KR20190044175A - 콩 배양조직 추출물을 포함하는 탈모방지 또는 육모촉진용 조성물 및 이의 제조방법 - Google Patents
콩 배양조직 추출물을 포함하는 탈모방지 또는 육모촉진용 조성물 및 이의 제조방법 Download PDFInfo
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Abstract
본 명세서는 콩 배양조직 추출물을 포함하는 탈모방지 또는 육모촉진용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로서, 본 발명의 일 측면을 이용할 경우 콩 배양 조직을 함유하는 탈모방지 또는 육모촉진용 조성물을 균일하게 대량으로 제조할 수 있고, 이러한 방법으로 제조된 조성물은 탈모방지 및 육모촉진 효과가 뛰어나며, 기존 탈모 치료제와는 달리 부작용이 없는 특징을 지닌다.
Description
본 명세서는 콩 배양조직 추출물을 포함하는 탈모방지 또는 육모촉진용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
최근 들어 식생활의 변화, 스트레스의 증가 등으로 탈모로 고민하는 인구가 늘어나고 있는 추세이고 그 연령 또한 낮아지고 있으며, 남성 뿐만 아니라 여성의 탈모 인구도 점점 늘어나고 있다.
탈모증의 원인 중에서 남성호르몬 과잉 분비와 직접적인 관계가 있는 가장 흔한 유형은 통상 남성형 탈모증(male pattern baldness)이라고 부르는 안드로겐성 탈모증(androgenic alopecia)이다. 안드로겐성 탈모증이 있는 경우 건강한 모발은 점차로 가늘어지고, 짧아지며, 모발이 약해져서 쉽게 부서지는 현상이 나타나게 되는데 이러한 현상을 축소화(miniaturization)라고 한다. 축소화가 일어나는 모낭은 결국 가늘고 눈에 잘 보이지 않으며 짧은 솜털로 변해 탈모가 진행된다.
최근 남성호르몬 활성 억제를 통한 탈모의 예방 및 치료를 위한 많은 연구가 이루어지고 있다. 남성형 탈모증은 남성호르몬 중의 하나인 테스토스테론(testosterone)이 5-알파 환원효소(5α-reductase)에 의해 활성형 남성호르몬인 디하이드로테스토스테론(dihydrotestosterone, DHT)으로 전환되고, 이렇게 활성화된 디하이드로테스토스테론이 안드로겐 수용체와 결합하여 모낭세포의 단백질 합성을 지연시켜 모낭의 생장기가 단축되고, 모낭을 위축시켜 탈모를 유발한다. 또한 안드로겐성 탈모 과정에서 피지가 과잉생성되기도 하며 그 결과로서 두피에서는 염증을 동반한 탈모가 나타나기도 한다. 여성의 탈모는 원인이 남성보다 훨씬 다양하다고 알려지고 있지만 남성호르몬에 대한 민감성이 유전되어 발생되는 안드로겐성 탈모가 성인 여성의 탈모 중 50% 정도를 차지한다.
시판되고 있는 프로페시아(propecia)나 미녹시딜(minoxidil)같은 탈모 치료약은 효과가 미미하거나 부작용이 커서 대상에 따라 사용에 제한이 되고, 사용하는 소비자들도 사용하기에 부담이 따를 수 있다. 이러한 문제를 해소하기 위해 천연 원료 등을 이용하면서도 효과가 우수한 탈모 방지제 또는 육모 촉진제의 개발이 절실한 실정이다.
본 명세서는 천연 원료를 이용하면서도 부작용이 없는 탈모방지 또는 육모촉진용 조성물과 그러한 조성물을 균일하게 제조하는 방법을 제공하는 것을 과제로 하고 있다.
상기 과제를 해결하기 위해, 본 명세서는 콩 배양조직의 추출물을 포함하되, 상기 콩 배양조직은 콩 배양근 또는 콩 캘러스인, 탈모방지용 또는 육모촉진용 조성물을 제공한다.
또한, 본 명세서는 (1) 콩 배양근을 생물반응기 내의 배지에 위치시켜 상기 생물반응기 내에서 공기공급량을 일정하게 유지하며 증식시키는 단계; (2) 상기 (1) 단계를 거친 배양근을 건조하는 단계; (3) 상기 (2) 단계를 거친 결과물을 알코올에 침지하여 추출하는 단계; 및 (4) 상기 (3) 단계를 거친 후 여과 및 건조시키는 단계를 포함하는, 탈모방지 또는 육모촉진용 조성물을 균일하게 대량으로 제조하는 방법을 제공한다.
본 발명은 일 측면을 이용할 경우, 균일한 품질의 콩 배양 조직을 함유하는 탈모방지 또는 육모촉진용 조성물을 균일하게 대량으로 제조할 수 있고, 이러한 방법으로 제조된 조성물은 천연 원료를 사용하면서도 탈모방지 및 육모촉진 효과가 뛰어나므로, 기존의 탈모방지 또는 육모촉진용 제품들의 단점을 극복할 수 있는 대안이 될 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 측면에 따른 엑스플렌테이션 기술을 이용하여, 4주간 콩 배양근을 배양한 모습을 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 일 측면에 따른 추출물이 농도 의존적으로 Wnt/β-catenin 활성을 증진시킴을 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 일 측면에 따른 추출물이 모낭주기 중 퇴행기 대비 성장기의 비율에 미치는 영향을 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 일 측면에 따른 추출물이 농도 의존적으로 Wnt/β-catenin 활성을 증진시킴을 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 일 측면에 따른 추출물이 모낭주기 중 퇴행기 대비 성장기의 비율에 미치는 영향을 나타낸 것이다.
본 명세서에서, 엑스플랜테이션(explantation)이란, 외식(外植) 또는 체외배양이라고도 하고, 주로 동식물 개체의 일부를 분리하여 체외에서 배양하는 기술이다. 주로 일정 기간에 걸쳐 체외에서 생존하며 차차 어떤 발생적 변화가 보일 정도로 시간을 두고 배양을 하는 것을 포함한다. 일반적인 조직배양(組織培養)도 체외배양의 한 방법이다. 또한, 본 발명의 일 측면에 따른 기내 배양도 체외배양에 포함된다.
본 명세서에서 엑스플랜테이션 기술은, 원형질체, 세포, 조직, 기관, 배, 종자, 배양근 및 식물체의 일부를 포함하는 군에서 선택된 하나 이상을 특정 성분이 첨가된 배지 등의 인공 배양 기구에서 키우는 것을 포함한다.
본 발명은 일 측면에서, 콩 배양조직의 추출물을 포함하되, 상기 콩 배양조직은 콩 배양근 또는 콩 캘러스인, 탈모방지용 또는 육모촉진용 조성물이다.
일 구현 예로서, 상기 콩은 대두, 납작콩(Glycine gracilis), 서리태, 서목태, 흑태, 청태, 황태, 울타리콩, 강낭콩, 얼룩강낭콩, 적두, 거두, 또는 콩나물콩일 수 있고, 바람직하게는 대두 또는 납작콩일 수 있다. 상기 콩의 품종은 제한이 없으나, 일 측면에서 장류 및 두부용, 나물용, 밥밑용 또는 풋콩용 품종일 수 있다. 장류 및 두부용 품종으로는, 대풍(大豊), 호장(湖醬), 장원(壯元), 대황(大潢), 소담, 송학(松鶴), 대원(大元), 진품(眞品), 단백(蛋白), 두유(豆油), 신팔달(新八達), 태광(太光), 만리(萬里), 장수(長壽), 무한(無限), 백운(白雲), 새알, 황금(黃金) 및 장엽(長葉) 등이 있다. 나물용 품종으로는, 신화, 소원, 안평(安平), 서남(西南), 다채(多彩), 소록(小綠), 소호(小湖), 소명(疏明), 다원(多元), 풍산(豊産)나물, 익산(益山)나물, 소백(小白)나물, 광안(光安), 단엽(短葉) 및 은하(銀河) 등이 있다. 밥밑용 품종으로는, 청자(靑磁), 흑청(黑靑), 갈미(褐味), 선흑(鮮黑), 검정콩 및 일품(一品)검정콩 등이 있다. 또한, 풋콩용 품종으로는, 다올, 신록(新綠), 새을, 검정을, 석량(夕凉)풋콩, 화엄(華嚴)풋콩 및 큰을 등이 있다. 본 발명의 다른 일 측면에서, 콩은 발아가 가능하고 병충해에 강한 품종인 것이 바람직하다. 그와 같은 콩으로는, 예를 들어 신화, 소원, 안평(安平), 서남(西南), 다채(多彩), 소록(小綠), 소호(小湖), 소명(疏明), 다원(多元), 풍산(豊産)나물, 익산(益山)나물, 소백(小白)나물, 광안(光安), 단엽(短葉) 및 은하(銀河) 등이 있다. 그러나 본 발명의 일 측면에 따른 콩이 상기 콩 품종에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 측면에 따른 납작콩은 납떼기콩, 납데기콩, 납쪼레기콩, 납드레콩, 납작콩 등으로 다양하게 불린다.
다른 구현 예로서, 상기 추출물은 물, C1 내지 C6의 저급 알코올, 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출한 것일 수 있다.
다른 구현 예로서, 상기 저급 알코올은 에탄올일 수 있다.
다른 구현 예로서, 상기 알코올 농도는 60 내지 100%(w/v)일 수 있다. 일 측면에서, 상기 알코올 농도는 60%(w/v)이상, 70%(w/v)이상, 75%(w/v)이상, 80%(w/v)이상, 85%(w/v)이상, 90%(w/v)이상, 또는 95%(w/v)이상일 수 있다. 다른 측면에서, 상기 알코올 농도는 100%(w/v)이하, 95%(w/v)이하, 90%(w/v)이하, 85%(w/v)이하, 80%(w/v)이하, 75%(w/v)이하, 70%(w/v)이하, 또는 65%(w/v)이하일 수 있다.
다른 구현 예로서, 상기 추출물은 쿠메스트롤을 추출물 총 중량 대비 5 내지 15중량% 포함하는 것일 수 있다. 또한 상기 조성물은 쿠메스트롤을 추출물 또는 조성물 총 중량 대비 5 내지 15중량% 포함하는 것일 수 있다. 일 측면에서 상기 쿠메스트롤의 함량은 5중량%이상, 7중량%이상, 8중량%이상, 9중량%이상, 10중량%이상, 12중량%이상, 또는 14중량%이상일 수 있다. 다른 측면에서 상기 쿠메스트롤의 함량은 15중량%이하, 13중량%이하, 12중량%이하, 11중량%이하, 10중량%이하, 8중량%이하, 또는 6중량%이하일 수 있다.
또 다른 구현 예로서, 상기 탈모방지 또는 육모촉진은 모유두세포 증식, 모낭줄기세포 활성 증가, 모낭 성장기 유도, 모낭 성장기 유지 또는 연장, 및 모낭주기 중 퇴행기로의 이행 억제로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상에 의한 것일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 의한 조성물은 모낭줄기세포 활성을 증가시켜, 모유두세포 증식을 촉진하므로 이를 통해 탈모방지, 육모촉진, 각종 탈모증(안드로젠성 탈모증, 창상성 탈모증, 원형탈모증, 약물에 의한 탈모증, 및 미생물 감염에 의한 탈모증으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상)의 개선 및 치료를 도모할 수 있다.
모발은 성장기, 퇴행기, 휴지기의 주기적인 변화를 규칙적으로 반복하는 과정으로, 모발 하나 하나가 독립적인 생성과 소멸을 반복한다. 성장기에 모구 세포는 기질 세포로 된 모유두에 둘러싸여 원형 형태를 띠고 있으며, 성장기는 새로운 모발의 생성을 위한 세포 분열이 활발한 시기이다. 퇴행기는 모낭의 성장활동이 정지되고 급속도로 위축되는 시기이며 이때의 털의 모양은 곤봉과 유사한 모습이다. 휴지기는 모낭의 세포 활동이 완전히 소멸된 시기로 2-3개월의 기간을 거치는 동안 휴지기 모발의 기저부에서 새로이 자라게 되는 성장기 모발에 의해 밀려나 빠지게 되거나 빗질이나 머리를 감는 등의 기계적 작용에 의해서 자연스럽게 빠지게 된다. 일반적으로 탈모증이라 함은 이러한 주기 중에 성장기의 모발 비율이 짧아지고 퇴행기 또는 휴지기의 모발이 많아져 비정상적으로 모발이 탈락되는 숫자가 많아지는 것을 포함한다. 본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 모낭의 성장기를 유도하고 유지 및 연장시키며, 퇴행기로의 이행을 억제시키므로, 상기 조성물을 이용하여 탈모방지, 육모촉진, 각종 탈모증(안드로젠성 탈모증, 창상성 탈모증, 원형탈모증, 약물에 의한 탈모증, 및 미생물 감염에 의한 탈모증으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상)의 개선 및 치료가 가능하다.
일 측면에서, 상기 탈모방지 또는 육모촉진은 베타-카테닌(β-catenin)의 전사활성 증가 또는 Wnt/β-catenin 활성 증가에 의한 것일 수 있다. 본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 농도 의존적으로 베타-카테닌(β-catenin)의 전사활성을 증가시키거나, Wnt/β-catenin 활성을 증가시키는데, 이를 통해 모낭주기가 조절(즉, 성장기 유도 및 성장기 유지)되므로, 이를 통해 본 발명의 일 측면을 탈모방지, 육모촉진 및 각종 탈모증(안드로젠성 탈모증, 창상성 탈모증, 원형탈모증, 약물에 의한 탈모증, 및 미생물 감염에 의한 탈모증 등) 치료에 활용할 수 있는 것이다.
일 구현 예로서, 상기 조성물의 투여경로는 제한되지 않으나, 바람직하게는 경피 또는 피부외용일 수 있다.
다른 구현 예로서, 상기 조성물 내 상기 추출물의 농도는 10 내지 100 ppm(w/v)일 수 있다. 일 측면에서, 상기 투여농도는 10ppm(w/v)이상, 20ppm(w/v)이상, 25ppm(w/v)이상, 30ppm(w/v)이상, 35ppm(w/v)이상, 40ppm(w/v)이상, 45ppm(w/v)이상, 50ppm(w/v)이상, 60ppm(w/v)이상, 70ppm(w/v)이상, 80ppm(w/v)이상, 90ppm(w/v)이상, 또는 95ppm(w/v)이상 일 수 있다. 다른 측면에서, 상기 투여농도는 100ppm(w/v)이하, 90ppm(w/v)이하, 80ppm(w/v)이하, 70ppm(w/v)이하, 60ppm(w/v)이하, 50ppm(w/v)이하, 45ppm(w/v)이하, 40ppm(w/v)이하, 35ppm(w/v)이하, 30ppm(w/v)이하, 25ppm(w/v)이하, 20ppm(w/v)이하, 또는 15ppm(w/v)이하일 수 있다.
다른 구현 예로서, 상기 조성물의 투여에 의한 상기 추출물의 투여량은 5mg/kg/일 내지 300mg/kg/일일 수 있다. 일 측면에서 상기 투여량은 5mg/kg/일 이상, 10mg/kg/일 이상, 30mg/kg/일 이상, 50mg/kg/일 이상, 80mg/kg/일 이상, 100mg/kg/일 이상, 120mg/kg/일 이상, 140mg/kg/일 이상, 160mg/kg/일 이상, 180mg/kg/일 이상, 200mg/kg/일 이상, 250mg/kg/일 이상, 또는 280mg/kg/일 이상일 수 있다. 다른 측면에서 상기 투여량은 300mg/kg/일 이하, 280mg/kg/일 이하, 250mg/kg/일 이하, 200mg/kg/일 이하, 180mg/kg/일 이하, 160mg/kg/일 이하, 140mg/kg/일 이하, 120mg/kg/일 이하, 100mg/kg/일 이하, 80mg/kg/일 이하, 50mg/kg/일 이하, 30mg/kg/일 이하, 10mg/kg/일 이하, 또는 8mg/kg/일 이하일 수 있다.
다른 측면에서, 상기 조성물은 식품, 약학, 또는 화장료 조성물일 수 있다.
또 다른 측면에서, 상기 조성물은 안드로젠성 탈모증, 창상성 탈모증, 원형탈모증, 약물에 의한 탈모증, 및 미생물 감염에 의한 탈모증으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 개선 또는 치료하기 위한 약학 조성물일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 식품 조성물은 건강식품 조성물일 수 있고, 상기 건강식품 조성물에 있어서, 상기 화합물의 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 투여하고자 하는 대상의 연령, 건강 상태, 합병증 등 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다.
상기 식품 조성물의 제형은 특별히 한정되지 않으나, 예를 들어, 정제, 과립제, 환제, 분말제, 드링크제와 같은 액제, 캐러멜, 겔, 바, 티백 등으로 제형화될 수 있다. 각 제형의 식품 조성물은 유효 성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다.
상기 조성물은 단순 섭취, 음용, 주사 투여, 스프레이 투여 또는 스퀴즈 투여 등 다양한 방법으로 투여될 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 건강식품 조성물은 건강기능식품일 수 있고, 그 뿐만 아니라, 예를 들어 츄잉껌, 캐러멜 제품, 캔디류, 빙과류, 과자류, 빵류 등의 각종 식품류, 청량 음료, 미네랄 워터, 알코올 음료 등의 음료 제품과 같이 어떠한 형태의 가공식품도 포함하고, 비타민이나 미네랄 등을 포함하는 기능성 식품류일 수 있다.
상기 외에, 본 발명의 일 측면에 따른 건강식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 증진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 일 측면에 따른 건강식품 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않으나 본 발명의 일 측면에 따른 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 50 중량부의 범위에서 포함되는 것이 일반적이다.
본 발명의 일 측면에 따른 화장료 조성물은 예를 들어 피부용, 손발톱용 및/또는 모발용 조성물로서, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 아이크림, 아이에센스, 에센스, 클렌징크림, 클렌징로션, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 보디로션, 보디크림, 보디에센스, 보디세정제, 염모제, 샴푸, 린스, 정발제, 양모제, 연고, 젤, 크림, 패취, 분무제, 분말제 및 피부 접착타입 등의 제형을 가질 수 있으나 이에 한정되지 않는다.
또한, 각각의 제형에 있어서 상기한 필수성분 이외에 다른 성분들은 기타 외용제의 종류 또는 사용목적 등에 따라 당업자가 어려움 없이 적합하게 선정하여 배합할 수 있다.
상기 화장료 조성물은 국소 적용에 적합한 모든 제형으로 제공될 수 있다. 예를 들면, 용액, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 유상에 수상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 고체, 겔, 분말, 페이스트, 마이크로 니들, 포말(foam) 또는 에어로졸 조성물의 제형으로 제공될 수 있다. 이러한 제형의 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.
본 명세서에 따른 화장료 조성물에는 본 명세서의 화합물, 추출물 또는 분획물 이외에 기능성 첨가물 및 일반적인 화장료 조성물에 포함되는 성분이 추가로 포함될 수 있다. 상기 기능성 첨가물로는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 성분을 포함할 수 있다. 본 명세서에 따른 화장료 조성물은 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서, 바람직하게는 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분들을 포함할 수 있다. 또한 본 명세서에 따른 화장료 조성물은 보습제, 에몰리언트제, 계면 활성제, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, pH 조정제, 유기 및 무기안료, 향료, 냉감제 또는 제한제를 더 포함할 수 있다. 상기 성분의 배합량은 본 명세서의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 당업자가 용이하게 선정 가능하며, 그 배합량은 조성물 전체 중량을 기준으로 0.001 내지 10 중량%, 구체적으로 0.01 내지 3 중량%일 수 있다.
또 다른 구현 예에 의하면, 상기 조성물은 피부 외용제 조성물일 수 있다. 피부 외용제 조성물은 화장료, 구강제, 세정제, 약학 및 의약외품 등의 조성물이 될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 피부 외용제는 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없다.
또한, 본 명세서의 피부 외용제 조성물은 특별한 목적을 위한 기능성의 염(salt) 및 pH 조절을 위한 pH 조절제 중에서 선택된 하나 이상을 더 포함할 수 있다. 이때, 상기 염은 이온 차폐, 보습, 자외선 차단 등을 위한 무기염, 유기염 및/또는 유기-무기염으로부터 선택될 수 있다. 구체적인 예를 들어, 상기 염은 소듐클로라이드(NaCl), 인산나트륨(Na3PO4) 및 염화칼슘(CaCl2) 등으로부터 선택될 수 있다. 상기 pH 조절제는 산(aicd)이나 염기(base)로부터 선택되며, 예를 들어 염산, 황산, 주석산, 구연산, 인산, 초산, 락틱액시드, 소듐락테이트, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 알킬 아민, 알칸올 아민 및 암모니아 등으로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있다.
본 명세서의 피부 외용제 조성물은 화장료, 약학 또는 의약외품 조성물일 수 있는데, 상기 화장료, 약학 또는 의약외품 조성물은 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 보조제 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 추가로 함유할 수 있다. 상기 조성물은, 로션, 크림, 연고 또는 젤 등으로 제형화될 수 있다. 상기 피부 외용제 조성물은, 경피 투여되는 것이 바람직하다.
상기 약학 또는 의약외품 조성물의 유효성분의 투여량은 치료 받을 대상의 연령, 성별, 체중과, 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여경로 및 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 상기 약학 조성물은 경구, 비경구, 직장, 국소, 경피, 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 피하 등으로 투여될 수 있다. 경구 투여를 위한 제형은 정제(錠劑), 환제(丸劑), 연질 및 경질 캅셀제, 과립제(顆粒劑), 산제, 세립제, 액제, 유탁제(乳濁濟) 또는 펠렛제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 비경구 투여를 위한 제형은 용액제, 현탁제, 유액제, 겔, 주사제, 점적제, 좌제(坐劑), 패취 또는 분무제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 제형은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 용이하게 제조될 수 있으며, 계면 활성제, 부형제, 수화제, 유화 촉진제, 현탁제, 삼투압 조절을 위한 염 또는 완충제, 착색제, 향신료, 안정화제, 방부제, 보존제 또는 기타 상용하는 보조제를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 상기 약학 조성물의 적용량 또는 투여량은 투여 받을 대상의 연령, 성별, 체중, 병리 상태 및 그 심각도, 투여 경로 또는 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 적용량 결정은 당업자의 수준 내에 있다.
본 발명은 다른 측면에서, (1) 콩 배양근을 생물반응기 내의 배지에 위치시켜 상기 생물반응기 내에서 공기공급량을 일정하게 유지하며 증식시키는 단계; (2) 상기 (1) 단계를 거친 배양근을 건조하는 단계; (3) 상기 (2) 단계를 거친 결과물을 알코올에 침지하여 추출하는 단계; 및 (4) 상기 (3) 단계를 거친 후 여과 및 건조시키는 단계를 포함하는, 탈모방지 또는 육모촉진용 조성물을 균일하게 대량으로 제조하는 방법일 수 있다.
일 측면에서 상기 방법은 (1) 단계 이전에 배지 내에서 콩을 발아시키는 단계를 포함할 수 있다. 다른 측면에서, 상기 방법은 (1) 단계 이전에 콩 식물체로부터 콩 배양근을 유도하는 단계도 포함할 수 있다.
일반적으로 노지에서 재배하여 일반적인 방법으로 추출한 콩 추출물은 성분 등이 일정하지 않으므로 특정 목적 달성을 위한 조성물의 균일한 대량생산이 매우 어렵다. 그러나, 본 발명의 일 측면에 따른 방법에 의하면, 외부 영향 요인 등을 최소화하여 탈모방지 또는 육모촉진용 조성물을 균일하게 대량으로 생산할 수 있다.
일 구현 예로서, 상기 생물반응기는 스터드 탱크 리액터(Stirred Tank Reactor), 버블 컬럼 리액터(Bubble Cloumn Reactor), 에어 리프트 리액터( Air Lift Reactor), 플루다이즈드 베드 리액터(Fludized Bed Reactor), 픽스트/팩드 베드 리액터(Fixed/Packed Bed Reactor), 또는 타워 퍼멘터(Tower Fermenter)일 수 있고, 바람직하게는 벌브형 기포 생물반응기(Bulb Type bubble bioreactor)일 수 있다.
다른 구현 예로서, 상기 (1) 단계의 배지는 IBA(indole-3-butyric acid), 탄소원이 첨가된 것일 수 있다. 일 측면에서 상기 탄소원은 포도당, 프럭토스, 만노스, 리보스, 아라비노스, 자일로스, 갈락토스, 수크로스, 셀로비오스, 트레할로스, 락토스, 라피노스, 아밀로스, 스타치, 소르비톨, 만니톨, 및 글리세롤로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있다.
다른 구현 예로서, 상기 (1) 단계의 배지는 무라시게/스쿡(Murashige and Skoog) 배지일 수 있다.
다른 구현 예로서, 상기 콩 배양근을 배지에 위치시킬 때의 배지 pH는 4.8 내지 6.8일 수 있다. 일 측면에서 상기 pH는 4.8이상, 5이상, 5.2이상, 5.4이상, 5.6이상, 5.8이상, 6.0이상, 6.2이상, 6.4이상, 또는 6.6이상일 수 있다. 다른 측면에서 상기 pH는 6.8이하, 6.6이하, 6.4이하, 6.2이하, 6.0이하, 5.8이하, 5.6이하, 5.4이하, 5.2이하, 5.0이하일 수 있다.
다른 구현 예로서, 상기 콩 배양근을 배지에 위치시킬 때 밀도는 2 내지 6 g/L일 수 있다. 일 측면에서 상기 밀도는 2g/L이상, 3g/L이상, 4g/L이상, 또는 5g/L이상일 수 있다. 다른 측면에서, 상기 밀도는 6g/L이하, 5g/L이하, 4g/L이하, 또는 3g/L이하일 수 있다.
또 다른 구현 예로서, 상기 (1) 단계의 증식은 암조건에서 실시하는 것일 수 있다.
또 다른 구현 예에서, 상기 (1) 단계는 19 내지 25℃에서 실시하는 것일 수 있다. 일 측면에서 상기 온도는 19℃이상, 20℃이상, 21℃이상, 22℃이상, 23℃이상, 또는 24℃이상일 수 있다. 다른 측면에서 상기 온도는 25℃이하, 24℃이하, 23℃이하, 22℃이하, 21℃이하, 또는 20℃이하일 수 있다.
일 측면에서, 상기 (1) 단계의 공기공급량은 0.05 내지 0.4 vvm(air volume/culture volume per min)일 수 있다. 일 구현 예로서 상기 공기공급량은 0.05vvm이상, 0.08vvm이상, 0.1vvm이상, 0.12vvm이상, 0.14vvm이상, 0.16vvm이상, 0.18vvm이상, 0.2vvm이상, 0.22vvm이상, 0.24vvm이상, 0.26vvm이상, 0.28vvm이상, 0.3vvm이상, 0.32vvm이상, 0.34vvm이상, 0.36vvm이상, 또는 0.38vvm이상 일 수 있다. 다른 구현 예로서 상기 공기공급량은 0.4vvm이하, 0.38vvm이하, 0.36vvm이하, 0.34vvm이하, 0.32vvm이하, 0.3vvm이하, 0.28vvm이하, 0.26vvm이하, 0.24vvm이하, 0.22vvm이하, 0.2vvm이하, 0.18vvm이하, 0.16vvm이하, 0.14vvm이하, 0.12vvm이하, 0.1vvm이하, 0.08vvm이하, 또는 0.06vvm이하일 수 있다.
일 구현 예로서, 상기 (1) 단계의 증식은 2 내지 5주간 실시하는 것일 수 있다. 일 측면에서 상기 (1) 단계의 증식은 2주 이상, 3주 이상 또는 4주 이상 실시하는 것일 수 있다. 다른 측면에서 상기 (1) 단계의 증식은 5주 이하, 4주 이하 또는 3주 이하 실시하는 것일 수 있다.
다른 구현 예로서, 상기 (3) 단계의 알코올 농도는 60 내지 100%(w/v)일 수 있다. 일 측면에서 상기 알코올 농도는 60%(w/v)이상, 70%(w/v)이상, 80%(w/v)이상, 90%(w/v)이상, 또는 95%(w/v)이상일 수 있다. 다른 측면에서 상기 알코올 농도는 100%(w/v)이하, 95%(w/v)이하, 90%(w/v)이하, 85%(w/v)이하, 80%(w/v)이하, 75%(w/v)이하, 70%(w/v)이하, 65%(w/v)이하일 수 있다.
일 측면에서, 상기 건조된 결과물과 알코올의 중량비는 1:50이하, 1:45이하, 1:40이하, 1:35이하, 1:32이하, 1:30이하, 1:25이하 또는 1:22이하일 수 있다. 다른 측면에서, 상기 중량비는 1:20이상, 1:22이상, 1:24이상, 1:26이상, 1:28이상, 1:31이상, 1:33이상, 1:35이상, 1:40이상, 1:45이상, 또는 1:48이상일 수 있다.
다른 구현 예로서, 상기 (3) 단계의 추출 시간은 20 내지 28시간일 수 있다. 일 측면에서 상기 추출 시간은 20시간 이상, 22시간 이상, 24시간 이상, 25시간 이상, 또는 26시간 이상일 수 있다. 다른 측면에서 상기 추출 시간은 28시간 이하, 26시간 이하, 25시간 이하, 24시간 이하, 22시간 이하, 또는 21시간 이하일 수 있다.
상기 방법을 이용하여 성장촉진제나 비료, 농약 등의 사용 없이 친환경적이고도 균일하게 콩 배양조직을 대량으로 수득하여, 친환경적이고도 균일한 효과를 발휘하는 상기 추출물 및 조성물을 대량으로 제조할 수 있다.
이하, 실시예 등을 들어 본 발명 일측면의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 아래 실시예 등은 본 발명의 일 측면에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 그에 의해 제한되는 것은 아니다.
[실시예 1] 콩 배양근 배양
콩(대두; Glycine max.) 및 납작콩(Glycine gracilis) 각각을 MS 배지(Murashige and Skoog medium, Duchefa, Haarlem, 네덜란드)에 치상하여 기내에서 발아시켰다. 기내 콩 식물체의 유근, 배축, 자엽 등을 이용하여 배양근을 유도(특히, 콩의 유근으로부터 유도)한 뒤, 공기용적이 3L인 벌브형(Bulb Type) 생물반응기(시중에서 일반적으로 입수 가능, 도 1 참조) 내에서 IBA(indole-3-butyric acid, Sigma-Aldrich; Merck KGaA, Darmstadt, 독일) 4mg/L, 수크로스 30g/L가 첨가된 MS 배지(Murashige and Skoog medium, Duchefa, Haarlem, 네덜란드)에 위치시켜 콩 배양근을 3주 간격으로 신선한 배지로 갈아주면서 계대 배양 및 증식시켰다. 상기 배지는 1N NaOH를 이용하여 pH 5.8로 조정 후 121℃, 1.2기압에서 35분간 멸균한 것을 사용하였다. 상기 배양근은 3주간 증식시킨 것으로서 1-1.5cm로 절단하여 생체중을 기준으로 4g/L 밀도로 상기 배지에 접종한 후 22±1℃가 유지되는 암조건에서 배양하였다. 이러한 과정에서, 농약, 비료 등은 일체 사용하지 않았다. 공기공급량은 배양 전 기간 동안 에어플로우 미터(air flow meters, RMA series; Dwyer Instruments, Inc., 미국)를 이용하여 0.1vvm(air volume/culture volume per min)으로 일정하게 조절하였으며, 생물반응기 내부로 공급하는 공기는 일정한 온도 유지를 위하여 압축공기를 응축시킬 수 있는 공기응축기와 불순물을 제거할 수 있는 필터 및 공기 건조기 등을 순차적으로 통과시킨 후 기름을 사용하지 않는 공기 압축기를 이용하여 생물반응기 내부로 공급하였다.
상기와 같은 생물반응기 등을 사용할 경우, 노지나 야외에서 재배한 통상의 콩(종자, 식물체 유래) 추출물과는 달리, 연중 균일한 품질의 콩 배양근 추출물을 생산할 수 있음을 확인하였다(도 1 참조).
[실시예 2] 추출물 제조
실시예 1의 생물반응기를 이용하여 4주간 증식시킨 콩 배양근을 열풍 건조 후, 80%(w/v) 에탄올에 배양근:에탄올 중량비율이 1:30이 되도록 침지하여 상온에서 24시간 추출하였다. 추출액은 여과지를 이용하여 여과한 다음 용매를 증발 건조시켜 분말을 수득하였다. 본 추출물은 약 10중량%의 쿠메스트롤을 비롯하여 다양한 활성물질을 포함하고 있는 것으로 확인되었다. 또한, 반복 추출 실험을 통해, 상기 실시예 1을 통해 생산된 배양근을 이용하여 추출물을 제조할 경우 추출물 내 성분들이 균일하게 유지됨을 확인할 수 있었고, 계대배양 등을 접목한 상기 추출물 제조방식으로 대량 양산이 가능함을 확인하였다.
[실험예 1] 모낭 줄기세포 활성 확인(Wnt/β-catenin luciferase assay)
LEADING LIGHT® Wnt Reporter Cell Line(Enzo life science 사) 및ONE-Glo luciferase assay reporter kit (Promega, Madison, 미국)를 이용하여 상기 추출물의 모낭 줄기세포 활성 여부를 확인하였다. 구체적으로, 96 well plate에 NIH3T3(WNT) 세포를 10000개/well 씩 시딩(seeding) 후 24시간 동안 배양 (5% CO2, 37℃)하였고, 이후 음성대조군에는 아무것도 처리하지 않고, 양성대조군에는 LiCl(lithium chloride)을, 실험군에는 상기 추출물을 농도별로 24시간 동안 처리하였다.
이후, 96 well plate의 각 well마다 ONE-Glo reagent를 100㎕ 씩 넣고 3분간 반응시킨 후 광도계(luminometer, Victor luminometer)로 루시퍼라제 활성을 측정하였다.
β-catenin의 전사활성은 상기 추출물의 농도가 증가할수록 높아졌다(도 2 참조). Wnt/β-catenin 활성은 상기 추출물 50ppm(w/w)을 처리한 경우 대조군보다 3.28배 높은 활성을 나타내었다. 도 2에서 SARE는 상기 추출물(soybean adventitious root extract)을 의미한다. β-catenin 경로를 통한 Wnt 시그널링(Wnt signaling)의 유지 및 활성화는 모유두(dermal papilla)의 모발 유도 활성에 필요한 것이고, 또한 모유두 세포에서 성장기(anagen-phase) 유지를 위해 필요한 것이다. 상기 추출물의 처리로 인해 Wnt/β-catenin 활성이 강하게 증진되고, 그러한 활성증가는 모낭주기를 조절(성장기 유지 및 성장기 유도)하므로, 본원발명의 추출물이 모발 유도, 육모 촉진, 탈모 방지 등의 효과를 나타냄을 알 수 있었다.
[실험예 2] 모낭기관 배양 및 모낭주기 측정
실험 적용을 위하여 6개 군의 인체에 대하여 군(group) 당 15개 모낭 샘플을 채취하여 90개의 샘플을 분리하였다. 분리한 모낭을 24well plate (Nunc, Wiesbaden, 독일)에 500ul의 배양배지를 분주한 후 well당 5~6개 샘플을 배치하여 배양하였다.
사용된 배양배지로는, 2 mM L-글루타민(PAA, Coelbe, 독일), 10 μg/ml 인슐린, 10 ng/ml 하이드로코티손(hydrocortisone, Sigma사, 미국), 0.1% 펀가이존(fungizone, Gibco사, 미국), 10 μg/ml 스트렙토마이신, 100 U/ml 페니실린( Gibco사, 미국)를 포함하는 William’s E (Gibco사, 미국)를 사용하였다.
상기 추출물을 농도별(0, 10, 50ppm)로 상기 배지 내 모낭 샘플에 처리하되, 2~3일 마다 배지를 교환하였다. 현미경을 이용하여 모낭을 촬영을 하고 형태적 기준에 따라서 주기를 분류하였다.
모낭 주기(hair follicle cycle, HF cycle)로부터 퇴행기(catagen phase) 대비 성장기(anagen phase)의 비율을 측정하였다. 특히 성장기-퇴행기 이행시에 케라티노사이트의 사멸이 증가하고 케라티노사이트의 증식이 억제되는데, 상기 추출물을 투여한 결과 27 내지 36%의 모낭만이 퇴행기로 이행하였고, 50ppm의 상기 추출물을 사용한 경우 11일 뒤 퇴행기 대비 성장기의 비율은 대조군에 비해 2배 이상 높음을 알 수 있었다(도 3). 즉, 본원발명의 추출물을 사용한 경우 HF사이클에서 성장기의 현저한 연장이 나타났다. (도 3에서, MNX는 미녹시딜(minoxidil), SARE는 본원발명의 추출물(soybean adventitious root extract)) 이를 통해, 본원발명의 추출물이 육모 촉진 및 탈모 방지 효과를 발휘함을 확인할 수 있었다. 또한, 천연 식물인 콩을 사용하였으므로, 기존 치료제의 부작용도 해소할 수 있음을 알 수 있었다.
[제형예 1] 연질캅셀제
상기 실시예 2의 추출물 10mg, L-카르니틴 80~140mg, 대두유 180mg, 팜유 2mg, 식물성 경화유 8mg, 황납 4mg 및 레시틴 6mg을 혼합하고, 통상의 방법에 따라 1캡슐에 충진하여 연질캅셀제를 제조하였다.
[제형예 2] 정제
상기 실시예 2의 추출물 10mg, 갈락토올리고당 200mg, 유당 60mg 및 맥아당 140mg을 혼합하고 유동층 건조기를 이용하여 과립한 후 당 에스테르(sugar ester)를 6mg을 첨가하여 타정기로 타정하여 정제를 제조하였다.
[제형예 3] 드링크제
상기 실시예 2의 추출물 5mg, 포도당 10g, 구연산 0.6g, 및 액상 올리고당 25g을 혼합한 후 정제수 300ml를 가하여 각 병에 200ml씩 충진한다. 병에 충진한 후 130℃ 에서 4~5 초간 살균하여 드링크제를 제조하였다.
[제형예 4] 주사제
상기 실시예 2의 추출물 20mg, 주사용 멸균증류수 적량, pH조절제 적량을 이용하여 통상적인 방법으로 주사제를 제조하였다.
[제형예 5] 건강식품
상기 실시예 2의 추출물 5mg, 비타민 A 아세테이트 70 ㎍, 비타민 E 1.0 ㎎, 비타민 B1 0.13 ㎎, 비타민 B2 0.15㎎, 비타민 B 60.5 ㎎, 비타민 B12 0.2 ㎍, 비타민 C 10 ㎎, 비오틴 10㎍, 니코틴산아미드 1.7 ㎎, 엽산50 ㎍, 판토텐산 칼슘 0.5 ㎎, 황산제1철 1.75㎎, 산화아연 0.82㎎, 탄산마그네슘 25.3㎎, 제1인산칼륨 15㎎, 제2인산칼슘 55㎎, 구연산칼륨 90㎎, 탄산칼슘 100㎎, 염화마그네슘 24.8㎎의 조성에 따라 통상적인 방법으로 건강 식품을 제조하였다.
상기 비타민 및 무기질 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 예로 혼합 조성하였으나, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
[제형예 6] 크림형 제제
상기 실시예 2의 추출물 0.2 중량%, 폴리에틸렌글리콜모노스테아레이트 2.00 중량%, 자기유화형 모노스테아르산글리세린 5.00 중량%, 프로필렌글리콜 4.00 중량%, 스쿠알렌 6.00 중량%, 트리2-에틸헥산글리세릴 6.00 중량%, 스핑고당지질 1.00 중량%, 1,3-부틸렌글리콜 7.00 중량%, 밀랍 5.00 중량%, 정제수 잔량을 사용하여 크림형 제제를 제조하였다. 또한, 정제수의 양을 조절하고 점도를 조정하여 연고제도 제조하였다.
Claims (24)
- 콩 배양조직의 추출물을 포함하되,
상기 콩 배양조직은 콩 배양근 또는 콩 캘러스인, 탈모방지용 또는 육모촉진용 조성물. - 제1항에 있어서, 상기 콩은 대두 또는 납작콩인, 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 추출물은 물, C1 내지 C6의 저급 알코올, 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출한 것인, 조성물.
- 제3항에 있어서, 상기 저급 알코올은 에탄올인, 조성물
- 제3항에 있어서, 상기 알코올 농도는 60 내지 100%(w/v)인, 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 쿠메스트롤을 조성물 총 중량 대비 5 내지 15중량% 포함하는 것인, 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 탈모방지 또는 육모촉진은 모유두세포 증식, 모낭줄기세포 활성 증가, 모낭 성장기 유도, 모낭 성장기 유지 또는 연장, 및 모낭주기 중 퇴행기로의 이행 억제로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상에 의한 것인, 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 탈모방지 또는 육모촉진은 베타-카테닌(β-catenin)의 전사활성 증가 또는 Wnt/베타-카테닌(Wnt/β-catenin) 활성 증가에 의한 것인, 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물의 투여경로는 경피 또는 피부외용인, 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물 내 상기 추출물의 농도는 10 내지 100 ppm(w/v)인, 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물의 투여에 의한 상기 추출물의 투여량은 5mg/kg/일 내지 300mg/kg/일인, 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 식품, 약학, 또는 화장료 조성물인, 조성물.
- (1) 콩 배양근을 생물반응기 내의 배지에 위치시켜 상기 생물반응기 내에서 공기공급량을 일정하게 유지하며 증식시키는 단계;
(2) 상기 (1) 단계를 거친 배양근을 건조하는 단계;
(3) 상기 (2) 단계를 거친 결과물을 알코올에 침지하여 추출하는 단계; 및
(4) 상기 (3) 단계를 거친 후 여과 및 건조시키는 단계를 포함하는, 제1항의 탈모방지 또는 육모촉진용 조성물을 균일하게 대량으로 제조하는 방법. - 제13항에 있어서, 상기 생물반응기는 벌브형 기포 생물반응기(Bulb Type bubble bioreactor)인, 방법.
- 제13항에 있어서, 상기 (1) 단계의 배지는 IBA(indole-3-butyric acid), 탄소원이 첨가된 것인, 방법.
- 제13항에 있어서, 상기 (1) 단계의 배지는 무라시게/스쿡(Murashige and Skoog) 배지인, 방법.
- 제13항에 있어서, 상기 (1) 단계에서 콩 배양근을 배지에 위치시킬 때의 배지 pH는 4.8 내지 6.8인, 방법.
- 제13항에 있어서, 상기 (1) 단계에서 콩 배양근을 배지에 위치시킬 때 밀도는 2 내지 6 g/L인, 방법.
- 제13항에 있어서, 상기 (1) 단계의 증식은 암조건에서 실시하는 것인, 방법.
- 제13항에 있어서, 상기 (1) 단계는 19 내지 25℃에서 실시하는 것인, 방법.
- 제13항에 있어서, 상기 (1) 단계의 공기공급량은 0.05 내지 0.4 vvm(air volume/culture volume per min)인, 방법.
- 제13항에 있어서, 상기 (1) 단계의 증식은 3 내지 5주간 실시하는 것인, 방법.
- 제13항에 있어서, 상기 (3) 단계의 알코올 농도는 60 내지 100%(w/v)인, 방법.
- 제13항에 있어서, 상기 (3) 단계의 추출 시간은 20 내지 28시간인, 방법.
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Legal Events
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---|---|---|---|
A201 | Request for examination | ||
E902 | Notification of reason for refusal | ||
AMND | Amendment | ||
E601 | Decision to refuse application | ||
X091 | Application refused [patent] | ||
AMND | Amendment | ||
X701 | Decision to grant (after re-examination) | ||
GRNT | Written decision to grant |