CN115803056A - 用于治疗慢性病性贫血的抗血幼素（hjv）抗体 - Google Patents

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Abstract

本申请的多个方面提供了抗血幼素抗体和使用其治疗慢性病性贫血、铁限制性贫血和/或与贫血相关的病症的方法。

Description

用于治疗慢性病性贫血的抗血幼素(HJV)抗体
相关申请
本申请在35 U.S.C.§119(e)下要求以下的权益：2020年5月13日提交的美国临时申请序列号63/024,427，题为“ANTI-HEMOJUVELIN(HJV)ANTIBODIES FOR TREATING ANEMIAOF CHRONIC DISEASE”，2020年6月5日提交的63/035,634，题为“ANTI-HEMOJUVELIN(HJV)ANTIBODIES FOR TREATING ANEMIA OF CHRONIC DISEASE”，2020年7月2日提交的63/047,844，题为“ANTI-HEMOJUVELIN(HJV)ANTIBODIES FOR TREATING ANEMIA OF CHRONICDISEASE”和2021年3月22日提交的63/164,307，题为“ANTI-HEMOJUVELIN(HJV)ANTIBODIESFOR TREATING ANEMIA OF CHRONIC DISEASE”，其每一篇的全部内容均通过引用并入本文。
背景技术
铁是氧转运储存分子(例如血红蛋白和肌红蛋白)的关键组分之一。铁缺乏导致贫血，而铁过载导致组织损伤和纤维化。铁调素是全身铁稳态的一种关键肽激素调节物。它通过与细胞铁输出蛋白膜铁转运蛋白(ferroportin)(存在于肝细胞、十二指肠中的肠上皮细胞、巨噬细胞和脂肪细胞上的跨膜蛋白)结合而发挥其调节功能。铁调素的结合促进膜铁转运蛋白降解，阻止铁从细胞中输出以及铁释放到血浆中。
发明内容
本公开内容的多个方面提供了用于治疗高铁调素病症的方法。特别地，提供了用于治疗慢性病性贫血(anemia of chronic disease，ACD)的方法。ACD是常发生于涉及炎症的慢性病症中的贫血类型。ACD可损害与慢性病症相关的潜在炎性过程，并且是导致不良结局的重要因素。ACD通常通过免疫和炎性作用驱动的机制产生，所述免疫和炎性作用包括红细胞存活缩短、红系祖细胞增殖受损以及铁代谢异常。在一些实施方案中，在ACD中观察到的铁代谢作用与炎性细胞因子增加引起的铁调素上调相关，从而导致巨噬细胞铁螯合和铁限制性红细胞生成。此外，在ACD中，诱导铁调素合成的促炎性细胞因子(例如IL-6和抑瘤素-M)通常会提高，并与该铁螯合(iron sequestration)、巨噬细胞铁负荷以及髓系增生和巨噬细胞活化相关(参见，例如图11)
本公开内容的一些方面涉及通过向患有ACD的对象皮下施用与血幼素(HJV)结合的分离的抗体连同有益地低的最大血清浓度(C最大)来实现有效的生物可利用度。在一些实施方案中，皮下施用抗HJV抗体与静脉内施用相同的抗体相比，在更低的抗HJV抗体最大浓度(C最大)下产生了相当的药效学作用(例如，循环铁调素-25水平降低，TSAT％提高，和/或血清铁水平提高)。C最大是在施用药剂/抗体之后至施用第二剂量之前药物(例如，抗HJV抗体)的最大(或峰值)血清浓度。在一些实施方案中，在施用抗HJV抗体之后的短时间内(例如，12小时内、24小时内)实现低C最大使血清铁响应的不期望的提高最小化，和/或使抗体的脱靶效应(例如，与RGMa结合)的机会最小化。在一些实施方案中，通过皮下施用抗HJV抗体来减弱(blunt)C最大避免了血清铁响应的不期望的急剧提高。在一些实施方案中，通过皮下施用抗HJV抗体来减弱C最大降低了抗体的脱靶效应。
本公开内容的一些方面还涉及与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其用于治疗患有ACD的对象的方法中，其中通过皮下施用向所述对象施用所述分离的抗体，并且其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区(VH)，并且包含含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
本公开内容的一些方面还涉及与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其用于在患有ACD的对象中抑制HJV活性的方法中，其中通过皮下施用向所述对象施用所述分离的抗体，并且其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区(VH)，并且包含含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
在一些实施方案中，施用(例如，静脉内注射或皮下注射)抗HJV抗体降低了循环铁调素-25(例如，血清铁调素-25或血浆铁调素-25)，其为铁调素的活性形式。
在一些方面中，本公开内容提供了用于在患有ACD的对象中降低铁调素-25的方法，所述方法包括：向对象施用有效量的与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区(VH)，和含有SEQ ID NO：39的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。在一些方面中，本公开内容提供了与血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其用于在患有ACD的对象中降低铁调素-25的方法中，其中所述抗体包含：含有SEQ IDNO：38的氨基酸序列的重链可变区(VH)，和含有SEQ ID NO：39的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。在一些实施方案中，对象通过皮下注射进行施用。在一些实施方案中，所述施用在施用之后4小时、6小时、8小时、12小时、28小时、24小时、2天、3天、4天、5天、6天、1周或2周降低铁调素-25。在一些实施方案中，与施用之前所述对象中的铁调素-25水平相比，所述施用将铁调素-25降低了至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的铁调素-25。
ACD通常与具有慢性免疫激活的病症相关，包括例如慢性肾病、慢性肾衰竭、癌症(例如实体瘤、血液学肿瘤，例如骨髓瘤)、感染(例如病毒感染、细菌感染、寄生虫感染、真菌感染)、自身免疫病(例如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮和相关病症，例如血管炎、结节病和炎性肠病)和涉及炎症的其它慢性病症，例如糖尿病和慢性心力衰竭。在一些实施方案中，本文提供的方法可用于治疗与这样的病症相关的ACD。
在一些方面中，本公开内容提供了治疗患有慢性病性贫血的对象的方法。在一些实施方案中，所述方法包括：向所述对象施用有效量的与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体。
在一些实施方案中，所述抗体包含：如X1YGMN(SEQ ID NO：105)所示的重链互补决定区1(HC CDR1)，其中X1可以是N或Y；如MIYYDSSX2KHYADSVKG(SEQ ID NO：106)所示的重链互补决定区2(HC CDR2)，其中X2可以是E或D；如GX3TPDX4(SEQ ID NO：107)所示的重链互补决定区3(HC CDR3)，其中X3可以是T或S，并且X4可以是Y、V或K；和/或如RSSQSLX5X6SDGX7TFLX8(SEQ ID NO：108)所示的轻链互补决定区1(LC CDR1)，其中X5可以是A或E，X6可以是T、S、E或D，X7可以是D、Y或G，并且X8可以是E或H；如X9VSX10RFS(SEQ ID NO：109)所示的轻链互补决定区2(LC CDR2)，其中X9可以是E、D或A，并且X10可以是N、S、T、E或H；如X11QX12TX13DPX14X15(SEQ ID NO：110)所示的轻链互补决定区3(LC CDR3)，其中X11可以是F或M，X12可以是V或A，X13可以是H或Y，X14可以是M、L或V，并且X15可以是T或S。
在一些实施方案中，抗体包含含有与SEQ ID NO:38具有至少85％同一性的氨基酸序列的VH，和/或包含含有与SEQ ID NO:39具有至少85％同一性的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的VH并且包含含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，抗体是人源化抗体。在一些实施方案中，人源化抗体包含人源化VH和/或人源化VL。在一些实施方案中，抗体选自全长IgG、Fab片段、F(ab’)片段、F(ab’)2片段、scFv和Fv。在一些实施方案中，抗体是全长IgG。在一些实施方案中，抗体包含同种型IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区。在一些实施方案中，抗体还包含SEQ ID NO:46、48、112或113中所示的重链恒定区。在一些实施方案中，抗体还包含SEQ ID NO:47中所示的轻链恒定区。在一些实施方案中，抗体包含：(i)含有与SEQ ID NO:61或117具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链，和/或含有与SEQ ID NO:62具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；或(ii)含有与SEQ ID NO:63或118具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链，和/或含有与SEQ ID NO:62具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO:61或117的氨基酸序列重链并且包含含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO:63或118的氨基酸序列的重链并且包含含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链。
在一些实施方案中，对象是红细胞输注依赖性的。在一些实施方案中，对象是红细胞输注非依赖性的。在一些实施方案中，慢性病性贫血是铁限制性贫血。在一些实施方案中，铁限制性贫血与功能性铁缺乏相关。
在一些实施方案中，慢性病性贫血与慢性肾病相关(或由慢性肾病引起)。
在一些实施方案中，慢性病性贫血与癌症相关(或由癌症引起)。在一些实施方案中，所述癌症是骨髓瘤。
在一些实施方案中，慢性病性贫血与慢性感染相关(或由慢性感染引起)。在一些实施方案中，感染是细菌感染、病毒感染、真菌感染或寄生虫感染。
在一些实施方案中，慢性病性贫血与自身免疫病相关(或由自身免疫病引起)。在一些实施方案中，慢性病性贫血与涉及炎症的慢性疾病相关(或由涉及炎症的慢性疾病引起)。在一些实施方案中，涉及炎症的慢性疾病是炎性肠病、糖尿病或心力衰竭。
在一些实施方案中，对象被鉴定为在治疗之前具有高铁调素水平。在一些实施方案中，对象被鉴定为具有功能性铁缺乏。在一些实施方案中，对象被鉴定为表现出炎症和/或铁限制性红细胞生成。
在一些实施方案中，对象是人。
在一些方面中，本公开内容还提供了与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体和包含该抗体的组合物。在一些实施方案中，抗体包含：如X1YGMN(SEQ ID NO：105)所示的重链互补决定区1(HC CDR1)，其中X1可以是N或Y；和/或如MIYYDSSX2KHYADSVKG(SEQ ID NO：106)所示的重链互补决定区2(HC CDR2)，其中X2可以是E或D；和/或如GX3TPDX4(SEQ ID NO：107)所示的重链互补决定区3(HC CDR3)，其中X3可以是T或S，并且X4可以是Y、V或K。在一些实施方案中，抗体包含：如RSSQSLX5X6SDGX7TFLX8(SEQ ID NO：108)所示的轻链互补决定区1(LCCDR1)，其中X5可以是A或E，X6可以是T、S、E或D，X7可以是D、Y或G，并且X8可以是E或H；和/或如X9VSX10RFS(SEQ ID NO：109)所示的轻链互补决定区2(LC CDR2)，其中X9可以是E、D或A，并且X10可以是N、S、T、E或H；和/或如X11QX12TX13DPX14X15(SEQ ID NO：110)所示的轻链互补决定区3(LC CDR3)，其中X11可以是F或M，X12可以是V或A，X13可以是H或Y，X14可以是M、L或V，并且X15可以是T或S。
在一些方面中，本公开内容还提供了与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：(i)含有SEQ ID NO：7的氨基酸序列的重链可变区(VH)的重链互补决定区1(HCCDR1)、重链互补决定区2(HC CDR2)、和重链互补决定区3(HC CDR3)；和/或(ii)含有SEQ IDNO：8的氨基酸序列的轻链可变区(VL)的轻链互补决定区1(LC CDR1)、轻链互补决定区2(LCCDR2)和轻链互补决定区3(LC CDR3)。在一些实施方案中，所述抗体包含：SEQ ID NO：1的HCCDR1、SEQ ID NO：2的HC CDR2、SEQ ID NO：3的HC CDR3，和/或SEQ ID NO：4的LC CDR1、SEQID NO：5的LC CDR2、SEQ ID NO：6的LC CDR3。在一些实施方案中，所述抗体包含含有与SEQID NO：7具有至少85％同一性的氨基酸序列的VH，和/或包含含有与SEQ ID NO:8具有至少85％同一性的氨基酸序列的VL。
在一些方面中，本公开内容提供了与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：(i)含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的重链可变区(VH)的重链互补决定区1(HCCDR1)、重链互补决定区2(HC CDR2)、和重链互补决定区3(HC CDR3)；和/或(ii)含有SEQ IDNO:30的氨基酸序列的轻链可变区(VL)的轻链互补决定区1(LC CDR1)、轻链互补决定区2(LC CDR2)和轻链互补决定区3(LC CDR3)。在一些实施方案中，所述抗体包含：SEQ ID NO:1的HC CDR1、SEQ ID NO:2的HC CDR2、SEQ ID NO:3的HC CDR3和/或SEQ ID NO:4的LC CDR1、SEQ ID NO:49的LC CDR2、SEQ ID NO:24的LC CDR3。在一些实施方案中，所述抗体包含含有与SEQ ID NO:7具有至少85％同一性的氨基酸序列的VH，和/或包含含有与SEQ ID NO:30具有至少85％同一性的氨基酸序列的VL。
在一些方面中，本公开内容提供了与血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：(i)含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的重链可变区(VH)的重链互补决定区1(HCCDR1)、重链互补决定区2(HC CDR2)、和重链互补决定区3(HC CDR3)；(ii)和/或含有SEQ IDNO:31的氨基酸序列的轻链可变区(VL)的轻链互补决定区1(LC CDR1)、轻链互补决定区2(LC CDR2)和轻链互补决定区3(LC CDR3)。在一些实施方案中，所述抗体包含：SEQ ID NO:1的HC CDR1、SEQ ID NO:2的HC CDR2、SEQ ID NO:3的HC CDR3和/或SEQ ID NO:4的LC CDR1、SEQ ID NO:18的LC CDR2、SEQ ID NO:25的LC CDR3。在一些实施方案中，所述抗体包含含有与SEQ ID NO:7具有至少85％同一性的氨基酸序列的VH，和/或包含含有与SEQ ID NO:8具有至少85％同一性的氨基酸序列的VL。
在一些方面中，本公开内容提供了与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：(i)含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的重链可变区(VH)的重链互补决定区1(HCCDR1)、重链互补决定区2(HC CDR2)、和重链互补决定区3(HC CDR3)；和/或(ii)含有SEQ IDNO:32的氨基酸序列的轻链可变区的轻链互补决定区1(LC CDR1)、轻链互补决定区2(LCCDR2)和轻链互补决定区3(LC CDR3)。在一些实施方案中，所述抗体包含：SEQ ID NO:1的HCCDR1、SEQ ID NO:2的HC CDR2、SEQ ID NO:3的HC CDR3，和/或SEQ ID NO:14的LC CDR1、SEQID NO:19的LC CDR2、SEQ ID NO:25的LC CDR3。在一些实施方案中，所述抗体包含含有与SEQ ID NO:7具有至少85％同一性的氨基酸序列的VH，和/或包含含有与SEQ ID NO:32具有至少85％同一性的氨基酸序列的VL。
在一些方面中，本公开内容提供了与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：(i)含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的重链可变区(VH)的重链互补决定区1(HCCDR1)、重链互补决定区2(HC CDR2)、和重链互补决定区3(HC CDR3)；和/或(ii)含有SEQ IDNO:33的氨基酸序列的轻链可变区的轻链互补决定区1(LC CDR1)、轻链互补决定区2(LCCDR2)和轻链互补决定区3(LC CDR3)。在一些实施方案中，所述抗体包含：SEQ ID NO:1的HCCDR1、SEQ ID NO:2的HC CDR2、SEQ ID NO:3的HC CDR3，和/或SEQ ID NO:15的LC CDR1、SEQID NO:20的LC CDR2、SEQ ID NO:26的LC CDR3。在一些实施方案中，所述抗体包含含有与SEQ ID NO:7具有至少85％同一性的氨基酸序列的VH，和/或包含含有与SEQ ID NO:33具有至少85％同一性的氨基酸序列的VL。
在一些方面中，本公开内容提供了与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：(i)含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链可变区(VH)的重链互补决定区1(HCCDR1)、重链互补决定区2(HC CDR2)、和重链互补决定区3(HC CDR3)；和/或(ii)含有SEQ IDNO:35的氨基酸序列的轻链可变区(VL)的轻链互补决定区1(LC CDR1)、轻链互补决定区2(LC CDR2)和轻链互补决定区3(LC CDR3)。在一些实施方案中，所述抗体包含：SEQ ID NO:9的HC CDR1、SEQ ID NO:2的HC CDR2、SEQ ID NO:3的HC CDR3，和/或SEQ ID NO:16的LCCDR1、SEQ ID NO:21的LC CDR2、SEQ ID NO:27的LC CDR3。在一些实施方案中，所述抗体包含含有与SEQ ID NO:34具有至少85％同一性的氨基酸序列的VH，和/或包含含有与SEQ IDNO:35具有至少85％同一性的氨基酸序列的VL。
在一些方面中，本公开内容提供了与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：(i)含有SEQ ID NO:36的氨基酸序列的重链可变区(VH)的重链互补决定区1(HCCDR1)、重链互补决定区2(HC CDR2)、和重链互补决定区3(HC CDR3)；和/或(ii)含有SEQ IDNO:37的氨基酸序列的轻链可变区(VL)的轻链互补决定区1(LC CDR1)、轻链互补决定区2(LC CDR2)和轻链互补决定区3(LC CDR3)。在一些实施方案中，所述抗体包含：SEQ ID NO:1的HC CDR1、SEQ ID NO:10的HC CDR2、SEQ ID NO:11的HC CDR3，和/或SEQ ID NO:17的LCCDR1、SEQ ID NO:18的LC CDR2、SEQ ID NO:28的LC CDR3。在一些实施方案中，所述抗体包含含有与SEQ ID NO:36具有至少85％同一性的氨基酸序列的VH，和/或包含含有与SEQ IDNO:37具有至少85％同一性的氨基酸序列的VL。
在一些方面中，本公开内容提供了与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：(i)含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区(VH)的重链互补决定区1(HCCDR1)、重链互补决定区2(HC CDR2)、和重链互补决定区3(HC CDR3)；和/或(ii)含有SEQ IDNO:39的氨基酸序列的轻链可变区的轻链互补决定区1(LC CDR1)、轻链互补决定区2(LCCDR2)和轻链互补决定区3(LC CDR3)。在一些实施方案中，所述抗体包含：SEQ ID NO:1的HCCDR1、SEQ ID NO:2的HC CDR2、SEQ ID NO:3的HC CDR3，和/或SEQ ID NO:17的LC CDR1、SEQID NO:5的LC CDR2、SEQ ID NO:27的LC CDR3。在一些实施方案中，所述抗体包含含有与SEQID NO:38具有至少85％同一性的氨基酸序列的VH，和/或包含含有与SEQ ID NO:39具有至少85％同一性的氨基酸序列的VL。
在一些方面中，本公开内容提供了与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：(i)含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区(VH)的重链互补决定区1(HCCDR1)、重链互补决定区2(HC CDR2)、和重链互补决定区3(HC CDR3)；和/或(ii)含有SEQ IDNO:41的氨基酸序列的轻链可变区的轻链互补决定区1(LC CDR1)、轻链互补决定区2(LCCDR2)和轻链互补决定区3(LC CDR3)。在一些实施方案中，所述抗体包含：SEQ ID NO:1的HCCDR1、SEQ ID NO:2的HC CDR2、SEQ ID NO:3的HC CDR3，和/或SEQ ID NO:50的LC CDR1、SEQID NO:22的LC CDR2、SEQ ID NO:28的LC CDR3。在一些实施方案中，所述抗体包含含有与SEQ ID NO:38具有至少85％同一性的氨基酸序列的VH，和/或包含含有与SEQ ID NO:41具有至少85％同一性的氨基酸序列的VL。
在一些方面中，本公开内容提供了与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：(i)含有SEQ ID NO:42的氨基酸序列的重链可变区(VH)的重链互补决定区1(HCCDR1)、重链互补决定区2(HC CDR2)、和重链互补决定区3(HC CDR3)；和/或(ii)含有SEQ IDNO:43的氨基酸序列的轻链可变区(VL)的轻链互补决定区1(LC CDR1)、轻链互补决定区2(LC CDR2)和轻链互补决定区3(LC CDR3)。在一些实施方案中，所述抗体包含：SEQ ID NO:1的HC CDR1、SEQ ID NO:2的HC CDR2、SEQ ID NO:12的HC CDR3，和/或SEQ ID NO:15的LCCDR1、SEQ ID NO:23的LC CDR2、SEQ ID NO:27的LC CDR3。在一些实施方案中，所述抗体包含含有与SEQ ID NO:42具有至少85％同一性的氨基酸序列的VH，和/或包含含有与SEQ IDNO:43具有至少85％同一性的氨基酸序列的VL。
在一些方面中，本公开内容提供了与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：(i)含有SEQ ID NO:44的氨基酸序列的重链可变区(VH)的重链互补决定区1(HCCDR1)、重链互补决定区2(HC CDR2)、和重链互补决定区3(HC CDR3)；和/或(ii)含有SEQ IDNO:45的氨基酸序列的轻链可变区(VL)的轻链互补决定区1(LC CDR1)、轻链互补决定区2(LC CDR2)和轻链互补决定区3(LC CDR3)。在一些实施方案中，所述抗体包含：SEQ ID NO:1的HC CDR1、SEQ ID NO:2的HC CDR2、SEQ ID NO:13的HC CDR3，和/或SEQ ID NO:16的LCCDR1、SEQ ID NO:21的LC CDR2、SEQ ID NO:29的LC CDR3。在一些实施方案中，所述抗体包含含有与SEQ ID NO:44具有至少85％同一性的氨基酸序列的VH，和/或包含含有与SEQ IDNO:45具有至少85％同一性的氨基酸序列的VL。
在一些方面中，本公开内容提供了与血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3，其与表1中列出的抗体的任一种的HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3相比总共包含不超过10个氨基酸变异，优选不超过8个氨基酸变异，更优选不超过5个氨基酸变异，以及更优选不超过2个氨基酸变异；和/或其中所述抗体包含LC CDR1、LCCDR2和LC CDR3，其与表1中列出的抗体的任一种的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3相比总共包含不超过10个氨基酸变异，优选不超过8个氨基酸变异。
在一些实施方案中，本文中提供的任何抗体是人源化抗体。在一些实施方案中，人源化抗体包含人源化VH和/或人源化VL。在一些实施方案中，抗体选自全长IgG、Fab片段、F(ab’)片段、F(ab’)2片段、scFv和Fv。在一些实施方案中，抗体是全长IgG。在一些实施方案中，抗体包含同种型IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区。在一些实施方案中，抗体还包含SEQ ID NO:46、48、112或113中所示的重链恒定区。在一些实施方案中，抗体还包含SEQ IDNO:47中所示的轻链恒定区。在一些实施方案中，抗体包含：(i)含有与SEQ ID NO:51或114具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链，和/或含有与SEQ ID NO:52至56具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；(ii)含有与SEQ ID NO:57或115具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链，和/或含有与SEQ ID NO:58具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；(iii)含有与SEQ ID NO:59或116具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链，和/或含有与SEQ ID NO:60具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；(iv)含有与SEQ ID NO:61或117具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链，和/或含有与SEQ ID NO:62具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；(v)含有与SEQ ID NO:63或118具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链，和/或含有与SEQ ID NO:62具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；(vi)含有与SEQ ID NO:61或117具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链，和/或含有与SEQ ID NO:65具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；(vii)含有与SEQ ID NO:66或119具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链，和/或含有与SEQ ID NO:67具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；或者(viii)含有与SEQ ID NO:68或120具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链，和/或含有与SEQ ID NO:69具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链。
在一些实施方案中，抗体以小于100nM的平衡解离常数(KD)结合HJV。在一些实施方案中，抗体以小于1nM的平衡解离常数(KD)结合HJV。
在一些实施方案中，抗体与分子载荷缀合。在一些实施方案中，分子载荷是可检测剂、诊断剂或治疗剂。
在一些方面中，本公开内容还提供了编码本文所述的分离的抗体的核酸。
在一些方面中，本公开内容还提供了包含编码本文所述的抗体的核酸的载体。在一些实施方案中，载体包含如表3中所示的核酸序列的核酸序列。
在一些方面中，本公开内容还提供了宿主细胞，其包含编码本文所述的分离的抗体的核酸和/或包含含有所述核酸的载体。
在一些方面中，本公开内容还提供了药物组合物，其包含本文所述的抗HJV抗体和可药用载体。
在一些方面中，本公开内容还提供了用于产生抗人血幼素(HJV)抗体的方法，所述方法包括：(i)在允许表达结合人血幼素(HJV)的抗体的条件下培养权利要求44所述的宿主细胞；以及(ii)收获所培养的宿主细胞或培养物以收集结合人血幼素(HJV)的抗体。在一些实施方案中，所述方法包括纯化结合人血幼素(HJV)的抗体。
在一些方面中，本公开内容还提供了与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其通过在宿主细胞中表达以下而产生：(i)编码重链的核酸序列，其中核酸序列与SEQ ID NO:92具有至少90％同一性；和/或(ii)编码轻链的核酸序列，其中核酸序列与SEQ ID NO:93具有至少90％同一性。在一些方面中，本公开内容还提供了与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其通过在宿主细胞中表达以下而产生：(i)编码重链的核酸序列，其中核酸序列与SEQ IDNO:94具有至少90％同一性；和/或(ii)编码轻链的核酸序列，其中核酸序列与SEQ ID NO:93具有至少90％同一性。在一些实施方案中，宿主细胞是中国仓鼠卵巢(Chinese hamsterovary，CHO)细胞、dhfr-CHO细胞、人胚肾(human embryonic kidney，HEK)-293细胞、verdareno(VERO)细胞、非分泌型null(NS0)细胞、人胚胎视网膜(PER.C6)细胞、Sp2/0细胞、小仓鼠肾(baby hamster kidney，BHK)细胞、马丁-达比犬肾(Madin-Darby canine kidney，MDCK)细胞、马丁-达比牛肾(Madin-Darby Bovine Kidney，MDBK)细胞或由SV40(COS)细胞转化的猴肾CV1系。
在一些方面中，本公开内容提供了与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其用于治疗患有慢性病性贫血的对象的方法中，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区(VH)，并且包含含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
在一些方面中，本公开内容提供了与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其用于在患有慢性病性贫血的对象中抑制铁螯合，其中抗体包含含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区(VH)，并且包含含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
在一些实施方案中，贫血由促炎性细胞因子诱导的铁调素合成导致，并且其中抗体的施用减轻了贫血。
在一些实施方案中，促炎性细胞因子包含白介素-6(IL-6)。
通过结合附图的以下描述，可以更充分地理解本教导的前述和其他方面、实施方式、作用、功能、特征和实施方案。
附图说明
并入并构成本说明书一部分的附图举例说明了某些实施方案，并且与书面描述一起用于提供本文公开的组合物和方法的某些方面的非限制性实例。
图1A至1G是示出抗HJV抗体的产生和表征的图。图1A示出了产生抗血幼素抗体、人源化和亲和力成熟的示意性过程。图1B至1G示出了通过BIAcore分析抗体HA、hHA-004、hHA-008、hHA-009和hHA-011的传感图。
图2A至2C是示出抗HJV抗体的BMP报道基因测定的图。图2A示出了HJV BMP报道物测定的一般原理。图2B示出了抗HJV抗体在抑制RGMc BMP信号传导中的作用。图2C示出了抗HJV抗体在抑制RGMa BMP信号传导中的作用。
图3是示出抗HJV抗体与HEK293细胞非特异性结合的图。每组从左到右的条：100μg/ml、10μg/ml和1μg/ml。
图4A至4C是示出hHA-008和hHA-008-QL的结构和设计的示意图。图4A示出了hHA-008的结构。图4B示出了hHA-008-QL的结构。图4C示出了hHA-008和hHA-008-QL之间抗体结构的比较。
图5是示出用hHA-008或hHA-008-QL攻击的CD4+T细胞应答外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)的图。
图6A至6C是示出hHA-008在大鼠中的PK/PD分析的图。图6A示出通过TSAT％测量的hHA-008的最大作用发生在处理之后4至8天。图6B示出了在雌性cyno中在注射之后约1至4天，通过TSAT％测量的hHA-008达到最大作用。图6C示出了在雄性cyno中在注射之后约1至4天，通过TSAT％测量的hHA-008达到最大作用，但其中一只雄性对hHA-008处理没有响应。
图7A至7F示出了在具有6mpk的单IV剂量的Cyno中的PK/PD相关性。图7A示出了最大TSAT％提高发生在注射之后1至4天(T最大＝1至4天)，并且其中一只受试动物在第34天左右TSAT急剧下降。图7B示出了注射hHA-008之后血浆铁调素-25浓度随时间的变化。图7C示出了注射hHA-008之后血浆hHA-008浓度随时间的变化。图7D至7F示出了hHA-008在PK(血浆抗体浓度)与TSAT％和血浆铁调素-25浓度之间具有强的PK/PD相关性。每个受试Cyno的结果都示于图7D(Cyno 1)、图7E(Cyno 2)和图7F(Cyno 3)中。
图8A至8C示出了hHA-008抗体以剂量依赖性方式调节TSAT％。图8A示出了在用0(载剂对照)或0.6mpk hHA-008处理动物之后的TSAT％和hHA008浓度。图8B示出了在用0(载剂对照)或3mpk hHA-008处理动物之后的TSAT％和hHA-008浓度。图8C示出了在用0(载剂对照)或60mpk hHA-008处理动物之后的TSAT％和hHA-008浓度。
图9A至9C是示出hHA-008和hHA-008-QL之间的PK/PD比较的图。图9A示出了hHA-008或hHA-008-QL处理之后Cyno中TSAT％随时间的变化。图9A示出了hHA-008或hHA-008-QL处理之后Cyno中TSAT％随时间的变化。图9B示出了hHA-008或hHA-008-QL处理之后Cyno中随时间的抗体血浆浓度。图9C示出了hHA-008和hHA-008-QL的血浆浓度下降的时间过程。
图10A至10B是示出在pH 6.0或pH 7.4下hHA-008和hHA-008-QL的FcRn的结合的图。图10A示出了在pH 6.0下hHA-008和hHA-008-QL的FcRn的结合。图10B示出了在pH 7.4下hHA-008和hHA-008-QL的FcRn的结合。X轴：时间。Y轴：响应。
图11示出了以某些高铁调素病症来表征的骨髓增生循环。
图12示出了铁调素刺激途径和铁调素对铁稳态的生理调节。
图13是示出IL-6在Cyno中诱导铁调素表达并且hHA-008处理以剂量依赖性方式阻止炎症诱导的(IL6)铁调素-25提高的图。
图14示出了hHA-008与3720-RG-050上的第170至183位氨基酸(SSPMALGANATATR(SEQ ID NO：121))相互作用。相互作用发生在3720-RG-050上第170、171、180、182、183位氨基酸处。
图15示出了3720-RG-050和hHA-008的相互作用。使用Swiss Model软件通过同源性产生3720-RG-050 PDB结构。3720-RG-050第170至183位氨基酸(SSPMALGANATATR(SEQ IDNO：121))示出在A、B、C、D、E中：前视图(A)、后视图(B)、侧视图1(C)、侧视图2(D)和顶视图(E)的带状/表面表示。F、G、H、I、J：前视图(F)、后视图(G)、侧视图1(H)、侧视图2(I)和顶视图(J)的带状表示。
图16示出了hHA-008-QL与3720-RG-050的第169至182位氨基酸(TSSPMALGANATAT(SEQ ID NO：122))和第289至300位氨基酸(SQRLSRSERNRR(SEQ ID NO：127))相互作用。相互作用发生在3720-RG-050上的第169、171、180、182；289、293、294、295、297、300位氨基酸上。
图17示出了相互作用3720-RG-050/hHA-008-QL。使用Swiss Model软件通过同源性产生3720-RG-050PDB结构。3720-RG-050第169至182位氨基酸(TSSPMALGANATAT(SEQ IDNO：122))和第289至291位氨基酸(SQR)示于A、B、C、D、E中：前视图(A)、后视图(B)、侧视图1(C)、侧视图2(D)和顶视图(E)的带状/表面表示。F、G、H、I、J：前视图(F)、后视图(G)、侧视图1(H)、侧视图2(I)和顶视图(J)的带状表示。
图18示出了hHA-008在食蟹猴中以剂量依赖性方式有效阻止IL-6诱导的血清铁抑制。
图19示出了在向Sprague-Dawley大鼠皮下施用hHA-008之后，PD响应(例如，铁调素-25浓度和TSAT％)的下降与hHA-008血清浓度的下降一致(图19)。
图20A至20D示出了皮下施用hHA-008之后食蟹猴中的PK/PD分析。图20A示出了在施用之后4天，SC注射与IV注射之间的血清浓度-时间谱变得无法区分。图20B至20D示出了通过皮下注射或静脉内注射0.3mpk、0.6mpk和1mpk hHA-008注射剂之后血清铁恢复到基线水平，这与hHA-008血清浓度的下降一致。
具体实施方式
根据一些方面，本公开内容提供了用于靶向铁调素的铁调素拮抗剂，其有效抑制铁调素功能和/或降低铁调素表达，特别是有效调节铁稳态以治疗慢性病性贫血(ACD)和/或者其一种或更多种症状或并发症。因此，在相关方面中，本公开内容提供了这样的组合物和方法，所述组合物和方法用于治疗ACD，其可与本文所公开的慢性肾病、癌症、慢性感染、自身免疫病或其它慢性炎性病症相关。
本公开内容的某些方面涉及这样的观察结果：血幼素(HJV)是铁调素合成的调节剂并且血幼素功能的丧失可能与铁过载相关。例如，在一些实施方案中，纯合HJV敲低动物不能响应于IL-6而放大铁调素合成，并且不能对急性炎症产生有效的低铁血应答。因此，在一些实施方案中，本文提供的方法涉及向有此需要的对象以有效治疗高铁调素病症的量施用铁调素拮抗剂，其可以是血幼素拮抗剂。在一些实施方案中，血幼素拮抗剂是抗血幼素抗体。在一些实施方案中，抗血幼素抗体结合RGMc作为其主要作用模式(与RGMa和RGMb相比)。因此，在一些实施方案中，抗血幼素抗体相对于RGMa和/或RGMb优先结合RGMc。在一些实施方案中，抗血幼素抗体以小于一百纳摩尔(nM)的平衡解离常数(KD)(KD<100nM)结合RGMc。然而，在一些实施方案中，抗血幼素抗体以与RGMa和/或RGMb相似的亲和力结合RGMc。
通过以下描述结合附图，可以更充分地理解本教导的前述和其他方面、实施方式、作用、功能性、特征和实施方案。
I.定义
施用：本文中使用的术语“施用”(“administering”或“administration”)意指以生理和/或药理学上可用的方式向对象提供复合物(例如，以治疗对象中的病症)。
慢性病性贫血：本文中使用的术语“慢性病性贫血”(ACD)是指在引起主动免疫/炎性应答从而导致血液运输氧能力缺乏的疾病或病症的情况下出现的血液学病症。慢性病症(例如，持续3个月或更长时间)可导致血液中铁水平较低，但巨噬细胞和肝细胞中的铁储存水平正常甚至增加。在这种情况下，炎症可阻止使用储存的铁来产生足够的健康红细胞，从而导致贫血。在一些实施方案中，ACD是红细胞缺乏、血红蛋白缺乏和/或总血容量缺乏的结果。在一些实施方案中，ACD与铁代谢的改变和身体铁的转移(例如，通过巨噬细胞螯合)、噬红细胞作用(haemophagocytosis)、红细胞生成减少和/或对促红细胞生成素刺激的响应减弱相关。在一些实施方案中，ACD可与以下一种或更多种因素相关或特征在于以下一种或更多种因素：促红细胞生成素(EPO)产生受损、对EPO的骨髓红系响应迟钝、铁限制性红细胞生成以及EPO响应性细胞池减少，同时伴有与炎症相关的相关慢性病症。因此，在一些实施方案中，当在存在潜在慢性病症或疾病的情况下观察时，低血清铁水平可提供对象中存在ACD的诊断标记。在一些实施方案中，ACD是铁限制性贫血，其特征可在于功能性铁缺乏，其可由于组织巨噬细胞中的铁积累而存在于对象中。与ACD相关的疾病包括共有免疫激活特征的疾病。与ACD相关的病症的实例包括但不限于慢性肾病、癌症(例如骨髓瘤)、感染(例如病毒感染、细菌感染、寄生虫感染或真菌感染)、恶性病(malignancy)(例如血液学肿瘤或实体瘤)、自身免疫病(例如类风湿性关节炎、狼疮、血管炎、结节病)、肾病(例如慢性肾衰竭)、心脏病和涉及炎症的慢性疾病(例如炎性肠病、糖尿病、心力衰竭)。
亲和力成熟的抗体：“亲和力成熟的抗体”在本文中用于指在一个或更多个CDR中具有一个或更多个改变的抗体，所述改变导致与亲本抗体(不具有改变)相比该抗体对靶抗原的亲和力(即KD、kd或ka)的改善。示例性的亲和力成熟的抗体将对靶抗原具有纳摩尔或甚至皮摩尔的亲和力。用于产生亲和力成熟的抗体的多种程序是本领域已知的，包括筛选已使用生物展示制备的组合抗体文库。例如，Marks et al.,BioTechnology,10:779-783(1992)描述了通过VH和VL结构域混编(shuffling)的亲和力成熟。CDR和/或框架残基的随机诱变由以下描述：Barbas et al.,Proc.Nat.Acad.Sci.USA,91:3809-3813(1994)；Schier et al.,Gene,169:147-155(1995)；Yelton et al.,J.Immunol.,155:1994-2004(1995)；Jackson et al.,J.Immunol.,154(7):3310-3319(1995)；和Hawkins et al,J.Mol.Biol.,226:889-896(1992)。在选择性诱变位置以及在与活性增强氨基酸残基的接触或超突变位置的选择性突变描述于美国专利No.6,914,128 B1中。
抗体：本文中使用的术语“抗体”是指包含至少一个免疫球蛋白可变结构域或至少一个抗原决定簇(例如与抗原特异性结合的互补位)的多肽。在一些实施方案中，抗体是全长抗体。在一些实施方案中，抗体是嵌合抗体。在一些实施方案中，抗体是人源化抗体。然而，在一些实施方案中，抗体是Fab片段、F(ab')2片段、Fv片段或scFv片段。在一些实施方案中，抗体是来源于骆驼科抗体的纳米抗体或来源于鲨鱼抗体的纳米抗体。在一些实施方案中，抗体是双抗体。在一些实施方案中，抗体包含具有人种系序列的框架。在另一个实施方案中，抗体包含选自IgG、IgG1、IgG2、IgG2A、IgG2B、IgG2C、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2、IgD、IgM和IgE恒定结构域的重链恒定结构域。在一些实施方案中，抗体包含重(H)链可变区(在本文中简称为VH)和/或轻(L)链可变区(在本文中简称为VL)。在一些实施方案中，抗体包含恒定结构域，例如Fc区。免疫球蛋白恒定结构域是指重链或轻链恒定结构域。人IgG重链和轻链恒定结构域氨基酸序列及其功能变异是已知的。关于重链，在一些实施方案中，本文中所述的抗体的重链可以是alpha(α)、delta(Δ)、epsilon(ε)、gamma(γ)或mu(μ)重链。在一些实施方案中，本文中所述的抗体的重链可包含人alpha(α)、delta(Δ)、epsilon(ε)、gamma(γ)或mu(μ)重链。在一个具体实施方案中，本文中所述的抗体包含人γ1 CH1、CH2和/或CH3结构域。在一些实施方案中，VH结构域的氨基酸序列包含人gamma(γ)重链恒定区的氨基酸序列，例如本领域已知的任何。人恒定区序列的非限制性实例已在本领域中描述，例如，参见美国专利No.5,693,780和Kabat E A et al.,(1991)同上。在一些实施方案中，VH结构域包含与本文中提供的任何可变链恒定区具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或至少99％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，对抗体进行修饰，例如，通过糖基化、磷酸化、SUMO化和/或甲基化进行修饰。在一些实施方案中，抗体是与一个或更多个糖或碳水化合物分子缀合的糖基化抗体。在一些实施方案中，一个或更多个糖或碳水化合物分子通过N-糖基化、O-糖基化、C-糖基化、糖基磷脂酰肌醇化(GPI锚定附着)和/或磷酸糖基化与抗体缀合。在一些实施方案中，一个或更多个糖或碳水化合物分子是单糖、二糖、寡糖或聚糖。在一些实施方案中，一个或更多个糖或碳水化合物分子是支链的寡糖或支链的聚糖。在一些实施方案中，一个或更多个糖或碳水化合物分子包括甘露糖单元、葡萄糖单元、N-乙酰氨基葡糖单元或磷脂单元。在一些实施方案中，抗体是包含多肽的构建体，所述多肽包含与接头多肽或免疫球蛋白恒定结构域连接的一个或更多个本公开内容的抗原结合片段。接头多肽包含两个或更多个通过肽键连接的氨基酸残基，并用于连接一个或更多个抗原结合部分。已经报道了接头多肽的实例(参见例如，Holliger,P.,et al.(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448；Poljak,R.J.,et al.(1994)Structure 2:1121-1123)。此外，抗体可以是较大免疫黏附分子的一部分，其通过抗体或抗体部分与一种或更多种其他蛋白质或肽的共价或非共价缔合形成。这样的免疫黏附分子的实例包括使用链霉亲和素核心区制备四聚体scFv分子(Kipriyanov,S.M.,et al.(1995)Human Antibodiesand Hybridomas 6:93-101)和使用半胱氨酸残基、标志物肽和C端多组氨酸标签以制造二价且生物素化的scFv分子(Kipriyanov,S.M.，et al.(1994)Mol.Immunol.31：1047-1058)。
大约：本文中使用的术语“大约”或“约”，如应用于一个或更多个目标值时，是指类似于所述参考值的值。在某些实施方案中，术语“大约”或“约”是指落入所述参考值的任一方向上(大于或小于)15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、或更小以内的值的范围，除非另有说明或在其他情况下从上下文中可以明显看出(除非其中这样的数字将超过可能值的100％)。
CDR：本文中使用的术语“CDR”是指抗体可变序列内的互补决定区。典型的抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，它们通常参与抗原结合。VH和VL区可以进一步细分为高变区，也称为“互补决定区”(“CDR”)，其中散布着更保守的区域，称为“框架区”(“framework region，FR”)。每个VH和VL通常由三个CDR和四个FR构成，从氨基端到羧基端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。框架区和CDR的范围可以使用本领域已知的方法精确确定，例如通过Kabat定义、IMGT定义、Chothia定义、AbM定义和/或接触定义，所有这些都是在本领域中公知的。参见例如
Kabat，E.A.，et al.(1991)Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，Fifth Edition，U.S.Department of Health and Human Services，NIHPublication No.91-3242；
Figure BDA0004016554230000181
the international ImMunoGeneTics information
Figure BDA0004016554230000182
http://www.imgt.org，Lefranc，M.-P.et al.,Nucleic Acids Res.，27：209-212(1999)；Ruiz，Met al.，Nucleic Acids Res.，28：219-221(2000)；Leffanc，M.-P.，NucleicAcids Res.，29：207-209(2001)；Leffanc，M.-P.，Nucleic Acids Res.，31：307-310(2003)；Lefranc，M-P.et al.，In Silico Biol.，5，0006(2004)[Epub]，5：45-60(2005)；Lefranc，M.-P.et al.，Nucleic Acids Res.，33：D593-597(2005)；Lefranc，M.-P.et al.，Nucleic Acids Res.，37：D1006-1012(2009)；Leffanc，M.-P.et al.，Nucleic AcidsRes.，43：D413-422(2015)；Chothia et al，(1989)Nature 342：877；Chothia，C.et al.(1987)J.Mol.Biol.196：901-917，Al-lazikani ct al(1997)J.Molec.Biol.273：927-948；and Almagro，J.Mol.Recognit.17：132-143(2004).还参见hgmp.mrc.ac.uk andbioinf.org.uk/abs.
本文中使用的CDR可以指由本领域已知的任何方法定义的CDR。两种抗体具有相同的CDR意味着两种抗体具有该CDR的相同的氨基酸序列，如通过同一方法确定，例如通过IMGT定义确定。
通常，重链和轻链的每个可变区中有三个CDR，对于每个可变区其称为CDR1、CDR2和CDR3。本文中使用的术语“CDR组”是指出现在单个可变区内的能够结合抗原的三个CDR的组。这些CDR的确切边界已根据不同的系统进行了不同的限定。Kabat(Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institutes ofHealth,Bethesda,Md.(1987)and(1991))描述的系统不仅提供了适用于抗体的任何可变区的明确残基编号系统，还提供了限定三个CDR的精确残基边界。这些CDR可以被称为KabatCDR。CDR的子部分可以被指定为L1、L2和L3或H1、H2和H3，其中“L”和“H”分别指定轻链和重链区域。这些区域可以称为Chothia CDR，其具有与Kabat CDR重叠的边界。Padlan(FASEBJ.9:133-139(1995))和MacCallum(J Mol Biol 262(5):732-45(1996))已经描述了限定与Kabat CDR重叠的CDR的其他边界。另一些CDR边界限定可能并不严格遵循上述系统之一，但仍与Kabat CDR重叠，尽管可以根据预测或者根据特定残基或残基的组或甚至整个CDR不会显著影响抗原结合的实验发现来缩短或延长它们。尽管优选的实施方案使用Kabat或Chothia定义的CDR，但是本文中使用的方法可利用根据这些系统中的任何一个定义的CDR。
CDR接枝抗体(CDR-grafted antibody)：术语“CDR接枝抗体”是指包含来自一个物种的重链和轻链可变区序列但是其中VH和/或VL的一个或更多个CDR区的序列被另一物种的CDR序列替代的抗体，例如具有鼠重链和轻链可变区(其中一个或更多个鼠CDR(例如，CDR3)已被人CDR序列替代)的抗体。
嵌合抗体：术语“嵌合抗体”是指包含来自一个物种的重链和轻链可变区序列和来自另一物种的恒定区序列的抗体，例如具有与人恒定区连接的鼠重链和轻链可变区的抗体。
互补：本文中使用的术语“互补”是指在两个核苷酸或两组核苷酸之间精确配对的能力。特别地，互补是表征氢键配对引起两个核苷酸或两组核苷酸之间结合的程度的术语。例如，如果寡核苷酸的一个位置处的碱基能够与靶核酸(例如，mRNA)的相应位置处的碱基进行氢键合，则认为在该位置处碱基彼此互补。碱基配对可包括规范的沃森-克里克(Watson-Crick)碱基配对和非沃森-克里克碱基配对(例如，Wobble碱基配对和Hoogsteen碱基配对)二者。例如，在一些实施方案中，对于互补碱基配对，腺苷型碱基(A)与胸苷型碱基(T)或尿嘧啶型碱基(U)互补，胞嘧啶型碱基(C)与鸟苷型碱基(G)互补，并且通用碱基例如3-硝基吡咯或5-硝基吲哚可以与任何A、C、U或T杂交并被认为与任何A、C、U或T互补。肌苷(I)在本领域中也被认为是通用碱基，被认为与任何A、C、U或T互补。
保守氨基酸替换：本文中使用的“保守氨基酸替换”是指不改变其中进行氨基酸替换的蛋白质的相对电荷或尺寸特征的氨基酸替换。可以根据本领域普通技术人员已知的用于改变多肽序列的方法制备变体，所述方法例如见于汇编这样的方法的参考文献中，例如Molecular Cloning:A Laboratory Manual,J.Sambrook,et al.,eds.,Fourth Edition,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,New York,2012，或Current Protocols in Molecular Biology,F.M.Ausubel,et al.,eds.,John Wiley&Sons,Inc.,New York.。氨基酸的保守替换包括在以下组内的氨基酸之间进行的替换：(a)M、I、L、V；(b)F、Y、W；(c)K、R、H；(d)A、G；(e)S、T；(f)Q、N；和(g)E、D。
交叉反应性：本文中使用的以及在靶向物质(例如，抗体)的情况下，术语“交叉反应性”是指该物质能够以相似亲和力或亲合力与相似类型或类别的超过一种抗原(例如，多个同源物、旁系同源物或直系同源物的抗原)特异性结合的特性。例如，在一些实施方案中，对相似类型或类别的人和非人灵长类抗原(例如人血幼素和非人灵长类血幼素)具有交叉反应性的抗体能够以相似亲和力或亲合力与人抗原和非人灵长类抗原结合。在一些实施方案中，抗体对相似类型或类别的人抗原和啮齿动物抗原具有交叉反应性。在一些实施方案中，抗体对相似类型或类别的啮齿动物抗原和非人灵长类抗原具有交叉反应性。在一些实施方案中，抗体对相似类型或类别的人抗原、非人灵长类抗原和啮齿动物抗原具有交叉反应性。
有效量：本文中使用的“有效量”是指单独或与一种或更多种其他活性剂组合的向对象赋予治疗效果所需的每种活性剂(例如，铁调素拮抗剂抗HJV抗体)的量。在一些实施方案中，治疗效果是降低的铁调素水平或活性、提高的转铁蛋白饱和水平(TSAT％)、循环转铁蛋白水平下降的水平、和/或减轻的疾病病症(例如，减轻的贫血)。
框架：本文中使用的术语“框架”或“框架序列”是指可变区减去CDR的剩余序列。由于CDR序列的确切定义可通过不同的系统确定，因此框架序列的含义相应地具有不同解释。六个CDR(轻链的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3和重链的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3)也将轻链和重链上的框架区分为每条链上的四个子区域(FR1、FR2、FR3和FR4)，其中CDR1位于FR1和FR2之间，CDR2位于FR2和FR3之间，并且CDR3位于FR3和FR4之间。在未将特定子区域指定为FR1、FR2、FR3或FR4的情况下，如其他人提到的框架区代表单个天然存在的免疫球蛋白链的可变区内的组合的FR。本文中使用的FR代表四个子区域之一，并且FR代表构成框架区的四个子区域中的两个或更多个。人重链和轻链接受体序列是本领域已知的。在一个实施方案中，本领域已知的接受体序列可用于本文中公开的抗体中。
血幼素(HJV):本文中使用的术语“血幼素(HJV)”(也称为排斥性导向分子C(repulsive guidance molecule C，RGMc)或2型血色素沉着病蛋白(HFE2))是指膜结合的和可溶形式的蛋白质，其通过BMP/SMAD信号传导途径调节铁调素的产生。HFE2基因编码两个已知类别的GPI锚定和糖基化的HJV分子，它们靶向膜并经历不同的命运。HJV以多种同种型存在，包括两种可溶性同种型和两种膜缔合同种型。在一些实施方案中，主要的膜缔合同种型是由N端和C端片段构成的经二硫键连接的双链形式。在一些实施方案中，全长单链同种型与膜缔合，但从细胞表面释放并积聚在细胞外流体中。在一些实施方案中，HJV可以是人(NCBI Gene ID 148738)、非人灵长类(例如，NCBI Gene ID 698805)或啮齿动物(例如，NCBI Gene ID 69585或NCBI Gene ID 310681)来源的。除HJV(RGMc)之外，排斥性导向分子家族还包括排斥性导向分子A(RGMa)和排斥性导向分子B(RGMb)。RGMa和RGMb在发育过程中在中枢神经系统中表达，并被认为参与控制轴突模式和神经元存活，而HJV在肝、心肌和骨骼肌中产生。
铁调素：本文中使用的“铁调素”是指主要在肝中产生的由HAMP基因编码的铁调节肽激素。在一些实施方案中，铁调素控制铁从吸收铁的肠细胞、从红细胞循环巨噬细胞和从储存铁的肝细胞向血浆的递送。在一些实施方案中，铁调素通过与位于肠肠上皮细胞的基底外侧表面和网状内皮细胞(巨噬细胞)质膜上的铁输出通道膜铁转运蛋白结合来抑制铁转运。在一些实施方案中，抑制膜铁转运蛋白阻止铁被输出并且铁被螯合在细胞中。在一些实施方案中，通过抑制膜铁转运蛋白，铁调素阻止肠上皮细胞使铁进入肝门静脉系统，从而减少膳食铁的吸收。铁调素表达涉及多个方面，包括例如HAMP基因的转录、转录的mRNA的翻译以及铁调素前体翻译后加工成具有生物活性的铁调素-25肽(DTHFPICIFCCGCCHRSKCGMCCKT(SEQ ID NO：129))。在一些实施方案中，铁调素表达通过血幼素诱导的BMP信号传导途径调节。在一些实施方案中，铁调素表达通过IL-6-JAK-STAT信号传导途径调节。
HJV诱导的BMP信号传导：本文中使用的术语“HJV诱导的BMP信号传导”是指通过由血幼素(HJV)诱导的BMP受体的信号传导，所述BMP受体是用于骨形态发生蛋白(BMP)信号传导的膜结合共受体。如XiaY，et al.，Hemojuvelin regulates hepcidin expression viaa selective subset of BMP ligands and receptors independently of neogenin，Blood.2008 May 15；111(10)：5195-5204中所讨论的，在肝细胞中，HJV诱导的BMP信号传导正向调节了铁调素mRNA表达。在一些实施方案中，HJV与BMP2、BMP4、BMP5或BMP6结合以诱导BMP信号传导，例如以正向调节肝细胞中的铁调素水平。在一些实施方案中，蛋白裂解酶-2对HJV的切割减少了可用于参与BMP信号传导的细胞表面HJV的量。在一些实施方案中，HJV对BMP信号传导的诱导不依赖于再生蛋白。然而，在一些实施方案中，再生蛋白促进HJV对BMP信号传导的诱导，如在Zhao et al，Neogenin Facilitates the Induction ofhepcidin Expression by Hemojuvelin in the Liver，J Biol Chem.2016 Jun 3；291(23)：12322-12335中所讨论的。在一些实施方案中，BMP6负责Smad信号传导的铁依赖性激活。在一些实施方案中，BMP6从肝窦内皮细胞分泌并与肝细胞上的BMP受体(BMPR)结合，并从而激活SMAD信号传导级联。在这样的实施方案中，HJV充当这样的BMP6的共受体，例如以正向调节肝细胞中的铁调素水平。在一些实施方案中，BMP通过与I型和II型丝氨酸/苏氨酸激酶受体的一者或其组合结合来转导信号。BMP II型受体包括BMPRII、ActRIIA和ActRIIB。BMP I型受体包括ALK3、ALK6和ALK2。在一些实施方案中，在配体结合之后，组成型活性II型受体使I型受体磷酸化，并且随后I型受体使胞内受体激活的Smad(R-Smad)(即Smad1、Smad5和/或Smad8)磷酸化。在这样的实施方案中，经激活的R-Smad与共同伴侣Smad4复合并易位到细胞核以调节基因转录，例如诱导铁调素表达。
铁调素拮抗剂：本文中使用的“铁调素拮抗剂”是指降低铁调素表达和/或铁调素活性(直接或间接)的药剂。在一些实施方案中，铁调素拮抗剂降低铁调素25水平和/或活性(直接或间接)。在一些实施方案中，铁调素拮抗剂抑制铁调素诱导的膜铁转运蛋白降解。因此，在一些实施方案中，铁调素拮抗剂通过铁调素刺激途径间接靶向铁调素功能以降低铁调素表达。在一些实施方案中，铁调素拮抗剂直接靶向铁调素功能，例如通过以下来进行靶向：结合铁调素肽以螯合游离铁调素或结合膜铁转运蛋白以抑制铁调素-膜转运铁蛋白结合相互作用，从而降低铁调素诱导的膜转运铁蛋白降解。在一些实施方案中，铁调素拮抗剂是破坏膜铁转运蛋白-铁调素相互作用的膜铁转运蛋白抑制剂，例如以下中所公开：RossSL,et al.,Identification of Antibody and Small Molecule Antagonists ofFerroportin-Hepcidin Interaction.Front Pharmacol.2017 Nov 21；8:838；Fung E.,etal.,High-Throughput Screening of Small Molecules Identifies HepcidinAntagonists.Molecular Pharmacology March 2013,83(3)681-690；和AngelikiKatsarou and Kostas Pantopoulos,Hepcidin Therapeutics.Pharmaceuticals(Basel).2018Dec；11(4):127，其每一篇的相关内容通过引用并入本文。
人抗体：本文中使用的术语“人抗体”旨在包括具有来源于人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。本公开内容的人抗体可包含不是由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或者通过体内体细胞突变而引入的突变)，例如在CDR中，并且特别是在CDR3中。然而，本文中使用的术语“人抗体”不旨在包括其中来源于另一哺乳动物物种(例如小鼠)种系的CDR序列已接枝到人框架序列上的抗体。
人源化抗体：术语“人源化抗体”是指包含来自非人物种(例如，小鼠)的重链和轻链可变区序列但是其中VH和/或VL序列的至少一部分已被改变为更加“类似于人(human-like)”(即，更类似于人种系可变序列)的抗体。一种类型的人源化抗体是CDR接枝抗体，其中人CDR序列被引入非人VH和VL序列中以替代相应的非人CDR序列。在一个实施方案中，提供了人源化抗血幼素抗体和抗原结合部分。这样的抗体可以通过以下来产生：使用传统的杂交瘤技术获得鼠抗血幼素单克隆抗体，随后使用体外遗传工程化进行人源化，例如在Kasaian等人的PCT公开No.WO 2005/123126 A2中公开的那些。
分离的抗体：本文中使用的“分离的抗体”旨在指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，特异性结合血幼素的分离的抗体基本上不含特异性结合除血幼素以外的抗原的抗体)。然而，特异性结合血幼素的分离的抗体可能对其他抗原具有交叉反应性，其他抗原例如其他排斥性导向分子(repulsive guidance molecule，RGM)蛋白(例如，RGMa和/或RGMb)。此外，分离的抗体可以基本上不含其他细胞材料和/或化学物质。
JAK-STAT信号传导：本文中使用的术语“JAK-STAT信号传导”是指这样的信号传导：通过募集Janus激酶(JAK)(例如如Janus激酶1(JAK1)或Janus激酶2(JAK2))的细胞受体，从而激活转录因子信号转导和转录激活因子(STAT)，例如STAT3。在一些实施方案中，如Maliken,BD,et al.,The Hepcidin Circuits Act:Balancing Iron and Inflammation,Hepatology.2011May；53(5):1764–1766中所讨论的，JAK-STAT信号传导涉及细胞因子白介素6(IL-6)与其同源细胞受体的结合，其然后募集Janus激酶2(JAK2)以使STAT3磷酸化。在一些实施方案中，然后STAT3(在JAK2激活/磷酸化之后)易位到细胞核中。在一些实施方案中，激活的STAT3然后诱导铁调素转录，例如，通过与铁调素启动子区域中的STAT3结合基序结合。因此，在一些实施方案中，通过IL-6激活STAT3在炎症期间通过JAK-STAT信号传导来诱导铁调素表达。
Kabat编号：术语“Kabat编号”、“Kabat定义和“Kabat标记”在本文中可互换使用。在本领域中公认的这些术语是指对抗体或其抗原结合部分的重链和轻链可变区中的比其他氨基酸残基更加可变(即高变)的氨基酸残基进行编号的系统((Kabat et al.(1971)Ann.NY Acad,Sci.190:382-391以及Kabat,E.A.,et al.(1991)Sequences of Proteinsof Immunological Interest,Fifth Edition,U.S.Department of Health and HumanServices,NIH Publication No.91-3242)。对于重链可变区，CDR1的高变区为第31至35位氨基酸，CDR2的高变区为第50至65位氨基酸，并且CDR3的高变区为第95至102位氨基酸。对于轻链可变区，CDR1的高变区为第24至34位氨基酸，CDR2的高变区为第50至56位氨基酸，并且CDR3的高变区为第89至97位氨基酸。
寡核苷酸：本文中使用的术语“寡核苷酸”是指长度多至200个核苷酸的寡聚核酸化合物。寡核苷酸的实例包括但不限于RNAi寡核苷酸(例如，siRNA、shRNA)、微RNA、适配体、混合聚体、亚磷酸二酰胺吗啉代(phosphorodiamidite morpholino)、肽核酸、适配体、指导核酸(例如，Cas9指导RNA)等。寡核苷酸可以是单链或双链。在一些实施方案中，寡核苷酸可包含一种或更多种经修饰的核苷酸(例如，2'-O-甲基糖修饰、嘌呤或嘧啶修饰)。在一些实施方案中，寡核苷酸可以包含一种或更多种经修饰的核苷酸间键。在一些实施方案中，寡核苷酸可以包含一种或更多种硫代磷酸酯键，其可以是Rp或Sp立体化学构象。
重组抗体：本文中使用的术语“重组人抗体”旨在包括通过重组方式制备、表达、产生或分离的所有人抗体，例如使用转染至宿主细胞内的重组表达载体所表达的抗体(在本公开内容中更详细地描述)、从重组组合人抗体文库中分离的抗体(Hoogenboom H.R.,(1997)TIB Tech.15:62-70；Azzazy H.,and Highsmith W.E.,(2002)Clin.Biochem.35:425-445；Gavilondo J.V.,and Larrick J.W.(2002)BioTechniques 29:128-145；Hoogenboom H.,and Chames P.(2000)Immunology Today 21:371-378)、从动物(例如，小鼠)中分离的抗体(其对于人免疫球蛋白基因是转基因的(参见例如，Taylor,L.D.,et al.(1992)Nucl.Acids Res.20:6287-6295；Kellermann S-A.,and Green L.L.(2002)CurrentOpinion in Biotechnology13:593-597；Little M.et al(2000)Immunology Today 21:364-370)或通过涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接至其他DNA序列的任何其他方式分离、制备、表达或产生的抗体。这样的重组人抗体具有来源于人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。然而，在某些实施方案中，对这样的重组人抗体进行体外诱变(或者，当使用对人Ig序列而言为转基因的动物时，进行体内体细胞诱变)，并因此重组抗体的VH和VL区的氨基酸序列是这样的序列，其虽然来源于人种系VH和VL序列并与其相关，但可能不天然存在于体内人抗体种系文库中。本公开内容的一个实施方案提供了能够结合人血幼素的完全人抗体，其可以使用本领域公知的技术产生，例如但不限于使用人Ig噬菌体文库，例如在Jermutus et al.,PCT公开号WO 2005/007699 A2中公开的那些。
选择性：本文中使用的术语“选择性”及其变形是指与参考分子相比，分子产生与其靶分子有关的作用的能力。例如，选择性抑制其靶分子的分子意指该分子能够抑制其靶分子，抑制程度为在抑制测定或其他抑制情况下可与参考分子区分开来。例如，关于抑制剂，术语“选择性抑制”是指抑制剂抑制其靶分子的能力，抑制程度为可与抑制测定中基本上未受抑制的参考分子区分开来，例如达到允许选择性抑制靶分子的程度，如本文所述。例如，对于靶分子和/或参考分子的半数最大抑制浓度(IC50)可以在激酶效力测定中测试，如Asshoff,M.et al.Momelotinib inhibits ACVR1/ALK2,decreases hepcidinproduction,and ameliorates anemia of chronic disease in rodents.Blood.2017Mar30；129(13):1823–1830中所述(例如，通过Carna Biosciences的酶效力测定)。在该测定中，将抑制剂溶液(例如，含有待测试的选择性抑制剂的溶液)/激酶底物与靶分子溶液(例如，ALK2)或参考分子溶液(例如，JAK1或JAK2)混合，并在室温下孵育1小时。一旦反应终止，就可以测量底物上酶活性所产生的信号。可以计算靶分子和参考分子的半数最大抑制剂浓度。在一些实施方案中，本文所述的分子与靶分子选择性地结合。在一些实施方案中，本文所述的分子选择性地抑制靶分子。在一些实施方案中，本文所述的分子选择性地拮抗靶分子。在一些实施方案中，本文所述的分子选择性地中和靶分子。
特异性结合：本文中使用的术语“特异性结合”是指分子以一定程度的亲和力或亲合力与结合伴侣结合的能力，该亲和力或亲合力使得分子能够用于在结合测定或其他结合环境中将结合伴侣与合适的对照区分开。关于抗体，术语“特异性结合”是指与合适的一种或更多种参考抗原相比，抗体以一定程度的亲和力或亲合力与特异性抗原结合的能力，该亲和力或亲合力使得抗体能够用于将特异性抗原与其他抗原区分开，例如至允许通过与如本文中所述的抗原结合而优先靶向某些细胞(例如肌细胞)的程度。在一些实施方案中，如果抗体结合靶标的KD为至少约10-4M、10-5M、10-6M、10-7M、10-8M、10-9M、10-10M、10-11M、10-12M、10-13M或更低，则抗体与靶标特异性结合。在一些实施方案中，抗体与血幼素特异性结合。
对象：本文中使用的术语“对象”是指哺乳动物。在一些实施方案中，对象是非人灵长类或啮齿动物。在一些实施方案中，对象是人。在一些实施方案中，对象是患者，例如患有或怀疑患有疾病的人患者。在一些实施方案中，对象是患有或怀疑患有ACD和/或者与ACD和/或功能性铁缺乏相关或者由ACD和/或功能性铁缺乏引起的一种或更多种病症的人患者。
治疗：本文中使用的术语“治疗”及其变形是指将包含一种或更多种活性剂(例如抗HJV抗体)的组合物应用或施用于患有目标疾病或病症、具有该疾病/病症之症状或对该疾病/病症的倾向性的对象，目的是治愈、治疗、减轻、缓解、改变、救治、改良、改善或影响病症、疾病症状或者对疾病或病症的倾向性。减轻目标疾病/病症包括延迟或阻止疾病的发生或进展，或者降低疾病严重性。
II.抗血幼素(HJV)抗体
在一些实施方案中，血幼素拮抗剂与排斥性导向分子(RGM)家族中的一种或更多种蛋白质，包括RGMa、RGMb和RGMc(HJV)结合。在一些实施方案中，血幼素拮抗剂相对于RGMa和RGMb选择性地结合血幼素(RGMc)。在一些实施方案中，血幼素拮抗剂是降低血幼素表达的反义寡核苷酸(参见，例如，美国专利No.7,534,764；美国专利公开No.US 2014/127325；和国际公开No.WO 2016/180784，其通过引用并入本文)。在一些实施方案中，血幼素拮抗剂是抑制血幼素的小分子化合物，例如通过血幼素的竞争性结合和/或化学修饰进行抑制。
在一些实施方案中，血幼素拮抗剂是对血幼素和/或RGM蛋白家族中的一种或更多种蛋白(例如，RGMa、RGMb)具有特异性的抗体(例如，HA001-HA012)。可用于本文中提供的某些方法的对血幼素和/或一种或更多种RGM蛋白具有特异性的适当抗体提供于例如美国专利No.10,118,958和8,507,435；美国专利公开No.US 2013/330343、US 2015/166672、和US2017/029499；以及国际公开No.WO 2015/171691、和WO 2018/009624，其通过引用并入本文。
在一些方面中，本文中提供了以高特异性和亲和力与人血幼素(HJV)结合的抗体。在一些实施方案中，本文所述的抗HJV抗体与HJV的任何胞外表位或暴露于抗体的表位特异性结合。在一些实施方案中，本文中提供的抗HJV抗体与来自人、非人灵长类、小鼠、大鼠等的HJV特异性结合。在一些实施方案中，本文中提供的抗HJV抗体与人HJV结合。在一些实施方案中，本文所述的抗HJV抗体与人或非人灵长类HJV的氨基酸区段结合。
在一些实施方案中，本文所述的抗HJV抗体与人HJV上的表位特异性结合。人HJV是426个氨基酸的蛋白质，具有31个氨基酸的预测N端信号肽和45个氨基酸的C端GPI连接信号。示例性人HJV氨基酸序列在SEQ ID NO:128中示出：
Figure BDA0004016554230000271
在一些实施方案中，本文所述的抗HJV抗体可以与人HJV的片段结合。HJV的片段长度可以是约5至约425个氨基酸、约10至约400个氨基酸、约50至约350个氨基酸、约100至约300个氨基酸、约150至约250个氨基酸、约200至约300个氨基酸、或约75至约150个氨基酸。片段可以包含来自RGMc的连续数量的氨基酸。HJV片段的示例性氨基酸如SEQ ID NO：123所示：
Figure BDA0004016554230000281
在一些实施方案中，本文所述的抗HJV抗体与人HJV或人HJV片段内的不同表位结合。
在一些实施方案中，抗HJV抗体与SEQ ID NO：123的第160至190位氨基酸内的表位相互作用。在一些实施方案中，抗HJV抗体与具有SEQ ID NO：123的第170至183位氨基酸的氨基酸序列的表位相互作用。在一些实施方案中，抗HJV抗体与具有SSPMALGANATATR(SEQID NO：121)的氨基酸序列的表位相互作用。在一些实施方案中，抗HJV抗体与SSPMALGANATATR(SEQ ID NO：121)内的不同区段相互作用。在一些实施方案中，抗HJV抗体与SEQ ID NO：123的第170至171位氨基酸、第171至180位氨基酸、第180至182位氨基酸和第182至183位氨基酸相互作用。在一些实施方案中，抗体与SEQ ID NO：123的第170(S)、171(S)、180(T)、182(T)和183(R)位氨基酸相互作用。在一些实施方案中，hHA-008与表位SSPMALGANATATR(SEQ ID NO：121)相互作用。在一些实施方案中，hHA-008与SEQ ID NO：123的第170(S)、171(S)、180(T)、182(T)和183(R)位氨基酸相互作用。
在一些实施方案中，抗HJV抗体与SEQ ID NO：123的第160至190位氨基酸和/或SEQID NO：123的第280至310位氨基酸内的表位相互作用。在一些实施方案中，抗HJV抗体与SEQID NO：123的第169至182位氨基酸和/或SEQ ID NO：123的第289至300位氨基酸内的表位相互作用。在一些实施方案中，抗HJV抗体与SEQ ID NO：123的第169至182位氨基酸和SEQ IDNO：123的第289至300位氨基酸内的表位相互作用。在一些实施方案中，抗HJV抗体与具有TSSPMALGANATAT(SEQ ID NO：122)的氨基酸序列和具有SQRLSRSERNRR(SEQ ID NO：127)的氨基酸序列的表位相互作用。在一些实施方案中，抗HJV抗体与TSSPMALGANATAT(SEQ IDNO：122)和SQRLSRSERNRR(SEQ ID NO：127)内的不同区段相互作用。在一些实施方案中，抗HJV抗体与SEQ ID NO：123的第169至171位氨基酸、第171至180位氨基酸和第180至182位氨基酸以及SEQ ID NO：123的第289至293位氨基酸、第293至294位氨基酸、第294至295位氨基酸、第295至297位氨基酸和第297至300位氨基酸相互作用。在一些实施方案中，抗体与SEQID NO：123的第169(T)、170(S)、171(S)、180(T)、182(T)、289(S)、293(S)、294(R)、295(S)、297(R)、和300(R)位氨基酸相互作用。在一些实施方案中，hHA-008-QL与TSSPMALGANATAT(SEQ ID NO：122)和SQRLSRSERNRR(SEQ ID NO：127)内的不同区段相互作用。在一些实施方案中，hHA-008-QL与SEQ ID NO：123的第169(T)、170(S)、171(S)、180(T)、182(T)、289(S)、293(S)、294(R)、295(S)、297(R)和300(R)位氨基酸相互作用。
在一些实施方案中，本文所述的抗HJV抗体是亲和力成熟的克隆。在一些实施方案中，抗HJV抗体以至少约10-4M、10-5M、10-6M、10-7M、10-8M、10-9M、10-10M、10-11M、10-12M、10-13M或更小的结合亲和力(例如，如KD所示)特异性结合HJV(例如，人HJV或非人灵长类HJV)。例如，本公开内容的抗HJV抗体可以以5pM至500nM，例如50pM至100nM，例如500pM至50nM的亲和力与血幼素蛋白(例如人血幼素)结合。本公开内容还包括与本文所述的任何抗体竞争结合血幼素蛋白(例如人血幼素)的抗体，并且其具有100nM或更低(例如80nM或更低、50nM或更低、20nM或更低、10nM或更低、500pM或更低、50pM或更低、或者5pM或更低)的亲和力。可以使用任何合适的方法检测抗HJV抗体的亲和力和结合动力学，所述方法包括但不限于生物传感器技术(例如，OCTET或BIACORE)。在一些实施方案中，本文所述的抗HJV抗体以亚纳摩尔范围的KD与HJV结合。在一些实施方案中，本文所述的抗HJV抗体选择性地与RGMc结合，但不结合RGMa或RGMb。
结合亲和力(或结合特异性)可通过多种方法测定，包括平衡透析法、平衡结合、凝胶过滤、ELISA、表面等离子体共振(surface plasmon resonance，SPR)、荧光激活细胞分选(florescent activated cell sorting，FACS)或光谱术(例如，使用荧光测定)。用于评价结合亲和力的示例性条件是在HBS-P缓冲液(10mM HEPES pH7.4，150mM NaCl，0.005％(v/v)表面活性剂P20)和PBS缓冲液(10mM PO4-3，137mM NaCl和2.7mM KCl)中。这些技术可用于测量结合蛋白的浓度，其作为靶蛋白浓度的函数。结合蛋白的浓度([结合的])通常通过下式与游离靶蛋白的浓度([游离的])相关：
[结合的]＝[游离的]/(Kd+[游离的])
然而，并不总是需要对KA进行精确测定，因为有时获得亲和力的定量测量就足够了，例如使用方法例如ELISA或FACS分析确定的亲和力与KA成比例并因此可用于比较，例如确定较高的亲和力是否是例如2倍高，以获得亲和力的定性测量或获得亲和力的推断，例如通过功能测定(例如体外或体内测定)中的活性。
表1提供了抗HJV抗体的非限制性实例的重链(HC)和轻链(LC)序列、重链可变结构域(VH)和轻链可变结构域(VL)、CDR序列以及重链和轻链恒定区序列。
表1.抗HJV抗体的实例(根据Kabat定义的CDR)
Figure BDA0004016554230000301
Figure BDA0004016554230000311
Figure BDA0004016554230000321
Figure BDA0004016554230000331
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Figure BDA0004016554230000361
Figure BDA0004016554230000371
Figure BDA0004016554230000381
Figure BDA0004016554230000391
Figure BDA0004016554230000401
Figure BDA0004016554230000411
Figure BDA0004016554230000421
Figure BDA0004016554230000431
在一些实施方案中，本文所述的抗HJV抗体的重链的N端是谷氨酸(E)。在一些实施方案中，谷氨酸可通过翻译后修饰自发环化成焦谷氨酸。谷氨酸到焦谷氨酸的自发环化先前已被描述，例如Chelius et al.,Formation of Pyroglutamic Acid From N-terminalGlutamic Acid in Immunoglobulin Gamma Antibodies，Anal Chem.2006；78(7)：2370-2376。在一些实施方案中，本文所述的抗HJV抗体的重链的N端是焦谷氨酸。在一些实施方案中，具有N端焦谷氨酸的抗HJV抗体是在抗HJV抗体群中的在抗HJV抗体群中的杂质(例如，小于5％、小于4％、小于3％、小于2％、小于1％、小于0.5％、小于0.1％、小于0.05％或小于0.01％)。在一些实施方案中，抗HJV抗体群包含在重链N端具有谷氨酸或焦谷氨酸的抗HJV抗体的混合物。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含来自选自表1的任一种抗HJV抗体的一个或更多个HC CDR(例如，HC CDR1、HC CDR2或HC CDR3)氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含如为选自表1的任一种抗体所提供的HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3。在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含来自选自表1的任一种抗HJV抗体的一种或更多种LC CDR(例如，LC CDR1、LC CDR2或LC CDR3)氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含如为选自表1的任一种抗HJV抗体提供的LC CDR1、LCCDR2和LC CDR3。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含如为选自表1的任一种抗HJV抗体提供的HC CDR1、HC CDR2、HC CDR3、LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3。在一些实施方案中，抗体重链CDR3结构域和轻链CDR3结构域可在抗体对抗原的结合特异性/亲和力中发挥特别重要的作用。因此，本公开内容的抗HJV抗体可以至少包括选自表1的任一种抗HJV抗体的重链CDR3和/或轻链CDR3。
在一些实施方案中，分离的抗HJV抗体包含含有重链CDR1(HC CDR1)、重链CDR2(HCCDR2)和重链CDR3(HC CDR3)的重链可变区。
在一些实施方案中，按照Kabat定义，HC CDR1可以包含X1YGMN(SEQ ID NO：105)的氨基酸序列，其中X1可以是N或Y。作为替选或补充，HC CDR2可以包含MIYYDSSX2KHYADSVKG(SEQ ID NO：106)的氨基酸序列，其中X2可以是E或D。作为替选或补充，HC CDR3可包含GX3TPDX4(SEQ ID NO：107)的氨基酸序列，其中X3可以是T或S，并且X4可以是Y、V或K。
在一些实施方案中，按照Kabat定义，抗HJV抗体可以包含轻链可变区，该轻链可变区包含轻链CDR1(LC CDR1)、轻链CDR2(LC CDR2)和轻链CDR3(LC CDR3)。在一些实施方案中，LC CDR1可以包含RSSQSLX5X6SDGX7TFLX8(SEQ ID NO：108)的氨基酸序列，其中X5可以是A或E，X6可以是T、S、E或D，X7可以是D、Y或G，并且X8可以是E或H。作为替选或补充，LC CDR2可以包含X9VSX10RFS(SEQ ID NO：109)的氨基酸序列，其中X9可以是E、D或A，并且X10可以为N、S、T、E或H。作为替选或补充，LC CDR3可包含X11QX12TX13DPX14X15(SEQ ID NO：110)的氨基酸序列，其中X11可以是F或M，X12可以是V或A，X13可以是H或Y，X14可以是M、L或V，并且X15可以是T或S。
本文中公开的任何示例性抗HJV抗体的功能变体也在本公开内容的范围内。相对于参考抗体，功能变体可以在VH和/或VL、或在一种或更多种HC CDR和/或者一种或更多种LCCDR中包含一个或更多个氨基酸残基变异，同时保留与参考抗体基本相似的结合和生物活性(例如，基本相似的结合亲和力、结合特异性、抑制活性、抗炎性活性或其组合)。
在一些实施方案中，本公开内容的任何抗HJV抗体具有与这样的序列基本上相似的一个或更多个CDR(例如，HC CDR或LC CDR)序列：任何来自选自表1的抗HJV抗体中的一种的HC CDR1、HC CDR2、HC CDR3、LC CDR1、LC CDR2和/或LC CDR3序列。在一些实施方案中，本文所述的抗体的沿VH区(例如，HC CDR1、HC CDR2、或HC CDR3)和/或VL区(例如LC CDR1、LCCDR2、或LC CDR3)的一个或更多个CDR的位置可以变化一、二、三、四、五或六个氨基酸位置，只要维持与血幼素(例如人血幼素)的免疫特异性结合(例如，基本上维持，例如其所来源的原始抗体的结合的至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)即可。例如，在一些实施方案中，限定本文所述的任何抗体的CDR的位置可以通过将CDR的N端和/或C端边界相对于本文所述的任一种抗体的CDR位置移动一、二、三、四、五或六个氨基酸来变化，只要维持与血幼素(例如人血幼素)的免疫特异性结合(例如，基本上维持，例如其所来源于的原始抗体的结合的至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)即可。在另一个实施方案中，本文所述的抗体的沿VH区(例如，HC CDR1、HC CDR2或HC CDR3)和/或VL区(例如LC CDR1、LC CDR2或LC CDR3)的一个或更多个CDR的长度可以变化(更短或更长)一、二、三、四、五个或更多个氨基酸，只要维持与血幼素(例如人血幼素)的免疫特异性结合(例如，基本上维持，例如其所来源于的原始抗体的结合的至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)即可。
因此，在一些实施方案中，本文所述的HC CDR1、HC CDR2、HC CDR3、LC CDR1、LCCDR2和/或LC CDR3可以比本文所述的CDR(例如，来自选自表1的任何抗HJV抗体的CDR)中的一个或更多个短一、二、三、四、五个或更多个氨基酸，只要维持与血幼素(例如，人血幼素)的免疫特异性结合(例如，基本上维持，例如相对于其所来源于的原始抗体的结合的至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)即可。在一些实施方案中，本文所述的HC CDR1、HC CDR2、HC CDR3、LC CDR1、LC CDR2和/或LC CDR3可以比本文所述的CDR(例如，来自选自表1的任何抗HJV抗体的CDR)中的一个或更多个长一、二、三、四、五个或更多个氨基酸，只要维持与血幼素(例如，人血幼素)的免疫特异性结合(例如，基本上维持，例如相对于其所来源于的原始抗体的结合的至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)即可。在一些实施方案中，本文所述的HC CDR1、HC CDR2、HC CDR3、LCCDR1、LC CDR2和/或LC CDR3的氨基部分可以比本文所述的CDR(例如，来自选自表1的任何抗HJV抗体的CDR)中的一个或更多个延长一、二、三、四、五个或更多个氨基酸，只要维持与血幼素(例如，人血幼素)的免疫特异性结合(例如，基本上维持，例如相对于其所来源于的原始抗体的结合的至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)即可。在一些实施方案中，本文所述的HC CDR1、HC CDR2、HC CDR3、LC CDR1、LC CDR2和/或LC CDR3的羧基部分可以比本文所述的CDR(例如，来自选自表1的任何抗HJV抗体的CDR)中的一个或更多个延长一、二、三、四、五个或更多个氨基酸，只要维持与血幼素(例如，人血幼素)的免疫特异性结合(例如，基本上维持，例如相对于其所来源于的原始抗体的结合的至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)即可。在一些实施方案中，本文所述的HC CDR1、HC CDR2、HC CDR3、LC CDR1、LC CDR2和/或LC CDR3的氨基部分可以比本文所述的CDR(例如，来自选自表1的任何抗HJV抗体的CDR)中的一个或更多个缩短一、二、三、四、五个或更多个氨基酸，只要维持与血幼素(例如，人血幼素)的免疫特异性结合(例如，基本上维持，例如相对于其所来源于的原始抗体的结合的至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)即可。在一些实施方案中，本文所述的HC CDR1、HC CDR2、HC CDR3、LCCDR1、LC CDR2和/或LC CDR3的羧基部分可以比本文所述的CDR(例如，来自选自表1的任何抗HJV抗体的CDR)中的一个或更多个缩短一、二、三、四、五个或更多个氨基酸，只要维持与血幼素(例如，人血幼素)的免疫特异性结合(例如，基本上维持，例如相对于其所来源于的原始抗体的结合的至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)即可。任何方法可用于确定是否维持与血幼素(例如人血幼素)的免疫特异性结合，例如使用本领域中所述的结合测定和条件。
在一些实例中，本公开内容的任何抗HJV抗体具有与选自表1的任一种抗HJV抗体基本上相似的一个或更多个CDR(例如，HC CDR或LC CDR)序列。例如，抗体可以包括来自选自表1的任何抗HJV抗体的一个或更多个CDR序列，与本文中提供的CDR(例如，来自选自表1的任何抗HJV抗体的CDR)中的任何一个中的相应CDR区相比其含有多至5、4、3、2或1个氨基酸残基变异，只要维持与血幼素(例如，人血幼素)的免疫特异性结合(例如，基本上维持，例如相对于其所来源于的原始抗体的结合的至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)即可。在一些实施方案中，本文中提供的任何CDR中的任何氨基酸变异都可以是保守变异。例如，如基于晶体结构所确定的，可以在残基不太可能参与与血幼素蛋白(例如人血幼素蛋白)相互作用的位置处将保守变异引入CDR中。本公开内容的一些方面提供了包含一个或更多个本文中提供的重链可变(VH)结构域和/或轻链可变(VL)结构域的抗HJV抗体。在一些实施方案中，本文中提供的任何VH结构域包含本文中提供的HC CDR序列(例如HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3)中的一个或更多个，例如选自表1的任一种抗HJV中提供的任何CDR-H序列。在一些实施方案中，本文中提供的任何VL结构域包含本文中提供的CDR-L序列(例如，LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3)中的一个或更多个，例如在选自表1的任一种抗HJV抗体中提供的任何LC CDR序列。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含任何这样的抗体，所述抗体包含选自表1的任一种抗HJV抗体的重链可变结构域和/或轻链可变结构域，及其变体。在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含任何这样的抗体，所述抗体包含选自表1的任何抗HJV抗体的重链可变和轻链可变对。
本公开内容的一些方面提供了具有重链可变(VH)结构域和/或轻链可变(VL)结构域氨基酸序列的抗HJV抗体，所述序列与本文所述的任何那些同源。在一些实施方案中，抗HJV抗体包含与选自表1的任一种抗HJV抗体的重链可变序列和/或任何轻链可变序列具有至少75％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的重链可变序列或轻链可变序列。在一些实施方案中，同源重链可变和/或轻链可变氨基酸序列不在本文中提供的任何CDR序列内变化。例如，在一些实施方案中，序列变异的程度(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)可发生在不包含本文中提供的任何CDR序列的重链可变序列和/或轻链可变序列中。在一些实施方案中，本文中提供的任何抗HJV抗体均包含重链可变序列和轻链可变序列，其包含与选自表1的任何抗HJV抗体的框架序列具有至少75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的框架序列。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体是人源化抗体(例如，包含表1的一个或更多个CDR的人源化变体)。在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含与表1中所示的HC CDR1、HC CDR2、HC CDR3、LC CDR1、LC CDR2、和LC CDR3相同的HC CDR1、HC CDR2、HCCDR3、LC CDR1、LC CDR2、和LC CDR3，并包含人源化重链可变区和/或人源化轻链可变区。
人源化抗体是人免疫球蛋白(接受体抗体)，其中来自接受体的互补决定区(CDR)的残基被来自具有期望特异性、亲和力和容量的非人物种(供体抗体)例如小鼠、大鼠或兔的CDR的残基替代。在一些实施方案中，人免疫球蛋白的Fv框架区(framework region，FR)残基被相应的非人残基替代。此外，人源化抗体可包含在接受体抗体或者导入的CDR或框架序列中均未发现但被包含在内以进一步完善和优化抗体性能的残基。一般而言，人源化抗体将包含至少一个并且通常是两个的可变结构域的基本上全部，其中所有或基本上所有的CDR区对应于非人免疫球蛋白的那些，并且所有或基本上所有的FR区是人免疫球蛋白共有序列的那些。人源化抗体最佳地还将包含免疫球蛋白恒定区或结构域(Fc)(通常是人免疫球蛋白的那些)的至少一部分。抗体可具有如WO 99/58572中所述修饰的Fc区。人源化抗体的另一些形式具有相对于原始抗体而改变的一个或更多个CDR(一个、两个、三个、四个、五个、六个)，其也称为来源于来自原始抗体的一个或更多个CDR的一个或更多个CDR。人源化抗体还可能涉及亲和力成熟。
在一些实施方案中，人源化是通过将CDR(例如，如表1所示)接枝到人可变结构域(例如，IGKV1-NL1*01和IGHV1-3*01人可变结构域)中来实现的。在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体是这样的人源化变体：与表1中列出的任一种VH相比，其包含一个或更多个氨基酸替换(例如，在VH框架区中)；和/或者与表1中列出的任一种VL相比，其包含一个或更多个氨基酸替换(例如，在VL框架区中)。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体是包含VH的人源化抗体，所述VH与表1中列出的任一种抗HJV抗体的VH相比，包含不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体是包含VL的人源化抗体，所述VL与表1中列出的任一种抗HJV抗体的VL相比，包含不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的重链可变结构域的HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的轻链可变结构域的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3。
在一些实施方案中，根据Kabat定义系统，本公开内容的抗HJV抗体包含：具有SEQID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2，具有SEQ IDNO:3的氨基酸序列的HC CDR3；具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LC CDR3。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3，其与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2和具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HC CDR3相比，总共包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。如在本公开内容的任何地方使用的“总共”意指所有三个重链CDR中的氨基酸变异的总数在限定的范围内。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3，其与具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LC CDR3相比，总共包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3，其总共与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HCCDR2和具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HC CDR3具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含LC CDR1、LCCDR2和LC CDR3，其总共与具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LC CDR3具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含：与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HCCDR1；与具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HC CDR2；和/或与具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCCDR3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HC CDR3。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含：与具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的LC CDR1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR1；与具有SEQID NO:5的氨基酸序列的LC CDR2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR2；和/或与具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LC CDR3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR3。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含与SEQ ID NO:7所示的VH相比含有不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含与SEQ IDNO:8所示的VL相比含有不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含含有与SEQ ID NO:7所示的VH具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含含有与SEQ ID NO:8所示的VL具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的重链可变结构域的HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含具有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的轻链可变结构域的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3。
在一些实施方案中，根据Kabat定义系统，本公开内容的抗HJV抗体包含：具有SEQID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2，具有SEQ IDNO:3的氨基酸序列的HC CDR3；具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的LC CDR3。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3，其与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2和具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HC CDR3相比，总共包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。如在本公开内容的任何地方使用的“总共”意指所有三个重链CDR中的氨基酸变异的总数在限定的范围内。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3，其与具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的LC CDR3相比，总共包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3，其总共与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HCCDR2和具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HC CDR3具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含LC CDR1、LCCDR2和LC CDR3，其总共与具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的LC CDR3具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含：与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HCCDR1；与具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HC CDR2；和/或与具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCCDR3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HC CDR3。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含：与具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的LC CDR1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR1；与具有SEQID NO:49的氨基酸序列的LC CDR2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR2；和/或与具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的LC CDR3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR3。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含与SEQ ID NO:7所示的VH相比含有不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含与SEQ IDNO:30所示的VL相比含有不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含含有与SEQ ID NO:7所示的VH具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含含有与SEQ ID NO:30所示的VL具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的重链可变结构域的HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含具有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链可变结构域的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3。
在一些实施方案中，根据Kabat定义系统，本公开内容的抗HJV抗体包含：具有SEQID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2，具有SEQ IDNO:3的氨基酸序列的HC CDR3；具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的LC CDR3。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3，其与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2和具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HC CDR3相比，总共包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。如在本公开内容的任何地方使用的“总共”意指所有三个重链CDR中的氨基酸变异的总数在限定的范围内。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3，其与具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的LC CDR3相比，总共包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3，其总共与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HCCDR2和具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HC CDR3具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含LC CDR1、LCCDR2和LC CDR3，其总共与具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的LC CDR3具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含：与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HCCDR1；与具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HC CDR2；和/或与具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCCDR3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HC CDR3。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含：与具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的LC CDR1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR1；与具有SEQID NO:18的氨基酸序列的LC CDR2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR2；和/或与具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的LC CDR3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR3。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含与SEQ ID NO:7所示的VH相比含有不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含与SEQ IDNO:31所示的VL相比含有不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含含有与SEQ ID NO:7所示的VH具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含含有与SEQ ID NO:31所示的VL具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的重链可变结构域的HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含具有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的轻链可变结构域的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3。
在一些实施方案中，根据Kabat定义系统，本公开内容的抗HJV抗体包含：具有SEQID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2，具有SEQ IDNO:3的氨基酸序列的HC CDR3；具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ IDNO:19的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的LC CDR3。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3，其与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2和具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HC CDR3相比，总共包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。如在本公开内容的任何地方使用的“总共”意指所有三个重链CDR中的氨基酸变异的总数在限定的范围内。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3，其与具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的LC CDR3相比，总共包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3，其总共与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HCCDR2和具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HC CDR3具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含LC CDR1、LCCDR2和LC CDR3，其总共与具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的LC CDR3具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含：与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HCCDR1；与具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HC CDR2；和/或与具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCCDR3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HC CDR3。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含：与具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的LC CDR1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR1；与具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的LC CDR2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR2；和/或与具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的LC CDR3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR3。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含与SEQ ID NO:7所示的VH相比含有不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含与SEQ IDNO:32所示的VL相比含有不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含含有与SEQ ID NO:7所示的VH具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含含有与SEQ ID NO:32所示的VL具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的重链可变结构域的HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含具有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的轻链可变结构域的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3。
在一些实施方案中，根据Kabat定义系统，本公开内容的抗HJV抗体包含：具有SEQID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2，具有SEQ IDNO:3的氨基酸序列的HC CDR3；具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ IDNO:20的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的LC CDR3。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3，其与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2和具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HC CDR3相比，总共包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。如在本公开内容的任何地方使用的“总共”意指所有三个重链CDR中的氨基酸变异的总数在限定的范围内。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3，其与具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的LC CDR3相比，总共包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3，其总共与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HCCDR2和具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HC CDR3具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含LC CDR1、LCCDR2和LC CDR3，其总共与具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的LC CDR3具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含：与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HCCDR1；与具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HC CDR2；和/或与具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCCDR3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HC CDR3。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含：与具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的LC CDR1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR1；与具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的LC CDR2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR2；和/或与具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的LC CDR3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR3。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含与SEQ ID NO:7所示的VH相比含有不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含与SEQ IDNO:33所示的VL相比含有不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含含有与SEQ ID NO:7所示的VH具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含含有与SEQ ID NO:33所示的VL具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含具有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链可变结构域的HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含具有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的轻链可变结构域的LC CDR1、LC CDR2和LCCDR3。
在一些实施方案中，根据Kabat定义系统，本公开内容的抗HJV抗体包含：具有SEQID NO:9的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2，具有SEQ IDNO:3的氨基酸序列的HC CDR3；具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ IDNO:21的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的LC CDR3。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3，其与具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2和具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HC CDR3相比，总共包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。如在本公开内容的任何地方使用的“总共”意指所有三个重链CDR中的氨基酸变异的总数在限定的范围内。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3，其与具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的LC CDR3相比，总共包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3，其总共与具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HCCDR2和具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HC CDR3具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含LC CDR1、LCCDR2和LC CDR3，其总共与具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的LC CDR3具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含：与具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HC CDR1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HCCDR1；与具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HC CDR2；和/或与具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCCDR3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HC CDR3。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含：与具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的LC CDR1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR1；与具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的LC CDR2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR2；和/或与具有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的LC CDR3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR3。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含与SEQ ID NO:34所示的VH相比含有不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含与SEQ IDNO:35所示的VL相比含有不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含含有与SEQ ID NO:34所示的VH具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含含有与SEQ ID NO:35所示的VL具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含具有SEQ ID NO:36的氨基酸序列的重链可变结构域的HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含具有SEQ ID NO:37的氨基酸序列的轻链可变结构域的LC CDR1、LC CDR2和LCCDR3。
在一些实施方案中，根据Kabat定义系统，本公开内容的抗HJV抗体包含：具有SEQID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的HC CDR2，具有SEQ IDNO:11的氨基酸序列的HC CDR3；具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ IDNO:18的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:28的氨基酸序列的LC CDR3。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3，其与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的HC CDR2和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HC CDR3相比，总共包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。如在本公开内容的任何地方使用的“总共”意指所有三个重链CDR中的氨基酸变异的总数在限定的范围内。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3，其与具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:28的氨基酸序列的LC CDR3相比，总共包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3，其总共与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的HCCDR2和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HC CDR3具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含LC CDR1、LCCDR2和LC CDR3，其总共与具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:28的氨基酸序列的LC CDR3具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含：与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HCCDR1；与具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的HC CDR2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HC CDR2；和/或与具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HCCDR3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HC CDR3。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含：与具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的LC CDR1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR1；与具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的LC CDR2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR2；和/或与具有SEQ ID NO:28的氨基酸序列的LC CDR3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR3。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:36的氨基酸序列的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:37的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含与SEQ ID NO:36所示的VH相比含有不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含与SEQ IDNO:37所示的VL相比含有不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含含有与SEQ ID NO:36所示的VH具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含含有与SEQ ID NO:37所示的VL具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含具有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变结构域的HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含具有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链可变结构域的LC CDR1、LC CDR2和LCCDR3。
在一些实施方案中，根据Kabat定义系统，本公开内容的抗HJV抗体包含：具有SEQID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2，具有SEQ IDNO:3的氨基酸序列的HC CDR3；具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ IDNO:5的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的LC CDR3。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3，其与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2和具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HC CDR3相比，总共包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。如在本公开内容的任何地方使用的“总共”意指所有三个重链CDR中的氨基酸变异的总数在限定的范围内。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3，其与具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的LC CDR3相比，总共包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3，其总共与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HCCDR2和具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HC CDR3具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含LC CDR1、LCCDR2和LC CDR3，其总共与具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的LC CDR3具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含：与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HCCDR1；与具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HC CDR2；和/或与具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCCDR3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HC CDR3。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含：与具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的LC CDR1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR1；与具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的LC CDR2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR2；和/或与具有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的LC CDR3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR3。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含与SEQ ID NO:38所示的VH相比含有不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含与SEQ IDNO:39所示的VL相比含有不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含含有与SEQ ID NO:38所示的VH具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含含有与SEQ ID NO:39所示的VL具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含具有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变结构域的HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含具有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的轻链可变结构域的LC CDR1、LC CDR2和LCCDR3。
在一些实施方案中，根据Kabat定义系统，本公开内容的抗HJV抗体包含：具有SEQID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2，具有SEQ IDNO:3的氨基酸序列的HC CDR3；具有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ IDNO:22的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:28的氨基酸序列的LC CDR3。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3，其与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2和具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HC CDR3相比，总共包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。如在本公开内容的任何地方使用的“总共”意指所有三个重链CDR中的氨基酸变异的总数在限定的范围内。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3，其与具有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:28的氨基酸序列的LC CDR3相比，总共包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3，其总共与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HCCDR2和具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HC CDR3具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含LC CDR1、LCCDR2和LC CDR3，其总共与具有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:28的氨基酸序列的LC CDR3具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含：与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HCCDR1；与具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HC CDR2；和/或与具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCCDR3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HC CDR3。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含：与具有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的LC CDR1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR1；与具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的LC CDR2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR2；和/或与具有SEQ ID NO:28的氨基酸序列的LC CDR3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR3。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含与SEQ ID NO:38所示的VH相比含有不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含与SEQ IDNO:41所示的VL相比含有不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含含有与SEQ ID NO:38所示的VH具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含含有与SEQ ID NO:41所示的VL具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含具有SEQ ID NO:42的氨基酸序列的重链可变结构域的HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含具有SEQ ID NO:43的氨基酸序列的轻链可变结构域的LC CDR1、LC CDR2和LCCDR3。
在一些实施方案中，根据Kabat定义系统，本公开内容的抗HJV抗体包含：具有SEQID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2，具有SEQ IDNO:12的氨基酸序列的HC CDR3；具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ IDNO:23的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的LC CDR3。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3，其与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2和具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的HC CDR3相比，总共包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。如在本公开内容的任何地方使用的“总共”意指所有三个重链CDR中的氨基酸变异的总数在限定的范围内。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3，其与具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的LC CDR3相比，总共包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3，其总共与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HCCDR2和具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的HC CDR3具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含LC CDR1、LCCDR2和LC CDR3，其总共与具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的LC CDR3具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含：与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HCCDR1；与具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HC CDR2；和/或与具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的HCCDR3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HC CDR3。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含：与具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的LC CDR1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR1；与具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的LC CDR2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR2；和/或与具有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的LC CDR3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR3。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:42的氨基酸序列的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:43的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含与SEQ ID NO:42所示的VH相比含有不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含与SEQ IDNO:43所示的VL相比含有不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含含有与SEQ ID NO:42所示的VH具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含含有与SEQ ID NO:43所示的VL具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含具有SEQ ID NO:44的氨基酸序列的重链可变结构域的HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含具有SEQ ID NO:45的氨基酸序列的轻链可变结构域的LC CDR1、LC CDR2和LCCDR3。
在一些实施方案中，根据Kabat定义系统，本公开内容的抗HJV抗体包含：具有SEQID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2，具有SEQ IDNO:13的氨基酸序列的HC CDR3；具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ IDNO:21的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的LC CDR3。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3，其与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2和具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的HC CDR3相比，总共包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。如在本公开内容的任何地方使用的“总共”意指所有三个重链CDR中的氨基酸变异的总数在限定的范围内。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3，其与具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的LC CDR3相比，总共包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3，其总共与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HCCDR2和具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的HC CDR3具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含LC CDR1、LCCDR2和LC CDR3，其总共与具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的LC CDR1、具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的LC CDR3具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含：与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC CDR1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HCCDR1；与具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HC CDR2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HC CDR2；和/或与具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的HCCDR3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的HC CDR3。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含：与具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的LC CDR1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR1；与具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的LC CDR2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR2；和/或与具有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的LC CDR3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的LC CDR3。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:44的氨基酸序列的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:45的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含与SEQ ID NO：44所示的VH相比含有不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含与SEQ IDNO：45所示的VL相比含有不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)的VL。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含含有与SEQ ID NO：44所示的VH具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列的VH。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含含有与SEQ ID NO：45所示的VL具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列的VL。
当使用不同的定义系统(例如，IMGT定义、Kabat定义或Chothia定义)时，抗体的CDR可能具有不同的氨基酸序列。定义系统用数字对给定抗体序列(例如，VH或VL序列)中的每个氨基酸进行注释，并且在表2中提供了对应于重链CDR和轻链CDR的数字。表1中列出的CDR是根据Kabat定义限定的。本领域技术人员能够使用不同的编号系统推导出表1中提供的抗HJV抗体的CDR序列。
表2.CDR定义
IMGT<sup>1</sup> Kabat<sup>2</sup> Chothia<sup>3</sup>
HC CDR1 27-38 31-35 26-32
HC CDR2 56-65 50-65 53-55
HC CDR3 105-116/117 95-102 96-101
LC CDR1 27-38 24-34 26-32
LC CDR2 56-65 50-56 50-52
LC CDR3 105-116/117 89-97 91-96
1
Figure BDA0004016554230000691
国际ImMunoGeneTics
Figure BDA0004016554230000692
mgt.org，Lefranc，M.-P.et al.，Nucleic Acids Res.，27：209-212(1999)
2Kabat et al.(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，Fifth Edition，U.S.Department of Health and Human Services,NIH PublicationNo.91-3242
3Chothia et al.，J.Mol.Biol.196：901-917(1987))
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体是嵌合抗体，其可包含来自人抗体的重恒定区和轻恒定区。嵌合抗体是指具有来自第一物种的可变区或可变区的一部分以及来自第二物种的恒定区的抗体。通常来说，在这些嵌合抗体中，轻链和重链二者的可变区模拟来源于一种哺乳动物(例如，非人哺乳动物，例如小鼠、兔和大鼠)的抗体的可变区，而恒定部分与来源于另一种哺乳动物(例如人)的抗体中的序列同源。在一些实施方案中，可在可变区和/或恒定区中进行氨基酸修饰。
在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体是嵌合抗体，其可包含来自人抗体的重恒定区和轻恒定区。嵌合抗体是指具有来自第一物种的可变区或可变区的一部分以及来自第二物种的恒定区的抗体。通常来说，在这些嵌合抗体中，轻链和重链二者的可变区模拟来源于一种哺乳动物(例如，非人哺乳动物，例如小鼠、兔和大鼠)的抗体的可变区，而恒定部分与来源于另一种哺乳动物(例如人)的抗体中的序列同源。在一些实施方案中，可在可变区和/或恒定区中进行氨基酸修饰。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含选自表1的任一种抗HJV抗体的VL结构域和/或VH结构域，并且包含恒定区，所述恒定区包含IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子、免疫球蛋白分子的任何类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或任何亚类(例如，IgG2a和IgG2b)的恒定区的氨基酸序列。人恒定区的一些非限制性实例在本领域中描述，例如参见上文Kabat E A et al.,(1991)。以下给出了人IgG1恒定区的一个实例：
Figure BDA0004016554230000701
在一些实施方案中，本文中所述的任何抗HJV抗体的重链包含突变体人IgG1恒定区。例如，已知在人IgG1的CH2结构域中引入LALA突变(来源于mAb b12的突变体，其已突变以用Ala234和Ala235替换较低的铰链残基Leu234 Leu235)降低了Fcg受体结合(Bruhns,P.,et al.(2009)和Xu,D.et al.(2000))。以下提供了突变体人IgG1恒定区(突变加粗并带有下划线)：
Figure BDA0004016554230000711
在一些实施方案中，本文所述的任何抗HJV抗体的重链还包含人IgG1恒定区中的突变。例如，引入T250Q和M248L替换。在一些实施方案中，这样的替换可影响FcRn结合和血清半衰期(WO2005047307和WO2013063110)。下面提供了包含LALA突变和QL突变的示例性IgG1恒定区(突变加粗并带有下划线)：
Figure BDA0004016554230000712
在一些实施方案中，在抗体产生期间，特别是用中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)产生抗体期间，可以理解重链C端的赖氨酸被切割。因此，分泌抗体内的人IgG1恒定区可以是：
Figure BDA0004016554230000713
在一些实施方案中，在分泌抗体中包含LALA突变的突变体人IgG1可以是：
Figure BDA0004016554230000714
在一些实施方案中，包含LALA突变和QL突变的突变体人IgG1可以是：
Figure BDA0004016554230000721
在一些实施方案中，本文中所述的任何抗HJV抗体的轻链可还包含轻链恒定区(CL)，其可以是本领域已知的任何CL。在一些实例中，CL是κ轻链。在另一些实例中，CL是λ轻链。在一些实施方案中，CL是κ轻链，以下提供了其序列：
Figure BDA0004016554230000722
其他抗体重链和轻链恒定区是本领域公知的，例如，在IMGT数据库(www.imgt.org)或www.vbase2.org/vbstat.php.中提供的那些，二者均通过引用并入本文。
在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含表1中列出的任一种VH或其任意变体以及与SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:112、或SEQ IDNO:113具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性的重链恒定区。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含表1中列出的任一种VH或其任意变体以及与SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:112、或SEQ ID NO:113相比包含不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)的重链恒定区。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含表1中列出的任一种VH或其任意变体以及SEQ ID NO:46中所示的重链恒定区。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含表1中列出的任一种VH或其任意变体以及SEQ ID NO:48中所示的重链恒定区。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含表1中列出的任一种VH或其任意变体以及SEQ ID NO:112中所示的重链恒定区。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含表1中列出的任一种VH或其任意变体以及SEQ ID NO:113中所示的重链恒定区。
在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链包含表1中列出的任一种VL或其任意变体以及与SEQ ID NO:47具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性的轻链恒定区。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链包含表1中列出的任一种VL或其任意变体以及与SEQ ID NO:47相比包含不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)的轻链恒定区。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链包含表1中列出的任一种VL或其任意变体以及SEQ ID NO:47中所示的轻链恒定区。
上表1中提供了所述抗HJV抗体的IgG重链和轻链氨基酸序列的实例。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:51、57、59、61、63、66、68、114、115、116、117、118、119或120中任一个中所示的重链相比包含不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:52、53、54、55、56、58、60、62、65、67或69中任一个所示的轻链相比含有不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含与SEQ IDNO:51、57、59、61、63、66、68、114、115、116、117、118、119或120中的任一个具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。替代地或另外地，本文中所述的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链包含与SEQ ID NO:52、53、54、55、56、58、60、62、65、67或69中的任一个具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:51、57、59、61、63、66、68、114、115、116、117、118、119或120中任一个的氨基酸序列。替代地或另外地，本文中所述的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:52、53、54、55、56、58、60、62、65、67或69中任一个的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:51或114中任一个中所示的重链相比包含不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:52中任一个所示的轻链相比含有不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含与SEQID NO:51或114中的任一个具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。替代地或另外地，本文中所述的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链包含与SEQID NO:52中的任一个具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含SEQ IDNO:51或114中任一个的氨基酸序列。替代地或另外地，本文中所述的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:52中任一个的氨基酸序列的轻链。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:51或114中任一个中所示的重链相比包含不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:53中任一个所示的轻链相比包含不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含与SEQID NO:51或114中的任一个具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。替代地或另外地，本文中所述的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链包含与SEQID NO:53中的任一个具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含SEQ IDNO:51或114中任一个的氨基酸序列。替代地或另外地，本文中所述的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:53中任一个的氨基酸序列的轻链。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:51或114中任一个中所示的重链相比包含不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:54中任一个所示的轻链相比包含不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含与SEQID NO:51或114中的任一个具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。替代地或另外地，本文中所述的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链包含与SEQID NO:54中的任一个具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含SEQ IDNO:51或114中任一个的氨基酸序列。替代地或另外地，本文中所述的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:54中任一个的氨基酸序列的轻链。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:51或114中任一个中所示的重链相比包含不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:55中任一个所示的轻链相比包含不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含与SEQID NO:51或114中的任一个具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。替代地或另外地，本文中所述的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链包含与SEQID NO:55中的任一个具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含SEQ IDNO:51或114中任一个的氨基酸序列。替代地或另外地，本文中所述的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:55中任一个的氨基酸序列的轻链。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:51或114中任一个中所示的重链相比包含不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:56中任一个所示的轻链相比包含不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含与SEQID NO:51或114中的任一个具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。替代地或另外地，本文中所述的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链包含与SEQID NO:56中的任一个具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含SEQ IDNO:51或114中任一个的氨基酸序列。替代地或另外地，本文中所述的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:56中任一个的氨基酸序列的轻链。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:57或115中任一个中所示的重链相比包含不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:58中任一个所示的轻链相比包含不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含与SEQID NO:57或115中的任一个具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。替代地或另外地，本文中所述的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链包含与SEQID NO:58中的任一个具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含SEQ IDNO:57或115中任一个的氨基酸序列。替代地或另外地，本文中所述的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:58中任一个的氨基酸序列的轻链。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:59或116中任一个中所示的重链相比包含不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:60中任一个所示的轻链相比包含不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含与SEQID NO:59或116中的任一个具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。替代地或另外地，本文中所述的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链包含与SEQID NO:60中的任一个具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含SEQ IDNO:59或116中任一个的氨基酸序列。替代地或另外地，本文中所述的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:60中任一个的氨基酸序列的轻链。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:61或117中任一个中所示的重链相比包含不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:62中任一个所示的轻链相比包含不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含与SEQID NO:61或117中的任一个具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。替代地或另外地，本文中所述的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链包含与SEQID NO:62中的任一个具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含SEQ IDNO:61或117中任一个的氨基酸序列。替代地或另外地，本文中所述的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:62中任一个的氨基酸序列的轻链。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:63或118中任一个中所示的重链相比包含不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:62中任一个所示的轻链相比包含不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含与SEQID NO:63或118中的任一个具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。替代地或另外地，本文中所述的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链包含与SEQID NO:62中的任一个具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含SEQ IDNO:63或118中任一个的氨基酸序列。替代地或另外地，本文中所述的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:62中任一个的氨基酸序列的轻链。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:61或117中任一个中所示的重链相比包含不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:65中任一个所示的轻链相比包含不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含与SEQID NO:61或117中的任一个具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。替代地或另外地，本文中所述的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链包含与SEQID NO:65中的任一个具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含SEQ IDNO:61或117中任一个的氨基酸序列。替代地或另外地，本文中所述的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:65中任一个的氨基酸序列的轻链。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:66或119中任一个中所示的重链相比包含不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:67中任一个所示的轻链相比包含不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含与SEQID NO:66或119中的任一个具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。替代地或另外地，本文中所述的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链包含与SEQID NO:67中的任一个具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含SEQ IDNO:66或119中任一个的氨基酸序列。替代地或另外地，本文中所述的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:67中任一个的氨基酸序列的轻链。
在一些实施方案中，本公开内容的抗HJV抗体包含重链，所述重链与SEQ ID NO:68或120中任一个中所示的重链相比包含不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。替代地或另外地，本公开内容的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链与SEQ ID NO:69中任一个所示的轻链相比包含不超过20个氨基酸变异(例如，不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含与SEQID NO:68或120中的任一个具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。替代地或另外地，本文中所述的抗HJV抗体包含轻链，所述轻链包含与SEQID NO:69中的任一个具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含重链，所述重链包含SEQ IDNO:68或120中任一个的氨基酸序列。替代地或另外地，本文中所述的抗HJV抗体包含含有SEQ ID NO:69中任一个的氨基酸序列的轻链。
本文中所述的抗HJV抗体可以是任何抗体形式，包括但不限于完整(即全长)抗体、其抗原结合片段(例如Fab、F(ab’)、F(ab’)2、Fv)、单链抗体、双特异性抗体或纳米抗体。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体是scFv。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体是scFv-Fab(例如，与恒定区的一部分融合的scFv)。
在一些实施方案中，可在残基不太可能参与与靶抗原(例如，血幼素)相互作用的位置(例如，如基于晶体结构确定的)处将保守突变引入抗体序列(例如，CDR或框架序列)中。在一些实施方案中，将一个、两个或更多个突变(例如，氨基酸替换)引入本文中所述的抗HJV抗体的Fc区(例如，在CH2结构域(人IgG1的第231至340位残基)和/或CH3结构域(人IgG1的第341至447位残基)和/或铰链区中，根据Kabat编号系统(例如，Kabat中的EU索引)编号)，以改变抗体的一种或更多种功能特性，例如血清半衰期、补体固定、Fc受体结合和/或抗原依赖性细胞毒性。
在一些实施方案中，将一个、两个或更多个突变(例如，氨基酸替换)引入Fc区(CH1结构域)的铰链区中，使得铰链区中的半胱氨酸残基的数目改变(例如，提高或降低)，如例如美国专利No.5,677,425中所述。可改变CH1结构域的铰链区中半胱氨酸残基的数目，例如以促进轻链和重链的组装，或改变(例如，提高或降低)抗体的稳定性或促进接头缀合。
在一些实施方案中，将一个、两个或更多个突变(例如，氨基酸替换)引入本文所述的肌肉靶向抗体的Fc区(例如，在CH2结构域(人IgG1的第231至340位残基)和/或CH3结构域(人IgG1的第341至447位残基)和/或铰链区中，根据Kabat编号系统(例如，Kabat中的EU索引)编号)，以提高或降低抗体对效应细胞表面上Fc受体(例如，激活的Fc受体)的亲和力。降低或提高抗体对Fc受体的亲和力的抗体Fc区中突变以及将这样的突变引入Fc受体或其片段的技术是本领域技术人员已知的。可被进行以改变抗体对Fc受体的亲和力的抗体Fc受体中突变的一些实例描述于以下中：例如Smith P et al.,(2012)PNAS 109:6181-6186，美国专利No.6,737,056，以及国际公开No.WO 02/060919、WO 98/23289、和WO 97/34631，其通过引用并入本文。
在一些实施方案中，将一个、两个或更多个氨基酸突变(即，替换、插入或缺失)引入IgG恒定结构域或其FcRn结合片段(优选地，Fc或铰链-Fc结构域片段)中以改变(例如，降低或提高)抗体在体内的半衰期。参见例如国际公开No.WO 02/060919、WO 98/23289和WO97/34631，以及美国专利No.5,869,046、6,121,022、6,277,375和6,165,745，例如将改变(例如，降低或提高)抗体在体内的半衰期的突变。
在一些实施方案中，将一个、两个或更多个氨基酸突变(即，替换、插入或缺失)引入IgG恒定结构域或其FcRn结合片段(优选地，Fc或铰链-Fc结构域片段)中以降低体内抗HJV抗体的半衰期。在一些实施方案中，将一个、两个或更多个氨基酸突变(即，替换、插入或缺失)引入IgG恒定结构域或其FcRn结合片段(优选地，Fc或铰链-Fc结构域片段)中以提高抗体在体内的半衰期。在一些实施方案中，抗体可在第二恒定(CH2)结构域(人IgG1的第231至340位残基)和/或第三恒定(CH3)结构域(人IgG1的第341至447位残基)(根据Kabat中的EU索引(Kabat E A et al.,(1991)同上)编号)中具有一个或更多个氨基酸突变(例如，替换)。在一些实施方案中，本文中所述的抗体的IgG1的恒定区包含在第252位处的甲硫氨酸(M)至酪氨酸(Y)替换，在第254位处的丝氨酸(S)至苏氨酸(T)替换，以及在第256位处的苏氨酸(T)至谷氨酸(E)替换，所述位置根据Kabat中的EU索引编号。参见美国专利No.7,658,921，其通过引用并入本文。这种类型的突变体IgG(称为“YTE突变体”)已显示出与同一抗体的野生型形式相比半衰期提高4倍(参见Dall’Acqua W F et al.,(2006)J Biol Chem281:23514-24)。在一些实施方案中，抗体包含IgG恒定结构域，该结构域包含在第251至257、285至290、308至314、385至389和428至436位处的氨基酸残基的一个、两个、三个或更多个氨基酸替换，所述位置根据Kabat中的EU索引编号。
在一些实施方案中，将一个、两个或更多个氨基酸替换引入IgG恒定结构域Fc区中，以改变抗HJV抗体的效应子功能。对其的亲和力被改变的效应配体可以是例如Fc受体或补体的C1组分。这种方法在美国专利No.5,624,821和5,648,260中有更详细的描述。在一些实施方案中，恒定区结构域的缺失或失活(通过点突变或其他方式)可降低循环抗体的Fc受体结合，从而提高肿瘤定位。对于使恒定结构域缺失或失活从而提高肿瘤定位的突变的描述，参见例如美国专利No.5,585,097和8,591,886。在一些实施方案中，可将一个或更多个氨基酸替换引入本文中所述的抗体的Fc区中，以去除Fc区上潜在的糖基化位点，这可降低Fc受体结合(参见，例如Shields R L et al.,(2001)J Biol Chem 276:6591-604)。
在一些实施方案中，可将本文中所述的抗HJV抗体的恒定区中的一个或更多个氨基替换为不同的氨基酸残基，使得抗体具有改变的C1q结合和/或者降低或消除的补体依赖性细胞毒性(CDC)。这种方法在美国专利No.6,194,551(Idusogie et al)中有更详细的描述。在一些实施方案中，改变本文中所述的抗体的CH2结构域的N端区域中的一个或更多个氨基酸残基，从而改变抗体的固定补体的能力。这种方法在国际公开No.WO 94/29351中有进一步描述。在一些实施方案中，对本文中所述的抗体的Fc区进行修饰以提高抗体的介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的能力和/或提高抗体对Fcγ受体的亲和力。这种方法在国际公开No.WO 00/42072中有进一步描述。
在一些实施方案中，本文中提供的抗体的重链和/或轻链可变结构域序列可用于产生例如CDR接枝、嵌合、人源化或复合的人抗体或抗原结合片段，如本文中其他地方所述。如本领域普通技术人员所理解的，来源于本文中提供的任何抗体的任何变体(CDR接枝、嵌合、人源化或复合的抗体)可用于本文中所述的组合物和方法中，并将维持特异性结合血幼素的能力，从而使得相对于其所来源原始抗体，变体(CDR接枝、嵌合、人源化或复合的抗体)具有至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更多的与血幼素的结合。
在一些实施方案中，本文中提供的抗体包含赋予抗体以期望性质的突变。例如，为了避免归因于已知与天然IgG4 mAb发生的Fab臂交换而引起的潜在并发症，本文中提供的抗体可包含稳定性‘Adair’突变(Angal S.,et al.,“A single amino acid substitutionabolishes the heterogeneity of chimeric mouse/human(IgG4)antibody,”MolImmunol 30,105-108；1993)，其中第228位(EU编号，根据Kabat编号为第241位残基)丝氨酸转化为脯氨酸，从而产生了IgG1样铰链序列。因此，任何抗体都可包含稳定性‘Adair’突变。
在一些实施方案中，对抗体进行修饰，例如，通过糖基化、磷酸化、SUMO化(sumoylation)和/或甲基化进行修饰。在一些实施方案中，抗体是与一个或更多个糖或碳水化合物分子缀合的糖基化抗体。在一些实施方案中，一个或更多个糖或碳水化合物分子通过N-糖基化、O-糖基化、C-糖基化、糖基磷脂酰肌醇化(GPI锚定附着)和/或磷酸糖基化(phosphoglycosylation)与抗体缀合。在一些实施方案中，一个或更多个糖或碳水化合物分子是单糖、二糖、寡糖或聚糖。在一些实施方案中，一个或更多个糖或碳水化合物分子是支化的寡糖或支化的聚糖。在一些实施方案中，一个或更多个糖或碳水化合物分子包含甘露糖单元、葡萄糖单元、N-乙酰葡糖胺单元、N-乙酰半乳糖胺单元、半乳糖单元、岩藻糖单元或磷脂单元。在一些实施方案中，存在约1至10、约1至5、约5至10、约1至4、约1至3或约2个糖分子。在一些实施方案中，糖基化抗体是完全或部分糖基化的。在一些实施方案中，通过化学反应或通过酶促手段使抗体糖基化。在一些实施方案中，抗体在体外或细胞内被糖基化，其可任选地缺少N-或O-糖基化途径中的酶，例如糖基转移酶。在一些实施方案中，用糖或碳水化合物分子对抗体进行官能化，如2014年5月1日公开的标题为“Modified antibody,antibody-conjugate and process for the preparation thereof”的国际专利申请公开WO2014065661中所述。
在一些实施方案中，本文中所述的任一种抗HJV抗体可在重链序列和/或轻链序列中包含信号肽(例如，N端信号肽)。在一些实施方案中，本文中所述的抗HJV抗体包含VH和VL序列中的任一种、IgG重链序列和轻链序列中的任一种、或者本文中所述的F(ab’)重链序列和F(ab’)轻链序列中的任一种，并且还包含信号肽(例如，N端信号肽)。在一些实施方案中，信号肽包含MEFGLSWLFLVAILKGVQC(SEQ ID NO：104)的氨基酸序列。
III.抗HJV抗体的制备
如本文所述的能够结合血幼素的抗体可以通过本领域已知的任何方法制备。例如参见Harlow and Lane，(1998)Antibodies：A Laboratory Manual，Cold Spring HarborLaboratory,New York。
在一些实施方案中，可通过常规的杂交瘤技术来制备对靶抗原(例如，HJV)具有特异性的抗体。任选地与载体蛋白例如KLH偶联的全长靶抗原或其片段可用于对进行宿主动物免疫接种以产生与该抗原结合的抗体。如本文中进一步描述的，宿主动物的免疫接种的途径和方案通常与用于抗体刺激和产生的已建立的和常规的技术保持一致。用于产生小鼠抗体、人源化抗体和人抗体的一般技术是本领域已知的并且在本文中进行了描述。考虑了任何哺乳动物对象(包括人)或从其来源的产生抗体的细胞均可被操作以用作产生哺乳动物(包括人)杂交瘤细胞系的基础。通常来说，向宿主动物腹膜内、肌内、经口、皮下、足底内(intraplantar)和/或皮内接种一定量的免疫原(包括如本文中所述的)。
如果期望的话，可对目的(例如，通过杂交瘤产生的)抗体(单克隆的或多克隆的)进行测序，并随后可将多核苷酸序列克隆到用于表达或增殖的载体中。编码目的抗体的序列可保持在宿主细胞中的载体中，并随后可扩增宿主细胞并冷冻以供将来使用。在一个替代方案中，多核苷酸序列可被用于遗传操作以使抗体“人源化”或改善抗体的亲和力(亲和力成熟)或其他特征。例如，如果抗体用于人的临床试验和治疗，则可将恒定区工程化成更类似于人恒定区以避免免疫应答。可期望对抗体序列进行遗传操作以获得对靶抗原更大的亲和力和更大的效力。对本领域技术人员明显的是，可对抗体进行一种或更多种多核苷酸改变并且仍保持其对靶抗原的结合特异性。
在另一些实施方案中，可通过使用已被工程化以表达特定人免疫球蛋白的市售小鼠来获得完全人抗体。被设计以产生更期望的(例如，完全人抗体)或更稳健的免疫应答的转基因动物也可用于产生人源化抗体或人抗体。这样的技术的一些实例是来自Amgen,Inc.(Fremont,CA)的XenomouseRTM和来自Medarex,Inc.(Princeton,NJ)的HuMAb-MouseRTM和TCMouseTM或来自Harbour Antibodies BV(Holland)的H2L2小鼠。在另一个替代方案中，可通过噬菌体展示或酵母技术重组地制备抗体。参见，例如，美国专利No.5,565,332；5,580,717；5,733,743和6,265,150；以及Winter et al.,(1994)Annu.Rev.Immunol.12:433-455。或者，噬菌体展示技术(McCafferty et al.,(1990)Nature 348:552-553)可用于由来自未经免疫接种的供体的免疫球蛋白可变(V)结构域基因库体外产生人抗体和抗体片段。
完整抗体(全长抗体)的抗原结合片段可通过常规方法制备。例如，F(ab')2片段可通过抗体分子的胃蛋白酶消化来产生，并且Fab片段可通过还原F(ab')2片段的二硫桥来产生。经遗传工程化的抗体，例如人源化抗体、嵌合抗体、单链抗体和双特异性抗体，可通过例如常规重组技术来产生。在一个实例中，编码对靶抗原具有特异性的单克隆抗体的DNA可使用常规程序容易地分离和测序(例如，通过使用能够特异性结合编码单克隆抗体的重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)。杂交瘤细胞充当这样的DNA的优选来源。一旦分离，DNA即可被置入一种或更多种表达载体中，然后将所述载体转染到宿主细胞(例如在其他情况下不产生免疫球蛋白的大肠杆菌(E.coli)细胞、猿猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(Chinese hamsterovary，CHO)细胞、人HEK293细胞或骨髓瘤细胞)中，以在重组宿主细胞中获得单克隆抗体的合成。参见例如PCT公开No.WO 87/04462。然后可修饰DNA，例如，通过替换人重链和轻链恒定结构域的编码序列来代替同源鼠序列，Morrison et al.,(1984)Proc.Nat.Acad.Sci.81:6851，或通过将非免疫球蛋白多肽的编码序列的全部或一部分共价连接至免疫球蛋白编码序列。以这种方式，可以制备具有对靶抗原的结合特异性的经遗传工程化的抗体，例如“嵌合”或“杂交”抗体。
可通过重组技术通过连接编码重链可变区的核苷酸序列和编码轻链可变区的核苷酸序列来制备单链抗体。优选地，在两个可变区之间并入柔性接头。
或者，所描述的用于产生单链抗体的技术(美国专利No.4,946,778和4,704,692)可进行调整以产生噬菌体或酵母scFv文库，并且可遵循常规程序从文库中鉴定出对HJV具有特异性的scFv克隆。可对阳性克隆进行进一步筛选，以鉴定出具有高HJV结合亲和力的那些。
遵循本领域已知的和本文中所述的方法获得的抗体可使用本领域公知的方法来表征。例如，一种方法是鉴定与抗原结合的表位，或“表位作图”。本领域已知有许多方法用于对蛋白质上表位的位置进行作图和表征，包括解析抗体-抗原复合物的晶体结构、竞争测定、基因片段表达测定和基于合成肽的测定，如例如在Harlow and Lane,UsingAntibodies,a Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,ColdSpring Harbor,N.Y.,1999的第11章中所述。在一个实例中，可使用与蛋白水解和质谱偶联的H/D-Ex(氢氘交换)来完成表位作图。在另一个实例中，表位作图可用于确定与抗体结合的序列。表位可以是线性表位，即包含在单个氨基酸区段中，或者可以是通过氨基酸的三维相互作用形成的构象表位，其可以不一定包含在单个区段中(一级结构线性序列)。可分离或合成(例如，重组地分离或合成)不同长度(例如，至少4至6个氨基酸长)的肽，并将其用于与抗体的结合测定。在另一个实例中，与抗体结合的表位可在系统筛选中通过使用来源于靶抗原序列的重叠肽并确定抗体的结合来确定。根据基因片段表达测定，将编码靶抗原的开放读码框随机地或通过特定的遗传构建进行片段化，并确定所表达的抗原片段与受试抗体的反应性。例如，基因片段可通过PCR产生，并随后转录并在存在放射性氨基酸的情况下在体外翻译成蛋白质。然后通过免疫沉淀和凝胶电泳来确定抗体与经放射性标记的抗原片段的结合。某些表位还可通过使用展示在噬菌体颗粒表面上的大的随机肽序列文库(噬菌体文库)来鉴定。或者，可在简单结合测定中测试所确定的重叠肽片段文库与受试抗体的结合。在另一个实例中，可进行抗原结合结构域的诱变、结构域交换实验和丙氨酸扫描诱变来鉴定对于表位结合而言所需、足够和/或必需的残基。或者，可使用已知与相同抗原结合的其他抗体进行竞争测定，以确定抗体是否与其他抗体结合相同的表位。竞争测定是本领域技术人员公知的。
在一些实例中，通过如下例示的重组技术制备抗HJV抗体。可将编码如本文中所述的抗HJV抗体的重链和轻链的核酸克隆到一个表达载体中，每个核苷酸序列与合适的启动子可操作连接。在一个实例中，编码所述重链和轻链的每个核苷酸序列与不同的启动子可操作连接。或者，编码所述重链和轻链的核苷酸序列可与单个启动子可操作连接，使得重链和轻链二者均由相同的启动子表达。必要时，可在重链编码序列和轻链编码序列之间插入内部核糖体进入位点(internal ribosomal entry site，IRES)。
在一些实例中，将编码抗体的两条链的核苷酸序列克隆到两种载体中，所述两种载体可被引入到相同或不同的细胞中。当两条链在不同细胞中表达时，可将其各自从表达它们的宿主细胞分离，并且可将所分离的重链和轻链混合并在允许形成抗体的合适条件下孵育。
一般而言，可使用本领域已知的方法将编码抗体的一条链或所有链的核酸序列克隆到与合适的启动子可操作连接的合适表达载体中。例如，可在合适的条件下使核苷酸序列和载体与限制性酶接触，以在每个分子上产生可彼此配对并用连接酶连接在一起的互补末端。或者，可将合成核酸接头与基因的末端连接。这些合成接头包含对应于载体中特定限制性位点的核酸序列。表达载体/启动子的选择将取决于用于产生抗体的宿主细胞的类型。
多种启动子可用于表达本文中所述的抗体，包括但不限于巨细胞病毒(CMV)中间早期启动子、病毒LTR(例如，劳斯肉瘤(Rous sarcoma)病毒LTR、HIV-LTR、HTLV-1LTR)、猿猴病毒40(SV40)早期启动子、大肠杆菌lac UV启动子和单纯疱疹tk病毒启动子。
还可使用可调节启动子。这样的可调节启动子包括：使用来自大肠杆菌的lac阻遏物作为转录调节物来调节来自带有lac操纵子的哺乳动物细胞启动子的转录的那些[Brown,M.et al.,Cell,49:603-612(1987)]，使用四环素阻遏物(tetracyclinerepressor，tetR)的那些[Gossen,M.,and Bujard,H.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:5547-555115(1992)；Yao,F.et al.,Human Gene Therapy,9:1939-1950(1998)；Shockelt,P.,etal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,92:6522-6526(1995)]。另一些系统包括：FK506二聚体，使用astradiol的VP16或p65，RU486，二酚米乐甾酮(diphenol murislerone)或雷帕霉素。可诱导系统可从Invitrogen、Clontech和Ariad等获得。
可使用包含具有操纵子的阻遏物的可调节启动子。在一个实施方案中，来自大肠杆菌的lac阻遏物可作为转录调节物发挥作用来调节来自带有lac操纵子的哺乳动物细胞启动子的转录[M.Brown et al.,Cell,49:603-612(1987)]；Gossen and Bujard(1992)；[M.Gossen et al.,Natl.Acad.Sci.USA,89:5547-5551(1992)]将四环素阻遏物(tetR)与转录激活物(VP16)组合以产生tetR-哺乳动物细胞转录激活物融合蛋白tTa(tetR-VP16)，其中tetO带有来源于人巨细胞病毒(human cytomegalovirus，hCMV)启动子的最小启动子，以产生tetR-tet操纵子系统来控制哺乳动物细胞中的基因表达。在一个实施方案中，使用四环素可诱导开关。当四环素操纵子适当地位于CMVIE启动子的TATA元件下游时，单独的四环素阻遏物(tetR)而不是tetR-哺乳动物细胞转录因子融合衍生物可作为强效反式调节物发挥作用来调节哺乳动物细胞中的基因表达(Yao et al.,Human Gene Therapy)。这种四环素可诱导开关的一个特别的优点是它不需要使用在一些情况下对细胞可能有毒性的四环素阻遏物-哺乳动物细胞反式激活子或阻遏物融合蛋白(Gossen 5et al.,Natl.Acad.Sci.USA,89:5547-5551(1992)；Shockett et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,92:6522-6526(1995))，以实现其可调节的作用。
另外，载体可包含例如以下中的一些或全部：选择标志物基因，例如用于在哺乳动物细胞中选择稳定或瞬时转染子的新霉素基因；用于高水平转录的来自人CMV的即早期基因的增强子/启动子序列；用于mRNA稳定性的来自SV40的转录终止和RNA加工信号；用于适当的附加体复制的SV40多瘤复制起点和ColE1；内部核糖体结合位点(IRES)、多功能多克隆位点；以及用于有义和反义RNA的体外转录的T7和SP6 RNA启动子。合适载体和用于产生含有转基因的载体的方法是本领域公知的并且是可获得的。可用于实践本文中所述方法的多腺苷酸化信号的一些实例包括但不限于人胶原蛋白I多腺苷酸化信号、人胶原蛋白II多腺苷酸化信号和SV40多腺苷酸化信号。
包含编码任何抗体的核酸(例如，表3中列出的核酸编码序列)的一种或更多种载体(例如，表达载体)可以引入到合适的宿主细胞中以产生抗体。宿主细胞的非限制性实例包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、dhfr-CHO细胞、人胚肾(HEK)-293细胞、verda reno(VERO)细胞、非分泌型null(NS0)细胞、人胚视网膜(PER.C6)细胞、Sp2/0细胞、小仓鼠肾(babyhamster kidney，BHK)细胞、马丁-达比犬肾(MDCK)细胞、马丁-达比牛肾(MDBK)细胞和由SV40(COS)细胞转化的猴肾CV1系。在一些实施方案中，表达抗HJV抗体的宿主细胞是CHO细胞。可在适合于表达抗体或其任何多肽链的条件下培养宿主细胞。这样的抗体或其多肽链可通过常规方法(例如亲和纯化)由所培养细胞(例如，从所述细胞或培养上清液)回收。如果必要的话，可在合适的条件下将抗体的多肽链孵育合适的时间段，从而允许产生抗体。在一些实施方案中，宿主细胞包含编码抗HJV抗体重链的核酸。在一些实施方案中，宿主细胞包含编码抗HJV抗体轻链的核酸。在一些实施方案中，宿主细胞包含编码重链的核酸和编码轻链的核酸。
在一些实施方案中，用于制备本文中所述抗体的方法涉及编码抗HJV抗体的重链和轻链二者的重组表达载体，其也如本文中所述。可通过常规方法，例如磷酸钙介导的转染，将重组表达载体引入到合适的宿主细胞(例如，dhfr-CHO细胞)中。可选择阳性转化体宿主细胞并在允许表达形成抗体的两条多肽链的合适条件下培养，所述多肽链可从细胞或从培养基回收。必要时，可在允许形成抗体的适合的条件下孵育从宿主细胞回收的两条链。
在一个实例中，提供了两种重组表达载体，一种编码抗HJV抗体的重链，并且另一种编码抗HJV抗体的轻链。这两种重组表达载体均可通过常规方法例如磷酸钙介导的转染引入到合适的宿主细胞(例如，dhfr-CHO细胞)中。
或者，可将每种表达载体引入到合适的宿主细胞中。可选择阳性转化体并在允许表达抗体的多肽链的合适条件下培养。当将两种表达载体引入到相同的宿主细胞中时，可从宿主细胞或从培养基回收在其中产生的抗体。如果必要的话，可从宿主细胞或从培养基回收多肽链，并随后在允许形成抗体的合适条件下孵育。当将两种表达载体引入到不同的宿主细胞中时，其各自可从相应的宿主细胞或从相应的培养基回收。然后可在合适的条件下孵育两条多肽链以形成抗体。
标准分子生物学技术用于制备重组表达载体、转染宿主细胞、选择转化体、培养宿主细胞以及从培养基回收抗体。例如，可用蛋白A或蛋白G偶联基质通过亲和色谱分离一些抗体。
编码本文中所述的抗HJV抗体的重链、轻链或这二者的任何核酸(例如，如表3中所提供的)、包含其的载体(例如，表达载体)；和包含所述载体的宿主细胞在本公开内容的范围内。
表3.编码表1中列出的抗HJV抗体的VH/VL的核酸序列
Figure BDA0004016554230000891
Figure BDA0004016554230000901
Figure BDA0004016554230000911
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Figure BDA0004016554230000971
Figure BDA0004016554230000981
Figure BDA0004016554230000991
Figure BDA0004016554230001001
在一些实施方案中，本文所述的抗HJV通过表达以下来产生：(i)与SEQ ID NO:71具有至少60％(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％)同一性的核酸，和/或(ii)与SEQ ID NO:73具有至少60％(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％)同一性的核酸。
在一些实施方案中，本文所述的抗HJV通过表达以下来产生：(i)与SEQ ID NO:71具有至少60％(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％)同一性的核酸，和/或(ii)与SEQ ID NO:75具有至少60％(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％)同一性的核酸。
在一些实施方案中，本文所述的抗HJV通过表达以下来产生：(i)与SEQ ID NO:71具有至少60％(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％)同一性的核酸，和/或(ii)与SEQ ID NO:77具有至少60％(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％)同一性的核酸。
在一些实施方案中，本文所述的抗HJV通过表达以下来产生：(i)与SEQ ID NO:71具有至少60％(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％)同一性的核酸，和/或(ii)与SEQ ID NO:79具有至少60％(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％)同一性的核酸。
在一些实施方案中，本文所述的抗HJV通过表达以下来产生：(i)与SEQ ID NO:71具有至少60％(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％)同一性的核酸，和/或(ii)与SEQ ID NO:81具有至少60％(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％)同一性的核酸。
在一些实施方案中，本文所述的抗HJV通过表达以下来产生：(i)与SEQ ID NO:84具有至少60％(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％)同一性的核酸，和/或(ii)与SEQ ID NO:85具有至少60％(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％)同一性的核酸。
在一些实施方案中，本文所述的抗HJV通过表达以下来产生：(i)与SEQ ID NO:88具有至少60％(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％)同一性的核酸，和/或(ii)与SEQ ID NO:89具有至少60％(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％)同一性的核酸。
在一些实施方案中，本文所述的抗HJV通过表达以下来产生：(i)与SEQ ID NO:92具有至少60％(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％)同一性的核酸，和/或(ii)与SEQ ID NO:93具有至少60％(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％)同一性的核酸。
在一些实施方案中，本文所述的抗HJV通过表达以下来产生：(i)与SEQ ID NO:94具有至少60％(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％)同一性的核酸，和/或(ii)与SEQ ID NO:93具有至少60％(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％)同一性的核酸。
在一些实施方案中，本文所述的抗HJV通过表达以下来产生：(i)与SEQ ID NO:92具有至少60％(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％)同一性的核酸，和/或(ii)与SEQ ID NO:96具有至少60％(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％)同一性的核酸。
在一些实施方案中，本文所述的抗HJV通过表达以下来产生：(i)与SEQ ID NO:99具有至少60％(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％)同一性的核酸，和/或(ii)与SEQ ID NO:100具有至少60％(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％)同一性的核酸。
在一些实施方案中，本文所述的抗HJV通过表达以下来产生：(i)与SEQ ID NO:40具有至少60％(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％)同一性的核酸，和/或(ii)与SEQ ID NO:64具有至少60％(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％)同一性的核酸。
在一些实施方案中，本文所述的抗HJV抗体可用于将分子载荷递送到靶细胞或靶组织(例如，表达HJV的细胞或组织)。因此，本文所述的抗HJV抗体可以与分子载荷连接。本文所述的复合物可用于各种应用，例如诊断或治疗应用。
在一些实施方案中，本文所述的复合物用于调节至少一种基因、蛋白质和/或核酸的活性或功能。在一些实施方案中，分子载荷负责基因、蛋白质和/或核酸的调节。分子载荷可以是能够调节细胞中基因、蛋白质和/或核酸的活性或功能的小分子、蛋白质、核酸、寡核苷酸或任何分子实体。在一些实施方案中，分子载荷是靶向肌细胞中疾病相关重复的寡核苷酸。
IV.药物组合物
本文中所述的抗体以及编码核酸或核酸组、包含这些的载体或包含所述载体的宿主细胞可与可药用载体(赋形剂)混合来形成用于治疗目标疾病的药物组合物。“可接受的”意指载体必须与组合物的活性成分相容(并且优选能够稳定活性成分)，并且对待治疗的对象无害。可药用赋形剂(载体)包括本领域中公知的缓冲剂。参见，例如Remington:TheScience and Practice of Pharmacy 20th Ed.(2000)Lippincott Williams andWilkins,Ed.K.E.Hoover。
本文公开的包含抗HJV抗体的药物组合物还可包含合适的缓冲剂。缓冲剂是弱酸或弱碱，用于在添加另外的酸或碱之后将溶液的pH值维持在选定值附近。在一些实例中，本文公开的缓冲剂可以是即使二氧化碳(由细胞呼吸产生)浓度发生变化仍能够维持生理pH的缓冲剂。示例性缓冲剂包括但不限于HEPES(4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸)缓冲剂、Dulbecco磷酸盐缓冲盐水(Dulbecco's phosphate-buffered saline，DPBS)缓冲剂或磷酸盐缓冲盐水(Phosphate-buffered Saline，PBS)缓冲剂。这样的缓冲剂可以包括磷酸氢二钠和氯化钠，或磷酸二氢钾和氯化钾。
在一些实施方案中，本文所述的药物组合物中的缓冲剂可以维持约5至8的pH值。例如，药物组合物的pH可以是约7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0。在其他实例中，药物组合物的pH值可低于7，例如约7、6.8、6.5、6.3、6、5.8、5.5、5.3或5。
本文所述的药物组合物包含一种或更多种合适的盐。盐是可以通过酸和碱的中和反应形成的离子化合物。(Skoog,D.A；West,D.M.；Holler,J.F.；Crouch,S.R.(2004).“chapters 14–16”.Fundamentals of Analytical Chemistry(8th ed.))。盐由相关数目的阳离子(带正电荷的离子)和阴离子(负离子)构成以使得产物是电中性的(无净电荷)。
在一些实施方案中，药物组合物可以包含冻干制剂或水溶液剂形式的可药用载体、赋形剂或稳定剂。(Remington:The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed.(2000)Lippincott Williams and Wilkins,Ed.K.E.Hoover)。在一些实施方案中，药物组合物可以被配制用于静脉内注射。在一些实施方案中，药物组合物可以被配制用于皮下注射。
用于体内施用的药物组合物必须是无菌的。这容易通过例如经由无菌过滤膜过滤来实现。通常将治疗性抗体组合物放置到具有无菌进入口的容器中，例如静脉内或皮下溶液袋或小瓶(其具有可被皮下注射针刺穿的塞)。
V.使用方法
本公开内容的多个方面涉及用于治疗对象中的ACD和/或者由ACD引起的一种或更多种病症的组合物和方法。
在一些方面中，本公开内容涉及用于在对象中治疗ACD的组合物和方法。在一些实施方案中，可基于适当的诊断方法学来鉴定根据本公开内容待治疗的对象，如例如在Cullis,JO,Diagnosis and management of anaemia of chronic disease:currentstatus British Journal of Haematology,Volume154,Issue 3,August 2011 pages289-300；和Madua AJ and Ughasoro MD,Anaemia of Chronic Disease:An In-DepthReview Med Princ Pract.2017 Jan；26(1):1–9中描述的，其每一篇的内容均通过引用并入本文。通常来说，诊断涉及评价潜在慢性病症的体征和症状，结合评估贫血和/或铁代谢缺陷的标志，包括例如通过分析全血细胞计数(complete blood count，CBC)、血清铁、铁蛋白、转铁蛋白、网织红细胞计数和其他标志物。在一些实施方案中，ACD可存在于患有小红细胞性贫血或正常细胞性贫血的对象中，所述对象还患有慢性病症，例如感染、自身免疫病、慢性肾病或癌症，例如骨髓瘤。
在一些实施方案中，可基于减少的EPO产生来鉴定根据本公开内容需要治疗的对象。例如，在正常生理条件下，EPO水平与血红蛋白水平和组织氧合呈负相关，但在慢性炎性条件下，EPO响应钝化，导致EPO水平不足以反映贫血程度，并且这被认为是通过炎性细胞因子如IL-1和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)介导的。因此，在一些实施方案中，钝化的EPO响应可以是对象中ACD的诊断。
在一些实施方案中，可以基于降低的红系(erythroid)响应性来鉴定根据本公开内容的需要治疗的对象。例如，ACD的特征可以是红系祖细胞增殖和分化减少。研究表明，由于炎性细胞因子(例如干扰素-γ)对爆裂型红细胞集落生成单位(erythroid burst-forming unit)(BFU-E)和红系集落形成单位(CFU-E)生长的抑制作用，ACD患者的巨噬细胞在体外会抑制集落形成，并且通过向培养体系添加高浓度EPO可以克服这种作用。还显示，与正常对照相比，来自活动期类风湿性关节炎患者的骨髓培养物显示出生长缺陷，并且培养物上清液中TNF-α水平与集落生长之间存在负相关。此外，在使用英夫利昔单抗(infliximab)(针对TNF-α的抗体)治疗之后，这些作用在体外和体内均被逆转。因此，在一些实施方案中，可以使用这些或用于评价红系响应性的类似的这样的测定来鉴定对象中降低的红系响应性。
在一些实施方案中，可以基于轻度至中度和/或正常色素性和正常红细胞性的贫血状态来鉴定根据本公开内容的需要治疗的对象(但贫血可随着疾病的进展而变成小红细胞性)。在一些实施方案中，基于低网织红细胞计数鉴定对象，所述低网织红细胞计数可指示对象中ACD的低增殖性质。对象中的炎症可以通过血细胞计数的其他特征(例如中性粒细胞增多、单核细胞增多、或血小板增多)推断出来，并且也可以通过测量非特异性炎性标志物(例如C反应蛋白(C-reactive protein，CRP)或红细胞沉降率(erythrocytesedimentation rate，ESR)推断出来。
在一些实施方案中，可以基于对象中缺铁性贫血(iron-deficiency anemia，IDA)的存在或不存在来鉴定根据本公开内容的需要治疗的对象。在一些实施方案中，通过排除对象中的IDA来鉴定对象，但ACD和IDA可以共存。通常来说，ACD和铁缺乏中血清铁和转铁蛋白饱和度均下降，表明对红细胞系的铁供应有限，但IDA中转铁蛋白水平提高，而ACD中转铁蛋白水平正常或降低。因此，在一些实施方案中，通过评估对象的生物样品中的铁储存来鉴定对象，例如使用Perl染色的骨髓抽吸物来鉴定对象。
在一些实施方案中，通过确定对象中生长分化因子15(GDF15)的水平来鉴定对象。GDF15是红细胞生成来源激素，在β地中海贫血和先天性红细胞生成异常性贫血中显著提高，并抑制铁调素表达，从而导致这些贫血中出现铁过载。已在ACD、ACD/IDA和IDA患者中研究了GDF15的水平。同时患有ACD和ACD/IDA的对象显示GDF15水平显著高于患有IDA的患者，并且GDF15浓度与白介素-1β相关，表明炎症诱导GDF15表达。因此，在一些实施方案中，基于GDF15的水平提高(例如，与已知患有IDA的对象或健康对象相比提高)来鉴定对象。
在一些实施方案中，通过确定血清转铁蛋白受体(sTFR)与铁蛋白的比率来鉴定对象。sTFR(膜受体的截短片段)的测量结果已被描述为在对象中区分ACD和IDA的指标。转铁蛋白受体几乎存在于体内的所有细胞中，但在红系祖细胞中以高水平存在。随着针对红细胞生成的铁的可用性降低，IDA中的sTFR水平提高，而ACD中的sTFR水平与稳态可能没有差异，这是因为转铁蛋白受体表达受到炎性细胞因子的负面影响。sTFR与血清铁蛋白对数的比率可用于对象中的ACD诊断，并且在某些情况下可用于区别ACD与IDA。比率小于1可能导致ACD，而比率大于2则表明铁储存不足，伴有或不伴有ACD。
在一些实施方案中，慢性病性贫血(ACD)是由以下导致的：铁代谢缺陷和多种慢性病症(例如，癌症、炎症、慢性肾病、自身免疫病等)所引起的无效红细胞生成、由于脾肿大引起的红细胞破坏提高、血浆量提高、促炎环境异常、或其组合。
在一些实施方案中，ACD与铁代谢异常相关。在一些实施方案中，ACD患者中的异常铁代谢是功能性铁缺乏(functional iron deficiency，FID)。FID代表铁限制性红细胞生成的状态，其特征在于铁需求和血清铁之间的不平衡，血清铁容易地可用于有效的红细胞生成。在FID中，即使当身体有足够的或提高的全身铁储存，铁被螯合并且不能用于红细胞生成。在一些实施方案中，FID是由铁调素相对于铁储存水平的提高引起的。在一些实施方案中，提高的铁调素表达是由促炎性细胞因子的上调引起的。
在ACD中，诱导铁调素合成的促炎性细胞因子(例如IL-6和制瘤素-M)通常提高并与铁螯合、巨噬细胞铁负荷以及髓系增生和巨噬细胞活化相关。这些提高的铁调素水平可导致贫血。
在一些实施方案中，促炎性细胞因子是IL-6。IL-6的正常范围(例如，在没有疾病的对象中)等于或小于1.8pg/ml。在一些实施方案中，对象具有高于正常的血清IL-6水平，例如大于1.8pg/ml。
在一些实施方案中，本公开内容提供了治疗患有ACD的对象的方法。在一些实施方案中，对象患有由促炎性细胞因子诱导的铁调素合成导致的贫血。在一些实施方案中，提高铁调素合成的促炎性细胞因子是IL-6。在一些实施方案中，向对象施用抗HJV抗体降低了由IL-6诱导的铁调素合成。在一些实施方案中，抗HJV抗体的施用改善了与由促炎性细胞因子(例如，IL-6)诱导的铁调素合成提高相关的FID。在一些实施方案中，可以使用红细胞指数来鉴定根据本公开内容的需要治疗的对象。例如，网织红细胞血红蛋白含量(CHr)和低色素红细胞百分比(％HYPO)可提供有关向红细胞供应铁的信息，并可用于指导ACD的管理。CHr是对最近形成的红细胞中血红蛋白的量度，而％HYPO指示血红蛋白含量<280g/l的细胞百分比。前者相对准确地评价了最近的骨髓活性(例如48小时)，而后者给出了时间平均图(例如20至120天)。Sysmex XE-2100分析仪(Sysmex,Mundelein,IL,USA)可报道类似指数，该分析仪得出RET-Y(相当于CHr)和RBC-Y(相当于HYPO％)。CHr已被证明是检测早期铁缺乏以及监测对铁治疗早期响应的有用工具。
在一些方面中，本公开内容涉及用于治疗ACD的组合物和方法。根据适当的诊断阈值参数，ACD可以表征为轻度至中度贫血或重度贫血。例如，在一些实施方案中，ACD是基于血红蛋白(Hgb)的水平表征的，其中贫血的严重性随着Hgb水平的降低而提高。在一些实施方案中，轻度至中度贫血与至少8g/dL且低于正常的下限(例如，约8g/dL至约14g/dL、约8g/dL至约12g/dL、约8g/dL至约10g/dL、约10g/dL至约14g/dL、或约10g/dL至约12g/dL)的Hgb水平相关。在一些实施方案中，重度贫血与约8g/dL或更低(例如，约2至约8g/dL、约4至约8g/dL、或约6至约8g/dL)的Hgb水平相关。在一些实施方案中，重度贫血与红细胞输注依赖性相关。在一些实施方案中，重度贫血与红细胞输注非依赖性相关，其中对象依赖正在进行的治疗性治疗以维持输注非依赖性，所述红细胞输注非依赖性产生自治疗干预(例如，输注依赖状态的治疗逆转)。
在一些方面中，本公开内容提供了用于治疗已知患有或怀疑患有表征为低系统铁水平的血液学病症的对象的组合物和方法。在一些实施方案中，对象患有ACD和/或者可引起ACD的一种或更多种病症，如本文其他地方所述。在一些实施方案中，对象为红细胞输注依赖性的。在一些实施方案中，对象为红细胞输注非依赖性的。
基于本文中提供的教导，确定抗体(例如，抗HJV抗体)的量是否达到治疗效果对于本领域技术人员来说是明显的。如本领域技术人员所知，有效量取决于以下而变化：所治疗的具体病症；病症的严重性；个体患者参数，包括年龄、身体状况、大小、性别、和体重；治疗的持续时间；同步治疗(例如果有的话)的性质；具体的施用途径；以及健康从业者知识和专长范围内的类似因素。这些因素对于本领域普通技术人员来说是公知的并且可以用不超出常规实验来解决。如本文中所讨论的，在本文中所述的方法中使用的特定给药方案，即剂量、时机和重复，将取决于特定对象和该对象的病史。
经验考虑因素，例如达到最大效果的时间、半衰期和/或高于特定浓度的时间通常将有助于剂量的确定。例如，与人免疫系统相容的抗体，例如人源化抗体或全人抗体，可用于延长抗体的半衰期并阻止抗体被宿主免疫系统攻击。剂量调整的其他原因包括由性别、年龄、个体响应、抗体靶标和/或参与抗体清除的受体的多态性驱动的药代动力学或药效学响应的差异。施用频率可在治疗过程期间确定和调节，并且通常(但并非必须)基于目标疾病/病症的治疗和/或抑制和/或改善和/或延迟。或者，抗体的持续连续释放制剂可以是合适的。用于实现持续释放的多种制剂和装置在本领域中是已知的。
在一些实施方案中，如本文中所述的用于抗体的剂量可以在已给予一次或更多次抗体施用的个体中以经验确定。个体被给予递增剂量的拮抗剂。为了评估拮抗剂的效力，可以遵循疾病/病症的指标。
给药频率可以根据要求保护的方法而变化。在一些实施方案中，组合物可被施用一次。在一些实施方案中，将在多个场合施用组合物。在一些实施方案中，给药频率是每周、每2周、每3周、每4周、每5周、每6周、每7周、每8周、每9周或每10周；或者每月、每2月、或每3月或更长时间一次。在一些实施方案中，组合物将每天、每两周、每周、每两个月、每月或以提供合适(例如，最大)效力的同时使对对象的安全风险最小化的任何时间间隔施用。通常来说，可以在整个治疗过程中监测效力和治疗以及安全风险。
在一些实施方案中，抗HJV抗体的施用导致铁调素(例如，循环铁调素-25水平)浓度降低和/或血清TSAT％提高(参见例如图7D至7E)，并且在一些实施方案中，这些作用持续一段时间(例如，一个月或更长时间)。因此，在一些实施方案中，抗HJV抗体的施用时机和频率可以通过监测一种或更多种生物标志物来确定，例如用于评估铁可用性或标记可能的铁过载的可测量标准。例如，在一些实施方案中，间歇施用或根据特定生物标志物的水平例如铁调素(例如，循环铁调素-25水平)水平、循环转铁蛋白水平、或转铁蛋白饱和百分比(TSAT％)施用抗HJV抗体。在一些实施方案中，生物标志物水平可用于确定对象是否是治疗的候选者。然而，在一些实施方案中，生物标志物可用于确定是继续治疗或恢复治疗或停止治疗，例如停止使用抗HJV抗体治疗。
例如，在一些实施方案中，如果对象的TSAT％处于或高于70％、处于或高于75％、处于或高于80％、处于或高于85％、处于或高于90％或处于或高于95％，则对象可被认为不是治疗的候选者。在一些情况下，如果对象的TSAT％处于或高于70％、处于或高于75％、处于或高于80％、处于或高于85％、处于或高于90％、或处于或高于95％。则可以停止或暂时停止使用抗HJV抗体的进行中的治疗，例如，以阻止铁过载。在其他实施方案中，当对象的TSAT％处于或低于95％、处于或低于90％、处于或低于80％、处于或低于70％、处于或低于65％、处于或低于60％、处于或低于55％、处于或低于50％、处于或低于45％、处于或低于40％、处于或低于35％、或处于或低于30％时，则可以进行抗HJV抗体的施用。因此，在一些实施方案中，可以在对象正在接受治疗或在主治医师的照料下，例如针对贫血，例如连续或定期监测对象的TSAT％，以阻止铁过载或以其他方式评估是否进一步治疗是适当的。然而，应当理解，可以根据本文中提供的方法监测其他合适的标志物以确定剂量和给药频率(其包括，例如，铁蛋白水平、血清铁水平、肌酸酐水平等)。
在一些实施方案中，可以在设定的时间段期间以一个或更多个间隔向对象施用本文中提供的组合物(例如，抗HJV抗体)。在一些情况下，以一个或更多个间隔向对象施用组合物的时间段可以由不向对象施用组合物的时间段分隔开。在一些实施方案中，相应时间段的相对持续时间可取决于对象对治疗或疾病严重性或其两者的响应和/或者可基于主治医师的判断来确定。例如，在一些实施方案中，在一年的过程中，可以每周、每两周或每月向对象施用组合物持续两个月，然后停止施用持续十个月。在一些实施方案中，在一年的过程中，可以每周、每两周或每月向对象施用组合物持续三个月，然后停止施用持续九个月。在一些实施方案中，在一年的过程中，可以每周、每两周或每月向对象施用组合物持续四个月，然后停止施用持续八个月。在一些实施方案中，在一年的过程中，可以每周、每两周或每月向对象施用组合物持续五个月，然后停止施用持续七个月。在一些实施方案中，在一年的过程中，可以每周、每两周或每月向对象施用组合物持续六个月，然后停止施用持续六个月。在一些实施方案中，在一年的过程中，可以每周、每两周或每月向对象施用组合物持续七个月，然后停止施用持续五个月。在一些实施方案中，在一年的过程中，可以每周、每两周或每月向对象施用组合物持续八个月，然后停止施用持续四个月。在一些实施方案中，在一年的过程中，可以每周、每两周或每月向对象施用组合物持续九个月，然后停止施用持续三个月。在一些实施方案中，在一年的过程中，可以每周、每两周或每月向对象施用组合物持续十个月，然后停止施用持续两个月。在一些实施方案中，在一年的过程中，可以每周、每两周或每月向对象施用组合物持续两个月，停药两个月；或施用三个月，停药三个月；或施用四个月，停药四个月。
通常来说，对于本文所述的任何抗体的施用，剂量可以是约0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg、80mg/kg、90mg/kg或100mg/kg。
在一些实施方案中，抗HJV抗体的剂量多至0.01mg/kg、多至0.05mg/kg、多至0.1mg/kg、多至0.2mg/kg、多至0.3mg/kg、多至0.4mg/kg、多至0.5mg/kg、多至0.6mg/kg、多至1mg/kg、mg/kg、多至2mg/kg、多至3mg/kg、多至4mg/kg、多至5g/kg、多至6mg/kg、多至7mg/kg、多至8mg/kg、多至9mg/kg、多至10mg/kg、多至20mg/kg、多至30mg/kg、多至40mg/kg、多至50mg/kg、多至60mg/kg、多至70mg/kg、80mg/kg、多至90mg/kg、多至100mg/kg或更多。
然而，在一些实施方案中，抗HJV抗体的剂量可以在0.01mg/kg至100mg/kg、0.01mg/kg至10mg/kg、0.5mg/kg至15mg/kg、1mg/kg至15mg/kg、5mg/kg至25mg/kg、10mg/kg至30mg/kg、20mg/kg至40mg/kg、30mg/kg至50mg/kg、40mg/kg至60mg/kg、50mg/kg至75mg/kg、或50mg/kg至100mg/kg的范围内。
在一些实施方案中，本文所述的抗体以足以抑制靶抗原活性至少20％(例如，30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更高)的量(例如，足以抑制HJV诱导的BMP信号传导至少20％(例如，30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更高)的量)体内施用于需要治疗的对象。在另一些实施方案中，抗体以有效降低靶抗原活性水平至少20％(例如，30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更高)的量的施用。
在一些实施方案中，抗体可以肠胃外施用。例如，肠胃外施用的组合物可以通过皮下、皮内、静脉内、腹膜内、瘤内、肌内、关节内、动脉内或输注技术施用。另外，其可以通过可注射的贮库(depot)施用途径例如使用1个月、3个月或6个月贮库可注射或生物可降解的材料和方法施用于对象。
在一些实施方案中，静脉内施用抗体(例如，抗HJV抗体)。在一些实施方案中，皮下施用抗体(例如抗HJV抗体)。在一些实施方案中，抗HJV抗体的皮下施用导致与以相同剂量静脉内施用相同抗体相比相似的生物利用度。
在一些实施方案中，以较低的抗HJV抗体最大浓度(C最大)皮下施用抗HJV抗体产生与静脉内施用相同抗体相比相当的药效学作用(例如，降低的循环铁调素-25水平、提高的TSAT％和/或提高的血清铁水平)。C最大是施用药物之后至施用第二剂量之前药物(例如抗HJV抗体)的最大(或峰值)血清浓度。在一些实施方案中，在施用抗HJV抗体之后的短时间内(例如，在12小时内，在24小时内等)达到低C最大使血清铁响应的不期望的提高最小化，和/或使抗体的脱靶作用(例如，与RGMa结合)的机会最小化。在一些实施方案中，通过皮下施用抗HJV抗体来减弱C最大避免了血清铁响应的不期望的急剧提高。在一些实施方案中，通过皮下施用抗HJV抗体来减弱C最大降低了抗体的脱靶作用。在一些实施方案中，通过皮下施用抗HJV抗体达到的C最大比通过静脉内施用抗HJV抗体达到的C最大低至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、或至少95％。
对于静脉内注射，水溶性抗体可通过滴注方法施用，通过该方法输注包含抗体和生理学上可接受的赋形剂的药物制剂。生理学上可接受的赋形剂可以包括例如5％的右旋糖、0.9％的盐水、林格氏液(Ringer’s solution)或其他合适的赋形剂。其他可注射组合物可包含多种载体，例如植物油、二甲基乙酰胺(dimethylactamide)、二甲基甲酰胺、乳酸乙酯、碳酸乙酯、豆蔻酸异丙酯、乙醇以及多元醇(甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)。在一些情况下，可将制剂，例如抗体的合适可溶性盐形式的无菌制剂，溶解在药用赋形剂例如注射用水、0.9％盐水或5％葡萄糖溶液中并施用。
在一个实施方案中，通过位点特异性或靶向局部递送技术施用抗体。位点特异性或靶向局部递送技术的一些实例包括抗体的多种可植入贮库源或局部递送导管，例如输注导管、留置导管或针导管、合成移植物、外膜包裹物(adventitial wrap)、分流器(shunt)和支架或其他可植入装置、位点特异性载体、直接注射或直接施加。参见例如PCT公开No.WO00/53211和美国专利No.5,981,568。
在一些实施方案中，可向有治疗需要的对象施用多于一种抗体，或者抗体与另外的合适的治疗剂的组合。抗体还可与用于增强和/或补充药剂有效性的其他药剂联合使用。目标疾病/病症的治疗效力可通过本领域中公知的方法来评估。
涉及例如本公开内容中所述的抗HJV抗体和治疗方法可与本文公开的目标疾病或病症的其他类型的治疗组合使用。在这种情况下，抗体组合物和治疗剂可以同时或顺序给予。实例包括化学治疗、免疫治疗(例如涉及其他铁调素拮抗剂的治疗)、手术、放射、基因治疗等，或抗感染治疗。这样的治疗可以与根据本公开内容的治疗同时或顺序(以任何顺序)施用。
例如，组合治疗可以包括与至少一种另外的治疗剂共配制和/或共施用的本文所述的抗HJV抗体和药物组合物。这样的组合治疗可有利地利用较低剂量的施用的治疗剂，从而防止与多种单一治疗相关的可能的毒性或并发症。此外，本文公开的另外治疗剂可作用于除铁调素/BMP途径之外或不同于铁调素/BMP途径的途径，并因此可增强和/或协同抗HJV抗体的作用。
因此，在一些实施方案中，需要根据本公开内容治疗中的对象先前已经接受用于血液学病症的治疗性干预。在一些实施方案中，对象先前已经经受了用于治疗一种或更多种血液学病症的手术操作。在一些实施方案中，对象先前已经受了脾切除术。在一些实施方案中，对象先前已接受用于治疗一种或更多种血液学病症的治疗剂。
在一些实施方案中，对象先前已接受红细胞生成素刺激剂。在一些实施方案中，红细胞生成素刺激剂选自：达那唑、泼尼松、沙利度胺、来那度胺和泊马度胺。
在一些实施方案中，对象先前已经接受JAK-STAT途径抑制剂。在一些实施方案中，JAK-STAT途径抑制剂是JAK抑制剂或STAT抑制剂。在一些实施方案中，JAK抑制剂对亚型JAK1和JAK2中的一种或两种具有选择性(例如，JAK1/2抑制剂)。在一些实施方案中，STAT抑制剂是STAT3抑制剂。在一些实施方案中，JAK1/2或STAT3抑制剂选自鲁索替尼、菲卓替尼、莫洛替尼、帕瑞替尼、INCB039110、AG490和PpYLKTK。
在一些实施方案中，对象先前已接受生长因子配体陷阱。在一些实施方案中，生长因子配体陷阱是转化生长因子β(TGF-β)配体陷阱。在一些实施方案中，TGF-β配体陷阱是sotatercept或罗特西普。在一些实施方案中，对象先前已接受抗纤维化剂。在一些实施方案中，抗纤维化剂是PRM-151。
在一些实施方案中，需要根据本公开内容进行治疗的对象继续接受用于血液学病症的治疗性治疗。因此，本公开内容在一些方面中提供了用于治疗ACD和/或者由ACD引起的一种或更多种病症的组合物和方法，所述方法通过向有此需要的对象施用与用于血液学病症的一种或更多种治疗性治疗组合的铁调素拮抗剂(例如，抗HJV抗体)进行。
在一些实施方案中，向对象施用与红细胞生成素刺激剂组合的血幼素拮抗剂(例如，抗HJV抗体及其组合物)。在一些实施方案中，红细胞生成素刺激剂选自：达那唑、泼尼松、沙利度胺、来那度胺和泊马度胺。
在一些实施方案中，向对象施用与JAK-STAT途径抑制剂组合的血幼素拮抗剂(例如，抗HJV抗体及其组合物)。在一些实施方案中，JAK-STAT途径抑制剂是JAK抑制剂或STAT抑制剂。在一些实施方案中，JAK抑制剂对亚型JAK1和JAK2中的一种或两种具有选择性(例如，JAK1/2抑制剂)。在一些实施方案中，STAT抑制剂是STAT3抑制剂。在一些实施方案中，JAK1/2或STAT3抑制剂选自鲁索替尼、菲卓替尼、莫洛替尼、帕瑞替尼、INCB039110、AG490和PpYLKTK。在一些实施方案中，向对象施用与鲁索替尼组合的血幼素拮抗剂(例如，抗HJV抗体及其组合物)。
在一些实施方案中，血幼素拮抗剂(例如，抗HJV抗体及其组合物)降低对象对JAK-STAT途径抑制剂表现出贫血响应的程度。例如，在一些实施方案中，用JAK-STAT途径抑制剂作为单一治疗治疗的对象可以被表征为：与对象的治疗前状态相比缺乏血液运输氧气的能力，与对象的治疗前状态相比缺乏红细胞，与对象的治疗前状态相比缺乏血红蛋白，和/或与对象的治疗前状态相比缺乏总血容量。因此，在一些实施方案中，血幼素拮抗剂(例如，抗HJV抗体)降低对象对选自鲁索替尼、菲卓替尼、莫洛替尼、帕瑞替尼、INCB039110、AG490和PpYLKTK的JAK-STAT途径抑制剂表现出贫血响应的程度。在一些在实施方案中，血幼素拮抗剂(例如，抗HJV抗体及其组合物)降低对象对鲁索替尼施用表现出贫血响应的程度。
在一些实施方案中，向对象施用与生长因子配体陷阱组合的血幼素拮抗剂(例如，抗HJV抗体及其组合物)。在一些实施方案中，生长因子配体陷阱是转化生长因子β(TGF-β)配体陷阱。在一些实施方案中，TGF-β配体陷阱是sotatercept或罗特西普。在一些实施方案中，向对象施用与抗纤维化剂组合的血幼素拮抗剂(例如，抗HJV抗体及其组合物)。在一些实施方案中，抗纤维化剂是PRM-151。
根据本公开内容对对象的成功治疗可通过本领域已知的方法或由熟练的从业者来确定。在一些实施方案中，基于对象中的铁调素(例如，循环铁调素-25水平)水平来评价铁调素拮抗剂(例如，抗HJV抗体及其组合物)治疗。例如，在一些实施方案中，确定对象中的基线铁调素(例如，循环铁调素-25水平)水平(例如，在用铁调素拮抗剂(例如抗HJV抗体及其组合物)治疗之前或另外在确定时没有铁调素拮抗剂(例如，抗HJV抗体及其组合物)治疗的情况下)并与对象中的治疗后铁调素(例如，循环铁调素-25水平)水平进行比较。在一些实施方案中，成功治疗了对象，其中铁调素拮抗剂(例如，抗HJV抗体及其组合物)将对象中的铁调素(例如，循环铁调素-25水平)水平降低约1ng/mL至约300ng/mL。在一些实施方案中，铁调素拮抗剂(例如，抗HJV抗体及其组合物)将对象体内的铁调素(例如，循环铁调素-25水平)水平降低约1ng/mL至约200ng/mL、约1ng/mL至约100ng/mL、约1ng/mL至约50ng/mL、约1ng/mL至约10ng/mL、约10ng/mL至约100ng/mL、或约10ng/mL至约50ng/mL。在一些实施方案中，本公开内容提供了用于在患有ACD的对象中降低铁调素(例如，循环铁调素-25水平)的方法。在一些实施方案中，施用在施用的4小时、6小时、8小时、12小时、28小时、24小时、2天、3天、4天、5天、6天、1周或2周内降低铁调素-25。在一些实施方案中，与施用之前对象中铁调素(例如，循环铁调素-25水平)水平相比，施用将铁调素(例如，循环铁调素-25水平)降低至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％、或100％的铁调素(例如，循环铁调素-25水平)。
在一些实施方案中，基于对象中的血清铁蛋白水平来评价铁调素拮抗剂(例如，抗HJV抗体及其组合物)治疗。例如，在一些实施方案中，确定对象中的基线血清铁蛋白水平(例如，在用铁调素拮抗剂(例如，抗HJV抗体及其组合物)治疗之前或另外在确定时没有铁调素拮抗剂(例如，抗HJV抗体及其组合物)治疗的情况下)，并与对象中的治疗后血清铁蛋白水平进行比较。在一些实施方案中，成功治疗了对象，其中铁调素拮抗剂(例如，抗HJV抗体及其组合物)将对象中的血清铁蛋白水平降低了约1ng/mL至约200ng/mL。在一些实施方案中，铁调素拮抗剂(例如，抗HJV抗体及其组合物)将对象中的血清铁蛋白水平降低了约1ng/mL至约100ng/mL、约1ng/mL至约50ng/mL、约1ng/mL至约25ng/mL、约1ng/mL至约10ng/mL、约10ng/mL至约100ng/mL、或约10ng/mL至约50ng/mL。
在一些实施方案中，基于对象中的血清血红蛋白水平来评价铁调素拮抗剂(例如，抗HJV抗体及其组合物)治疗。例如，在一些实施方案中，确定对象中的基线血清血红蛋白水平(例如，在用铁调素拮抗剂(例如，抗HJV抗体及其组合物)治疗之前或另外在确定时没有铁调素拮抗剂(例如，抗HJV抗体及其组合物)治疗的情况下)并与治疗之后对象中的血清血红蛋白水平进行比较。在一些实施方案中，成功治疗了对象，其中铁调素拮抗剂(例如，抗HJV抗体及其组合物)使对象中的血清血红蛋白水平降低约0.01g/dL至约5g/dL。在一些实施方案中，铁调素拮抗剂(例如，抗HJV抗体及其组合物)使对象中的血清铁蛋白水平降低约0.01g/dL至约1g/dL、约0.1g/dL至约5g/dL、约1g/dL至约5g/dL，约0.01g/dL至约0.1g/dL、约0.5g/dL至约2.5g/dL或约0.1g/dL至约1g/dL。
VI.治疗和诊断应用试剂盒
本公开内容还提供了用于本文公开的治疗或诊断应用的试剂盒。这样的试剂盒可包括一个或更多个容器，该容器包含抗HJV抗体，例如本文所述的那些抗体中的任一种。
在一些实施方案中，试剂盒可以包含根据本文所述的任何方法使用的说明。所包含的说明书可以包含对施用抗HJV抗体以治疗如本文所述的那些目标疾病、延迟如本文所述的那些目标疾病的发作或减轻如本文所述的那些目标疾病的描述。该试剂盒还可包含基于鉴定个体是否患有目标疾病来选择适合治疗的个体的描述。在另一些实施方案中，说明书包含对处于目标疾病的风险中的个体施用抗体的描述。
涉及使用抗HJV抗体的说明书通常包含关于用于预期治疗的剂量、给药方案和施用途径的信息。容器可以是单位剂量、散装包装(例如，多剂量包装)或亚单位剂量。本发明试剂盒中提供的说明书通常是标签或包装插页(例如，包含在试剂盒中的纸页)上的书面说明书，但机器可读说明(例如，磁性或光学存储盘上携带的说明书)也是可接受的。
标签或包装插页表明该组合物用于治疗疾病或病症、延迟疾病或病症的发作和/或者减轻疾病或病症。可提供说明书以实践本文中所述的任何方法。
本发明的试剂盒在合适的包装中。合适的包装包括但不限于小瓶、瓶、罐、软包装(例如密封的聚酯薄膜(Mylar)或塑料袋)等。
还设想了用于与特定装置组合使用的包装，所述特定装置例如输注装置，例如微型泵。试剂盒可具有无菌进入口(例如，容器可以是静脉内溶液袋或小瓶(其具有可被皮下注射针刺穿的塞))。容器还可具有无菌进入口(例如，容器可以是静脉内溶液袋或小瓶(其具有可被皮下注射针刺穿的塞))。组合物中的至少一种活性剂是如本文中所述的抗HJV抗体。
试剂盒可任选地提供另外的组成部分，例如缓冲剂和解释性信息。通常来说，试剂盒包含容器和在容器上或与容器相连的标记或包装插页。在一些实施方案中，本发明提供了包含上述试剂盒的内容物的制品。
本文还提供了用于检测样品中血幼素的试剂盒。这样的试剂盒可以包含本文所述的任何抗HJV抗体。在一些情况下，抗HJV抗体可以与本文所述的可检测标记缀合。本文中使用的“缀合的”或“附着的”意指两个实体缔合，优选地具有足够的亲和力，从而实现两个实体之间的缔合的治疗/诊断益处。两个实体之间的缔合可以是直接的，也可以是通过接头，如聚合物接头。缀合或附着可包括共价或非共价键合以及其他形式的缔合，例如包载，例如一个实体在另一个实体上或内，或者一个或两个实体在第三个实体上或内，例如微团。
作为替选或补充，试剂盒可包含能够与抗HJV抗体结合的二抗。试剂盒还可以包含用于使用抗HJV抗体检测血幼素的说明书。
实施例
实施例1：抗HJV抗体产生和表征
从用人血幼素免疫接种的大鼠中，鉴定了能够与人血幼素结合的杂交瘤克隆。通过CDR接枝将抗血幼素单克隆抗体(具有大鼠IgG1/κ的mAb)人源化(具有携带L234A、L235A突变的hIgG1恒定区的hHA抗体)。亲和力成熟的抗HJV(例如HA-001至HA-011)体外酵母展示测定。用于产生人源化亲和力成熟的抗HJV抗体的一般过程如图1A所不。
通过BIAcore分析测量了抗HJV抗体对可溶性人RGMa、大鼠RGMa和人RGMc的结合亲和力。表4示出了抗血幼素抗体对人RGMa的亲和力。表5示出了抗血幼素抗体对大鼠RGMa的亲和力。表6示出了抗血幼素抗体对人RGMc的亲和力。
表4：抗HJV抗体对人RGMa的结合亲和力(通过BIAcore)
Ab名称 K<sub>a</sub>(1/MS) K<sub>d</sub>(1/s) KD(M)
hHA-001 1.8E+06 6.7E-05 3.8E-11
hHA-002 1.4E+06 5.0E-05 3.7E-11
hHA-003 1.1E+06 1.4E-04 1.2E-10
hHA-004 1.4E+06 2.2E-05 1.5E-11
hHA-005 1.9E+06 2.5E-04 1.3E-10
hHA-006 1.2E+06 1.4E-04 1.2E-10
hHA-007 5.9E+05 8.9E-05 1.5E-10
hHA-008 8.7E+05 2.7E-05 3.1E-11
hHA-009 8.6E+05 4.0E-04 4.7E-10
hHA-010 8.5E+05 1.0E-04 1.2E-10
hHA-011 9.3E+05 9.9E-05 1.1E-10
hHA 6.0E+06 2.2E-03 3.7E-09
HA 1.2E+06 2.9E-03 2.4E-09
表5：抗HJV抗体对大鼠RGMa的结合亲和力(通过BIAcore)
Figure BDA0004016554230001181
表6：抗HJV抗体对人RGMc的结合亲和力(通过BIAcore)
Figure BDA0004016554230001182
Figure BDA0004016554230001191
在这些抗体中，至少hHA-004、hHA-008、hHA-009和hHA-011显示出与人RGMc的强结合，并被选择用于进一步检测。通过抗体HA、hHA-004、hHA-008、hHA-009和hHA-011的BIAcore分析得到的传感图示于图1B至1G中。进一步检测了hHA-008对人RGMa、Cyno RGMa、大鼠RGMa、人RGMc、Cyno RGMc、大鼠RGMc和人RGMb的结合亲和力，并且各自的结合亲和力示于表7中。hHA-008显示出对人RGMa和RGMc的高亲和力结合，具有对cyno和啮齿动物物种的强交叉反应性。
表7：hHA-008与人RGMa、Cyno RGMa、大鼠RGMa、人RGMc、Cyno RGMc、大鼠RGMc和人RGMb的结合亲和力。
Figure BDA0004016554230001192
*具有人和cyno RGMc的hHA数据被拟合为两态模型。ka1表示两态结合模型中的AbAg缔合
**具有大鼠RGMc的hHA数据拟合为稳态亲和力模型
使用RGMc(HJV)BMP报道基因测定来筛选和表征抗HJV抗体阻断膜结合RGMc诱导的BMP/Smad1/5/8信号传导的效力。该测定与抗HJV mAb抑制RGMc/BMP/Smad1/5/8信号传导途径的作用机制直接相关，该信号传导途径负责铁激素铁调素基因表达的诱导。HJV BMP报道物测定的原理如图2A中所示。
在具有或不具有Babbit et al(J.Biol.Chem.2005；280:29820)的RGMa表达载体的共转染的情况下，将最初由Korchynskyi和Dijke(J.Biol.Chem.2002；277:4883c)描述的BRE-Luc报道基因载体用于瞬时转染猪肾上皮细胞系LLC-PK1，以确定RGMa表达是否调节BMP信号传导。在BRE-Luc瞬时转染的细胞中，RGMa被证明通过Smad1/5/8信号传导途径增强BMP信号传导，这与RGMa作为BMP共受体的作用一致。所有RGM成员(RGMa、RGMb和RGMc)均作为BMP共受体，并增强BMP信号传导。构建了BRE-Luc报道载体，并在HEK293细胞中建立了RGMBMP报道基因测定。测定中使用的人RGMc表达载体为pcDNA-hRGMc。
将HEK293细胞在生长培养基(基础培养基DMEM(Invitrogen，目录#11965-092)，含有10％胎牛血清(Gibco#10438-026)和1％丙酮酸钠(Invitrogen，目录#11360-070))中培养。为了制备用于转染的细胞，将9×106个细胞HEK293细胞置于10cm皿中，并在37℃、5％CO2下孵育6小时。然后将细胞使用2:1的PolyJet(μL):DNA(μg)比率转染，特别是使用具有5μgpGL[luc2P/BRE/Hygro]DNA(Abbvie)和5μg pcDNA-hRGMc(Abbvie)的20μl PolyJet(SignaGen,目录#SL100688)转染，在37℃下、5％CO2中进行16小时。将培养基用新鲜HEK293生长培养基替换，持续6小时。然后将细胞用TrpLE(ThermoFisher,目录#12605010)胰蛋白酶化，计数，并以每孔1×105个细胞平板接种在96孔白色测定板(Thermo ScientificNunclon delta F96，目录#136102)中。将细胞使用抗RGMc mAb、抗BMP2/4mAb(R&DSystems，目录#MAB3552)(作为阳性对照)或同种型对照mAb在37℃、5％CO2下处理16小时。使用One-Glo萤光素酶试剂盒(Promega，目录#E6120)检测萤光素酶活性，并在TopCount发光计数器上进行测量。结果显示，抗HJV抗体剂量依赖性地抑制RGMc增强的BMP信号传导(图2B)。表8中示出了在BMP报道物测定中抑制RGMc信号传导中测试的每种抗体的IC50(nM)。
表8：在BMP报道物测定中抗HJV抗体针对RGMc的IC50。
HA hHA hHA-004 hHA-008 hHA-009 hHA-011
IC50(nM) 5.713 17.08 0.3124 0.3772 1.362 0.0554
此外，还测试了抗HJV抗体在BMP报道物测定中抑制RGMa信号传导的能力。在RGMaBMP报道基因测定中，hHA-004和hHA-011表现出对膜结合人RGMa的强效抑制，而hHA-008和hHA-009表现出对RGMa活性无抑制或抑制极小。hHA抗体对膜结合RGMa表现出无抑制。大鼠mAb HA表现出对RGMa的抑制，但与hHA-004和hHA-011相比，抑制程度要小得多。图2C。表9中示出了在BMP报道物测定中抑制RGMa信号传导中测试的每种抗体的IC50(nM)。
表9：在BMP报道物测定中抗HJV抗体针对RGMa的IC50
HA hHA-004 hHA-008 hHA-009 hHA-011
IC50(nM) 47.63 2.014 ～56.54 N/A 1.657
上述数据表明，抗HJV抗体在BMP报道物测定中中和膜RGMc的效力与对可溶性RGMc的结合亲和力相关。表10中示出了抗HJV抗体与可溶性人RGMc的结合亲和力及其抑制膜结合RGMc和RGMa信号传导的能力的总结。
表10：抗HJV抗体对可溶性人RGMc的结合亲和力，以及其抑制膜结合RGMc和RGMa信号传导的能力。
Figure BDA0004016554230001221
通过FACS分析测试了抗体(包括hHA、hHA-004、hHA-008、hHA-008-QL、hHA-009和hHA-011)与HEK293细胞的非特异性细胞结合。数据显示，hHA及其hHA-008、hHA-008-QL和hHA-011在高至100ug/ml的浓度下对HEK293细胞没有或只有最小的非特异性细胞结合。hHA-004和hHA-009在较高浓度下显示出一些非特异性细胞结合，但与阳性对照IgG相比程度要小得多(图3)
实施例2：hHA-008-QL的产生
开发hHA-008-QL来延长IgG血清半衰期(t1/2)。先前的研究显示，新生儿Fc受体(FcRn)保护IgG免于分解代谢，从而延长IgG血清半衰期。因此，hHA-008-QL的Fc部分被设计为具有T250Q和M428L突变(QL突变)，从而增强了与FcRn的结合。图4A和图4B分别示出了hHA-008和hHA-008-QL的结构。hHA-008和hHA-008-QL的进一步图示示于图4C中。
首先，测试了hHA-008-QL的RGMa和RGMc结合能力，并且数据显示hHA-008-QL对RGMa和RGMc的结合亲和力与hHA-008的相当(表11)
表11：hHA-008-QL和hHA-008对RGMa和RGMc的结合亲和力
Figure BDA0004016554230001231
实施例3：hHA-008和hHA-008-QL的免疫原性研究
在CD4+T细胞应答测定中，使用来自用hHA-008或hHA-008-QL攻击的50名供体(代表所有主要HLA-DR和HLA-DQ单倍型)的外周血单个核细胞(PBMC)测试hHA-008和hHA-008-QL的免疫原性。结果显示，50名供体中仅有4％(2/50)显示出T细胞应答，表明两种抗体的免疫原性风险较低。在该测定中，将赫赛汀(Herceptin)用作阴性对照，8％的供体对其具有T细胞应答。将艾塞那肽(Bydureon)和钥孔戚血蓝蛋白(keyhole limpet haemocyanin，KLH)用作阳性对照。32％的供体显示出对艾塞那肽具有T细胞应答，并且100％的供体对KLH具有T细胞应答。图5示出了在50名供体中对hHA-008和hHA-008-QL的T细胞应答。
此外，还测试了hHA-008和hHA-008-QL的FcγR结合作为免疫原性的另一个参数。对照组野生型不相关IgG1与高亲和力Fcγ受体和低亲和力Fcγ受体均有显著结合。如预期的，野生型不相关IgG4的结合显著低于野生型不相关IgG1的结合。与野生型IgG1相比，hHA-008和hHA-008-QL二者与高亲和力受体和低亲和力受体的结合显著减少，表明两种抗体的免疫原性都较低。
实施例4：hHA-008和hHA-008-QL的药代动力学/药效学(PK/PD)建模
在hHA-008的PK/PD初步研究中，将雄性大鼠通过静脉内注射用单剂量的5mg/kg体重(mpk)的hHA-008处理。随时间测试转铁蛋白饱和度(TSAT％；以血清铁比血清总铁结合能力的百分比测定)。数据显示，TSAT提高的最大作用出现在处理之后4至8天(图6A)。
此外，在非人灵长类食蟹猴(cyno)中进行了类似研究。雌性(n＝2)和雄性(n＝2)cyno均通过静脉内注射接受了单剂量的5mg/kg体重(mpk)的hHA-008。随时间测试转铁蛋白饱和度(TSAT％)。在注射之后约1至4天，两只雌性cyno均表现出TSAT％提高的最大作用(图6B)。其中一只雄性表现出相同的作用，而另一只对hHA-008处理无响应(图6C)。随后通过检查该雄性的血液学谱确定了，缺乏响应是由于该cyno的血浆铁调素-25水平低于检测限(低于2ng/mL)。此外，在注射之前，该雄性cyno的基线TSAT％和血清铁水平低于组中其他cyno：在注射之前两天，其基线TSAT％水平为18％，并且血清铁水平为77μg/dL；在注射之前一天，其基线TSAT％水平为14％，并且血清铁水平为61μg/dL。基线TSAT％和血清铁水平低，结合铁调素-25水平低，表明该雄性cyno存在绝对铁缺乏，而非功能性铁缺乏。
在超过70只cyno中检查hHA-008施用作用的进一步研究显示，基线血清铁水平正常(例如，在80μg/dL至180μg/dL的范围内)且铁调素-25水平大于2ng/mL的动物对hHA-008处理有响应，因为它们在注射之后不久(例如，处理之后1至2天内)响应于铁调素-25表达降低而表现出TSAT％水平的显著提高。
在cyno中进行了另外的实验。向三只cyno通过静脉内注射施用单剂量的6mpk的hHA-008，并针对每只动物和每个时间点测试了TSAT％(以血清铁比总铁结合能力测定)、血浆铁调素-25浓度和血浆hHA-008浓度。类似地，数据显示TSAT％提高的最大作用出现在注射之后1至4天(T最大＝1至4天)，这与hHA-008浓度的提高一致。其中一只动物在第34天左右出现TSAT％的急剧下降(图7A)，这与该时间前后血浆hHA-008浓度的下降一致。血浆铁调素-25浓度与hHA-008浓度呈负相关，因为注射抗体之后无法检测到铁调素-25，并且对于TSAT％急剧下降的动物，铁调素-25水平在约同一时间提高(图7B)。在该cyno中，hHA-008的血浆t1/2为约5天。大约在第34天时，动物显示出TSAT％下降以及铁调素-25水平提高，这与来自血浆的hHA-008的减少有很好的相关性(图7C)。在Cyno中，约7天的T1/2支持在人中≥1次/月的给药频率。
此外，hHA-008示出了PK(血浆抗体浓度)与TSAT％和血浆铁调素-25浓度的强PK/PD相关性。图7D(Cyno 1)、图7E(Cyno 2)和图7F(Cyno 3)示出了每只测试的Cyno的结果。hHA-008显示，在Cyno 1中t1/2为10.3天，在Cyno 2中t1/2为8.8天，以及在Cyno 3中t1/2为5.1天。在hHA-008处理之后，铁调素-25水平降至检测不到(<2ng/ml)。令人感兴趣的是，在Cyno3中，铁调素-25水平恢复到循环与hHA-008的t1/2有很好的相关性(图7F)。
hHA-008抗体以剂量依赖性方式调节TSAT％。在cyno中进行了多剂量研究。将cyno(每剂量水平下n＝4，2只雄性和2只雌性)用0(载剂对照)、0.6mpk hHA-008、3mpk hHA-008或60mpk hHA-008处理。图8A、图8B和图8C分别示出了针对0.6mpk、3mpk和60mpk处理的hHA-008的所得浓度和相应的TSAT％响应，所有均相对于载剂对照进行绘制。将cyno每14天给药一次。虚线表示给药日。在给药之后TSAT％提高，并且百分比调节与剂量水平一致：在0.6mpk时，TSAT达到约60％，以及在3mpk和60mpk时，TSAT％饱和，表明hHA-008以剂量依赖性方式调节TSAT％。此外，在以0.6mpk第一次给药之后，TSAT％水平维持在约60％，而在更高剂量水平时，TSAT％达到100％，表明可通过选择适当的剂量-水平/方案来调节TSAT(图8A至8C)。
实施例5：与hHA-008相比，hHA-008-QL赋予更长的血清半衰期并花费更长的时间达到最大作用
本研究旨在向cyno(n＝3)以6mpk静脉内施用hHA-008或hHA-008-QL。在处理之前48和24小时以及处理之后0、0.04、0.08、0.167、0.333、0.5、1、2、4、8、14、21、28、35和42天从每只动物收集样品。在每个样品中均测量了TSAT％和血浆铁调素-25水平。数据显示，与hHA-008-QL相比，hHA-008达到TSAT％提高的最大作用(T最大)的时间更短(图9A)。注意到，在用hHA-008-QL处理的动物中存在非响应者。如上所讨论的，在抗体处理之前，非响应者的铁调素-25水平低，并且基线处血清铁低。在另一方面中，与hHA-008(T1/2＝6.76天)相比，hHA-008-QL的血清半衰期(T1/2＝12.1天)更长(图9B)。随时间测量两种抗体的血浆浓度，如图9C所示。确定血浆峰值浓度。hHA-008和hHA-008-QL的数据汇总显示在表12中。
表12：hHA-008v.hHA-008-QL
Figure BDA0004016554230001261
为了研究hHA-008-QL的较长血清寿命(serum life)是否归因于对FcRn的较高亲和力，使用BIAcore分析了在pH 6.0和pH 7.4下两种抗体与FcRn的结合。将非特异性IgG1和IgG4用作对照。在pH 6.0和7.4下每种抗体和对照与FcRn的解离常数(KD)示于表13中，并且响应曲线示于图10A至10B中。在pH 7.4下没有观察到任一种抗体的结合(图10B)。
表13：pH 6.0和pH 7.4下针对FcRn的KD
pH 6.0下的KD(M) pH 7.4下的KD(M)
IgG1 1.64E-06 无结合
IgG4 3.64E-06 无结合
hHA-008 2.95E-06 无结合
hHA-008 2.96E-06 无结合
hHA-008-QL 9.00E-07 无结合
hHA-008-QL 8.82E-07 无结合
突变L247A和L248A(Kabat)(L234A和L235A，EU编号)显示对FcRn结合没有显著影响。与hHA-008相比，hHA-008-QL在pH 6.0下与FcRn结合的总亲和力和响应(RMax)提高，表明QL突变通过与受体结合赋予了更长的t1/2。
实施例6：hHA-008降低非人灵长类中IL-6诱导的铁调素-25表达
如图11所示，在铁螯合贫血中，诱导铁调素合成的促炎性细胞因子例如IL-6和抑瘤素-M通常会提高，并与铁螯合、巨噬细胞铁负荷以及髓系增生和巨噬细胞活化相关。为了测试IL-6是否确实提高铁调素表达以及抗HJV抗体是否能够抑制在非人灵长类中由IL-6诱导的铁调素表达，在第1天用IL-6攻击cyno，并将cyno分为三组。在第4天，组1中的cyno接受载剂对照，组2中的cyno以0.6mg/kg接受hHA-008抗体，并且组3中的cyno以6.0mg/kg接受hHA-008抗体。在第11天，将所有三个组中的cyno再次用IL-6攻击，并测量了所有cyno的血浆铁调素-25。如图13所示，与所有三个组中cyno的攻击前基线(BL)相比，在第1天IL-6攻击提高了血浆铁调素-25浓度。在第11天的第二次IL-6攻击之后，组1中的cyno显示血浆铁调素-25提高，与第1天观察到的相似。然而，对于组2(0.6mg/kg hHA-008)和组3(6mg/kg hHA-008)中的cyno，hHA-008的存在以剂量依赖性方式阻止了在第11天IL-6诱导的血浆铁调素-25的提高。换言之，hHA-008以剂量依赖性方式在cyno中有效阻止炎症诱导的(IL 6)铁调素提高。这些结果表明抗HJV抗体能够抑制由IL-6信号传导途径诱导的铁调素表达。
实施例7：表位作图
针对hHA-008和hHA-008-QL使用3720-RG-050(血幼素(HJV)片段，SEQ ID NO:123)进行表位作图。
在表位作图之前，使用高质量MALDI质谱和化学交联确认在样品制备中未检测到hHA-008和hHA-008-QL的非共价聚集体以及3720-RG-050的多聚体。
为了以高分辨率测定3720-RG-050上hHA-008和hHA-008-QL的表位，将3720-RG-050/hHA-008和3720-RG-050/hHA-008-QL复合物与氘化交联剂一起孵育并进行多酶裂解。在交联肽富集之后，将样品通过高分辨率质谱(nLC-LTQ-Orbitrap MS)分析，并使用XQuest和Stavrox软件分析生成的数据。
3720-RG-050/hHA-008(HJV片段/hHA-008)
在用氘化d0d12对蛋白复合物3720-RG-050/hHA-008进行胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、ASP-N、弹性蛋白酶和嗜热菌蛋白酶蛋白酶解之后，nLC-orbitrap MS/MS分析检测到3720-RG-050和hHA008之间的8种交联肽。
交联的顺序和位置见下表14。
表14：在3720-RG-050和hHA-008之间检测到的交联肽。
Figure BDA0004016554230001281
使用化学交联、高质量MALDI质谱和nLC-Orbitrap质谱，对3720-RG-050和hHA-008之间的分子界面进行了表征。图14示出了hHA-008与3720-RG-050上的第170至183位氨基酸(SSPMALGANATATR(SEQ ID NO:121)相互作用。相互作用发生在3720-RG-050上的第170、171、180、182、183位氨基酸上。图15示出了3720-RG-050和hHA-008的相互作用。使用SwissModel软件通过同源性产生了3720-RG-050PDB结构。图15示出了3720-RG-050序列的3720-RG-050第170至183位氨基酸(SSPMALGANATATR(SEQ ID NO:121))：前视图(A)、后视图(B)、侧视图1(C)、侧视图2(D)和顶视图(E)的带状/表面表示。F、G、H、I、J：前视图(F)、后视图(G)、侧视图1(H)、侧视图2(I)和顶视图(J)的带状表示。
3720-RG-050/hHA-008-QL(HJV片段/hHA-008-QL)
在用氘化d0d12对蛋白复合物3720-RG-050/hHA-008-QL进行胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、ASP-N、弹性蛋白酶和嗜热菌蛋白酶蛋白酶解之后，nLC-orbitrap MS/MS分析检测到3720-RG-050和hHA-008-QL之间存在16种交联肽。
交联的顺序和位置见下表15。
表15：在3720-RG-050和HA-008-QL之间检测到的交联肽。
Figure BDA0004016554230001291
使用化学交联、高质量MALDI质谱和nLC-Orbitrap质谱，表征了3720-RG-050和hHA-008-QL之间的分子界面。图16示出了hHA-008-QL与3720-RG-050的第169至182位氨基酸(TSSPMALGANATAT(SEQ ID NO：122))和第289至300位氨基酸(SQRLSRSERNRR(SEQ ID NO：127))的相互作用。相互作用发生在3720-RG-050上的第169、171、180、182位；第289、293、294、295、297、300位氨基酸上。图17示出了相互作用3720-RG-050/hHA-008-QL。使用SwissModel软件通过同源性产生了3720-RG-050PDB结构。3720-RG-050第169至182位氨基酸(TSSPMALGANATAT(SEQ ID NO：122))和第289至291位氨基酸(SQR)如图17所示：前视图(A)、后视图(B)、侧视图1(C)、侧视图2(D)和顶视图(E)的带状/表面表示。F、G、H、I、J：前视图(F)、后视图(G)、侧视图1(H)、侧视图2(I)和顶视图(J)的带状表示。
实施例8：hHA-008-QL降低循环转铁蛋白水平
循环转铁蛋白水平可与其他标志物(例如，总铁结合能力、血清铁蛋白水平等)一起用作体内铁水平的指标。循环转铁蛋白是反映蛋白质和铁状态二者的膜铁转运蛋白。转铁蛋白随着铁缺乏而提高，并且当铁状态改善时减少(参见，例如Litchford et al.，NUTRITIONAL ISSUES IN THE PATIENT WITH DIABETES AND FOOT ULCERS，Levin and O′Neal′s The Diabetic Foot(Seventh Edition)，2008；Ogun et al.，Biochemistry,Transferrin，Treasure Island(FL)：StatPearls Publishing；2021 Jan)。
为了测试hHA-008-QL处理之后循环转铁蛋白水平是否降低，在第1天hHA-008-QL给药之前，在11天的实验中为每只健康食蟹猴(cyno)建立了基线转铁蛋白水平。将cyno在第1天、第15天和第29天用0mg/kg、3mg/kg、30mg/kg或160mg/kg的hHA-008-QL给药(每组n＝5)。在第1天给药之后96小时、192小时和336小时；在第15天给药之后48小时、96小时、192小时和336小时；和第29天给药之后48小时收集每只cyno的血液。注意到，第1天给药之后336小时时间点的血液在第15天给药之前2小时收集，并且第15天给药之后336小时时间点的血液在第29天给药之前2小时收集。测量每只cyno的所有样品中的转铁蛋白水平，并与其自身的基线进行比较，以计算在每个时间点的百分比变化。表16中的数据显示出，与基线水平相比，hHA-008-QL处理降低了循环转铁蛋白水平。
表16：用hHA-008-QL处理的cyno中循环转铁蛋白水平和相对于基线的变化
Figure BDA0004016554230001311
Figure BDA0004016554230001321
Figure BDA0004016554230001331
实施例9:hHA-008阻止食蟹猴中炎症诱导的(IL-6)铁抑制
本研究中研究了在IL-6攻击之后hHA-008对铁抑制的阻止。在第0天，将三组cyno(N＝3/组)用6×104国际单位(international unit，IU)IL-6/kg皮下攻击。在第3天，使每组3只动物分别静脉内接受0(载剂)、0.6mg/kg或6mg/kg的hHA-008。在第10天，所有组均皮下接受6×104IU IL-6/kg的第二次攻击。在每次IL-6攻击之前48小时和24小时，以及每次IL-6给药之后2、4、8和24小时，从所有cyno中收集血液以评价血清铁水平。将每次IL-6给药之前48和24小时收集的样品的平均基线值用作D0值。结果显示hHA-008在食蟹猴中以剂量依赖性方式有效阻止IL-6诱导的血清铁抑制(图18)。
实施例10：在Sprague-Dawley大鼠中皮下注射hHA-008
将Sprague-Dawley大鼠(6只雌性和6只雄性)用hHA-008以6mg/kg(mpk)皮下注射。在给药之后35天评价药代动力学(SC PK)和药效学(SC PD)。血清平均药代动力学参数(例如，C最大、T最大、t1/2和AUC0-inf)示于表17中：
表17：在Sprague-Dawley大鼠中单次SC施用之后hHA-008的血清平均药代动力学(PK)参数
Figure BDA0004016554230001341
皮下施用之后hHA-008的生物利用度与以6mg/kg静脉内施用之后的hHA-008的生物利用度相似，其由以下证明：皮下注射的hHA-008生物利用度(SC生物利用度)为静脉内注射hHA-008生物利用度(IV生物利用度)的约84.7％(SC生物利用度＝SC DN_AUC0-inf/IV DN_AUC0-inf×100；DN：经归一化的剂量)。此外，SC施用之后达到最大浓度(C最大)的时间为3.6至4天，该C最大与IV施用之后的C最大相比要低得多。
在相似剂量水平下，IV或SC之间的PD响应无法区分：血清hHA-008浓度在给药之后1至2天达到饱和，在至少21天内保持升高，并且PD响应(例如铁调素-25浓度和TSAT％)的下降与hHA-008血清浓度的下降一致(图19)。
实施例11.食蟹猴中的皮下给药施用
还在食蟹猴(cyno)中评价了皮下hHA-008处理的PK/PD。以0.3mpk、0.6mpk、1mpk和6mpk向cyno皮下注射hHA-008。
在6mpk给药组中，2只雄性和1只雌性cyno接受hHA-008单次皮下注射，并收集血液样品，持续61天。使用接受6mpk的hHA-008IV注射的cyno进行比较。
在0.3mpk、0.6mpk和1.0mpk组中，每组包括接受hHA-008单次皮下注射的3只雄性cyno。收集血液样品，持续27天。将通过IV接受相同剂量的hHA-008的cyno用于进行各组比较。
在食蟹猴中SC施用hHA-008之后，与通过IV以相同剂量注射的动物相比，其生物利用度更高且随剂量水平提高(0.3mpk时55.0％，0.6mpk时81.9％，1mpk时89.5％，以及6mg/kg时100％)。在给药之后以剂量依赖性方式迅速达到T最大(1.33至2.67天)。表18示出了在cyno中进行单次SC施用之后hHA-008的血清平均药代动力学(PK)参数。施用之后4天，SC注射与IV注射的hHA-008血清浓度-时间谱变得无法区分(图20A)。
表18：在cyno中进行单次SC施用之后hHA-008的血清平均药代动力学(PK)参数
Figure BDA0004016554230001351
*从AUC0-最后推断小于3％。
SC给药之后的PD响应在动物之间是可变的，与剂量水平相对成比例，并且类似于以0.1mpk、0.6mpk和1.0mpk IV给药之后观察到的PD响应。对于所有动物，PD响应在给药之后1至2天功能性地最大(TSAT>80％，并且铁调素-25<LOQ)。PD标志物(例如，血清铁)回到基线水平与hHA-008血清浓度的下降一致(图20B至20D)。在6mpk时，SC注射组和IV注射组的血清铁浓度都太饱和而不能反映所述变化(数据未显示)。
其他实施方案
本说明书中公开的所有特征都可以以任意组合进行组合。本说明书中公开的每个特征都可以被用于相同、等同或类似目的的替代特征替换。因此，除非另有明确说明，否则所公开的每个特征仅是等同或类似特征的通用系列的一个实例。
通过以上描述，本领域技术人员可以容易地确定本发明的本质特征，并且在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以对本发明进行各种变化和修改以使其适应多种用途和条件。因此，其他实施方案也阐述如下：
1.治疗患有慢性病性贫血的对象的方法，所述方法包括：向所述对象施用有效量的与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：X1YGMN(SEQ ID NO：105)所示的重链互补决定区1(HC CDR1)，其中X1可以是N或Y；MIYYDSSX2KHYADSVKG(SEQ ID NO：106)所示的重链互补决定区2(HC CDR2)，其中X2可以是E或D；GX3TPDX4(SEQ ID NO：107)所示的重链互补决定区3(HC CDR3)，其中X3可以是T或S，并且X4可以是Y、V或K；和/或者RSSQSLX5X6SDGX7TFLX8(SEQ ID NO：108)所示的轻链互补决定区1(LC CDR1)，其中X5可以是A或E，X6可以是T、S、E或D，X7可以是D、Y或G，并且X8可以是E或H；X9VSX10RFS(SEQ ID NO：109)所示的轻链互补决定区2(LC CDR2)，其中X9可以是E、D或A，并且X10可以是N、S、T、E或H；X11QX12TX13DPX14X15(SEQ ID NO：110)所示的轻链互补决定区3(LC CDR3)，其中X11可以是F或M，X12可以是V或A，X13可以是H或Y，X14可以是M、L或V，并且X15可以是T或S。
2.在患有慢性病性贫血的对象中抑制铁螯合的方法，所述方法包括：向所述对象施用有效量的与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：如X1YGMN(SEQ IDNO：105)所示的重链互补决定区1(HC CDR1)，其中X1可以是N或Y；如MIYYDSSX2KHYADSVKG(SEQ ID NO：106)所示的重链互补决定区2(HC CDR2)，其中X2可以是E或D；如GX3TPDX4(SEQID NO：107)所示的重链互补决定区3(HC CDR3)，其中X3可以是T或S，并且X4可以是Y、V或K；和/或者如RSSQSLX5X6SDGX7TFLX8(SEQ ID NO：108)所示的轻链互补决定区1(LC CDR1)，其中X5可以是A或E，X6可以是T、S、E或D，X7可以是D、Y或G，并且X8可以是E或H；如X9VSX10RFS(SEQ ID NO：109)所示的轻链互补决定区2(LC CDR2)，其中X9可以是E、D或A，并且X10可以是N、S、T、E或H；如X11QX12TX13DPX14X15(SEQ ID NO：110)所示的轻链互补决定区3(LC CDR3)，其中X11可以是F或M，X12可以是V或A，X13可以是H或Y，X14可以是M、L或V，并且X15可以是T或S。
3.实施方案1或实施方案2所述的方法，其中所述抗体包含含有与SEQ ID NO:38具有至少85％同一性的氨基酸序列的VH，和/或包含含有与SEQ ID NO:39具有至少85％同一性的氨基酸序列的VL。
4.实施方案3所述的方法，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的VH并且包含含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的VL。
5.实施方案1至4中任一项所述的方法，其中所述抗体是人源化抗体。
6.实施方案5所述的方法，其中所述人源化抗体包含人源化VH和/或人源化VL。
7.实施方案1至6中任一项所述的方法，其中所述抗体选自全长IgG、Fab片段、F(ab’)片段、F(ab’)2片段、scFv和Fv。
8.实施方案7所述的方法，其中所述抗体是全长IgG。
9.实施方案8所述的方法，其中所述抗体包含同种型IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区。
10.实施方案9所述的方法，其中所述抗体还包含SEQ ID NO:46或SEQ ID NO:48中所示的重链恒定区。
11.实施方案10所述的方法，其中所述抗体还包含SEQ ID NO:47中所示的轻链恒定区。
12.实施方案1至11中任一项所述的方法，其中所述抗体包含：(i)含有与SEQ IDNO:61具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链，和/或含有与SEQ ID NO:62具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；或(ii)含有与SEQ ID NO:63具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链，和/或含有与SEQ ID NO:62具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链。
13.实施方案12所述的方法，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的重链并且包含含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链。
14.实施方案12所述的方法，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:63的氨基酸序列的重链并且包含含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链。
15.实施方案1至14中任一项所述的方法，其中所述对象是红细胞输注依赖性的。
16.实施方案1至14中任一项所述的方法，其中所述对象是红细胞输注非依赖性的。
17.实施方案1至14中任一项所述的方法，其中所述慢性病性贫血是铁限制性贫血。
18.实施方案17所述的方法，其中所述铁限制性贫血与功能性铁缺乏相关。
19.实施方案1至24中任一项所述的方法，其中所述慢性病性贫血与慢性肾病相关(或由慢性肾病引起)。
20.实施方案1至14中任一项所述的方法，其中所述慢性病性贫血与癌症相关(或由癌症引起)。
21.实施方案20所述的方法，其中所述癌症是骨髓瘤。
22.实施方案1至14中任一项所述的方法，其中所述慢性病性贫血与慢性感染相关(或由慢性感染引起)。
23.实施方案22所述的方法，其中所述感染是细菌感染、病毒感染、真菌感染或寄生虫感染。
24.实施方案1至15中任一项所述的方法，其中所述慢性病性贫血与自身免疫病相关(或由自身免疫病引起)。
25.实施方案1至15中任一项所述的方法，其中所述慢性病性贫血与涉及炎症的慢性疾病相关(或由所述慢性疾病引起)。
26.实施方案25所述的方法，其中所述涉及炎症的慢性疾病是炎性肠病、糖尿病或心力衰竭。
27.实施方案1至26中任一项所述的方法，其中所述对象在所述治疗之前被鉴定为具有高铁调素水平。
28.实施方案1至27中任一项所述的方法，其中所述对象被鉴定为具有功能性铁缺乏。
29.实施方案1至28中任一项所述的方法，其中所述对象被鉴定为表现出炎症和/或铁限制性红细胞生成。
30.实施方案1至29中任一项所述的方法，其中所述对象是人。
31.实施方案1至30中任一项所述的方法，其中所述抗血幼素抗体以比所述抗血幼素抗体结合RGMa的KD值低至少10倍的KD值与血幼素结合。
32.实施方案29所述的方法，其中所述抗血幼素抗体以比所述抗血幼素抗体结合RGMa的KD值低至少100倍的KD值与血幼素结合。
33.实施方案31或32中任一项所述的方法，其中所述血幼素的KD值小于100×10- 9M。
34与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述抗体包含含有与SEQ ID NO:38具有至少85％同一性的氨基酸序列的VH，和/或包含含有与SEQ ID NO:39具有至少85％同一性的氨基酸序列的VL。
35实施方案30所述的分离的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的VH并且包含含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的VL。
36.实施方案34或实施方案35所述的分离的抗体，其中所述抗体是人源化抗体。
37.实施方案36所述的分离的抗体，其中所述人源化抗体包含人源化VH和/或人源化VL。
38.实施方案34至37中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体选自全长IgG、Fab片段、F(ab’)片段、F(ab’)2片段、scFv和Fv。
39.实施方案38所述的分离的抗体，其中所述抗体是全长IgG。
40.实施方案39所述的分离的抗体，其中所述抗体包含同种型IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区。
41.实施方案40所述的分离的抗体，其中所述抗体还包含SEQ ID NO:46、48、112或113中所示的重链恒定区。
42.实施方案41所述的分离的抗体，其中所述抗体还包含SEQ ID NO:47中所示的轻链恒定区。
43.实施方案34至42中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含：(i)含有与SEQ ID NO:61或117具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链，和/或含有与SEQ ID NO:62具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；或者(ii)含有与SEQ ID NO:63或118具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链，和/或含有与SEQ ID NO:62具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链。
44.实施方案43所述的分离的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:61或117的氨基酸序列的重链并且包含含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链。
45.实施方案43所述的分离的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:63或118的氨基酸序列的重链并且包含含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链。
46.与人血幼素结合的分离的抗体，其通过在宿主细胞中表达以下产生：(i)编码重链的核酸序列，其中所述核酸序列与SEQ ID NO:92具有至少90％同一性；和/或(ii)编码轻链的核酸序列，其中所述核酸序列与SEQ ID NO:93具有至少90％同一性。
47.与人血幼素结合的分离的抗体，其通过在宿主细胞中表达以下产生：(i)编码重链的核酸序列，其中所述核酸序列与SEQ ID NO:94具有至少90％同一性；和/或(ii)编码轻链的核酸序列，其中所述核酸序列与SEQ ID NO:93具有至少90％同一性。
48.实施方案46或47所述的分离的抗体，其中所述宿主细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、dhfr-CHO细胞、人胚肾(HEK)-293细胞、verda reno(VERO)细胞、非分泌型null(NS0)细胞、人胚胎视网膜(PER.C6)细胞、Sp2/0细胞、小仓鼠肾(BHK)细胞、马丁-达比犬肾(MDCK)细胞、马丁-达比牛肾(MDBK)细胞或由SV40(COS)细胞转化的猴肾CV1系。
等同方案和范围
在权利要求中，未用数量词限定的名词可意指一个/种或多于一个/种，除非指出相反或者从上下文中另外明显的。在组的一个或更多个成员之间包含“或”的权利要求或描述被认为满足以下：对于给定的产品或过程，存在、使用或以其他方式相关一个、多于一个或所有的组成员，除非指出相反或者从上下文中另外明显的。本发明包括其中对于给定产品或过程存在、使用或以其他方式相关恰好一个组成员的实施方案。本发明包括其中对于给定产品或过程存在、使用或以其他方式相关多于一个或所有组成员的实施方案。
此外，本发明涵盖其中将来自一个或更多个所列权利要求的限制、要素、条款和描述性术语引入到另一个权利要求中的所有变型、组合和排列。例如，可以对从属于另一权利要求的任何权利要求进行修改，以包含在从属于相同基础权利要求的任何其他权利要求中发现的一个或更多个限制。在要素以列表形式提出时，例如以马库什组格式，则还公开了要素的每个子组，并且可以从组中去除任何要素。应当理解，通常来说，在将本发明或本发明的方面称为包含特定要素和/或特征的情况下，则本发明的某些实施方案或本发明的方面由或基本上由这样的要素和/或特征组成。为了简单的目的，这些实施方案未在本文言语中明确给出。
如本文中在说明书和权利要求书中使用的短语“和/或”应理解成意指如此连接的要素中的“之一或两者”，即在一些情况下要素结合存在，而在另一些情况下要素分别存在。用"和/或"列举的多个要素应以相同方式理解，即所连接要素中的"一个或更多个"。除了由“和/或”子句具体地所指明的要素之外，其他要素任选地存在，不管与具体地所指明的那些要素相关或不相关。因此，作为非限制性实例，当与开放式语言例如“包含”结合使用时，对“A和/或B”的引用可以在一个实施方案中仅指代A(可选地包含除B之外的要素)；在另一个实施方案中，仅指代B(可选地包含除A之外的要素)；在又一个实施方案中，指代A和B二者(任选地包含其他要素)；等。
如本说明书和权利要求书中所用，“或”应理解为具有与如上所定义的“和/或”相同的含义。例如，当分离列表中的项目时，“或”或“和/或”应理解为包括，即包括多个要素或要素列表中的至少一个，但也包括其中的多于一个，并且任选地包括另外的未列举项目。仅明确指出相反的术语，例如“仅之一”或“恰好之一”，或者当用于权利要求时“由......组成”，将指的是包括多个要素或要素列表中的恰好一个要素。一般而言，如本文所用的术语“或/或者”在前面有排他性术语(例如“任一”、“之一”、“仅之一”或“恰好之一”)时仅应解释为指示排他性替代方案(即“一个或另一个但并非二者”)。“基本上由......组成”在用于权利要求中时应具有其在专利法领域中所使用的普通含义。
如本文在说明书中和权利要求书中使用的，在提及一个或更多个要素的列表时，短语“至少一个”应被理解为意指选自要素列表中任意一个或更多个要素的至少一个要素，但不一定包括要素列表内具体列出的多个和每个要素中的至少一个，并且不排除要素列表中要素的任意组合。该定义还允许可以任选地存在除在短语“至少一个”所提及的要素列表中具体指出的要素之外的要素，无论其与具体指出的那些要素相关或不相关。因此，作为非限制性实例，“A和B中的至少一者”(或等同地，“A或B中的至少一者”，或等同地，“A和/或B中的至少一者”)在一个实施方案中可以指至少一个A，任选地包括多于一个A，而不存在B(并且任选地包括除B之外的要素)；在另一个实施方案中，可以指至少一个B，任选地包括多于一个B，而不存在A(并且任选地包括除A之外的要素)；在又一个实施方案中，可以指至少一个A，任选地包括多于一个A，以及至少一个B，任选地包括多于一个B(并且任选地包括其他要素)；等等。
还应当理解，除非明确指出相反，在本文要求保护的包括多于一个步骤或动作的任何方法中，方法的步骤或动作的顺序不必需限于所叙述的方法的步骤或动作的顺序。
在权利要求书以及以上说明书中，所有过渡性短语例如“包含”、“包括”、“携有”、“具有”、“含有”、“涉及”、“持有”、“由......构成”等都应理解为开放式的，即，意指包括但不限于。如美国专利局专利审查程序手册第2111.03节中阐述的，仅过渡性短语“由......组成”和“基本上由......组成”应分别是封闭式或半封闭式过渡性短语。应当理解，在本文件中使用开放式过渡性短语(例如，“包含/包括”)描述的实施方案也在替代实施方案中被考虑为“由该开放式过渡性短语描述的特征组成”和“基本上由该开放式过渡性短语描述的特征组成”。例如，如果本申请描述“包含A和B的组合物”，则本申请还考虑了替代实施方案：“由A和B组成的组合物”和“基本上由A和B组成的组合物”。
在范围给定的情况下，包括端点。此外，除非另外指出或者从上下文中或根据本领域普通技术人员的理解另外明显的，作为范围表达的值在本发明的不同实施方案中可以假定为所述范围内的任何特定值或子范围，直到该范围的下限单位的十分之一，除非上下文另有明确规定。
本申请涉及多个已授权的专利、公开的专利申请、期刊文章和其他出版物，所有这些均通过引用并入本文中。如果在任何并入的参考文献与本说明书之间存在冲突，则以本说明书为准。另外，落入现有技术范围内的本发明的任何特定实施方案可以明确地从任意一个或更多个权利要求中排除。因为这样的实施方案被认为是本领域普通技术人员已知的，所以即使本文未明确提出排除，也可以将它们排除。本发明的任何特定实施方案可以出于任何原因从任何权利要求中排除，无论是否与现有技术的存在有关。
本领域技术人员将认识或能够仅使用常规实验即可确定本文中所述的特定实施方案的许多等同方案。本文中所述的本发明实施方案的范围不旨在限于上述描述，而是在所附权利要求书中给出。本领域普通技术人员将理解，可以在不背离所附权利要求所限定的本发明的精神或范围的情况下对该描述进行多种改变和修改。
本文中对变量的任何定义中列举化学基团的记载包括将该变量定义为所列基团的任何单个基团或组合。本文中对变量的实施方案的记载包括作为任何单个实施方案或与任何其他实施方案或其部分组合的实施方案。本文中实施方案的记载包括作为任何单个实施方案或与任何其他实施方案或其部分组合的实施方案。
序列表
<110> Disc Medicine, Inc.
AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG
AbbVie Inc.
<120> 用于治疗慢性病性贫血的抗血幼素（HJV）抗体
<130> D0842.70002WO00
<140> 尚未分配
<141> 与此同时
<150> US 63/024,427
<151> 2020-05-13
<150> US 63/035,634
<151> 2020-06-05
<150> US 63/047,844
<151> 2020-07-02
<150> US 63/164,307
<151> 2021-03-22
<160> 129
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 1
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 2
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Gly
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<220>
<223> 合成多肽
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<220>
<223> 合成多肽
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<220>
<223> 合成多肽
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<220>
<223> 合成多肽
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<220>
<223> 合成多肽
<400> 7
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
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Gly Met Ile Tyr Tyr Asp Ser Ser Glu Lys His Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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<223> 合成多肽
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Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser
20 25 30
Asp Gly Asp Thr Phe Leu Glu Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Glu Val Ser Thr Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Val
85 90 95
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<220>
<223> 合成多肽
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Gly
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<220>
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<220>
<223> 合成多肽
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Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Glu Ser Asp Gly Tyr Thr Phe Leu Glu
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<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
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Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asp Ser Asp Gly Gly Thr Phe Leu Glu
1 5 10 15
<210> 17
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 17
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Glu Ser Asp Gly Tyr Thr Phe Leu His
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成多肽
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成多肽
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<223> 合成多肽
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
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<223> 合成多肽
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<220>
<223> 合成多肽
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<223> 合成多肽
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<220>
<223> 合成多肽
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Phe Gln Ala Thr His Asp Pro Val Thr
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 29
Phe Gln Ala Thr His Asp Pro Leu Ser
1 5
<210> 30
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 30
Asp Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
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Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser
20 25 30
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Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Glu Val Ser Ser Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
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65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Val
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 31
Asp Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser
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100 105 110
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 32
Asp Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Ser Ser
20 25 30
Asp Gly Asp Thr Phe Leu Glu Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Val Ser Thr Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Val
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 33
Asp Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Glu Ser
20 25 30
Asp Gly Tyr Thr Phe Leu Glu Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
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Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Val Ser Glu Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
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Thr Tyr Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
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<210> 34
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 34
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Tyr Tyr Asp Ser Ser Glu Lys His Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
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100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 35
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 35
Asp Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Gly Thr Phe Leu Glu Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
85 90 95
Thr His Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 36
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 36
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Lys His Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Lys Gly Thr Thr Pro Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
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<210> 37
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 37
Asp Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Glu Ser
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Asp Gly Tyr Thr Phe Leu His Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
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Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
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100 105 110
<210> 38
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 38
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Tyr Tyr Asp Ser Ser Glu Lys His Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Thr Thr Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 39
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 39
Asp Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Glu Ser
20 25 30
Asp Gly Tyr Thr Phe Leu His Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Glu Val Ser Thr Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
85 90 95
Thr His Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 40
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 40
gaagtacagt tggtagaaag cggcggagga cttgtgcagc caggtggatc tctcagactt 60
tcatgtgccg caagcggttt tacttttagt aactatggaa tgaactgggt tagacaagcg 120
cccggaaaag gattggaatg gataggaatg atatactacg acagctccga gaaacattat 180
gccgactcag ttaaaggaag atttacaata tcaagagaca atagcaaaaa cacactttat 240
cttcaaatga attcactgcg agccgaggat acagcagtct attattgcgc aaaaggctcg 300
acccccgatt actggggtca aggaacaatg gtaaccgtgt caagcgcgtc gaccaagggc 360
ccatcggtct tccccctggc accctcctcc aagagcacct ctgggggcac agcggccctg 420
ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc 480
ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc 540
agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg 600
aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaaagttg agcccaaatc ttgtgacaaa 660
actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaagccgcgg ggggaccgtc agtcttcctc 720
ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg 780
gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg 840
gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg 900
gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag 960
gtctccaaca aagccctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020
ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccgcg aggagatgac caagaaccag 1080
gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140
agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200
tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1260
ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1320
ctgtctccgg gtaaatga 1338
<210> 41
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 41
Asp Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Ala Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Asp Thr Phe Leu His Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Ala Val Ser His Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
85 90 95
Thr His Asp Pro Val Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 42
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 42
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Tyr Tyr Asp Ser Ser Glu Lys His Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Thr Thr Pro Asp Lys Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 43
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 43
Asp Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Glu Ser
20 25 30
Asp Gly Tyr Thr Phe Leu Glu Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Glu Val Ser His Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
85 90 95
Thr His Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 44
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 44
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Tyr Tyr Asp Ser Ser Glu Lys His Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Ser Thr Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 45
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 45
Asp Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Gly Thr Phe Leu Glu Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Val Ser Ser Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
85 90 95
Thr His Asp Pro Leu Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 46
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 46
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 47
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 47
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 48
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 48
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Gln Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 49
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 49
Glu Val Ser Ser Arg Phe Ser
1 5
<210> 50
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 50
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Ala Asp Ser Asp Gly Asp Thr Phe Leu His
1 5 10 15
<210> 51
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 51
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Tyr Tyr Asp Ser Ser Glu Lys His Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Thr Thr Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 52
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 52
Asp Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser
20 25 30
Asp Gly Asp Thr Phe Leu Glu Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Glu Val Ser Thr Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Val
85 90 95
Thr His Asp Pro Met Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 53
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 53
Asp Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser
20 25 30
Asp Gly Asp Thr Phe Leu Glu Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Glu Val Ser Ser Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Val
85 90 95
Thr His Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 54
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 54
Asp Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser
20 25 30
Asp Gly Asp Thr Phe Leu Glu Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Val
85 90 95
Thr His Asp Pro Val Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 55
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 55
Asp Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Ser Ser
20 25 30
Asp Gly Asp Thr Phe Leu Glu Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Val Ser Thr Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Val
85 90 95
Thr His Asp Pro Val Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 56
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 56
Asp Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Glu Ser
20 25 30
Asp Gly Tyr Thr Phe Leu Glu Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Val Ser Glu Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
85 90 95
Thr Tyr Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 57
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 57
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Tyr Tyr Asp Ser Ser Glu Lys His Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Thr Thr Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 58
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 58
Asp Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Gly Thr Phe Leu Glu Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Val Ser Ser Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
85 90 95
Thr His Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 59
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 59
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Lys His Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Thr Thr Pro Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
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225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 60
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 60
Asp Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Glu Ser
20 25 30
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35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
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100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
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Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
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Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
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195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 61
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 61
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
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Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Met Ile Tyr Tyr Asp Ser Ser Glu Lys His Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
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195 200 205
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Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
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Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
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Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
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His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
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<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 62
Asp Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Glu Ser
20 25 30
Asp Gly Tyr Thr Phe Leu His Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Glu Val Ser Thr Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
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Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 63
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 63
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
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Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Met Ile Tyr Tyr Asp Ser Ser Glu Lys His Tyr Ala Asp Ser Val
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Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
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225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Gln Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
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Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
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<210> 64
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 64
gacgtagtac tgacccaaag ccccctttct ctcccagtaa ccctcggaca accagcctca 60
atttcatgca gatcatcaca atcacttgag gacagcgacg gaggcacttt tcttgagtgg 120
ttccaacaaa gacccggaca aagcccacgc ctgcttattt acgacgtatc aagcagattc 180
tcaggagttc cagacagatt ttcaggcagc ggatccggca cagacttcac ccttaaaatt 240
agcagagtag aagcagaaga tgtaggagtg tattattgtt tccaagccac ccacgacccc 300
ctcagcttcg gacaaggaac taagctcgaa atcaaaagaa cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttga 660
<210> 65
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 65
Asp Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Ala Asp Ser
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Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Ala Val Ser His Arg Phe Ser Gly Val Pro
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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
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Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 66
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 66
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
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Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Met Ile Tyr Tyr Asp Ser Ser Glu Lys His Tyr Ala Asp Ser Val
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Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
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<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 67
Asp Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
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<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 68
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
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Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
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245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
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Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
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<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 69
Asp Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
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Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asp Ser
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 70
gaagtacagt tggtagaaag cggcggagga cttgtgcagc caggtggatc tctcagactt 60
tcatgtgccg caagcggttt tacttttagt aactatggaa tgaattggat tagacaagcg 120
cccggaaaag gattggaatg gataggaatg atatactacg atagctcaga aaaacattat 180
gccgactcag ttaaaggaag atttacaata tcaagagaca atagcaaaaa cacactttat 240
cttcaaatga attcactgcg agccgaggat acagcagtct attattgcgc aaaaggaaca 300
acaccagatt attggggtca aggaacaatg gtaaccgtgt caagc 345
<210> 71
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 71
gaagtacagt tggtagaaag cggcggagga cttgtgcagc caggtggatc tctcagactt 60
tcatgtgccg caagcggttt tacttttagt aactatggaa tgaattggat tagacaagcg 120
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tcaggagttc cagacagatt ttcaggcagc ggatccggca cagacttcac ccttaaaatt 240
agcagagtag aagcagaaga tgtaggagtg tattattgtt tccaagccac ccacgacccc 300
ctgaccttcg gacaaggaac taagctcgaa atcaaa 336
<210> 92
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 92
gaagtacagt tggtagaaag cggcggagga cttgtgcaac caggtggatc tctcagactt 60
tcatgtgccg caagcggttt tacttttagt aactatggaa tgaactgggt tagacaagcg 120
cccggaaaag gattggaatg gataggcatg atatattacg acagctcgga gaaacattat 180
gccgactcag ttaaaggaag atttacaata tcaagagaca atagcaaaaa cacactttat 240
cttcaaatga attcactgcg agccgaggat acagcagtct attattgcgc aaaagggacc 300
acccccgatt actggggtca aggaacaatg gtaaccgtgt caagcgcgtc gaccaagggc 360
ccatcggtct tccccctggc accctcctcc aagagcacct ctgggggcac agcggccctg 420
ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc 480
ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc 540
agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg 600
aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaaagttg agcccaaatc ttgtgacaaa 660
actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaagccgcgg ggggaccgtc agtcttcctc 720
ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg 780
gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg 840
gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg 900
gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag 960
gtctccaaca aagccctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020
ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccgcg aggagatgac caagaaccag 1080
gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140
agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200
tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1260
ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1320
ctgtctccgg gtaaatga 1338
<210> 93
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 93
gacgtagtac tgacccaaag ccccctttct ctcccagtaa ccctcggaca accagcctca 60
atttcatgca gatcatcaca atcacttgaa gaaagcgacg gatacacttt tcttcactgg 120
ttccaacaaa gacccggaca aagcccacgc ctgcttattt acgaggtatc aaccagattc 180
tcaggagttc cagacagatt ttcaggcagc ggatccggca cagacttcac ccttaaaatt 240
agcagagtag aagcagaaga tgtaggagtg tattattgtt tccaagccac ccacgacccc 300
ctgaccttcg gacaaggaac taagctcgaa atcaaaagaa cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttga 660
<210> 94
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 94
gaagtacagt tggtagaaag cggcggagga cttgtgcaac caggtggatc tctcagactt 60
tcatgtgccg caagcggttt tacttttagt aactatggaa tgaactgggt tagacaagcg 120
cccggaaaag gattggaatg gataggcatg atatattacg acagctcgga gaaacattat 180
gccgactcag ttaaaggaag atttacaata tcaagagaca atagcaaaaa cacactttat 240
cttcaaatga attcactgcg agccgaggat acagcagtct attattgcgc aaaagggacc 300
acccccgatt actggggtca aggaacaatg gtaaccgtgt caagcgcgtc gaccaagggc 360
ccatcggtct tccccctggc accctcctcc aagagcacct ctgggggcac agcggccctg 420
ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc 480
ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc 540
agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg 600
aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaaagttg agcccaaatc ttgtgacaaa 660
actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaagccgcgg ggggaccgtc agtcttcctc 720
ttccccccaa aacccaagga ccaactcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg 780
gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg 840
gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg 900
gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag 960
gtctccaaca aagccctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020
ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccgcg aggagatgac caagaaccag 1080
gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140
agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200
tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1260
ttctcatgct ccgtgctgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1320
ctgtctccgg gtaaatga 1338
<210> 95
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 95
gacgtagtac tgacccaaag ccccctttct ctcccagtaa ccctcggaca accagcctca 60
atttcatgca gatcatcaca atcacttgcg gacagcgacg gagatacttt tcttcactgg 120
ttccaacaaa gacccggaca aagcccacgc ctgcttattt acgcggtatc acacagattc 180
tcaggagttc cagacagatt ttcaggcagc ggatccggca cagacttcac ccttaaaatt 240
agcagagtag aagcagaaga tgtaggagtg tattattgtt tccaagccac ccatgacccc 300
gtcacgttcg gacaaggaac taagctcgaa atcaaa 336
<210> 96
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 96
gacgtagtac tgacccaaag ccccctttct ctcccagtaa ccctcggaca accagcctca 60
atttcatgca gatcatcaca atcacttgcg gacagcgacg gagatacttt tcttcactgg 120
ttccaacaaa gacccggaca aagcccacgc ctgcttattt acgcggtatc acacagattc 180
tcaggagttc cagacagatt ttcaggcagc ggatccggca cagacttcac ccttaaaatt 240
agcagagtag aagcagaaga tgtaggagtg tattattgtt tccaagccac ccatgacccc 300
gtcacgttcg gacaaggaac taagctcgaa atcaaaagaa cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttga 660
<210> 97
<211> 345
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 97
gaagtacagt tggtagaaag cggcggagga cttgtgcagc caggtggatc tctcagactt 60
tcatgtgccg caagcggttt tacttttagt aactatggaa tgaactgggt tagacaagcg 120
cccggaaaag gattggaatg gataggcatg atatactacg acagctccga gaaacattat 180
gccgactcag ttaaaggaag atttacaata tcaagagaca atagcaaaaa cacactttat 240
cttcaaatga attcactgcg agccgaggat acagcagtct attattgcgc aaaaggcacg 300
acgcccgata aatggggtca aggaacaatg gtaaccgtgt caagc 345
<210> 98
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 98
gacgtagtac tgacccaaag ccccctttct ctcccagtaa ccctcggaca accagcctca 60
atttcatgca gatcatcaca atcacttgag gagagcgacg gatacacttt tcttgagtgg 120
ttccaacaaa gacccggaca aagcccacgc ctgcttattt acgaggtatc acatagattc 180
tcaggagttc cagacagatt ttcaggcagc ggatccggca cagacttcac ccttaaaatt 240
agcagagtag aagcagaaga tgtaggagtg tattattgtt tccaagcgac ccacgacccc 300
ctgacgttcg gacaaggaac taagctcgaa atcaaa 336
<210> 99
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 99
gaagtacagt tggtagaaag cggcggagga cttgtgcagc caggtggatc tctcagactt 60
tcatgtgccg caagcggttt tacttttagt aactatggaa tgaactgggt tagacaagcg 120
cccggaaaag gattggaatg gataggcatg atatactacg acagctccga gaaacattat 180
gccgactcag ttaaaggaag atttacaata tcaagagaca atagcaaaaa cacactttat 240
cttcaaatga attcactgcg agccgaggat acagcagtct attattgcgc aaaaggcacg 300
acgcccgata aatggggtca aggaacaatg gtaaccgtgt caagcgcgtc gaccaagggc 360
ccatcggtct tccccctggc accctcctcc aagagcacct ctgggggcac agcggccctg 420
ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc 480
ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc 540
agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg 600
aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaaagttg agcccaaatc ttgtgacaaa 660
actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaagccgcgg ggggaccgtc agtcttcctc 720
ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg 780
gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg 840
gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg 900
gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag 960
gtctccaaca aagccctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020
ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccgcg aggagatgac caagaaccag 1080
gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140
agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200
tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1260
ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1320
ctgtctccgg gtaaatga 1338
<210> 100
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 100
gacgtagtac tgacccaaag ccccctttct ctcccagtaa ccctcggaca accagcctca 60
atttcatgca gatcatcaca atcacttgag gagagcgacg gatacacttt tcttgagtgg 120
ttccaacaaa gacccggaca aagcccacgc ctgcttattt acgaggtatc acatagattc 180
tcaggagttc cagacagatt ttcaggcagc ggatccggca cagacttcac ccttaaaatt 240
agcagagtag aagcagaaga tgtaggagtg tattattgtt tccaagcgac ccacgacccc 300
ctgacgttcg gacaaggaac taagctcgaa atcaaaagaa cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttga 660
<210> 101
<211> 345
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 101
gaagtacagt tggtagaaag cggcggagga cttgtgcagc caggtggatc tctcagactt 60
tcatgtgccg caagcggttt tacttttagt aactatggaa tgaactgggt tagacaagcg 120
cccggaaaag gattggaatg gataggaatg atatactacg acagctccga gaaacattat 180
gccgactcag ttaaaggaag atttacaata tcaagagaca atagcaaaaa cacactttat 240
cttcaaatga attcactgcg agccgaggat acagcagtct attattgcgc aaaaggctcg 300
acccccgatt actggggtca aggaacaatg gtaaccgtgt caagc 345
<210> 102
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 102
gacgtagtac tgacccaaag ccccctttct ctcccagtaa ccctcggaca accagcctca 60
atttcatgca gatcatcaca atcacttgag gacagcgacg gaggcacttt tcttgagtgg 120
ttccaacaaa gacccggaca aagcccacgc ctgcttattt acgacgtatc aagcagattc 180
tcaggagttc cagacagatt ttcaggcagc ggatccggca cagacttcac ccttaaaatt 240
agcagagtag aagcagaaga tgtaggagtg tattattgtt tccaagccac ccacgacccc 300
ctcagcttcg gacaaggaac taagctcgaa atcaaa 336
<210> 103
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人
<400> 103
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 104
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 104
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Leu Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys
<210> 105
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> Xaa可以是Asn或者Tyr
<400> 105
Xaa Tyr Gly Met Asn
1 5
<210> 106
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa可以是Glu或者Asp
<400> 106
Met Ile Tyr Tyr Asp Ser Ser Xaa Lys His Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 107
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(2)
<223> Xaa可以是 Thr或者Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa可以是Tyr, Val,或者Lys
<400> 107
Gly Xaa Thr Pro Asp Xaa
1 5
<210> 108
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> Xaa可以是Ala或者Glu
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa可以是Thr, Ser, Glu,或者Asp
<220>
<221> misc_feature
<222> (12)..(12)
<223> Xaa可以是Asp, Tyr,或者Gly
<220>
<221> misc_feature
<222> (16)..(16)
<223> Xaa可以是Glu或者His
<400> 108
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Xaa Xaa Ser Asp Gly Xaa Thr Phe Leu Xaa
1 5 10 15
<210> 109
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> Xaa可以是Glu, Asp,或者Ala
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> Xaa可以是Asn, Ser, Thr, Glu,或者His
<400> 109
Xaa Val Ser Xaa Arg Phe Ser
1 5
<210> 110
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> Xaa可以是Phe或者Met
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa可以是Val或者Ala
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> Xaa可以是His或者Tyr
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa可以是Met, Leu,或者Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa可以是Thr或者Ser
<400> 110
Xaa Gln Xaa Thr Xaa Asp Pro Xaa Xaa
1 5
<210> 111
<211> 329
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 111
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 112
<211> 329
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 112
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
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Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
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85 90 95
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Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
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130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
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<223> 合成多肽
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325
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<213> 人工序列
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<223> 合成多肽
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<223> 合成多肽
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<223> 合成多肽
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<220>
<223> 合成
<400> 122
Thr Ser Ser Pro Met Ala Leu Gly Ala Asn Ala Thr Ala Thr
1 5 10
<210> 123
<211> 364
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 123
Gln Cys Lys Ile Leu Arg Cys Asn Ala Glu Tyr Val Ser Ser Thr Leu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Gly Gly Gly Ser Ser Gly Ala Leu Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Arg Gly Gly Gly Val Gly Ser Gly Gly Leu Cys Arg Ala Leu
35 40 45
Arg Ser Tyr Ala Leu Cys Thr Arg Arg Thr Ala Arg Thr Cys Arg Gly
50 55 60
Asp Leu Ala Phe His Ser Ala Val His Gly Ile Glu Asp Leu Met Ile
65 70 75 80
Gln His Asn Cys Ser Arg Gln Gly Pro Thr Pro Pro Pro Pro Arg Gly
85 90 95
Pro Ala Leu Pro Gly Ala Gly Ser Gly Leu Pro Ala Pro Asp Pro Cys
100 105 110
Asp Tyr Glu Gly Arg Phe Ser Arg Leu His Gly Arg Pro Pro Gly Phe
115 120 125
Leu His Cys Ala Ser Phe Gly Asp Pro His Val Arg Ser Phe His His
130 135 140
His Phe His Thr Cys Arg Val Gln Gly Ala Trp Pro Leu Leu Asp Asn
145 150 155 160
Asp Phe Leu Phe Val Gln Ala Thr Ser Ser Pro Met Ala Leu Gly Ala
165 170 175
Asn Ala Thr Ala Thr Arg Lys Leu Thr Ile Ile Phe Lys Asn Met Gln
180 185 190
Glu Cys Ile Asp Gln Lys Val Tyr Gln Ala Glu Val Asp Asn Leu Pro
195 200 205
Val Ala Phe Glu Asp Gly Ser Ile Asn Gly Gly Asp Arg Pro Gly Gly
210 215 220
Ser Ser Leu Ser Ile Gln Thr Ala Asn Pro Gly Asn His Val Glu Ile
225 230 235 240
Gln Ala Ala Tyr Ile Gly Thr Thr Ile Ile Ile Arg Gln Thr Ala Gly
245 250 255
Gln Leu Ser Phe Ser Ile Lys Val Ala Glu Asp Val Ala Met Ala Phe
260 265 270
Ser Ala Glu Gln Asp Leu Gln Leu Cys Val Gly Gly Cys Pro Pro Ser
275 280 285
Gln Arg Leu Ser Arg Ser Glu Arg Asn Arg Arg Gly Ala Ile Thr Ile
290 295 300
Asp Thr Ala Arg Arg Leu Cys Lys Glu Gly Leu Pro Val Glu Asp Ala
305 310 315 320
Tyr Phe His Ser Cys Val Phe Asp Val Leu Ile Ser Gly Asp Pro Asn
325 330 335
Phe Thr Val Ala Ala Gln Ala Ala Leu Glu Asp Ala Arg Ala Phe Leu
340 345 350
Pro Asp Leu Glu Lys Leu His Leu Phe Pro Ser Asp
355 360
<210> 124
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 124
Ser Ser Pro Met Ala Leu Gly Ala Asn Ala Thr Ala Thr Arg Lys Leu
1 5 10 15
Thr Ile Ile Phe Lys
20
<210> 125
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 125
Asp Asn Asp Phe Leu Phe Val Gln Ala Thr Ser Ser Pro Met Ala Leu
1 5 10 15
Gly Ala Asn Ala Thr Thr Arg Lys Leu Thr Ile Ile Phe Lys
20 25 30
<210> 126
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 126
Gln Leu Cys Val Gly Gly Cys Pro Pro Ser Gln Arg Leu Ser Arg Ser
1 5 10 15
Glu Arg Asn Arg Arg
20
<210> 127
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 127
Ser Gln Arg Leu Ser Arg Ser Glu Arg Asn Arg Arg
1 5 10
<210> 128
<211> 426
<212> PRT
<213> 智人
<400> 128
Met Gly Glu Pro Gly Gln Ser Pro Ser Pro Arg Ser Ser His Gly Ser
1 5 10 15
Pro Pro Thr Leu Ser Thr Leu Thr Leu Leu Leu Leu Leu Cys Gly His
20 25 30
Ala His Ser Gln Cys Lys Ile Leu Arg Cys Asn Ala Glu Tyr Val Ser
35 40 45
Ser Thr Leu Ser Leu Arg Gly Gly Gly Ser Ser Gly Ala Leu Arg Gly
50 55 60
Gly Gly Gly Gly Gly Arg Gly Gly Gly Val Gly Ser Gly Gly Leu Cys
65 70 75 80
Arg Ala Leu Arg Ser Tyr Ala Leu Cys Thr Arg Arg Thr Ala Arg Thr
85 90 95
Cys Arg Gly Asp Leu Ala Phe His Ser Ala Val His Gly Ile Glu Asp
100 105 110
Leu Met Ile Gln His Asn Cys Ser Arg Gln Gly Pro Thr Ala Pro Pro
115 120 125
Pro Pro Arg Gly Pro Ala Leu Pro Gly Ala Gly Ser Gly Leu Pro Ala
130 135 140
Pro Asp Pro Cys Asp Tyr Glu Gly Arg Phe Ser Arg Leu His Gly Arg
145 150 155 160
Pro Pro Gly Phe Leu His Cys Ala Ser Phe Gly Asp Pro His Val Arg
165 170 175
Ser Phe His His His Phe His Thr Cys Arg Val Gln Gly Ala Trp Pro
180 185 190
Leu Leu Asp Asn Asp Phe Leu Phe Val Gln Ala Thr Ser Ser Pro Met
195 200 205
Ala Leu Gly Ala Asn Ala Thr Ala Thr Arg Lys Leu Thr Ile Ile Phe
210 215 220
Lys Asn Met Gln Glu Cys Ile Asp Gln Lys Val Tyr Gln Ala Glu Val
225 230 235 240
Asp Asn Leu Pro Val Ala Phe Glu Asp Gly Ser Ile Asn Gly Gly Asp
245 250 255
Arg Pro Gly Gly Ser Ser Leu Ser Ile Gln Thr Ala Asn Pro Gly Asn
260 265 270
His Val Glu Ile Gln Ala Ala Tyr Ile Gly Thr Thr Ile Ile Ile Arg
275 280 285
Gln Thr Ala Gly Gln Leu Ser Phe Ser Ile Lys Val Ala Glu Asp Val
290 295 300
Ala Met Ala Phe Ser Ala Glu Gln Asp Leu Gln Leu Cys Val Gly Gly
305 310 315 320
Cys Pro Pro Ser Gln Arg Leu Ser Arg Ser Glu Arg Asn Arg Arg Gly
325 330 335
Ala Ile Thr Ile Asp Thr Ala Arg Arg Leu Cys Lys Glu Gly Leu Pro
340 345 350
Val Glu Asp Ala Tyr Phe His Ser Cys Val Phe Asp Val Leu Ile Ser
355 360 365
Gly Asp Pro Asn Phe Thr Val Ala Ala Gln Ala Ala Leu Glu Asp Ala
370 375 380
Arg Ala Phe Leu Pro Asp Leu Glu Lys Leu His Leu Phe Pro Ser Asp
385 390 395 400
Ala Gly Val Pro Leu Ser Ser Ala Thr Leu Leu Ala Pro Leu Leu Ser
405 410 415
Gly Leu Phe Val Leu Trp Leu Cys Ile Gln
420 425
<210> 129
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 129
Asp Thr His Phe Pro Ile Cys Ile Phe Cys Cys Gly Cys Cys His Arg
1 5 10 15
Ser Lys Cys Gly Met Cys Cys Lys Thr
20 25

Claims (51)

1.治疗患有慢性病性贫血的对象的方法，所述方法包括：
向所述对象施用有效量的与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：
X1YGMN(SEQ ID NO：105)所示的重链互补决定区1(HC CDR1)，其中X1可以是N或Y；
MIYYDSSX2KHYADSVKG(SEQ ID NO：106)所示的重链互补决定区2(HC CDR2)，其中X2可以是E或D；
GX3TPDX4(SEQ ID NO：107)所示的重链互补决定区3(HC CDR3)，其中X3可以是T或S，并且X4可以是Y、V或K；和/或者
RSSQSLX5X6SDGX7TFLX8(SEQ ID NO：108)所示的轻链互补决定区1(LC CDR1)，其中X5可以是A或E，X6可以是T、S、E或D，X7可以是D、Y或G，并且X8可以是E或H；
X9VSX10RFS(SEQ ID NO：109)所示的轻链互补决定区2(LC CDR2)，其中X9可以是E、D或A，并且X10可以是N、S、T、E或H；
X11QX12TX13DPX14X15(SEQ ID NO：110)所示的轻链互补决定区3(LC CDR3)，其中X11可以是F或M，X12可以是V或A，X13可以是H或Y，X14可以是M、L或V，并且X15可以是T或S。
2.在患有慢性病性贫血的对象中抑制铁螯合的方法，所述方法包括向所述对象施用有效量的与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：
X1YGMN(SEQ ID NO：105)所示的重链互补决定区1(HC CDR1)，其中X1可以是N或Y；
MIYYDSSX2KHYADSVKG(SEQ ID NO：106)所示的重链互补决定区2(HC CDR2)，其中X2可以是E或D；
GX3TPDX4(SEQ ID NO：107)所示的重链互补决定区3(HC CDR3)，其中X3可以是T或S，并且X4可以是Y、V或K；和/或者
RSSQSLX5X6SDGX7TFLX8(SEQ ID NO：108)所示的轻链互补决定区1(LC CDR1)，其中X5可以是A或E，X6可以是T、S、E或D，X7可以是D、Y或G，并且X8可以是E或H；
X9VSX10RFS(SEQ ID NO:109)所示的轻链互补决定区2(LC CDR2)，其中X9可以是E、D或A，并且X10可以是N、S、T、E或H；
A11QX12TX13DPX14X15(SEQ ID NO:110)所示的轻链互补决定区3(LC CDR3)，其中X11可以是F或M，X12可以是V或A，X13可以是H或Y，X14可以是M、L或V，并且X15可以是T或S。
3.权利要求1或权利要求2所述的方法，其中对象通过皮下注射进行施用。
4.权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述贫血由促炎性细胞因子诱导的铁调素表达导致，并且其中所述抗体的施用减轻了该贫血。
5.权利要求4所述的方法，其中所述促炎性细胞因子是IL-6。
6.权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述抗体包含SEQ ID NO:1的HC CDR1、SEQID NO:2的HC CDR2、SEQ ID NO:3的HC CDR3和SEQ ID NO:17的LC CDR1、SEQ ID NO:5的LCCDR2、SEQ ID NO:27的LC CDR3。
7.权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的VH，并且包含含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的VL。
8.权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述抗体是包含人源化VH和/或人源化VL的人源化抗体。
9.权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述抗体选自全长IgG、Fab片段、F(ab’)片段、F(ab’)2片段、scFv和Fv。
10.权利要求9所述的方法，其中所述抗体是包含同种型IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区的全长IgG。
11.权利要求10所述的方法，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的重链，并且包含含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链。
12.权利要求10所述的方法，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:63的氨基酸序列的重链，并且包含含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链。
13.权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述对象是红细胞输注依赖性的。
14.权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述对象是红细胞输注非依赖性的。
15.权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述慢性病性贫血是铁限制性贫血。
16.权利要求15所述的方法，其中所述铁限制性贫血与功能性铁缺乏相关。
17.权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述慢性病性贫血与慢性肾病相关。
18.权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述慢性病性贫血与癌症相关，任选地其中所述癌症是骨髓瘤。
19.权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述慢性病性贫血与选自细菌感染、病毒感染、真菌感染或寄生虫感染的慢性感染相关。
20.权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述慢性病性贫血与自身免疫病相关。
21.权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述慢性病性贫血与涉及炎症的选自炎性肠病、糖尿病或心力衰竭的慢性疾病相关。
22.权利要求1至21中任一项所述的方法，其中所述对象在所述治疗之前被鉴定为具有高铁调素水平。
23.治疗患有ACD的对象的方法，所述方法包括：
通过皮下施用向所述对象施用有效量的与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：
含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区(VH)，和含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
24.在患有ACD的对象中抑制HJV活性的方法，所述方法包括：
通过皮下施用向所述对象施用有效量的与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：
含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区(VH)，和含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
25.在患有ACD的对象中降低铁调素-25的方法，所述方法包括：向所述对象施用有效量的与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：
含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区(VH)，和含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
26.权利要求25所述的方法，其中所述对象通过皮下注射进行施用。
27.权利要求25或权利要求26所述的方法，其中所述施用在施用之后4小时、6小时、8小时、12小时、28小时、24小时、2天、3天、4天、5天、6天、1周或2周降低铁调素-25。
28.权利要求25至27中任一项所述的方法，其中与施用之前所述对象中的铁调素-25水平相比，所述施用将铁调素-25降低了至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的铁调素-25。
29.与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其用于治疗患有慢性病性贫血(ACD)的对象的方法中，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区(VH)，并且包含含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
30.与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其用于在患有慢性病性贫血(ACD)的对象中抑制铁螯合，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区(VH)，并且包含含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
31.根据权利要求29或权利要求30所述应用的与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述对象通过皮下注射进行施用。
32.根据权利要求29至31中任一项所述应用的与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述贫血由促炎性细胞因子诱导的铁调素合成导致，并且其中所述抗体的施用减轻了该贫血。
33.根据权利要求32所述应用的与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述促炎性细胞因子是IL-6。
34.根据权利要求29至33所述应用的与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的VH，并且包含含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的VL。
35.根据权利要求29至34所述应用的与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述抗体是包含人源化VH和/或人源化VL的人源化抗体。
36.根据权利要求29至35所述应用的与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述抗体选自全长IgG、Fab片段、F(ab’)片段、F(ab’)2片段、scFv和Fv。
37.根据权利要求36所述应用的与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述抗体是包含同种型IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区的全长IgG。
38.根据权利要求37所述应用的与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:61或117的氨基酸序列的重链，并且包含含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链。
39.根据权利要求37所述应用的与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:63或118的氨基酸序列的重链，并且包含含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链。
40.根据权利要求29至39所述应用的与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述对象是红细胞输注依赖性的或红细胞输注非依赖性的。
41.根据权利要求29至40所述应用的与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述慢性病性贫血是铁限制性贫血。
42.根据权利要求41所述应用的与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述铁限制性贫血与功能性铁缺乏相关。
43.根据权利要求29至42所述应用的与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其中所述慢性病性贫血与以下相关：
(i)慢性肾病；
(ii)癌症，任选地其中所述癌症是骨髓瘤；
(iii)选自细菌感染、病毒感染、真菌感染或寄生虫感染的慢性感染；
(iv)自身免疫病；和/或者
(v)涉及炎症的选自炎性肠病、糖尿病或心力衰竭的慢性疾病。
44.权利要求29至43中任一项所述的方法，其中所述对象在所述治疗之前被鉴定为具有高铁调素水平。
45.与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其用于治疗患有ACD的对象的方法中，其中通过皮下施用向所述对象施用所述分离的抗体，并且其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区(VH)，并且包含含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
46.与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其用于在患有慢性病性贫血(ACD)的对象中抑制铁螯合，其中通过皮下施用向所述对象施用所述分离的抗体，并且其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区(VH)，并且包含含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
47.与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其用于在患有ACD的对象中抑制HJV活性的方法中，其中通过皮下施用向所述对象施用所述分离的抗体，并且其中所述抗体包含含有SEQID NO:38的氨基酸序列的重链可变区(VH)，并且包含含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
48.与人血幼素(HJV)结合的分离的抗体，其用于在患有ACD的对象中降低铁调素-25的方法中，其中所述抗体包含：
含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的重链可变区(VH)，和含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
49.根据权利要求48所述应用的分离的抗体，其中所述对象通过皮下注射进行施用。
50.根据权利要求48或权利要求49所述应用的分离的抗体，其中所述施用在施用之后4小时、6小时、8小时、12小时、28小时、24小时、2天、3天、4天、5天、6天、1周或2周降低铁调素-25。
51.权利要求48至50中任一项所述的方法，其中与施用之前所述对象中的铁调素-25水平相比，所述施用将铁调素-25降低了至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的铁调素-25。
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RU2815059C2 (ru) Собачьи антитела с модифицированными последовательностями ch2-ch3

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