KR20190010054A - 항균 활성을 갖는 스타필로코커스 갈리나럼 균주 및 이의 항균 용도 - Google Patents
항균 활성을 갖는 스타필로코커스 갈리나럼 균주 및 이의 항균 용도 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 항균 활성을 갖는 스타필로코커스 갈리나럼 균주 및 이의 항균 용도에 관한 것으로, 보다 구체적으로 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003 균주(기탁번호: KACC 92162P), 상기 균주 또는 그 배양물 등을 포함하는 생균제, 상기 균주 또는 그 배양물 등을 포함하는 항균용 조성물, 상기 균주로부터 항균물질을 생산하는 방법, 상기 균주 등을 사용한 유해균 제거 또는 활성 억제 방법 및 유해균 감염 질환 예방, 완화 또는 치료 방법에 관한 것이다.
본 발명의 균주는 항균 활성, 특히 항생제 내성의 황색포도상구균에 대해서도 우구한 항균 활성을 보여, 이를 이용하여 각종 농축산물의 생산 및 유통과정의 오염으로 의한 농작물 손실을 줄일 수 있으며, 항생제 내성 미생물의 효과적인 제어가 가능하다.
본 발명의 균주는 항균 활성, 특히 항생제 내성의 황색포도상구균에 대해서도 우구한 항균 활성을 보여, 이를 이용하여 각종 농축산물의 생산 및 유통과정의 오염으로 의한 농작물 손실을 줄일 수 있으며, 항생제 내성 미생물의 효과적인 제어가 가능하다.
Description
본 발명은 유해균의 생장 억제용 신규 균주 및 이의 용도에 관한 것이며, 특히 항생제 내성 황색포도상구균 등의 식중독균에 대한 생장 억제 활성을 가진 신규 균주, 상기 균주 등을 포함하는 항균용 조성물, 상기 균주로부터 항균물질을 제조하는 방법 및 상기 균주를 이용한 유해균 억제 방법에 관한 것이다.
병원성세균 중 현재 전 세계적으로 가장 문제되고 있는 황색포도상구균(Staphylococcus aureus)은 전체 인구의 약 30%에서 검출되는 그람양성구균으로 병원 내 감염증을 유발하는 병원체로 널리 알려져 있다. 상기 유해균은 일차적으로 피부와 연부조직에 감염을 일으켜 농피증(pyoderma)의 원인이 되고, 골수염, 심내막염, 패혈증과 균혈증 등 생명을 위협하는 중한 전신 감염증을 유발할 수 있다. 페니실린, 메티실린 등 포도상구균 항균제는 그 효과가 우수하여 지난 오랫동안 감염증의 주요 치료약제로 사용되어 왔으나, 1961년 영국에서 메티실린에 내성을 보이는 균주(methicillin-resistant Staphylococcus aureus: MRSA)가 처음 보고된 이후 전 세계적으로 항생제 내성 황색포도상구균이 지속적으로 증가하고 있으며, 우리나라에서도 항생제의 무분별한 오남용으로 인한 내성 균주 출현은 특히 문제가 심각하다. 예를 들어, 메티실린 내성률은 50% 내외로 매우 높으며, 대한병원 감염관리학회가 최근 조사한 결과에 따르면 대부분의 대학 병원과 종합병원에서 분리되는 MRSA 균주는 약 75%에 이른다. 이러한 다양한 항생제에 내성을 갖는 병원성 세균의 출현으로 질병 치료의 어려움과 내성균의 확산으로 2차적인 사회 경제적 손실 등 또 다른 문제점이 대두되고 있다.
한편, 상기 황색포도상구균(Staphylococcus aureus) 이외에, 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes), 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) 등이 식중독을 일으킬 수 있다. 식중독(Food poisoning)은 경구를 통한 병원체의 장관 내 감염에 의하여 구토, 설사와 같은 증상과 장내 균총의 변화를 나타나게 한다. 특히, 리스테리아 모노사이토제네스는 육류, 어패류, 치즈, 아이스크림, 냉동식품 등 대부분의 식품을 오염시키며 임산부, 신생아, 노약자에게 유산, 패혈증, 수막염, 식중독을 일으키는 치명적인 병원균이다. 이러한 리스테리아 모노사이토제네스는 고염분, 고당분, 건조 등 삼투압 스트레스를 받을 경우 세포 내에 삼투보호물질인 osmolyte를 축적함으로써 세포내 팽압을 유지하여 증식할 수 있으며, 또 저온(4℃)에서도 증식이 가능하며 열처리 공정에서 생존할 수 있어 식품 위생학적인 측면에서 관심이 집중되고 있다.
한편, 식중독 미생물의 증식을 억제하는 보존제로 화학제제가 상업적으로 사용되고 있으나 근래 소비자의 건강지향적 욕구의 증대와 안정성의 문제로 인해 합성 보존제의 기피 현상이 두드러지고 있다. 이러한 문제점에 대처하기 위해서 인체에 무해한 항생제 대체 물질의 개발에 관심이 집중되고 있다. 특히, 항생제 내성 유해균을 효과적으로 억제할 필요성이 매우 높다. 이러한 항생제 대체물질로는 생균제(probiotics), 항균물질(bacterioncin), 산성화제(acidifer), 면역조절 및 증강 물질, 복합효소제, 기능성 천연추출물 등이 있으나, 이중 장내미생물의 균형을 개선하여 숙주동물에게 유익한 작용을 하는 생균제 및 항균물질이 각광을 받고 있다.
생균제(probiotics)는 사람 또는 동물에서 장내 미생물의 균형을 개선시켜 숙주에게 유익한 작용을 하는 미생물 및 성분으로 정의되고 있으며, 생균제로 사용되고 있는 미생물로는 유산균, 고초균, 바실러스, 효모 등이 있다. 숙주에게 도움을 주기 위하여 생균제로서 갖추어야할 조건으로는 숙주에 대한 안전성, 내산성 및 내담즙산성을 보유하여 장내에서 생존할 수 있는 능력, 장내에 정착할 수 있는 능력, 항균물질을 생성하여 병원성 세균을 억제하는 능력, 면역활성 효능, 제조과정에서의 손쉬운 대량생산 및 유통기간 내에서의 생존성 등이 있으며, 추가적으로 가축용 생균제의 경우에는 성장률 및 사료효율 개선, 소화율 개선으로 인한 영양소 흡수의 용이, 그리고 축산 환경의 악취개선 효과 등이 요구되고 있다.
항균물질(bacterioncin)은 세포 외로 분비되는 단백질 또는 펩타이드계 항균물질로서 생산균주와 근연관계에 있는 미생물을 죽이거나 생육을 억제하는 물질이라고 알려져 있다. 현재, 산업적으로 실용화되고 있는 유일한 항균물질인 니신(nisin)은 약 50개국에서 가공치즈, 야채, 과일의 통조림, 발효유 제품 등에 식품보존제로서 사용되고 있다. 이러한 항균물질은 소화기계의 여러 단백질 분해효소에 의해 분해되므로 인체에 무해하고 잔류성이 없는 장점이 있어 일반적으로 인체에 안정하다는 인식에 따라, 최근 천연의 항생제 또는 식품보존제로서 활용하기 위한 다양한 연구가 활발히 진행되고 있다.
이에 바실러스 세레우스 증식 억제능을 갖는 바실러스 리케니포미스 SCK 121057 및 이를 포함하는 장류(특허문헌 1), 우수한 항균성을 가지며, 광범위의 pH 안정성 및 열 안정성을 나타내는 항균물질을 생산하는 락토바실러스 사케이 P3-1(특허문헌 2), 바실러스 시리우스 및 리스테리아 모노사이토제네스에 높은 항균 활성을 갖는 바실러스 테퀄엔시스 HD 15(특허문헌 3) 및 스타필로코커스 파스트리 RSP-1 (특허문헌 4) 등이 알려져 있다.
이렇듯 인체에 무해한 천연 항균활성 물질의 개발에 관심이 집중되고 있고, 특히 항생제 내성 유해균을 효과적으로 억제할 필요성은 매우 높다.
본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 유해균, 특히 식중독균, 더 나아가 항생제 내성 유해균의 생장을 효과적이고 환경 친화적인 방법으로 억제할 수 있는 신규 균주 및 이러한 균주를 이용해 농축산물, 식품 등에서 유해균의 생장을 억제하는 방법을 제공하는 것이다.
상기 상술한 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003 균주(기탁번호: KACC 92162P)를 제공한다.
본 발명에 따른 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003 균주는 서열번호 1로 표시되는 염기서열의 16S rRNA를 가질 수 있다.
본 발명의 일 태양에 따르면, 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003 균주(기탁번호: KACC 92162P), 상기 균주의 배양물 및 상기 균주가 생산하는 항균물질 중 어느 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 생균제를 제공한다.
본 발명에 따른 생균제는 항생제 내성 균주에 대하여 항균 활성을 가질 수 있다.
본 발명의 일 태양에 따르면, 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003 균주(기탁번호: KACC 92162P), 상기 균주의 배양물 및 상기 균주가 생산하는 항균물질 중 어느 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 항균용 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 항균용 조성물은 항생제 내성 균주에 대하여 항균 활성을 가질 수 있다.
본 발명에 따른 항균용 조성물은 약학 조성물, 식품 조성물, 식품 첨가제 조성물, 사료 조성물, 사료 첨가제 조성물, 화장료 조성물 또는 의약외품 조성물일 수 있다.
본 발명의 일 태양에 따르면, 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003 균주(기탁번호: KACC 92162P)를 배양하는 단계를 포함하는 항균물질 생산 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 항균물질 생산 방법은, 본 발명의 균주를 배양하는 단계에서 수득한 배양물을 원심분리하는 단계, 상기 원심분리 이후 수득한 상청액을 여과하는 단계, 및 상기 상청액을 여과하는 단계에서 수득한 여과액을 농축하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 일 태양에 따르면, 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003 균주(기탁번호: KACC 92162P), 상기 균주의 배양물 및 상기 균주가 생산하는 항균물질을 세포 외에 처리하는 것을 특징으로 하는 유해균 제거 또는 활성 억제 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 유해균 제거 또는 활성 억제 방법은 항생제 내성 균주에 적용될 수 있다.
본 발명의 일 태양에 따르면, 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003 균주(기탁번호: KACC 92162P), 상기 균주의 배양물 및 상기 균주가 생산하는 항균물질 중 선택된 어느 하나 이상을 사람 이외의 동물에 투여하는 것을 특징으로 하는 유해균 감염 질환 예방, 완화 또는 치료 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 유해균 감염 질환 예방, 완화 또는 치료 방법은 항생제 내성 균주 감염 질환에 적용될 수 있다.
본 발명은 식중독균 등의 유해균, 특히 항생제 내성 황색포도상구균의 생장 억제 활성이 뛰어난 신규 균주인 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003 균주(기탁번호: KACC 92162P), 상기 균주의 배양물 및 상기 균주가 생산하는 항균물질을 제공하고, 상기 균주의 배양물을 포함하는 항균용 조성물 및 생균제, 이를 사용한 유해균 억제 방법을 제공한다. 본 발명에 따른 특정 균주를 이용하여 농축산물의 생산 및 유통과정의 오염으로 의한 농작물 손실을 줄일 수 있으며, 항생제 내성 미생물의 효과적인 제어가 가능하다.
도 1은 본 발명의 균주가 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus)에 대하여 갖는 항균 활성을 확인한 사진이다.
도 2는 본 발명의 균주에 대하여 기존에 알려진 항균물질 유전자를 가지고 있는지 여부를 확인한 PCR 실험 결과이다.
도 3은 본 발명에 따른 실시예 3의 열 안정성을 확인한 결과이다.
도 4는 본 발명에 따른 실시예 3의 pH 안정성을 확인한 결과이다.
도 5는 본 발명에 따른 실시예 3의 용매 안정성을 확인한 결과이다. 좌측은 1시간 처리, 우측은 24 시간 처리 결과임.
도 2는 본 발명의 균주에 대하여 기존에 알려진 항균물질 유전자를 가지고 있는지 여부를 확인한 PCR 실험 결과이다.
도 3은 본 발명에 따른 실시예 3의 열 안정성을 확인한 결과이다.
도 4는 본 발명에 따른 실시예 3의 pH 안정성을 확인한 결과이다.
도 5는 본 발명에 따른 실시예 3의 용매 안정성을 확인한 결과이다. 좌측은 1시간 처리, 우측은 24 시간 처리 결과임.
상기 상술한 목적을 달성하기 위한 본 발명은 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003 균주(기탁번호: KACC 92162P), 상기 균주 또는 그 배양물 등을 포함하는 생균제, 상기 균주 또는 그 배양물 등을 포함하는 항균용 조성물, 상기 균주로부터 항균물질을 생산하는 방법, 상기 균주를 사용한 유해균 제거 또는 활성 억제 방법 및 유해균 감염 질환 예방, 완화 또는 치료 방법임을 특징으로 한다. 이하 도면을 참조하여 본 발명을 구체적으로 설명한다.
본 발명은 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003 균주(기탁번호: KACC 92162P)를 제공한다.
본 발명자들은 농산물에서 분리한 259여 Staphylococcus 균들 중에서 항생제 내성 황색포도상구균에 대해서도 항균력을 가지는 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003를 선발하였으며, 또한 상기 선발된 균주에 기존에 보고된 항균물질 생산 유전자가 없음을 PCR(polymerase chain reaction)을 이용하여 확인하였다.
보다 구체적으로, 본 발명에 따른 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003 균주는 서열번호 1로 표시되는 염기서열의 16S rRNA를 가질 수 있다.
본 발명의 일 태양에 따르면, 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003 균주(기탁번호: KACC 92162P), 상기 균주의 배양물 및 상기 균주가 생산하는 항균물질 중 어느 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 생균제를 제공한다.
본 발명의 일 태양에 따르면, 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003 균주(기탁번호: KACC 92162P), 상기 균주의 배양물, 및 상기 균주가 생산하는 항균물질 중 어느 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 항균용 조성물을 제공한다.
본 명세서에서 “배양물”은 균주를 배지에 접종하고 일정시간 배양하여 얻은 결과물로서, 본 발명에 따른 균주를 적합한 액체 배지에서 배양한 배양액 자체(조 배양액), 상기 배양액을 여과 또는 원심분리하여 균주를 제거한 여액(여과액 또는 원심분리한 상등액), 상기 배양액을 초음파 처리하거나 상기 배양액에 용해효소(lysozyme)를 처리하여 수득한 세포 파쇄액, 상기 배양액, 여액, 파쇄액을 추출한 추출액, 상기 배양액, 여액, 파쇄액, 추출액 등을 농축한 농축액 및 이들의 건조물 등을 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 명세서에서 용어 "농축액"은 상기 배양액을 농축한 것을 의미한다.
본 명세서에서 용어 "추출액"은 상기 배양액 또는 그의 농축액로부터 추출한 것을 의미하며, 본 발명의 항균 효과를 나타낼 수 있는 추출물인 한, 이에 제한되지는 않고, 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들 조정제물 또는 정제물, 이를 분획한 분획물을 모두 포함할 수 있다.
본 명세서에서 용어 "건조물"은 상기 배양액, 그의 농축액, 그의 추출액을 건조한 것을 의미한다. 건조방법은 통풍건조, 자연건조, 분무건조 및 동결건조가 가능하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
따라서, 본 발명에 따른 생균제 또는 항균용 조성물은 상술한 균주 그 자체 또는 그의 배양물을 함유할 수 있고, 나아가 적합한 부형제 또는 담체를 추가로 포함할 수도 있다.
본 명세서에서 용어“생균제”는 인체나 동물의 건강을 증진시키기 위하여 고안된 살아있는 미생물 제제이고, 이는 독자적으로 섭취 또는 투여되거나 의약품, 식품 및 사료 또는 식이 첨가제 등에 포함되어 사용될 수 있다.
본 명세서에서 용어 "항균"은 특정 농도에서 미생물의 성장 또는 생존을 감소, 방지, 억제, 또는 제거하는 능력을 의미한다. 항균용 조성물이란 항미생물제를 총칭하는 의미인 항생제와 같은 의미일 수 있고, 항균제, 살균제, 방부제, 보존제 또는 제균제와 같은 의미일 수 있으며, 바람직하게는 그람양성균, 그람음성균, 진균 (효모 및 곰팡이)으로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상의 미생물의 발육과 생활 기능을 저지 또는 억제할 수 있는 물질 즉, 항세균 및 항진균 효력이 있는 물질을 의미한다.
본 발명에 따른 항균용 조성물은 약학 조성물, 식품 조성물, 식품 첨가제 조성물, 사료 조성물, 사료 첨가제 조성물, 화장료 조성물 또는 의약외품 조성물일 수 있다. 이 경우 본 발명의 균주, 그 배양물 및 상기 균주가 생산하는 향균물질 중 어느 하나 이상을 유효성분으로 포함한다.
본 발명에 따른 항균용 조성물은 농약, 의약, 화장품, 식품, 식품 첨가제, 사료, 사료 첨가제, 생활용품 등에서 항균, 살균, 소독, 방부 등의 목적을 달성하기 위해 광범위하게 사용될 수 있다. 구체적으로, 농업에 있어서는 항균, 살균, 소독의 목적으로, 의약에 있어서는 항생제나 오염방지제와 같은 목적으로, 식품에 있어서는 방부나 항균목적으로, 화장품이나 생활용품에 있어서는 비듬억제용, 무좀방지용, 겨드랑이 채취억제용, 항여드름용 등 미생물과 직접 연관된 제품에 사용되거나 청소용 세정제나 식기세척용 세정제 등에 방부나 항균 또는 살균목적으로 사용되어 질 수 있으며, 이러한 목적으로만 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 약학 조성물은 상술한 유효성분 이외에 약학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용하여 제조될 수 있으며, 상기 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등을 사용할 수 있다. 상기 약학 조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 약제학적 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다.
상기 약학 조성물의 제제 형태는 과립제, 산제, 정제, 피복정, 캡슐제, 좌제, 액제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 점적제 또는 주사 가능한 액제 등이 될 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 캡슐제의 형태로의 제제화를 위해, 유효 성분은 에탄올, 글리세롤, 물 등과 같은 경구, 무독성의 약학적으로 허용 가능한 불활성 담체와 결합될 수 있다. 또한, 원하거나 필요한 경우, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 발색제 또한 혼합물로 포함될 수 있다. 적합한 결합제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 젤라틴, 글루코스 또는 베타-락토오스와 같은 천연 당, 옥수수 감미제, 아카시아, 트래커캔스 또는 소듐올레이트와 같은 천연 및 합성 검, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드 등을 포함한다. 붕해제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토니트, 잔탄 검 등을 포함한다. 액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용 가능한 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물은 또한 식품 조성물일 수 있는데, 이러한 식품 조성물은 상술한 유효성분을 함유하는 것 외에 통상의 식품 조성물과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 본 발명이 적용될 수 있는 상기 식품의 예로는 특별한 제한은 없으며, 육류, 소세지, 빵, 쵸컬릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함하는 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 식품, 특히 건강식품을 모두 포함한다. 본 발명에 따른 조성물을 함유하는 건강식품으로는 상기 균주, 이의 배양물, 또는 이로부터 분리된 항균물질을 유효성분으로 하는 차, 젤리, 즙, 엑기스, 음료 등의 유해균 생장 억제를 목적으로 하는 민간요법제를 들 수 있다.
본 발명의 조성물은 또한 식품 첨가제 조성물일 수 있다. 본 발명에 따른 조성물을 식품 첨가제로 사용할 경우, 상술한 유효 성분 각각을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 본 발명의 식품은 통상의 식품와 같이 여러 가지 향미제, 감미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토오스, 슈크로오스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올이 있다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 외의 본 발명의 식품에는 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다.
본 발명의 조성물은 또한 사료 첨가제 조성물일 수 있다. 본 발명에 따른 조성물을 사료 첨가제로 사용할 경우, 상술한 유효 성분 각각을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다.본 발명의 사료첨가제는 식물 또는 동물 사료에 첨가할 수 있다. 본 발명의 사료 첨가제는 20 내지 90% 고농축액이거나 분말 또는 과립형태일 수 있다. 상기 사료 첨가제는 구연산, 후말산, 아디픽산, 젖산, 사과산 등의 유기산이나 인산나트륨, 인산칼륨, 산성피로인산염, 폴리인산염(중합인산염) 등의 인산염이나 폴리페놀, 카테킨(catechin),리 추출물(rosemary extract), 비타민 C, 녹차 추출물, 감초 추출물, 키토산, 탄닌산, 피틴산 등의 천연 항산화제 중 어느 하나 또는 하나 이상을 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 사료 첨가제 및 이를 포함하는 사료는 보조성분으로 아미노산, 무기염류, 비타민, 항생물질, 항균물질, 항산화, 항곰팡이 효소, 살아있는 미생물 제제 등과 같은 각종보조제가 곡물, 예를 들면 분쇄 또는 파쇄된 밀, 귀리, 보리, 옥수수 및 쌀; 식물성 단백질 사료, 예를 들면 평지, 콩 및 해바라기를 주성분으로 하는 것; 동물성 단백질 사료, 예를 들면 혈분, 육분, 골분 및 생선분; 당분 및 유제품, 예를 들면 각종 분유 및 유장 분말로 이루어지는 건조 성분, 건조 첨가제를 모두 혼합한 후, 액체 성분과, 가열 후에 액체가 되는 성분, 즉, 지질, 예를 들면 가열에 의해 임의로 액화시킨 동물성 지방 및 식물성 지방 등과 같은 주성분 이외에 영양 보충제, 소화 및 흡수향상제, 성장촉진제, 질병예방제 등과 같은 물질과 함께 사용될 수 있다. 상기 사료 첨가제는 단독으로 식용 담체 중에서 다른 사료 첨가제와 조합되어 투여될 수 있다. 또한, 상기 사료 첨가제는 탑 드레싱으로서 또는 이들을 사료에 직접 혼합하거나 또는 사료와 별도로, 별도의 경구 제형으로, 주사 또는 경피로 또는 다른 성분과 조합하여 쉽게 투여할 수 있다.
또한, 본 발명은 화장료 조성물일 수 있다. 화장료 조성물로 사용 시, 화장료의 제형에 맞게 물질을 더 첨가할 수 있다. 이에 한정되는 것은 아니나 예를 들어, 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있고, 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있으며, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다. 또한 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되는데, 바람직하게는 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있으며, 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 조성물은 화장료 조성물로 이용되어 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 바디로션, 바디크림, 바디오일, 바디에센스, 메이크업 베이스, 파운데이션, 염모제, 샴푸, 린스 또는 바디 세정제 등으로 제형화 될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 조성물은 또한 외약외품 조성물일 수 있다. 상기 "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 치료, 경감, 처치 또는 예방할 목적을 사용되는 섬유, 고무제품 또는 이와 유사한 것, 인체에 대한 작용이 약하거나 인체에 직접 작용하지 아니하며, 기구 또는 기계가 아닌 것과 이와 유사한 것, 감염형 예방을 위하여 살균, 살충 및 이와 유사한 용도로 사용되는 제제 중 하나에 해당하는 물품으로서, 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용하는 물품 중 기구, 기계 또는 장치가 아닌 것 및 사람이나 동물의 구조와 기능에 약리학적 영향을 줄 목적으로 사용하는 물품 중 기구, 기계 또는 장치가 아닌 것을 제외한 물품을 의미할 수 있다. 또한 상기 의약외품은 피부외용제 및 개인위생용품을 포함할 수 있다. 바람직하게는 소독청결제, 샤워폼, 가그린, 물티슈, 세제비누, 핸드워시, 또는 연고제일 수 있으나 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 일 태양에 따르면, 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003 균주(기탁번호: KACC 92162P), 그 배양물 및 상기 균주가 생산하는 항균물질, 및 상기 중 어느 하나 이상을 포함하는 항균용 조성물의 다양한 유해균에 대한 항균 용도를 제공한다. 상기 항균 용도는 본 발명의 균주가 항균 활성을 발휘하는 유해균이라면 제한되지 않고 적용될 수 있다.
본 발명의 균주, 그 배양물 및 상기 균주가 생산하는 항균물질, 및 상기 중 어느 하나 이상을 포함하는 항균용 조성물은 항생제 내성 균주에 대하여 항균 활성을 가질 수 있다.
상기 항생제 내성 균주는 반코마이신(Vancomycin), 페니실린(Penicillin), 메티실린(Methicillin), 세팔로신(Cephalothin), 에리스로마이신(Erythromycin), 노플로삭신(Norfloxacin), 옥사실린(Oxacillin), 겐타마이신(Gentamicin), 클로람페니콜(Chloramphenicol), 설폰아마이드(Sulfonamides), 스트렙토마이신(Streptomycin), 카바페넴(carbapenem), 및 테트라사이클린(Tetracyclin)과 같은 항생제에 대한 내성을 가진 균주일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
보다 구체적으로, 상기 유해균은 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 스타필로코커스 자일로서스(Staphylococcus xylosus), 스타필로코커스 와르네리(Staphylococcus warneri), 스타필로코커스 비털리너스(Staphylococcus vitulinus), 스타필로코커스 로덴티엄(Staphylococcus rodentium), 스타필로코커스 사프로파이티커스(Staphylococcus saprophyticus), 스타필로코커스 파스테우리(Staphylococcus pasteuri), 스타필로코커스 나팔렌시스(Staphylococcus napalensis), 스타필로코커스 러그더넨시스(Staphylococcus lugdunensis), 스타필로코커스 렌터스(Staphylococcus lentus), 스타필로코커스 클로시이(Staphylococcus kloosii), 스타필로코커스 하이커스(Staphylococcus hyicus), 스타필로코커스 호미니스(Staphylococcus hominis), 스타필로코커스 해몰라이티커스(Staphylococcus haemolyticus), 스타필로코커스 에쿼럼(Staphylococcus equorum), 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis), 스타필로코커스 델피니(Staphylococcus delphini), 스타필로코커스 코흐니이(Staphylococcus cohnii), 스타필로코커스 크롬제네스(Staphylococcus chromgenes), 스타필로코커스 카르노서스(Staphylococcus carnosus), 스타필로코커스 카피티스(Staphylococcus capitis), 스타필로코커스 아우리컬라리스(Staphylococcus auricularis) 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 태양에 따르면, 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003 균주(기탁번호: KACC 92162P)를 배양하는 단계를 포함하는 항균물질 생산 방법을 제공한다.
본 발명의 균주를 배양하는 단계에서 사용되는 배지는 상기 균주의 성장을 돕고 항균 활성을 높게 유지시킬 수 있는 배지라면 제한 없이 사용할 수 있다. 따라서, LB 배지, NB 배지, BHI 배지, KB(King's B) 또는 TSB 배지로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상의 배지에서 배양할 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 상기 균주는 바람직하게는 TSB 배지에서 배양될 수 있고, 보다 바람직하게는 상기 TSB 배지는 카제인의 췌장 소화물(pancreatic digest of casein), 대두의 효소 소화물(enzymatic digest of soya been), 염화나트륨(sodium chloride), 인산수소이칼륨(di-potassium hydrogen phosphate) 및 포도당(glucose)을 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 균주의 배양 온도 및 배양 시간은 상기 균주의 성장을 돕고 항균 활성을 높게 유지시킬 수 있는 온도 및 시간 내에서 수행될 수 있다. 따라서 상기 배양은 pH 5.0 ~ 7.0에서 48시간 동안 배양할 수 있으며, 보다 바람직하게는 pH 5.7 ~ 7.0에서 16시간씩 2회 차로 나누어 배양할 수 있다.
본 발명의 항균물질 생산 방법은, 본 발명의 균주를 배양하는 단계에서 수득한 배양물을 여과과정, 농축과정, 추출과정 및 건조과정 중 어느 하나 이상의 과정으로 처리하는 단계를 추가로 더 포함할 수 있다. 일례로, 상기 배양물을 원심분리하는 단계, 상기에서 수득한 상청액을 여과하는 단계, 및 상기에서 수득한 여과액을 농축하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
상기 여과과정, 농축과정, 추출과정 및 건조과정은 통상의 기술자가 미생물 배양물에 사용할 수 있는 통상적인 방법이 모두 적용될 수 있다. 따라서, 통상적으로 사용되는 필터여과, 막여과, 한외여과, 원심분리, 가열농축, 동결건조, 파쇄, 분쇄, 용매추출 및 열수추출 등이 단독 또는 조합으로 사용될 수 있다.
상기 항균물질의 제조방법의 상기 여과 또는 추출과정은 상기 배양물에서 불순물을 제거하고 나아가 항균 활성 물질을 분리하는 과정일 수 있다. 상기에서 '분리'는 충분히 정제된 해당 화합물을 수득하는 정제 단계를 포함하는 공정을 말한다.
본 발명의 일 태양에 따르면, 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003 균주(기탁번호: KACC 92162P), 상기 균주의 배양물 및 상기 균주가 생산하는 항균물질 중 어느 하나 이상을 항균제 조성물의 제조에 사용하는 용도를 제공한다.
구체적으로, 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003 균주(기탁번호: KACC 92162P), 상기 균주의 배양물 및 상기 균주가 생산하는 항균물질 중 어느 하나 이상을 유효성분으로 사용하여 생균제 또는 항균용 조성물을 제조할 수 있다. 상기 생균제 및 항균용 조성물은 상술한 바와 같다.
본 발명의 일 태양에 따르면, 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003 균주(기탁번호: KACC 92162P), 상기 균주의 배양물 및 상기 균주가 생산하는 항균물질을 처리하는 것을 특징으로 하는 유해균 억제 방법을 제공한다.
구체적으로, 본 발명은 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003 균주(기탁번호: KACC 92162P), 상기 균주의 배양물 및 상기 균주가 생산하는 항균물질 중 선택된 어느 하나 이상을 세포 외 처리할 수 있다.
구체적으로, 상기 유해균 제거 또는 활성 억제 방법은 항생제 내성 균주에 적용될 수 있다.
본 발명의 일 태양에 따르면, 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003 균주(기탁번호: KACC 92162P), 상기 균주의 배양물 및 상기 균주가 생산하는 항균물질 중 선택된 어느 하나 이상을 개체에 투여하는 것을 특징으로 하는 유해균 감염 질환 예방, 완화 또는 치료 방법을 제공한다.
구체적으로, 본 발명은 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003 균주(기탁번호: KACC 92162P), 상기 균주의 배양물 및 상기 균주가 생산하는 항균물질 중 선택된 어느 하나 이상을 사람 이외의 동물에 투여할 수 있다.
구체적으로, 상기 유해균 감염 질환 예방, 완화 또는 치료 방법은 항생제 내성 균주 감염 질환에 적용될 수 있다.
본 명세서에서 용어 "예방"이란, 본 발명에 따른 미생물 감염 질환의 예방 또는 치료용 조성물을 개체에 투여하여 유해균 감염 질환의 발병을 억제하거나 지연시키는 모든 행위를 의미할 수 있다.
본 명세서에서 용어 "치료"란, 본 발명의 상기 조성물을 미생물 감염 질환 발병 의심 개체에 투여하여 미생물 감염 질환의 증세가 호전되도록 하거나 이롭게 되도록 하는 모든 행위를 의미할 수 있다.
본 명세서에서 용어 "완화"는 치료되는 상태와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미할 수 있다.
본 명세서에서 용어 "개체"란, 미생물 감염 질환이 발병되었거나 발병할 가능성이 있는 인간을 포함한 모든 동물을 의미할 수 있다.
본 발명의 균주, 그 배양물 및 상기 균주가 생산하는 항균물질 중 어느 하나 이상을 유해균에 감염된 부분에 직접 처리 또는 투여하거나 상술한 적절한 형태의 생균제 또는 항균용 조성물로 제조하여 처리 또는 투여할 수 있다.
상기 유해균 감염 질환은 식중독, 피부진균증, 질염, 설사, 구토, 장염, 위장관염, 변비, 복통, 복부팽만, 콜레라, 리스테리아증, 봉와직염, 요로감염증, 수막염, 복막염, 방광염, 림프관염, 표저, 중이염, 호흡기 질환, 폐렴, 화농성 염증, 또는 패혈증일 수 있다.
본 발명의 항균용 조성물의 투여량은 투여 대상에서 유해 미생물을 사멸시키는 효과를 발휘하기 위해 요구되는 정도의 양을 의미하는데, 제형의 종류 및 투여 대상의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 경로, 투여 시간 및 기간을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있다. 가축 또는 어류에 사용하는 경우는 수의학에서 허용하는 범위 내에서 제제화하고 그에 따라 투여경로를 정할 수 있다
이하, 실시 예를 통해서 본 발명을 보다 상세히 설명하기로 한다. 하지만, 이들은 본 발명을 보다 상세하게 설명하기 위한 것일 뿐 본 발명의 권리범위가 이에 한정되는 것은 아니다.
[실시예 1] 미생물의 선별 및 동정
시장의 농산물, 병원 내부의 손잡이 등으로부터 총 259 개의 Staphylococcus 균주를 수집한 후, 항생제 내성 황색포도상구균이 자라는 고체 배지에 수집된 균주의 배양액을 여과하여 처리한 후 생장 억제환을 확인하는 방법으로 항생제 내성 황색포도상구균에 대해 가장 우수한 항균 활성을 보이는 균주를 선별하였다.(도 1 참조)
상기 선별된 균주의 16S rDNA 염기서열에 기초한 분자계통분류학적 분석, 기타 생화학 분석 등을 통해 해당 균주가 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum)임을 확인하고 이 균주를 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003으로 명명하였으며, 2017년 01월 02일자로 유전자원정보센터에 기탁하여 기탁번호 KACC 92162P를 부여받았다.
[실시예 2] 선정된 미생물의 항균물질 분석
본 발명의 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003이 기존에 보고된 항균물질(박테리오신) 생산 유전자를 가지고 있는지 여부를 PCR을 이용하여 확인하였다. 하기 표 1은 다양한 스타필로코커스 속 균들에 존재하는 것으로 알려진 스타필로코신(Staphylococcin) 생산 유전자들의 PCR primer 서열이다.
| 유전자 | 프라이머 | 서열 | 온도 | 크기 (bp) |
관련 유전자 | 생산 균주 |
| (°C) | ||||||
| epiA | E159F | ATGGAAGCAGTAAAAGAAAAAAA | 51 | 159bp | Epidermin structural gene | Staphylococcus epidermidis |
| E159R | TTAACAACAATAACTGTTAAAA | 42 | ||||
| pepA | P183F | ATGAAAAATAACAAAAATTTAT | 43 | 183bp | Pep5 structural gene | Staphylococcus epidermidis |
| P183R | CTATTTACATCCGTTTTTTCCTT | 51 | ||||
| eciA | E170F | ATGGAAAACAAAAAAGATTTA | 46 | 170bp | Epicidin 280 structural gene | Staphylococcus epidermidis |
| E170R | TATTGACAATCACTTTTTTTAC | 44 | ||||
| elkA | K71 | ATGAATAACTCATTATTC | 49 | 171bp | Epilancin K7 structural gene | Staphylococcus epidermidis |
| K72 | ATGGAAAACAAAAAAG | 50 | ||||
| aucA | A101F | CGCTAAATATGGCAAAAAAGC | 54 | 101bp | Aureocin A53 structural gene | Staphylcoccus aureus |
| A101R | TTTGCCATACCCATTCAAGAG | 54 | ||||
| aurABCD | A441F | CCATATAAACCTGCGCCACTA | 54 | 441bp | Aureocin A70 structural gene | Staphylcoccus aureus |
| A441R | GAAATTAGCTATCAAAGCTGG | 48 | ||||
| nukA | N174F | ATGGAAAATTCTAAAGTTATGAA | 47 | 174bp | Nukacin ISK-1 structural gene | Staphylcoccus warneri,Staphylcoccuss imulans |
| N174R | TTATGAACAACAAGTAAATACAAA | 46 | ||||
| nukM | N185F2 | GGTGTAACGGAGTTACAGGAC | 61 | 185bp | Nukacin ISK-1 modificationenzyme gene | Staphylcoccus warneri,Staphylcoccuss imulans |
| N185R2 | TCCCATGACGCCATGACATAG | 61 | ||||
| edcA | edcA-F | CTATAATACTATTGAAAAGGGGCA | 58 | 150bp | Epidermicin NI01 structual gene | Staphylococcus epidermidis |
| edcA-R | CAAAACTTTGACCGGCGTTA | 56 | ||||
| bacCH91 | ch91-F | GATTAGTGAAAATAAATAGTAAT | 50 | 399bp | BacCH-91structural gene | Staphylcoccus aureus |
| ch91-R | CATTTGTAAGCACCTCAC | 51 | ||||
| aclA | aclA-F | AGGTTTAGGCATTGGGACTG | 58 | 154bp | Aureocyclicin 4185 structual gene | Staphylcoccus aureus |
| aclA-R | TCCACCTTCTTTTAAAGCTTGTTT | 58 | ||||
| sodA | Staph154F | GAACAATGGGGTTCTTTAGA | 53 | 154bp | Superoxide dismutase gene | Staphylococcus species |
| Staph154R | GTTTTACCTTCAGTAATTGG | 53 |
확인 결과 본 발명의 균주는 기존에 보고된 항균물질 생산 유전자를 가지고 있지 않았으며, 스타필로코신 생산 유전자를 클로닝하고 서열을 분석한 결과 본 발명의 균주의 항균물질 생산 유전자는 기존의 스타필로코신 생산 유전자와는 상이한 서열을 가짐을 확인할 수 있었다.(도 2 참조)
[실시예 3] 본 발명의 균주에서 항균물질의 분리 농축
15㎖ 코니컬 튜브에 트립틱 소이 브로스(Tryptic soy broth, TSB) 3㎖를 넣고, 본 발명의 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003의 콜로니 한 개를 취하여 접종한 후 16시간 동안 배양하였다. 1차 배양 후 새로운 50㎖ 코니컬 튜브에 트립틱 소이 브로스 15㎖를 넣은 후 1차 배양액을 15㎖의 1/100인 150㎕를 취하여 16시간 동안 배양하였다.
상기에서 얻은 배양액을 10,000g에서 20분 동안 원심분리를 수행하여 균체를 제거한 후, 0.22㎛ 필터로 여과를 수행하였다. 상기에서 여과된 상층액을 3 KDa 초미세여과를 수행하여 (4,000rpm) 최종 20배로 농축하였다.
[실험예 1] 선정된 미생물의 항균 스펙트럼 조사
항생제 다중 내성을 보이는 총 18 종의 스타필로코커스 아우레우스( Staphylococcus aureus) 및 25 종의 코아귤라아제 음성 스타필로코시(Coagulase-Negative Staphylococci) 균에 대하여 상기 선정된 본 발명의 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum)의 항균 활성을 구체적으로 측정하였다.
| 균주 | S. gallinarum R0003 (본 발명) |
S. gallinarum MR043 |
S. gallinarum MR047 |
| Staphylococcus aureus R0001 | + | + | + |
| Staphylococcus aureus R-5 | + | + | - |
| Staphylococcus aureus R-6 | + | + | + |
| Staphylococcus aureus R-8 | + | + | + |
| Staphylococcus aureus K-9 | + | - | - |
| Staphylococcus aureus SS-10 | + | + | + |
| Staphylococcus aureus SS-25 | + | + | + |
| Staphylococcus aureus Newman | + | - | - |
| Staphylococcus aureus RN4220 | + | + | - |
| Staphylococcus aureus USA300 | + | + | + |
| Staphylococcus aureus KCTC1916 | + | + | + |
| Staphylococcus aureus ATCC25923 | + | + | + |
| Staphylococcus aureus CCARM3504 | + | + | + |
| Staphylococcus aureus CCARM3792 | + | + | + |
| Staphylococcus aureus CCARM3103 | + | - | - |
| Staphylococcus aureus CCARM3489 | + | + | + |
| Staphylococcus aureus CCARM3869 | + | + | - |
| Staphylococcus aureus CCARM3A052 | + | + | - |
| Staphylococcus auricularis KACC13252 | + | + | - |
| Staphylococcus capitis KACC13242 | + | + | - |
| Staphylococcus capitis subsp. urealyticus KACC13172 | + | + | - |
| Staphylococcus carnosus KACC13250 | + | + | - |
| Staphylococcus chromogenes KACC13248 | + | + | - |
| Staphylococcus cohnii KACC13237 | + | - | - |
| Staphylococcus cohnii subsp. urealyticus KACC13173 | + | - | + |
| Staphylococcus delphini KACC13258 | + | + | + |
| Staphylococcus epidermidis KACC13234 | + | + | + |
| Staphylococcus equorum KACC15974 | + | + | - |
| Staphylococcus equorum subsp. equorum KACC13255 | + | + | - |
| Staphylococcus gallinarum KACC13253 | + | + | - |
| Staphylococcus haemolyticus KACC13238 | + | + | + |
| Staphylococcus hominis KACC13712 | + | + | + |
| Staphylococcus hyicus KACC13249 | + | + | + |
| Staphylococcus kloosii KACC13256 | + | + | - |
| Staphylococcus lentus KACC16174 | + | + | - |
| Staphylococcus lugdunensis KACC11270 | + | + | - |
| Staphylococcus nepalensis KACC16177 | + | + | - |
| Staphylococcus pasteuri KACC13185 | + | + | + |
| Staphylococcus saprophyticus KACC13235 | + | + | - |
| Staphylococcus sciuri subsp. rodentium KACC13217 | + | - | + |
| Staphylococcus vitulinus KACC13211 | + | - | - |
| Staphylococcus warneri KACC13240 | + | + | - |
| Staphylococcus xylosus KACC16180 | + | + | - |
실험 결과, 본원발명과 대비되는 다른 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum)인 스타필로코커스 갈리나럼 MR043 및 MR047 모두 항균 활성을 갖지 않는 균주인 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) K-9, 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) Newman, 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) CCARM3103, 스타필로코커스 코흐니(Staphylococcus cohnii) KACC13237, 스타필로코커스 비툴리누스(Staphylococcus vitulinus) KACC13211에 대해서도 항균 활성을 보여 가장 넓은 항균 스펙트럼을 보유하는 것을 확인하였다.
[실험예 2] 안정성 실험
상기 실시예 3에서 얻은 배양액에 대하여 여러 온도 조건, pH 조건 및 다양한 유기 용매 조건에서 안정성 실험을 진행하였다.
상기 배양액을 40℃, 60℃, 80℃, 100℃에서 30분간 열처리한 결과를 도 3에 도시하였다. 실험 결과 100℃에서 30분간 처리에서도 항균 활성을 유지하여 열에 매우 안정한 것을 알 수 있었다.
상기 배양액을 pH 2, pH 4, pH 5, pH 8 및 pH 10에서 1시간 동안 처리한 결과를 도 4에 도시하였다. 실험 결과 pH 2 내지 10까지 비교적 폭넓은 범위에서 활성을 나타내었다.
상기 배양액을 에탄올(EtOH), 이소프로판올(IPA), 아세토니트릴(ACN)을 첨가한 하고 1시간, 24시간 경과한 결과를 도 5에 도시하였다. 실험 결과 다양한 용매를 가하더라도 항균 활성이 떨어지지 않아 안정한 것을 알 수 있었다.
이상에서, 출원인은 본 발명의 바람직한 실시 예들을 설명하였지만, 이와 같은 실시예들은 본 발명의 기술적 사상을 구현하는 일 실시예일 뿐이며 본 발명의 기술적 사상을 구현하는 한 어떠한 변경예 또는 수정예도 본 발명의 범위에 속하는 것으로 해석되어야 한다.
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<221> rRNA
<222> (1)..(1464)
<223> 16S rRNA of Staphylococcus gallinarum R0003
<400> 1
acgctggcgg cgtgcctaat acatgcaagt cgagcgaaca gataaggagc ttgctccttt 60
gacgttagcg gcggacgggt gagtaacacg tgggtaacct acctataaga ctggaataac 120
tccgggaaac cggggctaat gccggataac atatagaacc gcatggttct atagtgaaag 180
atggttttgc tatcacttat agatggaccc gcgccgtatt agctagttgg taaggtaatg 240
gcttaccaag gcgacgatac gtagccgacc tgagagggtg atcggccaca ctggaactga 300
gacacggtcc agactcctac gggaggcagc agtagggaat cttccgcaat gggcgaaagc 360
ctgacggagc aacgccgcgt gagtgatgaa gggtttcggc tcgtaaaact ctgttattag 420
ggaagaacat atgtgtaagt aactgtgcac atcttgacgg tacctaatca gaaagccacg 480
gctaactacg tgccagcagc cgcggtaata cgtaggtggc aagcgttatc cggaattatt 540
gggcgtaaag cgcgcgtagg cggtttctta agtctgatgt gaaagcccac ggctcaaccg 600
tggagggtca ttggaaactg ggaaacttga gtgcagaaga ggaaagtgga attccatgtg 660
tagcggtgaa atgcgcagag atatggagga acaccagtgg cgaaggcgac tttctggtct 720
gtaactgacg ctgatgtgcg aaagcgtggg gatcaaacag gattagatac cctggtagtc 780
cacgccgtaa acgatgagtg ctaagtgtta gggggtttcc gccccttagt gctgcagcta 840
acgcattaag cactccgcct ggggagtacg accgcaaggt tgaaactcaa aggaattgac 900
ggggacccgc acaagcggtg gagcatgtgg tttaattcga agcaacgcga agaaccttac 960
caaatcttga catcctttga ccactctaga gatagagctt tccccttcgg gggacaaagt 1020
gacaggtggt gcatggttgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgcaa 1080
cgagcgcaac ccttaagctt agttgccatc attaagttgg gcactctagg ttgactgccg 1140
gtgacaaacc ggaggaaggt ggggatgacg tcaaatcatc atgcccctta tgatttgggc 1200
tacacacgtg ctacaatgga caatacaaag ggcagctaaa ccgcgaggtc atgcaaatcc 1260
cataaagttg ttctcagttc ggattgtagt ctgcaactcg actacatgaa gctggaatcg 1320
ctagtaatcg tagatcagca tgctacggtg aatacgttcc cgggtcttgt acacaccgcc 1380
cgtcacacca cgagagtttg taacacccga agccggtgga gtaaccattt atggagctag 1440
ccgtcgaagg tgggacaaat gatt 1464
Claims (13)
- 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003 균주(기탁번호: KACC 92162P).
- 제1항에 있어서,
상기 균주는 서열번호 1로 표시되는 염기서열의 16S rRNA를 갖는 것을 특징으로 하는 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003 균주(기탁번호: KACC 92162P).
- 제1항에 따른 균주, 상기 균주의 배양물 및 상기 균주가 생산하는 항균물질 중에서 선택된 어느 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 생균제.
- 제3항에 있어서,
상기 생균제는 항생제 내성 균주에 대하여 항균 활성을 가지는 것을 특징으로 하는 생균제.
- 제1항에 따른 균주, 상기 균주의 배양물 및 상기 균주가 생산하는 항균물질 중에서 선택된 어느 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 항균용 조성물.
- 제5항에 있어서,
상기 항균용 조성물은 항생제 내성 균주에 대하여 항균 활성을 가지는 것을 특징으로 하는 항균용 조성물.
- 제6항에 있어서, 상기 항균용 조성물은 약학 조성물, 식품 조성물, 식품 첨가제 조성물, 사료 조성물, 사료 첨가제 조성물, 화장료 조성물 또는 의약외품 조성물인 것을 특징으로 하는 항균용 조성물.
- 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003 균주(기탁번호: KACC 92162P)를 배양하는 단계를 포함하는 항균물질 생산 방법.
- 제8항에 있어서,
상기 균주를 배양하는 단계에서 수득한 배양물을 원심분리하는 단계, 상기 원심분리 이후 수득한 상청액을 여과하는 단계, 및 상기 상청액을 여과하는 단계에서 수득한 여과액을 농축하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 항균물질 생산 방법.
- 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003 균주(기탁번호: KACC 92162P), 상기 균주의 배양물 및 상기 균주가 생산하는 항균물질 중에서 선택된 어느 하나 이상을 세포 외에 처리하는 것을 특징으로 하는 유해균 제거 또는 활성 억제 방법.
- 제10항에 있어서,
상기 유해균은 항생제 내성 균주인 것을 특징으로 유해균 제거 또는 활성 억제 방법.
- 스타필로코커스 갈리나럼(Staphylococcus gallinarum) R0003 균주(기탁번호: KACC 92162P), 상기 균주의 배양물 및 상기 균주가 생산하는 항균물질 중 선택된 어느 하나 이상을 사람 이외의 동물에 투여하는 것을 특징으로 하는 유해균 감염 질환 예방, 완화 또는 치료 방법.
- 제12항에 있어서,
상기 유해균은 항생제 내성 균주인 것을 특징으로 유해균 감염 질환 예방, 완화 또는 치료 방법.
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2017
- 2017-07-20 KR KR1020170092216A patent/KR101959730B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (4)
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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