por exemplo, 30 mmol/l

[0119] K* 0 a 25 mmol/l, por exemplo, 15 mmol/l

[0120] CI 0a 100 mmol!

[0121] OH 0 a75 mmol/l

[0122] De preferência, uma solução de acordo com a invenção é preparada e armazenada sob condições anóxicas na ausência de luz UV.

[0123] É uma vantagem particular que a solução como definida compreendendo os componentes (i) - (vi) possa ser armazenada por períodos prolongados, e componentes adicionais necessários para uso clínico

(por exemplo, heparina) adicionados imediatamente antes da sua utilização. É especialmente uma vantagem da solução da presente invenção que a solução possa ser armazenada por períodos prolongados sem a geração de produtos de degradação indesejáveis. Mais particularmente, a solução pode ser armazenada sem a geração de um ou ambos de ácido acético e amônia, e sem a geração de acetamida. Alternativamente, a solução pode ser armazenada com a geração de um ou ambos de ácido acético e amônia e/ou com a geração de acetamida, em quantidade inferior ao equivalente molar de ácido salicílico e ácido glutâmico, respectivamente.

[0124] A solução de preservação da invenção, como aqui definida, preferencialmente compreende os componentes básicos (i) - (vi) combinados com componentes adicionais para funções específicas. A solução para uso na preservação de órgãos é particularmente de maior complexidade do que na preservação de sistemas celulares simples, no entanto, constatou-se que a solução pode, no entanto, ser relativamente direta.

[0125] De preferência, a solução de preservação para órgãos intra-abdominais como rim, fígado e pâncreas; e também intestino e intestino delgado; compreende componentes (i) - (vi) como aqui definidos juntamente com pelo menos um componente selecionado a partir de um componente aniônico sequestrante impermeabilizante; e um componente com propriedades osmóticas coloides; e mais preferencialmente, adicionalmente, um ou mais componentes selecionados dentre:

[0126] componente soluto inorgânico ou orgânico;

[0127] um componente aminoácido adicional;

[0128] um componente eficaz contra radicais livres de oxigênio; e

[0129] um componente de suprimento de energia.

[0130] De preferência, uma solução de preservação para preservação do fígado, rim, intestino delgado e pâncreas compreende uma combinação:

(i) água para injeção; (ii) um dissacarídeo; (ii) pelo menos um componente com propriedades de tampão de pH; (iv) pelo menos um bloqueador de canal ou de transporte de cálcio; (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal, ou aspirina; e (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, ou glutamina, como definido anteriormente no presente documento; juntamente com um àânion sequestrador impermeabilizante, solutos inorgânicos, componentes eficazes contra radicais livres de oxigênio e um osmótico coloidal, e quaisquer componentes adicionais opcionais, conforme aqui definido;

[0131] mais preferencialmente, uma combinação de

[0132] (ii) água para injeção;

[0133] (ii) sacarose;

[0134] (iii) Na2HPO, e NaH2PO;

[0135] (iv) diltiazem ou nicardipina; (vi) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal, ou aspirina; e (vii) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, ou glutamina, como definido anteriormente no presente documento; juntamente com ácido lactobiônico, KOH e NaOH, glutationa e alopurinol e PEG, e quaisquer componentes adicionais opcionais como aqui definido; mais preferencialmente, compreende uma combinação de classes de componentes dada abaixo, mais preferencialmente, do tipo específico listado, e substancialmente na quantidade listada a seguir, juntamente com quaisquer componentes adicionais opcionais como definido no presente documento, quando constituídos de volume em água:

Componente Tipo Quantidade A ma componente de ânion | Ácido lactobiônico | 40 a 70 sequestrante ou lactobionato impermeabilizante componentes —“de soluto|KOH&NaOH 40 a 70 Fi componentes eficazes contra | Glutationa el3a5

PSA A componente de tampão de | Na,HPO, & |40a70 a o o aminoácido (vi) Ácido — glutâmico; | 2 a 20 ou <20 como 2 a mr oem Sado anti-inflamatório (v) Ácido salicílico; ou | 0,025 a 0,5 ou <0,5 como sum á joos iumasao componente com bloqueio | Diltiazem 0,0005 a 1,0 [drtmpona dreams

[0136] desde que se (v) for aspirina, (vi) não seja glutamina;

[0137] e, com mais preferência, substancialmente na quantidade listada a seguir, juntamente com quaisquer componentes adicionais opcionais como definido anteriormente no presente documento, quando constituídos de volume em água:

[0138] desde que se (v) for aspirina, (vi) não seja glutamina.

[0139] Além disso, surpreendentemente constatou-se que a eficácia dos constituintes de uma solução de preservação de acordo com a invenção é melhorada pela substituição de certos constituintes pelos seus principais produtos de degradação. Sem se limitar a essa teoria, parece que os subprodutos dessa degradação podem exercer efeitos tóxicos indesejados durante o uso da solução de preservação, tanto individualmente quanto em combinação. Por exemplo, ácido acético e amônia formam acetamida, que é potencialmente prejudicial ao fígado. Ao remover esse efeito tóxico, a eficácia da solução de preservação é aprimorada.

[0140] Por conseguinte, a constatação de acordo com a presente invenção é que certos substituintes são essenciais para a preservação das principais funções celulares essenciais para todos os tipos de células e foram identificados como os componentes (i) a (vi) como definidos no presente documento. Embora essa solução possa ser altamente eficaz ou satisfatória na preservação de tecidos simples ou sistemas celulares, se desejar preservar órgãos ou sistemas celulares que exijam ou forneçam funções celulares incomuns ou mais complexas, é necessário incorporar substituintes especificamente direcionados para preservar o requisito ou função fornecida, seja muscular, elétrica, atividade específica da membrana, suprimento de energia e similares.

[0141] Assim, a invenção fornece particularmente uma solução de preservação como definida no presente documento para a preservação do fígado, rim, intestino delgado e pâncreas.

[0142] A solução é adequadamente preparada por métodos como conhecidos na técnica por simples mistura sob condições farmacopeticamente aceitáveis. De preferência, os componentes são determinados e incorporados na concentração molar desejada.

[0143] Será apreciado que a variação pode ser específica ou inespecífica para a eficácia da solução e que uma quantidade de variação que não tem efeito no desempenho do fluido é considerada dentro do escopo desta invenção. A seleção do tipo de componente, que requer uma quantidade de verificação por experimentação de rotina, é considerada dentro do escopo desta invenção.

[0144] Em um aspecto adicional da invenção, é fornecido um método para a preparação de uma solução de preservação compreendendo a adição de componentes (i) - (vi) em sequência à água, acompanhando quaisquer componentes adicionais, com exceção das propriedades osmóticas coloidais os componentes instáveis, se houver, por exemplo, aspirina ou glutamina, e dissolução da mistura; adicionando as propriedades osmóticas do componente com coloide, se houver, e tornando a solução quase no volume; e finalmente compensando o volume para regular o pH, esterilizando e resfriando a O a 4 “ºC. A solução pode ser armazenada, se desejado, com a adição subsequente de qualquer componente instável (por exemplo, aspirina e/ou glutamina) imediatamente antes do uso. O método de acordo com este aspecto da invenção pode incluir embalar a solução preparada para armazenamento, preferencialmente sob temperatura reduzida, mais preferencialmente na faixa de O a 12 ºC, mais preferencialmente 0 a 4 ºC, por exemplo, embalar a solução preparada em uma condição anóxica e na ausência de luz UV.

[0145] Em outro aspecto, é fornecida uma solução de preservação obtida pelo método como aqui descrito.

[0146] Nas modalidades deste documento, é fornecida uma solução de preservação obtida por um método que compreende a adição de componentes (i) - (vi) à água.

[0147] Em um aspecto adicional da invenção, é fornecido o uso de uma solução de preservação como definida no presente documento como uma solução de preservação por lavagem ou uma solução de preservação de armazenamento a frio; para a preservação de células na ausência de suprimento sanguíneo, em especial para evitar danos aos órgãos, tecidos vivos e células. A solução é adequada para uso em pequenos ou grandes animais ou mamíferos, em particular células humanas, tecidos e órgãos.

[0148] O uso da solução pode estar no transplante, incluindo órgãos de doadores com ou sem batimento cardíaco, em cirurgia incluindo qualquer situação de isquemia quente ou fria, preservação de membros ou de todo o corpo, em experimentação em tecidos vivos, em cultura e preservação de engenharia células, tecidos e órgãos e afins. De preferência, a solução é usada como uma solução nivelada colocada em contato com células, tecidos ou órgãos, membros ou todo o corpo através do sistema vascular, e, opcionalmente, também serve como uma solução de preservação para armazenamento de células niveladas, tecidos e órgãos. A solução é adequada para preservação prolongada das células, tecidos e órgãos, tanto no armazenamento estático hipotérmico quanto no sistema de perfusão hipotérmica por máquina.

[0149] Assim, a invenção fornece particularmente uma solução de preservação como definida no presente documento para a preservação do fígado, rim, intestino delgado e pâncreas.

[0150] Em um aspecto adicional da invenção, é fornecido um método para lavar, preservar ou preservar por lavagem células, em particular células vivas, tecidos ou órgãos pelos quais as células, tecidos ou órgãos são colocados em contato com uma solução como definida no presente documento. De acordo com este aspecto da invenção, é fornecido um método para lavar, preservar ou preservar por lavagem células para armazenamento hipotérmico simples, em particular células vivas, tecidos ou órgãos pelos quais as células, tecidos ou órgãos são colocados em contato com uma solução de preservação que compreende: () água para injeção; (ii) pelo menos um sacarídeo, como um monossacarídeo, dissacarídeo, trissacarídeo ou polissacarídeo; (iii) pelo menos um componente com propriedades de tampão de pH; (iv) opcionalmente, pelo menos um componente com propriedades de bloqueio de transporte de cálcio ou uma atividade de ação anticálcio; (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal, ou aspirina; e (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, ou glutamina;

[0151] desde que se acetamida estiver ausente e/ou se aspirina estiver presente, glutamina esteja ausente e se glutamina estiver presente, aspirina esteja ausente; mais particularmente, em que se (v) for aspirina, (vi) seja ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, e se (vi) for glutamina, (v) seja ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal;

[0152] em que as células, tecidos ou órgãos são lavados com solução, removidos do lócus normal, resfriados a temperaturas normalmente na faixa de zero a 12 ºC e armazenados.

[0153] De acordo com esse aspecto da invenção, se a acetamida estiver ausente, pelo menos um dos ácidos acético e amônia está ausente. De acordo com um aspecto da invenção, o método compreende a preservação por lavagem de células, tecidos ou órgãos vivos.

[0154] De acordo com outro aspecto da invenção, o método compreende a preservação no armazenamento a frio de células, tecidos ou órgãos vivos.

[0155] Em um método preferencial de acordo com este aspecto da invenção, a aspirina é substituída por ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal e glutamina é substituída por ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, de modo que tanto a aspirina quanto a glutamina sejam substancialmente ausentes da solução, de preferência acetamida está adicionalmente ausente e/ou ácido acético, amônia e acetamida também estão ausentes, mais particularmente em que (v) é ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal, e (vi) é ácido glutâmico , na forma livre ou na forma de sal.

[0156] De acordo com um aspecto adicional da invenção, é fornecido um método para a preservação de células para armazenamento hipotérmico simples, em particular células vivas, tecidos ou órgãos pelos quais as células, tecidos ou órgãos são colocados em contato com uma solução de preservação que compreende: (i) água para injeção; (ii) pelo menos um sacarídeo, como um monossacarídeo, dissacarídeo, trissacarídeo ou polissacarídeo; (iii) pelo menos um componente com propriedades de tampão de pH; (iv) opcionalmente pelo menos um componente com propriedades de bloqueio de transporte de cálcio ou uma atividade de ação anticálcio; (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal, ou aspirina; e (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, ou glutamina; e pelo menos um componente com propriedades crioprotetoras (isto é, um crioprotetor); desde que acetamida esteja ausente e/ou pelo menos um dentre ácido acético e amônia esteja adicionalmente ausente; mais particularmente se (v) for aspirina, (vi) é ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, e se (vi) for glutamina, (v) é ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal;

[0157] em que as células, tecidos ou órgãos são lavados com solução, removidos do local normal, resfriados a temperaturas normalmente na faixa entre -20 ºC e 12 ºC e armazenados.

[0158] De acordo com esse aspecto da invenção, se a acetamida estiver ausente, então, pelo menos um dentre ácido acético e amônia está ausente.

[0159] O método pode ser para armazenamento hipotérmico simples, em que as células, tecidos ou órgãos são lavados com solução, removidos do local normal, resfriados, preferencialmente a temperaturas normalmente na faixa entre zero e 12 ºC e armazenados. Além disso, se um crioprotetor estiver presente, o tecido ou órgão pode ser armazenado a uma temperatura de cerca de -20 ºC a cerca de 4 ºC. Além disso, a solução pode ser ativamente liberada através do órgão. Descobrimos que células, tecidos ou órgãos podem ser armazenados por períodos prolongados superiores aos praticados atualmente, por exemplo, rim e fígado por períodos da ordem de 48 horas ou mais. Além disso, alternativamente, o método é para a preservação de células, particularmente tecidos ou órgãos, pelo qual as células, tecidos ou órgãos foram lavados e levados a um estado hipotérmico e são contatados com a solução de preservação por imersão ou perfusão.

[0160] De preferência o método de invenção compreende administrar às células, tecidos, órgãos ou a um doador uma quantidade biologicamente eficaz da solução da invenção, a uma taxa efetiva ou a uma concentração eficaz para manter ou melhorar a função da mesma. De preferência, o método é um método para preservar determinadas funções celulares, de tecidos ou órgãos, por exemplo, metabolismo celular, e/ou para interromper temporariamente determinadas funções, por exemplo, atividade muscular, quebra ou excreção de componentes celulares essenciais, etc., produtos excretórios, por exemplo, na forma de bile ou urina e similares.

[0161] A isquemia é a situação que resulta da interrupção do fluxo sanguíneo através de um órgão. Os efeitos são devidos à falta de oxigênio e nutrientes; e acumulação de dióxido de carbono e outros resíduos. É mais prejudicial à temperatura corporal do que ao frio, razão pela qual os órgãos de transplante são lavados e resfriados. Os doadores de órgãos sofreram frequentemente traumas e, portanto, o órgão doador pode ter sido submetido a um período de isquemia quente como resultado do trauma. À adição experimental de um período de isquemia quente antes da lavagem imita essa situação. É uma vantagem que nossa solução forneça proteção contra essa isquemia quente. A perfusão de lavagem de preferência é realizada a uma pressão de até 300 mmHg, mais preferencialmente na faixa atmosférica a 200 mmHg, mais preferencialmente na faixa de 160 mmHg, mais preferencialmente até 100 mmHg, mais preferencialmente até 50 mmHg.

[0162] O método de acordo com esse aspecto da invenção compreende o uso da solução de preservação como definida no presente documento.

[0163] Em um aspecto adicional da invenção, é fornecido um kit de partes compreendendo uma solução de preservação tendo, em uma parte, componentes (i) - (vi) como definido no presente documento, opcionalmente associado com, em uma ou mais partes adicionais, individuais componentes selecionados de um ou mais dos componentes adicionais, como definido no presente documento, para uso na preparação de uma ou mais soluções para fins específicos; e servindo como uma solução universal de preservação. Nas modalidades, um Kkit de partes aqui inclui uma solução de preservação tendo, em uma parte, componentes (i) - (vi) como definido no presente documento, dos quais um ou mais componentes instáveis estão ausentes e são fornecidos separadamente, em um ou mais partes adicionais, para adição imediatamente antes do uso. De acordo com um aspecto da invenção, o kit de partes compreende uma solução de preservação nivelada com componentes (i) - (vi) como definido no presente documento.

[0164] De acordo com outro aspecto da invenção, o kit de peças compreende uma solução de preservação a frio com componentes (i) - (vi) como definido no presente documento.

[0165] A invenção é agora ilustrada de maneira não limitativa com referência aos exemplos e com referência às figuras anexas, nas quais:

[0166] A Figura 1 ilustra a estabilidade da aspirina em uma solução de preservação: métodos de HPLC foram desenvolvidos para medir a concentração de aspirina e ácido salicílico na solução da Técnica Anterior. A aspirina é rapidamente hidrolisada em ácido salicílico e ácido acético durante o armazenamento. Após 8 semanas, nenhum dos compostos parentais permanecem.

[0167] A Figura 2 ilustra a creatinina sérica após a preservação renal em uma solução de preservação aprimorada (solução da invenção) versus uma formulação anterior (técnica anterior). A creatinina sérica mais baixa ilustra dano reduzido ao órgão.

[0168] A Figura 3 ilustra a preservação ex vivo do rim suíno em solução de preservação da invenção até 72 horas fora do corpo. O parênquima é bem preservado com glomérulos e túbulos normais. Coloração H&E, ampliação de 40x.

EXEMPLO 1 11 Soluções de Preservação por Lavagem Usadas na Invenção

[0169] As soluções de preservação envolvidas neste estudo são mostradas nas Tabelas 1, 2, 3 e 4, valores em mmol/l. As soluções (SOLS) foram compostas a partir de um frasco meio cheio de água, ao qual todos os lactobionatos, KOH, fosfato de sódio, glutamina ou ácido glutâmico, sacarose, aspirina ou ácido salicílico, alopurinol e diltiazem foram adicionados em sequência e dissolvidos. O coloide (PEG) foi então adicionado e a solução preparada quase até o volume. Foi adicionado NaOH para definir o pH. À solução foi então preparada para o volume. Todas as soluções foram esterilizadas por filtração e armazenadas em garrafas de vidro a 4 ºC. Glutationa reduzida foi adicionada durante a preparação ou imediatamente antes do uso. As fontes são como indicadas acima ou como divulgado no documento WO 02/41696.

COMPARATIVO

[0170] A formulação anterior é como divulgada e descrita no documento WO 02/41696 e como ilustrada na Tabela 1 deste documento.

UW é uma solução comercial original padrão (viaSpan/BELZER UW, DU PONT PHARMA).

Composição de Soluções de Preservação Comparativas

[0171] A composição de soluções de preservação comparativas é ilustrada na Tabela 1: TABELA 1 Mmol/l Formulação da Técnica Universidade de Anterior Wiscosin Solução (Belzer) BE wo er sw | E & 3 Fam FA x ea eo a eo ss meme | a se e Ra meo — a eo ag [Nest — a FETO |

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Composição das Soluções de Preservação a Frio da Invenção

[0173] A composição das soluções de preservação a frio da invenção com (v) e/ou (vi) em quantidade reduzida é ilustrada na Tabela 3: TABELA 3

SE e a e se R | E e | rg Asset os as Fm o emo RR Composição das Soluções de Preservação a Frio da invenção com (v) e/ou (vi) em quantidade reduzida

[0174] A composição das soluções de preservação a frio da invenção com (v) e/ou (vi) em quantidade reduzida é ilustrada na Tabela 4: TABELA 4 Asdoguamica ty | a o Ss a EEsEEN | mm | e | so as Pee | rr | EXEMPLO 2

[0175] As soluções comparativas e a solução de preservação por lavagem da invenção foram estudadas nos seguintes sistemas.

211 Geração e impacto de metabólitos tóxicos produzidos por soluções de preservação por lavagem descritas na técnica anterior

[0176] Verificou-se que a solução de preservação por lavagem descrita no pedido de patente internacional nº WO 02/41696 gera, mediante armazenamento, produtos metabólicos com potencial de serem tóxicos para as células/tecidos/órgãos sob armazenamento. Como exemplo, a Figura 1 ilustra que o armazenamento da solução por 8 semanas resulta em 100% da aspirina convertendo em ácido salicíico e na produção de quantidades equimolares de ácido acético prejudicial. Em uma solução que originalmente contém 0,5 mM de aspirina, isso resulta na formação de 0,5 mM de ácido acético, 30 mg/l. O ácido acético é um irritante conhecido e danifica os tecidos humanos.

[0177] A título de exemplo adicional, a presença de amônia na solução da técnica anterior foi demonstrada por ensaio colorimétrico. O kit de ensaio de amônia (ab83360) fornece um ensaio rápido, simples, sensível e confiável, adequado para pesquisas e ensaios de alto rendimento de amônia e amônio. No ensaio, amônia e amônio são convertidos em um produto que reage com a sonda OxiRed para gerar cor (Amáx = 570 nm) que pode ser facilmente quantificada pelo leitor de placas. O kit pode detectar 1 nmol (-20 uM) de amônia total e amônio, o que é muito mais sensível do que medir a amônia com um ensaio baseado em NADPH. Usando este protocolo, é demonstrado que a Solução da Técnica Anterior contém aproximadamente 2,6 mM de amônia. Isso é muitas vezes maior que a toxicidade conhecida da amônia, sabe-se que 300 UM são tóxicos para as células humanas'. Por outro lado, na solução da invenção, a amônia está substancialmente ausente, abaixo do nível mais baixo de quantificação do teste, menor que 2 nmol.

[0178] A toxicidade da amônia pode ocorrer, causando uma perturbação na absorção de potássio pelas células. Isso pode causar efeitos deletérios em todos os órgãos e tecidos; alteração do pH, potencial de membrana e metabolismo?. In vivo, a amônia normalmente seria desintoxicada pelo ciclo da ureia hepática. No entanto, isso não pode ocorrer durante o armazenamento ou o uso da solução de preservação, pois a atividade metabólica das células é intencionalmente reprimida durante a preservação pelo frio. Isso significa que a amônia na solução da técnica anterior permanece durante o período de preservação e há um potencial significativo de dano celular por reperfusão. Em uma solução da presente invenção, a amônia está ausente e esse dano não pode ocorrer.

[0179] Em uma solução que originalmente contém 20 mM de glutamina ou aproximadamente 2,6 mM de amônia e 0,5 mM de aspirina, ou até 0,5 mM de ácido acético, isso resulta na formação de até 0,5 mM de acetamida, 30 mg/l. Sabe-se que a acetamida é prejudicial para os tecidos humanos.

'Heeneman et al, Journal of Immunological Methods (1993) 166, 1, páginas 85 a 91 ?Dasarathy, S., Mookerjee, R.P., Rackayova, V. et al. Metab Brain Dis (2017) 32: 529.

https://doi.org/10.1007/sl 1011-016-9938-3

2.1.2 Ausência de metabólitos tóxicos nas soluções de preservação por lavagem da invenção

[0180] Nas soluções da invenção em que a aspirina está ausente, SOL 1.1, SOL 1.2, SOL 2.1, SOL 2.2, SOL 3.1 e SOL 3.2, o ácido acético está substancialmente ausente mesmo após o armazenamento, abaixo do nível mais baixo de quantificação do ensaio.

[0181] Em outras soluções da invenção nas quais a aspirina é adicionada imediatamente antes do uso, o ácido acético está substancialmente ausente ou em níveis reduzidos durante o período de uso.

[0182] Em uma solução da invenção a partir da qual a glutamina está ausente, SOL 1.1, SOL 1.3, SOL 2.1, SOL 2.3, SOL 3.1 e SOL

3.3, a amônia está substancialmente ausente mesmo após o armazenamento, abaixo do nível mais baixo de quantificação do teste, menor que 2 nmol.

[0183] Em outras soluções da invenção nas quais a glutamina é adicionada imediatamente antes do uso, a amônia está substancialmente ausente ou em níveis reduzidos durante o período de uso.

[0184] Além disso, em todas as soluções da invenção aspirina ou glutamina ou ambas estão ausentes, SOL 1.1, SOL 1.2, SOL 1.3, SOL 2.1, SOL 2.2, SOL 2.3, SOL 3.1, SOL 3.1, SOL 3.2 e SOL 33, e a acetamida está substancialmente ausente mesmo após armazenamento.

2.2 Modelo de Transplante de Suínos

[0185] Para uma avaliação verdadeira da qualidade das soluções de preservação, é necessário empregar um modelo animal inteiro para avaliar os resultados clínicos do transplante usando as soluções de teste. O modelo suíno é mais apropriado para isso. Em resumo, o protocolo envolve a recuperação do órgão (fígado, rim, intestino delgado ou pâncreas), preservação por lavagem em teste (invenção) ou soluções de controle (comparação) e depois implantação (alo ou autotransplante, dependendo do órgão considerado). A função do órgão e saúde geral do receptor são monitoradas após a cirurgia por um período de tempo clinicamente apropriado.

[0186] A tabela a seguir fornece uma indicação das medidas usadas para avaliar a funcionalidade do órgão transplantado no animal receptor. Além disso, são monitorados a saúde geral e o bem-estar do animal (peso corporal, consumo de alimentos etc.). No final do estudo, o animal é sacrificado e os principais órgãos são coletados para análise histológica. [— [esses —

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[0187] A creatinina é um marcador importante no sangue, diretamente relacionado à função renal. Um rim funcional manterá uma baixa concentração de creatinina; um nível alto indica um rim que está funcionando mal. Após o transplante, a creatinina sérica deve aumentar e só volta aos níveis normais se/quando a função renal for restaurada. A magnitude do aumento reflete a magnitude da lesão de preservação. A velocidade com que os níveis de creatinina retornam ao normal reflete a rapidez com que o rim retorna à função normal; isso por si só é uma medida-chave de quão bem o órgão foi preservado. A Figura 2 ilustra um estudo recente no qual a solução de preservação da invenção supera significativamente a solução da técnica anterior; o pico de creatinina é significativamente menor e a função renal retorna ao normal muito mais rapidamente. Isso é evidência de muito dano reduzido ao tecido na solução da invenção.

HISTOLOGIA

[0188] Foi realizada histologia de amostras de tecido coletadas de órgãos abdominais (fígado, rim, pâncreas e intestino delgado) de animais perfundidos na Universidade de Wisconsin (UW) (disponível comercialmente como solução de armazenamento a frio Belzer UWO) ou na solução de utilização da invenção para até 72 horas. As soluções padrão de comparação, como UW, são normalmente capazes de preservar tecidos por aproximadamente 12 a 24 horas. As amostras de tecido coradas por hematoxilina e eosina (Figura 3) ilustam a morfologia normal e a boa preservação das amostras pela solução de preservação da invenção por até 72 horas. É observada uma melhor retenção do conteúdo citoplasmático e o fantasma nuclear também estava presente no grupo UW, ausente na solução de preservação da invenção. Outros fantasmas nucleares são aparentes em amostras UW às 48 e 72 horas, ausentes na solução de preservação das amostras. Isso é evidência de que a solução de preservação da invenção causa muito dano celular reduzido ao longo de tempos de preservação

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Solução de preservação para a preservação de células, tecidos e/ou órgãos, na ausência de um suprimento sanguíneo, caracterizada pelo fato de que compreende: (i) água para injeção; (ii) pelo menos um sacarídeo; (iii) pelo menos um componente com propriedades de tampão de pH; (iv) opcionalmente, pelo menos um componente com propriedades de bloqueio de transporte de cálcio ou uma atividade de ação anticálcio; (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal, ou aspirina; e (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, ou glutamina; desde que acetamida esteja ausente e/ou se aspirina estiver presente, glutamina esteja ausente e se glutamina estiver presente, aspirina esteja ausente.

2. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que se (v) for aspirina, (vi) é ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal.

3. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que se (vi) for glutamina, (v) é ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal.

4. Solução de preservação, de acordo com qualquer uma das reivindicações | a 3, caracterizada pelo fato de que a solução é uma solução de preservação por lavagem.

5. Solução de preservação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que a solução é uma solução de preservação de armazenamento a frio.

6. Solução de preservação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que aspirina está ausente.

7. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que (v) é ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal; e (vi) é ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, ou glutamina; e aspirina está ausente, e/ou em que ácido acético e/ou acetamida estão ausentes.

8. Solução de preservação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que glutamina está ausente.

9. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que (v) é ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal, ou aspirina; e (vi) é ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal; e glutamina está ausente, e/ou em que amônia e/ou acetamida estão ausentes.

10. Solução de preservação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que aspirina e glutamina estão ausentes.

11. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo fato de que (v) é ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal; e (vi) é ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, desde que acetamida esteja ausente e/ou ácido acético e amônia estejam ausentes.

12. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo fato de que acetamida está ausente e/ou aspirina e glutamina estão ausentes.

13. Solução de preservação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que o pelo menos um componente com propriedades de bloqueio de transporte de cálcio ou uma atividade de ação anticálcio está presente.

14. Solução de preservação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizada pelo fato de que o pelo menos um componente com propriedades de bloqueio de transporte de cálcio ou uma atividade de ação anticálcio está ausente.

15. Solução de preservação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a quantidade de ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal, é menor que 0,5 mmol/l.

16. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 15, caracterizada pelo fato de que a quantidade de ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal, é de cerca de 0,025 a cerca de 0,275 mmol/l.

17. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que aspirina, se presente, está em uma quantidade de cerca de 0,3 mmol/l a cerca de 1,0 mmol/l.

18. Solução de preservação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a quantidade de ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, presente é menor que 20 mmol/l.

19. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 18, caracterizada pelo fato de que a quantidade de ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, presente é de cerca de 2 a cerca de 12 mmol/l.

20. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que glutamina, se presente, está em uma quantidade de cerca de 15 mmol/l a cerca de 30 mmol/l.

21. Solução de preservação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que o sacarídeo é selecionado de um ou mais dentre sacarose, rafinose e manitol.

22. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 21, caracterizada pelo fato de que o sacarídeo é sacarose.

23. Solução de preservação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que o tampão de pH é selecionado a partir de um tampão de fosfato de sódio, um tampão de fosfato de potássio e similares.

24. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 23, caracterizada pelo fato de que o tampão de pH é selecionado a partir de Na2HPOs, NaH2POas, KaHPOa, KH2PO, e similares; e combinações dos mesmos.

25. Solução de preservação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que o bloqueador de transporte de cálcio ou o agente de atividade anticálcio é selecionado a partir de qualquer bloqueador de canal ou de transporte de cálcio conhecido, como um ou mais dentre nicardipina, diltiazem, verapamil, nisoldipina, clorpromazina ou trifluorperazina.

26. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 25, caracterizada pelo fato de que o bloqueador de transporte de cálcio ou agente de atividade anticálcio é nicardipina e/ou diltiazem.

27. Solução de preservação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a solução de preservação inclui pelo menos um ânion que é amplamente impermeável a células.

28. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 27, caracterizada pelo fato de que o ânion que é amplamente impermeável a células é um ânion sequestrante impermeabilizante.

29. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 27, caracterizada pelo fato de que o ânion sequestrante impermeabilizante compreende lactobionato ou ácido lactobiônico.

30. Solução de preservação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a solução de preservação inclui pelo menos um componente com propriedades osmóticas coloides.

31. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 30, caracterizada pelo fato de que o componente com propriedades osmóticas coloides compreende polietileno glicol (PEG), gelatina succinilada (como em Gelofusina), Ficoll (um polissacarídeo) ou um produto de amido.

32. Solução de preservação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a solução de preservação inclui um soluto inorgânico ou orgânico.

33. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 32, caracterizada pelo fato de que o soluto inorgânico ou orgânico é um eletrólito que inclui cátions e/ou ânions, por exemplo, selecionados a partir de Na*, K, CI, OH e similares; e combinações dos mesmos.

34. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 32, caracterizada pelo fato de que o soluto inorgânico é NaCl.

35. Solução de preservação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a solução de preservação inclui pelo menos um componente com propriedades quelantes de cálcio.

36. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 35, caracterizada pelo fato de que o componente com propriedades quelantes de cálcio compreende citrato ou EGTA (etileno glicol- bis(B-aminoetil éter)-N,N,N' N'-ácido tetra acético).

37. Solução de preservação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a solução de preservação inclui pelo menos um componente com propriedades quelantes de ferro.

38. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 37, caracterizada pelo fato de que o componente com propriedades quelantes de ferro compreende EDTA (ácido etilenodiamina tetra acético).

39. Solução de preservação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a solução de preservação inclui um ou mais (adicionais) aminoácidos, além do ácido glutâmico e/ou glutamina.

40. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 39, caracterizada pelo fato de que o aminoácido adicional é glicina ou n-acetilcisteína ou uma combinação das mesmas.

41. Solução de preservação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a solução de preservação inclui pelo menos um componente que é eficaz contra radicais livres de oxigênio ou a produção de radicais livres de oxigênio.

42. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 41, caracterizada pelo fato de que o componente que é eficaz contra radicais livres de oxigênio ou a produção de radicais livres de oxigênio é selecionado a partir de alopurinol e glutationa reduzidos, ou uma combinação dos mesmos.

43. Solução de preservação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a solução de preservação inclui pelo menos um componente de um sistema de suprimento de energia ou que influencia um sistema de suprimento de energia ou um corpo cetônico.

44. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 43, caracterizada pelo fato de que o componente do sistema de suprimento de energia compreende adenosina.

45. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 43, caracterizada pelo fato de que o corpo cetônico compreende beta-hidróxi butirato.

46. Solução de preservação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a solução de preservação inclui um componente que atua de maneira reversível na função de ponte cruzada no músculo.

47. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 46, caracterizada pelo fato de que o componente que atua de maneira reversível na função de ponte cruzada no músculo é butanodiona monoxima.

48. Solução de preservação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a solução de preservação inclui pelo menos um componente que influencia a inserção e remoção de proteínas em e a partir das membranas celulares.

49. Solução de preservação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a solução de preservação inclui pelo menos um componente do sistema de transdução de sinal intracelular ou que modifica esse sistema.

50. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 49, caracterizada pelo fato de que o componente do sistema de transdução de sinal intracelular ou que modifica esse sistema é um inibidor de proteína quinase ou um inibidor de calmodulina.

51. Solução de preservação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a solução de preservação inclui pelo menos um componente que tem uma ação estabilizadora de membrana.

52. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 51, caracterizada pelo fato de que o componente que tem uma ação estabilizadora de membrana é ranolazina.

53. Solução de preservação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a solução de preservação inclui pelo menos um componente que tem uma ação crioprotetora.

54. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 53, caracterizada pelo fato de que o componente que tem uma ação crioprotetora é um glicolipídeo.

55. Solução de preservação para preservação de fígado, rim, intestino delgado e pâncreas, de acordo com qualquer uma ou mais das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que compreende uma combinação de (i) água para injeção; (ii) um dissacarídeo; (iii) pelo menos um componente com propriedades de tampão de pH; (iv) pelo menos um bloqueador de canal ou de transporte de cálcio; (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal, ou aspirina; e (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, ou glutamina, como definido anteriormente no presente documento; juntamente com um àânion sequestrante impermeabilizante, solutos inorgânicos, componentes eficazes contra radicais livres de oxigênio e um osmótico coloidal, e quaisquer componentes adicionais opcionais como definido anteriormente no presente documento.

56. Solução de preservação para preservação de fígado, rim, intestino delgado e pâncreas, de acordo com qualquer uma ou mais das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que compreende uma combinação de (ii) água para injeção; (ii) sacarose; (iii) Na2HPO, e NaH2PO:;

(iv) diltiazem; (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal, ou aspirina; e (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, ou glutamina, como definido anteriormente no presente documento; juntamente com ácido lactobiônico, KOH e NaOH, glutationa e alopurinol e PEG, e quaisquer componentes adicionais opcionais como definido anteriormente no presente documento.

57. Solução de preservação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a solução tem um pH na faixa de 6,5 a 7,8.

58. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 57, caracterizada pelo fato de que a solução tem um pH na faixa de 6,5a7,0.

59. Solução de preservação, de acordo com a reivindicação 57, caracterizada pelo fato de que a solução tem um pH na faixa de 6,8 a 7,0.

60. Solução de preservação para preservação de fígado, rim, intestino delgado e pâncreas caracterizada pelo fato de que compreende solução de preservação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores.

61. Uso de uma solução de preservação conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 60, caracterizado pelo fato de que é como uma solução de lavagem, solução de preservação ou solução de preservação por lavagem para a preservação de células na ausência de um suprimento sanguíneo, em particular para evitar danos a órgãos, tecidos vivos e células.

62. Uso, de acordo com a reivindicação 61, caracterizado pelo fato de que a solução é uma solução de preservação por lavagem.

63. Uso, de acordo com a reivindicação 61, caracterizado pelo fato de que a solução é uma solução de preservação de armazenamento a frio.

64. Uso de uma solução de preservação, de acordo com as reivindicações 61 a 63, caracterizado pelo fato de que compreende uso em transplante que inclui órgãos de doadores de coração com batimentos cardíacos ou sem batimentos cardíacos, em cirurgia, incluindo qualquer situação de isquemia quente ou fria, preservação de membros ou de todo o corpo, em experimentação de tecidos vivos ou em cultura e preservação de células, tecidos e órgãos, membros ou corpo inteiro.

65. Uso de uma solução de preservação, de acordo com as reivindicações 61 a 62, caracterizado pelo fato de que a solução de preservação é colocada em contato com células, tecidos vivos, órgãos, membros ou todo o corpo através do sistema vascular e, opcionalmente, também serve como uma solução de preservação para armazenamento de células, tecidos e órgãos lavados.

66. Uso de uma solução de preservação, de acordo com as reivindicações 61 a 63, caracterizado pelo fato de que compreende a preservação prolongada de células, tecidos e órgãos, tanto no armazenamento estático hipotérmico, quanto no sistema de perfusão hipotérmica por máquina.

67. Uso de uma solução de preservação, de acordo com as reivindicações 61 a 64, caracterizado pelo fato de que os órgãos são fígado, rim, intestino delgado e/ou pâncreas.

68. Método para a preservação de células para armazenamento hipotérmico simples, em particular células vivas, tecidos ou órgãos pelos quais as células, tecidos ou órgãos são colocados em contato com uma solução de preservação utilizada, caracterizado pelo fato de que compreende: (i) água para injeção; (ii) pelo menos um sacarídeo; (iii) pelo menos um componente com propriedades de tampão de pH; (iv) opcionalmente, pelo menos um componente com propriedades de bloqueio de transporte de cálcio ou uma atividade de ação anticálcio; (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal, ou aspirina; e (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, ou glutamina; desde que se acetamida estiver ausente e/ou se aspirina estiver presente, glutamina esteja ausente e se glutamina estiver presente, aspirina esteja ausente; em que as células, tecidos ou órgãos são lavados com solução, removidos do local normal, resfriados a temperaturas normalmente na faixa de zero a 12 ºC e armazenados.

69. Método, de acordo com a reivindicação 68, caracterizado pelo fato de que compreende a preservação por lavagem de células, tecidos ou órgãos vivos.

70. Método, de acordo com a reivindicação 68, caracterizado pelo fato de que compreende preservação de armazenamento a frio de células, tecidos ou órgãos vivos.

71. Método, de acordo com as reivindicações 68 a 70, caracterizado pelo fato de que (v) é ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal.

72. Método, de acordo com as reivindicações 68 a 71, caracterizado pelo fato de que aspirina está ausente.

73. Método, de acordo com as reivindicações 68 a 72, caracterizado pelo fato de que (vi) é ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal.

74. Método, de acordo com as reivindicações 68 a 72, caracterizado pelo fato de que glutamina está ausente.

75. Método, de acordo com as reivindicações 68 a 74, caracterizado pelo fato de que (v) é ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal; e (vi) é ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal.

76. Método, de acordo com as reivindicações 68 a 74, caracterizado pelo fato de que aspirina e glutamina estão ausentes.

77. Método, de acordo com as reivindicações 68 a 76, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um componente com propriedades de bloqueio de transporte de cálcio ou uma atividade de ação anticálcio está presente.

78. Método, de acordo com a reivindicação 68 a 76, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um componente com propriedades de bloqueio de transporte de cálcio ou uma atividade de ação anticálcio está ausente.

79. Método para lavar, preservar ou preservar por lavagem células para armazenamento hipotérmico simples, em particular células, tecidos ou órgãos vivos pelos quais as células, tecidos ou órgãos são colocados em contato com uma solução de preservação, caracterizado pelo fato de que compreende: (i) água para injeção; (ii) pelo menos um sacarídeo; (iii) pelo menos um componente com propriedades de tampão de pH; (iv) opcionalmente, pelo menos um componente com propriedades de bloqueio de transporte de cálcio ou uma atividade de ação anticálcio; (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal, ou aspirina; e (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal, ou glutamina; e pelo menos um componente com propriedades crioprotetoras;

desde que se acetamida estiver ausente e/ou se aspirina estiver presente, glutamina esteja ausente e se glutamina estiver presente, aspirina esteja ausente; em que as células, tecidos ou órgãos são lavados com solução, removidos do local normal, resfriados a temperaturas normalmente na faixa entre -20 ºC e 8 ºC e armazenados.

80. Método, de acordo com a reivindicação 79, caracterizado pelo fato de que (v) é ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal.

81. Método, de acordo com a reivindicação 79, caracterizado pelo fato de que aspirina está ausente.

82. Método, de acordo com as reivindicações 79 a 81, caracterizado pelo fato de que (vi) é ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal.

83. Método, de acordo com a reivindicação 79, caracterizado pelo fato de que glutamina está ausente.

84. Método, de acordo com as reivindicações 79 a 86, caracterizado pelo fato de que (v) é ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal; e (vi) é ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal.

85. Método, de acordo com a reivindicação 79, caracterizado pelo fato de que aspirina e glutamina estão ausentes.

86. Método, de acordo com as reivindicações 79 a 82, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um componente com propriedades de bloqueio de transporte de cálcio ou uma atividade de ação anticálcio está presente.

87. Método, de acordo com as reivindicações 79 a 82, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um componente com propriedades de bloqueio de transporte de cálcio ou uma atividade de ação anticálcio está ausente.

88. Método, de acordo com as reivindicações 79 ou 84,

caracterizado pelo fato de que é para a preservação de células, particularmente tecidos ou órgãos, em que as células, tecido ou órgãos são lavados e colocados em um estado hipotérmico e são colocados em contato com a solução de preservação por imersão ou perfusão.

89. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 79 ou 85, caracterizado pelo fato de que compreende administrar às células, tecido, órgão ou a um doador uma quantidade biologicamente eficaz da solução de preservação a uma taxa eficaz ou a uma concentração eficaz para manter ou melhorar a função dos mesmos, em que o método é um método para preservação de determinada função das células, tecidos ou órgãos e/ou para interromper temporariamente determinadas funções.

90. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 79 ou 89, caracterizado pelo fato de que a perfusão de lavagem é executada a uma pressão de até 300 mmHg.

91. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 79 ou 89, caracterizado pelo fato de que a solução de preservação é conformem definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 61.

92. Kit de partes caracterizado pelo fato de que compreende uma solução de preservação conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 60, que tem, em uma primeira parte, componentes (i)- (vi), de modo opcional juntamente com, em uma ou mais partes adicionais, componentes individuais selecionados a partir de um ou mais dos componentes adicionais, conforme definido nas reivindicações 17 a 60, ou que tem, em uma parte, componentes (i)-(vi) como definido no presente documento, dos quais um ou mais componentes instáveis estão ausentes e são fornecidos separadamente, em uma ou mais partes adicionais, para adição imediatamente antes do uso, em que o dito kit é para uso na preparação de uma ou mais soluções de lavagem para um fim específico, e servindo como uma lavagem universal, preservação ou solução de preservação por lavagem.

93. Kit de partes, de acordo com a reivindicação 92, caracterizado pelo fato de que a solução de preservação compreende a solução de preservação por lavagem.

94. Kit de partes, de acordo com a reivindicação 92, caracterizado pelo fato de que a solução de preservação compreende uma solução de preservação de armazenamento a frio.

95. Método para a preparação de uma solução de preservação conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 60, caracterizado pelo fato de que compreende adicionar componentes (i) - (vi) em sequência à água e adicionar quaisquer outros componentes com exceção do componente com propriedades osmóticas coloides e componentes instáveis, se houver; e dissolver a mistura; adicionando o componente com propriedades osmóticas coloides, se houver, e fazer a solução quase no volume; e finalmente compensar o volume para regular o pH, esterilizando e resfriando.

96. Método, de acordo com a reivindicação 95, caracterizado pelo fato de que a solução é preparada e armazenada sob condições anóxicas na ausência de luz UV.

97. Método, de acordo com a reivindicação 95 ou 96, caracterizado pelo fato de que a solução é constituída na ausência de quaisquer componentes instáveis e armazenada, com adição subsequente de tais componentes instáveis imediatamente antes do uso.

98. Método, de acordo com a reivindicação 97, caracterizado pelo fato de que a solução é armazenada sem a geração de amônia e ácido acético, e sem a geração de nenhum produto de reação dos mesmos como acetamida.

99. Solução de preservação caracterizada pelo fato de que é obtida pelo método conforme definido nas reivindicações 95 a 98.

100. Solução de preservação caracterizada pelo fato de que é obtida por um método que compreende adicionar à água, componentes

(1) - (vi), conforme definido em qualquer uma das reivindicações anteriores.

101. Solução de preservação para a preservação de células, tecidos e/ou órgãos, na ausência de um suprimento sanguíneo, caracterizada pelo fato de que compreende: (i) água para injeção; (ii) pelo menos um sacarídeo; (ili) pelo menos um componente com propriedades de tampão de pH; (iv) opcionalmente, pelo menos um componente com propriedades de bloqueio de transporte de cálcio ou uma atividade de ação anticálcio; (v) ácido salicílico, na forma livre ou na forma de sal, e/ou aspirina; e (vi) ácido glutâmico, na forma livre ou na forma de sal e/ou glutamina; desde que se aspirina estiver presente, glutamina esteja ausente e se glutamina estiver presente, aspirina esteja ausente e/ou em que se aspirina e/ou acetamida e/ou ácido acético estiverem presentes, a quantidade de ácido salicílico presente exceda aquela que pode ser atribuída à degradação a partir da aspirina, por exemplo, como determinado pela soma das quantidades de qualquer ácido acético e de qualquer acetamida presente; e/ou em que se glutamina e/ou acetamida e/ou amônia estiverem presentes, a quantidade de ácido glutâmico presente exceda aquela que pode ser atribuída à degradação a partir da glutamina, por exemplo, como determinado pela soma das quantidades de qualquer amônia e de qualquer acetamida presente.

102. Solução de preservação, uso, método ou kit de partes caracterizado pelo fato de que são descritos no presente documento com referência à descrição anexa.

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