KR20190030380A - 발포성 정제 미생물 배지 및 그 제조방법 - Google Patents

발포성 정제 미생물 배지 및 그 제조방법 Download PDF

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/34—Processes using foam culture

Abstract

본 발명은 배지 조성물 및 발포 혼합제를 포함하는 미생물 배양용 발포성 정제 배지를 제공한다. 본 발명의 미생물 배양용 발포성 정제 배지는 배지 제조 시 미세먼지 및 분진 발생을 억제하고, 배지 원료의 수용화 시간을 단축할 수 있는 것은 물론, 배지에 포함된 각각의 원료들을 정량하는 수고를 최소화할 수 있는 장점을 제공한다.

Description

발포성 정제 미생물 배지 및 그 제조방법{Forming Tablet Microorganism Medium and the Process for the preparation thereof}
본 발명은 발포성 정제 미생물 배지 및 그 제조방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 PDA(Potato Dextrose Agar) 배지 조성물, TSA(Tryptic Soy Agar) 배지 조성물 및 NA(Nutrient Agar) 배지 조성물을 포함하는 군으로부터 선택된 배지 조성물 및 발포 혼합제를 포함하는 미생물 배양용 발포성 정제 배지에 관한 것이다.
미생물 배양에 있어서 원료물질로 탄수원, 질소원, 일반무기염류 등의 배지분이 사용되어지고 있으며, 탄소원, 질소원, 무기염류가 혼합된 형태의 추출물, 소화물 등이 사용되어지고 있다. 추출물로는 가장 많이 사용되는 것으로 효모 발효 추출물(yeast extract), 동물성 추출물로서 소고기 추출물(beef extract), 맥아 추출물(malt extract) 등이 있다.
소화물로는 펩톤 등의 가수분해산물로 단백질을 원료로 하여 산, 효소 등을 이용하여 아미노산 등의 미생물 필수 영양원으로 사용되어질 수 있는 물질로 제조된 것으로 우유, 콩, 육류, 미생물 등의 단백질 함유물질을 원료로 제조된다.
이러한 복합물질의 장점은 생체물질이 원료로 생체 발육에 필요한 여러 가지 비타민, 무기물, 탄소원, 질소원 등이 균형있게 포함되어 있어 미생물 배양용 배지성분의 주원료로 사용되어지고 있다.
예로서 LB 배지(Luria-Bertani medium)의 경우 효모 추출물(Yeast extract)와 트립신에 의해 소화된 단백질 가수분해물인 트립톤이 포함되어 있으며, 효모 배양시 많이 사용되는 YM 배지도 효모 추출물과 맥아 추출물이 포함되어 있다. 이러한 추출물은 미생물 성장에 중요한 역할을 하며, 산업적 미생물 배양에 있어서 가장 중요한 성분이다.
현재 시판되는 미생물 배지는 대부분 파우더 형태로 되어있으며, 파우더 배지의 문제점은 배지를 제조할 때 마다 저울을 이용하여 정량을 해야 하는 불편한 부분이 있으며, 미세가루 형태로 미세 먼지 및 분진 등이 발생하여 사용자의 호흡기를 통하여 흡입될 수 있는 문제점을 가지고 있으며, 물에 녹이는 과정에서 뭉침 현상으로 인해 용해되는데 시간이 오래 걸려 교반기를 사용하는 불편함이 있다.
상술한 문제를 해결하기 위해 KR 특허출원번호 제10-2012-0042149호(발명의 명칭 : 식물조직 배양용 정제 배지 및 그 제조방법)에서는 식물조직을 배양하기 위한 배지에 있어서, MS배지 조성물을 포함하여 정제화(tabletting, 錠劑化)한 것을 특징으로 하는 식물조직 배양용 정제(tablet, 錠劑) 배지에 대해 개시하고 있고,
KR 특허출원번호 제10-2013-7020168호(발명의 명칭 : 발포성 조성물 및 그 용도)에서는 표적 미생물의 성장을 높이는 방법으로서, 배양 배지, 표적 미생물을 포함할 수 있는 샘플, 및 잠재적 발포체(latent effervescent body)를 제공하는 단계 - 여기서, 잠재적 발포체는 코어 조성물이 내부에 배치된 외부 쉘(shell)을 포함하며, 코어 조성물은 2가지 이상의 발포 성분 및 적어도 하나의 다른 미생물의 성장에 비하여 표적 미생물의 성장을 촉진하는 선발제(selective agent)를 포함함 - 와; 샘플, 잠재적 발포체 및 배양 배지를 표적 미생물의 성장을 촉진하는 조건 하에 접촉시키는 단계와; 선발제를 잠재적 발포체로부터 방출시키는 단계를 포함하는 방법에 대해 개시하고 있다.
그러나 상술한 특허 문헌 1의 경우 배지 혼합을 위한 별도의 교반기를 추가로 필요로 하는 문제를 해결할 수 없었고, 특허 문헌 2의 경우 선택적 미생물 검출과 관련된 발포 정제로서 근본적으로 미생물을 배양하기 위한 배지가 아닌 문제가 있다.
본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.
본 발명의 발명자들은 현재 시판되는 파우더 형태의 미생물 배지는 배지를 제조할 때 마다 저울을 이용하여 정량을 해야 하고, 미세 먼지 및 분진 등이 발생하여 사용자의 호흡기를 통하여 흡입될 수 있는 문제점을 가지고 있으며, 물에 녹이는 과정에서 뭉침 현상이 발생하여 이를 해결하기 위해 예의 연구 노력하였다. 그 결과, 기존 파우더 형태의 배지를 물에 쉽게 녹는 발포정(Foaming tablet) 형태로 만들 경우 배지 제조 시 미세먼지 및 분진 발생을 억제하고, 배지 원료의 수용화 시간을 단축할 수 있는 것은 물론, 배지에 포함된 각각의 원료들을 정량하는 수고를 최소화할 수 있다는 사실을 발견하여 본 발명을 완성하였다.
따라서 본 발명의 목적은 발포성 정제 배지를 제공하는데 있다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 발포성 정제 배지의 제조방법을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.
본 발명은 정제 배지를 제공한다.
본 발명의 발명자들은 현재 시판되는 파우더 형태의 미생물 배지는 배지를 제조할 때 마다 저울을 이용하여 정량을 해야 하고, 미세 먼지 및 분진 등이 발생하여 사용자의 호흡기를 통하여 흡입될 수 있는 문제점을 가지고 있으며, 물에 녹이는 과정에서 뭉침 현상이 발생하여 이를 해결하기 위해 예의 연구 노력하였다. 그 결과, 기존 파우더 형태의 배지를 물에 쉽게 녹는 발포정(Foaming tablet) 형태로 만들 경우 배지 제조 시 미세먼지 및 분진 발생을 억제하고, 배지 원료의 수용화 시간을 단축할 수 있는 것은 물론, 배지에 포함된 각각의 원료들을 정량하는 수고를 최소화할 수 있다는 사실을 확인하였다.
본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 배지 조성물 및 발포 혼합제를 포함하는 미생물 배양용 발포성 정제 배지를 제공한다.
본 명세서에서 사용하는 용어‘PDA(Potato Dextrose Agar) 배지’는 감자 추출물, 덱스트로스 및 아가(Agar)를 포함하는 배지를 의미할 수 있다.
본 명세서에서 사용하는 용어‘TSA(Tryptic Soy Agar) 배지’는 트립톤, 소이빈 및 아가를 포함하는 배지를 의미할 수 있다.
본 명세서에서 사용하는 용어‘NA(Nutrient Agar) 배지’는 소고기 추출물, 펩톤 및 아가를 포함하는 배지를 의미할 수 있다.
본 명세서에서 사용하는 용어‘액체 배지’는 아가(Agar)를 포함하지 않은 배지 조성물을 의미할 수 있다.
본 명세서에서 사용하는 용어‘고체 배지’는 아가(Agar)를 포함하는 배지 조성물을 의미할 수 있다.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 본 발명의 상기 배지 조성물은 바람직하게는 액체 배지 또는 고체 배지일 수 있고, 보다 바람직하게는 고체 배지일 수 있으며, 가장 바람직하게는 PDA(Potato Dextrose Agar) 배지 조성물, TSA(Tryptic Soy Agar) 배지 조성물 및 NA(Nutrient Agar) 배지 조성물을 포함하는 군으로부터 선택된 배지일 수 있다.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 본 발명의 상기 발포 혼합제는 바람직하게는 탄산수소나트륨(Sodium hydrogen carbonate) 및 구연산(Citric acid)의 혼합물일 수 있다.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 본 발명의 상기 배지 조성물 및 발포 혼합제의 혼합 비율은 바람직하게는 배지 조성물 100 중량부를 기준으로 발포 혼합제의 비율이 다음과 같을 수 있다:
(a) PDA 배지 : 5 중량부 내지 25 중량부;
(b) TSA 배지 : 15 중량부 내지 30 중량부; 및
(c) NA 배지 : 10 중량부 내지 40 중량부.
본 발명에서 배지 조성물 및 발포 혼합제가 상술한 혼합 비율을 갖는 것은 매우 중요한 구성이다. 왜냐하면, 상술한 범위 미만의 발포 혼합제를 포함할 경우 발포력이 충분하지 않은 문제가 있고, 상술한 범위를 초과하는 발포 혼합제를 포함할 경우 발포력이 더 이상 증가하지 않는 것은 물론, 오토클레이브에 의한 배지 멸균 작업 후 배지 내에 이산화탄소가 잔류할 수 있는 문제가 있기 때문이다.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 본 발명의 상기 탄산수소나트륨 및 구연산의 혼합 비율은 바람직하게는 탄산수소나트륨 100 중량부를 기준으로 구연산의 비율이 다음과 같을 수 있다:
(a) PDA 배지 : 50 중량부 내지 100 중량부;
(b) TSA 배지 : 20 중량부 내지 40 중량부; 및
(c) NA 배지 : 40 중량부 내지 100 중량부.
본 발명에서 탄산수소나트륨 및 구연산이 상술한 혼합 비율을 갖는 것은 매우 중요한 구성이다. 왜냐하면, 상술한 혼합 비율에서 미생물이 생장할 수 있는 최적의 pH를 나타냈기 때문이다.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 본 발명의 상기 미생물 배양용 발포성 정제 배지의 pH는 바람직하게는 다음과 같을 수 있다:
(a) PDA 배지 : 5±0.5;
(b) TSA 배지 : 7±0.5; 및
(c) NA 배지 : 6.5±0.5.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 PDA 배지 조성물 및 탄산수소나트륨 및 구연산이 포함된 발포 혼합제를 포함하고, 상기 탄산수소나트륨 및 구연산의 혼합 비율은 탄산수소나트륨 100 중량부를 기준으로 구연산을 50 중량부 내지 100 중량부 포함하며, 상기 PDA 배지 조성물 및 발포 혼합제의 혼합 비율은 배지 조성물 100 중량부를 기준으로 발포 혼합제를 5 중량부 내지 25 중량부 포함하고, 상기 미생물 배양용 발포성 정제 PDA 배지의 pH는 5±0.5인 미생물 배양용 발포성 정제 PDA 배지를 제공한다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 TSA 배지 조성물 및 탄산수소나트륨 및 구연산이 포함된 발포 혼합제를 포함하고, 상기 탄산수소나트륨 및 구연산의 혼합 비율은 탄산수소나트륨 100 중량부를 기준으로 구연산을 20 중량부 내지 40 중량부 포함하며, 상기 TSA 배지 조성물 및 발포 혼합제의 혼합 비율은 배지 조성물 100 중량부를 기준으로 발포 혼합제를 15 중량부 내지 30 중량부 포함하고, 상기 미생물 배양용 발포성 정제 TSA 배지의 pH는 7±0.5인 미생물 배양용 발포성 정제 TSA 배지를 제공한다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 NA 배지 조성물 및 탄산수소나트륨 및 구연산이 포함된 발포 혼합제를 포함하고, 상기 탄산수소나트륨 및 구연산의 혼합 비율은 탄산수소나트륨 100 중량부를 기준으로 구연산을 40 중량부 내지 100 중량부 포함하며, 상기 NA 배지 조성물 및 발포 혼합제의 혼합 비율은 배지 조성물 100 중량부를 기준으로 발포 혼합제를 10 중량부 내지 40 중량부 포함하고, 상기 미생물 배양용 발포성 정제 NA 배지의 pH는 6.5±0.5인 미생물 배양용 발포성 정제 NA 배지를 제공한다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 다음의 단계를 포함하는 미생물 배양용 발포성 정제 배지 제조방법을 제공 한다: (a) PDA, TSA 및 NA 배지 조성물을 포함하는 군으로부터 선택된 배지 조성물 및 탄산수소나트륨 및 구연산이 포함된 발포 혼합제를 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계; 및 (b) 상기 단계 (a)의 혼합물에 에탄올을 첨가한 다음 성형기를 이용하여 압축 성형하는 단계.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 본 발명의 상기 단계 (b)의 에탄올은 바람직하게는 중량기준 90-99% 에탄올일 수 있다.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 본 발명의 상기 단계 (b)의 에탄올은 바람직하게는 배양용 배지 0.25 L를 제조할 수 있는 상기 배지 조성물의 중량 당 1-10 ml 첨가하는 것일 수 있다.
본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:
(a) 본 발명은 배지 조성물 및 발포 혼합제를 포함하는 미생물 배양용 발포성 정제 배지를 제공한다.
(b) 본 발명의 미생물 배양용 발포성 정제 배지는 배지 제조 시 미세먼지 및 분진 발생을 억제하고, 배지 원료의 수용화 시간을 단축할 수 있는 것은 물론, 배지에 포함된 각각의 원료들을 정량하는 수고를 최소화할 수 있는 장점을 제공한다.
도 1은 본 발명인 미생물 배양용 발포성 정제 배지를 나타낸다.
도 2는 PDA 배지 미생물 배양 실험 결과를 나타낸다.
도 3은 TSA 배지 미생물 배양 실험 결과를 나타낸다.
도 4는 NA 배지 미생물 배양 실험 결과를 나타낸다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명 하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예
본 명세서 전체에 걸쳐, 특정 물질의 농도를 나타내기 위하여 사용되는 “%“는 별도의 언급이 없는 경우, 고체/고체는 (중량/중량) %, 고체/액체는 (중량/부피) %, 그리고 액체/액체는 (부피/부피) %이다.
제조예
제조예 1 : PDA 발포배지의 제조
제조예 1-1 : 발포 혼합제 함량의 결정
배양용 PDA 배지 0.25 L를 제조할 수 있는 PDA 파우더 배지와 발포 혼합제를 하기 표 1의 조성으로 혼합하여 혼합물을 제조한 후, 상기 혼합물에 95% EtoH 3 ml를 첨가하여 수분을 머금은 가루 형태로 만든 다음, 성형기를 이용하여 습식 압축 성형하여 발포 혼합제 함량 결정을 위한 발포성 정제 PDA 배지를 완성하였다. 여기서 발포 혼합제에 포함된 구연산과 탄산수소나트륨의 비율은 중량기준 1 : 2로 고정하여 실험을 진행하였다.
성분 제조1 제조2 제조3 제조4 제조5 제조6 제조7 제조8 제조9 제조10
PDA 배지 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100
발포 혼합제 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50
발포여부 O O O O O O O O O O
붕해시간 (S) 322 283 254 232 199 201 210 207 208 210
단위 : 중량부
실험 결과, 발포 혼합제를 25 중량부 포함한 제조예 5에서 가장 짧은 붕해시간을 나타냈다. 발포 혼합제를 25 중량부 초과하여 포함하고 있는 제조예 6 내지 제조예 10의 경우 제조예 5와 유사한 수준의 붕해 시간을 나타냈으나, 발포 혼합제 첨가량 증가에 의한 붕해 시간의 단축이 관찰되지 않았다.
제조예 1-2 : 발포 혼합제 비율의 결정
배양용 PDA 배지 0.25 L를 제조할 수 있는 PDA 파우더 배지와 발포 혼합제를 하기 표 2의 조성으로 혼합하여 혼합물을 제조한 후, 상기 혼합물에 95% EtoH 3 ml를 첨가하여 수분을 머금은 가루 형태로 만든 다음, 성형기를 이용하여 습식 압축 성형하여 발포 혼합제 비율 결정을 위한 발포성 정제 PDA 배지를 완성하였다. 여기서 발포성 정제 PDA 배지에 포함된 발포 혼합제 중 탄산수소나트륨의 함량은 상기 표 1의 제조예 5에 포함된 탄산수소나트륨의 함량으로 고정하여 실험을 진행하였다. 상술한 함량에서 붕해 시간이 가장 짧았기 때문이다.
성분 제조11 제조12 제조13 제조14 제조15 제조16 제조17 제조18 제조19 제조20
탄산수소
나트륨 		100 100 100 100 100 100 100 100 100 100
구연산 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
발포여부 O O O O O O O O O O
붕해시간 (S) 870 750 280 230 250 220 210 196 201 202
pH 7.2±0.2 7.1±0.2 6.7±0.2 6.2±0.2 6.0±0.2 5.9±0.2 5.7±0.2 5.5±0.2 5.3±0.2 5.0±0.2
단위 : 중량부
실험 결과, 탄산수소나트륨 100 중량부를 기준으로 구연산을 80 중량부 포함하고 있는 제조예 18에서 PDA 배지의 대상 미생물에 대한 배양 적정 pH인 5.5±0.2를 나타냈다.
제조예 2 : TSA 발포배지의 제조
제조예 2-1 : 발포 혼합제 함량의 결정
배양용 TSA 배지 0.25 L를 제조할 수 있는 TSA 파우더 배지와 발포 혼합제를 하기 표 3의 조성으로 혼합하여 혼합물을 제조한 후, 상기 혼합물에 95% EtoH 7 ml를 첨가하여 수분을 머금은 가루 형태로 만든 다음, 성형기를 이용하여 습식 압축 성형하여 발포 혼합제 함량 결정을 위한 발포성 정제 TSA 배지를 완성하였다. 여기서 발포 혼합제에 포함된 구연산과 탄산수소나트륨의 비율은 중량기준 1 : 2로 고정하여 실험을 진행하였다.
성분 제조21 제조22 제조23 제조24 제조25 제조26 제조27 제조28 제조29 제조30
TSA 배지 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100
발포 혼합제 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50
발포여부 O O O O O O O O O O
붕해시간 (S) 923 887 550 420 480 352 380 410 399 413
단위 : 중량부
실험 결과, 발포 혼합제를 20 중량부 포함한 제조예 26에서 가장 짧은 붕해 시간을 나타냈다. 발포 혼합제를 30 중량부 초과하여 포함하고 있는 제조예 27 내지 제조예 30의 경우 제조예 26과 유사한 수준의 붕해 시간을 나타냈으나, 발포 혼합제 첨가량 증가에 의한 붕해 시간의 단축이 관찰되지 않았다.
제조예 2-2 : 발포 혼합제 비율의 결정
배양용 TSA 배지 0.25 L를 제조할 수 있는 TSA 파우더 배지와 발포 혼합제를 하기 표 4의 조성으로 혼합하여 혼합물을 제조한 후, 상기 혼합물에 95% EtoH 7 ml를 첨가하여 수분을 머금은 가루 형태로 만든 다음, 성형기를 이용하여 습식 압축 성형하여 발포 혼합제 비율 결정을 위한 발포성 정제 TSA 배지를 완성하였다. 여기서 발포성 정제 TSA 배지에 포함된 발포 혼합제 중 탄산수소나트륨의 함량은 상기 표 3의 제조예 26에 포함된 탄산수소나트륨의 함량으로 고정하여 실험을 진행하였다. 상술한 함량에서 붕해 시간이 가장 짧았기 때문이다.
성분 제조31 제조32 제조33 제조34 제조35 제조36 제조37 제조38 제조39 제조40
탄산수소
나트륨 		100 100 100 100 100 100 100 100 100 100
구연산 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
발포여부 O O O O O O O O O O
붕해시간 (S) 870 353 382 489 785 883 852 875 782 953
pH 7.3±0.2 7.2±0.2 7.2±0.2 6.6±0.2 6.3±0.2 5.9±0.2 5.7±0.2 5.5±0.2 5.3±0.2 5.0±0.2
단위 : 중량부
실험 결과, 탄산수소나트륨 100 중량부를 기준으로 구연산을 80 중량부 포함하고 있는 제조예 32 및 제조예 33에서 TSA 배지의 대상 미생물에 대한 배양 적정 pH인 7.2±0.2를 나타냈다.
제조예 3 : NA 발포배지의 제조
제조예 3-1 : 발포 혼합제 함량의 결정
배양용 NA 배지 0.25 L를 제조할 수 있는 NA 파우더 배지와 발포 혼합제를 하기 표 5의 조성으로 혼합하여 혼합물을 제조한 후, 상기 혼합물에 95% EtoH 3 ml를 첨가하여 수분을 머금은 가루 형태로 만든 다음, 성형기를 이용하여 습식 압축 성형하여 발포 혼합제 함량 결정을 위한 발포성 정제 NA 배지를 완성하였다. 여기서 발포 혼합제에 포함된 구연산과 탄산수소나트륨의 비율은 중량기준 1 : 2로 고정하여 실험을 진행하였다.
성분 제조41 제조42 제조43 제조44 제조45 제조46 제조47 제조48 제조49 제조50
TSA 배지 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100
발포 혼합제 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50
발포여부 O O O O O O O O O O
붕해시간 (S) 330 198 245 207 227 221 210 190 198 192
단위 : 중량부
실험 결과, 발포 혼합제를 40 중량부 포함한 제조예 48에서 가장 짧은 붕해시간을 나타냈다. 발포 혼합제를 40 중량부 초과하여 포함하고 있는 제조예 49 및 제조예 50의 경우 제조예 48과 유사한 수준의 붕해 시간을 나타냈으나, 발포 혼합제 첨가량 증가에 의한 붕해 시간의 단축이 관찰되지 않았다.
제조예 3-2 : 발포 혼합제 비율의 결정
배양용 NA 배지 0.25 L를 제조할 수 있는 NA 파우더 배지와 발포 혼합제를 하기 표 6의 조성으로 혼합하여 혼합물을 제조한 후, 상기 혼합물에 95% EtoH 3 ml를 첨가하여 수분을 머금은 가루 형태로 만든 다음, 성형기를 이용하여 습식 압축 성형하여 발포 혼합제 비율 결정을 위한 발포성 정제 NA 배지를 완성하였다. 여기서 발포성 정제 NA 배지에 포함된 발포 혼합제 중 탄산수소나트륨의 함량은 상기 표 5의 제조예 48에 포함된 탄산수소나트륨의 함량으로 고정하여 실험을 진행하였다. 상술한 함량에서 붕해 시간이 가장 짧았기 때문이다.
성분 제조51 제조52 제조53 제조54 제조55 제조56 제조57 제조58 제조59 제조60
탄산수소
나트륨 		100 100 100 100 100 100 100 100 100 100
구연산 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
발포여부 O O O O O O O O O O
붕해시간 (S) 210 250 220 199 183 201 230 225 227 245
pH 7.2±0.2 7.1±0.2 6.7±0.2 6.4±0.2 6.6±0.2 6.2±0.2 5.7±0.2 5.5±0.2 5.3±0.2 5.2±0.2
단위 : 중량부
실험 결과, 탄산수소나트륨 100 중량부를 기준으로 구연산을 50 중량부 포함하고 있는 제조예 55에서 NA 배지의 대상 미생물에 대한 배양 적정 pH인 6.6±0.2를 나타냈다.
실험예 : 미생물 생장 실험
실험예 1 : PDA 발포배지의 미생물 생장 실험
상기 표 2의 제조예 11 내지 제조예 20의 방법으로 제조한 PDA 발포성 정제 배지에 미생물 생장 실험을 실시하였다. PDA 배지에 사용한 미생물은 Aspergillus niger(KCTC 6960), Colletotrichum gleosporidide(KACC 40003), Fusarium oxysporum(KACC 42795) 및 Monosporacus cannonballus(KACC 40940)이며, 대조구로는 Sigma 사의 PDA 배지를 사용하였다. 실험 결과는 하기 표 7과 같고, 육안으로 관찰한 결과 미생물의 배양 상태가 대조구인 MBcell 사의 PDA 배지에서 배양한 미생물과 동일 내지 유사한 상태로 배양되었을 경우‘O’, 미생물이 배양되지 않았거나, 거의 배양되지 않았을 경우‘X’로 표기하였다. 육안으로 관찰 결과 제조예 18의 방법으로 제조한 PDA 발포성 정제 배지에서 미생물 배양이 가장 잘 되었고, 그 결과를 도 2에 첨부하였다.
성분 제조11 제조12 제조13 제조14 제조15 제조16 제조17 제조18 제조19 제조20
미생물
배양여부 		X X X X X O O O O O
실험예 2 : TSA 발포배지의 미생물 생장 실험
상기 표 4의 제조예 31 내지 제조예 40의 방법으로 제조한 TSA 발포성 정제 배지에 미생물 생장 실험을 실시하였다. TSA 배지에 사용한 미생물은 Bacillus subtilis(KCTC 1021), Staphylococus aureus(KCTC 1916), Salmonella typhimurium(KCTC 1925) 및 Candida albcans(KCTC 7965)이며, 대조구로는 MBcell 사의 TSA 배지를 사용하였다. 실험 결과는 하기 표 8과 같고, 육안으로 관찰한 결과 미생물의 배양 상태가 대조구인 MBcell 사의 TSA 배지에서 배양한 미생물과 동일 내지 유사한 상태로 배양되었을 경우‘O’, 미생물이 배양되지 않았거나, 거의 배양되지 않았을 경우‘X’로 표기하였다. 육안으로 관찰 결과 제조예 33의 방법으로 제조한 TSA 발포성 정제 배지에서 미생물 배양이 가장 잘 되었고, 그 결과를 도 3에 첨부하였다.
성분 제조31 제조32 제조33 제조34 제조35 제조36 제조37 제조38 제조39 제조40
미생물
배양여부 		O O O O X X X X X X
실험예 3 : NA 발포배지의 미생물 생장 실험
상기 표 6의 제조예 51 내지 제조예 60의 방법으로 제조한 NA 발포성 정제 배지에 미생물 생장 실험을 실시하였다. NA 배지에 사용한 미생물은 Bacillus subtilis(KCTC 1021), Staphylococus aureus(KCTC 1916), Salmonella typhimurium(KCTC 1925) 및 Candida albcans(KCTC 7965)이며, 대조구로는 MBcell 사의 NA 배지를 사용하였다. 실험 결과는 하기 표 9과 같고, 육안으로 관찰한 결과 미생물의 배양 상태가 대조구인 MBcell 사의 NA 배지에서 배양한 미생물과 동일 내지 유사한 상태로 배양되었을 경우‘O’, 미생물이 배양되지 않았거나, 거의 배양되지 않았을 경우‘X’로 표기하였다. 육안으로 관찰 결과 제조예 55의 방법으로 제조한 PDA 발포성 정제 배지에서 미생물 배양이 가장 잘 되었고, 그 결과를 도 4에 첨부하였다.
성분 제조51 제조52 제조53 제조54 제조55 제조56 제조57 제조58 제조59 제조60
미생물
배양여부 		X X X O O O O O O O

Claims (12)

  1. 배지 조성물 및
    발포 혼합제를 포함하는
    미생물 배양용 발포성 정제 배지.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 배지 조성물은 PDA(Potato Dextrose Agar) 배지 조성물, TSA(Tryptic Soy Agar) 배지 조성물 및 NA(Nutrient Agar) 배지 조성물을 포함하는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 미생물 배양용 발포성 정제 배지.
  3. 제 2 항에 있어서,
    상기 발포 혼합제는 탄산수소나트륨(Sodium hydrogen carbonate) 및 구연산(Citric acid)의 혼합물인 것을 특징으로 하는 미생물 배양용 발포성 정제 배지.
  4. 제 3 항에 있어서,
    상기 탄산수소나트륨 및 구연산의 혼합 비율은 탄산수소나트륨 100 중량부를 기준으로 구연산의 비율이 다음과 같은 것을 특징으로 하는 미생물 배양용 발포성 정제 배지:
    (a) PDA 배지 : 50 중량부 내지 100 중량부;
    (b) TSA 배지 : 20 중량부 내지 40 중량부; 및
    (c) NA 배지 : 40 중량부 내지 100 중량부.
  5. 제 4 항에 있어서,
    상기 배지 조성물 및 발포 혼합제의 혼합 비율은 배지 조성물 100 중량부를 기준으로 발포 혼합제의 비율이 다음과 같은 것을 특징으로 하는 미생물 배양용 발포성 정제 배지:
    (a) PDA 배지 : 5 중량부 내지 25 중량부;
    (b) TSA 배지 : 15 중량부 내지 30 중량부; 및
    (c) NA 배지 : 10 중량부 내지 40 중량부.
  6. 제 5 항에 있어서,
    상기 미생물 배양용 발포성 정제 배지의 pH는 다음과 같은 것을 특징으로 하는 미생물 배양용 발포성 정제 배지:
    (a) PDA 배지 : 5±0.5;
    (b) TSA 배지 : 7±0.5; 및
    (c) NA 배지 : 6.5±0.5.
  7. PDA 배지 조성물 및
    탄산수소나트륨 및 구연산이 포함된 발포 혼합제를 포함하고,
    상기 탄산수소나트륨 및 구연산의 혼합 비율은 탄산수소나트륨 100 중량부를 기준으로 구연산을 50 중량부 내지 100 중량부 포함하며,
    상기 PDA 배지 조성물 및 발포 혼합제의 혼합 비율은 배지 조성물 100 중량부를 기준으로 발포 혼합제를 5 중량부 내지 25 중량부 포함하고,
    상기 미생물 배양용 발포성 정제 PDA 배지의 pH는 5±0.5인
    미생물 배양용 발포성 정제 PDA 배지.
  8. TSA 배지 조성물 및
    탄산수소나트륨 및 구연산이 포함된 발포 혼합제를 포함하고,
    상기 탄산수소나트륨 및 구연산의 혼합 비율은 탄산수소나트륨 100 중량부를 기준으로 구연산을 20 중량부 내지 40 중량부 포함하며,
    상기 TSA 배지 조성물 및 발포 혼합제의 혼합 비율은 배지 조성물 100 중량부를 기준으로 발포 혼합제를 15 중량부 내지 30 중량부 포함하고,
    상기 미생물 배양용 발포성 정제 TSA 배지의 pH는 7±0.5인
    미생물 배양용 발포성 정제 TSA 배지.
  9. NA 배지 조성물 및
    탄산수소나트륨 및 구연산이 포함된 발포 혼합제를 포함하고,
    상기 탄산수소나트륨 및 구연산의 혼합 비율은 탄산수소나트륨 100 중량부를 기준으로 구연산을 40 중량부 내지 100 중량부 포함하며,
    상기 NA 배지 조성물 및 발포 혼합제의 혼합 비율은 배지 조성물 100 중량부를 기준으로 발포 혼합제를 10 중량부 내지 40 중량부 포함하고,
    상기 미생물 배양용 발포성 정제 NA 배지의 pH는 6.5±0.5인
    미생물 배양용 발포성 정제 NA 배지.
  10. 다음의 단계를 포함하는 미생물 배양용 발포성 정제 배지 제조방법:
    (a) PDA, TSA 및 NA 배지 조성물을 포함하는 군으로부터 선택된 배지 조성물 및 탄산수소나트륨 및 구연산이 포함된 발포 혼합제를 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계; 및
    (b) 상기 단계 (a)의 혼합물에 에탄올을 첨가한 다음 성형기를 이용하여 압축성형하는 단계.
  11. 제 10 항에 있어서,
    상기 단계 (b)의 에탄올은 중량기준 90-99% 에탄올인 것을 특징으로 하는 미생물 배양용 발포성 정제 배지 제조방법.
  12. 제 10 항에 있어서,
    상기 단계 (b)의 에탄올은 배양용 배지 0.25 L를 제조할 수 있는 상기 배지 조성물의 중량 당 1-10 ml 첨가하는 것을 특징으로 하는 미생물 배양용 발포성 정제 배지 제조방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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