KR20180086268A

KR20180086268A - 항-N3pGlu 아밀로이드 베타 펩티드 항체 및 그의 용도

Info

Publication number: KR20180086268A
Application number: KR1020187019854A
Authority: KR
Inventors: 로날드 브래들리 데마토스; 지롱 류; 잉 탕
Original assignee: 일라이 릴리 앤드 캄파니
Priority date: 2016-01-15
Filing date: 2017-01-10
Publication date: 2018-07-30
Also published as: TW201739761A; US9944696B2; IL259748B2; KR102141969B1; IL259748A; AU2017207250A1; AU2017207250B2; CN108473566A; EA201891286A1; CA3007000C; CA3007000A1; EP3402817B1; ZA201901207B; JP2019507107A; EP3402817A1; JP6634158B2; CN114891100A; BR112018011308A2; TWI634126B; US20170204171A1

Abstract

인간 N3pGlu Aβ에 대한 항체, 그러한 N3pGlu Aβ 항체를 포함하는 조성물 및 임상 또는 전-임상 알츠하이머 병, 다운 증후군 및 임상 또는 전-임상 대뇌 아밀로이드 혈관병증을 포함하는 Aβ의 침착을 특징으로 하는 질병의 치료를 위한 그러한 N3pGlu Aβ 항체의 사용 방법.

Description

항-N3pGlu 아밀로이드 베타 펩티드 항체 및 그의 용도

본 발명은 N3pGlu 아밀로이드 베타 펩티드에 결합하는 항체 및 아밀로이드 베타 (본원에서 Aβ 또는 A베타로 지칭됨) 펩티드에 관련된 질병의 치료에서의 그의 용도에 관한 것이다.

아밀로이드 전구체 단백질의 절단은 크기가 38 내지 43 아미노산 범위인 Aβ 펩티드를 생성한다. Aβ의 가용성에서 높은 베타-시트 함량을 갖는 불용성 형태로의 전환 및 뇌에서 신경염성(neuritic) 및 뇌혈관성 플라크로서의 이러한 불용성 형태의 침착은 알츠하이머 병 (AD), 다운 증후군, 및 대뇌 아밀로이드 혈관병증 (CAA)을 포함하는 다수의 질환 및 질병과 관련되어 왔다.

플라크에서 발견되는 침착물은 Aβ 펩티드의 불균일 혼합물로 구성된다. N3pGlu Aβ는 N3pE, pE3-42, 또는 Aβ_p3-42로도 불리며 Aβ 펩티드의 말단절단된(truncated) 형태이고 플라크에서만 발견된다. N3pGlu Aβ는 인간 Aβ의 N-말단에 있는 처음 두 아미노산 잔기가 없으며 세 번째 아미노산 위치에 글루탐산으로부터 유래된 피로글루타메이트를 갖는다. N3pGlu Aβ 펩티드가 뇌에서 침착된 Aβ의 작은 구성성분임에도 불구하고, 연구는 N3pGlu Aβ 펩티드가 공격적인 응집 특성을 가지며 침착 캐스케이드에서 초기에 축적된다는 것을 입증하였다.

N3pGlu Aβ에 대한 항체는 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 미국 특허 제8,679,498호는 인간 N3pGlu Aβ 항체 (예컨대, B12L) 및 상기 항체로 알츠하이머 병과 같은 질병을 치료하는 방법을 개시한다. 그러나, 높은 친화성, 개선된 열안정성, 감소된 비-특이적 결합, 및 더 낮은 수준의 면역 원성을 갖는 N3pGlu Aβ 항체에 대한 필요성이 여전히 남아있다. 그러한 N3pGlu Aβ 항체는 더 나은 투여 계획을 위한 약동학과 함께 잠재적인 인간 치료제에 대한 개선된 안전성 프로파일을 제공할 것이다.

본 발명의 범위 내의 항체는 이러한 바람직한 특징을 갖는다. 본 발명은 인간 N3pGlu Aβ에 결합하는 항체를 제공하며, 여기서 상기 항체는 서열식별번호(SEQ ID NO): 9 또는 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 (LCVR), 및 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 인간 N3pGlu Aβ에 결합하는 항체를 제공하며, 여기서 상기 항체는 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함한다. 또다른 특정 실시양태에서, 본 발명은 인간 N3pGlu Aβ에 결합하는 항체를 제공하며, 여기서 상기 항체는 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함한다.

일 실시양태에서, 본 발명은 경쇄 (LC) 및 중쇄 (HC)를 포함하는 인간 N3pGlu Aβ에 결합하는 항체를 제공하며, 여기서 LC의 아미노산 서열은 서열식별번호:12 또는 13의 아미노산 서열이고, HC의 아미노산 서열은 서열식별번호:11의 아미노산 서열이다. 보다 특정한 실시양태에서, 본 발명은 경쇄 (LC) 및 중쇄 (HC)를 포함하는 인간 N3pGlu Aβ에 결합하는 항체를 제공하며, 여기서 LC의 아미노산 서열은 서열식별번호:12의 아미노산 서열이고, HC의 아미노산 서열은 서열식별번호:11의 아미노산 서열이다. 또다른 특정 실시양태에서, 본 발명은 경쇄 (LC) 및 중쇄 (HC)를 포함하는 인간 N3pGlu Aβ에 결합하는 항체를 제공하며, LC의 아미노산 서열은 서열식별번호:13의 아미노산 서열이고, HC의 아미노산 서열은 서열식별번호:11의 아미노산 서열이다. 추가의 실시양태에서, 본 발명은 2 개의 LC 및 2 개의 HC를 포함하는 항체를 제공하며, 여기서 각 LC의 아미노산 서열은 서열식별번호:12 또는 13이고 각 HC의 아미노산 서열은 서열식별번호:11이다. 보다 특정한 실시양태에서, 본 발명은 2 개의 LC 및 2 개의 HC를 포함하는 항체를 제공하며, 각 LC의 아미노산 서열은 서열식별번호:12이고, 각 HC의 아미노산 서열은 서열식별번호:11이다. 보다 특정한 실시양태에서, 본 발명은 2 개의 LC 및 2 개의 HC를 포함하는 항체를 제공하며, 각 LC의 아미노산 서열은 서열식별번호:13이고, 각 HC의 아미노산 서열은 서열식별번호:11이다.

본 발명은 또한 LCVR 및 HCVR을 포함하는 N3pGlu Aβ 항체를 제공하며, 여기서 상기 LCVR은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 여기서 상기 HCVR은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, 여기서 상기 CDR의 아미노산 서열은 LCDR1에 대해서는 서열식별번호:4, LCDR2에 대해서는 서열식별번호:6, LCDR3에 대해서는 서열식별번호:7, HCDR1에 대해서는 서열식별번호:1, HCDR2에 대해서는 서열식별번호:2 및 HCDR3에 대해서는 서열식별번호:3이다.

본 발명은 본 발명의 항체 및 하나 이상의 제약상 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 추가로 제공한다. 또한, 본 발명은 본 발명의 제약 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 Aβ의 침착을 특징으로 하는 질병을 치료하는 방법을 제공한다. 특히, 본 발명은 유효량의 본 발명의 항체를 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 임상 또는 전-임상 알츠하이머 병, 다운 증후군, 및 임상 또는 전-임상 CAA를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 보다 구체적으로, 본 발명은 본 발명의 제약 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 전구성(prodromal) AD (때로는 Aβ관련 경도 인지 장애, 또는 MCI로 지칭됨), 경도 AD, 중등도 AD 및 중증 AD로부터 선택되는 질환을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.

또다른 실시양태에서, 본 발명은 본 발명의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 전-임상 알츠하이머 병 또는 임상 알츠하이머 병으로 진단된 환자의 인지기능 감퇴를 지연시키는 방법을 제공한다. 보다 구체적으로, 본 발명은 본 발명의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 전구성 AD, 경도 AD, 중등도 AD 및 중증 AD로부터 선택되는 질환으로 진단된 환자의 인지기능 감퇴를 지연시키는 방법을 추가로 제공한다.

또다른 실시양태에서, 본 발명은 본 발명의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 전-임상 알츠하이머 병 또는 임상 알츠하이머 병으로 진단된 환자의 기능 저하를 지연시키는 방법을 제공한다. 보다 구체적으로, 본 발명은 본 발명의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 전구성 AD, 경도 AD, 중등도 AD 및 중증 AD로부터 선택되는 질환으로 진단된 환자의 기능 저하를 지연시키는 방법을 제공한다.

또다른 실시양태에서, 본 발명은 본 발명의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 전-임상 또는 임상 알츠하이머 병으로 진단된 환자에서 뇌 Aβ 아밀로이드 플라크 부하를 감소시키는 방법을 제공한다. 보다 구체적으로, 본 발명은 본 발명의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 전구성 AD, 경도 AD, 중등도 AD 및 중증 AD로부터 선택되는 질환으로 진단된 환자에서 뇌 Aβ 아밀로이드 플라크 부하를 감소시키는 방법을 제공한다.

또다른 실시양태에서, 뇌의 뇌척수액 (CSF) 또는 Aβ 플라크에서 낮은 수준의 Aβ1-42를 갖는 무증상 환자의 기억 상실 또는 인지기능 감퇴를 예방하는, 상기 환자에게 본 발명의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.

또다른 실시양태에서, 본 발명은 알츠하이머 병-유발 유전자 돌연변이를 갖는 것으로 알려진 무증상 환자를 치료하는, 상기 환자에게 본 발명의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 PSEN1 E280A 알츠하이머 병-유발 유전자 돌연변이 (파이사(Paisa) 돌연변이)를 갖는 것으로 알려진 무증상 환자를 치료하는, 상기 환자에게 본 발명의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 또다른 특정 실시양태에서, 본 발명은 상 염색체-우성 알츠하이머 병을 유발하는 유전자 돌연변이를 갖는 무증상 환자를 치료하는, 상기 환자에게 본 발명의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.

또다른 실시양태에서, 본 발명은 알츠하이머 병-유발 유전자 돌연변이를 갖는 것으로 알려진 무증상 환자의 기억 상실 또는 인지기능 감퇴를 예방하는, 상기 환자에게 본 발명의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 PSEN1 E280A 알츠하이머 병-유발 유전자 돌연변이 (파이사 돌연변이)를 갖는 것으로 알려진 무증상 환자의 기억 상실 또는 인지기능 감퇴를 예방하는, 상기 환자에게 본 발명의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 또다른 특정 실시양태에서, 본 발명은 상 염색체-우성 알츠하이머 병을 유발하는 유전자 돌연변이를 가진 무증상 환자의 기억 상실 또는 인지기능 감퇴를 예방하는, 상기 환자에게 본 발명의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.

또다른 실시양태에서, 본 발명은 알츠하이머 병-유발 유전자 돌연변이를 갖는 것으로 알려진 무증상 환자의 인지기능 감퇴를 지연시키는, 상기 환자에게 본 발명의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 PSEN1 E280A 알츠하이머 병-유발 유전자 돌연변이 (파이사 돌연변이)를 갖는 것으로 알려진 무증상 환자의 인지기능 감퇴를 지연시키는, 상기 환자에게 본 발명의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 또다른 특정 실시양태에서, 본 발명은 상 염색체-우성 알츠하이머 병을 유발하는 유전자 돌연변이를 가진 무증상 환자의 인지기능 감퇴를 지연시키는, 상기 환자에게 본 발명의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 치료에 사용하기 위한 본 발명의 항체를 제공한다. 일 실시양태에서, 본 발명은 Aβ의 침착을 특징으로 하는 질병의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 항체를 제공한다. 또다른 실시양태에서, 본 발명은 임상 또는 전-임상 알츠하이머 병, 다운 증후군 및 임상 또는 전-임상 대뇌 아밀로이드 혈관병증의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 항체를 제공한다. 또다른 실시양태에서, 본 발명은 전구성 AD, 경도 AD, 중등도 AD 및 중증 AD로부터 선택되는 질환의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 항체를 제공한다. 또다른 실시양태에서, 본 발명은 임상 또는 전-임상 알츠하이머 병, 다운 증후군 및 임상 또는 전-임상 대뇌 아밀로이드 혈관병증으로부터 선택되는 질환으로 진단된 환자의 인지기능 감퇴 지연에 사용하기 위한 본 발명의 항체를 제공한다. 다른 실시양태에서, 본 발명은 전구성 AD, 경도 AD, 중등도 AD 및 중증 AD로부터 선택되는 질환으로 진단된 환자의 인지기능 감퇴 지연에 사용하기 위한 본 발명의 항체를 제공한다.

또한, 본 발명은 치료에 사용하기 위한 본 발명의 항체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 일 실시양태에서, 본 발명은 Aβ의 침착을 특징으로 하는 질병의 치료에 사용하기 위한 항체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한 Aβ의 침착을 특징으로 하는 질병의 치료를 위한 약제의 제조에서의 본 발명의 항체의 용도를 제공한다. 일 실시양태에서, 본 발명은 임상 또는 전-임상 알츠하이머 병, 다운 증후군 및 임상 또는 전-임상 대뇌 아밀로이드 혈관병증의 치료를 위한 약제의 제조에서의 본 발명의 항체의 용도를 제공한다. 일 실시양태에서, 본 발명은 전구성 AD, 경도 AD, 중등도 AD 또는 중증 AD의 치료를 위한 약제의 제조에서의 본 발명의 항체의 용도를 제공한다. 또다른 실시양태에서, 본 발명은 임상 또는 전임상 알츠하이머 병, 다운 증후군 및 임상 또는 전-임상 대뇌 아밀로이드 혈관병증으로부터 선택되는 질환으로 진단된 환자의 인지기능 감퇴를 지연시키는 약제의 제조에서의 본 발명의 항체의 용도를 제공한다. 또다른 실시양태에서, 본 발명은 전구성 AD, 경도 AD, 중등도 AD 및 중증 AD로부터 선택되는 질환으로 진단된 환자의 인지기능 감퇴를 지연시키기 위한 약제의 제조에서의 본 발명의 항체의 용도를 제공한다.

일 실시양태에서, 본 발명은 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 제공한다. 일 실시양태에서, 본 발명은 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 제공한다. 일 실시양태에서, 본 발명은 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 제공한다. 추가의 실시양태에서, 본 발명은 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하고, 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 제공한다. 또다른 실시양태에서, 본 발명은 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하고, 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 제공한다.

일 실시양태에서, 본 발명은 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 제공한다. 일 실시양태에서, 본 발명은 서열식별번호:12의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 제공한다. 일 실시양태에서, 본 발명은 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 제공한다. 추가의 실시양태에서, 본 발명은 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하고, 서열식별번호:12의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 제공한다. 또다른 실시양태에서, 본 발명은 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하고, 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 제공한다. 또다른 실시양태에서, 본 발명은 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자, 및 서열식별번호:12의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 제공한다. 또다른 실시양태에서, 본 발명은 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자, 및 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 제공한다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열은 서열식별번호:14이고, 서열식별번호:12의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열은 서열식별번호:15이다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열은 서열식별번호:14이고, 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열은 서열식별번호:16이다.

또한, 본 발명은 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자 및 서열식별번호:12의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 포함하는 포유동물 세포를 제공한다. 바람직하게 포유동물 세포는 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 서열식별번호:12의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 포함한다. 본 발명은 또한 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자 및 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 포함하는 포유동물 세포를 제공한다. 바람직하게 포유동물 세포는 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 포함한다. 일 실시양태에서, 포유동물 세포주는 중국 햄스터 난소 (CHO) 또는 햄스터 배아 신장 (HEK) 세포주이다.

본 발명은 또한 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자 및/또는 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 포함하는 포유동물 세포를 제공하며, 여기서 세포는 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 갖는 HCVR 및 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 갖는 LCVR을 포함하는 항체를 발현할 수 있다. 바람직하게는 포유동물 세포는 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 포함한다. 본 발명은 또한 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자 및/또는 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 포함하는 포유동물 세포를 제공하며, 여기서 세포는 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 갖는 HCVR 및 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 갖는 LCVR을 포함하는 항체를 발현할 수 있다. 바람직하게는 포유동물 세포는 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 포함한다. 일 실시양태에서, 포유동물 세포주는 CHO 또는 HEK 세포주이다.

또다른 실시양태에서, 본 발명은 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 갖는 LCVR 및 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 갖는 HCVR을 포함하는 항체의 제조 방법을 제공하며, 여기서 방법은 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 갖는 LCVR을 코딩하는 DNA 및/또는 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 갖는 HCVR을 코딩하는 DNA를 포함하는 포유동물 세포를 항체가 발현되고, 발현된 항체를 회수하는 조건 하에 배양하는 것을 포함한다. 본 발명은 바로 위에 기술된 바와 같이 본 발명의 방법에 의해 수득가능한 항체를 포함한다. 또한, 본 발명은 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 갖는 LCVR 및 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 갖는 HCVR을 포함하는 항체의 제조 방법을 제공하며, 여기서 방법은 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 갖는 LCVR 및/또는 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 갖는 HCVR을 코딩하는 DNA를 포함하는 포유동물 세포를 항체가 발현되고, 발현된 항체를 회수하는 조건 하에 배양하는 것을 포함한다. 본 발명은 바로 위에 기술된 바와 같이 본 발명의 방법에 의해 수득가능한 항체를 포함한다.

또다른 실시양태에서, 본 발명은 서열식별번호:12의 아미노산 서열을 갖는 LC 및 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 갖는 HC를 포함하는 항체의 생산 방법을 제공하며, 여기서 방법은 서열식별번호:12의 아미노산 서열을 갖는 LC 및/또는 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 갖는 HC를 코딩하는 DNA를 포함하는 포유동물 세포를 항체가 발현되고, 발현된 항체를 회수하는 조건 하에 배양하는 것을 포함한다. 본 발명은 바로 위에 기술된 바와 같이 본 발명의 방법에 의해 수득가능한 항체를 포함한다. 또한, 본 발명은 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 갖는 LC 및 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 갖는 HC를 포함하는 항체의 생산 방법을 제공하며, 여기서 방법은 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 갖는 LC 및/또는 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 갖는 HC를 코딩하는 DNA를 포함하는 포유동물 세포를 항체가 발현되고, 발현된 항체를 회수하는 조건 하에 배양하는 것을 포함한다. 본 발명은 바로 위에 기술된 바와 같이 본 발명의 방법에 의해 수득가능한 항체를 포함한다.

본 발명은 2 개의 HC 및 2 개의 LC를 포함하고, 여기서 2 개의 HC 각각의 아미노산 서열은 서열식별번호:11이고, 2 개의 LC 각각의 아미노산 서열은 서열식별번호:12인 항체의 제조 방법을 포함하며, 그 방법은 a) 항체가 발현되는 조건 하에, 상기 기술된 바와 같이 본 발명의 포유동물 세포를 배양하는 단계 및 b) 발현된 항체를 회수하는 단계를 포함한다. 본 발명은 바로 위에 기술된 바와 같이 본 발명의 방법에 의해 수득가능한 항체를 포함한다. 또한, 본 발명은 2 개의 HC 및 2 개의 LC를 포함하고, 여기서 2 개의 HC 각각의 아미노산 서열은 서열식별번호:11이고, 2 개의 LC 각각의 아미노산 서열은 서열식별번호:13인 항체의 제조 방법을 포함하며, 그 방법은 a) 항체가 발현되는 조건 하에, 상기 기술된 바와 같이 본 발명의 포유동물 세포를 배양하는 단계 및 b) 발현된 항체를 회수하는 단계를 포함한다. 본 발명은 바로 위에 기술된 바와 같이 본 발명의 방법에 의해 수득가능한 항체를 포함한다.

본 발명의 항체는 N3pGlu Aβ에 결합한다. N3pGlu Aβ의 서열은 서열식별번호:17의 아미노산 서열이다.

본원에서 사용된 "항체"는 디술피드 결합에 의해 상호연결된 2 개의 중쇄 (HC) 및 2 개의 경쇄 (LC)를 포함하는 면역글로불린 분자이다. 각 LC 및 HC의 아미노 말단 부분은 그 안에 함유된 상보성 결정 영역 (CDR)을 통해 항원 인식을 담당하는 가변 영역을 포함한다. CDR에는 프레임워크 영역이라고 하는, 더 보존된 영역이 산재해 있다. 본 발명의 항체의 LCVR 및 HCVR 영역 내의 CDR 도메인에 대한 아미노산의 지정은 잘-알려진 카밧(Kabt) 넘버링 관례 (문헌[Kabat, et al., Ann. NY Acad. Sci. 190:382-93 (1971)]; 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 (1991)]) 및 노스(North) 넘버링 관례 (문헌[North et al., A New Clustering of Antibody CDR Loop Conformations, Journal of Molecular Biology, 406:228-256 (2011)])에 기초한다. 상기 방법에 따라, 본 발명의 CDR을 결정하였다 (표 1).

본 발명의 항체는 카파(kappa) LC 및 IgG HC를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 항체는 IgG1이다.

본 발명의 항체는 모노클로날 항체 ("mAb")이다. 모노클로날 항체는 예를 들어, 하이브리도마 기술, 재조합 기술, 파지 디스플레이 기술, 합성 기술, 예컨대, CDR-그래프팅(grafting), 또는 당업계에 공지된 그러한 또는 다른 기술의 조합에 의해 생성될 수 있다. 본 발명의 또다른 실시양태에서, 항체 또는 이를 코딩하는 핵산은 단리된 형태로 제공된다. 본원에 사용된 용어 "단리된"은 자연에서 발견되지 않고, 세포 환경에서 발견되는 다른 거대분자 종이 없거나 실질적으로 없는 단백질, 펩티드 또는 핵산을 지칭한다. 본원에서 사용된 "실질적으로 없는"는 목적하는 단백질, 펩티드 또는 핵산이 존재하는 거대분자 종을 80 % 초과 (몰 기준), 바람직하게는 90 % 초과, 보다 바람직하게는 95 % 초과로 포함하는 것을 의미한다.

항체의 발현 및 분비 후에, 배지를 청징화하여(clarified) 세포를 제거하고, 청징화된 배지를 많은 통상적으로-사용되는 기술 중 하나를 사용하여 정제한다. 정제된 항체는 비경구 투여, 특히 피하, 경막내 또는 정맥내 투여를 위해 단백질 및 항체를 제제화하는 잘-알려진 방법에 따라 제약 조성물로 제제화될 수 있다. 항체는 적절한 제약상-허용가능한 부형제와 함께 동결건조될 수 있고, 그 다음에는 사용하기 전에 수성 희석제로 나중에 재구성될 수 있다. 대안적으로, 항체를 수용액에서 제제화하여 사용하기 전 1 - 3 년까지 저장할 수 있다. 어느 경우이든, 저장된 형태 및 항체의 제약 조성물의 주사 형태는 항체 이외의 성분인 제약상-허용되는 부형제 또는 부형제들을 함유할 것이다. 성분이 제약상-허용가능한지 여부는 안전성 및 유효성 또는 제약 조성물의 안전성, 순도 및 효능에 대한 그의 효과에 좌우된다. 성분이 안전성 또는 유효성에 대해 (또는 안전성, 순도 또는 효능에 대해) 인간에게 투여하기 위한 조성물에 사용되지 않음을 보증하기에 충분히 불리한 효과를 갖는 것으로 판단되면, 그러면 그것은 항체의 제약 조성물에 사용되기에 제약상-허용되지 않는 것이다.

본 발명의 항체를 포함하는 제약 조성물은 본원에 기술된 바와 같은 질병 또는 장애의 위험이 있거나 이를 나타내는 환자에게 비경구 경로 (예컨대, 피하, 정맥내, 복강내, 근육내)에 의해 투여될 수 있다. 피하 및 정맥내 경로가 바람직하다. 본 발명의 제약 조성물은 본 발명의 항체의 "유효”량을 함유한다. 유효량은 원하는 치료적 결과를 달성하는데 필요한 양 (투여량 및 투여 기간 및 투여 방법에서)을 지칭한다. 항체의 유효량은 개인의 질병 상태, 연령, 성별 및 체중, 및 개인에게서 원하는 반응을 이끌어내는 항체의 능력과 같은 요인에 따라 달라질 수 있다. 유효량은 당업자로서 공지된 기술을 사용하고 결과를 관찰함으로써 주치의인 진단자 또는 건강 관리 전문가에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 투여 빈도는 인간에서 실제 약력학 및 약동학에 따라 좌우된다. 치료 기간은 많은 요인에 따라 다양할 것이며, 당해 기술분야의 경험 및 기술에 기초하여 환자의 진단자 또는 치료 건강 관리 제공자에 의해 결정될 것이다. 치료의 빈도와 기간은 증세에 따라 다를 수 있다. "치료", "치료하는" 또는 "치료하기" 등의 용어는 환자의 기존 증상, 질환, 질병 또는 장애의 진행 또는 중증도를 억제, 지연 또는 중지시키는 것을 포함한다. "환자"란 용어는 인간을 지칭한다.

용어 "예방"은 질환의 진행을 예방하기 위해 무증상 환자 또는 전-임상 알츠하이머 병 환자에게 본 발명의 항체를 예방 투여하는 것을 의미한다.

용어 "Aβ의 침착을 특징으로 하는 질병"은 병리학적으로 뇌 또는 뇌 혈관계의 Aβ 침전물을 특징으로 하는 질병이다. 여기에는 알츠하이머 병, 다운 증후군 및 대뇌 아밀로이드 혈관병증과 같은 질병이 포함된다. 알츠하이머 병의 임상 진단, 병기분류(staging) 또는 진행은 당업자로서 공지된 기술을 사용하고 결과를 관찰함으로써 주치의인 진단자 또는 건강 관리 전문가에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 이는 일반적으로 뇌 플라크 상상, 정신적 또는 인지적 평가 (예컨대 임상 치매 척도 - 박스 총점 (CDR-SB), 미니-정신 상태 검사 (MMSE) 또는 알츠하이머 병 인지기능 평가 척도 (ADAS-Cog)) 또는 기능적 평가 (예컨대 알츠하이머 병 협동 연구-일상 생활의 활동 (ADCS-ADL))를 포함한다. 본원에서 사용된 "임상 알츠하이머 병"은 알츠하이머 병의 진단 단계이다. 이는 전구성 알츠하이머 병, 경도 알츠하이머 병, 중등도 알츠하이머 병 및 중증 알츠하이머 병으로 진단된 질환을 포함한다. "전-임상 알츠하이머 병"이라는 용어는 임상 알츠하이머 병에 선행하는 단계로, 여기서 바이오마커 (예컨대 CSF Aβ42 수준 또는 아밀로이드 PET에 의해 침착된 뇌 플라크)의 측정가능한 변화는 알츠하이머의 병리상태를 갖는 환자의 임상 알츠하이머 병으로 진행되는 초기 징후를 나타낸다. 이는 보통 기억 상실 및 혼란과 같은 증상이 두드러지기 전이다.

하기 실시예 및 분석은 본 발명의 항체가 알츠하이머 병, 다운 증후군 및 CAA와 같은 Aβ의 침착을 특징으로 하는 질병을 치료하는데 유용함을 입증한다. 그러나, 하기 실시예는 예시로서 설명된 것이지 한정하고자 하는 것이 아니며, 당업자에 의해 다양한 변경이 이루어질 수 있음을 이해해야 한다.

실시예

조작된 N3pGlu Aβ 항체의 발현 및 정제

본 발명의 N3pGlu Aβ 항체는 본질적으로 다음과 같이 발현 및 정제될 수 있다. 서열식별번호: 12 또는 13의 LC 아미노산 서열을 코딩하는 DNA 서열 및 서열식별번호:11의 HC 아미노산 서열을 코딩하는 DNA 서열을 함유하는 글루타민 신테타제 (GS) 발현 벡터를 사용하여 중국 햄스터 난소 세포주 (CHO)를 전기천공법으로 형질감염시켰다. 발현 벡터는 SV 얼리(Early) (시미안 바이러스(Simian Virus) 40E) 프로모터 및 GS 유전자를 코딩한다. 형질감염-후, 세포는 0-50 μM L-메티오닌 술폭시민 (MSX)으로 벌크 선택을 거친다. 그 다음 선택된 벌크 세포 또는 마스터 웰을 혈청이-없는 현탁 배양물에서 스케일 업하여 생산에 사용한다.

항체가 분비된 청징화된 배지를 인산염 완충 염수 (pH 7.4)와 같은 상용성 완충액으로 평형화된 단백질 A 친화성 컬럼에 적용한다. 컬럼을 1 M NaCl로 세척하여 비특이적 결합 성분을 제거한다. 결합된 N3pGlu Aβ 항체는 예를 들어 pH (약) 3.5의 시트르산 나트륨으로 용리되고, 분획은 1 M 트리스 완충액으로 중화된다. N3pGlu Aβ 항체 분획을 예컨대 SDS-PAGE 또는 분석 크기-배제에 의해 검출하고, 그 다음 풀링한다. 본 발명의 N3pGlu Aβ 항체는 pH 7.4의 PBS 완충액 또는 10 mM의 시트르산 나트륨 완충액, pH 약 6의 150 mM의 NaCl 중 어느 하나에서 농축된다. 최종 물질은 통상적인 기술을 사용하여 무균 여과될 수 있다. N3pGlu Aβ 항체의 순도는 95 % 초과이다. 본 발명의 N3pGlu Aβ 항체는 -70 ℃에서 즉시 동결되거나 수 개월 동안 4 ℃에서 저장될 수 있다. 본 발명의 예시된 항체에 대한 아미노산 서열식별번호를 하기에 나타낸다.

표 1. 예시된 N3pGlu Aβ 항체의 아미노산 서열.

결합 친화성 및 동력학

pE3-42 Aβ 펩티드 또는 Aβ 1-40 펩티드에 대한 N3pGlu Aβ 항체의 결합 친화도 및 동력학은 비아코어(Biacore)(등록상표) 3000 (GE 헬스케어)을 사용하여 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된다. 결합 친화성은 비아코어(등록상표) CM5 칩 상의 고정화 단백질 A를 통해 N3pGlu Aβ 항체를 포획하고, pE3-42 Aβ 펩티드 또는 Aβ 1-40 펩티드를 100 nM에서 시작하여 3.125 nM까지 2-배 연속 희석으로 흘려보냄으로써 측정된다. 실험은 HBS-EP 완충액 (GE 헬스케어 BR100669, 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.05 % 계면 활성제 P20, pH 7.4)에서 25 ℃에서 수행된다.

각 주기마다 10 μL/분 유속으로 10 μg/mL 농도의 항체 용액을 5 μL 주입하여 항체를 포획한다. 상기 펩티드는 50 μL/분으로 250 μL를 주입하여 결합시키고 그 다음 10 분간 해리시킨다. 칩 표면은 pH 1.5에서 10 μL/mL 유속으로 글리신 완충액 5 μL를 주입하여 재생시킨다. 이 데이터를 1:1 랭뮤어(Langmiur) 결합 모델에 피팅시켜 k_on, k_off를 유도하고 K_D를 계산한다. 본질적으로 상기 기술한 바와 같은 절차에 따라, 하기 파라미터 (표 2에 나타냄)가 관찰되었다.

표 2. 결합 친화성 및 동력학.

Aβ 1-40에 대한 인식할만한 결합은 검출되지 않았으며, 이는 Aβ 1-40과 비교하여 항체 I 및 항체 II가 pE3-42 Aβ 펩티드에 특이적으로 결합함을 나타낸다.

열안정성

스트레스 받은 조건 (즉, 승온 및 낮은 pH)에서 항체 안정성을 결정하기 위해, 본 발명의 항체를 함유하는 청징화된 배지는 PBS 또는 100 mM 시트르산 나트륨으로 pH 7.4 또는 pH 5.0으로 각각 조정된다. 샘플을 밀봉하고 65 ℃에서 60 분 동안 인큐베이션한 다음 얼음 위에서 식힌다. 샘플의 단백질 응집체는 원심분리에 의해 침전시키고, 맑은 상등액을 새로운 플레이트로 옮기고 PBS 완충액으로 50-배 희석하여 pH 7.4로 중화한다. 항원 (pE3-42) 결합 활성을 측정하고 스트레스 받지 않은 샘플에 대해 계산하여 잔여 활성의 백분율을 결정한다.

본질적으로 상기 기술한 바와 같은 절차에 따라, 하기 데이터를 얻었다.

표 3. 스트레스 이후 항원 결합 활성의 백분율.

표 3에 입증된 바와 같이, 항체 I 및 항체 II는 B12L과 비교하여 증가된 열안정성을 갖는다.

생체 외 표적 결합

고정된 PDAPP 뇌로부터 뇌 절편에 대한 생체 외 표적 결합을 결정하기 위해, 외인성으로 첨가된 본 발명의 N3pGlu Aβ 항체로 면역조직화학적 분석을 수행하였다. 노화된 PDAPP 마우스 (25 개월 됨)로부터의 저온유지 연속 관상면 절편을 20 μg/mL의 본 발명의 예시된 N3pGlu Aβ 항체 (항체 I 또는 항체 II)와 함께 인큐베이션하였다. 인간 IgG에 특이적인 2차 HRP 시약을 이용하고, 침착된 플라크를 DAB-플러스(Plus) (DAKO)로 가시화한다. 바이오티닐화된 뮤린 3D6 항체에 이어서 단계-HRP 2차를 양성 대조군으로 사용한다. 양성 대조군 항체 (바이오티닐화된 3D6)는 PDAPP 해마에서 상당한 양의 침착된 Aβ를 표지하였고, 본 발명의 예시된 N3pGlu Aβ 항체는 침착물의 서브세트를 표지하였다. 이러한 조직학적 연구는 본 발명의 예시된 N3pGlu Aβ 항체가 생체 외에서 침착된 Aβ 표적과 결합하는 것을 입증하였다.

생체 외 식작용

본 발명의 N3pGlu Aβ 항체 (항체 I 또는 항체 II)가 플라크의 소교세포 식작용을 촉진할 수 있는지 여부를 조사하기 위해 생체 외 식작용 분석이 수행된다. 인간 알츠하이머 뇌의 동결 절편 (20 μm)은 본 발명의 예시된 N3pGlu Aβ 항체 10 μg/ml 또는 대조군과 함께 24-웰 플레이트에서 37 ℃에서 1 시간 동안 사전-인큐베이션된다. 처리 당 4 개의 웰이 있다. 그 다음 일차 뮤린 소교 세포 (8x10⁵, C57/BL6)를 첨가하고 24 시간 동안 인큐베이션하였다. 각 웰의 조직을 5.2 M 구아니딘 완충액에서 변성시키고 Aβ_1-42 함량을 엘리사(ELISA)로 평가한다. Aβ 함량은 여러 섹션의 범위에 걸쳐 달라질 수 있으므로 모든 시험 웰에 대해 자매 섹션 대조군이 실시되고 테스트 웰의 함량을 자매 섹션의 것에 대해 표준화한다.

양성 대조군 샘플과 비교하여, 본 발명의 예시된 N3pGlu Aβ 항체는 상당히 감소된 Aβ_1-42를 가졌다. 음성 대조군 샘플은 무시할 정도의 침착된 Aβ_1-42의 제거를 가졌다. 따라서, 생체 외 식작용 분석은 본 발명의 예시된 N3pGlu Aβ 항체가 식작용에 의해 생체 외에서 플라크를 제거할 수 있음을 나타낸다.

생체 내 표적 결합

본 발명의 N3pG 항체가 혈액-뇌-장벽을 가로질러 생체 내에서 침착된 플라크에 결합하는 능력이 측정된다. 18 개월 된 PDAPP 유전자도입 마우스에게 N3pGlu Aβ 항체 (항체 I 또는 항체 II) 또는 음성 대조군 IgG를 복강 내 주사한다. 그룹당 6 마리의 마우스는 1 일째 및 3 일째에 하나의 40 mg/kg 항체 주사를 맞는다. 생체 내 표적 결합은 마우스를 희생시키고 조직화학적 분석을 위해 뇌를 수집하는 6 일째에 결정된다.

생체 내 표적 결합의 정도는 자매 섹션 (TE 비율)에서 외인성 3D6 면역염색법에 의해 정의된 바와 같이 총 플라크 면적으로 표준화된 생체 내 N3pGlu Aβ 항체 결합에 대해 양인 백분율 면적으로 정량화된다. TE 비율은 항체가 결합한 면적의 백분율을 측정하고 그 값을 가능한 표적의 면적의 총 백분율 (자매 섹션에서 양성 대조군 항체 (3D6)로 외인성 면역조직화학법에 의해 가시화된 총 침착된 Aβ)에 대해 표준화함으로써 생성된다.

본질적으로 상기 기술한 바와 같은 절차에 따라, 본 발명의 예시된 N3pGlu Aβ 항체는 해마 내에서 및 피질에서 제한된 범위까지 생체 내 표적 결합을 입증하는 반면, 대조군 IgG를 주사한 동물은 플라크-특이적 염색을 나타내지 않는다. TE 비율은 1.95 % (항체 I) 및 3.65 % (항체 II)였다.

유사한 연구가 평균 24-26 개월령의 PDAPP 마우스에서 항체 II로 수행된다. 항체 II는 9.41 %의 TE 비율을 가졌다.

이러한 결과는 항체 I 및 항체 II가 말초로 투여될 경우, 혈액-뇌 장벽을 가로질러 침착된 Aβ와 결합할 수 있음을 입증한다.

생체 내 플라크 제거

연구는 노화된 PDAPP 마우스에서 생체 내 플라크 제거를 평가하기 위해 뮤린 상수 카파 영역 및 IgG2a Fc에 융합된 항체 II의 LCVR 및 HCVR을 갖는 키메라 대용 항체로 수행된다. 노화된 PDAPP 마우스 (22 내지 24- 개월령, 그룹당 n = 23)를 12.5 mg/kg의 키메라 항체 II 또는 대조군 IgG로 7 주 동안 1 주일에 1 회 피하에 주사한다. 대조군 노화된 PDAPP 마우스 (연구 개시 때 희생됨)를 사용하여 치료 처리 전에 사전에-존재하는 침착의 수준을 평가한다.

연구의 결말에서, 혈장에서 최종 약물 수준을 측정하고 Aβ_1-42의 수준에 대하여 엘리사로 뇌를 평가한다. 노화된 PDAPP 마우스는 대조군 IgG로 7-주간의 처리 기간 동안 상당하지 않은 Aβ_1-42의 추가 증가에 의해 증명되는 바와 같이 플라크 실링(ceiling)에 있다. 항체 II 키메라 항체 그룹은 대조군과 비교하여 Aβ_1-42의 상당한 감소 (23 %, p = 0.0174)를 나타낸다. 항체 노출 수준은 7-주 투여 기간의 끝에서 측정되었으며, 항체 II는 31 μg/mL의 수준을 가졌다. 이 연구는 예시된 키메라 N3pGlu Aβ 항체가 생체 내에서 플라크 (Aβ_1-42)를 낮출 수 있음을 입증했다.

생체 외 T-세포 증식 에피스크린(EpiScreen) 분석

본 발명의 예시적인 N3pGlu Aβ 항체 (항체 I 및 항체 II)에 반응한 인간 CD4+ T 세포의 활성화 (증식, 시토카인 분비)를 측정하기 위해 에피스크린^TM 생체 외 인간 T-세포 분석을 사용한다. 에피스크린^TM은 유럽/북미 및 세계 집단에서 발현된 HLA-DR 및 DQ 알로타입(allotype)의 수와 빈도를 가장 잘 표현하는 50 명의 건강한 기증자의 샘플을 활용한다. 이 분석에는 두 가지 양성 대조군이 포함된다: 임상에서 높은 수준의 면역원성을 나타내며 (73 %) 일상적으로 에피스크린 분석에서 20-30 % T-세포 반응을 유도하는 임상 기준 항체인 휴머나이즈드(humanized) A33 및 신항원을 함유하는 마이토젠-유사 단백질인 KLH (키홀 림펫 헤모시아닌(keyhole limpet hemocyanin)). 대응되는 완충액 음성 대조군도 분석에 포함된다.

T-세포 증식의 백분율은 시간 과정 (5-8 일) 동안 관찰된 모든 양성 기증자 반응의 평균으로부터 계산된다. T-세포 증식 백분율은 양성 대조군 A33 및 KLH에 대하여 각각 20 % 및 98 %이었다. B12L, 항체 I 및 항체 II에 대한 T-세포 증식률은 각각 14 %, 6 % 및 8 %이었다. 이들 데이터는 본 발명의 예시된 N3pGlu Aβ 항체가 양성 대조군 및 B12L과 비교하여 감소된 T-세포 반응 속도를 갖는 것을 입증한다.

비-특이적 결합

본 발명의 N3pGlu Aβ 항체는 형광-활성화된 세포 분류 (FACS) 분석에 의해 살아있는 CHO 세포에 대한 비-특이적 결합에 대하여, 그리고 광범위한 동적 범위에 걸쳐 매우 민감하고 정밀하며 정확한 결과를 제공하는 메소 스케일 디스커버리(Meso Scale Discovery) (MSD) 기술을 사용하는 분석에 의해 인간 혈청 알부민, 피브로넥틴 및 인간 LDL에 대한 비-특이적 결합에 대하여 연구된다.

살아있는 CHO 세포에 대한 비-특이적 결합을 검출하기 위해, FACS 분석이 수행된다. N3pGlu Aβ 항체 (항체 I, 항체 II 또는 B12L)를 FACS 완충액 + 0.1 % BSA에서 200 μg/mL로 희석한다. RPE로 표지된 F(ab')2 당나귀 항-인간 IgG (H+L) 2 차 항체를 FACS 완충액 + 0.1 % BSA에서 20 μg/mL로 희석한다. CHO 세포를 1,000 rpm에서 5 분 동안 회전시키고, 그 다음 FACS 완충액 + 0.1 % BSA로 세척하였다. 세포를 FACS 완충액 + 0.1 % BSA에서 4x10⁶ 세포/mL로 재현탁하고 55 μL의 세포 현탁액을 96-웰 플레이트의 웰에 첨가한다. 2차 항체를 N3pGlu Aβ 항체와 동일한 부피로 혼합하고 실온에서 1 시간 동안 인큐베이션한다. 항체 혼합물 (55 μL)을 세포 현탁액에 첨가하고 실온에서 1 시간 동안 인큐베이션한다. 각 샘플은 2 번씩 실행된다. 플레이트를 회전시키고 상등액을 버리고 세포를 75 μL FACS 완충액 + 0.1 % BSA에 재현탁한다. 플레이트를 다시 회전시키고 세포를 110 μL FACS 완충액 + 0.1 % BSA에 재현탁한다. 생존력 염료 (시톡스 블루(Sytox Blue); 1.1 μL를 각 웰에 첨가하고 FACS 분석 전에 혼합한다. 세포 결합 활성은 LSR포르테사(LSRFortessa)^TM FACS 장치 (BD 바이오사이언스)를 사용하여 FACS 분석에 의해 측정한다.

인간 혈청 알부민, 피브로넥틴 및 인간 LDL에 대한 비-특이적 결합을 검출하기 위해 MSD 분석이 활용된다. 플레이트 (MSD 멀티어레이(Multiarray) 96 웰 플레이트: MSD 카탈로그 #L15XA-3)는 4 ℃에서 하룻밤 동안 30 μL/웰의 코팅 단백질 (PBS 중 20 μg/mL)로 코팅된다. 코팅 단백질은 LDL 용액 (지단백질, 인간 혈장에서 저밀도, 시그마(Sigma) 카탈로그 #L7914), 소 혈장으로부터의 피브로넥틴 (시그마 카탈로그 #F1141) 또는 HSA (5 mg/mL, 시그마 카탈로그 #A8763)일 수 있다. 플레이트를 PBS + 0.1 % 트윈(Tween)-20으로 3 회 세척하고, PBS + 0.5 % BSA에서 1 시간 동안 블로킹한 다음 세척하였다. 항체 I 또는 항체 II (50 μg/mL, PBS + 0.5 % BSA로 희석됨)를 웰에 첨가한다. 각 웰은 2 번씩 실행된다. 플레이트를 실온에서 1 시간 동안 인큐베이션한 다음 세척한다. MSD 술포-태그(SULFO-TAG) 항-인간 항체 (MSD; 카탈로그 번호 R32AJ-5)를 PBS + 0.5 % BSA로 1 μg/ml로 희석하고 각 웰에 50 μL를 첨가한다. 플레이트를 실온에서 1 시간 동안 인큐베이션한 다음 세척한다. MSD 판독 완충액 (MSD; 카탈로그 번호 R92TC-3)를 물에서 1:4로 희석하여 1 배 작업액을 얻은 다음, 각 웰에 150 μL를 첨가한다. 플레이트가 판독되고 평균 신호가 계산된다.

표 4. 비-특이적 결합 프로파일

MFI = 평균 형광 강도; ECIL = 전기화학발광 빛

표 4의 데이터는 항체 I 및 항체 II가 B12L과 비교하여 살아있는 CHO 세포, 인간 혈청 알부민, 피브로넥틴 및 인간 LDL에 대해 감소된 비-특이적 결합을 갖는다는 것을 입증한다.

서열

항체 I 및 항체 II HCDR1 (서열식별번호: 1)

KASGYTFTDYYIN

항체 I 및 항체 II HCDR2 (서열식별번호: 2)

WINPGSGNTKYNEKFKG

항체 I 및 항체 II HCDR3 (서열식별번호: 3)

TREGETVY

항체 I 및 항체 II LCDR1 (서열식별번호: 4)

KSSQSLLYSRGKTYLN

항체 II LCDR2 (서열식별번호: 5)

YAVSKLDS

항체 I LCDR2 (서열식별번호: 6)

YDVSKLDS

항체 I 및 항체 II LCDR3 (서열식별번호: 7)

VQGTHYPFT

항체 I 및 항체 II HCVR (서열식별번호: 8)

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDYYINWVRQAPGQGLEWMGWINPGSGNTKYNEKFKGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTREGETVYWGQGTLVTVSS

항체 I LCVR (서열식별번호: 9)

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLYSRGKTYLNWFQQRPGQSPRRLIYDVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCVQGTHYPFTFGQGTKLEIK

항체 II LCVR (서열식별번호: 10)

DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKSSQSLLYSRGKTYLNWLQQKPGKAPKLLIYAVSKLDSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCVQGTHYPFTFGQGTKLEIK

항체 I 및 항체 II 중쇄 (서열식별번호: 11)

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDYYINWVRQAPGQGLEWMGWINPGSGNTKYNEKFKGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTREGETVYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

항체 I 경쇄 (서열식별번호: 12)

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLYSRGKTYLNWFQQRPGQSPRRLIYDVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCVQGTHYPFTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

항체 II 경쇄 (서열식별번호: 13)

DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKSSQSLLYSRGKTYLNWLQQKPGKAPKLLIYAVSKLDSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCVQGTHYPFTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

서열식별번호: 11의 항체 중쇄 발현을 위한 예시된 DNA (서열식별번호: 14)

CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACCGACTATTATATCAACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTGGCAGTGGTAATACAAAGTACAATGAGAAGTTCAAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACGAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTACAAGAGAAGGCGAGACGGTCTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCGCTAGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGACGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCCCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT

서열식별번호: 12의 항체 경쇄 발현을 위한 예시된 DNA (서열식별번호: 15)

GATGTTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCTTGGACAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAAGTCTAGTCAAAGCCTCCTGTACAGTCGCGGAAAAACCTACTTGAATTGGTTTCAGCAGAGGCCAGGCCAATCTCCAAGGCGCCTAATTTATGATGTTTCTAAACTGGACTCTGGGGTCCCAGACAGATTCAGCGGCAGTGGGTCAGGCACTGATTTCACACTGAAAATCAGCAGGGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCGTGCAAGGTACACACTACCCTTTCACTTTTGGCCAAGGGACCAAGCTGGAGATCAAACGGACCGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGC

서열식별번호: 13의 항체 경쇄 발현을 위한 예시된 DNA (서열식별번호: 16)

GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAAGTCCAGTCAGAGTCTCCTGTACAGTCGCGGAAAAACCTATTTGAACTGGCTCCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGTCTCCAAACTGGACAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCGTGCAGGGTACACATTATCCTTTCACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAACGGACCGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGC

N3pGlu Aβ (서열식별번호: 17)

[pE]FRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA

SEQUENCE LISTING <110> Eli Lilly and Company <120> ANTI-N3pGlu AMYLOID BETA PEPTIDE ANTIBODIES AND USES THEREOF <130> X20893 <150> 62/279628 <151> 2016-01-15 <160> 17 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 1 Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Ile Asn 1 5 10 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 2 Trp Ile Asn Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 3 Thr Arg Glu Gly Glu Thr Val Tyr 1 5 <210> 4 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 4 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Arg Gly Lys Thr Tyr Leu Asn 1 5 10 15 <210> 5 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 5 Tyr Ala Val Ser Lys Leu Asp Ser 1 5 <210> 6 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 6 Tyr Asp Val Ser Lys Leu Asp Ser 1 5 <210> 7 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 7 Val Gln Gly Thr His Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 8 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 8 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Glu Gly Glu Thr Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 9 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 9 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Arg Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Asp Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Val Gln Gly 85 90 95 Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 10 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 10 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Arg Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Val Gln Gly 85 90 95 Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 11 <211> 444 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 11 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Glu Gly Glu Thr Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 <210> 12 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artifical Sequence <400> 12 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Arg Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Asp Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Val Gln Gly 85 90 95 Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 13 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artifical Sequence <400> 13 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Arg Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Val Gln Gly 85 90 95 Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 14 <211> 1332 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 14 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcacc gactattata tcaactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaaccctg gcagtggtaa tacaaagtac 180 aatgagaagt tcaagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtac aagagaaggc 300 gagacggtct actggggcca gggaaccctg gtcaccgtct cctcagcctc caccaagggc 360 ccatcggtct tcccgctagc accctcctcc aagagcacct ctgggggcac agcggccctg 420 ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc 480 ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc 540 agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg 600 aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaaagttg agcccaaatc ttgtgacaaa 660 actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaactcctgg ggggaccgtc agtcttcctc 720 ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg 780 gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg 840 gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg 900 gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag 960 gtctccaaca aagccctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020 ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg acgagctgac caagaaccag 1080 gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140 agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcccc ccgtgctgga ctccgacggc 1200 tccttcttcc tctatagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1260 ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1320 ctgtctccgg gt 1332 <210> 15 <211> 657 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 15 gatgttgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccttggaca gccggcctcc 60 atctcctgca agtctagtca aagcctcctg tacagtcgcg gaaaaaccta cttgaattgg 120 tttcagcaga ggccaggcca atctccaagg cgcctaattt atgatgtttc taaactggac 180 tctggggtcc cagacagatt cagcggcagt gggtcaggca ctgatttcac actgaaaatc 240 agcagggtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgcg tgcaaggtac acactaccct 300 ttcacttttg gccaagggac caagctggag atcaaacgga ccgtggctgc accatctgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgc 657 <210> 16 <211> 657 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 16 gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgca agtccagtca gagtctcctg tacagtcgcg gaaaaaccta tttgaactgg 120 ctccagcaga aaccagggaa agcccctaag ctcctgatct atgctgtctc caaactggac 180 agtggggtcc catcaaggtt cagcggcagt ggatctggga cagaattcac tctcaccatc 240 agcagcctgc agcctgatga ttttgcaact tattactgcg tgcagggtac acattatcct 300 ttcacttttg gccaggggac caagctggag atcaaacgga ccgtggctgc accatctgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgc 657 <210> 17 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 = pyroglutamic acid <400> 17 Xaa Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys Leu Val 1 5 10 15 Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile Gly Leu 20 25 30 Met Val Gly Gly Val Val Ile Ala 35 40

Claims

서열식별번호(SEQ ID NO):9 또는 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하는 인간 N3pGlu Aβ에 결합하는 항체.
제1항에 있어서, 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 갖는 LCVR 및 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 갖는 HCVR을 포함하는 항체.
제1항에 있어서, 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 갖는 LCVR 및 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 갖는 HCVR을 포함하는 항체.
제1항에 있어서, 서열식별번호:12 또는 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 (LC) 및 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 (HC)를 포함하는 항체.
제1항에 있어서, 서열식별번호:12의 아미노산 서열을 갖는 LC 및 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 갖는 HC를 포함하는 항체.
제1항에 있어서, 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 갖는 LC 및 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 갖는 HC를 포함하는 항체.
제1항에 있어서, 2 개의 LC 및 2 개의 HC를 포함하고, 여기서 각 LC의 아미노산 서열은 서열식별번호:12 또는 서열식별번호:13이고, 각 HC의 아미노산 서열은 서열식별번호:11인 항체.
제1항에 있어서, 2 개의 LC 및 2 개의 HC를 포함하고, 여기서 각 LC의 아미노산 서열은 서열식별번호:12이고, 각 HC의 아미노산 서열은 서열식별번호:11인 항체.
제1항에 있어서, 2 개의 LC 및 2 개의 HC를 포함하고, 여기서 각 LC의 아미노산 서열은 서열식별번호: 13이고, 각 HC의 아미노산 서열은 서열식별번호:11인 항체.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 항체 및 하나 이상의 제약상 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
유효량의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 항체를 환자에게 투여하는 것을 포함하는, Aβ의 침착을 특징으로하는 질병을 갖는 환자의 치료 방법.
유효량의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 항체를 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 임상 또는 전-임상 알츠하이머 병, 다운 증후군 및 임상 또는 전-임상 대뇌 아밀로이드 혈관병증으로부터 선택되는 질환을 갖는 환자의 치료 방법.
유효량의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 항체를 투여하는 것을 포함하는, 전구성 AD, 경도 AD, 중등도 AD 및 중증 AD로부터 선택되는 질환을 갖는 환자의 치료 방법.
유효량의 제10항의 제약 조성물을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 임상 또는 전-임상 알츠하이머 병, 다운 증후군 및 임상 또는 전-임상 대뇌 아밀로이드 혈관병증으로부터 선택되는 질환을 갖는 환자의 치료 방법.
유효량의 제10항의 제약 조성물을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 전구성 AD, 경도 AD, 중등도 AD 및 중증 AD로부터 선택되는 질환을 갖는 환자의 치료 방법.
유효량의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 항체를 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 임상 또는 전-임상 알츠하이머 병, 다운 증후군 및 임상 또는 전-임상 대뇌 아밀로이드 혈관병증으로부터 선택되는 질환으로 진단된 환자의 인지기능 감퇴를 지연시키는 방법.
유효량의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 항체를 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 전구성 AD, 경도 AD, 중등도 AD 및 중증 AD로부터 선택되는 질환으로 진단된 환자의 인지기능 감퇴를 지연시키는 방법.
유효량의 제10항의 제약 조성물을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 임상 또는 전-임상 알츠하이머 병, 다운 증후군 및 임상 또는 전-임상 대뇌 아밀로이드 혈관병증으로부터 선택되는 질환으로 진단된 환자의 인지기능 감퇴를 지연시키는 방법.
유효량의 제10항의 제약 조성물을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 전구성 AD, 경도 AD, 중등도 AD 및 중증 AD로부터 선택되는 질환으로 진단된 환자의 인지기능 감퇴를 지연시키는 방법.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 치료에 사용하기 위한 항체.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, Aβ의 침착을 특징으로 하는 질병의 치료에 사용하기 위한 항체.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 임상 또는 전-임상 알츠하이머 병, 다운 증후군 및 임상 또는 전-임상 대뇌 아밀로이드 혈관병증으로부터 선택되는 질환의 치료에 사용하기 위한 항체.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 전구성 AD, 경도 AD, 중등도 AD 및 중증 AD로부터 선택되는 질환의 치료에 사용하기 위한 항체.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 임상 또는 전-임상 알츠하이머 병, 다운 증후군 및 임상 또는 전-임상 대뇌 아밀로이드 혈관병증으로부터 선택되는 질환으로 진단된 환자의 인지기능 감퇴를 지연시키는 데 사용하기 위한 항체.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 전구성 AD, 경도 AD, 중등도 AD 및 중증 AD로부터 선택되는 질환으로 진단된 환자의 인지기능 감퇴를 지연시키는 데 사용하기 위한 항체.
Aβ의 침착을 특징으로 하는 질병의 치료를 위한 약제의 제조에서의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 항체의 용도.
임상 또는 전-임상 알츠하이머 병, 다운 증후군 및 임상 또는 전-임상 대뇌 아밀로이드 혈관병증으로부터 선택되는 질환의 치료를 위한 약제의 제조에서의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 항체의 용도.
전구성 AD, 경도 AD, 중등도 AD 및 중증 AD로부터 선택되는 질환의 치료를 위한 약제의 제조에서의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 항체의 용도.