CN109328075A - 包含esRAGE的溶瘤病毒及治疗癌的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了包含esRAGE基因的经修饰或经改造的新型溶瘤病毒以及使用所述溶瘤病毒治疗癌的方法。

Description

包含esRAGE的溶瘤病毒及治疗癌的方法
背景技术
溶瘤病毒能够通过癌细胞的病毒裂解或宿主免疫应答的募集而特异性靶向癌细胞，因此通过施用溶瘤病毒，已将癌的治疗推向尖端癌疗法的前沿。然而，溶瘤病毒疗法的功效可受到对病毒感染的早期先天性免疫应答的抑制，这减少了oHSV复制、肿瘤破坏和功效。此外，炎症信号可上调内皮细胞上的晚期糖基化终产物受体(RAGE)的表达。任何RAGE配体与RAGE的结合都会引起内皮细胞的增殖、迁移、侵袭、血管生成。因此，需要的是在接受溶瘤病毒疗法的受试者中减少、抑制或防止RAGE信号传导并引起癌细胞的逃逸和增殖的新疗法和治疗方法。
发明内容
公开了与表达内源性分泌型晚期糖基化终产物受体(esRAGE)的溶瘤病毒相关的方法和组合物。
在一个方面，本文公开了经修饰的溶瘤病毒；其中溶瘤病毒经过修饰以编码和表达内源性分泌型晚期糖基化终产物受体(esRAGE)基因或其功能片段或变体，该基因或其功能片段或变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和/或SEQ ID NO:6具有至少90％序列同一性。
在一个方面，任何前述方面的经修饰的溶瘤病毒可包含来源于以下病毒的病毒骨架：经修饰或经改造的腺病毒、腺相关病毒、单纯疱疹病毒1、单纯疱疹病毒2、水痘带状疱疹病毒、EB病毒、巨细胞病毒、人疱疹病毒6型、天花病毒、痘苗病毒、传染性软疣病毒、羊口疮病毒、呼肠孤病毒、轮状病毒、肠道病毒、塞内卡病毒、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、鼻病毒、甲型肝炎病毒、口蹄疫病毒、披膜病毒、甲病毒、塞姆利基森林病毒、东部马脑炎病毒、辛德毕斯病毒、风疹病毒、冠状病毒、黄病毒、丙型肝炎病毒、日本脑炎病毒、圣路易斯脑炎病毒、墨累谷热病毒、黄热病毒、西尼罗河病毒、寨卡病毒、登革病毒、埃博拉病毒、马尔堡病毒、沙粒病毒、拉沙热病毒、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒、皮钦德病毒、胡宁病毒、马丘波病毒、汉坦病毒、裂谷热病毒、副粘病毒、人副流感病毒、腮腺炎病毒、猴病毒5、麻疹病毒、水疱性口炎病毒、狂犬病病毒、呼吸道合胞病毒、正粘病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、丙型流感病毒、丁型肝炎病毒、猴免疫缺陷病毒、人免疫缺陷病毒1型和人免疫缺陷病毒2型、劳氏肉瘤病毒、嗜人T细胞白血病病毒1型、猴泡沫病毒、乙型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、人乳头瘤病毒或多瘤病毒。
还公开了包含任何前述方面的溶瘤病毒和药物载体的药物组合物。
还公开了治疗患有癌的受试者的方法，所述方法包括向受试者施用任何前述方面的溶瘤病毒。
在一个方面，本文公开了治疗患有癌的受试者的方法，所述方法包括向受试者施用经修饰的溶瘤病毒；其中溶瘤病毒经过修饰以编码和表达内源性分泌型晚期糖基化终产物受体(esRAGE)基因或其功能片段，该基因或其功能片段与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和/或SEQ ID NO:6具有至少90％序列同一性。
还公开了任何前述方面的方法，其中该癌选自B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、霍奇金病、骨髓性白血病、鳞状细胞癌、腺癌、肉瘤、胶质瘤、高级别胶质瘤、母细胞瘤、神经母细胞瘤、骨肉瘤、浆细胞瘤、组织细胞瘤、黑色素瘤、腺瘤、缺氧肿瘤、骨髓瘤、AIDS相关淋巴瘤或肉瘤、膀胱癌、脑癌、神经系统癌、头颈癌、头颈部鳞状细胞癌、肺癌(lungcancer)诸如小细胞肺癌和非小细胞肺癌、神经母细胞瘤/胶质母细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌、肝癌、黑色素瘤、嘴、咽、喉和肺鳞状细胞癌、结肠癌、宫颈癌(cervicalcancer)、宫颈癌(cervical carcinoma)、乳腺癌以及上皮癌、肾癌、泌尿系统癌、肺癌(pulmonary cancer)、食管癌、大肠癌、造血系统癌；睾丸癌；结肠癌和直肠癌。
在一个方面，本文公开了修饰溶瘤病毒以抑制晚期糖基化终产物受体(RAGE)干扰溶瘤病毒清除癌细胞的功效的方法，所述方法包括改造溶瘤病毒以表达内源性分泌型RAGE(esRAGE)基因。
附图说明
并入并构成本说明书一部分的附图示出了几个实施方案，并且连同说明书一起示出了所公开的组合物和方法。
图1示出了膜结合RAGE通路的HMGB1活化的通路，该膜结合RAGE通路引起癌细胞的迁移/增殖和血管生成，并且HMGB1与esRAGE的结合导致没有进一步的信号传导和持续的溶瘤病毒复制。
图2A和图2B示出了esRAGE/抗RAGE治疗减少了oHSV介导的EC迁移和渗漏。图2A示出了通过测量EBA渗透汇合内皮细胞(EC)单层的能力来评估内皮细胞渗漏。所示数据是平均EBA±标准差。图2C示出了在用CM±oHSV±esRAGE 200ng/ml或抗RAGE2μg/ml刺激EC之后的EC迁移。所示数据是穿过Transwell膜迁移的EC的平均数±标准差。
图3示出了OVesRAGE有效地表达并分泌esRAGE。
图4示出了OVesRAGE显著地抑制oHSV诱导的EC活化并且增强oHSV复制。
图5示出了OVesRAGE在与HUVEC共培养时增强胶质瘤细胞杀伤。
图6示出了OVesRAGE活化巨噬细胞中的NFkB信号传导。
图7示出了OVesRAGE显著地增强巨噬细胞/小胶质细胞迁移。
图8示出了在溶瘤病毒暴露或表达esRAGE的经修饰的溶瘤病毒暴露后U251T3和BV2细胞中的细胞因子表达的诱导和减少。
图9示出了OVesRAGE显著地增强小胶质细胞/巨噬细胞介导的胶质瘤细胞杀伤。
图10示出了可溶性RAGE(esRAGE)表达增加了被感染受试者的存活率。Fvbn小鼠的DB7颅内手术：2×10^5pfu。OVesRAGE病毒IU单位是对照rHSVQ病毒的20倍，我们决定以pfu注射病毒
具体实施方式
应当理解，在公开和描述本发明化合物、组合物、制品、装置和/或方法之前，除非另有说明，否则它们不限于特定的合成方法或特定的重组生物技术方法，或者除非另有说明，否则不限于特定的试剂，因此当然可以改变。另外应当了解，本文所用的术语只是为了描述具体实施方案的目的，并非旨在进行限制。
A.定义
如本说明书和所附权利要求中所使用的，单数形式“一个”和“所述”包括复数指代，除非上下文另有明确说明。因此，例如，对“药物载体”的提及包括两种或更多种这样的载体的混合物等。
在本文中，范围可被表示为从“约”一个具体的值，和/或到“约”另一个具体的值。当表示这样的范围时，另一个实施方案包括从一个具体的值和/或到其他具体的值。相似地，当前面用“约”将值表示为近似值时，应当理解，该值的具体值构成了另一个实施方案。还应当理解，每个范围的端值相对于另一个端值以及独立于另一个端值都是有意义的。还应当理解，本文公开了许多值，并且除了值本身之外，每个值在本文中也被公开为“约”该特定值。例如，如果公开了值“10”，则还公开了“约10”。还应当理解，当公开一个值时，“小于或等于”该值、“大于或等于该值”和在值之间的可能范围也被公开，如本领域技术人员适当理解的。例如，如果公开了值“10”，则还公开了“小于或等于10”以及“大于或等于10”。还应当理解，在整个申请中，数据以多种不同格式提供，并且该数据表示端点和起点，以及数据点的任何组合的范围。例如，如果公开了特定数据点“10”和特定数据点15，则应当理解，认为公开了大于、大于或等于、小于、小于或等于、等于10和15以及介于10和15之间。还应当理解，还公开了在两个特定单元之间的每个单元。例如，如果公开了10和15，则还公开了11、12、13和14。
在本说明书和随后的权利要求书中，将提及的许多术语将被定义为具有下列含义：
“任选的”或“任选地”意指随后描述的事件或情况可发生或可不发生，并且该描述包括所述事件或情况发生的示例和不发生的示例。
多种出版物的引用贯穿于本申请。这些出版物的公开内容据此全文以引用方式并入本申请中以便更全面地描述其所属领域的现状。本发明所公开的参考文献所包含的材料也单独且具体地通过引用方式并入本文，这些材料在引用文献所依据的句子中进行了讨论。
B.组合物
公开了用于制备所公开的组合物的成份以及在本文公开的方法中使用的组合物本身。本文公开了这些及其他材料，并且应当理解，当公开这些材料的组合、子组、交互、组等时，尽管可能没有明确公开对这些化合物的各种单独和集合组合和排列中每一者的特定引用，但本文对每一者都进行了具体地设想和描述。例如，如果公开和讨论了内源性分泌型晚期糖基化终产物受体(esRAGE)，并且讨论了可对包括晚期糖基化终产物受体(esRAGE)的许多分子进行的许多修饰，则具体地设想晚期糖基化终产物受体(esRAGE)的每一种组合和排列以及可能的修饰，除非明确地指出相反的情况。因此，如果公开了一类分子A、B和C以及一类分子D、E和F，并且公开了组合分子的一个示例A-D，则即使没有单独地列举每一个，每一个都是单独且全部地设想的意义组合，也认为公开了A-E、A-F、B-D、B-E、B-F、C-D、C-E和C-F。同样，还公开了这些的任何子组或组合。因此，例如，将考虑公开A-E、B-F和C-E的子组。该概念适用于本申请的所有方面，包括但不限于制备和使用所公开的组合物的方法中的步骤。因此，如果存在可进行的各种附加步骤，则应当理解，这些附加步骤中的每一个步骤可利用所公开的方法的任何具体实施方案或实施方案的组合来进行。
溶瘤病毒的施用推向尖端癌疗法的前沿。然而，溶瘤病毒疗法的功效可受到对病毒感染的早期先天性免疫应答的抑制，这减少了oHSV复制、肿瘤破坏和功效。此外，炎症信号可上调内皮细胞上的晚期糖基化终产物受体(RAGE)的表达。RAGE是IgG分子的成员。RAGE的配体包括AGE、HMGB1、S100家族、淀粉样蛋白β。RAGE与其配体之间的相互作用被认为会引起促炎基因活化。任何RAGE配体与RAGE的结合都会引起内皮细胞的增殖、迁移、侵袭、血管生成。在溶瘤病毒感染后，RAGE配体的表达增加，这成为影响溶瘤病毒治疗的功效的重大问题，为癌细胞的逃逸提供了机制。
有趣的是，RAGE蛋白质有若干亚型，它们缺乏跨膜结构域和信号传导结构域(通常称为可溶性RAGE或内源性分泌型(esRAGE))。这些esRAGE肽、多肽和蛋白质也可结合RAGE配体。应当理解且本文设想，可利用esRAGE蛋白质来抵御膜结合RAGE的抑制作用。具体地讲，esRAGE可与膜结合RAGE竞争可用配体，这将减少能够通过RAGE进行信号传导的配体的量。此外，由于esRAGe是可溶的并因此分泌到细胞外基质中，它们具有比膜结合RAGE更大的生物可利用性并且也无法引发任何细胞信号级联(图1)。为了测试该系统，LN229细胞用溶瘤病毒感染，搁置不作处理或用esRAGE或抗RAGE配体(HGMB1)抗体处理，并且测量内皮细胞(EC)迁移和渗漏。接受esRAGE或抗HGMB1抗体的细胞显示出减少的渗漏和EC迁移(图2)。
在一个方面，本文公开了经修饰的溶瘤病毒；其中溶瘤病毒经过修饰以编码和表达内源性分泌型晚期糖基化终产物受体(esRAGE)基因或其功能片段或变体，该基因或其功能片段或变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和/或SEQ ID NO:6具有至少90％序列同一性。
在一个方面，任何前述方面的经修饰的溶瘤病毒可包含来源于以下病毒的病毒骨架：经修饰或经改造的腺病毒、腺相关病毒、单纯疱疹病毒1、单纯疱疹病毒2、水痘带状疱疹病毒、EB病毒、巨细胞病毒、人疱疹病毒6型、天花病毒、痘苗病毒、传染性软疣病毒、羊口疮病毒、呼肠孤病毒、轮状病毒、肠道病毒、塞内卡病毒、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、鼻病毒、甲型肝炎病毒、口蹄疫病毒、披膜病毒、甲病毒、塞姆利基森林病毒、东部马脑炎病毒、辛德毕斯病毒、风疹病毒、冠状病毒、黄病毒、丙型肝炎病毒、日本脑炎病毒、圣路易斯脑炎病毒、墨累谷热病毒、黄热病毒、西尼罗河病毒、寨卡病毒、登革病毒、埃博拉病毒、马尔堡病毒、沙粒病毒、拉沙热病毒、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒、皮钦德病毒、胡宁病毒、马丘波病毒、汉坦病毒、裂谷热病毒、副粘病毒、人副流感病毒、腮腺炎病毒、猴病毒5、麻疹病毒、水疱性口炎病毒、狂犬病病毒、呼吸道合胞病毒、正粘病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、丙型流感病毒、丁型肝炎病毒、猴免疫缺陷病毒、人免疫缺陷病毒1型和人免疫缺陷病毒2型、劳氏肉瘤病毒、嗜人T细胞白血病病毒1型、猴泡沫病毒、乙型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、人乳头瘤病毒或多瘤病毒。例如，溶瘤病毒可为单纯疱疹1病毒；并且其中该病毒是HSV-1溶瘤病毒HSV1716，即由Nestin启动子表达且含Vstat120表达的病毒ICP34.5；经修饰的腺病毒溶瘤病毒；并且其中腺病毒是H101；经修饰的痘苗病毒；并且其中经修饰的痘苗病毒是GL-ONC1或JX-594；经修饰的呼肠孤病毒；并且其中经修饰的呼肠孤病毒是reolysin；经修饰的肠道病毒，并且其中经修饰的肠道病毒是Riga病毒；经修饰的塞内卡病毒，并且其中经修饰的塞内卡病毒是SVV-001病毒；经修饰的脊髓灰质炎病毒，并且其中经修饰的脊髓灰质炎病毒是PVSRIPO病毒；和/或经修饰的柯萨奇病毒，并且其中经修饰的柯萨奇病毒是A21病毒。
针对esRAGE表达来测试包含esRAGE的溶瘤病毒(图3)。接下来针对抑制溶瘤病毒诱导的EC活化的能力以及对溶瘤病毒复制的任何不利影响来测试包含并表达esRAGE的溶瘤病毒。与对照相比，表达esRAGe的溶瘤病毒对病毒复制没有任何影响，但的确降低了溶瘤病毒诱导的EC活化(图4)。然后针对对胶质瘤细胞杀伤的影响来测试包含esRAGE的溶瘤病毒。OVesRAGE在与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共培养时增强了胶质瘤细胞杀伤(图5)。OVesRAGE还活化了巨噬细胞中的NFkB信号传导(图6)并且显著地增强了巨噬细胞/小胶质细胞迁移(图7)。然后测量这些病毒以观察其对细胞因子表达的影响。图8示出了在溶瘤病毒暴露或表达esRAGE的经修饰的溶瘤病毒暴露后U251T3和BV2细胞中的细胞因子表达的诱导和减少。RANTES.GM-CSF、IL-1β、IL-7、IL-6、IL-12-p40/p70、TNFα、TCA-3、TIMP-1的表达全都被诱导，而IL-4、IL-1α、嗜酸性粒细胞活化趋化因子-2的表达减少。
应当理解且本文设想，由于所公开的esRAGE溶瘤病毒可成功阻止RAGE通路的信号传导，因此减少RAGE对溶瘤病毒功效的干扰的方法是有价值的。在一个方面，本文公开了修饰溶瘤病毒以抑制晚期糖基化终产物受体(RAGE)干扰溶瘤病毒清除癌细胞的功效的方法，所述方法包括改造溶瘤病毒以表达内源性分泌型RAGE(esRAGE)基因。应当理解且本文设想，可通过修饰溶瘤病毒以表达esRAGE，从而在任何溶瘤病毒中执行所公开的抑制RAGE的方法。
1.同源性/同一性
应当理解，本文公开的基因和蛋白质的任何已知变体和衍生物或可能出现的任何已知变体和衍生物的一种定义方法是通过在与特定已知序列的同源性方面定义变体和衍生物。例如，SEQ ID NO:1、2、3、4、5和6说明了esRAGE的特定序列。具体公开了本文公开的这些和其他基因和蛋白质的变体，这些变体与所述序列具有至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的同源性。本领域技术人员容易理解确定两种蛋白质或核酸诸如基因的同源性的方法。例如，可以在比对两个序列后计算同源性，使得同源性处于其最高水平。
计算同源性的另一种方法可以通过公开的算法来进行。用于比较的序列的最佳比对可以通过“Smith和Waterman，Adv.Appl.Math.，第2期，第482页，1981年”的局部同源性算法，通过“Needleman和Wunsch，J.MoL Biol.，第48期，第443页，1970年”的同源性比对算法，通过“Pearson和Lipman，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，第85期，第2444页，1988年”的搜索相似性方法，通过这些算法的计算机化实现方式(威斯康星遗传学软件包(WisconsinGenetics Software Package)中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，Genetics ComputerGroup,575Science Dr.,Madison,WI)，或通过检查进行。
通过例如“Zuker,M.，Science，第244期，第48-52页，1989年”、“Jaeger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，第86期，第7706-7710页，1989年”、“Jaeger等人，MethodsEnzymol，第183卷，第281-306页，1989年”中所公开的算法可获得核酸的相同类型的同源性，这些文献中至少与核酸比对相关的资料以引用方式并入本文。
2.核酸
本文公开了多种基于核酸的分子，包括例如编码例如esRAGE的核酸、或本文所公开的用于制备表达esRAGE的溶瘤病毒的任何核酸或其片段以及各种功能性核酸。所公开的核酸由例如核苷酸、核苷酸类似物或核苷酸替代物构成。本文讨论了这些和其他分子的非限制性示例。应当理解，例如，当载体在细胞中表达时，所表达的mRNA通常将由A、C、G和U构成。同样，应当理解，如果例如通过例如外源递送将反义分子导入细胞或细胞环境中，则有利的是，反义分子由降低反义分子在细胞环境中的降解的核苷酸类似物构成。
a)核苷酸及相关分子
核苷酸是含有碱基部分、糖部分和磷酸盐部分的分子。核苷酸可通过它们的磷酸盐部分和糖部分连接在一起，从而形成核苷间键。核苷酸的碱基部分可为腺嘌呤-9-基(A)、胞嘧啶-1-基(C)、鸟嘌呤-9-基(G)、尿嘧啶-1-基(U)和胸腺嘧啶-1-基(T)。核苷酸的糖部分是核糖或脱氧核糖。核苷酸的磷酸盐部分是五价磷酸盐。核苷酸的非限制性示例将是3'-AMP(3'-腺苷一磷酸)或5'-GMP(5'-鸟苷一磷酸)。许多种这些类型的分子可在本领域和本文中找到。
核苷酸类似物是含有对碱基部分、糖部分或磷酸盐部分的某种类型的修饰的核苷酸。对核苷酸的修饰是本领域熟知的，并且将包括例如5-甲基胞嘧啶(5-me-C)、5-羟甲基胞嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤和2-氨基腺嘌呤以及在糖部分和磷酸盐部分的修饰。许多种这些类型的分子可在本领域和本文中找到。
核苷酸替代物是与核苷酸具有类似功能特性的分子，但其不含有磷酸盐部分，诸如肽核酸(PNA)。核苷酸替代物是将以沃森-克里克或Hoogsteen方式识别核酸的分子，但是其经由不是磷酸盐部分的部分连接在一起。当与适当的靶核酸相互作用时，核苷酸替代物能符合双螺旋类型的结构。许多种这些类型的分子可在本领域和本文中找到。
也可以将其他类型的分子(缀合物)连接到核苷酸或核苷酸类似物以增强例如细胞摄取。缀合物能够以化学方式连接到核苷酸或核苷酸类似物。此类缀合物包括但不限于脂质部分，诸如胆固醇部分。(Letsinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1989年，第86卷，第6553-6556页)。许多种这些类型的分子可在本领域和本文中找到。
沃森-克里克相互作用是与核苷酸、核苷酸类似物或核苷酸替代物的沃森-克里克面的至少一种相互作用。核苷酸、核苷酸类似物或核苷酸替代物的沃森-克里克面包括基于嘌呤的核苷酸、核苷酸类似物或核苷酸替代物的C2、N1和C6位，以及基于嘧啶的核苷酸、核苷酸类似物或核苷酸替代物的C2、N3、C4位。
Hoogsteen相互作用是发生在核苷酸或核苷酸类似物的Hoogsteen面的相互作用，Hoogsteen面暴露于双链DNA的大沟内。Hoogsteen面包括嘌呤核苷酸的N7位以及嘌呤核苷酸的C6位的反应性基团(NH2或O)。
b)序列
有多种与参与本文所公开的信号传导通路的蛋白质分子(例如esRAGE)有关的序列、或与本文所公开的用于制备esRAGE的任何核酸有关的序列，所有所述序列由核酸编码或者是核酸。这些基因的人类似物以及其他类似物、这些基因的等位基因以及剪接变体和其他类型的变体的序列可在多种蛋白质和基因数据库(包括Genbank)中找到。本领域技术人员理解如何解决序列差异和不同，以及如何调整涉及特定序列的组合物和方法以适应其他相关序列。
3.表达系统
递送至细胞的核酸通常含有表达控制系统。例如，病毒或逆转录病毒系统中插入的基因通常含有启动子和/或增强子，以帮助控制所需基因产物的表达。启动子通常是DNA的一个或多个序列，其相对于转录起始位点处于相对固定的位置时发挥功能。启动子含有RNA聚合酶和转录因子的基本相互作用所需的核心元件，并且可含有上游元件和应答元件。
a)病毒启动子和增强子
控制载体在哺乳动物宿主细胞中转录的优选启动子可从各种来源获得，例如从诸如下列病毒的基因组中获得：多瘤、猴病毒40(SV40)、腺病毒、逆转录病毒、乙型肝炎病毒和最优选的巨细胞病毒，或从异源哺乳动物启动子如β肌动蛋白启动子中获得。SV40病毒的早期启动子和晚期启动子可便利地作为SV40限制片段获得，该片段还含有SV40病毒复制起点(Fiers等人，Nature，第273卷，第113页，1978年)。可便利地获得人巨细胞病毒或单纯疱疹病毒-1的立即早期启动子。当然，来自宿主细胞或相关物种的启动子在本文中也是可用的。
增强子通常是指在距转录起始位点的未固定距离发挥功能的DNA序列，并且可为转录单位的5’(Laimins,L.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.第78卷，第993页，1981年)或3’(Lusky,M.L.等人，Mol.Cell Bio.第3卷，第1108页，1983年)。此外，增强子可位于内含子内(Banerji,J.L.等人，Cell，第33卷，第729页，1983年)以及编码序列自身内(Osborne,T.F.等人，Mol.Cell Bio.第4卷，第1293页，1984年)。它们的长度通常为10至300bp，并且以顺式方式发挥功能。增强子起到增强附近启动子的转录的作用。增强子也常含有介导转录调节的应答元件。启动子也可含有介导转录调节的应答元件。增强子通常决定基因表达的调节。虽然目前已知来自哺乳动物基因(球蛋白、弹性蛋白酶、白蛋白、胎蛋白以及胰岛素)的许多增强子序列，但通常将使用来自真核细胞病毒的增强子进行常规表达。优选的示例是位于复制起点后侧的SV 40增强子(bp 100-270)、巨细胞病毒早期启动子增强子、复制起点后侧的多瘤增强子以及腺病毒增强子。
启动子和/或增强子可通过光或触发它们功能的特异性化学事件来特异性地活化。系统可由诸如四环素和地塞米松的试剂调节。也存在通过暴露于辐照(诸如γ辐照)或烷基化化疗药物来增强病毒载体基因表达的方式。
在某些实施方案中，启动子和/或增强子区域可充当组成型启动子和/或增强子，以使待转录的转录单位区域的表达最大化。在某些构建体中，启动子和/或增强子区域在所有真核细胞类型中是有活性的，即使其仅在特定时间下在特定类型的细胞中表达。该类型的优选启动子是CMV启动子(650个碱基)。其他优选的启动子是SV40启动子、巨细胞病毒(全长启动子)和逆转录病毒载体LTR。
已经证明，所有特异性调节元件均可克隆并用于构建在特定细胞类型(诸如黑色素瘤细胞)中选择性表达的表达载体。胶质纤维酸性蛋白质(GFAP)启动子已用于在胶质源性细胞中选择性表达基因。
真核宿主细胞(酵母、真菌、昆虫、植物、动物、人或有核细胞)中使用的表达载体也可含有可影响mRNA表达的转录终止所需的序列。这些区域被转录为编码组织因子蛋白的mRNA的非翻译部分中的多聚腺苷酸化节段。3'非翻译区也包括转录终止位点。优选的是，转录单位也含有多聚腺苷酸化区域。该区域的一个好处是其增加了转录的单位像mRNA那样被加工和运输的可能性。表达构建体中多聚腺苷酸化信号的鉴定和使用已很好地确立。优选的是，在转基因构建体中使用同源的多聚腺苷酸化信号。在某些转录单位中，多聚腺苷酸化区域来源于SV40早期多聚腺苷酸化信号，并由约400个碱基组成。还优选的是，转录的单位含有单独的或与上述序列组合的其他标准序列，改善构建体的表达或稳定性。
b)标记
病毒载体可包括编码标记产物的核酸序列。这种标记产物用于测定基因是否已被递送至细胞，且一旦递送就会表达。优选的标记基因是大肠杆菌lacZ基因(其编码β-半乳糖苷酶)和绿色荧光蛋白。
在一些实施方案中，该标记可为可选择标记。适合哺乳动物细胞的可选择标记的示例是二氢叶酸还原酶(DHFR)、胸苷激酶、新霉素、新霉素类似物G418、潮霉素以及嘌呤霉素。当此类可选择标记成功地转移到哺乳动物宿主细胞中时，如果被置于选择性压力下，转化的哺乳动物宿主细胞可以存活。有两种广泛使用的不同类别的选择性方案。第一类别是基于细胞的代谢并使用缺乏独立于补充培养基而生长的能力的突变细胞系。两个示例是：CHO DHFR细胞和小鼠LTK细胞。这些细胞缺乏在未添加诸如胸苷、次黄嘌呤之类的营养素的情况下生长的能力。因为这些细胞缺少完整核苷酸合成通路所需的某些基因，因此它们不能存活，除非在补充培养基中提供了缺少的核苷酸。补充培养基的替代方案是向缺少DHFR或TK基因的细胞中导入完整的相应基因，因此改变了它们的生长需求。未用DHFR或TK基因转化的单独细胞在非补充培养基中不能存活。
第二类别是优势选择，其是指任何细胞类型中使用的选择方案但不需要利用突变细胞系。这些方案通常使用药物来抑制宿主细胞的生长。具有新基因的这些细胞将表达赋予药物抗性的蛋白质，并且在选择中存活下来。此类优势选择的示例使用如下药物：新霉素(Southern P.和Berg,P.，J.Molec.Appl.Genet.第1卷，第327页，1982年)、霉酚酸(Mulligan,R.C.和Berg,P.Science，第209卷，第1422页，1980年)或潮霉素(Sugden,B.等人，Mol.Cell.Biol.第5卷，第410-413页，1985年)。这三个示例采用在真核控制下的细菌基因分别赋予对适当的药物G418或新霉素(遗传霉素)、xgpt(霉酚酸)或潮霉素的抗性。其他包括新霉素类似物G418以及嘌呤霉素。
4.药物载体/药物产品递送
如上所述，组合物还可以在药学上可接受的载体中体内施用。因此，在一个方面，本文公开了药物组合物，该药物组合物包含经修饰的溶瘤病毒和药物载体；其中溶瘤病毒经过修饰以编码和表达内源性分泌型晚期糖基化终产物受体(esRAGE)基因或其功能片段或变体，该基因或其功能片段或变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6具有至少90％序列同一性。所谓“药学上可接受的”是指不是生物学或其他方面不合需要的材料，即，该材料可以与核酸或载体一起施用于受试者，而不引起任何不期望的生物效应或不与包含其的药物组合物中的任何其他成分以有害的方式相互作用。自然地选择载体以使活性成分的任何降解最小化，并且使对受试者的任何不良副作用最小化，如本领域的技术人员所熟知的。
组合物可以口服、非肠道(例如，静脉内)、通过肌内注射、通过腹膜内注射、透皮、体外、局部等施用，包括局部鼻内施用或通过吸入施用。如本文所用，“局部鼻内施用”意指通过两个鼻孔中的一个或两个将组合物递送到鼻和鼻腔通道内，并且可以包括用喷涂机制或液滴机制进行递送，或通过核酸或载体的雾化。通过吸入剂施用组合物可以是通过用喷雾或液滴机制经由递送而经鼻或经口的。也可以经由插管法直接递送到呼吸系统的任何区域(例如肺)。所需组合物的确切的量因受试者而异，取决于受试者的种类、年龄、体重和一般状况、所治疗的过敏性障碍的严重程度，所用的特定核酸或载体、其施用模式等。因此，不可能为每种组合物指定确切的量。但是，在给定本文的教导的情况下，本领域的普通技术人员可以仅使用常规实验来确定适当的量。
如果使用的话，非肠道施用组合物通常以注射为特征。注射剂能够以常规形式制备，可以是液体溶液或悬浮液，适于在注射前在液体中溶解或悬浮的固体形式、或者是乳液。最近改进的非肠道施用方法涉及使用缓慢释放或持续释放系统使得保持恒定的剂量。参见例如美国专利No.3,610,795，该专利以引用方式并入本文。
材料可以是溶液、悬浮液(例如，掺入微粒、脂质体或细胞中)。这些可以经由抗体、受体或受体配体靶向特定细胞类型。以下参考文献是使用该技术将特定蛋白质靶向肿瘤组织的示例(Senter等人，Bioconjugate Chem，第2期，第447-451页，1991年；Bagshawe,K.D.，Br.J.Cancer，第60期，第275-281页，1989年；Bagshawe等人，Br.J.Cancer，第58期，第700-703页，1988年；Senter等人，Bioconjugate Chem.，第4期，第3-9页，1993年；Battelli等人，Cancer Immunol.Immunother.，第35期，第421-425页，1992年；Pietersz和McKenzie，Immunolog.Reviews，第129期，第57-80页，1992年；以及Roffler等人，Biochem.Pharmacol，第42期，第2062-2065页，1991年)。载体诸如“隐形”和其他抗体缀合脂质体(包括靶向结肠癌的脂质介导的药物)，受体介导的DNA通过细胞特异性配体靶向，淋巴细胞定向肿瘤靶向和体内小鼠神经胶质瘤细胞的高度特异性治疗性逆转录病毒靶向。以下参考文献是使用该技术将特定蛋白质靶向肿瘤组织的示例(Hughes等人，Cancer Research，第49期，第6214-6220页，1989年；以及Litzinger和Huang，Biochimica et Biophysica Acta，第1104期，第179-187页，1992年。通常，受体涉及组成型或配体诱导的内吞作用途径。这些受体聚集在披网格蛋白小窝中，经由披网格蛋白小泡进入细胞，通过其中受体被分选的酸化内体，并且然后循环到细胞表面在细胞内储存，或在溶酶体中降解。内化途径具有多种功能，诸如营养摄取、去除活化蛋白、清除大分子、机会性进入病毒和毒素、解离和降解配体，以及调节受体水平。许多受体遵循一种以上的细胞内途径，这取决于细胞类型、受体浓度、配体类型、配体化合价和配体浓度。综述了受体介导的内吞作用的分子和细胞机制(Brown和Greene，DNA andCell Biology，第10卷第6期，第399-409页，1991年)。
a)药学上可接受的载体
包括抗体的组合物可与药学上可接受的载体在治疗学上结合使用。
合适的载体及其制剂描述于Remington:The Science and Practice ofPharmacy(第19版)，编辑A.R.Gennaro，Mack Publishing Company,Easton,PA，1995年。通常，在制剂中使用适当量的药学上可接受的盐以使制剂等渗。药学上可接受的载体的示例包括但不限于盐水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。溶液的pH优选为约5至约8，更优选约7至约7.5。其他载体包括缓释制剂，诸如包含抗体的半透性固体疏水性聚合物基质，所述基质为成形制品形式，例如膜、脂质体或微粒。对于本领域的技术人员将显而易见的是，根据例如给药途径和所施用组合物的浓度，某些载体可能是更优选的。
药物载体是本领域的技术人员已知的。这些药物载体最典型地将是用于向人类施用药物的标准载体，包括溶液如生理pH下的无菌水、盐水以及缓冲溶液等。组合物可以肌内或皮下施用。其他化合物将根据本领域的技术人员所使用的标准方法施用。
除了所选择的分子之外，药物组合物还可以包括载体、增稠剂、稀释剂、缓冲剂、防腐剂、表面活性剂等。药物组合物还可以包括一种或多种活性成分，诸如抗微生物剂、消炎药、麻醉剂等。
药物组合物能够以多种方式施用，取决于是否需要局部或全身治疗，并且取决于治疗区域。可以局部地(包括经眼地、经阴道地、经直肠地、鼻内给药)、口服、通过吸入或非肠道地施用，所述非肠道施用为例如通过静脉滴注、皮下、腹膜内或肌内注射。所公开的抗体可以静脉内、腹膜内、肌内、皮下、腔内或透皮施用。
非肠道施用的制剂包括无菌水性溶液或非水性溶液、悬浮液和乳液。非水性溶剂的示例是丙二醇、聚乙二醇、植物油诸如橄榄油，以及可注射的有机酯诸如油酸乙酯。水性载体包括水、醇/水性溶液、乳液或包括盐水和缓冲介质的悬浮液。非肠道载体包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化钠、乳酸林格氏液或固定油。静脉内媒介物包括流体和营养补充剂，电解质补充剂(诸如基于林格氏葡萄糖的那些)等等。还可以存在防腐剂和其他添加剂，诸如例如抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体等。
用于局部施用的制剂可以包括膏剂、洗剂、霜剂、凝胶剂、滴剂、栓剂、喷剂、液体和粉剂。常规的药物载体、水性、粉末或油性基质、增稠剂等可能是必需或期望的。
口服施用的组合物包括粉末或颗粒、悬浮液或水或非水性介质中的溶液、胶囊、小袋或片剂。可能需要增稠剂、调味剂、稀释剂、乳化剂、分散助剂或粘合剂。
一些组合物可以潜在地作为药学上可接受的酸或碱加成盐施用，所述酸或碱加成盐是通过与无机酸(诸如盐酸、氢溴酸、高氯酸、硝酸、硫氰酸、硫酸和磷酸)和有机酸(诸如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸和富马酸)反应，或通过与无机碱(诸如氢氧化钠、氢氧化铵、氢氧化钾)和有机碱(诸如单烷基胺、二烷基胺、三烷基胺和芳基胺以及取代的乙醇胺)反应形成的。
b)治疗用途
用于施用组合物的有效剂量和时间表可凭经验确定，并且进行此类测定在本领域技术范围内。组合物施用的剂量范围大到足以产生障碍症状受到影响的期望效应。剂量不应大到引起不良副作用，例如不希望的交叉反应、过敏反应等。一般来讲，剂量将随患者的年龄、状况、性别和疾病程度、施用途径或是否包括在该方案中的其他药物而变化，并且可由本领域的技术人员确定。在任何禁忌症的情况下，个体医师可以调整剂量。剂量可以变化，并且可在一天或几天内每天给予一次或多次剂量施用。对于给定类别的药物产品，可以在文献中找到关于适当剂量的指导。例如，可以在关于抗体的治疗用途的文献中找到关于选择抗体的合适剂量的指导，例如，Handbook of Monoclonal Antibodies，Ferrone等人编辑，Noges Publications,Park Ridge,N.J.，1985年，第22章，第303-357页；Smith等人，Antibodies in Human Diagnosis and Therapy，Haber等人编辑，Raven Press,New York，1977年，第365-389页。根据上述因素，单独使用的抗体的典型日剂量可以为每天约1μg/kg至最多100mg/kg体重或更多。
C.治疗癌的方法
在一个方面，应当理解，所公开的溶瘤病毒可用于治疗任何发生不受控制的细胞增殖的疾病，诸如癌。如本文所指出，现有技术证实，通过膜结合RAGE进行结合和信号传导的活化炎症分子引起了癌细胞的增殖、迁移和血管生成。所公开的溶瘤病毒通过表达可溶性(即，内源性分泌型)RAGE(esRAGE)来解决该问题，该esRAGE可结合细胞外基质中的RAGE配体，因此限制了通过膜结合RAGE的任何结合和后续信号传导。esRAGE的表达未改变自然杀伤细胞介导的肿瘤杀伤。实际上，如图9所示，OVesRAGE显著地增强小胶质细胞/巨噬细胞介导的胶质瘤细胞杀伤。这种经由可溶性RAGE(esRAGE)表达而增强的肿瘤靶向杀伤增加了被感染受试者的存活率(图10)。因此，在一个方面，本文公开了治疗患有癌的受试者的方法，所述方法包括向受试者施用本文所公开的任何包含esRAGE的溶瘤病毒。例如，本文公开了治疗患有癌的受试者的方法，所述方法包括向受试者施用经修饰的溶瘤病毒；其中溶瘤病毒经过修饰以编码和表达内源性分泌型晚期糖基化终产物受体(esRAGE)基因或其功能片段，该基因或其功能片段与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQID NO:5或SEQ ID NO:6具有至少90％序列同一性。
可使用所公开的包含esRAGE的溶瘤病毒治疗的不同类型的癌的非限制性列表如下：淋巴瘤(霍奇金和非霍奇金)、白血病、癌、实体组织癌、鳞状细胞癌、腺癌、肉瘤、胶质瘤、高级别胶质瘤、母细胞瘤、神经母细胞瘤、骨肉瘤、浆细胞瘤、组织细胞瘤、黑色素瘤、腺瘤、缺氧肿瘤、骨髓瘤、AIDS相关淋巴瘤或肉瘤、转移癌或一般的癌。
所公开的组合物可用于治疗的癌的代表性但非限制性列表如下：淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、霍奇金病、骨髓性白血病、鳞状细胞癌、腺癌、肉瘤、胶质瘤、高级别胶质瘤、母细胞瘤、神经母细胞瘤、骨肉瘤、浆细胞瘤、组织细胞瘤、黑色素瘤、腺瘤、缺氧肿瘤、骨髓瘤、AIDS相关淋巴瘤或肉瘤、膀胱癌、脑癌、神经系统癌、头颈部鳞状细胞癌、肺癌(lung cancer)诸如小细胞肺癌和非小细胞肺癌、神经母细胞瘤/胶质母细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌、肝癌、黑色素瘤、嘴、咽、喉和肺鳞状细胞癌、结肠癌、宫颈癌(cervical cancer)、宫颈癌(cervical carcinoma)、乳腺癌以及上皮癌、肾癌、泌尿系统癌、肺癌(pulmonary cancer)、食管癌、大肠癌、造血系统癌；睾丸癌；结肠癌和直肠癌。
应当理解且本文设想，可使用包含任何溶瘤病毒骨架的本文所公开的任何溶瘤病毒来应用所公开的治疗癌的方法。因此，在一个方面，本文公开了治疗受试者的癌的方法，所述方法包括向受试者施用经修饰的溶瘤病毒；其中溶瘤病毒经过修饰以编码和表达内源性分泌型晚期糖基化终产物受体(esRAGE)基因或其功能片段，该基因或其功能片段与SEQID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6具有至少90％序列同一性；其中溶瘤病毒的病毒骨架来源于经修饰或经改造的腺病毒、腺相关病毒、单纯疱疹病毒1、单纯疱疹病毒2、水痘带状疱疹病毒、EB病毒、巨细胞病毒、人疱疹病毒6型、天花病毒、痘苗病毒、传染性软疣病毒、羊口疮病毒、呼肠孤病毒、轮状病毒、肠道病毒、塞内卡病毒、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、鼻病毒、甲型肝炎病毒、口蹄疫病毒、披膜病毒、甲病毒、塞姆利基森林病毒、东部马脑炎病毒、辛德毕斯病毒、风疹病毒、冠状病毒、黄病毒、丙型肝炎病毒、日本脑炎病毒、圣路易斯脑炎病毒、墨累谷热病毒、黄热病毒、西尼罗河病毒、寨卡病毒、登革病毒、埃博拉病毒、马尔堡病毒、沙粒病毒、拉沙热病毒、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒、皮钦德病毒、胡宁病毒、马丘波病毒、汉坦病毒、裂谷热病毒、副粘病毒、人副流感病毒、腮腺炎病毒、猴病毒5、麻疹病毒、水疱性口炎病毒、狂犬病病毒、呼吸道合胞病毒、正粘病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、丙型流感病毒、丁型肝炎病毒、猴免疫缺陷病毒、人免疫缺陷病毒1型和人免疫缺陷病毒2型、劳氏肉瘤病毒、嗜人T细胞白血病病毒1型、猴泡沫病毒、乙型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、人乳头瘤病毒或多瘤病毒。
D.序列
SEQ ID NO:1内源性分泌型RAGE变体1
SEQ ID NO:2：内源性分泌型RAGE变体2
SEQ ID NO:3：内源性分泌型RAGE变体3
SEQ ID NO:4：内源性分泌型RAGE变体4
SEQ ID NO:5：内源性分泌型RAGE变体5
SEQ ID NO:6：内源性分泌型RAGE变体6

Claims (15)

1.一种经修饰的溶瘤病毒；其中所述溶瘤病毒经过修饰以编码和表达内源性分泌型晚期糖基化终产物受体(esRAGE)基因或其功能片段或变体，所述基因或其功能片段或变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6具有至少90％序列同一性。
2.根据权利要求1所述的经修饰的溶瘤病毒，其中所述病毒骨架来源于经修饰或经改造的腺病毒、腺相关病毒、单纯疱疹病毒1、单纯疱疹病毒2、水痘带状疱疹病毒、EB病毒、巨细胞病毒、人疱疹病毒6型、天花病毒、痘苗病毒、传染性软疣病毒、羊口疮病毒、呼肠孤病毒、轮状病毒、肠道病毒、塞内卡病毒、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、鼻病毒、甲型肝炎病毒、口蹄疫病毒、披膜病毒、甲病毒、塞姆利基森林病毒、东部马脑炎病毒、辛德毕斯病毒、风疹病毒、冠状病毒、黄病毒、丙型肝炎病毒、日本脑炎病毒、圣路易斯脑炎病毒、墨累谷热病毒、黄热病毒、西尼罗河病毒、寨卡病毒、登革病毒、埃博拉病毒、马尔堡病毒、沙粒病毒、拉沙热病毒、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒、皮钦德病毒、胡宁病毒、马丘波病毒、汉坦病毒、裂谷热病毒、副粘病毒、人副流感病毒、腮腺炎病毒、猴病毒5、麻疹病毒、水疱性口炎病毒、狂犬病病毒、呼吸道合胞病毒、正粘病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、丙型流感病毒、丁型肝炎病毒、猴免疫缺陷病毒、人免疫缺陷病毒1型和人免疫缺陷病毒2型、劳氏肉瘤病毒、嗜人T细胞白血病病毒1型、猴泡沫病毒、乙型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、人乳头瘤病毒或多瘤病毒。
3.根据权利要求2所述的经修饰的溶瘤病毒，其中所述溶瘤病毒是单纯疱疹1病毒；并且其中所述病毒是HSV-1溶瘤病毒HSV1716，即由Nestin启动子表达且含Vstat120表达的病毒ICP34.5。
4.根据权利要求2所述的经修饰的溶瘤病毒，其中所述溶瘤病毒是经修饰的腺病毒溶瘤病毒；并且其中所述腺病毒是H101。
5.根据权利要求2所述的经修饰的溶瘤病毒，其中所述溶瘤病毒是经修饰的痘苗病毒；并且其中所述经修饰的痘苗病毒是GL-ONC1或JX-594。
6.根据权利要求2所述的经修饰的溶瘤病毒，其中所述溶瘤病毒是经修饰的呼肠孤病毒；并且其中所述经修饰的呼肠孤病毒是reolysin。
7.根据权利要求2所述的经修饰的溶瘤病毒，其中所述溶瘤病毒是经修饰的肠道病毒，并且其中所述经修饰的肠道病毒是Riga病毒。
8.根据权利要求2所述的经修饰的溶瘤病毒，其中所述溶瘤病毒是经修饰的塞内卡病毒，并且其中所述经修饰的塞内卡病毒是SVV-001病毒。
9.根据权利要求2所述的经修饰的溶瘤病毒，其中所述溶瘤病毒是经修饰的脊髓灰质炎病毒，并且其中所述经修饰的脊髓灰质炎病毒是PVSRIPO病毒。
10.根据权利要求2所述的经修饰的溶瘤病毒，其中所述溶瘤病毒是经修饰的柯萨奇病毒，并且其中所述经修饰的柯萨奇病毒是A21病毒。
11.一种药物组合物，包含药物载体和根据权利要求1所述的溶瘤病毒。
12.一种治疗患有癌的受试者的方法，包括向所述受试者施用根据权利要求1所述的溶瘤病毒。
13.一种治疗患有癌的受试者的方法，包括向所述受试者施用经修饰的溶瘤病毒；其中所述溶瘤病毒经过修饰以编码和表达内源性分泌型晚期糖基化终产物受体(esRAGE)基因或其功能片段或变体，所述基因或其功能片段或变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6具有至少90％序列同一性。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述癌选自B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、霍奇金病、骨髓性白血病、鳞状细胞癌、腺癌、肉瘤、胶质瘤、高级别胶质瘤、母细胞瘤、神经母细胞瘤、骨肉瘤、浆细胞瘤、组织细胞瘤、黑色素瘤、腺瘤、缺氧肿瘤、骨髓瘤、AIDS相关淋巴瘤或肉瘤、膀胱癌、脑癌、神经系统癌、头颈癌、头颈部鳞状细胞癌、肺癌(lungcancer)诸如小细胞肺癌和非小细胞肺癌、神经母细胞瘤/胶质母细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌、肝癌、黑色素瘤、嘴、咽、喉和肺鳞状细胞癌、结肠癌、宫颈癌(cervicalcancer)、宫颈癌(cervical carcinoma)、乳腺癌以及上皮癌、肾癌、泌尿系统癌、肺癌(pulmonary cancer)、食管癌、大肠癌、造血系统癌；睾丸癌；结肠癌和直肠癌。
15.一种修饰溶瘤病毒以抑制晚期糖基化终产物受体(RAGE)干扰所述溶瘤病毒清除癌细胞的功效的方法，包括改造所述溶瘤病毒以表达内源性分泌型RAGE(esRAGE)基因。
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