KR20170137184A

KR20170137184A - 인간 지방 유래 줄기 세포 및 간세포에서 c형 간염 바이러스의 복제를 저해할 수 있는 펩타이드 및 그 유도체

Info

Publication number: KR20170137184A
Application number: KR1020177032845A
Authority: KR
Inventors: 첸-렁 린
Original assignee: 이노 바이오-드러그 디벨롭먼트 리미티드
Priority date: 2015-04-16
Filing date: 2015-04-16
Publication date: 2017-12-12
Also published as: AU2015391060A1; EP3283503A1; EP3283503B1; HK1249914A1; WO2016165101A1; CA2982391A1; EP3283503A4; CN107849091B; US11254706B2; JP2018516272A; US20180134751A1; CN107849091A

Abstract

본 발명은 hADSC 및 인간 간세포에서 혈청성 HCV의 복제를 현저하게 저해하는, 토끼 α1-안티프로테나제 F의 단편인 서열 DEAQETAVSSHEQD의 펩타이드 및 이의 유도체, 즉 DEAQETAVSSHEQ 및 QETACSSHEQD를 제공한다.

Description

인간 지방 유래 줄기 세포 및 간세포에서 C형 간염 바이러스의 복제를 저해할 수 있는 펩타이드 및 그 유도체

본 발명은 C형 간염 바이러스의 복제를 저해할 수 있는 펩타이드 및 그 유도체, 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 상기 펩타이드를 포함하는 벡터, 숙주 세포 및 약학적 조성물, 및 그 용도에 관한 것이다.

HCV는 플라비비리대 (Flaviviridae) 과에 속하는 외막을 가진 (+) 가닥 RNA 바이러스이다. 이는, 비-번역 영역 (5'-UTR)에서 시작하여, 구조 단백질 (코어, E1, E2)과 p7, NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A 및 NS5B를 비롯한 비-구조 (NS) 단백질 순서로 이루어진 9.6 kb의 게놈을 가지고 있다 (참조문헌¹). 적어도 1억7천만명에 달하는 사람들이 HCV에 만성적으로 감염되어 있으며, 매년 3백5십만명 이상이 사망하고 있다². PEG-인터페론과 항-바이러스제 리바비린의 병용과 같은 현행 치료법은 많은 부작용을 가지고 있으며, 감염된 환자들 중 일부에서만 효과적이다. 새로운 항-HCV 치료제 개발이 활발하게 시도되고 있지만³, 혈청성 HCV (serum-borne HCV, HCVser)를 배양하기 위한 믿을 수 있는 생리학적 세포 배양 시스템의 부족이 여전히 문제가 되고 있다. 예를 들어, HCVser의 직접 감염은 1차 인간 및 침팬지 간세포에서만 입증되었고, 감염도 일시적이고 비효율적이었다⁴. 최근 고안된 시험관내 세포 배양 방법은 천연 바이러스가 아닌 HCV 게놈의 분자 클론을 이용한다⁵. 또한, 이 모델은 간암 세포주⁶ 또는 신경상피 세포주⁷와 같이 1차 세포가 아닌 인간 세포에서 HCV를 증식시킨다. 그래서, 발견 결과를 임상적인 바이러스-숙주 상호작용으로 추론하는데에는 문제가 된다. HCV 감염에 취약한 침팬지, 인간-간 키메라 마우스⁸ 또는 유전자 변형된 마우스⁹ 등의 동물 모델도 입수 또는 확립하기 어렵다. 이를 극복하기 위해, 계류 중인 출원 (PCT/CN2015/070243)에서, 본 발명자들은 인간 지방-유래 줄기 세포 (hADSC)의 서브세트가 혈청-유래 HCV 유전자형 1a, 1b, 2a, 2b 및 혼성형 2a+2b의 완전한 복제를 뒷받침하는 플랫폼을 성공적으로 개발하였다. 또한, 새롭게 생산된 바이러스는 나이브 hADSC에 감염성이어서, 나이브 hADSC에 대한 연속적인 "재-감염"으로 바이러스 복제를 유지시키고, 재-감염을 6회 반복한 후 총 바이러스 역가를 1x10¹¹ 카피 이상으로 높일 수 있다. 중요한 것은, 혈청성 HCV에 감염된 hADSC에 의해 생산된 바이러스가 1차 인간 간세포에 감염성이라는 점이었다.

여전히 효과적인 약물과 부작용이 적은 치료법에 대한 요구는 남아있는 실정이다. 최근들어 새로운 세대의 항-HCV 치료제로서 소분자를 고안하는데 진전이 이루어졌지만, 이들 HCV-특이적인 효소 저해제는 생산 비용이 높다. 또한, 장기간에 걸친 유해 반응들에 대한 추가적인 모니터링이 필요하다. 따라서, 보다 안전한 프로파일을 가지며 생산 비용이 보다 저렴할 것으로 생각될 수 있는, 천연 산물로부터 유래되거나 또는 천연 산물로 구성된 새로운 항-HCV 치료제의 개발이 여전히 필요한 실정이다.

Lindenbach, B. D. & Rice, C. M. Unravelling hepatitis C virus replication from genome to function. Nature 436, 933-938, doi:10.1038/nature04077 (2005). Sheets, W. F. http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs164/en/. (July 2012). Scheel, T. K. & Rice, C. M. Understanding the hepatitis C virus life cycle paves the way for highly effective therapies. Nature medicine 19, 837-849, doi:10.1038/nm.3248 (2013). Bartenschlager, R. & Lohmann, V. Novel cell culture systems for the hepatitis C virus. Antiviral research 52, 1-17 (2001). Wilson, G. K. & Stamataki, Z. In vitro systems for the study of hepatitis C virus infection. International journal of hepatology 2012, 292591, doi:10.1155/2012/292591 (2012). Sheehy, P. et al. In vitro replication models for the hepatitis C virus. Journal of viral hepatitis 14, 2-10, doi:10.1111/j.1365-2893.2006.00807.x (2007). Fletcher, N. F. et al. Hepatitis C virus infection of neuroepithelioma cell lines. Gastroenterology 139, 1365-1374, doi:10.1053/j.gastro.2010.06.008 (2010). Mercer, D. F. et al. Hepatitis C virus replication in mice with chimeric human livers. Nature medicine 7, 927-933, doi:10.1038/90968 (2001). Dorner, M. et al. A genetically humanized mouse model for hepatitis C virus infection. Nature 474, 208-211, doi:10.1038/nature10168 (2011). Lin, C. L. et al. Immunization with Epstein-Barr Virus (EBV) peptide-pulsed dendritic cells induces functional CD8+ T-cell immunity and may lead to tumor regression in patients with EBV-positive nasopharyngeal carcinoma. Cancer research 62, 6952-6958 (2002). Bhogal, R. H. et al. Isolation of primary human hepatocytes from normal and diseased liver tissue: a one hundred liver experience. PloS one 6, e18222, doi:10.1371/journal.pone.0018222 (2011).

발명의 내용은 본 발명의 특성과 대상을 간략하게 나타내기 위해 본 발명의 개요를 제시하고자 제공된다. 이는 청구항의 범위 또는 의미를 제한하거나 또는 해석하기 위해 사용되지 않을 것이라는 인식 하에 제출된다.

일 측면에서, 본 발명의 내용은, 아미노산 서열 DEAQETAVSSHEQD와 70% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드 또는 이의 변이체, 유도체, 돌연변이 또는 단편을 유효량으로 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 HCV 감염을 치료 또는 예방하거나 또는 HCV 복제를 저해하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 펩타이드의 아미노산 서열은 아미노산 서열 DEAQETAVSSHEQD와 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 그 이상 동일한 아미노산 서열을 가진다. 일부 구현예에서, 펩타이드는 아미노산 서열 DEAQETAVSSHEQD, QETAVSSHEQD 또는 DEAQETAVSSHEQ를 포함한다. 일부 구현예에서, 펩타이드 서열은 DEAQETAVSSHEQD, QETAVSSHEQD 또는 DEAQETAVSSHEQ로 실질적으로 구성되거나, 또는 구성된다. 일부 구현예에서, 펩타이드는 하나 이상의 아미노산 부가, 결손 및/또는 치환을 포함한다. 일부 구현예에서, 아미노산 부가, 결손 및/또는 치환은 C-말단 및/또는 N-말단에서 수행된다. 일부 구현예에서, 펩타이드는 1-5개, 바람직하게는 1-3개의 아미노산 부가, 결손 및/또는 치환을 가진다. 일부 구현예에서, 본 방법은 또 다른 항-HCV 물질을 투여하는 단계를 더 포함한다. 이러한 항-HCV 물질은 본 발명의 펩타이드를 투여하기 전에, 이후에 또는 동시에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, HCV는 유전자형 1a, 1b, 2a 또는 2b, 또는 유전자형 3, 또는 유전자형 4의 HCV이다.

다른 측면에서, 본 발명의 내용은 아미노산 서열 QETAVSSHEQD 또는 DEAQETAVSSHEQ와 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드, 또는 이의 변이체, 유도체, 돌연변이 또는 단편을 제공한다. 일부 구현예에서, 펩타이드의 아미노산 서열은 아미노산 서열 QETAVSSHEQD 또는 DEAQETAVSSHEQ와 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 그 이상 동일한 아미노산 서열로 이루어지거나, 또는 실질적으로 이루어진다. 일부 구현예에서, 펩타이드는 1개 이상의 아미노산 부가, 결손 및/또는 치환을 포함한다. 일부 구현예에서, 아미노산 부가, 결손 및/또는 치환은 C-말단 및/또는 N-말단에서 수행된다. 일부 구현예에서, 펩타이드는 1-5개, 바람직하게는 1-3개의 아미노산 부가, 결손 및/또는 치환을 가진다. 일부 구현예에서, 펩타이드는 HCV 복제에 대해 저해 효과를 가진다. 일부 구현예에서, 펩타이드는 단리 (isolation)되거나, 또는 화학 합성에 의해 수득된다.

다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 숙주 세포를 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 유효량의 펩타이드, 폴리뉴클레오티드, 벡터 또는 숙주 세포, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 개체에서 HCV 감염의 치료 또는 예방 또는 HCV의 복제를 저해하는 약제를 제조하는데 있어 본 발명의 펩타이드, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 숙주 세포 또는 약학적 조성물의 용도를 제공한다. 일부 구현예에서, 약제는 또 다른 항-HCV 물질을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, HCV는 유전자형 1a, 1b, 2a 또는 2b, 또는 유전자형 3, 또는 유전자형 4의 HCV이다.

다른 측면들을 아래에 기술한다.

전술한 개요 및 상세한 설명은, 예로서, 비-제한적인 방식으로 포함되는, 첨부된 도면과 함께 읽었을 때 보다 잘 이해된다.
도 1. DEAQETAVSSHEQD 및 이의 유도체는 hADSC 및 1차 간세포에서 혈청성 HCV의 복제를 효과적으로 저해한다. ( A 및 B ) 1, 10 및 100 ㎍/ml 농도의 DEA, DEA-Q 및 QET 펩타이드를, HCV(+) 혈청 (유전자형 1b)에 노출시키기 전에, 1시간 동안 p5 hADSC 배양물에 첨가하였다. HLA-A11 제한된, 엡스타인-바르 바이러스-특이적인 펩타이드 에피토프 CSSCSSCPLSK를 대조군 (비관련) 펩타이드로서 사용하였다. 감염 후 21일째에, 상층액 ( A ) 및 세포 용혈물 ( B )에서 5'-UTR 카피 수를 qRT-PCR에 의해 정량하였다. 데이타는 실험 3번의 평균 ± SD로 나타낸다. ( C ) 1, 10 및 100 ㎍/ml 농도의 DEA, DEA-Q 및 QET 펩타이드를, HCVser (유전자형 1b)에 노출시키기 전, 1시간 동안 1차 인간 간세포 배양물에 첨가하였다. 감염 후 5일 후, 세포 RNA를 5'-UTR에 대한 RT-PCR을 위해 추출하였다. 데이타는 실험 3번의 평균 ± SD로 나타낸다. DEA, DEA-Q 및 QET 실험군은 일부 농도 수준 (예, 10 및 100 ㎍/ml)에서는 HCV 카피 수가 검출 한계 보다 낮았다.

본 발명의 몇몇 측면들은 예시를 위한 적용예들을 들어 아래에서 설명된다. 다수의 구체적인 상세 설명, 관계 및 방법들은 본 발명을 완전히 이해하기 위해 제공되는 것으로 이해하여야 한다. 그러나, 관련 기술 분야의 당업자라면, 본 발명을 한가지 이상의 구체적인 설명없이 또는 다른 방법으로도 실시할 수 있음을 쉽게 알 것이다. 본 발명은, 일부 행위들이 또다른 순서로 이루어질 수 있거나 및/또는 다른 행위 또는 현상과 동시에 이루어질 수 있으므로, 행위 또는 현상의 순서는 제한되지 않는다. 또한, 예시된 모든 행위 또는 현상이 본 발명에 따른 방법을 구현하는데 필요한 것은 아니다.

달리 언급되지 않은 한, 본원에 사용되는 과학 용어 및 기술 용어, 그리고 명명법은 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자가 통상적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 가진다. 일반적으로, 세포 배양, 감염, 분자 생물학적 방법 등에 대한 절차들은 당해 기술 분야에서 사용되는 통상의 방법들이다. 이러한 표준 기법들은 예를 들어 Sambrook et al. (1989, Molecular Cloning―A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories) 및 Ausubel et al. (1994, Current Protocols in Molecular Biology, Wiley, New York)과 같은 참조 매뉴얼에서 확인할 수 있다.

본원에서, 단수 형태 "부정관사 (a, an)" 및 "정관사 (the)"는 문맥상 그렇지 않은 것으로 명확하게 교시되지 않은 한, 복수 형태 역시 포함하는 것으로 의도된다.

본원에서, 용어 "약"은 양, 시간적 기간 등과 같은 측정가능한 값을 언급하는 경우, 명시된 값으로부터 ±20% 또는 ±10%, 더 바람직하게는 ±5%, 보다 더 바람직하게는 ±1%, 더욱 바람직하게는 ±0.1%의 편차를 포괄하는 의미를 가지는데, 이러한 편차는 언급된 방법을 수행하기에 적당한 수준이다.

본원의 펩타이드는 재조합, 천연 또는 합성 펩타이드일 수 있다. 본원의 펩타이드는 정제된 천연 산물 또는 화학적으로 합성된 산물일 수 있다. 다른 예로, 펩타이드를 원핵 또는 진핵생물의 숙주, 예를 들어, 박테리아, 효모, 고등 식물, 곤충 및 포유류 세포에서 재조합 기법을 이용해 제조할 수 있다. 재조합 제조에 사용되는 숙주에 따라, 펩타이드는 당화되거나 또는 당화되지 않을 수 있다. 일 구현예에서, 본원의 펩타이드는 토끼 α1-안티프로테나제 (antiproteinase) F의 단편 또는 그 유도체로부터 유래된다.

본원에서, 용어 "유도체", "변이체", "돌연변이" 및 "단편"은 본 발명의 펩타이드와 동일한 생물학적 기능 또는 활성을 필연적으로 가진 펩타이드를 의미한다.

본원에서, 용어 "유도체"는, (i) 하나 이상의 아미노산 잔기가 치환기를 포함하는 것, (ii) 펩타이드가, 펩타이드의 반감기를 증가시키기 위한 화합물 (예, 폴리에틸렌 글리콜)과 같은 다른 화합물과 융합된 것, (iii) 리더 또는 분비성 서열 또는 펩타이드나 프로-단백질을 정제하는데 사용되는 서열 등의 부가적인 아미노산이 펩타이드에 융합된 것, 또는 (iv) 일부 변형에 의해 펩타이드가 변형된 것을 포함하나, 이들로 한정되는 것은 아니다. 이러한 유도체는 본원의 교시 내용을 토대로 당업자들에게 공지되어 있다.

본원에서, 용어 "변형" (이는 일반적으로 1차 서열을 변형하진 않음)은 펩타이드의 생체내 또는 시험관내 화학적 유도체화, 예를 들어, 아세틸화 또는 카르복시화를 포함한다. 또한, 당화의 변형, 예를 들어, 펩타이드의 합성 및 가공 중에 또는 추가적인 가공 단계 중에, 예를 들어 펩타이드를 당화 효소 (예, 포유류 당화 효소 또는 탈당화 효소)에 노출시킴으로써, 펩타이드의 당화 패턴을 변형시킴으로써 만들어진 것을 포함한다. 또한, 인산화된 아미노산 잔기를 가진 서열, 예를 들어, 포스포티로신, 포스포세린, 포스포트로닌 뿐만 아니라 단백질 분해에 대한 내성을 향상시키거나 용해 특성을 최적화하기 위해 변형된 서열도 포함된다.

본원에서, 용어 "변이체"는 비-제한적으로 펩타이드의 C-말단, N-말단 또는 내부 (inside)에, 수개의 아미노산의 결손, 삽입 및/또는 치환을 포함하며, 바람직하게는 수개의 보존된 아미노산 치환 (전형적으로 1-7개, 바람직하게는 1-6개, 더 바람직하게는 1-5개, 보다 더 바람직하게는 1-4개, 더더 바람직하게는 1-3개, 가장 바람직하게는 1-2개), 및 하나 이상의 아미노산 (전형적으로 20개 미만, 바람직하게는 10개 미만, 더 바람직하게는 5개 미만)의 부가를 포함한다. 예를 들어, 단백질 기능은 통상적으로 아미노산이 비슷하거나 또는 유사한 것으로 치환되는 경우에는, 예를 들어, 보존된 또는 비-보존된 아미노산 잔기 (바람직하게는, 보존된 아미노산 잔기)로 치환되는 경우에는, 바뀌지 않는다. 나아가, C-말단 및/또는 N-말단에 아미노산 1개 또는 수개의 부가 역시 통상적으로 단백질의 기능을 변형하지 않는다.

본원에서, "보존된 아미노산 치환"은, 오리지날 아미노산 서열과 비교하여, 최대 7개, 바람직하게는 최대 6개, 더 바람직하게는 5개, 가장 바람직하게는 최대 3개의 아미노산이 실질적으로 동일한 또는 비슷한 특성을 가진 아미노산으로 치환됨으로써 제조된 펩타이드를 의미한다. 천연적으로 형성되는 아미노산은 공통 측쇄 특징에 따라 다음과 같은 유형들로 분류될 수 있다:

1) 소수성: 노르루신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;

2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;

3) 산성: Asp, Glu;

4) 염기성: His, Lys, Arg;

5) 체인의 배향 (chain orientation)에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro;

6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.

보존적인 아미노산 치환은 그 유형의 것을 동일한 유형에 속하는 다른 것으로 치환하는 것을 포함할 수 있다. 보존적인 아미노산 치환은, 전형적으로, 생물 시스템에서의 합성이 아닌 펩타이드의 화학 합성에 의해 병합되는, 비-천연적으로 형성되는 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 이는 펩타이드 모방체 및 아미노산 모이어티의 또 다른 도치된 (reversed) 또는 역위된 (inverted) 형태들을 포함한다.

예시적인 보존된 아미노산 치환들을 표 1에 나타낸다.

보존적인 아미노산 치환

원 잔기	치환 예
Ala	Ser
Arg	Lys
Asn	Gln, His
Asp	Glu
Cys	Ser
Gln	Asn
Glu	Asp
Gly	Pro
His	Asn, Gln
Ile	Leu, Val
Leu	Ile, Val
Lys	Arg, Gln, Glu
Met	Leu, Ile
Phe	Met, Leu, Tyr
Ser	Thr
Thr	Ser
Trp	Tyr
Tyr	Trp, Phe
Val	Ile, Leu

당업자라면 본원에 제공된 정보와 널리 공지된 기법을 이용해 본원에 기술된 폴리펩타이드에 대한 적절한 변이체를 결정할 수 있을 것이다. 당해 기술 분야의 당업자는 활성에 중요한 것으로 여겨지지 않는 영역을 타겟팅함으로써 활성을 파괴하지 않으면서도 치환가능한 분자의 적절한 부위를 동정할 수 있다. 또한, 당업자라면 유사 폴리펩타이드들에서 보존된 분자의 잔기 및 영역을 동정할 수 있을 것이다. 다른 구현예에서, 생물 활성 또는 구조에 중요할 수 있는 영역이더라도, 생물 활성을 파괴하지 않거나 또는 펩타이드 구조에 불리한 영향을 미치지 않으면서, 보존적인 아미노산 치환을 거칠 수 있다.

본 발명의 폴리뉴클레오티드는 DNA 및 RNA 형태일 수 있다. DNA는 cDNA, 게놈 DNA 및 합성 DNA를 단일 가닥 또는 이중 가닥 형태로 포함한다. 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 축중 서열 (degenerate sequence)일 수 있다. 본원에서, "축중 서열"이라는 용어는 코돈의 축중으로 인해 동일한 단백질을 코딩하는 서열이 여러 개 존재한다는 것을 의미한다.

용어 "펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드"는 펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드와 부가적인 및/또는 비-코딩 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.

본원의 펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 PCR 증폭, 재조합 방법 및 합성 방법에 의해 제조할 수 있다. PCR 증폭의 경우, 본원에 개시된 뉴클레오티드 서열, 특히 ORF에 기반하여 프라이머를 설계하고, 주형으로서 당해 기술 분야의 일반적인 기법에 의해 제조된 또는 상업적으로 이용가능한 cDNA 라이브러리를 이용함으로써, 서열을 입수할 수 있다. 서열이 입수되면, 재조합 방법을 통해 서열을 다량 생산할 수 있다. 통상적으로, 서열을 벡터에 클로닝한 다음 숙주 세포에 형질전환한다. 통례적인 기법을 이용해 증폭시킨 숙주 세포에서 서열을 단리한다.

본 발명은, 또한, 본원의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 이 벡터로 형질전환된 유전자 조작된 숙주 세포 또는 본원의 폴리뉴클레오티드, 및 재조합 기법에 의한 펩타이드 제조 방법에 관한 것이다.

재조합 펩타이드는, 본 발명의 폴리뉴클레오티드 서열을 이용해, 통례적인 재조합 DNA 기법 (Science, 1984; 224:1431)에 의해 발현 또는 생산할 수 있다. 통상적으로, 이는 하기 단계를 포함한다:

(1) 적절한 숙주 세포를 펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터로 형질감염 또는 형질전환하는 단계;

(2) 숙주 세포를 적절한 배지에서 배양하는 단계;

(3) 배지 또는 세포로부터 단백질을 단리 또는 정제하는 단계.

본 발명에서, 본원의 폴리뉴클레오티드 서열은 재조합 발현 벡터에 삽입할 수 있다. 용어 "발현 벡터"는 박테리아 플라스미드, 박테리오파지, 효소 플라스미드, 식물 바이러스 또는 포유류 세포 바이러스, 예를 들어, 아데노바이러스, 레트로바이러스 또는 당해 기술 분야에 공지된 임의의 기타 비히클을 의미한다. 숙주에서 복제 및 안정할 수 있는 한, 임의의 플라스미드 또는 벡터를 사용해 재조합 발현 벡터를 구축할 수 있다. 발현 벡터의 중요한 특징은, 발현 벡터가 전형적으로 복제 오리진, 프로모터, 마커 유전자 뿐만 아니라 번역 조절 구성 요소를 포함한다는 것이다.

공지된 방법을 이용해 본원의 서열과 적절한 전사/번역 조절 구성 요소가 포함된 발현 벡터를 구축할 수 있다. 이러한 방법으로는 시험관내 재조합 DNA 기법, DNA 합성 기법, 생체내 재조합 기법 등이 있다. DNA 서열은 mRNA의 합성을 지시하기 위해 발현 벡터내 적절한 프로모터에 효율적으로 연결된다. 프로모터의 예로는 E. coli의 lac 또는 trp 프로모터; A 파지의 PL 프로모터; 진핵생물 프로모터, 예를 들어, CMV 최초기 프로모터 (immediate early promoter), HSV 티미딘 키나제 프로모터, 초기 및 후기 SV40 프로모터, 레트로바이러스의 LTR 및 원핵생물 세포, 진핵생물 세포 또는 바이러스에서 유전자 발현을 제어하는 그외 공지된 수종의 프로모터가 있다. 발현 벡터는 번역 개시를 위한 리보좀 결합 부위, 전사 종결인자 등을 더 포함할 수 있다.

본원에서, "숙주 세포"는 원핵생물, 예를 들어 박테리아; 원시 진핵생물 (primary eukaryote), 예를 들어, 효모; 고등 진핵생물, 예를 들어, 포유류 세포를 포함한다. 대표적인 예는 박테리아 세포, 예를 들어, E. coli, 스트렙토마이세스 (Streptomyces), 살모넬라 티피무리움 (Salmonella typhimurium); 진균 세포 (fungal cell), 예를 들어, 효모; 식물 세포; 곤충 세포, 예를 들어 드로소필라 (Drosophila) S2 또는 Sf9; 동물 세포, 예를 들어, CHO, COS 또는 Bowes 흑색종이다.

본 발명은, 또한, 본 발명의 펩타이드를 유효량으로 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 HCV 감염을 치료 또는 예방하거나 또는 HCV 복제를 저해하는 방법에 관한 것이다. 상기한 펩타이드는 아미노산 서열 DEAQETAVSSHEQD와 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드 또는 이의 변이체, 유도체, 돌연변이 또는 단편을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 펩타이드는 아미노산 서열 DEAQETAVSSHEQD, QETAVSSHEQD 또는 DEAQETAVSSHEQ로 구성되거나 또는 이로 실질적으로 구성되거나, 또는 이를 포함한다. 일 구현예에서, 펩타이드는, 변이체, 유도체, 돌연변이 또는 단편이 펩타이드 DEAQETAVSSHEQD, QETAVSSHEQD 또는 DEAQETAVSSHEQ의 저해 효과를 가지는 한, 펩타이드 DEAQETAVSSHEQD, QETAVSSHEQD 또는 DEAQETAVSSHEQ의 변이체, 유도체, 돌연변이 또는 단편일 수 있다. 예를 들어, 상기 변이체, 유도체, 돌연변이 또는 단편의 HCV 저해 효과는 펩타이드 DEAQETAVSSHEQD, QETAVSSHEQD 또는 DEAQETAVSSHEQ의 HCV 저해 효과의 적어도 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 110% 또는 그 이상일 수 있다. 당해 기술 분야의 당업자라면 이러한 변이체, 유도체, 돌연변이 및 단편을 통상적으로 선별 및 결정할 수 있다.

본원에서 용어 "유효량"은 의미있는 환자 편익, 예를 들어 지속적인 바이러스 부하 (viral load) 감소를 발휘하기에 충분한 활성 성분의 양을 의미한다.

본 발명에 따른 HCV는 hADSC 또는 인간 간세포를 감염시킬 수 있는 임의의 HCV, 또는 HCV로 감염된 개체로부터 분리될 수 있는 임의의 HCV일 수 있다. 일 구현예에서, HCV는 유전자형 1a, 1b, 2a, 2b, 2c, 2d, 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f, 4a, 4b, 4c, 4d, 4e, 4f, 4g, 4h, 4i, 4j, 5a 및 6a로 이루어진 군으로부터 선택되는 HCV 유전자형 중 하나 이상 또는 이들의 임의 조합이다. 다른 구현예에서, HCV는 유전자형 1a, 1b, 2a, 2b, 3 및 4로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 HCV 유전자형을 가진다.

HCV 수준은 당해 기술 분야에 공지된 임의 기법으로 측정할 수 있다. 이러한 기법으로는 HCV 단백질을 검사하기 위한 anti-HCV ELISA 분석 (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay)을 포함할 수 있다. RNA 증폭 검사에 의해 HCV 복제를 검사하는 방법 (예, 중합효소 연쇄 반응 또는 PCR, 분기형 DNA 분석 (branched DNA assay))을 이용할 수도 있다. HCV의 RNA 합성은 실제 실시간 PCR용으로 설계된 디바이스를 이용하여 한 단계로 RT-PCR에 의해 또는 HCV-특이적인 방사성 프로브를 이용하여 필터 상의 RNA 혼성화에 의해 분석할 수 있다. 예를 들어, 단리된 RNA에 대해, HCV 게놈을 증폭할 수 있는 특이적인 올리고뉴클레오티드 프라이머를 이용해, 커플링된 역전사 및 증폭, 예를 들어, 역전사 및 중합효소 연쇄 반응에 의한 증폭 (RT-PCR)을 수행할 수 있다. 그런 후, 개체에 감염된 HCV의 유전자형을 확인하기 위해 직접 서열분석을 수행할 수 있다.

본원에서, 용어 "인간 지방-유래 줄기 세포" (hADSC)는 지방 조직을 함유한 조직 소스로부터 수득되는 모 세포 (parental cell)이거나 또는 상기한 모 세포를 함유한, 성인 성체 줄기 세포이다. 일부 경우, hADSC는, ADSC 시리즈 중 가장 초기 오리진인 기질혈관분획 (stromal vascular fraction, SVF)이라고도 한다. SVF는 인간 지방 조직으로부터 단리된 1차 세포로서, 이를 배양하면 자발적으로 증식할 것이다 (세포 수 증가).

본원에서, "환자", "개체", "개인" 등의 용어들은 상호 호환적으로 사용되며, 본원에 기술된 방법이 적용가능한 모든 동물을 지칭하며, 인간, 인간을 제외한 포유류 (예, 소, 양, 토끼, 개, 마우스, 랫, 원숭이 등) 및 가축 등이 있다.

또한, 본 발명은 유효량의 본 발명에 따른 펩타이드, 이의 변이체, 유도체, 돌연변이 및/또는 단편을 약제학적으로 허용가능한 담체와 조합하여 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 이러한 담체로는, 식염수, 완충제 용액, 글루코스, 물, 글리세린, 에탄올 또는 이들의 조합이 있으나, 이들로 한정되는 것은 아니다. 약학적 제형은 전달 방법에 적합하여야 한다. 약학적 조성물은 생리 식염수 또는 그외 글루코스나 보조 물질이 함유된 수용액을 이용해, 통상적인 방법에 의해 제조되는 주사제 형태일 수 있다. 정제 또는 캡슐제 형태의 약학적 조성물은 통상적인 방법에 의해 제조할 수 있다. 약학적 조성물, 예를 들어, 주사제, 용액제, 정제 및 캡슐제는 무균 조건 하에 제조되어야 한다. 활성 성분은 치료학적인 유효량으로, 예를 들어, 약 1 ㎍ 내지 50 mg/체중 kg/일 또는 그 이상으로 투여된다.

또한, 본 발명의 펩타이드는 다른 anti-HCV 물질과 조합 용법으로, 합동으로 (jointly) 또는 분리하여 투여할 수 있거나, 또는 화합물들을 조성물로 조합함으로써 투여할 수 있다. 본 발명의 펩타이드와 함께 투여할 수 있는 물질로는, 인터페론 및 라바비린, 보세프레비르 (boceprevir), 텔라프레비르 (telaprevir) 또는 소포스부비르 (sofosbuvir) 등이 있지만, 이들로 한정되는 것은 아니다. 인터페론은 인터페론 α 2B, 페길화된 인터페론 α (pegylated interferon alpha), 컨센서스 인터페론 (consensus interferon), 인터페론 α 2A, 인터페론 λ, 페길화된 인터페론 λ 및 림프모구의 인터페론 τ (lymphoblastoid interferon tau)로부터 선택할 수 있다.

또한, 본 발명의 펩타이드는 실험실 시약으로서 사용할 수 있다. 펩타이드는 바이러스 복제 분석, 동물 분석 시스템 검증 및 HCV 질병 기전에 대한 지식을 추가로 보강하기 위해 생물 구조 실험을 설계하기 위한 연구 툴을 제공하는데 유용할 수 있다. 나아가, 본 발명의 펩타이드는 예를 들어 경쟁적인 저해에 의해 다른 항바이러스제의 결합 부위를 확립 또는 결정하는데 사용가능하다.

또한, 본 발명의 펩타이드를 사용하여, 재료의 바이러스 오염을 처리 또는 예방함으로써, 이러한 물질, 예를 들어, 혈액, 조직, 시술 장치 및 의복, 실험실 장비 및 의복, 및 혈액 채집 또는 수혈 장치 및 재료에 접촉하는 실험실 또는 의료 종사자의 바이러스 감염 위험성을 줄일 수 있다.

본 발명의 펩타이드, 약학적 조성물, 용도 및 방법에 대한 구현예들은 예시를 위한 것으로 한정하고자 하는 것은 아니다. 전술한 교시 내용에 비추어, 당해 기술 분야의 당업자라면 수정 및 변형, 특히 anti-HCV 바이러스 효과와 관련하여 거의 본래의 기능성을 유지하면서 펩타이드내 변형과 관련있을 수 있는 수정 및 변형을 가할 수 있다. 따라서, 기술된 범위내에서 기술된 특정 구현예들에 대한 수정이 이루어질 수 있는 것으로 이해되어야 한다.

본 발명은 아래 실시예들 들어 추가로 설명된다. 이들 실시예는 본 발명은 설명하기 위한 것일 뿐 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니다. 아래 실시예에서 실험 방법들은 달리 언급되지 않은 한 Molecule Clone: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989에 언급된 바와 같이 통상적인 조건에서 수행하거나 또는 제조사의 지침에 따라 수행한다.

실시예 1

펩타이드 준비

합성에 대한 일반적인 정보. 합성에 사용되는 아미노산: Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(tBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Glu(tBu)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH. HPLC 분석은 C18 컬럼 (BIOSIL, 4.6 mm x 150 mm, 5 ㎛)을 사용하여 Agilent 1100 시리즈 시스템에서 수행하였다. 검출은 UV 220 nm에서 수행하였다. 유속은 0.3 mL/min이었다. 펩타이드-3 및 5의 경우, 다음과 같은 농도 구배 용출을 사용한다 (용매 A: 0.1% TFA/H₂O, 용매 B: 0.1% TFA/MeOH): 100% A, 0분 - 10분에 80% A, 20% B -> 15분에 50% A, 50% B -> 20분에 100 % B -> 다시 10분간 100% B. HPLC (NUCLEODUR C18 Pyramid, 4.6 mm x 250 mm, 5 ㎛)에서 QET에 대한 이동상은 0.1% TFA/CH₃OH이다. MALDI-TOF 질량 분광측정기 (Autoflex III system, BrukerDaltonics) 및 핵 자기 공명 분광측정 (Varian Unity Plus 400 MHz)으로 펩타이드를 동정한다.

일반적인 펩타이드 합성 및 정제. 펩타이드는 고상 펩타이드 합성기 (PS3)를 사용해 표준적인 Fmoc-기법으로 합성하였다. 일반적으로, D 또는 Q 잔기 사전-로딩된 Wang 수지 (0.79 mmol/g load)를 반응 바셀에서 중량을 측정하여 넣고, 합성하기 전 1시간 동안 신선한 DMF (5 mL)로 팽윤시켰다. 첫번째 Fmoc 기와 순차적인 Fmoc 기들은 5분간 2번 5 mL DMF 중의 20% 피페리딘 ("DEP" 용액으로서)으로 제거하여, N-말단에 유리 아민을 노출시켰다. 그런 후, 0.4 MN-메틸모르폴린/3 mL DMF를 C-말단 활성화를 위해 첨가하고 ("ACT"), 원하는 아미노산 (Fmoc-AA (보호된 측쇄)-OH)과 PyBOP를 커플링을 위해 4배 과량으로 사용하였다 (AA). 적절한 시간 동안 "AA"를 진행한 다음 (표 2 참조), N-말단 아미노산을 Ac₂O (100 ㎕)에 첨가하여, 25분간 ACT 용액 중에 남아있는 비반응성 유리 아민 (CAP라 함)을 캡핑하였다 (CAP). 그런 후, DEP-ACT-AA-CAP 사이클을 반복 실시하여, C 말단에서 N 말단까지 펩타이드를 구축하였다. 반응들 모두 카이저 검사로 모니터링하였다. 마지막으로, 얼음조에서 95% TFA/H₂O를 처리한 다음 실온으로 옮겨 1.5시간 두어, 고체 지지체로부터 펩타이드를 회수하였다. 조산물을 여과에 의해 수집하였다. 조산물을 C18 컬럼을 사용해 중간 압력 액체 크로마토그래피 (MERCK Lobar 310-25 Lichrprep)에 의해 정제하였다. HPLC 시스템으로 순도를 확인하였다. 합성된 펩타이드는 MALDI-TOF 질량 분광측정기 및 핵 자기 공명 분광측정을 통해 규명하였다.

결과

펩타이드-3 (DEA-Q): DEAQETAVSSHEQ, 수율: 29%. 체류 시간: 17.7분 (순도 >95%). MS (MALDI-TOF): 계산치: 1430 Da (M + H⁺), 실측치: 1430 Da (M + H⁺) (관찰됨). ¹H-NMR (400 MHz, D₂O): 8.54 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 4.65 ( m, 1H), 4.51 (q, J = 7 Hz, 1H), 4.30 (m, 8H), 4.09 (m, 3H), 3.77 (m, 3H), 3.58 (m, 2H), 3.23 (dd, J = 6 및 6 Hz, 1H), 3.09 (dd, J = 8 및 9 Hz, 1H), 2.97 (dd, J = 5 및 5 Hz, 1H), 2.87 (dd, J = 8 및 8 Hz, 1H), 2.42 (m, 6H), 2.04 (m, 15H), 1.30 (t, J = 7 Hz, 6H), 1.16 (m, 3H), 0.87 (dd, J = 4 및 4 Hz, 6H).

펩타이드-5 (DEA): DEAQETAVSSHEQD, 수율: 28%. 체류 시간: 16.5분 (순도 >95%). MS (MALDI-TOF): 계산치: 1545 Da.(M + H⁺), 실측치: 1545 Da ((M + H⁺). ¹H-NMR (400 MHz, D₂O): 8.53 (s, 1H), 7.20 (s, 1H), 4.64 (m, 2H), 4.50 (t, J = 7 Hz, 1H), 4.30 (m, 8H), 4.08 (m, 3H), 3.69 (m, 5H), 3.20 (dd, J = 6 및 6 Hz, 1H), 3.07 (dd, J = 8 및 8 Hz, 1H), 2.85 (m, 3H), 2.42 (m, 6H), 2.07 (m, 15H), 1.28 (m, 6H), 1.15 (m, 3H), 0.86 (dd, J = 3 및 3 Hz, 6H).

QET: QETAVSSHEQD; 체류 시간: 3.9; MS (MALDI-TOF): 계산치: 1230 Da([M+H]), 실측치: 1230. Da ([M+H]).

표 2 각 아미노산 커플링 (AA) 단계의 반응 시간.

	펩타이드
	반응 시간^#	반응 시간^#	반응 시간^#
잔기 번호^##	펩타이드-3 (DEA-Q)	펩타이드-5 (DEA)	QET
1	1hr*1	1hr*2	5hr*2
2	2hr*1	2hr*2	6hr*2
3	1hr*1	2hr*1	5hr*1
4	2hr*1	2hr*1	5hr*1
5	1.5hr*1	2hr*2	6hr*1
6	2hr*1	1.5hr*2	6hr*1
7	2hr*1	2hr*1	6hr*1
8	2hr*1	2hr*1	6hr*3
9	2.5hr*1	2hr*2	6hr*2
10	2hr*1	2.5hr*2	6hr*1
11	2hr*1	2hr*1
12	2hr*1	2hr*2
13		3hr*1

# AA 2회 운영은 "*2"로 표시됨.

## 순서: C -> N

실시예 2

Anti- HCV 활성

다음으로 본 발명자들은 실시예 1에서 제조한 14개의 아미노산으로 구성된 펩타이드 DEAQETAVSSHEQD (DEA로 지칭됨)와 이의 유도체들 QETAVSSHEQD (QET로 지칭됨) 및 DEAQETAVSSHEQ (DEA-Q로 지칭됨)을 대상으로, hADSC 및 인간 1차 간세포에서 혈청성 HCV의 복제에 미치는 효과를 조사하였다. 각 펩타이드를 1, 10 및 100 ㎍/ml 농도로 p5 hADSC 배양물에 첨가하여 1시간 둔 후, HCV(+) 혈청 (유전자형 1b)에 노출시켰다. 또한, hADSC에 대조군 펩타이드로서 HLA-A11 제한된 엡스타인-바르 바이러스-특이적인 펩타이드 에피토프 CSSCSSCPLSK를 100 ㎍/ml 농도로 처리하였다 ¹⁰. 감염 후 21일째에, 상층액과 세포 용혈물에서 5'-UTR 카피 수를 qRT-PCR에 의해 정량하였다. 그 결과, HCVser-1b 감염된 hADSC의 d21 상층액 (도 1A) 및 세포 용혈물 (도 1B) 둘다에서, DEA, DEA-Q 또는 QET 펩타이드 전-처리에 의해 바이러스 카피 수가 현저하게 감소되었으며, 저해 효과는 각 펩타이드 1 ㎍/ml에서도 이미 인지가능한 수준인 것으로 확인되었다. 이와는 대조적으로, 대조군 펩타이드를 전-처리한 경우에는 아무런 효과가 없었다.

또한, 본 발명자들은, 이들 펩타이드가 인간 간세포에서도 HCVser 복제를 저해하는 지를 조사하였다. 인간 간세포를 공지된 바와 같이 병소로부터 분리한 비-종양성 부위에서 단리하였다¹¹. 간세포를 3일간 두어 플라스틱 웰에 부착시키고, 이후 대조군 펩타이드, DEA, DEA-Q 또는 QET 펩타이드를 전처리하거나 또는 전처리없이 HCVser-1b에 노출시켰다. 감염 후 5일 후, 5'-UTR의 RT-PCR을 위해 세포 RNA를 추출하였다. 그 결과, hADSC에서와 마찬가지로, 펩타이드 DEA, DEA-Q 및 QET를 전처리한 경우, 인간 간세포에서 1 ㎍/ml 수준의 낮은 농도에서 HCVser 복제를 유의하게 저해하는 것으로 검증되었다 (도 1C).

요컨대, 본 발명자들은, 서열 DEAQETAVSSHEQD, DEAQETAVSSHEQ 및 QETAVSSHEQD를 가진 펩타이드가 hADSC 및 1차 인간 간세포 둘다에서 HCVser 복제를 저해하는 효과가 있음을 제시한다. 서열 DEAQETAVSSHEQD의 펩타이드는 토끼 α1-안티프로테나제 F의 단편이며, 이러한 천연 유래 산물은 보다 안전한 프로파일을 가지며, 생산 단가가 낮을 것으로 예상된다.

SEQUENCE LISTING <110> INNO BIO-DRUG DEVELOPMENT LIMITED <120> A peptide and its derivatives capable of inhibiting replication of hepatitis C virus in human adipose-derived stem cells and hepatocytes <130> FPCH13160112P <160> 4 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 14 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(14) <223> residues 1-14 of rabbit alpha1-antiproteinase F <400> 1 Asp Glu Ala Gln Glu Thr Ala Val Ser Ser His Glu Gln Asp 1 5 10 <210> 2 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> A derivative of DEA <400> 2 Asp Glu Ala Gln Glu Thr Ala Val Ser Ser His Glu Gln 1 5 10 <210> 3 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> A derivative of DEA <400> 3 Gln Glu Thr Ala Val Ser Ser His Glu Gln Asp 1 5 10 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HLA-A11 restricted, Epstein-Barr virus-specific peptide epitope <400> 4 Cys Ser Ser Cys Ser Ser Cys Pro Leu Ser Lys 1 5 10

Claims

개체에서 HCV 감염을 치료 또는 예방하거나 또는 HCV 복제를 저해하는 방법으로서,
아미노산 서열 DEAQETAVSSHEQD와 70% 이상의 동일성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드 또는 이의 변이체, 유도체, 돌연변이 또는 단편을 상기 개체에게 유효량으로 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
제1항에 있어서,
상기 펩타이드의 아미노산 서열이 아미노산 서열 DEAQETAVSSHEQD에 대해 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 그 이상의 동일성을 가진 아미노산 서열을 가지는, 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 펩타이드가 아미노산 서열 DEAQETAVSSHEQD, QETAVSSHEQD 또는 DEAQETAVSSHEQ를 포함하는, 방법.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 펩타이드의 서열이 DEAQETAVSSHEQD, QETAVSSHEQD 또는 DEAQETAVSSHEQ로 실질적으로 구성되거나 또는 이들로 구성되는, 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 펩타이드가 1개 이상의 아미노산 부가, 결손 및/또는 치환을 포함하는, 방법.
제5항에 있어서,
상기 아미노산 부가, 결손 및/또는 치환이 C-말단 및/또는 N-말단에서 수행되는, 방법.
제5항 또는 제6항에 있어서,
상기 펩타이드가 1-5개, 바람직하게는 1-3개의 아미노산 부가, 결손 및/또는 치환을 가지는, 방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 방법이 다른 항-HCV 물질 (anti-HCV agent)을 투여하는 단계를 더 포함하는, 방법.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 HCV가 유전자형 1a, 1b, 2a 또는 2b, 또는 유전자형 3, 또는 유전자형 4인, 방법.
아미노산 서열 QETAVSSHEQD 또는 DEAQETAVSSHEQ와 70% 이상 동일성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드, 또는 이의 변이체, 유도체, 돌연변이 또는 단편.
제10항에 있어서,
상기 펩타이드의 서열이 QETAVSSHEQD 또는 DEAQETAVSSHEQ로 실질적으로 구성되거나 또는 이들로 구성되는, 펩타이드.
(a) 및 (b)로 이루어진 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열에 대해 70% 이상의 동일성을 공유하는 뉴클레오티드 서열을 포함하며:
(a) QETAVSSHEQD 또는 DEAQETAVSSHEQ의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드, 또는 이의 변이체, 유도체, 돌연변이 또는 단편을 코딩하는, 뉴클레오티드 서열, 및
(b) (a)의 뉴클레오티드 서열에 상보적인 폴리뉴클레오티드,
상기 펩타이드, 또는 이의 변이체, 유도체, 돌연변이 또는 단편이 HCV 복제를 저해하는 효과를 가지는, 폴리뉴클레오티드.
제12항에 따른 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
제12항에 따른 폴리뉴클레오티드 또는 제13항에 따른 벡터를 포함하는 숙주 세포.
유효량의, 제10항 또는 제11항에 따른 펩타이드, 제12항에 따른 폴리뉴클레오티드, 제13항에 따른 벡터 또는 제14항에 따른 숙주 세포; 및
약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는,
약학적 조성물.
개체에서 HCV 감염을 치료 또는 예방하거나 또는 HCV의 복제를 저해하기 위한 약제의 제조에 있어, 아미노산 서열 DEAQETAVSSHEQD와 70% 이상의 동일성을 가진 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드, 제12항에 따른 폴리뉴클레오티드, 제13항에 따른 벡터, 제14항에 따른 숙주 세포 또는 제15항에 따른 약학적 조성물의, 용도.
제16항에 있어서,
상기 약제가 다른 항-HCV 물질을 더 포함하는, 용도.
제16항에 있어서,
상기 HCV가 유전자형 1a, 1b, 2a 또는 2b, 또는 유전자형 3, 또는 유전자형 4인, 용도.