KR20180031487A

KR20180031487A - 지모 추출물을 함유하는 안티-폴루션 효과를 가지는 화장품 조성물

Info

Publication number: KR20180031487A
Application number: KR1020160120205A
Authority: KR
Inventors: 구창섭; 장동일; 김대현; 서수경
Original assignee: 주식회사 콧데
Priority date: 2016-09-20
Filing date: 2016-09-20
Publication date: 2018-03-28

Abstract

본 발명은 지모의 뿌리줄기 추출물을 유효성분으로 포함하여 황사와 미세먼지에 의해 유발된 염증 등의 피부 트러블을 완화시키는 안티-폴루션효과를 가진 화장품 조성물에 제공한다.

Description

지모 추출물을 함유하는 안티-폴루션 효과를 가지는 화장품 조성물{Cosmetic composition having effect of anti-pollution comprising extract of Anemarrhena asphodeloides}

본 발명은 황사와 미세먼지에 의해 유발된 염증 등의 피부 트러블을 완화시키는 안티-폴루션효과를 가진 천연식물 추출물을 포함하는 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로 지모 추출물을 유효성분으로 포함하는 대기의 유해환경으로부터 유발되는 피부 염증 등의 피부 트러블을 완화하는 안티-폴루션(anti-pollution) 효과를 가지는 화장품 조성물에 관한 것이다.

피부에서의 염증반응(inflammatory response)은 물리적 자극이나 화학 물질, 세균 등에 의해 피부손상이 유발될때 이를 방어하기 위한 작용으로서 시작되며, 이에 대한 반응으로 keratinocyte(각질형성세포) 또는 Langerhans cell(랑게스한스 세포)에서는 다양한 종류의 cytokine을 내보냄으로써 염증반응이 시작되는데, 인터루킨-8(Interleukin-8;IL-8), 인터루킨-6(Interleukin-6;IL-6), 인터루킨-1(Interleukin-1;IL-1), 종양 괴사인자-α(Tumor necrosis factor-α; TNF-α) 등이 대표적이며, 이들로 인해 활성화된 대식세포(macrophage)는 일산화질소(nitricoxide;NO)나 프로스타글란딘 (prostaglandin) E2 (PGE2)를 과도하게 생성하여 염증 과정을 더욱 심화시킨다.

미세먼지는 입자크기 10㎛ 이하인 먼지를 통칭하고 PM10(Particulate Matter 10)으로 약칭하며, 2.5㎛이하의 초미세먼지인 PM2.5(Particulate Matter 2.5)로 구분된다. 주로 화석연료를 연소할 때 발생하며, 석탄의존도가 70%인 중국발 미세먼지가 상당부분을 차지한다. 또한, 황사는 중국이나 몽골 등 아시아 대륙의 중심부에 있는 사막과 황토 지대의 작은 모래나 황토 또는 먼지가 하늘에 떠다니다가 상층 바람을 타고 멀리까지 날아가 떨어지는 현상을 말하며 장거리 이동성 대기오염물질로 제주도까지 이동이 가능하다.

산업국가 질병의 약 25 ~ 33%가 환경위해요인에 의해 발생하며, 유럽에서는 오염된 공기로 연간 약 31만 명이 조기에 사망하는 것으로 추정되고 있으며, 미국 암학회에서는 초미세먼지가 m³ 당 10㎍ 증가할 경우 전체 사망률은 7% 증가한다는 연구결과가 발표되었다. 2013년 환경부의 공동연구 결과(Journal of Allergy and Clinical Immunology. 132(2), 2013, 495-498)에 따르면, 미세먼지 또는 대기오염물질의 농도가 상승할 시 피부염의 증상이 더욱 악화되는 것으로 나타났다.

미세먼지(PM10)가 1㎍/m³증가할 때마다 피부염의 증상이 평균 0.4% 증가하였고, 대기오염물질 중 하나인 총 휘발성유기화합물(TVOC)과 벤젠이 0.1ppb씩 증가할수록 증상이 각각 평균 2.59%, 2.74% 증가하였다. 또한 황사가 발생하면 흙먼지가 대기를 황갈색으로 오염시켜 대기의 먼지량이 평균 4배나 증가하여, 피부가 쉽게 지치고 생기를 잃기 쉽다. 또한 황사 먼지는 일반 먼지보다 입자가 작아 피부 모공 속에 깊숙이 들어가 피부 트러블을 일으킬 수 있으며, 피부 건조증, 자극성 피부염, 알레르기 피부염, 여드름, 기미, 주근깨 등 각종 증상을 더욱 악화시킨다. 따라서, 황사와 미세먼지에 의해 유발된 피부염 발생은 증가할 것으로 판단되며, 황사와 미세먼지에 의해 유발된 피부 염증 반응을 완화시킬 소재에 대한 필요성은 증가될 것이다.

피부 염증을 치료하기 위하여, 스테로이드제가 주로 이용되고 있지만 장기간 투여 시 피부의 위축이나 성장 지연 가능성 등 여러 가지 부작용을 일으키고 있어 최근에는 비-스테로이드제의 사용이 증가하고 있다. 그러나 비-스테로이드제 역시 홍반, 가려움 등의 증상과 면역력 약화 등의 부작용을 나타내고 있어 피부염의 원천적 치료가 어려운 실정이다. 따라서, 안전성이 입증된 천연물유래 소재로부터 치료효과가 높고 부작용이 적은 새로운 물질을 찾고자 하는 연구가 많이 이루어지고 있다. 대표적으로 마가목 추출물(등록특허 10-0563548), 오배자 추출물(등록특허 10-1309172), 스피루리나 추출물(공개특허 10-2009-0079468), 해방풍 추출물(등록특허 10-0919852) 등이 있으나, 황사와 미세먼지에 의해 유발되는 염증을 완화시켜주는 효과를 가진 추출물은 개발되지 않았다.

따라서, 안전성이 입증된 천연물 유래 소재로부터 치료효과가 높고 부작용이 적은 새로운 물질의 필요성이 증가되고 있으나, 아직 황사와 미세먼지에 의해 유발되는 염증을 완화시켜주는 효과를 가진 천연물 유래 소재에 관한 연구결과는 아직 필요한 실정이다.

1. 대한민국 등록특허 제10-0563548호 2. 대한민국 등록특허 제10-1309172호 3. 대한민국 공개특허 제10-2009-0079468호 4. 대한민국 등록특허 제10-0919852호

이에 본 발명자들은 황사와 미세먼지에 의해 유발되는 염증을 완화시켜주며, 기존의 피부염 치료제가 가지는 문제점을 해결해줄 수 있는 천연물 유래 소재에 대한 예의 연구를 수행한 결과, 지모 추출물이 황사 또는 미세먼지에 의해 유발된 염증을 완화시켜주는 것을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 해결하려는 과제는 지모 추출물을 유효성분으로 포함하는 대기의 유해환경으로부터 유발되는 피부 염증을 완화시키는 안티-폴루션 효과를 보이는 화장품 조성물을 제공하는 것이다.

상기 기술적 과제를 달성하기 위하여 본 발명은,

지모의 뿌리줄기 추출물을 활성 성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 안티-폴루션(anti-pollution) 효과를 가지는 화장품 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 안티-폴루션(anti-pollution) 효과를 가지는 화장품 조성물에 있어서, 상기 추출물의 추출 용매는 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 및 이들의 혼합 용매로 이루어진 군에서 선택되는 하나인 것이 바람직하며, 유효 성분으로 포함하는 추출물은 총 조성물의 중량 대비 0.001 내지 30 중량% 포함될 수 있다.

본 발명에 따른 화장품 조성물은 황사 및 미세먼지의 의해 유발되는 피부 염증 등의 피부 트러블를 억제하는 효과가 명백하여 안티-폴루션(anti-pollution) 화장품으로서 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 PM1648a로 자극한 HaCaT cells에서의 XRE luciferase activity 측정 결과 그래프이다.
도 2는 LPS로 자극한 Raw264.7 cells에서의 ROS 생성 억제 활성을 측정한 그래프이다.
도 3은 PM1648a로 자극한 Raw264.7 cells에서의 ROS 생성 억제 활성을 측정한 그래프이다.
도 4는 PM1648로 자극한 HaCaT cell에서의 ROS 생성 억제 활성을 측정한 그래프이다.
도 5는 지모 추출물과 PM1648a를 농도별로 혼합한 혼합물의 DPPH radical 소거능을 측정한 그래프이다(양성 대조군으로는 Ascorbic acid를 사용).
도 6은 LPS로 자극한 Raw264.7 cells에서의 PGE2 생성 억제 활성을 측정한 그래프이다.
도 7은 PM1648a로 자극한 Raw264.7 cells에서의 PGE2 생성 억제 활성을 측정한 그래프이다.
도 8은 PM1648로 자극한 HaCaT cell에서의 PGE2 생성 억제 활성을 측정한 그래프이다.

이하 본 발명을 실시하기 위한 구체적인 내용을 설명하기로 한다.

본 발명은 지모의 뿌리줄기 추출물을 유효성분으로 포함하는 대기의 유해환경으로부터 유발되는 피부 염증 등의 피부 트러블을 완화시키는 안티-폴루션(anti-pollution)용 화장품 조성물을 제공한다.

상기 지모는 학명이 Anemarrhena asphodeloides 로서 중국이 원산지이고, 뿌리줄기는 굵고 옆으로 뻗으며 끝에서 잎이 뭉쳐나며, 잎은 줄 모양이고 길이가 20∼70cm이며 끝이 실처럼 가늘고 밑 부분이 서로 안기어 줄기를 감싸며 가장자리가 밋밋하고 잎맥은 나란히맥이다. 특히 뿌리줄기에는 약의 성분으로 쓸 수 있는 아스포닌·살사포케닌 등이 들어 있으며, 한방에서는 뿌리줄기를 약재로 쓰는데, 해열제로 사용하고, 만성기관지염·당뇨병 등에 효과가 있는 것으로 알려져 있다.

본 발명에서는 지모 중에서 약용으로 사용되는 뿌리줄기 부분을 이용하여 추출물을 제조하여, 추출 용매는 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매를 사용할 수 있으며, 상기 저급알코올은 에탄올 또는 메탄올일 수 있고, 보다 구체적으로 에탄올일 수 있다.

또한 추출 방법으로는 여과법, 열수 추출, 침지 추출, 환류냉각 추출, 초음파 추출, 초임계 추출 등 당업계의 통상적인 방법을 특별한 제한 없이 이용할 수 있다.

본 발명에서의 화장품 조성물은 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 일 예로 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

이와 같은 화장품 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 일 구체예로 고점도 유화제형, 저점도 유화제형 및 가용화 제형으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 제형일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 제조하고자 하는 제형에 따라 발명이 속하는 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 화장품 조성물 배합 성분을 포함할 수 있다. 일 예로 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화 될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 선로션, 선크림, 메이크업 베이스, 비비크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징 워터, 팩, 스틱상 제품, 밤(Balm) 타입 제품, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

제조하고자 하는 제형에 따라 추가로 수상성분, 유상성분, 계면활성제, 보습제, 저급알콜, 점증제, 킬레이트제, 방부제, 향료 등을 선택하여 배합 첨가할 수 있다.

본 발명에 따른 화장품 조성물은 지모의 뿌리줄기 추출물을 유효성분으로 조성물 중량 대비 0.001 내지 30 중량%로 포함될 수 있다. 상기 추출물이 총 조성물 중량 대비 0.001 중량% 미만인 경우에는 피부 염증 등의 피부 트러블 완화를 통한 안티-폴루션 효과가 나타나지 않으며, 30 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 효과 증대 정도가 미미하고, 제형상의 안정성에 문제가 있으며, 경제적이지 않다.

이하, 본 발명을 하기의 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: 지모추출물의 제조방법

지모(Anemarrhena asphodeloides)의 뿌리 줄기 5kg을 95% 에탄올 12.5리터로 추출하고 얻은 농축물에 정제수 125리터로 2회 세척하여 침전물을 회수하고 여기에 에탄올을 넣어 가용부를 얻은 후 감압농축 건고시켜 갈색가루 20.6g을 얻었다.

시험예 1: luciferase 의 발현 억제를 통한 Anti-Pollution 효과 시험

1-1. 세포 배양

Human keratinocyte cell line인 HaCaT cell을 한국 세포주 은행 (Korean Cell Line Bank)으로부터 구입하였으며, 1% antibiotic (Gibco, USA)과 10% fetal bovine serum (FBS; Gibco, USA)이 함유된 DMEM 배지(hyclone, USA)를 사용하여 37℃, 5% CO₂ incubator(Thermo, USA)에서 배양하였으며, 2일에 한번씩 계대 배양을 실시하였다.

1-2. XRE luciferase activity assay

● 측정 원리

luciferase assay는 특정 gene의 promoter 부분을 luciferase가 있는 vector에 ligation 시켜서 그 promoter가 활성화 되면 발광되는 원리로 사용된다. 즉 promoter 활성화 여부에 대한 확인을 위해 luciferase assay를 한다. 따라서 promoter의 특정 gene에 따라 (IFN-γ, NFκB, Progesterone, TGFβ, Vitamin D 등) 선택적으로 반응하여 유전자의 조절이나 기능연구 등으로 사용한다.

본 실시예에서는 Xenobiotic XRE(중금속 및 기타 미량원소를 포함하는 미세먼지)과 반응하는 XRE promoter luciferase gene을 사용하였다. XRE는 AhR signaling pathway를 통해 측정되는 reporter gene이다. AhR은 보통 세포질 내에서 활성화되지 않은 상태에서 Chaperone과 결합되어 있다. PM과 같은 외부 물질의 자극에 의해서 AhR은 Chaperone과 분리되고 ARNT (AhR nuclear translocator)와 결합하여 핵으로 이동하고 XRE promoter를 활성화 시켜 Xenobiotic metabolizing enzymes (CYP1A1, CYP1A2, CYP1B1, NQ01, ALHD3A1, UGT1A2, GSTA1) 발현을 유도하여 생체 내 독성 반응에 영향을 미친다.

HaCaT cell에 XRE promoter luciferase gene을 transfection 한 후 PM1648a와 지모추출물을 동시에 처리하였다. PM1648a로 자극된 cell은 AhR signaling pathway를 통해 XRE promoter가 활성화 되고 luciferase가 발현되면서 cell이 발광하게 된다. 지모추출물이 AhR signaling pathway를 차단하는 효과를 확인하기 위해 이 실험을 수행하였다. 지모추출물의 처리 농도가 높을수록 luciferase의 발현으로 발광되는 정도가 약해진다면 이는 Anti-Pollution 효과가 있는 것으로 확인될 수 있다.

● 측정 방법

HaCaT cell에 XRE luciferase DNA 1.2 ug (Qiagen, USA)을 transfection 하기 위해 6 well plate (nunc, USA)에 3x10⁵개로 접종한다. 37℃, 5% CO₂incubator(Thermo,USA)에서 18시간 배양한 후 α-MEM (gibco, USA) 50ul에 희석한 XRE luciferase DNA 1.8 ug (Qiagen, USA)과 α-MEM (gibco, USA) 50ul에 희석한 Transfection reagent (Qiagen, USA) 4.5 ul를 혼합하여 실온에서 20분간 방치한다. 6 well plate (nunc, USA)의 각 well을 PBS (sigma, USA)로 washing 한다(1ml/well, 2 times).

각 well에 α-MEM (gibco, USA)을 1ml/well로 분주한 후 준비된 transfection mixture를 처리한다. 37℃, 5% CO₂incubator(Thermo,USA)에서 6시간 배양한 후 PBS (sigma, USA)로 washing한다(1ml/well, 2 times).

Cell transfection이 끝나고 Trypsin-EDTA (gibco, USA)를 처리하여 cell을 떼어낸 후 cell을 DMEM (hyclone, USA)으로 희석하여 96 well plate (nunc, USA)에 3x10⁴개로 접종하고 37℃, 5% CO₂incubator(Thermo,USA)에서 18시간 동안 배양한다. 배양이 끝난 후 준비된 cell에 처리할 시료를 준비한다.

96 well plate(SPL, Korea)의 각 well의 배양액을 제거한 후 PBS (sigma, USA)로 washing 한다(100ul/well, 2 times). 1X Passive Lysis Buffer (promega, USA)로 처리하여 실온에서 15분 동안 방치한 후 각 well의 상등액을 새로운 1.5ml tube (Axygen, UK)에 옮겨 원심분리기 (hanil, Korea)로 원심분리 한다(12000 rpm, 15 min, 4 ℃).

상등액을 96 well plate (SPL, Korea)에 50 ul씩 분주한 후 Luciferase Assay Reagent (promega, USA)를 50 ul 추가 분주하여 실온에서 90분 동안 반응 한 후 Luminescence 측정기 (Molecular DEVICES, USA)로 565 nm 에서 Firefly luminescence를 측정한다. Stop & Glo Reagent 50ul (promega, USA)를 추가 반응 하여 실온에서 90 분 동안 반응한 후 Luminescence 측정기 (Molecular DEVICES, USA)로 480 nm 에서 Renilla luminescence를 측정한다.

1-3. 측정 결과

HaCaT cell에 PM1648a 12.5㎍/ml로 자극하여 지모추출물 농도별 XRE luciferase activity를 분석하여(XRE luciferase reporter gene plasmid (Qiagen, #CCS-2015L) 1.8 ㎍/ml) 그 결과를 도 1에 나타냈다.

도 1을 보면 본 발명에 따른 실시예 1의 추출물로 처리하지 대조군의 활성을 100으로 보았을 때 본 발명에 따른 실시예 1의 추출물 샘플 농도 0.78㎍/ml에서는 효과가 나타나지 않았으나 1.56㎍/ml에서는 약 10% 감소, 3.13㎍/ml에서는 70% 감소하는 것을 알 수 있습니다.

따라서 본 발명에 따른 화장품 조성물이 미세먼지와 같은 오염원으로부터 피부를 보호하는 Anti-Pollution 효과가 있음은 명백합니다.

실시예 2. ROS 생성 억제를 통한 Anti-Pollution 효과 시험

2-1. 세포 배양

Murine macrophage cell line 인 Raw 264.7 cell과 Human keratinocyte cell line 인 HaCaT cell을 한국 세포주 은행 (Korean Cell Line Bank)으로부터 구입하였으며, 1% antibiotic (Gibco, USA)과 10% fetal bovine serum (FBS; Gibco, USA)이 함유된 DMEM 배지 (hyclone, USA)를 사용하여 37℃, 5% CO2 incubator (Thermo, USA)에서 배양하였으며, 2일에 한번씩 계대 배양을 실시하였다.

2-2. ROS 측정 ( DCF -DA assay) 방법

세포 내 활성산소의 농도변화를 측정하기 위하여 형광 probe의 Dichlorofluorescin diacetate (DCF-DA; thermo fisher scientific, USA)를 이용하였다. 비형광물질인 DCF-DA는 세포 내 hydrogenperoxide와 관련된 peroxides 존재 시 reactive oxygen species (ROS, 활성산소종)에 의해 산화되어 녹색의 형광을 띄게 된다. 따라서 ROS의 측정은 DCF-DA를 통해 이루어 질 수 있다. 5×10⁴개의 Raw264.7 cell과 1×10⁴개의 HaCaT cell을 96 well plate (SPL, Korea)에 접종하여 18 시간 동안 배양하였고, 지모추출물 농도별과 PM1648a을 동시에 처리한 처리군을, 그리고 시료 농도별과 LPS를 동시에 처리한 처리군으로 처리하여 24 시간 배양하였다. 배양 완료 후 배지를 제거한 다음, PBS (sigma, USA)로 2번 washing한다. 각 well에 10 uM DCF-DA (Thermo, USA)를 가하고 37℃, 5% CO2 incubator(Thermo, USA)에서 90분 배양한 뒤에 Flourescence reader (Molecular DEVICES, USA)를 이용해 excitation 485nm, emission 530nm에서 형광강도를 측정하였다.

2-3 측정 결과

1) Raw 264.7 cell에 1㎍/ml LPS로 처리한 결과를 도시한 도 2를 보면 지모 추출물 농도별로 LPS와 동시에 처리하였을 때 ROS 생성이 지모 추출물의 농도 의존적으로 억제되는 것을 확인할 수 있었으며, 특히 지모 추출물 농도 12.5 및 25㎍/ml에서 억제 효과가 명확하게 나타남을 알 수 있었다.

2) Raw 264.7 cell에 200㎍/ml PM1648a로 처리한 결과를 도시한 도 3을 보면, 지모 추출물 농도별로 PM1648a와 동시에 처리했을 때 농도 의존적으로 ROS 생성을 억제하는 것을 확인할 수 있었으며, 지모 추출물 농도 6.25㎍/ml에서 억제 효과가 명확하게 나타남을 알 수 있었다.

3) HaCaT cell에 12.5㎍/ml PM1648a로 처리한 결과를 도시한 도 4을 보면 지모추출물 농도별로 PM1648a와 동시에 처리했을 때 농도 의존적으로 ROS 생성을 억제하는 것을 확인할 수 있었다.

4) 따라서 본 발명에 따른 조성물이 미세먼지 등에 자극에 의해 일어나는 피부 트러블을 억제할 수 있는 효과, 즉 anti-pollution 효과를 보임은 명백하다.

실시예 3: 자유라디컬 소거력 측정을 통한 Anti-Pollution 효과 시험

3-1. 자유라디칼소거력 ( DPPH 측정)

DPPH 자유 라디컬에 대한 각 시료의 환원력을 측정하기 위해 메탄올에 시료와 PM1648a를 농도별로 희석하여 준비한다. 준비된 샘플 160ul와 0.4mM DPPH 40ul(sigma, USA)를 96 well plate (SPL, Korea)에 분주한 후 혼합한다. 실온에서 30분간 방치한 후 517nm에서 흡광도를 측정한다. 양성대조군으로 ascorbic acid를 사용한다. DPPH 자유라디칼 소거활성을 계산한 공식은 다음과 같다.

저해율 (%) = 1 ( 시료첨가군의 흡광도/ 시료무첨가군의 흡광도) X 100

3-2 측정 결과

전자공여능 측정에 사용된 DPPH는 안정한 자유라디칼로서, 만일 시료가 항산화 활성을 가지고 있다면 DPPH 가 갖고 있는 지질 산화에 관여하는 자유라디칼의 비공유 결합을 소거하여 DPPH의 환원성을 높인다.

지모 추출물과 PM1648a 농도별로 혼합한 혼합물에 대하여 DPPH 라디칼 소거 효과를 확인하여 그 결과를 도 5에 나타냈으며, 양성 대조군으로는 Ascorbic acid를 사용하였다.

도 5를 보면, 지모 추출물 농도 3.13㎍/ml부터 1000㎍/ml의 농도에 따른 DPPH 라디칼 소거 효과가 농도 의존적인 것으로 나타났고, 양성 대조군인 ascorbic acid 만큼이나 높은 DPPH 환원력을 가짐을 확인할 수 있었다.

따라서 본 발명에 따른 조성물이 미세먼지 등에 자극에 의해 일어나는 피부 트러블을 억제할 수 있는 효과, 즉 anti-pollution 효과를 보임은 명백하다.

실시예 4: PGE2 발현 억제 시험을 통한 Anti-Pollution 효과 시험

4-1. 측정 방법

10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 Raw264.7 cell은 1.0 × 10⁵개, HaCaT cell은 5.0 × 10⁴ 개로 48 well plate에 접종하고, 18시간 배양 하였다. 이후 배지를 제거한 다음 시료 농도별과 LPS (1 ㎍/ml) 를, 그리고 시료농도별과 PM1648a (12.5 ㎍/ml)를 동시에 처리하여 24시간 배양하였다. 24시간 후 배양 배지를 원심분리 (3,000 rpm, 10 min) 하여 얻어진 상층액의 PGE₂함량을 측정하였다.

모든 시료는 정량 전까지 냉동보관 (-20℃) 하였다. PGE₂는 mouse enzyme-linked immnunosorbent assay (ELISA) kit (R&D, USA)를 이용하여 정량하였으며 standard에 대한 표준곡선의 r ² 값은 0.99 이상이었다.

PGE2는 염증반응 시 COX-2에 의해 생성되며 혈관을 확장시키고 혈관투과성을 증가시켜 백혈구의 염증부위로의 화학주성을 증가시킨다. 지모추출물이 PGE2 발현에 어떠한 영향을 미치는지 알아보기 위해 ELISA kit를 이용하여 확인해 보았다.

4-2. 측정 결과

1) Raw 264.7 cell에 1㎍/ml LPS로 처리한 결과를 도시한 도 6을 보면, 지모 추출물 25㎍/ml과 LPS 1㎍/ml/로 동시에 처리한 군에서 PGE2 발현이 억제되는 것을 확인할 수 있었다.

2) Raw 264.7 cell에 12.5㎍/ml PM1648a로 처리한 결과를 도시한 도 7을 보면, 지모 추출물 농도별로 PM1648a 12.5㎍/ml와 동시에 처리했을 때 농도 의존적으로 PGE2 발현을 억제하는 것을 확인할 수 있었다.

3) HaCaT cell에 12.5㎍/ml PM1648a로 처리한 결과를 도시한 도 8을 보면, 지모 추출물 농도별로 PM1648a 12.5㎍/ml와 동시에 처리했을 때 농도 의존적으로 PGE2 발현을 억제하는 것을 확인할 수 있었다.

Claims

지모의 뿌리줄기 추출물을 활성 성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 안티-폴루션(anti-pollution) 효과를 가지는 화장품 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 추출물의 추출 용매가 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 및 이들의 혼합 용매로 이루어진 군에서 선택되는 하나인 것을 특징으로 하는 안티-폴루션(anti-pollution) 효과를 가지는 화장품 조성물.
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 추출물은 총 조성물의 중량 대비 0.001 내지 30 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 안티-폴루션(anti-pollution) 효과를 가지는 화장품 조성물.