KR20190003992A - esRAGE를 포함하는 종양용해성 바이러스 및 암의 치료 방법 - Google Patents

esRAGE를 포함하는 종양용해성 바이러스 및 암의 치료 방법 Download PDF

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Abstract

esRAGE 유전자를 포함하는 신규한 변형된 또는 조작된 종양용해성 바이러스, 및 암의 치료를 위하여 상기 종양용해성 바이러스를 사용하기 위한 방법이 개시된다.

Description

esRAGE를 포함하는 종양용해성 바이러스 및 암의 치료 방법
1. 암 세포의 바이러스 용해 또는 숙주 면역 반응의 동원을 통해 암 세포를 특이적으로 표적화하는 종양용해성 바이러스의 능력은 종양용해성 바이러스를 최첨단 암 요법의 최전선에 투여하면서 암의 치료를 이동시켜 왔다. 그러나, 종양용해성 바이러스 요법의 효능(efficacy)은 바이러스성 감염에 대한 초기 선천성 면역 반응에 의해 억제되어 oHSV 복제, 종양 파괴, 및 효능을 감소시킬 수 있다. 더욱이, 염증 신호는 내피 세포에서 최종 당화 산물에 대한 수용체 (RAGE)의 발현을 상향조절할 수 있다. 임의의 RAGE 리간드의 RAGE에 대한 결합은 내피 세포의 증식, 이동, 침윤, 혈관생성을 야기한다. 따라서, 필요한 것은, 종양용해성 바이러스 요법을 제공받는 대상체에서 RAGE 신호전달을 감소, 억제 또는 방지하고 암 세포의 탈출 및 증식을 유발하는 새로운 요법 및 치료 방법이다.
2. 최종 당화 산물에 대한 내인성 분비 수용체 (esRAGE)를 발현하는 종양용해성 바이러스와 관련된 방법 및 조성물이 개시된다.
3. 일 태양에서, 변형된 종양용해성 바이러스가 본 명세서에 개시되며, 상기 종양용해성 바이러스는 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및/또는 서열 번호 6과의 적어도 90% 서열 동일성을 포함하는 최종 당화 산물에 대한 내인성 분비 수용체 (esRAGE) 유전자 또는 이의 기능성 단편 또는 변이체를 인코딩 및 발현하도록 변형되었다.
4. 일 태양에서, 임의의 선행하는 태양의 변형된 종양용해성 바이러스는 변형된 또는 조작된 아데노바이러스, 아데노-관련성 바이러스, 1형 단순 포진 바이러스, 2형 단순 포진 바이러스, 수두 대상 포진 바이러스, 엡스타인-바르(Epstein-Barr) 바이러스, 거대세포바이러스, 6형 인간 헤르페스 바이러스, 바리올라(Variola) 바이러스, 우두 바이러스, 전염성 연속종 바이러스, 양아구창 바이러스, 레오바이러스, 로타바이러스, 엔테로바이러스, 세네카바이러스, 폴리오바이러스, 콕사키 바이러스, 리노바이러스, A형 간염 바이러스, 구제역 바이러스, 토가바이러스, 알파바이러스, 셈리키 삼림(Semliki Forest) 바이러스, 동부 말 뇌염(Eastern Equine Encephalitis) 바이러스, 신드비스(Sindbis) 바이러스, 풍진 바이러스, 코로나바이러스, 플라비바이러스, C형 간염 바이러스, 일본 뇌염 바이러스, 세인트루이스 뇌염(St. Louis Encephalitis) 바이러스, 머레이 계곡(Murray Valley) 열 바이러스, 황열 바이러스, 웨스트 나일(West Nile) 바이러스, 지카 바이러스, 뎅기 바이러스, 에볼라 바이러스, 마르부르크(Marburg) 바이러스, 아레나바이러스, 라사 열 바이러스, 림프구성 맥락수막염 바이러스, 피친드(Pichinde) 바이러스, 주닌(Junin) 바이러스, 마추포(Machupo) 바이러스, 한탄(Hantaan) 바이러스, 리프트 계곡(Rift Valley) 열 바이러스, 파라믹소바이러스, 인간 파라인플루엔자 바이러스, 볼거리 바이러스, 유인원 바이러스 5, 홍역 바이러스, 소포성 구내염 바이러스, 광견병 바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스, 오르토믹소바이러스, A형 인플루엔자 바이러스, B형 인플루엔자 바이러스, C형 인플루엔자 바이러스, D형 간염 바이러스, 유인원 면역결핍 바이러스, 1형 인간 면역결핍 바이러스, 및 2형 인간 면역결핍 바이러스, 라우스 육종 바이러스, 1형 인간 T-세포 백혈병 바이러스, 유인원 포말상 바이러스, B형 간염 바이러스, E형 간염 바이러스, 인간 파필로마바이러스, 또는 폴리오마바이러스로부터 유래되는 바이러스 골격을 포함할 수 있다.
5. 또한, 임의의 선행하는 태양의 종양용해성 바이러스 및 약제학적 담체를 포함하는 약제학적 조성물이 개시된다.
6. 또한, 암을 가진 대상체를 치료하는 방법이 개시되며, 상기 방법은 임의의 선행하는 태양의 종양용해성 바이러스를 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
7. 일 태양에서, 암을 가진 대상체를 치료하는 방법이 본 명세서에 개시되며, 상기 방법은 변형된 종양용해성 바이러스를 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 종양용해성 바이러스는 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및/또는 서열 번호 6과의 적어도 90% 서열 동일성을 포함하는 최종 당화 산물에 대한 내인성 분비 수용체 (esRAGE) 유전자 또는 이의 기능성 단편을 인코딩 및 발현하도록 변형되었다.
8. 또한, 임의의 선행하는 태양의 방법에 있어서, 상기 암은 B 세포 림프종, T 세포 림프종, 마이코시스 진균증, 호지킨병, 골수성 백혈병, 편평 세포 암종, 선암종, 육종, 신경교종, 고등급 신경교종, 아세포종, 신경아세포종, 골육종, 형질세포종, 조직구종, 흑색종, 선종, 저산소성 종양, 골수종, AIDS-관련 림프종 또는 육종, 방광암, 뇌암, 신경계 암, 두경부암, 두경부의 편평 세포 암종, 폐암, 예컨대 소세포 폐암 및 비소세포 폐암, 신경아세포종/교아세포종, 난소암, 췌장암, 전립선암, 피부암, 간암, 흑색종, 구강, 인후, 후두, 및 폐의 편평 세포 암종, 결장암, 자궁경부암, 자궁경부 암종, 유방암, 및 상피암, 신장암, 비뇨생식기암, 폐암, 식도 암종, 대장암, 조혈암; 고환암; 결장암, 및 직장암으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법이 개시된다.
9. 일 태양에서, 암 세포를 제거하는 종양용해성 바이러스의 효능에 대한, 최종 당화 산물에 대한 수용체 (RAGE)의 방해를 억제하도록 종양용해성 바이러스를 변형시키는 방법이 본 명세서에 개시되며, 상기 방법은 내인성 분비 RAGE (esRAGE) 유전자를 발현하도록 종양용해성 바이러스를 조작하는 단계를 포함한다.
10. 본 명세서 내에 포함되어 그의 일부를 구성하는 첨부된 도면은 몇몇 실시 형태를 예시하고, 상세한 설명과 함께 개시된 조성물 및 방법을 예시한다.
11. 도 1은 암 세포의 이동/증식, 및 혈관생성으로 이어지는 막 결합된 RAGE 경로의 HMGB1 활성화의 경로를 보여주고, HMGB1과 esRAGE의 결합이 추가의 신호전달 및 계속된 종양용해성 바이러스 복제를 야기하지 않음을 보여준다.
12. 도 2a 및 도 2b는 esRAGE/항-RAGE 처리가 oHSV-매개 EC 이동 및 누출을 감소시킨다는 것을 보여준다. 도 2a는 융합 내피 세포 (EC) 단층을 투과하는 EBA의 능력을 측정함으로써 평가된 내피 세포 누출을 보여준다. 도시된 데이터는 평균 EBA ± sd이다. 도 2c는 EC를 CM ± oHSV ± esRAGE 200 ng/ml 또는 항-RAGE 2 ug/ml로 자극한 후의 EC 이동을 나타낸다. 도시된 데이터는 트랜스웰 막(Transwell membrane)을 통해 이동된 EC의 평균수 ± sd이다.
13. 도 3은 OVesRAGE가 esRAGE를 효율적으로 발현하고 분비함을 보여준다.
14. 도 4는 OVesRAGE가 oHSV-유도 EC 활성화를 유의하게 억제하고 oHSV 복제를 증가시킴을 보여준다.
15. 도 5는 OVesRAGE가 HUVEC와의 공동 배양에서 신경교종 세포 사멸을 증가시킴을 보여준다.
16. 도 6은 OVesRAGE가 대식세포 세포에서 NFkB 신호전달을 활성화함을 보여준다.
17. 도 7은 OVesRAGE가 대식세포/미세교세포 이동을 유의하게 증가시킴을 보여준다.
18. 도 8은 종양용해성 바이러스 또는 esRAGE를 발현하는 변형된 종양용해성 바이러스의 노출 후의 U251T3 및 BV2 세포에서의 사이토카인 발현의 유도 및 감소를 보여준다.
19. 도 9는 OVesRAGE가 미세교세포/대식세포-매개 신경교종 세포 사멸을 유의하게 증가시킴을 보여준다.
20. 도 10은 가용성 RAGE (esRAGE) 발현이 감염된 대상체의 증가된 생존율을 야기함을 보여준다. Fvbn 마우스에서의 DB7 두개내 수술: 2 × 10^5 pfu. OVesRAGE 바이러스 IU 단위는 대조군 rHSVQ 바이러스보다 20배 더 높았으며, 바이러스에 pfu를 주입하기로 결정한다.
21. 본 화합물, 조성물, 물품, 디바이스, 및/또는 방법을 개시 및 기술하기에 앞서, 이들은 달리 명시되지 않는 한 특정 합성 방법 또는 특정 재조합 바이오기술 방법으로, 또는 달리 명시되지 않는 한 특정 시약으로 제한되지 않음이 이해되어야 하며, 이들은 그 자체로 물론 변동될 수 있다. 또한, 본 명세서에서 사용되는 용어는 단지 특정 실시 형태들을 설명하기 위한 것이며, 한정하는 것으로 의도되지 않음을 이해해야 한다.
A. 정의
22. 본 명세서 및 첨부된 청구범위에 사용되는 바와 같이, 단수 형태 ("a", "an", 및 "the")는 그 문맥에 달리 명확히 나타나 있지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어, "약제학적 담체"에 대한 언급은 둘 이상의 그러한 담체들의 혼합물 등을 포함한다.
23. 범위는 본 명세서에서 "약" 하나의 특정 값으로부터 그리고/또는 "약" 다른 하나의 특정 값까지로 표현될 수 있다. 그러한 범위가 표현되는 경우, 다른 실시 형태는 하나의 특정 값으로부터 그리고/또는 다른 하나의 특정 값까지를 포함한다. 유사하게, 값이 선행어 "약"의 사용에 의해 근사치로서 표현될 때, 특정 값은 다른 실시 형태를 형성한다는 것이 이해될 것이다. 각각의 범위의 종점이 나머지 다른 종점과 관련하여, 그리고 또한 나머지 다른 종점과 무관하게 유의함이 추가로 이해될 것이다. 또한, 본 명세서에는 다수의 값이 개시되어 있으며, 각각의 값은 또한 본 명세서에서 그 값 자체에 더하여 "약" 그러한 특정 값으로서 개시됨이 이해되어야 한다. 예를 들어, 값 "10"이 개시되는 경우, "약 10"이 또한 개시된다. 또한, 소정의 값이 개시되는 경우, 당업자에게 적절히 이해되는 바와 같이, 그 값 "이하", "그 값 이상" 및 값들 사이의 가능한 범위가 또한 개시되는 것으로 이해된다. 예를 들어, 값 "10"이 개시되는 경우, "10 이하"뿐만 아니라 "10 이상"이 또한 개시된다. 또한, 본 출원 전체에 걸쳐, 다수의 상이한 포맷으로 데이터가 제공되고, 이러한 데이터는 종점 및 출발점을 나타내고, 데이터 포인트들의 임의의 조합에 대한 범위임이 이해된다. 예를 들어, 특정 데이터 포인트 "10" 및 특정 데이터 포인트 15가 개시되는 경우, 10 및 15 초과, 10 및 15 이상, 10 및 15 미만, 10 및 15 이하, 및 10 및 15뿐만 아니라 10 내지 15가 개시된 것으로 여겨짐이 이해된다. 또한, 2개의 특정 단위들 사이의 각각의 단위가 또한 개시됨이 이해된다. 예를 들어, 10 및 15가 개시되는 경우, 11, 12, 13, 및 14가 또한 개시된다.
24. 본 명세서에서 그리고 하기 청구범위에서는, 다수의 용어를 참조할 것이며, 이들 용어는 하기 의미를 갖는 것으로 정의될 것이다:
25. "선택적" 또는 "선택적으로"는 이어서 설명되는 사건 또는 상황이 일어날 수 있거나 또는 일어나지 않을 수 있음을 의미하고, 상세한 설명이 상기 사건 또는 상황이 일어나는 경우 및 일어나지 않은 경우를 포함하는 것을 의미한다.
26. 본 출원 전체에 걸쳐, 다양한 공개 문헌들이 참조된다. 이러한 공개 문헌들의 개시 내용 전체는 이로써 이와 관련된 최신 기술을 더 충분히 설명하기 위해서 본 출원에 참고로 포함된다. 개시된 참고문헌은 또한, 참고문헌이 의존되는 문장에서 논의되는 것들에 포함되는 자료에 대하여 개별적으로 그리고 구체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
B. 조성물
27. 개시된 조성물을 제조하는 데 사용되는 성분들뿐만 아니라 본 명세서에 개시된 방법에 사용되는 조성물 그 자체가 개시된다. 이들 및 다른 재료가 본 명세서에 개시되며, 이들 재료의 조합, 하위세트, 상호작용, 그룹 등이 개시되는 경우, 이들 화합물의 각각의 다양한 개별적 및 집합적 조합 및 순열에 대한 구체적인 언급이 명시적으로 개시되어 있지 않을 수 있지만, 각각은 본 명세서에서 구체적으로 고려되고 기술되어 있음이 이해된다. 예를 들어, 특정 당화 최종 산물에 대한 내인성 분비 수용체 (esRAGE)가 개시 및 논의되고, 당화 최종 산물에 대한 수용체 (esRAGE)를 포함한 다수의 분자에 대해 이루어질 수 있는 다수의 변형이 논의되는 경우, 당화 최종 산물에 대한 내인성 분비 수용체 (esRAGE)의 각각 하나하나의 모든 조합 및 순열 및 구체적으로 반대로 나타내지 않는 한 가능한 변형이 구체적으로 고려된다. 따라서, 분자 A, B, 및 C의 부류가 개시될 뿐만 아니라 분자 D, E, 및 F의 부류 및 조합 분자, A-D의 예가 개시되는 경우, 각각이 개별적으로 언급되어 있지 않더라고, 각각은 개별적으로 그리고 집합적으로 고려되며, 이는 조합, A-E, A-F, B-D, B-E, B-F, C-D, C-E, 및 C-F가 개시된 것으로 여겨짐을 의미한다. 마찬가지로, 이들의 임의의 하위세트 또는 조합이 또한 개시된다. 따라서, 예를 들어 A-E, B-F, 및 C-E의 하위-그룹이 개시된 것으로 간주될 것이다. 이러한 개념은 개시된 조성물의 제조 및 사용 방법에서의 단계를 포함하지만 이로 한정되지 않는 본 출원의 모든 태양에 적용된다. 따라서, 수행될 수 있는 다양한 추가 단계가 있다면, 이들 추가 단계 각각은 개시된 방법의 임의의 구체적인 실시 형태 또는 실시 형태들의 조합으로 수행될 수 있음이 이해된다.
28. 최첨단 암 요법의 최전선에의 종양용해성 바이러스의 투여. 그러나, 종양용해성 바이러스 요법의 효능은 바이러스성 감염에 대한 초기 선천성 면역 반응에 의해 억제되어 oHSV 복제, 종양 파괴, 및 효능을 감소시킬 수 있다. 더욱이, 염증 신호는 내피 세포에서 최종 당화 산물에 대한 수용체 (RAGE)의 발현을 상향조절할 수 있다. RAGE는 IgG 분자의 구성원이다. RAGE에 대한 리간드는 AGE, HMGB1, S100 패밀리, 아밀로이드 β를 포함한다. RAGE와 그의 리간드 사이의 상호작용은 전염증성 유전자 활성화를 야기하는 것으로 여겨진다. 임의의 RAGE 리간드의 RAGE에 대한 결합은 내피 세포의 증식, 이동, 침윤, 혈관생성을 야기한다. 종양용해성 바이러스 감염 후, RAGE 리간드의 발현이 증가하는데, 이는 암 세포에 대한 탈출을 위한 기전을 제공하는 종양용해성 바이러스 치료의 효능에 있어서 상당한 문제가 된다.
29. 흥미롭게도, 막관통 및 신호전달 도메인이 결여되어 있는, (가용성 RAGE 또는 내인성 분비 (esRAGE)로 일반적으로 지칭되는) RAGE 단백질의 몇몇 아이소형(isoform)이 존재한다. 이들 esRAGE 펩티드, 폴리펩티드, 및 단백질은 또한 RAGE 리간드와 결합할 수 있다. esRAGE 단백질이 막 결합된 RAGE의 억제 효과에 대항하도록 하는 데 이점을 얻을 수 있다는 것이 이해되고 본 명세서에서 고려된다. 구체적으로, esRAGE는 이용가능한 리간드에 대해 막 결합된 RAGE와 경쟁할 수 있는데, 이는 RAGE를 통해 신호전달할 수 있는 리간드의 양을 감소시킬 것이다. 더욱이, esRAGe가 가용성이며 이에 따라 세포외 기질 내로 분비됨에 따라, 이들은 막 결합된 RAGE보다 더 생체이용가능할 것이고, 또한 어떠한 세포 신호전달 캐스케이드도 개시할 수 없다 (도 1). 이 시스템을 시험하기 위하여, LN229 세포를 종양용해성 바이러스로 감염시키고, 단독으로 두거나, esRAGE 또는 항-RAGE 리간드 (HGMB1) 항체로 처리하고, 내피 세포 (EC) 이동 및 누출에 대해 측정하였다. esRAGE 또는 항-HGMB1 항체를 제공받은 세포는 감소된 누출 및 EC 이동을 나타내었다 (도 2).
30. 일 태양에서, 변형된 종양용해성 바이러스가 본 명세서에 개시되며, 상기 종양용해성 바이러스는 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및/또는 서열 번호 6과의 적어도 90% 서열 동일성을 포함하는 최종 당화 산물에 대한 내인성 분비 수용체 (esRAGE) 유전자 또는 이의 기능성 단편 또는 변이체를 인코딩 및 발현하도록 변형되었다.
31. 일 태양에서, 임의의 선행하는 태양의 변형된 종양용해성 바이러스는 변형된 또는 조작된 아데노바이러스, 아데노-관련성 바이러스, 1형 단순 포진 바이러스, 2형 단순 포진 바이러스, 수두 대상 포진 바이러스, 엡스타인-바르 바이러스, 거대세포바이러스, 6형 인간 헤르페스 바이러스, 바리올라 바이러스, 우두 바이러스, 전염성 연속종 바이러스, 양아구창 바이러스, 레오바이러스, 로타바이러스, 엔테로바이러스, 세네카바이러스, 폴리오바이러스, 콕사키 바이러스, 리노바이러스, A형 간염 바이러스, 구제역 바이러스, 토가바이러스, 알파바이러스, 셈리키 삼림 바이러스, 동부 말 뇌염 바이러스, 신드비스 바이러스, 풍진 바이러스, 코로나바이러스, 플라비바이러스, C형 간염 바이러스, 일본 뇌염 바이러스, 세인트루이스 뇌염 바이러스, 머레이 계곡 열 바이러스, 황열 바이러스, 웨스트 나일 바이러스, 지카 바이러스, 뎅기 바이러스, 에볼라 바이러스, 마르부르크 바이러스, 아레나바이러스, 라사 열 바이러스, 림프구성 맥락수막염 바이러스, 피친드 바이러스, 주닌 바이러스, 마추포 바이러스, 한탄 바이러스, 리프트 계곡 열 바이러스, 파라믹소바이러스, 인간 파라인플루엔자 바이러스, 볼거리 바이러스, 유인원 바이러스 5, 홍역 바이러스, 소포성 구내염 바이러스, 광견병 바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스, 오르토믹소바이러스, A형 인플루엔자 바이러스, B형 인플루엔자 바이러스, C형 인플루엔자 바이러스, D형 간염 바이러스, 유인원 면역결핍 바이러스, 1형 인간 면역결핍 바이러스, 및 2형 인간 면역결핍 바이러스, 라우스 육종 바이러스, 1형 인간 T-세포 백혈병 바이러스, 유인원 포말상 바이러스, B형 간염 바이러스, E형 간염 바이러스, 인간 파필로마바이러스, 또는 폴리오마바이러스로부터 유래되는 바이러스 골격을 포함할 수 있다. 예를 들어, 종양용해성 바이러스는 1형 단순 포진 바이러스 (상기 바이러스는 HSV-1 종양용해성 바이러스 HSV1716, 34.5ENVE (viral ICP34.5 Expressed by Nestin promotor 및 Vstat120 Expressing)임); 변형된 아데노바이러스 종양용해성 바이러스 (상기 아데노바이러스는 H101임); 변형된 우두 바이러스 (상기 변형된 우두 바이러스는 GL-ONC1 또는 JX-594임); 변형된 레오바이러스 (상기 변형된 레오바이러스는 레오라이신임); 변형된 엔테로바이러스 (상기 변형된 엔테로바이러스는 리가 바이러스임); 변형된 세네카바이러스 (상기 변형된 세네카바이러스는 SVV-001 바이러스임); 변형된 폴리오바이러스 (상기 변형된 폴리오바이러스는 PVSRIPO 바이러스임); 및/또는 변형된 콕사키 바이러스 (상기 변형된 콕사키 바이러스는 A21 바이러스임)일 수 있다.
32. esRAGE를 포함하는 종양용해성 바이러스를 esRAGE 발현에 대해 시험하였다 (도 3). 다음으로, esRAGE를 포함하고 발현하는 종양용해성 바이러스를 종양용해성 바이러스 유도 EC 활성화를 억제하는 능력에 대해 그리고 종양용해성 바이러스 복제에 대한 임의의 유해 효과에 대해 시험하였다. esRAGE 발현 종양용해성 바이러스는 대조군과 대비하여 바이러스 복제에 어떠한 효과도 미치지 않았지만, 종양용해성 바이러스 유도 EC 활성화는 감소시켰다 (도 4). 이어서, esRAGE를 포함하는 종양용해성 바이러스를 신경교종 세포 사멸에 대한 효과에 대해 시험하였다. OVesRAGE는 인간 제대 정맥 내피 세포 (HUVEC)와의 공동-배양(co-culture)에서 신경교종 세포 사멸을 증가시켰다 (도 5). OVesRAGE는 또한 대식세포 세포에서 NFkB 신호전달을 활성화하였으며 (도 6), 대식세포/미세교세포 이동을 유의하게 증가시킨다 (도 7). 이어서, 사이토카인 발현에 대한 효과를 확인하기 위하여 바이러스를 측정하였다. 도 8은 종양용해성 바이러스 또는 esRAGE를 발현하는 변형된 종양용해성 바이러스의 노출 후의 U251T3 및 BV2 세포에서의 사이토카인 발현의 유도 및 감소를 보여준다. RANTES. GM-CSF, IL-1β, IL-7, IL-6, IL-12-p40/p70, TNFα, TCA-3, TIMP-1은 모두 유도되었으며, 한편 IL-4, IL-1α, 에오탁신-2는 발현이 감소되었다.
33. 개시된 esRAGE 종양용해성 바이러스가 RAGE 경로의 신호전달을 성공적으로 방해할 수 있기 때문에, 종양용해성 바이러스 효능에 대한 RAGE의 방해를 감소시키는 방법이 가치있는 것으로 이해되고 본 명세서에서 고려된다. 일 태양에서, 암 세포를 제거하는 종양용해성 바이러스의 효능에 대한, 최종 당화 산물에 대한 수용체 (RAGE)의 방해를 억제하도록 종양용해성 바이러스를 변형시키는 방법이 본 명세서에 개시되며, 상기 방법은 내인성 분비 RAGE (esRAGE) 유전자를 발현하도록 종양용해성 바이러스를 조작하는 단계를 포함한다. RAGE를 억제하는 개시된 방법은, 임의의 종양용해성 바이러스에서, esRAGE를 발현하도록 바이러스를 변형시킴으로써 수행될 수 있음이 이해되고 본 명세서에서 고려된다.
1. 상동성 /동일성
34. 본 명세서에 개시된 유전자 및 단백질의 임의의 알려진 변이체 및 유도체 또는 생길 수 있는 것들을 정의하기 위한 한 가지 방법은 특정한 알려진 서열에 대한 상동성의 관점에서 그러한 변이체 및 유도체를 정의함에 의한 것임이 이해된다. 예를 들어, 서열 번호 1, 2, 3, 4, 5 및 6은 esRAGE의 특정 서열을 제시한다. 본 명세서에 개시된 이들 및 다른 유전자 및 단백질의 언급된 서열과 적어도 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% 상동성을 갖는 변이체가 구체적으로 개시된다. 당업자는 2개의 단백질 또는 핵산, 예컨대 유전자의 상동성을 결정하는 방법에 대해 용이하게 이해한다. 예를 들어, 상동성은, 2개의 서열을 상동성이 그의 최고 수준에 있도록 정렬한 후에 계산될 수 있다.
35. 상동성을 계산하는 다른 방법은 공개된 알고리즘에 의해 수행될 수 있다. 비교를 위한 서열의 최적 정렬은 스미스 및 워터만 (문헌[Smith and Waterman Adv. Appl . Math. 2: 482 (1981)])의 국부 상동성 알고리즘에 의해, 니들만 및 분쉬 (문헌[Needleman and Wunsch, J. MoL Biol . 48: 443 (1970)])의 상동성 정렬 알고리즘에 의해, 피어슨 및 립만 (문헌[Pearson and Lipman, Proc . Natl . Acad. Sci. U.S.A. 85: 2444 (1988)])의 유사성 검색 방법에 의해, 이들 알고리즘의 전산화 구현 (미국 위스콘신주 매디슨, 575 사이언스 드라이브 소재의 Genetics Computer Group의 Wisconsin Genetics Software Package의 GAP, BESTFIT, FASTA, 및 TFASTA)에 의해, 또는 조사에 의해 수행될 수 있다.
36. 동일한 상동성 유형들이, 예를 들어 문헌[Zuker, M. Science 244:48-52, 1989], 문헌[Jaeger et al. Proc . Natl . Acad . Sci . USA 86:7706-7710, 1989], 문헌[Jaeger et al. Methods Enzymol . 183:281-306, 1989])에 개시되어 있는 알고리즘에 의해 핵산에 대해 획득될 수 있으며, 이들은 적어도 핵산 정렬과 관련된 자료에 대하여 본 명세서에 참고로 포함된다.
2. 핵산
37. 예를 들어 하기를 포함한, 핵산 기반의 다양한 분자가 본 명세서에 개시되어 있다: 예를 들어 esRAGE를 인코딩하는 핵산, 또는 esRAGE를 발현하는 종양용해성 바이러스를 제조하기 위한 본 명세서에 개시된 임의의 핵산, 또는 이들의 단편뿐만 아니라 다양한 기능성 핵산. 개시된 핵산은, 예를 들어 뉴클레오티드, 뉴클레오티드 유사체, 또는 뉴클레오티드 치환체로 구성된다. 이들 및 다른 분자의 비제한적인 예가 본 명세서에서 논의된다. 예를 들어, 벡터가 세포에서 발현될 때, 발현된 mRNA는 전형적으로 A, C, G, 및 U로 구성될 것임이 이해된다. 마찬가지로, 예를 들어, 안티센스 분자가, 예를 들어 외인성 전달을 통해 세포 또는 세포 환경 내로 도입되는 경우, 안티센스 분자는 세포 환경에서 안티센스 분자의 분해를 감소시키는 뉴클레오티드 유사체로 구성되는 것이 유리하다는 것이 이해된다.
a) 뉴클레오티드 및 관련 분자
38. 뉴클레오티드는 염기 모이어티(moiety), 당 모이어티 및 포스페이트 모이어티를 포함하는 분자이다. 뉴클레오티드들은 그들의 포스페이트 모이어티 및 당 모이어티를 통해 함께 연결되어 뉴클레오시드간 결합을 생성할 수 있다. 뉴클레오티드의 염기 모이어티는 아데닌-9-일 (A), 사이토신-1-일 (C), 구아닌-9-일 (G), 우라실-1-일 (U), 및 티민-1-일 (T)일 수 있다. 뉴클레오티드의 당 모이어티는 리보스 또는 데옥시리보스이다. 뉴클레오티드의 포스페이트 모이어티는 5가 포스페이트이다. 뉴클레오티드의 비제한적인 예는 3'-AMP (3'-아데노신 모노포스페이트) 또는 5'-GMP (5'-구아노신 모노포스페이트)일 것이다. 당업계에서 이용가능하고 본 명세서에서 이용가능한 이들 유형의 분자들의 많은 종류가 있다.
39. 뉴클레오티드 유사체는 염기, 당 또는 포스페이트 모이어티에 대한 어떠한 유형의 변형을 함유하는 뉴클레오티드이다. 뉴클레오티드에 대한 변형은 당업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들어 5-메틸사이토신 (5-me-C), 5-하이드록시메틸 사이토신, 잔틴, 하이포잔틴, 및 2-아미노아데닌을 포함할 뿐만 아니라, 당 또는 포스페이트 모이어티에서의 변형도 포함할 것이다. 당업계에서 이용가능하고 본 명세서에서 이용가능한 이들 유형의 분자들의 많은 종류가 있다.
40. 뉴클레오티드 치환체는, 뉴클레오티드와 유사한 기능적 특성을 갖지만 펩티드 핵산 (PNA)과 같은 포스페이트 모이어티를 함유하지 않는 분자이다. 뉴클레오티드 치환체는, 왓슨-크릭(Watson-Crick) 또는 후그스틴(Hoogsteen) 방식으로 핵산을 인식하겠지만 포스페이트 모이어티 이외의 모이어티를 통해 함께 연결된 분자이다. 뉴클레오티드 치환체는 적절한 표적 핵산과 상호작용할 때 이중 나선 유형 구조에 따를 수 있다. 당업계에서 이용가능하고 본 명세서에서 이용가능한 이들 유형의 분자들의 많은 종류가 있다.
41. 다른 유형의 분자 (접합체)를 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 유사체에 연결하여, 예를 들어 세포 취입(cellular uptake)을 향상시키는 것이 또한 가능하다. 접합체는 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 유사체에 화학적으로 연결될 수 있다. 그러한 접합체는 콜레스테롤 모이어티와 같은 지질 모이어티를 포함하지만 이로 한정되지 않는다 (문헌[Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 6553-6556]). 당업계에서 이용가능하고 본 명세서에서 이용가능한 이들 유형의 분자들의 많은 종류가 있다.
42. 왓슨-크릭 상호작용은 뉴클레오티드, 뉴클레오티드 유사체, 또는 뉴클레오티드 치환체의 왓슨-크릭 면과의 적어도 하나의 상호작용이다. 뉴클레오티드, 뉴클레오티드 유사체, 또는 뉴클레오티드 치환체의 왓슨-크릭 면은 푸린 기반 뉴클레오티드, 뉴클레오티드 유사체, 또는 뉴클레오티드 치환체의 C2, N1, 및 C6 위치 및 피리미딘 기반 뉴클레오티드, 뉴클레오티드 유사체, 또는 뉴클레오티드 치환체의 C2, N3, C4 위치를 포함한다.
43. 후그스틴 상호작용은, 이중체 DNA의 주요 홈(groove)에 노출되어 있는, 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 유사체의 후그스틴 면 상에서 일어나는 상호작용이다. 후그스틴 면은 푸린 뉴클레오티드의 C6 위치에 반응성 기 (NH2 또는 O)를 그리고 N7 위치를 포함한다.
b) 서열
44. 본 명세서에 개시된 신호전달 경로에 관여하는 단백질 분자, 예를 들어 esRAGE, 또는 esRAGE를 제조하기 위한 본 명세서에 개시된 임의의 핵산과 관련된 다양한 서열이 존재하며, 이들 모두는 핵산에 의해 인코딩되거나 핵산이다. 이들 유전자의 인간 유사체뿐만 아니라 다른 유사체, 및 이들 유전자의 대립유전자, 및 스플라이스 변이체 및 다른 유형의 변이체에 대한 서열은 Genbank를 비롯한 다양한 단백질 및 유전자 데이터베이스에서 입수가능하다. 당업자는 서열 불일치(sequence discrepancy) 및 차이를 어떻게 해결할지 그리고 특정 서열에 관한 조성물 및 방법을 다른 관련 서열에 대해 어떻게 조정할지를 이해한다.
3. 발현 시스템
45. 세포에 전달되는 핵산은 전형적으로 발현 제어 시스템을 함유한다. 예를 들어, 바이러스 및 레트로바이러스 시스템 내에 삽입된 유전자는 프로모터 및/또는 인핸서를 통상 함유하여 원하는 유전자 산물의 발현을 제어하는 데 도움을 준다. 프로모터는 일반적으로 전사 시작 부위에 대하여 상대적으로 고정된 위치에 있을 때 기능하는 DNA의 서열 또는 서열들이다. 프로모터는 RNA 중합효소와 전사 인자의 기본적인 상호작용에 필요한 핵심 요소들을 함유하며, 상류 요소 및 반응 요소를 함유할 수 있다.
a) 바이러스 프로모터 및 인핸서
46. 포유동물 숙주 세포에서 벡터로부터의 전사를 제어하는 바람직한 프로모터는 다양한 공급원, 예를 들어 폴리오마, 유인원 바이러스 40 (SV40), 아데노바이러스, 레트로바이러스, B형 간염 바이러스, 그리고 가장 바람직하게는 거대세포바이러스와 같은 바이러스들의 게놈으로부터, 또는 이종성 포유류 프로모터, 예를 들어 베타 액틴 프로모터로부터 얻어질 수 있다. SV40 바이러스의 초기 및 후기 프로모터는, SV40 바이러스 복제 기점을 또한 함유하는 SV40 제한 단편으로서 편리하게 얻어진다 (문헌[Fiers et al., Nature, 273: 113 (1978)]). 인간 거대세포바이러스 또는 1형 단순 포진 바이러스의 전초기 프로모터가 편리하게 얻어진다. 물론, 숙주 세포 또는 관련 종으로부터의 프로모터가 또한 본 발명에서 유용하다.
47. 인핸서는 일반적으로 전사 개시 부위로부터 일정하지 않은 거리에서 기능하는 DNA 서열을 지칭하며, 전사 단위에 대해 5' (문헌[Laimins, L. et al., Proc. Natl . Acad . Sci. 78: 993 (1981)]) 또는 3' (문헌[Lusky, M.L., et al., Mol. Cell Bio. 3: 1108 (1983)])에 있을 수 있다. 더욱이, 인핸서는 인트론 내에 있을 수 있을 (문헌[Banerji, J.L. et al., Cell 33: 729 (1983)]) 뿐만 아니라, 코딩 서열 그 자체 내에 있을 수 있다 (문헌[Osborne, T.F., et al., Mol. Cell Bio. 4: 1293 (1984)]). 이들은 통상 길이가 10 내지 300 bp이며, 이들은 시스(cis)에서 기능한다. 인핸서는 부근 프로모터로부터의 전사를 증가시키도록 기능한다. 인핸서는 또한 종종 전사의 조절을 매개하는 반응 요소를 함유한다. 프로모터는 또한 전사의 조절을 매개하는 반응 요소를 함유한다. 인핸서는 종종 유전자의 발현의 조절을 결정한다. 지금 많은 인핸서 서열이 포유류 유전자 (글로빈, 엘라스타제, 알부민, -페토단백질 및 인슐린)로부터 알려져 있지만, 전형적으로는 일반적인 발현을 위해 진핵 세포 바이러스로부터의 인핸서를 사용할 것이다. 바람직한 예는 복제 기점의 후기 측에 있는 SV40 인핸서 (bp 100-270), 거대세포바이러스 초기 프로모터 인핸서, 복제 기점의 후기 측에 있는 폴리오마 인핸서, 및 아데노바이러스 인핸서이다.
48. 프로모터 및/또는 인핸서는 구체적으로는 그들의 기능을 촉발하는 특정 화학 이벤트 또는 광에 의해 활성화될 수 있다. 시스템은 테트라사이클린 및 덱사메타손과 같은 시약에 의해 조절될 수 있다. 방사선 조사, 예컨대 감마선 조사, 또는 알킬화 화학요법 약물에 대한 노출에 의해 바이러스 벡터 유전자 발현을 향상시키는 방법이 또한 있다.
49. 소정 실시 형태에서, 프로모터 및/또는 인핸서 영역은 전사될 전사 단위의 영역의 발현을 최대화하도록 구성적 프로모터 및/또는 인핸서로서 작용할 수 있다. 소정 작제물에서, 프로모터 및/또는 인핸서 영역은, 그것이 특정 시간에 특정 유형의 세포에서만 발현되더라도, 모든 진핵 세포 유형에서 활성일 수 있다. 이러한 유형의 바람직한 프로모터는 CMV 프로모터 (650개의 염기)이다. 다른 바람직한 프로모터는 SV40 프로모터, 거대세포바이러스 (전장(full length) 프로모터), 및 레트로바이러스 벡터 LTR이다.
50. 모든 특정 조절 요소가 클로닝되고, 흑색종 세포와 같은 특정 세포 유형에서 선택적으로 발현되는 발현 벡터를 작제하는 데 사용될 수 있는 것으로 밝혀졌다. 아교세포 섬유 아세트산 단백질 (GFAP) 프로모터는 아교세포 기원의 세포에서 유전자를 선택적으로 발현시키는 데 사용되어 왔다.
51. 진핵 숙주 세포 (효모, 진균, 곤충, 식물, 동물, 인간 또는 유핵 세포)에 사용되는 발현 벡터는 또한 mRNA 발현에 영향을 줄 수 있는 전사의 종결에 필요한 서열을 포함할 수 있다. 이들 영역은 조직 인자 단백질을 인코딩하는 mRNA의 비번역 부분에서 폴리아데닐화 절편으로서 전사된다. 3' 비번역 영역은 또한 전사 종결 부위를 포함한다. 전사 단위는 또한 폴리아데닐화 영역을 함유하는 것이 바람직하다. 이 영역의 한 가지 이익은, 그것이, 전사된 단위가 mRNA와 같이 처리 및 수송될 가능성을 증가시킨다는 것이다. 발현 작제물에서의 폴리아데닐화 신호의 확인 및 사용은 잘 확립되어 있다. 상동성 폴리아데닐화 신호가 도입유전자 작제물에 사용되는 것이 바람직하다. 소정의 전사 단위에서, 폴리아데닐화 영역은 SV40 초기 폴리아데닐화 신호로부터 유래되고 약 400개의 염기로 이루어진다. 전사된 단위는 다른 표준 서열을 단독으로 또는 상기 서열과 조합하여 함유하여, 작제물로부터의 발현 또는 그의 안정성을 개선하는 것이 또한 바람직하다.
b) 마커
52. 바이러스 벡터는 마커 생성물을 인코딩하는 핵산 서열을 포함할 수 있다. 이 마커 생성물은 유전자가 세포로 전달되었는지를 결정하는데 사용되고, 일단 전달되면 발현된다. 바람직한 마커 유전자는 β-갈락토시다제를 인코딩하는 E. 콜라이(E. Coli) lacZ 유전자, 및 녹색 형광 단백질이다.
53. 일부 실시 형태들에서, 마커는 선택가능한 마커일 수 있다. 포유류 세포에 대한 적합한 선택가능한 마커의 예는 다이하이드로폴레이트 리덕타제 (DHFR), 티미딘 키나제, 네오마이신, 네오마이신 유사체 G418, 하이드로마이신, 및 푸로마이신이다. 그러한 선택가능한 마커가 포유류 숙주 세포 내로 성공적으로 전달될 때, 형질전환된 포유류 숙주 세포는 선택압 하에 놓인 경우 생존할 수 있다. 선택적 계획의 널리 사용되는 별개의 카테고리가 2가지 있다. 첫 번째 카테고리는 세포의 대사, 및 보충 배지에 비의존적으로 성장하는 능력이 결여되어 있는 돌연변이 세포주의 사용에 기초한다. 2가지 예는 CHO DHFR-세포 및 마우스 LTK-세포이다. 이들 세포는 티미딘 또는 하이포잔틴과 같은 영양소의 첨가 없이 성장하는 능력이 결여되어 있다. 이들 세포는 완전한 뉴클레오티드 합성 경로에 필요한 소정 유전자가 결여되어 있기 때문에, 그들은 누락 뉴클레오티드가 보충 배지 내에 제공되지 않는 한 생존할 수 없다. 배지를 보충하는 것에 대한 대안은 온전한 DHFR 또는 TK 유전자를 각각의 유전자들이 결여되어 있는 세포 내로 도입하여, 그들의 성장 요건을 변경시키는 것이다. DHFR 또는 TK 유전자로 형질전환되지 않은 개별 세포는 보충되지 않은 배지에서 생존할 수 없을 것이다.
54. 두 번째 카테고리는 임의의 세포 유형에서 사용되는 선택 계획을 지칭하는 우성 선택이며, 돌연변이 세포주의 사용을 필요로 하지 않는다. 이들 계획은 전형적으로 약물을 사용하여 숙주 세포의 성장을 저지한다. 신규한 유전자를 갖는 그러한 세포는 약물 저항성을 전달하는 단백질을 발현할 것이고 선택에서 살아남을 것이다. 그러한 우성 선택의 예는 약물 네오마이신 (문헌[Southern P. and Berg, P., J. Molec . Appl . Genet. 1: 327 (1982)]), 마이코페놀산 (문헌[Mulligan, R.C. and Berg, P. Science 209: 1422 (1980)]) 또는 하이그로마이신 (문헌[Sugden, B. et al., Mol . Cell. Biol. 5: 410-413 (1985)])을 사용한다. 이들 3가지 예는 적절한 약물 G418 또는 네오마이신 (제네티신), xgpt (마이코페놀산) 또는 하이그로마이신 각각에 대한 저항성을 전달하기 위해 진핵세포 제어 하에서 세균 유전자를 사용한다. 다른 것들은 네오마이신 유사체 G418 및 푸라마이신을 포함한다.
4. 약제학적 담체 /의약품의 전달
55. 전술된 바와 같이, 조성물은 또한 약제학적으로 허용되는 담체로 생체내 투여될 수 있다. 따라서, 일 태양에서, 약제학적 조성물이 본 명세서에 개시되며, 상기 약제학적 조성물은 변형된 종양용해성 바이러스 - 상기 종양용해성 바이러스는 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 또는 서열 번호 6과의 적어도 90% 서열 동일성을 포함하는 최종 당화 산물에 대한 내인성 분비 수용체 (esRAGE) 유전자 또는 이의 기능성 단편 또는 변이체를 인코딩 및 발현하도록 변형되었음 - 및 약제학적 담체를 포함한다. "약제학적으로 허용가능한"은 생물학적으로 또는 달리 바람직한 물질을 의미하는 것으로, 즉, 그가 함유된 약제학적 조성물의 임의의 다른 성분과 유해한 방식으로 상호작용하거나 임의의 바람직하지 않은 생물학적 효과를 야기함이 없이, 상기 물질은 핵산 또는 벡터와 함께 대상체에 투여될 수 있다. 담체는 본질적으로, 당업자에게 잘 알려져 있는 바와 같이, 활성 성분의 어떠한 분해도 최소화하고 대상체에 어떠한 부작용도 최소화하도록 선택될 것이다.
56. 조성물은 경구, 비경구 (예를 들어, 정맥내), 근육내 주사, 복막내 주사, 경피, 체외, 국소 투여 등 - 국소 비강내 투여 또는 흡입제에 의한 투여를 포함함 - 으로 투여될 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "국소 비강내 투여"는 한쪽 또는 양쪽 외비공을 통한 코 및 비도(nasal passage) 내로의 조성물의 전달을 의미하며, 핵산 또는 벡터의 에어로졸화를 통한, 또는 분무 메커니즘 또는 적하 메커니즘에 의한 전달을 포함할 수 있다. 흡입제에 의한 조성물의 투여는 분무 또는 적하 메커니즘에 의한 전달을 통해 코 또는 입을 통해 이루어질 수 있다. 전달은 또한 삽관을 통해 호흡계의 임의의 영역 (예를 들어, 폐)에 직접 행해질 수 있다. 조성물의 정확한 필요량은 대상체의 종, 연령, 체중 및 전신 상태, 치료되는 알레르기성 장애의 중증도, 사용된 특정 핵산 또는 벡터, 그의 투여 방식 등에 따라 대상체마다 다를 것이다. 따라서, 모든 조성물에 대해 정확한 양을 지정하는 것은 불가능하다. 그러나, 본 명세서에서의 교시내용을 고려하여 일상적인 실험만을 사용하여 당업자에 의해 적절한 양이 결정될 수 있다.
57. 조성물의 비경구 투여는, 사용되는 경우, 대체적으로 주사에 의해 특징지어진다. 주사용 물질은 액체 용액 또는 현탁액, 주사 전에 액체 중 용액 또는 현탁액에 적합한 고체 형태, 또는 에멀젼으로서 통상적인 형태로 제조될 수 있다. 비경구 투여를 위한 보다 최근에 수정된 접근법은 일정 투여량이 유지되도록 저속 방출 또는 지속 방출 시스템의 사용을 수반한다. 예를 들어, 미국 특허 제3,610,795호를 참조하며, 이는 본 명세서에 참고로 포함된다.
58. 물질은 용액 상태, 현탁액 (예를 들어, 미세입자, 리포좀 또는 세포 내로 혼입됨) 상태일 수 있다. 이들은 항체, 수용체, 또는 수용체 리간드를 통해 특정 세포 유형을 표적으로 할 수 있다. 하기 참고문헌은 특정 단백질이 종양 조직을 표적으로 하기 위한 이러한 기술의 사용의 예이다 (문헌[Senter, et al., Bioconjugate Chem., 2:447-451, (1991)]; 문헌[Bagshawe, K.D., Br. J. Cancer, 60:275-281, (1989)]; 문헌[Bagshawe, et al., Br. J. Cancer, 58:700-703, (1988)]; 문헌[Senter, et al., Bioconjugate Chem., 4:3-9, (1993)]; 문헌[Battelli, et al., Cancer Immunol . Immunother., 35:421-425, (1992)]; 문헌[Pietersz and McKenzie, Immunolog . Reviews, 129:57-80, (1992)]; 및 문헌[Roffler, et al., Biochem . Pharmacol, 42:2062-2065, (1991)]). 비히클, 예컨대 "스텔스(stealth)" 및 다른 항체가 접합된 리포좀 (결장 암종을 표적으로 하는 지질 매개 약물을 포함함), 세포 특이적 리간드를 통한 DNA의 수용체 매개 표적화, 림프구 유도 종양 표적화, 및 생체내 뮤린 교종 세포의 고특이적인 치료적 레트로바이러스 표적화가 있다. 하기 참고문헌은 특정 단백질이 종양 조직을 표적으로 하기 위한 이러한 기술의 사용의 예이다 (문헌[Hughes et al., Cancer Research, 49:6214-6220, (1989)]; 및 문헌[Litzinger and Huang, Biochimica et Biophysica Acta, 1104:179-187, (1992)]). 일반적으로, 수용체는 구성성(constitutive) 또는 리간드 유도 세포내이입(endocytosis) 경로에 관여한다. 이들 수용체는 클라트린-피복 소공(clathrin-coated pit) 내에 클러스터링되고, 클라트린-피복 소포를 통해 세포에 들어가고, 산성화된 엔도솜을 통과하고, 여기서 수용체들이 분류되고, 이어서 세포 표면으로 재순환되거나, 세포내에 저장되거나, 리소좀에서 분해된다. 내재화 경로는 영양 섭취, 활성화된 단백질의 제거, 거대분자의 제거, 바이러스 및 독소의 기회적 유입(opportunistic entry), 리간드의 해리 및 분해, 및 수용체-수준 조절과 같은 다양한 기능을 제공한다. 많은 수용체들이 세포 유형, 수용체 농도, 리간드의 유형, 리간드 가수(valency), 및 리간드 농도에 따라 하나 초과의 세포내 경로를 따른다. 수용체-매개 세포내이입의 분자 및 세포 기전이 검토되어 있다 (문헌[Brown and Greene, DNA and Cell Biology 10:6, 399-409 (1991)]).
a) 약제학적으로 허용되는 담체
59. 항체를 포함하는 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체와 배합되어 치료적으로 사용될 수 있다.
60. 적합한 담체 및 그의 제형이 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy (19th ed.) ed. A.R. Gennaro, Mack Publishing Company, Easton, PA 1995]에 기재되어 있다. 전형적으로, 제형에 등장성(isotonic)을 부여하기 위해 적절한 양의 약제학적으로 허용되는 염이 제형에 사용된다. 약제학적으로 허용되는 담체의 예에는 식염수, 링거액 및 덱스트로스 용액을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 용액의 pH는 바람직하게는 약 5 내지 약 8, 더 바람직하게는 약 7 내지 약 7.5이다. 또한, 담체는 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스와 같은 지속 방출 제제를 포함하는데, 이러한 매트릭스는 형상화된 물품, 예를 들어 필름, 리포좀 또는 미세입자의 형태이다. 소정의 담체가, 예를 들어 투여되는 조성물의 투여 경로 및 농도에 따라 더 바람직할 수 있음이 당업자에게 명백할 것이다.
61. 약제학적 담체는 당업자에게 알려져 있다. 이들 대부분은 전형적으로 생리학적 pH의 완충 용액, 식염수, 및 멸균수와 같은 용액을 포함한, 인간에게 약물을 투여하기 위한 표준 담체일 것이다. 조성물은 근육내 또는 피하 투여될 수 있다. 다른 화합물은 당업자에 의해 사용되는 표준 절차에 따라 투여될 것이다.
62. 약제학적 조성물은 선택된 분자에 더하여 담체, 증점제, 희석제, 완충제, 방부제, 표면 활성제 등을 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 또한 항미생물제, 항염증제, 마취제 등과 같은 하나 이상의 활성 성분을 포함할 수 있다.
63. 약제학적 조성물은 국부 치료 또는 전신 치료 어느 것이 요구되는지에 따라, 그리고 치료하려는 영역에 따라 다수의 방식으로 투여될 수 있다. 투여는 국소 투여 (안내, 질내, 직장내, 비강내 투여를 포함함), 경구 투여, 흡입에 의한 투여, 또는 비경구 투여, 예를 들어 정맥내 점적, 피하, 복막내 또는 근육내 주사에 의한 투여일 수 있다. 개시된 항체는 정맥내, 복막내, 근육내, 피하, 강내(intracavity), 또는 경피 투여될 수 있다.
64. 비경구 투여를 위한 제제는 멸균 수성 또는 비수성 용액, 현탁액, 및 에멀젼을 포함한다. 비수성 용매의 예는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브유와 같은 식물성 오일, 및 에틸 올리에이트와 같은 주사용 유기 에스테르이다. 수성 담체는 물, 알코올 용액/수용액, 에멀젼 또는 현탁액을 포함하며, 이에는 식염수 및 완충 매체가 포함된다. 비경구 비히클은 염화나트륨 용액, 링거 덱스트로스, 덱스트로스 및 염화나트륨, 락트산 첨가 링거액 또는 고정유(fixed oil)를 포함한다. 정맥내 비히클은 유체 및 영양 보충물, 전해질 보충물 (예컨대, 링거 덱스트로스에 기반한 것들) 등을 포함한다. 또한, 예를 들어 항미생물제, 항산화제, 킬레이트제, 및 불활성 기체 등과 같은 방부제 및 다른 첨가제가 존재할 수 있다.
65. 국소 투여를 위한 제형은 연고, 로션, 크림, 겔, 점적제, 좌제, 스프레이, 액체 및 분말을 포함할 수 있다. 통상적인 약제학적 담체, 수성, 분말 또는 유성 기재(base), 증점제 등이 필요하거나 바람직할 수 있다.
66. 경구 투여를 위한 조성물은 분말 또는 과립, 물 또는 비수성 매체 중의 현탁액 또는 용액, 캡슐, 사셰(sachet) 또는 정제를 포함한다. 증점제, 향미제, 희석제, 유화제, 분산 보조제 또는 결합제가 바람직할 수 있다.
67. 조성물들 중 일부는 잠재적으로 염산, 브롬화수소산, 과염소산, 질산, 티오시안산, 황산, 및 인산과 같은 무기 산, 및 포름산, 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 락트산, 피루브산, 옥살산, 말론산, 석신산, 말레산, 및 푸마르산과 같은 유기 산과의 반응에 의해, 또는 수산화나트륨, 수산화암모늄, 수산화칼슘과 같은 무기 염기, 및 모노-, 다이-, 트라이알킬 및 아릴 아민 및 치환된 에탄올아민과 같은 유기 염기와의 반응에 의해 형성된, 약제학적으로 허용되는 산- 또는 염기- 부가 염으로 투여될 수 있다.
b) 치료적 용도
68. 조성물을 투여하기 위한 유효 투여량 및 일정은 경험적으로 결정될 수 있으며, 그러한 결정을 내리는 것은 당업계의 기술 범위 내에 있다. 조성물의 투여를 위한 투여량 범위는 장애의 증상에 미치는 원하는 효과를 생성하기에 충분히 큰 것이다. 투여량은 원치 않는 교차-반응, 아나필락시 반응 등과 같은 유해한 부작용을 야기할 정도로 커서는 안 된다. 대체적으로, 투여량은 환자의 연령, 상태, 성별 및 질병의 정도, 투여 경로, 또는 다른 약물이 계획(regimen)에 포함되는지 여부에 따라 달라질 것이며, 당업자에 의해 결정될 수 있다. 투여량은 어떠한 금기가 있는 경우에는 개인 의사에 의해 조정될 수 있다. 투여량은 다양할 수 있으며, 1일 또는 수 일 동안 매일 1회 이상의 용량 투여로 투여될 수 있다. 지정된 부류의 의약품의 적정 투여량에 대한 지침은 문헌에서 찾아볼 수 있다. 예를 들어, 항체의 적정 용량 선택에 대한 지침은 항체의 치료적 용도에 관한 문헌, 예를 들어 문헌[Handbook of Monoclonal Antibodies, Ferrone et al., eds., Noges Publications, Park Ridge, N.J., (1985) ch. 22 and pp. 303-357]; 문헌[Smith et al., Antibodies in Human Diagnosis and Therapy, Haber et al., eds., Raven Press, New York (1977) pp. 365-389]에서 찾아볼 수 있다. 단독으로 사용되는 항체의 전형적인 일일 투여량은 상기 언급된 인자들에 따라 약 1 ㎍/㎏ 체중/일 내지 최대 100 mg/㎏ 체중/일 또는 그 이상의 범위일 수 있다.
C. 암의 치료 방법
69. 일 태양에서, 개시된 종양용해성 바이러스는 암과 같은 제어되지 않는 세포 증식이 발생하는 임의의 질병을 치료하는 데 사용될 수 있는 것으로 이해된다. 본 명세서에 언급된 바와 같이, 종래 기술은 막 결합된 RAGE를 통해 결합 및 신호전달하는 염증성 분자의 활성화가 암 세포의 증식, 이동, 및 혈관생성으로 이어지는 것을 보여준다. 개시된 종양용해성 바이러스는 세포외 기질 내에서 RAGE에 대한 리간드에 결합할 수 있고 이에 따라 막 결합된 RAGE를 통한 임의의 결합 및 후속 신호전달을 제한할 수 있는 가용성 (즉, 내인성 분비) RAGE (esRAGE)를 발현함으로써 이러한 문제를 해결한다. esRAGE의 발현은 NK 세포 매개 종양 사멸을 변경시키지 않는다. 실제로, 도 9에 나타낸 바와 같이, OVesRAGE는 미세교세포/대식세포-매개 신경교종 세포 사멸을 유의하게 증가시킨다. 가용성 RAGE (esRAGE) 발현을 통한 이러한 증가된 종양 표적화된 사멸은 감염된 대상체의 증가된 생존율을 가져온다 (도 10). 따라서, 일 태양에서, 암을 가진 대상체를 치료하는 방법이 본 명세서에 개시되며, 상기 방법은 본 명세서에 개시된 esRAGE 함유 종양용해성 바이러스들 중 임의의 것을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 암을 가진 대상체를 치료하는 방법이 본 명세서에 개시되며, 상기 방법은 변형된 종양용해성 바이러스를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 종양용해성 바이러스는 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 또는 서열 번호 6과의 적어도 90% 서열 동일성을 포함하는 최종 당화 산물에 대한 내인성 분비 수용체 (esRAGE) 유전자 또는 이의 기능성 단편을 인코딩 및 발현하도록 변형되었다.
70. 개시된 esRAGE 함유 종양용해성 바이러스를 사용하여 치료될 수 있는 상이한 유형의 암의 비제한적인 목록은 하기와 같다: 림프종 (호지킨 및 비호지킨), 백혈병, 암종, 고형 조직의 암종, 편평 세포 암종, 선암종, 육종, 신경교종, 고등급 신경교종, 아세포종, 신경아세포종, 골육종, 형질세포종, 조직구종, 흑색종, 선종, 저산소성 종양, 골수종, AIDS-관련 림프종 또는 육종, 전이성 암, 또는 일반적인 암.
71. 개시된 조성물이 치료하는 데 사용될 수 있는 암의 대표적이지만 비제한적인 목록은 하기와 같다: 림프종, B 세포 림프종, T 세포 림프종, 마이코시스 진균증, 호지킨병, 골수성 백혈병, 편평 세포 암종, 선암종, 육종, 신경교종, 고등급 신경교종, 아세포종, 신경아세포종, 골육종, 형질세포종, 조직구종, 흑색종, 선종, 저산소성 종양, 골수종, AIDS-관련 림프종 또는 육종, 방광암, 뇌암, 신경계 암, 두경부의 편평 세포 암종, 폐암, 예컨대 소세포 폐암 및 비소세포 폐암, 신경아세포종/교아세포종, 난소암, 췌장암, 전립선암, 피부암, 간암, 흑색종, 구강, 인후, 후두, 및 폐의 편평 세포 암종, 결장암, 자궁경부암, 자궁경부 암종, 유방암, 및 상피암, 신장암, 비뇨생식기암, 폐암, 식도 암종, 대장암, 조혈암; 고환암; 결장암, 및 직장암.
72. 개시된 암 치료 방법은 임의의 종양용해성 바이러스 골격을 포함하는 본 명세서에 개시된 임의의 종양용해성 바이러스를 사용하여 적용될 수 있음이 이해되고 본 명세서에서 고려된다. 따라서, 일 태양에서, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 본 명세서에 개시되며, 상기 방법은 변형된 종양용해성 바이러스를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 종양용해성 바이러스는 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 또는 서열 번호 6과의 적어도 90% 서열 동일성을 포함하는 최종 당화 산물에 대한 내인성 분비 수용체 (esRAGE) 유전자 또는 이의 기능성 단편을 인코딩 및 발현하도록 변형되었고; 종양용해성 바이러스의 바이러스 골격은 변형된 또는 조작된 아데노바이러스, 아데노-관련성 바이러스, 1형 단순 포진 바이러스, 2형 단순 포진 바이러스, 수두 대상 포진 바이러스, 엡스타인-바르 바이러스, 거대세포바이러스, 6형 인간 헤르페스 바이러스, 바리올라 바이러스, 우두 바이러스, 전염성 연속종 바이러스, 양아구창 바이러스, 레오바이러스, 로타바이러스, 엔테로바이러스, 세네카바이러스, 폴리오바이러스, 콕사키 바이러스, 리노바이러스, A형 간염 바이러스, 구제역 바이러스, 토가바이러스, 알파바이러스, 셈리키 삼림 바이러스, 동부 말 뇌염 바이러스, 신드비스 바이러스, 풍진 바이러스, 코로나바이러스, 플라비바이러스, C형 간염 바이러스, 일본 뇌염 바이러스, 세인트루이스 뇌염 바이러스, 머레이 계곡 열 바이러스, 황열 바이러스, 웨스트 나일 바이러스, 지카 바이러스, 뎅기 바이러스, 에볼라 바이러스, 마르부르크 바이러스, 아레나바이러스, 라사 열 바이러스, 림프구성 맥락수막염 바이러스, 피친드 바이러스, 주닌 바이러스, 마추포 바이러스, 한탄 바이러스, 리프트 계곡 열 바이러스, 파라믹소바이러스, 인간 파라인플루엔자 바이러스, 볼거리 바이러스, 유인원 바이러스 5, 홍역 바이러스, 소포성 구내염 바이러스, 광견병 바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스, 오르토믹소바이러스, A형 인플루엔자 바이러스, B형 인플루엔자 바이러스, C형 인플루엔자 바이러스, D형 간염 바이러스, 유인원 면역결핍 바이러스, 1형 인간 면역결핍 바이러스, 및 2형 인간 면역결핍 바이러스, 라우스 육종 바이러스, 1형 인간 T-세포 백혈병 바이러스, 유인원 포말상 바이러스, B형 간염 바이러스, E형 간염 바이러스, 인간 파필로마바이러스, 또는 폴리오마바이러스로부터 유래된다.
D. 서열
서열 번호 1: 내인성 분비 RAGE 변이체 1
1 gccaggaccc tggaaggaag caggatggca gccggaacag cagttggagc ctgggtgctg
61 gtcctcagtc tgtggggggc agtagtaggt gctcaaaaca tcacagcccg gattggcgag
121 ccactggtgc tgaagtgtaa gggggccccc aagaaaccac cccagcggct ggaatggaaa
181 ctgaacacag gccggacaga agcttggaag gtcctgtctc cccagggagg aggcccctgg
241 gacagtgtgg ctcgtgtcct tcccaacggc tccctcttcc ttccggctgt cgggatccag
301 gatgagggga ttttccggtg ccaggcaatg aacaggaatg gaaaggagac caagtccaac
361 taccgagtcc gtgtctacca gattcctggg aagccagaaa ttgtagattc tgcctctgaa
421 ctcacggctg gtgttcccaa taaggtgggg acatgtgtgt cagagggaag ctaccctgca
481 gggactctta gctggcactt ggatgggaag cccctggtgc ctaatgagaa gggagtatct
541 gtgaaggaac agaccaggag acaccctgag acagggctct tcacactgca gtcggagcta
601 atggtgaccc cagcccgggg aggagatccc cgtcccacct tctcctgtag cttcagccca
661 ggccttcccc gacaccgggc cttgcgcaca gcccccatcc agccccgtgt ctgggagcct
721 gtgcctctgg aggaggtcca attggtggtg gagccagaag gtggagcagt agctcctggt
781 ggaaccgtaa ccctgacctg tgaagtccct gcccagccct ctcctcaaat ccactggatg
841 aaggatggtg tgcccttgcc ccttcccccc agccctgtgc tgatcctccc tgagataggg
901 cctcaggacc agggaaccta cagctgtgtg gccacccatt ccagccacgg gccccaggaa
961 agccgtgctg tcagcatcag catcatcgaa ccaggcgagg aggggccaac tgcaggtgag
1021 gggtttgata aagtcaggga agcagaagat agcccccaac acatgtgact ggggggatgg
1081 tcaacaagaa aggaatggaa ggccccagaa aaccaggagg aagaggagga gcgtgcagaa
1141 ctgaatcagt cggaggaacc tgaggcaggc gagagtagta ctggagggcc ttgaggggcc
1201 cacagacaga tcccatccat cag
서열 번호 2: 내인성 분비 RAGE 변이체 2
1 aggaagcagg atggcagccg gaacagcagt tggagcctgg gtgctggtcc tcagtctgtg
61 gggggcagta gtaggtgctc aaaacatcac agcccggatt ggcgagccac tggtgctgaa
121 gtgtaagggg gcccccaaga aaccacccca gcggctggaa tggaaactga acacaggccg
181 gacagaagct tggaaggtcc tgtctcccca gggaggaggc ccctgggaca gtgtggctcg
241 tgtccttccc aacggctccc tcttccttcc ggctgtcggg atccaggatg aggggatttt
301 ccggtgccag gcaatgaaca ggaatggaaa ggagaccaag tccaactacc gagtccgtgt
361 ctaccagatt cctgggaagc cagaaattgt agattctgcc tctgaactca cggctggtgt
421 tcccaataag gtggggacat gtgtgtcaga gggaagctac cctgcaggga ctcttagctg
481 gcacttggat gggaagcccc tggtgcctaa tgagaaggga gtatctgtga aggaacagac
541 caggagacac cctgagacag ggctcttcac actgcagtcg gagctaatgg tgaccccagc
601 ccggggagga gatccccgtc ccaccttctc ctgtagcttc agcccaggcc ttccccgaca
661 ccgggccttg cgcacagccc ccatccagcc ccgtgtctgg gagcctgtgc ctctggagga
721 ggtccaattg gtggtggagc cagaaggtgg agcagtagct cctggtggaa ccgtaaccct
781 gacctgtgaa gtccctgccc agccctctcc tcaaatccac tggatgaagg atggcctcag
841 gaccagggaa cctacagctg tgtggccacc cattccagcc acgggcccca ggaaagccgt
901 gctgtcagca tcagcatcat cgaaccaggc gaggaggggc caactgcagg ctctgtggga
961 ggatcagggc tgggaactct agccctggcc ctggggatcc tgggaggcct ggggacagcc
1021 gccctgctca ttggggtcat cttgtggcaa aggcggcaac gccgaggaga ggagaggaag
1081 gccccagaaa accaggagga agaggaggag cgtgcagaac tgaatcagtc ggaggaacct
1141 gaggcaggcg agagtagtac tggagggcct tgaggggccc acagacagat ccca
서열 번호 3: 내인성 분비 RAGE 변이체 3
1 aggaagcagg atggcagccg gaacagcagt tggagcctgg gtgctggtcc tcagtctgtg
61 gggggcagta gtaggtgctc aaaacatcac agcccggatt ggcgagccac tggtgctgaa
121 gtgtaagggg gcccccaaga aaccacccca gcggctggaa tggaaactga acacaggccg
181 gacagaagct tggaaggtcc tgtctcccca gggaggaggc ccctgggaca gtgtggctcg
241 tgtccttccc aacggctccc tcttccttcc ggctgtcggg atccaggatg aggggatttt
301 ccggtgccag gcaatgaaca ggaatggaaa ggagaccaag tccaactacc gagtccgtgt
361 ctaccagatt cctgggaagc cagaaattgt agattctgcc tctgaactca cggctggtgt
421 tcccaataag gtggggacat gtgtgtcaga gggaagctac cctgcaggga ctcttagctg
481 gcacttggat gggaagcccc tggtgcctaa tgagaaggga gtatctgtga aggaacagac
541 caggagacac cctgagacag ggctcttcac actgcagtcg gagctaatgg tgaccccagc
601 ccggggagga gatccccgtc ccaccttctc ctgtagcttc agcccaggcc ttccccgaca
661 ccgggccttg cgcacagccc ccatccagcc ccgtgtctgg gagcctgtgc ctctggagga
721 ggtccaattg gtggtggagc cagaaggtgg agcagtagct cctggtggaa ccgtaaccct
781 gacctgtgaa gtccctgccc agccctctcc tcaaatccac tggatgaagg atggtgtgcc
841 cttgcccctt ccccccagcc ctgtgctgat cctccctgag atagggcctc aggaccaggg
901 aacctacagc tgtgtggcca cccattccag ccacgggccc caggaaagcc gtgctgtcag
961 catcagcatc atcgaaccag gcgaggaggg gccaactgca ggtgaggggt ttgataaagt
1021 cagggaagca gaagatagcc cccaacacat gtgactgggg ggatggtcaa caagaaagga
1081 atggaaggcc ccagaaaacc aggaggaaga ggaggagcgt gcagaactga atcagtcgga
1141 ggaacctgag gcaggcgaga gtagtactgg agggccttga ggggcccaca gacagatccc
1201 a
서열 번호 4: 내인성 분비 RAGE 변이체 4
1 aggaagcagg atggcagccg gaacagcagt tggagcctgg gtgctggtcc tcagtctgtg
61 gggggcagta gtaggtgctc aaaacatcac agcccggatt ggcgagccac tggtgctgaa
121 gtgtaagggg gcccccaaga aaccacccca gcggctggaa tggaaactga acacaggccg
181 gacagaagct tggaaggtcc tgtctcccca gggaggaggc ccctgggaca gtgtggctcg
241 tgtccttccc aacggctccc tcttccttcc ggctgtcggg atccaggatg aggggatttt
301 ccggtgccag gcaatgaaca ggaatggaaa ggagaccaag tccaactacc gagtccgtgt
361 ctaccagatt cctgggaagc cagaaattgt agattctgcc tctgaactca cggctggtgt
421 tcccaataag gtggggacat gtgtgtcaga gggaagctac cctgcaggga ctcttagctg
481 gcacttggat gggaagcccc tggtgcctaa tgagaaggga gtatctgtga aggaacagac
541 caggagacac cctgagacag ggctcttcac actgcagtcg gagctaatgg tgaccccagc
601 ccggggagga gatccccgtc ccaccttctc ctgtagcttc agcccaggcc ttccccgaca
661 ccgggccttg cgcacagccc ccatccagcc ccgtgtctgg gagcctgtgc ctctggagga
721 ggtccaattg gtggtggagc cagaaggtgg agcagtagct cctggtggaa ccgtaaccct
781 gacctgtgaa gtccctgccc agccctctcc tcaaatccac tggatgaagg atggcctcag
841 gaccagggaa cctacagctg tgtggccacc cattccagcc acgggcccca ggaaagccgt
901 gctgtcagca tcagcatcat cgaaccaggc gaggaggggc caactgcagg tgaggggttt
961 gataaagtca gggaagcaga agatagcccc caacacatgt gactgggggg atggtcaaca
1021 agaaaggaat ggaaggcccc agaaaaccag gaggaagagg aggagcgtgc agaactgaat
1081 cagtcggagg aacctgaggc aggcgagagt agtactggag ggccttgagg ggcccacaga
1141 cagatccca
서열 번호 5: 내인성 분비 RAGE 변이체 5
1 aggaagcagg atggcagccg gaacagcagt tggagcctgg gtgctggtcc tcagtctgtg
61 gggggcagta gtaggtgctc aaaacatcac agcccggatt ggcgagccac tggtgctgaa
121 gtgtaagggg gcccccaaga aaccacccca gcggctggaa tggaaactga acacaggccg
181 gacagaagct tggaaggtcc tgtctcccca gggaggaggc ccctgggaca gtgtggctcg
241 tgtccttccc aacggctccc tcttccttcc ggctgtcggg atccaggatg aggggatttt
301 ccggtgccag gcaatgaaca ggaatggaaa ggagaccaag tccaactacc gagtccgtgt
361 ctaccagatt cctgggaagc cagaaattgt agattctgcc tctgaactca cggctggtgt
421 tcccaataag gtagtggaag aaagcaggag aagtagaaaa cggccctgtg aacaggaggt
481 ggggacatgt gtgtcagagg gaagctaccc tgcagggact cttagctggc acttggatgg
541 gaagcccctg gtgcctaatg agaagggagt atctgtgaag gaacagacca ggagacaccc
601 tgagacaggg ctcttcacac tgcagtcgga gctaatggtg accccagccc ggggaggaga
661 tccccgtccc accttctcct gtagcttcag cccaggcctt ccccgacacc gggccttgcg
721 cacagccccc atccagcccc gtgtctggga gcctgtgcct ctggaggagg tccaattggt
781 ggtggagcca gaaggtggag cagtagctcc tggtggaacc gtaaccctga cctgtgaagt
841 ccctgcccag ccctctcctc aaatccactg gatgaaggat ggtgtgccct tgccccttcc
901 ccccagccct gtgctgatcc tccctgagat agggcctcag gaccagggaa cctacagctg
961 tgtggccacc cattccagcc acgggcccca ggaaagccgt gctgtcagca tcagcatcat
1021 cgaaccaggc gaggaggggc caactgcagg tgaggggttt gataaagtca gggaagcaga
1081 agatagcccc caacacatgt gactgggggg atggtcaaca agaaaggaat ggaaggcccc
1141 agaaaaccag gaggaagagg aggagcgtgc agaactgaat cagtcggagg aacctgaggc
1201 aggcgagagt agtactggag ggccttgagg ggcccacaga cagatccca
서열 번호 6: 내인성 분비 RAGE 변이체 6
1 atggcagccg gaacagcagt tggagcctgg gtgctggtcc tcagtctgtg gggggcagta
61 gtaggtgctc aaaacatcac agcccggatt ggcgagccac tggtgctgaa gtgtaagggg
121 gcccccaaga aaccacccca gcggctggaa tggaaactga acacaggccg gacagaagct
181 tggaaggtcc tgtctcccca gggaggaggc ccctgggaca gtgtggctcg tgtccttccc
241 aacggctccc tcttccttcc ggctgtcggg atccaggatg aggggatttt ccggtgccag
301 gcaatgaaca ggaatggaaa ggagaccaag tccaactacc gagtccgtgt ctaccagatt
361 cctgggaagc cagaaattgt agattctgcc tctgaactca cggctggtgt tcccaataag
421 gtggggacat gtgtgtcgga gggaagctac cctgcaggga ctcttagctg gcacttggat
481 gggaagcccc tggtgcctaa tgagaaggga gtatctgtga aggaacagac caggagacac
541 cctgagacag ggctcttcac actgcagtcg gagctaatgg tgaccccagc ccggggagga
601 gatccccgtc ccaccttctc ctgtagcttc agcccaggcc ttccccgaca ccgggccttg
661 cgcacagccc ccatccagcc ccgtgtctgg gagcctgtgc ctctggagga ggtccaattg
721 gtggtggagc cagaaggtgg agcagtagct cctggtggaa ccgtaaccct gacctgtgaa
781 gtccctgccc agccctctcc tcaaatccac tggatgaagg atggggtgcc cttgcccctt
841 ccccccagcc ctgtgctgat cctccctgag atagggcctc aggaccaggg aacctacagc
901 tgtgtggcca cccattccag ccacgggccc caggaaagcc gtgctgtcag catcagcatc
961 atcggtgaga cctctcccca agccctacag accctgggac tagggtgcag gacagcacag
1021 gctctaattt cctgccccat tctggcctta tccctaacag ccaccccacc tctccctcca
1081 tgcacccaca cccaagcctc ccctgcccca cccaaattct gccaagagag cagccaagcc
1141 tctcccttct tccctctgag ctaa
SEQUENCE LISTING <110> Ohio State Innovation Foundation <120> ONCOLYTIC VIRUSES COMPRISING esRAGE AND METHODS OF TREATING CANCER <130> 10336-323WO1 <140> PCT/US2017/032300 <141> 2017-05-11 <160> 6 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 1223 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 1 gccaggaccc tggaaggaag caggatggca gccggaacag cagttggagc ctgggtgctg 60 gtcctcagtc tgtggggggc agtagtaggt gctcaaaaca tcacagcccg gattggcgag 120 ccactggtgc tgaagtgtaa gggggccccc aagaaaccac cccagcggct ggaatggaaa 180 ctgaacacag gccggacaga agcttggaag gtcctgtctc cccagggagg aggcccctgg 240 gacagtgtgg ctcgtgtcct tcccaacggc tccctcttcc ttccggctgt cgggatccag 300 gatgagggga ttttccggtg ccaggcaatg aacaggaatg gaaaggagac caagtccaac 360 taccgagtcc gtgtctacca gattcctggg aagccagaaa ttgtagattc tgcctctgaa 420 ctcacggctg gtgttcccaa taaggtgggg acatgtgtgt cagagggaag ctaccctgca 480 gggactctta gctggcactt ggatgggaag cccctggtgc ctaatgagaa gggagtatct 540 gtgaaggaac agaccaggag acaccctgag acagggctct tcacactgca gtcggagcta 600 atggtgaccc cagcccgggg aggagatccc cgtcccacct tctcctgtag cttcagccca 660 ggccttcccc gacaccgggc cttgcgcaca gcccccatcc agccccgtgt ctgggagcct 720 gtgcctctgg aggaggtcca attggtggtg gagccagaag gtggagcagt agctcctggt 780 ggaaccgtaa ccctgacctg tgaagtccct gcccagccct ctcctcaaat ccactggatg 840 aaggatggtg tgcccttgcc ccttcccccc agccctgtgc tgatcctccc tgagataggg 900 cctcaggacc agggaaccta cagctgtgtg gccacccatt ccagccacgg gccccaggaa 960 agccgtgctg tcagcatcag catcatcgaa ccaggcgagg aggggccaac tgcaggtgag 1020 gggtttgata aagtcaggga agcagaagat agcccccaac acatgtgact ggggggatgg 1080 tcaacaagaa aggaatggaa ggccccagaa aaccaggagg aagaggagga gcgtgcagaa 1140 ctgaatcagt cggaggaacc tgaggcaggc gagagtagta ctggagggcc ttgaggggcc 1200 cacagacaga tcccatccat cag 1223 <210> 2 <211> 1194 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 2 aggaagcagg atggcagccg gaacagcagt tggagcctgg gtgctggtcc tcagtctgtg 60 gggggcagta gtaggtgctc aaaacatcac agcccggatt ggcgagccac tggtgctgaa 120 gtgtaagggg gcccccaaga aaccacccca gcggctggaa tggaaactga acacaggccg 180 gacagaagct tggaaggtcc tgtctcccca gggaggaggc ccctgggaca gtgtggctcg 240 tgtccttccc aacggctccc tcttccttcc ggctgtcggg atccaggatg aggggatttt 300 ccggtgccag gcaatgaaca ggaatggaaa ggagaccaag tccaactacc gagtccgtgt 360 ctaccagatt cctgggaagc cagaaattgt agattctgcc tctgaactca cggctggtgt 420 tcccaataag gtggggacat gtgtgtcaga gggaagctac cctgcaggga ctcttagctg 480 gcacttggat gggaagcccc tggtgcctaa tgagaaggga gtatctgtga aggaacagac 540 caggagacac cctgagacag ggctcttcac actgcagtcg gagctaatgg tgaccccagc 600 ccggggagga gatccccgtc ccaccttctc ctgtagcttc agcccaggcc ttccccgaca 660 ccgggccttg cgcacagccc ccatccagcc ccgtgtctgg gagcctgtgc ctctggagga 720 ggtccaattg gtggtggagc cagaaggtgg agcagtagct cctggtggaa ccgtaaccct 780 gacctgtgaa gtccctgccc agccctctcc tcaaatccac tggatgaagg atggcctcag 840 gaccagggaa cctacagctg tgtggccacc cattccagcc acgggcccca ggaaagccgt 900 gctgtcagca tcagcatcat cgaaccaggc gaggaggggc caactgcagg ctctgtggga 960 ggatcagggc tgggaactct agccctggcc ctggggatcc tgggaggcct ggggacagcc 1020 gccctgctca ttggggtcat cttgtggcaa aggcggcaac gccgaggaga ggagaggaag 1080 gccccagaaa accaggagga agaggaggag cgtgcagaac tgaatcagtc ggaggaacct 1140 gaggcaggcg agagtagtac tggagggcct tgaggggccc acagacagat ccca 1194 <210> 3 <211> 1201 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 3 aggaagcagg atggcagccg gaacagcagt tggagcctgg gtgctggtcc tcagtctgtg 60 gggggcagta gtaggtgctc aaaacatcac agcccggatt ggcgagccac tggtgctgaa 120 gtgtaagggg gcccccaaga aaccacccca gcggctggaa tggaaactga acacaggccg 180 gacagaagct tggaaggtcc tgtctcccca gggaggaggc ccctgggaca gtgtggctcg 240 tgtccttccc aacggctccc tcttccttcc ggctgtcggg atccaggatg aggggatttt 300 ccggtgccag gcaatgaaca ggaatggaaa ggagaccaag tccaactacc gagtccgtgt 360 ctaccagatt cctgggaagc cagaaattgt agattctgcc tctgaactca cggctggtgt 420 tcccaataag gtggggacat gtgtgtcaga gggaagctac cctgcaggga ctcttagctg 480 gcacttggat gggaagcccc tggtgcctaa tgagaaggga gtatctgtga aggaacagac 540 caggagacac cctgagacag ggctcttcac actgcagtcg gagctaatgg tgaccccagc 600 ccggggagga gatccccgtc ccaccttctc ctgtagcttc agcccaggcc ttccccgaca 660 ccgggccttg cgcacagccc ccatccagcc ccgtgtctgg gagcctgtgc ctctggagga 720 ggtccaattg gtggtggagc cagaaggtgg agcagtagct cctggtggaa ccgtaaccct 780 gacctgtgaa gtccctgccc agccctctcc tcaaatccac tggatgaagg atggtgtgcc 840 cttgcccctt ccccccagcc ctgtgctgat cctccctgag atagggcctc aggaccaggg 900 aacctacagc tgtgtggcca cccattccag ccacgggccc caggaaagcc gtgctgtcag 960 catcagcatc atcgaaccag gcgaggaggg gccaactgca ggtgaggggt ttgataaagt 1020 cagggaagca gaagatagcc cccaacacat gtgactgggg ggatggtcaa caagaaagga 1080 atggaaggcc ccagaaaacc aggaggaaga ggaggagcgt gcagaactga atcagtcgga 1140 ggaacctgag gcaggcgaga gtagtactgg agggccttga ggggcccaca gacagatccc 1200 a 1201 <210> 4 <211> 1149 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 4 aggaagcagg atggcagccg gaacagcagt tggagcctgg gtgctggtcc tcagtctgtg 60 gggggcagta gtaggtgctc aaaacatcac agcccggatt ggcgagccac tggtgctgaa 120 gtgtaagggg gcccccaaga aaccacccca gcggctggaa tggaaactga acacaggccg 180 gacagaagct tggaaggtcc tgtctcccca gggaggaggc ccctgggaca gtgtggctcg 240 tgtccttccc aacggctccc tcttccttcc ggctgtcggg atccaggatg aggggatttt 300 ccggtgccag gcaatgaaca ggaatggaaa ggagaccaag tccaactacc gagtccgtgt 360 ctaccagatt cctgggaagc cagaaattgt agattctgcc tctgaactca cggctggtgt 420 tcccaataag gtggggacat gtgtgtcaga gggaagctac cctgcaggga ctcttagctg 480 gcacttggat gggaagcccc tggtgcctaa tgagaaggga gtatctgtga aggaacagac 540 caggagacac cctgagacag ggctcttcac actgcagtcg gagctaatgg tgaccccagc 600 ccggggagga gatccccgtc ccaccttctc ctgtagcttc agcccaggcc ttccccgaca 660 ccgggccttg cgcacagccc ccatccagcc ccgtgtctgg gagcctgtgc ctctggagga 720 ggtccaattg gtggtggagc cagaaggtgg agcagtagct cctggtggaa ccgtaaccct 780 gacctgtgaa gtccctgccc agccctctcc tcaaatccac tggatgaagg atggcctcag 840 gaccagggaa cctacagctg tgtggccacc cattccagcc acgggcccca ggaaagccgt 900 gctgtcagca tcagcatcat cgaaccaggc gaggaggggc caactgcagg tgaggggttt 960 gataaagtca gggaagcaga agatagcccc caacacatgt gactgggggg atggtcaaca 1020 agaaaggaat ggaaggcccc agaaaaccag gaggaagagg aggagcgtgc agaactgaat 1080 cagtcggagg aacctgaggc aggcgagagt agtactggag ggccttgagg ggcccacaga 1140 cagatccca 1149 <210> 5 <211> 1249 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 5 aggaagcagg atggcagccg gaacagcagt tggagcctgg gtgctggtcc tcagtctgtg 60 gggggcagta gtaggtgctc aaaacatcac agcccggatt ggcgagccac tggtgctgaa 120 gtgtaagggg gcccccaaga aaccacccca gcggctggaa tggaaactga acacaggccg 180 gacagaagct tggaaggtcc tgtctcccca gggaggaggc ccctgggaca gtgtggctcg 240 tgtccttccc aacggctccc tcttccttcc ggctgtcggg atccaggatg aggggatttt 300 ccggtgccag gcaatgaaca ggaatggaaa ggagaccaag tccaactacc gagtccgtgt 360 ctaccagatt cctgggaagc cagaaattgt agattctgcc tctgaactca cggctggtgt 420 tcccaataag gtagtggaag aaagcaggag aagtagaaaa cggccctgtg aacaggaggt 480 ggggacatgt gtgtcagagg gaagctaccc tgcagggact cttagctggc acttggatgg 540 gaagcccctg gtgcctaatg agaagggagt atctgtgaag gaacagacca ggagacaccc 600 tgagacaggg ctcttcacac tgcagtcgga gctaatggtg accccagccc ggggaggaga 660 tccccgtccc accttctcct gtagcttcag cccaggcctt ccccgacacc gggccttgcg 720 cacagccccc atccagcccc gtgtctggga gcctgtgcct ctggaggagg tccaattggt 780 ggtggagcca gaaggtggag cagtagctcc tggtggaacc gtaaccctga cctgtgaagt 840 ccctgcccag ccctctcctc aaatccactg gatgaaggat ggtgtgccct tgccccttcc 900 ccccagccct gtgctgatcc tccctgagat agggcctcag gaccagggaa cctacagctg 960 tgtggccacc cattccagcc acgggcccca ggaaagccgt gctgtcagca tcagcatcat 1020 cgaaccaggc gaggaggggc caactgcagg tgaggggttt gataaagtca gggaagcaga 1080 agatagcccc caacacatgt gactgggggg atggtcaaca agaaaggaat ggaaggcccc 1140 agaaaaccag gaggaagagg aggagcgtgc agaactgaat cagtcggagg aacctgaggc 1200 aggcgagagt agtactggag ggccttgagg ggcccacaga cagatccca 1249 <210> 6 <211> 1164 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 6 atggcagccg gaacagcagt tggagcctgg gtgctggtcc tcagtctgtg gggggcagta 60 gtaggtgctc aaaacatcac agcccggatt ggcgagccac tggtgctgaa gtgtaagggg 120 gcccccaaga aaccacccca gcggctggaa tggaaactga acacaggccg gacagaagct 180 tggaaggtcc tgtctcccca gggaggaggc ccctgggaca gtgtggctcg tgtccttccc 240 aacggctccc tcttccttcc ggctgtcggg atccaggatg aggggatttt ccggtgccag 300 gcaatgaaca ggaatggaaa ggagaccaag tccaactacc gagtccgtgt ctaccagatt 360 cctgggaagc cagaaattgt agattctgcc tctgaactca cggctggtgt tcccaataag 420 gtggggacat gtgtgtcgga gggaagctac cctgcaggga ctcttagctg gcacttggat 480 gggaagcccc tggtgcctaa tgagaaggga gtatctgtga aggaacagac caggagacac 540 cctgagacag ggctcttcac actgcagtcg gagctaatgg tgaccccagc ccggggagga 600 gatccccgtc ccaccttctc ctgtagcttc agcccaggcc ttccccgaca ccgggccttg 660 cgcacagccc ccatccagcc ccgtgtctgg gagcctgtgc ctctggagga ggtccaattg 720 gtggtggagc cagaaggtgg agcagtagct cctggtggaa ccgtaaccct gacctgtgaa 780 gtccctgccc agccctctcc tcaaatccac tggatgaagg atggggtgcc cttgcccctt 840 ccccccagcc ctgtgctgat cctccctgag atagggcctc aggaccaggg aacctacagc 900 tgtgtggcca cccattccag ccacgggccc caggaaagcc gtgctgtcag catcagcatc 960 atcggtgaga cctctcccca agccctacag accctgggac tagggtgcag gacagcacag 1020 gctctaattt cctgccccat tctggcctta tccctaacag ccaccccacc tctccctcca 1080 tgcacccaca cccaagcctc ccctgcccca cccaaattct gccaagagag cagccaagcc 1140 tctcccttct tccctctgag ctaa 1164

Claims (15)

  1. 변형된 종양용해성 바이러스로서,
    상기 종양용해성 바이러스는 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 또는 서열 번호 6과의 적어도 90% 서열 동일성을 포함하는 최종 당화 산물에 대한 내인성 분비 수용체 (esRAGE) 유전자 또는 이의 기능성 단편 또는 변이체를 인코딩 및 발현하도록 변형된, 변형된 종양용해성 바이러스.
  2. 제1항에 있어서, 바이러스 골격이, 변형된 또는 조작된 아데노바이러스, 아데노-관련성 바이러스, 1형 단순 포진 바이러스, 2형 단순 포진 바이러스, 수두 대상 포진 바이러스, 엡스타인-바르(Epstein-Barr) 바이러스, 거대세포바이러스, 6형 인간 헤르페스 바이러스, 바리올라(Variola) 바이러스, 우두 바이러스, 전염성 연속종 바이러스, 양아구창 바이러스, 레오바이러스, 로타바이러스, 엔테로바이러스, 세네카바이러스, 폴리오바이러스, 콕사키 바이러스, 리노바이러스, A형 간염 바이러스, 구제역 바이러스, 토가바이러스, 알파바이러스, 셈리키 삼림(Semliki Forest) 바이러스, 동부 말 뇌염(Eastern Equine Encephalitis) 바이러스, 신드비스(Sindbis) 바이러스, 풍진 바이러스, 코로나바이러스, 플라비바이러스, C형 간염 바이러스, 일본 뇌염 바이러스, 세인트루이스 뇌염(St. Louis Encephalitis) 바이러스, 머레이 계곡(Murray Valley) 열 바이러스, 황열 바이러스, 웨스트 나일(West Nile) 바이러스, 지카 바이러스, 뎅기 바이러스, 에볼라 바이러스, 마르부르크(Marburg) 바이러스, 아레나바이러스, 라사 열 바이러스, 림프구성 맥락수막염 바이러스, 피친드(Pichinde) 바이러스, 주닌(Junin) 바이러스, 마추포(Machupo) 바이러스, 한탄(Hantaan) 바이러스, 리프트 계곡(Rift Valley) 열 바이러스, 파라믹소바이러스, 인간 파라인플루엔자 바이러스, 볼거리 바이러스, 유인원 바이러스 5, 홍역 바이러스, 소포성 구내염 바이러스, 광견병 바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스, 오르토믹소바이러스, A형 인플루엔자 바이러스, B형 인플루엔자 바이러스, C형 인플루엔자 바이러스, D형 간염 바이러스, 유인원 면역결핍 바이러스, 1형 인간 면역결핍 바이러스, 및 2형 인간 면역결핍 바이러스, 라우스 육종 바이러스, 1형 인간 T-세포 백혈병 바이러스, 유인원 포말상 바이러스, B형 간염 바이러스, E형 간염 바이러스, 인간 파필로마바이러스, 또는 폴리오마바이러스로부터 유래되는, 변형된 종양용해성 바이러스.
  3. 제2항에 있어서, 상기 종양용해성 바이러스는 1형 단순 포진 바이러스이며; 상기 바이러스는 HSV-1 종양용해성 바이러스 HSV1716, 34.5ENVE (viral ICP34.5 Expressed by Nestin promotor and Vstat120 Expressing)인, 변형된 종양용해성 바이러스.
  4. 제2항에 있어서, 상기 종양용해성 바이러스는 변형된 아데노바이러스 종양용해성 바이러스이며; 상기 아데노바이러스는 H101인, 변형된 종양용해성 바이러스.
  5. 제2항에 있어서, 상기 종양용해성 바이러스는 변형된 우두 바이러스이며; 상기 변형된 우두 바이러스는 GL-ONC1 또는 JX-594인, 변형된 종양용해성 바이러스.
  6. 제2항에 있어서, 상기 종양용해성 바이러스는 변형된 레오바이러스이며; 상기 변형된 레오바이러스는 레오라이신인, 변형된 종양용해성 바이러스.
  7. 제2항에 있어서, 상기 종양용해성 바이러스는 변형된 엔테로바이러스이며, 상기 변형된 엔테로바이러스는 리가 바이러스인, 변형된 종양용해성 바이러스.
  8. 제2항에 있어서, 상기 종양용해성 바이러스는 변형된 세네카바이러스이며, 상기 변형된 세네카바이러스는 SVV-001 바이러스인, 변형된 종양용해성 바이러스.
  9. 제2항에 있어서, 상기 종양용해성 바이러스는 변형된 폴리오바이러스이며, 상기 변형된 폴리오바이러스는 PVSRIPO 바이러스인, 변형된 종양용해성 바이러스.
  10. 제2항에 있어서, 상기 종양용해성 바이러스는 변형된 콕사키 바이러스이며, 상기 변형된 콕사키 바이러스는 A21 바이러스인, 변형된 종양용해성 바이러스.
  11. 제1항의 종양용해성 바이러스 및 약제학적 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  12. 암을 가진 대상체를 치료하는 방법으로서,
    제1항의 종양용해성 바이러스를 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  13. 암을 가진 대상체를 치료하는 방법으로서,
    변형된 종양용해성 바이러스를 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 종양용해성 바이러스는 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 또는 서열 번호 6과의 적어도 90% 서열 동일성을 포함하는 최종 당화 산물에 대한 내인성 분비 수용체 (esRAGE) 유전자 또는 이의 기능성 단편 또는 변이체를 인코딩 및 발현하도록 변형된, 방법.
  14. 제13항에 있어서, 상기 암은 B 세포 림프종, T 세포 림프종, 마이코시스 진균증, 호지킨병, 골수성 백혈병, 편평 세포 암종, 선암종, 육종, 신경교종, 고등급 신경교종, 아세포종, 신경아세포종, 골육종, 형질세포종, 조직구종, 흑색종, 선종, 저산소성 종양, 골수종, AIDS-관련 림프종 또는 육종, 방광암, 뇌암, 신경계 암, 두경부암, 두경부의 편평 세포 암종, 폐암, 예컨대 소세포 폐암 및 비소세포 폐암, 신경아세포종/교아세포종, 난소암, 췌장암, 전립선암, 피부암, 간암, 흑색종, 구강, 인후, 후두, 및 폐의 편평 세포 암종, 결장암, 자궁경부암, 자궁경부 암종, 유방암, 및 상피암, 신장암, 비뇨생식기암, 폐암, 식도 암종, 대장암, 조혈암; 고환암; 결장암, 및 직장암으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  15. 암 세포를 제거하는 종양용해성 바이러스의 효능에 대한, 최종 당화 산물에 대한 수용체 (RAGE)의 방해를 억제하도록 상기 종양용해성 바이러스를 변형시키는 방법으로서,
    내인성 분비 RAGE (esRAGE) 유전자를 발현하도록 상기 종양용해성 바이러스를 조작하는 단계를 포함하는, 방법.
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