KR20180063091A

KR20180063091A - 난각막 조성물을 이용하여 활성화 B 세포 조절 장애의 핵 인자 카파-경쇄 인핸서(NF-κB)를 이를 필요로 하는 숙주에서 활성화하기 위한 방법

Info

Publication number: KR20180063091A
Application number: KR1020187008834A
Authority: KR
Inventors: 케빈 제이. 러프
Original assignee: 이에스엠 테크놀로지즈, 엘엘씨
Priority date: 2015-10-08
Filing date: 2015-10-08
Publication date: 2018-06-11
Also published as: AU2015411324A1; US20180339002A1; MX2017007130A; HUE060219T2; AU2015411324B2; CN107206029A; PL3359170T3; BR112017014304A2; RU2713656C2; US11020437B2; RS63620B1; US10328104B2; ES2927890T3; US20190365824A1; RU2017130716A; CA2970101A1; DK3359170T3; RU2017130716A3; JP2018531212A; EP3359170A4

Abstract

본 발명은 활성화 B 세포의 핵 인자 카파-경쇄-인핸서(NF-κB)의 수준을 이를 필요로 하는 숙주의 내장에서 활성화하기 위한 난각막 조성물의 용도 및 NF-κB 조절 장애와 연관된 병태를 치료하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 NF-κB를 이를 필요로 하는 숙주의 내장에서 활성화하기 위한 방법을 제공한다. 상기 방법은 NF-κB의 활성화를 위해 본질적으로는 난각막, 및/또는 난각막 단리체 및/또는 난각막 가수분해물로 이루어진 유효량의 조성물을 상기 숙주에 경구 투여하는 단계를 포함한다.

Description

난각막 조성물을 이용하여 활성화 B 세포 조절 장애의 핵 인자 카파-경쇄 인핸서(NF-κB)를 이를 필요로 하는 숙주에서 활성화하기 위한 방법

본 발명은 활성화 B 세포의 핵 인자 카파-경쇄-인핸서("NF-κB")의 수준을 이를 필요로 하는 숙주의 내장에서 활성화하기 위한 난각막 조성물의 용도 및 NF-κB 조절 장애와 연관된 병태를 치료하는 방법에 관한 것이다.

염증은 감염성 침입자로부터 숙주를 방어하고 상처 이후에 조직을 회복하는데 중요한 역할을 한다. 그러나 염증이 적절히 아물지 않은 경우, 이는 몸체 내에서 심각한 악영향을 미칠 수 있다. 만성 염증이 수많은 질환의 병인(pathogenesis)에 기여하는 것으로 널리 인정되고 있다. 이러한 유형의 염증은 흔히 조직 파괴 및/또는 장기 부전으로 이어지고, 감염자의 삶의 질에 극단적인 영향을 미칠 수 있는 증상들로 이어질 수 있다.

조직의 상처가 물리적, 화학적 또는 생물학적 수단을 통해 발생하는 경우, 먼저 세포막 내의 인지질은 아라키돈산으로 물질 대사되며, 이는 널리 공지된 사이클로옥시게나아제(cyclooxygenase) 효소(COX-1 및 COX-2)를 통해 프로스타글란딘(prostaglandin)류로 추가로 물질 대사된다. 상기 얻어진 프로스타글란딘은 주로 부종(부기(swelling)), 홍반(홍진(redness)), 국부 발열 및 통증을 포함한 상처 부위에서 관측되는 잘 알려진 겉보기 효과(outward effect)를 나타낸다.

동시에, 전염증성 사이토카인류, 특히 인터류킨 1 베타(IL-1β) 및 종양 괴사 인자 알파(TNF-α)는 이들이 상처 부위에 도달하는 경우에 국부 세포에 의해 방출되고, 또한 면역 세포에 의해 방출된다. 이들 전염증성 사이토카인류는 하기 도면에 예시된 바와 같이 피드백 기전(feedback mechanism)을 통해 염증 과정 및 통증 캐스케이드(pain cascade) 둘 모두를 증폭한다:

만성 염증성 병태에 대한 치료제는 이러한 캐스케이드 내에 있는 임의의 다수의 효소 또는 수용체를 표적화(targeting)할 수 있다. 예를 들어, 코르티코스테로이드(corticosteroid)류는 포스포리파아제(phospholipase) A2의 활성을 억제하며, 그 결과 세포막 내에서 인지질의 전환으로 인해 아라키돈산의 방출 속도가 느려지며, 가장 널리 공지된 비스테로이드성 염증 치료 약물(NSAID)들 중 하나인 아스피린(아세틸살리실산)은 비선택적 및 비가역적으로 하류 프로스타글란딘의 생성에서 주요 효소들 중 하나인 사이클로옥시게나아제-1(COX-1)을 억제한다. 소수의 치료제가 존재하는 경우 이들은 이러한 염증성 캐스케이드에서 NF-κB의 역할을 특이적으로 표적화하였다.

NF-κB는 거의 모든 동물 세포 유형의 세포질에서 발견되는 단백질 복합체 패밀리이고, 이러한 전사 인자 패밀리의 DNA 결합 활성은 1986년에 최초로 보고되었다. 일단 활성화되어 핵으로 전위(translocation)되면, NF-κB는 하기 도면에서 증명된 바와 같이 부정적이거나 해로운 외부 세포 자극에 신속하게 반응하는 것과 관련이 있는 다중 유전자들의 전사를 제어한다:

활성 NF-κB는 RelA 단량체와 함께 p50 단량체로 이루어진 이종 이량체성 단백질(p50/RelA)이거나 RelB 단량체와 함께 p52 단량체로 이루어진 이종 이량체성 단백질(p52/RelB)이다. 상기 Rel 단백질(RelA 및 RelB)은 전사 활성화 도메인(TAD)도 함유하는 Rel 상동 도메인(RHD)으로도 공지된 고도로 보존된 (모든 종에서 보존된) DNA-결합 도메인이며, 이때 상기 전사 활성화 도메인(TAD)은 이들이 표적 유전자의 발현을 활성화하도록 한다. 상기 p50 및 p52 단량체는 NF-κB 단백질로도 공지되어 있으며, 주로 2개의 N-말단 세린 잔기의 안키린 반복(ankyrin repeat)으로 이루어져 있다. 이들은 또한 RHD 도메인을 함유하지만, 이들은 Rel 단백질에서 발견되는 TAD가 결여되어 있으며, 따라서 이들의 단량체성 형태 또는 동종 이량체성 형태(p50/p50 또는 p52/p52)로 유전자 발현을 활성화할 수 없다. 이들은 총칭하여 κB 부위로도 공지된 NA 서열을 활성화하기 위해 Rel 단백질과 결합되어야 한다.

활성화 이전에, 상기 p50/RelA 동종 이량체는 세포질에서 상기 동종 이량체가 IκBα로도 공지된 κB의 억제제에 결합되어 있는 불활성 복합체로서 존재하고, 상기 p52/RelB 동종 이량체는 세포질에서 불활성 p100/RelB 동종 이량체로서 존재한다. NF-κB의 활성화를 위한 2개의 널리 알려진 경로, 즉 정형적이거나 고전적인 경로 및 비정형적이거나 대안적인 경로가 존재한다. 상기 정형적인 경로에서, IκBα는 κB 키나아제(κB kinase)의 억제제(IKK-α)에 의해 연속적으로 인산화되며, 그 결과 프로테아좀(proteasome)에서의 유비퀴틴화(ubiquitination) 및 결과적인 파괴를 위해 IκBα를 표적화한다. 상기 비정형적인 경로에서, κB의 억제제(IκB)로서 기능을 하는 p100은 κB 키나아제의 억제제(IKK-β)에 의해 연속적으로 인산화되고, 부분적으로는 활성 p52 단백질로 분해된다. 이들 IκB 키나아제(IKK-α 및 IKK-β)는 세포질에서 삼량체 형태로 존재하며, 여기서 이는 IKK 복합체로서 알려져 있다. 상기 IKK는 조절 스캐폴드 단백질(regulatory scaffold protein)인 NF-κB 필수 조절인자(NEMO)와 결합하여 NF-κB의 연속적인 활성화를 방지한다. 상기 경로(정형적인 경로 및 비정형적인 경로)들 중 하나에서, 상기 IKK 복합체는 신호전달 분자가 세포 포면 수용체와 결합하는 경우에 활성화된다. 박테리아 또는 바이러스 항원, 다양한 사이토카인(예를 들어, IL-1β, TNF-α 등), 산화적 스트레스, 자외선 조사 및 유리 라디칼은 이들 세포 포면 수용체에 대한 직접 결합을 통해 또는 다른 신호전달 분자가 형성되도록 한 후 이를 상기 수용체에 결합하도록 함으로써 NF-κB 경로들 중 하나 또는 다른 경로의 활성화를 개시하는 것으로 알려진 자극들 중 단지 일부이다.

NF-κB는 감염에 대한 면역 반응을 조절하는데 이의 중요한 역할 때문에 초기에 연구되었다. 그러나 이의 발견 이래로 수십년 동안, NF-κB의 조절 장애는 패혈증, 천식, 류머티스성 관절염(RA) 및 염증성 장질환(IBD)과 같은 수많은 고전적인 염증성 질환과 연관이 있었다. 흥미롭게도, 특성상 명백히 염증성이 아닌 다수의 질환은 또한 아테롬성 동맥경화증, 알츠하이머병, 다발성 경화증, 당뇨병 및 다양한 암을 포함한 NF-κB 조절 장애와 연관이 있었다.

일반적으로, 질병 병리학과 관련이 있는 NF-κB 조절 장애는 과활성화(over-activation), 부적절한 활성화 또는 만성 활성화에 의한 것이다. 천식과 같은 고전적인 염증성 질환에서, 정상 기도에 단지 가벼운 자극을 가하는 기도 자극물은 천식 기도에서 심각한 염증을 야기한다(즉, 과활성화). 크론병 또는 글루텐 불내증(gluten intolerance)과 같은 염증성 장질환에서, 정상적인 내장에 대해 자극을 나타내지 않는 사람의 식이 성분들은 심각한 장 손상(즉, 부적절한 활성화)을 초래할 수 있는 급성 염증을 야기한다. 또한 류머티스성 관절염의 경우에 RA 환자의 몸체는 퇴화된 연골의 분절(즉, 글리코사미노글리칸, II형 콜라겐 등)에 민감하게 되며, 이는 환자 자신의 연골에 대한 자가 면역 반응을 초래하며, 이는 궁극적으로 추가적이고 심각한 연골 퇴화(즉, 만성 활성화)를 초래한다. 논리적으로, 이들 질환을 치료하기 위해 당업자는 이의 적절한 조절 기능을 회복하기 위해 몇몇 방식으로 NF-κB를 불활성화하거나 억제하려고 시도할 수 있다.

놀랍게도, 본 출원인은 숙주의 내장에서 NF-κB의 활성화가 NF-κB 조절 장애를 치료할 뿐만 아니라 많은 질환 및 병태에 대한 긍정적인 효과를 나타낸다는 것을 발견하였다. 이론에 결부되지 않는 한, 본 출원인은 숙주의 내장에서 NF-κB의 활성화가 상기 숙주에서 조직적으로는 NF-κB의 감소 또는 불활성화를 초래한다는 것을 생각하였다.

본 발명은 NF-κB를 이를 필요로 하는 숙주의 내장에서 활성화하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 본질적으로는 난각막, 및/또는 난각막 단리체 및/또는 난각막 가수분해물로 이루어진 유효량의 조성물을 상기 숙주에 경구 투여하는 단계를 포함한다.

본 발명은 또한 NF-κB를 이를 필요로 하는 숙주에서 조직적으로 감소시키기 위한 방법을 제공한다. 상기 방법은 본질적으로는 난각막, 및/또는 난각막 단리체 및/또는 난각막 가수분해물로 이루어진 유효량의 조성물을 상기 숙주에 경구 투여하는 단계를 포함한다.

일 실시형태에서, 이를 필요로 하는 상기 숙주는 폐질환 또는 병태를 앓고 있다. 상기 폐질환 또는 병태는 천식, 만성 폐쇄성 폐질환, 기관지염, 기종, 낭포성 섬유증, 폐부종, 유육종증, 급성 호흡 장애 증후군, 진폐증, 폐 고혈압, 과민성 폐렴 및 알레르기로 이루어진 군으로부터 선택된다.

상기 폐질환 또는 병태는 또한 가벼운 주기성 폐울혈; 가벼운 주기성 기침; 가벼운 주기성 동울혈(sinus congestion); 주기성 재채기; 및 가벼운 주기성 폐 염증으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

다른 실시형태에서, 이를 필요로 하는 상기 숙주는 뇌 또는 신경계에 영향을 미치는 질환 또는 병태를 앓고 있다. 상기 뇌 또는 신경계에 영향을 미치는 질환 또는 병태는 알츠하이머병, 섬유 근육통, 일과성 허혈성 발작(temporary ischemic attack), 맥관염(vasculitis), 뇌부종, 다발성 경화증, 헌팅턴병, 근위축성 측삭 경화증(amyotrophic lateral sclerosis), 파킨슨병, 뇌전증(epilepsy) 및 신경변성으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

상기 뇌 또는 신경계에 영향을 미치는 질환 또는 병태는 또한 주기성 건망증; 가벼운 주기성 신경 자통(nerve tingling) 또는 환상 감각(phantom sensation); 및 가벼운 주기성 근육 경련으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

또 다른 실시형태에서, 이를 필요로 하는 상기 숙주는 심혈관계 질환 또는 병태를 앓고 있다. 상기 심혈관계 질환 또는 병태는 아테롬성 동맥경화증, 심근증(cardiomyopathy), 마르판 증후군(Marfan Syndrome), 심낭염(pericarditis), 심장 판막증, 류마티스성 심장 질환, 말초 동맥 질환, 정맥 혈전증, 염증성 심장 질환, 고혈압, 고지혈증 및 고중성지질혈증(hypertriglyceridemia)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

상기 심혈관계 질환 또는 병태는 또한 가벼운 혈관 염증; 약간의 혈압 상승; 약간의 콜레스테롤 상승; 및 약간의 트리글리세리드 상승으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본 발명의 방법에서, 이를 필요로 하는 상기 숙주는 또한 위장관계(gastrointestinal system)의 질환 또는 병태를 앓고 있는 숙주이다. 상기 위장관계의 질환 또는 병태는 크론병, 궤양성 대장염, 위염, 게실염(diverticulitis), 과민성 대장 증후군, 복강병(celiac disease), 위식도역류병, 소화 불량, 위궤양 및 십이지장 궤양으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

상기 위장관계의 질환 또는 병태는 또한 가벼운 주기성 설사; 가벼운 주기성 변비; 가벼운 주기성 위경련 또는 복통; 가벼운 위염; 가벼운 장염; 및 가벼운 결장 염증으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본 발명의 실시형태에 따르면, 이를 필요로 하는 상기 숙주는 암을 앓고 있다. 상기 암은 백혈병, 림프종, 유방암, 방광암, 대장암, 전립선암, 췌장암, 난소암 및 갑상선암으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

다른 실시형태에서, 이를 필요로 하는 상기 숙주는 비알콜성 지방간염, 간염, 신염, 피부염, 결막염 및 치은염(gingivitis)으로 이루어진 군으로부터 선택된 질환을 앓고 있다.

본 발명은 NF-κB 조절 장애가 나타나는 병태를 앓고 있는 이를 필요로 하는 숙주를 제공한다.

본 발명의 실시형태에 따르면, 상기 방법은 염증 치료제를 상기 숙주에 동시 투여하는 단계를 더 포함한다.

상기 염증 치료제는 흡입형 코르티코스테로이드; 경구용 코르티코스테로이드; 비스테로이드성 염증 치료 약물; 오메가-3 또는 오메가-6 고도 불포화 지방산; 보스웰리아 종(Boswellia species) 또는 보스웰리아 추출물; 강황(turmeric) 또는 강황 추출물; 커큐민(curcumin) 또는 커큐미노이드(curcuminoid)류; 흰버들 껍질(white willow bark) 또는 흰버들 껍질 추출물; 단백질 분해 효소; 콜라겐 또는 콜라겐 가수분해물; 소나무 껍질 추출물; 비타민 또는 비타민 전구체; 및 미네랄로 이루어진 군으로부터 선택된다.

도 1: 본 도면은 인간 말초 혈액 단핵세포에서 난각막의 발효 및 효소 가수분해물의 시험관 내 NF-κB 활성을 나타낸다.
도 2: 본 도면은 인간 THP-1 단핵구 세포주에서 난각막의 발효, 효소 및 화학적 가수분해물의 시험관 내 NF-κB 활성을 나타낸다.
도 3: 본 도면은 단순 대조군, 관절염 대조군, 메토트렉사트(methotrexate) 처리 래트 및 NEM 처리 래트에서 콜라겐 유도 관절염에서 9일째 내지 17일째 날에 발목 부기(ankle swelling)에 대한 캘리퍼스(caliper) 측정치를 나타낸다.

본 발명은 NF-κB를 이를 필요로 하는 숙주의 내장에서 활성화하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 NF-κB를 이를 필요로 하는 숙주에서 조직적으로 불활성화하기 위한 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 본질적으로는 난각막, 및/또는 난각막 단리체 및/또는 난각막 가수분해물로 이루어진 유효량의 조성물을 상기 숙주에 경구 투여하는 단계를 포함한다.

"활성화"란 용어는 숙주의 세포 내에 존재하는 내생성 NF-κB가 활성화되며, 즉 난각막 조성물에 반응하여 상기 숙주의 내장에서 야기된 면역 반응에 의해 작용한다는 것을 의미한다. 상기 활성화의 결과로서, 상기 숙주의 내장에서 활성 NF-κB의 수준이 증가한다.

"조직적 불활성화"란 용어는 활성 NF-κB의 양이 이를 필요로 하는 숙주의 몸체에서 감소한다는 것을 의미한다. 상기 "신체"는 숙주의 물리적 신체의 모든 부분을 포함한다. 신체는 상기 숙주의 사지, 기관계, 뇌, 피부 및 골격계를 포함한다.

"내장"이란 용어는 그 전체로서 소화관을 포함한다는 것을 의미한다. 예를 들어, 내장은 유문(pylorus)에서 항문(anus)에 이르는 상기 숙주의 내장의 모든 부분을 포함한다. 내장은 또한 상기 숙주의 앞창자, 중간창자 및 뒤창자를 포함한다는 것을 의미한다. 이는, 예를 들어 위, 대장 및 소장을 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 상기 NF-κB의 활성화는 소장 및 대장에서 일어난다.

"이를 필요로 하는 숙주"란 용어는 NF-κB의 조직적인 불활성화로부터 이익을 얻을 수 있는 임의의 숙주를 의미한다. 상기 숙주는 임의의 포유동물, 양서류, 파충류, 어류 또는 조류이다. 포유동물로는, 예를 들어 인간, 가축 및 농장 동물을 들 수 있다. 가축으로는, 예를 들어, 고양이 및 개를 들 수 있다. 농장 동물로는, 예를 들어 소, 말, 돼지, 닭 및 양을 들 수 있다. 양서류로는, 예를 들어 개구리, 두꺼비, 도롱뇽 및 영원류를 포함한 임의의 양서류를 들 수 있다. 파충류로는, 예를 들어 뱀, 도마뱀 및 거북을 포함한 임의의 파충류를 들 수 있다. 어류로는 해수어 및 담수어를 포함한 임의의 어류를 들 수 있다. 조류로는 임의의 조류를 들 수 있다.

상기 NF-κB의 불활성화는 상기 숙주의 신체의 임의의 부부에서 일어난다. 예를 들어, 상기 NF-κB의 불활성화는 폐, 뇌, 심장 또는 내장에서 일어난다. 바람직한 실시형태에서, 상기 NF-κB의 불활성화는 상기 숙주에서 조직적으로 일어난다.

"이를 필요로 하는 숙주"의 예로는 폐질환 또는 병태, 뇌 또는 신경계에 영향을 미치는 질환 또는 병태, 심혈관계 질환 또는 병태, 위장관계의 질환 또는 병태, 암, 기타 질환 및 병태, 또는 NF-κB 조절 장애가 나타나는 병태를 앓고 있는 숙지를 들 수 있다.

상기 폐질환 또는 병태는 임의의 폐질환 또는 병태일 수 있다. 예를 들어, 상기 폐질환 또는 병태는 천식, 만성 폐쇄성 폐질환, 기관지염, 기종, 낭포성 섬유증, 폐부종, 유육종증, 급성 호흡 장애 증후군, 진폐증, 폐 고혈압, 과민성 폐렴 및 알레르기로 이루어진 군으로부터 선택된다. 게다가, 상기 폐질환 또는 병태는 가벼운 주기성 폐울혈; 가벼운 주기성 기침; 가벼운 주기성 동울혈; 주기성 재채기; 및 가벼운 주기성 폐 염증으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

상기 뇌 또는 신경계에 영향을 미치는 질환 또는 병태는 상기 뇌 또는 신경계에 영향을 미치는 임의의 질환 또는 병태일 수 있다. 예를 들어, 상기 뇌 또는 신경계에 영향을 미치는 질환 또는 병태는 알츠하이머병, 섬유 근육통, 일과성 허혈성 발작, 맥관염, 뇌부종, 다발성 경화증, 헌팅턴병, 근위축성 측삭 경화증, 파킨슨병, 뇌전증 및 신경변성으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

상기 뇌 또는 신경계에 영향을 미치는 질환 또는 병태는 또한 주기성 건망증; 가벼운 주기성 신경 자통 또는 환상 감각; 및는 가벼운 주기성 근육 경련으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

상기 심혈관계 질환 또는 병태는 심혈관계에 영향을 미치는 임의의 질환 또는 병태일 수 있다. 예를 들어, 상기 심혈관계 질환 또는 병태는 아테롬성 동맥경화증, 심근증, 마르판 증후군, 심낭염, 심장 판막증, 류마티스성 심장 질환, 말초 동맥 질환, 정맥 혈전증, 염증성 심장 질환, 고혈압, 고지혈증 및 고중성지질혈증으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 상기 심혈관계 질환 또는 병태는 또한 가벼운 혈관 염증; 약간의 혈압 상승; 약간의 콜레스테롤 상승; 및 약간의 트리글리세리드 상승으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

상기 위장관계의 질환 또는 병태는 상기 숙주의 위장관계에 영향을 미치는 임의의 질환 또는 병태일 수 있다. 예를 들어, 상기 위장관계의 질환 또는 병태는 크론병, 궤양성 대장염, 위염, 게실염, 과민성 대장 증후군, 복강병, 위식도역류병, 소화 불량, 위궤양 및 십이지장 궤양으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 상기 위장관계의 질환 또는 병태는 또한 가벼운 주기성 설사; 가벼운 주기성 변비; 가벼운 주기성 위경련 또는 복통; 가벼운 위염; 가벼운 장염; 및 가벼운 결장 염증으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

암은 임의의 형태의 암일 수 있다. 상기 암은 백혈병, 림프종, 유방암, 방광암, 대장암, 전립선암, 췌장암, 난소암 및 갑상선암으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

기타 질환으로는 내장에서 NF-κB의 활성화로부터 이익을 얻을 수 있는 임의의 질환을 들 수 있다. 예를 들어, 기타 질환은 비알콜성 지방간염, 간염, 신염, 피부염, 결막염 및 치은염으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

NF-κB 조절 장애가 나타나는 질환 및 병태로는 기여 인자들 중 하나가 NF-κB 조절 장애인 임의의 질환 또는 병태를 들 수 있다. 예를 들어, 이는 NF-κB 조절 장애가 질환의 병인학 및/또는 병리학에서 역할을 하는 질환 또는 병태를 포함하며, NF-κB가 국부적 또는 조직적으로 세포 수준에서 비정상적으로 활성화(또는 과활성화되거나, 부적절하게 활성화되거나 또는 만성적으로 활성화됨)된 질환 상태를 지칭하는 것으로, 상기 질환 상태는 신체의 기타 계통에 영향을 미침으로써 직접 또는 간접적으로 질환 상태의 발병 및/또는 진행에 기여한다.

게다가, 비정상적으로 활성화된 NF-κB는 억제되지 않거나 활성 상태의 NF-κB의 세포 수준을 갖는 숙주를 지칭하며, 이때 상기 NF-κB의 세포 수준은 상기 처리된 숙주와 동일한 성, 체중 및/또는 나이를 갖는 동일한 세포 유형 내의 동일한 종의 개개의 정상 숙주에 비해 증가된 상태이다. 이러한 효과는 흔히 NF-κB에 의한 숙주 면역계의 활성화를 통해 일어나며, 이는 비정상적인 만성 염증 반응을 초래한다. 천식의 경우, 이러한 염증은 폐에서 일어난다. 알츠하이머병의 경우, 이러한 염증은 뇌 조직에서 일어난다. 관절염의 경우, 이러한 염증은 관절의 조직(예를 들어, 힘줄, 인대, 활막(synovium), 관절 연골 등)에서 일어난다. 심혈관계 질환의 경우, 이러한 염증은 심장 조직 또는 혈관 벽에서 일어난다. 당뇨병의 경우, 이러한 염증은 췌장에서 일어난다. 염증성 장질환(IBD)의 경우, 이러한 염증은 특정 유형의 IBD(예를 들어, 크론병, 과민성 대장 증후군(IBS), 궤양성 대장염 등)에 따라 장관 내의 다양한 장소에서 일어난다. 다발성 경화증의 경우, 이러한 염증은 신경 및 근육 조직에서 일어난다.

본 발명의 다른 양태에서, 이를 필요로 하는 상기 숙주는 "전-질환" 상태이다. 예를 들어, 전-질환 상태에서 NF-κB 조절 장애는 가장 이른 단계에서 발생할 수 있지만, 이 같은 질환의 진단을 내릴 수 있는 질환의 임상적 증상이 없거나 불충분하며, 그렇지 않는 경우에 개체는 '건강한' 것으로 간주될 수 있다. 비록 상기 개체가 '건강한' 것으로 간주될지라도 이들은 본 발명의 청구주제인 조성물의 투여로부터 이익을 얻을 수 있으며, 심지어 가능하게도 이 같은 치료는 상기 개체가 질환 상태에 도달하는 것을 방지할 수 있다. 따라서 일 실시형태에서는 이를 필요로 하는 상기 숙주는 '건강한' 숙주이다.

투여

본 발명에 따르면, 본질적으로는 난각막, 및/또는 난각막 단리체 및/또는 난각막 가수분해물로 이루어진 조성물은 이를 필요로 하는 상기 숙주에 경구 투여된다. 경구 투여는 임의의 적합한 형태로 입을 통한 투여를 포함한다. 예를 들어, 적합한 형태로는 환제, 정제, 캡슐제, 분말제, 구미즈(gummies), 트로키(troche) 및 엘릭서(elixir)를 들 수 있다. 상기 조성물은 또한 음식, 다이어트 보조제 또는 제약 내 성분으로서 경구 투여된다.

당업자라면 기타 경구 전달 형태를 생각할 수 있으며, 이들은 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 의도된다.

유효량

"유효량"이란 용어는 NF-κB를 이를 필요로 하는 상기 숙주의 내장에서 효과적으로 활성화하는 임의의 양을 의미한다. 이러한 양은 상기 숙주의 체중을 고려하여 결정된다. 바람직한 실시형태에서, 본질적으로는 난각막, 및/또는 난각막 단리체 및/또는 난각막 가수분해물로 이루어진 상기 조성물의 1일 투여량은 평균 크기의 인간(예를 들어, 132lb. 또는 60㎏)에 있어서 1일 약 500㎎이다. 개 또는 고양이와 같은 보다 작은 숙주에 있어서, 상기 조성물의 1일 투여량은 15㎎/㎏(6.8㎎/lb.)이다. 말과 같은 보다 큰 숙주에 있어서, 상기 조성물의 1일 투여량은 5㎎/㎏(2.3㎎/lb.)이다.

상기 1일 투여량은 1회 투여되거나, 결과적으로 상기 숙주에 있어서 대략 1일 투여량이 되는 2회 이상의 투여량으로 투여된다. 예를 들어, 약 500㎎/1일의 투여량은 아침에 약 250㎎ 및 저녁에 250㎎의 양으로 섭취할 수 있다. 서방형 제형이 또한 고련된다.

본 발명의 조성물

본 발명의 조성물은 본질적으로는 난각막, 및/또는 난각막 단리체 및/또는 난각막 가수분해물로 이루어져 있다. 상기 조성물은 또한 가공된 난각막, 난각막 단리체 및 가수분해물의 조합을 포함한다.

난각막 물질은 바람직하게는 후속적인 가공 및 단리 단계 이전에 난황, 난백 및 난각으로부터 난각막을 분리하는 단계를 포함하는 방법에 의해 수득된다. 상기 난각막, 가공된 난각막, 및 난각막 단리체 및 가수분해물에는 바람직하게는 임의의 배아 구성성분 또는 이의 흔적, 예를 들어 동물 조직, 혈액 또는 체액 구성성분이 없으며, 이때 이들 구성성분은 제품 또는 제품의 조합의 의도된 용도에 유해하거나 바람직하지 않다.

전형적으로, 난각막의 공급원은 파쇄된 달걀일 것이며, 이때 상기 난각막은 여전히 난각에 부착되어 있다. 상기 난각막은 임의의 편리한 방식으로 난각으로부터 분리될 수 있다. 바람직하게는, 상기 난각막은 원재료에 남아있을 수 있는 임의의 원치 않는 물질의 부재 하에 난각으로부터 분리된다. 원치 않는 물질은 주로 잔류 난각에서 유래하는 탄산칼슘을 포함할 것이다.

그러나 소량의 이러한 칼슘 공급원은 특정 응용, 예를 들어 다이어트 보조제에서 유익할 수 있다.

난각으로부터 난각막을 분리하기 위한 방법은, 예를 들어 신선하거나 삶지 않은 달걀의 노른자 및 알부민의 제거 이후에 세척한 껍질로부터 막을 굴리거나 잡아당기는 방식과 같은 순수한 기계적 방식을 포함할 수 있다. 삶은 달걀로부터 난각막을 분리하는 기계적 방법이 또한 고려된다.

난각으로부터 난각막을 분리하기 위한 기계적 수단과 화학적 수단의 조합, 예를 들어 접착막이 껍질로부터 분리될 때까지 희석된 산의 존재 하에 상기 막을 함유하는 굵게 다진 난각을 교반하는 수단과 상기 껍질로부터 상기 방출된 막을 분리하는 수단의 조합은 또한 사용될 수 있다. 뉴하서(Neuhauser)에게 허여된 미국 특허 제 3,194,732 호에는 난각으로부터 난각막을 분리하기 위한 방법에 대한 보다 상세한 토의가 제공되며, 이는 본원에서 참고로 인용된다.

또한 상기 방법은 바람직하게는 상기 분리된 난각막을 건조하여 다양한 치수의 난각막 플레이크(eggshell membrane flake)를 생성하는 단계 및 후속적으로 상기 난각막 플레이크를 연마하거나 밀링(milling)하여 50 내지 500마이크론(㎛)의 입자 크기를 갖는 난각막 분말을 생성하는 단계를 포함한다. 분말화는 약 10% 미만의 습도를 함유하는 난각막 플레이크를 처리하기 위해 표준 연마, 밀링, 또는 분쇄 과정을 이용하여 달성된다. 사이징(sizing)은 일련의 스크린을 이용하여 수행된다.

바람직한 실시형태에서, 상기 분말화된 난각막에는 화학적 또는 효소적 가수분해가 적용된다. 상기 얻어진 슬러리는 전형적으로 주로 단백질 또는 보다 작은 펩티드 및 기타 수용성 분획을 함유하는 가용성 분획, 및 주로 고분자량 단백질 및 기타 불용성 분획을 함유하는 불용성 분획을 포함한다. 난각막의 화학적 가수분해는 무기산, 유기산, 무기염기, 유기염기, 금속 촉매, 아미노산, 환원제, 산화제, 또는 임의의 방식으로 상기 물질의 가수분해를 촉매하거나 이를 가용화하는 임의의 기타 화학 약품을 이용하여 달성될 수 있다. 난각막의 효소적 가수분해는 식물 또는 동물 공급원에서 유래한 효소 또는 박테리아 또는 효모와 같은 미생물에서 유래한 효소를 이용하여 달성될 수 있다. 상기 가수분해에 사용될 수 있는 유형의 효소들은 다음과 같다: 프로테아제(protease), 콜라게나아제(collagenase), 엘라스타아제(elastase), 하이드롤라아제(hydrolase), 리아제(lyase), 리가아제(ligase), 또는 임의의 방식으로 상기 물질의 가수분해를 촉매하거나 이를 가용화하는 임의의 기타 효소.

다른 실시형태에서, 살아있는 접종원과 함께 분말화된 난각막에는 발효가 적용한다. 상기 접종원은 박테리아, 효모, 곰팡이 또는 이들의 조합과 같은 살아있는 미생물로 구성되어 있다. 몇몇 예시적인 미생물 종은 다음과 같다: 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 바실러스 리케니포미스(Bacillus licheniformis), 바실러스 스테아로테르모필루스(Bacillus stearothermophilus), 스트렙토미케스 그리세우스(Streptomyces griseus), 세라티아 마르세센스(Serratia marcescens), 리조푸스 니베우스(Rhizopus niveus), 리조푸스 오리제(Rhizopus oryzae), 페니실리움 듀폰티(Penicillium duponti), 아스퍼질러스 오리제(Aspergillus oryzae), 아스퍼질러스 나이거(Aspergillus niger), 아스퍼질러스 멜레우스(Aspergillus melleus), 아스퍼질러스 소제(Aspergillus sojae), 아스퍼질러스 사이토이(Aspergillus saitoi), 캔디다 알비칸스(Candida albicans), 사카로마이세스 세리비지에(Saccharomyces cerevisiae), 사카로마이세스 프라질리스(Saccharomyces fragilis) 등. 상기 얻어진 슬러리는 전형적으로 주로 단백질 또는 보다 작은 펩티드 및 기타 수용성 분획을 함유하는 가용성 분획, 및 주로 고분자량 단백질 및 기타 불용성 분획을 함유하는 불용성 분획을 포함한다. 난각막 단리체 및 가수분해물은 상기 난각막에서 발견되는 천연 물질을 실질적으로 변경하지 않은 채 제조되는 것이 바람직하다.

바람직하게는, 상기 난각막에서 발견되는 물질들은 자연적으로 발생하며, 다시 말해 상기 단리체 또는 가수분해물을 제조하기 위해 사용되는 공정의 결과로서 실질적으로 변경되지 않는다.

난각막에서 유래하는 "천연 물질", "자연적으로 발생하는 물질" 또는 "자연적으로 발생하는 활성 물질"이란 용어는 난각막에서 유래하는 물질이 치료적 응용에 유용한 성분으로서의 이의 기능 측면에서 미처리되거나 미가공된 난각막으로부터 실질적으로 변경되지 않은 난각막의 적어도 하나의 성분 또는 구성성분을 유효량으로 함유한다는 것을 의미한다. 실질적으로 변경되지 않는다는 것은 선택되거나 요구되는 성분(들) 또는 구성성분(들)이 실질적으로는 이의/이들의 물리적 특성을 보유하고, 유의하게 분해, 소화(digestion) 또는 개열되지 않는다는 것을 의미한다. 그러나 기타 구성성분 또는 성분들은 특정 단리체 또는 가수분해물 내에서 변경될 수 있다. 예를 들어, 효소적 처리에 의해 제조된 가수분해물은 적어도 부분적으로 소화된 자연적으로 발생하는 단백질을 초래할 수 있다. 바람직하게는, 상기 난각막에서 발견되는 대부분의 자연적으로 발생하는 성분들은 실질적으로 변경되지 않으며, 보다 바람직하게는 실질적으로 모든 자연적으로 발생하는 성분들은 실질적으로 변경되지 않는다. 상기 난각막의 개개의 구성성분의 물리적 특성이 실질적으로 변경되지 않는 채로 남아있을지라도 서로 상이한 구성성분의 전체 조성 또는 양은 특정한 단리체 또는 가수분해물를 위한 목적하는 조성물에 따라 변경될 수 있다.

상기 조성물은 플레이크 또는 분말과 같은 기계적으로 가공된 난각막, 또는 난각막 단리체 또는 가수분해물을 포함할 수 있다. 상기 난각막 단리체 또는 가수분해물은 액체, 반고체 또는 고체 형태일 수 있으며, 예를 들어 다양한 양의 액체 또는 수분을 함유하는 부분적으로 수화된 분말 형태일 수 있다.

본 발명이 닭(즉, 갈루스 갈루스(Gallus gallus) 또는 갈루스 도메스티쿠스(Gallus domesticus))의 난각막에 관한 것일지라도 당업자라면 오리, 거위, 타조, 비둘기, 메추라기 등과 같은 임의의 기타 가금류의 난각막의 사용을 생각할 수 있다. 게다가, 몇몇 실시예에서, 본 출원서는 난각막의 효소적 가수분해 및 자연적으로 발생하는 난각막 물질의 후속적인 추출 및 정제를 위한 방법을 참고하여 개시되어 있다. 당업자라면 난각막의 가수분해를 위한 다양한 방법을 용이하게 확인할 수 있다. 이 같은 등가물은 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 의도된다.

본 발명에는 치료학적으로 허용 가능한 담체 또는 비히클(vehicle)과 함께 난각막을 포함하는 치료용 조성물이 또한 고려된다. 치료학적으로 허용 가능한 담체는 본 발명의 치료 효과(들)를 방해하지 않지만 상기 치료용 조성물을 경구 전달하는 작용을 할 수 있는 임의의 물질인 것으로 의도된다. 이는 탄산칼슘, 미세 결정성 셀룰로오스, 실리카, 전분, 만니톨, 프록토오스, 수크로오스, 소르비톨, 시트르산, 알긴산염, 인산칼슘, 젤라틴, 글리세린, 펙틴, 하이프로멜로스(hypromellose), 스테아린산마그네슘, 폴리에틸렌글리콜, 메틸파라벤 등과 같은 전형적인 약학적 부형제 및/또는 결합제를 포함할 수 있다.

(a) 난각막, 및/또는 난각막 단리체 및/또는 난각막 가수분해물 및 (b) 염증 치료제 둘 모두를 함유하는 조성물이 본 발명에서 또한 고려된다.

"염증 치료제"란 용어는 숙주에서 항염증 효과를 제공하는 것으로 알려진 임의의 화합물을 포함한다는 것을 의미한다. 예를 들어, 상기 염증 치료제는 흡입형 코르티코스테로이드; 경구용 코르티코스테로이드; 비스테로이드성 염증 치료 약물; 오메가-3 또는 오메가-6 고도 불포화 지방산; 보스웰리아 종 또는 보스웰리아 추출물; 강황(turmeric) 또는 강황 추출물; 커큐민 또는 커큐미노이드; 흰버들 껍질(white willow bark) 또는 흰버들 껍질 추출물; 단백질 분해 효소; 콜라겐 또는 콜라겐 가수분해물; 소나무 껍질 추출물; 비타민 또는 비타민 전구체; 및 미네랄로 이루어진 군으로부터 선택된다.

(a) 난각막, 및/또는 난각막 단리체 및/또는 난각막 가수분해물; 및 (b) 프로바이오틱, 프리바이오틱 및/또는 이들의 조합 둘 모두를 함유하는 조성물이 본 발명에서 또한 고려된다. (a) 난각막, 및/또는 난각막 단리체 및/또는 난각막 가수분해물; 및 (b) 소화 효소, L-글루타민 또는 섬유질 둘 모두를 함유하는 조성물이 본 발명에서 또한 고려된다. 이 같은 조성물은 내장 건강을 향상시키는데 유용하며, 내장의 질환 또는 병태를 포함한 질환 또는 병태의 치료에 유용하다.

(a) 난각막, 및/또는 난각막 단리체 및/또는 난각막 가수분해물; 및 (b) 계피, 또는 피콜린산크롬 또는 짐네마 실베스터(Gymnema sylvestre), 또는 알파 리포산, 또는 흰 강남콩 추출물 둘 모두를 함유하는 조성물이 본 발명에서 또한 고려된다. 이 같은 조성물은 혈당 제어에 유용하다.

(a) 난각막, 및/또는 난각막 단리체 및/또는 난각막 가수분해물; 및 (b) 니아신(niacin), 또는 오메가-3 또는 오메가-6 고도 불포화 지방산, 또는 조효소 Q10 또는 토코트리에놀(tocotrienol) 둘 모두를 함유하는 조성물이 본 발명에서 또한 고려된다. 이 같은 조성물은 심혈관계 건강을 개선시키기 위해 심혈관계 질환 또는 병태를 포함한 질환 또는 병태의 치료에 유용하다.

(a) 난각막, 및/또는 난각막 단리체 및/또는 난각막 가수분해물; 및 (b) 징코 빌로바(Ginko biloba) 또는 비타민 D 둘 모두를 함유하는 조성물이 또한 고려된다. 이 같은 조성물은 뇌 건강을 향상시키고 뇌 및 신경계의 질환 또는 병태를 치료하는데 유용하다.

(a) 난각막, 및/또는 난각막 단리체 및/또는 난각막 가수분해물; 및 (b) 예를 들어 케르시틴(quercitin), 소나무 껍질 추출물 및 녹차 추출물을 포함한 산화 방지제 둘 모두를 함유하는 조성물이 또한 고려된다. 이 같은 조성물은 암 및/또는 상기 암과 연관된 증상을 치료하고/하거나 면역 지지체를 제공하는데 유용하다.

실시예

하기의 비제한적인 실시예는 본 발명의 다양한 실시형태를 예시하기 위해 수행되었다.

실시예 1: 난각막 플레이크 및 분말의 제조

하기 실시예에는 난각막 플레이크 및 분말의 제조가 예시되어 있다. 난각막이 부착되어 있는 닭의 난각은 알깨기 시설로부터 수득하였다. 먼저 상기 난각막을 난각으로부터 분리하였다. 난각막 플레이크를 수집하고, 10% 미만의 수분 함량까지 즉시 건조하였다. 상기 건조된 난각막 플레이크의 분말화는 표준 밀링 또는 분쇄 과정을 이용하여 달성되었다. 상기 분말은 50 내지 500마이크론(㎛) 범위의 크기를 갖는 입자를 생성하기 위해 일련의 보정형 스크린을 통해 상기 파쇄된 분말을 스크리닝함으로써 후속적으로 사이징되었다.

실시예 2: 발효를 통한 난각막 가수분해물의 제조

하기 실시예에는 발효 공정을 이용한 난각막 가수분해물의 제조가 예시되어 있다. 실시예 1에서 제조된 난각막 분말을 박테리아 및 효모로 구성된 접종원을 함유한 수용액에 넣었다. 이러한 슬러리는 실온(약 25℃)에서 약 24시간 동안 발효하도록 하였다. 상기 슬러리를 여과하여 소화되지 않은 난각막 분말의 임의의 입자를 제거하였다. 상기 발효 가수분해물(여과된 액체)은 즉시 사용되지 않는 경우에 냉장 또는 냉동 상태로 저장하였으며, 이때 이는 ESM-FH로 지칭한다.

실시예 3: 효소적 가수분해를 통한 난각막 가수분해물의 제조

하기 실시예에는 효소적 소화를 이용한 난각막 가수분해물의 제조가 예시되어 있다. 바실러스 리케니포미스에서 유래한 정제된 알칼리 프로테아제를 막 분말(중량/중량)에 대해 1:10의 비율로 함유하는 완충액(약 pH 9)에 실시예 1에서 제조된 난각막 분말을 넣었다. 이러한 슬러리는 약 55℃에서 최대 5일 동안 교반하도록 하였다. 상기 슬러리를 냉각하도록 방치한 후, 여과하여 소화되지 않은 난각막 분말의 임의의 입자를 제거하였다. 상기 발효 가수분해물(여과된 액체)은 즉시 사용되지 않는 경우에 냉장 또는 냉동 상태로 저장하였으며, 이때 이는 ESM-EH로 지칭한다.

실시예 4: 화학적 가수분해를 통한 난각막 가수분해물의 제조

하기 실시예에는 화학적 가수분해를 이용한 난각막 가수분해물의 제조가 예시되어 있다. 실시예 1에서 제조된 난각막 분말을 3M 수산화나트륨을 함유한 알칼리 용액(약 pH 14)에 넣었다. 이러한 슬러리를 약 55℃에서 약 8시간 동안 교반하도록 하였다. 상기 슬러리를 냉각하도록 방치한 후, 여과하여 소화되지 않은 난각막 분말의 임의의 입자를 제거하였다. 과량의 중화열을 흡수하기 위해 상기 여과된 액체를 냉각시키면서 12M 염산으로 중화하였다(약 pH 7). 상기 화학적 가수분해물은 즉시 사용되지 않는 경우에 냉장 또는 냉동 상태로 저장하였으며, 이때 이는 ESM-CH로 지칭한다.

실시예 5: NEM^®(미주리주 카시지(Carthage) 소재의 이에스엠 테크놀로지스(ESM Technologies)) 상표인 난각막 제품의 제조

하기 실시예에는 실시예 1에서 제조된 바와 같은 난각막 및 실시예 2 내지 실시예 4에서 제조된 바와 같은 난각막의 가수분해물의 조합인 난각막 제품의 제조가 예시되어 있다. 실시예 1에서 제조된 난각막 분말을 재킷 리본 혼합기(jacketed ribbon blender)에 넣었다.

혼합 도중에 난각막 가수분해물을 상기 난각막 분말 상에 조심스럽게 분부한다. 혼합기 재킷을 적어도 185℉까지 가온하고, 용기에 약한 진공을 가하여 수분의 제거를 용이하게 한다. 일단 함수율이 10중량% 미만까지 도달한 경우, 상기 혼합기에서 건조된 분말을 제거하고, 분쇄기를 통과시켜 형성 가능한 임의의 덩어리를 분쇄한다. 이러한 제품(NEM^®)은 주위 조건 하에 이중의 다중 라이닝(poly-lining)된 판지 상자에 저장한다.

실시예 6: 인간 말초 혈액 단핵세포에서 난각막 가수분해물의 시험관 내 NF-κB 활성의 결정

하기 실시예에는 인간 말초 혈액 단핵세포(PBMC)에서 난각막 가수분해물의 시험관 내 NF-κB 활성의 결정이 예시되어 있다. PBMC는 건강한 지원자로부터 단리되고, 배양 배지[10% 소 태아 혈청(FBS), L-글루타민(2mM), 페니실린(100U/㎖) 및 스트렙토마이신(100㎎/㎖)이 보충된 RPMI-1640 배지]에서 3.2 × 10⁶ 세포/웰의 농도로 배양하였다. 세포는 2회 도말하였다. 실시예 2 및 실시예 3에서 제조된 바와 같은 난각막 가수분해물은 0.22㎛의 셀룰로오스 아세테이트 디스크를 통해 여과된 인산 완충 식염수(PBS)로 1:1로 희석하여 이들을 살균하였다(예를 들어, 박테리아, 효모 및/또는 곰팡이를 제거하였음). 이어 상기 가수분해물을 배양 배지로 희석하였다(1:100; 1:1,000; 1:10,000). 각각의 희석액(60㎕)을 배양 웰에 첨가하고, 세포를 5% CO₂ 존재 하에 37℃에서 4시간 동안 배양하였다. 공지된 NF-κB의 활성제인 지질 다당류(LPS)(100ng/㎖)를 양성 대조군으로서 사용하고, 공지된 NF-κB의 억제제인 비타민 C(아스코르브산)(20mM)(문헌{Bowie & O'Neill, 2000})를 LPS 처리 세포에서의 억제 효과의 비교물질(comparator)로서 사용하였다. 또한 활성은 미처리 세포와 비교하였다. 세포를 150 × g(1,200rpm)에서 3분 동안 원심분리함으로써 펠릿화(pelletization)하고, 상층액은 폐기하였다. 세포 용균액은 비드 밀링을 통해 배양된 배양액으로부터 제조하였다. 상기 전체 세포 용균액은 상업적으로 이용 가능한 효소-결합 면역 흡착 측정(ELISA) 키트(TransAM^® NF-κB p65 ELISA 측정 키트; 캘리포니아주의 칼즈배드(Carlsbad)의 액티브 모티프(Active Motif))를 통해 NF-κB 활성에 대해 측정하였다. 시료는 2회 측정하였으며, 브래드포드(Bradford)법(캘리포니아주의 헤르쿨레스(Hercules) 소재의 바이오-라드 래버러토리스(Bio-Rad Laboratories))을 통해 총 단백질 함량에 대해 보정하였다. 상기 평가된 각각의 용액(미처리, LPS, 비타민 C, ESM-FH 및 ESM-EH)에 대한 PBMC에서의 NF-κB의 상대적인 활성은 도 1에서 확인할 수 있다.

실시예 7: 인간 단핵구 세포주에서 난각막 가수분해물의 시험관 내 NF-κB 활성의 결정

하기 실시예에는 인간 단핵구 세포주(THP-1)에서 난각막 가수분해물의 시험관 내 NF-κB 활성의 결정이 예시되어 있다. THP-1 세포는 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(American Type Culture Collection: 버지니아주의 머내서스(Manassas) 소재)으로부터 수득하고, 배양 배지[10% 소 태아 혈청(FBS), 2-메르캅토에탄올(0.05mM) 및 1% 페니실린-스트렙토마이신이 보충된 RPMI-1640 배지]에서 2.0 × 10⁵ 세포/웰의 농도로 배양하였다. 웰 당 350㎕의 부피를 이용하여 세포를 2회 도말하였으며, 개개의 플레이트는 n = 3이다. 실시예 2, 실시예 3 및 실시예 4에서 제조된 바와 같은 난각막 가수분해물을 0.2㎛의 폴리에테르설폰 디스크를 통해 여과하여 이들을 살균하였다(예를 들어, 박테리아, 효모 및/또는 곰팡이를 제거하였음). 이어 상기 가수분해물을 배양 배지로 희석하였다(1:1,000; 1:10,000). 각각의 희석액을 배양 웰에 첨가하고, 세포를 5% CO₂ 존재 하에 37℃에서 4시간 동안 배양하였다. 공지된 NF-κB의 활성제인 지질 다당류(LPS)(100ng/㎖)를 양성 대조군으로서 사용하고, 미처리된 세포를 음성 대조군으로서 사용하였다. 세포를 150 × g(1,200rpm)에서 3분 동안 원심분리함으로써 펠릿화하고, 상층액은 폐기하였다. 세포 용균액은 45㎕의 완전 용균 완충액(용균 완충액, 프로테아제 억제제 칵테일 및 디티오트레이톨을 함유함)을 첨가함으로써 상기 배양된 배양액으로부터 제조하였다. 상기 전체 세포 용균액은 상업적으로 이용 가능한 효소-결합 면역 흡착 측정(ELISA) 키트(TransAM^® NF-κB p65 ELISA 측정 키트; 캘리포니아주의 칼즈배드의 액티브 모티프)를 통해 NF-κB 활성에 대해 측정하였다. 시료는 2회 측정하였으며, 브래드포드법(캘리포니아주의 헤르쿨레스 소재의 바이오-라드 래버러토리스)을 통해 총 단백질 함량에 대해 보정하였다. 상기 평가된 각각의 용액(미처리, LPS, ESM-FH, ESM-EH 및 ESM-CH)에 대한 THP-1 세포에서의 NF-κB의 상대적인 활성은 도 2에서 확인할 수 있다.

실시예 8: 류머티스성 관절염의 NF-κB 매개 동물 모델에서 경구 투여형 NEM^® 상표인 난각막의 효능

하기 실시예에는 류머티스성 관절염의 NF-κB 매개 동물 모델에서 경구 투여형 난각막 제품(상표명: NEM^®)의 생체 내 효능의 결정이 예시되어 있다. NF-κB는 인간 류머티스성 관절염에서 활성화되는 것으로 알려져 있고(문헌{Simmonds & Foxwell, 2008; Brown, Claudio, & Siebenlist, 2008}), 류머티스성 관절염의 콜라겐 유도 관절염 동물 모델에서 중요한 역할을 하는 것으로 확립되어 있다(문헌{Han, Boyle, Manning, & Firestein, 1998; Seetharaman, Mora, Nabozny, Boothby, & Chen, 1999}).

몸무게가 115그래(g) 내지 139g인 암컷 루이스 래트(그룹 당 10마리: 체중에 의해 무작위로 선별됨)(매사추세츠주의 윌밍턴 소재의 챨스 리버 래버러토리스 인코포레이션(Charles River Laboratories, Inc.)에 14일 동안 경구 섭식에 의해 NEM^® (52㎎/㎏ 체중) 또는 비히클(수 중 0.5% 메틸셀룰로오스)이 제공되었다. 부가적인 그룹은 0일째 날(예비 식사(pre-feed) 없음)부터 시작하여 비교물질로서 메토트렉사트(0.0075㎎/㎏ 체중)(미주리주의 세인트루이스 소재의 시그마-알드리히(Sigma-Aldrich))를 투여 받았다. 예비 식사(0일째 날) 이후, 래트를 이소플루란으로 마취시키고, 2㎎/㎖의 돼지 II형 콜라겐(오리건주의 포틀랜드 소재의 콘드렉스(Chondrex))을 함유하는 400㎕의 디프코^TM 프로인트 불완전 보조제(Difco^TM reund's Incomplete Adjuvant; 미시간주의 디트로이트 소재)를 꼬리 기저부의 2개의 부위에 주사하였다(주사 부위 당 200㎕). 7일 후, 래트는 꼬리의 기저부의 단일 부위에 보강 주사액을 100㎕ 투여 받았다. 비히클 단독 투여 그룹은 사전에 단순 대조군(관절염이 없음) 및 관절염 대조군(치료가 없음)으로 나누었다. 동물은 음식과 물에 임의로 접근 가능한 상태에서 표준 실험실 조건(67 내지 76℉, 30 내지 70%의 습도 및 12시간의 명주기/암주기) 하에서 케이지에 3 내지 4마리씩 사육하였다. 연구 9일째 내지 17일째 날에 발목 부기의 캘리퍼스(caliper) 측정은 디지트릭스 II 포인트 마이크로미터(Digitrix II Point Micrometer; 매사추세츠주의 뉴턴 소재의 파울러(Fowler))에 의해 이루어졌다. 단순 대조군, 관절염 대조군, 메토트렉사트 처리 래트 및 NEM 처리 래트에서 9일째 내지 17일째 날에 콜라겐 유도 관절염에서의 발목 부기에 대한 캘리퍼스 측정 결과는 도 3에서 알 수 있다.

실시예 9: 염증성 장질환을 앓고 있는 인간에서 경구 투여형 NEM^® 상표인 난각막의 효능

하기 실시예에는 염증성 장질환의 한 형태를 앓고 있는 인간을 치료하는데 있어 경구 투여형 난각막 제품(상표명: NEM^®)의 효능이 예시되어 있다. 남성 인간은 부종 및 고통스러운 경련을 동반하는 빈번하고 심각한 계속되는 설사를 앓고 있다. 이들 에피소드(episode)는 종종 3일 내지 4일 동안 지속할 수 있으며, 매일 수많은 화장실로의 여정이 필요할 수 있다. 1일 내지 2일의 기간 동안 이러한 심각한 증상이 없을 수 있으며, 그 이후에 수일 동안의 다른 심각한 설사, 부종 및 경련의 에피소드가 이어졌다. 상기 개체는 후속적으로는 결장경 검사(colonoscopy)로부터 채취한 생검을 통해 궤양성 대장염으로 공식적으로 진단 받았다. 상기 개체는 부작용으로 인해 처방된 약물로 병태를 치료할 수 없었다. 지방 음식, 튀긴 음식 및 탄수화물 또는 섬유질이 풍부한 기타 음식을 피하거나 최소로 유지하는 배제 식이(exclusion diet)는 설사 에피소드의 중증도를 감소시키는 데는 도움이 되지만, 빈도를 줄이는 데는 거의 도움이 되지 않았다. 상기 개체는 매일 식사 이전에 실시예 5에서 제조된 바와 같은 500㎎의 NEM^®을 함유한 캡슐을 하나 복용하기 시작하였다. 약 7일 내지 10일 이후, 설사 에피소드의 중증도 및 빈도가 줄어들기 시작하였다. 약 2개월 동안의 상기 NEM^® 요법 이후, 상기 개체는 1주 당 단지 1회 또는 2회의 설사 에피소드를 경험할 수 있었으며, 각각의 설사 에피소드는 1일 또는 2일 동안 지속되었다. 위경련을 야기하기 위해 상기 요법에 소화 효소를 첨가하고 장 치유를 지원하기 위해 상기 요법에 락토바실러스 아시도필루스(Lactobacillus acidophilus) 프로바이오틱 및 L-글루타민를 첨가한 후, 상기 개체는 상기 배제 식이에서 배제된 더욱 많은 음식, 특히 육류 및 빵을 추가할 수 있었다. 이러한 요법 이후, 상기 개체는 일반적으로는 화장실로의 1회 여정을 필요로 하는 1회의 설사 에피소드만을 경험했을 수 있다. 약 6개월 동안의 이러한 요법 이후, 상기 개체는 단지 가끔 설사 에피소드로 인해 하나의 NEM^® 캡슐, 소화 효소, L-글루타민 및 프로바이오틱의 1회 유지량까지 상기 투약을 점진적으로 감소시킬 수 있었다. 2년 동안의 추적 결장경 검사에 따르면 결장에서의 심각한 염증은 진정되었으며, 상기 개체는 더 이상 궤양성 대장염을 앓지 않은 것으로 확인되었다.

실시예 10: 심혈관계 질환을 앓고 있는 인간에서 경구 투여형 NEM^® 상표인 난각막의 효능

하기 실시예에는 심혈관계 질환을 앓고 있는 인간을 치료하는데 있어 경구 투여형 난각막 제품(상표명: NEM^®)의 효능이 예시되어 있다. 심혈관계 질환(고지혈증, 고중성지질혈증, 고혈압, 아테롬성 동맥경화증 등)에 대한 긴 이력을 갖고 있는 남성 인간은 다음과 같은 초기의 미처리 지질 패널을 갖는다: 총 콜레스테롤(TC) = 186㎎/㎗, 저밀도 지질 단백질(LDL) = 108㎎/㎗, 고밀도 지질 단백질(HDL) = 42㎎/㎗ 및 트리글리세리드(TG) = 181㎎/㎗. 상기 개체는 부작용으로 인해 처방된 지질 저하 약물로는 병태를 치료할 수 없었으며, 식이 및 운동으로도 상기 질환을 적절히 제어하지 못하였다. 상기 개체는 100㎎/1일의 아테놀롤(atenolol)로 자신의 고혈압을 치료하고 있었다. 이는 146/84mm Hg의 휴면 수축기/확장기 혈압(bp)을 초래하였다. 상기 개체는 또한 다양한 심장 혈관의 죽상 경화성 협착증(협소증)을 치료하기 위해 설치된 4개의 심장 스텐트(cardiac stent)를 갖고 있었다. 상기 개체는 지질 패널 결과에 대한 효과를 알리기 전에 약 12개월 동안 실시예 5에서 제조된 바와 같은 NEM^®의 500㎎ 캡슐 하나를 매일 소비하였다. 상기 개체는 추가로 약 12개월(총 약 2년) 동안 NEM^® 요법을 계속하였다. 추적 지질 패널 결과는 다음과 같다: TC = 138㎎/㎗, LDL = 80㎎/㎗, HDL = 41㎎/㎗ 및 TG = 84㎎/㎗. 모든 지질 결과는 현재 정상 범위 내에 있었다. 상기 개체는 또한 아테놀롤 투여량을 100㎎/1일에서 25㎎/1일로 줄이는 것이 필요한 것으로 나타났다. 심지어 이러한 약물 감소와 더불어, 상기 개체는 현재 102/78mm Hg의 휴면 혈압(bp)을 나타냈다.

심혈관계 질환(고지혈증 및 고중성지질혈증만을 포함함)에 대한 최근 이력을 갖고 있는 두 번째 남성 인간은 10㎎/1일의 아토르바스타틴(atorvastatin)으로 치료 받고 있었다. 이러한 개체에 대한 처리된 지질 패널 결과는 다음과 같다: TC = 207㎎/㎗, LDL = 114㎎/㎗, HDL = 47㎎/㎗ 및 TG = 247㎎/㎗. 이러한 개체는 정상 범위 내의 미처리 휴면 혈압(bp)을 나타냈다. 상기 개체는 약 2년 동안 실시예 5에서 제조된 바와 같은 NEM^®의 500㎎ 캡슐 하나를 매일 소비하였다. 추적 지질 패널 결과는 다음과 같다: TC = 150㎎/㎗, LDL = 81㎎/㎗, HDL = 46㎎/㎗ 및 TG = 113㎎/㎗. 모든 지질 결과는 현재 정상 범위 내에 있었다.

실시예 11: 간질환의 한 형태를 앓고 있는 인간에서 경구 투여형 NEM^® 상표인 난각막의 효능

하기 실시예에는 간질환의 한 형태를 앓고 있는 인간을 치료하는데 있어 경구 투여형 난각막 제품(상표명: NEM^®)의 효능이 예시되어 있다. 남성 인간은 정기적인 건강 검진을 통해 간 효소가 약간 상승한 것을 발견하였다. 초기 간 효소 패널 결과는 다음과 같다: 알라닌 아미노전이효소(ALT) = 81 및 아스파르트산 아미노전이효소(AST) = 41. 상기 개체의 비민 및 기타 동시 소견의 부족으로 인해 상기 개체는 간질환의 한 형태인 비알콜성 지방간염을 진단 받았다. 이러한 병태의 주요 치료는 체중 감소이다. 상기 개체는 약 2년 동안 실시예 5에서 제조된 바와 같은 NEM^®의 500㎎ 캡슐 하나를 매일 소비하였다. 추적 간 효소 패널 결과는 다음과 같다: ALT = 40 및 AST = 21. 간 효소는 현재 정상 범위 내에 있었다.

실시예 12: 관절 경직 및 경미한 통증을 앓고 있는 인간에서 경구 투여형 NEM^® 상표인 난각막의 효능

하기 실시예에는 관절 경직 및 경미한 통증을 앓고 있는 무질환 인간을 치료하는데 있어 경구 투여형 난각막 제품(상표명: NEM^®)의 효능이 예시되어 있다. 남성 인간은 양 무릎에서의 관절 경직 및 경미한 통증뿐만 아니라 양 어깨 및 양 둔부에서 경미한 관절 통증을 앓고 있었다. 상기 개체는 관절염으로 진단받지 않았으며, 상기 경미한 통증은 관절염과 같이 퇴행성 관절 질환을 갖는 사례에서와 같이 다년간에 걸쳐 유의하게 악화되는 것으로는 나타나지 않았다. 상기 개체는 자신의 수면을 방해할 수 있는 침대에 누워있는 동안에 자신의 어깨 및 둔부에서 통증을 경험했을 수 있다. 이러한 수면 장애 패턴은 일반적으로 1주 당 1회 내지 2회 발생할 수 있다. 상기 개체는 또한 바닥에서 무릎 꿇은 자세 또는 앉은 자세를 취하는데 어려움이 있으며, 서 있는 자세로 되돌아가는데 큰 어려움이 있다. 상기 개체는 약 4주 동안 실시예 5에서 제조된 바와 같은 NEM^®의 500㎎ 캡슐 3개를 매일 소비하였다. 상기 개체는 자신의 어깨 및 둔부에서 임의의 경미한 통증으로 인해 자신의 수면 중에 더 이상 깨어나지 않았다. 매우 경미한 통증과 더불어 상기 개체의 무릎이 또한 훨씬 덜 경직되었으며, 상기 개체는 현재 바닥에서 무릎 꿇은 자세 또는 앉은 자세를 보다 용이하게 취할 수 있었으며, 서 있는 자세로 되돌아가는데 어려움이 훨씬 완화되었다.

실시예 13: 섬유 근육통을 앓고 있는 인간에서 경구 투여형 NEM^® 상표인 난각막의 효능

하기 실시예에는 섬유 근육통을 앓고 있는 인간을 치료하는데 있어 경구 투여형 난각막 제품(상표명: NEM^®)의 효능이 예시되어 있다. 섬유 근육통에 대한 4년의 이력을 갖고 있는 여성 인간은 전신을 통해 수많은 위치에 관절통 및 연결조직 통증을 앓고 있고, 극심한 피로를 겪고 있으며, 멜록시캄(meloxicam; 오전에 7.5㎎/1일), 이부프로펜(ibuprofen; 매일 200㎎씩 2회(오전 및 오후)), 트라마돌(tramadol; 취침 전 50㎎/1일) 및 아미트리프틸린(amitriptyline; 취침 전 20㎎/1일)으로 치료받고 있었다. 상기 개체는 섬유 근육통의 진단 이전에 500㎎/1일의 NEM^®을 소비하고 있었다. 상기 개체는 특히 장기간 동안 서 있기 및 걷기를 포함한 일상 활동(예를 들어, 청소, 세탁, 쇼핑 등)으로부터 증상 악화를 경험하였다. 시간이 흐름에 따라 상기 섬유 근육통은 실제로 일상 활동을 수행하는 개체의 능력을 제한하기 시작하였다. 활동 수준의 감소와 더불어, 상기 개체는 고통스러운 증상을 제어하기 위해 1일 2회(bid) 50㎎ 및 종종 심지어는 1일 3회(tid) 50㎎까지 트라마돌을 증가시킬 필요성을 확인하였다. 아편성 진통제인 트라마돌(마취제와 유사함)에 대한 필요성의 증가 및 이부프로펜에 의한 타는 듯한 위 자극(gastric burning)으로 인해, 상기 개체는 3주 동안 약 4 내지 5시간의 간격으로 실시예 5에서 제조된 바와 같은 NEM^®의 부가적인 500㎎ 캡슐(즉, 1일 500㎎씩 2회)을 매일 소비하기 시작하였다. 상기 개체는 통증 및 아픔으로부터 유의한 경감을 확인하였으며, 트라마돌 투약을 최초 50㎎/1일까지 감소할 수 있었으며, 이부프로펜을 완전히 끊을 수 있었다.

Claims

NF-κB를 이를 필요로 하는 숙주의 내장에서 활성화하는 방법으로서,
본질적으로는 자연적으로 발생하는 난각막, 및/또는 난각막 단리체 및/또는 난각막 가수분해물로 이루어진 유효량의 조성물을 상기 숙주에 투여하는 단계를 포함하는, NF-κB를 이를 필요로 하는 숙주의 내장에서 활성화하는 방법.
제 1 항에 있어서, 이를 필요로 하는 상기 숙주는 폐질환 또는 병태를 앓고 있는 것을 특징으로 하는 방법.
제 2 항에 있어서, 상기 폐질환 또는 병태는 천식, 만성 폐쇄성 폐질환, 기관지염, 기종, 낭포성 섬유증, 폐부종, 유육종증, 급성 호흡 장애 증후군, 진폐증, 폐 고혈압, 과민성 폐렴 및 알레르기로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 2 항에 있어서, 상기 폐질환 또는 병태는 가벼운 주기성 폐울혈; 가벼운 주기성 기침; 가벼운 주기성 동울혈(sinus congestion); 주기성 재채기; 및 가벼운 주기성 폐 염증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 이를 필요로 하는 상기 숙주는 뇌 또는 신경계에 영향을 미치는 질환 또는 병태를 앓고 있는 것을 특징으로 하는 방법.
제 5 항에 있어서, 상기 뇌 또는 신경계에 영향을 미치는 질환 또는 병태는 알츠하이머병, 섬유 근육통, 일과성 허혈성 발작(temporary ischemic attack), 맥관염(vasculitis), 뇌부종, 다발성 경화증, 헌팅턴병, 근위축성 측삭 경화증(amyotrophic lateral sclerosis), 파킨슨병, 뇌전증(epilepsy) 및 신경변성으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 5 항에 있어서, 상기 뇌 또는 신경계에 영향을 미치는 질환 또는 병태는 주기성 건망증; 가벼운 주기성 신경 자통(nerve tingling) 또는 환상 감각(phantom sensation); 및 가벼운 주기성 근육 경련으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 이를 필요로 하는 상기 숙주는 심혈관계 질환 또는 병태를 앓고 있는 것을 특징으로 하는 방법.
제 8 항에 있어서, 상기 심혈관계 질환 또는 병태는 아테롬성 동맥경화증, 심근증(cardiomyopathy), 마르판 증후군(Marfan Syndrome), 심낭염(pericarditis), 심장 판막증, 류마티스성 심장 질환, 말초 동맥 질환, 정맥 혈전증, 염증성 심장 질환, 고혈압, 고지혈증 및 고중성지질혈증(hypertriglyceridemia)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 8 항에 있어서, 상기 심혈관계 질환 또는 병태는 가벼운 혈관 염증; 약간의 혈압 상승; 약간의 콜레스테롤 상승; 및 약간의 트리글리세리드 상승으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 이를 필요로 하는 상기 숙주는 위장관계(gastrointestinal system)의 질환 또는 병태를 앓고 있는 것을 특징으로 하는 방법.
제 11 항에 있어서, 상기 위장관계의 질환 또는 병태는 크론병, 궤양성 대장염, 위염, 게실염(diverticulitis), 과민성 대장 증후군, 복강병(celiac disease), 위식도역류병, 소화 불량, 위궤양 및 십이지장 궤양으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 11 항에 있어서, 상기 위장관계의 질환 또는 병태는 가벼운 주기성 설사; 가벼운 주기성 변비; 가벼운 주기성 위경련 또는 복통; 가벼운 위염; 가벼운 장염; 및 가벼운 결장 염증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 이를 필요로 하는 상기 숙주는 암을 앓고 있는 것을 특징으로 하는 방법.
제 14 항에 있어서, 상기 암은 백혈병, 림프종, 유방암, 방광암, 대장암, 전립선암, 췌장암, 난소암 및 갑상선암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 이를 필요로 하는 상기 숙주는 비알콜성 지방간염, 간염, 신염, 피부염, 결막염 및 치은염(gingivitis)으로 이루어진 군으로부터 선택된 질환을 앓고 있는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 이를 필요로 하는 상기 숙주는 NF-κB 조절 장애가 나타나는 병태를 앓고 있는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 염증 치료제를 상기 숙주에 투여하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 18 항에 있어서, 상기 염증 치료제는 흡입형 코르티코스테로이드; 경구용 코르티코스테로이드; 비스테로이드성 염증 치료 약물; 오메가-3 또는 오메가-6 고도 불포화 지방산; 보스웰리아 종(Boswellia species) 또는 보스웰리아 추출물; 강황(turmeric) 또는 강황 추출물; 커큐민(curcumin) 또는 커큐미노이드(curcuminoid)류; 흰버들 껍질(white willow bark) 또는 흰버들 껍질 추출물; 단백질 분해 효소; 콜라겐 또는 콜라겐 가수분해물; 소나무 껍질 추출물; 비타민 또는 비타민 전구체; 및 미네랄로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 내장 건강을 향상시키는 것으로 알려져 있거나 내장의 질환 또는 병태를 포함한 질환 또는 병태의 치료에 알려져 있는 약제를 상기 숙주에게 투여하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 20 항에 있어서, 상기 내장 향상제는 프로바이오틱(probiotic), 프리바이오틱(prebiotic), 소화 효소, L-글루타민, 섬유질 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 상기 숙주는 인간인 것을 특징으로 하는 방법.