KR20170099527A - 알코올성 지방간 예방 효능이 있는 돌나물 타정 캔디의 개발 및 그 제조방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 돌나물의 에탄올 추출물을 첨가하여 알코올성 지방간 발생을 예방하는 효능을 지닌 타정 캔디의 제조방법에 관한 것이다. 더 구체적으로 본 발명은 백서에 8주간 알코올과 돌나물 타정 캔디를 급여하여 알코올성 지방간의 바이오마커 변화를 통해 돌나물 타정 캔디의 건강기능성 식품으로서의 효능을 평가하고자 한다.
알코올 투여구는 대조구에 비하여 체중이 감소하였다. 양성대조구 및 돌나물 캔디 처리구에서도 체중 감소 현상은 관측되었으나 ethanol 처리구보다 유의적으로 적었다. 알코올 투여구에서는 간조직 중량 및 간조직 내의 지방 농도가 증가되었으나, 돌나물 타정 캔디를 알코올과 함께 급여했을 때는 알코올성 지방간 발현이 유의적으로 감소하였다. Ethanol 투여구와 돌나물 타정 캔디 투여구에서 문맥주위성 (periportal)으로 간세포의 공포화(vacuolation)이 관찰되었다. 대조구에서도 간세포의 공포화가 관측되었으나 미만성으로 관찰되었으며 알코올투여구와 비교하여 공포가 작은 경향을 나타내었다. 이러한 특징으로 미루어 대조구에서 관측되는 공포화는 지방변성이 아닌 glycogen 축적(deposit)으로 추정되었다. 양성대조물질은 알코올에 의해 유발되는 지방간을 예방하는 것으로 관측되었다. 또한 알코올과 함께 돌나물 타정 캔디를 섭취함으로써 알코올에 의해 유발되는 지방간의 유발을 억제할 수 있는 것으로 나타났다.

Description

알코올성 지방간 예방 효능이 있는 돌나물 타정 캔디의 개발 및 그 제조방법{Production of the anti-alcoholic fatty liver disease candies supplemented with Dolnamul (Sedum sarmentosum)}
본 발명은 돌나물의 에탄올 추출물을 첨가하여 알코올성 지방간 발생을 예방하는 효능을 지닌 타정 캔디의 제조방법에 관한 것이다.
돌나물 (Sedum sarmentosum)은 돌나물과에 속하며 비타민 C, 철분 및 칼슘 등의 영양성분을 많이 함유하고 있는 다년생 산채류이다. 돌나물은 골다공증에 유효하고, 간기능 개선효과, 알코올 산화 촉진 및 숙취 완화 효과가 있는 것으로 보고되고 있다. 그러나 돌나물은 다량의 수분을 함유하고 있어 저장성이 매우 낮은 식품이다. 돌나물의 부가가치를 증진시키기 위하여 쥬스, 젤리, 설기떡 등의 가공식품을 개발하려는 시도가 있어왔으나 실용화되어 있지 않다. 알코올은 선사시대로부터 갈증해소 및 사회적·종교적 행사 참여와 같은 다양한 이유로 섭취되고 있다.
다량의 알코올을 단기간 내에 섭취할 경우에는 탈수, 피로, 두통, 구역, 구토, 홍조, 설사, 수면장애 등이 유발되는데, 이와 같은 불유쾌한 신체 증상을 ‘숙취’하고 한다. 흡수된 대부분의 알코올은 alcohol dehydrogenase(ADH)에 의해 간에서 산화되고, acetaldehyde dehydrogenase(ALDH)에 의해 acetaldehyde로 전환된다. Acetaldehyde는 알코올 산화의 중간체로 인체에 심각한 질환을 유발하는 원인이 된다. 따라서 알코올 섭취로 유발되는 알코올성지방간 및 간경변증과 같은 질환을 예방하거나 숙취를 해소하기 위해서는 혈장 내 acetaldehyde의 농도를 감소시키는 것이 효과적인 방법인 것으로 알려져 있다.
본 발명이 해결하고자 하는 과제는 돌나물의 에탄올 추출물을 첨가하여 알코올성 지방간 발생을 예방하는 효능을 지닌 건강기능성 타정 캔디의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명은 돌나물의 용매(에탄올)추출물 첨가를 통해 알코올성 지방간 발생을 예방하는 건강기능성을 지닌 타정 캔디를 제조하는 방법을 제공하는데 그 목적이 있다.
더 구체적으로 본 발명은 백서에 8주간 알코올과 돌나물 타정 캔디를 급여하여 알코올성 지방간의 바이오마커 변화를 통해 돌나물 타정 캔디의 건강기능성 식품으로서의 효능을 평가하고자 한다.
본 발명으로 제조된 돌나물 타정 캔디는 알코올 분해 촉진효과가 우수하다. 또한 알코올과 함께 돌나물 타정 캔디를 섭취하면 알코올 섭취에 의해 유발되는 알코올성 지방간 발생을 예방할 수 있다.
도1은 다양한 용매 추출분획이 ADH 및 ALDH 활성도에 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.
도2는 돌나물 타정 캔디가 ADH 및 ALDH 활성도에 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.
도3은 8주간 에탄올과 돌나물 타정 캔디를 섭취한 백서 간조직의 조직염색학적 사진이다.
이하, 본 발명을 실시예를 통해 설명하면 다음과 같다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
돌나물 추출물의 제조
동결건조하고 분쇄한 돌나물 분말에 에탄올(돌나물 분말 부피의 3배 용량)을 넣고 12시간동안 실온에서 추출(140 rpm)하고 여과한 후 여과액을 감압농축하였다. 상기 조작을 3회 반복하여 추출수율을 증가시켰다. 에탄올 추출의 추출수율은 18.6± 4.15%이었고, 감압농축된 추출물을 동결건조한 후 분쇄하여 돌나물 분말로 제조하였다.
돌나물 분말 300g을 초임계 유체 추출용기에 넣고 추출압력(100-300 atm)과 온도(30-50℃)를 표1과 같이 변화시켰고, 초임계 유체 추출 용매는 순도 99.9%의 이산화탄소를 사용하여 추출하였다.
초임계 유체 추출 수율은 압력이 높고 추출온도가 높을수록 증가하였다. 압력이 100 atm일 때는 8.94±1.28%이었고, 압력이 200 atm일 때는 10.24±2.08%이었고, 압력이 300 atm일 때는 13.72±2.81%이었다. 초임계 유체 추출물은 돌나물에 함유된 모든 색소가 추출되어 잔사에는 색이 전혀 남아있지 않았다.
돌나물 타정 캔디 제조를 위한 돌나물 유용성분의 초임계유체추출조건
Experimental
number
Pressure
(atm)
Temperature
(℃)
Dynamic time
(min)
1 100 30 30
2 100 40 30
3 100 50 30
4 200 30 30
5 200 40 30
6 200 50 30
7 300 30 30
8 300 40 30
9 300 50 30
돌나물 추출물을 첨가한 돌나물 타정 캔디의 제조
본 발명에 의한 돌나물 캔디의 제조에 사용된 기본 배합비는 표2와 같다. 계량한 분말은 실온(24.5±0.5℃)에서 혼합한 후 1.3 kPa의 압력으로 타정(20.0±2.5℃)하여, 돌나물 캔디를 제조하였다.
돌나물 타정 캔디 제조를 위한 재료배합비
재료명 조성비(%)
Xylitol 43.25
돌나물 분말 50.00
무수포도당 2.00
유당 2.45
스테아린산 마그네슘 2.00
페퍼민트 0.20
수크랄로스 0.10
멘톨분말 0.25
냉각제(cooling agent) 0.10
 합계 100.00
돌나물 추출액이 alcohol dehyderogenase(ADH)와 acetaldehyde dehydrogenase ( ALDH ) 활성도에 미치는 효과
추출물이 ADH와 ALDH 활성도에 미치는 효과는 assay kits를 사용하여 제조사의 매뉴얼에 따라 측정하였다. 결과는 효소 반응 후에 reaction mixture에 남아있는 ethanol 및 acetaldehyde 농도로부터 산출하여 표시하였다. Dihydromyricetin (DHM, purity > 99%)을 양성대조구로 사용하였다. DHM과 추출물은 dimethyl sulfoxide (DMSO)에 각각 용해하여 사용하였다.
추출용매를 달리 하여 추출한 분획이 ADH와 ALDH 활성도에 미치는 효과를 측정한 결과는 도1과 같다. Simple batch extraction 법으로 추출하였을 때는 ethyl acetate 추출물 > ethanol 추출물 > 물 추출물 순으로 ADH, ALDH 활성도를 촉진하였다. 따라서 돌나물에 함유되어 있는 ADH와 ALDH 활성도를 증가시키는 물질을 추출할 때는 ethyl acetate를 사용하는 것이 바람직한 것으로 사료되었다.
초임계추출은 simple batch extraction보다 활성 물질을 추출하는 효율이 낮은 것으로 나타났다. 도1에서와 같이, simple batch extraction(ethanol)보다 SFE (#1~#9) 추출물의 ADH, ALDH 활성도 촉진효과가 낮았다. 초임계유체추출 만을 비교할 때는, ADH와 ALDH 활성도 촉진 물질의 추출 효과는 추출 온도에는 거의 영향을 받지 않는 것으로 나타났으나 추출 압력에는 양(positive)의 상관관계가 있는 것으로 나타났다. 즉, ADH 활성도를 촉진하는 물질의 추출과 추출압력 사이에는 강한 양의 상관관계 (
Figure pat00001
)가 성립되었다. 또한 ALDH 활성도를 촉진하는 물질의 추출과 추출압력 사이에도 강한 양의 상관관계 (
Figure pat00002
가 성립되었다. 따라서 에탄올 추출물(실온, simple batch extraction)을 감압농축한 후에 동결건조하고 분말화한 후에 돌나물 타정 캔디 제조에 사용하였다.
돌나물 타정 캔디가 알코올 분해 효소 활성에 미치는 영향
돌나물 캔디 2정(10 g)을 증류수에 현탁시킨 후 37℃에서 60분간 초음파(40 kHz) 추출하고 10분간 원심분리(3,000 rpm)한 후 상등액 만을 취해 효소활성 측정에 사용하였다. ADH와 ALDH 활성은 전술한 바와 같은 방법으로 측정하였다.
돌나물 캔디가 ADH와 ALDH 활성도에 주는 영향을 측정한 결과는 도2와 같다. 돌나물 분말이 함유되어 있지 않은 캔디를 대조구로 하였을 때 보다 돌나물 분말이 첨가된 경우는 ADH 활성은 약 25%, ALDH 활성은 약 20% 정도 증가하였다. 따라서 돌나물 캔디는 알코올 분해를 촉진하는 효과가 있는 것으로 나타났다.
돌나물 타정 캔디의 섭취가 알코올성 지방간을 예방하는 효과
웅성의 Sprague-Dawley rat(300.24±10.07 g)을 구입하여, 사육환경은 온도 20±2℃, 습도 55±1%(RH), 명암주기 12시간 간격으로 유지하였고, 설치류표준사료와 물을 자유급여(ad libitum)하여 1주일간의 적응기간을 거친 후, 18마리씩 대조구(control), 양성대조구(positive control), ethanol 투여구 및 ethanol-시료 투여구로 나누어 wire mesh bottom을 지닌 stainless steel cage에 한 마리씩 분리사육하였다. 대조구를 제외한 모든 실험구는 25% ethanol(5 mL/kg body weight)을, 실험구는 돌나물 캔디 2정(10 g)을 증류수 1 mL에 용해한 것을, 양성대조구는 3 mM dihydromyricetin(순도 > 99%)을 각각 경구투여하였다. 대조구는 돌나물 분말이 제외된 캔디를 증류수 1 mL에 용해하여 경구투여하였고, 실험 기간 동안(8주) 식이와 물은 공급하지 않았다. 동물실험은 실험동물자료협회의 원칙에 준하여 실험하였다.
8주간 ethanol을 투여한 결과, ethanol 투여구는 대조구에 비하여 체중이 감소하였다(표3). Ethanol의 과량 섭취에 의해 체중이 감소하는 것은 ethanol의 산화에 산소가 소비되고 대사율이 증가되어 microsome에서 ATP 생성이 저하되기 때문이다. 양성대조구 및 돌나물 캔디 처리구에서도 체중 감소 현상은 ethanol 처리구보다 유의적으로 적었다.
간조직의 중량 및 간 조직 내의 지질농도는 ethanol 투여에 의해 대조구보다 유의적으로 증가하였다. 돌나물 타정 캔디를 에탄올과 함께 급여하였을 때, 간 조직의 중량 및 간조직 내의 지방 함량의 증가가 완화되었다(표3, 표4).
Ethanol 투여구와 돌나물 타정 캔디 투여구에서 문맥주위성 (periportal)으로 간세포의 공포화(vacuolation)이 관찰되었다(도3). 공포 변성의 원인은 다양하지만, 일반적으로 glycogen이 미만성(diffuse)으로 축적되며, 문맥주위가 먼저 소모되는 경향을 보이므로 AL 및 SA group에서 관찰된 periportal pattern의 공포 변성은 알코올의 투여로 인한 지방변성(fatty change)인 것으로 추정하였다(표5). Co group에서도 간세포의 공포화가 관측되었으나, 미만성으로 관찰되었으며 AL group과 비교하여 공포가 작은 경향을 나타내었다. 이러한 특징으로 미루어 Co group엣 관측되는 공포화는 지방변성이 아닌 glycogen 축적(deposit)으로 추정되었다. 양성대조물질은 알코올에 의해 유발되는 지방간을 예방하는 것으로 관측되었다. 또한 알코올과 함께 돌나물 타정 캔디를 섭취함으로써 알코올에 의해 유발되는 지방간의 유발을 억제할 수 있는 것으로 나타났다.
알코올을 투여한 백서의 체중과 간중량에 미치는 돌나물 타정 캔디의 효과
Experimental groups Body weight (g) Liver weight (g/100g B.W.)
CO 258.75 ± 5.73a 3.27 ± 0.20a
AL 231.08 ± 13.13b 3.69 ± 0.21c
PC 240.82 ± 14.24bc 3.40 ± 0.18ab
SA 242.68 ± 12.63bc 3.44 ± 0.17ab
CO; control, AL; 25% ethanol loaded group, PC; dihydromyricetin treated group (positive control group), SA; sedum tablet candies treated group. Values are mean±standard deviation. Same superscript letters within a column denote values that were not significantly different, analyzed by ONE-WAY ANOVA and Duncan’s multiple range test (p < 0.05).
알코올을 투여한 백서 간조직의 지질농도
Experimental groups Cholesterol TG
CO 59.29±2.93a 43.76±2.18a
AL 85.18±4.90b 71.32±2.20b
PC 68.93±3.43c 50.94±2.09c
SA 67.94±4.82c 63.86±2.52d
CO; control, AL; 25% ethanol loaded group, PC; dihydromyricetin treated group (positive control group), SA; sedum tablet candies treated group. Values are mean±standard deviation. Same superscript letters within a column denote values that were not significantly different, analyzed by ONE-WAY ANOVA and Duncan’s multiple range test (p < 0.05).
알코올을 투여한 백서 간조직의 histological changes
Co Al PC SA
Vacuolation (Fatty change) 0 2+ 0 +1
CO; control, AL; 25% ethanol loaded group, PC; dihydromyricetin treated group (positive control group), SA; sedum tablet candies treated group.

Claims (4)

  1. 돌나물을 에탄올로 추출하여 감압농축한 후 동결건조하여 분말로 제조하는 단계
  2. 제1항에 있어서, ADH 및 ALDH 활성도를 촉진시키는 돌나물의 에탄올 추출분획을 분말화하는 단계
  3. 제1항에 있어서, 돌나물 에탄올 추출분말을 타정 캔디로 제조하는 단계
  4. 제2항에 있어서, 알코올성 지방간 발생을 예방하는 효능을 지닌 돌나물 타정 캔디의 제조
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KR20200140105A (ko) * 2019-06-05 2020-12-15 한국 한의학 연구원 수분초를 유효성분으로 포함하는 뼈 성장 촉진용 조성물

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