CN108186709A - 凹叶景天在制备治疗或预防酒精引起的高脂血症和/或酒精性肝病的药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医药技术领域,更具体涉及凹叶景天在制备治疗或预防酒精引起的高脂血症和/或酒精性肝病的药物中的应用。在凹叶景天具有抗肝炎作用的基础上,进一步扩展其在制备治疗或预防酒精性高脂血症和/或酒精性肝病药物中的作用,在实验过程中取得了显著的效果,疗效确定、无毒副作用,而且提取方法易于实施,应用前景广阔。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域,更具体涉及凹叶景天在制备治疗或预防酒精引起的高脂血症和/或酒精性肝病的药物中的应用。
背景技术
甘油三酯(TG)是血浆或血清中含有的脂类的一种,其与载脂蛋白结合形成脂蛋白才能溶于血浆,并进行转运和代谢。各种脂蛋白在血浆中有基本恒定的浓度以维持相互之间的平衡,某些血脂或脂蛋白高出正常范围则成为高脂血症或高脂血蛋白症。高血脂症是一种具有全身性影响的疾病,对身体的损害是慢性且遍布全身的。它的直接损害是加速全身动脉粥样硬化,而动脉硬化又能进一步引发肾功能衰竭等。大量研究资料表明,高血脂症是引发脑卒中、冠心病、心肌梗死、心脏猝死的重要因素。统计学结果表明过量饮酒更易引起高脂血症,因此对于饮酒甚至酗酒人群来说预防及治疗高脂血症的工作极其重要。
酒精性肝病(Alcoholic liver disease,ALD)是长期过量饮酒导致的肝脏疾病,初期表现为脂肪肝,进而可发展成酒精性肝炎和肝硬化,甚至恶化为肝癌,最终无法挽救。ALD在我国成人发病率约为2.2-8.6%,严重影响患者生活质量,并给家庭和社会造成沉重的经济负担。目前,在ALD治疗方面,除了戒酒和营养支持外,西医临床确切有效的药物很少,主要有糖皮质激素、己酮可可豆碱等,疗效有限,副作用较大。
凹叶景天(Sedum emarginatum)是景天科景天属的植物,分布广泛,易于存活,廉价易得。其性凉,味苦、酸;归心、肝、大肠经。已知的药用效果有具有清热解毒,凉血止血,止痛等功效,可用于治疗肝炎、痢疾、吐血、衄血、便血以及月经过多等症等。尚未发现其用于酒精性肝病或高脂血症的治疗。
本发明将凹叶景天制备成用于治疗或预防酒精引起的高脂血症和/或酒精性肝病的药物,对于饮酒导致的高脂血症和脂肪肝、肝炎有较好的治疗和缓解作用,能避免引发更严重的并发症,减慢脂肪肝恶化,减少肝硬化以及肝癌的发生。本发明将满足广大病人的需要,预计会有较好的经济效益和社会效益。
发明内容
本发明通过采取常见植物凹叶景天制备成药物来达到治疗或预防酒精引起的高脂血症和/或酒精性肝病的目的。
本发明通过采集新鲜凹叶景天叶和茎,将其洗净、沥干、匀浆成汁,即得到凹叶景天匀浆液。将上述所得凹叶景天匀浆液作用于酒精性高脂血症和脂肪肝的小鼠模型,实验结果表明凹叶景天匀浆液可以显著降低乙醇引起的肝脏甘油三酯蓄积,缓解乙醇引起的高脂血症。
本发明同时提供了凹叶景天多糖在制备治疗或预防酒精引起的肝炎的药物中的应用。
进一步的,所述凹叶景天多糖由以下方法制备得到:将凹叶景天干燥茎和叶混合物依次经石油醚、乙酸乙酯、甲醇各回流提取3次,然后用水在100℃下回流提取3次,合并得到水部位提取液,经木瓜蛋白酶水解、醇沉得粗多糖。
进一步的,每次提取时,所述石油醚、乙酸乙酯、甲醇的体积与凹叶景天干燥茎和叶总质量比均为10mL:1g。
进一步的,每次提取时,所述水的体积与凹叶景天干燥茎和叶总质量的比均为10mL:1g。
进一步的,所述经木瓜蛋白酶水解、醇沉的具体操作为:将水部位提取液浓缩至体积与凹叶景天干燥茎和叶总质量的比为(8-12)mL:1g,然后加入占水部位提取液浓缩液比例为0.5m/v%(m/v=g/mL)的木瓜蛋白酶,在pH为6-7、60℃条件下水解5h;然后灭活木瓜蛋白酶,过滤除去沉淀,在上清中加入乙醇使其中乙醇终浓度为75v/v%,沉淀12h,离心得到沉淀,沉淀依次用乙醇、丙酮、乙醚各洗3次,所得固体干燥后得到粗多糖。
与现有技术相比,本发明具有以下优点和效果:
1、扩展了常见植物凹叶景天的新用途;
2、凹叶景天制备成的药物治疗或预防酒精引起的高脂血症和脂肪肝效果显著,从凹叶景天中提取的凹叶景天多糖可以有效缓解酒精引起的脂肪化和肝炎;
3、凹叶景天,源自天然,来源广泛,价格便宜,单味药即可达到很好疗效,与现有药物相比,更易为患者接受。
附图说明
图1为实施例1的小鼠肝脏内甘油三酯检测结果,与空白对照组相比,**P<0.01;与模型组相比,##P<0.01。
图2为实施例1的小鼠肝脏冰冻切片的油红O染色结果,三角形表示细胞核,箭头表示油红O着色的脂滴。
图3为实施例2的小鼠肝脏HE染色图片,其中→指示炎性病灶;>指示脂滴。
具体实施方式
下面申请人将结合具体的实施例对本发明的技术方案做进一步的详细说明。应理解,以下内容不应以任何方式被理解为对本发明权利要求书请求保护范围的限制。
本发明实施例中所用生化试剂盒为组织甘油三酯酶法测定试剂盒,北京普利莱(APPLYGEN)基因技术有限公司,货号:E1003-2;
所用全自动生化仪为FUJIFILM DRI-CHEM 7000i全自动生化仪;
所用全自动快速研磨仪为JX-FSTPRP-24全自动快速研磨仪。
实施例1凹叶景天在制备治疗或预防酒精引起的小鼠高脂血症和脂肪肝药物中的应用:
采集新鲜凹叶景天的茎和叶,洗净,摊开晾干,切成小段,在研钵内初步捣碎,然后用全自动快速研磨仪进一步研磨匀浆,研磨过程中不加水,得到凹叶景天匀浆液,得到的匀浆液能通过12号小鼠灌胃针。
雌性昆明小鼠,体重为28-32g,分为5组:空白对照组、酒精模型对照组(模型组)、凹叶景天高剂量处理组、凹叶景天低剂量处理组、凹叶景天对照组,每组8只。
处理方式:
模型组小鼠每只灌胃给予5g/kg体重的乙醇(乙醇通过56度红星二锅头给予,以乙醇计量),之后立即灌胃给予0.2mL生理盐水。
凹叶景天处理组每次先灌胃给予5g/kg体重的乙醇(乙醇通过56度红星二锅头给予,以乙醇计量),之后高剂量处理组每只立即灌胃给予0.2mL上述制备好的凹叶景天匀浆液,低剂量处理组每只灌胃给予0.1mL上述制备好的凹叶景天匀浆液;凹叶景天对照组每只先灌胃给予0.3mL生理盐水,之后立即每只给予0.2mL上述制备好的凹叶景天匀浆液;空白对照组每只灌胃给予0.5mL的生理盐水。以上5组处理均每12h灌胃1次,共3次,最后1次灌胃4h后,眼球取血,处死动物后取肝脏。
将取出的血样于4℃冰箱中静置8小时,然后以1000rpm离心10min后取血清,用全自动生化仪检测生化指标,结果如表1,检测了甘油三酯(TG)、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)等三项指标,其中甘油三酯水平在各组差异较大:与空白对照组相比,模型组的血甘油三酯浓度显著提高;而与模型组相比,凹叶景天低剂量处理组血甘油三酯水平有降低趋势,高剂量组能显著降低血甘油三酯水平,说明凹叶景天匀浆液对乙醇引起的高脂血症有较好的缓解作用。
各组取部分肝脏匀浆,用试剂盒测定其中甘油三酯水平,结果见图1,与空白对照组相比,模型组小鼠肝脏甘油三酯水平显著升高;低剂量和高剂量凹叶景天处理组与模型组相比,小鼠肝脏甘油三酯水平降低,P<0.01,可以看出,低剂量和高剂量凹叶景天匀浆液均可以显著降低乙醇引起的肝脏甘油三酯蓄积。各组另取部分肝脏,制作成厚8μm冰冻切片,进行油红O染色试验,并用苏木精进行复染以标记细胞核,结果如图2所示,与空白对照组相比,模型组油红O着色明显提高;而与模型组相比,低剂量和高剂量凹叶景天处理组油红O着色明显变浅,进一步说明凹叶景天匀浆液可以显著降低乙醇引起的肝脏甘油三酯蓄积。
表1小鼠血生化指标检测结果(Mean±SD,n=7-8)
GPT:谷丙转氨酶;GOT:谷草转氨酶;TG:甘油三酯;与空白对照组相比,*P<0.05;与模型组相比,#P<0.05。
实施例2凹叶景天多糖在制备治疗或预防酒精引起的小鼠肝炎药物中的应用:
取370g干燥凹叶景天的地上部分(茎和叶),粉碎,依次用石油醚、乙酸乙酯、甲醇于60℃分别回流提取3次,每次加入3.7L溶剂,各溶剂的三次提取液合并,然后用水在100℃回流提取3次,每次加入3.7L水,将3次提取液合并,得到水部位提取液。分别将石油醚、乙酸乙酯、甲醇提取液浓缩成浸膏、干燥,得石油醚部位4.1g,乙酸乙酯部位12.2g,甲醇部位52.0g。
将水部位提取液浓缩至3L,加入15g木瓜蛋白酶(南宁市庞博生物工程有限公司,10万u/g,批号:16042338)在pH为6.5(必要时,用氢氧化钠或者盐酸调节pH)、60℃条件下水解5h;然后将其加热至100℃,保持10min灭活木瓜蛋白酶,过滤除去沉淀,在上清中加入乙醇使其中乙醇终浓度为75v/v%,沉淀12h,离心得到沉淀,接着依次用乙醇、丙酮、乙醚各洗3次,所得固体干燥后得到凹叶景天粗多糖30.6g,以葡萄糖为标准品,用苯酚-硫酸法测定粗多糖中多糖含量为73.8%。
实验动物:昆明种雌性小鼠,体重为28-32g,分为6组:空白对照组(8只动物)、酒精模型对照组(12只动物)、石油醚部位处理组(8只动物)、乙酸乙酯部位处理组(7只动物)、甲醇部位处理组(8只动物)、水部位处理组(8只动物)。
方法:
空白对照组每只灌胃给予0.5mL/次的生理盐水,连续9次,每12h灌胃一次。
酒精模型对照组小鼠每只灌胃给予5g/kg体重的乙醇(乙醇通过56度红星二锅头给予,以乙醇计量),连续9次,每12h灌胃一次。
各部位处理组分别将上述制备的石油醚部位、乙酸乙酯部位、甲醇部位、凹叶景天粗多糖(水部位)浮于56度红星二锅头中,各部位药物的剂量为100mg/kg/次,每隔12h小鼠灌胃给予56度红星二锅头(折合乙醇5g/kg体重),连续9次,第3次和第7次灌胃的同时,每只小鼠腹腔注射10mg/kg剂量的LPS(脂多糖)。
记录动物死亡率:空白对照组无动物死亡,模型组动物死亡率为7/12,各部位处理组(石油醚部位、乙酸乙酯部位、甲醇部位、水部位)死亡率分别为1/8、1/7、4/8、1/8。
以上6组在第9次灌胃4h后,处死剩余存活的动物,取肝脏进行相应指标检测。肝脏切片HE染色显示(图3),各部位均在不同程度上缓解脂肪化和炎细胞浸润,其中水部位的脂肪化和炎性病灶均最少。
Claims (8)
1.凹叶景天在制备治疗或预防酒精引起的高脂血症和/或酒精性肝病的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述凹叶景天是所述药物的唯一活性成分。
3.根据权利要求1或2所述的应用,其特征在于,所述凹叶景天的用药部位为茎和叶。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,将凹叶景天经如下方法制备成凹叶景天匀浆液:采集凹叶景天的茎和叶,洗净后,摊开沥干,切成段后匀浆,得到凹叶景天匀浆液。
5.凹叶景天多糖在制备治疗或预防酒精引起的肝炎的药物中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于:所述凹叶景天多糖提取自凹叶景天的茎和叶。
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,所述凹叶景天多糖由以下方法制备得到:将凹叶景天的干燥茎和叶依次经石油醚、乙酸乙酯、甲醇各回流提取3次,然后用水在100℃下回流提取3次,得到水部位提取液,经木瓜蛋白酶水解、醇沉得粗多糖。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述木瓜蛋白酶水解、醇沉的具体操作为:将水部位提取液浓缩至体积与凹叶景天干燥茎和叶总质量的比为(8-12)mL:1g,加入占水部位提取液浓缩液比例0.5 m/v%的木瓜蛋白酶在pH为6-7、60℃条件下水解5 h;然后灭活木瓜蛋白酶,过滤除去沉淀,在上清中加入乙醇使乙醇终浓度为75v/v%,沉淀12 h,离心得到沉淀,洗涤、干燥后得到粗多糖。
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