KR20230150357A - 세포 성장 배지를 생산하는 방법 - Google Patents

세포 성장 배지를 생산하는 방법 Download PDF

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KR20230150357A
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파시 바이니카
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실레스히 붑스헤트
니나 솔베리
레네 외베르뷔
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Abstract

세포 성장 배지의 제조방법이 개시된다. 상기 방법은 기체 발효에 의해 미생물 세포를 배양하여 바이오매스 슬러리를 얻는 단계, 고상으로부터 액상을 분리 및 제거함으로써 상기 바이오매스 슬러리를 농축하는 단계, 고압 균질화로 농축된 바이오매스 슬러리를 균질화하는 단계로서, 미생물 세포는 적어도 부분적으로 분해되는 것인 단계, 하나 이상의 프로테아제를 첨가함으로써 상기 균질화된 바이오매스 슬러리를 처리하는 단계, 및 상기 처리된 바이오매스 슬러리를 가열하는 단계를 포함한다.

Description

세포 성장 배지를 생산하는 방법
본 개시내용은 일반적으로 세포 성장 배지(medium) 또는 세포 성장 배지(mediums); 보다 구체적으로는 세포 성장 배지를 생산하는 방법에 관한 것이다. 더욱이, 본 개시내용은 또한 세포 성장 배지를 생산하기 위한 시스템에 관한 것이다.
인간은 균형 잡힌 식단에 대한 요구 사항을 충족하기 위해 다양한 식품 공급원에 의존한다. 일반적으로 균형 잡힌 인간 식단은 단백질, 탄수화물, 지방, 비타민 및 미네랄을 적절한 비율로 포함한다. 동물성 식품 공급원은 앞서 언급한 영양소의 대부분을 제공하지만 동물을 사육하는 데 넓은 면적의 토지, 식량 및 수자원이 소비되기 때문에 지속 가능한 솔루션이 아니다. 더욱이, 사육되는 동물은 소량의 유용한 생산물(동물의 고기, 혈청 등)을 얻기 위해 희생되므로 축산의 비윤리적인 측면이 형성된다. 게다가 육류 산업은 전 세계적으로 대기 이산화탄소(CO2)의 주요 생산자이다. 따라서, 적합한 세포 성장 배지를 사용하여 지속 가능한 동물성 단백질 생산, 보다 구체적으로 세포 배양 고기에 대한 필요성이 오랫동안 느껴져 왔다. 특히, 인간이 소비할 목적으로 세포를 효율적으로 배양하고 그에 따른 제품을 만드는 가장 중요한 비용 동인은 성장 배지(세포 성장 배지 및 성장 보충제를 포함)이며, 이는 총 비용의 최대 96%를 차지할 수 있다. 특히, 세포 성장 배지 및 성장 보충제는 지속 가능한 대규모 세포 배양 및 그 결과 얻어지는 생산물을 위한 제한 요소이다.
전통적인 성장 배지에는 도살장에서 소 태아로부터 수확한 상업적으로 이용 가능한 혈청이 포함되어 있다. 게다가 이 솔루션은 축산과 관련된 윤리적 및 환경적 염려를 배제하지 않는다. 더욱이, 이러한 시판되는 혈청 보충제는 가격이 비싸고 반드시 식품-등급일 필요는 없다. 따라서 혈청 보충제에 대한 저렴한 식품-등급 대안을 식별하는 것이 중요하다. 그러나 기술적 과제 중 하나는 지속 가능한 무혈청 세포 배양 배지를 제제화하는 것이다. 또 다른 과제는 일반적으로 식물 기반 성장 배지에 존재하지 않는 충분한 양의 철분과 비타민 B12를 함유하는 세포 성장 배지를 제공하는 것이다.
최근 세포 배양 기술의 발전으로 식품 단백질의 가수분해로부터 유래된 생리활성 펩타이드를 세포 촉진제로 적용할 수 있는 잠재적인 화합물로서 식별할 수 있는 길이 열렸다(Roeseler et al., 2017). 더욱이, 섬유질 단백질과 글리코사미노글리칸의 보충이 소의 일차 골격 근육 세포의 세포 성장을 개선하고(Rønning et al., 2013), 닭고기 부산물로부터의 생리활성 펩타이드(Lima et al., 2019)가 포도당 흡수를 개선시킨다는 것이 이전에 입증되었다. 또한 난각막은 활성 성분(탄수화물, 단백질, 및 펩타이드), 성장 인자 및 세포 성장과 생존을 지원하는 효소를 포함하는 항염증 특성을 지닌 또 다른 유망한 섬유질 물질이다(Ahmed et al., 2017; Vuong et al., 2017) ). 또한 Nofima는 닭 시체, 대구 등뼈, 난각막, 달걀 흰자 분말, 돼지 혈장 및 효모 추출물을 포함한 다양한 부산물에서 나온 가수분해물이 모두 맞춤형 무혈청 배지에 포함될 잠재성이 있음을 보여주었다(Andreassen et al., 2020).
과도기 단계에서 식품 산업의 부산물은 지속 가능한 무혈청 성장 배지의 성분으로 사용될 수 있다. 더욱이, 식품 단백질(예: 식물 단백질)의 가수분해로부터 유래된 생리활성 펩타이드는 세포 촉진제로 적용할 수 있는 잠재적인 화합물인 것으로 나타났다(Roeasler et al., 2017). 상업적으로 이용 가능한 가수분해물과 관련된 한 가지 문제는 그 구성을 표준화하는 것이 어렵다는 것이다. 따라서 육류 배양의 장기적인 목표는 농업과 전혀 무관한 단백질 공급원을 사용하는 것이다.
따라서, 전술한 논의에 비추어 볼 때, 가격이 저렴하고, 식품-등급 성분만을 함유하며, 세포 성장 및 분화 촉진에 효과적인 기존의 세포 성장 배지와 관련된 단점을 극복할 필요성이 존재한다.
요약
본 개시내용은 세포 성장 배지를 생산하는 방법을 제공하고자 한다. 본 개시내용은 또한 세포 성장 배지를 생산하기 위한 시스템을 제공하고자 한다. 본 개시내용은 세포 배양된 육류 생산을 위해 동물 기반 또는 대체 식물 기반 세포 성장 배지를 사용하는 기존 문제에 대한 해결책을 제공하고자 한다. 본 개시내용의 목적은 선행 기술에서 직면한 문제를 적어도 부분적으로 극복하는 해결책을 제공하는 것이다.
일 측면에서, 본 개시내용의 구체예는 세포 성장 배지를 생산하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 다음을 포함한다:
- 기체 발효에 의해 미생물 세포를 배양하여 바이오매스 슬러리를 얻는 단계;
- 고상으로부터 액상을 분리 및 제거함으로써 상기 바이오매스 슬러리를 농축하는 단계;
- 상기 농축된 바이오매스 슬러리를 고압 균질화로 균질화하는 단계로서, 여기서 미생물 세포는 적어도 부분적으로 분해되는 것인 단계;
- 상기 균질화된 바이오매스 슬러리를 하나 이상의 프로테아제를 첨가함으로써 처리하는 단계; 및
- 상기 처리된 바이오매스 슬러리를 가열하는 단계.
또 다른 측면에서, 본 개시내용의 구체예는 세포 성장 배지를 생산하기 위한 시스템을 제공하며, 상기 시스템은 다음을 포함한다:
- 바이오매스 슬러리를 얻기 위해 기체 발효에 의해 미생물 세포를 배양하기 위한 바이오반응기;
- 상기 바이오매스의 고상과 액상을 분리하기 위한 분리기;
- 상기 미생물 세포를 적어도 부분적으로 분해하기 위해 고압 균질화로 상기 바이오매스 슬러리를 균질화하기 위한 균질화 장치;
- 상기 바이오매스 슬러리를 하나 이상의 프로테아제를 첨가함으로써 처리하기 위한 반응 챔버; 및
- 상기 바이오매스 슬러리를 가열하기 위한 인큐베이터.
본 개시내용의 구체예는 선행 기술에서 전술한 문제점을 실질적으로 제거하거나 적어도 부분적으로 해결하고, 미생물 세포로부터 유래된 세포 성장 배지를 생산하는 효율적인 방법을 제공한다. 유익하게도, 앞서 언급한 세포 성장 배지는 세포 배양에 사용되는 소 태아 혈청(FBS)에 대한 지속 가능한 대안이다. 또한, 유리하게도 앞서 언급한 세포 성장 배지는 살아있는 미생물이 전기, 공기 및 물을 사용하여 단백질을 생산하는 발효와 유사한 과정을 통해 생성된 단백질이 풍부한 분말 또는 슬러리이다. 단백질 외에도, 앞서 언급한 세포 성장 배지는 자연적으로 철, 비타민 B, 기타 관련 미량 영양소 및 핵산을 성장 촉진 인자 역할을 하는 상당량으로 포함한다. 더욱이, 상기 언급된 세포 성장 배지는 농업과는 전혀 무관하며, 고기를 배양하는 성분으로서 사용될 수 있다.
본 개시내용의 추가적인 측면, 장점, 특징 및 목적은 도면 및 이어지는 첨부된 청구범위와 함께 해석되는 예시적인 구체예의 상세한 설명으로부터 명백해질 것이다.
본 개시내용의 특징은 첨부된 청구범위에 의해 정의된 본 개시의 범위를 벗어나지 않고 다양한 조합으로 결합될 수 있다는 것을 이해하여야 할 것이다.
예시적인 구체예에 대한 다음의 상세한 설명뿐만 아니라 위의 요약은 첨부된 도면과 함께 읽을 때 더 잘 이해된다. 본 개시내용을 예시할 목적으로, 본 개시내용의 예시적인 구성이 도면에 도시되어 있다. 그러나, 본 개시내용은 본 명세서에 개시된 특정 방법 및 수단에 제한되지 않는다. 더욱이, 통상의 기술자는 도면이 실제크기로 그려져 있지 않다는 것을 이해할 것이다. 가능하다면 유사한 요소는 동일한 번호로 표시되었다.
본 발명의 구체예는 단지 예시로서 다음의 도면을 참조하여 이제 설명될 것이다:
도 1은 본 개시내용의 구체예에 따라 세포 성장 배지를 생산하는 방법의 단계를 도시하는 흐름도이다. 그리고
도 2는 본 개시내용의 다양한 구체예에 따른 세포 성장 배지 생산 라인의 블록도이다.
도 3은 세포 성장 배지로 배양된 근육 세포를 묘사하는 그래프를 나타내며, 세포 대사 활성을 보여준다.
도 4는 대조 세포에 대해 표준화된 DNA를 도시하는 그래프를 나타낸다.
첨부된 도면에서 밑줄 친 숫자는 밑줄 친 숫자가 위치하는 항목 또는 밑줄 그 숫자가 인접한 항목을 나타내기 위해 채용되었다. 밑줄이 없는 숫자는 밑줄이 없는 숫자를 항목에 연결하는 선으로 식별되는 항목과 관련된다. 숫자에 밑줄이 없고 관련 화살표가 있는 경우 밑줄이 없는 숫자는 화살표가 가리키는 일반 항목을 식별하는 데 사용된다.
다음의 상세한 설명은 본 개시내용의 구체예 및 이들이 구현될 수 있는 방식을 예시한다. 본 개시내용을 수행하는 일부 모드가 개시되었지만, 통상의 기술자는 본 개시내용을 수행하거나 실시하기 위한 다른 구체예도 가능하다는 것을 인식할 것이다.
일 측면에서, 본 개시내용의 구체예는 세포 성장 배지를 생산하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 다음을 포함한다:
- 기체 발효에 의해 미생물 세포를 배양하여 바이오매스 슬러리를 얻는 단계;
- 고상으로부터 액상을 분리 및 제거함으로써 상기 바이오매스 슬러리를 농축하는 단계;
- 상기 농축된 바이오매스 슬러리를 고압 균질화로 균질화하는 단계로서, 여기서 미생물 세포는 적어도 부분적으로 분해되는 것인 단계;
- 상기 균질화된 바이오매스 슬러리를 하나 이상의 프로테아제를 첨가함으로써 처리하는 단계; 및
- 상기 처리된 바이오매스 슬러리를 가열하는 단계.
또 다른 측면에서, 본 개시내용의 구체예는 세포 성장 배지를 생산하기 위한 시스템을 제공하며, 상기 시스템은 다음을 포함한다:
- 바이오매스 슬러리를 얻기 위해 기체 발효에 의해 미생물 세포를 배양하기 위한 바이오반응기;
- 상기 바이오매스의 고상과 액상을 분리하기 위한 분리기;
- 상기 미생물 세포를 적어도 부분적으로 분해하기 위해 고압 균질화로 상기 바이오매스 슬러리를 균질화하기 위한 균질화 장치;
- 하나 이상의 프로테아제를 첨가함으로써 상기 바이오매스 슬러리를 처리하기 위한 반응 챔버; 및
- 상기 바이오매스 슬러리를 가열하기 위한 인큐베이터.
본 개시내용은 전술한 세포 성장 배지의 제조 방법을 제공한다. 또한 생산된 제품은 그 생산이 농업 및 축산업과 완전히 분리된 지속 가능한 세포 성장 배지이다. 상기 세포 성장 배지는 전형적으로 독점 미생물이 전기, 공기 및 물을 사용하여 성장하고 단백질을 키우는 발효와 유사한 과정을 통해 생성된 단일 세포 단백질 분말이다.
유익하게도, 최종 미생물 바이오매스는 식품-등급 프로테아제를 사용하여 펩타이드로 가수분해될 수 있는 건조 물질 내에 60% 이상의 단백질을 함유하고 있다. 추가로, 유리하게도, 다른 가수분해물, 특히 식물 기반 가수분해물과 비교할 때 상기 세포 성장 배지의 한 가지 장점은 이의 생산이 고도로 제어되고 자동화되어 각 가수분해 단계 동안 동일한 펩티드 및 아미노산을 생산할 수 있다는 것이다. 또한, 상기 세포 성장 배지는 자연적으로 철, 비타민 B, 기타 관련 미량 영양소 및 핵산을 모두 성장 촉진 인자로 작용하는 상당량으로 포함한다.
상기 방법으로 얻은 세포 성장 배지는 동물을 희생시킨 후 얻은 표준 동물 기반 혈청(예컨대 소 태아 혈청)에 비해 더욱 지속 가능하고 건강하며 잔인성이 없는 대안이라는 점을 이해할 것이다. 더욱이, 이러한 세포 성장 배지는 채식주의자 또는 비건으로 식별되는 광범위한 인구통계학적 소비자의 사용에 적합할 수 있다. 더욱이, 상기 세포 성장 배지의 생산 과정은 환경에 다량의 이산화탄소를 방출하는 동물 기반 혈청의 생산에 비해 지구 온난화 효과에 미미하게 기여한다.
본 개시내용 전반에 걸쳐, 본원에 사용된 용어 "세포 성장 배지"는 세포 성장에 필수적인 여러 영양분 및 성장 인자의 공급원으로서 정의된 처방을 지칭한다. 선택적으로, 세포 성장 배지는 그 성분으로서 세포 배양 배지에 첨가될 수 있다. 구체적으로, 세포 성장 배지는 미생물 바이오매스로부터 유래된 단세포 단백질 분말이다. 유익하게도 세포 성장 배지는 무동물 및 무식물 제품이다. 또한, 유익하게도 미생물 세포 성장 배지는 대부분 모든 유형의 세포 배양에 적합한다. 성장 배지는 일반적으로 다양한 아미노산, 비타민, 무기 미네랄, 지질, 핵산 유도체, 호르몬(예컨대 인슐린, 부신피질 호르몬, 스테로이드 등), 성장 인자(예컨대 표피 성장 인자, 섬유아세포 성장 인자 등), 세포 부착 인자(예컨대 라미닌, 피브로넥틴 등), 염, 탄수화물, 항생제 등등을 포함한다.
선택적으로, 미생물 세포는 단리된 박테리아 균주 VTT-E-193585 또는 이의 유도체를 포함한다. 상기 단리된 박테리아 균주 또는 이의 유도체는 일반적으로 그람-음성 박테리아(그람-염색 방법에 사용되는 크리스탈 바이올렛 염색을 유지하지 않음)이다. 상기 단리된 박테리아 균주 또는 이의 유도체는 유전적으로 안정하고 시간이 지남에 따라 최적 조건부터 스트레스가 많은 조건까지 광범위한 공정 조건에서 성장할 수 있다는 점을 이해할 것이다. 본원에 사용된 용어 "유전적으로 안정한"은 변화에 저항하고 여러 세대 또는 세포 분열, 이상적으로는 수백 내지 수천에 걸쳐 그 유전형을 유지하는 종 또는 균주/분리물의 특성을 의미한다. 선택적으로, 상기 단리된 박테리아 균주 또는 이의 유도체는 수소 기체를 에너지원으로 활용하고 이산화탄소를 탄소원으로 활용한다. 유익하게도, 상기 균주 또는 그 유도체는 단백질, 철 및 비타민 B12를 포함한다. 본 방법에서 단리된 박테리아 균주 VTT-E-193585 또는 이의 유도체를 포함하는 미생물 세포를 사용하면 단백질, 철 및 비타민 B12가 풍부한 세포 성장 배지를 얻을 수 있으므로 동물성 단백질 생산을 위해 세포 성장 배지에 상기 구성분을 첨가하기 위한 추가의 처리가 불필요하다.
상기 방법은 기체 발효에 의해 미생물 세포를 배양하여 바이오매스 슬러리를 얻는 단계를 포함한다. 상기 미생물 세포는 통상적으로 바이오반응기라고 불리는 특수 용기에서 배양된다. 선택적으로, 소량의 미생물 세포(즉, 접종원)를 원액으로부터 바이오반응기에 로딩하고 통제된 조건에서 배양한다. 상기 바이오반응기에는 일반적으로 미생물 세포의 성장에 적합한 공기, 물, 영양분, 성장 보조제, 빛, 최적 온도 조건 등이 공급된다. 이와 관련하여, 미생물 세포는 세포 성장 배지 내의 하나 이상의 영양분 및 성장 보충제를 탄소원, 질소원 및 에너지원으로 사용하여 세포 밀도가 높은 바이오매스를 생산한다. 특히, 바이오리케이터 외에, 미생물 세포는 통상의 기술자에게 공지된 임의의 종래의 공정을 통해 성장할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "바이오매스"는 샘플 내 살아있는 성분(즉, 박테리아)의 양의 정도를 의미한다. 특히, 상기 바이오매스는 전형적으로 액체상(예: 물)과 혼합된 고체상(즉, 박테리아 세포)을 포함하여 그에 의해 점성 바이오매스 슬러리를 생성한다. 선택적으로, 바이오매스 슬러리의 고체상에는 단백질, 탄수화물, 지방, 미네랄(예컨대 칼슘, 철), 비타민, 섬유질 등이 포함될 수 있다. 선택적으로, 바이오매스는 연속 재배 또는 회분식 배양에 의해 생산될 수 있다. 미생물은 더 짧은 번식 시간을 가지므로 빠르게 성장하여 높은 세포 밀도의 바이오매스를 생산할 수 있으며, 이는 예를 들어 식품 성분 분말과 같은 다양한 용도를 위해 이후에 수확될 수 있는 것이다.
본 명세서에 사용된 용어 "기체 발효"는 성장을 위해 미생물 세포에 의해 수소, 이산화탄소 및 일산화탄소와 같은 기체를 에너지 및 탄소원으로 사용하는 과정을 의미한다. 선택적으로, 기체 발효에 의한 재배를 위한 피드는 CO2, CH4, H2, O2, NH3, 미네랄 중에서 선택된 하나 이상을 포함한다. 더욱이 NH3의 첨가는 박테리아 세포를 위한 질소원을 제공하는 것이다. 암모늄, 인산염, 칼륨, 나트륨, 바나듐, 철, 황산염, 마그네슘, 칼슘, 몰리브덴, 망간, 붕소, 아연, 코발트, 셀레늄, 요오드, 구리 및/또는 니켈을 함유하는 미네랄과 같이 미네랄을 첨가하는 것은 박테리아 세포의 성장을 강화한다는 점을 이해할 것이다. 선택적으로, 상기 미네랄은 1g/L 미만의 염화물 염, 예를 들어 0.25g/L 미만의 염화물 염, 예를 들어 0.1g/L 미만의 염화물 염을 포함하고, 바람직하게는 염화물염을 포함하지 않는다.
또한, 고상으로부터 액상을 분리 및 제거하여 바이오매스 슬러리를 농축시킨다. 바이오매스 슬러리를 농축하는 것은 바이오매스 슬러리의 고체상으로부터 과잉의 액체상을 제거하는 것을 의미한다는 것으로 이해될 것이다. 특히, 바이오매스의 액상은 LPS 함유 내독소를 포함한 세포벽 구조의 가수분해된 성분을 포함한다. 고체상에서 액체상을 분리 및 제거하면 내독소가 감소된 농축된 바이오매스가 남게 된다. 선택적으로, 분리는 여과, 원심분리 중 적어도 하나로부터 선택된 분리 방법으로 수행된다. 상기 여과 기술은 전형적으로 반투막 위에 고체상을 유지하면서 액체상이 통과하도록 허용하는 반투막을 통해 액체상과 고체상을 분리한다. 원심분리는 일반적으로 크기, 모양, 밀도, 점도 또는 분리에 사용되는 로터의 속도에 따라 입자를 분리하는 기술이다. 원심분리는 일반적으로 고체상으로부터 액체상의 약 90-95%를 분리한다. 이 단계에서 바이오매스는 액상을 제거함으로써 농축되며, 분리 전 초기의 0.5~2% 건조 물질과 비교하여 약 5-30%의 건조 물질로 구성된다.
상기 방법은 농축된 미생물 바이오매스 슬러리를 고압 균질화로 균질화하는 단계를 추가로 포함하며, 여기서 상기 미생물 세포는 적어도 부분적으로 분해된다. 본 명세서에 사용된 용어 "균질화"는 미생물 세포벽의 물리적 파괴 수단을 의미한다. 일반적으로 균질화 기술은 유체 흐름, 입자-입자 상호 작용 및 압력 강하를 활용하여 세포 파괴를 촉진한다. 열처리와 함께 바이오매스 슬러리를 인큐베이션하는 것은 세포벽의 외막을 부분적으로 파괴하고, 바이오매스 슬러리를 균질화하면 세포벽을 더욱 파괴한다는 것으로 이해될 것이다. 부분적인 세포벽 가수분해로 인해, 단백질이 미생물 세포로부터 부분적으로 방출되어 바이오매스의 나머지 액체상으로 방출된다(즉, 분리 공정 후에)는 점을 이해할 것이다. 이 단계에서 균질화는 세포 내부로부터의 단백질 방출을 향상시켜 단백질이 효소적 가수분해에 더 많이 이용될 수 있도록 한다. 균질화는 단백질 방출을 향상시켜 단백질이 추가 처리 단계에서 더 나은 가용성을 갖도록 한다. 예를 들어, 부분적인 세포 용해는 세포 내부로부터 단백질 방출을 유도하고 세포 내부는 다음 단계에서 효소 가수분해에 접근할 수 있게 되어 프로테아제로 하는 처리를 더욱 효율적으로 만든다. 나아가 균질화 과정에서 내독소가 추가로 제거되어 내독소 반응이 10-1000배 낮은 최종 제품이 생성되도록 한다.
미생물 세포벽 파괴에 가장 일반적으로 사용되는 기술에는 고압 균질화(HPH)가 포함된다. 본 명세서에 사용된 "고압 균질화"라는 용어는 고상 및 액상을 포함하는 바이오매스와 같은 샘플의 흐름(분리 후 정화 공정)을, 샘플을 균질화 및/또는 샘플 내의 모든 구성 요소의 입자 크기를 줄이기 위해 샘플에 고압 또는 전단력의 임의의 조합과 같은 복수의 힘을 샘플에 가하는 균질화 장치(나중에 자세히 설명)로 실행하는 시스템을 통해 강제하는 물리적 또는 기계적 공정을 의미한다.
선택적으로 고압 균질화는 900bar 내지 2000bar의 압력에서 수행된다. 선택적으로 균질화 압력은 일반적으로 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800 또는 1900bar로부터 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 1900 또는 2000 bar까지일 수 있다. 선택적으로 고압 균질화는 원하는 균질화를 얻기 위해 1회, 2회 또는 3회 수행된다. 유익하게도, 상기 균질화 과정은 세포를 부분적으로 용해시키고 바이오매스의 가용성 단백질 함량을 증가시킨다.
균질화된 바이오매스 슬러리는 하나 이상의 프로테아제를 첨가하여 처리된다. 본 명세서에서 사용된 용어 "처리"는 구체적으로 농축된 바이오매스 슬러리의 효소적 처리를 의미하며, 보다 구체적으로는 효소적 가수분해를 의미한다. 효소적 가수분해는 물을 첨가하여 더 작은 펩타이드와 아미노산을 생성함으로써 효소로 하여금 더 큰 분자(예컨대 단백질 분자)의 결합 절단을 촉진하도록 하는 과정을 의미한다. 선택적으로, 바이오매스 슬러리를 하나 이상의 프로테아제를 첨가함으로써 처리하는 것은 30℃ 내지 75℃의 온도에서 수행된다. 바이오매스 슬러리 처리 온도는 일반적으로 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65 또는 70℃로부터 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70 또는 75℃까지일 수 있다. 처리의 효소적 가수분해 기간은 0.5시간 내지 16시간까지 지속될 수 있다. 상기 지속 시간은 일반적으로 0.5, 1, 2, 3, 5, 10 또는 15시간으로부터 1, 2, 3, 5, 10, 15 또는 16시간까지 지속될 수 있다. 일 예에서, 상기 바이오매스 슬러리는 pH 7.0에서 1-12시간의 범위인 시간 동안 50℃의 온도에서 처리된다.
가수분해는 일반적으로 하나 이상의 프로테아제를 사용하여 달성된다. 선택적으로, 상기 하나 이상의 프로테아제는 식품-등급의 프로테아제이다. 상기 프로테아제는 일반적으로 물 분자를 사용하여 단백질 분자 내의 펩티드 결합을 파괴한다. 단백질 분해적인 가수분해는 단백질의 기능적(예컨대 맛, 식감) 및 구조적(예컨대 용해도, 소화성, 단백질 분산성) 특성을 크게 향상시키는 것으로 이해될 것이다. 유익하게도, 바이오매스 슬러리의 단백질 분해적인 가수분해는 소의 일차 골격근 세포에 대한 바이오매스 슬러리의 성장 촉진 특성을 향상시킨다.
선택적으로, 상기 하나 이상의 프로테아제는 플레이버자임, 알칼라제, 뉴트라제, 파파인, 트립신, 펩신 중 적어도 하나로부터 선택된다. 알칼라제는 엔도펩티다제이고 플레이버자임은 엔도펩티다제와 엑소펩티다제의 혼합물이다. 엔도펩티다제는 일반적으로 폴리펩티드 말단에 위치한 말단 아미노산이 아닌 폴리펩티드 사슬 내에서 폴리펩티드를 절단한다. 조(crude) 형태의 바이오매스 슬러리는 불용성이지만, 알칼라제 및 플레이버자임 모두를 사용한 효소적 가수분해로 인해 단백질, 펩티드 및 아미노산을 함유하는 수용성 분획이 생성된다는 점을 이해할 것이다. 알칼라제 가수분해물(알칼라제를 사용하여 얻은 단백질 가수분해물)과 플레이버자임 가수분해물(플레이버자임을 사용하여 얻은 단백질 가수분해물)은 모두 세포 배양에 유익하다. 세포 배양물에 보충하면 알칼라제 가수분해물과 플레이버자임 가수분해물 모두 세포 생존력, 세포 증식 및 세포 수를 향상시킨다. 엔도펩티다제인 알칼라제는 엔도펩티다제와 엑소펩티다제의 혼합물인 플레이버자임과는 다른 분자량 분포를 갖는 가수분해물 혼합물을 제공한다. 플레이버자임을 사용하여 생산된 가수분해물은 동일한 원료의 알칼라제 분해에 비해 작은 펩타이드와 유리 아미노산의 더 많은 분획을 포함한다. 알칼라제를 사용하여 생산된 가수분해물에는 더 큰 펩타이드의 더 많은 분획이 포함되어 있다. 이 두 효소의 조합을 사용하여 작은 펩타이드를 더 높은 비율로 포함하는 가수분해물을 생성했다.
플레이버자임 및 알칼라제의 조합을 사용함으로써 가장 높은 수율과 가장 낮은 평균 분자량이 달성되었다. 다양한 프로테아제가 사용될 수 있지만, 단독으로 또는 조합하여 사용되는 플레이버자임 및 알칼라제로 단백질 슬러리를 가수분해하면 가용성 단백질, 아미노산 및 펩타이드 함량이 더 높은 물질이 생성된다. 알칼라제 및/또는 플레이버자임이 소 골격근 세포의 성장 배지에 보충되었을 때, 단백질 슬러리의 가수분해물은 세포 생존력, 세포 증식 및 세포 수를 보다 효율적으로 향상시켰다. 알칼라제와 플레이버자임을 함께 조합하면 가수분해물에 대해 더 나은 수율과 더 유리한 분자량(MW) 분포를 얻음으로써 시너지 효과가 나타났다. 선택적으로 플레이버자임과 알칼라제는 단독으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.
더욱이, 뉴트라아제는 온화한 가수분해를 제공하는 광범위한 스펙트럼의 엔도펩티다아제이다. 선택적으로, 중성효소는 고립되어 사용되거나 우수한 향미 이점을 위해 엑소펩티다제와 함께 사용될 수 있다. 파파인은 엑소- 및 엔도펩티다제 활성을 모두 나타낸다. 트립신은 엔도펩티다아제이다. 펩신은 일반적으로 pH 1.5-2.5 범위에서 활성을 갖는 산성 엔도펩티다제이다. 고압 균질화로 미생물 세포를 적어도 부분적으로 분해하기 때문에, 균질화 단계가 없는 가수분해에 비해 세포 생존율, 세포 증식 및 세포 수 증가가 더 높다.
세포를 배양하는 동안 혈청을 완전히 제거하는 것은 세포에 극적이고 가혹한 조건이라는 점을 이해할 것이다. 그러나 가수분해물(동물 기반 또는 식물 기반) 중 어느 것도 혈청(즉, 소 태아 혈청) 없이 세포 성장을 완전히 회복할 수 없다 할지라도, 조 추출물, 즉 비-가수분해된 것 중 바이오매스 슬러리의 최고 농도는 0.01 mg/ml이고 플레이버자임 및/또는 알칼라제를 사용한 단백질 가수분해물 0.1 mg/ml은 혈청을 사용하지 않은 대조군에 비해 세포 성장을 2배 크게 향상시킬 수 있다. 더욱이, 고농도의 바이오매스 슬러리 조추출물 및 단백질 가수분해물은 세포 배양에서 박테리아 감염을 초래할 수 있음이 이해될 것이다. 따라서 세포 배양에 보충할 때 바이오매스 슬러리 조추출물과 단백질 가수분해물의 농도를 결정하는 것이 결정적이다.
더욱이, 선택적으로, 상기 방법은 단백질 가수분해물의 분자량 분포 분석, 조 바이오매스 슬러리 및/또는 단백질 가수분해물에 대해 다양한 농도에서, 전형적으로는 0.0001 - 0.1mg/mL 범위에서 세포 배양물 내 혈청 대체, 세포 독성, 세포 생존력, 세포 증식 및 세포 형태학에 대한 분석을 포함한다.
플레이버자임 및 알칼라제를 단독으로 또는 조합하여 사용하는 단백질분해적 가수분해는 가용성 단백질, 아미노산 및 펩티드 함량이 높은 단백질 가수분해물(가수분해 생성물)을 생성한다는 점을 이해할 것이다. 소 골격근 세포의 성장 배지에 보충될 때, 단백질 가수분해물은 세포 생존력, 세포 증식 및 세포 수(농도 0.0001 - 0.1 mg/mL)를 향상시켰다. 나아가, 상업용 프로테아제(즉, 알칼라제 및 플레이버자임)에 의한 효소적 가수분해의 분자량 분포 프로파일로부터 플레이버자임 가수분해물은 알칼라제 가수분해물보다 낮은 분자량을 가지고 있었다. 더욱이, 상기 분자량 프로파일은 효소의 상이한 작용 방식과 일치한다.
선택적으로, 상기 방법은 하나 이상의 프로테아제를 첨가하여 바이오매스 슬러리를 처리하기 전에 바이오매스 슬러리의 pH를 4.0 내지 10으로 조정하는 단계를 추가로 포함한다. 바이오매스 슬러리의 pH는 4, 5, 6, 7, 8 또는 9에서 5, 6, 7, 8, 9 또는 10까지의 범위일 수 있다. 이와 관련하여, 상기 바이오매스 슬러리에 통상적인 pH 조절제(산 또는 염기)를 첨가하여 pH를 조절할 수 있다. 바이오매스 슬러리의 최적 pH는 바이오매스 슬러리를 처리하기 위한 하나 이상의 프로테아제의 활성을 유지하는 데 도움이 된다는 점을 이해할 것이다.
더욱이, 상기 방법은 처리된 바이오매스 슬러리를 가열하는 단계를 포함한다. 처리된 바이오매스 슬러리는 최적 온도에서 가열되어 바이오매스 슬러리의 효소 불활성화 및 살균(또는 저온살균)이 가능하게 한다. 가열은 바이오매스 슬러리 내 단백질 및 기타 원하는 영양분의 활성화에 안전한 온도에서 수행된다는 점을 이해할 것이다. 선택적으로, 바이오매스 슬러리 가열은 80℃ 내지 130℃의 온도에서 수행된다. 가열 온도는 일반적으로 80, 90, 100 또는 110℃에서 90, 100, 110, 120 또는 130℃까지일 수 있다. 가열 시간은 0.5분 내지 60분일 수 있다. 가열 지속 시간은 일반적으로 0.5, 1, 2, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30 또는 45분에서 1, 2, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 45분 또는 60분까지일 수 있다. 특히, 상기 가열 온도는 박테리아 병원체를 죽이기에 충분하다.
선택적으로, 상기 방법은 가열된 바이오매스 슬러리로부터 불용성 성분을 분리 및 제거하는 단계를 추가로 포함한다. 분리의 목적은 가열된 바이오매스 슬러리의 용해성 성분 중에서 불용성 성분을 제거하는 것이다. 상기 가용성 성분은 예를 들어 단백질, 펩티드, 아미노산, 비타민 및 미네랄을 포함할 수 있다. 상기 불용성 성분에는 예를 들어 세포 잔해가 포함될 수 있다. 분리는 예를 들어 원심 분리, 막 여과에 의해 수행될 수 있다. 원심분리로 얻은 상청액과 여과로 얻은 투과물은 용해성 성분을 포함하며 이는 성장 배지로 사용될 수 있다.
선택적으로, 상기 방법은 배양된 바이오매스 슬러리를 열처리하여 인큐베이션하는 단계를 추가로 포함한다. 본 명세서에서 사용된 용어 "인큐베이팅"은 선택된 시간 동안 선택된 온도에서 수행되는 열처리를 의미한다. 배양된 바이오매스 슬러리를 인큐베이트하면 지질다당류 및 핵산과 같은 잠재적 항영양소의 양이 감소한다. 더욱이, 열처리와 함께 인큐베이트하면 미생물 세포의 세포벽이 부분적으로 가수분해된다. 또한 세포벽 외막의 부분적인 가수분해로 인해 세포 내부에 더 쉽게 접근할 수 있을 뿐만 아니라 세포벽과 함께 내독소도 부분적으로 제거된다.
선택적으로, 배양된 바이오매스 슬러리를 열처리와 함께 인큐베이션하는 것은 55℃ 내지 80℃ 범위의 온도에서 10 내지 60분 동안 수행된다. 인큐베이션 중 온도는 예를 들어 55, 56, 57, 58, 59, 60, 65, 70 또는 75℃에서 56, 57, 58, 59, 60, 65, 70, 75 또는 80℃까지일 수 있다. 잠복기는 예를 들어 10, 15, 20, 25, 30, 35 또는 40분부터 20, 25, 30, 35, 40, 55 또는 60분까지일 수 있다.
선택적으로, 상기 방법은 가열된 바이오매스 슬러리를 분무 건조로 건조시키는 단계를 추가로 포함한다. 본 명세서에서 사용된 용어 "건조"는 원료, 예컨대 바이오매스 슬러리로부터 액체를 건조시키는 과정을 의미한다. 상기 분무 건조 공정에서는 뜨거운 기체(예컨대 질소 또는 산소)의 분무를 이용하여 바이오매스를 빠르게 건조시킨다. 분무 건조는 식품 및 의약품과 같이 열에 민감한 샘플을 건조하는 데 적합한다.
상기 건조된 바이오매스는 인큐베이션, 분리 및/또는 균질화되지 않은 샘플과 비교하여 인큐베이션, 분리 및 균질화 단계 후 감소된 수준의 내독소를 포함한다. 대안적으로, 예를 들어 건조 드럼과 같은 폐쇄 시스템에서 바이오매스를 회전시키면서 상대적으로 낮은 온도를 사용하여 건조를 달성할 수 있다.
바이오매스 슬러리 건조는 그로부터 유래된 건조 바이오매스의 쉽고 효과적인 저장 및 운반을 가능하게 한다는 점을 이해할 것이다. 또한, 바이오매스 슬러리를 건조하면 건조된 바이오매스가 잠재적인 감염(infestation)을 방지하고 그에 다라 사람이나 동물이 섭취하기에 부적합하다.
선택적으로, 상기 방법은 농축된 바이오매스 슬러리를 건조하여 단백질 분말을 얻는 단계를 추가로 포함한다. 상기 건조는 예를 들어 드럼 건조 또는 분무 건조에 의해 수행될 수 있다. 위에서 언급한 바와 같이, 건조된 바이오매스 또는 바이오매스 분말은 예를 들어 세포 배양과 같은 추가 적용을 위해 저장되거나 운송될 수 있다. 그러나 단백질 분말의 일부 적용에서는 여전히 단백질 분말을 물과 혼합하는 것이 필요할 수도 있다. 이때, 단백질 분말 5-20중량%를 멸균수 80-95중량%에 균일한 혼합물이 될 때까지 혼합한다. 선택적으로, 상기 단백질 분말은 고전단 혼합을 사용하여 물과 혼합된다. 고전단 혼합은 완전한 수화를 보장하고 혼합물의 임의의 덩어리를 분해한다는 점을 이해할 것이다.
가열되거나 건조된 바이오매스 슬러리로서 유래된 개시된 세포 성장 배지의 잠재적인 적용은 세포 배양된 육류 생산에 있다. 일 구체예에서, 상기 세포 성장 배지는 건조 단계 전(또는 단백질 분말 생산 전)에 수집된 바이오매스 슬러리(즉, 액체 스트림)로서 사용될 수 있다. 이와 관련하여, 상기 바이오매스 슬러리는 이 단계에서 가수분해 효소에 노출된다. 얻은 가수분해물은 불용성 성분(예컨대 세포 잔사)에서 분리되고 얻어진 수용성 성분(단백질 가수분해물, 비타민, 미네랄 등)을 함유한 액체는 그 용해도가 잘 유지된 상태로 분말로 건조되어 세포배양육 생산업체에 (판매 등의 방법으로) 제공된다.
또 다른 구체예에서, 상기 세포 성장 배지는 단백질 분말로 사용될 수 있으며 세포 배양육 생산 회사에 제공될 수 있다. 이 경우, 단백질 분말을 물과 혼합하여 분산된 형태의 바이오매스 슬러리를 형성한다. 이때, 단백질 분말 5-20중량%를 멸균수 80-95중량%에 균일한 혼합물이 될 때까지 혼합한다. 바이오매스 슬러리는 불용성 성분과 분리된 수용성 성분인 프로테아제로 처리되어 세포 배양에서 세포 성장 배지로 사용된다. 그러나, 단백질 분말과 물을 혼합하여 얻은 바이오매스 슬러리는 효과적으로 가수분해되지 않아 그에 의해 가수분해 수율이 저하될 수 있다.
또 다른 구체예에서, 세포 성장 배지 생산 회사와 세포 배양 육류 생산 회사는 한 장소에서 공존할 수 있고, 가수분해된 바이오매스 슬러리는 연속 공정으로 세포 배양 육류 생산에 직접 공급될 수 있다. 한 위치에 두 생산자가 공존하면 단백질 분말이 세포 성장 배지로 사용되기 전에 어쨋든 수화되어야 하므로 하나의 건조 단계를 제거할 수 있다는 점을 이해할 것이다.
본 개시내용은 또한 위에서 설명된 시스템에 관한 것이다. 위에 개시된 다양한 구체예 및 변형은 본 시스템에 약간의 변형을 가하여 적용된다.
바이오매스 슬러리의 액상과 고상의 분리는 산업 규모에서 널리 사용되는 원심 분리기나 막 여과 장치와 같은 분리기에서 수행될 수 있다. 원심분리기는 일반적으로 용액 속의 성분을 입자 크기에 따라 분리하는 원심분리 기술을 사용한다. 막 여과 장치는 반투막을 활용하여 용액의 고체상과 액체상을 분리하는 여과 기술을 기반으로 작동한다. 원심분리기는 여과와 비교하여 박테리아 세포를 농축하는데 바람직하다는 점을 이해할 것이다.
반응 챔버는 하나 이상의 프로테아제를 첨가하여 처리하기 위한 일정 부피의 바이오매스 슬러리를 담는 특수 용기이다. 상기 반응 챔버는 바이오매스 슬러리의 피드 및 하나 이상의 프로테아제의 피드를 연속적으로 또는 회분식으로 수용할 수 있다는 점을 이해할 것이다. 선택적으로, 상기 반응 챔버는 바이오매스 슬러리의 효소적 가수분해로 인해 발생하는 조건을 견디도록 설계된 것이다.
인큐베이터는 바이오매스 슬러리를 가열하는 용기이다. 특히, 배양기의 온도는 바이오매스 슬러리의 구성성분, 즉 세포, 효소 등에 따라 조절된다. 온도 외에도 인큐베이터에서는 예컨대 습도, 공기 등의 기타 최적 조건을 세포 성장에 최적인 수준으로 조절할 수 있다. 선택적으로 인큐베이터의 예로는 수조가 있다. 수조를 사용하면 바이오매스 슬러리가 열과 직접 접촉하는 것을 피하면서 가열이 보장된다는 점을 이해할 것이다. 선택적으로 인큐베이터의 온도는 80℃ 내지 120℃이다.
상기 시스템은 미생물 세포를 적어도 부분적으로 분해하기 위해 고압 균질화로 바이오매스 슬러리를 균질화하기 위한 균질화 장치를 추가로 포함한다. 균질화 장치는 재료를 파괴하거나 균질화하는 물리적 또는 기계적 방법을 사용한다. 일반적으로 사용되는 균질화 장치에는 막자사발과 막자, 블렌더, 비드 밀, 초음파 처리기, 로터-고정자 등이 포함된다. 고압 균질화(HPH)는 세포 파괴 효율을 높이기 위해 균질화 장치를 통과하는 적어도 1회, 예를 들어 1회, 2회 또는 3회의 통과를 포함한다. 선택적으로, 균질화 장치는 고압 균질화기이고, 여기서 고압 균질화기의 압력은 900bar 내지 2000bar이다. 고압 균질화기는 일반적으로 매우 높은 압력을 사용하여 세포 구조를 파괴한다. 선택적으로 균질화 장치는 액체 분쇄기이다. 액체 분쇄기는 일반적으로 전단력을 사용하여 세포 구조를 파괴한다.
선택적으로, 상기 시스템은 바이오매스 슬러리를 배양하기 위한 열 교환기를 추가로 포함한다. 열 교환기는 둘 이상의 유체 사이에 열을 전달하는 데 사용되는 시스템이다. 이와 관련하여, 열 교환기는 열 교환 유체가 서로 평행하게 또는 서로 반대 방향으로 각각 이동하도록 흐름 배열, 평행 흐름 또는 역류를 가질 수 있다. 통상적으로 열교환기는 산업 규모에서 널리 사용되며 통상의 기술자에게 잘 알려져 있다. 선택적으로, 열교환기는 탱크 열교환기, 관형 열교환기, 또는 판형 열교환기 중 적어도 하나로부터 선택된다.
선택적으로, 상기 시스템은 미생물 바이오매스 슬러리를 건조하기 위한 분무 건조기를 추가로 포함한다. 상기 분무 건조기는 뜨거운 기체를 사용하여 슬러리 물질을 빠르게 건조시킬 수 있다. 분무 건조는 전형적으로 열에 민감한 재료에 적합하다. 선택적으로, 분무 건조된 제품은 플레이크 또는 분말 형태로 추가로 밀링되거나 마무리될 수 있다. 대안적으로, 선택적으로 건조기는 드럼 건조기이다. 드럼 건조기는 바이오매스와 같은 슬러리 물질을 수용하고 상대적으로 낮은 온도에서 물질을 회전시켜 드럼 건조 제품의 시트를 생성하도록 구성된 회전형 대용량 용기이다.
선택적으로, 상기 하나 이상의 프로테아제는 플레이버자임, 알칼라제, 뉴트라제, 파파인, 트립신, 펩신 중 하나 이상으로부터 선택된다.
선택적으로, 상기 하나 이상의 프로테아제를 첨가하여 바이오매스 슬러리를 처리하기 위한 반응 챔버의 온도는 30℃ 내지 75℃이다.
선택적으로, 바이오반응기에서 기체 발효를 위한 피드는 CO2, CH4, H2, O2, NH3 중에서 선택된 적어도 하나 이상, 하나 이상의 미네랄을 포함한다.
선택적으로, 상기 시스템은 단리된 박테리아 균주 VTT-E-193585 또는 이의 유도체를 포함하는 미생물 세포를 추가로 포함한다.
실험 부분
본 개시내용의 단계에 따라 세포 성장 배지를 제조하였다(도 2). 분석 결과, 크기 배제 크로마토그래피(SEC)로 결정된 세포 성장 배지의 최고 수율(중량 기준)과 최저 평균 분자량은 알칼라제와 플레이버자임의 조합을 사용하여 얻은 것으로 나타났다(표 1). 플레이버자임 단독으로는 가장 낮은 수율을 보였다.
효소 수율 (%) Mw(g/mol)
샘플 1 2% 알칼라제, 2% 플레이버자임 40 482
샘플 2 4% 알칼라제 36 654
샘플 3 4% 플레이버자임 22 506
도면의 상세한 설명
도 1을 참조하면, 본 개시내용의 구체예에 따른 세포 성장 배지를 생산하는 방법의 단계를 예시하는 흐름도(100)가 도시되어 있다. 단계 (102)에서, 미생물 세포는 기체 발효에 의해 배양되어 바이오매스 슬러리를 얻는다. 단계 (104)에서는 고상으로부터 액상을 분리 및 제거하여 바이오매스 슬러리를 농축시킨다. 단계 (106)에서, 바이오매스 슬러리는 하나 이상의 프로테아제를 첨가하여 처리된다. 단계 (107)에서, 바이오매스 슬러리는 고압 균질화로 균질화된다. 단계 (108)에서, 바이오매스 슬러리가 가열된다.
단계 (102), (104), (106) 및 (108)은 단지 예시일 뿐이며, 하나 이상의 단계가 추가되거나, 하나 이상의 단계가 제거되거나, 하나 이상의 단계가 본 명세서에서의 청구범위의 범위를 벗어나지 않고 다른 순서로 제공되도록 하는 다른 대안도 제공될 수 있다.
도 2를 참조하면 본 개시내용의 다양한 구체예에 따른 세포 성장 배지 생산 라인(200)의 블록도가 도시되어 있다. 도시된 바와 같이, 세포 성장 배지 생산 라인(200)은 미생물 세포의 접종물이 세포 배양 배지 및 성장을 위한 최적 조건을 사용하여 바이오반응기 배양(202)에 적용되어 바이오매스 슬러리(고체상 및 액체상 (208)을 포함)를 형성하는 공정 A와 함께 개시된다. 상기 배양된 바이오매스는 열처리를 통해 인큐베이션(204)된다. 인큐베이션된 바이오매스는 농축된 바이오매스(210)를 생성하기 위하여 바이오매스 슬러리의 고체상으로부터 액체상(208)을 분리(206)함으로써 농축된다. 상기 농축된 바이오매스는 고압 균질화(212)를 거친 후 건조(214)되어 단백질 분말(216)을 생성한다. 이 단계에서, 공정 B에 도시된 바와 같이, 단백질 분말(216)은 공정 C에 도시된 바와 같이 재수화(226)되고 이어서 단백질 가수분해(220)를 거친다.
공정 C에 도시된 바와 같이, 단백질 가수분해(220)는 고압 균질화(212)로부터 또는 대안적으로 농축된 바이오매스로부터 직접 얻은 균질화된 바이오매스 슬러리에 대해 수행된다. 가수분해된 단백질은 멸균 또는 저온살균(222)을 거쳐 멸균 또는 저온살균된 가수분해물을 얻는다.
멸균 또는 저온살균(222) 다음에는 분리(224)가 이어지며, 여기서 수용성 성분(단백질, 펩타이드, 아미노산, 비타민, 미네랄 등)이 불용성 성분(세포 잔사 등)으로부터 분리되고 불용성 성분(226)을 제거하여 가수분해물 생성물을 얻고, 이는 세포 성장 배지로서 함께 배치된 세포 배양육 생산자(230)에게 제공된다. 공정 B의 다른 단계는 멸균 또는 저온살균된 가수분해물을 건조(228)로 회부하여 건조된 형태의 세포 성장 배지를 얻고, 이는 세포 성장 배지 생산라인(200)으로부터 동일 위치에 있거나 멀리 설치된 세포 배양육 생산자(230)에게 제공되는 것이다.
도 3에서는 소의 일차 골격근 세포를 조 바이오매스 슬러리, 알칼라제 및 플레이버자임 가수분해물을 보충하여 96시간 동안 배양하였다. 그래프는 발광 시 세포 대사 활성(아데노신 삼인산 양)을 보여준다. 데이터는 평균±SEM을 나타낸다(n=3개의 독립적인 세포 실험이 3중으로 시드됨). (별표는 유의미한 차이를 나타낸다, *<0.05, **<0.01, ***<0.001, ****p<0.0001. 약어: n.s. - 큰 차이는 없다).
도 4에서는 소의 일차 골격근 세포에 대해 조 바이오매스 슬러리, 알칼라제 또는 플레이버자임 가수분해물을 보충하여 96시간 동안 배양하고 세포의 DNA 함량을 분석하였다. 그래프는 대조(ctr) 세포에 대해 정규화된 DNA를 묘사한다. 데이터는 평균±SEM을 나타낸다(n=3개의 독립적인 세포 실험이 3중으로 시드됨). (별표는 유의미한 차이를 나타낸다. *<0.05, **<0.01, ***<0.001, ****p<0.0001. 약어: n.s. - 큰 차이는 없다).
첨부된 청구범위에 의해 정의된 본 개시내용의 범위를 벗어나지 않고 전술한 본 개시내용의 구체예에 대한 수정이 가능하다. 본 개시내용을 설명하고 청구하기 위해 사용된 "포함하는", "함유하는", "통합하는", "갖는", "인"와 같은 표현은 비배타적인 방식, 즉 존재한다고 명시적으로 설명되지는 않은 품목, 구성분 또는 구성요소를 허용하는 방식으로 해석되도록 의도된 것이다. 단수에 대한 언급은 또한 복수에 관련된 것으로 해석되어야 한다.
VTT Culture Collection VTTE-193585 20190611

Claims (20)

  1. 다음을 포함하는, 세포 성장 배지를 생산하는 방법:
    - 기체 발효에 의해 미생물 세포를 배양하여 바이오매스 슬러리를 얻는 단계;
    - 고상으로부터 액상을 분리 및 제거함으로써 상기 바이오매스 슬러리를 농축하는 단계;
    - 상기 농축된 바이오매스 슬러리를 고압 균질화로 균질화하는 단계로서, 여기서 미생물 세포는 적어도 부분적으로 분해되는 것인 단계;
    - 상기 균질화된 바이오매스 슬러리를 하나 이상의 프로테아제를 첨가함으로써 처리하는 단계; 및
    - 상기 처리된 바이오매스 슬러리를 가열하는 단계.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 가열된 바이오매스 슬러리로부터 불용성 성분을 분리 및 제거하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
  3. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서, 상기 배양된 바이오매스 슬러리를 열처리로 인큐베이션(incubation)하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
  4. 청구항 1 내지 청구항 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 가열된 바이오매스 슬러리를 건조시키는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
  5. 청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 프로테아제가 플레이버자임, 알칼라제, 뉴트라제, 파파인, 트립신, 펩신 중 하나 이상인 것으로 선택되는 것인 방법.
  6. 청구항 1 내지 청구항 5 중 어느 한 항에 있어서, 상기 바이오매스 슬러리를 가열하는 단계는 80℃ 내지 130℃의 온도에서 수행되는 것인 방법.
  7. 청구항 1 내지 청구항 6 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 프로테아제를 첨가함으로써 상기 바이오매스 슬러리를 처리하기 전에 바이오매스 슬러리의 pH를 4.0 내지 10으로 조정하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
  8. 청구항 1 내지 청구항 7 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 프로테아제를 첨가함으로써 바이오매스 슬러리를 처리하는 단계가 30℃ 내지 75℃의 온도에서 수행되는 것인 방법.
  9. 청구항 1 내지 청구항 8 중 어느 한 항에 있어서,
    - 상기 농축된 바이오매스 슬러리를 건조하여 단백질 분말을 얻는 단계;
    - 상기 건조된 단백질 분말을 물과 혼합하여 바이오매스 슬러리를 얻는 단계
    를 추가로 포함하는 것인 방법.
  10. 청구항 1 내지 청구항 9 중 어느 한 항에 있어서, 기체 발효에 의해 배양하기 위한 피드(feed)는 CO2, CH4, H2, O2, NH3, 미네랄로부터 선택된 것 중 하나 이상을 포함하는 것인 방법.
  11. 청구항 1 내지 청구항 10 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물 세포가 단리된 박테리아 균주 VTT-E-193585 또는 이의 유도체를 포함하는 것인 방법.
  12. 다음을 포함하는, 세포 성장 배지를 생산하기 위한 시스템:
    - 바이오매스 슬러리를 얻기 위해 기체 발효에 의해 미생물 세포를 배양하기 위한 바이오반응기;
    - 상기 바이오매스의 고상과 액상을 분리하기 위한 분리기;
    - 상기 미생물 세포를 적어도 부분적으로 분해하기 위해 고압 균질화로 상기 바이오매스 슬러리를 균질화하기 위한 균질화 장치;
    - 하나 이상의 프로테아제를 첨가함으로써 상기 바이오매스 슬러리를 처리하기 위한 반응 챔버; 및
    - 상기 바이오매스 슬러리를 가열하기 위한 인큐베이터.
  13. 청구항 12에 있어서, 상기 가열된 바이오매스 슬러리로부터 불용성 성분을 분리하기 위한 분리기를 추가로 포함하는 것인 시스템.
  14. 청구항 12 또는 13에 있어서, 상기 바이오매스 슬러리를 인큐베이션하기 위한 열교환기를 추가로 포함하는 것인 시스템.
  15. 청구항 12 내지 청구항 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 가열된 바이오매스 슬러리를 건조하기 위한 분무 건조기를 추가로 포함하는 것인 시스템.
  16. 청구항 12 내지 청구항 15 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 프로테아제는 플레이버자임, 알칼라제, 뉴트라제, 파파인, 트립신, 펩신 중 하나 이상인 것으로 선택되는 것인 시스템.
  17. 청구항 12 내지 청구항 16 중 어느 한 항에 있어서, 상기 바이오매스 슬러리를 하나 이상의 프로테아제를 첨가함으로써 처리하기 위한 반응 챔버의 온도는 30℃ 내지 75℃인 것인 시스템.
  18. 청구항 12 내지 청구항 17 중 어느 한 항에 있어서, 상기 바이오반응기에서 기체 발효를 위한 피드는 CO2, CH4, H2, O2, NH3, 적어도 하나의 미네랄로부터 선택된 하나 이상을 포함하는 것인 시스템.
  19. 청구항 12 내지 청구항 18 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물 세포는 단리된 박테리아 균주 VTT-E-193585 또는 이의 유도체를 포함하는 것인 시스템.
  20. 청구항 1 내지 청구항 11 중 어느 한 항에 따른 방법으로 얻은 세포 성장 배지.
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Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2069406A4 (en) * 2006-09-01 2012-03-28 Ra Energy Corp HIGHLY DEVELOPED BIORAFFINATION PROCESS
WO2009020389A1 (en) * 2007-08-03 2009-02-12 Campina Nederland Holding B.V. Culture medium for eukaryotic cells
WO2013133715A1 (en) * 2012-03-08 2013-09-12 Friesland Brands B.V. Culture medium for eukaryotic cells
CN104593318B (zh) * 2013-10-31 2018-05-04 中国食品发酵工业研究院 一种用于细胞培养基的玉米活性肽添加剂
US20190352676A1 (en) * 2018-05-21 2019-11-21 Jupeng Bio, Inc. Process for Obtaining Protein-Rich Nutrient Supplements from Bacterial Fermentation Process
AU2020348683A1 (en) * 2019-09-16 2022-04-28 Kiverdi, Inc. Microbial protein hydrolysate compositions and methods of making same

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