KR20180125154A - 아마니타 독소의 유도체 및 세포 결합 분자와의 그것의 결합 - Google Patents

아마니타 독소의 유도체 및 세포 결합 분자와의 그것의 결합 Download PDF

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Abstract

화학식 1의 아마니타 독소의 유도체, 상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, X, L, m, n 및 Q는 본원에서 정의된다. 유도체의 제조. 암, 자가 면역 질환 및 전염병의 표적 치료에서 유도체의 치료적 사용.

Description

아마니타 독소의 유도체 및 세포 결합 분자와의 그것의 결합
본 발명은 신규한 세포 독성제, 아마니타 독소의 유도체 및 이들 유도체를 세포 결합제에 화학적으로 결합시킴으로써 세포군을 특이적으로 표적화하는 용도에 관한 것이다.
단일클론성 항체 (mAb)의 표적화 능력을 이용하여 표적 종양 세포에 독성이 강한 약물을 전달하는 항체 약물 접합체(ADC)는 Seattle Genetics / Takeda의 Brentuximab vedotin (Adcetris)과 ImmunoGen/Roche의 Trastuzumab emtansine (Kadcyla)이 출시된 이후에, 이 제품들이 기술적으로 실현가능하고 치료 효과가 있으며, 규제 승인을 받을 수 있다는 증거가 되었다(Sassoon, I. and Blanc, V. Laurent Ducry (ed.), Antibody-Drug Conjugates, Methods in Molecular Biology, vol. 1045, pl-27). 현재 www.clinictrails.gov에 따르면 50 개가 넘는 ADC 약품들이 임상 시험중에 있으며, 많은 대형 제약 회사 및 생명 공학 회사 뿐만 아니라, 많은 소규모 벤처기업들이 이 기술을 더 개발하는데 투자할 인센티브를 갖는다. 실제로, 세포 독성제, 링커 기술, 항체 성질 및 접합 방법의 4가지 이동 레퍼토리를 가진 항체-약물 접합체의 복잡성은 이 분야를 놀라울 정도로 도전적이면서도 혁신 잠재력으로 가득차게 만든다. (Perez, HL, et al. Drug Discovery Today, 2014, 19 (7), 869-81). 새로운 표적화 리간드에서부터 새로운 부위 특정 접합 방법에 이르기까지, 다중 페이로드에서 약물 항체 비율의 변화에 이르기까지, 기능성 링커에서 균질 화학양론에 이르는 개발은 차세대 ADC 설계 및 개발을 위한 컨벤션에 도전하고 있다 (Zhao, R. et al, PCT / IB2015 / 055051, PCT / IB2015 / 055264, 도입부). 그러나, 강력한 ADC를 생성하는 중요한 핵심 요소는 세포 독성제제이다 (Bourchard, H., et al, Bioorg. Med. Chem. Lett. 2014, 24, 5357-63). ADC에 사용될 수 있는 매우 강력한 세포 독성제제의 한 부류는 아마니틴이며 (Moldenhauer, G. et al., J Natl Cancer Inst 2012, 104 (8) : 622-34, Flygare, JA 외, Chem. Drug, 2013, 81, 113-121 ; WO2010/115629, WO2010/115630, WO2012041504, WO2012119787, WO2014/009025, WO2014135282, 미국 특허 출원 20120213805, 20120100161, 20130259880, 20140294865, 20150218220, EP2416805, EP1661584, EP1859811, EP2497499, EP2774624] (문헌 참조 : [Vetter, J., Toxicon 1998, 36 (1) : 13-24]) 이것은 아마니타 독소의 독성이 매우 강한 성분이다.
아마니타 독소는 주로 트립타티오닌으로 알려진 특이한 Trp-Cys 교량을 함유 한 아마니타 버섯의 고리형 옥타 및 헵타 펩타이드 독소이다(Walton, J. D. et al. Biopolymers 2010; 94 (5) : 659-64). 아마니타 독소의 주요 성분은 아마톡신 (amatoxins), 팔로톡신(phallotoxins) 및 바이로톡신(virotoxins)이며 (Wieland, T., Faulstich, H., CRC Crit.Rev.Biochem.1978, 5 (3) : 185-260, Vetter, J., Toxicon 1998, 36 : 1, 13-24, Weiland, T., Faulstich, H. 1983. 아마니타로부터의 펩티드 독소(Peptide Toxins from Amanita), p.585-635 In : 자연 독소 핸드북, 제 1 권 : 식물 및 곰팡이 독소 RF Keeler and AT Tu, Ed. Marcel Dekker, Inc., New York, Wieland, T., Int J. Pept. 단백질 Res., 1983, 22, 257-76) 총체적으로 알려진 이들의 구조는 다음 표 1, 2 및 3에 각각 열거된다.
[표 1] 현재 알려진 아마톡신의 10 가지 구조
Figure pct00001
[표 2] 팔로톡신의 구조
Figure pct00002
[표 3] 바이로톡신의 구조
Figure pct00003
독성 버섯들의 여러 속, 가장 주목할만하게는 아미니타 팔로이드(phalloides) 및 몇몇 다른 버섯 종에서 처음 발견된, 적어도 10 가지 독성 화합물의 하위 그룹인 아마톡신은 트립토판 및 시스테인으로부터 산화 형성되는 고리 내 트립타티오닌(tryptathionine) 교차다리(crossbridge)를 함유하는 이환형 옥타펩티드이다 (Kaya, E., et al, Toxicon 2013, 76, 225-33).
아마톡신은 메신저 RNA (mRNA), 마이크로 RNA 및 작은 핵 RNA (snRNA)의 합성에 필수적인 효소인 RNA 중합 효소 II (Pol II)의 강력하고 선택적인 억제제이다 (Karlson-Stiber C, Persson H. 2003 "세포독성 곰팡이 - 개요 ", Toxicon 42 (4) : 339-49). 따라서 아마톡신은 유전자 전사와 단백질 생합성을 정지시킴으로써 세포를 죽인다 (Brodner, OG and Wieland, T. 1976 Biochem., 15 (16) : 3480-4, Fiume, L., Curr Probl Clin Biochem, 1977, 8, Karlson-Stiber C, Persson H. 2003, Toxicon 42 (4) : 339-49, Chafin, DR, Guo, H. Price, DH 1995 J. Biol. Chem.270 (32) : 19114-19; Wieland (1983) Int. J. Pept. Protein Res.22 (3) : 257-76). 지금까지 알려진 10 가지 아마톡신, 명칭α-아마니틴, β-아마니틴, γ-아마니틴, ε-아마니틴, 아마눌린, 아마눌린산, 아마닌아미드, 아마닌 및 프로아마눌린은 35 개 아미노산 프로프로테인(전단백질)으로 합성되며, 그 중 최종 8 개 아미노산은 프로필 올리고 펩티다제에 의해 분해된다. 문헌 [Litten, W. 1975 Scientific American 232 (3) : 90-101, H. E. Hallen, et al 2007 Proc.Nat.Aca.Sci.USA 104, 19097-101, K. Baumann, 등, 1993 Biochemistry 32 (15) : 4043-50; Karlson-Stiber C, Persson H. 2003, Toxicon 42 (4) : 339-49; Horgen, P. A. 외. 1978 Arch. Microbio. 118 (3) : 317-9] 참조). 아마톡신은 수집된 아마니타 팔로이드 버섯으로부터(Yocum, R.R. 1978 Biochemistry 17 (18) : 3786-9, Zhang, P. 등, 2005, FEMS Microbiol. Lett. 252 (2), 223-8), 또는 담자균 (basidiomycete)을 이용한 발효로부터 (Muraoka, S. and Shinozawa T., 2000 J. Biosci. Bioeng. 89 (1) : 73-6, US pat. Appl 20100267019) 또는 A. fissa를 이용한 발효로부터(Guo, X. W., 등, 2006 Wei Sheng Wu Xue Bao 46 (3) : 373-8) 또는 Galerina fasciculata 또는 Galerina helvoliceps 배양으로부터 수득할 수 있다 (WO / 1990 / 009799, JP1137291). 그러나 이러한 단리 및 발효로부터의 수확량은 매우 낮았다 (배양물 1L당 5 mg 미만). 아마톡신 및 그의 유사체의 몇몇 반-화학적 또는 합성 조제가 지난 30 년 동안보고 되었다 (W. E. Savige, A. Fontana, Chem. Commun. 1976, 600-1, Zanotti, G. 등, Int J Pept Protein Res, 1981. 18 (2) : 162-8, Wieland, T. Bartlett 등, Tetrahedron Lett., 1982, 23, 619-22], Zanotti, G., et al., Biochim Biophys Acta, 1986, 870 (3), Eur. J. Biochem. 1981, 117, ) : 454-62, Zanotti, G., 등, Int. J. Peptide Protein Res.1987, 30, 323-9, Zanotti, G., 등, Int. J. Peptide Protein Res.1987, 30, 450-9, Zanotti, G. 등, Int J Pept Protein Res, 1988, 32 (1) : 9-20, G. Zanotti, T.et al., Int. J. Peptide Protein Res.1989 , 34, 222-8, Zanotti, G. 등, Int J Pept Protein Res, 1990. 35 (3) : 263-70, Mullersman, JE and JF Preston, Int, J Pept Protein Res, 1991. 37 (6) : 544-51; Mullersman, JE, 등, Int J Pept Protein Res, 1991. 38 (5) : 409-16, Zanotti, G. 등, Int J Pept Protein Res, 1992. Schmitt, W.et al., J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 4380-7], Anderson, MO 등, J. Org. Chem., 2005, 70 (12) : 4578-84; J. P. May, et al, J. Org. Chem. 2005, 70, 8424-30; F. Brueckner, P. Cramer, Nat. Struct. Mol. Biol. 2008, 15, 811-8; J. P. May, D. M. Perrin, Chem. Eur. J. 2008, 14, 3404-9; J. P. May, et al, Chem. Eur. J. 2008, 14, 3410-17; Q. Wang, et al, Eur. J. Org. Chem. 2002, 834-9; May, J.P. 및 D.M. Perrin, Biopolymers, 2007. 88 (5) : 714-24; May, J.P., et al., Chemistry, 2008. 14 (11) : 3410-7; S. De Lamo Marin, et al, Eur. J. Org. Chem. 2010, 3985-9; Pousse, G., 등, Org Lett, 2010. 12 (16) : 3582-5; Luo, H., 등, Chem Biol, 2014, 21 (12) : 1610-7; Zhao, L., 등, Chembiochem, 2015, 16 (10) : 1420-5). 세포 독성의 극단적인 효력 및 유일한 메커니즘 때문에, 아마톡신은 접합을위한 페이로드로 사용되어왔다 (Fiume, L., Lancet, 1969.2 (7625) : 853-4), Barb항- Brodano, G. 및 L. Fiume, Nat New Biol, 1973, 243 (130) : 281-3, Bonetti, E., M., et al, Arch Toxicol, 1976. 35 (1) : 69-73 페이지, Davis, MT, Preston, JF Science 1981, 213, 1385-1388; Preston, JF 등, Arch Biochem Biophys, 1981. H. Faulstich 등, Biochemistry 1981, 20, 6498-504, Barak, LS 등, Proc Natl Acad Sci USA, 1981. 78 (5) : 3034-8; Faulstich, H. 및 L. Fiume, Methods Enzymol, 1985. 112 : 225-37, Zhelev, Z., A.et al., Toxicon, 1987. 25 (9) : 981-7, Khalacheva, K. , Eksp Med Morfol, 1990. 29 (3) : 26-30, U. Bermbach, H. Faulstich, Biochemistry 1990, 29, 6839-45; Mullersman, JE 및 JF Preston, Int. J. Peptide Protein Res.1991, 37, 544-51, Mullersman, JE 및 JF Preston, Biochem Cell Biol, 1991. 69 (7) : 418-27, J. Anderl, H. Echner, H. Faulstich, Beilstein J. Org. Chem. 2012, 8 , 2072-84, Moldenhauer, G., 등, J. Natl.Cancer Inst., 2012, 104, 622-34; A. Moshnikova, et al., Biochemistry 2013, 5 2, 1171-8; Zhao, L., 등, Chembiochem, 2015, 16 (10) : 1420-5; Zhou, B., 등, Biosens Bioelectron, 2015, 68 : 189-96; WO2014 / 043403, US20150218220, EP 1661584).
2고리식 헵타펩타이드인 팔로톡신은 표 2에 나타낸 바와 같이 적어도 7 가지 화합물로 구성되어 있으며, 1937 년 Heinrich Wieland의 학생이자 사위인 Feodor Lynen과 뮌헨 대학의 Ulrich Wieland에 의해 데쓰캡(death cap) 버섯 (Amanita phalloides)에서 발견되었다 (Enjalbert, F., et al, Toxicon 1993, 31, 803-7). 복강내(i.p.) 투여 후 팔로톡신은 액틴-F가 액틴-G로 전환되는 것을 억제하고 세포 기능에 필요한 이들 형태의 동적 평형을 교란시킨다 (Enjalbert, F., et al., CR Acad. Sci. Paris, Sciences de la vie / Life Sciences, 1999, 322, 855-62, Wieland, T., 50 Jahre Phalloidin, Naturwissenchaften 1987, 74, 367-73 ). 표 2에 제시된 것처럼 팔로톡신(phallotoxin)의 6 가지 알려진 구조, 즉 프로팔로인(prophalloin), 팔로인(phalloin), 팔리신(phallisin), 팔라시딘(phallacidin), 팔라신(phallacin) 및 팔리사신(phallisacin)이 있다 (Yocum RR, Simons M., Lloydia 1977, 40, 178-90, Enjalbert, F. 등, CR Acad. Sci. Paris, Sciences de la vie / Life Sciences, 1999, 322, 855-62, Schafer AJ, Faulstich H., Anal. Biochem., 1977, 83, 720-723). 간 세포에 매우 독성이 있지만, 팔로톡신은 장내에서 흡수되지 않기 때문에 데쓰캡(death cap)의 독성에 거의 기여하지 못하는 것으로 밝혀졌다. 평균적으로 알려진 6 가지 구조의 팔로톡신은 (α-, β-, γ-, 또는 ε-) 아마니틴보다 약 5 ~ 10 배 독성이 적다. (Vetter, J., Toxicon, 1998, 36, 13-24). 또한 팔로이딘(phalloidin)은 식용 Blusher(블러셔) (Amanita rubescens)에서도 발견된다. (Litten, W., Scientific American 1975, 232, 90-101).
바이로톡신은 표 3에 나타낸 바와 같이 알라바이로이딘, 바이로이신, 데옥소바이로이신, 바이로이딘 및 데옥소바이로이딘과 같은 적어도 5 가지 상이한 화합물에 의해 형성된 단환형 헵타펩타이드이다(Vetter, J., Toxicon, 1998, 36, 13-24). 바이로톡신의 구조 및 생물학적 활성은 팔로톡신의 구조 및 생물학적 활성과 유사하므로, 바이로톡신이 팔로톡신으로부터 생합성적으로 유도되거나 또는 공통적인 전구 경로를 공유함을 시사한다 (Wieland, T., Int J Pept Protein Res, 1983, 22, 257-76). 그러나 팔로톡신과는 달리, 바이로톡신은 단환형 펩타이드이며 L- 시스테인 대신 D- 세린을 함유하고, 2 개의 비천연 아미노산: 2,3- 트랜스 -3,4- 디하이드록시-L-프롤린 및 2'-(메틸술포닐)-L-트립토판을 갖는다 (Buku, A. 등, Proc Natl Acad Sci USA, 1980, 77 (5), 2370-1). NMR 연구는 세린의 D- 배열이 팔로이딘(phalloidin)과 같은 구조를 유지하는 구조적 요소인 반면, 수산기는 구조 안정성에 기여하지는 않지만 액틴 표면과 접촉할 가능성이 있음을 보여주었다. (Zanotti, G., et al , Biochemistry, 1999, 38 (33) : 10723-9] 참조). 분자 수준에서 바이로톡신은 팔로톡신과 유사하게 행동하며, 예를 들어 바이로이신(viroisin)의 친화도는 팔로이딘(phalloidin)의 그것과 매우 흡사하며, 겉보기(표관) 평형 해리 상수 Kd는 약 2 x 10-8 M이다 (Faulstich, H., et al, Biochemistry, 1980, 19, 3334-43). 그러나, 단일고리 구조의 유연성과 바이로톡신에서의 두 개의 추가적인 수산기의 존재는 액틴과 상호 작용의 다른 모드를 제시한다. 2고리식 팔로톡신이 단단한 결합 부위를 보유한다는 증거가 있지만, 바이로톡신은 액틴과 접촉시 유도 적응(적합)(Induced-fit) 메카니즘에 의해 생물학적 활성 구조(형태)를 채택할 수 있다 (Faulstich, H., 등, Biochemistry, 1980, 19, 3334-43 ).
지금까지 아다만틴의 컨쥬게이션(접합)에서 개시된 몇 가지 방법이 있다. Preston과 그의 동료들은 p-아미노벤조일글리실글리신의 디아조화(diazotization)를 사용하고 그다음 링커를 트립토판의 7'C 위치에 있는 α-아마니틴에 커플링시켰다 (Preston, JF et al., Arch. Biochem. Biophy. 1981, 209, 63-71; Davis, MT.B 및 Preston, JF, Science, 1981, 213, 1385-7; Hencin, RS and Preston, Mol. Pharm., 1979, 16, 961-9] 참조). Heidelberg Pharma GMBH (WO2010/115629, WO2010115630, WO2012 / 041504, US20120100161, US20120213805)는 아미노산 4의 6'C 원자에 대한 에테르 결합으로서의 산소 원자를 통한, 또는 아미노산 3의 δC- 원자에 대한 에스테르 또는 카르보메이트 결합으로서의 산소 원자를 통한, 또는 아미노산 1의 γC- 원자에 대한 아미드 결합으로서의 질소 원자를 통한 아마톡신의 컨쥬게이션을 개시하였다. Heidelberg Pharma GMBH (EP2774624, WO2012119787, WO2014 / 135282, US20140294865, US20160002298)는 또한 아마톡신의 인돌의 1'N-원자의 위치를 통한 접합을 개시하였다. Agensys Inc (미국 특허 20150218220)는 요오드와 같은 시약으로 α- 아마니틴의 인돌 기의 C7'-위치를 활성화시킨 다음 적절하게 치환된 2 °- 아미노 시약과 커플링시켜 디아민 스페이서 결합을 도입함으로써, 또는 포름 알데히드의 존재하에 탄소 스페이서(인돌의 C7- 위치의 C-C 결합)를 2 °- 아미노 결합 앞에서 도입하는 것을 개시하였다.
아마톡신은 항체 분자와 같은 큰 생체 분자 담체에 결합될 때 상대적으로 무독성이며, 생체 분자 담체가 절단된 후에만 세포 독성 활성을 발휘한다는 것이 알려져있다. 아마톡신의 독성, 특히 간세포에 대한 악명 높은 독성에 비추어 볼 때 (Zhou, P. 외, World J. Gastroenterology, 2012, 18 (5), 435-4; Giannini, A. 등, Clin. , 2007. 45 (5), 539-42), 표적 종양 치료를 위한 아마톡신 콘쥬게이트가 혈장 투여 후에 매우 안정하게 유지되고, 표적 세포의 내재화 후에, 방출된 아마톡신이 표적 세포로부터 도망가지 않거나 간세포를 손상시키지 않는 것이 가장 중요하다.
여기에서 본 발명자들은 첫째, 단순한 니트로화 그리고 이어서 아마니타 독소 유도체의 인돌 단위에서의 환원과 컨쥬게이션 후에, 안정한 아미드 결합을 통해 결합된 세포 결합 분자가 될 수 있는 새로운 아마니타 독소 유도체를 공개한다. 둘째로, 본 발명의 아마니타 독소 유도체의 대부분은 인돌 단위 상에 프로드러그 단위를 가지고 있어서 시험관내에서 높은 효능을 떨어뜨릴 수 있지만, 여분의 전구약물(프로드러그) 단위가 효소에 의해 제거된 후에 생체 내에서 매우 강력한 세포 독성으로 천천히 변형될 수 있다. 아마톡신은 신장의 사이질과 세뇨관 관련 급성 신장병(tubulointerstitial nephropathy) 뿐만 아니라 중심소엽 괴사와 간 지방증을 동반한 간염에 대해 극도로 독성이 있는것으로 악명이 높기 때문에, 전적으로 심하게 간질 증후군을 일으킨다. (Litten, W. 1975 Scientific American 232 : 90-10, Karlson-Stiber C, Persson H. 2003 Toxicon 42 (4) : 339-49). 보다 안전한 프로드러그를 모체 독소로 천천히 전환시키면, 독소가 전달 중에 목표물을 벗어날 때의 심각한 부작용을 최소화 할 수 있다. 따라서 접합가능한 아마니타 독소 유도체의 이러한 개선은 보다 넓은 치료 지수 창(window)의 급격한 결과를 가져올 수 있으며 목표로 삼은 치료 응용을 위한 아마톡신 접합체의 안전성이 훨씬 높아질 수 있다.
발명의 개요
본 발명의 제 1 양태는 효과적으로 세포 증식을 차단하는 데 사용할 수 있는, 강력한 세포 독성제, 구체적으로는 아마톡신, 팔로톡신 또는 바이로톡신 유도체를 개시하는 것이다. 특히, 본 발명은 세포 증식을 차단하기 위해 임의로 세포 결합제에 연결가능하거나 연결되는 신규한 아마니타 독소 유도체를 개시하는 것이다. 본 발명의 신규 세포 독성제 및 세포 결합제에 대한 이의 접합체는 하기 화학식 (I)으로 예시된다 :
Figure pct00004
또는 이들의 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형체 결정 구조; 또는 이들의 광학 이성질체, 라세미체, 부분 입체 이성질체 또는 거울상 이성질체.
상기식에서
----는 방향족 (인돌) 고리의 임의의 탄소 위치를 연결하는 단일 결합을 나타내고;
Figure pct00005
는 선택적인 단일 결합 또는 결핍(부재)된 결합을 나타낸다.
R1 및 R2는 H, OH, CH2OH, CH(OH)CH2OH, CH(CH3)CH2OH, CH(OH)CH3, C1-C8 알킬, -OR12 (에테르), C2-C8 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, -OCOR12 (에스테르), -OC(=O)OR12(탄산염), -OC(=O)NHR12 (카바메이트); C3-C8 아릴, 헤테로고리, 탄소고리, 사이클로 알킬, 헤테로사이클로 알킬, 헤테로아랄킬, 알킬카보닐로부터 독립적으로 선택된다.
R3 및 R4는 독립적으로 H, OH, -OR12 (에테르), -OCOR12(에스테르), -OCOCH3(아세테이트), -OCOOR12(카보네이트), -OC(=O)NHR12(카바메이트), -OP(O)(OR12)(OR12')(포스페이트), OP(0)(NHR12)(NHR12') (포스파미드), O-S03 - 또는 O- 글리코시드로부터 선택되고;
R5는 H, OH, NH2, NHOH, NHNH2, -OR12 -NHR12, NHNHR12, -NR12R12', N(H)(R12) R13CO(Aa)p 중에서 선택되고 (아미노산 또는 펩티드, 이때 Aa는 아미노 산 또는 폴리펩티드이고, p는 0 내지 6을 나타냄);
R6은 H, OH, CH2OH, CH(OH)CH2OH, CH(CH2OH)2, CH(CH3)OH, CH2CH2OH, PrOH, BuOH, C1~C8 알킬, -OR12(에테르), C2~C8 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, -OCOR12 (에스테르); C3~C8 아릴, 헤테로고리 또는 탄소고리 중에서 선택된다.
R7, R8 및 R9는 H, OH, CH3, CH(CH3)2, CH(CH3)CH2CH3, CH2OH,CH(OH)CH2OH, CH2CH(OH)CH2OH, CH(CH2OH)2, CH2C(OH)(CH2OH)2, CH2C(OH)(CH3)(CH2OH), CH2C(OH)(CH(CH3)2)(CH2OH), CH2CH2OH, PrOH, BuOH, CH2COOH, CH2CH2COOH, CH(OH)COOH, CH2CONH2, CH2CH2CONH2, CH2CH2CH2CH2NH2, CH2CH2CH2NHC(=NH)NH2, C1~C8 알킬, CH2Ar, CH2SH, CH2SR12, CH2SSR12, CH2SSAr, CH2CH2SCH3, -OR12 (에테르), C2~C8 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, -OCOR12(에스테르); C3~C8 아릴, 헤테로고리, 또는 탄소고리 중에서 독립적으로 선택된다.
R10 은 H, NH2, OH, SH, NO2, 할로겐, -NHOH, -N3 (아지도); -CN (시아노); C1~C8 알킬, C2~C8 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬; C3~C8 아릴, 헤테로고리, 또는 탄소고리; -OR12 (에테르), -OCOR12 (에스테르), -OCOCH3 (아세테이트), -OC(O)OR12 (카보네이트), -OC(O)CH(R12)NHAa (Aa는 아미노산 기임), -NR12R12’(아민), -NR12COR12’(아민),-NR12NR12’NR12"(아민);-OCONR12R12’(카바메이트); -NR12(C=NH)NR12’R12" (구아니디눔); -NR12CO(Aa)p, (아미노산 또는 펩티드, 이때 Aa는 아미노산 또는 폴리펩티드이고, p는 0 - 6을 나타냄); -N(R12)CONR12’R12" (유레아); -OCSNHR12 (티오카바메이트); -SH (티올); -SR12 (설파이드); -S(O)R12 (설폭시드); -S(O2)R12 (술폰); -SO3, HSO3, HSO2, 또는 HSO3-, SO3 2- 또는 -HSO2 - (설파이트)의 염; -OSO3 - ; -N(R12)SOOR12’ (술폰아미드); H2S2O5 또는 S2O52-의 염(메타비설파이트); PO3SH3, PO2S2H2, POS3H2, PS4H2 또는 PO3S3 -, PO2S2 3 -, POS3 3 -, PS4 3-의 염( 모노-, 디-, 트리-, 및 테트라-티오포스페이트); (R12O)2POSR12’ (티오포스페이트 에스테르); HS2O3 또는 S2O3 2-의 염(티오설페이트); HS2O4 또는 S2O4 2 -의 염 (디티오나이트); (P(=S)(OR12)(S)(OH) 또는 양이온으로 형성된 염 (포스포로디티오에이트); -N(R12)OR12’ (하이드록실아민 유도체); R12C(=O)NOH 또는 양이온으로 형성된 염 (하이드록삼산); (HOCH2SO2 -, 또는 그것의 염(포름알데히드 설폭실레이트); -N(R12)COR12’ (아미드); R12R12’R12 "NPO3H (트리알킬포스포-라미데이트 또는 포스포라미드산); 또는 ArAr’Ar"NPO3H (트리아릴포스포늄); OP(O)(OM1)(OM2), OCH2OP(O)(OM1)(OM2), OSO3M1; O-글리코시드 (글루코시드, 갈락토시드, 만노시드, 글루쿠로노시드, 알로시드, 프룩토시드, 등), NH-글리코시드, S-글리코시드 또는 CH2-글리코시드 중에서 선택되고; M1 및 M2 는 독립적으로 H, Na, K, Ca, Mg, NH4, NR1’R2’R3’이고; R1’, R2’ 및 R3’ 은 독립적으로 H, C1~C8 알킬이고; Ar, Ar', 및 Ar"은 C3-C8 아릴 또는 헤테로방향족 기이다.
R11은 H, C1~C8 알킬; C2~C8 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬; C3~C8 아릴, 헤테로 아릴이다.
R12, R12'및 R12 "는 H, C1~C8 알킬; C2~C8 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬; C3~C8 아릴, 헤테로 아릴, 헤테로고리 또는 탄소고리로부터 독립적으로 선택된다.
X는 S, O, NH, SO, SO2 또는 CH2이다.
m은 0 또는 1이고; n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이다.
L은 링커 또는 링커-세포-결합 분자(Q) 공유 결합 클러스터 또는 링커 상에 세포 결합제 (CBA)와의 결합을 가능하게하는 작용기를 갖는 링커이다. L은 바람직하게는 다음의 화학식을 갖는 방출형 링커이다 : ―Ww―(Aa)r―Tt―; 또는 ―Ww―(Aa)r―Tt―Q; 또는 Q―Ww―(Aa)r―Tt―을 가지며; 이때 W는 스트레처 유닛 (Stretcher unit)이고; w는 0 또는 1이고; Aa는 독립적인 아미노산을 포함하는 아미노산 단위이며; r은 0 내지 100 범위의 정수이다. 상기 스트렛처 유닛 (W)은 자가 침식형(self-immolative) 또는 비-자가 침식형 성분, 펩티딜 단위, 하이드라존 결합, 디설파이드, 에스테르, 옥심, 아미드 또는 티오에테르 결합을 함유할 수 있다. 자가 - 침식형 유닛은 2- 아미노 이미다졸 -5- 메탄올 유도체, 헤테로고리 PAB 유사체, 베타-글루쿠로니드 및 오르토 또는 파라 - 아미노벤질아세탈과 같은 파라 - 아미노벤질카바모일 (PAB) 그룹과 전기적으로 유사한 방향족 화합물을 포함하는데, 이들로만 국한되는 것은 아니다. 바람직하게는, 자가 - 침식 링커 성분은 하기 구조 중 하나를 갖는다 :
Figure pct00006
이때 (*) 원자는 추가의 스페이서 또는 방출형 링커 단위, 또는 세포 독성제 및/또는 결합 분자 (CBA)의 부착점이고; X1, Y1, Z2 및 Z3은 독립적으로 NH, O, 또는 S 이고; Z1 은 독립적으로 H, NH, O 또는 S 이고; v 는 0 또는 1 이고; Q1는 독립적으로 H, OH, C1~C6 알킬, (OCH2CH2)n, F, CI, Br, I, OR12, SR12, NR12R12', N=NR12, N=R12, NR12R12', N02, SOR12R12', S02R12, S03R12, OS03R12, PR12R12', POR12R12', P02R12R12', OPO(OR12)(OR12'), 또는 OCH2PO(OR12(OR12')이고, 여기에서 R12 및 R12'는 위에서 정의된 바와 같다; 바람직하게는 R12 와 R12' 는 독립적으로 H, C1~C8 알킬; C2~C8 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬; C3~C8 아릴, 헤테로고리, 탄소고리, 사이클로 알킬, 헤테로 사이클로 알킬, 헤테로아랄킬, 알킬카보닐; 또는 약학적 양이온성 염 중에서 선택된다.
비-자가 침식 링커 성분은 하기 구조 중 하나이다 :
Figure pct00007
Figure pct00008
상기 (*) 원자는 추가의 스페이서 또는 방출형 링커, 세포 독성제 및/또는 결합 분자의 부착 지점이고, ; X1, Y1, Q1, R12, R12 '는 상기 정의된 바와 같고; r은 0 내지 100이고; p 와 q는 독립적으로 0 내지 6이다.
스페이서 (T)는 탄소원자 1 내지 10의 선형, 분지형 또는 환형 알킬, 알케닐, 알키닐 또는 아릴이거나, T는 폴리에틸렌 글리콜 (-CH2CH2O-) 스페이서 일 수 있다. t는 0 또는 1∼100이다. T는 또한 아미드 결합 가수 분해시 고리화를 거칠 수 있으며, 이러한 아미드는 치환 및 비치환된 4- 아미노 부티르산 아미드, 적절하게 치환된 바이사이클 [2.2.1] 및 바이사이클로 [2.2.2] 고리 시스템 및 2- 아미노 페닐 프로피온산 아미드를 포함한다.
Q는 세포 결합제 / 분자 (CBA), 또는 세포 결합제와 결합 할 수 있는 작용기, 또는 세포 결합제에 부착된 링커와 결합할 수 있는 작용기이다. 작용기는 티올, 아민, 히드라진, 알콕시 아미노, 다이설파이드 치환기, 말레이미도, 할로아세틸 기, 카르복시산, N- 히드록시 숙신이미드 에스테르, 케톤, 에스테르, 알데히드, 알키닐, 알케닐 또는 보호된 티올 또는 다이설파이드 기, 예컨대 SAc, SSRi 또는 SSAr로부터 선택된다. Ar은 방향족 기 또는 헤테로 방향족 기이다.
추가의 양태에서, 본 발명은 하기를 포함하는 치료학적 조성물을 개시한다 : (1). 선택적으로 세포 결합제에 연결가능하거나 연결된 2 종 이상의 아마니타 독소의 유효량; (2). 표적 세포 또는 표적 세포를 함유하는 조직을 사멸시키기 위한 특허 출원의 화학식 I의 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제.
도 1은 디펩티드 Tr-Hpi-Gly-OH의 합성을 보여준다.
도 2는 Ile3 -S-데옥소-아마니틴_1의 용액 상 합성을 보여준다.
도 3은 Ile3-S-데옥소-아마니틴_2의 용액 상 합성을 보여준다.
도 4는 Ile3- S - 데옥소 - 아마니틴 전구체의 고상 합성을 보여준다.
도 5는 Ile3-S- 데옥소 - 아마니틴 유도체의 합성을 나타낸다.
도 6은 아마니타 독소의 합성을 위한 링커_l의 합성을 보여줍니다.
도 7은 Ile3-S-데옥소-아마니틴 유도체와 컨쥬케이트_2의 합성을 보여준다.
도 8은 아마니타 독소의 합성을 위한 링커_2의 합성을 보여줍니다.
도 9는 Ile3- S - 데옥소 - 아마니틴 유도체와 컨쥬케이트_3의 합성을 보여준다.
도 10은 아마니타 독소의 합성을 위한 링커_3의 합성을 보여준다.
도 11은 Ile3- S - 데옥소 - 아마니틴 유도체와 컨쥬케이트_4의 합성을 보여준다.
도 12는 아마니타 독소의 링커_4 합성의 합성을 보여준다.
도 13은 Ile3-S- 데옥소 - 아마니틴 유도체 및 콘쥬게이트_5의 합성을 도시한다.
도 14는 Ile3-S- 데옥소 - 아마니틴 유도체 및 콘쥬게이트_6의 합성을 나타낸다.
도 15는 아마니타 독소의 링커_5 합성을 보여준다.
도 16은 Ile3-S- 데옥소 - 아마니틴 유도체 및 콘쥬게이트_7의 합성을 도시한다.
도 17은 Ile3-S- 데옥소 - 아마니틴 유도체 및 콘쥬게이트_8의 합성을 나타낸다.
도 18은 아마니타 독소에 대한 링커_6의 합성을 보여준다.
도 19는 Ile3-S- 데옥소 - 아마니틴 유도체 및 콘쥬게이트_9의 합성을 도시한다.
도 20은 Ile3-S- 데옥소 - 아마니틴 유도체 및 콘쥬게이트_10의 합성을 나타낸다.
도 21은 아마니틴 유도체_1의 접합체(콘쥬게이트)의 합성을 나타낸다.
도 22는 아마니틴 유도체_2의 접합체의 합성을 나타낸다.
도 23은 아마니틴 유도체_3의 접합체의 합성을 나타낸다.
도 24는 아마니틴 유도체_4의 접합체의 합성을 나타낸다.
도 25는 팔로이딘 유도체_1의 접합체의 합성을 보여준다.
도 26은 아마톡신 및 유도체의 합성 용액 상 합성을 도시한다
도 27은 팔로톡신 및 유도체의 용액 상 합성을 나타낸다.
도 28은 바이로톡신 및 유도체의 용액 상 합성을 도시한다.
도 29는 정맥내 한 번의 주사 6 mg / kg의 투여량에서 인간 위암 N87 세포 모델을 사용하여, T-DM1과 접합 화합물 A1, A2, A3, A5, A6, A7, A9 및 A10의 항 종양 효과의 비교를 나타낸다. 그것은 모든 접합체가 동물 체중 감소를 일으키지 않았음을 보여준다.
도 29는 정맥내 한 번의 주사 6 mg / kg의 투여 량에서 인간 위암 N87 세포 모델을 사용하여, T-DM1과 접합 화합물 A1, A2, A3, A5, A6, A7, A9 및 A10의 항 종양 효과의 비교를 나타낸다. 대조군의 동물을 45 일째에 희생시켰다. 모든 8 개의 접합 화합물 (A1, A2, A3, A5, A6, A7, A9 및 A10)은 T-DM1보다 우수한 생체 내 활성을 갖는다.
정의:
"알킬"은 쇄 또는 고리 내에 1 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄일 수 있는 지방족 탄화수소 기를 의미한다. "분지형"은 메틸, 에틸 또는 프로필과 같은 하나 이상의 저급 알킬기가 선형 알킬 사슬에 결합되어 있음을 의미한다. 예시적인 알킬 기는 메틸, 에틸, n- 프로필을 포함한다. 옥틸, 노닐, 데실, 시클로 펜틸, 시클로 헥실, 2,2- 디메틸 부틸, 2,3- 디메틸 부틸, 2,2- 디메틸 펜틸, 2,6- 디메틸 펜틸, 2,6- 디메틸 펜틸, 2,3,4- 트리메틸 펜틸, 3- 메틸 헥실, 2,2- 디메틸 헥실, 2,4- 디메틸 헥실, 2,5- 디메틸 헥실, 3,5- 디메틸 헥실, 2,4- 디메틸 펜틸, 2- 메틸 헵틸, 3- 메틸 헵틸, n- 헵틸, 이소 헵틸, n- 옥틸 및 이소 옥틸이다. C1-C8 알킬기는 이것으로 한정되지는 않지만 -C1~C8 알킬, -0-(C1~C8 알킬), -아릴, -C(0)R, -OC(0)R'. -C(0)OR", - C(0)NH2, -C(0)NHR' -C(0)N(R')2-NHC(0)R', -S(0)2R', ~S(0)R', -OH, -할로겐 (F, CI, Br 또는 I), -N3, -NH2, -NH(R'), -N( R')2 및 -CN을 포함하는 하나 이상의 기로 치환되지 않거나 치환될 수 있으며,; 이때 각각의 R' 은 - C1~C8 알킬 및 아릴로부터 독립적으로 선택된다.
"환형 알킬", "시클로 알킬" 및 "C3-C8 카르보시클"은 상호 교환 가능하게 사용될 수 있다. 이들은 3-, 4-, 5-, 6-, 7- 또는 8- 원 포화 또는 불포화 비 방향족 탄소고리 고리를 의미한다. 대표적인 C3 ~ C8 카보사이클은 시클로 프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로펜타디에닐, 시클로헥실, 사이클로 헥세닐, 1,3- 시클로헵타디에닐, 1,3,5- 시클로 헵타트리에닐, 사이클로 옥틸 및 시클로 옥타디에닐을 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다. C3 ~ C8 카보 사이클 그룹은 치환되지 않거나 또는 --C1~C8 알킬, -OR5, -아릴, -C(0)R5, -OC(0)R5, -C(0)OR5, -C(0)NH2, -C(0)NHR5, -C(0)NR5R5 ', -NHC(0)R5, -S(O)2R5, -S(0)R5, -OH, -할로겐, -N3, -NH2, -NHR5, -NR5R5 ' 및 -CN 을 포함하는 하나 이상의 기로 치환될 수 있으며; 이때 R5 및 R5'은 독립적으로 H; 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 아릴, 아릴 알킬 또는 카보닐 알킬의 C1-C8; 또는 약학적 염이다. R5 및 R5'는 또한 하기: -N(R5)(R5'), -C02H, -S03H, -OR5, -C02R5, -CONR5, 및 - PO3H로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 더 치환 될 수 있다.
"C3 ~ C8 카보사이클로"는 탄소고리 상에 있는 수소 원자 중 하나가 결합으로 치환된 위에서 정의된 C3 ~ C8 탄소고리 기를 지칭한다.
알케닐은 탄소 - 탄소 이중 결합을 함유하는 지방족 탄화수소 기를 말하며, 쇄 내에 2 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 직쇄상 또는 분지상 일 수 있다. 알케닐 이중 결합은 "시스 (cis)" 및 "트랜스 (trans)" 배향, 또는 대안으로 "E" 배향 및 "Z" 배향을 가질 수 있다. 예시적인 알케닐 기는 이에 한정되는 것은 아니지만, 에틸레닐 또는 비닐, 프로페닐 또는 알릴, n- 부테닐, i- 부틸일, 3-메틸부트-2-에닐, n-펜테닐, 헥실레닐, 헵테닐, 옥테닐을 포함한다.
"알키닐(alkynyl)" 또는 "알키닐(alkinyl)"은 탄소 - 탄소 삼중 결합을 함유하고 사슬 내에 2 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지 쇄일 수 있는 지방족 탄화수소 기를 의미한다. 예시적인 알키닐 기는 에티닐, 프로피닐, n- 부티 닐, 2- 부티닐, 3- 메틸 부티닐, 펜티닐, n- 펜티닐, 헥실리닐, 헵티닐, 및 옥티닐을 포함한다.
"헤테로알킬"은 1 내지 4 개의 탄소 원자가 독립적으로 O, S 및 N으로 이루어진 군으로부터의 헤테로 원자로 치환된 C2~C8 알킬이다.
"헤테로 사이클"은 1 내지 4 개의 고리 탄소 원자가 독립적으로 O, N, P, S 및 Se의 그룹으로부터의 헤테로 원자로 치환된 방향족 또는 비 방향족 C3~C14 탄소고리를 나타낸다. 바람직한 헤테로 원자는 산소, 질소 및 황이다. 적합한 헤테로 사이클은 또한 문헌 [Handbook of Chemistry and Physics, 76th Edition, CRC Press, Inc., 1995-1996, p2-25 to 2-26]에 개시되어 있으며, 그 개시 내용은 본원에 참고로 포함된다. 바람직한 비 방향족 헤테로 사이클은 피롤리디닐, 피라졸리디닐, 이미다졸리디닐, 옥시라닐, 테트라 하이드로푸라닐, 다이옥솔란일, 테트라하이드로-피라닐, 다이옥사닐, 다이옥솔란일, 피페리딜, 피페라지닐, 모르폴리닐, 피란일, 이미다졸리닐, 피롤리닐, 피라졸리닐, 티아졸리디닐, 테트라하이드로티오피란일, 디티아닐, 티오모르폴리닐, 디히드로피라닐, 테트라히드로피라닐, 디하이드로피란일, 테트라 히드로 피리딜, 디 히드로 피리딜, 테트라하이드로피리니디닐, 디하이드로티오피라닐, 아제파닐은 물론이고 페닐기와의 축합반응에서 생성된 융합 시스템을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다.
"아릴" 또는 Ar은 3 내지 14 개의 탄소 원자, 바람직하게는 6 내지 10 개의 탄소 원자를 포함하는 하나 또는 수 개의 고리로 이루어진 방향족 또는 헤테로 방향족기를 의미한다. 헤테로 방향족 기의 용어는 방향족 기 상에 하나 또는 수 개의 탄소를 지칭하고, 바람직하게는 1, 2, 3 또는 4 개의 탄소 원자가 O, N, Si, Se, P 또는 S로 우선적으로 치환된다. 아릴 또는 Ar은 또한 하나 또는 여러 개의 H 원자가 독립적으로 알킬, F, Cl, Br, I 및 OR5, 또는 SR5, NR5R5 ', N=NR5, N=R5, NR5R5 ', N02, SOR5R5, SO2R5, SO3R5, OSO3R5, PR5R5 ', POR5R5 ', PO5R5 ', OPO3R5R5 ' 또는 PO3R5R5 '에 의해 치환된 방향족기를 나타내고, 여기서 R5 및 R5'는 독립적으로 H, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 아릴, 아릴 알킬, 카르 보닐 또는 약학적 염이다.
용어 "헤테로아릴" 또는 방향족 헤테로 사이클은 5 내지 14 원, 바람직하게는 5 내지 10 원 방향족 헤테로, 모노 -, 바이 - 또는 멀티사이클릭 환(고리)을 의미한다. 예는 피 롤릴, 피리딜, 피라졸릴, 티에닐, 피리미디닐, 피라지닐, 테트라 졸릴, 인돌릴, 퀴놀리닐, 퓨리닐, 티아졸릴, 티아졸릴, 벤조티아졸릴, 푸라닐, 벤조 푸라닐, 1,2,4- 티아디아졸일, 이소티아졸릴, 트리아졸일, 테트라 졸릴, 이소퀴놀릴, 벤조티에닐, 이소벤조푸릴, 피라졸릴, 카르바졸릴, 벤즈이미다 졸릴, 이속사졸릴, 피리딜-N-옥사이드 뿐만 아니라 페닐 기과의 축합으로부터 생성된 융합된 시스템을 포함한다.
"알킬", "사이클로알킬", "알케닐", "알키닐", "아릴", "헤테로아릴", "헤테로사이클릭" 등은 또한 상응하는 "알킬렌", "사이클로 알킬렌", "알케닐렌" , "알키닐렌", "아릴렌", "헤테로아릴렌", "헤테로 사이클렌" 및 2 개의 수소 원자의 제거에 의해 형성된 유사체를 포함한다.
"할로겐 원자"는 불소, 염소, 브롬 또는 요오드 원자; 바람직하게는 브롬 및 염소 원자이다.
"약학적으로" 또는 "약학적으로 허용 가능한"은 동물, 또는 인간에게 적절하게 투여 될 때 불리한, 알레르기성 또는 다른 부적당한 반응을 일으키지 않는 분자 실체 및 조성물을 지칭한다.
"약학적으로 허용되는 부형제"는 보존제 또는 산화 방지제, 충전제, 붕괴 제, 습윤제, 유화제, 현탁제, 용매, 분산 매질, 코팅제, 항균 및 항진균제, 등장 성 약제 및 흡수 지연 제 등과 같은 임의의 담체, 희석제, 보조제 또는 비히클을 포함한다. 약제 활성 물질 을위한 그러한 매질 및 제제의 사용은 당업계에 잘 알려져있다. 임의의 통상적인 매질 또는 제제가 활성 성분과 양립 불가능한 경우를 제외하고, 치료 조성물에서의 그의 용도가 고려된다. 보충 활성 성분은 또한 적절한 치료 조합 물로서 조성물에 혼입될 수 있다.
본원에서 사용된 "약학적 염"은 모 화합물이 그의 산 또는 염기 염을 제조함으로써 변형된, 개시된 화합물의 유도체를 의미한다. 약학적으로 허용 가능한 염은 예를 들어 비 독성 무기 또는 유기산으로부터 형성된 모 화합물의 통상적 인 무독성 염 또는 4 차 암모늄 염을 포함한다. 예를 들어, 그러한 통상적인 무독성 염은 염산, 브롬산, 황산, 술팜산, 인산, 질산 등과 같은 무기산으로부터 유도된 것들; 그리고 아세트산, 프로피온산, 숙신산, 타르타르산, 시트르산, 메탄 술폰산, 벤젠 술폰산, 글루코 론산, 글루탐산, 벤조산, 살리실산, 톨루엔 술폰산. 옥살산, 푸마르산. 말레산, 락트산 등과 같은 유기산으로부터 제조된 염이 포함된다. 추가의 부가 염은 트로 메타민, 트리에탄올 아민, 메 글루 민, 에포 라민 등과 같은 암모늄염, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 아연 또는 마그네슘과 같은 금속염을 포함한다.
본 발명의 약학적 염은 통상적인 화학적 방법에 의해 염기성 또는 산성 잔기를 함유하는 모 화합물로부터 합성 될 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 유리 산 또는 염기 형태의 이들 화합물을 물 또는 유기 용매 중의 화학량론적 양의 적절한 염기 또는 산과 반응시킴으로써 또는 둘의 혼합물로 제조할 수 있다. 일반적으로 에테르, 에틸 아세테이트, 에탄올, 이소프로판올 또는 아세토 니트릴 같은 비 수성 매질이 바람직하다. 적합한 염의 목록은 Remington 's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1985, pI 418에서 찾을 수 있으며, 이것의 개시 내용은 본원에 참고문헌으로서 포함된다.
용어 "화합물", "세포 독성제", "세포 독성 화합물", "세포 독성 이량체" 및 "세포 독성 이량체 화합물"은 서로 바꿔서 사용된다. 이들은 본 발명에서 구조 또는 화학식 또는 그의 유도체가 개시된 화합물, 또는 본원에 참고로 인용된 구조 또는 화학식 또는 그의 유도체를 포함하는 것으로 의도된다. 이 용어는 또한 본 발명에 개시된 모든 화학식의 화합물의 입체 이성질체, 기하 이성질체, 호변 이성질체, 용매화물, 대사물, 염 (예를 들어, 약학적으로 허용되는 염) 및 전구 약물 및 전구 약물 염을 포함한다. 상기 용어는 또한 임의의 상기 용매화물, 수화물 및 다 형체를 포함한다. 본원에 기재된 본 발명의 특정 양태에서의 "입체 이성질체", "기하 이성질체" "호변 이성질체", "용매화물", "대사 산물", "염" "전구 약물", "전구 약물 염", "접합체", "콘쥬게이트 염", "용매화물", "수화물" 또는 "다형체"의 특정한 설명은 용어 "화합물"이 이들 다른 형태를 기재하지 않고 사용되는 본 발명의 다른 양태에서 이들 형태의 의도적 누락으로 해석되어서는 안된다.
"세포 결합제" 또는 "세포 결합 분자"는 현재 공지된 또는 공지될 수 있는 임의의 종류일 수 있으며, 펩타이드 및 비-펩타이드를 포함할 수 있다. 일반적으로 이들은 항체 (특히 단일 클론 항체) 또는 적어도 하나의 결합 부위, 림포카인, 호르몬, 성장 인자, 영양 전달 분자 (트랜스페린과 같은)을 함유하는 항체의 조각또는 기타 세포 결합 분자 또는 물질(예: 비타민) 일 수 있다.
사용될 수 있는 세포 결합제의 보다 구체적인 예는 다음을 포함한다 :
- 단일 클론 항체 (mAb);
- 단일 사슬 항체;
- 항체의 단편, 예컨대 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, (Parham, J. Immunol.131, 2895-2902 (1983), Spring et al, J.Immunol.1 113, 470-478 (1974); (Nisonoff et al, Arch. Biochem Biophys., 89, 230-244 (1960)), Fab 발현 라이브러리에 의해 생성된 단편, 항-이디오 타입 (항-Id) 항체, CDR's 및 암 세포 항원, 바이러스 항원 또는 미생물 항원에 면역 특이적으로 결합하는 상기 중 어느 것의 에피토프 결합 단편
- 인터페론;
- 펩타이드; 또는 접합된 단백질 또는 펩티드;
- IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6과 같은 림포카인;
- 인슐린, TRH (갑상선 자극호르몬 분비 호르몬), MSH (멜라닌세포 자극 호르몬), 스테로이드 호르몬 (예: 안드로겐 및 에스트로겐)과 같은 호르몬;
- 성장 인자 및 콜로니 자극 인자 예컨대 EGF, TGFaα, 인슐린 유사 성장 인자 (IGF-I, IGF-II) G-CSF, M-CSF 및 GM-CSF (Burgess, Immunology Today515-158 (1984)); 엽산과 같은 비타민
- 트랜스페린 (O'Keefe 등, J. Biol. Chem. 260, 932-937 (1985)).
단일 클론 항체 (mAb), mAb 단일 사슬 또는 단편은 공지 기술 수준에서 생산 될 수 있다. 이 기술은 특정 단클론 항체의 형태로 매우 선택적 세포 결합제를 생산할 수 있게 한다. 당업계에 공지된 것은 손상되지 않은 표적 세포, 표적 세포로부터 분리된 항원, 전체 바이러스, 약독화된 전체 바이러스, 그리고 바이러스 코트 단백질과 같은 바이러스성 단백질과 같이, 관심있는 항원을 갖는 마우스, 래트, 햄스터 또는 임의의 포유동물을 면역화시켜 제조된 모노클로날 항체를 생성하는 기술이다.
적절한 세포 결합제의 선택은 표적화될 특정 세포 집단에 의존하는 선택의 문제이지만, 적절한 단일 세포 항체가 이용 가능하다면 일반적으로 단일 클론 항체가 바람직하다.
예를 들어, 리툭시 맵으로 알려진 항 CD20 항원 단클론 항체는 키메라 (마우스 / 인간) 단클론 항체이며, 그것은 재발성 또는 난치성 저등급 또는 여포성 NHL의 치료를 위해 미국 식약청에 의해 승인된 최초의 치료용 항체였다(Leonard, J. P. 등, Clin. Cane. Res. 10 : 5327-5334 (2004)). Ofatumumab으로 알려진 또 다른 항-CD20 항체는 리툭시 맵 및 다른 대부분의 CD20 지시 항체와 다른 에피토프를 표적으로 하는 인간 단클론 항체이다. 그것은 만성 림프구성 백혈병 치료를 위해 미국 FDA의 승인을 받았으며 또한 Follicular non-Hodgkin 림프종, Diffuse large B 세포 림프종, 류마티스 관절염 및 재발성 다발성 경화증 치료에 잠재력을 보였다 (Coiffier, B. et al Blood 111 : 1094-100 (2008); Zhang, B. MAbs 1 (4) : 326-31 (2009)). Afutuzumab (현재는 obinutuzumab)이라는 이름의 B 세포 림프성 악성 종양의 치료를 위한 제 3 세대의 인간화 및 글리코 조작 항-CD20 mAb가 개발되었다 (Robak, T (2009) England : 2000) 10 (6) : 588-96). Obinutuzumab은 완전 인간형 IgG1 타입 II 항 -CD20 항체이며 선택성은 악성 인간 B 세포의 인간 CD20 항원의 세포 외 도메인에 결합한다. 유사하게, 항 -CD19 항원 단클론 항체 B4는 B 세포상의 CD19 항원에 결합하는 쥐의 IgG1이며 (Nadler 등, 131 J. Immunol. 244-250 (1983)), 표적 세포는 비호 지킨 림프 또는 만성 림프구성 백혈병과 같은 CD19 항원을 발현하는 B 세포 또는 병 세포이다. 또한, RFB4 (Mansfield, E. 등, Blood 90 : 2020-2026 (1997)), CMC-544 (Di Joseph, JF, Blood 103 : 1807-1814 (2004))를 포함하는 항-CD22 항체는, 및 LL2 (Pawlak-Byczkowska, EJ 등, Cancer Res. 49 : 4568-4577 (1989))는 B 세포 암 및 다른 B 세포 증식성 질환에 대한 잠재적 치료법으로 사용될 수 있다. LL2 항체 (이전에는 HPB-2로 불림)는 CD22 항원에 대한 IgG2a 마우스 단클론 항체이다 (상기 문헌 (1989), 상기 문헌 [W1akByC / koWska.E1.1 등]). 또한, Gemtuzumab으로 명명된 항 CD33 항원 단클론 항체는 급성 골수성 백혈병 (AML)을 치료하기 위해 세포 독성 약물과 접합된 최초의 단클론 항체였다 (P. F. Bross 등, Ile Clin Cancer Res 7 (6) : 1490 6). My9-6으로 명명된 유사한 항 CD33 항원 항체는 CD33 항원 (JD Griffin 등, Leukemia Res., 521 (1984))에 특이적으로 결합하는 쥐 IgG1 항체이며, 급성 골수성 백혈병 (AML)의 질병에서와 같이 CD33을 발현하는 세포를 표적화하는데 사용될 수 있다. 또한, 골수 세포에 결합하는 GM-CSF 항체는 급성 골수성 백혈병의 병 세포에 대한 세포 결합제로서 사용될 수 있다. 활성화된 T 세포에 결합하는 IL-2 항체는 이식편 이식 거부의 예방, 이식편 대 숙주 질환의 치료 및 예방, 급성 T 세포 백혈병의 치료에 사용될 수 있다. 멜라닌 세포에 결합하는 MSH 항체는 흑색종의 치료에 사용될 수 있다.
본 발명의 신규한 세포독성제 및 그의 컨쥬게이션
본 발명에 따른 신규한 아마니타 독소 유도체는 아목시펜, 팔로톡신 또는 바이로톡신의 한가지 이상의 유도체를 포함하며, 선택적으로 연결기를 통해 세포 결합제에 연결가능하거나 또는 연결된다. 연결기는 통상적인 방법을 통해 아마니타 독소 유도체에 공유 결합되는 화학적 부분(moiety)의 일부이다.
본 발명에 개시된 아마니타 톡신 유도체는 하기 화학식 I을 갖는다 :
[화학식 I]
Figure pct00009
또는 이들의 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형체 결정 구조; 또는 광학 이성질체, 라세미체, 부분 입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 의미한다.
상기식에서,
----는 방향족 (인돌) 고리의 임의의 탄소 위치를 연결하는 단일 결합을 나타내고;
Figure pct00010
는 임의의 단일 결합 또는 부재된 결합을 나타낸다.
R1 및 R2는 H, OH, CH2OH, CH(OH)CH2OH, CH(CH3)CH2OH, CH(OH)CH3, C1-C8 알킬, -OR12(에테르), C2-C8 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, -OCOR12 (에스테르), -OC(=O) OR12-(카보네이트), -OC(=O)NHR12 (카바메이트); C3-C8 아릴, 헤테로고리, 탄소고리, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아랄킬, 알킬카보닐로부터 독립적으로 선택된다.
R3 및 R4는 독립적으로 H, OH, -OR12 (에테르), -OCOR12 (에스테르), -OCOCH3 (아세테이트), -OCOOR12 (카보네이트), -OC(=O)NHR12 (카바메이트), -OP(O)(OR12) (OR12 ') (포스페이트), OP(O)(NHR12)(NHR12')(포스파마이드), O-SO3 - 또는 O- 글리코시드 로부터 독립적으로 선택된다.
R5는 H, OH, NH2, -OR12, -NHR12, -NR12R12 ', N(H)(R12)R13CO(Aa)p 로부터 선택된다(아미노산 또는 펩티드, 여기서 Aa는 아미노산 또는 폴리펩타이드이며, p는 0 내지 6을 나타냄).
R6은 H, OH, CH2OH, CH(OH)CH2OH, CH(CH2OH)2, CH(CH3)OH, CH2CH2OH, PrOH, BuOH, C1 ~ C8의 알킬, -OR12 (에테르), C2 ~ C8의 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, -OCOR12 (에스테르); C3-C8 아릴, 헤테로고리 또는 탄소고리 중에서 선택된다.
R7, R8 및 R9 는 H, OH, CH3, CH(CH3)2, CH(CH3)CH2CH3, CH2OH, CH(OH)CH2OH, CH2CH(OH)CH2OH, CH(CH2OH)2, CH2C(OH)(CH2OH)2, CH2C(OH)(CH3)(CH2OH), CH2C(OH)(CH(CH3)2)(CH2OH), CH2CH2OH, PrOH, BuOH, CH2COOH, CH2CH2COOH, CH(OH)COOH, CH2CONH2, CH2CH2CONH2, CH2CH2CH2CH2NH2, CH2CH2CH2NHC(=NH)NH2, C1~C8 알킬, CH2Ar, CH2SH, CH2SR12, CH2SSR12, CH2SSAr, CH2CH2SCH3, -OR12 (에테르), C2~C8 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, -OCOR12 (에스테르); C3-C8 아릴, 헤테로고리 또는 탄소고리 중에서 독립적으로 선택된다.
R10 은 H, NH2, OH, SH, NO2, 할로겐, -NHOH, -N3 (아지도); -CN (시아노); C1~C8 알킬, C2~C8 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬; C3~C8 아릴, 헤테로고리, 또는 탄소고리; -OR12 (에테르), -OCOR12 (에스테르), -OCOCH3 (아세테이트), -OC(O)OR12 (카보네이트), -OC(O)CH(R12)NHAa (Aa는 아미노산 기임), -NR12R12’(아민), -NR12COR12’(아민),-NR12NR12’NR12"(아민);-OCONR12R12’(카바메이트) ; -NR12(C=NH)NR12’R12" (구아니디눔); -NR12CO(Aa)p, (아미노산 또는 펩티드, 이때 Aa는 아미노산 또는 폴리펩티드이고, p는 0 - 6을 나타냄); -N(R12)CONR12’R12" (유레아); -OCSNHR12 (티오카바메이트); -SH (티올); -SR12 (설파이드); -S(O)R12 (설폭시드); -S(O2)R12 (술폰); -SO3, HSO3, HSO2, 또는 HSO3-, SO3 2- 또는 -HSO2 - (설파이트)의 염; -OSO3 - ; -N(R12)SOOR12’ (술폰아미드); H2S2O5 또는 S2O52-의 염( 메타비설파이트); PO3SH3, PO2S2H2, POS3H2, PS4H2 또는 PO3S3 -, PO2S2 3 -, POS3 3 -, PS4 3-의 염( 모노-, 디-, 트리-, 및 테트라-티오포스페이트); (R12O)2POSR12’ (티오포스페이트 에스테르); HS2O3 또는 S2O3 2 -의 염(티오설페이트); HS2O4 또는 S2O4 2 - 의 염 (디티오나이트); (P(=S)(OR12)(S)(OH) 또는 양이온으로 형성된 염 (포스포로디티오에이트); -N(R12)OR12’ (하이드록실아민 유도체); R12C(=O)NOH 또는 양이온으로 형성된 염 (하이드록삼산); (HOCH2SO2 -, 또는 그것의 염(포름알데히드 설폭실레이트); -N(R12)COR12’ (아미드); R12R12’R12 "NPO3H (트리알킬포스포-라미데이트 또는 포스포라미드산); 또는 ArAr’Ar"NPO3H (트리아릴포스포늄); OP(O)(OM1)(OM2), OCH2OP(O)(OM1)(OM2), OSO3M1; O-글리코시드 (글루코시드, 갈락토시드, 만노시드, 글루쿠로노시드, 알로시드, 프룩토시드, 등), NH-글리코시드, S-글리코시드 또는 CH2-글리코시드 중에서 선택되고; M1 및 M2 는 독립적으로 H, Na, K, Ca, Mg, NH4, NR1’R2’R3’이고; R1’, R2’ 및 R3’은 독립적으로 H, C1~C8 알킬이고; Ar, Ar', 및 Ar"은 C3-C8 아릴 또는 헤테로방향족 기이다.
R11은 H, C1~C8 알킬; C2~C8 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬; C3~C8 아릴, 헤테로 아릴이다.
R12, R12'및 R12 "는 H, C1~C8 알킬; C2~C8 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬; C3~C8 아릴, 헤테로 아릴, 헤테로고리 또는 탄소고리로부터 독립적으로 선택된다.
X는 S, O, NH, SO, SO2 또는 CH2이다.
m은 0 또는 1이고; n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이다.
L은 링커 또는 링커 - 세포 - 결합 분자 (Q) 공유 결합 클러스터 또는 링커 상에 세포 결합제 (CBA)와의 결합을 가능하게하는 작용기를 갖는 링커이다. L은 바람직하게는 화학식 : ―Ww―(Aa)r―Tt―; 또는 ―Ww―(Aa)r―Tt―Q; 또는 Q―Ww―(Aa)r―Tt―을 가지며, 이때 W는 스트레처 유닛 (Stretcher unit)이고; w는 0 또는 1이고; Aa는 독립적인 아미노산을 포함하는 아미노산 단위이며; r은 0 내지 100 범위의 정수이다. 상기 스트렛처 유닛 (W)은 자가 침식형 또는 비 자가 침식형 성분, 펩티딜 단위, 히드라존 결합, 디설파이드, 에스테르, 옥심, 아미드 또는 티오 에테르 결합을 함유할 수 있다. 자가-침식 유닛은 파라-아미노벤질카바 모일 (PAB) 그룹, 예컨대 2- 아미노 이미다졸 -5- 메탄올 유도체, 헤테로고리 PAB 유사체, 베타 - 글루쿠로니드 및 오르토 또는 파라 - 아미노벤질아세탈과 전자적으로 유사한 방향족 화합물을 포함하지만, 이것으로 제한되지는 않는다. 바람직하게는, 자가 - 침식 링커 성분은 하기 구조 중 하나를 갖는다 :
Figure pct00011
이때 (*) 원자는 추가의 스페이서 또는 방출형 링커 단위, 또는 세포 독성제 및/또는 결합 분자 (CBA)의 부착점이고; X1, Y1, Z2 및 Z3은 독립적으로 NH, O 또는 S이고; Z1는 독립적으로 H, NH, O 또는 S 이고; v 는 0 또는 1이고; Q1 는 독립적으로 H, OH, C1~C6 알킬, (OCH2CH2)n, F, Cl, Br, I, OR12, SR12, NR12R12 ’, N=NR12, N=R12, NR12R12 ’, NO2, SOR12R12’, SO2R12, SO3R12, OSO3R12, PR12R12 ’, POR12R12’, PO2R12R12’, OPO(OR12)(OR12’), 또는 OCH2PO(OR12(OR12’)이고, 이때 R12 및 R12 '는 상기 정의된 바와 같고; 바람직하게는 R12 및 R12 '는 H, C1~C8 알킬; C2~C8 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬; C3~C8 아릴, 헤테로고리, 탄소고리, 사이클로 알킬, 헤테로 사이클로 알킬, 헤테로 아랄킬, 알킬카보닐; 또는 약학 양이온성 염 중에서 독립적으로 선택된다.
비자가 침식 링커 성분은 하기 구조 중 하나이다 :
Figure pct00012
Figure pct00013
상기식에서 (*) 원자는 추가의 스페이서 또는 방출형 링커, 세포 독성제 및/또는 결합 분자의 부착 지점이고; X1, Y1, Q1, R12, R12'는 상기 정의된 바와 같고; r은 0 내지 100이고; p 와 q는 독립적으로 0 내지 6이다.
스페이서 (T)는 1 내지 10 개의 탄소 원자를 갖는 선형, 분지형 또는 환형 알킬, 알케닐, 알키닐 또는 아릴이거나 또는 T는 폴리에틸렌 글리콜 (-CH2CH2O-) 스페이서일 수 있다; t는 0 또는 1 ~ 100이다. T는 또한 아미드 결합 가수 분해시 고리화를 거칠 수 있으며, 이러한 아미드는 치환 및 비치환된 4- 아미노 부티르산 아미드, 적절하게 치환된 바이사이클 [2.2.1] 및 바이사이클 [2.2.2] 고리 시스템 및 2- 아미노 페닐 프로피온산 아미드를 포함한다.
링커는 또한 다음으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다:
R12, OR12, OR12O, NHR12, NHR12NH, NR11R12, SR12S, OR12NH, OR12Ar, NHR12Ar, NR11R12NR12’R12", -(CR11R12)p-(Aa)r(CR12’R12")q(OCH2CH2)t, -(CR11R12)p(CR12’R12")q(Aa)r(OCH2CH2)t-, -(Aa)r-(CR11R12)p(CR12’R12")q-(OCH2CH2)t, -(CR11R12)p(CR12’R12")n(OCH2CH2)t(Aa)r-, -(CR11R12)p(CH=CH)(CR12’R12")q(Aa)r(OCH2CH2)t, -(CR11R12)p(NR12’CO)(Aa)r(CR12’R12")q -(OCH2CH2)t, -(CR11R12)p(Aa)t(NHCO)(CR12’R12")q-(OCH2CH2)r-, (CR11R12)p(OCO)(Aa)r-(CR12’R12")q-(OCH2CH2)t, -(CR11R12)p(OCNR7)(Aa)r(CR12’R12")q (OCH2CH2)t, -(CR11R12)p-(CO)-(Aa)r(CR12’R12")q(OCH2CH2)t, -(CR11R12)p(NR11CO)(Aa)r(CR12’R12")q(OCH2CH2)t, -(CR11R12)p-(OCO)(Aa)r(CR12’R12")q-(OCH2CH2)t, -(CR11R12)p(OCNR7)(Aa)r(CR12’R12")q-(OCH2CH2)t, -(CR11R12)p(CO)(Aa)r(CR12’R12")q(OCH2CH2)t, -(CR11R12)p-페닐-CO-(Aa)r(CR12’R12")q, -(CR11R12)p-푸릴-CO-(Aa)t(CR12’R12")q, -(CR11R12)p-옥사졸릴-CO-(Aa)r(CR12’R12")q, -(CR11R12)p-티아졸릴-CO(Aa)r(CR12’R12")q, -(CR11R12)p-티에닐-CO-(CR12’R12")q, -(CR11R12)p-이미다졸릴-CO-(CR12’R12")q-, -(CR11R12)p-모르폴리노-CO-(Aa)r(CR12’R12")q-, -(CR11R12)p-피페라지노-CO(Aa)r-(CR12’R12")q-, -(CR11R12)p-N-메틸-피페라진-CO(Aa)r(CR12’R12")q-, -(CR11R12)p(Aa)r-페닐-, -(CR11R12)p-(Aa)r-푸릴-, -(CR11R12)p-옥사졸릴(Aa)r-, -(CR11R12)p-티아졸릴-(Aa)r-, -(CR11R12)p-티에닐-(Aa)t-, -(CR11R12)p-이미다졸릴(Aa)r-, -(CR11R12)p-모르폴리노-(Aa)r-, -(CR11R12)p-피페라지노-(Aa)r-, -(CR11R12)p-N-메틸피페라지노-(Aa)r-, -K(CR11R12)p-(Aa)r(CR12’R12")q(OCH2CH2)t-,-K(CR11R12)p(CR12’R12")q(Aa)r(OCH2CH2)t-, -K(Aa)r(CR11R12)p(CR12’R12")q-(OCH2CH2)t-, -K(CR11R12)p(CR12’R12")q(OCH2CH2)r(Aa)t, -K(CR11R12)p(CR7=CR8)(CR12’R12")q-(Aa)r(OCH2CH2)t-, -K(CR11R12)p(NR7CO)(Aa)r(CR12’R12")q(OCH2CH2), -K(CR11R12)p-(Aa)t(NR7-CO)(CR12’R12")q(OCH2CH2)t, -K(CR11R12)p(OCO)(Aa)r(CR12’R12")q(OCH2CH2)t-, -K(CR11R12)p(OCNR7)(Aa)r(CR12’R12")q(OCH2CH2)t-, -K(CR11R12)p(CO)(Aa)r(CR12’R12")q-(OCH2CH2)t, -K(-CR11R12)p(NR11CO)(Aa)r(CR12’R12")q(OCH2CH2)t, -K(CR11R12)p(OCO)-(Aa)r(CR12’R12")q(OCH2CH2)t, -K(CR11R12)p(OCNR7)(Aa)r(CR12’R12")q(OCH2CH2)t,-K(CR11R12)p(CO)(Aa)r(CR12’R12")q(OCH2CH2)rQ, -K(CR11R12)p-페닐-CO-(Aa)r(CR12’R12")q-, -K(CR11R12)p-푸릴-CO(Aa)t-(CR12’R12")q, -K(CR11R12)p-옥사졸릴-CO(Aa)r(CR12’R12")q-, -K(CR11R12)p-티아졸릴-CO(Aa)r-(CR12’R12")q,-K(CR11R12)p-티에닐-CO(CR12’R12")q , -K(CR11R12)p-이미다졸릴-CO-(CR12’R12")q, -K(CR11R12)p-모르폴리노-CO(Aa)t(CR12’R12")q-, -K(CR11R12)p-피페라지노-CO-(Aa)r(CR12’R12")q-, -K(CR11R12)p-N-메틸피페라진-CO(Aa)r-(CR12’R12")q, -K(CR11R12)p-(Aa)r-페닐-, -K(CR11R12)m-(Aa)r-푸릴-, -K(CR11R12)p-옥사졸릴(Aa)r-, -K(CR11R12)m-티아졸릴-(Aa)r-, -K(CR11R12)p-티에닐-(Aa)r, -K(CR11R12)p-이미다졸릴(Aa)r-, -K((CR11R12)m-모르폴리노-(Aa)r, -K(CR11R12)p-피페라지노-(Aa)t-,-K(CR11R12)mN-메틸피페라지노-(Aa)r.
상기 식에서, Aa, r, n, p, q, t, R7, R11, R12, R12'및 R12 "는 상기 정의된 바와 같다. K는 Ar 또는 헤테로 고리의 NR12, O, S, Se, B, C3 ~ C10이다.
Q는 세포 결합 분자 (cell-binding molecule, CBA) 또는 세포 결합제와의 결합을 가능하게하는 작용기, 또는 세포 결합제에 부착된 링커와 결합을 가능하게하는 작용기이다. 작용기는 티올, 아민, 히드라진, 알콕시아미노, 다이설파이드 치환기, 말레이미도, 할로아세틸 기, 카복시산, N- 하이드록시 숙신이미드 에스테르, 케톤, 에스테르, 알데히드, 알키닐, 알케닐 또는 보호된 티올 또는 다이설파이드 기, 예컨대 SAc, SSR1 또는 SSAr중에서 선택된다. Ar은 방향족 기 또는 헤테로 방향족 기이다.
기하학적 및 입체 이성질체를 갖는 일반식 (I)의 화합물은 또한 본 발명의 일부이다.
특정 양태에서, 아마니타 톡신 유도체는 하기 화학식 (Ia) (Ib) 및 (Ic)로 나타내며, 여기에서 아미드 링커는 인돌 단위의 C-5 위치에 연결된다.
Figure pct00014
상기 식에서, "----", "
Figure pct00015
", R1, R2, R4, R5, R7, R8, R9, R10, L 및 Q는 화학식 I에서 정의한 바와 동일하다.
특정 실시 양태에서, 아마니타 독소 유도체는 하기 화학식 (Id)로 나타내며, 여기에서 아미드 링커는 인돌 단위의 C-7 위치에 연결된다.
식 중, R1, R2, R4, R5, R10, L 및 Q는 화학식 (I)에서 정의된 바와 동일하다.
특정 실시 양태에서, 화학식 1a, 1b 및 1c의 아마니타 독소 유도체는 하기 화학식 (Ia-1), (Ia-2), (Ia-3), (Ia-4), (Ia-5), (Ia-6), (Ia-7), (Ia-8), (Ia-9), (Ia-10), (Ia-11), (Ia-12), (Ia-13), (Ia-14), (Ia-15), (Ia-16), (Ia-17), (Ia-18), (Ia-19), (Ia-20), (Ia-21), (Ia-22), (Ia-23), (Ia-24), (Ib-1), (Ib-2), (Ib-3), (Ib-4), (Ib-5), (Ib-6), (Ib-7), (Ic-1), (Ic-2), (Ic-3), (Ic-4), (Ic-5), 및 (Ic-6)로 표시된다.
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
Figure pct00024
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Figure pct00030
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Figure pct00032
Figure pct00033
Figure pct00034
Figure pct00035
Figure pct00036
Figure pct00037
Figure pct00038
Figure pct00039
Figure pct00040
Figure pct00041
Figure pct00042
Figure pct00043
상기 식에서, R10, L 및 Q는 화학식 I에서 정의된 바와 동일하다.
특정 실시 양태에서, 화학식 (Id)의 아마니타 독소 유도체는 하기 화학식 (Id-1), (Id-2), (Id-3), (Id-4), (Id-5), (Id-6), (Id-7), (Id-8), (Id-9), (Id-10), (Id-11), (Id-12), (Id-13), (Id-14), (Id-15), (Id-16), (Id-17), (Id-18), (Id-19), (Id-20), 및 (Id-21)으로 표시된다.
Figure pct00044
Figure pct00045
Figure pct00046
Figure pct00047
Figure pct00048
Figure pct00049
Figure pct00050
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Figure pct00053
Figure pct00054
Figure pct00055
Figure pct00056
상기 식에서, R14는 H, PO3 2-, SO3 -, R12, -COR12, -COCH3, -COOR12, -CONR12R12 ', -C(=O)R12NH(Aa)t, (아미노산 또는 펩타이드, 이때 Aa는 아미노산 또는 폴리펩티드이고, t는 0 내지 100을 나타냄); -CSNHR12 (티오카르바메이트); - SOR12 (술폭시드); -SO2R12 (술폰); -SO3 -, HSO3, HSO2 또는 HSO3 -의 염, SO3 2- 또는 -HSO2 - (아황산염); P(O)(OM1)(OM2), CH2OP(O)(OM1)(OM2), SO3M1; 글리코사이드 (글루코시드, 갈락토사이드, 만노사이드, 글루쿠로노시드, 알로시드, 프룩토시드 등)이고, M1 및 M2는 독립적으로 H, Na, K, Ca, Mg, NH4, NR1'R2'R3'이고; R1', R2' 및 R3'은 독립적으로 H, C1~C8 알킬이다.
추가의 실시 양태에서, 본 발명의 세포 독성제 및 이의 접합체는 하기 구조 중 하나가 바람직하다 :
Figure pct00057
Figure pct00058
Figure pct00059
Figure pct00060
Figure pct00061
Figure pct00062
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Figure pct00074
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Figure pct00076
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Figure pct00078
Figure pct00079
Figure pct00080
또는 그의 화합물의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 수화된 염, 또는 다형체 결정 구조, 또는 광학 이성질체, 라세미체, 부분 입체 이성질체 또는 거울상 이성질체이다.
여기에서, Aa, r, n, L 및 Q는 화학식 (I)에서 동일하다. PEG는 -OCH2CH2의 화학식을 갖는 폴리에틸렌 글리콜이다. 바람직하게는, Q는 H, C1 ~ C8의 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 시클릭, 시클로헤테로, 할로알킬, 알콕시, 할로 알콕시 알킬 아미노; 또는 할로겐; 또는 -NO2; 또는 -CN; -SH; -SSCH3; -SSAc; -SSAr;-SS- 피리딘; -SS-Ar(-NO2); -S- 세포 결합제; 또는 NHS 에스테르의 작용기, 펜타 플루오로 페닐 에스테르; 알킬옥시아민; 알데히드; 케톤; 카르복실산; 히드라진; 아민; 또는 티오락톤이고; 또는 Stretcher 단위 (Ww) 또는 Spacer 단위 (Tt)를 통해 세포 결합 제제를 연결하거나, 이때 W, w, T 및 t는 화학식 I에서 정의된 바와 같고; Q는 하기 화학식 중 어느 하나로부터 선택된다 :
Figure pct00081
Figure pct00082
여기에서 D는 H, -NO2, S03-, CN 또는 F 이고; R1, R2, R3, R4, r, m 및 n은 화학식 (I)에 기재되어 있다. w 및 w '는 독립적으로 0 또는 1이다.
[기술적 해결방법]
아마니타의 유도체의 세포 독성제제로서의 합성
본 발명의 화합물 및 방법은 당업자에게 공지된 다수의 방법으로 제조될 수있다. 화합물은 예를 들어, 실시예에 기술 된 방법의 적용 또는 변형, 또는 당업자에 의해 인식되는 변형에 의해 합성될 수 있다. 적절한 변형 및 치환은 당업자에게 과학 문헌으로부터 용이하게 명백하고 잘 알려져 있거나 쉽게 얻을 수 있을 것이다. 특히 이러한 방법은 Richard C. Larock, "포괄적 유기 전환, 기능 그룹 준비 지침서", Two Volume Set, 2nd Edition, 와일리 출판사, 2010에서 찾을 수 있다.
본 발명의 아마니타 독소의 유도체의 유도체의 한가지 바람직한 제조 측면은 반-합성이다. 따라서, 아마니타 독소의 이들 유도체의 핵심 구조 화합물은 아마니타, Galerina 및 Lepiota 속의 유도체들, 특히 A. bisporigera, A. visosa, A. suballiacea, A. phalloides 및 동종 식물 유래의 유도체들로부터 분리되거나 (문헌 [Hallen, HE et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 104, 19097-101]), 또는 담자균을 사용한 발효로부터 분리하거나 A. fissa를 사용하여 분리 하였다 (Guo, XW, et al., 2006 Wei Sheng Wu Xue Bao 46 (3) : 373-8). 분리된 독소 화합물은 인돌 단위의 방향족 니트로화, 이어서 니트로 기의 아민으로의 환원 반응을 거친 다음, 생성된 아민 화합물을 반응성 또는 반응성 카르복시기를 갖는 링커와 축합시켜 아미드 결합을 형성한다. 반-합성 단계의 도식은 아래에 나타낸다:
Figure pct00083
식 중, R10, L 및 Q는 화학식 I에서 정의된 바와 같다. 여기에서 Lv는 OH, 할로겐, NHS (N- 하이드록시 숙신이미드), 니트로 페놀, 펜탈 플루오로 페놀 등으로부터 선택된 이탈 기이다.
상기 니트로화는 선택적으로 아세트산 무수물, 또는 tert-부틸 아질산염 (TBN) 또는 니트로소늄 염 (NO+ BF4 -, NO+C104 -, NO+PF- 6, NO+AsF- 6, NO+SbF- 6) 또는 니트로늄염 (N02+BF4-, NO2+C104-, NO2+PF- 6, N02+AsF- 6, NO2+SbF- 6)을 함유하는 질산 또는 질산과 황산의 혼합물 또는 질산과 아세트산의 혼합물을 사용할 수 있다. 니트로 기의 아민으로의 환원은 탄소 상 팔라듐, 산화 백금 (IV) 또는 라니 니켈을 사용하는 촉매적 수소화 환원; 또는 산성 매질, 소듐 하이드로설파이트에서 철을 사용하여 직접 환원; 소듐 설파이드 (또는 황화수소 및 염기), 염화 주석 (II), 염화 티탄 (III), 트리페닐포스핀, 트리알킬포스핀, 아연 또는 사마륨을 포함하는 여러가지 다른 방법에 의해 이루어질 수 있다. 카르복시산 유도체를 함유하는 링커 L에 대한 아미노기의 최종 축합. -C (O)-Lv. 여기서, Lv는 F, Cl, Br, I, 니트로 페놀; N- 히드록시 숙신이미드 (NHS); 페놀; 디니트로 페놀; 펜타 플루오로 페놀; 테트라 플루오로 페놀; 디플루오로 페놀; 모노 플루오로 페놀; 펜타 클로로 페놀; 트리 플레이트; 이미다졸; 디클로로 페놀; 테트라 클로로 페놀; 1- 히드록시 벤조트리아졸; 토실 레이트; 메실 레이트; 2- 에틸 -5- 페닐이소옥사 졸륨 -3'- 술포네이트, 그 자체로 형성된 무수물 또는 다른 무수물, 예를 들면, 아세틸 무수물, 포밀 무수물로부터 선택될 수 있다. Lv가 OH 그룹인 경우, 아미노 그룹과의 축합은 펩타이드 커플링제 또는 미츠노부 반응용 커플링제와 같은 커플링 시약을 통해 이루어진다. 이들 커플링 시약은 다음과 같은데 이들로 한정되는 것은 아니다: N-(3- 디메틸 아미노- 프로필) -N'- 에틸 카르 보디이 미드 (EDC), 디시클로헥실-카르 보디이미드(DCC), N, N'-디이소프로필-카르보디이미드 (DIC), N-시클로 헥실-N'-(2-모르폴리노에틸)카르보디이미드 메토-p-톨루엔 술포네이트 (CMC, 또는 CME-CDI), 1,1'- 카르보닐디이미다졸 (CDI), O-(벤조트리아졸 -1- 일) -N, N, N ', N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 (TBTU), N, N, N ', N'- 테트라 메틸 -0- (1H- 벤조트리아졸 -1- 일)우로늄 헥사플루오로 포스페이트 (HBTU), 벤조트리아졸-1- 일옥시)트리스(디메틸-아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트(BOP), (벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyBOP), 디에틸 시아노 포스포네이트 (DEPC), 클로로 -N, N ', N'- 테트라 메틸 포름 아미디늄 헥사플루오로 포스페이트, 1-[비스(디메틸아미노)- 메틸렌]-1H-1,2,3- 트리아졸로 [4,5-b] 피리디늄 3- 옥사이드 헥사플루오로 포스페이트 (HATU), 1 - [(디메틸 아미노) (모르폴리노) 메틸렌] -1H- [1,2,3 ] 트리아졸로 [4,5-b] 피리딘-1-윰 3- 옥사이드 헥사플루오로 포스페이트 (HDMA), 2- 클로로 -1,3- 디메틸이미다졸리디늄 헥사플루오로포스페이트(CIP), 클로로트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyCloP), 플루오로- N, N, N ', N'-비스(테트라메틸렌)포름아미디늄 헥사플루오로 포스페이트 (BTFFH), N, N', N', N'- 테트라 메틸-S-(1-옥시도-2-피리딜)티우로늄 헥사플루오로 포스페이트, O- (2- 옥소 -1(2H) 피리딜) -N, N, N ', N'- 테트라메틸유로늄 테트라플루오로보레이트 (TPTU), S-(1-옥소-2-피리딜)-N, N, N ', N'- 테트라메틸티우로늄 테트라플루오로보레이트, O- [(에톡시카르보닐) 시아노 - 메틸렌아미노] -N, N, N'- 테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HOTU), (1- 시아노 -2-에톡시-2-옥소틸리덴아미노옥시) 디메틸아미노-모르폴리노-카르베늄 헥사플루오로포르세피트(COMU), O-(벤조트리아졸-1-일)- N, N ', N'- 비스 (테트라 메틸렌) 우로늄 헥사플루오로 포스페이트 (HBPyU), N-벤질-N'-사이클로헥실카르보디이미드(폴리머-결합 있거나 없음), 디피롤리디노(N-숙신이미딜옥시)카베늄 헥사플루오로-포스페이트(HSPyU), 클로로 디피롤리디노카르베늄 헥사플루오로 포스페이트 (PyClU), 2- 클로로 -1,3- 디메틸이미다졸리디늄 테트라플루오로보레이트 (CIB), (벤조트리아졸 -1- 일옥시)디피페리디노카르베늄 헥사플루오로포스페이트 (HBPipU), O- (6- 클로로 벤조트리아졸 -1- 일) -N, N, N ', N'- 테트라 메틸유로 늄 테트라플루오로보레이트 (TCTU), 브로모트리스(디메틸아미노)-포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (BroP), 프로필포스폰산 무수물 (PPACA, T3P®), 2- 모르폴리노 에틸 이소시아나이드 (MEI), N, N, N', N'- 테트라 메틸 -O- (N- 숙신이미딜) 우로늄 헥사플루오로 포스페이트 (HSTU), 2- 브로모 -1- 에틸 - 피리디늄 테트라플루오로보레이트 (BEP), O- [(에톡시카르보닐)시아노메틸렌아미노] -N, N, N ', N'- 테트라메틸-우로늄 테트라플루오로보레이트 (TOTU), 4-(4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진-2-일)-4-메틸-모르폴리늄 클로라이드(MMTM, DMTMM), N, N, N ', N'- 테트라 메틸 -0- (N- 숙신이미딜) - 우로늄 테트라플루오로보레이트(TSTU), O- (3,4- 디 하이드로 -4- 옥소 -1,2,3- 벤조트리아진 -3- 일)- N,N, N ', N'- 테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 (TDBTU), 1,1'-(아조디카르보닐)디피페리딘(ADAD), 디-(4- 클로로벤질) 아조다이카복실레이트 (DCAD), 디-tert-부틸 아조디카르복실레이트(DBAD), 디이소프로필 아조디카르복실레이트(DIAD), 디에틸 아조디카르복실레이트 (DEAD).
본 발명의 또 다른 양태는 도 1 내지 28에 예시된 화학식 (I)의 아마니타 독소 유도체의 화학 합성 제제를 제공한다. 합성 제제는 고상, 용액상 또는 고체 및 용액상의 조합일 수 있다.
본 발명의 화학식 (I)의 세포 독성제는 비대칭 치환된 탄소 원자를 함유하고, 광학 활성 또는 라세미 형태로 단리될 수 있기 때문에, 특정 입체 화학 또는 이성질체 형태가 구체적으로 표시되지 않는 한, 모든 키랄성, 부분 입체 이성질체, 라세미 형태 및 모든 기하이성체 형태의 구조물이 의도된다. 이러한 광학 활성 형태를 제조하고 단리하는 방법은 당업계에 잘 알려져있다. 예를 들어, 입체 이성질체의 혼합물은 이것으로 제한되는 것은 아니지만, 라세미 형태의 분해, 정상, 역상 및 키랄 크로마토그래피, 우선적 염 형성, 재결정화 등을 포함하는 표준 기술에 의해 또는 키랄성 출발 물질로부터 또는 표적 키랄 중심의 고의적 합성에 의한 키랄 합성에 의해 제조 될 수 있다.
본 발명의 세포 독성제는 다양한 합성 경로에 의해 제조될 수 있다. 시약 및 출발 물질은 상업적으로 입수 가능하거나, 또는 당업자가 잘 알고 있는 기술에 의해 용이하게 합성될 수 있다. 모든 치환체는 달리 명시되지 않는 한, 앞서 정의된 대로이다.
본 발명의 세포 독성제의 합성 반응에서 반응성 작용기, 예를 들어 히드록시, 아미노, 이미노, 티오 또는 카복시 기를 보호할 필요가 있을 수 있으며, 이들은 반응에 원치 않는 참여를 피하기 위해 최종 생성물에서 요구된다. 통상적인 보호기가 표준 관행에 따라 사용될 수 있으며, 예를 들어 Peter G. M. Wuts를 참조 할 수 있다. Theodora W. Greene의 "Greene Protective Groups in Organic Synthesis". 4 판. John Wiley and Sons, 2006; Ian T. Harrison, Shuyen Harrison "유기 합성 방법의 개론". Vol 1, 2 Vols. 1 & 2 Ian T. Harrison & Shuyen Harrison, Vols 3-5, Louis S. Hegedus. Leroy Wade Vols 6 ~ 12 권 Michael B. Smith. John Wiley and Sons.2006-2012.
일반적으로 합성 반응은 적절한 용매, 온도 및 시간에서 수행된다. 반응 또는 관련 시약에 악영향을 미치지 않는 다양한 용매가 세포 독성제의 합성 반응에 사용될 수 있다. 적합한 용매의 예에는 : 방향족, 지방족 또는 지환족 탄화수소일 수 있는 탄화수소, 예컨대 , 헥산, 사이클로 헥산, 벤젠, 톨루엔 및 크실렌; 할로겐을 함유하는 탄화수소, 예컨대 클로로포름, 디클로로 메탄, 디클로로 에탄; 예컨대 디메틸 락탐 아미드 또는 디메틸 포름아미드와 같은 아미드; 에탄올 또는 메탄올과 같은 알콜, 및 디에틸 에테르, 테트라하이드로푸란 또는 디옥산과 같은 에테르가 포함된다. 반응은 -100 ℃ ~ 300 ℃, 바람직하게는 0 ℃ ~ 100 ℃의 넓은 온도 범위에서 일어날 수 있다. 합성 반응에 필요한 시간은 또한 많은 인자, 특히 반응 온도 및 시약의 성질에 따라 광범위하게 변할 수 있으며, 5 초 내지 4 주,보다 바람직하게는 10 분 내지 20 시간 일 수 있다. 또한, 제조된 세포 독성제는 반응 혼합물로부터 통상적인 수단, 예를 들어 반응 혼합물로부터 용매를 증발시키거나 증류 제거하거나, 또는 반응 혼합물로부터 용매를 증류 제거한 후, 잔류물을 물에 붓고 물과 섞이지 않는 유기 용매로 추출한 후 추출물로부터 용매를 증류 제거함으로써 수득할 수 있다. 또한 재결정, 재침전 또는 다양한 크로마토그래피 기술, 특히 칼럼 크로마토그래피, 제조용 박층 크로마토그래피 또는 고성능 액체 크로마토그래피와 같은 다양한 공지된 기술을 포함할 수 있다.
세포 독성제 및 그의 접합체와 세포 결합제의 합성 반응의 일부는 상세한 설명의 도 1-28 및 실시예 1-70에서 추가로 예시되나 이것으로 제한되지는 않는다.
세포 결합제- 세포 독성제의 컨쥬게이트
본 발명은 또한 가교제 (L)의 연결기를 통해 세포 결합제 (CBA)에 공유 결합 된 아마니타 독소 유도체를 적어도 하나 이상 포함하는 접합체 분자를 제공한다. 바람직하게는 상기 접합체는 아마니타 독소 유도체의 링커 연결기를 통해 세포 결합제에 공유 결합된 본 발명에 따른 아마니타 독소 유도체의 1 내지 20 분자를 포함한다.
상기한 바와 같이, 세포 표면 결합 분자 - 세포 독성제의 접합체는 화학식 I로 예시된다 :
Figure pct00084
또는 이들의 약학 적으로 허용되는 염, 수화물 또는 수화 된 염; 또는 이들 화합물의 다 형체 결정 구조; 또는 광학 이성질체, 라세미체, 부분 입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 의미한다.
이때 R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, L, m, n 및 Q는 화학식 (I)에서 이전에 설명한 것과 동일하다. L은 링커 - 세포 결합 분자가 공유 결합된 클러스터인 것이 바람직하다.
특정 실시 양태에서, 본 발명의 콘쥬게이트는 하기 화학식으로 예시된다 :
Figure pct00085
Figure pct00086
Figure pct00087
Figure pct00088
Figure pct00089
Figure pct00090
Figure pct00091
Figure pct00092
Figure pct00093
Figure pct00094
Figure pct00095
Figure pct00096
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Figure pct00099
Figure pct00100
Figure pct00101
Figure pct00102
Figure pct00103
Figure pct00104
Figure pct00105
Figure pct00106
Figure pct00107
여기서 Aa, L, m, n, p, Q, r, R1 및 R2는 화학식 (I)에서 상기 기재되어 있다. CBA는 세포 결합제이다.
접합체의 약물 로딩 (DAR)은 세포 결합제 당 1 내지 20 약물 부분 (D)의 범위일 수 있고, 바람직하게는 화학식 (II-1)- (11-91)의 분자에서 세포 1 결합제 당 평균 2 내지 8 약물 부분인 것이 바람직하다. CBA가 ADC의 조제에서 항체 일 때, 바람직한 약물 부하량은 항체 당 3-6 약물이고, 접합 반응으로부터 항체 당 평균 약물 잔기 수는 질량 분광학 (HPLC-MS, UPLC-QTOF , HPLC-MS / MS), ELISA 분석 및 HPLC (SEC-HPLC, H IC-HPLC)과 같은 종래의 수단에 의해 특성화될 수 있다. 약물 부하의 관점에서 접합체의 정량적 분포도 또한 결정될 수 있다. 일부 경우, 약물 부하량이 약물 부하량과의 접합체로부터 일정한 값인 균질의 접합체의 분리, 정제 및 특성화는 역상 HPLC 또는 전기 영동과 같은 수단에 의해 달성될 수있다.
세포 결합제 (CBA)는 펩티드 및 비 - 펩티드를 포함하는 임의의 종류일 수 있다. 일반적으로, 세포 결합제는 큰 분자량 단백질을 포함하는데 예를 들어 전장 항체 (폴리클로날 및 모노클로날 항체) ; 단일 사슬 항체; 항체의 단편, 이를테면Fab, Fab ', F(ab')2, FV [Parham, J. Immunol. 131, 2895-2902 (1983)], Fab 발현 라이브러리에 의해 생성된 단편, 항- 이디오 타입 (항-Id) 항체, CDR 및 암 세포 항원, 바이러스 항원 또는 미생물 항원에 면역특이적으로 결합하는 이들 중 어느 하나의 에피토프 결합 단편 ; 결합체와 같은 항체 모방체; 도메인 항체 (dAb); 나노 바디; 유니바디; DARPins; 안티칼린; 버서바디(versabodies); 듀오칼린; 리포 칼린; 바이머(vimers); 인터페론 (타입 II.III와 같은); 펩타이드; IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, GM-CSF, 인터페론 - 감마 (IFN-γ)과 같은 림포카인; 인슐린, TRH (thyrotropin 방출 호르몬), MSH (멜라닌세포- 자극 호르몬), 안드로겐 및 에스트로겐과 같은 스테로이드 호르몬, 멜라닌 세포 자극 호르몬 (MSH)과 같은 호르몬; 성장 인자 및 콜로니-자극 인자, 이를테면 표피 성장 인자 (EGF), 과립구- 대식세포 콜로니-자극 인자 (GM-CSF), TGFα, TGFβ와 같은 형질전환 성장 인자 (TGF), 인슐린 및 인슐린 유사 성장 인자 (IGF-I, IGF-II) G-CSF. M-CSF 및 GM-CSF [Burgess, Immunology Today. 5, 155-158 (1984)]; 백시니아 성장 인자 (VGF); 섬유 아세포 성장 인자 (FGF); 분자량이 작은 단백질, 폴리펩타이드, 펩타이드 및 펩타이드 호르몬, 예컨대 봄베신(bombesin), 가스트린 (gastrin), 가스트린 방출 펩티드(gastrin-releasing peptide); 혈소판 유래 성장 인자; 인터루킨 및 사이토킨 예컨대, 인터류킨-2 (IL-2), 인터류킨-6 (IL-6), 백혈병 억제 인자, 과립구 - 대식세포 콜로니 - 자극 인자 (GM-CSF); 엽산과 같은 비타민; 아포프로테인 및 당 단백질, 예컨대 트랜스페린 {O'Keefe et al. 260 J. Biol. Chem. 932-937 (1985)]; 당 결합 단백질 또는 렉틴과 같은 지질단백질; 세포 영양-수송 분자; 및 전립선 - 특이 막 항원 (PSMA) 억제제 및 소분자 티로신 키나아제 억제제 (TKI)와 같은 소분자 저해제, 비 - 펩티드 또는 임의의 다른 세포 결합 분자 또는 물질, 예컨대 생체 활성 중합체 (Dhar, et al, Proc. Natl.Acad.Sci.2008, 105, 17356-61) 또는 그의 표면 상에 세포 결합제를 갖는 중합체; 덴드리머 (Lee, et al., Nat. Biotechnol. 2005, 23, 1517-26; Almutairi 등, Proc. Natl. Acad. Sci. 2009, 106, 685-90) 또는 세포 결합제를 함유하는 덴드리머; 나노 입자 (Liong 등, ACS Nano, 2008, 19, 1309-12, Medarova, et al., Nat. Med. 2007, 13, 372-7; Javier 등, Bioconjugate Chem.2008, 19, 1309-12 ) 또는 표면에 세포 결합제를 갖는 나노 입자; 리포좀 (Medinai, et al, Curr. Phar. Des. 2004, 10, 2981-9) 또는 세포 결합제를 갖는 리포좀; 바이러스성 캡시드 (Flenniken, et al., Viruses Nanotechnol. 2009, 327. 71-93)을 포함하지만, 이들로 한정되는 것은 아니다. 일반적으로 적절한 것이 이용가능하다면, 세포 표면 결합제로서 단일 클론 항체가 바람직하다.
본 발명의 접합에 사용되는 링커는 디설파이드 링커, 티오에테르 링커, 아미드 결합 링커, 펩티다제 - 불안정성 링커, 광 불안정성 링커, 산 불안정 링커 (예를 들어, 하이드라존 라이너), 에스테라제-불안정성 링커, 산화적으로 불안정한 링커, 대사적으로 불안정한 링커, 생화학적으로 불안정한 링커를 포함하며, 이들로 한정되지는 않는다.
바람직하게는, 링커는 환원된 다이설파이드 결합 및 리신 잔기로부터 각각 오는 세포 결합제의 티올 및 아미노 작용에 대해 반응성인 기능을 통해 세포 결합제에 연결된다. 보다 구체적으로, 상기 유도체는 -CO-기를 통해 상기 세포 결합제의 라이신 잔기의 아미노 기능에 연결되어 아미드 결합을 형성한다.
또한, 링커는 하나 이상의 링커 성분으로 구성될 수 있다. 예시적인 링커 성분은 6- 말레이미도카프로일("MC"), 말레이미도프로파노일("MP"), 발린 - 시트룰린 ("val-cit"또는 "vc"), 알라닌 - 페닐알라닌 ("ala-phe"또는 "af"), 글리신- 글리신, 최대 6 개의 동일하거나 다른 아미노산을 함유하는 천연 펩티드 (디펩티드, 트리펩타이드, 테트라펩타이드, 펜타펩티드, 헥사펩타이드), p- 아미노벤질옥시카보닐 ("PAB"), N- 숙신이미딜 4-(2- 피리딜티오)펜타노에이트 ("SPP"), N- 숙신이미딜 4- (N- 말레이미도메틸)사이클로헥산-1 카복실레이트 ("SMCC")), N- 숙신이미딜 (4- 요오도- 아세틸)아미노벤조에이트 ("SIAB"), 에틸렌옥시(--CH2CH2O--)를 하나 또는 100 이하의 반복 단위 ("EG" 또는 "PEO")로서 포함한다. 링커는 세포 내 약물 방출을 촉진하는 "절단 가능한 링커"일 수 있다. 추가적인 링커 성분은 당업계에 공지되어 있고, 일부는 하기에 예시되어 있다 :
Figure pct00108
상기식에서 R10 은 상기 화학식 I에서 정의되어있다. 상기 식에서, R15, R16 및 R17은 -C1~C8 알킬 또는 알킬렌-, --C1 ~ C7 카보시클로, -O-(C1 ~ C8 알킬) - -NH-(C1~C8 알킬)-, - 아릴렌 -, -C1 ~ C8 알킬렌-, -C1~C8 알킬렌-( C1~C8 카보시클로)-, -(C3~C7 카보시클로)- C1~C8 알킬렌-, -C3~C8 헤테로시클로-, -C1~C8 알킬렌-(C3~C8 헤테로시클로)-, -(C3~C8 헤테로시클로)- C1~C9 알킬렌-, -(CH2CH2O)k-, -(CH(CH3)CH2O)k-, 및 -(CH2CH2O)k-CH2- 중에서 독립적으로 선택되며; k는 1 내지 30 범위의 정수이고; X "', Y"' 및 Z "'는 NH, O 또는 S로부터 독립적으로 선택된다.
바람직한 실시예에서, 본 발명의 콘쥬게이트는 항체/세포 독성제, 항체 단편 /세포 독성제, 다이아바디/세포 독성제, 트라이아바디/세포 독성제, 표피 성장 인자 (EGF)/ 세포 독성제, 전립선 특이성 멤브레인 항원 (PSMA) 억제제/세포 독성제, 멜라닌 세포 자극 호르몬(MSH)/세포 독성제, 갑상선 자극 호르몬(TSH)/세포 독성제, 다클론 항체/세포 독성제, 소마토스타틴/세포 독성제, 엽산/세포 독성제, 마트리프타제 억제제/세포 독성제, 에스트로겐/세포 독성제, 에스트로겐 유사체/ 세포 독성제, 설계된 안키린 반복 단백질 (DARPins)/세포 독성제, 안드로겐/세포 독성제 및 안드로겐 유도체 / 세포 독성제제 이다.
보다 바람직한 양태에서, 본 발명의 콘쥬게이트는 모노클로날 항체, 세포독성제이다. 이러한 예방에서 세포 독성제제의 접합에 사용되는 항체의 예로는 3F8 (항-GD2), Abagovomab (anti CA-125), Abciximab (anti CD41 (인테그린 알파-IIb), Adalimumab (항-TNF-α), Adecatumumab (항-EpCAM, CD326), Afelimomab (항-TNF-α); Afutuzumab (항-CD20), Alacizumab pegol (항-VEGFR2), ALD518 (항-IL-6), Alemtuzumab (Campath, MabCampath, 항-CD52), Altumomab (항-CEA), Anatumomab (항-TAG-72), Anrukinzumab (IMA-638, 항-IL-13), Apolizumab (항-HLA-DR), Arcitumomab (항-CEA), Aselizumab (항-L-셀렉틴 (CD62L), Atlizumab (tocilizumab, Actemra, RoActemra, 항-IL-6 수용체), Atorolimumab (항-Rhesus 인자), Bapineuzumab (항-베타 아밀로이드), Basiliximab (Simulect, antiCD25 (α chain of IL-2 수용체), Bavituximab (항-포스파티딜세린), Bectumomab (LymphoScan, 항-CD22), Belimumab (Benlysta, LymphoStat-B, 항-BAFF), Benralizumab (항-CD125), Bertilimumab (항-CCL11 (eotaxin-1)), Besilesomab (Scintimun, 항-CEA-related 항원), Bevacizumab (Avastin, 항-VEGF-A), Biciromab (FibriScint, 항-피브린 II 베타 사슬), Bivatuzumab (항-CD44 v6), Blinatumomab (BiTE, 항-CD19), Brentuximab (cAC10, 항-CD30 TNFRSF8), Briakinumab (항-IL-12, IL-23) Canakinumab (Ilaris, 항-IL-1), Cantuzumab (C242, 항-CanAg), Capromab, Catumaxomab (Removab, 항-EpCAM, 항-CD3), CC49 (항-TAG-72), Cedelizumab (항-CD4), Certolizumab pegol (Cimzia 항-TNF-α), Cetuximab (Erbitux, IMC-C225, 항-EGFR), Citatuzumab bogatox (항-EpCAM), Cixutumumab (항-IGF-1), Clenoliximab (항-CD4), Clivatuzumab (항-MUC1), Conatumumab (항-TRAIL-R2), CR6261 (항-Influenza A hemagglutinin), Dacetuzumab (항-CD40), Daclizumab (Zenapax, 항-CD25 (α chain of IL-2 수용체)), Daratumumab (항-CD38 (사이클릭 ADP 리보오스 가수분해효소), Denosumab (Prolia, 항-RANKL), Detumomab (항-B-림프종 세포), Dorlimomab, Dorlixizumab, Ecromeximab (항-GD3 갱글리오사이드), Eculizumab (Soliris, 항-C5), Edobacomab (항-endotoxin), Edrecolomab (Panorex, MAb17-1A, 항-EpCAM), Efalizumab (Raptiva, 항-LFA-1 (CD11a), Efungumab (Mycograb, 항-Hsp90), Elotuzumab (항-SLAMF7), Elsilimomab (항-IL-6), Enlimomab pegol (항-ICAM-1 (CD54)), Epitumomab (항-에피시알린), Epratuzumab (항-CD22), Erlizumab (항-ITGB2 (CD18)), Ertumaxomab (Rexomun, 항-HER2/neu, CD3), Etaracizumab (Abegrin, 항-인테그린 αvβ3), Exbivirumab ( 항-간염 B 표면 항원), Fanolesomab (NeutroSpec, 항-CD15), Faralimomab (항-인터페론 수용체), Farletuzumab (항-folate 수용체 1), Felvizumab (항-호흡기 세포융합 바이러스), Fezakinumab (항-IL-22), Figitumumab (항-IGF-1 수용체), Fontolizumab (항-IFN-γ), Foravirumab (항-광견병 바이러스 글리코단백질), Fresolimumab (항-TGF-β), Galiximab (항-CD80), Gantenerumab (항- 베타 아밀로이드), Gavilimomab (항-CD147 (basigin)), Gemtuzumab (항-CD33), Girentuximab (항-carbonic anhydrase 9), Glembatumumab (CR011, 항-GPNMB), Golimumab (Simponi, 항-TNF-α), Gomiliximab (항-CD23 (IgE 수용체)), Ibalizumab (항-CD4), Ibritumomab (항-CD20), Igovomab (Indimacis-125, 항-CA-125), Imciromab (Myoscint, 항-cardiac myosin), Infliximab (Remicade, 항-TNF-α), Intetumumab (항-CD51), Inolimomab (항-CD25 (α chain of IL-2 수용체)), Inotuzumab (항-CD22), Ipilimumab (항-CD152), Iratumumab (항- CD30 (TNFRSF8)), Keliximab (항-CD4), Labetuzumab (CEA-Cide, 항-CEA), Lebrikizumab (항- IL-13), Lemalesomab (항-NCA-90 (과립구 항원)), Lerdelimumab (항-TGF 베타 2), Lexatumumab (항-TRAIL-R2), Libivirumab (항-간염 B 표면 항원), Lintuzumab (항-CD33), Lucatumumab (항-CD40), Lumiliximab (항- CD23 (IgE 수용체), Mapatumumab (항-TRAIL-R1), Maslimomab (항- T-세포 수용체), Matuzumab (항-EGFR), Mepolizumab (Bosatria, 항-IL-5), Metelimumab (항-TGF 베타 1), Milatuzumab (항-CD74), Minretumomab (항-TAG-72), Mitumomab (BEC-2, 항-GD3 갱글리오사이드), Morolimumab (항-Rhesus 인자), Motavizumab (Numax, 항-호흡기 세포융합 바이러스), Muromonab-CD3 (Orthoclone OKT3, 항-CD3), Nacolomab (항-C242), Naptumomab (항-5T4), Natalizumab (Tysabri, 항-인테그린 α4), Nebacumab (항-endotoxin), Necitumumab (항-EGFR), Nerelimomab (항-TNF-α), Nimotuzumab (Theracim, Theraloc, 항-EGFR), Nofetumomab, Ocrelizumab (항-CD20), Odulimomab (Afolimomab, 항-LFA-1 (CD11a)), Ofatumumab (Arzerra, 항-CD20), Olaratumab (항-PDGF-R α), Omalizumab (Xolair, 항-IgE Fc region), Oportuzumab (항-EpCAM), Oregovomab (OvaRex, 항-CA-125), Otelixizumab (항-CD3), Pagibaximab (항-리포테이코산), Palivizumab (Synagis, Abbosynagis, 항-호흡기 세포융합 바이러스), Panitumumab (Vectibix, ABX-EGF, 항-EGFR), Panobacumab (항-Pseudomonas aeruginosa), Pascolizumab (항-IL-4), Pemtumomab (Theragyn, 항-MUC1), Pertuzumab (Omnitarg, 2C4, 항-HER2/neu), Pexelizumab (항-C5), Pintumomab (항-adenocarcinoma 항원), Priliximab (항-CD4), Pritumumab (항-비멘틴), PRO 140 (항-CCR5), Racotumomab (1E10, 항-(N-글리콜ylneuraminic acid (NeuGc, NGNA)-갱글리오사이드s GM3)), Rafivirumab (항-광견병 바이러스 글리코단백질), Ramucirumab (항-VEGFR2), Ranibizumab (Lucentis, 항-VEGF-A), Raxibacumab (항-탄저균 독소, 보호 항원), Regavirumab (항-사이토메갈로바이러스 글리코단백질 B), Reslizumab (항-IL-5), Rilotumumab (항-HGF), Rituximab (MabThera, Rituxanmab, 항-CD20), Robatumumab (항-IGF-1 수용체), Rontalizumab (항-IFN-α), Rovelizumab (LeukArrest, 항-CD11, CD18), Ruplizumab (Antova, 항-CD154 (CD40L)), Satumomab (항-TAG-72), Sevirumab (항-사이토메갈로바이러스), Sibrotuzumab (항-FAP), Sifalimumab (항-IFN-α), Siltuximab (항-IL-6), Siplizumab (항-CD2), (Smart) MI95 (항-CD33), Solanezumab (항-베타 아밀로이드), Sonepcizumab (항-스핑고신-1-포스페이트), Sontuzumab (항-에피시알린), Stamulumab (항-마이오스타틴), Sulesomab (LeukoScan, (항-NCA-90 (과립구 항원), Tacatuzumab (항-알파-페토단백질), Tadocizumab (항-인테그린 αIIbβ3), Talizumab (항-IgE), Tanezumab (항-NGF), Taplitumomab (항-CD19), Tefibazumab (Aurexis, (항-클럼핑(군집) 인자 A), Telimomab, Tenatumomab (항-tenascin C), Teneliximab (항-CD40), Teplizumab (항-CD3), TGN1412 (항-CD28), Ticilimumab (Tremelimumab, (항-CTLA-4), Tigatuzumab (항-TRAIL-R2), TNX-650 (항-IL-13), Tocilizumab (Atlizumab, Actemra, RoActemra, (항-IL-6 수용체), Toralizumab (항-CD154 (CD40L)), Tositumomab (항-CD20), Trastuzumab (Herceptin, (항-HER2/neu), Tremelimumab (항-CTLA-4), Tucotuzumab celmoleukin (항-EpCAM), Tuvirumab (항-간염 B 바이러스), Urtoxazumab (항-Escherichia coli), Ustekinumab (Stelara, 항-IL-12, IL-23), Vapaliximab (항-AOC3 (VAP-1)), Vedolizumab, (항-인테그린 α4β7), Veltuzumab (항-CD20), Vepalimomab (항-AOC3 (VAP-1), Visilizumab (Nuvion, 항-CD3), Vitaxin (항-혈관 인테그린 avb3), Volociximab (항-인테그린 α5β1), Votumumab (HumaSPECT, 항-종양 항원 CTAA16.88), Zalutumumab (HuMax-EGFr, (항-EGFR), Zanolimumab (HuMax-CD4, 항-CD4), Ziralimumab (항-CD147 (basigin)), Zolimomab (항-CD5), Etanercept (Enbrel®), Alefacept (Amevive®), Abatacept (Orencia®), Rilonacept (Arcalyst), 14F7 [항-IRP-2 (철분 조절 단백질 2)], 14G2a (항-GD2 갱글리오사이드, from Nat. Cancer Inst. for 흑색종 및 고형 종양), J591 (항-PSMA, Weill Cornell Medical School for 전립선암), 225.28S [항-HMW-MAA (High molecular weight-melanoma-관련 항원), Sorin Radiofarmaci S.R.L. (Milan, Italy) for melanoma], COL-1 (항-CEACAM3, CGM1, from Nat. Cancer Inst. USA for 대장암 및 위암), CYT-356 (Oncoltad®, for 전립선암), HNK20 (OraVax Inc. for 호흡기 세포융합 바이러스), ImmuRAIT (from Immunomedics for NHL), Lym-1 (항-HLA-DR10, Peregrine Pharm. for Cancers), MAK-195F [항-TNF (종양 괴사 인자; TNFA, TNF-알파; TNFSF2), from Abbott / Knoll for 패혈증 독성 쇼크], MEDI-500 [T10B9, 항-CD3, TRαβ (T cell 수용체 알파/베타), 복합체, from MedImmune Inc for 이식편 대 숙주 질환], RING SCAN [ 항-TAG 72 (종양 관련 글리코단백질 72), from Neoprobe Corp. for 유방암, 결장암 및 직장암], Avicidin (항-EPCAM (상피세포 부착 분자), 항-TACSTD1 (종양-관련 칼슘 신호 변환기 1), 항-GA733-2 (위장 종양-관련 단백질 2), 항-EGP-2 (상피 글리코단백질 2); 항-KSA; KS1/4 항원; M4S; 종양 항원 17-1A; CD326, from NeoRx Corp. for 결장암, 난소암, 전립선암 및 NHL]; LymphoCide (Immunomedics, NJ), Smart ID10 (단백질 Design Labs), Oncolym (Techniclone Inc, CA), Allomune (BioTransplant, CA), 항-VEGF (Genentech, CA); CEAcide (Immunomedics, NJ), IMC-1C11 (ImClone, NJ) 및 Cetuximab (ImClone, NJ)을 포함하며, 이들로 국한되지는 않는다.
결합제로서의 다른 항체들은 다음의 항원에 대한 항체이며, 이것들로 한정되는 것은 아니다: 아미노 펩티다제 N (CD13), 아넥신 A1, B7-H3 (CD276, 다양한 암), CA125 (난소), CA15-3 (췌장암), 및 다른 항원에 대한 항체가 결합 리간드로서 다른 항체 CA19-9 (암종), L6 (암종), Lewis Y (암종), Lewis X (암종), 알파 태아 단백 (암종). CA242 (대장암), 태반 알칼리성 포스 파타 아제 (암종), 전립선 특이 항원 (전립선), 전립선 포스파타아제 (전립선), 표피 성장 인자 (암종), CD2 (호 지킨 병, NHL 임파종, 다발성 골수종), CD3 엡실론 (T 세포 림프종, 폐암, 유방암, 위암, 난소암,자가 면역 질환, 악성 복수), CD19 (B 세포 악성 종양), CD20 (비-호지킨 림프종), CD22 (백혈병, 림프종, 다발성 골수종, SLE), CD30 (호지킨 림프종), CD33 (백혈병,자가 면역 질환), CD38 (다발성 골수종), CD40 (림프종, 다발성 골수종, 백혈병 (CLL)), CD51 (전이성 흑색종, 육종), CD52(백혈병), CD56 (소세포 폐암, 난소암, 메켈 세포 암종 및 다발성 골수종), CD66e (암), CD70 (전이성 신장 세포 암종 및 비호 지킨 림프종), CD74 (다발성 골수종), CD80 (림프종), CD98 (암), 점액 (암종), CD221 (고형 종양), CD227 (유방암, 난소암), CD262 (NSCLC 및 기타 암), CD309 (난소암), CD326 (고형 종양), CEACAM3 (대장암, 위암), CEACAM5 (종양, 대장암 및 폐암), DLL4 (Δ-유사 -4), EGFR (표피 성장 인자 수용체, 다양한 암), CTLA4 (흑색종), CXCR4 (CD184, 헤마암종, 고형 종양), Endoglin (CD105, 고형 종양), EPCAM (상피 세포 부착 분자, 방광, 머리, 목, 결장, NHL 전립선 및 난소암), ERBB2 (표피 성장 인자 수용체 2, 폐암, 유방암, 전립선 암), FCGR1 (자가 면역 질환), FOLR (엽산 수용체, 난소암), GD2 강글리오사이드 (암), G-28 (세포 표면 항원 글리보리피드(glyvolipid), 흑색종), GD3 이디오타입 (암), 열 쇼크 단백질 (암), HER1 (폐, 위암), HER2 (유방암, 폐암 및 난소암), HLA-DR10 (NHL), HLA-DRB (NHL, B 세포 백혈병), 인간 융모성 생식선 자극호르몬 (암종), IGF1R (인슐린 유사 성장 인자 1 수용체, 고형 종양, 혈액 암), IL-2 수용체 (인터루킨 2 수용체, T - 세포 백혈병 및 림프종), IL-6R (인터루킨 6 수용체, 다중 골수종, RA, 캐슬만 병, IL6 의존성 종양), 인테그린 (ανβ3, α5β1, α6β4, α1β3, α5β5, ανβ5) (암종), MAGE-1 (암종), MAGE-2 (암종), MAGE-3 (암종), MAGE-3 (암종), MAGE 4 (암종), 항 트랜스퍼린 수용체 (암종), p97 (흑색종), MS4A1 (멤브레인 스패닝 4- 도메인 서브 패밀리 A 멤버 1, 비-호지킨 B 세포 림프종, 백혈병), MUC1 또는 MUC1- (유방, 난소, 자궁 경부, 기관지 및 위장 암), MUC16 (CA125) (난소암), CEA (대장암), gplOO (흑색종), MARTI (흑색종), MPG(흑색종), MS4A1 (멤브레인 스패닝 4 도메인 서브 패밀리 A, 소세포 폐암, NHL), Nucleolin, Neu 암 유전자 제품 (암종), P21 (암종), 고 콜레스테롤성 항염증제 (난소암, 고환암), PS MA (전립선 종양), PSA (전립선 암), ROB04, TAG 72 (종양 관련 당 단백질 72, AML, 위, 대장암, 난소암), T 세포 막관통성 단백질 (암), Tie (CD202b), TNFRSFIOB (종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 일원 10B, 암), TNFRSF13B (종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 일원 13B, 다발성 골수종, NHL, 다른 암, RA 및 SLE), TPBG (영양막 당 단백질, 신 세포 암종), TRAIL-R 1 (종양 괴사 아포프로시스 유도 리간드 수용체 1, 림프종, NHL, 대장암, 폐암), VCAM-1 (CD106, 흑색종), VEGF, VEGF-A, VEGF-2 (CD309) (다양한 암). 항체에 의해 인식되는 다른 종양 관련 항원이 검토되었다 (Gerber, et al, niAbs 1 : 3, 247-253 (2009); Novellino et al. Cancer Immunol Immunothcr. 54(3), 187-207 (2005). Franke, et al, Cancer Biother Radiopharm. 2000, 15, 459-76). 이들 항원에 대한 항체의 예는 다음과 같다 : 많은 다른 분화(차별화) 클러스터 (CD4, CD5, CD6, CD7, CDS, CD9, CD10, CD11a, CD11b, CD11c, CD12w, CD14. CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD25, CD26, CD27, CD28, CD29, CD30, CD31, CD32, CD34, CD35, CD36, CD37, CD38, CD41, CD42, CD43, CD44, CD46, CD47, CD48, CD49b, CD49c, CD53, CD54, CD55, CD56, CD58, CD59, CD61.CD62E, CD62L, CD62P, CD63, CD68, CD69, CD70, CD71, CD72, CD79, CD81 , CD82, CD83, CD86, CD87, CD88, CD89, CD90, CD91, CD95, CD96, CD 100. CD 103. CD 105. CD 106. CD 109. CD 1 17. CD 120. CD 125. CD 127. CD 133. CD 134. CD135, CD138, CD141 , CD142, CD 143. CD 144. CD 147. CD151 , CD 152. CD 154. CD 156. CD 158. CD 163. CD 166. .CD 168. CD 184. CDwl86, CD 195. CD202 (a, b). CD209. CD235a, CD271 , CD303, CD304), Annexin Al, Nucleolin, Endoglin (CD 105), ROB04, 아미노-펩티다아제 N, Δ-유사-4 (DLL4), VEGFR-2 (CD309), CXCR4 9CD 184), Tie2, B7-H3, WT1, MUC1, LMP2, HPV E6 E7, EGFRvIII, HER-2/neu, Idiotype, MAGE A3, p53 비돌연변이, NY-ESO-1, GD2, CEA, MclanA/MART1, Ras 돌연변이, gp 100. p53 돌연변이, 프로테이나제 (PR1), bcr-abl, Tyrosinase, Survivin, hTERT. 육종체 전위 중단점, EpbA2, PAP, ML-1AP, AFP, EpCAM, ERG (TMPRSS2 ETS 융합 유전자), NA17, PAX3, ALK. 안드로겐 수용체, Cyclin B1 , 폴리시알산, MYCN, RhoC, TRP-2, GD3, 푸코실 GMl, Mesothelin, PSCA, MAGE Al, sLe(a), CYP1B 1, PLAC1, GM3, BORIS, Tn, GloboII, ETV6-AML, NY-BR- 1, RGS5, SART3, STn, 탄산탈수효소 IX, PAX5, OY-TES 1, Sperm 단백질 17, LCK, HMWMAA, AKAP-4, SSX2, XAGE 1, B7H3, Legumain, Tie 2, Page4. VEGFR2, MAD-CT- 1 , FAP, PDGFR-β. MAD-CT-2, Fos-관련 항원 1 .
본 발명에서 사용되는 항체의 생산은 생체 내 또는 시험관내 절차 또는 이들의 조합을 포함한다. 폴리클론 항-수용체 펩티드 항체를 생산하는 방법은 예컨대 미국특허 제 4,493,795 호 (Nestor 등) 당업계에 잘 공지되어 있다. 단일 클론 항체는 전형적으로 원하는 항원으로 면역화된 마우스의 비장 세포와 골수종 세포를 융합시킴으로써 제조된다 (Kohler, G. Milstein, C. (1975). Nature 256 : 495-497). 자세한 절차는 "항체 - 실험실 매뉴얼"에 설명되어 있다. Harlow and Lane, eds., Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (1988). 이는 본원에 참고 문헌으로 인용된다. 특히 단일클론 항체는 손상되지 않은 표적 세포, 표적 세포로부터 분리된 항원, 전체 바이러스, 약독화된 전체 바이러스 및 바이러스 단백질과 같은 대상 항원으로 마우스, 래트, 햄스터 또는 임의의 다른 포유 동물을 면역화함으로써 생성된다. 비장 세포는 일반적으로 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 6000을 사용하여 골수종 세포와 융합된다. 융합된 하이브리드는 HAT (hypoxanthine-aminopterin-thyminc)에 대한 민감도에 따라 선택된다. 본 발명을 실시하는데 유용한 모노클로날 항체를 생산하는 하이브리도마는 특정 수용체를 면역 반응하거나 표적 세포에서 수용체 활성을 저해하는 능력에 의해 동정된다.
본 발명에 사용되는 단일클론 항체는 적절한 항원 특이성의 항체 분자를 분비하는 하이브리도마를 함유하는 영양 배지를 포함하는 단일클론 하이브리도마 배양 물을 개시함으로써 제조될 수 있다. 배양물은 하이브리도마가 항체 분자를 배지에 분비하기에 충분한 시간 및 조건 하에서 유지된다. 이어서, 항체- 함유 배지를 수집한다. 항체 분자는 단백질 -A 또는 단백질 -G 친화도 크로마토그래피 (음이온, 양이온, 소수성 또는 크기 배제 크로마토그래피)를 사용하는 것과 같은 잘 알려진 기술에 의해 추가로 단리될 수 있다 (특히 단백질 후 특정 항원에 대한 친화도 A 또는 G, 및 사이징 컬럼 크로마토그래피); 원심 분리, 차별화된 용해도 또는 단백질 정제를 위한 다른 표준 기술에 의해 수행될 수 있다.
이들 조성물의 제조에 유용한 매질은 당업계에 널리 공지되어 있으며 상업적으로 유용하며 합성 배지를 포함한다. 예시적인 합성 배지는 4.5gm/l 글루코스, 20mm 글루타민, 20 % 태아 송아지 혈청 및 폴리옥시에틸렌 - 폴리옥시프로필렌 블럭 공중 합체와 같은 항-발포제를 보충한 Dulbecco의 최소 필수 배지(DMEM; Dulbecco 등, Virol.8 : 396 (1959))이다.
또한, 항체 생성 세포주는 발현 DNA로 B 림프구를 직접 형질전환하거나 엡스타인 - Barr 바이러스 (EBV, 또한 유도된 인간 헤르페스 바이러스 4 (HHV-4)로 불림) 또는 카포시 육종 관련 포진 바이러스 (KSHV)와 같은 온코바이러스로 형질 감염시키는 것과 같은, 세포 융합 이외의 기술에 의해 생성될 수 있다. 미국 특허 제 4,341,761 호; 4,399,121; 4.427.783; 4.444.887; 4.451.570; 4.466.917; 4.472.500; 4.491.632; 4.493.890 참조. 모노클로날 항체는 또한 항 - 수용체 펩티드 또는 이 기술 분야에 잘 공지된 바와 같은 카르복실 말단을 함유하는 펩타이드를 통해 생산될 수 있다. Niman et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80 : 4949-4953 (1983); Geysen 등, Proc. Natl. Acad. Sci. 미국. 82 : 1 78-182 (1985); Lei et al. Biochemistry 34 (20) : 6675-6688. (1995) 참조. 전형적으로, 항 - 수용체 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 항 - 수용체 펩티드 모노클로날 항체를 생산하기 위한 면역원으로서, 단독으로 또는 면역 원성 담체에 접합되어 사용된다.
본 발명에서 단일클론 항체를 결합 분자로서 제조하기 위한 다수의 다른 잘 알려진 기술이 있다. 완전한 인간 항체를 제조하는 방법이 특히 유용하다. 하나의 방법은 친화성 강화 방법을 사용하여 항원에 특이적으로 결합하는 인간 항체의 범위를 선택하는데 사용될 수있는 파지 디스플레이 기술이다. 파지 디스플레이는 문헌에서 철저히 기술되었으며, 파지 디스플레이 라이브러리의 제작 및 스크리닝은 당업계에 잘 공지되어 있으며, 예를 들어 문헌 [Dente et al, Gene. 148 (1) : 7-13 (1994); Little et al, Biotechnol Adv. Methods in Molecular의 Hoogenboom 등, Clonson 등, Nature 352 : 264-268 (1991), Huse et al., Science 246 : 1275-1281 (1989), 문헌 [Clackson et al., 31 : 539-55 (1994) Biotechnology 178 : 1-37 (2001) (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ) 및 Lee 등 J.Mol.Biol.340 : 1073- 1093 (2004)에서의 특정 실시 양태를 참조하라.
마우스와 같은 인간 이외의 다른 종으로부터의 하이브리도마 기술에 의해 유도된 단클론 항체는 사람에게 주입될 때 인간 항 - 마우스 항체를 피하기 위해 인간화 될 수 있다. 항체의 인체 유래의 가장 일반적인 방법 중에는 상보성 결정 영역 이식 및 표면 치환이 있다. 이 방법들은 광범위하게 기술되었으며, 예를 들어 미국 특허 제 5,859,205 호 및 제 6,797,492 호; Liu 등, Immunol Rev.222 : 9-27 (2008); Almagro 외, Front Biosci. 1 : 13 : 1619-33 (2008); Lazar 등, Mol Immunol. 44 (8) : 1986-98 (2007); Li et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S A. 103 (10) : 3557-62 (2006)]를 참고하고 각각은 본원에 참고문헌으로 포함된다. 완전 인간 항체는 또한 면역원으로 인간 면역 글로불린 중쇄 및 경쇄의 상당 부분을 운반하는 형질 전환 쥐, 토끼, 원숭이 또는 다른 포유 동물을 면역시킴으로써 제조될 수 있다. 그러한 생쥐의 예로는 Xenomouse (Abgenix / Amgen.), HuM Ab-Mouse (Medarex / BMS). Vcloci Mouse (Regeneron)가 있으며, 또한 미국 특허 제 6,596,541 호, 제 6.207.41 호, 제 6.150.584 호. No. 6.1 1 1.166. No. 6.075. 1 81. No. 5.922.545. No. 5.661 .016. 5.545.806. 5.436.149 및 5.569.825 참조. 인간 치료법에서, 쥐의 가변 영역과 인간의 불변 영역은 또한 융합되어 마우스 mAb보다 사람에서 면역 원성이 훨씬 적은 종양의 "키메라 항체"를 만들 수 있다 (ipriyanov 등, Mol Biotechnol.26 : 39-60 (2004); Houdebinc. Curr Opin Biotechnol.13 : 625-9 (2002)). 또한, 항체의 가변 영역에서 부위 특이적 돌연변이 유발은 그의 항원에 대한보다 높은 친화도 및 특이성을 갖는 항체를 초래할 수 있으며(Brannigan 등, Nat Rev Mol Cell Biol. 3 : 964-70. (2002)); 아담스 엘 알. J Immunol Methods. 231 : 249-60 (1999)), niAb의 불변 영역을 교환하면 결합 및 세포 독성의 작동자 기능을 중재하는 능력을 향상시킬 수 있다.
악성 세포 항원에 대해 면역 특이적 항체는 또한 상업적으로 수득되거나 또는 예를 들면, 화학 합성 또는 재조합 발현 기술을 포함한 당업자에게 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 악성 세포 항원에 대해 면역 특이적인 항체를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열은 예를 들어, GenBank 데이터베이스 또는 이와 유사한 데이터베이스, 문헌 간행물, 또는 일상적인 복제 및 서열 분석을 통해 상업적으로 수득될 수 있다.
항체의 하이브리도마-유래 단일 클론 항체 또는 항체의 파지 디스플레이 Fv 클론을 코딩하는 DNA는 통상적인 절차 (예를 들어, 하이 브리 도마 또는 파지 DNA 주형으로부터 관심있는 중쇄 및 경쇄 코딩 영역을 특이적으로 증폭하도록 고안된 올리고 뉴클레오타이드 프라이머를 사용함으로써)를 사용하여 쉽게 단리 및 서열결정할 수 있다. 일단 분리되면 DNA를 발현 벡터에 넣을 수 있으며,이 발현 벡터는 E. coli 세포, simian COS 세포와 같은 숙주 세포로 형질 감염될 수 있다. 재조합 숙주 세포에서 목적하는 모노클로날 항체의 합성을 얻기 위해, 면역 글로불린 단백질을 생산하지 않는 CHO 세포, 또는 CHO 세포를 사용하는 것이 바람직하다 (Skerra et al., Curr. Opinion in Immunol. 1993) 및 Pluckthun.Immunol.Rev., 130 : 151 (1992)] 참조). 항체는 또한 발현된 폴리펩티드 성분의 정량적 비율이 조절되어 분비되고 적절히 조합된 항체의 수율을 최대화하는 발현 시스템을 사용하여 생산 될 수 있다. 이러한 조절은 폴리펩티드 성분에 대한 번역 강도를 동시에 조절함으로써 적어도 부분적으로 달성된다. 당업계에 공지된 발효 후, 생성된 항체 단백질을 추가로 정제하여 추가의 분석 및 사용을 위해 실질적으로 균질인 제제를 수득한다. 당업계에 공지된 표준 단백질 정제 방법을 사용할 수 있다. 예시적인 정제 과정: 면역 친화성 (단백질 A 컬럼과 같은) 또는 이온 교환 컬럼상에서의 분획, 에탄올 침전, 역상 HPLC. 실리카 또는 DEAE와 같은 양이온 교환 수지상에서의 크로마토그래피, 크로마토 포커싱, SDS-PAGE, 황산 암모늄 침전 및 예를 들어 Sephadex G-75를 사용한 겔 여과.
항체와는 별도로, 표적 세포상의 에피토프 또는 상응하는 수용체와 상호 작용하는 블록/표적 또는 다른 방법으로 결합하는 펩타이드 또는 단백질이 결합 분자로서 사용될 수 있다. 이러한 펩타이드 또는 단백질은 에피토프 또는 상응하는 수용체에 대한 친화성을 갖는 임의의 펩타이드 또는 단백질일 수 있으며 반드시 면역 글로불린 패밀리일 필요는 없다. 이러한 펩타이드는 파지 디스플레이 항체와 유사한 기술로 분리할 수 있다 (Szardenings, J Recept Signal Transduct Res. 23 (4) : 307-49, 2003). 이러한 무작위 펩타이드 라이브러리로부터의 펩티드의 사용은 항체 및 항체 단편과 유사 할 수 있다. 펩타이드 또는 단백질의 결합 분자는 펩타이드 또는 단백질이 그것의 항원 결합 특이성을 유지할 수 있도록 허용되는 한 큰 분자 또는 물질, 예컨대 알부민, 중합체, 리포솜, 나노 입자와 같은 (이에 제한되지는 않음) 물질에 접합되거나 연결될 수 있다.
바람직하게는 항체상의 세포 결합제상의 몇몇 상이한 반응성 그룹 중 임의의 하나는 리신 잔기의 ε- 아미노기, 펜던트 탄수화물 잔기, 카르복실산기, 디술 피드 기 및 티올 기와 같은 접합 부위일 수 있다. 접합에 적합한 항체 반응성 그룹에 대한 리뷰는, 예를 들어 Hermanson, G.T. (2008). Bioconjugate Techniques, Academic Press; Garnett, Adv. Drug Delivery Rev. 53 (2001), 171-216 및 Dubowchik and Walker, Pharmacology & Therapeutics 83 (1999), 67-123를 참조하고, 그 개시 내용은 본원에 참고 문헌으로 포함된다.
본 발명의 세포 독성제는 세포 결합제에 직접 접합(연결)될 수 있거나, 또는 세포 기능 결합제 또는 세포 결합제에 대한 가교 결합제를 통해 접합될 수 있다. 2 관능성 링커는 2 개의 반응성기를 보유한다; 그 중 하나는 세포 결합제와 반응 할 수있는 반면, 다른 하나는 본 발명의 세포 독성제의 하나 이상의 분자와 반응 할 수 있다. 이관능성 가교 결합제는 당해 기술 분야에 잘 알려져있다 (예를 들어, 미국 특허 제 5.208.020 호; Isalm and Dent "Bioconjugation"Chapter 5, p 218-363, Groves Dictionaries Inc., New York, 1999 참조). 이관능성 링커의 예는 다음과 같다: N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트 (SPDP), N-숙신이미딜-4-(2-피리딜디티오)부티레이트 (SPDB), N-숙신이미딜-4-(2-피리딜디티오)펜타노에이트 (SPP), N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오)-부티레이트 (SDPB), 2-이미노티올레인, N-숙신이미딜-4-(5-니트로-2-피리딜디티오) 부티레이트 (SNPB), N-숙신이미딜 4-(5-니트로-2-피리딜디티오)-펜타노에이트 (SNPP), N-설포숙신이미딜-4-(5-니트로-2-피리딜디티오) 부티레이트 (SSNPB), N-숙신이미딜-4-메틸-4-(5-니트로-2-피리딜디티오)펜타노에이트 (SMNP), N-설포숙신이미딜 4-(5-니트로-2-피리딜디티오)-펜타노에이트 (SSNPP), 4-숙신이미딜-옥시카보닐-α-메틸-α-(2-피리딜디티오)-톨루엔 (SMPT), N-설포숙신이미딜-4-메틸-4-(5-니트로-2-피리딜디티오)펜타노에이트 (SSMNP); N-숙신이미딜-4-메틸-4-(2-피리딜디티오)펜타노에이트 (SMPDP), N-숙신이미딜-4-(5-N,N-디메틸-카복사미도-2-피리딜디티오) 부티레이트 (SCPB), N-설포숙신이미딜-4-(5-N,N-디메틸-카복사미도-2-피리딜디티오) 부티레이트 (SSCPB), N-숙신이미딜-4,4-디메틸-4-(2-피리딜디티오)펜타노에이트 (SDMPDP), 숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥세인-1-카르복실레이트 (SMCC), N-숙신이미딜-4-(요오도아세틸)-아미노벤조에이트 (SIAB), 비스-말레이미도폴리에틸렌글리콜 (BMPEG), BM(PEG)1~20, N-(β-말레이미도프로필옥시)-숙신이미드 에스테르 (BMPS), 이미노티올레인 (IT), 디메틸 아디피미데이트 HCl 또는 이미도에스테르의 유도체, 활성 에스테르 (예컨대 디숙신이미딜 수베르산염), 알데히드 (예컨대 글루타르알데히드), 비스-아지도 화합물 (예컨대 비스(p-아지도벤조일) 헥세인디아민), 비스-디아조늄 유도체 (예컨대 비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민), 디이소시아네이트 (예컨대 톨루엔 2,6-디이소시아네이트), 및 비스-활성 플루오르 화합물 (예컨대 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠), 감마-말레이미도부티르산 N-숙신이미딜 에스테르 (GMBS), E-말레이미도카프로산 N-하이드록시숙신이미드 에스테르 (EMCS), 5-말레이미도발레르산 NHS, HBVS, N-숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸)-사이클로헥세인-1-카복시-(6-아미도카프로에이트) (SMCC (LC-SMCC))의 "장쇄" 유사체), m-말레이미도벤조일-N-하이드록시숙신이미드 에스테르 (MBS), 4-(4-N-말레이미도페닐)-부티르산 히드라지드 또는 HCl 염 (MPBH), N-숙신이미딜 3-(브로모아세트아미도)프로피오네이트 (SBAP), N-숙신이미딜 요오도아세테이트 (SIA), 카파-말레이미도운데칸산 N-숙신이미딜 에스테르 (KMUA), N-숙신이미딜 4-(p-말레이미도페닐)-부티레이트 (SMPB), 숙신이미딜-6-(베타-말레이미도프로피온아미도)-헥사노에이트 (SMPH), 숙신이미딜-(4-비닐설포닐)벤조에이트 (SVSB), 디티오비스-말레이미도에탄 (DTME), 1,4-비스-말레이미도부탄 (BMB), 1,4 비스말레이미딜-2,3-디하이드록시부탄 (BMDB), 비스-말레이미도헥산 (BMH), 비스-말레이미도에탄 (BMOE), 설포숙신이미딜 4-(N-말레이미도-메틸)사이클로헥세인-1-카르복실레이트 (설포-SMCC), 설포숙신이미딜(4-요오도-아세틸)아미노벤조에이트 (설포-SIAB), m-말레이미도벤조일-N-하이드록시설포숙신이미드 에스테르 (설포-MBS), N-(감마-말레이미도부트릴옥시)설포-숙신이미드에스테르 (설포-GMBS), N-(엡실론-말레이미도카프로일옥시)설포숙시미도 에스테르 (설포-EMCS), N-(카파-말레이미도운데카노일옥시)설포숙신이미드 에스테르 (설포-KMUS), 및 설포숙신이미딜 4-(p-말레이미도페닐)부티레이트 (설포-SMPB); 또는 상업적으로 이용가능한 링커(예컨대 Thermo Scientific’s Pierce: Imidoester Crosslikers: DMA (디메틸 아디피미데이트ㆍ2 HCl), DMP (디메틸 피멜리미데이트ㆍ2 HCl), DMS (디메틸 수베리메이트ㆍ2 HCl), DTBP (디메틸 3,3´-디티오비스프로피온이미데이트ㆍ2 HCl); NHS-에스테르 Crossliker-Amine Reactive: BS(PEG)5 (비스(숙신이미딜) 펜타(에틸렌 글리콜), BS(PEG)9 (비스(숙신이미딜) 노나(에틸렌 글리콜), BS³(비스[설포숙신이미딜] 수베르산염), BSOCOES (비스[2-(숙신이미도옥시카보닐옥시)에틸]설폰), DSG (디숙신이미딜 글루타레이트), DSP (디티오비스[숙신이미딜 프로피오네이트]), DSS (디숙신이미딜 수베르산염), DST (디숙신이미딜 타르타레이트), DTSSP (3,3´-디티오비스[설포숙신이미딜프로피오네이트]), EGS (에틸렌 글리콜 비스[숙신이미딜숙시네이트]), 설포-EGS (에틸렌 글리콜 비스[설포숙신이미딜숙시네이트]), TSAT (트리스-숙신이미딜 아미노트리아세테이트), DFDNB (1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠); 아민-대-설피드릴 가교결합제: 설포-SIAB (설포숙신이미딜 (4-요오도아세틸)아미노벤조에이트), SIAB (숙신이미딜 (4-요오도아세틸)아미노벤조에이트), SBAP(숙신이미딜 3-(브로모아세트아미도)프로피오네이트), SIA (숙신이미딜 요오도아세테이트), 설포-SMCC (설포숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸)-사이클로헥세인-1-카르복실레이트), SM(PEG)n (NHS-PEG-말레이미드 가교결합제: 숙신이미딜-([N-말레이미도프로피온아미도])-#에틸렌글리콜)에스테르, # =1 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 18, 20, 22, 24), LC-SMCC (숙신이미딜 4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥세인-1-카복시-(6-아미도카프로에이트)), 설포-EMCS (N-엡실론-말레이미도카프로일-옥시설포숙신이미드 에스테르), EMCS (N-엡실론-말레이미도카프로일-옥시숙신이미드 에스테르), 설포-GMBS (N-감마-말레이미도부티릴-옥시설포숙신이미드 에스테르), GMBS (N-감마-말레이미도부티릴-옥시숙신이미드 에스테르), 설포-KMUS (N-카파-말레이미도운데카노일-옥시설포숙신이미드 에스테르), 설포-MBS (m-말레이미도벤조일-N-하이드록시설포숙신이미드 에스테르), MBS (m-말레이미도벤조일-N-하이드록시숙신이미드 에스테르), 설포-SMPB ((설포숙신이미딜 4-(p-말레이미도페닐)부티레이트), SMPB (숙신이미딜 4-(p-말레이미도페닐)부티레이트), AMAS N-(α-말레이미도아세톡시) 숙신이미드 에스테르), BMPS (N-베타-말레이미도프로필-옥시숙신이미드 에스테르), SMPH (숙신이미딜 6-[(베타-말레이미도프로피온아미도)헥사노에이트]), PEG12-SPDP (2-피리딜디티올-테트라옥사옥타트리아콘탄-N-하이드록시숙신이미드), PEG4-SPDP (2-피리딜디티올-테트라옥사테트라데칸-N-하이드록시숙신이미드), 설포-LC-SPDP (설포숙신이미딜 6-[3'-(2-피리딜디티오)프로피온아미도]헥사노에이트), LC-SPDP (숙신이미딜 6-[3-(2-피리딜디티오)프로피온아미도]헥사노에이트), SMPT (4-숙신이미딜옥시카보닐-알파-메틸-알파(2-피리딜디티오)톨루엔); 카복실-대-아민 가교결합제: DCC (디사이클로헥실카보디이미드), EDC (1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카보디이미드); 광반응성 가교결합제: ANB-NOS (N-5-아지도-2-니트로벤조일옥시숙신이미드), NHS-디아지린 (SDA) 가교결합제: SDA (NHS-디아지린)(숙신이미딜 4,4'-아지펜타노에이트), LC-SDA (NHS-LC-디아지린)(숙신이미딜 6-(4,4'-아지펜탄아미도)헥사노에이트), SDAD (NHS-SS-디아지린)(숙신이미딜 2-([4,4'-아지펜탄아미도]에틸)-1,3'-디티오프로피오네이트), 설포-SDA (설포-NHS-디아지린)(설포숙신이미딜 4,4'-아지펜타노에이트), 설포-LC-SDA (설포-NHS-LC-디아지린) (설포숙신이미딜 6-(4,4'-아지펜탄아미도)헥사노에이트), 설포-SDAD (설포-NHS-SS-디아지린)(설포숙신이미딜 2-([4,4'-아지펜탄아미도]에틸)-1,3'-디티오프로피오네이트), 설포-SANPAH (설포숙신이미딜 6-(4'-아지도-2'-니트로페닐아미노)-헥사노에이트), SPB (숙신이미딜-[4-(소랄렌-8-일옥시)]-부티레이트); 설피드릴-대-탄수화물 가교결합제: BMPH (N-베타-말레이미도프로피온산 히드라지드-TFA), EMCH (N-엡실론-말레이미도카프로산 히드라지드-TFA), KMUH (N-카파-말레이미도운데칸산 히드라지드-TFA), MPBH (4-(4-N-말레이미도페닐)부티르산 히드라지드-HCl), PDPH (3-(2-피리딜디티오)프로피오닐 히드라지드); 설피드릴-대-하이드록실 가교결합제: PMPI (p-말레이미도페닐 이소시아네이트); 설피드릴-대-설피드릴 가교결합제: BM(PEG)2 (1,8-비스말레이미도-디에틸렌글리콜), BM(PEG)3 (1,11-비스말레이미도-트리에틸렌글리콜), BMB (1,4-비스말레이미도부탄), BMDB (1,4-비스말레이미딜-2,3-디하이드록시부탄), BMH (비스말레이미도헥산), BMOE (비스말레이미도에탄), DTME (디티오비스말레이미도-에탄), TMEA (트리스(2-말레이미도에틸)아민) 및 SVSB (숙신이미딜-(4-비닐설폰)벤조에이트).
비스-말레이미드 또는 비스-2-피리딜디티올 시약은 순차적 또는 동시적 방식으로 티올 - 함유 약물 부분, 표지 또는 링커 중간체에 티올 - 함유 세포 결합제(예: 항체)의 티올 기의 부착을 허용한다. 세포 결합제, 약물 잔기, 표지 또는 링커 중간체의 티올 기와 반응성인 말레이미드 및 피리딜 디티올 이외의 다른 작용기는 요오도아세트아미드, 브로모아세트아미드, 비닐 피리딘, 디술피드, 피리딜 디술피드, 이소시아네이트 및 이소티오시아네이트를 포함한다.
추가의 실시 양태에서, 링커는 하나 이상의 링커 성분으로 구성 될 수 있다. 예시적인 링커 성분은 다음과 같다 :
1. 자가-침식 링커 성분 :
Figure pct00109
여기에서 (*) 원자는 추가의 스페이서 또는 방출형 링커 단위, 또는 세포 독성제 및/또는 결합 분자 (CBA)의 부착점이고; X1, Y1, Z2 및 Z3은 독립적으로 NH 또는 O 또는 S이고; Z1은 H, 또는 NH 또는 O 또는 S이다. v는 0 또는 1이고; Q1은 독립적으로 H, OH, C1~C6 알킬, (OCH2CH2) nF, Cl, Br, I, OR5 또는 SR5, NR5R5 ', N = NR5, N = R5, NR5R5 ', NO2, SOR5R5 ’, SO2R5, SO3R5, OSO3R5, PR5R5 ’, POR5R5 ’, PO2R5R5 ’, OPO(OR5)(OR5’), 또는 OCH2PO(OR5(OR5’)이고, 이때 R5 및 R5'는 화학식 I에서 기술되고, 바람직하게는 R5 및 R5'는 H, C1 내지 C8의 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬의 C2~C8; 아릴, 헤테로고리, 탄소고리, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로 아랄킬, 알킬카보닐의 C3~C8; 또는 약제 양이온 염으로부터 독립적으로 선택되고;
2. 비-자가-침식 링커 성분의 예:
Figure pct00110
Figure pct00111
상기식에서 (*) 원자는 추가의 스페이서 또는 방출성 링커, 세포 독성제 및/또는 결합 분자의 부착점이다; X1, Y1, Q1, R5, R5’ 및 r 은 화학식 (I)에서 정의된 바와 같고; m, n 및 p 는 0~6 이다.
3. 예시적인 링커 성분은 6- 말레이미도 카프로일 ("MC"), 말레이미도프로 파노일("MP"), 발린-시트룰린 ("val-cit"또는 "vc"), 알라닌 - 페닐알라닌 ("ala-phe"또는 "af" ("PAB"), N- 숙신이미딜 4- (2- 피리딜티오)펜타노에이트 ("SPP"), N-숙신이미딜 4-(N-말레이미도메틸) 시클로헥산 -1 카르복실레이트("SMCC"), 하나 이상의 반복 단위 ("EO"또는 "PEO")로서의 N - 숙신이미딜 (4- 요오도 - 아세틸) 아미노 - 벤조에이트 ("SIAB"), 에틸렌옥시 (--CH2CH2O--)을 포함할 수 있다. 추가적인 링커 성분은 당업계에 공지되어 있고, 일부는 이 특허 출원을 통해 기술된다.
추가적인 구현예에서, 링커는 아미노산 잔기를 포함 할 수 있다. 예시적인 아미노산 링커 성분은 디펩티드, 트리 펩티드, 테트라 펩타이드 또는 펜타 펩티드를 포함한다. 예시적인 디펩티드는 발린 - 시트룰린 (VC 또는 val-cit), 알라닌 - 페닐알라닌 (af 또는 ala-phe)을 포함한다. 예시적인 트리 펩티드에는 글리신 - 발린 - 시트룰린 (글리 val-cit) 및 글리신 - 글리신 - 글리신 (gly-gly-gly)이 포함된다. 아미노산 링커 성분을 포함하는 아미노산 잔기는 자연적으로 발생하는 아미노산뿐만 아니라 마이너 아미노산 및 시트룰린과 같은 자연 발생적 아미노산 유사체를 포함한다. 아미노산 링커 성분은 특정 효소 (예: 종양 관련 프로테아제, 카 텝신 B, C 및 D 또는 플라스민 프로테아제)에 의한 효소 절단에 대한 선택성을 고려하여 설계되고 최적화 될 수 있다.
본 발명의 세포 결합제-약물 접합체에서, 세포 - 결합제 (CBA)는 하나 이상의 약물 부분 (약물 또는 PBD 유도체)에 접합되며, 예를 들어 2 작용성 링커 (L)를 통해 세포 결합제 당 약 1 내지 약 20 개의 약물 부분을 포함할 수 있다. 화학식 (II-1) - (II-91)의 콘쥬게이트는 다음을 포함하는 유기 화학 반응, 조건 및 당업자에게 공지된 시약을 사용하는, 여러 경로에 의해 제조될 수 있으며, (1) 반응성 다이설파이드, 말레이미도, 할로아세틸, 히드라지드, 니트릴을 도입하기 위해 임의로 0 내지 30 %의 유기 공용매가 있는 수성 완충액 (pH 3 내지 9) 중 가교제 (L)를 갖는 세포 결합제 (CBA), 알키닐, 알킬옥시아미노 또는 알데히드 기를 공유 결합시켜 공유 결합된 CBA-L을 형성한다. 이어서, CBA-L 분자는 화학식 (I)의 약물 잔기 (약물)와 반응하여 세포 결합제-약물 접합체를 생성한다; 또는 (2) 임의로 0 내지 99 %의 유기 공용매가 있는 유기 매질 또는 수성 완충액 (pH 3 내지 9) 중 가교제 (L)로 화학식 (I)의 약물 부분 (약물)의 제 1 변형으로, 반응성 디술피드, 말레이미도, 할로아세틸, 히드라지드, 니트릴, 알키닐, 알킬 옥시 아미노, 알데히드, N- 히드록시 숙신이미드 (NHS) 또는 펜타 플루오로 페닐 에스테르 그룹을 약물 잔기 (공유 결합 된 약물 -L 분자)에 도입시킴으로써 제조 될 수 있다. 그런 다음 Drug-L 분자는 세포 결합제 (CBA) 또는 사전 변형된 CBA와 반응하여 세포 결합제-약물 접합체를 생성한다. 또는 (3) 임의로 0 내지 30 %의 유기 보조 용매를 갖는 수성 완충액 pH 3 내지 9 중에서, 세포 결합제와 할로 알콕시, 히드라지드, 니트릴, 알키닐, 알킬옥시아미노, 알데히드, N- 히드록시 숙신이미드 (NHS) 또는 펜타 플루오로 페닐 에스테르의 반응성 작용기를 갖는 화학식 (I)의 약물 부분의 반응을 통해 직접적으로 제조될 수 있다.
항체와 같은 세포 결합제상의 티올 또는 아민 기는 친핵성이어서 반응하여 다음을 포함하는 링커 시약 및 약물 - 링커 중간체상의 친 전자성 기와 공유 결합을 형성할 수 있다; (i) 활성 에스테르, 예컨대 NHS 에스테르, HOBt 에스테르, 할로 포름 에이트 및 산 할라이드; (ii) 할로 아세트 아미드와 같은 알킬 및 벤질 할라이드; (iii) 알데히드, 케톤, 카르복실 및 말레이미드 기; 및 (iv) 설파이드 교환을 통한 피리딜 다이설파이드를 포함한 다이설파이드. 약물 잔기상의 친핵성 기는 링커 잔기 및 링커 시약상의 친전자성 기와 공유 결합을 형성하도록 반응 할 수 있는 아민, 티올, 히드록실, 히드라지드, 옥심, 히드라진, 티오 세미카르바존, 히드라진 카르복실레이트 및 아릴 히드라지드기를 포함하나, 이에 국한되지는 않는다.
항체 또는 단백질상의 친핵성 기는 세포 독성제와의 반응에 의해 기능 링커상의 친전자성기에 반응하거나 또는 링커 - 세포 독성제 부분에 직접 반응하여 세포 결합제 - 세포 독성제의 공유 결합 접합체를 형성할 수 있다. 항체 또는 단백질상의 친핵성 기는 다음을 포함하지만 이에 한정되지는 않는다 :(i) N 말단 아민 기, (ii) 측쇄 아민 기, 예컨대 라이신, (iii) 측쇄 티올 그룹, 예컨대 시스테인 및 (iv) 항체가 글리코실화되는 당 하이드록실 또는 아미노기. 아민, 티올 및 히드록실기는 친핵성이며 반응하여, 다음을 포함하는 링커 잔기 및 링커 잔기의 친 전자성 기와 공유 결합을 형성 할 수 있다 : (i) 활성 에스테르, 예컨대 NHS 에스테르, HOBt 에스테르, 할로 포름 에이트 및 산 할라이드; (ii) 할로 아세트 아미드와 같은 알킬 및 벤질 할라이드; (iii) 알데히드, 케톤, 카르복실 및 말레이미드 기. 특정 항체는 환원 가능한 인터체인 디설파이드, 즉 DTT (디티오트레이톨), L- 글루타티온 (GSH), 디티오에리트 리톨 (DTE), 2- 머캅토에틸아민 (β-MEA), 베타 (β-ME, 2-ME) 또는 트리카보닐 에틸포스핀 (TCEP)와 같은 환원제로 처리함으로써 반응성으로 만들 수 있는 시스테인 브릿지를 갖는다. (Getz et al (1999) Anal. Biochem. Vol 273 : 73-80, Soltec Ventures, Beverly, MA). 따라서 각각의 시스테인 브릿지는 이론적으로 2 개의 반응성 티올 친핵체를 형성할 것이다. 다르게는, 술핀 히드로 기는 라이신 잔기의 변형을 통해, 예를 들어 리신 잔기를 2- 이미노티올란 (트라우트 시약)과 반응시켜 항생제에 도입하여 아민을 티올로 전환시킬 수 있다. 반응성 티올 그룹은 1 개, 2 개, 3 개, 4 개 또는 그 이상의 시스테인 잔기 (예를 들어, 하나 이상의 비 천연 시스테인 아미노산 잔기를 포함하는 변이체 항체를 제조함으로써)를 도입함으로써 항체로 도입될 수 있다. 따라서, 세포 결합제상의 유리 티올은 본 발명의 세포 독성제 또는 링커 - 세포 독성제 중간체 상에서, 말레이미드, 요오도아세트아미드, 피리딜 디술피드 또는 다른 티올 반응성 기와 같은 티올 반응성기에 접합 될 수 있다. 항체상의 일부 비 접합된 자유 티올은 재산화되어 사슬간 및 사슬간 디설파이드 결합을 개질시킬 수 있다.
본 발명의 항체-약물 접합체는 또한 알데히드 또는 케톤 카르보닐기와 같은 항체상의 친전자성 기와 링커 시약 또는 약물상의 친핵성 기 사이의 반응에 의해 생성될 수 있다. 링커 시약상의 유용한 친핵성 기는 히드라지드, 옥심, 아미노, 히드라진, 티오세미카르바존, 히드라진 카르복실레이트 및 아릴 히드라지드를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 한 실시 양태에서, 항체는 링커 시약 또는 약물상의 친핵성 치환체와 반응 할 수 있는 친전자성 잔기를 도입하도록 변형된다. 또 다른 실시예에서, 당화된 항체의 당은 예를 들어, 과 요오드 산염 산화 시약을 사용하여 산화될 수 있고, 링커 시약 또는 약물 잔기의 아민 기와 반응 할 수 있는 알데히드 또는 케톤기를 형성한다. 생성된 이민 Schiff(쉬프) 염기 그룹은 안정한 결합을 형성할 수 있거나, 예를 들어, 환원될 수 있다. 안정한 아민 결합을 형성하기 위해 보로하이드라이드 시약으로 처리한다. 한 실시 양태에서, 글리코실화 항체의 탄수화물 부분과, 갈락토오스 산화 효소 또는 소듐 메타-페리오데이트 중 하나와의 반응은 약물상의 적절한 그룹과 반응 할 수 있는 카보닐 (알데히드 및 케톤) 그룹을 생성 할 수있다 (Hermanson, Bioconjugate Techniques). 또다른 구체예에서, N- 말단 세린 또는 트레오닌 잔기를 함유하는 항체는 나트륨 메타페리오데이트와 반응하여 첫 번째 아미노산 대신에 알데히드를 생성 할 수 있다 (Geoghegan & Stroh, (1992) Bioconjugate Chem. 3 : 138-146 미국 특허 제 5,362,852 호). 이러한 알데히드는 약물 잔기 또는 링커 친핵체와 반응 할 수 있다.
링커가 약물에 반응하여 링커 - 약물 중간체를 먼저 형성하고, 세포 - 결합 분자와의 접합 반응에 의해 이어지는 일반적인 접합의 예는 다음과 같다 :
Figure pct00112
상기식에서 E는 히드록시 숙신이미딜 에스테르 (NHS, 설포-NHS 등), 4- 니트로 페닐 에스테르, 펜타 플루오로 페닐 에스테르, 테트라 플루오로 페닐 (술포 - 테트라 플루오로 페닐) 에스테르, 무수물, 산 염화물, 술포닐 클로라이드, 이소시아네이트 및 이소티오시아네이트 등을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. R '및 R "는 독립적으로 H 또는 CH3 또는 C2H5이고; J는 F, Cl, Br, I, 토실레이트 (TsO), 메실레이트 (MsO), 니트로페놀, 디니트로페놀 또는 펜타플루오로페놀이고; 이때 약물은 본 발명의 화학식 I, Ia, Ib, Ic 또는 Id의 화합물이다.
항체와 같은 세포 결합제상의 하나 이상의 친핵성 기가 약물 - 링커 중간체 또는 링커 시약과 이어서 약물 부분 시약과 반응하는 경우, 그 결과 생성물은 항체에 부착된 하나 이상의 약물 부분의 분포를 갖는 세포 결합제 - 세포 독성 물질 접합체의 혼합물이다. 항체 당 평균 약물 수는 항체에 특이적이고 약물에 특이적인 이중 ELISA 항체 분석에 의해 혼합물로부터 계산될 수 있다. 개별 접합체 분자는 질량 분광법에 의해 혼합물에서 동정될 수 있고, HPLC, 예를 들어, 소수성 상호 작용 크로마토그래피에 의해 분리될 수 있다. 특정 구현 예에서, 단일 로딩 값을 갖는 동종 접합체는 전기 영동 또는 크로마토그래피에 의해 접합 혼합물로부터 분리 될 수 있다.
또다른 실시예에서, IgG 항체가 선택적으로는(임의로) IgG 항체상의 한 쌍의 티올을 통해 다른 다른 기능 분자 또는 세포 독성제와 함께, 화학식 (II-11), (II-12), (II-13), (II-14), (II-17), (II-18), (II-19), (II-20), (II-24), (II-25), (II-29), (II-30), (II-32), (II-33), (II-34), (II-35), (II-36), (II-37), (II-38), (II-39), (II-40), (II-41), (II-42), (II-43), (II-44), (II-45), (II-46), (II-47), (II-48), (II-49), (II-50), (II-51), (II-52), (II-53), 및 (II-64)으로 예시된 바와 같은 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic) 또는 (Id)의 아마니타 독소 유도체의 하나 또는 둘 이상의, 동일하거나 상이한 유도체와 접합될 때, 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic) 또는 (Id)의 아마니타 독소를 함유하는 ADC는 (디설파이드 결합의 환원을 통한) 경쇄와 중쇄 사이에서 및/또는 2 개의 중쇄 사이의 상부 다이설파이드 결합 및/또는 2 개의 중쇄 사이의 하부 다이설파이드 결합을 통해서, 한 쌍의 티올에서 특이적으로 가교 결합제를 통해 형성되는 것이 바람직하다. 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic) 또는 (Id)의 아마니타 톡신 유도체의 하나 또는 둘 또는 그 이상의 유도체를 브릿지 링커와 함께 함유하는 ADC가 바람직하며, 다음의 식 (III-4), (III-5), (III-6), (III-7), (III-8), (III-9), (III-10), (III-11) 또는 (III-12)을 갖는다 :
Figure pct00113
Figure pct00114
Figure pct00115
Figure pct00116
Figure pct00117
Figure pct00118
여기서 굵고 진한 구조
Figure pct00119
는 IgG 항체, 바람직하게는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 항체이며; "
Figure pct00120
" 는 단일 결합 또는 이중 결합을 나타내며; L1 및 L2는 같거나 다른 것으로, 화학식 (I)에서의 L과 동일하게 독립적으로 정의되며; X1 및 X2는 NH, N (R1), O, S, CH2 또는 Ar으로부터 독립적으로 선택되며, R1은 C1-C6 알킬이고, Ar은 방향족 또는 헤테로 방향족 고리이고; 이때 Drug1 및 Drug2는 동일하거나 상이한, 화학식 I, Ia, Ib, Ic 또는 Id의 아마니타 독소 유도체이다. 또한 Drug1 또는 Drug2는 부재할 수 있지만 동시에 부재할 수는 없다. Drug1 또는 Drug2 중 임의의 하나가 화학식 I, Ia, Ib, Ic 또는 Id의 아마니타 독소의 유도체인 경우, Drug1 또는 Drug2 중 다른 하나는 (OCH2CH2)rOR10, 또는 (OCH2CH(CH3))pOR10, 또는 NH(CH2CH2O)pR10, 또는 NH(CH2CH(CH3)O)pR10, 또는 N[(CH2CH2O)pR10][(CH2CH2O)rR5], 또는 (OCH2CH2)pCOOR10, 또는 CH2CH2(OCH2CH2)pCOOR10, 중에서 선택될 수 있으며, 여기에서 p, r, R10은 본 특허 출원 전반에 걸쳐 많은 실시예에 기재되어 있다. 추가적으로, Drug2 및 L2는 부재할 수 있으며, 따라서 X2는 NH2 또는 OH이다.
또다른 실시 양태에서, IgG 항체가, IgG 항체의 한 쌍의 티올을 통해 화학식 I, Ia, Ib, Ic 또는 Id의 아마니타 독소 유도체와 접합될 때, 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic) 또는 (Id)의 아마니타 독소를 함유하는 ADC는 경쇄와 중쇄 사이에서 (디설파이드 결합의 환원을 통해), 2 개의 중쇄 사이의 상부 디설파이드 결합, 및 2 개의 중쇄 사이의 하부 디설파이드 결합을 통해 IgG 항체의 티올 쌍에서 특이적으로 다리 링커를 통해 형성되는 것이 또한 바람직하다. (IV-1), (IV-2), (IV-3), (IV-4), (IV-5) 및 (IV-6)의 구조를 갖는 가교 결합이 바람직하다.
Figure pct00121
여기에서 "
Figure pct00122
"는 단일 결합 또는 이중 결합을 나타내고; 약물은 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic) 또는 (Id)의 아마니타 독소의 유도체이다;
Figure pct00123
는 항체상의 부위를 나타낸다; L, X, n 및 R12는 화학식 (I)에서 정의된 바와 동일하다.
항체상의 티올 쌍은 디티오트레이톨(DTT), 디티오에리트리올(DTE), L- 글루타티온 (GSH), 트리스 (2- 카르복시에틸) 포스핀 (TCEP), 2- 머캅토에틸아민 (β-MEA) 및/또는 베타 머 캅토 에탄올 (β-ME, 2-ME )로부터 선택된 환원제에 의해 환원되는 것이 바람직하다. 보다 바람직하게는, 이들 환원제는 고체 중합체 또는 고체 입자에 로딩되거나 공유 결합된다. 중합체 또는 입자는 폴리에틸렌, 폴리 아크릴레이트, 실란, 교차 결합 실리카 (예: 2- 메르캅토에틸) 실리카, (아미노에틸) 실리카, (아미노프로필) 실리카, 폴리에틸렌 테레프탈레이트, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리스티렌, 폴리 (이소프로필 아크릴레이트), 덱스트란 (예: 세파덱스, 가교 결합된 덱스트란), 이소프로필 아크릴 아미드 부틸 메타 크릴 레이트 공중합체, 다당류 중합체 (예: 아가로스, 한천, 아가로펙틴, 세파로스)가 될 수 있다. 중합체 결합 환원제의 환원 하에서, 디설파이드 결합 쌍은 특정 위치에서 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 항체의 경첩 부위 또는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 항체의 중쇄와 경쇄 사이의 이황화 결합 또는 단백질 또는 세포 결합의 특정 외부 표면 분자에서 선택적으로 환원될 수 있다. 따라서, 세포 결합 분자에 접합된 아마니타 독소의 유도체의 위치 뿐만 아니라 로딩 비율이 제어된다.
또한, 식 (III-1), (III-2), (III-3), (III-4), (III-5), (III-6), (III-9), (III-10), (III-11) 또는 (III-12)의 화합물은 화학식 (I)의 아마니타 독소의 유도체이고, Drug1 또는 Drug2 중 다른 하나는 단백질, 항체, 항체 이합체, 항체 다합체, 이중 특이적 또는 삼특이적 항체, 단일쇄 항체, 표적 세포에 결합하는 항체 단편, 단일클론 항체 또는 다클론 항체, 발색단 분자 (chromophore molecule), 튜 뷸리신 유도체 (tubulysin derivative) 메이탄시노이드, 탁사노이드(taxanoid) (탁산), CC-1065 유사체, 다우노루비신 또는 독소루비신 화합물, 벤조디아제핀 다이머 (예: 피롤로 벤조디아제핀 (PBD)의 다이머, 토메이마이신, 안트라 마이신, 인돌 리노 벤조디아제핀, 이미다조 벤조티아디아제핀 또는 옥사졸리디논벤조디아제핀), 칼리케아미신 또는 엔디딘 항생제, 악티노마이신, 아자세린 (azaserine), 블레오 마이신 (bleomycin), 에피루비신 (epirubicin), 타목시펜 (타목시펜), 이데루비신 (idarubicin), 돌라스타틴 (dolastatins), 어리스타틴 유도체, (예: 모노 메틸 아우리스타틴 E, MMAE, MMAF, 아우리스타틴 PYE, 아우리스타틴 TP, 아우리스타틴 2-AQ, 6-AQ, EB (AEB) 및 EFP (AEFP)), 듀오카르마이신, 티오테파, 빈크리스틴, 헤미어스터린, 나즈마미드, 마이크로지닌, 라디오스민, 대체 항균제, microsclerodermin, 테노닐아미드, 에스페라미신, PNU-159682, 젤다나마이신, 메토트렉세이트, 빈데신 (vindesines), siRNA, 핵산 분해 효소 (nucleolytic enzyme)로부터 선택될 수 있다. 이들 기능 분자 또는 세포 독성 약물 중 일부의 바람직한 구조의 예가 하기에 예시되어 있다 :
Figure pct00124
Figure pct00125
Figure pct00126
Figure pct00127
Figure pct00128
Figure pct00129
여기에서 R10은 화학식 (I)에서 기재되어 있고,
Figure pct00130
는 링커 L1 또는 링커 L2 중 어느 하나를 연결하기 위한 부위이다.
접합에서, 본 발명의 이들 유도체의 유도체들과의 로딩 (약물/항체 비율) 및/또는 ADC의 위치는 이를테면 다음과 같이 다른 상이한 방식으로 제어될 수 있다:
(i) 항체에 대한 약물 - 링커 중간체 또는 링커 시약의 몰 과량을 제한함,
(ii) 컨쥬게이션 반응 시간 또는 온도를 제한하는 것,
(iii) 시스테인 티올 변형에 대한 부분적 또는 제한적 환원 조건,
(iv) 리신, 탄수화물, 세린, 티로신, 글루타민, 히스티딘, 시스테인 또는 잔기의 수 및 위치가 변형되거나 또는 비 천연 아미노산이 항체 서열에 삽입되도록 항체의 아미노산 서열을 재조합 기술로 조작하는 방법.
이러한 엔지니어링 방법에는 thioMab, ThioFab, 티오탄수화물, 셀레노 시스테인, 비 천연 아미노산의 세포 기반 접근법, 비 천연 아미노산의 OCFS (Open Cell-Free Synthesis), 글리칸의 산화 또는 화학 효소적 변형, 포르밀글리신 생성 효소 (FGE), Sortase 또는 Transglutaminases, Fc- 결합 도메인 (FcBD)을 통한 접합 또는 뉴클레오티드 결합 사이트 또는 촉매 항체를 통한 접합이 있는데 이것으로 제한되지는 않는다 (Dennler, P. 등, Antibodies 2015, 4, 197-224)
아마니타 독소 유도체의 ADC를 제조하기 위한 다른 추가적인 예시적 방법은 특허의 설명에서도 1-28 및 실시예 1-70에 기재되어있다.
아마니타 독소의 이러한 유도체의 세포 결합제- 약물 컨쥬게이트의 치료
본 발명의 세포 결합제-약물 접합체, 바람직하게는 항체-약물 접합체 (ADC)는 예를 들어, 종양 항원의 과발현을 특징으로 하는 다양한 질병 또는 장애를 치료하는데 사용될 수 있는 것으로 고려된다. 예시적인 증상 또는 과증식성 질환은 양성 또는 악성 종양; 백혈병 및 림프성 악성 종양을 포함한다. 다른 것들은 자가 면역 질환을 포함하여 신경 세포, 신경교 세포, 성상 세포, 시상 하부, 선, 대식 세포, 상피 세포, 간질 세포, 모세포, 염증성, 혈관 신생 및 면역 질환을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 본 발명의 접합체는 암 치료를 위한 본 발명의 조성물 및 방법에 따라 사용된다. 암에는 부신 암, 항문 암, 방광암, 뇌 종양 (성인, 뇌 줄기 세포종, 유년기, 소뇌 성상 세포종, 대뇌 성상 세포종, 뇌실막종, 수 모세포종, 흉막 원시 신경 외배엽 및 뇌성 종양, 시각 경로 및 시상 하부암이 포함되나 이에 국한되지 않음) 유방암, 유방암, 유암종, 위장 암, 알 수 없는 원발성 암종, 자궁 경부암, 결장암, 자궁 내막 암, 식도암, 간외 담관 암, Ewings 종양 가족 (PNET), 외래 세포 암 종양, 눈 암, 안구 내 흑색종, 담낭암, 위암 (위), 생식 세포 종양, 고환외(Extragonadal), 임신성 융모 종양, 두경부암, 하인두암, 섬 세포 암종, 신장 암 (신세포 암), 후두암, 백혈병 (급성 림프구성, 급성 골수성, 만성 림프성 백혈병, 만성 골수성, 털이있는 세포), 입술과 구강암, 간암, 폐암 (비소 세포, 소형 세포, 림프종 (에이즈 관련, 중추 신경계, 피부 T 세포, 호 지킨 병, 비호 지킨 병, 악성 중피종, 흑색종, 메르 셀 세포 암종, 잠복 원발을 동반한 전이성 편평 상피암, 다발성 골수종 및 기타 혈장 세포 신 생물, 균사 증후군, 골수 이형성 증후군, 골수 증식성 장애, 비 인두 암, 신경 아세포종, 구강암, 구강암, 골육종, 난소암 (상피 세포, 생식 세포 종양, 저 악성 전위 종양), 췌장암 (외분비, 섬 세포 암종), 부비동 부비강과 비강암, 부갑상선 암, 암세포 암, 갈색 세포종 암, 뇌하수체 암, 혈장 세포 신생물, 전립선 암 횡문근 육종, 직장 암, 신 세포 암 (신장 암), 신장 골반 및 요관 (Transitional Cell), 타액선 암, Sezary 증후군, 피부암, 피부암 (피부 T 세포 림프종, 카포시 육종, 흑색종), 소장 암, 연조직 육종, 위암, 고환암, Thymoma (악성 종양) 암, 요도 암, 자궁암 (육종), 유년기의 특이한 암, 질 암, Vulvar 암, Wilms 종양이 포함되는데 이들로만 국한되지는 않는다.
또다른 특정 실시 양태에서, 본 발명의 화합물 및 접합체는 자가 면역 질환의 치료 또는 예방을 위한 본 발명의 조성물 및 방법에 따라 사용된다. 자가 면역 질환에는 Achlorhydra 자가 면역 활성 만성 간염, 급성 전염성 뇌척수염, 급성 출혈성 뇌척수지염, 애디슨 질환, 감마 글로불린 혈증, 원형 탈모증, 근 위축성 측삭 경화증, 강직성 척추염, 항 -GBM / TBM 신염, 항 인지질 증후군, Antisynthetase 증후군, 관절염, 아토피성 알레르기, 아토피 피부염, 자가 면역성 재생 불량성 빈혈,자가 면역성 심근 병증,자가 면역 용혈성 빈혈,자가 면역성 간염, 자가 면역 내이성 질병,자가 면역성 림프 증식 증후군, 자가 면역 말초 신경 병증, 자가 면역성 췌장염, 자가 면역성 췌장 내분비 증후군 I 형, II 형 및 III 형,자가 면역성 프로게스테론 피부염,자가 면역성 혈소판 감소성 자반병, 자가 면역성 포도막염, Balo 병 / Balo 동맥 경화증, Bechets 증후군, 버거 병, Bickerstaff 뇌염, 만성 피로 면역 증후 증후군, 만성 염증성 탈수 초성 다발성 신경 병증, 만성 재발성 다발성 골수염, 만성 라임 병, 만성 심근 경색증, 만성 심근 경색증, 만성 폐쇄성 폐 질환, 척 슈트라우스 (Churg-Strauss) 증후군, 세균성 천포창, 세균성 질병, 코간 증후군, 콜드 아글 루티 닌병, 보체 성분 2 결핍증, 뇌동맥염, 크레스트 증후군, 크론 병 (특발성 염증성 장 질환), 커싱 증후군, Dercum 병, Dermatomyitis, 피부 근염, 1 형 당뇨병, Diffuse 피부 전신 경화증, Dressler 증후군, 원반모양 홍반 루푸스, 습진, 자궁 내막증, Enthesitis 관련 관절염, 호산 구성 근막염, 후천성 표피 수포증, 백혈구 증식성 혈관염, 홍반 결절, 필수 혼합 저온글로불린혈증, Evan 증후군, 진행성 골화성 섬유이형성증, 섬유근통증, 섬유근염, 섬유증 aveolitis, 위염, 위장 천포창, 거대 세포 동맥염, 사구체 신염, 굿파 슬러 증후군, 그레이브스 병, 길랑 - 바레 증후군, 하시 모토 뇌염, 하시모토 갑상선염, 용혈성 빈혈, 헤 노크 숀 레인 자반병, 헤르페스 임신, 화농성 한선염, 휴즈 증후군 (항인지질 증후군 참조), 저혈당 글로블린 혈증, 특발성 염증성 탈수 초성 질환, 특발성 폐 섬유증, 특발성 혈소판 감소성 자반병 (자가 면역 혈소판 감소 자반증 참조), IgA 신 장애 (버거 병), 삽입체 근육염, 염증성 탈수 초성 다발성 신경병증, 간질성 방광염, 과민성 장 증후군, 청소년 특발성 관절염, 청소년 류마티스 관절염, 가와사키 병, Lambert-Eaton 근 형성 증후군, 백혈구 파괴성 혈관염, 편평 태선, 이끼 경화증, 선형 IgA 병 (LAD), 루게릭 병 (또한 근 위축성 측삭 경화증) 루푸 이드 간염, 루푸스 홍반, 마지드 증후군, 메니에르 병, 현미경 적 다발성 혈관염, 밀러 피셔 증후군, 혼합 결합 조직 질환, 국소피부경화증, Mucha-Habermann 병, Muckle-Wells 증후군, 다발성 골수종, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 근염, 기면증, 시신경 척수염 (Devic병), 신경근긴장증, 백내장성 천포창, 안구간대경련-근간대경련 증후군, Ord 갑상선염, 회맹 류마티즘, PANDAS (연쇄상 구균과 관련된 소아자가 면역 신경 정신 장애), 소 혈관성 소뇌 변성, 발작성 야간 혈색소증, 패리롬 버그 증후군, Parsonnage-Turner 증후군, 평면부염(Pars planitis), 천포창, 천포창 불가리스, 악성 빈혈, Perivenous 뇌척수염, POEMS 증후군, 결절성 다발 동맥염, 류마치스성 관절염, 다발성 근염, 원발성 담즙성 간경화, 원발성 경화성 담관염, 진행성 염증성 신경 병증, 건선, 건선성 관절염, 악성 피로 증후군, 순수한 적혈구 증식증, 라스무센의 뇌염, 레이노 현상, 재발성 다발성 연쇄 염, 라이 타 증후군,하지 불안 증후군, 복막 섬유증, 류마티스 관절염, 류마티스 열, 사코이도증, 정신 분열병, 슈미트 증후군, 쉬니 쯔 러 증후군, 공막염, 경피증, 쇼그렌 증후군, 척추 관절 병증, 끈끈한 혈액 증후군, 정지의 질병, 뻣뻣한 사람 증후군, 아 급성 세균성 심내막염, 수삭 증후군, 스윗 증후군, 시데남 무도병, 동정 안염, 다카야스 동맥염, 일시적인 동맥염 (거대 세포 동맥염), Tolosa-Hunt 증후군, 횡격근염, 궤양성 대장염 (특발성 염증성 장 질환의 일종), 미분화된 결합 조직 질환, 미분화 척추 관절 병증, 혈관염, 백반증, 베게너 육아 종증, 윌슨 증후군, 위스 코트 - 알드리치 증후군이 포함되는데 이들로 한정되지는 않는다.
또다른 특정 실시 양태에서, 자가 면역 질환의 치료 또는 예방을 위한 접합체에 사용되는 결합 분자는 이들로 국한되지는 않지만, 항-엘라스틴 항체; 상피 세포 항체에 대한 숙주; 항-베이스먼트 멤브레인 콜라겐 타입 IV 단백질 항체; 항핵 항체; 안티 ds DNA; 안티 ss DNA, 안티 카디오 리핀 항체 IgM, IgG; 항균제 항체; 항 인지질 항체 IgK, IgG; 항 SM 항체; 항 미토콘드리아 항체; 갑상선 항체; 마이크로솜 항체, T 세포 항체; 티로글로불린 항체, 반대로 SCL-70; 반 조; 항 -U1RNP; 항-La / SSB; 안티 SSA; 안티 SSB; 항체 세포 항체; 안티 히스톤; 항 RNP; C-ANCA; P-ANCA; 안티 동원체; 항 섬유소 및 항 GBM 항체, 항 갱글 리오 시드 항체; 항 - 데스모게인 3 항체; 항-p62 항체; 항 sp100 항체; 항 미토콘드리아 (M2) 항체; 류마티스 인자 항체; 항 -MCV 항체; 항 - 토포이소머라제 항체; 항 호중구 세포질 (cANCA) 항체를 포함한다.
특정 바람직한 구체예에서, 본 발명의 접합체에 대한 결합 분자는 자가 면역 질환과 관련된 활성화된 림프구 상에 발현된 수용체 또는 수용체 복합체에 결합 할 수 있다. 수용체 또는 수용체 복합체는 면역 글로불린 유전자 수퍼 패밀리 멤버 (예: CD2, CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD22, CD28, CD30, CD33, CD37, CD38, CD56, CD70, CD79, CD90, CD152 / CTLA- 4, PD-1 또는 ICOS), INF-R1, TNFR-2, RANK, TACI, BCMA 등의 TNF 수용체 슈퍼 패밀리 멤버 (예: CD27, CD40, CD95 / Fas, CD134 / OX40, CD137 / 4-1BB, 오스테오프로테게린, Apo2 / TRAIL-R1, TRAIL-R2, TRAIL-R3, TRAIL-R4 및 APO-3), 인테그린, 사이토 카인 수용체, 케모카인 수용체, 주요 조직 적합성 단백질, 렉틴 (C- 형, S 형 또는 I- 형), 또는 보체 대조 단백질을 포함할 수 있다.
또 다른 특정 실시 양태에서, 바이러스 또는 미생물 항원에 대해 면역 특이적인 유용한 결합 리간드는 인간화 또는 인간 모노클로날 항체이다. 본원에 사용 된 용어 "바이러스 항원"은 이들로 제한되지는 않지만, 임의의 바이러스 펩타이드, 폴리 펩타이드 단백질 (예: HIV gp120, HIV nef, RSV F 당 단백질, 인플루엔자 바이러스 뉴라미미다제, 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌, HTLV 택스, 단순 포진 바이러스 (예: gB, gC, gD 및 gE) 및 B 형 간염 표면 항원)을 포함하며, 면역 반응을 유발할 수 있다. 본원에 사용된 용어 "미생물 항원"은 면역 반응을 유도할 수있는 임의의 미생물 펩타이드, 폴리 펩타이드, 단백질, 사카 라이드, 다당류 또는 지질 분자 (예를 들어, 박테리아, 균류, 병원성 원충, 또는 LPS 및 캡슐 폴리사카 라이드 5/8을 포함하는 효모 폴리 펩타이드)를 포함하며, 이것들로 제한되지는 않는다. 바이러스 또는 미생물 감염에 대해 이용 가능한 항체의 예는 RSV 감염의 치료를 위한 인간화된 호흡기 융합 바이러스 단클론 항체인 팔리비주맵 (Palivizumab); HIV 감염의 치료를 위한 CD4 융합 항체인 PRO542; B 형 간염 바이러스 치료용 인간 항체인 오스타비르 (Ostavir); 사이토 메갈로 바이러스의 치료를 위한 인간화된 IgG 1 항체인 PROTVIR; 및 항 -LPS 항체를 포함하며, 이들로 제한되지는 않는다.
본 발명의 결합 분자 - 세포 독성제 접합체는 감염성 질환의 치료에 사용될 수 있다. 이러한 감염성 질병은 Acinetobacter 감염, 방선균 감염, 아프리카 수면 증 (아프리카 트리파노소마증), 에이즈 (Acquired immune deficiency syndrome), 아메바성 감염, 아나플라스마증, 탄저병, 용혈성 아카노박테리아균 감염, 아르헨티나 출혈열, 회충증, 아스페르길루스증, 아스트로 바이러스 감염, Babesiosis, Bacillus cereus 감염, 세균성 폐렴, 세균성 질염, Bacteroides 감염, Balantidiasis, Baylisascaris 감염, BK 바이러스 감염, Black piedra, Blastocystis hominis 감염, Blastomycosis, 볼리비아 출혈열, Borrelia 감염, 보툴리누스 중독 및 보툴리누스 중독, 브라질 출혈열, Brucellosis, Burkholderia 감염, Buruli 궤양, Calicivirus 감염 (노로바이러스 및 사포바이러스), 캄필로박터 증 (Campylobacteriosis), 칸디다증 (Moniliasis; Thrush), 고양이 스크래치 병, 셀룰라이트 염, Chagas 병 (미국 트리파노노미시스), 췌장암, 수두, 클라미디아, 클라미도 필라뉴모니아 감염, 콜레라, 크로모블라스토마이코시스, 간디스토마증, Clostridium difficile 감염, 콕시디오이데스 진균증, 콜로라도 진드기 열 (Colorado tick fever), 일반 감기 (급성 바이러스성 비인두염, 급성 코 감기), 크로이츠 펠트 - 야콥병, 크리미아 - 콩고 출혈열, 크립토코쿠스증, 크립토스포리듐증, 피부 유충 migrans, 원포자충증, 낭포성 경화증, 세포 거대 바이러스 감염, 뎅기열, Dientamoebiasis, 디프테리아, 열두조충증, 다르쿤큘라스증, 에볼라 출혈열, 에코코코시스, 에를리히코스증, 요충증 (Pinworm 감염), Enterococcus 감염, 엔테로 바이러스 감염, 전염병 발진티푸스, 홍반 감염 (제 5 병), Exanthem 서비텀, 비대흡충증, 간질증, 치명적인 가족의 불면증, 필라리아병, Clostridium perfringens에 의한 식중독, 자유 -활성 아메바 감염, Fusobacterium 감염, 가스 괴저 (클로스트리듐성근괴사), 지질 강직 (Geotrichosis) Gerstmann-Straussler-Scheinker 증후군, 편모충증, 점막 마비저, 유두 증식 증, 임질, 육아종 육아종 (Donovanosis), A 군 연쇄 구균 감염, B 군 연쇄상 구균 감염, Haemophilus 인플루엔자 감염, 손, 구강 질병 (HFMD), (한타바이러스 폐 증후군), 헬리코박터 파일로리 (Helicobacter pylori) 감염, 용혈성 - 요독 증후군, 신장 증후군을 동반 한 출혈열, A 형 간염, B 형 간염, C 형 간염, D 형 간염, E 형 간염, 단순 헤르페스, 히스토플라스마증, Hookworm 감염, 인간 보카바이러스 감염, 인간 ewingii ehrlichiosis, 인간 과립구 아나플라스마증, 인간 폐렴후바이러스 감염, 인간 단핵백혈구 엘리히증, 인간 유두종 바이러스 감염, 인간 파라 인플루엔자 바이러스 감염, Hymenolepiasis, Epstein-Barr 바이러스 전염성 단핵구증 (모노) 인플루엔자, 이노스포리아 증, 카와사키 병, 각막염, Kingella kingae 감염, Kuru, Lassa 열병, Legionellosis (Legionnaires' 질병), Legionellosis (폰티악 열), 레슈마니아증, 나병, 렙토스피라증, 리스테리아 증, 라임 병 (라임보렐리아 증), 림프필라리아시스 (엘레판티스 증), 림프성 충혈 림프성염, 말라리아, 마르부르크 출혈열, 홍역, 멜리 오 증증 (위트 모어 병), 수막염, 수막 구균성 질환, 메타 노 미아 증, 미포자충증, 전염성 연속증, 유행성 이하선염, 생쥐 발진티푸스 (발진티푸스), 마이코 플라스마 폐렴, 균종(Mycetoma), 구더기증, 신생아 결막염 (신생아 안염), (New) Variant Creutzfeldt-Jakob 병 (vCJD, nvCJD), 노카르디아증, 사상충증 (강변 실명증), 파라콕시디오이데스 진균증 (남미 분열증), 폐흡충증, 파스투렐라증, Pediculosis capitis (머릿니) Pediculosis corporis (몸 이), Pediculosis pubis (치모슬, 사면발이), 골반 염증성 질환, 백일해 (백일해), 전염병, 폐렴 구균 감염, Pneumocystis 폐렴, 폐렴, 소아마비, Prevotella 감염, 원발성 아메바성 뇌수막염, 진행성 다병성 백혈구 뇌증, 사이푸틴증, 큐 발열, 광견병, 서교열, 호흡기 합병증 바이러스 감염, Rhinosporidiosis, 라이노 바이러스 감염, 리케차리아 감염, Rickettspox, Rift Valley 열, 록키 마운틴 열병, 로타 바이러스 감염, 풍진, 살모넬라증, SARS (중증 급성 호흡기 증후군), Scabies, Schistosomiasis, 패혈증, 세균성 세균 증 (세균성 이질) 대상 포진 (대상 포진), 천연두 (바리올라), 포자낭 병증, 포도상구균 식중독, 포도상구균 감염, Strongyloidiasis, 매독, Taeniasis, 파상풍 (Lockjaw), Tinea barbae (이발습진(모창)), Tinea capitis (두피의 백선), Tinea corporis (몸의 백선), 고부백선 (Jock 가려움), Tinea manuum (손의 백선), Tinea의 nigra, Tinea pedis (무좀), Tinea unguium (Onychomycosis), Tinea versicolor (Pityriasis versicolor), 톡소카라증 (Ocular Larva Migrans), 톡소카라증 (내장 유충 Migrans), 톡소플라즈마증, 섬모충증, 트리코모나스증, 편충증 (Whipworm 감염), 결핵, 야토병(Tularemia), 우레아플라스마 우레알리티쿰 감염, 베네수엘라 말 뇌염, 베네수엘라 출혈열, 바이러스성 폐렴, 서부 나일강 열, 백색사모 (Tinea blanca), 예르시니아 슈도튜베르큘로시스 감염, 예르시니아증, 황열병, 접합 고혈증이 포함되며, 이들로 제한되는 것은 아니다.
본 특허에서 기술한 결합 분자, 보다 바람직한 항체들은 다음의 병원성 균주들에 대항하는데, 이들로 국한되지는 않으며, Acinetobacter baumannii, Actinomyces israelii, Actinomyces gerencseriae 및 Propionibacterium propionicus, Trypanosoma brucei, HIV (인간 면역 결핍 바이러스), Entamoeba histolytica, Anaplasma 속, Bacillus anthracis, 용혈성 아카노박테리아균, Junin 바이러스, Ascaris lumbricoides, Aspergillus 속, Astroviridae과, 바실러스 세레우스, 다중 박테리아, 박테로이드 속, 발란티디엄 콜리, 바이스리스 카리스 속, BK 바이러스, 피에이 트리아 (Piedraia hortae), 블라스토시스티스 호미니스 (Blastocystis hominis), 블래스트마이세스 더마티티데스 (Blastomyces dermatitides), Machupo 바이러스, 보렐리 아 (Borrelia) 속, 클로스트리디움 보툴리눔 (Clostridium botulinum) Sabia, Brucella 속, 보통 Burkholderia cepacia 및 다른 Burkholderia 종, Mycobacterium ulcerans, Caliciviridae 계통, 캄필로박터 속 (Campylobacter genus), 보통 Candida albicans 및 다른 Candida 종, Bartonella henselae, A Streptococcus 및 Staphylococcus, Trypanosoma cruzi, Haemophilus ducreyi, 수두 대상 포진 바이러스 (VZV), 클라미디아 trachomatis, Chlamydophila pneumoniae, 콜레라 비브리오, Fonsecaea pedrosoi, Clonorchis sinensis, Clostridium difficile, Coccidioides immitis 및 Coccidioides posadasii, 콜로라도 진드기 열 바이러스, 라이노 바이러스, 코로나 바이러스, CJD 프리온, 크림 - 콩고 출혈열 바이러스, Cryptococcus neoformans, Cryptosporidium 속, Ancylostoma braziliense; 여러 기생충, Cyclospora cayetanensis, Taenia solium, 사이토메갈로바이러스, Dengue 바이러스 (DEN-1, DEN-2, DEN-3 및 DEN-4) - 플라비 바이러스, Dientamoeba fragilis, 코리네박테리움 디프테리아, Diphyllobothrium, Dracunculus medinensis, Ebola바이러스, Echinococcus 속, 에르리키히아 속, 엔테로비우스 베르미큐라리스 (Enterobius vermicularis), 엔테로코커스 속, Entero바이러스 속, Rickettsia prowazekii, Parvo바이러스 B19, 인간 헤르페스 바이러스 6 및 인간 헤르페스 바이러스 7, Fasciolopsis buski, Fasciola hepatica 및 Fasciola gigantica, FFI 프리온, Filarioidea 수퍼패밀리, Clostridium perfringens, Fusobacterium 속, Clostridium perfringens; 다른 Clostridium 종, Geotrichum candidum, GSS 프리온, Giardia intestinalis, Burkholderia mallei, Gnathostoma spinigerum 및 Gnathostoma hispidum, Neisseria gonorrhoeae, (Klebsiella granulomatis), 연쇄 구균 (Streptococcus pyogenes), 연쇄상 구균 (Streptococcus agalactiae) Haemophilus 인플루엔자, 엔테로바이러스, 주로 Coxsackie A 바이러스와 엔테로바이러스 71, Sin Nombre 바이러스, 헬리코박터 파일로리, Escherichia coli O157 : H7, Bunyaviridae 계통, A 형 간염 바이러스, B 형 간염 바이러스, C 형 간염 바이러스, D 형 간염 바이러스, E 형 간염 바이러스, 단순 포진 바이러스 1, 단순 포진 바이러스 2, Histoplasma capsulatum, Ancylostoma 십이지장 및 Necator americanus, Hemophilus 인플루엔자, 인간 보카(boca)바이러스, Ehrlichia ewingii, Anaplasma phagocytophilum, 인간 폐렴후바이러스, Ehrlichia chaffeensis, 인간 유두종 바이러스, 인간 파라 인플루엔자 바이러스, Hymenolepis nana 및 Hymenolepis diminuta, 엡스타인- 바 바이러스, 오르토믹소바이러스과 계통, Isospora belli 계, Kingella kingae 계, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella ozaenas, Klebsiella rhinoscleromotis, 쿠루 프리온, 라사 바이러스, 레지오넬라 뉴모필라, 레지오넬라 뉴모필라, Leishmania 속, Mycobacterium leprae 및 Mycobacterium lepromatosis, Leptospira 속, Listeria monocytogenes, 보렐리아 부르그도 페리 (Borrelia burgdorferi) 및 기타 보렐리아 (Borrelia) Wuchereria bancrofti 및 Brugia malayi, 림프성 맥락수막염 바이러스 (LCMV), Plasmodium 속, Marburg 바이러스, 홍역 바이러스, Burkholderia pseudomallei, 나이세리아(Neisseria) meningitides, Metagonimus yokagawai, Microsporidia phylum, 전염성 연속증 바이러스 (MCV), 유행성 이하선염 바이러스, Rickettsia typhi, Mycoplasma pneumoniae, (Actinomycetoma) 및 곰팡이 (Eumycetoma)의 수많은 종, 기생 파리목(쌍시) 파리 애벌레, 클라미디아 트라코마 및 임질균(Neisseria gonorrhoeae), vCJD 프리온, 노르카디아 아스테로이디즈 및 다른 Nocardia 종, Onchocerca volvulus, Paracoccidioides brasiliensis, Paragonimus westermani 및 다른 Paragonimus 종, Pasteurella 속, Pediculus humanus capitis, Pediculus humanus corporis, Phthirus pubis, 보르데텔라 퍼투시스, Yersinia pestis, Streptococcus pneumoniae, Pneumocystis jirovecii, 폴리오 바이러스, Prevotella 속, Naegleria fowleri, JC 바이러스, Chlamydophila psittaci, Coxiella burnetii, 광견병 바이러스, Streptobacillus moniliformis 및 Spirillum minus, 호흡기 세포 융합 바이러스, Rhinosporidium seeberi, Rhino바이러스, Rickettsia 속, 리케차 아카리 (Rickettsia akari), 리프트 밸리 발열 바이러스 (Rift Valley 열 바이러스), 리케차 리케티 (Rickettsia rickettsii), 로타 바이러스 (로타바이러스) 풍진 바이러스, 살모넬라 (Salmonella) 속, 사스 (SARS) 코로나 바이러스 (코로나바이러스), 사코프테스 스카비에 (Sarcoptes scabiei) Schistosoma 속, Shigella 속, 수두 대상 포진 바이러스, 바렐라 메이저 또는 바리 아 마이너, 스포로트릭스 schenckii, 포도상 구균, 포도상구균 (Staphylococcus) 속, 포도상 구균 (Staphylococcus aureus), 연쇄상구균 (Streptococcus pyogenes), Strongyloides stercoralis, Treponema pallidum, Taenia 속, Clostridium tetani, 선모충 (Trichophyton) 속, 선모충 (Trichophyton tonsurans), Trichophyton 속, 표피 박테리아 (Epidermophyton floccosum), 선모충 (Trichophyton rubrum), (Trichophyton mentagrophytes), 선모충 (Trichophyton rubrum), Hortaea werneckii, Trichophyton 속, Malassezia 속, Toxocara canis 또는 Toxocara cati, Toxoplasma gondii, Trichinella spiralis, Trichomonas vaginalis, Trichuris trichiura, Mycobacterium tuberculosis, Francisella tularensis, Ureaplasma 우레알리티쿰, 베네수엘라 말 뇌염 바이러스, 비브리오 콜레라, 구아나리토 바이러스, 웨스트 나일 바이러스, Trichosporon beigelii, 예르시니아 슈도튜베르큘로시스, Yersinia enterocolitica, 황열병 바이러스, Mucorales order (Mucormycosis) 및 Entomophthorales order (Entomophthoramycosis), Pseudomonas aeruginosa, Campylobacter (Vibrio) 태아, Aeromonas hydrophila, Edwardsiella tarda, Yersinia pestis, Shigella dysenteriae, Shigella flexingi, Shigella sonnei, 살모넬라 티피뮤륨 (Salmonella typhimurium), 트레폰네마 페르테누 (Treponema pertenue), Treponema carateneum, 보렐리아 빈센티 (Borrelia vincentii), 보렐리아 부르그도페리 (Borrelia burgdorferi), 렙토스피라 icterohemorrhagiae, Pneumocystis carinii, Brucella abortus, Brucella suis, Brucella melitensis, Mycoplasma spp., Rickettsia prowazeki, Rickettsia tsutsugumushi, 클라미디아 (Clamydia) spp .; 병원성 진균 (Aspergillus fumigatus, 칸디다 알비칸스 (Candida albicans), 히스토플라스마 캡슐라툼 (Histoplasma capsulatum)); 원생 동물 (Entomoeba histolytica, Trichomonas tenas, Trichomonas hominis, Tryoanosoma gambiense, Trypanosoma rhodesiense, 내장 리슈만편모충, 피부 리슈만편모충, 브라질 레슈마니아, Pneumocystis 폐렴, Plasmodium vivax, Plasmodium falciparum, Plasmodium 말라리아); 또는 Helminiths (일본 주혈흡충, 만손주혈흡충, 방광주혈흡충 및 십이지장충) 을 포함한다.
바이러스 질환의 치료를 위한 본 발명의 결합 리간드로서의 다른 항체로는 이것으로 국한되지는 않지만 병원성 바이러스의 항원에 대한 항체를 포함하며, 예를 들어 제한 사항이 아닌 다음을 포함한다 :Poxyiridae, 헤르페스 바이러스 (Herpesviridae), 아데노 바이러스 (Adenoviridae), 파포바바이러스 (Papovaviridae), 엔테로 바이러스 (Enteroviridae) Picornaviridae, Parvoviridae, Reoviridae, Retroviridae, 인플루엔자 바이러스, 파라 인플루엔자 바이러스, 유행성 이하선염, 홍역, 호흡기 세포융합 바이러스, 풍진, Arboviridae, Rhabdoviridae, Arenaviridae, non-A / non-B 형 간염 바이러스, Rhinoviridae, 코로나바이러스과 (Coronaviridae), 로토바이러스과(Rotoviridae) 온코 바이러스 [예: HBV (간세포 암종), HPV (자궁 경부암, 항문 암), 카포시 육종 관련 포진 바이러스 (카포시 육종), 엡스타인 - 바 바이러스 (비인두암, 버킷 림프종, 일차 중추 신경계 림프종), MCPyV (Merkel 세포 암), SV40 (Simian 바이러스 40), HCV (간세포 암종), HTLV-I (성인 T 세포 백혈병 / 림프종)], 면역 질환으로 인해 바이러스가 생겼다 : [인간 면역 결핍 바이러스 (AIDS)와 같은]; 중추 신경계 바이러스 : [JCV (진행성 다초점 백색질뇌병증)], [MeV (아급성 경화성 범뇌염)], [LCV (림프구성 맥락 수막염), 아르보 바이러스 뇌염 (아르보바이러스 뇌염) 오르토믹소바이러스과 (가능성이 있음) (뇌염 (기면성 뇌염)), RV (광견병), 찬디푸라 바이러스, 헤르페스 바이러스 수막염, 램지 헌트 증후군 II 형; 폴리오 바이러스 (소아마비, 소아마비 후 증후군), HTLV-I (열대 경련성 대부전 마비)]; 세포 거대 바이러스 (사이토메갈로바이러스 망막염, HSV (Herpatic 각막염)); 심혈 관계 바이러스 [CBV (심장막염, 심근염)와 같은]; 호흡기 계통 / 급성 바이러스 비 인두염 / 바이러스성 폐렴 : 엡스타인 바 바이러스 (EBV 감염 / 전염성 단핵구증) 세포 고갈 바이러스; 사스(SARS) 코로나바이러스 (중증 급성 호흡기 증후군) 오르토믹소바이러스과 : 인플루엔자 A / B / C (인플루엔자 / 조류 인플루엔자), Paramyxo바이러스 : 인간 파라인플루엔자 바이러스 (Parainfluenza), RSV (인간 호흡 세포융합 바이러스), hMPV]; 소화 기계 바이러스 [MuV (유행성 이하선염), 세포 거대 바이러스 (사이토메갈로바이러스 esophagitis); 아데노 바이러스 (아데노 바이러스 감염); 로타 바이러스, 노로 바이러스, 아스트로 바이러스, 코로나 바이러스; HBV (B 형 간염 바이러스), CBV, HAV (A 형 간염 바이러스), HCV (C 형 간염 바이러스), HDV (D 형 간염 바이러스), HEV (E 형 간염 바이러스), HGV (간염 G 바이러스) 비뇨 생식기 바이러스 [예: BK 바이러스, MuV (유행성 이하선염)].
또다른 구현예에 따르면, 본 발명은 또한 암 및 자가 면역 질환의 치료를 위한 약학적으로 허용가능한 담체와 함께 본 발명의 접합체를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 암, 자가 면역 질환, 감염성 질환 또는 바이러스성 질환의 치료 방법은 생체 외, 생체 내 또는 생체 외에서 수행 될 수 있다. 시험관 내 사용의 예로는 표적 항원을 발현하지 않는 목적하는 변이체를 제외한 모든 세포를 사멸시키기 위한 세포 배양 처리; 또는 원하지 않는 항원을 발현하는 변이형을 죽이기 위해서이다. 생체 외 사용의 예로는 병에 걸린 세포 또는 악성 세포를 죽이기 위해 동일한 환자에게 이식 (HSCT)을 수행하기 전에 조혈 모세포 (HSC)를 처리하는 것을들 수 있다. 예를 들어, 이식편 대 숙주 질환을 예방하기 위해서, 암 치료 또는 자가 면역 질환의 치료에서 자가 이식 이전에 골수에서 종양 세포 또는 림프 세포를 제거하거나, 이식 이전에 동종 골수 또는 조직으로부터 T 세포 및 다른 림프 세포를 제거하는 생체 외적 처치는 다음과 같이 시행 할 수 있다. 골수를 환자 또는 다른 개체로부터 수확 한 다음, 약 37 ℃에서 약 30 분 내지 약 48 시간 동안 약 1 pM 내지 0.1 mM의 농도 범위의 본 발명의 접합체가 첨가된 혈청을 함유하는 배지에서 배양한다. 배양의 정확한 농도와 시간 (= 투여량)은 숙련된 임상의에 의해 쉽게 결정된다. 배양 후, 골수 세포를 혈청을 함유하는 배지로 세척하고 공지된 방법에 따라 정맥내(i.v.) 주입한다. 환자가 골수 수확 및 처리된 세포의 재주입 시간 사이에 절제 화학 요법 또는 전신 방사선 조사의 과정과 같은 다른 치료를 받는 환경에서, 처리된 골수 세포는 표준 의료 장비를 사용하여 액체 질소에서 냉동 보관된다.
임상적 생체 내 사용에 있어서, 본 발명의 세포 결합제 - 세포 독성제 접합체는 용액으로서 또는 주사를 위해 멸균수에서 재용해 될 수 있는 동결 건조된 고체로서 공급될 것이다. 접합체 투여의 적합한 프로토콜의 예는 다음과 같다. 컨쥬 게이트는 매주, 격주, 격주 또는 매월 4-24 주 동안 또는 정맥내 약덩이(i.v. bolus)로서 질병 진행 또는 수용할 수 없는 독성까지 제공된다. 약 1회분 투약량은 인간 혈청 알부민 (예: 인간 혈청 알부민의 농축 용액, 0.5mg ~ 100mg, 100mg / ml)을 첨가할 수 있는 생리 식염수 10 ~ 500ml에 주어진다. 투약량은 체중의 약 50 ㎍ ~ 20 mg / kg, 주당, 격주, 3주 또는 매월 정맥내(주입 당 10 ~ 200 mg / kg 범위)가 될 것이다. 치료 후 4-24 주에 환자는 두 번째 치료 과정을 받을 수 있다. 투여 경로, 부형제, 희석제, 투여량, 시간 등에 관한 특정 임상 프로토콜은 숙련 된 임상의에 의해 결정될 수 있다. 예를 들어, 간단한 부형제는 0.002 % -0.5 % 폴리소르베이트 (폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60 또는 폴리 소 베이트 80) 또는 다른 제약상 허용되는 계면 활성제, 예컨대 나트륨 라우릴 설페이트, 트리톤 X-100, 0.1 % 내지 10 %의 결합제, 이를테면 수/크로스, 락토오스, 트레 할로 오스 또는 말 토즈와 같은 당류 및 이들의 유도체, 소르비톨 또는 말티톨과 같은 당 알코올, 또는 폴리에틸렌 글리콜 및 구연산염, 숙신산 아세테이트, 인산염 등의 약학적 완충제 0.1 % 내지 10 %, 또는 pH 4.5 ~ 9.5의 특정 pH를 갖는 붕산염 일 수 있다. 특정 애플리케이션에서, 또는 복용 제형은 다당류 및 그 유도체와 같은 다른 부형제를 함유 할 수 있다 :전분, 셀룰로오스 또는 변형 된 셀룰로오스, 예컨대 미세 결정질 셀룰로스 및 셀룰로스 에테르, 예컨대 하이드 록시 프로필 셀룰로오스 (HPC), 하이프로 멜로오스 (하이드록시 프로필 메틸 셀룰로오스 (HPMC)) 또는 하이드록시 프로필 셀룰로오스; 단백질, 예컨대 젤라틴 또는 알부민; 합성 고분자 : 폴리 비닐 피롤리돈 (PVP), 폴리에틸렌 글리콜 (PEG); 비타민 A, 비타민 E, 비타민 C, 레티닐 팔미테이트, 셀레늄과 같은 항산화제; 시스테인, 티로신 또는 메티오닌과 같은 아미노산; 파라벤: 메틸 파라벤과 프로필 파라벤과 같은 합성 방부제.
선별된 세포 집단을 죽이는 생체 내 또는 생체 외 방법에 따라 치료할 수 있는 의학적 상태의 예로는 어떤 유형의 암의 악성 종양, 자가 면역 질환, 이식 거부 및 감염 (바이러스, 세균 또는 기생충)이 있다.
원하는 생물학적 효과를 달성하는데 필요한 컨쥬 게이트의 양은 화학적 특성, 효능 및 접합체의 생체 이용률, 질병의 종류, 환자가 속한 종, 환자의 질환 상태, 투여 경로, 필요한 투여량, 투여 및 처방을 지시하는 모든 인자를 포함하는 다수의 인자들에 따라 달라질 수 있다.
일반적으로, 본 발명의 세포 결합제 - 세포 독성제 접합체는 비경 구 투여를 위한 0.1 내지 10 % w / v 접합체를 함유하는 수성 생리 학적 완충액 중에 제공 될 수 있다. 일반적인 용량 범위는 체중의 1μg / kg 내지 0.1g / kg, 하루, 3 일, 1 주일, 격주, 3 주 또는 4 주에 1 회이다. 바람직한 투여량 범위는 주 단위로 체중의 0.01 mg / kg 내지 20 mg / kg 1주, 2 주간, 3 주간 또는 1개월마다 또는 어린아이의 경우에도 등가 투여량이다. 투여될 약물의 바람직한 투여량은 질병 또는 장애의 진행 유형 및 범위, 특정 환자의 전반적인 건강 상태, 선택된 화합물의 상대적인 생물학적 효능, 화합물의 제형, 투여 경로 (정맥 내, 근육 내 또는 기타), 선택된 전달 경로에 의한 화합물의 약동학적 성질, 및 속도 (볼러스 또는 연속 주입) 및 투여 계획 (주어진 시간 기간에서의 반복 횟수)와 같은 변수에 의존할 가능성이 있다.
본 발명의 세포 결합제 - 세포 독성제 접합체는 또한 단위 투여 형태로 투여 될 수 있으며, 용어 "단위 투여량"은 환자에게 투여 될 수 있고, 용이하게 취급되고 포장될 수 있는 단일 투여량을 의미하며, 이후에 기술되는 바와 같이, 활성 접합체 자체 또는 약학적으로 허용 가능한 조성물 중 하나를 포함하는 물리적 및 화학적으로 안정한 단위 투여량으로서의 상태로 유지된다. 이와 같이, 전형적인 총 1 일 투여량 범위는 0.01 내지 100 mg / kg 체중이다. 일반적 지침에 따라, 사람에 대한 단위 용량은 하루에 1mg에서 3000mg까지 다양하다. 바람직하게는 단위 투여 량 범위는 1 일 1 회 내지 3 회, 1 주일, 2 주, 3 주 또는 1개월마다 투여되는 0.1 내지 500 mg이며, 더욱 바람직하게는 1 mg 내지 500 mg로, 주 1 회, 격주 또는 3주에 1번 투여된다. 본원에서 제공되는 접합체는 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제와의 혼합물에 의해 제약 조성물로 제형화 될 수 있다. 이러한 단위 투여 조성물은 경구 투여, 특히 정제, 단순 캡슐 또는 연질 겔 캡슐의 형태로 사용하기 위해 또는 비강 내로 투여, 특히 분말, 점 비액 또는 에어로졸의 형태로; 또는 피부 투여, 이를테면 크림, 로션, 젤 또는 스프레이, 또는 경피 패치를 통해 국소적으로 사용을 위해 제조될 수 있다. 상기 조성물은 편리하게 단위 투약 형태로 투여 될 수 있고, 예를 들어, Remington : The Science and Practice of Pharmacy, 21th ed.;에 기술 된 바와 같이 약학 분야에 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. Lippincott Williams & Wilkins : 필라델피아, PA, 2005. 바람직한 제형은 본 발명의 화합물이 경구 또는 비경구 투여를 위해 제형화된 약제학적 조성물을 포함한다. 경구 투여를 위해, 정제, 환제, 산제, 캡슐제, 트로키제 등은 다음 성분 중 하나 이상 또는 유사한 성질의 화합물을 함유할 수 있다 :미결정 셀룰로오스 또는 트라가칸트 고무와 같은 결합제; 전분 또는 락토오스와 같은 희석제; 전분 및 셀룰로스 유도체와 같은 붕해제; 마그네슘 스테아레이트와 같은 윤활제; 콜로이드성 이산화 규소와 같은 유동화제; 수크로스 또는 사카린과 같은 감미제; 또는 페퍼민트, 또는 메틸 살리실레이트와 같은 향미제를 포함할 수 있다. 캡슐은 하드 캡슐 또는 연질 캡슐의 형태 일 수 있으며, 일반적으로 전분 캡슐뿐만 아니라 가소제와 임의로 블렌딩된 젤라틴 블렌드로 제조된다. 또한, 투약 단위 형태는 투약 단위의 물리적 형태를 변형시키는 다양한 다른 물질, 예를 들어 설탕, 쉘락 또는 장용 물질의 코팅을 포함할 수 있다. 다른 경구 투여 형태의 시럽 또는 엘릭서에는 감미료, 방부제, 염료, 착색제 및 향료가 포함될 수 있다. 또한, 활성 화합물은 속 용해성, 개질- 방출 또는 서방성 제제 및 제제에 혼입될 수 있으며, 이러한 서방성 제제는 바람직하게는 바이모달 (bi-modal)이다. 바람직한 정제는 유당, 옥수수 전분, 마그네슘 실리케이트, 크로스 카멜 로스 나트륨, 포비돈, 마그네슘 스테아 레이트 또는 탈크를 임의의 조합으로 함유한다. 비경구 투여를 위한 액체 제제는 멸균 된 수성 또는 비- 수성 용액, 현탁액 및 유화액을 포함한다. 액체 조성물은 또한 결합제, 완충제, 방부제, 킬레이트제, 감미료, 향료 및 착색제 등을 포함 할 수 있다. 비 수성 용매는 알콜, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 오일 및 에틸 올레에이트와 같은 유기 에스테르를 포함한다. 수성 담체는 알콜 및 물의 혼합물, 완충 된 매질 및 식염수를 포함한다. 특히, 생체 적합성, 생분해성 락티드 중합체, 락티드 / 글리콜 라이드 공중합체 또는 폴리 옥시 에틸렌 - 폴리 옥시 프로필렌 공중 합체는 활성 화합물의 방출을 조절하기위한 유용한 부형제 일 수있다. 정맥 비히클은 액체 및 영양 보충제, 링거 덱스트로스 (Ringer's dextrose)에 기초한 것과 같은 전해질 보충제 등을 포함할 수있다. 이들 활성 화합물을 위한 잠재적으로 유용한 비경 구적 전달 시스템은 에틸렌 - 비닐 아세테이트 공중 합체 입자, 삼투 펌프, 이식 가능한 주입 시스템 및 리포좀을 포함한다.
대안적 형태의 투여 방식으로는 건조 분말, 에어로졸 또는 드롭과 같은 수단을 포함하는 흡입 제제가 있다. 이들은 예를 들어 폴리 옥시 에틸렌 -9- 라우릴 에테르, 글리코 콜레이트 및 데 옥시 콜레이트를 함유하는 수용액, 또는 점비제 형태로 또는 비내 투여용 겔로서 투여하기 위한 유성 용액일 수 있다. 구강 투여용 제제는 예를 들면, 로젠지 또는 캔디를 포함하며, 착향기 염기, 예컨대 수크로스 또는 아카시아 및 글리코 콜레이트와 같은 다른 부형제를 또한 포함할 수 있다. 직장 투여에 적합한 제형은 바람직하게는 코코아 버터와 같은 고형 담체와 함께 단위 투여 좌제로서 제공되며, 살리실 레이트를 포함 할 수 있다. 피부에 국소 도포하기위한 제형은 바람직하게는 연고, 크림, 로션, 페이스트, 겔, 스프레이, 에어로졸 또는 오일의 형태를 취한다. 사용될 수 있는 담체는 석유 젤리, 라놀린, 폴리에틸렌 글리콜, 알콜 또는 이들의 조합물을 포함한다. 경피 투여에 적합한 제제는 별개의 패치로서 제공될 수 있고 중합체 또는 접착제에 용해 및/또는 분산된 친유성 에멀젼 또는 완충된 수용액 일 수 있다.
특정 실시 양태에서, 본 발명의 세포 결합제 - 세포 독성제 접합체는 다른 공지 된 또는 알려진 치료제와 동시에 투여되며, 방사선 치료, 면역 요법 제,자가 면역 질환 제제, 항 감염제 또는 다른 항체-약물 접합체와 같은 치료제와 병용하여 상승 작용을 일으킨다. 또다른 특정 실시 양태에서, 상승 작용 약물 또는 방사선 요법은 한 양태에서는 본 발명의 콘쥬게이트의 투여 적어도 1 시간, 12 시간, 1 일, 1 주, 2 주, 3 주, 한달 전 또는 후에 투여되고 추가 양태에서는, 접합체의 투여 수 개월 전 또는 투여 후에, 투여 될 수 있다.
다른 구체예에서, 상승 작용 약물은 다음이 포함되며, 이에 국한되지 않는다:
1). 화학 요법제 :
a). 알킬화제 : 예컨대 [질소 머스터드 (클로람부실, 사이클로포스파미드, 이포스파미드, 메클로레타민, 멜팔란, 트로포스파미드); 니트로소우레아: (카르무스틴, 로무스틴); 알킬술폰산염 : (부술판, 트레오술판); 트리아젠 : (다카르바진); 백금 함유 화합물 : (카르보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴)];
b). 식물 알칼로이드 : 예컨대 [빈카 알칼로이드 : (빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 비노렐빈); 탁솔류 : (파클리탁셀, 도세탁솔)];
c). DNA 국소이성화효소 저해제 : 예컨대 [에피포도필린(Epipodophyllins) : (9-아미노캄프토테신, 캄프토테신, 크리스나톨, 에토포시드, 에토포시드 포스페이트, 이리노테칸, 테니 포 시드, 토포 테칸); 마이토마이신 : (마이토마이신 C)];
d). 항 대사물질 : 예컨대 {[항 백혈구 : DHFR 억제제 : (메토트렉세이트, 트리메트렉세이트)]; IMP 탈수소 효소 억제제 : (마이코페놀산, 트리아조푸린, 리바비린, EICAR); 리보뉴클레오타이드 환원 효소 억제제 : (히드록시 우레아, 데페 록사민)]; [피리미딘 유사체 : 우라실 유사체 : (5- 플루오로우라실, 독시플루리딘, 플럭스루리딘, 레티렉스드(Tomudex)); 사이토신 유사체 : (시타라빈, 시토신 아라비노사이드, 플루다라빈); 퓨린 유사체 : (아자티오프린, 메르캅토푸린, 티오구아닌)]};
e). 호르몬 요법 : 예컨대 {수용체 길항제 : [항-에스트로겐 : (메게스트롤, 랄록시펜,타목시펜); LHRH 작용제 : (고스크르클린, 류프롤라이드 아세테이트); 항 안드로겐 : (바이칼루타미드, 플루타미드)]; 레티노이드 / 델토이드 : [비타민 D3 유사체 : (CB 1093, EB 1089 KH 1060, 콜레칼시페롤, 에르고칼시페롤); 광 역학 요법 : (베르테포르핀, 프탈로시아닌, 감광제 Pc4, 데메톡시 -하이포크렐린 A); 사이토카인 : (인터페론 - 알파, 인터페론 - 감마, 종양 괴사 인자 (TNFs), TNF 도메인을 포함하는 인간 단백질)]};
f). 키나제 억제제, 예컨대 BIBW 2992 (항-EGFR / Erb2), imatinib, gefitinib, pegaptanib, sorafenib, dasatinib, sunitinib, erlotinib, nilotinib, lapatinib, axitinib, pazopanib, Vandetanib, E7080 (항 -VEGFR2), mubritinib (mubritinib), ponatinib(AP24534), bafetinib (INNO-406), bosutinib (SKI-606), cabozantinib, vismodegib, iniparib, ruxolitinib, CYT387, axitinib, tivozanib, sorafenib, bevacizumab, cetuximab, Trastuzumab, Ranibizumab, Panitumumab, ispinesib .
g). 기타 : 예컨대 젬시타빈, 에폭소녹민 (예: 카필조미브), 보테졸미브, 탈리도마이드, 레날리도마이드, 포말리도마이드, 토세도스타트, 자이브레스타트, PLX4032, STA-9090, 스티무박스, 알로벡틴-7, Xegeva, 프로벤지, Yervoy, 이소프레 닐레이션 억제제 (예컨대 로바스타틴) 도파민성 신경독 (예컨대 1- 메틸 -4- 페닐 피리디늄 이온), 세포주기 억제제 (예: 스타우로스포린), Actinomycins (예: Actinomycin D, dactinomycin), 블레오마이신 (예: 블레오 마이신 A2, 블레오마이신 B2, 펩로마이신), Anthracyclines (예: 다우노루비신, 독소루비신 (아드리아마이신), 이데루비신, 에피루비신, 피라루비신, 조루비신, 뮤톡산트론, MDR 억제제 (예: 베라파밀), Ca2 + ATPase 억제제 (예: thapsigargin), vismodegib, 히스톤 데아세틸라제 억제제 (Vorinostat, Romidepsin, Panobinostat, 발프로산, Mocetinostat (MGCD0103), Belinostat, PCI-24781, Entinostat, SB939, Resinostat, Givinostat, AR-42, CUDC-101, 설포라판, Trichostatin A); Thapsigargin, Celecoxib, glitazones, epigallocatechin gallate, Disulfiram, Salinosporamide A. 본 발명의 화합물 및 접합체와의 병용 요법 (상승 작용 효과)으로 사용될 수 있는 공지된 그리고 공지될 항암제의 보다 상세한 목록은 미국 국립 암 연구소 (National Cancer Institute) 웹 사이트에서 볼 수 있다. (www.cancer.gov; www.cancer.gov/cancertopics/druginfo/apphalist), American Cancer Society (www.cancer.org/treatment/index) and Cancer Research UK (www.cancerrearchuk.org; (www.cancerresearchuk.org/cancer-help/about-cancer/treatment/cancer-drugs/)
2). 항 -자가 면역 질환 약제는
사이클로스포린, 사이클로스포린 A, 아미노카프로산, 아자티오프린, 브로모 크립틴, 클로람부실, 클로로퀸, 사이클로포스파미드, 코르티코스테로이드 (예: 암시노니드, 베타메타손, 부데소니드, 하이드로코르티손, 플루니솔리드, 플루티코손 프로피온산 염, 플루코르톨론 다나졸, 덱사메타손, 트리암시놀론 아세토니드, 베클로메타손 디프로피오네이트), DHEA, 에나네르셉트(enanercept), 하이드록시클로로퀸, 인플릭시마브(infliximab), 멜록시캄, 메토트렉세이트, 모페틸, 마이코페닐레이트, 프레드니손, 시롤리무스, 타크로리무스를 포함하는데, 이들로 국한되지는 않는다.
3) 항 감염 질환제에는 이것들로 국한되는 것은 아니나,
a). 아미노글리코시드 : 아미카신, 아스트로퀸, 겐타마이신 (네티실신, 시소 미신, 이세파미틴), 하이그로마이신 B, 카나마이신 (아미카신, 아르베카신, 베카 나마이신, 디베카신, 토브라마이신), 네오마이신 (프롤라세틴, 파로모마이신, 리보스타마이신), 넷틸마이신, 스펙시노마이신, 스트렙토마이신, 토브라마이신, 베르다 미신;
b). 암페니콜 : 아지담페니콜, 클로르암페니콜, 플로르페니콜, 티암페니콜;
c). 안사마이신 : 젤다나마이신, 헤르비마이신;
d). 카르바페넴(Carbapenems) : 비아페넴(biapenem), 도리페넴 (doripenem), 에르타페넴(ertapenem), 이미펨 /실라스타틴, 메로페넴, 파니페넴;
e). 세펨(Cephems) : 카바세펨 (loracarbef), 세파세트릴 (cefacetrile), 세파클로르 (cefaclor) 세팔린, 세팔로딘, 세팔로늄, 세팔로딘, 세팔로긴, 세팔로글리신, 페사모기신(cefamogycin), 세파폴린(cefapoline), 세파트리진(cefatrizine), 세파자플루르(cefazaflur), 세파제돈(cefazedone), 세파졸린(cefazolin), 세프부페라존(cefbuperazone), 세프카펜(cefcapene), 세팔다록심, 세페핌(cefepime), 세프미녹스(cefminox), 세폭시틴(cefoxitin), 세프록스(cefprox), 세프록사딘(cefroxadine), 세프테졸(ceftezole), 세푸록심(cefuroxime), 세픽심(cefixime), 세프디니르(cefdinir), 세프디토렌(cefditoren), 세프핌(cefepime), 세포디짐(cefodizime), 세포니시드(cefonicid), 세포페라존(cefoperazone), 세포타미드, 세포타민임, 세포티암, 세포자프란, 세팔렉신, 세피미졸, 세피아미드, 세프피롬(cefpirome), 세프포독심(cefpodoxime), 세프프로질(cefprozil), 세프퀴놈(cefquinome), 세프술로딘(cefsulodin), 세프타지딤(ceftazidime), 세프테람(cefteram), 세프티부텐(ceftibuten), 세프티올렌(ceftiolene), 세프티족심(ceftizoxime), 세프토비프롤(ceftobiprole), 세프트리악손(ceftriaxone), 세푸록심(cefuroxime), 세푸조남(cefuzonam), 세파마이신(cephamycin) (세폭시틴(cefoxitin), 세포테탄(cefotetan), 세프메타졸(cefmetazole)), 옥사세펨(oxacephem) (플로목세프(flomoxef), 라타목세프(latamoxef));
f). 글리코펩타이드 : 블레오마이신, 반코마이신 (오리타반신, 텔라반신), 테이코플라닌 (달바반신), 라모플라닌;
g). 글리실사이클린 : 예를 들면, 티게사이클린;
h). β- 락타마제 저해제 : 페넘 (술박탐, 타조박탐), 클라밤 (클라불란산);
i). 린코사미드 : 클린다마이신, 린코마이신;
j). 리포펩티드 : 답토마이신, A54145, 칼슘-의존 항생제 (CDA);
k). 마크로라이드 : 아지트로마이신, 세트로마이신, 클라리트로마이신, 디리트로마이신, 에리트로마이신, 푸리트로마이신, 조사마이신, 케톨라이드(텔리트로마이신, 세트로마이신), 미데카마이신, 미오카마이신, 올레안도마이신, 리파마이신(리팜피신, 리팜핀, 리파부틴, 리파텐틴), 로키타마이신, 록시트로마이신, 스펙티노마이신, 스피라마이신, 타크롤리무스(FK506), 트롤레안도마이신 (troleandomycin), 텔리트로마이신;
l). 모노박탐: 아즈트레오남, 티게모남;
m). 옥사졸리디논 : 리네졸리드;
n). 페니실린 : 아목시실린, 암피실린 (피밤피실린, 헤타살린, 바캄피실린, 메탐피실린, 탈람피실린), 아지도실린, 아즐로실린, 벤질페니실린, 벤자틴 벤질페니실린, 벤자틴 페녹시메틸페니실린, 클로메토실린, 프로카인 벤질페니실린, 카르베니실린 (카린다실린), 클록사실린, 디클록사실린, 에피실린, 플루클록사실린, 메실리남 (피브메실리남), 메즐로실린, 메티실린, 나프실린, 옥사실린, 페나메실린, 페니실린, 페네티실린, 페녹시메틸페니실린, 피페라실린, 프로피실린, 술베니실린, 테모실린, 티카르실린;
o). 폴리펩타이드 : 바시트라신, 콜리스틴, 폴리믹신 B;
p). 퀴놀론 : 알라트로플록사신, 발로플록사신, 시프로플록사신, 클리나플록사신, 다노플록사신, 디플록사신, 에녹사신, 엔로플록사신, 플록신, 가레녹사신, 가티플록사신, 젬이플록사신, 그레파플록사신, 카노 트로바플록사신, 레보플록사신, 로메플록사신, 마르보플록사신, 목시플록사신, 나디플록사신, 노르플록사신, 오르비플록사신, 오플록사신, 페플록사신, 트로바플록사신, 그레파플록사신, 시타플록사신, 스파르플록사신, 테마플록사신, 토수플록사신, 트로바플록사신;
q). 스트렙토그라민(Streptogramins) : 프리스티나마이신(pristinamycin), 퀴누프리스틴(quinupristin) / 달포프리스틴(dalfopristin);
r). 술폰아미드 : 마페니드(mafenide), 프론토실(prontosil), 술파세타미드(sulfacetamide), 술파메티졸(sulfamethizole), 술파닐리미드(sulfanilimide), 술파살라진(sulfasalazine), 술피속사졸(sulfisoxazole), 트리메토프림(trimethoprim), 트리메토프림(trimethoprim)-술파메톡사졸(sulfamethoxazole) (코-트리목사졸(co- trimoxazole));
s). 스테로이드 항균제 : 예. 푸시딘산;
t). 테트라사이클린 : 독시사이클린, 클로르테트라사이클린, 클로모시클린, 데메클로사이클린, 라임사이클린, 메클로사이클린, 메타사이클린, 미노사이클린, 옥시테트라사이클린, 페니메피사이클린, 로티테트라사이클린, 테트라사이클린, 글리실사이클린 (예를 들어, 티게사이클린);
u). 다른 종류의 항생제 : 아노나신, 아르스페나민, 박토프레놀 억제제 (바시트라신), DADAL/AR 억제제 (cycloserine), dictyostatin, discodermolide, eleutherobin, 에포틸론, 에탐부톨, 에토포시드, 파로레넴(faropenem), 푸시드산(fusidic acid), 푸라졸리돈, 이소니아지드, 라우리마이드, 메트로니다졸, 뮤피로신 (mupirocin), 마이코 락톤 (mycolactone), NAM 합성 억제제 (예 : fosfomycin), 니트로푸란토인 (nitrofurantoin), 파클리탁셀 (paclitaxel), 플라텐시마이신, 피라진 아미드, 퀴핀트리틴 / 달포르피스틴, 리팜피신(리팜핀), 타조박탐 (tazobactam) 티닐다졸, 우바리신;
4). 항 바이러스 약물 :
a). 진입/융합 억제제 : 아플라비록(aplaviroc), 마라비록(maraviroc), 빅리비록(vicriviroc), gp41 (엔푸비르티드(enfuvirtide)), PRO 140, CD4 이발리주마브(ibalizumab);
b). 인테그라제 억제제 : raltegravir, elvitegravir, globoidnan A;
c). 성숙 억제제 : bevirimat, vivecon;
d). 뉴라미니다아제 저해제 : 오셀타미비르 (oseltamivir), 자나미비르 (zanamivir), 페라미비르 (peramivir);
e). 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드: 아바카비르, 아시클로비르, 아데포비어, 암독소비르(amdoxovir), 앱리타 비빈 (apricitabine), 브리부딘 (brivudine), 시스도비르, 클레부딘, 덱셀부타빈, 디다노신 (ddI), 엘부시타빈(elvucitabine), 엠트리시타빈(emtricitabine) (FTC), 엔테카비르(entecavir), 파시클로비르(famciclovir), 플루오로우라실 (5-FU), 3’-플루오로-치환된 2’, 3’-디데옥시뉴클레오시드 유사체 (예: 3’-플루오로-2’,3’-디데옥시티미딘 (FLT) 및 3’-플루오로-2’,3’-디데옥시구아노신 (FLG), 포미비르센, 간시클로비르, 이독스루리 딘, 라미부딘 (3TC), l-뉴클레오시드 (예, β-l-티미딘 및 β-l-2’-데옥시시티딘), 펜시클로빌, 래시비르, 리바비린, 스탬프딘, 스타부딘 (d4T), 타르비바린(비라 미딘), 텔비부딘, 테노포비르, 트리플루리딘 발라시클로비르, 발간시클로비르(valganciclovir), 잘시타빈(zalcitabine) (ddC), 지도부딘(zidovudine) (AZT);
f). 비- 뉴클레오시드 : 아만타딘, 아테비리딘, 카프라비린, 디아릴피리미딘 (에트라 비린, 릴피비린), 델라비르딘, 도코사놀, 에미빈린, 에파비렌즈 (efavirenz), 포스카네트(foscarnet, 포스포노포름산), 이미퀴모드(imiquimod), 인터페론 알파, 로비라이드 (loviride), 로데노신 (lodenosine), 메티사존, 네비라핀, NOV-205, 페그인터페론 알파, 포도필로톡신(podophyllotoxin), 리팜피신 (rifampicin), 리만타딘(rimantadine), 레시퀴모드(R-848), 트로만타딘 (tromantadine);
g). 프로테아제 억제제 : 암프레나비르(amprenavir), 아타자나비르(atazanavir), 보케프레비르(boceprevir), 다루나비르(darunavir), 포삼프레나비르(fosamprenavir), 인디나비르(indinavir), 로피나비르(lopinavir), 넬피나비르 (nelfinavir), 플레코나릴(pleconaril), 리토나비르, 사퀴나비르, 텔라프레비르 (VX-950), 팁라나비르;
h). 다른 유형의 항 바이러스 약물 : 아브자임, 아르비돌(arbidol), 칼라놀라이드 에이(calanolide a), 세라제닌(ceragenin), 시아노비린-n, 디아릴피리미딘, 에피갈로카네친 갈라이트(epigallocatechin gallate) (EGCG), 포스카넷(foscarnet), 그리피트신(griffithsin), 타리바비린(viramidine), 하이드록시우레아, KP-1461, 밀테포신(miltefosine), 플레코나릴(pleconaril), 포만토(Portmanteau) 억제제, 리바비린, 셀리시클리브 (seliciclib).
5). 기타 면역 요법 약물 :
예: 이미퀴모드, 인터페론 (예: 알파, 베타), 과립구 콜로니- 자극 인자, 사이토카인, 인터루킨 (IL-1~IL-35), 항체 (예, 트라스투주맙, 퍼투주맙, 베바시주 맙, 세툭시마브, 파니투무맙, 인플릭시맵, 아달리무맙, 바실릭시맙, 다클리주마브, 오말리주맙), 단백질 결합 약물 (예: Abraxane), 칼리케아미신(calicheamicin) 유도체, 메이탄신 유도체 (DM1 및 DM4)의 약물, CC-1065 및 듀오카르마이신(duocarmycin) 마이너 그루브 바인더, 강력한 탁솔 유도체, 독소루비신(doxorubicin), 오리스타틴(auristatin) 세포분열 저지성 약물 (예: Trastuzumab-DM1, Inotuzumab ozogamicin, Brentuximab vedotin, Glembatumumab vedotin, lorvotuzumab mertansine, AN-152 LMB2, TP-38, VB4-845, Cantuzumab mertansine, AVE9633, SAR3419, CAT-8015 (항-CD22), IMGN388, milatuzumab-doxorubicin, SGN-75 (항-CD70), 항-CD22-MCC-DM1, IMGN853, 항-CD22-MMAE, 항-CD22-MMAF, 항-CD22-calicheamicin으로 구성된 군으로부터 선택된 약물과 컨쥬게이트된 항체.
본 발명은 하기 실시예에서의 설명에 의해 추가로 예시되며, 이것으로 제한되지 않는다.
실시예
실시예 1. (S) -3- (1H- 인돌 -2- 일) -2- (트리틸아미노) 프로판산 (1)의 합성
Figure pct00131
실온에서 클로로트리메틸실란 (3.4 mL, 26.9 mmol)을 메틸렌 클로라이드 (40 mL) 중 L- 트립토판 (5.00 g, 24.5 mL)의 현탁액에 천천히 첨가하였다. 혼합물을 4.5 시간 동안 연속적으로 교반하고, 트리에틸아민 (6.8 mL, 49.0 mmol)을 첨가한 후, 염화 메틸렌 (20 mL) 중 트리페닐메틸 클로라이드 (7.17 g, 25.7 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 교반하였다. 메탄올 (25 mL)로 켄칭시켰다. 반응물을 거의 건조 될 때까지 농축시키고 메틸렌 클로라이드에 재용해시키고 5 % 시트르산 용액 (3 ×) 및 염수로 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔사를 메틸렌 클로라이드에 추가로 용해시키고 셀 라이트 패드 위에서 여과하고 여액을 농축시켜 담황색 거품 (11.8 g)을 수득하고, 이를 다음 단계에서 직접 사용하였다. ESI MS m/z 446.5 ([M + H] +).
실시예 2. (S) - 메틸 2- (3- (1H- 인돌 -2- 일) -2- (트리틸아미노) 프로판 아미도) 아세테이트 (2)의 합성
Figure pct00132
THF (30 mL) 중 산 (9.27 g, 30.7 mmol)의 용액에 글리신 메틸 에스테르 하이드로클로라이드 (2.85 g, 22.8 mmol) 및 HOBt (3.08 g, 22.8 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 0 ℃로 냉각시키고 트리에틸아민 (7.4 mL, 51.9 mmol)을 첨가한 후 EDC·HCl (4.38 g, 22.8 mmol)을 분량을 나누어 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 가온시켰다. 20 시간 동안 교반한 후, 농축시키고 메틸렌 클로라이드에 재용해시키고 5 % 시트르산 용액 (3 ×) 및 염수로 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트로 분쇄하고, 여과하여 백색 고체를 수집하였다 (6.46g, 2 단계에 걸쳐 65 % 수율). ESIMS m/z 518.2 ([M + H]+).
실시예 3. 디메틸디옥시레인(DMDO)의 합성
1L 둥근 바닥 플라스크에서 증류수 (20mL), 아세톤 (30mL) 및 NaHCO3 (24g, 0.285mol)을 합하고, 20 분 동안 자기 교반하면서 얼음 / 수조에서 냉각시켰다. 20 분 후, 교반을 멈추고 옥손 (25 g, 0.0406 mol)을 한번에 첨가하였다. 플라스크를 느슨하게 덮고 슬러리를 여전히 빙욕(얼음 욕조)에 감겨있는 상태에서 15 분 동안 격렬하게 교반하였다. 이어서, 반응 슬러리를 함유하는 플라스크를 실온에서 조(bath)와 함께 회전 증발기에 부착시켰다. 범프 벌브 (250 mL)를 드라이 아이스 / 아세톤 배스에서 냉각시키고, 165 mtor의 진공을 벤치 탑 다이어프램 펌프를 통해 적용하였다. 15 분 후, 배스 온도를 10 분에 걸쳐 40 ℃로 상승시켰다. 욕조가 40 ℃에 도달하면, 진공을 해제하고 플라스크를 가열된 수조에서 들어올림으로써 증류를 즉시 정지시켰다. DMDO의 담황색 아세톤 용액을 범프 전구로부터 직접 눈금 실린더 내로 기울여서 용액의 총 부피 (약 25 mL)를 측정 한 다음, 용액을 Na2SO4상에서 건조시켰다.
여과에 의해 Na2SO4를 제거하고 5 mL의 아세톤으로 헹구었다. 이어서, 수득 된 DMDO 용액의 적정을 Adam 등의 절차에 따라 수행한다. (Adam, W .; Chan, YY; Cremer, D .; Gauss, J .; Scheutzow, D .; Scheutzow, D .; Schindler, MJ Org. Chem., 1987, 52, 2800-2803). 결과는 용액 중에 2.1-2.3 mmol의 DMDO를 일관되게 보여 주었다. 적정 후에 즉시 DMDO 용액을 사용하였다.
실시예 4. 메틸 2- (3a- 하이드 록시 -1- 트리틸 -1,2,3,3a,8,8a- 헥사하이드로 - 피롤로 [2,3-b] 인돌-2-카복스아미도) 아세테이트(3)의 합성
Figure pct00133
-78 ℃에서 메틸렌 클로라이드 (20 mL) 중 Trt-Trp-Gly-OMe (0.80 g, 1.54 mmol)의 용액에 아세톤 (2.25 mmol) 중의 DMDO 용액을 첨가하였다. 1 시간 후, 혼합물을 실온에서 감압하에 농축 건조시켰다. 조 물질을 칼럼 크로마토그래피 (헥산 / EtOAc / Et3N 70 : 30 : 1 내지 30 : 70 : 1)로 정제하여 밝은 황색 거품, 2 개의 부분 입체 이성질체의 혼합물 (0.58 g, 70 % 수율)을 수득하였다. ESIMS m/z 534.22 ([M + H] +).
실시예 5. 2- (3a- 하이드록시 -1- 트라이틸 -1,2,3,3a, 8,8a- 헥사 하이드로 피롤로 [2,3-b] 인돌 -2- 카복스아미도) 아세트산 (4)의 합성
Figure pct00134
디옥산/물 (30 mL, v / v 2 : 1) 중의 Tr-Hpi-Gly-OMe (부분 입체 이성질체의 혼합물) (0.80 g, 1.50 mmol) 용액에 LiOH (0.63 g, 15.0 mmol)를 첨가하고 반응물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. (TLC (CH2Cl2 / MeOH, 9 : 1)에 의한 출발 물질의 소비 후). 반응 혼합물을 증발 건조시키고, 잔류물을 CH2Cl2 / MeOH / Et3N (90 : 10 : 1)로 용리하면서 짧은 실리카 겔 플러그로 정제하였다. 분획을 합하여 2 개의 부분 입체 이성질체의 트리에틸아민 염 (0.89 g, 95 % 수율)으로서 밝은 황색 고체를 수득하였다.
실시예 6. (5S, 11R) - 메틸 5 - ((S) -sec- 부틸) -1- (9H- 플루오렌-9- 일) -3,6,9- 트리옥소 -11 - ((트리틸티오) 메틸) -2- 옥사 -4,7,10- 트리아자도 데칸 -12- 오에이트 (5)의 합성
Figure pct00135
THF (40 mL) 중 Fmoc-Ile-Gly-OH (2.50 g, 6.09 mmol), H-Cys (Trt) -OMe (2.76 g, 7.30 mmol), HOBt (1.11 g, 7.30 mmol)의 용액에 DIPEA (2.6 mL, 15.3 mmol)를 0 ℃에서 첨가한 후, 분량을 나누어 EDC·HCl (1.40 g, 7.30 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온시키고 16 시간 동안 교반하였다. 반응물을 농축 건조시키고 에틸 아세테이트로 희석시키고 5 % 시트르산 (3x), 포화 NaHCO3 (3x) 및 염수로 세척하였다. 유기 상을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (0-20 % 에틸 아세테이트 / 헥산)로 정제하여 백색 고체를 수득하였다 (4.45 g, 95 % 수율). ESI MS m/z 770.2 ([M + H] +).
실시예 7. (6S, 12R) - 메틸 6 - ((S) -sec- 부틸) -1- (3a- 히드록시 -1- 트리 틸 -1,2,3,3a, 8,8a- 헥사히드로피롤로 [2 , 3-b] 인돌 -2- 일) -1,4,7,10- 테트라 옥소 -12 - ((트리틸티오) 메틸) -2,5,8,11- 테트라아자트리데칸-13-오에이트 (6)의 합성
Figure pct00136
Fmoc-Ile-Gly-Cys (Trt) -OMe (4.45 g, 5.78 mmol)를 피페리딘/DMF (20 %, 10 mL)와 혼합하고 실온에서 30 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 디클로로 메탄 (50 mL)으로 희석하고 물 및 염수로 세척하였다. 유기 상을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (1 % Et3N 함유 0-10 % MeOH / CH2Cl2)로 정제하여 백색 고체를 수득하였다 (3.12 g, 99 % 수율). ESIMS m/z 548.2 ([M + H] +).
상기 고체 (1.04 g, 1.90 mmol)를 CH2Cl2 (10 mL) 중에서 Trt-Hpi-Gly-OH · NEt3 (0.98 g, 1.58 mmol)과 혼합하고, 거기에 HOBt (0.29 g, 1.90 mmol) 및 DIPEA mL, 4.00 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. EDC·HCl (0.36 g, 1.90 mmol)을 마지막에 조금씩 나누어 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온시키고 16 시간 동안 교반한 후, 에틸 아세테이트로 희석하고 5 % 시트르산 (3x), 포화 NaHCO3 (3x) 및 염수로 세척하였다. 유기 상을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (20-70 % 에틸 아세테이트 / 헥산)로 정제하여 백색 고체를 수득하였다 (0.75 g, 45 % 수율). ESI MS m/z 1049.4 ([M + H] +).
실시예 8. (6S, 12R) -6 - ((S) -sec- 부틸) -1- (3a- 히드록시 -1- 트리 틸 -1,2,3,3a, 8,8a- 헥사히드로피롤로 [ 3-b] 인돌 -2- 일) -1,4,7,10- 테트라 옥소 -12 - ((트리틸티오) 메틸) -2,5,8,11- 테트라아자트리데칸 -13- 오산 (7)의 합성
Figure pct00137
Trt-Hpi-Gly-Ile-Gly-Cys (Trt) -OMe (0.75 g, 0.71 mmol)를 디옥산 / 물 (v / v 2 : 1, 30 mL)에 용해시키고 실온에서 30 분 동안 LiOH · H2O (0.30 g, 7.1 mmol)으로 처리하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시키고, 잔류물을 CH2Cl2 / MeOH / Et3N (90 : 10 : 1)로 용리하면서 짧은 실리카 겔 마개로 정제하였다. 분획을 합하여 Trt-Hpi-Gly-Ile-Gly-Cys (Trt)-OH 의 트리에틸아민 염으로서 백색 고체를 수득하였다(0.77g, 95 % 수율).
실시예 9. (2S, 4R) - (9H- 플루오렌 -9- 일) 메틸 4- (tert- 부톡시) -2 - (((2S, 3S) -1- (tert- 부톡시) -3- 메틸 -1- 옥소펜탄 -2- 일) 카르바모일) 피롤리딘 -1- 카르복실레이트 (8) 의 합성
Figure pct00138
THF (40mL) 중의 Fmoc-Pro (OtBu) -OH (2.50g, 6.10mmol), H-Ile-OtBu (1.37g, 7.32mmol), HOBt (1.12g, 7.32mmol)의 용액에 DIPEA (2.6 mL, 15.3 mmol)을 0 ℃에서 첨가 한 후, EDC·HCl (1.40 g, 7.32 mmol)을 조금씩 나누어 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온시키고 16 시간 동안 교반하였다. 농축시킨 후, 잔류물을 에틸 아세테이트로 희석하고 5 % 시트르산 (3x), 포화 NaHCO3 (3x) 및 염수로 세척하였다. 유기 상을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (0-20 % 에틸 아세테이트 / 헥산)로 정제하여 백색 고체를 수득하였다 (2.55 g, 85 % 수율). ESI MS m/z 579.3 ([M + H] +).
실시예 10. (2S, 3S) -tert- 부틸 2 - ((2S, 4R) -1 - ((S) -2 - (((9H- 플루오렌 -9- 일)메톡시)카르보닐)아미노)-4- 메톡시 -4- 옥소부타노일) -4- (tert- 부톡시) 피롤리딘 -2- 카르복사미도) -3- 메틸 펜타노에이트 (9)의 합성
Figure pct00139
Fmoc-Pro (OtBu) -Ile-OtBu (2.55 g, 4.40 mmol)를 DMF (20 mL) 중 20 % 피 페리딘으로 30 분 동안 처리하였다. 반응 혼합물을 농축시키고 컬럼 크로마토그래피 (1 % Et3N을 갖는 0-10 % MeOH / CH2Cl2)에 의해 정제하여 백색 고체를 수득하였다 (1.41 g, 90 % 수율). ESI MS m/z 357.2 ([M + H] +).
상기 고체 (1.41 g, 3.96 mmol)를 DMF (20 mL) 중 Fmoc-Asp (OMe) -OH (1.22 g, 3.30 mmol)와 혼합시키고, 여기에 HOBt (0.61 g, 3.96 mmol) 및 DIPEA(1.4mL, 8.25 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. EDC ·HCl (0.76 g, 3.96 mmol)을 마지막에 조금씩 나누어 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온시키고 16 시간 동안 교반한 후 에틸 아세테이트로 희석시키고 H2O, 5 % 시트르산 (3x), 포화 NaHCO3 (3x) 및 염수로 세척하였다. 유기 상을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (20-70 % 에틸 아세테이트 / 헥산)로 정제하여 백색 고체를 수득하였다 (1.78 g, 수율 76 %). ESI MS m/z 708.4 ([M + H] +).
실시예 11. ((6S, 12R, 15S) - 메틸 15 - ((2S, 4R) -4- (tert- 부톡시) -2-((((2S, 3S) -1- (tert- 부톡시) -3- 메틸 -1- 옥소펜탄 -2- 일)카르바모일) 피롤리딘 -1- 카르보닐) -6 - ((S) -sec- 부틸) -1- (3a- 히드록시 -1- 트리틸 -1,2,3,3a, 8,8a- 헥사히드로피롤로 [2,3- b] 인돌 -2- 일) -1,4,7,10,13- 펜타 옥소 -12 - ((트리틸티오) 메틸) -2,5,8,11,14- 펜타아자헵타데칸 -17- 오에이트 (10)의 합성
Figure pct00140
Fmoc-Asp (OMe) -Pro (OtBu) -Ile-OtBu (0.59 g, 0.90 mmol)를 피페리딘 / DMF (20 %, 10 mL)와 혼합하고 실온에서 30 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 디클로로 메탄 (50 mL)으로 희석하고 물 및 염수로 세척하였다. 유기 상을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (1 % Et3N 함유 0-10 % MeOH / CH2Cl2)로 정제하여 백색 고체를 수득하였다 (0.43 g, 99 % 수율). ESI MS m/z 486.6 ([M + H] +).
상기 고체 (0.43 g, 0.89 mmol)를 CH2Cl2 (5 mL) 중의 Trt-Hpi-Gly-Ile-Gly-Cys (Trt) -OH · NEt3 (0.77 g, 0.67 mmol)과 혼합시키고, 거기에 HOBt (0.12 g, 0.80 mmol) 및 DIPEA (0.33 mL, 1.88 mmol)를 0 ℃에서 첨가하였다. EDC·HCl (0.15 g, 0.80 mmol)을 마지막에 조금씩 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온시켰고 18 시간 동안 교반한 후 에틸 아세테이트로 희석하고 5 % 시트르산 (3x), 포화 NaHCO3 (3x) 및 염수로 세척하였다. 유기 상을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (30-80 % 에틸 아세테이트 / 헥산)로 정제하여 백색 고체를 수득하였다 (0.50 g, 50 % 수율). ESIMS m/z 1502.7 ([M + H] +).
실시예 12. (2S, 3S) -2 - ((2S, 4R)-1-((S) -2 - ((3R, 9S, 15S) -15- 아미노-9-((S)-sec-부틸)-5,8,11,14-테트라옥소-2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,21- 헥사데카히드로-[1,4,7,10,13] 티아 테트라 아자 시클로 옥타데시노 [18,17-b] 인돌-3- 카르복스아미도)-4- 메톡시 -4- 옥소부타노일)-4- 히드록시피롤리딘 -2- 카르복사미도)-3- 메틸펜탄산 (11)의 합성
Figure pct00141
Trt-Hpi-Gly-Ile-Gly-Cys (Trt) -Asp (OMe) -Pro (OtBu) -Ile-OtBu (0.50 g, 0.33 mmol)를 순수한 TFA로 실온에서 처리 하였다. 5 시간 동안 메탄올을 첨가하고 반응물을 농축시켰다. 이것을 2 회 반복하고 잔류물을 prep-HPLC (H2O / MeCN)로 정제하여 백색 고체를 수득하였다 (99.6 mg, 34 % 수율).
Fmoc - Ile - OH를 하기의 프로토콜에 따라 2- 클로로 트리틸 클로라이드 수지에 부착시켰다 :
Fmoc-Ile-OH (0.35 g, 1.0 mmol) 및 DIPEA (0.70 mL, 4.0 mmol)를 건조 메틸렌 클로라이드 (10 mL)에 용해시켰다. 생성된 용액을 클로로트리틸 수지 (1.0 g, 0.911 mmol / g, GL Biochem)에 첨가하고, 혼합물을 질소하에 1.5 시간 진탕하였다. 이어서 메탄올 (2 mL)을 가하고 30분 동안 계속 흔들었다. 액체를 진공하에 배출시키고 수지를 메틸렌 클로라이드 (15 mL), DMF (10 mL) 및 메탄올 (10 mL)로 세척하고 진공하에 건조시켰다.
커플링은 하기 프로토콜에 따라 수행하였다 :
수지를 컬럼에 넣고 30 분 동안 DMF (10 mL)에서 팽윤시켰다. 용매를 진공하에 배출시키고, N- 말단 Fmoc 보호기를 DMF 중 20 % 피페리딘으로 30 분 동안 흔들어서 분해시켰다. 탈 보호 후, 수지를 DMF (3 x 10 mL),이어서 CH2Cl2 (3 x 10 mL) 그리고 다시 DMF (3 x 10 mL)로 세척하였다. 다음 Fmoc 보호된 아미노산 (Fmoc-Xaa-OH, 5 당량)을 2 시간 동안 진탕하면서 DMF (10 mL) 중의 커플링제 HBTU (5 당량) 및 DIPEA (10 당량)로 수지에 커플링시켰다. 수지를 DMF (3 × 10 mL),이어서 CH2Cl2 (3 x 10 mL) 및 DMF (3 x 10 mL)로 광범위하게 세척하였다. 작은 샘플을 채취하고 CH2Cl2 중 헥사플루오로 이소프로판올 (HFIP)로 5 분 동안 처리하여 수지로부터 펩티드를 절단하고 질량 분석으로 확인하였다. Trt-Hpi-Gly-OH와 같은 상업적으로 이용 가능한 아미노산을 커플링하는 경우, 보다 적은 당량 (3 당량) 및 더 긴 시간 (3 시간)을 채택하였다.
모든 커플링이 완료되면, 수지 - 결합된 펩티드를 둥근 바닥 플라스크에 옮기고 TFA (10 mL)를 첨가하고 실온에서 5 시간 동안 교반하였다. 산 불안정 보호기는 TFA 처리 중에 동시에 제거되었다. 수지를 여과하고 CH2Cl2 (10 mL) 및 메탄올 (10 mL)로 세척하였다. 여액을 농축시키고 물과 에틸 아세테이트 사이에 분배시켰다. 수성층을 prep-HPLC (H2O / MeCN)로 정제하여 모노사이클릭 옥타펩티드의 백색 고체를 수득하였다 (40.3 mg, 5 % 수율). ESI MS m/z 888.38 ([M + H] +).
실시예 13. Ile3-S- 데옥소 -아마니틴 (12)의 합성
Figure pct00142
건조 DMF (5 ㎖) 중 모노사이클릭 옥타펩티드 (25.7 ㎎, 0.0289 밀리몰)의 용액에 EDC·HCl (27.7 ㎎, 0.145 밀리몰), HOBt (39.0 ㎎, 0.289 밀리몰) 및 DIPEA (0.025 ㎖, 0.145 밀리몰)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 20 시간 동안 교반한 후, 농축시키고 prep-HPLC (H2O / MeCN)로 정제하여 백색 고체 화합물 12 (9.0 mg, 36 % 수율)을 수득하였다. ESI MS m/z 870.40 ([M + H] +).
실시예 14. 화합물 13의 합성
Figure pct00143
THF (1 mL) 중 화합물 12 (5.0 mg, 0.00575 mmol, 1.0 당량)의 용액에 0 ℃에서 t-BuONO (7 μL, 0.0575 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 0 ℃에서 1 시간 동안 교반한 다음 실온에서 20 시간 동안 교반하였다. 물 (5 mL)을 첨가한 후, 반응 혼합물을 농축시키고 prep-HPLC (H2O / MeCN)로 정제하여 백색 고체를 수득하였다 (2.6 mg, 50 % 수율). ESI MS m/z 915.38 ([M + H] +).
실시예 15. 화합물 14의 합성
Figure pct00144
메탄올 (2 mL) 중의 니트로 화합물 (2.6 mg, 0.00284 mmol)과 Pd / C (10 중량 %, 10 mg)의 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 수소화시킨 후 (1 atm H2), 셀라이트 (여과 보조제)를 통해 여과하였다. 여액을 농축시켜 백색 고체를 수득하였다 (2.5 mg, 99 % 수율). ESI MS m/z 885.38 ([M + H] +).
실시예 16. 화합물 15의 합성
Figure pct00145
무수 DMF 중 화합물 14 (2.5 mg, 0.00283 mmol) 및 4- (2,5- 다이 옥소 -2,5- 다이 하이드로 -1H- 피롤 -1- 일) 부탄산 (2.6 mg, 0.0141 mmol) 1 mL)의 용액에 HATU (5.4 mg, 0.0141 mmol) 및 DIPEA (0.05 mL, 0.283 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 20 시간 동안 교반한 후, 에틸 아세테이트로 희석하고 염수로 세척하였다. 유기 상을 농축시키고 prep-HPLC (H2O / MeCN)로 정제하여 백색 고체 Ile3-S- 데옥소- 아마니틴(1.7 mg, 56 % 수율)을 수득하였다. ESIMS m/z 1050.41 ([M + H] +).
실시예 17. 2- (2- (디 벤질 아미노)에톡시) 에탄올 (16)의 합성
Figure pct00146
아세토니트릴(350 mL) 중의 2- (2- 아미노에톡시) 에탄올 (21.00 g, 200 mmol, 1.0 당량) 및 K2CO3 (83.00 g, 600 mmol, 3.0 당량)의 용액에 BnBr (57.0 mL, 480 mmol, 2.4 eq )을 첨가하였다. 혼합물을 밤새 환류시켰다. 물 (1 L)을 첨가하고 EtOAc (3 x 300 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 (1000 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시키고 SiO2 칼럼 크로마토그래피 (4 : 1 헥산 / EtOAc)로 정제하여 무색 오일 (50.97 g, 89.2 % 수율)을 수득하였다. MS ESI m/z [M + Na]+ 309.1967.
실시예 18. tert- 부틸 3- (2- (2- (디벤질아미노)에톡시)에톡시) 프로파노에이트 (17)의 합성
Figure pct00147
DCM (560 mL) 중의 2- (2- (디벤질아미노)에톡시)에탄올 (47.17 g, 165.3 mmol, 1.0 당량), tert- 부틸 아크릴레이트 (72.0 mL, 495.9 mmol, 3.0 eq.) 및 n-Bu4NI (6.10 g, 16.53 mmol, 0.1 eq.)의 혼합물에 수산화 나트륨 용액 (300 mL, 50 %)을 첨가하였다. 혼합물을 밤새 교반하였다. 유기층을 분리하고, 물층을 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 물 (3 x 300 mL) 및 염수 (300 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피 (7 : 1 헥산 / EtOAc)로 정제하여 무색 오일 (61.08 g , 89.4 % 수율)을 수득하였다. MS ESI m/z [M + H] + 414.2384.
실시예 19. tert- 부틸 3- (2- (2- 아미노에톡시)에톡시)프로파노에이트 (18)의 합성
Figure pct00148
THF (30 mL) 및 MeOH (60 mL) 중의 tert- 부틸 3- (2- (2- (다이벤질아미노)에톡시)에톡시)프로파노에이트 (20.00 g, 48.36 mmol, 1.0 당량)의 용액에, 수소화 병에서 Pd / C (2.00 g, 10 중량 %, 50 중량 % 습윤)를 첨가하였다. 혼합물을 밤새 진탕시키고, 셀 라이트 (여과 조제)를 통해 여과하고, 여액을 농축하여 무색 오일 (10.58g, 수율 93.8 %)을 수득하였다. MS ESI m/z [M + H] + 234.1810.
실시예 20. (E) -16- 브로모 -2,2- 디메틸 -4,14- 디 옥소 -3,7,10- 트리 옥사 -13- 아자헵타데크 -15-엔-17- 오산 (19)의 합성
Figure pct00149
THF (5 mL) 중 3- 브로모퓨란 -2,5- 디온 (89 mg, 0.5 mmol)의 용액에 tert- 부틸 3- (2- (2- 아미노에톡시)에톡시)프로파노에이트 (117 mg, 0.5 mmol) 를 추가하였다. 생성된 용액을 실온에서 4 시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에서 제거하여 화합물 19 (205 mg, 이론 수율)를 수득하였다. MS ESI m/z [M + H] + 410.03.
실시예 21. (E) -1-tert- 부틸 18- 메틸 13- 브로모 -11,14- 디 옥소 -4,7- 디 옥사 -10,15- 다이아자옥타데크 -12- 엔 -1,18- 다이오에이트 (20)의 합성
Figure pct00150
화합물 19 (205 mg, 0.5 mmol) 및 메틸 3- 아미노프로파노에이트 히드로클로라이드 (70 mg, 0.5 mmol)를 DCM (20 mL)에 용해시키고, 여기에 DIPEA (0.26 mL, 1.5 mmol) 및 EDC·HCl (144 mg, 0.75 mmol)을 첨가하였다. 생성된 용액을 밤새 실온에서 교반하였고, 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 농축시키고 컬럼 크로마토그래피 (0 내지 10 % MeOH / DCM)로 정제하여 화합물 20 (88 mg, 36 % 수율)을 수득하였다. MS ESI m/z [M + H] + 495.25.
실시예 22. (E) -8- 브로모 -3,7,10- 트리옥소 -2,14,17- 트리 옥사 -6,11- 디아자 아이코스 -8- 엔 -20- 오산 (21)의 합성
Figure pct00151
DCM (3 mL) 중 화합물 20 (88 mg, 0.18 mmol)을 포름산 (6 ml)으로 38 ℃에서 밤새 처리하였다. 모든 휘발성 물질을 진공 하에서 제거하여 화합물 21 (78 mg, 이론 수율)을 수득하였다.
실시예 23. 화합물 22의 합성
Figure pct00152
화합물 14 (2.0 mg, 0.00226 mmol) 및 화합물 21 (5.0 mg, 0.0113 mmol)을 DMF (1 mL)에 용해시키고, 거기에 HATU (4.3 mg, 0.0113 mmol) 및 DIPEA (2.0 μL, 0.0113 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 밤새 교반하고, 에틸 아세테이트로 희석시킨 후, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 예비 HPLC (H2O / MeCN)에 의한 농축 및 정제는 백색 고체를 수득하였다 (1.2 mg, 44 % 수율). MS ESI m/z [M + H] + 1227.50.
실시예 24. 4 - (((벤질 옥시)카르보닐)아미노)부탄산 (23)의 합성
Figure pct00153
H2O (40 mL) 중의 4- 아미노 부티르산 (7.5 g, 75 mmol) 및 NaOH (6 g, 150 mmol)의 용액을 0 ℃로 냉각시키고, THF (32 ml) 중의 CbzCl (16.1 g, 95 mmol)의 용액으로 적가 처리하였다. 1 시간 후, 반응물을 실온으로 가온시키고, 3 시간 동안 교반하였다. THF를 진공하에 제거하고, 6N HCl을 첨가하여 수용액의 pH를 1.5로 조정하였다. 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기층을 염수로 세척하고, 건조 및 농축시켜 화합물 23을 수득하였다(16.4 g, 92 % 수율). MS ESI m/z [M + H] + 238.08.
실시예 25. tert - 부틸 4 -((( 벤질옥시 )카르보닐) 아미노) 부타노에이트 (24)의 합성
Figure pct00154
DMAP (0.8 g, 6.56 mmol) 및 DCC (17.1 g, 83 mmol)를, DCM (100mg) 중의 4 -(((벤질옥시)카르보닐)아미노)부탄산 (16.4 g, 69.2 mmol) 및 t-BuOH(15.4g, 208 mmol)의 용액에 첨가하였다. 실온에서 하룻밤 동안 교반한 후, 반응물을 여과하고 여액을 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트에 용해시키고, 1N HCl, 염수로 세척하고 Na2SO4상에서 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (10 내지 50 % EtOAc / 헥세인)에 의해 농축하고 정제하여 화합물 24 (7.5g, 37 % 수율)을 수득하였다. MS ESI m/z [M + Na] + 316.13.
실시예 26. tert- 부틸 4- 아미노부타노에이트 (25)의 합성
Figure pct00155
tert- 부틸 4 - (((벤질옥시)카르보닐)아미노) 부타노에이트 (560 mg, 1.91 mmol)를 MeOH (50 mL)에 용해시키고, Pd / C 촉매 (10 중량 %, 100mg)과 혼합하고, 이어서 실온에서 3 시간 동안 수소화 (1 기압)시켰다. 촉매를 여과하고, 모든 휘발성 물질을 진공 하에서 제거하여 화합물 25 (272 mg, 90 % 수율)를 수득하였다. MS ESI m/z [M + H] + 160.13.
실시예 27. (E) -2- 브로모 -4 - ((4- ( tert - 부톡시 ) -4- 옥소부틸 ) 아미노) -4- 옥소부트 -2- 에노산 (26)의 합성
Figure pct00156
3- 브로모퓨란 -2,5- 디온 (300 mg, 1.71 mmol)을 THF (20 mL)에 용해시키고, 거기에 4- 아미노 부타노에이트 tert- 부틸 (272 mg, 1.71 mmol)을 첨가하고, 생성된 용액을 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. 용매를 진공하에 제거하여 화합물 26 을 수득(572 mg, 이론 수율)하였다. MS ESI m/z [M + H] + 338.04.
실시예 28. (E) - tert - 부틸 4- (3- 브로모 -4 -((2- 메톡시에틸 ) 아미노) -4- 옥소부트 -2-에나미도) 부타노에이트 (27)의 합성
Figure pct00157
2- 브로모 -4 -((4- (tert- 부톡시)-4- 옥소부틸)아미노)-4- 옥소부트 -2- 엔산 (286 mg, 0.85 mmol) 및 2- 메톡시에탄아민 (128 mg, 1.7 mmol)을 DCM (40 mL)에 용해시키고, 거기에 DIPEA (329 mg, 2.55 mmol) 및 EDC·HCl (490 mg, 2.55 mmol)을 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 교반한 후, 염수로 세척하고, Na2SO4상에서 건조시켰다. 농축시키고 컬럼 크로마토그래피 (0 내지 10 % MeOH / DCM)로 정제하여 화합물 27 (102 mg, 31 % 수율)을 수득하였다. MS ESI m/z [M + H] + 393.11.
실시예 29. (E) -4- (3- 브로모 -4-((2- 메톡시에틸 )아미노)-4- 옥소부트 -2- 엔아미도) 부탄산 (28)의 합성
Figure pct00158
화합물 27 (52 mg, 0.132 mmol)을 DCM (3 mL)에 용해시키고, 거기에 포름산 (6 mL)을 첨가하였다. 생성된 용액을 38 ℃에서 밤새 교반한 후, 농축하여 화합물 28 (45 mg, 이론적인 수율)을 수득하였다. MS ESI m/z [M + H] + 339.05.
실시예 30. (E) -2,5- 디옥소피롤리딘 -1- 일 4- (3- 브로모 -4 -((2- 메톡시 에틸) 아미노) -4- 옥소부트 -2- 엔아미도) 부타노에이트 (29)의 합성
Figure pct00159
DCM (10 mL) 중 화합물 28 (45 mg, 0.132 mmol)의 용액에 NHS (23 mg, 0.199 mmol) 및 EDC·HCl (38 mg, 0.199 mmol)을 첨가하였다. 실온에서 3 시간 동안 교반한 후, 반응물을 농축시키고 컬럼 크로마토그래피 (10 내지 50 % EtOAc / 헥산)로 정제하여 화합물 29 (57mg, 99 % 수율)를 수득하였다. MS ESI m/z [M + H] + 436.06.
실시예 31. 화합물 30의 합성
Figure pct00160
에탄올 (1 mL) 및 인산염 완충액 (pH 7.2, 1 mL) 중 화합물 14 (2.0 mg, 0.00226 mmol)의 용액에, 에탄올 (1 mL) 중 화합물 29 (4.9 mg, 0.0113 mmol)을 30 분에 걸쳐 첨가하였다. 실온에서 3 시간 동안 교반한 후, 반응물을 농축시키고 prep-HPLC (H2O / MeCN)로 정제하여 화합물 30 (2.7 mg, 30 % 수율)을 수득하였다. MS ESI m/z [M + H] + 1203.40.
실시예 32. tert - 부틸 3- (2- (2- (2- 하이드록시에톡시 ) 에톡시 ) 프로파노에이트 (31)의 합성
Figure pct00161
무수 THF (200 mL) 중 2,2 '- (에탄 -1,2- 디일비스(옥시))디에탄올 (55.0 mL, 410.75 mmol, 3.0 당량)의 용액에 나트륨(0.1 g)을 첨가하였다. Na가 사라질 때까지 혼합물을 교반한 다음 tert- 부틸 아크릴레이트 (20.0 mL, 137.79 mmol, 1.0 eq.)를 적가하였다. 혼합물을 밤새 교반한 후, 0 ℃에서 HCl 용액 (20.0 mL, 1 N)으로 켄칭시켰다. 회전 증발에 의해 THF를 제거하고, 염수 (300 mL)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 염수 (3 × 300 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 무색 오일 (30.20 g, 79.0 % 수율)을 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. MS ESI m/z [M + H] + 278.17.
실시예 33. tert - 부틸 3- (2- (2- ( 토실옥시 ) 에톡시 ) 에톡시 ) 에톡시 ) 프로파노에이트 (32)의 합성
Figure pct00162
0 ℃에서 무수 DCM (220 mL) 중의 tert- 부틸 3- (2- (2- (2- 하이드록시에톡시)에톡시)에톡시)프로파노에이트 (30.20 g, 108.5 mmol, 1.0 eq.) 및 TsCl (41.37 g, 217.0 mmol, 2.0 eq.)의 용액에 TEA (30.0 mL, 217.0 mmol, 2.0 eq.)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 후, 물 (3 x 300 mL) 및 염수 (300 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피 (3 : 1 헥산 / EtOAc)로 정제하여, 무색 오일 (39.4 g, 84.0 % 수율)을 얻었다. MS ESI m/z [M + H] + 433.28.
실시예 34. tert - 부틸 3- (2- (2- (2- 아지도에톡시 ) 에톡시 ) 에톡시 ) 프로파노에이트 (33)의 합성
Figure pct00163
무수 DMF (100 mL) 중 tert- 부틸 3- (2- (2- (2- (2- 토실옥시)에톡시)에톡시)에톡시)프로파노에이트 (39.4 g, 91.1 mmol, 1.0 eq.)의 용액에 NaN3 (20.67 g, 316.6 mmol, 3.5 eq.)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 물 (500 mL)을 첨가하고 EtOAc (3 x 300 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 물 (3 x 900 mL) 및 염수 (900 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시키고 SiO2 칼럼 크로마토그래피 (5 : 1 헥산 / EtOAc)로 정제하여 담황색 오일 23.8 g, 85.5 % 수율)을 얻었다. MS ESI m/z [M + Na]+ 326.20.
실시예 35. tert- 부틸 3- (2- (2- (2- 아미노에톡시)에톡시)에톡시) 프로파노에이트 (34)의 합성
Figure pct00164
라니 - 니켈 (7.5 g, 물 중에 현탁)을 물 (3 회) 및 이소프로필 알콜 (3 회)로 세척하고, 이소프로필 알콜 중 화합물 33 (5.0 g, 16.5 밀리몰)과 혼합하였다. 혼합물을 실온에서 16 시간 동안 H2 벌룬하에 교반하고, 이어서 셀 라이트 패드상에서 여과하고 이소프로필 알코올로 패드를 세척하였다. 여액을 농축시키고 컬럼 크로마토그래피 (5-25 % MeOH / DCM)로 정제하여 담황색 오일 (2.60 g, 57 % 수율)을 수득하였다. MS ESI m/z [M + H] + 279.19.
실시예 36. 디-tert- 부틸 14,17- 디옥소 -4,7,10,21,24,27- 헥사옥사 -13,18- 디아자트라이아콘트 -15-이네 -1,30- 디오에이트 (35)의 합성
Figure pct00165
아세틸렌 디카르복실산 (0.35 g, 3.09 mmol, 1.0 당량)을 NMP (10 mL)에 용해시키고 0 ℃로 냉각시키고, 화합물 34 (2.06 g, 7.43 mmol, 2.4 eq.)를 첨가 한 후, DMTMM (2.39 g, 8.65 mmol, 2.8 eq.)을 조금씩 나누어 첨가하였다. 반응물을 0 ℃에서 6 시간 동안 교반한 후, 에틸 아세테이트로 희석하고 물과 염수로 세척하였다. 유기 용액을 농축시키고 에틸 아세테이트와 석유 에테르의 혼합물 용매로 분쇄(triturate)하였다. 고체를 여과하고 여액을 농축시키고 칼럼 크로마토그래피 (80-90 % EA / PE)로 정제하여 담황색 오일 (2.26 g,> 100 % 수율)을 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. MS ESI m/z [M + H] + 633.30.
실시예 37. 14,17- 디옥소 -4,7,10,21,24,27- 헥사옥사 -13,18- 디아자 트리아콘트 -15-이네 -1,30- 디오산 (36)의 합성
Figure pct00166
화합물 35 (2.26g)을 디클로로 메탄 (15mL)에 용해시키고 0 ℃로 냉각시킨 다음 TFA (15mL)로 처리 하였다. 반응물을 실온으로 가온시키고, 45 분 동안 교반한 후, 용매 및 잔류 TFA를 로토뱁(rotovap)에서 제거하였다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피 (0-15 % MeOH / DCM)로 정제하여 밝은 황색 오일 (1.39 g, 2 단계에 대해 86 % 수율)을 수득하였다. MS ESI m/z [M + H] + 521.24.
실시예 38. 화합물 37의 합성
Figure pct00167
화합물 14 (2.0 mg, 0.00226 mmol) 및 화합물 36 (5.9 mg, 0.0113 mmol)을 DMF (1 mL)에 용해시키고, 거기에 HATU (4.3 mg, 0.0113 mmol) 및 DIPEA (2.0 μL, 0.0113 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 밤새 교반한 후, 농축시키고 prep-HPLC (H2O / MeCN)로 정제하여 백색 고체를 수득하였다 (0.94 mg, 30 % 수율). MS ESI m/z [M + H] + 1387.50.
실시예 39. 메틸 2,5- 디옥소 -2,5- 디히드로 -1H- 피롤 -1- 카르복실레이트 (38)의 합성
Figure pct00168
0 ℃에서 에틸 아세테이트 (120 mL) 중 말레이미드 (6.35 g, 65.4 mmol)의 용액에 NMM (8.6 mL, 78.5 mmol)과, 이어서 메틸 클로로 포르메이트 (6.0 mL, 78.5 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 0 ℃에서 30 분 동안 교반하고 실온에서 1시간동안 교반하였다. 고체를 여과해내고 여액을 농축시켰다. 잔류물을 메틸렌 클로라이드에 용해시키고 실리카겔 플러그를 통해 여과하고 메틸렌 클로라이드로 용리시켜 붉은 색을 제거하였다. 농축 후, 고체를 에틸 아세테이트 및 석유 에테르로 분쇄하여 백색 고체를 수득하였다 (9.0g, 88 % 수율).
실시예 40. tert - 부틸 (2- (2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1H- 피롤 -1- 일) 에틸) 카바메이트 (39)의 합성
Figure pct00169
tert- 부틸 (2- 아미노 에틸) 카르바메이트 (11.2 mL) 및 포화 NaHCO3 (120 mL)의 혼합물을 0 ℃에서 격렬하게 교반하고, 거기에 화합물 38 (10.0 g, 64.4 mmol)을 나누어 첨가하였다. 0 ℃에서 30 분 동안 교반한 후, 반응물을 실온으로 가온시키고 1.0 시간 동안 교반하였다. 이어서, 진공 여과에 의해 고체를 수집하고, 에틸 아세테이트에 용해시키고, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 백색 발포체 (13.6 g, 87 % 수율)를 수득하였다.
실시예 41. tert - 부틸 (2- (1,3- 디옥소 -3a, 4,7,7a- 테트라 히드로 -1H-4,7- 에폭시이소인돌 -2 (3H) - 일) 에틸) 카르바메이트 (40)의 합성
Figure pct00170
화합물 39 (6.0 g, 25.0 mmol) 및 퓨란 (18 mL)의 톨루엔 (120 mL) 중 혼합물을 고압 플라스크에서 100 ℃로 가열 하였다. 반응물을 16 시간 동안 교반한 다음 용매를 제거하였다. 형성된 고체를 에틸 에테르로 분쇄하여 백색 고체를 수득하였다 (6.5 g, 84 % 수율).
실시예 42. 2- (2- 아미노에틸 ) -3a, 4,7,7a- 테트라히드로 -1H-4,7- 에폭시 이소인돌 -1,3 (2H) - 디온 하이드로클로라이드 (41)의 합성
Figure pct00171
메틸렌 클로라이드 (60 mL) 중 화합물 40 (7.90 g, 25.6 mmol)의 얼음 냉각 된 용액에 HCl / 다이옥산 (30 mL의 다이옥산에 용해된 농축 HCl 10 mL)을 천천히 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 2 시간 동안 교반하였다. 반응 공정은 TLC로 모니터링 하였다. 일단 완료되면, 반응물을 농축시키고 에틸 아세테이트로 분쇄시켰다. 진공 여과에 의해 백색 고체를 수집하였다 (6.32g, 이론 수율).
실시예 43. 화합물 42의 합성
Figure pct00172
화합물 14 (2.0 mg, 0.00226 mmol) 및 3 - ((tert- 부톡시카르보닐)아미노) 프로판산 (2.1 mg, 0.0113 mmol)을 DMF (1 mL)에 용해시키고, 거기에 HATU (4.3 mg, 0.0113 mmol) 및 DIPEA (2.0 μL, 0.0113 mmol)을 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 밤새 교반한 다음, 농축시키고 prep-HPLC (H2O / MeCN)로 정제하여 백색 고체를 수득하였다 (1.8 mg, 62 % 수율). MS ESI m/z [M + H] + 1156.50.
실시예 44. 화합물 43의 합성
Figure pct00173
화합물 42 (1.8 mg, 0.0016 mmol)를 CH2Cl2 (2 mL)에 용해시키고 0 ℃로 냉각시킨 후, TFA (0.5 mL)를 적가하였다. 반응물을 0 ℃에서 5 시간 동안 교반한 후, CH2Cl2로 희석시키고 농축시켰다. 잔류물을 prep-HPLC (H2O / MeCN)에 의해 정제하여 백색 고체 (1.1 mg, 75 % 수율)를 TFA로서 수득하였다. MS ESI m/z [M + H] + 956.40.
실시예 45. 화합물 44의 합성
Figure pct00174
화합물 41 (0.40 g, 1.64 mmol)을 메틸렌 클로라이드 (2.5 mL)에 현탁시키고, 0 ℃로 냉각시켰다. 포스포릴 트라이클로라이드 (0.75 mL, 0.82 mmol)를 적가하고, 이어서 트리에틸아민 (0.69 mL)을 천천히 적가하였다. 반응물을 0 ℃에서 1 시간 동안 교반하고 셀 라이트 패드로 여과하였다. 여액을 즉시 사용하였다.
화합물 43 (1.1mg, 0.00115mmol)을 메틸렌 클로라이드 (0.5mL)에 용해시키고 0 ℃로 냉각시킨 다음, 상기 용액을 천천히 첨가하였다. 2 시간 동안 교반한 후, 반응물을 농축시키고 prep-HPLC (H2O / MeCN)로 정제하여 백색 고체를 수득하였다 (1.0 mg, 60 % 수율). MS ESI m/z [M + H] + 1416.54.
실시예 46. 화합물 45의 합성
Figure pct00175
화합물 44 (1.0 mg, 0.000706 mmol)를 톨루엔 (2 mL)에 용해시키고 100 ℃에서 16 시간 동안 가열하였다. 이어서, 용매를 진공하에 제거하여 백색 고체를 수득하였다 (0.85 mg, 95 % 수율). MS ESI m/z [M + H] + 1280.48.
실시예 47. 화합물 디-tert- 부틸 1,2- 비스 (2- (tert- 부톡시)-2-옥소에틸) 히드라진 -1,2- 디카르복실레이트 (46)의 합성
Figure pct00176
실온에서 무수 DMF (2 mL) 중 NaH (0.259 g, 6.48 mmol, 3.0 eq.)의 현탁액에 무수 DMF (8 mL) 중 다이-tert- 뷰틸 하이드라진 -1,2- 다이카복실레이트 (0.50 g, 2.16 mmol, 1.0 eq.)을 질소하에 10 분 동안 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 10 분 동안 교반한 다음, 0 ℃로 냉각시켰다. 여기에 tert- 부틸 2- 브로모아세테이트(1.4 mL, 8.61 mmol, 4.0 당량)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 가온시키고 밤새 교반하였다. 포화 염화 암모늄 용액 (100 mL)을 첨가하였다. 유기층을 분리하고 수성 층을 EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 용액을 물 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시키고 SiO2 컬럼 크로마토그래피 (10 : 1 헥산 / EtOAc)로 정제하여 화합물 46을 무색의 오일로서 수득하였다 (0.94 g, 99.6 % 수율). ESI MS m/z [M + Na] + 483.4.
실시예 48. 화합물 2,2 '- (히드라진 -1,2- 디일) 디아세트산(47)의 합성
Figure pct00177
0 ℃에서 DCM (4 mL) 중의 화합물 46 (0.94 g, 2.04 mmol)의 용액에 TFA (4 mL)를 첨가하였다. 반응물을 30 분 동안 교반한 후 실온으로 가온시키고 밤새 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, DCM으로 희석시키고, 농축시켰다. 이 조작을 3 회 반복하여 백색 고체를 얻었다. DCM으로 분쇄하고 여과에 의해 백색 고체를 수집하였다 (0.232g, 수율 76.8 %). ESI MS m/z [M + H] + 149.2.
실시예 49. 화합물 2,2 '- (1,2- 비스 (2- 클로로아세틸 ) 히드라진 -1,2- 디일 )디아세트산의 합성 (48)
Figure pct00178
0 ℃에서 무수 THF (10 mL) 중 화합물 47 (0.232 g, 1.57 mmol, 1.0 eq.)의 용액에 2- 클로로 아세틸 클로라이드 (0.38 mL, 4.70 mmol, 3.0 당량)를 10 분에 걸쳐 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온하고 밤새 교반하고 농축시켰다. 잔류물을 THF와 3 회 공동 증발시켜 백색 고체를 수득하였다 (0.472g, 이론 수율). ESI MS m/z [M + H] + 301.1.
실시예 50. 화합물 49의 합성
Figure pct00179
0 ℃에서 무수 DCM (3 mL) 중 화합물 48 (0.0245 g, 0.0814 mmol)의 용액에 옥살릴 디클로라이드 (0.07 mL, 0.814 mmol)를 10 분에 걸쳐 첨가 한 후, 무수 DMF를 적가하였다. 혼합물을 30 분 동안 교반한 후 실온으로 가온시키고 1.5 시간 동안 교반하였다. 마지막으로, 혼합물을 농축시키고 DCM과 함께 3 회 증발시켜 황색 오일을 수득하고, 이를 직접 사용하였다.
무수 DCM (1 mL) 중 화합물 43 (2.0 mg, 0.00209 mmol)의 용액에 0 ℃에서 DCM (1 mL) 중의 상기 황색 오일의 1/4을 첨가하였다. 혼합물을 2 시간 동안 교반한 후, 농축시키고 prep-HPLC (H2O / MeCN)로 정제하여 무색 오일 (1.3g, 48 % 수율)을 수득하고, 이를 다음 단계에서 직접 사용하였다. ESIMS m/z [M + H] + 1238.40.
실시예 51. (E) - tert - 부틸 3- (2- (2- 브로모아크릴아미도 ) 에톡시 ) 프로파노에이트 (50)의 합성
Figure pct00180
0 ℃에서 DCM (10 ml) 중 (E) -3- 브로모아크릴산 (0.15 g, 1 mmol), DMAP (0.15 g, 1.2 mmol) 및 DCC (0.21 g, 1 mmol)의 용액에, tert- 부틸 3- (2- (2- 아미노에톡시)에톡시)프로파노에이트 (0.23g, 1mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고 밤새 교반하였다. 조 생성물을 농축시키고 EA / DCM의 구배로 SiO2 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 50 (0.31g, 85 % 수율)을 수득하였다. ESI MS m/z [M + H] + 366.08.
실시예 52. (E) -3- (2- (2- (3- 브로모아크릴아미도 ) 에톡시 ) 에톡시 )프로판산 (51)의 합성
Figure pct00181
화합물 50 (0.31 g, 0.84 mmol)을 0 ℃에서 포름산 (4 ml)에 용해시킨 다음 H2O (2 ml)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고 실온에서 밤새 교반하였다. 조 생성물을 농축시키고 더 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다. ESIMS m/z [M + H] + 310.03.
실시예 53. (E) -2,5- 디옥시피롤리딘 -1- 일 3- (2- (2- (3- 브로모아크릴 아미도)에톡시)에톡시)프로파노에이트 (52)의 합성
Figure pct00182
화합물 51 (0.12 g, 0.39 mmol), NHS (0.067 g, 0.58 mmol) 및 EDC (0.11 g, 0.58 mmol)를 DCM (10 ml)에 용해시키고, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 농축시키고 SiO2 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 생성물 52 (0.13g, 82 % 수율)를 수득하였다. ESI MS m/z [M + H] + 407.04.
실시예 54. 화합물 53의 합성
Figure pct00183
화합물 43 (2.0 mg, 0.00209 mmol), 화합물 52 (4.2 mg, 0.0105 mmol)를 DMA (1 ml)에 용해시키고, 이어서 인산염 완충액 (pH 7.2, 1 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 농축시키고, MeCN / H2O 구배의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 53 (0.9 mg, 33 % 수율)을 수득하였다. ESI MS m/z [M + H] + 1248.40.
실시예 55. 화합물 54의 합성
Figure pct00184
에탄올 (1 mL)중의 화합물 14 (2.0 mg, 0.00226 mmol)과 인산 완충액 (pH 7.2, 1 mL)의 용액에, 에탄올 (1 mL)중의 2,5- 디옥시피롤리딘 -1- 일 2- (2- (4-(2,5- 디옥소 -2,5- 디하이드로 -1H- 피롤- 1 -일)부탄아미도)프로판아미도)아세테이트(4.6 mg, 0.0113 mmol)를 30 분에 걸쳐 적가하였다. 실온에서 3 시간 동안 교반한 후, 반응물을 농축시키고 prep-HPLC (H2O / MeCN)로 정제하여 화합물 54 (1.1 mg, 41 % 수율)를 수득하였다. MS ESI m/z [M + H] + 1178.48.
실시예 56. 메틸 4- ( 비스 (2- 히드록시에틸 )아미노) -4- 옥소부타노에이트(55)의 합성
Figure pct00185
무수 톨루엔 (500 ml) 및 피리딘 (50 ml)의 혼합물 중 숙신산 디메틸 (20.0 g, 136.9 mmol) 및 디히드록시에틸아민 (7.20 g, 68.7 mmol)을 150 ℃에서 28 시간 동안 환류시켰다. 혼합물을 농축시키고 EtOAc / DCM (5 % ~ 25 % EtOAc)로 용출시키는 SiO2 칼럼상에서 정제하여 표제 화합물 (12.5g, 83 % 수율)을 수득하였다. ESI MS m/z [M + Na] + 242.4.
실시예 57. 메틸 4- ( 비스 (2 -(( 메틸술포닐 ) 옥시 )에틸)아미노)-4- 옥소부타 노에이트 (56)의 합성
Figure pct00186
무수 피리딘 (350 ml) 중의 메틸 4- (비스 (2- 하이드록시에틸)아미노)-4- 옥소부타노에이트 (12.0 g, 49.56 mmol)에 메테인설폰일 클로라이드 (20.0 g, 175.4 mmol)를 첨가하였다. 밤새 교반한 후, 혼합물을 농축시키고, EtOAc (350 ml)로 희석시키고, 차가운 1M NaH2PO4 (2 x 300 ml)로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과 및 증발시켜 조 생성물 ( ~18.8 g,> 100 % 수율)을 수득하였다. 조 생성물을 추가 정제없이 다음 단계에 사용하였다.
실시예 58. 3,6- 엔독소 -Δ- 테트라하이드로프탈이미드 (57)의 합성
Figure pct00187
톨루엔 (200 ml) 중 말레이미드 (10.0 g, 103.0 mmol)에 푸란 (10.0 ml, 137.4 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 1L 의 오토 클레이브 밤(bomb) 내에서 100 ℃에서 8 시간 동안 가열 하였다. 밤을 실온으로 냉각시키고, 내부 고체를 메탄올로 헹구고, 에틸 아세테이트 / 헥산 중에서 농축시키고 결정화시켜 16.7 g (99 %)의 표제 화합물을 수득하였다. 1H NMR (CDCl3) : 11.12 (s, 1H), 6.68-6.64 (m, 2H), 5.18~5.13 (m, 2H), 2.97~2.92 (m, 2H). ESI MS m/z [M + Na] + 188.04.
실시예 59. 메틸 4 - ((2 - (( 3aR , 4R, 7S, 7aS ) -1,3- 디옥소 - 3a,4 ,7,7a- 테트라하이드로 -1H-4,7- 에폭시이소인돌 -2(3H)-일)에틸) (2 - ((4R, 7S, 7aS ) -1,3- 디옥소 - 3a,4 ,7,7a- 테트라 하이드로 -1H-4,7- 에폭시이소인돌 -2(3H)- 일) 에틸)아미노)-4- 옥소부타노에이트 (58)의 합성
Figure pct00188
DMA (350 ml) 중 메틸 4- (비스 (2- ((메틸술포닐)옥시)에틸)아미노) -4- 옥소부타노에이트 (56, 신품, 90 % 순수, 8.5 g, ~20 mmol)에 3,6- 엔독소 -Δ- 테트라하이드로프탈이미드 (10.2 g, 61.8 mmol), 탄산나트륨 (8.0 g, 75.5 mmol) 및 요오드화 나트륨 (0.3 g, 2.0 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 농축시키고, EtOAc (350 ml)로 희석시키고, 포화 NaHCO3 용액 (300 ml), 포화 NaCl 용액 (300 ml) 및 1M NaH2PO4 (300 ml)로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시키고, SiO2 칼럼에 로딩하고 EtOAc /헥세인 (10 % ~ 30 % EtOAc)으로 용리시켜 표제 화합물 (7.9g, 77 % 수율)을 수득하였다. ESI MS m/z [M + Na] + 536.4.
실시예 60. 4 - ( 비스 (2- (2,5- 디옥소 -2,5- 디히드로 -1H- 피롤 -1- 일) 에틸) 아미노) -4- 옥소부탄산 (59)의 합성
Figure pct00189
1,2- 디클로로 에탄 (150 ml) 중의 화합물 58 (3.0 g, 5.8 mmol) 및 트리메틸스탄나놀 (4.8 g, 26.4 mmol)을 80 ℃에서 8 시간 동안 환류시켰다. 이를 실온으로 냉각시키고, 잔류물을 짧은 실리카 겔 컬럼을 통과시키고 디클로로메탄/메탄올로 용리시켜 여분의 트리메틸틴 수산화물을 제거하였다. 이어서, 통합된 분획을 합치고, DMA 및 톨루엔으로 농축 및 희석하고, 120 ℃에서 밤새 환류시키고, SiO2 칼럼에 로딩하고 MeOH / DCM (5 % ~10 % MeOH)로 용출시켜 표제 화합물을 얻었다 (1.62 g, 76 % 수율). ESI MS m/z [M + Na] + 386.2.
실시예 61. 2,5- 디옥시피롤리딘 -1- 일 4- ( 비스 (2-(2,5- 디옥소 -2,5- 디 히드로 -1H- 피롤 -1- 일) 에틸) 아미노)-4- 옥소부타노에이트 (60)의 합성
Figure pct00190
DMA (100 ml) 중 화합물 59 (1.60 g, 4.4 mmol)의 용액에 NHS (0.76 g, 6.61 mmol) 및 EDC (1.70 g, 8.90 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 밤새 교반하고, 증발시키고 SiO2 칼럼상에서 정제하여 EtOAc / DCM (5 % 내지 15 % EtOAc)로 용출시켜 표제 생성물 (1.72 g, 85.0 % 수율)을 수득하였다. ESI MS m/z [M + Na] + 483.2.
실시예 62. 화합물 61의 합성
Figure pct00191
에탄올 (1 mL) 및 인산염 완충액 (pH 7.2, 1 mL) 중 화합물 14 (2.0 mg, 0.00226 mmol)의 용액에 에탄올 (1 mL) 중의 화합물 60 (5.2 mg, 0.0113 mmol)을 30 분에 걸쳐 첨가하였다 . 실온에서 교반한 후, 3 시간 동안 반응물을 농축시키고 prep-HPLC (H2O / MeCN)로 정제하여 화합물 61 (1.2 mg, 45 % 수율)을 수득하였다. MS ESI m/z [M + H] + 1230.48.
실시예 63. 화합물 63의 합성
Figure pct00192
아세트산 (1 mL) 및 CH2Cl2 (1 mL) 중의 화합물 62 (5.0 mg, 0.00563 mmol, 1.0 당량)의 용액에 70 % HNO3 (0.5 mL)를 0 ℃에서 첨가하였다. 반응물을 0 ℃에서 1 시간 동안 교반한 다음 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 물 (5 mL)을 첨가 한 후, 반응 혼합물을 농축시키고 prep-HPLC (H2O / MeCN)로 정제하여 담황색 고체를 수득하였다 (2.4 mg, 46 % 수율). ESI MS m/z 931.34 ([M + H] +).
실시예 64. 화합물 64의 합성
Figure pct00193
CH3CN (2 ml) 및 DMA (1 ml)의 혼합물 중 화합물 63 (2.4 mg, 0.00257 mmol)에 0 ℃에서 DIPEA (9 μl, 0.0524 mmol)를 첨가하였다. 2 분 동안 교반한 후, 0 ℃에서 POCl3 (2.4 ㎕, 0.0262 mmol)를 적가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간동안 교반하고, 0 ℃에서 포화 NaHCO3 용액을 천천히 첨가하면서 켄칭시켰다. 혼합물을 농축시키고 prep-HPLC (H2O / MeCN)로 정제하여 백색 고체를 수득하였다 (2.0 mg, 77 % 수율). ESI MS m/z 1011.28 ([M + H] +).
실시예 65. 화합물 65의 합성
Figure pct00194
메탄올 (2 mL) 중의 화합물 64 (2.0 mg, 0.00197 mmol) 및 Pd / C (10 중량 %, 5 mg)의 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 수소화(1 atm H2)시킨 다음, 셀라이트 (여과 보조제)를 통해 여과 하였다. 여액을 농축시켜 백색 고체를 수득하였다 (1.8 mg, 93 % 수율). ESI MS m/z 981.33 ([M + H] +).
실시예 66. 화합물 66의 합성
Figure pct00195
에탄올 (1 mL) 및 인산염 완충액 (pH 7.2, 1 mL) 중 화합물 14 (1.8 mg, 0.00183 mmol)의 용액에, 에탄올 (1 ㎖)중의 2,5- 다이옥시피롤리딘-1- 일 4- (2,5- 디옥소 -2,5- 디히드로 -1H- 피롤 -1- 일)부타노에이트 (2.6 ㎎, 0.0930 밀리몰)를 10 분에 걸쳐 첨가하였다. 실온에서 3 시간 동안 교반한 후, 반응물을 농축시키고 prep-HPLC (H2O / MeCN)로 정제하여 화합물 30 (1.3 mg, 62 % 수율)을 수득하였다. MS ESI m/z [M + H] + 1146.45.
실시예 67. Her2 항체 (허셉틴)에 독립적으로 화합물 15, 22, 30, 37, 45, 49, 53, 54, 61 또는 66을 접합시키는 일반적인 방법.
pH 6.0 ~ 8.0의 10 mg/ml Herceptin의 2.0 mL의 혼합물에, 100 mM NaH2PO4, pH 6.5 ~ 8.5 완충액의 0.70 ~ 2.0 mL의 PBS 완충액, TCEP (14-35 μL, 물 20 mM) 및 화합물 15, 22, 30, 37, 45, 49, 53, 54, 61 또는 66 (14-28 μL, DMA 중 20 mM)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4 ~ 16 시간 동안 배양 한 후, DHAA (135 μL, 50 mM)를 첨가하였다. 실온에서 밤새 계속 배양한 후, 혼합물을 100 mM NaH2PO4, 50 mM NaCl pH 6.0 ~ 7.5의 완충액으로 용출시킨 G-25 컬럼상에서 정제하여, 12.0 ~ 18.4 mg의 공액 화합물 A1, A2, A3, A4, A5, A6, A7, A8, A9 또는 A10 (68 % ~ 83 % 수율)을 13.0 ~ 15.8 ml의 완충액에 맞춰 수득하였다. 약물 / 항체 비 (DAR)는 UPLC-QTOF 질량 스펙트럼을 통해 측정한 1.9 ~ 4.0이었다. 그것은 SEC HPLC (Tosoh Bioscience, Tskgel G3000SW, 7.8mm ID x 30cm, 0.5ml / min, 100 분)에 의해 분석된 94 ~ 99 % 단량체이며, SDS-PAGE 겔로 측정된 단일 밴드였다.
실시예 68. 화합물 22, 30, 37, 45, 49, 54 또는 61을 허셉틴 ( Her2 항체)에 독립적으로 컨쥬게이트시키는 일반적인 방법.
pH 6.0 ~ 8.0인 10 mg/ml Herceptin 2.0 mL와, 100 mM NaH2PO4, 1 mM Na2SO3, pH 6.5 ~ 8.5 완충액의 0.70 ~ 2.0 mL 그리고 1 시간 동안 독립적으로 배양시킨 화합물 22, 30, 37, 45, 49, 54 또는 61 (21-24 μL, DMA 중 20 mM) 의 혼합물에, TCEP (14-23 μL, 물 중의 20 mM)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 8 ~ 24 시간 동안 배양한 후, DHAA (135 μL, 50 mM)를 첨가하였다. 상기 용액을 12 시간 동안 연속 배양한 후, 100 mM NaH2PO4, 50 mM NaCl pH 6.0 ~ 7.5 완충액으로 용출시킨 G-25 컬럼상에서 정제하여, 완충액 중의 접합체 화합물 A2, A3, A4, A5, A6 , A7 또는 A9 (63 % ~ 87 %의 수율) 각각의 13.8 ~ 17.6 mg 를 수득하였다. 약물 / 항체 비 (DAR)는 UPLC-QTOF 질량 스펙트럼을 통해 측정했을 때 1.9 ~ 3.8이었다. 그것은 SEC HPLC (Tosoh Bioscience, Tskgel G3000SW, 7.8mm ID x 30cm, 0.5ml / min, 100 분)에 의해 분석된 96-99 % 단량체이며, SDS-PAGE 젤에 의해 측정된 단일 밴드 또는 환원 시약 DTT가 SDS 페이지에 있는 경우에는 2개의 밴드였다.
실시예 69. T-DM1과 비교하여 콘쥬게이트 A1, A2, A3, A4, A5, A6, A7, A8, A9 및 A10의 시험관내 세포 독성 평가 :
세포 독성 분석에 사용된 세포주는 인간 위암 세포주인 NCI-N87이었다. 세포를 10 % FBS가 함유된 RPMI-1640에서 성장시켰다. 분석을 실행하기 위해, 세포 (180 μl, 6000 세포)를 96 웰 플레이트의 각각의 웰에 추가하고 5 % 이산화탄소와 함께 37 ℃에서 24 시간동안 배양하였다. 그다음, 세포를 적절한 세포 배양 배지 (총 부피, 0.2 mL) 중에서 다양한 농도로 시험 화합물 (20 ㎕)로 처리 하였다. 대조구 웰에는 세포와 배지가 들어 있지만 시험 화합물은 부족하다. 플레이트를 5 % CO2와 함께 37 시간 동안 120 시간 동안 배양 하였다. 그 후 MTT (5mg/ml)를 웰 (20㎕)에 첨가하고 플레이트를 1.5 시간 동안 37 ℃에서 배양하였다. 배지를 조심스럽게 제거하고 이후에 DMSO (180㎕)를 첨가하였다. 15 분간 진탕한 후, 620nm의 레퍼런스 필터로 490nm 및 570nm에서의 흡광도를 측정하였다. 다음의 식: 억제 % = [1- (분석 - 블랭크) / (대조 - 블랭크)] × 100에 따라 억제%를 계산 하였다.
세포 독성 결과 :
Figure pct00196
가교 결합제와의 접합체는 시험관내에서 T-DM1보다 효능이 더 적었다.
실시예 70. 생체내 항종양 활성.
T-DM1과 함께 A1, A2, A3, A5, A6, A7, A9 및 A10 접합체의 생체 내 효능을 인간 위암 N-87 세포주의 종양 이식편 모델에서 평가하였다. 5 주된 암컷 BALB / c 누드 마우스 (60 마리 동물)에게 0.1 ㎖의 혈청없는 배지중의 N-87 암종 세포 (5 × 106 세포/마우스)로 우측 어깨 아래 영역에 피하 접종하였다. 종양은 평균 123 mm3 크기로 8 일 동안 성장했다. 그후 동물을 무작위로 10 그룹으로 나누었다 (그룹당 6 마리의 동물). 첫번째 그룹의 마우스를 대조군으로 사용하고 인산염 완충 식염수 비히클로 처리하였다. 나머지 9 개 그룹은 정맥 내 투여된 6 mg / kg의 용량으로 컨쥬게이트 A1, A2, A3, A5, A6, A7, A9 및 A10과 T-DM1으로 각각 처리하였다. 종양의 3 치수(가로, 세로, 높이)를 4 일마다 측정하고 종양 체적을 화학식 종양 체적 = 1 / 2 (길이 × 폭 × 높이)를 사용하여 계산 하였다. 동물의 무게도 동시에 측정되었다. 다음 기준 중 하나가 충족되면 마우스를 희생시켰다: (1) 전처리 중량에서 20 % 이상의 체중 감소, (2) 1500 mm3보다 큰 종양 체적, (3) 너무 병들어서 음식과 물에 도달할 수 없음, 또는 (4) 피부 괴사. 종양이 만져지지 않으면 마우스는 종양이 없는 것으로 간주되었다.
그 결과를 도 30에 도시하였다. 모든 9 개의 콘쥬게이트는 동물 체중 감소를 일으키지 않았다. 그리고 대조군의 동물들은 종양 체적이 1200mm3 이상으로 인해 30 일째에 희생되었고 그들은 너무 병들었다. 도면 31에서, 화합물 A2, A5, A7, A9 및 A10의 그룹에 있는 모든 6/6 동물은 16 일에서 62 일(실험의 끝)까지 측정가능한 종양이 전혀 관찰되지 않았다. 대조적으로, 6mg / Kg의 투여량의 T-DM1은 종양을 완전히 제거할 수 없었고, 그것은 단지 37일 동안 종양 성장을 억제했을 뿐이었다. 접합(컨쥬게이트) 화합물 A1, A3 및 A6도 6mg/Kg의 투여량으로 종양을 완전히 박멸하지는 않았지만, T-DM1보다 우수한 항-종양 활성을 보였다. 보다 중요한 것은 실험 종료시 혈청 중 알라닌 아미노트랜스퍼라제 (ALT)와 아스파탐 아미노 트랜스퍼라제 (AST)의 농도를 측정하였을 때 (데이터는 나타내지 않음), 컨쥬게이트 화합물 A1, A2, A3, A5, A6, A7, A9 및 A10으로 치료한 모든 동물은 T-DM1으로 치료한 동물에 비해 간 독성이 거의 없거나 적었다. 이것은 본 특허 출원의 접합체가 전통적인 접합체보다 더 넓은 치료학적 응용성을 가질 것이라는 것을 입증한다.

Claims (21)

  1. 화학식 I의 화합물 또는 이들의 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형체 결정 구조; 또는 이들의 광학 이성질체, 라세미체, 부분 입체 이성질체 또는 거울상 이성질체.
    Figure pct00197

    상기식에서,
    ----는 방향족 (인돌) 고리의 임의의 탄소 위치를 연결하는 단일 결합을 나타내고;
    Figure pct00198
    는 임의의 단일 결합 또는 부재된 결합을 나타내고;
    R1 및 R2는 H, OH, CH2OH, CH(OH)CH2OH, CH(CH3)CH2OH, CH(OH)CH3, C1-C8 알킬, -OR12(에테르), C2-C8 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, -OCOR12 (에스테르), -OC(=O) OR12-(카보네이트), -OC(=O)NHR12 (카바메이트); C3-C8 아릴, 헤테로고리, 탄소고리, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아랄킬, 알킬카보닐로부터 독립적으로 선택되고;
    R3 및 R4는 H, OH, -OR12 (에테르), -OCOR12 (에스테르), -OCOCH3 (아세테이트), -OCOOR12 (카보네이트), -OC(=O)NHR12 (카바메이트), -OP(O)(OR12) (OR12') (포스페이트), OP(O)(NHR12)(NHR12')(포스파마이드), O-SO3 - 또는 O-글리코시드 로부터 독립적으로 선택되고;
    R5는 H, OH, NH2, NHOH, NHNH2, -OR12, -NHR12, NHNHR12, -NR12R12', N(H)(R12)R13CO(Aa)p 로부터 선택되고(아미노산 또는 펩티드, 여기서 Aa는 아미노산 또는 폴리펩타이드이며, p는 0 내지 6을 나타냄);
    R6은 H, OH, CH2OH, CH(OH)CH2OH, CH(CH2OH)2, CH(CH3)OH, CH2CH2OH, PrOH, BuOH, C1~C8의 알킬, -OR12 (에테르), C2~C8 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, -OCOR12 (에스테르); C3~C8 아릴, 헤테로고리 또는 탄소고리 중에서 선택되고;
    R7, R8 및 R9 는 H, OH, CH3, CH(CH3)2, CH(CH3)CH2CH3, CH2OH, CH(OH)CH2OH, CH2CH(OH)CH2OH, CH(CH2OH)2, CH2C(OH)(CH2OH)2, CH2C(OH)(CH3)(CH2OH), CH2C(OH)(CH(CH3)2)(CH2OH), CH2CH2OH, PrOH, BuOH, CH2COOH, CH2CH2COOH, CH(OH)COOH, CH2CONH2, CH2CH2CONH2, CH2CH2CH2CH2NH2, CH2CH2CH2NHC(=NH)NH2, C1~C8 알킬, CH2Ar, CH2SH, CH2SR12, CH2SSR12, CH2SSAr, CH2CH2SCH3, -OR12 (에테르), C2~C8 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, -OCOR12 (에스테르); C3~C8 아릴, 헤테로고리 또는 탄소고리 중에서 독립적으로 선택되고;
    R10 은 H, NH2, OH, SH, NO2, 할로겐, -NHOH, -N3 (아지도); -CN (시아노); C1~C8 알킬, C2~C8 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬; C3~C8 아릴, 헤테로고리, 또는 탄소고리; -OR12 (에테르), -OCOR12 (에스테르), -OCOCH3 (아세테이트), -OC(O)OR12 (카보네이트), -OC(O)CH(R12)NHAa (Aa는 아미노산 기임), -NR12R12'(아민), -NR12COR12'(아민),-NR12NR12'NR12"(아민);-OCONR12R12'(카바메이트); -NR12(C=NH)NR12'R12" (구아니디눔); -NR12CO(Aa)p, (아미노산 또는 펩티드, 이때 Aa는 아미노산 또는 폴리펩티드이고, p는 0 내지 6을 나타냄); -N(R12)CONR12'R12" (유레아); -OCSNHR12 (티오카바메이트); -SH (티올); -SR12 (설파이드); -S(O)R12 (설폭시드); -S(O2)R12 (술폰); -SO3, HSO3, HSO2, 또는 HSO3 -, SO3 2- 또는 -HSO2 - (설파이트)의 염; -OSO3 - ; -N(R12)SOOR12' (술폰아미드); H2S2O5 또는 S2O5 2 -의 염(메타비설파이트); PO3SH3, PO2S2H2, POS3H2, PS4H2 또는 PO3S3 -, PO2S2 3 -, POS3 3 -, PS4 3-의 염(모노-, 디-, 트리-, 및 테트라-티오포스페이트); (R12O)2POSR12’(티오포스페이트 에스테르); HS2O3 또는 S2O3 2 -의 염(티오설페이트); HS2O4 또는 S2O4 2 -의 염 (디티오나이트); (P(=S)(OR12)(S)(OH) 또는 양이온으로 형성된 염 (포스포로디티오에이트); -N(R12)OR12’(하이드록실아민 유도체); R12C(=O)NOH 또는 양이온으로 형성된 염 (하이드록삼산); HOCH2SO2 -, 또는 그것의 염(포름알데히드 설폭실레이트); -N(R12)COR12'(아미드); R12R12'R12"NPO3H (트리알킬포스포-라미데이트 또는 포스포라미드산); 또는 ArAr'Ar"NPO3H (트리아릴포스포늄); OP(O)(OM1)(OM2), OCH2OP(O)(OM1)(OM2), OSO3M1; O-글리코시드 (글루코시드, 갈락토시드, 만노시드, 글루쿠로노시드, 알로시드, 프룩토시드, 등), NH-글리코시드, S-글리코시드 또는 CH2-글리코시드 중에서 선택되고; M1 및 M2 는 독립적으로 H, Na, K, Ca, Mg, NH4, NR1'R2'R3'이고; R1', R2' 및 R3'은 독립적으로 H, C1~C8 알킬이고; Ar, Ar', 및 Ar"은 C3-C8 아릴 또는 헤테로방향족 기 이고;.
    R11은 H, C1~C8 알킬; C2~C8 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬; C3~C8 아릴, 헤테로 아릴 이고;
    R12, R12' 및 R12"는 H, C1~C8 알킬; C2~C8 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬; C3~C8 아릴, 헤테로 아릴, 헤테로고리 또는 탄소고리로부터 독립적으로 선택되고;
    X는 S, O, NH, SO, SO2 또는 CH2이고;
    m은 0 또는 1이고; n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이고;
    L은 링커 또는 링커-세포-결합 분자 (Q) 공유 결합된 클러스터, 또는 링커 상에 세포 결합제 (CBA)와의 결합을 가능하게하는 작용기를 갖는 링커이며, L은 바람직하게는 화학식: ―Ww―(Aa)r―Tt―; 또는 ―Ww―(Aa)r―Tt―Q; 또는 Q―Ww―(Aa)r―Tt―을 가지며, 이때 W는 스트레처 유닛 (Stretcher unit)이고; w는 0 또는 1이고; Aa는 독립적인 아미노산을 포함하는 아미노산 단위이며; r은 0 내지 100 범위의 정수이고, 상기 스트렛처 유닛 (W)은 자가 침식형 또는 비 자가 침식형 성분, 펩티딜 단위, 히드라존 결합, 디설파이드, 에스테르, 옥심, 아미드 또는 티오 에테르 결합을 함유할 수 있고, 자가 -침식 유닛은 파라-아미노벤질카바모일 (PAB) 기, 2-아미노이미다졸-5-메탄올 유도체, 헤테로고리 PAB 유사체, 베타-글루쿠로니드 및 오르토 또는 파라-아미노벤질아세탈과 전자적으로 유사한 방향족 화합물을 포함하고, 바람직하게는, 자가-침식 링커 성분은 하기 구조 중 하나를 갖고;
    Figure pct00199

    이때 (*) 원자는 추가의 스페이서 또는 방출형 링커 단위, 또는 세포 독성제 및/또는 결합 분자 (CBA)의 부착점이고; X1, Y1, Z2 및 Z3은 독립적으로 NH, O 또는 S이고; Z1는 독립적으로 H, NH, O 또는 S 이고; v 는 0 또는 1이고; Q1 는 독립적으로 H, OH, C1~C6 알킬, (OCH2CH2)nF, Cl, Br, I, OR12, SR12, NR12R12', N=NR12, N=R12, NR12R12', NO2, SOR12R12', SO2R12, SO3R12, OSO3R12, PR12R12', POR12R12', PO2R12R12', OPO(OR12)(OR12'), 또는 OCH2PO(OR12(OR12')이고, 이때 R12 및 R12'는 상기 정의된 바와 같고; 바람직하게는 R12 및 R12'는 H, C1~C8 알킬; C2~C8 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬; C3~C8 아릴, 헤테로고리, 탄소고리, 사이클로 알킬, 헤테로 사이클로 알킬, 헤테로 아랄킬, 알킬카보닐; 또는 약학 양이온성 염 중에서 독립적으로 선택되고;
    비-자가 침식 링커 성분은 하기 구조 중 하나이다:
    Figure pct00200

    Figure pct00201

    상기 (*) 원자는 추가의 스페이서 또는 방출형 링커, 세포 독성제 및/또는 결합 분자의 부착 지점이고, ; X1, Y1, Q1, R12, R12'는 상기 정의된 바와 같고; r은 0 내지 100이고; p 와 q는 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6으로부터 독립적으로 선택되고;
    스페이서 (T)는 탄소 원자 1 내지 10의 선형, 분지형 또는 환형 알킬, 알케닐, 알키닐 또는 아릴이거나, T는 폴리에틸렌 글리콜 (-CH2CH2O-) 스페이서일 수 있고; t는 0 또는 1∼100이고, T는 또한 아미드 결합 가수 분해시 고리화를 거칠 수 있으며, 이러한 아미드는 치환 및 비치환된 4- 아미노 부티르산 아미드, 적절하게 치환된 바이사이클 [2.2.1] 및 바이사이클로 [2.2.2] 고리 시스템 및 2- 아미노 페닐 프로피온산 아미드를 포함하고;
    Q는 세포 결합제/분자 (CBA), 또는 세포 결합제와 결합할 수 있는 작용기, 또는 세포 결합제에 부착된 링커와 결합할 수 있는 작용기이고, 작용기는 티올, 아민, 히드라진, 알콕시아미노, 다이설파이드 치환기, 말레이미도, 할로아세틸 기, 카르복시산, N- 히드록시 숙신이미드 에스테르, 케톤, 에스테르, 알데히드, 알키닐, 알케닐 또는 보호된 티올 또는 다이설파이드 기: SAc, SSR1 또는 SSAr로부터 선택된다. Ar은 방향족 기 또는 헤테로 방향족 기이고, Q는 다음 화학식들 중의 하나가 될 수 있다:
    Figure pct00202

    Figure pct00203

    상기 식에서, D는 H, -NO2, SO3 -, CN 또는 F이고; Aa, r, p, q, m 및 n은 상기 기재되어 있고; w 및 w'는 독립적으로 0 또는 1이고, R1', R2', R3' 및 R4'는 독립적으로 H, CH3, C2H5, C3H7, CH2OH, CH2CH2OH 이다.
  2. 제 1항에 있어서, 화학식 (Ia) (Ib), 및 (Ic)를 갖는 것을 특징으로 하는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염, 또는 그것의 다형체 결정 구조, 또는 광학 이성질체, 라세미체, 부분 입체 이성질체 또는 거울상 이성질체.
    Figure pct00204

    상기식에서 R1, R2, R4, R5, R7, R8, R9, R10, L 및 Q는 제 1 항에서 정의한 바와 같다.
  3. 제 1항에 있어서, 화학식 (Id)를 갖는 것을 특징으로 하는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염, 또는 그것의 다형체 결정 구조, 또는 광학 이성질체, 라세미체, 부분 입체 이성질체 또는 거울상 이성질체.
    Figure pct00205

    상기식에서 R1, R2, R4, R5, R10, L 및 Q는 청구항 제 1 항에서 정의한 바와 같다.
  4. 제 1항에 있어서, 하기 화학식 (Ia-1), (Ia-2), (Ia-3), (Ia-4), (Ia-5), (Ia-6), (Ia-7), (Ia-8), (Ia-9), (Ia-10), (Ia-11), (Ia-12), (Ia-13), (Ia-14), (Ia-15), (Ia-16), (Ia-17), (Ia-18), (Ia-19), (Ia-20), (Ia-21), (Ia-22), (Ia-23), (Ia-24), (Ib-1), (Ib-2), (Ib-3), (Ib-4), (Ib-5), (Ib-6), (Ib-7), (Ic-1), (Ic-2), (Ic-3), (Ic-4), (Ic-5), 및 (Ic-6)을 갖는 것을 특징으로 하는 화합물
    Figure pct00206

    Figure pct00207

    Figure pct00208

    Figure pct00209

    Figure pct00210

    Figure pct00211

    Figure pct00212

    Figure pct00213

    Figure pct00214

    Figure pct00215

    Figure pct00216

    Figure pct00217

    Figure pct00218

    Figure pct00219

    Figure pct00220

    Figure pct00221

    Figure pct00222

    또는 그의 제약상 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염, 또는 그것의 다형체 결정 구조, 또는 광학 이성질체, 라세미체, 부분 입체 이성질체 또는 거울상 이성질체.
    여기에서 R10, L 및 Q는 제 1 항에서 정의한 바와 같다.
  5. 제 1항에 있어서, 하기 화학식 (Id-1), (Id-2), (Id-3), (Id-4), (Id-5), (Id-6), (Id-7), (Id-8), (Id-9), (Id-10), (Id-11), (Id-12), (Id-13), (Id-14), (Id-15), (Id-16), (Id-17), (Id-18), (Id-19), (Id-20), 및 (Id-21)을 갖는 것을 특징으로 하는 화합물:
    Figure pct00223

    Figure pct00224

    Figure pct00225

    Figure pct00226

    Figure pct00227

    Figure pct00228

    Figure pct00229

    Figure pct00230

    Figure pct00231

    Figure pct00232

    Figure pct00233

    상기식에서 L과 Q는 청구항 1에서 정의된 바와 같고, 이때 R14는 H, PO3 2-, SO3 -, R12, -COR12, -COCH3, -COOR12, -CONR12R12', -C(=O)R12NH(Aa)t, (아미노산 또는 펩타이드, 이때 Aa는 아미노산 또는 폴리펩티드이고, t는 0 내지 100을 나타냄); -CSNHR12 (티오카르바메이트); - SOR12 (술폭시드); -SO2R12 (술폰); -SO3 -, HSO3, HSO2 또는 HSO3 -의 염, SO3 2- 또는 -HSO2 - (아황산염); P(O)(OM1)(OM2), CH2OP(O)(OM1)(OM2), SO3M1; 글리코사이드 (글루코시드, 갈락토사이드, 만노사이드, 글루쿠로노시드, 알로시드, 프룩토시드 등)이고, M1 및 M2는 독립적으로 H, Na, K, Ca, Mg, NH4, NR1'R2'R3'이고; R1', R2' 및 R3'은 독립적으로 H, C1~C8 알킬이다.
  6. 제 1항에 있어서, 하기 화학식 (I-1), (I-2), (I-3), (I-4), (I-5), (I-6), (I-7), (I-8), (I-9), (I-10), (I-11), (I-12), (I-13), (I-14), (I-15), (I-16), (I-17), (I-18), (I-19), (I-20), (I-21), (I-22), (I-23), (I-24), (I-25), (I-26), (I-27), (I-28), (I-29), (I-30), (I-31), (I-32), (I-33), (I-34), (I-35), (I-36), (I-37), (I-38), (I-39), (I-40), (I-41), (I-42), (I-43), (I-44), (I-45), (I-46), (I-47), (I-48), (I-49), (I-50), (I-51), (I-52), (I-53), (I-54), (I-55), (I-56), (I-57), (I-58), (I-69), (I-60), (I-61), (I-62), (I-63), (I-64), (I-65), (I-66), (I-67), (I-68), (I-69), (I-70), (I-71), (I-72), (I-73), (I-74), (I-75), (I-76), (I-77), (I-78), (I-79), (I-80), (I-81), (I-82), (I-83), (I-84), (I-85), (I-86), (I-87), (I-88), (I-89), (I-90), (I-91), (I-92), (I-93), (I-94), (I-95), (I-96) 및 (I-97)을 갖는 것을 특징으로 하는 화합물:
    Figure pct00234

    Figure pct00235

    Figure pct00236

    Figure pct00237

    Figure pct00238

    Figure pct00239

    Figure pct00240

    Figure pct00241

    Figure pct00242

    Figure pct00243

    Figure pct00244

    Figure pct00245

    Figure pct00246

    Figure pct00247

    Figure pct00248

    Figure pct00249

    Figure pct00250

    Figure pct00251

    Figure pct00252

    Figure pct00253

    Figure pct00254

    Figure pct00255

    Figure pct00256

    Figure pct00257

    Figure pct00258

    또는 그의 제약상 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염, 또는 그것의 다형체 결정 구조, 또는 광학 이성질체, 라세미체, 부분 입체 이성질체 또는 거울상 이성질체.
    상기 식에서, Aa, r, n, p, q 및 Q는 제 1 항에서 정의한 바와 같고, PEG는 -(OCH2CH2)r의 화학식을 갖는 폴리에틸렌 글리콜이고, 바람직하게는 Q는 H, 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 시클릭, 시클로헤테로, 할로알킬, 알콕시, 할로알콕시 알킬아미노의 C1~C8; 할로겐; -NO2; -CN; -SH; -SSCH3; -SSAc; -SSAr; -SS-피리딘; -SS-Ar(-NO2); -S-세포 결합제; 또는 NHS 에스테르, 펜타플루오로페닐 에스테르의 작용기; 알킬옥시아민; 알데히드; 케톤; 카르복실산; 히드라진; 아민; 또는 티오락톤; 또는 스트렛처 단위 (Ww) 또는 스페이서 단위 (Tt)를 통해 연결된 세포 결합 제제이며, 이때 W, w, T 및 t는 제 1 항에서와 동일하게 정의된다.
  7. 제 1 항, 제 2 항, 제 3 항, 제 4 항, 제 5 항 또는 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 인돌 단위를 순차적으로 방향족 니트로화시킨 후, 니트로기를 아민으로 환원시킨 후, 생성된 아민 화합물을 반응성 또는 반응가능한 카르복시 기를 갖는 링커로 축합하여 아래에 도시한 바와 같이 아미드 결합을 형성하는 것을 특징으로 하는 화합물.
    Figure pct00259

    식 중에서, R10, L 및 Q는 화학식 I에서 정의된 바와 같고, 여기서 Lv는 OH, 할로겐, NHS (N-하이드록시 숙신이미드), 니트로페놀, 펜탈플루오로페놀로부터 선택된 이탈 기 또는 펩티드 커플링이나 미츠노부 반응으로부터 생성된 중간체이다.
  8. 제 1항에 있어서, 링커 L은 다음으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있는 것을 특징으로 하는 화합물: R12, OR12, OR12O, NHR12, NHR12NH, NR11R12, SR12S, OR12NH, OR12Ar, NHR12Ar, NR11R12NR12'R12", -(CR11R12)p(Aa)r(CR12'R12")q(OCH2CH2)t, -(CR11R12)p(CR12'R12")q(Aa)r(OCH2CH2)t-, -(Aa)r(CR11R12)p(CR12'R12")q-(OCH2CH2)t, -(CR11R12)p(CR12'R12")n(OCH2CH2)t(Aa)r-, -(CR11R12)p(CH=CH)(CR12'R12")q(Aa)r(OCH2CH2)t, -(CR11R12)p(NR12'CO)(Aa)r(CR12'R12")q -(OCH2CH2)t, -(CR11R12)p(Aa)t(NHCO)(CR12'R12")q-(OCH2CH2)r-, (CR11R12)p(OCO)(Aa)r-(CR12'R12")q-(OCH2CH2)t, -(CR11R12)p(OCNR7)(Aa)r(CR12'R12")q(OCH2CH2)t, -(CR11R12)p(CO)-(Aa)r(CR12'R12")q(OCH2CH2)t, -(CR11R12)p(NR11CO)(Aa)r(CR12'R12")q(OCH2CH2)t, -(CR11R12)p-(OCO)(Aa)r(CR12'R12")q-(OCH2CH2)t, -(CR11R12)p(OCNR7)(Aa)r(CR12'R12")q(OCH2CH2)t, -(CR11R12)p(CO)(Aa)r(CR12'R12")q(OCH2CH2)t, -(CR11R12)p-페닐-CO-(Aa)r(CR12'R12")q, -(CR11R12)p-푸릴-CO-(Aa)t(CR12'R12")q, -(CR11R12)p-옥사졸릴-CO-(Aa)r(CR12'R12")q, -(CR11R12)p-티아졸릴-CO(Aa)r(CR12'R12")q, -(CR11R12)p-티에닐-CO-(CR12'R12")q, -(CR11R12)p-이미다졸릴-CO-(CR12'R12")q-, -(CR11R12)p-모르폴리노-CO(Aa)r(CR12'R12")q-, -(CR11R12)p-피페라지노-CO(Aa)r-(CR12'R12")q-, -(CR11R12)p-N-메틸피페라진-CO(Aa)r(CR12'R12")q-, -(CR11R12)p(Aa)r-페닐-, -(CR11R12)p-(Aa)r-푸릴-, -(CR11R12)p-옥사졸릴(Aa)r-, -(CR11R12)p-티아졸릴-(Aa)r-, -(CR11R12)p-티에닐-(Aa)t-, -(CR11R12)p-이미다졸릴(Aa)r-, -(CR11R12)p-모르폴리노-(Aa)r-, -(CR11R12)p-피페라지노-(Aa)r-, -(CR11R12)p-N-메틸피페라지노-(Aa)r-, -K(CR11R12)p-(Aa)r(CR12'R12")q(OCH2CH2)t-,-K(CR11R12)p(CR12'R12")q(Aa)r(OCH2CH2)t-, -K(Aa)r(CR11R12)p(CR12'R12")q-(OCH2CH2)t-, -K(CR11R12)p(CR12'R12")q(OCH2CH2)r(Aa)t, -K(CR11R12)p(CR7=CR8)(CR12'R12")q-(Aa)r(OCH2CH2)t-, -K(CR11R12)p(NR7CO)(Aa)r(CR12'R12")q(OCH2CH2)t, -K(CR11R12)p-(Aa)t(NR7-CO)(CR12'R12")q(OCH2CH2)t, -K(CR11R12)p(OCO)(Aa)r(CR12'R12")q(OCH2CH2)t, -K(CR11R12)p(OCNR7)(Aa)r(CR12'R12")q(OCH2CH2)t-, -K(CR11R12)p(CO)(Aa)r(CR12’R12")q(OCH2CH2)t, -K(-CR11R12)p(NR11CO)(Aa)r(CR12'R12")q(OCH2CH2)t, -K(CR11R12)p(OCO)(Aa)r(CR12'R12")q(OCH2CH2)t, -K(CR11R12)p(OCNR7)(Aa)r(CR12'R12")q(OCH2CH2)t,-K(CR11R12)p(CO)(Aa)r(CR12'R12")q(OCH2CH2)rQ, -K(CR11R12)p-페닐-CO-(Aa)r(CR12'R12")q-, -K(CR11R12)p-푸릴-CO(Aa)t-(CR12'R12")q, -K(CR11R12)p-옥사졸릴-CO(Aa)r(CR12'R12")q-, -K(CR11R12)p-티아졸릴-CO(Aa)r-(CR12'R12")q, -K(CR11R12)p-티에닐-CO(CR12'R12")q -, -K(CR11R12)p-이미다졸릴-CO-(CR12'R12")q, -K(CR11R12)p-모르폴리노-CO(Aa)t(CR12'R12")q-, -K(CR11R12)p-피페라지노-CO-(Aa)r(CR12'R12")q-, -K(CR11R12)p-N-메틸피페라진-CO(Aa)r-(CR12'R12")q, -K(CR11R12)p-(Aa)r-페닐-, -K(CR11R12)m-(Aa)r-푸릴-, -K(CR11R12)p-옥사졸릴(Aa)r-, -K(CR11R12)m-티아졸릴-(Aa)r-, -K(CR11R12)p-티에닐-(Aa)r, -K(CR11R12)p-이미다졸릴(Aa)r-, -K(CR11R12)m-모르폴리노-(Aa)r, -K(CR11R12)p-피페라지노-(Aa)t-,-K(CR11R12)mN-메틸피페라지노-(Aa)r.
    상기식에서 K는 Ar 또는 헤테로고리의 NR12, O, S, Se, B, C3~C10이고; 여기서, Aa, r, n, p, q, t, R7, R11, R12, R12', R12"는 제 1 항에서 정의한 바와 같다.
  9. 제 1항에 있어서, 하기 화학식 (II-1) 내지 (II-91)을 갖는 것을 특징으로 하는 화합물.
    Figure pct00260

    Figure pct00261

    Figure pct00262

    Figure pct00263

    Figure pct00264

    Figure pct00265

    Figure pct00266

    Figure pct00267

    Figure pct00268

    Figure pct00269

    Figure pct00270

    Figure pct00271

    Figure pct00272

    Figure pct00273

    Figure pct00274

    Figure pct00275

    Figure pct00276

    Figure pct00277

    Figure pct00278

    Figure pct00279

    Figure pct00280

    Figure pct00281

    여기서, Aa, L, m, n, p, Q, r, R1 및 R2는 제 1 항에 기술되어 있고, CBA는 세포 결합제/분자이다.
  10. 제 1 항, 제 2 항, 제 3 항, 제 4 항, 제 5 항, 제 6 항 또는 제 8 항 중 어느 한 항에 따른 세포 결합제 (CBA)가 전장 항체 (폴리클로날 및 모노클로날 항체); 단일 사슬 항체; 다이아바디(diabody), 트리아바디(triabody), 항체의 단편 (Fab, Fab', F(ab')2, Fv, Fab 발현 라이브러리에 의해 생성된 단편, 항-이디오 타입(항-Id) 항체, CDR's, 및 암 세포 항원, 바이러스 항원 또는 미생물 항원에 면역특이적으로 결합하는 상기 중 어느 것의 에피토프-결합 단편; 인터페론(유형 I, II, III); 펩티드; 림포카인 IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, GM-CSF, 인터페론-감마(IFN-γ); 호르몬, 인슐린, TRH(티로트로핀 방출 호르몬), MSH(멜라닌세포-자극 호르몬), 스테로이드 호르몬, 안드로겐, 에스트로겐, 멜라닌세포-자극 호르몬(MSH); 성장 인자 및 콜로니 자극 인자, 표피 성장 인자(EGF), 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자(GM-CSF), 형질 전환 성장 인자(TGF), TGFα, TGFβ; 인슐린 및 인슐린 유사 성장 인자(IGF-I, IGF-II) G-CSF, M-CSF 및 GM-CSF; 백시니아 성장 인자(VGF); 섬유 아세포 성장 인자(FGF); 보다 작은 분자량의 단백질, 폴리-펩티드, 펩티드 및 펩티드 호르몬, 봄베신, 가스트린, 가스트린-방출 펩타이드; 혈소판-유래 성장 인자; 인터류킨 및 사이토카인, 인터루킨-2(IL-2), 인터루킨-6(IL-6), 백혈병 억제 인자, 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자 (GM-CSF); 비타민, 엽산; 아포프로테인(apoprotein) 및 라이코프로테이스(lycoproteis); 트랜스페린; 당-결합 단백질 또는 지질단백질, 렉틴; 세포 영양분-수송 분자(트랜스페린); 및 작은 분자 억제제, 전립선-특이성 막 항원(PSMA) 억제제 및 작은 분자 티로신 키나아제 억제제(TKI); 펩티드, 또는 펩티드 유사체, 표적화된 세포에 결합할 수 있는 접합된 단백질을 포함하는 단백질; 생체 활성 중합체, 생체 활성 덴드리머, 나노 입자, 리포솜 또는 바이러스 캡시드의 형태인 비-펩티드 또는 임의의 다른 세포 결합 분자 또는 물질 인 것을 특징으로 하는 세포 결합제(CBA).
  11. 제 1 항, 제 2 항, 제 3 항, 제 4 항, 제 5 항, 제 6 항 또는 제 9 항 중 어느 한 항에 따른 링커 L은
    6-말레이미도카프로일("MC"), 말레이미도프로파노일("MP"), 발린-시트룰린 ("val-cit" 또는 "vc"), 알라닌-페닐알라닌 ("ala-phe" 또는 "af"), 글리신-글리신, 최대 6개의 동일하거나 다른 아미노산을 함유하는 천연 펩타이드(디펩타이드, 트리펩타이드, 테트라펩타이드, 펜타펩티드, 헥사펩타이드), p-아미노벤질옥시카보닐("PAB"), N-숙신이미딜 4-(2-피리딜티오)펜타노에이트("SPP"), N-숙신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1 카복실레이트("SMCC"), N-숙신이미딜 (4-요오도-아세틸)아미노벤조에이트("SIAB"), 에틸렌옥시(--CH2CH2O--) 중 한가지 이상의 링커 성분들로 하나 또는 100 이하의 반복 단위 ("EO" 또는 "PEO")로 구성되거나, 또는 아래에 도시되는 한가지 이상의 성분들로 구성될 수 있는 것을 특징으로 하는 링커 L.
    Figure pct00282

    상기 식에서, R10은 상기 화학식 I에서 정의된 바와 같고, 상기 식에서, R15, R16 및 R17은 -C1~C8 알킬 또는 알킬렌-, --C1~C7 카보시클로, -O-(C1~C8 알킬)-, -NH-(C1~C8 알킬)-, -아릴렌-, -C1~C8 알킬렌-아릴렌-, -아릴렌, -C1~C8 알킬렌-, -C1~C8 알킬렌-(C1~C8 카보시클로)-, -(C3~C7 카보시클로)-C1~C8 알킬렌-, -C3~C8 헤테로시클로-, -C1~C8 알킬렌-(C3~C8 헤테로시클로)-, -(C3~C8 헤테로시클로)-C1~C9 알킬렌-, -(CH2CH2O)k-, -(CH(CH3)CH2O)k- 및 -(CH2CH2O)k-CH2- 로부터 독립적으로 선택되고; k는 1 내지 50 범위의 정수이고; X''', Y''' 및 Z '''는 NH, O 또는 S로부터 독립적으로 선택된다.
  12. 제 1 항, 제 2 항, 제 3 항, 제 4 항, 제 5 항, 제 6 항 또는 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서, 그것이 IgG 항체의 한쌍의 티올에 대해 브릿지 링커를 통해 IgG 항체에 접합될 때, 경쇄와 중쇄 사이의 (디설파이드 결합의 환원을 통해) 및/또는 2 개의 중쇄 사이의 상부 다이설파이드 결합, 및/또는 2 개의 중쇄 사이의 하부 다이설파이드 결합을 통해서, 한 쌍의 티올에서 특이적으로 브릿지 링커를 통해 컨쥬게이팅되며, 다음의 식 (III-1), (III-2), (III-3), (III-4), (III-5), (III-6), (III-7), (III-8), (III-9), (III-10), (III-11) 또는 (III-12)의 특정 컨쥬게이션 구조 중 어느 하나를 갖는 것이 바람직한 것을 특징으로 하는 화합물.
    Figure pct00283

    Figure pct00284

    Figure pct00285

    Figure pct00286

    Figure pct00287

    Figure pct00288

    상기식에서 굵고 진한 구조
    Figure pct00289
    는 IgG 항체, 바람직하게는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 항체이며; "" 는 단일 결합 또는 이중 결합을 나타내며; L1 및 L2는 같거나 다른 것으로, 청구항 1항에서의 L과 동일하게 독립적으로 정의되며; X1 및 X2는 NH, N(R1), O, S, CH2 또는 Ar으로부터 독립적으로 선택되며, 이때 R1은 C1-C6 알킬이고, Ar은 방향족 또는 헤테로 방향족 고리이고; 이때 Drug1 및 Drug2는 동일하거나 상이한, 청구항 1항, 2항, 3항, 4항, 5항 또는 6항 중 어느 한가지의 아마니타 독소 유도체이고; 또한, Drug1 또는 Drug2 중 하나는 부재할 수 있지만, 동시에 부재할 수는 없고, Drug1 또는 Drug2 중 임의의 단일 하나가 청구항 1항, 2항, 3항, 4항, 5항 또는 6항 중 어느 하나의 아마니타 독소의 유도체인 경우, Drug1 또는 Drug2 중 다른 하나는 (OCH2CH2)rOR10, 또는 (OCH2CH(CH3))pOR10, 또는 NH(CH2CH2O)pR10, 또는 NH(CH2CH(CH3)O)pR10, 또는 N[(CH2CH2O)pR10][(CH2CH2O)rR5], 또는 (OCH2CH2)pCOOR10, 또는 CH2CH2(OCH2CH2)pCOOR10 중에서 선택될 수 있으며, 여기에서 p, r, R10은 청구항 1항에 기재된 것과 동일하고, 추가적으로, Drug1 이 존재하는 경우, Drug2 및 L2 둘다 부재할 수 있으며, 따라서 X2는 NH2 또는 OH이다.
  13. 제 1 항, 제 2 항, 제 3 항, 제 4 항, 제 5 항, 제 6 항 또는 제 9 항 중 어느 한 항에 기재된 한 화합물을 브릿지 링커를 통해 IgG 항체에 결합시킨 경우, 제 1 항, 제 2 항, 제 3 항, 제 4 항, 제 5 항, 제 6 항 또는 제 9 항 중 어느 한 항에 따르는 컨쥬게이트 화합물이 다음의 (IV-1), IV-2), (IV-3), (IV-4), (IV-5) 및 (IV-6)의 연결 구조 중 임의의 하나를 갖는 것이 바람직한 것을 특징으로 하는 컨쥬게이트 화합물.
    Figure pct00291

    여기에서 "
    Figure pct00292
    "는 단일 결합 또는 이중 결합을 나타내고; 약물(Drug)은 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic) 또는 (Id)의 아마니타 독소의 유도체이며;
    Figure pct00293
    는 항체 위의 부위를 나타내고; L, X, n 및 R12는 화학식 (I)에서 정의된 바와 동일하다.
  14. 청구항 제 12항 또는 청구항 제 13항에 따르는 티올의 쌍이,
    디티오트레이톨(DTT), 디티오에리트리올(DTE), L- 글루타티온(GSH), 트리스(2-카르복시에틸)포스핀(TCEP), 2-메르캅토에틸아민(β-MEA) 및/또는 베타 메르캅토에탄올(β-ME, 2-ME)로부터 선택된 한가지 이상의 환원제에 의해 환원되는 것이 바람직하며, 바람직하게는, 이들 환원제는 고체 중합체 또는 고체 입자에 로딩되거나 공유 결합되고, 중합체 또는 입자는 폴리에틸렌, 폴리아크릴레이트, 실리칸, 교차-결합 실리카(2-메르캅토에틸)실리카, (아미노에틸)실리카, (아미노프로필)실리카, 폴리에틸렌 테레프탈레이트, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리스티렌, 폴리 (이소프로필 아크릴레이트), 덱스트란(세파덱스, 가교 결합된 덱스트란), 이소프로필아크릴아미드 부틸 메타크릴레이트 공중합체, 다당류 중합체(아가로스, 한천, 아가로펙틴, 세파로스)중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 티올의 쌍.
  15. 제 12항에 있어서, 다음을 특징으로 하는 컨쥬게이트 화합물.
    화학식 (III-1), (III-2), (III-3), (III-4), (III-5), (III-6), (III-9), (III-10), (III-11) 또는 (III-12)의 Drug1 또는 Drug2 중 어느 단일 하나가 청구항 제 1항, 2항, 3항, 4항, 5항, 6항, 또는 9항 중 어느 하나의 아마니타 독소의 유도체이고, Drug1 또는 Drug2 중 다른 하나는 단백질, 항체(단일클론 항체 또는 다클론 항체, 항체 다이머, 항체 다합체, 이중 특이적 또는 삼 특이적 항체, 단일쇄 항체, 표적 세포에 결합하는 항체 단편), 발색단 분자, 튜뷸리신 유도체, 메이탄시노이드, 탁사노이드(탁산), CC-1065 유사체, 다우노루비신 또는 독소루비신 화합물, 벤조디아제핀 다이머(예: 피롤로벤조디아제핀(PBD)의 다이머, 토메이마이신, 안트라 마이신, 인돌리노벤조디아제핀, 이미다조 벤조티아디아제핀 또는 옥사졸리디노벤조디아제핀), 칼리케아미신, 돌라스타틴(dolastatins) 또는 어리스타틴 유도체(모노메틸 아우리스타틴 E, MMAE, MMAF, 아우리스타틴 PYE, 아우리스타틴 TP, 아우리스타틴 2-AQ, 6-AQ, EB(AEB) 및 EFP(AEFP)), 듀오카르마이신, siRNA, 또는 효소로부터 선택될 수 있으며,
    이들 기능 분자 또는 세포독성 약물 중 일부의 바람직한 구조는 아래에 도시된다:
    Figure pct00294

    Figure pct00295

    Figure pct00296

    Figure pct00297

    Figure pct00298

    Figure pct00299

    여기에서 R10은 청구항 제 1 항에 기재되어 있고,
    Figure pct00300
    는 청구항 제 11 항의 링커 L1 또는 링커 L2 중 어느 하나를 연결하기 위한 부위이다.
  16. 치료학적 유효량의 청구항 제 1 항, 제 2 항, 제 3 항, 제 4 항, 제 5 항, 제 6 항, 제 9 항, 제 12 항, 제 13 항, 제 14 항 또는 제 15 항 중 어느 한 항의 화합물과,
    0.002 % ~ 1 %의 폴리소르베이트(폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60 또는 폴리소르베이트 80) 또는 나트륨 라우릴 술페이트, 트리톤 X-100 중의 한가지 이상의 성분들로부터 선택된 제약상 허용되는 부형제;
    및/또는 0.01 % ~ 10 %의 결합제(이당류: 자당, 락토오스, 트레할로스 또는 말토스; 또는 당 알코올: 자일리톨, 소르비톨 또는 말티톨, 또는 폴리에틸렌 글리콜)
    및 pH 4.5 ~ 9.5 범위의 특정 pH에 있는 0.01 % ~ 10 %의 약학적 완충제 (구연산염, 석시네이트 아세테이트, 포스페이트 또는 보레이트 중에서 선택됨)를 포함하는 약제학적 조성물.
  17. 제 1 항, 제 2 항, 제 3 항, 제 4 항, 제 5 항, 제 6 항, 제 9 항, 제 12 항, 제 13 항, 제 14 항, 제 15 항 또는 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서,
    비정상적인 세포 성장을 억제하거나
    암, 양성 또는 악성 종양; 백혈병 및 림프계 악성 종양; 신경 세포, 신경교, 성상 세포(별아교세포), 시상 하부, 선상, 대식 세포, 상피 세포, 간질 세포, 배반 세포, 혈관 신생 및 면역학적 장애; 염증성; 자가 면역 질환; 파괴적인 장애; 뼈 장애; 감염성 질병; 바이러스성 질환; 섬유성 질환; 신경 변성 장애; 췌장염 또는 신장병;을 포함하는 증식성 장애를 치료하기 위해 사용되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  18. 제 16 항에 있어서, 암, 자가 면역 질환 또는 전염성 질병의, 상승 작용에 의해 효과적인 치료 또는 예방을 위하여, 임상의 공지된 화학요법제, 방사선 요법, 면역요법제, 자가 면역 장애 제제, 항감염제 또는 다른 접합체의 한가지 이상의 시너지 약물을 포함하는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
  19. 제 1 항, 제 2 항, 제 3 항, 제 4 항, 제 5 항, 제 6 항, 제 9 항, 제 12 항, 제 13 항, 제 14 항 또는 제 15 항 중 어느 한 항에 따르는 세포 결합제(CBA)가 더욱 바람직하게는 항체, 항체 단편, 다이아바디, 트리아바디, 표피 성장 인자(EGF), 전립선 특이성 막 항원(PSMA) 억제제, 멜라닌 세포 자극 호르몬(MSH), 갑상선 자극 호르몬(TSH), 폴리클로날 항체, 소마토스타틴, 엽산, 매트립타제 억제제, 에스트로겐, 에스트로겐 유사체, 디자인된 안키린 반복 단백질(DARPins), 안드로겐 및 안드로겐 유사체인 것을 특징으로 하는 세포 결합제(CBA).
  20. 제 1 항, 제 2 항, 제 3 항, 제 4 항, 제 5 항, 제 6 항, 제 9 항, 제 12 항, 제 13 항, 제 14 항, 제 15 항 또는 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서,
    더 바람직하게는 표적 세포가 다음 중에서 선택된 것을 특징으로 하는 화합물.
    종양 세포; 바이러스 감염 세포; 미생물 감염 세포; 기생충 감염 세포; 자가 면역 세포; 활성화된 세포; 골수 세포; 활성화된 T 세포, B 세포 또는 멜라닌 세포; 또는 CD3, CD4, CD5, CD6, CD7, CD8, CD9, CD10, CD11a, CD11b, CD11c, CD12w, CD14, CD15, CD16, CDw17, CD18, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD25, CD26, CD27, CD28, CD29, CD30, CD31, CD32, CD33, CD34, CD35, CD36, CD37, CD38, CD39, CD40, CD41, CD42, CD43, CD44, CD45, CD46, CD47, CD48, CD49b, CD49c, CD51, CD52, CD53, CD54, CD55, CD56, CD58, CD59, CD61, CD62E, CD62L, CD62P, CD63, CD66, CD68, CD69, CD70, CD72, CD74, CD79, CD79a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CD86, CD87, CD88, CD89, CD90, CD91, CD95, CD96, CD98, CD100, CD103, CD105, CD106, CD109, CD117, CD120, CD125, CD126, CD127, CD133, CD134, CD135, CD137, CD138, CD141, CD142, CD143, CD144, CD147, CD151, CD147, CD152, CD154, CD156, CD158, CD163, CD166, CD168, CD174, CD180, CD184, CDw186, CD194, CD195, CD200, CD200a, CD200b, CD209, CD221, CD227, CD235a, CD240, CD262, CD271, CD274, CD276 (B7-H3), CD303, CD304, CD309, CD326, 4-1BB, 5AC, 5T4 (Trophoblast 당 단백질, TPBG, 5T4, Wnt- 활성화 저해 인자 1 또는 WAIF1), 선암 항원, AGS-5, AGS-22M6, 액티빈 수용체-유사 키나아제 1, AFP, AKAP-4, ALK, 알파 인터그린, 알파 v 베타 6, 아미노-펩티다제 N, 아밀로이드 베타, 안드로겐 수용체, 안지오포이에틴 2, 안지오포이에틴 3, 안넥신 A1, 탄저 독소 방어 항원, 항 - 트랜스페린 수용체, AOC3 (VAP-1), B7-H3, Bacillus anthracis 탄저병, BAFF (B 세포 활성화 인자), BCMA, B- 림프종 세포, bcr-abl, Bombesin, BORIS, C5, C242 항원, CA125 (탄수화물 항원 125, MUC16), CA-IX (또는 CAIX, 탄산 탈수 효소 9), CALLA, CanAg, Canis lupus familiaris IL31, 탄산 탈수 효소 IX, 심장 미오신, CCL11 (C-C 모티프 케모카인 11), CCR4 (C-C 케모킨 수용체 유형 4, CD194), CCR5, CD3E (엡실론), CEA (암배아(Carcinoembryonic) 항원), CEACAM3, CEACAM5 (암배아 항원), CFD (Factor D), Ch4D5, 콜레시스토키닌 2 (CCK2R), CLDN18 (클라우딘 -18), 응집 인자 A, cMet, CRIPTO, FCSF1R (콜로니 자극 인자 1 수용체, CD115), CSF2 (콜로니 자극 인자 2, 과립구 - 대식세포 콜로니 - 자극 인자 (GM-CSF)), CSP4, CTLA4 (세포 독성 T- 림프구 - 관련 단백질 4), CTAA16.88 종양 항원, CXCR4 (CD184), C-X-C 케모카인 수용체 유형 4, 환형 ADP 리보스 가수 분해 효소, 사이클린 B1, CYP1B1, 사이토 메갈로 바이러스, 사이토 메갈로 바이러스 당 단백질 B, Dabigatran, DLL4 (델타 - 유사 - 리간드 4), DPP4 (디펩티딜 - 펩 티다제 4), DR5 (죽음 수용체 5), 대장균 시가 독소 타입 -1, 대장균(E. coli) 시가 독소 타입 -2, ED-B, EGFL7 (EGF 유사 도메인 함유 단백질 7), EGFR, EGFRII, EGFRvIII, 엔도그린 (Endoglin) (CD105), 엔도텔린 B 수용체, 내독소, EpCAM (상피 세포 부착 분자), EphA2, Episialin, ERBB2 (표피 성장 인자 수용체 2), ERBB3, ERG (TMPRSS2 ETS 융합 유전자), Escherichia coli, ETV6-AML, FAP (섬유 아세포 활성화 단백질 알파), FCGR1, 알파 - 페토프로테인, 피브린 II, 베타 사슬, 피브로넥틴 여분 도메인 -B, FOLR (엽산 수용체), 엽산 수용체 알파, 엽산 가수 분해 효소, 호흡기 세포 융합 바이러스의 Fos 관련 항원 1F 단백질, Frizzled 수용체, 푸코실 GM1, GD2 강글리오사이드, G-28 (세포 표면 항원 glyvolipid), GD3 이디오 타입, GloboH, Glypican 3, N- 글리콜릴뉴라민산, GM3, GMCSF 수용체 α-쇄, 성장 분화 인자 8, GP100, GPNMB (트랜스-멤브레인 글리코단백질 NMB), GUCY2C (구아닐레이트 시클라아제 2C, 구아닐린 시클라제 C (GC-C), 장내 구아닐레이트 시클라제, 구아닐산 시클라제 -C 수용체, 열 안정성 장 독소 수용체 (hSTAR)), 열 충격 단백질, 헤마글루티닌, B 형 간염 표면 항원, B 형 간염 바이러스, HER1 (인간 상피 성장 인자 수용체 1), HER2, HER2 / neu, HER3 (ERBB-3), IgG4, HGF / SF (간세포 성장 인자 / 산란 인자), HHGFR, HIV-1, 히스톤 (Histone) 복합체, HLA-DR (인간 백혈구 항원), HLA-DR10, HLA-DRB, HMWMAA, 인간 융모막 성선 자극 호르몬, HNGF, 인간 산란 인자 수용체 키나아제, HPV E6 / E7, Hsp90, hTERT, ICAM-1 (세포간 부착 분자 1), 이디오 타입, IGF1R (IGF-1, 인슐린 유사 성장 인자 1 수용체), IGHE, IFN-γ, 인플루엔자 헤마글루티닌, IgE, IgE Fc 영역, IGHE, IL-1, IL-2 수용체 (인터루킨 2 수용체), IL-4, IL-5, IL-6, IL-6R (인터루킨 6 수용체), IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-17, IL-17A, IL-20, IL-22, IL-23, IL31RA, ILGF2 (인슐린 유사 성장 인자 2), 인테그린 (α4, αIIbβ3, αvβ3, α4β7, α5β1, α6β4, α7β7, α11β3, α5β5, αvβ5), 인터페론 감마 - 유도 단백질, ITGA2, ITGB2, KIR2D, Kappa Ig, LCK, Le, Legumain, Lewis-Y 항원, LFA-1 (림프구 기능 관련 항원 1, CD11a), LHRH, LINGO-1, 리포테이코산, LIV1A, LMP2, LAD, MAD-CT-1, MAD-CT-2, MAGE-1, MAGE-2, MAGE-3, MAGE A1, MAGE A3, MAGE 4, MART1, MCP-1, MIF (대식세포 이동 저해 인자 또는 글리코실화 억제 인자 (GIF)), MS4A1 (멤브레인 스패닝 4- 도메인 서브 패밀리 A 멤버 1), MSLN (메소테린), MUC1 (뮤신 1, 세포 표면 연합 (MUC1) 또는 다형성 상피 뮤신 (PEM)), MUC1-KLH, MUC16 (CA125), MCP1 (단핵구 화학 주성 단백질 1), MelanA / MART1, ML-IAP, MPG, MS4A1 (멤브레인 스패닝 4- 도메인 서브 패밀리 A), MYCN, Myelin 관련 당 단백질, Myostatin, NA17, NARP-1, NCA-90 (과립구 항원), Nectin-4 (ASG-22ME), NGF, 신경세포 사멸 조절 단백질 분해 효소 1, NOGO-A, Notch 수용체, Nucleolin, Neu 종양유전자 제품, NY-BR-1, NY-ESO-1, OX-40, OxLDL (산화된 저밀도 지방단백질), OY-TES1, P21, p53 비 돌연변이, P97, Page4, PAP, 안티-(N-글리콜릴뉴라민산)의 파라토프, PAX3, PAX5, PCSK9, PDCD1 (PD-1, 프로그램된 세포 사멸 단백질 1, CD279), PDGF-Rα (알파 형 혈소판 유래 성장 인자 수용체), PDGFR-β, PDL-1, PLAC1, PLAP-유사 고환(정소) 알칼리성 포스파타제, 혈소판-유래 성장 인자 수용체 베타, 인산염-나트륨 공-수송 체, PMEL 17, 폴리시알 산, Proteinase3 (PR1), 전립선 암종, PS (포스파티딜세린), 전립선 암종 세포, Pseudomonas aeruginosa, PSMA, PSA, PSCA, 광견병 바이러스 당 단백질, RHD (Rh 폴리펩티드 1 (RhPI), CD240), Rhesus factor, RANKL, RhoC, Ras 돌연변이체, RGS5, ROBO4, 호흡기 융합 바이러스, RON, ROR1, 육종 전좌 중단 점, SART3, Sclerostin, SLAMF7 (SLAM 패밀리 7), Selectin P, SDC1 (Syndecan 1), sLe (a), Somatomedin C, SIP (스핑고신-1- 인산염), 소마토스타틴, 정자 단백질 17, SSX2, STEAP1 (전립선 1의 6-막관통성 상피 항원), STEAP2, STN, TAG-72 (종양 관련 당 단백질 72), Survivin, T 세포 수용체, T 세포 막관통성 단백질, TEM1 (종양 내피 표지자 1), TENB2, Tenascin C (TN-C), TGF-α, TGF-β (형질 전환 성장 인자 베타), TGF-β1, TGF-β2 (형질 전환 성장 인자 -β2), Tie (CD202b), Tie2, TIM-1 (CDX-014), Tn, TNF, TNF-α, TNFRSF8, TNFRSF10B (종양 괴사 인자 수용체 슈퍼 패밀리 멤버 10B), TNFRSF-13B (종양 괴사 인자 수용체 슈퍼 패밀리 멤버 13B), TPBG (영양막 글리코단백질), TRAIL-R1 (종양 괴사 세포자멸사 유도 리간드 수용체 1), TRAILR2 (죽음 수용체 5 (DR5)), 종양 관련 칼슘 신호 변환기 2, MUC1의 종양특이적 글리코실화, TWEAK 수용체, TYRP1 (당 단백질 75), TRP-2, Tyrosinase, VCAM-1 (CD106), VEGF, VEGF-A, VEGF-2 (CD309), VEGFR-1, VEGFR2, 또는 비멘틴, WT1, XAGE 1의 항원을 발현하는 세포
    또는 임의의 인슐린 성장 인자 수용체, 또는 임의의 표피 성장 인자 수용체를 발현하는 세포.
  21. 제 16 항 또는 제 18 항에 있어서, 암, 자가 면역 질환, 전염성 질환 또는 바이러스성 질환의 치료를 위하여 시험관 내, 생체 내 또는 생체 외에서 적용되는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
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