KR20170020868A - 항-폴레이트 수용체 알파 (fra) 항체-약물 컨쥬게이트 및 그것의 사용 방법 - Google Patents

항-폴레이트 수용체 알파 (fra) 항체-약물 컨쥬게이트 및 그것의 사용 방법 Download PDF

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쉬-야오 린
유-차이 흐시에
치우-첸 후앙
슈-화 리
유-윙 차이
펭-린 치앙
리-안 후
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바이오얼라이언스 씨.브이.
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Abstract

본 개시는 친수성 자가-희생 링커를 포함하는 항-폴레이트 수용체 알파 (FRA) 항체-약물 컨쥬게이트를 제공한다. 본 개시는 추가로 암을 치료하기 위한 조성물 및 방법을 제공한다.

Description

항-폴레이트 수용체 알파 (FRA) 항체-약물 컨쥬게이트 및 그것의 사용 방법{ANTI-FOLATE RECEPTOR APLHA (FRA) ANTIBODY-DRUG CONJUGATES AND METHODS OF USING THEREOF}
관련 출원에 대한 교차 -참조
본 출원은 2014년 6월 20일에 출원된 미국 임시 출원 번호 62/015,321의 우선권 유익을 주장하며, 이 출원은 본원에 전체 내용이 참조로 포함된다.
ASCII 텍스트 파일 상의 서열 목록의 제출
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기술분야
본 발명은 암 치료제 분야에 있고, 항체-약물 컨쥬게이트 (ADC) 포맷을 통하여 암세포에 특이적으로 세포독성 약물을 전달하기 위한 효능 및 특이성을 제공한다.
항체-약물 컨쥬게이트 (ADC)는 단클론성 항체 (mAb)의 특이성을 세포독성 분자의 효능과 조합시키는 치료제의 한 부류이다. ADC의 사용은 컨쥬게이팅된 세포독성제에 의한 항체의 암 사멸 활성을 강화시키는 한편, 표적-특이적 전달은 유리 독성제에 대한 노출에 의해 유발된 전신적 독성을 피하게 해준다. 2014년 5월 현재, 2개의 ADC가 FDA에 의해 인간 암치료용으로 승인받았다. 세포독성제 MMAE와 컨쥬게이팅된 항-CD30 항체인 아드세트리스 (Adcetris) (브렌툭시맙 베도틴 또는 SGN-35)는 CD30-포지티브 재발성 림프종을 치료하기 위해 고안된 것이다. 세포독성제 DM1과 컨쥬게이팅된 항-HER2 항체인 카드실라 (Kadcyla)(T-DM1)은 HER2-포지티브 전이성 유방암을 치료하기 위해 고안된 것이다.
링커 기술은 ADC 효능, 특이성 및 안전성에 현저하게 영향을 미친다. 효소-불안정성 링커는 약물 방출의 제어를 이루기 위해 세포 내부 및 외부에 있는 프로테아제의 차등 활성을 활용한다. 약물은 펩티드 결합을 통해 항체에 컨쥬게이팅될 수 있고, 세포 내부에 존재하는 리소좀성 프로테아제의 작용에 의해서만, 특정 종양 유형에서 상승된 수준으로 특이적으로 절단될 수 있다 (Koblinski et al (2000) Clin. Chem. Acta 291:113-135). 이것은 건강한 조직에 대한 손상을 제한하기 위한 혈류 중의 링커의 안정성을 보장한다. 그러나, 일부 효소-불안정성 링커들의 증가된 소수성은 ADC, 특히 강력하게 소수성인 약물과의 ADC의 응집을 유발할 수 있다. 친수성 자가-희생 링커 (self-immolative linker)는 특이적인 효소-불안정성 디자인을 통해 더 나은 혈청 안정성을 제공할 수 있을 뿐 아니라, 이종성 암세포에 대한 방관자 효과를 통해 더 나은 효능을 이룰 수 있다.
막 단백질인 폴레이트 수용체 알파 (FRA)는 엽산에 고친화성으로 결합하고 수용체-중재된 세포 이물 흡수를 통해 폴레이트의 세포 흡수를 중재한다 (Leamon et al., 1991, PNAS 88:5572-5576). FRA의 과잉발현은 90%의 상피성 난소암뿐 아니라, 수많은 다른 암, 이를테면 자궁내막암, 신장암, 폐암, 중피종, 유방암, 뇌암 및 골수성 백혈병에서 발견된 반면, 대부분의 정상 조직은 무시해도 좋을 수준으로 낮게 발현한다 (Coney et al., 1991, Cancer Res. 51:6125-6132). 암 대 정상 조직에서 FRA의 차등 발현 프로필은 Ab-기반 치료제의 개발에 정당성을 부여하였다. 쥐과 단클론성 항-FRA 항체의 인간화된 형태는 예비인산 연구에서 효과적인 것으로 밝혀졌고 (Ebel et al., 2007, Cancer Immun 7:1-8), 현재 FRA 발현 종양을 가진 환자들에게서 평가되고 있다 (Kalli et al., 2007, Curr Opin Investig 8:1067-1073). 나아가, 세포 이물 흡수를 중재하는 FRA의 능력은 암-표적화 ADC의 개발을 위한 매력적인 후보로 만든다. 오늘날까지, 다양한 약물 컨쥬게이트 및 항-FRA 항체들이 임상 실험에서 시험되고 있고 안전성이 증명되었다 (Xia et al., 2010, J Med Chem. 53:6811-6824; Zacchetti et al., 2009, Nucl Med Biol. 36: 759-770).
항체-약물 컨쥬게이트 (ADC) 포맷을 통해 암세포에 세포독성 약물을 전달할 수 있는 향상된 효능을 가지는 항암 치료제에 대한 요구가 있다.
본 개시의 화합물들은 약물 부분, 선택된 세포 집단 (예컨대 폴레이트 수용체 알파 (FRA)를 발현하는 세포 집단)을 표적화할 수 있는 항체인 표적화 부분, 및 아실 단위, 약물 부분과 표적화 부분 (예컨대 항-FRA 항체) 사이에 거리를 제공하기 위한 임의의 스페이서 단위, 적절한 조건하에서 절단될 수 있는 펩티드 링커, 친수성 자가-희생 링커 및 임의의 제 2 자가-희생 스페이서 또는 고리화 자가-제거 링커를 함유하는 링커를 포함한다.
본 개시는 다음 식 (I)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체를 제공한다:
Figure pct00001
식에서:
D는 약물 부분이고;
T는 폴레이트 수용체 알파 (FRA) (예컨대 인간 FRA)에 특이적으로 결합하는 항체인 표적화 부분이며;
X는 친수성 자가-희생 링커이고;
L1은 결합, 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커이며;
L2는 결합 또는 제 2 자가-희생 링커이고;
이때 만약 L1이 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커라면 L2는 결합이며;
L2가 제 2 자가-희생 링커라면 L1은 결합이고;
L3은 펩티드 링커이며;
L4는 결합 또는 스페이서이고; 및
A는 아실 단위이다.
본 개시는 식 (II)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체를 제공한다:
Figure pct00002
식에서:
D는 약물 부분이고;
T는 폴레이트 수용체 알파 (FRA) (예컨대 인간 FRA)에 특이적으로 결합하는 항체인 표적화 부분이며;
R1은 수소, 비치환 또는 치환된 C1-3 알킬 또는 비치환 또는 치환된 헤테로사이클릴이고;
L1은 결합, 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커이며;
L2는 결합 또는 제 2 자가-희생 링커이고;
이때 만약 L1이 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커라면 L2는 결합이며;
L2가 제 2 자가-희생 링커라면 L1은 결합이고;
L3은 펩티드 링커이며;
L4는 결합 또는 스페이서이고; 및
A는 아실 단위이다.
본 개시는 식 (Ia)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체를 제공한다:
Figure pct00003
(Ia)
식에서:
p는 1 내지 20이고;
D는 약물 부분이며;
T는 폴레이트 수용체 알파 (FRA) (예컨대 인간 FRA)에 특이적으로 결합하는 항체인 표적화 부분이고;
X는 친수성 자가-희생 링커이며;
L1은 결합, 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커이고;
L2는 결합 또는 제 2 자가-희생 링커이며;
이때 만약 L1이 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커라면 L2는 결합이고;
L2가 제 2 자가-희생 링커라면 L1은 결합이며;
L3은 펩티드 링커이고;
L4는 결합 또는 스페이서이며; 및
A는 아실 단위이다.
본 개시는 식 (IIa)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체를 제공한다:
Figure pct00004
(IIa)
식에서:
p는 1 내지 20이고;
D는 약물 부분이며;
T는 폴레이트 수용체 알파 (FRA) (예컨대 인간 FRA)에 특이적으로 결합하는 항체인 표적화 부분이고;
R1은 수소, 비치환 또는 치환된 C1-3 알킬 또는 비치환 또는 치환된 헤테로사이클릴이며;
L1은 결합, 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커이고;
L2는 결합 또는 제 2 자가-희생 링커이며;
이때 만약 L1이 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커라면 L2는 결합이고;
L2가 제 2 자가-희생 링커라면 L1은 결합이며;
L3은 펩티드 링커이고;
L4는 결합 또는 스페이서이며; 및
A는 아실 단위이다.
상기 화합물의 특정 구체예에서, p는 1 내지 4이다. 특정 구체예에서, L1은 결합이다. 특정 구체예에서, L1은 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커이다. 특정 구체예에서, L1은 아미노벤질옥시카르보닐 링커이다. 특정 구체예에서, L1은:
Figure pct00005
,
Figure pct00006
,
Figure pct00007
및
Figure pct00008
(식에서 n은 1 또는 2임)
으로 구성되는 군으로부터 선택된다.
특정 구체예에서, L1은
Figure pct00009
,
Figure pct00010
및
Figure pct00011
으로 구성되는 군으로부터 선택된다.
상기 화합물의 특정 구체예에서, L2는 결합이다. 특정 구체예에서, L2는 제 2 자가-희생 링커이다. 특정 구체예에서, L2는 아미노벤질옥시카르보닐 링커이다. 특정 구체예에서, L2는 다음으로부터 선택된다:
Figure pct00012
,
Figure pct00013
,
Figure pct00014
및
Figure pct00015
(식에서 n은 1 또는 2임).
상기 화합물들의 특정 구체예에서, L3은 1 내지 10 아미노산 잔기의 펩티드 링커이다. 특정 구체예에서, L3은 2 내지 4 아미노산 잔기의 펩티드 링커이다. 특정 구체예에서, L3은 적어도 하나의 라이신 또는 아르기닌 잔기를 포함하는 펩티드 링커이다. 특정 구체예에서, L3은 라이신, D-라이신, 시트룰린, 아르기닌, 프롤린, 히스티딘, 오르니틴 및 글루타민으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함하는 펩티드 링커이다. 특정 구체예에서, L3은 발린, 아이소류신, 페닐알라닌, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 알라닌, 류신, 트립토판 및 타이로신으로부터 선택된 아미노산을 포함하는 펩티드 링커이다. 특정 구체예에서, L3은 발린-시트룰린, 프롤린-라이신, 메티오닌-D-라이신, 아스파라긴-D-라이신, 아이소류신-프롤린, 페닐알라닌-라이신 및 발린-라이신으로부터 선택된 다이펩티드이다. 특정 구체예에서, L3은 발린-시트룰린이다.
상기 화합물들의 특정 구체예에서, L4는 결합이다. 특정 구체예에서, L4는 스페이서이다. 특정 구체예에서, 스페이서는 폴리알킬렌 글리콜, 알킬렌, 알케닐렌, 알키닐렌 또는 폴리아민이다. 특정 구체예에서, L4는 L4a-C(O), L4a-C(O)-NH, L4a-S(O)2 또는 L4a-S(O)2-NH이고, 이때 각각의 L4a는 독립적으로 폴리알킬렌 글리콜, 알킬렌, 알케닐렌, 알키닐렌 또는 폴리아민이다. 특정 구체예에서, L4는 L4a-C(O)이고, 이때 L4a는 독립적으로 폴리알킬렌 글리콜, 알킬렌, 알케닐렌, 알키닐렌 또는 폴리아민이다. 특정 구체예에서, L4는 L4a-C(O)이고, 이때 L4a는 폴리알킬렌 글리콜이다. 특정 구체예에서, L4는 L4a-C(O)이고, 이때 L4a는 폴리에틸렌 글리콜이다. 특정 구체예에서, 스페이서는 식 -CH2-(CH2-O-CH2)m-CH2-C(O)-의 것이고, 이때 m은 0 내지 30의 정수이다. 특정 구체예에서, L4는 L4a-C(O)이고, 이때 L4a는 알킬렌이다.
상기 화합물들의 특정 구체예에서, A는
Figure pct00016
,
Figure pct00017
,
Figure pct00018
,
Figure pct00019
,
Figure pct00020
,
Figure pct00021
,
Figure pct00022
및
Figure pct00023
으로 구성되는 군으로부터 선택되며;
식에서 각각의 Q2는 NH 또는 O이고, 각각의 q는 독립적으로 1 내지 10의 정수이며, 각각의 q1은 독립적으로 1 내지 10의 정수이다. 특정 구체예에서, q는 2, 3, 4 또는 5이다. 특정 구체예에서, q1은 2, 3, 4 또는 5이다. 특정 구체예에서, A는
Figure pct00024
및
Figure pct00025
으로 구성되는 군으로부터 선택되며, 식에서 각각의 Q2는 독립적으로 NH 또는 O이고 각각의 q는 독립적으로 1 내지 10의 정수이다. 특정 구체예에서, q는 2, 3, 4 또는 5이다. 특정 구체예에서, A는
Figure pct00026
,
Figure pct00027
,
Figure pct00028
,
Figure pct00029
,
Figure pct00030
및
Figure pct00031
으로 구성되는 군으로부터 선택되고, 식에서 각각의 Q2는 독립적으로 NH 또는 O이다.
상기 화합물들의 특정 구체예에서, 항-폴레이트 수용체 알파 (FRA) 항체의 중쇄의 하나 이상의 아미노산 잔기는 하나 이상의 시스테인 잔기로 대체된다. 특정 구체예에서, 항체는 중쇄 불변 영역 (예컨대 인간 IgG의 중쇄 불변 영역)을 포함하고, 이때 중쇄 불변 영역 (예컨대 CH1, CH2 또는 CH3)의 하나 이상의 아미노산 잔기는 하나 이상의 시스테인 잔기로 대체된다. 특정 구체예에서, 항체는 중쇄 불변 영역 (예컨대 인간 IgG의 중쇄 불변 영역)을 포함하고, 이때 중쇄 불변 영역의 위치 155, 157, 165, 169, 197, 199 및 442로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기는 하나 이상의 시스테인 잔기로 대체되며, 이때 넘버링은 Kabat의 EU 색인에 따른다. 특정 구체예에서, 항체는 인간 IgG1, 인간 IgG2, 인간 IgG3, 인간 IgG4 또는 인간 IgG4p의 중쇄 불변 영역을 포함하며, 이때 중쇄 불변 영역의 위치 155, 157, 165, 169, 197, 199 및 442로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기는 하나 이상의 시스테인 잔기로 대체되며, 이때 넘버링은 Kabat의 EU 색인에 따른다. 특정 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:32 또는 SEQ ID NO:33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함하고, 이때 중쇄 불변 영역의 위치 155, 157, 165, 169, 197, 199 및 442로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기는 하나 이상의 시스테인 잔기로 대체되며, 이때 넘버링은 Kabat의 EU 색인에 따른다.
상기 화합물들의 특정 구체예에서, 항-폴레이트 수용체 알파 (FRA) 항체의 경쇄의 하나 이상의 아미노산 잔기는 시스테인 잔기들로 대체된다. 특정 구체예에서, 항체는 경쇄 불변 영역 (예컨대 인간 카파 경쇄 불변 영역)을 포함하고, 이때 항체의 경쇄 불변 영역의 하나 이상의 아미노산 잔기는 하나 이상의 시스테인 잔기로 대체된다. 특정 구체예에서, 항체는 경쇄 불변 영역을 포함하고, 경쇄 불변 영역의 위치 201 및 206으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기는 하나 이상의 시스테인 잔기로 대체되며, 이때 넘버링은 Kabat의 EU 색인을 따른다. 특정 구체예에서, 항체는 인간 IgG1, 인간 IgG2, 인간 IgG3, 인간 IgG4 또는 인간 IgG4p의 경쇄 불변 영역 (예컨대 카파 경쇄 불변 영역)을 포함하며, 이때 경쇄 불변 영역의 위치 201 및 206으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기는 하나 이상의 시스테인 잔기로 대체되며, 이때 넘버링은 Kabat의 EU 색인에 따른다. 특정 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:34의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함하고, 이때 경쇄 불변 영역의 위치 201 및 206으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기는 하나 이상의 시스테인 잔기로 대체되며, 이때 넘버링은 Kabat의 EU 색인에 따른다.
상기 화합물들의 특정 구체예에서, D는 첨가된 시스테인 잔기에 의해 (또는 잔기를 통해) T에 연결된다. 일부 구체예에서, D는 링커 부분 (-A-L4-L3-L2-X-L1-)을 통해 연결된 첨가된 시스테인 잔기의 티올기를 통해 T에 연결된다. 특정 구체예에서, D는 아미노-함유 약물 부분이고, 이때 약물은 아미노기를 통해 L1 또는 X에 연결된다. 특정 구체예에서, D는 듀오카르마이신, 돌라스타틴, 튜불라이신, 독소루비신 (DOX), 파클리탁셀 또는 미토마이신 C (MMC) 또는 그것들의 아미노 유도체이다. 특정 구체예에서, D는
Figure pct00032
및
Figure pct00033
으로 구성되는 군으로부터 선택된 듀오카르마이신의 아미노 유도체이다.
특정 구체예에서, D는 돌라스타틴의 아미노 유도체 (예컨대 모노메틸 돌라스타틴 10)이다:
Figure pct00034
.
특정 구체예에서, A-L4-L3-L2-는
Figure pct00035
,
Figure pct00036
,
Figure pct00037
,
Figure pct00038
또는
Figure pct00039
이다.
특정 구체예에서, A-L4-L3-L2-X-L1-D는
Figure pct00040
이다.
특정 구체예에서, A-L4-L3-L2-X-L1-D는
Figure pct00041
이다.
특정 구체예에서, A-L4-L3-L2-X-L1-D는
Figure pct00042
이다.
상기 화합물들의 특정 구체예에서, 항-폴레이트 수용체 알파 (FRA) 항체는 인간화된 항체, 키메라 항체 또는 인간 항체이다.
특정 구체예에서, 항-폴레이트 수용체 알파 (FRA) 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 이때
(1) 중쇄 가변 영역은 항체 hLK26의 3개의 중쇄 HVR (예컨대 SEQ ID NO:14, 15 및 16)을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 항체 hLK26의 3개의 경쇄 HVR (예컨대 SEQ ID NO:17, 18 및 19)을 포함하거나;
(2) 중쇄 가변 영역은 항체 26B3의 3개의 중쇄 HVR (예컨대 SEQ ID NO:20, 21 및 22)을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 항체 26B3의 3개의 경쇄 HVR (예컨대 SEQ ID NO:23, 24 및 25)을 포함하거나; 또는
(3) 중쇄 가변 영역은 항체 hMov19의 3개의 중쇄 HVR (예컨대 SEQ ID NO:26, 27 및 28)을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 항체 hMov19의 3개의 경쇄 HVR (예컨대 SEQ ID NO:29, 30 및 31)을 포함한다.
특정 구체예에서, 항-폴레이트 수용체 알파 (FRA) 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 이때
(1) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:8의 아미노산 서열의 3개의 중쇄 HVR (예컨대 SEQ ID NO:14, 15 및 16)을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:9의 아미노산 서열의 3개의 경쇄 HVR (예컨대 SEQ ID NO:17, 18 및 19)을 포함하거나;
(2) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:10의 아미노산 서열의 3개의 중쇄 HVR (예컨대 SEQ ID NO:20, 21 및 22)을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:11의 아미노산 서열의 3개의 경쇄 HVR (예컨대 SEQ ID NO:23, 24 및 25)을 포함하거나; 또는
(3) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:12의 아미노산 서열의 3개의 중쇄 HVR (예컨대 SEQ ID NO:26, 27 및 28)을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:13의 아미노산 서열의 3개의 경쇄 HVR (예컨대 SEQ ID NO:29, 30 및 31)을 포함한다.
특정 구체예에서, 항-폴레이트 수용체 알파 (FRA) 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 이때
(1) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:8의 아미노산 서열을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:9의 아미노산 서열을 포함하거나;
(2) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:10의 아미노산 서열을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:11의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(3) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:12의 아미노산 서열을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:13의 아미노산 서열을 포함한다.
특정 구체예에서, 항-폴레이트 수용체 알파 (FRA) 항체는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 이때
(1) 중쇄는 SEQ ID NO:1의 아미노산 서열을 포함하고 및/또는 경쇄는 SEQ ID NO:3의 아미노산 서열을 포함하거나;
(2) 중쇄는 SEQ ID NO:2의 아미노산 서열을 포함하고 및/또는 경쇄는 SEQ ID NO:3의 아미노산 서열을 포함하거나;
(3) 중쇄는 SEQ ID NO:10의 아미노산 서열을 포함하는 가변 영역 및 SEQ ID NO:32 또는 33의 아미노산 서열을 포함하는 불변 영역을 포함하고 및/또는 경쇄는 SEQ ID NO:11의 아미노산 서열을 포함하는 가변 영역 및 SEQ ID NO:34의 아미노산 서열을 포함하는 불변 영역을 포함하거나; 또는
(4) 중쇄는 SEQ ID NO:6의 아미노산 서열을 포함하고 및/또는 경쇄는 SEQ ID NO:7의 아미노산 서열을 포함한다.
특정 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:32 또는 SEQ ID NO:33의 아미노산 서열을 포함하는 인간 중쇄 불변 영역 및 SEQ ID NO:34의 아미노산 서열을 포함하는 인간 카파 경쇄 불변 영역을 포함하고, 이때 중쇄 불변 영역의 T155, S157, S165, T169, T197, T199 및 S442로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기 및/또는 경쇄 불변 영역의 L201 및 T206으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기는 시스테인 잔기로 대체되며, 이때 넘버링은 Kabat의 EU 색인을 따른다. 이들 구체예중 일부 구체예에서, 중쇄 불변 영역의 T155, S157, S165, T169, T197, T199 및 S442로부터 선택된 적어도 하나 (예컨대 하나)의 아미노산 잔기 및/또는 경쇄 불변 영역의 L201 및 T206으로부터 선택된 적어도 하나 (예컨대 하나)의 아미노산 잔기는 시스테인 잔기로 대체된다. 특정 구체예에서, 항체는 Fab, Fab', F(ab')2, Fv 및 ScFv로 구성되는 군으로부터 선택된 항원-결합 단편이다.
본 개시는 상기에서 및 본원에서 기술된 화합물, 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체; 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
본 개시는 본원에 기술된 화합물, 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체의 세포를 사멸하기에 충분한 양을 인간 폴레이트 수용체 알파 (FRA)를 발현하는 세포에 투여하는 단계를 포함하는, 인간 FRA를 발현하는 세포를 사멸하는 방법을 제공한다. 특정 구체예에서, 그 세포는 암세포이다. 특정 구체예에서, 암세포는 개체 (예컨대 인간)에 있다. 특정 구체예에서, 암세포는 림프종 또는 백혈병 세포이다. 특정 구체예에서, 암세포는 폴레이트 수용체 알파 (FRA)-포지티브 림프종 또는 폴레이트 수용체 알파 (FRA)-포지티브 백혈병 세포이다.
본 개시는 본원에 기술된 화합물, 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체의 암의 치료 방법을 제공한다. 특정 구체예에서, 개체는 암을 가지고 있거나 암으로 진단되었다. 특정 구체예에서, 암은 난소암, 폐암, 자궁암, 고환 융모막 암종, 상의세포종, 중피종, 유방암, 대장암 또는 시장 세포 암종이다. 일부 구체예에서, 암은 폴레이트 수용체 알파 (FRA)-포지티브 암이다. 특정 구체예에서, 개체는 인간이다.
본 개시는 본원에 기술된 화합물, 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체를 포함하는 키트를 제공한다. 특정 구체예에서, 키트는 암 치료에 사용하기 위한 지침서를 더 포함한다.
본원에는 항체를 화합물 Z:
Figure pct00043
(화합물 Z) 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체와 반응시키는 단계를 포함하는, 다음 식 (II)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체의 제조 방법이 제공된다:
Figure pct00044
식에서:
D는 약물 부분이고;
T는 폴레이트 수용체 알파 (FRA) (예컨대 인간 FRA)에 특이적으로 결합하는 항체인 표적화 부분이며;
R1은 수소, 비치환 또는 치환된 C1-3 알킬 또는 비치환 또는 치환된 헤테로사이클릴이고;
L1은 결합, 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커이며;
L2는 결합 또는 제 2 자가-희생 링커이고;
이때 만약 L1이 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커라면 L2는 결합이며;
L2가 제 2 자가-희생 링커라면 L1은 결합이고;
L3은 펩티드 링커이며;
L4는 결합 또는 스페이서이고; 및
A는 아실 단위이다.
본원에는 항체를 화합물 Z:
Figure pct00045
(화합물 Z) 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체와 반응시키는 단계를 포함하는, 다음 식 (IIa)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체의 제조 방법이 제공된다:
Figure pct00046
(IIa)
식에서:
p는 1 내지 20이고;
D는 약물 부분이며;
T는 폴레이트 수용체 알파 (FRA) (예컨대 인간 FRA)에 특이적으로 결합하는 항체인 표적화 부분이고;
R1은 수소, 비치환 또는 치환된 C1-3 알킬 또는 비치환 또는 치환된 헤테로사이클릴이며;
L1은 결합, 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커이고;
L2는 결합 또는 제 2 자가-희생 링커이며;
이때 만약 L1이 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커라면 L2는 결합이고;
L2가 제 2 자가-희생 링커라면 L1은 결합이며;
L3은 펩티드 링커이고;
L4는 결합 또는 스페이서이며; 및
A는 아실 단위이다.
본원의 방법 및 과정의 특정 구체예에서, 항체는 하나 이상의 설프하이드릴기를 포함한다. 특정 구체예에서, 항-폴레이트 수용체 알파 (FRA) 항체의 중쇄의 하나 이상의 아미노산 전기는 하나 이상의 시스테인 잔기로 대체된다. 특정 구체예에서, 중쇄 불변 영역 (예컨대 CH1, CH2 또는 CH3)의 하나 이상의 아미노산 잔기는 하나 이상의 시스테인 잔기로 대체된다. 특정 구체예에서, 항체는 중쇄 불변 영역 (예컨대 인간 IgG의 중쇄 불변 영역)을 포함하고, 이때 중쇄 불변 영역의 위치 155, 157, 165, 169, 197, 199 및 442로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기는 하나 이상의 시스테인 잔기로 대체되며, 이때 넘버링은 Kabat의 EU 색인을 따른다. 특정 구체예에서, 항체는 인간 IgG1, 인간 IgG2, 인간 IgG3, 인간 IgG4 또는 인간 IgG4p의 중쇄 불변 영역을 포함하며, 이때 중쇄 불변 영역의 위치 155, 157, 165, 169, 197, 199 및 442로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기는 하나 이상의 시스테인 잔기로 대체되고, 이때 넘버링은 Kabat의 EU 색인에 따른다. 특정 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:32 또는 SEQ ID NO:33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함하고, 이때 중쇄 불변 영역의 155, 157, 165, 169, 197, 199 및 442로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기는 하나 이상의 시스테인 잔기로 대체되며, 이때 넘버링은 Kabat의 EU 색인에 따른다.
본원의 방법 및 과정의 특정 구체예에서, 항체의 경쇄의 하나 이상의 아미노산 잔기는 하나 이상의 시스테인 잔기로 대체된다. 특정 구체예에서, 항체의 경쇄 불변 영역의 하나 이상의 아미노산 잔기는 하나 이상의 시스테인 잔기로 대체된다. 특정 구체예에서, 항체는 경쇄 불변 영역 (예컨대 인간 카파 경쇄 불변 영역)을 포함하고, 이때 경쇄 불변 영역의 위치 201 및 206으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기는 하나 이상의 시스테인 잔기로 대체되며, 여기서 넘버링은 Kabat의 EU 색인에 따른다. 특정 구체예에서, 항체는 인간 IgG1, 인간 IgG2, 인간 IgG3, 인간 IgG4 또는 인간 IgG4p의 경쇄 불변 영역을 포함하고, 이때 경쇄 불변 영역의 위치 201 및 206으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기는 하나 이상의 시스테인 잔기로 대체되며, 여기서 넘버링은 Kabat의 EU 색인에 따른다. 특정 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:34의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함하고, 이때 경쇄 불변 영역의 위치 201 및 206으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기는 하나 이상의 시스테인 잔기로 대체되며, 여기서 넘버링은 Kabat의 EU 색인에 따른다.
본원의 방법 또는 과정의 특정 구체예에서, D는 첨가된 시스테인 잔기에 의해 (또는 잔기를 통해) T에 연결된다. 일부 구체예에서, D는 링커 부분 (-A-L4-L3-L2-X-L1-)을 통해 연결된 첨가된 시스테인 잔기의 티올기를 통해 T에 연결된다.
본원의 방법 또는 과정의 특정 구체예에서, 항-폴레이트 수용체 알파 (FRA) 항체는 인간화된 항체, 키메라 항체 또는 인간 항체이다. 특정 구체예에서, 항-폴레이트 수용체 알파 (FRA) 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 이때
(1) 중쇄 가변 영역은 항체 hLK26의 3개의 중쇄 HVR (예컨대 SEQ ID NO:14, 15 및 16)을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 항체 hLK26의 3개의 경쇄 HVR (예컨대 SEQ ID NO:17, 18 및 19)을 포함하거나;
(2) 중쇄 가변 영역은 항체 26B3의 3개의 중쇄 HVR (예컨대 SEQ ID NO:20, 21 및 22)을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 항체 26B3의 3개의 경쇄 HVR (예컨대 SEQ ID NO:23, 24 및 25)을 포함하거나; 또는
(3) 중쇄 가변 영역은 항체 hMov19의 3개의 중쇄 HVR (예컨대 SEQ ID NO:26, 27 및 28)을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 항체 hMov19의 3개의 경쇄 HVR (예컨대 SEQ ID NO:29, 30 및 31)을 포함한다.
본원의 방법 또는 과정의 특정 구체예에서, 항-폴레이트 수용체 알파 (FRA) 항체는 인간화된 항체, 키메라 항체 또는 인간 항체이다. 특정 구체예에서, 항-폴레이트 수용체 알파 (FRA) 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 이때
(1) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:8의 아미노산 서열의 3개의 중쇄 HVR (예컨대 SEQ ID NO:14, 15 및 16)을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:9의 아미노산 서열의 3개의 경쇄 HVR (예컨대 SEQ ID NO:17, 18 및 19)을 포함하거나;
(2) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:10의 아미노산 서열의 3개의 중쇄 HVR (예컨대 SEQ ID NO:20, 21 및 22)을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:11의 아미노산 서열의 3개의 경쇄 HVR (예컨대 SEQ ID NO:23, 24 및 25)을 포함하거나; 또는
(3) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:12의 아미노산 서열의 3개의 중쇄 HVR (예컨대 SEQ ID NO:26, 27 및 28)을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:13의 아미노산 서열의 3개의 경쇄 HVR (예컨대 SEQ ID NO:29, 30 및 31)을 포함한다.
본원의 방법 또는 과정의 특정 구체예에서, 항-폴레이트 수용체 알파 (FRA) 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 이때
(1) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:8의 아미노산 서열을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:9의 아미노산 서열을 포함하거나;
(2) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:10의 아미노산 서열을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:11의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(3) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:12의 아미노산 서열을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:13의 아미노산 서열을 포함한다.
특정 구체예에서, 항-폴레이트 수용체 알파 (FRA) 항체는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 이때
(1) 중쇄는 SEQ ID NO:1의 아미노산 서열을 포함하고 및/또는 경쇄는 SEQ ID NO:3의 아미노산 서열을 포함하거나;
(2) 중쇄는 SEQ ID NO:2의 아미노산 서열을 포함하고 및/또는 경쇄는 SEQ ID NO:3의 아미노산 서열을 포함하거나;
(3) 중쇄는 SEQ ID NO:10의 아미노산 서열을 포함하는 가변 영역 및 SEQ ID NO:32 또는 33의 아미노산 서열을 포함하는 불변 영역을 포함하고 및/또는 경쇄는 SEQ ID NO:11의 아미노산 서열을 포함하는 가변 영역 및 SEQ ID NO:34의 아미노산 서열을 포함하는 불변 영역을 포함하거나; 또는
(4) 중쇄는 SEQ ID NO:6의 아미노산 서열을 포함하고 및/또는 경쇄는 SEQ ID NO:7의 아미노산 서열을 포함한다.
본원의 방법 및 과정의 특정 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:32 또는 SEQ ID NO:33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역 및 SEQ ID NO:34의 아미노산 서열을 포함하는 인간 카파 경쇄 불변 영역을 포함하고, 이때 중쇄 불변 영역의 T155, S157, S165, T169, T197, T199 및 S442로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기 및/또는 파카 경쇄 불변 영역의 L201 및 T206으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기는 시스테인 잔기로 대체되며, 넘버링은 Kabat의 EU 색인을 따른다. 이들 구체예 중 일부 구체예에서, 중쇄 불변 영역의 T155, S157, S165, T169, T197, T199 및 S442로부터 선택된 적어도 하나 (예컨대 하나)의 아미노산 잔기 및/또는 경쇄 불변 영역의 L201 및 T206으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기는 시스테인 잔기로 대체된다.
본 개시는 화합물, 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체를 제공하며, 이때 화합물은 본원에 기술된 방법 또는 과정에 의해 제조되고, 항체는 하나 이상의 설프하이드릴기를 포함한다.
본 개시는 화합물, 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공하며, 이때 화합물은 본원에 기술된 과정에 의해 제조되고, 항체는 하나 이상의 설프하이드릴기를 포함한다.
본원에 기술된 다양한 구체예들의 특성들 중 하나, 일부 또는 전부는 본 발명의 다른 구체예들을 형성하기 위해 조합될 수 있음이 인지되어야 한다. 발명의 이들 및 다른 측면들은 기술분야의 숙련자에게 드러나게 될 것이다.
도 1은 Tap-18H의 NMR 스펙트럼을 도시한다.
도 2는 Tap-18Hr1의 NMR 스펙트럼을 도시한다.
도 3은 Tap-18Hr2의 NMR 스펙트럼을 도시한다.
도 4는 난소암 셀라인 SK-OV-3으로부터 유도된 이종이식편에 대한 hLK26-IgG1-Tap18Hr1의 생체 내 항-종양 활성을 도시한다.
도 5는 난소암 셀라인 SK-OV-3으로부터 유도된 이종이식편에 대한 부위-특이적 컨쥬게이트된 hLK26-Tap18Hr1 ADC들, hLK26-S442C-IgG1-Tap18Hr1, hLK26-T155C-IgG4p-Tap18Hr1 및 hLK26-S442C-IgG4p-Tap18Hr1의 생체 내 항-종양 활성을 도시한다.
도 6은 폐암 셀라인 NCI-H2110으로부터 유도된 이종이식편에 대한 종래의 hLK26-IgG1-Tap18Hr1, 및 부위-특이적 컨쥬게이트된 hLK26-Tap18Hr1 ADC들, hLK26-T206C-IgG1-Tap18Hr1, hLK26-T155C-IgG4p-Tap18Hr1, hLK26-T199C-IgG4p-Tap18Hr1 및 hLK26-L201C-IgG4p-Tap18Hr1의 생체 내 항-종양 활성을 도시한다.
정의
다음의 용어들은 다르게 표시되지 않는 한 다음의 의미를 가진다. 어떠한 정의되지 않은 용어라도 그것들의 기술분야에서 인지된 의미를 가진다.
"알킬"은 1 내지 10개의 탄소 원자, 바람직하게는 1 내지 6개의 탄소 원자를 가지는 1가의 포화된 지방족 하이드로카르빌기를 나타낸다. 이 용어는, 예를 들면 선형 및 분지형 하이드로카르빌기, 예컨대 메틸 (CH3-), 에틸 (CH3CH2-), n-프로필 (CH3CH2CH2-), 아이소프로필 ((CH3)2CH-), n-부틸 (CH3CH2CH2CH2-), 아이소부틸 ((CH3)2CHCH2-), sec-부틸 ((CH3)(CH3CH2)CH-), t-부틸 ((CH3)3C-), n-펜틸 (CH3CH2CH2CH2CH2-), 네오펜틸 ((CH3)3CCH2-) 및 n-헥실 (CH3(CH2)5-)를 포함한다.
"알킬렌"은 직쇄 또는 분지쇄 중 어느 하나인, 바람직하게 1 내지 10개, 보다 바람직하게는 1 내지 3개의 탄소 원자를 가지는 2가의 지방족 하이드로카르빌렌기를 나타낸다. 이 용어는, 예를 들면, 메틸렌 (-CH2-), 에틸렌 (-CH2CH2-), n-프로필렌 (-CH2CH2CH2-), 아이소-프로필렌 (-CH2CH(CH3)-), (-C(CH3)2CH2CH2-), (-C(CH3)2CH2C(O)-), (-C(CH3)2CH2C(O)NH-), (-CH(CH3)CH2-) 등을 포함한다
"알케닐"은 2 내지 10개의 탄소 원자, 바람직하게는 2 내지 4개의 탄소 원자를 가지고 적어도 1, 바람직하게는 1 내지 2개 부위의 이중 결합 불포화를 가지는 직쇄 또는 분지쇄 하이드로카르빌기를 나타낸다. 이 용어는, 예를 들면 바이-비닐, 알릴 및 부트-3-엔-1-일을 포함한다. 이 용어 내에는 시스 및 트랜스 이성질체 또는 이들 이성질체의 혼합물들이 포함된다.
"알케닐렌"은 2 내지 10개의 탄소 원자, 바람직하게는 2 내지 4개의 탄소 원자를 가지고 적어도 1, 바람직하게는 1 내지 2개 부위의 이중 결합 불포화를 가지는 직쇄 또는 분지쇄 하이드로카르빌렌기를 나타낸다. 알케닐렌의 실례는, 그것들에 한정되는 것은 아니지만, 비닐렌 (-CH=CH-), 알릴렌 (-CH2C=C-) 및 부트-3-엔-1-일렌 (-CH2CH2C=CH-)을 포함한다. 이 용어에는 시스 및 트랜스 이성질체 또는 이들 이성질체의 혼합물들이 포함된다.
"알키닐"은 2 내지 6개의 탄소 원자, 바람직하게는 2 내지 3개의 탄소 원자를 가지고 적어도 1, 바람직하게는 1 내지 2개 부위의 삼중 결합 불포화를 가지는 직쇄 또는 분지쇄 하이드로카르빌기를 나타낸다. 그런 알키닐기의 실례는 아세틸레닐 (-C≡CH) 및 프로파르길 (-CH2C≡CH)을 포함한다.
"알키닐렌"은 2 내지 6개의 탄소 원자, 바람직하게는 2 내지 3개의 탄소 원자를 가지고 적어도 1, 바람직하게는 1 내지 2개 부위의 삼중 결합 불포화를 가지는 직쇄 또는 분지쇄 하이드로카르빌렌기를 나타낸다. 그런 알키닐렌기의 실례는 아세틸레닐렌 (-C≡C-) 및 프로파르길렌 (-CH2C≡C-)을 포함한다.
"아미노"는 -NH2 기를 나타낸다.
"치환된 아미노"는 각각의 R이 수소, 알킬, 치환된 알킬, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로사이클릴로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되는 -NRR 기를 나타내고, 단 적어도 하나의 R은 수소가 아니어야 한다.
"아릴"은 단일 고리 (예컨대 페닐기에 존재하는 것과 같이) 또는 방향족이거나 방향족이 아닐 수 있고, 단 부착 지점이 방향족 고리의 원자를 통한 것이어야 하는 다중 축합 고리 (예를 들면 그런 방향족 고리 시스템은 나프틸, 안트릴 및 인다닐을 포함함)를 가지는 고리 시스템을 가지는 6 내지 18 탄소 원자의 1가의 방향족 탄소고리기를 나타낸다. 이 용어는, 예를 들면 페닐 및 나프틸을 포함한다. 아릴 치환기에 대한 정의에 의해 다르게 한정되지 않는 한, 그런 아릴기는 아실옥시, 하이드록시, 티올, 아실, 알킬, 알콕시, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 알킬, 치환된 알콕시, 치환된 알케닐, 치환된 알키닐, 치환된 사이클로알킬, 치환된 사이클로알케닐, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아실아미노, 알크아릴, 아릴, 아릴옥시, 아지도, 카르복실, 카르복실 에스테르, 시아노, 할로겐, 니트로, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클로옥시, 아미노아실옥시, 옥시아실아미노, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, 설포닐아미노, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴, -SO2-헤테로아릴 및 트라이할로메틸로부터 선택된 1 내지 5개의 치환기 또는 1 내지 3개의 치환기로 임의로 치환될 수 있다.
"사이클로알킬"은 융합된, 가교된 및 스피로 고리 시스템을 포함하여 단일 또는 다중 고리형 고리를 가지는 3 내지 10개의 탄소 원자의 고리형 기를 나타낸다. 적합한 사이클로알킬기의 실례는, 예를 들면 아다만틸, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로옥틸 등을 포함한다. 그런 사이클로알킬기는, 예를 들면, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로옥틸 등과 같은 단일 고리 구조 또는 아다만틸 등과 같은 다중 고리 구조를 포함한다.
"헤테로아릴"은 1 내지 15개의 탄소 원자, 예컨대 1 내지 10개의 탄소 원자 및 고리 내의 산소, 질소 및 황으로 구성되는 군으로부터 선택된 1 내지 10개의 헤테로원자의 방향족 기를 나타낸다. 그런 헤테로아릴기는 고리 시스템에 단일 고리를 가지거나 (예컨대 피리디닐, 이미다졸릴 또는 퓨릴) 다중 축합 고리를 가지며 (예를 들면 인돌리지닐, 퀴놀리닐, 벤조푸라닐, 벤즈이미다졸릴 또는 벤조티에닐기에서와 같이), 이때 고리 시스템 내의 적어도 하나의 고리는 방향족이고 고리 시스템 내의 적어도 하나의 고리는 방향족이며, 단 부착 지점은 방향족 고리의 원자를 통한 것이어야 한다. 특정 구체예에서, 헤테로아릴기의 질소 및/또는 황 고리 원자(들)은 N-옥사이드 (N→0), 설피닐 또는 설포닐 부분을 제공하기 위하여 임의로 산화된다. 이 용어는, 예를 들면, 피리디닐, 피롤릴, 인돌릴, 티오페닐 및 퓨라닐을 포함한다. 헤테로아릴 치환기에 대한 정의에 의해 다르게 한정되지 않는 한, 그런 헤테로아릴기는 아실옥시, 하이드록시, 티올, 아실, 알킬, 알콕시, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 알킬, 치환된 알콕시, 치환된 알케닐, 치환된 알키닐, 치환된 사이클로알킬, 치환된 사이클로알케닐, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아실아미노, 알크아릴, 아릴, 아릴옥시, 아지도, 카르복실, 카르복실 에스테르, 시아노, 할로겐, 니트로, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클로옥시, 아미노아실옥시, 옥시아실아미노, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, 설포닐아미노, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴 및 -SO2-헤테로아릴, 및 트라이할로메틸로부터 선택된 1 내지 5개의 치환기, 또는 1 내지 3개의 치환기로 임의로 치환될 수 있다.
헤테로아릴의 실례로는, 그것들에 한정되는 것은 아니지만, 피롤, 이미다졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리미딘, 피리다진, 인돌리진, 아이소인돌, 인돌, 퓨린, 아이소퀴놀린, 퀴놀린, 프탈라진, 나프티리딘, 퀴녹살린, 퀴나졸린, 신놀린, 프테리딘, 카르바졸, 카르볼린, 페난트리딘, 아크리딘, 페난트롤린, 아이소티아졸, 페나진, 아이속사졸, 페녹사진, 페노티아진, 피페리딘, 피페라진, 프탈이미드, 4,5,6,7-테트라하이드로벤조[b]티오펜, 티아졸, 티오펜, 벤조[b]티오펜 등을 포함한다.
"헤테로고리", "헤테로고리형", "헤테로사이클로알킬" 또는 "헤테로사이클릴"은 융합된, 가교된 또는 스피로 고리 시스템을 포함하여, 단일 고리 또는 다중 축합 고리를 가지고, 1 내지 10개의 헤테로원자를 포함하여 3 내지 20개의 고리 원자를 가지는, 포화된 또는 부분적으로 불포화된 기를 나타낸다. 이들 고리 원자들은 탄소, 질소, 황 또는 산소로 구성되는 군으로부터 선택되고, 이때 융합된 고리 시스템에서 하나 이상의 고리는 사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴일 수 있으며, 단 부착 지점은 비-방향족 고리를 통해야 한다. 특정 구체예에서, 헤테로고리형 기의 질소 및/또는 황 원자(들)은 N-옥사이드, -S(O)- 또는 -SO2- 부분을 제공하기 위해 임의로 산화된다.
헤테로고리의 실례는, 그것들에 한정되는 것은 아니지만, 아제티딘, 다이하이드로인돌, 인다졸, 퀴놀리진, 이미다졸리딘, 이미다졸린, 피페리딘, 피페라진, 인돌린, 1,2,3,4-테트라하이드로아이소퀴놀린, 티아졸리딘, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐 (티아모르폴리닐로도 언급됨), 1,1-다이옥소티오모르폴리닐, 피페리디닐, 피롤리딘, 테트라하이드로푸라닐 등을 포함한다.
헤테로아릴 또는 헤테로사이클릴 기가 "치환된" 경우, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클릴 치환기에 대한 정의에 의해 다르게 한정되지 않는 한, 그런 헤테로아릴 또는 헤테로사이클릴 기는 알킬, 치환된 알킬, 알콕시, 치환된 알콕시, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 아지도, 시아노, 할로겐, 하이드록실, 옥소, 티오케토, 카르복실, 카르복실 에스테르, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, 티오헤테로사이클로옥시, 티올, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클로옥시, 하이드록시아미노, 알콕시아미노, 니트로, 설포닐아미노, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO-헤테로사이클릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴, -SO2-헤테로아릴 및 -SO2-헤테로사이클릴로부터 선택된 1 내지 5 또는 1 내지 3개의 치환기로 치환될 수 있다.
"폴리알킬렌 글리콜"은 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜 및 폴리부틸렌 글리콜과 같은 직쇄 또는 분지쇄 폴리알킬렌 글리콜 중합체를 나타낸다. 폴리알킬렌 글리콜 하위단위는 단일 폴리알킬렌 글리콜 단위이다. 예를 들어, 폴리알킬렌 글리콜 하위단위의 실례는 사슬 종결점에서 수소로 캡핑된 에틸렌 글리콜, -O-CH2-CH2-0- 또는 프로필렌 글리콜, -O-CH2-CH2-CH2-0-일 수 있을 것이다. 폴리(알킬렌 글리콜)의 다른 실례는 그것들에 한정되는 것은 아니지만, PEG, PEG 유도체, 예컨대 메톡시폴리(에틸렌 글리콜) (mPEG), 폴리(에틸렌 옥사이드), PPG, 폴리(테트라메틸렌 글리콜), 폴리(에틸렌 옥사이드-코-프로필렌 옥사이드) 또는 그것들의 공중합체 및 조합을 포함한다.
"폴리아민"은 폴리알킬렌이민에서처럼 골격에 통합된 단량체 단위에 또는 폴리비닐 아민에서와 같이 펜던트기에 아민 기능성을 가지고 있는 중합체를 나타낸다.
본원의 개시에 더불어, 용어 "치환된"은, 명시된 기 또는 라디칼을 변경시키기 위해 사용될 때, 또한 명시된 기 또는 라디칼의 하나 이상의 수소 원자가 각각, 상호 독립적으로, 아래에서 정의되는 것과 같은 동일하거나 상이한 치환기로 대체되는 것을 의미할 수 있다.
본원의 개별적인 용어들과 관련하여 개시된 기들에 더불어, 명시된 기 또는 라디칼의 포화된 탄소 원자 상의 하나 이상의 수소를 치환하기 위한 치환기들 (단일 탄소 상의 어떠한 2개의 수소는 =O, =NR70, =N-OR70, =N2 또는 =S로 대체될 수 있음)은, 다르게 명시되지 않는 한, -R60, 할로, =O, -OR70, -SR70, -NR80R80, 트라이할로메틸, -CN, -OCN, -SCN, -NO, -NO2, =N2, -N3, -S(O)R70, -S(O)2R70, -SO3 -M+, -S(O)2OR70, -OS(O)2R70, -OSO3 -M+, -OS(O)2OR70, -PO3 2-(M+)2, -P(O)(OR70)O-M+, -P(O)(OR70)2, -C(O)R70, -C(S)R70, -C(NR70)R70, -C(O)O-M+, -C(O)OR70, -C(S)OR70, -C(O)NR80R80, -C(NR70)NR80R80, -OC(O)R70, -OC(S)R70, -OC(O)O-M+, -OC(O)OR70, -OC(S)OR70, -NR70C(O)R70, -NR70C(S)R70, -NR70CO2 -M+, -NR70CO2R70, -NR70C(S)OR70, -NR70C(O)NR80R80, -NR70C(NR70)R70 및 -NR70C(NR70)NR80R80이고, 이때 R60은 임의로 치환된 알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴 및 헤테로아릴알킬로 구성되는 군으로부터 선택되며, 각각의 R70은 독립적으로 수소 또는 R60이고; 각각의 R80은 독립적으로 R70이거나 또는 다르게는, 2개의 R80은 그것들이 결합하는 질소 원자와 함께 O, N 및 S로 구성되는 군으로부터 선택된 1 내지 4개의 동일하거나 상이한 추가의 헤테로원자를 임의로 포함할 수 있는 3-, 4-, 5-, 6- 또는 7-원 헤테로사이클로알킬을 형성하며, 이때 헤테로원자 중 N은 -H, C1-C4 알킬, -C(O)C1- 4알킬, -C02C1 - 4알킬 또는 -S(O)2C1-4알킬 치환을 가질 수 있고; 각각의 M+는 전체 단일 양전하를 가지는 카운터 이온이다. 각각의 M+는 독립적으로, 예를 들면 알칼리 이온, 예컨대 K+, Na+, Li+; 암모늄 이온, 예컨대 +N(R60)4; 또는 알칼리토 이온, 예컨대 [Ca2 +]0.5, [Mg2 +]0.5 또는 [Ba2+]0.5이다 (첨자 0.5는 그런 2가 알칼리토 이온들에 대한 카운터 이온들 중 하나가 구체예들의 화합물의 이온화된 형태일 수 있고 다른 하나는 클로라이드와 같은 전형적인 카운터 이온일 수 있거나, 또는 본원에 기술된 2개의 이온화된 화합물이 그런 2가 알칼리토 이온에 대한 카운터 이온으로서 작용할 수 있거나, 또는 구체예들의 이중으로 이온화된 화합물이 그런 2가 알칼리토 이온들에 대한 카운터 이온으로서 작용할 수 있음을 의미한다).
본원에 개시된 것에 더불어, "치환된" 알켄, 알킨, 아릴 및 헤테로아릴기의 불포화 탄소 원자 상의 수소에 대한 치환기는 다르게 명시되지 않는 한, -R60, 할로, -O-M+, -OR70, -SR70, -S-M+, -NR80R80, 트라이할로메틸, -CF3, -CN, -OCN, -SCN, -NO, -NO2, -N3, -S(O)R70, -S(O)2R70, -SO3 -M+, -SO3R70, -OS(O)2R70, -OSO3 -M+, -OSO3R70, -PO3 2-(M+)2, -P(O)(OR70)O-M+, -P(O)(OR70)2, -C(O)R70, -C(S)R70, -C(NR70)R70, -CO2 -M+, -CO2R70, -C(S)OR70, -C(O)NR80R80, -C(NR70)NR80R80, -OC(O)R70, -OC(S)R70, -OCO2 -M+, -OCO2R70, -OC(S)OR70, -NR70C(O)R70, -NR70C(S)R70, -NR70CO2 -M+, -NR70CO2R70, -NR70C(S)OR70, -NR70C(O)NR80R80, -NR70C(NR70)R70 및 -NR70C(NR70)NR80R80이고, 이때 R60, R70, R80 및 M+는 앞서 정의된 것과 같고, 단 치환된 알켄 또는 알킨의 경우에, 치환기는 -O-M+, -OR70, -SR70 또는 -S-M+가 아니다.
본원에서 개별적인 용어들과 관련하여 개시된 치환기에 더불어, "치환된" 헤테로사이클로알킬 및 사이클로알킬 기에서 질소 원자 상의 수소들에 대한 치환기는, 다르게 명시되지 않는 한, -R60, -O-M+, -OR70, -SR70, -S-M+, -NR80R80, 트라이할로메틸, -CF3, -CN, -NO, -NO2, -S(O)R70, -S(O)2R70, -S(O)2O-M+, -S(O)2OR70, -OS(O)2R70, -OS(O)2O-M+, -OS(O)2OR70, -PO3 2-(M+)2, -P(O)(OR70)O-M+, -P(O)(OR70)(OR70), -C(O)R70, -C(S)R70, -C(NR70)R70, -C(O)OR70, -C(S)OR70, -C(O)NR80R80, -C(NR70)NR80R80, -OC(O)R70, -OC(S)R70, -OC(O)OR70, -OC(S)OR70, -NR70C(O)R70, -NR70C(S)R70, -NR70C(O)OR70, -NR70C(S)OR70, -NR70C(O)NR80R80, -NR70C(NR70)R70 및 -NR70C(NR70)NR80R80이고, 이때 R60, R70, R80 및 M+는 앞서 정의된 것과 같다.
본원에 개시된 것에 더불어, 특정 구체예에서, 치환된 기는 1, 2, 3 또는 4개의 치환체, 1, 2 또는 3개의 치환체, 1 또는 2개의 치환체 또는 1개의 치환체를 가진다.
상기에서 정의된 모든 치환된 기에서, 자체에 대한 추가의 치환체를 가지는 치환체를 정의함으로써 이루어진 중합체 (예컨대 치환된 아릴기로 자체 치환되거나, 치환된 아릴기에 의해 추가로 치환되는 등의, 치환체로서 치환된 아릴기를 가지는 치환된 아릴)는 본원에 포함되는 것으로 의도되지 않는 것이 인지되어야 한다. 그런 경우에, 그런 치환의 최대 수는 3이다. 예를 들어, 본원에서 구체적으로 고려된 치환된 아릴기의 연속적인 치환은 치환된 아릴-(치환된 아릴)-치환된 아릴로 제한된다.
다르게 표시되지 않는 한, 본원에서 명백하게 정의되지 않는 치환체의 명명법은 기능성의 말단 부분과 이어서 부착점을 향한 인접한 기능성을 명명함으로써 이루어진다. 예를 들어, 치환체 "아릴알킬옥시카르보닐"은 (아릴)-(알킬)-O-C(O)- 기를 나타낸다.
하나 이상의 치환체를 함유한 본원에서 개시된 기들 중 어느 것에 대해서든지, 물론, 그런 기는 입체적으로 실행 불가능한 및/또는 합성적으로 실현 가능하지 않은 어떠한 치환 또는 치환 패턴을 함유하지 않는다. 또한, 대상 화합물은 이들 화합물의 치환으로부터 유발되는 모든 입체화학적 이성질체를 포함한다.
용어 "약학적으로 허용되는 염"은 환자, 예컨대 포유류에게 투여하기에 허용되는 염을 의미한다 (염은 주어진 단위용량 요법에 대해 허용되는 포유류 안전성을 가지는 카운터이온을 가짐). 그런 염은 약학적으로 허용되는 무기 또는 유기 염기로부터 및 약학적으로 허용되는 무기 또는 유기 산으로부터 유도될 수 있다. "약학적으로 허용되는 염"은 화합물의 약학적으로 허용되는 염을 나타내고, 그 염은 기술분야에 잘 알려져 있는 다양한 유기 및 무기 카운터 이온들로부터 유도되며, 단지 예를 들면 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 암모늄, 테트라알킬암모늄 등을 포함하고; 분자가 염기성 기능성을 포함할 때에는 무기 또는 유기 산의 염, 예컨대 염산염, 하이드로브로마이드, 포르메이트, 타르타레이트, 베실레이트, 메실레이트, 아세테이트, 말레에이트, 옥살레이트 등을 포함한다.
기의 구조 도면에서 파선 (wavy line)은 원래의 구조에 대한 기의 부착점을 나타낸다.
용어 "그것의 염"은 산의 일부가 양이온, 예컨대 금속 양이온 또는 유기 양이온 등에 이해 대체될 때 형성된 화합물을 의미한다. 적용 가능한 경우, 염은 약학적으로 허용되는 염이지만, 이것은 환자에게 투여하기 위해 의도되지 않는 중간체 화합물의 염에는 필요하지 않다. 예를 들면, 본 화합물의 염은 화합물이 무기 또는 유기 산에 의해 양성자화되어 양이온을 형성하게 되고, 이때 무기 또는 유기 산의 컨쥬게이트 염기는 염의 음이온 성분인 것들을 포함한다.
"용매 화합물"은 용매 분자와 용질의 분자 또는 이온들과의 조합에 의해 형성된 착체를 나타낸다. 용매는 유기 화합물, 무기 화합물 또는 둘 다의 혼합물일 수 있다. 용매의 몇몇 실례는, 그것들에 한정되는 것은 아니지만, 메탄올, N,N-다이메틸포름아미드, 테트라하이드로퓨란, 다이메틸설폭시드 및 물을 포함한다. 용매가 물일 때, 형성된 용매 화합물은 수화물이다.
"입체 이성질체" 및 "입체 이성질체들"은 동일한 원자 연결을 갖지만 공간에서 상이한 원자 배열을 가지는 화합물들을 나타낸다. 입체 이성질체는 시스-트랜스 이성질체, E 및 Z 이성질체, 경상 이성질체 및 부분입체 이성질체를 포함한다.
"토토머"는 예컨대 엔올-케토 및 이민-엔아민 토토머와 같이 원자의 전자 결합에서만 상이한 및/또는 양성자의 위치에서 상이한 분자의 또 다른 형태, 또는 피라졸, 이미다졸, 벤즈이미다졸, 트라이아졸 및 테트라졸과 같이 -N=C(H)-NH- 고리 원자 배열을 함유하는 헤테로아릴기의 토토머 형태를 나타낸다. 기술분야의 통상적인 지식을 가진 사람은 다른 토토머 고리 원자 배열도 가능한 것을 인지할 것이다.
용어 "또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체"는 염, 용매 화합물 및 입체 이성질체의 모든 순열, 예컨대 대상 화합물의 입체 이성질체의 약학적으로 허용되는 염의 용매 화합물을 포함하는 것으로 의도된다.
본원에서 사용되는 바, 약물, 화합물, 컨쥬게이트, 약물 컨쥬게이트, 항체 약물 컨쥬게이트 또는 약학 조성물의 "유효한 단위용량" 또는 "유효량"은 유익한 또는 원하는 결과를 이루기에 충분한 양이다. 예방적 용도에 대해서, 유익한 또는 원하는 결과는 질환, 그것의 합병증 및 질환의 발생 중에 나타나는 중간 병리적 현상의 생화학적, 조직학적 및/또는 행동적 증상을 포함하여 위험의 제거 또는 감소, 심각성의 감소 또는 질환의 개시의 지연과 같은 결과를 포함한다. 치료적 용도에 대해, 유익한 또는 원하는 결과는 질환으로부터 유발되는 하나 이상의 증상의 감소, 질환으로 고생하는 대상들의 삶의 질의 증가, 질환을 치료하기 위해 필요한 다른 의약의 용량의 감소, 표적화를 통한 것과 같은 다른 의약의 효과의 증강, 질환의 진행의 지연 및/또는 생존의 연장과 같은 임상적 결과들을 포함한다. 암 또는 종양의 경우에, 약물의 유효량은 암세포의 수의 감소; 종양 크기의 감소; 말초 조직으로의 암세포의 침윤의 억제 (즉 어느 정도까지의 둔화, 바람직하게는 중지); 종양 전이의 억제 (즉 어느 정도까지의 둔화, 바람직하게는 중지); 어느 정도까지의 종양 성장의 억제; 및/또는 장애와 관련된 하나 이상의 증상의 어느 정도까지의 완화에 효과를 나타낼 수 있다. 유효한 단위용량은 1회 이상의 투여로 투여될 수 있다. 본 개시의 목적에 대해, 약물, 화합물 또는 약학 조성물의 유효한 단위용량은 직접 또는 간접적으로 예방적 또는 치료적 치료를 이루기에 충분한 양이다. 임상적인 맥락에서 인지되는 것과 같이, 약물, 화합물 또는 약학 조성물의 유효한 단위용량은 다른 약물, 화합물 또는 약학 조성물과 함께 이루어질 수도 있거나 그렇지 않을 수 있다. 그러므로, "유효한 단위용량"은 하나 이상의 치료제를 투여하는 맥락에서 고려될 수 있고, 단일 제제는 만약 하나 이상의 다른 제제와 함께 바람직한 결과를 얻을 수 있거나 이루어진다면, 유효량으로 제공된 것으로 여겨질 수 있다.
본원에서 사용되는 바, "과 함께"는 다른 치료 양상에 더불어 한 치료 양상의 투여를 나타낸다. 그와 같이, "과 함께"는 개체에 대한 다른 치료 양상의 투여 전, 중 또는 후의 한 치료 양상의 투여를 나타낸다.
본원에서 사용되는 바, "치료" 또는 "치료하는"은 임상 결과를 포함하여 및 바람직하게는 유익한 또는 원하는 결과를 얻기 위한 접근법이다. 본 개시의 목적에 대해, 유익한 또는 원하는 임상 결과는, 그것들에 한정되는 것은 아니지만, 다음 중 하나 이상을 포함한다: 암성 세포의 증식의 감소 (또는 파괴), 질환으로부터 유발되는 증상들의 감소, 질환으로 고생하는 개체들의 삶의 질의 증가, 질환을 치료하기 위해 필요한 다른 의약의 용량의 감소, 질환의 진행의 지연 및/또는 개체의 생존의 연장.
본원에서 사용되는 바, "질환의 발달의 지연"은 질환 (예컨대 암)의 발달을 연기, 방해, 둔화, 지체, 안정화 및/또는 보류하는 것을 의미한다. 이런 지연은 질환 및/또는 치료되는 개체의 이력에 따라, 시간의 길이를 변화시키는 것일 수 있다. 기술분야의 숙련된 자에게 명백한 것과 같이, 충분한 또는 유의미한 지연은, 실제로는, 개체가 질환을 발달시키지 않는다는 점에서 방지를 포함할 수 있다. 예를 들어, 후기 단계 암, 예컨대 전이의 발달이 지연될 수 있다.
"개체" 또는 "대상"은 포유류, 보다 바람직하게는 인간이다. 포유류는 또한, 그것들에 한정되는 것은 아니지만, 가축, 스포츠용 동물, 애완동물 (예컨대 고양이, 개, 말), 영장류, 마우스 및 래트를 포함한다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "특이적으로 인식하는" 또는 "특이적으로 결합하는"은 생물학적 분자들을 포함하여 분자들의 이질적인 집단의 존재하에 표적의 존재에 결정적인, 표적과 항체 (또는 분자 또는 부분) 사이의 인력 (attraction) 또는 결합과 같은 측정 가능하고 재생 가능한 상호작용을 나타낸다. 예를 들어, 에피토프에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 항체는 표적의 다른 에피토프 또는 비-표적 에피토프들에 결합하는 것보다 더 큰 친화성, 결합력으로, 보다 쉽게 및/또는 더 큰 기간동안 이 에피토프에 결합하는 항체이다. 또한, 예를 들어, 제 1 표적에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 항체 (또는 부분 또는 에피토프)는 제 2 항체에 특이적으로 또는 우선적으로 결합할 수도 있고 그렇지 않을 수도 있다. 그와 같이, "특이적 결합" 또는 "우선적 결합"은 본질적으로 배타적인 결합을 필요로 하지 않는다 (비록 포함할 수 있긴 하지만). 표적에 특이적으로 결합하는 항체는 적어도 약 10 3 M -1 또는 10 4 M -1, 때로 약 10 5 M -1 또는 10 6 M -1, 다른 경우에는 약 10 6 M -1 또는 10 7 M -1, 약 10 8 M -1 내지 10 9 M - 1 , 또는 약 10 10 M -1 내지 10 11 M -1 또는 그 이상의 결합 상수를 가질 수 있다. 특별한 단백질과 특이적으로 면역반응하는 항체들을 선택하기 위해 다양한 면역분석 포맷이 사용될 수 있다. 예를 들어, 단백질과 특이적으로 면역반응하는 단클론성 항체들을 선택하기 위하여 고체-상 ELISA 면역분석이 기본적으로 사용된다. 특이적 면역반응성을 측정하기 위해 사용될 수 있는 면역분석 포맷 및 조건의 설명에 대해서는 예컨대 Harlow and Lane (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Publications, New York 참조.
본원에서 사용되는 바, 용어 "암", "종양", "암성" 및 "악성 종양"은 전형적으로 조절되지 않는 세포 성장을 특징으로 하는 포유류에서의 생리적 조건을 나타내거나 기술한다. 암의 예를 들면, 그것들에 한정되는 것은 아니지만, 선암종, 림프종, 아세포종, 흑색종 및 육종을 포함한 암종을 포함한다. 그런 암의 보다 구체적인 실례는 편평세포암, 소-세포 폐암, 비-소세포 폐암, 폐 선암종, 폐 편평세포 암종, 위장암, 호지킨 및 비-호지킨 림프종, 췌장암, 교아세포종, 경부암, 신경교종, 난소암, 간 암종 및 간종양과 같은 간암, 방광암, 유방암, 대장암, 결장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 침샘 암종, 신장 세포 암종 및 빌름스 종양과 같은 신장암, 기저 세포 암종, 흑색종, 중피종, 전립선암, 갑상선암, 고환암, 식도암, 담낭암 및 다양한 유형의 두경부암을 포함한다.
본원에서 및 첨부된 청구범위에서 사용되는 것과 같이, 단일한 형태를 나타내는 표현들은 맥락이 분명하게 다르게 표시하지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다. 예를 들어, "항체"에 대한 언급은 하나 내지 많은 항체, 예컨대 몰량에 대한 언급이며, 기술분야의 숙련자들에게 알려져 있는 그것의 동등물을 포함하는 식이다.
본원에서 "약" 값 또는 변수에 대한 언급은 그 값 또는 변수 자체에 대해 지시된 구체예들을 포함 (및 기술)한다. 예를 들어, "약 X"를 언급하는 기술은 "X"의 기술을 포함한다.
본원에 기술된 발명의 측면 및 변화는 측면 및 변화로 "구성되는" 및/또는 "본질적으로 구성되는"을 포함하는 것이 인지되어야 한다.
다르게 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술적이고 과학적인 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상적인 기술을 가진 자에 의해 통상적으로 인지되는 것과 같은 의미를 가진다. 본원에 기술된 것들과 유사하거나 동등한 어떠한 방법 및 물질들이 또한 본 발명의 실시 또는 실험에 사용될 수 있긴 하지만, 바람직한 방법 및 물질들이 이제 기술된다. 본원에서 언급된 모든 공보들은 그 공보들이 인용된 것과 관련된 방법 및/또는 물질들을 개시하고 기술하기 위해 본원에 참조로 포함된다.
다르게 주지된 것은 예외로 하고, 본 구체예들의 방법 및 기법들은 일반적으로 기술분야에 잘 알려져 있고 본 명세서 전체를 통해 인용되고 논의되는 다양한 일반적이고 보다 구체적인 참고문헌들에 기술된 것과 같은 종래 방법들을 따라 수행된다. 예컨대 Loudon, Organic Chemistry, 4th edition, New York: Oxford University Press, 2002, pp. 360-361, 1084-1085; Smith and March, March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 5th edition, Wiley-Interscience, 2001 참조.
본원에서 사용된 명명법은 본원의 실시예에서 설명된다. 이 명명법은 일반적으로 상업적으로 입수가능한 AutoNom 소프트웨어 (MDL, San Leandro, Calif.)를 사용하여 유도되었다.
명확성을 위해 별도의 구체예의 맥락으로 기술되는 발명의 특정 특징들이 또한 단일 구체예에서 함께 제공될 수 있다는 것이 인지된다. 역으로, 간결함을 위해, 단일 구체예의 맥락으로 기술되는 발명의 다양한 특징들이 또한 별도로 또는 어떠한 적합한 하위조합으로 제공될 수 있다. 변수들에 의해 표시된 화학적 기들이 속하는 구체예들의 모든 조합은 구체적으로 본 발명에 의해 포함되고 각각의 및 모든 조합이 개별적으로 및 명백하게 개시된 것처럼, 그런 조합들이 안정한 화합물들 (즉 분리되고, 특성화되고, 생물학적 활성에 대해 시험될 수 있는 화합물들)인 화합물들을 포함하는 정도로, 본원에서 개시된다. 또한, 그런 변수들을 기술하는 구체예들에서 열거된 화학적 기들의 모든 하위조합들은 또한 본 발명에 구체적으로 포함되고 화학적 기들의 각각의 및 모든 그런 하위조합이 개별적으로 및 명백하게 본원에 개시된 것처럼 본원에서 개시된다.
상세한 설명
본 개시는 적절한 조건하에서 절단될 수 있고 컨쥬게이트의 더 나은 용해도를 제공하기 위해 친수성 기를 포함하는, 친수성 자가-희생 링커를 가지는 화합물들 (항-FRA 항체-약물 컨쥬게이트)을 제공한다. 친수성 자가 희생 링커는 종종 소수성인 세포독성 약물에 대한 약물 컨쥬게이트의 증가된 용해도를 제공할 수 있다. 약물 컨쥬게이트에 친수성 자가-희생 링커를 사용하는 다른 장점들은 약물 컨쥬게이트의 증가된 안정성 및 약물 컨쥬게이트의 감소된 응집을 포함한다.
본 개시는 월등한 혈청 안정성을 가질 수 있는 항체-약물 컨쥬게이트를 제공한다. 예를 들어, 약물의 하이드록실기가 수성 완충액 또는 인간 혈청에서 신속한 가수분해에 민감한 불안정한 카보네이트 연쇄를 통해 스페이서에 연결되어 있는 항체-약물 컨쥬게이트와 대조적으로, 벤질옥시카르보닐 연쇄를 사용하는 본 구체예들의 항체-약물 컨쥬게이트는 동일한 조건하에서 상대적으로 보다 안정할 수 있고, 프로테아제, 예컨대 카텝신 B로 처리될 때 약물을 방출하기 위해 선택적으로 단편화가 진행될 수 있다. 혈청 안정성은 환자의 혈청에 비활성 약물을 투여하는 것이 바람직한 경우에, 리간드에 의해 표적에서 약물 농축물을 비활성화시킨 후, 항체-약물 컨쥬게이트가 표적에 근접한 곳에서만 활성 형태로 전환될 수 있도록 하는 항체-약물 컨쥬게이트에 대한 바람직한 특성이다.
본 개시는 감소된 응집을 가질 수 있는 항체-약물 컨쥬게이트를 제공한다. 일부 효소-불안정한 링커들의 증가된 결합된 소수성은, 특히 강력한 소수성 약물을 가지는 항체-약물 컨쥬게이트의 응집을 유도할 수 있다. 친수성 기가 링커 안으로 통합되면, 항체-약물 컨쥬게이트의 응집은 감소될 수 있다.
본 개시의 화합물들 (항체-약물 컨쥬게이트)은 약물 부분, 선택된 세포 집단 (예컨대 FRA 발현 세포)을 표적화할 수 있는 표적화 부분, 및 아실 단위, 약물 부분과 표적화 부분 사이의 거리를 제공하기 위한 임의의 스페이서 단위, 적절한 조건하에서 절단될 수 있는 펩티드 링커, 친수성 자가-희생 링커 및 임의의 제 2 자가-희생 스페이서 또는 고리화 자가-제거 링커를 함유하는 링커를 포함한다. 각각의 특징은 아래에서 논의된다.
본 개시는 식 (I)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체를 제공한다:
Figure pct00047
(I)
식에서:
D는 약물 부분이고;
T는 표적화 부분이며;
X는 친수성 자가-희생 링커이고;
L1은 결합, 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커이며;
L2는 결합 또는 제 2 자가-희생 링커이고;
이때 만약 L1이 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커라면 L2는 결합이며;
L2가 제 2 자가-희생 링커라면 L1은 결합이고;
L3은 펩티드 링커이며;
L4는 결합 또는 스페이서이고; 및
A는 아실 단위이다.
일부 구체예에서, 표적화 부분은 FRA (예컨대 인간 FRA)에 특이적으로 결합하는 항체이다. 일부 구체예에서, 표적화 부분은 약물 부분에 연결되기 위한 하나 이상의 부착 부위를 가지는 항-FRA 항체이다. 예를 들어, 표적화 부분 T는 링커-약물 부분 (예컨대 A-L4-L3-L2-X-L1-D)에 연결하기 위한 다중 부위를 가질 수 있다. 그러므로, 또한 식 (Ia)의 화합물:
Figure pct00048
(Ia)
또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체가 제공되며; 식에서, D, T, X, L1, L2, L3, L4 및 A는 식 (I)에 대해 정의된 것과 같고, p는 1 내지 20이다. 일부 구체예에서, p는 1 내지 8이다. 일부 구체예에서, p는 1 내지 6이다. 일부 구체예에서, p는 1 내지 4이다. 일부 구체예에서, p는 2 내지 4이다. 일부 구체예에서, p는 1, 2, 3 또는 4이다. 일부 구체예에서, p는 2이다. 일부 구체예에서, p는 3이다. 일부 구체예에서, p는 4이다.
펩티드 링커
식 (I)에서, L3은 펩티드 링커이다. 특정 구체예에서, L3은 1 내지 10 아미노산 잔기의 펩티드 링커이다. 특정 구체예에서, L3은 2 내지 4 아미노산 잔기의 펩티드 링커이다. 특정 구체예에서, L3은 다이펩티드 링커이다.
아미노산 잔기는 자연적으로-발생하는 또는 비-자연 아미노산 잔기이다. 용어 "자연 아미노산" 및 "자연적으로-발생하는 아미노산"은 Ala, Asp, Cys, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr을 나타낸다. "비-자연 아미노산" (즉 자연적으로 발생하지 않는 아미노산)은 비-제한적인 실례를 들면, 호모세린, 호모아르기닌, 시트룰린, 페닐글리신, 타우린, 요오도타이로신, 셀레노-시스테인, 노르류신 ("Nle"), 노르발린 ("Nva"), 베타-알라닌, L- 또는 D-나프탈라닌, 오르니틴 ("Orn") 등을 포함한다.
아미노산은 또한 자연 및 비-자연 아미노산의 D-형태를 포함한다. "D-"는 자연적으로 발생하는 ("L-") 아미노산의 형태와 반대로 "D" (우회전) 형태를 갖는 아미노산을 나타낸다. 구체적인 형태가 표시되지 않은 경우에, 기술분야의 숙련자는 아미노산이 L-아미노산인 것을 인지할 것이다. 그러나, 아미노산은 또한 D- 및 L-형태의 라세미 혼합물로도 존재할 수 있다. 자연 및 비-자연 아미노산은 상업적으로 구매하거나 (Sigma Chemical Co.; Advanced Chemtech) 또는 기술분야에 공지된 방법들을 사용하여 합성될 수 있다. 아미노산 치환은 잔기들의 생물학적 활성이 보유되는 한 잔기들의 극성, 전하, 용해도, 소수성, 친수성 및/또는 양친매성 성질의 유사성을 기준으로 만들어질 수 있다.
아미노산 잔기 서열은 특이적으로 맞춰져서 결과적인 펩티딜 유도체 약물-컨쥬게이트로부터 하나 이상의 종양-관련 프로테아제에 의해 선택적으로 효소적으로 절단될 것이다.
특정 구체예에서, L3은 적어도 하나의 라이신 또는 아르기닌 잔기를 포함하는 펩티드이다.
특정 구체예에서, L3은 라이신, D-라이신, 시트룰린, 아르기닌, 프롤린, 히스티딘, 오르니틴 및 글루타민으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함하는 펩티드 링커이다.
특정 구체예에서, L3은 발린, 아이소류신, 페닐알라닌, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 알라닌, 류신, 트립토판 및 타이로신으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함하는 펩티드 링커이다.
특정 구체예에서, L3은 발린-시트룰린, 프롤린-라이신, 메티오닌-D-라이신, 아스파라긴-D-라이신, 아이소류신-프롤린, 페닐알라닌-라이신 및 발린-라이신으로부터 선택된 다이펩티드 링커이다. 특정 구체예에서, L3은 발린-시트룰린이다.
본 개시에 사용하기에 적합한 수많은 특이적 펩티드 링커 분자들이 디자인될 수 있고 특정 종양-관련 프로테아제에 의한 효소적 절단에 대한 선택성에서 최적화될 수 있다. 본 개시에 사용하기 위한 특정 펩티드 링커들은 프로테아제, 카텝신 B 및 D에 대해 최적화된 것들이다.
친수성 자가-희생 링커
식 (I)에서, X는 친수성 자가-희생 링커이다.
본 개시의 화합물은 일정 간격을 두고 약물 부분 및 표적화 부분과 함께 공유적으로 연결되며 화합물의 더 나은 용해도를 제공하는 친수성 기를 통합시키는 친수성 자가-희생 스페이서를 사용한다. 일부 효소-불안정성 링커의 증가된 관련된 소수성은 약물 컨쥬게이트, 특히 강력한 소수성 약물과의 컨쥬게이트의 응집을 유도할 수 있다. 링커 안으로의 친수성 기의 통합으로, 약물 컨쥬게이트의 응집은 감소될 수 있다.
자가-희생 스페이서는 2개의 떨어져 있는 화학적 부분을 함께 정상적으로 안정한 3부분 분자로 공유적으로 연결시킬 수 있고, 효소적 절단에 의해 3부분 분자로부터 떨어져 있는 화학적 부분들 중 하나를 방출시킬 수 있으며; 효소적 절단 후에, 떨어져 있는 화학적 부분들 중 다른 하나를 방출시키기 위해 분자의 나머지로부터 자발적으로 절단될 수 있는 이중기능성 화학적 부분으로서 정의될 수 있다.
특정 구체예에서, X는 벤질옥시카르보닐기이다. 특정 구체예에서, X는
Figure pct00049
또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체이며, 식에서 R1은 수소, 비치환 또는 치환된 C1- 3알킬 또는 비치환 또는 치환된 헤테로사이클릴이다.
그런 경우에, 본 개시는 다음 식 (II)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체를 제공한다:
Figure pct00050
식에서:
D는 약물 부분이고;
T는 표적화 부분이며;
R1은 수소, 비치환 또는 치환된 C1- 3알킬 또는 비치환 또는 치환된 헤테로사이클릴이고;
L1은 결합, 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커이며;
L2는 결합 또는 제 2 자가-희생 링커이고;
이때 만약 L1이 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커라면 L2는 결합이며;
L2가 제 2 자가-희생 링커라면 L1은 결합이고;
L3은 펩티드 링커이며;
L4는 결합 또는 스페이서이고; 및
A는 아실 단위이다.
일부 구체예에서, 다음 식 (IIa)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체가 제공된다:
Figure pct00051
(IIa);
식에서 D, T, L1, L2, L3, L4 및 A는 식 (II)에 대해 정의된 것과 같고, p는 1 내지 20이다. 일부 구체예에서, p는 1 내지 8이다. 일부 구체예에서, p는 1 내지 6이다. 일부 구체예에서, p는 1 내지 4이다. 일부 구체예에서, p는 2 내지 4이다. 일부 구체예에서, p는 1, 2, 3 또는 4이다. 일부 구체예에서, p는 2이다. 일부 구체예에서, p는 3이다. 일부 구체예에서, p는 4이다.
식 (II) 또는 (IIa)의 특정 구체예에서, R1은 수소이다. 특정 구체예에서, R1은 메틸이다.
식 (I) 또는 (Ia)에 대해 기술된 D, T, L1, L2, L3, L4 및 A의 각각의 및 모든 변화는 식 (II) 또는 (IIa)에 대해 각각의 및 모든 변화 및 그것들의 조합이 개별적으로 기술되는 것처럼 적용될 수 있는 것으로 의도되고 인지된다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 식 (II) 또는 (IIa)의 표적화 부분은 폴레이트 수용체 알파 (FRA) (예컨대 인간 FRA)에 특이적으로 결합하는 항체이다. 식 (I)에 대해 기술된 D, T, L1, L2, L3, L4 및 A 중 하나의 각각의 및 모든 변화는 식 (I)에 대해 기술된 D, T, L1, L2, L3, L4 및 A 중 다른 하나의 각각의 및 모든 변화와, 적용가능한 경우, 각각의 및 모든 조합이 개별적으로 기술되는 것처럼 조합될 수 있는 것으로 추가로 의도되고 인지된다.
약물 부분의 방출은 아미노벤질옥시카르보닐기의 자가-제거 반응을 기반으로 한다. 예시의 목적으로, 약물 및 부착된 펩티드와의 아미노벤질옥시카르보닐기의 반응 계획도를 아래에 나타낸다.
계획도 1
Figure pct00052
계획도 1을 참조하면, 펩티드로부터 절단시, 아미노벤질옥시카르보닐이 형성되고 자발적인 1,6 제거가 진행되어 사이클로헥사-2,5-다이엔이민 유도체 및 이산화탄소가 형성되고 약물이 방출될 수 있다.
임의의 제 2 자가 -희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커
제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커는 약물 부분을 방출하기 위해 화합물의 미세 조정을 허용하기 위한 추가의 링커를 제공한다.
식 (I) 또는 (Ia)에서, L1은 결합, 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커이고; L2는 결합 또는 제 2 자가-희생 링커이며; 만약 L1이 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커라면 L2는 결합이고; 만약 L2가 제 2 자가-희생 링커라면 L1은 결합이다. 그러므로, 친수성 자가-희생 링커에 인접하여 임의의 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커가 있다.
특정 구체예에서, L1은 결합이고 L2는 결합이다. 특정 구체예에서, L1은 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커이고 L2는 결합이다. 특정 구체예에서, L1은 결합이고 L2는 제 2 자가-희생 링커이다.
식 (I) 또는 (Ia)에서, 특정 구체예에서, L1은 결합이다. 특정 구체예에서, L1은 제 2 자가-희생 스페이서 또는 고리화 자가-제거 링커이고, 그것은 친수성 자가-희생 링커와 약물 부분을 분리시킨다. 특정 구체예에서, L1은 아미노벤질옥시카르보닐 링커이다.
특정 구체예에서, L1은
Figure pct00053
,
Figure pct00054
,
Figure pct00055
및
Figure pct00056
(식에서 n은 1 또는 2임)으로부터 선택된다.
특정 경우에, 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커는 사용될 수 있는 매우 다양한 부분들에 대해 가능한 디자인을 제공한다. 예를 들어, 식 (II) 또는 (IIa)에서, 친수성 자가-희생 링커와 약물 부분 사이의 카바메이트 연쇄 (-O-C(O)-N(H)-) 연쇄는 안정한 약물 컨쥬게이트를 제공할 것이고 쉽게 절단되어 유리 약물 부분을 제공할 것이다. 친수성 자가-희생 링커는 전형적으로 옥시카르보닐기 (-O-C(O)-)로 종결될 것이다. 만약 약물 부분이 카바메이트기를 형성하기 위한 반응에 사용될 수 있는 아미노-반응성 기를 가진다면, 제 2 자가-희생 단위 또는 고리화 자가-제거 링커는 필요하지 않지만; 여전히 사용될 수는 있다. 그러나, 만약 약물이 아미노기를 함유하지 않지만, 대신 일부 다른 반응성 기능성 기를 함유한다면, 그런 약물들은 약물 부분과 아미노벤질옥시카르보닐기 사이의 제 2, 중간 자가-희생 스페이서 또는 고리화 자가-제거 링커를 포함함으로써, 본 구체예의 아미노벤질옥시카르보닐-함유 화합물 안에 통합될 수 있어야 한다.
아래의 L1의 고리화 자가-제거 링커는 친수성 자가-희생 링커의 아미노벤질옥시카르보닐기에 하이드록실-함유 또는 티올-함유 약물 부분의 연쇄를 제공한다:
Figure pct00057
,
Figure pct00058
및
Figure pct00059
.
구체예들의 화합물들에서 고리화 자가-제거 링커는 약물 부분을 방출하기 위해 화합물의 절단을 제공한다. 인접한 친수성 자가-희생 링커의 제거 메커니즘은 L1의 아미노기를 드러낼 것이다. 그러면 아미노기는 L1의 카바메이트 기 또는 티오카바메이트 연쇄와 반응하고 하이드록실-함유 또는 티올-함유 약물 부분을 방출시키기 위해 고리화 반응에서 약물 부분과 반응한다.
식 (I) 또는 (Ia)에서, 특정 구체예에서, L2는 결합이다. 특정 구체예에서, L2는 친수성 자가-희생 링커와 펩티드 링커를 분리시키는 제 2 자가-희생 스페이서이다. 특정 구체예에서, L2는 아미노벤질옥시카르보닐 링커이다.
특정 구체예에서, L2는
Figure pct00060
,
Figure pct00061
,
Figure pct00062
및
Figure pct00063
(식에서 n은 1 또는 2임)으로부터 선택된다.
임의의 스페이서
식 (I) 또는 (Ia)에서, L4는 결합 또는 스페이서이다. 특정 구체예에서, L4는 결합이다. 특정 구체예에서, L4는 스페이서이고, 그것은 약물 부분과 표적화 부분 사이에 거리를 제공할 수 있다.
특정 구체예에서, 스페이서는 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로고리형, 치환된 헤테로고리형 및 헤테로원자, 및 그것들의 조합으로부터 선택된다. 스페이서는 그것의 원자 함량에 있어 동종성이거나 이질성일 수 있다 (예컨대 단지 탄소 원자들만을 함유하는 스페이서 또는 탄소 원자들뿐만 아니라 스페이서 상에 존재하는 하나 이상의 헤테로원자들을 함유하는 스페이서). 바람직하게, 스페이서는 1 내지 50 탄소 원자 및 산소, 질소 및 황으로부터 선택된 0 내지 30개의 헤테로원자를 함유한다. 스페이서는 또한 키랄 또는 아키랄, 선형, 분지형 또는 고리형일 수 있다.
특정 구체예에서, L4는 폴리알킬렌 글리콜, 알킬렌, 알케닐렌, 알키닐렌 및 폴리아민으로부터 선택된 스페이서이다. 알케닐렌의 예를 들면, 그것들에 한정되는 것은 아니지만, 비닐렌 (-CH=CH-), 알릴렌 (-CH2C=C-) 및 부트-3-엔-1-일렌 (-CH2 CH2C=CH-)을 포함한다. 알키닐렌의 실례는, 그것들에 한정되는 것은 아니지만, 아세틸레닐렌 (-C≡C-) 및 프로파르길렌 (-CH2C≡C-)을 포함한다.
특정 구체예에서, L4는 펩티드 연쇄의 말단 단부에 연쇄를 제공할 수 있는 기능성 기를 포함하는 스페이서이다. 기능성 기, 예컨대 C(O), C(O)-NH, S(O)2 및 S(O)2-NH는 펩티드 연쇄의 말단 단부에 연쇄를 제공할 수 있다. 특정 경우에, L4는 L4a-C(O), L4a-C(O)-NH, L4a-S(O)2, L4a-S(O)2-NH이고, 이때 L4a는 폴리알킬렌 글리콜, 알킬렌, 알케닐렌, 알키닐렌 및 폴리아민으로부터 선택된다. 특정 경우에, L4는 L4a-C(O)이고, 이때 L4a는 폴리알킬렌 글리콜, 알킬렌, 알케닐렌, 알키닐렌 및 폴리아민으로부터 선택된다.
특정 구체예에서, L4는 L4a-C(O)이고, 이때 L4a는 폴리알킬렌 글리콜이다. 특정 구체예에서, L4는 L4a-C(O)이고, 이때 L4a는 폴리에틸렌 글리콜이다. 특정 구체예에서, 스페이서는 식 -CH2-(CH2-O-CH2)m-CH2-C(O)-의 것이고, 이때 m은 0 내지 30의 정수이다.
특정 구체예에서, L4는 L4a-C(O)이고, 이때 L4a는 알킬렌이다. 특정 구체예에서, L4는 L4a-C(O)이고, 이때 L4a는 C1- 10알킬렌, C1- 8알킬렌 또는 C1- 6알킬렌이다. 특정 구체예에서, L4는 L4a-C(O)이고, 이때 L4a는 C4알킬렌, C5알킬렌 또는 C6알킬렌이다. 특정 구체예에서, L4는 L4a-C(O)이고, 이때 L4a는 C5알킬렌이다.
아실 단위
식 (I) 또는 (Ia)에서, A는 아실 단위이다. 특정 구체예에서, 아실 단위 "A"는 황 원자를 포함하고, 표적화 부분으로부터 유도된 황 원자를 통해 표적화 부분에 연결된다. 그런 경우에 다이티오 결합이 아실 단위와 표적화 부분 사이에 형성된다.
특정 구체예에서, A는
Figure pct00064
,
Figure pct00065
,
Figure pct00066
,
Figure pct00067
,
Figure pct00068
,
Figure pct00069
,
Figure pct00070
및
Figure pct00071
으로부터 선택되며; 식에서 Q2는 NH 또는 O이고, 각각의 q는 독립적으로 1 내지 10의 정수이며, 각각의 q1은 독립적으로 1 내지 10의 정수이다. 일부 구체예에서, q는 2 내지 5의 정수, 예컨대 2, 3, 4 또는 5이다. 일부 구체예에서, q1은 2 내지 5의 정수, 예컨대 2, 3, 4 또는 5이다.
특정 구체예에서, A는
Figure pct00072
이고, 이때 Q2는 NH 또는 0이며 q는 1 내지 10의 정수이다. 특정 경우에, q는 2 내지 5의 수, 예컨대 2, 3, 4 또는 5이다.
특정 구체예에서, A는
Figure pct00073
이고, 이때 Q2는 NH 또는 0이며 q는 1 내지 10의 정수이다. 특정 경우에, q는 2 내지 5의 수, 예컨대 2, 3, 4 또는 5이다.
특정 구체예에서, A는:
Figure pct00074
,
Figure pct00075
,
Figure pct00076
,
Figure pct00077
,
Figure pct00078
및
Figure pct00079
으로부터 선택되고, 식에서 Q2는 NH 또는 O이다.
약물 부분
본 구체예들의 약물 컨쥬게이트는 해당하는 약물들이 효과적이고, 표적화 부분에 고유한, 그곳에서 약물이 특히 유익하게 작용하는 원하는 세포에 그 약물을 수송하는 능력으로 인해 월등한 효능을 가져야 하는 통상적인 목적에 대해 효과적이다.
본 구체예들에 사용하기에 바람직한 약물들은 세포독성 약물, 예컨대 암 치료법에 사용되는 것들이다. 그런 약물들은 일반적으로, DNA 손상 제제, 항-대사산물, 자연 생성물 및 그것들의 유사체를 포함한다. 세포독성제의 특정 부류로는, 예를 들면, 효소 억제제, 예컨대 다이하이드로폴레이트 환원효소 억제제, 타이미딜레이트 합성효소 억제제, DNA 삽입제, DNA 절단제, 토포아이소메라제 억제제, 약물의 안트라사이클린 패밀리, 빈카 약물, 미토마이신, 블레오마이신, 세포독성 뉴클레오시드, 약물의 프테리딘 패밀리, 다이인엔, 포도필로톡신, 분화 유도제 및 탁솔을 포함한다. 그런 부류의 특정한 유용한 구성원은, 예를 들면 메토트렉세이트, 메토프테린, 다이클로로메토트렉세이트, 5-플루오로우라실, 6-머캅토퓨린, 시토신 아라비노시드, 멜팔란, 로이로신, 로이로시데인, 악티노마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 미토마이신 C, 미토마이신 A, 카르미노마이신, 아미노프테린, 탈리소마이신, 포도필로톡신 및 포도필로독신 유도체, 예컨대 에토포시드 또는 에토포시드 포스페이트, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 탁솔, 탁소테어 레틴산, 부티르산, N8-아세틸 스퍼미딘, 캄프토테신 및 그것들의 유도체를 포함한다. 다른 약물은 돌라스타틴 및 듀오카르마이신을 포함한다.
기술분야의 숙련자는 원하는 화합물의 반응을 발명의 컨쥬게이트를 제조하는 목적에 대해 보다 편리하게 만들기 위해 그 화합물에 대해 화학적 변형을 만들 수 있다.
특정 구체예에서, D는 L1 또는 X에 결합되는 약물에 의해 화학적으로 반응성인 기능성 기를 가지는 약물 부분이다. 특정 경우에, 기능성 기는 일차 아민, 이차 아민, 하이드록실 및 설프하이드릴로부터 선택된다. 특정 경우에, 기능성 기는 일차 아민 또는 이차 아민이다. 특정 경우에, 기능성 기는 하이드록실이다. 특정 경우에, 기능성 기는 설프하이드릴이다.
상기에서 논의된 것과 같이, 친수성 자가-희생 링커는 전형적으로 옥시카르보닐기 (-O-C(O)-)로 종결될 것이다. 그러므로, 아미노-함유 약물 부분은 카바메이트기를 형성하기 위하여 옥시카르보닐기와 쉽게 반응할 것이다. 특정 구체예에서, D는 아미노-함유 약물 부분이고, 이때 약물은 아미노기를 통해 L1 또는 X에 연결된다.
그러나, 만약 약물 부분이 아미노기를 함유하지 않으면, L1의 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커는 사용될 수 있는 매우 다양한 부분에 가능한 디자인을 제공할 수 있다. 특정 구체예에서, D는 하이드록실-함유 또는 설프하이드릴-함유 약물 부분이고, 이때 약물은 하이드록실 또는 설프하이드릴 기를 통해 L1에 연결된다.
대표적인 아미노-함유 약물은 미토마이신-C, 미토마이신-A, 다우노루비신, 독소루비신, 아미노프테린, 악티노마이신, 블레오마이신, 9-아미노 캄프토테신, N8-아세틸 스퍼미딘, 1-(2-클로로에틸)-1,2-다이메탄설포닐 하이드라지드, 탈리소마이신, 시타라빈, 돌라스타틴 및 그것들의 유도체를 포함한다. 아미노-함유 약물들은 또한 아미노기를 자연적으로 함유하지 않는 약물들의 아미노 유도체들을 포함한다. 특정 구체예에서, D는 듀오카르마이신, 돌라스타틴, 튜불라이신, 독소루비신 (DOX), 파클리탁셀 또는 미토마이신 C (MMC) 또는 그것들의 아미노 유도체들이다.
대표적인 하이드록실-함유 약물은 에토포시드, 캄프토테신, 탁솔, 에스페라마이신, 1,8-다이하이드록시-바이사이클로[7.3.1] 트라이데카-4-9-다이엔-2,6-다이인-13-온 (미국 특허 번호 5,198,560), 포도필로톡신, 안구이딘, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 모르폴린-독소루비신, n-(5,5-다이아세톡시-펜틸)독소루비신, 듀오카르마이신 및 그것들의 유도체를 포함한다.
대표적인 설프하이드릴-함유 약물은 에스페라마이신 및 6-메르캅토퓨린 및 그것들의 유도체를 포함한다.
본 구체예들에서 약물로서 사용하기 위한 세포독성제들의 특정 그룹은 다음식의 약물들을 포함한다;
Figure pct00080
(돌라스타틴의 아미노 유도체)
Figure pct00081
(듀오카르마이신의 아미노 유도체)
Figure pct00082
(듀오카르마이신의 아미노 유도체).
표적화 부분
본 개시에서 기술된 것과 같은 표적화 부분은 주어진 세포 집단 (예컨대 FRA 발현 세포)에 특이적으로 결합하거나, 그것과 복합체를 형성하거나, 그것과 반응하거나 또는 그것과 회합하는 부분 또는 분자를 나타낸다. 본원에 기술된 컨쥬게이트에서, 본원에 기술된 표적화 부분은 컨쥬게이트의 약물 부분에 링커를 통해 연결된다. 일부 구체예에서, 표적화 부분은 표적화 부분이 결합하거나, 그것과 복합체를 형성하거나 또는 회합하는 특별한 표적 세포 집단에 약물 부분 (예컨대 치료 목적으로 사용된 약물 부분)을 전달할 수 있다.
일부 구체예에서, 표적화 부분은 항체 (또는 항체 부분 또는 항체 표적화 부분)이다. 일부 구체예에서, 표적화 부분은 설프하이드릴 (-SH) 기 (예컨대 유리 반응성 설프하이드릴 (-SH)기)를 포함하거나 그런 설프하이드릴기를 함유하도록 변형될 수 있다. 일부 구체예에서, 표적화 부분은 설프하이드릴기 (예컨대 유리 반응성 설프하이드릴기)를 가지는 항체를 포함한다. 일부 구체예에서, 표적화 부분은 유리 티올기를 가지는 항체와 같이 유리 티올기를 포함하거나 그런 티오기를 함유하도록 변형될 수 있다. 일부 구체예에서, 설프하이드릴기 또는 티올기를 포함하는 표적화 부분은 설프하이드릴기의 황 원자를 통해 링커에 결합한다.
일부 구체예에서, 표적화 부분 (예컨대 항체 표적화 부분)은 약물 부분에 연결하기 위한 하나 이상의 부착 부위를 가진다. 예를 들어, 표적화 부분 T (예컨대 항체)은 링커-약물 부분 (예컨대 A-L4-L3-L2-X-L1-D, 여기서 A는 표적화 부분의 설프하이드릴기에 결합하기에 적합함)에 연결하기 위한 다수의 부위 (예컨대 다중 설프하이드릴기)를 가질 수 있다. 일부 구체예에서, 표적화 부분은 1 내지 20개의 부착 부위를 가질 수 있다. 일부 구체예에서, 표적화 부분은 1 내지 20, 1 내지 10, 1 내지 8, 1 내지 6, 1 내지 4, 2 내지 8, 2 내지 6 또는 2 내지 4개의 부착 부위를 가질 수 있다. 일부 구체예에서, 표적화 부분은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 부착 부위를 가진다. 일부 구체예에서, 표적화 부분은 2개의 부착 부위를 가진다. 일부 구체예에서, 표적화 부분은 1개의 부착 부위를 가진다. 일부 구체예에서, 표적화 부분은 4개의 부착 부위를 가진다. 일부 경우에, 특정한 잠재적 부착 부위는 약물 부분에의 결합에 대해 접근이 가능하지 않을 수 있다. 그러므로, 표적화 부분 T에서 부착 부위의 수는 잠재적인 부착 부위의 수보다 적은 수의 부착된 약물 부분을 가지는 약물 컨쥬게이트를 초래할 수 있다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 부착 부위가 약물 부분에 결합하기 위해 접근 가능할 수 있다. 예를 들어, 항체 표적화 부분은 링커를 통해 약물 부분에 결합하기 위해 접근 가능한 항체의 각 사슬에 하나 또는 2개의 설프하이드릴기를 가질 수 있다.
본원에 기술된 항체는 면역글로불린 분자의 가변 영역에 위치한 적어도 하나의 항원 인식 부위를 통해 표적 (즉 FRA)에 특이적으로 결합할 수 있는 면역글로불린 분자를 나타낸다. 본원에서 사용되는 용어 "항체"는 무상 다클론성 또는 단클론성 항체뿐 아니라, 그것의 항원-결합 단편 (예컨대 Fab, Fab', F(ab')2, Fv), 단일 사슬 (ScFv), 그것의 돌연변이들, 항체 부분을 포함하는 융합 단백질 및 항원 인식 부위를 포함하는 면역글로불린 분자의 어떠한 다른 변형된 형태를 포함한다. 항체는 어떠한 부류의 항체, 예컨대 IgG, IgA 또는 IgM (또는 그것들의 하위-부류)을 포함하고, 항체는 어떠한 특정 부류의 것일 필요는 없다. 중쇄의 불변 도메인의 항체 아미노산 서열에 따라, 면역글로불린은 상이한 부류로 배정될 수 있다. 면역글로불린에는 5개의 주요 부류: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이 있고, 이들 중 여러 개는 하위부류 (아이소타입), 예컨대 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2로 더 나누어질 수 있다. 면역글로불린의 상이한 부류들에 해당하는 중쇄 불변 도메인들은 각각 알파, 델타, 엡실론, 감마 및 뮤로 불린다. 상이한 부류의 면역글로불린의 하위단위 구조 및 삼-차원 형태들은 잘 알려져 있다.
본원에 기술된 표적화 부분 (또는 항체 표적화 부분)에 포함되거나 사용된 항체는 단클론성 항체, 다클론성 항체, 항체 단편 (예컨대 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, Fc 등), 키메라 항체, 인간화된 항체, 인간 항체 (예컨대 전체 인간 항체), 단일 사슬 (ScFv), 이중특이성 항체, 다중특이성 항체, 그것들의 돌연변이, 항체 부분을 포함하는 융합 단백질 및 필요한 특이성의 항원 인식 부위를 포함하는 면역글로불린 분자의 어떠한 다른 변형된 형태를 포함할 수 있다. 항체는 쥐과 동물, 래트, 카멜, 인간 또는 어떠한 다른 기원 (인간화된 항체를 포함하여)의 것일 수 있다. 일부 구체예에서, 본원에 기술된 표적화 부분 (또는 항체 표적화 부분)에 사용된 항체는 다음 중 어떠한 한 가지이다: 이중특이성 항체, 다중특이성, 단일-사슬, 이중기능성, 및 항체의 적어도 하나의 초가변성 영역 (HVR) 또는 상보성 결정 영역 (CDR)에 의해 부여된 폴리펩티드에 대한 친화성을 가지는 키메라 및 인간화된 분자. 본 개시에 사용된 항체들은 또한 항체 중쇄의 가변 도메인 또는 항체 경쇄의 가변 도메인 중 어느 하나인 단일 도메인 항체를 포함한다. Holt et al., Trends Biotechnol. 21:484-490, 2003. 항체로부터의 자연적으로 발생하는 6개의 HVR 또는 CDR 중 3개를 함유하는, 항체 중쇄의 가변 도메인 또는 항체 경쇄의 가변 도메인 중 어느 하나를 포함하는 도메인 항체의 제조 방법 또한 기술분야에 공지되어 있다. 예컨대 Muyldermans, Rev. Mol. Biotechnol. 74:277-302, 2001 참조.
일부 구체예에서, 본원에 기술된 표적화 부분 (또는 항체 표적화 부분)에 포함된 또는 사용된 항체는 단클론성 항체이다. 본원에서 사용되는 단클론성 항체는 실질적으로 동질성인 항체들의 항체를 나타낸다, 즉 집단을 포함하는 개별적인 항체들은 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연적으로-발생하는 돌연변이를 제외하고 동일하다. 나아가, 전형적으로 상이한 결정기들 (에피토프들)에 대해 지시된 상이한 항체들을 포함하는 다클론성 항체 제조와 대조적으로, 단클론성 항체는 별개의 항체들의 혼합물이 아니다. 수식어 "단클론성"은 실질적으로 동질성인 항체 집단으로부터 얻어지는 것으로서의 항체의 특성을 나타내고, 어떠한 특별한 방법에 의한 항체의 제조를 필요로 하는 것으로서 해석되지 않는다. 예를 들어, 본 개시에 사용된 단클론성 항체는 Kohler와 Milstein에 의해 먼저 기술된 것과 같은 (1975, Nature, 256:495) 하이브리도마 방법에 의해 제조되거나, 또는 미국 특허 번호 4,816,567에 기술된 것과 같은 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다. 단클론성 항체들은 또한 예를 들어 McCafferty et al., 1990, Nature, 348:552-554에 기술된 기법들을 사용하여 생성된 파지 라이브러리로부터 분리될 수 있다.
일부 구체예에서, 본원에 기술된 표적화 부분 (또는 항체 표적화 부분)에 포함된 또는 사용된 항체는 키메라 항체이다. 본원에서 사용된 키메라 항체는 제 1 종으로부터의 가변 영역 또는 가변 영역의 부분 및 제 2 종으로부터의 불변 영역을 가지는 항체를 나타낸다. 무상 키메라 항체는 키메라 경쇄의 2개의 복사물 및 키메라 중쇄의 2개의 복사물을 포함한다. 키메라 항체의 제조는 기술분야에 알려져 있다 (Cabilly et al. (1984), Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 81:3273-3277; Harlow and Lane (1988), Antibodies: a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory). 전형적으로, 이들 키메라 항체에서, 경쇄 및 중쇄 둘 다의 가변 영역은 포유류의 한 종으로부터 유도된 항체들의 가변 영역을 모방하는 한편, 불변 부분들은 다른 종으로부터 유도된 항체들의 서열에 상동한다. 그런 키메라 형태들에 대한 한 가지 분명한 장점은, 예를 들면, 가변 영역들은 쉽게 활용할 수 있는 하이브리도마를 사용하여 현재 알려져 있는 공급원으로부터 또는 예를 들면 인간 세포 제제로부터 유도된 불변 영역과 함께 비-인간 숙주 유기체로부터의 B 세포로부터 편리하게 유도될 수 있다. 가변 영역은 제조가 쉽다는 장점을 가지고, 특이성이 그것의 공급원에 의해 영향을 받지 않는 한편, 인간인 불변 영역은 항체들이 주입될 때 비-인간 공급원으로부터의 불변 영역보다 인간 대상으로부터 면역 반응을 덜 유도하는 것 같다. 그러나, 정의는 이런 특별한 실례에 제한되지 않는다.
일부 구체예에서, 본원에 기술된 표적화 부분 (또는 항체 표적화 부분)에 포함된 또는 사용된 항체는 인간화된 항체이다. 본원에서 사용되는 인간화된 항체는 비-인간 면역글로불린으로부터 유도된 최소 서열을 함유하는 특이적인 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 사슬 또는 그것들의 단편 (예컨대 Fv, Fab, Fab', F(ab')2 또는 항체들의 다른 항원-결합 서열들)인 비-인간 (예컨대 쥐과) 항체들의 형태를 나타낸다. 대부분, 인간화된 항체는 수용주 (recipient)의 HVR 또는 CDR로부터의 잔기들이 비-인간 종 (공여 항체), 예컨대 원하는 특이성, 친화성 및 용량을 가지는 마우스, 래트 또는 토끼의 HVR 또는 CDR로부터의 잔기들에 의해 대체되는 인간 면역글로불린 (수용주 항체)이다. 일부 경우에, 인간 면역글로불린의 Fv 프레임워크 영역 (FR) 잔기들은 해당하는 비-인간 잔기들에 의해 대체된다. 나아가, 인간화된 항체는 수용자 항체에서나 도입된 HVR 또는 CDR 또는 프레임워크 서열에서 발견되지 않지만, 항체 성능을 추가로 개선하고 최적화하기 위해 포함되는 잔기들을 포함할 수 있다. 일반적으로, 인간화된 항체는 적어도 하나, 전형적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것인데, 이때 모든 또는 실질적으로 모든 HVR 또는 CDR 영역은 비-인간 면역글로불린의 HVR 또는 CDR 영역에 해당하고 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은 인간 면역글로불린 일치 서열의 FR 영역이다. 인간화된 항체는 최적으로 또한 전형적으로 인간 면역글로불린의 것인, 면역글로불린 불변 영역 또는 도메인 (Fc)의 적어도 일부를 포함할 것이다. 항체는 WO 99/58572에 기술된 것과 같이 변형된 Fc 영역을 가질 수 있다. 인간화된 항체의 다른 형태들은 원래의 항체와 관련하여 변경된 하나 이상 (1, 2, 3, 4, 5, 6개)의 HVR 또는 CDR을 가지며, 그것들은 원래의 항체로부터의 하나 이상의 HVR 또는 CDR"로부터 유도된" 하나 이상의 HVR 또는 CDR로 명명된다.
일부 구체예에서, 본원에 기술된 표적화 부분 (또는 항체 표적화 부분)에 포함된 또는 사용된 항체는 인간 항체이다. 본원에서 사용되는 인간 항체는 인간에 의해 제조된 및/또는 기술분야에 공지된 인간 항체의 제조 기법들 중 어느 것을 사용하여 제조된 항체의 아미노산 서열에 해당하는 아미노산 서열을 가지는 항체를 의미한다. 본원에서 사용된 인간 항체는 적어도 하나의 인간 중쇄 폴리펩티드 또는 적어도 하나의 인간 경쇄 폴리펩티드를 포함하는 항체들을 포함한다. 하나의 그런 실례는 쥐과의 경쇄 및 인간 중쇄 폴리펩티드를 포함하는 항체이다. 인간 항체들은 기술분야에 공지된 다양한 기법들을 사용하여 제조될 수 있다. 한 구체예에서, 인간 항체는 인간 항체들을 발현하는 파지 라이브러리로부터 선택된다 (Vaughan et al., 1996, Nature Biotechnology, 14:309-314; Sheets et al., 1998, PNAS, (USA) 95:6157-6162; Hoogenboom and Winter, 1991, J. Mol. Biol., 227:381; Marks et al., 1991, J. Mol. Biol., 222:581). 인간 항체들은 또한 인간 면역글로불린 유전자좌들을 유전자 도입 동물들, 예컨대 내인성 면역글로불린 유전자들이 부분적으로 또는 완전하게 비활성화되어 있는 마우스에 도입함으로써 제조될 수 있다. 이 접근법은 미국 특허 번호 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 및 5,661,016에 기술되어 있다. 다르게는, 인간 항체는 표적 항원에 대해 지시된 항체를 생성하는 인간 B 림프구를 불멸화시킴으로써 제조될 수 있다 (그런 B 림프구는 개체로부터 회수되거나 시험관 내에서 인간화될 수 있다). 예컨대 Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner et al., 1991, J. Immunol., 147 (1):86-95; 및 미국 특허 번호 5,750,373 참조.
일부 구체예에서, 본원에 기술된 표적화 부분 (또는 항체 표적화 부분)에 포함된 또는 사용된 항체는 폴레이트 수용체 알파 (즉 FRA) (예컨대 인간 FRA)에 특이적으로 결합한다. 일부 구체예에서, 본원에 기술된 표적화 부분 (또는 항체 표적화 부분)에 포함된 또는 사용된 항체는 FRA의 세포외 도메인 (예컨대 인간 FRA의 세포외 도메인)에 특이적으로 결합한다. 본원에서 사용되는 "FRA"는 야생형 서열 및 자연적으로 발생하는 변이체 서열 둘 다를 나타낸다. 본 발명의 항체들에 의해 인식되는 FRA의 비-제한적인 실례는 인간 FRA (승인 번호 P15328)이다.
인간 폴레이트 수용체 알파의 아미노산 서열이 아래에 제시된다:
SEQ ID NO:35 (인간 FRA)
MAQRMTTQLL LLLVWVAVVG EAQTRIAWAR TELLNVCMNA KHHKEKPGPE DKLHEQCRPW
RKNACCSTNT SQEAHKDVSY LYRFNWNHCG EMAPACKRHF IQDTCLYECS PNLGPWIQQV
DQSWRKERVL NVPLCKEDCE QWWEDCRTSY TCKSNWHKGW NWTSGFNKCA VGAACQPFHF
YFPTPTVLCN EIWTHSYKVS NYSRGSGRCI QMWFDPAQGN PNEEVARFYA AAMSGAGPWA
AWPFLLSLAL MLLWLLS
일부 구체예에서, 본원에 기술된 항-FRA 항체는 인간 세포 (예컨대 인간 암세포)의 세포 표면에 발현된 성숙한 FRA (예컨대 인간 FRA)에 결합한다. 일부 구체예에서, 본원에 기술된 항-FRA 항체는 인간 암세포 (예컨대 난소암 세포, 폐암 세포, 자궁암 세포, 고환 융모막 암종 세포, 상의세포종 세포, 중피종 세포, 유방암 세포, 대장암 세포 또는 신장 세포 암종 세포)의 세포 표면에 발현된 성숙한 FRA에 결합한다.
항-FRA 항체 및 그것들의 아미노산 서열의 실례가 아래의 표 1에 제시된다.
항- FRA 항체들의 아미노산 서열
SEQ ID NO. 설명
1 hLK26-IgG1 중쇄
2 hLK26-IgG4p 중쇄
3 hLK26-카파 경쇄
4 26B3 (마우스) IgG1 중쇄
5 26B3 (마우스) 카파 경쇄
6 hMov19-IgG1 중쇄
7 hMov19-카파 셩쇄
8 hLK26 중쇄 가변 영역
9 hLK26 경쇄 가변 영역
10 26B3 중쇄 가변 영역
11 26B3 경쇄 가변 영역
12 hMov19 중쇄 가변 영역
13 hMov19 경쇄 가변 영역
IgG4p는 Ser228의 Pro (S228P)로의 돌연변이를 가진 인간 IgG4 항체를 나타내는데, 그것은 생체 내에서 Fab가 다른 IgG4로 교체되는 것을 방지할 것이다 (Stubenrauch et al., (2010) Drug Metab Dispos. 38(1):84-91).
아래에 제시된 서열들의 밑줄로 표시된 부분은 가변 영역의 서열들을 나타낸다. 아래에 제시된 서열들의 진한 부분은 CDR을 나타낸다.
SEQ ID NO:1 (hLK26-IgG1 중쇄):
EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCSASGFTFS GYGLS WVRQAPGKGLEWVA MISSGGSYTYYADSVKG RFAIS
RDNAKNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCAR HGDDPAWFAY WGQGTPVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTA
ALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKV
DKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGV
EVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP
SRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS
CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:2 (hLK26-IgG4p 중쇄):
EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCSASGFTFS GYGLS WVRQAPGKGLEWVA MISSGGSYTYYADSVKG RFAIS
RDNAKNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCAR HGDDPAWFAY WGQGTPVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTA
ALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKV
DKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVH
NAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQE
EMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSV
MHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:3 (hLK26-카파 경쇄):
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC SVSSSISSNNLH WYQQKPGKAPKPWIY GTSNLAS GVPSRFSGSGSGTD
YTFTISSLQPEDIATYYC QQWSSYPYMYT FGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF
YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFN
RGEC
SEQ ID NO:4 (26B3 (마우스) IgG1 중쇄):
GPELVKPGASVKISCKASDYSFT GYFMN WVMQSHGKSLEWIG RIFPYNGDTFYNQKFKG RATLTVDKSSST
AHMELRSLASEDSAVYFCAR GTHYFDY WGQGTTLTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYF
PEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSPRPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGC
KPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNS
TFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMI
TDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMNTNGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKS
LSHSPGK
SEQ ID NO:5 (26B3 (마우스) 카파 경쇄):
PASLSASVGETVTITC RTSENIFSYLA WYQQKQGISPQLLVY NAKTLAE GVPSRFSGSGSGTQFSLKINSL
QPEDFGSYYC QHHYAFPWT FGGGSKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWK
IDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
SEQ ID NO:6 (hMov19-IgG1 중쇄):
QVQLVQSGAEVVKPGASVKISCKASGYTFT GYFMN WVKQSPGQSLEWIG RIHPYDGDTFYNQKFQG KATLT
VDKSSNTAHMELLSLTSEDFAVYYCTR YDGSRAMDY WGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAA
LGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD
KKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVE
VHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPS
RDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSC
SVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:7 (hMov19-카파 경쇄):
DIVLTQSPLSLAVSLGQPAIISC KASQSVSFAGTSLMH WYHQKPGQQPRLLIY RASNLEA GVPDRFSGSGS
KTDFTLTISPVEAEDAATYYC QQSREYPYT FGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNN
FYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF
NRGEC
SEQ ID NO:8 (hLK26 중쇄 가변 영역)
EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCSASGFTFSGYGLSWVRQAPGKGLEWVAMISSGGSYTYYADSVKGRFAIS
RDNAKNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCARHGDDPAWFAYWGQGTPVTVSS
SEQ ID NO:9 (hLK26 경쇄 가변 영역)
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCSVSSSISSNNLHWYQQKPGKAPKPWIYGTSNLASGVPSRFSGSGSGTD
YTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSYPYMYTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO:10 (26B3 중쇄 가변 영역)
GPELVKPGASVKISCKASDYSFTGYFMNWVMQSHGKSLEWIGRIFPYNGDTFYNQKFKGRATLTVDKSSST
AHMELRSLASEDSAVYFCARGTHYFDYWGQGTTLTVSS
SEQ ID NO:11 (26B3 경쇄 가변 영역)
PASLSASVGETVTITCRTSENIFSYLAWYQQKQGISPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSL
QPEDFGSYYCQHHYAFPWTFGGGSKLEIK
SEQ ID NO:12 (hMov19 중쇄 가변 영역)
QVQLVQSGAEVVKPGASVKISCKASGYTFTGYFMNWVKQSPGQSLEWIGRIHPYDGDTFYNQKFQGKATLT
VDKSSNTAHMELLSLTSEDFAVYYCTRYDGSRAMDYWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO:13 (hMov19 경쇄 가변 영역)
DIVLTQSPLSLAVSLGQPAIISCKASQSVSFAGTSLMHWYHQKPGQQPRLLIYRASNLEAGVPDRFSGSGS
KTDFTLTISPVEAEDAATYYCQQSREYPYTFGGGTKLEIK
상기 항-FRA 항체들의 CDR이 아래의 표 2에 제시된다.
항- FRA 항체의 CDR의 아미노산 서열
hLK26 26B3 hMov19
CDR-H1 GYGLS
(SEQ ID NO:14)		 GYFMN
(SEQ ID NO:20)		 GYFMN
(SEQ ID NO:26)
CDR-H2 MISSGGSYTYYADSVKG
(SEQ ID NO:15)		 RIFPYNGDTFYNQKFKG
(SEQ ID NO:21)		 RIHPYDGDTFYNQKFQG
(SEQ ID NO:27)
CDR-H3 HGDDPAWFAY
(SEQ ID NO:16)		 GTHYFDY
(SEQ ID NO:22)		 YDGSRAMDY
(SEQ ID NO:28)
CDR-L1 SVSSSISSNNLH
(SEQ ID NO:17)		 RTSENIFSYLA
(SEQ ID NO:23)		 KASQSVSFAGTSLMH
(SEQ ID NO:29)
CDR-L2 GTSNLAS
(SEQ ID NO:18)		 NAKTLAE
(SEQ ID NO:24)		 RASNLEA
(SEQ ID NO:30)
CDR-L3 QQWSSYPYMYT
(SEQ ID NO:19)		 QHHYAFPWT
(SEQ ID NO:25)		 QQSREYPYT
(SEQ ID NO:31)
중쇄 불변 영역의 아미노산 서열은 아래에 제시된다:
SEQ ID NO:32 (IgG1 중쇄 불변 영역)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV
PSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV
TCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPA
PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSD
GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:33 (IgG4p 중쇄 불변 영역)
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV
PSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV
VVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIE
KTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:34 (카파 경쇄 불변 영역)
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSST
LTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 항체 hLK26, hMov19, 또는 이들 항체 중 어느 것으로부터 유도된 항체이다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 항체 26B3으로부터 유도된 항체 (예컨대 인간화된 또는 키메라 항체)이다. 항체 hLK26, hMov19 및 26B3의 경쇄 및 중쇄 가변 서열은 상기 표 1에서 제시된다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 항체 hLK26 또는 hMov19 (또는 이들 항체 중 어느 것으로부터 유도된 항체)의 경쇄 및/또는 중쇄로부터의 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 항체 hLK26 또는 hMov19 (또는 이들 항체 중 어느 것으로부터 유도된 항체)의 경쇄 또는 중쇄로부터의 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR), 예컨대 상기 표 2에 나타낸 CDR 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 항체 hLK26 또는 hMov19 (또는 이들 항체 중 어느 것으로부터 유도된 항체)의 경쇄 및 중쇄로부터의 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR), 예컨대 상기 표 2에 나타낸 CDR 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 항체 26B3 또는 항체 26B3으로부터 유도된 항체 (예컨대 인간화된 또는 키메라 항체)의 경쇄 및/또는 중쇄로부터의 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 항체 26B3 또는 항체 26B3으로부터 유도된 항체 (예컨대 인간화된 또는 키메라 항체)의 경쇄 또는 중쇄로부터의 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR), 예컨대 상기 표 2에 나타낸 CDR 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 항체 26B3 또는 항체 26B3으로부터 유도된 항체 (예컨대 인간화된 또는 키메라 항체)의 경쇄 및 중쇄로부터의 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR), 예컨대 상기 표 2에 나타낸 CDR 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 항체 hLK26 또는 hMov19의 단편 또는 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 항체 26B3으로부터 유도된 항체 (예컨대 인간화된 또는 키메라 항체)의 단편 또는 영역을 포함한다. 한 구체예에서, 단편은 항체 hLK26 또는 hMov19의 경쇄 가변 영역을 포함한다. 한 구체예에서, 단편은 항체 26B3 또는 항체 26B3으로부터 유도된 항체 (예컨대 인간화된 또는 키메라 항체)의 경쇄 가변 영역을 포함한다. 다른 구체예에서, 단편은 항체 hLK26 또는 hMov19의 중쇄 가변 영역을 포함한다. 다른 구체예에서, 단편은 항체 26B3 또는 항체 26B3으로부터 유도된 항체 (예컨대 인간화된 또는 키메라 항체)의 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 항체 hLK26 또는 hMov19의 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 항체 26B3 또는 항체 26B3으로부터 유도된 항체 (예컨대 인간화된 또는 키메라 항체)의 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 단편은 항체 hLK26, 26B3 또는 hMov19의 경쇄 및/또는 중쇄로부터의 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 단편은 항체 hLK26, 26B3 또는 hMov19의 경쇄 및 중쇄로부터의 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체 hLK26, 26B3 또는 hMov19로부터 유도된 하나 이상의 HVR (또는 CDR)은 hLK26, 26B3 또는 hMov19의 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5 또는 적어도 6개의 HVR (또는 CDR)에 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일하다.
일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:8로부터의 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및/또는 SEQ ID NO:9로부터의 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:8로부터의 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:9로부터의 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:8로부터의 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO:9로부터의 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:14 내지 16으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:17 내지 19로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:14 내지 16으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO:17 내지 19로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:8로부터의 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및/또는 SEQ ID NO:9로부터의 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:8로부터의 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:9로부터의 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:8로부터의 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO:9로부터의 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:14에 나타낸 중쇄 가변 영역 (VH) CDR1 서열, SEQ ID NO:15에 나타낸 VH CDR2 서열 및 SEQ ID NO:16에 나타낸 VH CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:17에 나타낸 경쇄 가변 영역 (VL) CDR1 서열, SEQ ID NO:18에 나타낸 VL CDR2 서열 및 SEQ ID NO:19에 나타낸 VL CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:14에 나타낸 VH CDR1 서열, SEQ ID NO:15에 나타낸 VH CDR2 서열 및 SEQ ID NO:16에 나타낸 VH CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO:17에 나타낸 VL CDR1 서열, SEQ ID NO:18에 나타낸 VL CDR2 서열 및 SEQ ID NO:19에 나타낸 VL CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:8의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및/또는 SEQ ID NO:9의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:8의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 또는 SEQ ID NO:9의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:8의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO:9의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및/또는 SEQ ID NO:9의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:9의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO:9의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:1 또는 SEQ ID NO:2의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및/또는 SEQ ID NO:3의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:1 또는 SEQ ID NO:2의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 또는 SEQ ID NO:3의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:1 또는 SEQ ID NO:2의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO:3의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:1 또는 SEQ ID NO:2의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및/또는 SEQ ID NO:3의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:1 또는 SEQ ID NO:2의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:3의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:1 또는 SEQ ID NO:2의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO:3의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 인간화된 항체이다.
일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:10으로부터의 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및/또는 SEQ ID NO:11로부터의 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:10으로부터의 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:11로부터의 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:10으로부터의 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO:11로부터의 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:20 내지 22로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:23 내지 25로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:20 내지 22로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO:23 내지 25로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:10으로부터의 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및/또는 SEQ ID NO:11로부터의 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:10으로부터의 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:11로부터의 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:10으로부터의 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO:11로부터의 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:20에 나타낸 중쇄 가변 영역 (VH) CDR1 서열, SEQ ID NO:21에 나타낸 VH CDR2 서열 및 SEQ ID NO:22에 나타낸 VH CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:23에 나타낸 경쇄 가변 영역 (VL) CDR1 서열, SEQ ID NO:24에 나타낸 VL CDR2 서열 및 SEQ ID NO:25에 나타낸 VL CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:20에 나타낸 VH CDR1 서열, SEQ ID NO:21에 나타낸 VH CDR2 서열 및 SEQ ID NO:22에 나타낸 VH CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO:23에 나타낸 VL CDR1 서열, SEQ ID NO:24에 나타낸 VL CDR2 서열 및 SEQ ID NO:25에 나타낸 VL CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:10의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및/또는 SEQ ID NO:11의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:10의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 또는 SEQ ID NO:11의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:10의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO:11의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및/또는 SEQ ID NO:11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 또는 SEQ ID NO:11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:32 또는 SEQ ID NO:33의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역 및/또는 SEQ ID NO:34의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:32 또는 SEQ ID NO:33의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 또는 SEQ ID NO:34의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:32 또는 SEQ ID NO:33의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO:34의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:32 또는 SEQ ID NO:33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역 및/또는 SEQ ID NO:34의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:32 또는 SEQ ID NO:33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:34의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:32 또는 SEQ ID NO:33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역 및 SEQ ID NO:34의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 키메라 항체이다. 일부 구체예에서, 항체는 인간화된 항체이다.
일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:12로부터의 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및/또는 SEQ ID NO:13으로부터의 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:12로부터의 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:13으로부터의 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:12로부터의 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO:13으로부터의 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:26 내지 28로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:29 내지 31로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:26 내지 28로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO:29 내지 31로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:12로부터의 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및/또는 SEQ ID NO:13으로부터의 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:12로부터의 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:13으로부터의 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:12로부터의 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO:13으로부터의 3개의 HVR (또는 CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:26에 나타낸 중쇄 가변 영역 (VH) CDR1 서열, SEQ ID NO:27에 나타낸 VH CDR2 서열 및 SEQ ID NO:28에 나타낸 VH CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:29에 나타낸 경쇄 가변 영역 (VL) CDR1 서열, SEQ ID NO:30에 나타낸 VL CDR2 서열 및 SEQ ID NO:31에 나타낸 VL CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:26에 나타낸 VH CDR1 서열, SEQ ID NO:27에 나타낸 VH CDR2 서열 및 SEQ ID NO:28에 나타낸 VH CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO:29에 나타낸 VL CDR1 서열, SEQ ID NO:30에 나타낸 VL CDR2 서열 및 SEQ ID NO:31에 나타낸 VL CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:12의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및/또는 SEQ ID NO:13의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:12의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 또는 SEQ ID NO:13의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:12의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO:13의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및/또는 SEQ ID NO:13의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:13의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO:13의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:32 또는 SEQ ID NO:33의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역 및/또는 SEQ ID NO:34의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:32 또는 SEQ ID NO:33의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 또는 SEQ ID NO:34의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:32 또는 SEQ ID NO:33의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO:34의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:32 또는 SEQ ID NO:33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역 및/또는 SEQ ID NO:34의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:32 또는 SEQ ID NO:33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:34의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:32 또는 SEQ ID NO:33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역 및 SEQ ID NO:34의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:6의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및/또는 SEQ ID NO:7의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:6의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:7의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:6의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO:7의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:6의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및/또는 SEQ ID NO:7의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:6의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:7의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 SEQ ID NO:6의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO:7의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에 기술된 표적화 부분 (또는 항체 표적화 부분)에 포함된 또는 사용된 항-FRA 항체는 암세포 (예컨대 FRA-포지티브 난소암 세포, 폐암 세포, 자궁암 세포, 고환 융모막 암종 세포, 상의세포종 세포, 중피종 세포, 유방암 세포, 대장암 세포 또는 신장 세포 암종 세포)에 의해 발현된 FRA (예컨대 인간 FRA)에 특이적으로 결합한다.
본원에서 서열과 관련하여 사용된 "퍼센트 (%) 아미노산 서열 동일성" 및 "상동성"은 최대 퍼센트 서열 동일성을 이루기 위해 서열들을 일렬배열하고, 필요에 따라 갭을 도입한 후에, 특이적인 서열의 아미노산 잔기들과 동일한 후보 서열의 아미노산 잔기들의 백분율을 나타내고, 서열 동일성의 일부로서 어떠한 보존성 치환은 고려하지 않는다. 퍼센트 아미노산 서열 동일성을 측정할 목적을 위한 일렬배열은 기술분야의 숙련도 범위 내에 있는 다양한 방법으로, 예를 들면 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 MEGALIGNTM (DNASTAR) 소프트웨어와 같은 대중적으로 활용 가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 이루어질 수 있다. 기술분야의 전문가들은 비교되는 서열들의 전체 길이에 걸친 최대 일렬배열을 이루기 위해 필요한 어떠한 알고리즘을 포함하여, 일렬배열을 측정하기 위한 적절한 변수들을 결정할 수 있다.
일부 구체예에서, 본원에 기술된 CDR은 Kabat CDR, Chothia CDR 또는 접촉 CDR이다. 일부 구체예에서, CDR은 Kabat CDR이다. 일부 구체예에서, CDR은 Chothia CDR이다. 일부 구체예에서, CDR은 Kabat과 Chothia CDR의 조합이다 (또한 "조합 CDR" 또는 "연장 CDR"로도 불림). 다르게 표현하면, 하나 이상의 CDR을 함유하는 어떠한 주어진 구체예에 대해, CDR은 Kabat, Chothia 및/또는 조합된 것들 중 어느 것일 수 있다. CDR을 측정하는 방법은 기술분야에 알려져 있다.
항체의 가변 영역은 단독으로 또는 조합된, 항체 경쇄의 가변 영역 또는 항체 중쇄의 가변 영역을 나타낸다. 일반적으로, 가변 영역(들)은 항원 결합을 중재하고 그것의 특정 항원에 대한 특정 항체의 특이성을 규정한다. 가변 영역들은 "초가변성 영역" ("HVR") (예컨대 각각 9 내지 12 아미노산 길이의 HVR)으로 불리는 극한 가변성의 더 짧은 영역에 의해 분리된 프레임워크 영역 (FR)으로 불리는 상대적으로 불변하는 구간을 가질 수 있다. 일부 구체예에서, 천연 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각, 베타-쉬트 구조를 연결시키고, 어떤 경우에는 그 구조의 일부를 형성하는 루프를 형성하는, 3개의 초가변 영역에 의해 연결된, 대부분 베타-쉬트 형태를 채택하는 4개의 FR을 포함한다. 각 사슬에서 초가변 영역은 FR에 매우 가까운 곳에서 함께 보유될 수 있고, 다른 사슬로부터의 초가변 영역과 함께, 항체들의 항원-결합 부위의 형성에 기여한다 (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991) 참조). 불변 도메인은 항원에 대한 항체의 결합에 직접적으로 포함되지 않을 수 있지만, 다양한 이펙터 기능, 예컨대 항체 의존성 세포의 세포독성 (ADCC)에서 항체의 참여를 나타낼 수 있다. 항체의 불변 영역은 항체 경쇄의 불변 영역 또는 항체 중쇄의 불변 영역을 단독으로 또는 조합하여 나타낸다. 항체의 불변 영역은 일반적으로 구조적 안정성 및 항체 사슬 회합, 분비, 태반경유 이동성 및 보체 결합과 같은 다른 생물학적 기능들을 제공하지만, 항원에의 결합에는 관련되지 않는다. 불변 영역의 유전자의 아미노산 서열 및 해당하는 엑손 서열은 그것이 유도되는 종에 따라 좌우될 것이다; 그러나, 알로타입을 유도하는 아미노산 서열의 변화는 상대적으로 종 내에서의 특별한 불변 영역에 한정될 것이다. 각 사슬의 가변 영역은 연결 폴리펩티드 서열에 의해 불변 영역에 합쳐진다. 연쇄 서열은 경쇄 유전자에서 "J" 서열에 의해 코드화되고 중쇄 유전자에서 "D" 서열 및 "J" 서열의 조합에 의해 코드화된다.
용어 "초가변 영역" ("HVR")은 본원에서 사용될 때 항원-결합에 기여하는 항체의 아미노산 잔기를 나타낸다. 초가변 영역은 일반적으로 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"로부터의 아미노산 잔기 (예컨대 VL의 대략 약 잔기 24 내지 34 (L1), 50 내지 56 (L2) 및 89 내지 97 (L3) 및 VH의 대략 약 31 내지 35B (H1), 50 내지 56 (H2) 및 95 내지 102 (H3) (한 구체예에서, H1은 대략 약 31 내지 35임); Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)); 및/또는 "초가변 루프"로부터의 그런 잔기 (예컨대 VL의 잔기 26 내지 32 (L1), 50 내지 52 (L2) 및 91 내지 96 (L3) 및 VH의 26 내지 32 (H1), 53 내지 55 (H2) 및 96 내지 101 (H3); Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987))를 포함한다. CDR을 측정하는 방법은 많이 있는데, 예를 들면 종간-교차 서열 가변성을 기반으로 한 접근법 (즉 Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, (5th ed., 1991, National Institutes of Health, Bethesda MD)); 및 항원-항체 복합체의 결정학 연구를 기반으로 한 접근법 (Al-lazikani et al. (1997) J. Mol. Biol. 273:927-948))이 있다. Kabat 상보성-결정 영역 (CDR)인 HVR은 서열 가변성을 기반으로 하고 가장 보편적으로 사용된다 (Kabat et al., 상기 동일). Chothia는 대신 구조적 루프의 위치를 언급하다 (Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). AbM HVR은 Kabat CDR과 Chothia 구조적 루프 사이의 절충을 나타내고, Oxford Molecular's AbM 항체-모델링 소프트웨어에 의해 사용된다. "접촉" HVR은 활용 가능한 복합체 결정 구조의 분석을 기반으로 한다. 본원에서 사용되는 CDR은 접근법들 중 어느 것에 의해 또는 접근법들 중 어떠한 2 또는 3개의 조합에 의해 정의된 CDR일 수 있다. CDR은 Kabat CDR, Chothia CDR 또는 접촉 CDR일 수 있다. 이들 HVR의 각각으로부터의 잔기들이 아래에 표시된다.
Figure pct00083
HVR은 다음과 같이 "연장된 HVR"을 포함할 수 있다: VL에서 24 내지 36 또는 24 내지 34 (L1), 46 내지 56 또는 50 내지 56 (L2) 및 89 내지 97 또는 89 내지 96 (L3)K 및 VH에서 26 내지 35 (H1), 50 내지 65 또는 49 내지 65 (바람직한 구체예) (H2) 및 93 내지 102, 94 내지 102 또는 95 내지 102 (H3). 가변-도메인 잔기들은 이들 연장된-HVR 정의의 각각에 대한 Kabat 등 (상기 동일)을 따라 넘버링된다.
일부 구체예에서, 항체는 중쇄 또는 경쇄 (예컨대 중쇄 및/또는 경쇄 불변 영역 및/또는 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역)에 유리 시스테인 아미노산을 포함하는 시스테인 엔지니어링된 항체이다. 항체에서 유리 시스테인 아미노산의 엔지니어링은 특이적 부위에 약물 분자를 가지는 항체-약물 컨쥬게이트 (ADC) (즉 부위-특이적 컨쥬게이션)와 같은 항체 컨쥬게이트 화합물을 추가로 가능하게 할 수 있는 반응성 친전자성 기능성을 제공할 수 있다. 시스테인 엔지니어링된 항체들 및 시스테인 엔지니어링된 항체를 제조하기 위한 수단은 문헌에 제공된다: Junutula, JR et al., (2008) Nat. Biotech. 26(8):925-932; Lyons, A et al., (1990) Prot . Engineering 3(8):703-708; 및 Stimmel, JB et al., (2000) J. Biol . Chem. 275(39):30445-30450. 일부 구체예에서, 항체는 중쇄 상에서 (예컨대 불변 영역에서) 또는 경쇄 상에서 (예컨대 불변 영역에서) 하나 이상의 시스테인 잔기로 아미노산 잔기들을 치환하기 위하여 엔지니어링되며, 단 시스테인 잔기들의 반응성 티올기는 항체 접힘 또는 조립에 거의 또는 전혀 영향을 미치지 않아야 하고 항원 결합을 유의미하게 변경시키지 않아야 한다. 일부 구체예에서, 시스테인 잔기들은 새롭게 도입된, 엔지니어링된 시스테인 티올기의 반응성에 대해 평가된다. 티올 반응성 값은 0 내지 1.0의 범위의 상대적인, 수치 용어이고 어떠한 시스테인 엔지니어링된 항체에 대해 측정될 수 있다. 일부 구체예에서, 발명의 시스테인 엔지니어링된 항체들의 티올 반응성 값은 약 0.6 내지 1.0; 0.7 내지 1.0; 또는 0.8 내지 1.0 중 어느 하나이다. 부위-특이적 컨쥬게이션에 대한 시스테인 엔지니어링된 항체들은 WO 2006/034488, WO 2010/141902, WO 2013/093809, WO 2008/038024, WO 2008/070593, WO 2009/092011, WO 2011/005481 및 WO 2011/156328에 제공된다.
시스테인 엔지니어링된 항체는 시스테인 엔지니어링된 항체를 코드화하기 위하여 시스테인에 의해 하나 이상의 아미노산 잔기를 대체함으로써 원래의 항체의 핵산 서열을 돌연변이시키고; 시스테인 엔지니어링된 항체를 발현시키고; 및 시스테인 엔지니어링된 항체를 분리함으로써 제조될 수 있다. 일부 구체예에서, 시스테인 엔지니어링된 항체는 항체 단편; 예를 들면 Fab, Fab', F(ab')2, Fv 또는 단일 사슬 (ScFv) 항체이다. 일부 구체예에서, 항체는 경쇄의 L201, V205 및 T206뿐 아니라 중쇄의 아미노산 잔기 T155, S157, S165, T169, T197, T199 및 S442 (EU 넘버링)의 하나 이상의 시스테인 치환을 포함하도록 엔지니어링된다. 발명의 일부 구체예에서, 본원에 기술된 항체 (예컨대 항체 hLK26, hMov19 또는 항체 26B3으로부터 유도된 항체, 예컨대 인간화된 또는 키메라 항체) 또는 이들 항체 중 어느 것으로부터 유도된 항체는 하나 이상의 유리 시스테인 잔기를 포함하도록 엔지니어링된다. 엔지니어링된 시스테인 잔기는 또한 "첨가된 시스테인 잔기"로서 언급된다.
일부 구체예에서, IgG 중쇄의 다음의 위치들 중 어떠한 하나 이상의 위치에서 하나 이상의 아미노산 잔기가 시스테인 잔기로 대체된다: 40, 43, 84, 88, 103, 112, 113, 114, 115, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 161, 168, 172, 234, 235, 237, 239, 246, 249, 265, 267, 269, 270, 276, 278, 282, 283, 284, 287, 289, 292, 293, 297, 298, 299, 300, 302, 303, 312, 314, 315, 318, 320, 324, 326, 327, 330, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 339, 345, 347, 354, 355, 356, 358, 359, 360, 361, 362, 370, 373, 376, 378, 380, 382, 383, 384, 386, 388, 398, 390, 392, 393, 400, 401, 404, 411, 413, 414, 416, 418, 419, 421, 422, 428, 431, 432, 437, 438, 439, 440, 442, 443 및 444; 넘버링은 Kabat 등의 EU 색인에 따름. (1991, NIH Publication 91- 3242, National Technical Information Service, Springfield, VA, hereinafter "Kabat").
일부 구체예에서, IgG 중쇄의 다음의 위치들의 어떠한 조합에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 또는 그 이상의 아미노산 잔기가 시스테인 잔기로 대체된다: 40, 43, 84, 88, 103, 112, 113, 114, 115, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 161, 168, 172, 234, 235, 237, 239, 246, 249, 265, 267, 269, 270, 276, 278, 282, 283, 284, 287, 289, 292, 293, 297, 298, 299, 300, 302, 303, 312, 314, 315, 318, 320, 324, 326, 327, 330, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 339, 345, 347, 354, 355, 356, 358, 359, 360, 361, 362, 370, 373, 376, 378, 380, 382, 383, 384, 386, 388, 398, 390, 392, 393, 400, 401, 404, 411, 413, 414, 416, 418, 419, 421, 422, 428, 431, 432, 437, 438, 439, 440, 442, 443 및 444; 넘버링은 KabaT의 EU 색인에 따름.
일부 구체예에서, IgG 중쇄 (예컨대 인간 IgG1, 인간 IgG2, 인간 IgG3, 인간 IgG4 또는 인간 IgG4p)의 다음 위치들: T155, S157, S165, T169, T197, T199 및 S442 중 어떠한 하나 이상의 위치에서 하나 이상의 아미노산이 시스테인 잔기로 대체되고, 이때 넘버링은 Kabat의 EU 색인에 따른다. 아미노산들의 돌연변이 위치 (EU 넘버링) 및 플랭킹 서열이 아래의 표 3에 열거된다.
Figure pct00084
일부 구체예에서, 본원에 기술된 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:32 또는 SEQ ID NO:33에 나타낸 아미노산을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 본원에 기술된 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:34의 아미노산을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 본원에 기술된 항-FRA 항체는 SEQ ID NO:32 또는 SEQ ID NO:33의 아미노산을 포함하는 중쇄 불변 영역 및 SEQ ID NO:34의 아미노산을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다.
부위-특이적 컨쥬게이션에 대한 엔지니어링된 시스테인일 수 있는 IgG 중쇄 상의 추가의 위치들은 (EU 넘버링) 118 내지 215, 234 내지 239, 246, 248, 249, 254, 265, 267, 269, 270, 273, 276, 278, 279, 282, 283, 284, 286, 287, 289, 292, 293, 294, 297, 298, 299, 300, 302, 303, 312, 314, 315, 318, 320, 324, 326, 327, 330, 332 내지 337, 339, 341 내지 447을 포함한다 (US 2012/0148580 A1; WO 2013/093809 A1; US 2009/0258420 A1; US 7521541 B2; US 7855275 B2; US 2011/0137017 A1; US 2012/0213705 A1; US 2011/0033378 A1; US 8455622 B2에 기술됨).
부위-특이적 컨쥬게이션에 대한 엔지니어링된 시스테인일 수 있는 IgG 경쇄 상의 추가의 위치들은 (EU 넘버링) 108 내지 211을 포함한다 (WO 2013/093809 A1; US 2009/0258420 A1; US 7855275 B2; US 8455622 B2에 기술됨).
일부 구체예에서, IgG 람다 경쇄의 다음의 위치들: 7, 15, 20, 22, 25, 43, 110, 111, 125, 144, 149, 155, 158, 161, 168, 185, 188, 189, 191, 197, 205, 206, 207, 208 및 210 (Kabat의 EU 색인을 따름) 중 어떠한 하나 이상의 위치에서 하나 이상의 아미노산 잔기가 시스테인 잔기로 대체된다.
일부 구체예에서, IgG 람다 경쇄의 다음의 위치들의 어떠한 조합에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 또는 그 이상의 아미노산 잔기가 시스테인 잔기로 대체된다: 7, 15, 20, 22, 25, 43, 110, 111, 125, 144, 149, 155, 158, 161, 168, 185, 188, 189, 191, 197, 205, 206, 207, 208 및 210 (Kabat의 EU 색인에 따름).
일부 구체예에서, IgG 카파 경쇄의 다음의 위치들 중 어떠한 하나 이상의 위치에서 하나 이상의 아미노산 잔기가 시스테인 잔기로 대체된다: 7, 15, 20, 22, 25, 43, 110, 111, 144, 168, 183 및 210 (Kabat의 넘버링에 따름).
일부 구체예에서, IgG 카파 경쇄의 다음의 위치들의 어떠한 조합에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 또는 그 이상의 아미노산 잔기가 시스테인 잔기로 대체된다: 7, 15, 20, 22, 25, 43, 110, 111, 144, 168, 183 및 210.
일부 구체예에서, IgG 카파 경쇄의 위치 L201, V205 및 T206 (Kabat의 넘버링에 따름) 중 어떠한 하나 이상의 위치에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 시스테인 잔기로 대체된다. 아미노산들의 돌연변이 위치 (EU 넘버링) 및 플랭킹 서열이 아래의 표 4에 제시된다.
아미노산들의 돌연변이 위치 (EU 넘버링 ) 및 플랭킹 서열
EU 넘버링 플랭킹 서열 SEQ ID NO:
L201C (CL) EVTHQG C SSPVTKSFNRGEC 51
T206C (CL) EVTHQGLSSPV C KSFNRGEC 52
V205C (CL) EVTHQGLSSP C TKSFNRGEC 53
일부 구체예에서, 항체는 중쇄 불변 영역의 T155, S157, S165, T169, T197, T199 및 S442로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기 및 경쇄 불변 영역의 L201 및 T206으로부터 선택된 하나 이상의 잔기가 시스테인 잔기로 대체된 중쇄 불변 영역 및 경쇄 불변 영역을 포함하고, 이때 넘버링은 Kabat의 EU 색인을 따른다. 일부 구체예에서, 항체는 중쇄 불변 영역의 T155, S157, S165, T169, T197, T199 및 S442로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기 및 경쇄 불변 영역의 L201 및 T206으로부터 선택된 하나 이상의 잔기가 시스테인 잔기로 대체된 중쇄 불변 영역 및 경쇄 불변 영역을 포함하고, 이때 넘버링은 Kabat의 EU 색인을 따른다.
일부 구체예에서, 항체가 분리된다. 분리된 항체는 확인되고 그것의 자연 환경의 성분으로부터 분리되고 및/또는 회수된 항체를 나타낸다. 일부 구체예에서, 항체는 실질적으로 순수하다. 용어 "실질적으로 순수한"은 적어도 50% 순수한 (즉 오염물이 없는), 보다 바람직하게는 적어도 90% 순수한, 보다 바람직하게는 적어도 95% 순수한, 보다 바람직하게는 적어도 98% 순수한, 보다 바람직하게는 적어도 99% 순수한 물질을 나타낼 수 있다. 일부 구체예에서, 항체는 단클론성 항체이다. 일부 구체예에서, 항체는 인간화된 항체이다. 일부 구체예에서, 항체는 키메라 항체이다. 일부 구체예에서, 항체는 인간 항체이다. 일부 구체예에서, 항체는 IgG (예컨대 IgG1, IgG2 또는 IgG4)이다. 일부 구체예에서, 항체는 인간 IgG1과 같은 인간 IgG이다. 일부 구체예에서, 항체는 인간 IgG4p 불변 도메인을 포함하는 인간 IgG이다.
본원에 기술된 항체들은 추가로 변형된, 즉 공유 부착이 그것의 항원 결합 면역특이성을 보유하는 것을 허용하는 한 어떠한 유형이든 분자의 공유 부착에 의해 변형된 유사체 및 유도체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 항체들의 유도체 및 유사체는 예컨대 글리코실화, 아세틸화, 페길화, 포스필화 (phosphylation), 아미드화, 공지된 보호/차단기에 의한 유도체화, 단백질 가수분해성 절단, 세포 리간드 또는 다른 단백질에의 연쇄 등에 의해 추가로 변형된 것들을 포함한다. 화학적 변형은, 그것들에 한정되는 것은 아니지만 특이적인 화학적 절단, 아세틸화, 제형 등을 포함한 공지의 기법들에 의해 수행될 수 있다. 추가로, 유사체 또는 유도체는 하나 이상의 비자연 아미노산을 함유할 수 있다.
일부 구체예에서, 식 (I) 내지 (V)의 화합물들 또는 그것들의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체에서, 항체 표적화 부분 T는 약물 부분과 부분적으로 컨쥬게이트된 항체여서, 추가의 약물 부분에 추가로 연결될 수 있다. 그러므로, 일부 구체예에서, 식 (I)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체는 식 (Ia)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체를 포함하는 것으로 의도된다. 마찬가지로, 식 (II)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체는 식 (IIa)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체를 포함하는 것으로 의도되고; 식 (III)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체는 식 (IIIa)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체를 포함하는 것으로 의도되며; 식 (IV)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체는 식 (IVa)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체를 포함하는 것으로 의도되고; 그리고 식 (V)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체는 식 (Va)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체를 포함하는 것으로 의도된다.
표적화 부분 (예컨대 항체, 폴리펩티드, 펩티드 또는 비-펩티딜 부분)의 제조 방법, 예를 들면 미국 특허 번호 7,674,605, 미국 특허 번호 7,982,017, PCT/US2007/013587 (Publication No. WO 2007/146172), or PCT/US2008/087515 (Publication No. WO 2009/079649)에 기술된 방법들은 기술분야에 공지되어 있다.
대표적인 링커들
특정 경우에, 식 (I), (Ia), (II) 또는 (IIa)의 화합물에서 "-A-L4-L3-L2-" 또는 "-A-L4-L3-" 부분은:
Figure pct00085
,
Figure pct00086
또는
Figure pct00087
이다.
특정 경우에, 식 (I), (Ia), (II) 또는 (IIa)의 화합물에서 "-A-L4-L3-L2-" 또는 "-A-L4-L3-" 부분은:
Figure pct00088
이다.
특정 경우에, 식 (I), (Ia), (II) 또는 (IIa)의 화합물에서 "-A-L4-L3-L2-" 또는 "-A-L4-L3-" 부분은:
Figure pct00089
이다.
특정 경우에, 식 (I), (Ia), (II) 또는 (IIa)의 화합물에서 "-A-L4-L3-L2-X-L1-D" 부분은:
Figure pct00090
이다.
그런 경우에, 본 개시는 식 (III)의 화합물:
Figure pct00091
(III)
또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체를 제공하며; 식에서 T는 표적화 부분이다. 특정 경우에, 식 (III)에서, T는 항체이다. 일부 구체예에서, T는 항-FRA 항체이다. 일부 구체예에서, T는 항체 hLK26 또는 hMov19이다. 일부 구체예에서, T는 항체 26B3의 유도체 (예컨대 인간화된 또는 키메라 항체)이다.
일부 구체예에서, 다음 식 (IIIa)의 화합물:
Figure pct00092
(IIIa)
또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체가 제공되며; 식에서 T는 표적화 부분이고 p는 1 내지 20이다. 일부 구체예에서, p는 1 내지 8이다. 일부 구체예에서, p는 1 내지 6이다. 일부 구체예에서, p는 1 내지 4이다. 일부 구체예에서, p는 2 내지 4이다. 일부 구체예에서, p는 1, 2, 3 또는 4이다. 일부 구체예에서, p는 2이다. 일부 구체예에서, p는 3이다. 일부 구체예에서, p는 4이다. 특정 경우에, 식 (IIIa)에서, T는 항체이고, 임의로 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 하나 이상의 아미노산 잔기는 시스테인 잔기로 대체된다. 특정 구체예에서, 항체는 항-FRA 항체이다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 hLK26 또는 hMov19 또는 그것들의 유도체이거나, 또는 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 하나 이상의 아미노산 잔기가 시스테인 잔기로 대체된 hLK26이거나, 또는 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 하나 이상의 아미노산 잔기가 시스테인 잔기로 대체된 hMov19이다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 26B3의 유도체 (예컨대 인간화된 또는 키메라 항체), 또는 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 하나 이상의 아미노산 잔기가 시스테인 잔기로 대체된 26B3의 유도체 (예컨대 인간화된 또는 키메라 항체)이다.
특정 구체예에서, 식 (I) 또는 (Ia)의 화합물, 예컨대 식 (III) 또는 (IIIa)의 화합물은 합성 중간체, 예컨대 식 (VI)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 및/또는 식 (IX)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물을 사용하여 제조될 수 있다:
Figure pct00093
Figure pct00094
특정 경우에, 식 (I), (Ia), (II) 또는 (IIa)의 화합물에서 "-A-L4-L3-L2-X-L1-D" 부분은:
Figure pct00095
이다.
그런 경우에, 본 개시는 식 (IV)의 화합물:
Figure pct00096
또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체를 제공하며; 식에서 T는 표적화 부분이다. 특정 경우에, 식 (IV)에서, T는 항체이다. 일부 구체예에서, T는 항-FRA 항체이다. 일부 구체예에서, 항체는 항체 hLK26 또는 hMov19이다. 일부 구체예에서, 항체는 항체 26B3의 유도체 (예컨대 인간화된 또는 키메라 항체)이다.
일부 구체예에서, 다음 식 (IVa)의 화합물:
Figure pct00097
(IVa)
또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체가 제공되며; 식에서 T는 표적화 부분이고 p는 1 내지 20이다. 일부 구체예에서, p는 1 내지 8이다. 일부 구체예에서, p는 1 내지 6이다. 일부 구체예에서, p는 1 내지 4이다. 일부 구체예에서, p는 2 내지 4이다. 일부 구체예에서, p는 1, 2, 3 또는 4이다. 일부 구체예에서, p는 2이다. 일부 구체예에서, p는 3이다. 일부 구체예에서, p는 4이다. 특정 경우에, 식 (IVa)에서, T는 항체이고, 임의로 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 하나 이상의 아미노산 잔기는 시스테인 잔기로 대체된다. 특정 구체예에서, 항체는 항-FRA 항체이다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 hLK26 또는 hMov19 또는 그것들의 유도체이거나, 또는 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 하나 이상의 아미노산 잔기가 시스테인 잔기로 대체된 hLK26이거나, 또는 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 하나 이상의 아미노산 잔기가 시스테인 잔기로 대체된 hMov19이다. 일부 구체예에서, 항-FRA 항체는 26B3의 유도체 (예컨대 인간화된 또는 키메라 항체), 또는 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 하나 이상의 아미노산 잔기가 시스테인 잔기로 대체된 26B3의 유도체 (예컨대 인간화된 또는 키메라 항체)이다.
특정 경우에, 식 (I) 또는 (Ia)의 화합물, 예컨대 식 (IV) 또는 (IVa)의 화합물은 식 (VII)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 및/또는 식 (X)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물과 같은 합성 중간체를 사용하여 제조될 수 있다:
Figure pct00098
Figure pct00099
특정 경우에, 식 (I), (Ia), (II) 또는 (IIa)의 화합물에서 "-A-L4-L3-L2-X-L1-D" 부분은:
Figure pct00100
이다.
그런 경우에, 본 개시는 식 (V)의 화합물:
Figure pct00101
또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체를 제공하며; 식에서 T는 표적화 부분이다. 특정 경우에, 식 (V)에서, T는 항체이다. 일부 구체예에서, 항체는 항-FRA 항체이다. 일부 구체예에서, 항체는 항체 hLK26 또는 hMov19이다. 일부 구체예에서, 항체는 항체 26B3의 유도체 (예컨대 인간화된 또는 키메라 항체)이다.
일부 구체예에서, 다음 식 (Va)의 화합물:
Figure pct00102
(Va)
또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체가 제공되며; 식에서 T는 표적화 부분이고 p는 1 내지 20이다. 일부 구체예에서, p는 1 내지 8이다. 일부 구체예에서, p는 1 내지 6이다. 일부 구체예에서, p는 1 내지 4이다. 일부 구체예에서, p는 2 내지 4이다. 일부 구체예에서, p는 1, 2, 3 또는 4이다. 일부 구체예에서, p는 2이다. 일부 구체예에서, p는 3이다. 일부 구체예에서, p는 4이다. 특정 경우에, 식 (Va)에서, T는 항체이고, 임의로 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 하나 이상의 아미노산 잔기는 시스테인 잔기로 대체된다. 특정 구체예에서, 항체는 항-FRA 항체이다. 일부 구체예에서, 항체는 항체 hLK26 또는 hMov19 또는 그것들의 유도체이거나, 또는 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 하나 이상의 아미노산 잔기가 시스테인 잔기로 대체된 hLK26이거나, 또는 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 하나 이상의 아미노산 잔기가 시스테인 잔기로 대체된 hMov19이다. 일부 구체예에서, 항체는 26B3의 유도체 (예컨대 인간화된 또는 키메라 항체), 또는 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 하나 이상의 아미노산 잔기가 시스테인 잔기로 대체된 26B3의 유도체 (예컨대 인간화된 또는 키메라 항체)이다.
특정 구체예에서, 식 (I) 또는 (Ia)의 화합물, 예컨대 식 (V) 또는 (Va)의 화합물은 식 (VIII)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 및/또는 식 (XI)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물과 같은 합성 중간체를 사용하여 제조될 수 있다:
Figure pct00103
Figure pct00104
특정 구체예에서, 식 (I) 또는 (Ia)의 화합물 또는 본원에 기술된 어떠한 변화는 식 (XII)의 화합물:
Figure pct00105
또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체를 사용하여 제조될 수 있고; 식에서 R은 NO2 또는 NH2이다.
식 (I) 내지 (V) 또는 (Ia) 내지 (Va)의 화합물들은 약학적으로 허용되는 염으로서 제조되거나 및/또는 제형될 수 있다. 약학적으로 허용되는 염은 유리 염기의 원하는 약물학적 활성을 가지는 화합물의 유리 염기 형태의 비-독성 염이다. 이들 염은 무기 또는 유기 산으로부터 유도될 수 있다. 약학적으로 허용되는 염의 비-제한적인 실례는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 포스페이트, 1수소-포스페이트, 2수소포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트, 클로라이드, 브로마이드, 요오다이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포르메이트, 아이소부티레이트, 카프로에이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바세이트, 푸마레이트, 말레에이트, 부틴-1,4-다이오에이트, 헥신-1,6-다이오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 다이니트로벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 설포네이트, 메틸설포네이트, 프로필설포네이트, 베실레이트, 자일렌설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, γ-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 타르타레이트 및 만델레이트를 포함한다. 다른 적합한 약학적으로 허용되는 염의 목록은 Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th Edition, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985에서 찾아볼 수 있다.
염기성 질소를 함유하는 식 (I) 내지 (V) 또는 (Ia) 내지 (Va) 중 어느 하나의 화합물에 대해, 약학적으로 허용되는 염은 기술분야에서 활용 가능한 어떠한 적합한 방법, 예를 들면 유리 염기의 무기산, 예컨대 염산, 브롬화수소산, 황산, 설팜산, 질산, 붕산, 인산 등으로의 처리, 또는 유기산, 예컨대 아세트산, 페닐아세트산, 프로피온산, 스테아르산, 락트산, 아스코르브산, 말레산, 하이드록시말레산, 이세티온산, 석신산, 발레르산, 푸마르산, 말론산, 피루브산, 옥살산, 글리콜산, 살리실산, 올레산, 팔미트산, 라우르산, 피라노시딜산, 예컨대 글루쿠론산 또는 갈락투론산, 알파-하이드록시산, 예컨대 만델산, 시트르산 또는 타르타르산, 아미노산, 예컨대 아스파르트산 또는 글루탐산, 방향족 산, 예컨대 벤조산, 2-아세톡시벤조산, 나프토산 또는 신남산, 설폰산, 예컨대 라우릴설폰산, p-톨루엔설폰산, 메탄설폰산 또는 에탄설폰산, 또는 본원에서 실례로서 제시된 것들과 같은 산들의 어떠한 적합한 혼합물 및 이런 기술의 통상적인 숙련 수준의 관점에서 동등물 또는 허용되는 치환물로서 간주되는 그것들의 어떠한 다른 산 및 혼합물로의 처리에 의해 제조될 수 있다.
또한 식 (I) 내지 (V) 또는 (Ia) 내지 (Va)의 하나 이상의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체를 포함하는 조성물이 제공된다. 식 (I) 내지 (V) 또는 (Ia) 내지 (Va)의 하나 이상의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체에서, 표적화 부분은 약물 부분에의 연결을 위한 하나 이상의 부착 부위를 가질 수 있다. 표적화 부분의 부착 부위의 접근성 및 컨쥬게이트의 형성시 약물 부분의 상대 농도에 따라, 부착 부위 부분은 형성된 컨쥬게이트의 약물 부분에 결합하지 않을 수 있다. 각각의 표적화 부분에서 다양한 수의 약물 부분을 가지는 화합물들의 혼합물이 형성될 수 있다. 그러므로 식 (Ia) 내지 (Va)의 하나 이상의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체를 포함하는 조성물이 또한 제공된다. 예를 들어, 4개의 부착 부위를 가지는 표적화 분자에 대해, 조성물은 p가 1인 식 (Ia)의 화합물, p가 2인 식 (Ia)의 화합물, p가 3인 식 (Ia)의 화합물 및 p가 4인 식 (Ia)의 화합물로부터 선택된 하나 이상의 화합물을 포함할 수 있다. 조성물 중의 화합물들의 상대적 양은 약물 부분과 표적화 부분 사이의 바람직한 비율을 이루기 위해 조정될 수 있다. 일부 구체예에서, 조성물은 화합물들 중 우선적으로 하나 또는 둘을 포함한다.
발명의 화합물 또는 조성물에서 "약물-항체 비율" (DAR)은 화합물 또는 조성물의 약물 부분과 화합물 또는 조성물의 항체 사이의 몰 비율로서 정의된다. 항체가 하나 이상의 부착 부위를 가지는 경우에, 하나 이상의 약물 부분은 각각의 항체에 연결될 수 있다. 일부 경우에, 하나 이상의 항체-약물 컨쥬게이트 (ADC) 분자를 포함하는 혼합물이 얻어진다. 항체-약물 컨쥬게이트의 약물-항체 비율은 기술분야에 공지된 분석적 방법들, 예를 들면 Jeffrey, et al., Bioconjug . Chem . 24(7):1256-1263 (2013); 및 Sun et al., Bioconjug . Chem . 16(5):1282-1290 (2005)에 기술된 방법들에 의해 측정될 수 있다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 본원에 기술된 ADC를 포함하는 조성물은 약 0.5 내지 약 6, 약 1 내지 약 5, 약 1 내지 약 4, 약 1.5 내지 약 3.5 또는 약 2 내지 약 4의 평균 DAR을 가진다. 일부 구체예에서, 조성물은 약 1.5 내지 약 3.5, 또는 약 2 내지 약 3.5, 또는 약 2.7 내지 약 3.5, 또는 약 2 내지 약 3, 또는 약 3 내지 약 3.3, 또는 약 2 또는 약 3의 평균 DAR을 가진다. 일부 다른 바람직한 구체예에서, 조성물은 약 2.5 ± 10% (예를 들면 약 2.25 내지 약 2.75)의 평균 DAR을 가진다. 일부 구체예에서, 표적화 항체는 시스테인 엔지니어링된 부착 부위를 함유하며 조성물은 약 1.6 내지 약 2.1 또는 약 2.0의 평균 DAR을 가진다.
약학 조성물 및 치료 방법
치료 목적에 대해, 구체예들의 약학 조성물은 식 (I) 내지 (V) 또는 (Ia) 내지 (Va)의 적어도 하나의 화합물 또는 그것의 약학적으로 허용되는 염을 포함한다.약학 조성물은 하나 이상의 약학적으로-허용되는 부형제 또는 약학적으로-허용되는 담체를 더 포함할 수 있다. 약학적으로-허용되는 부형제는 비-독성이고 다르게는 대상에게 투여하기에 생물학적으로 적합한 물질이다. 그런 부형제는 본원에 기술된 화합물들의 투여를 용이하게 하고 활성 성분과 부합한다. 약학적으로-허용되는 부형제의 실례는 안정화제, 윤활제, 계면활성제, 희석제, 항-산화제, 결합제, 착색제, 벌크화제, 유화제 또는 맛-변형제를 포함한다. 바람직한 구체예에서, 구체예들에 따르는 약학 조성물은 멸균 조성물이다. 약학 조성물은 공지된 또는 기술분야의 숙련자들에게 활용될 수 있는 화합 기법을 사용하여 제조될 수 있다.
멸균 조성물은 또한 그런 조성물에 관련된 국가적 및 지역적 규제에 따르는 조성물들을 포함하여, 구체예들에 의해 고려된다.
본원에 기술된 약학 조성물 및 화합물들은 용액, 에멀션, 현탁액, 분산액, 또는 적합한 약학적 용매 또는 담체 중의 사이클로덱스트린과 같은 봉입 복합체, 또는 다양한 단위용량 형태의 제조를 위해 기술분야에 공지된 종래 방법에 따라 고체 담체와 함께 환, 정제, 당의정, 좌제, 봉지, 드라제, 과립, 분말, 복원용 분말 또는 캡슐로서 제형될 수 있다. 구체예들의 약학 조성물은 적합한 전달 경로, 예컨대 경구, 비경구, 직장, 비강, 국소적, 또는 눈 경로에 의해 또는 흡입에 의해 투여될 수 있다. 바람직하게 조성물은 정맥 내 또는 경구 투여에 대해 제형된다.
경구 투여를 위해, 구체예들의 화합물은 고체 형태로, 예컨대 정제 또는 캡슐로서 또는 용액, 에멀션 또는 현탁액으로서 제공될 수 있다. 경구용 조성물을 제조하기 위하여, 구체예들의 화합물은 예컨대 매일 약 0.01 내지 약 50 mg/kg, 또는 매일 약 0.05 내지 약 20 mg/kg 또는 매일 약 0.1 내지 약 10 mg/kg의 단위용량을 산출하기 위해 제형될 수 있다. 경구용 정제는 희석제, 붕괴제, 결합제, 윤활제, 감미제, 풍미제, 착색제 및 보존제와 같은 적합한 약학적으로 허용되는 부형제와 혼합된 활성 성분(들)을 포함할 수 있다. 적합한 비활성 충전제는 나트륨 및 칼슘 카보네이트, 나트륨 및 칼슘 포스페이트, 락토오스, 전분, 당, 글루코오스, 메틸 셀룰로오스, 마그네슘 스테아레이트, 만니톨, 소르비톨 등을 포함한다. 예시적인 액체 경구용 부형제는 에탄올, 글리세롤, 물 등을 포함한다. 전분, 폴리비닐-피롤리돈 (PVP), 나트륨 전분 글리콜레이트, 미정질 셀룰로오스, 및 알긴산이 예시적인 붕괴제이다. 결합제는 전분 및 젤라틴을 포함할 수 있다. 윤활제는 존재한다면, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 또는 탈크일 수 있다. 바람직하다면, 정제는 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 다이스테아레이트와 같은 물질로 코팅되어 위장관에서 흡수가 지연될 수 있거나, 또는 장용 코팅으로 코팅될 수 있다.
경구 투여를 위한 캡슐은 경질 및 연질 젤라틴 캡슐을 포함한다. 경질 젤라틴 캡슐을 제조하기 위하여, 활성 성분(들)은 고체, 반-고체 또는 액체 희석제와 혼합될 수 있다. 연질 젤라틴 캡슐은 활성 성분을 물, 땅콩 오일 또는 올리브유와 같은 오일, 액체 파라핀, 짧은 사슬 지방산의 모노 및 다이-글리세라이드의 혼합물, 폴리에틸렌 글리콜 400 또는 프로필렌 글리콜과 혼합함으로써 제조될 수 있다.
경구 투여를 위한 액체는 현탁액, 용액, 에멀션 또는 시럽의 형태로 존재할 수 있고, 또는 사용 전에 물 또는 다른 적합한 비히클로 복원되기 위한 건조 생성물로서 동결건조되거나 제공될 수 있다. 그런 액체 조성물은 임의로 다음을 함유할 수 있다: 약학적으로 허용되는 부형제, 예컨대 현탁제 (예를 들면 소르비톨, 메틸 셀룰로오스, 알긴산 나트륨, 젤라틴, 하이드록시에틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 알루미늄 스테아레이트 겔 등); 비-수성 비히클, 예컨대 오일 (예를 들면 아몬드유 또는 분별된 코코넛유), 프로필렌 글리콜, 에틸 알코올 또는 물; 보존제 (예를 들면 메틸 또는 프로필 p-하이드록시벤조에이트 또는 소르브산); 습윤제, 예컨대 레시틴; 및 필요하다면 풍미제 또는 착색제.
구체예들의 조성물은 좌제로서 직장 투여를 위해 제형될 수 있다. 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 비강 내 또는 피하 경로를 포함한 비경구 용도를 위해, 구체예들의 제제들은 적절한 pH 및 등장성으로 또는 비경구적으로 허용되는 오일로 완충된, 멸균 수성 용액 또는 현탁액으로 제공될 수 있다. 적합한 수성 비히클은 링거 용액 및 등장성 염화나트륨을 포함한다. 그런 형태는 앰풀 또는 일회용 주사 장치와 같은 단위-용량 형태로, 적절한 용량이 누출될 수 있는 바이알과 같은 다중-용량 형태로 또는 주사 가능한 제형을 제조하기 위해 사용될 수 있는 고체 형태 또는 전-농축물로 제공될 수 있다. 예시적인 주입 용량 범위는 수 분 내지 수 일 범위의 기간에 걸쳐 1 내지 1000 μg/kg/분의 약학적 담체와 혼합된 제제이다.
비강, 흡입 또는 경구 투여를 위해, 구체예들의 약학 조성물은 예를 들면, 또한 적합한 담체를 함유하는 분무 제형을 사용하여 투여될 수 있다.
국조 적용을 위해, 구체예들의 화합물은 바람직하게 크림 또는 연고 또는 국소 투여에 적합한 유사한 비히클로서 제형된다. 국소 투여를 위해, 발명의 화합물들은 비히클에 대한 약 0.1% 내지 약 10%의 약물의 농도에서 약학적 담체와 혼합될 수 있다. 구체예들의 제제를 투여하는 다른 방식은 경피 전달을 이루기 위하여 패치 제형을 활용할 수 있다.
본 개시는 식 (I) 내지 (V) 또는 (Ia) 내지 (Va)의 화합물 또는 그것의 염, 용매 화합물 또는 입체 이성질체의 유효량을 세포에게 투여하는 단계를 포함하는, 폴레이트 수용체 알파 (FRA)를 발현하는 세포의 사멸 방법을 제공한다. 일부 구체예에서, 식 (I) 내지 (V) 또는 (Ia) 내지 (Va)의 화합물 또는 그것의 염, 용매 화합물 또는 입체 이성질체의, 세포를 사멸하기에 충분한 양을 세포에 투여하는 단계를 포함하는, 인간 폴레이트 수용체 알파 (FRA)를 발현하는 세포의 사멸 방법이 제공된다. 특정 구체예에서, 세포는 암세포이다. 특정 구체예에서, 암세포는 난소암 세포, 폐암 세포, 자궁암 세포, 고환 융모막 암종 세포, 상의세포종 세포, 중피종 세포, 유방암 세포, 대장암 세포 또는 신장 세포 암종 세포이다. 특정 구체예에서, 암세포는 FRA-포지티브 난소암 세포, FRA-포지티브 폐암 세포, FRA-포지티브 자궁암 세포, FRA-포지티브 고환 융모막 암종 세포, FRA-포지티브 상의세포종 세포, FRA-포지티브 중피종 세포, FRA-포지티브 유방암 세포, FRA-포지티브 대장암 세포 또는 FRA-포지티브 신장 세포 암종 세포이다.
다른 측면으로, 본 개시는 식 (I) 내지 (V) 또는 (Ia) 내지 (Va)의 화합물 또는 그것의 염, 용매 화합물 또는 입체 이성질체의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다. 본원에 기술된 방법으로 치료될 수 있는 암의 실례는, 그것들에 한정되는 것은 아니지만, 선암종, 림프종, 아세포종, 흑색종 및 육종을 포함한 암종을 포함한다. 그런 암의 보다 구체적인 실례는 편평세포 암, 소-세포 폐암, 비-소세포 폐암, 폐 선암종, 폐 편평세포 암종, 위장암, 호지킨 및 비-호지킨 림프종, 췌장암, 교아세포종, 경부암, 신경교종, 난소암, 간 암종 및 간종양과 같은 간암, 방광암, 유방암, 대장암, 결장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 침샘 암종, 신장 세포 암종 및 빌름스 종양과 같은 신장암, 기저 세포 암종, 흑색종, 중피종, 전립선암, 갑상선암, 고환암, 식도암, 담낭암 및 다양한 유형의 두경부암을 포함한다.
암 치료 방법의 특정 구체예에서, 암은 난소암, 폐암, 자궁암, 고환 융모막 암종, 상의세포종, 중피종, 유방암, 대장암 및 신장 세포 암종으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 암은 FRA-포지티브 암이다. 특정 구체예에서, 암은 FRA-포지티브 난소암, FRA-포지티브 폐암, FRA-포지티브 자궁암, FRA-포지티브 고환 융모막 암종, FRA-포지티브 상의세포종, FRA-포지티브 중피종, FRA-포지티브 유방암, FRA-포지티브 대장암 및 FRA-포지티브 신장 세포 암종이다. 특정 구체예에서, 개체는 암을 가지거나 암으로 진단되었다. 특정 구체예에서, 개체는 FRA-포지티브 악성종양을 가지거나 FRA-포지티브 악성종양 (예컨대 난소암, 폐암, 자궁암, 고환 융모막 암종, 상의세포종, 중피종, 유방암, 대장암 및 신장 세포 암종)으로 진단되었다. 특정 구체예에서, 개체는 인간이다. 일부 구체예에서, 방법은 화합물을 투여하기 전에 암세포 상에서 FRA의 발현 수준을 검출하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 화합물은 복강 내로, 정맥 내로, 근육 내로, 비경구로, 비강 내로, 피부로, 혀 밑으로 또는 흡입에 의해 투여된다.
키트
본 개시는 암의 치료 또는 방지에 유용한, 식 (I) 내지 (V) 또는 (Ia) 내지 (Va)의 화합물, 또는 그것의 염, 용매 화합물 또는 입체 이성질체를 포함하는 하나 이상의 용기를 포함하는 약학적 팩 또는 키트를 제공한다. 키트는 암의 치료에 사용하기 위한 지침서를 추가로 포함할 수 있다.
본 개시는 또한 본 구체예들의 약학 조성물의 하나 이상의 성분을 포함하는 하나 이상의 용기를 포함하는 약학적 팩 또는 키트를 제공한다. 그런 용기(들)과 임의로 결합될 수 있는 것은 약품 또는 생물학적 생성물의 제조, 사용 또는 판매를 조절하는 정부 기관에 의해 규정된 형태의 주의사항일 수 있고, 그 주의사항은 인간 투여를 위한 제조, 사용 또는 판매 기관에 의한 승인을 반영한다.
약물 컨쥬게이트의 합성
구체예들은 또한 대상 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체를 제조하기에 유용한 방법 및 중간체에 관련된다.
개시된 화합물들을 합성하기에 유용한 통상적으로 공지된 화학적 합성 계획도 및 조건들을 제공하는 많은 일반적 참조가 활용 가능하다 (예컨대 Smith and March, March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, Fifth Edition, Wiley-Interscience, 2001 참조).
본원에 개시된 화합물들은 크로마토그래피 수단, 예컨대 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC), 제조용 박막 크로마토그래피, 플래시 칼럼 크로마토그래피 및 이온 교환 크로마토그래피를 포함하여, 기술분야에 공지되어 있는 수단들 중 어느 것에 의해 정제될 수 있다. 이온 수지뿐 아니라 정상 및 역상을 포함하여, 어떠한 적합한 정지 상이 사용될 수 있다. 가장 전형적으로는 개시된 화합물들은 실리카겔 및/또는 알루미나 크로마토그래피를 통해 정제된다. 예컨대 Introduction to Modern Liquid Chromatography, 2nd ed., ed. L. R. Snyder and J. J. Kirkland, John Wiley and Sons, 1979; 및 Thin Layer Chromatography, E. Stahl (ed.), Springer-Verlag, New York, 1969 참조.
대상 화합물의 제조를 위한 과정 중 어느 과정 동안, 관련된 분자들 중 어느 분자상의 민감한 또는 반응성 기들을 보호하는 것이 필요하거나 및/또는 바람직할 수 있다. 이것은 표준 작업, 예컨대 T. W. Greene and P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis," 4th ed., Wiley, New York 2006에서 기술된 것과 같이, 종래의 보호기에 의해 이루어질 수 있다. 보호기들은 기술분야에 공지된 방법들을 사용하여 편리한 후속 단계에서 제거될 수 있다.
구체예들의 방법에 유용한 예시적인 화학적 실체들은 이제 본원의 일반적 제조를 위한 예시적인 합성 계획도 및 이어지는 특정 실시예들을 참조로 기술될 것이다. 당업자들은 본원의 다양한 화합물들을 얻기 위하여, 출발 물질이 적합하게 선택되어서 궁극적으로 원하는 치환체들이 원하는 생성물을 산출하기 위하여 적절하게 보호가 있거나 없는 반응 계획도를 통해 운반될 수 있을 것임을 인지할 것이다. 다르게는, 궁극적으로 원하는 치환체 대신, 반응 계획도를 통해 운반될 수 있고 원하는 치환체로 적절하게 대체될 수 있는 적합한 기를 사용하는 것이 필요하거나 바람직할 수 있다. 나아가, 당업자는 아래의 계획도에 나타낸 변형들이 특별한 펜던트기의 기능성에 적합한 어떠한 순서로든지 수행될 수 있음을 인지할 것이다. 일반적인 계획도에 도시된 각각의 반응은 바람직하게는 약 0℃ 내지 사용된 유기 용매의 환류 온도 범위의 온도에서 작동된다. 다르게 명시되지 않는 한, 변수들은 식 (I)과 관련하여 상기에서 규정된 것과 같다.
본 구체예들의 컨쥬게이트들은 친수성 자가-희생 스페이서를 포함하는 링커를 통해 항체에 약물 부분을 부착시킴으로써 구성될 수 있다.
식 (I)의 화합물의 링커 부분에 대한 대표적인 합성이 아래의 계획도 및 이어지는 특정 실시예에서 기술된다.
계획도 2
Figure pct00106
4-니트로벤즈알데하이드로부터 화합물 C의 합성은 상기 계획도 2에 도시된다. 4-니트로페닐글리콜산이 염소화제, 예컨대 SOCl2, PCl3, 또는 PCl5를 사용하여 해당하는 산 염화물로 전환된다. 산 염화물은 그런 다음 1-메틸피페라진과 반응하여 케토아미드 중간체를 생성한다. 다르게는, 4-니트로페닐글리콜산은 커플링제, 예컨대 EDCI를 사용하여 1-메틸피페라진에 커플링될 수 있다. 케토아미드 중간체는 케토기를 함유하는데, 그것은 다음에 환원제, 예컨대 DIBAL-H, BH3, LiAlH4-AlCl3, LiAlH4-BF3-Et2O 또는 나트륨 보로하이드라이드로 환원되어 화합물 C가 생성된다.
계획도 3
Figure pct00107
계획도 3을 참조하면, 화합물 C의 니트로기는 팔라듐, 니켈 또는 백금과 같은 촉매로 촉매적 수소화에 의해 환원되어 화합물 I의 아닐린기가 생성된다. 적합한 수소화 촉매의 실례는 Pd/C 및 라니 니켈을 포함한다.
계획도 4
Figure pct00108
Figure pct00109
계획도 4를 참조하면, 화합물 I는 본 구체예들의 화합물에 친수성 자가-희생 링커 부분을 제공한다. 화합물 I의 아미노기는 표준 펩티드 커플링 조건을 통해 화합물 W와 반응하여 화합물 X를 생성할 수 있다. DIEA와 같은 염기 또는 기술분야의 숙련자에게 친숙한 다른 염기들의 존재하에 및 적절한 용매 중에서 EDCI/HOBt, HOBt, PyBOP, HATU 또는 BEM (Carpino, L. A. J. Am. Chem. Soc. 1993, 115, 4397. Carpino, L. A.; El-Faham, A. J. Am. Chem. Soc. 1995, 117, 5401. Li, P.; Xu, J. C. J. Pept. Res. 2001, 58, 129.)과 같은 시약들이 사용될 수 있다.
계획도 4를 계속해서 참조하면, 화합물 X의 하이드록실기는 4-니트로페닐 플로로포르메이트를 사용하여 활성화된 카보네이트로 전환된다. 화합물 Y를 사용하여, 아미노기를 가진 약물과의 반응은 화합물 Z를 생성할 수 있다. 만약 약물이 아미노기를 함유하지 않는다면, 제 2, 중간 자가-희생 스페이서 또는 고리화 자가-제거 링커가, 상기에서 논의된 것과 같이, 약물 부분과 아미노벤질옥시카르보닐기 사이에 위치할 수 있다.
아래의 계획도 5를 참조하는 특정 구체예에서, 링커의 -L3-L2- 부분은 화합물 I에 부착된다. 그런 다음 -A-L4- 부분이 부착된다.
계획도 5
Figure pct00110
Figure pct00111
본 구체예들의 화합물의 제조 방법은 완충액 중에서 항체 용액을 제조하는 단계 및 환원제, 예컨대 TCEP의 용액으로 처리하는 단계를 포함한다. 유리 티올의 양이 측정된다. 유리 티올의 양이 예정된 양에 도달할 때, 부분적으로 환원된 항체가 링커-약물 부분으로 알킬화된다.
일부 구체예에서, 표적화 부분 T를 포함하는 화합물을 식: A-L4-L3-L2-X-L1-D의 화합물과 반응시키는 단계를 포함하는, 식 (I) 또는 (Ia)의 화합물:
Figure pct00112
Figure pct00113
(Ia)
또는 그것들의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체 (식에서 D, T, X, L1, L2, L3, L4, A 및 p는, 적용 가능한 경우, 식 (I) 또는 (Ia)에 대해 정의된 것과 같음)의 제조방법이 제공된다. 일부 구체예에서, T는 폴레이트 수용체 알파 (예컨대 인간 FRA)에 특이적으로 결합하는 항체이다. 일부 구체예에서, 그 방법에 의해 제조된 화합물이 제공된다. 추가로 그 방법에 의해 제조된 하나 이상의 화합물을 포함하는 조성물이 제공된다.
일부 구체예에서, 하나 이상의 티올 (또는 설프하이드릴기)를 가지는 항체를 화합물 Z:
Figure pct00114
(화합물 Z)
또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체와 반응시키는 단계를 포함하는, 식 (II) 또는 (IIa)의 화합물:
Figure pct00115
Figure pct00116
(IIa)
또는 그것들의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체 (식에서 D, T, L1, L2, L3, L4, A 및 p는, 적용 가능한 경우, 식 (II) 또는 (IIa)에 대해 정의된 것과 같음)의 제조 방법이 제공된다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 유리 티올 (또는 설프하이드릴기)을 가지는 항체는 항-FRA 항체이다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 유리 티올 (또는 설프하이드릴기)을 가지는 항체는 hLK26 또는 hMov19이다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 유리 티올 (또는 설프하이드릴기)을 가지는 항체는 26B3의 유도체 (예컨대 인간화된 또는 키메라 항체)이다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 유리 티올 (또는 설프하이드릴기)을 가지는 항체는 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 하나 이상의 아미노산 잔기가 시스테인 잔기로 대체되는 hLK26, 또는 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 하나 이상의 아미노산 잔기가 시스테인 잔기로 대체되는 hMov19이다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 유리 티올 (또는 설프하이드릴기)을 가지는 항체는 26B3의 유도체 (예컨대 그런 인간화된 또는 키메라 항체), 또는 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 하나 이상의 아미노산 잔기가 시스테인 잔기로 대체되는 26B3의 유도체 (예컨대, 인간화된 항체 또는 키메라 항체)이다. 일부 구체예에서, 방법은 본원에서 상세하게 설명되는 것과 같이, 화합물 Z의 제조 방법을 더 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 본원에서 상세하게 설명되는 것과 같이, 화합물 Z로 유도하는 하나 이상의 합성 중간체 (예컨대 화합물 Y 및 화합물 X)의 제조 방법을 더 포함한다. 일부 구체예에서, 본원에 상세하게 설명된 방법들 중 어느 것에 의해 제조된 화합물이 제공된다. 추가로 본원에 상세하게 설명된 방법들 중 어느 것에 의해 제조된 하나 이상의 화합물을 포함하는 조성물이 제공된다.
일부 구체예에서, 항체를 화합물 Z:
Figure pct00117
(화합물 Z)
또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체와 반응시키는 것을 포함하는, 식 (II)의 화합물:
Figure pct00118
또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체의 제조 방법이 제공되며, 식에서:
D는 약물 부분이고;
T는 항체이며;
R1은 수소, 비치환 또는 치환된 C1-3 알킬 또는 비치환 또는 치환된 헤테로사이클릴이고;
L1은 결합, 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커이며;
L2는 결합 또는 제 2 자가-희생 링커이고;
이때 만약 L1이 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커라면 L2는 결합이며;
L2가 제 2 자가-희생 링커라면 L1은 결합이고;
L3은 펩티드 링커이며;
L4는 결합 또는 스페이서이고; 및
A는 아실 단위이다. 일부 구체예에서, T는 폴레이트 수용체 알파 (예컨대 인간 FRA)에 특이적으로 결합하는 항체이다.
일부 구체예에서, 항체를 화합물 Z:
Figure pct00119
(화합물 Z)
또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체와 반응시키는 것을 포함하는, 식 (IIa)의 화합물:
Figure pct00120
(IIa)
또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체의 제조 방법이 제공되고, 식에서:
p는 1 내지 20이며;
D는 약물 부분이고;
T는 항체이며;
R1은 수소, 비치환 또는 치환된 C1-3 알킬 또는 비치환 또는 치환된 헤테로사이클릴이고;
L1은 결합, 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커이며;
L2는 결합 또는 제 2 자가-희생 링커이고;
이때 만약 L1이 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커라면 L2는 결합이며;
L2가 제 2 자가-희생 링커라면 L1은 결합이고;
L3은 펩티드 링커이며;
L4는 결합 또는 스페이서이고; 및
A는 아실 단위이다. 일부 구체예에서, T는 FRA (예컨대 인간 FRA)에 특이적으로 결합하는 항체이다.
추가로, 본원에 상세하게 기술된 것과 같은 화합물의 제조 과정 및/또는 제조 방법들 중 어느 것에 의해 제조된 화합물이 제공된다. 또한 본원에 상세하게 기술된 것과 같은 화합물의 제조 과정 및/또는 제조 방법들 중 어느 것에 의해 제조된 하나 이상의 화합물을 포함하는 조성물 (예컨대 약학 조성물)이 제공된다.
본 개시는 계획도 4 및 5에서 화합물 및 중간체의 제조 과정을 제공한다. 계획도 4 및 5에 나타낸 화합물들은 전체 원자가를 가지는 것을 의미하고 적절할 때 임의의 보호기 또는 이탈기로 적절하게 캡핑된다. 예를 들어, 계획도 "화합물 TAP-18H의 합성"에서 도시된 것과 같이, L3-L2는
Figure pct00121
일 수 있다.
본 개시는 화합물 W: A-L4-L3-L2를 화합물 I:
Figure pct00122
와 반응시키는 단계를 포함하는, 화합물 X:
Figure pct00123
(화합물 X)
또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체의 제조 방법을 제공하며, 식에서:
R1은 수소, 비치환 또는 치환된 C1-3 알킬 또는 비치환 또는 치환된 헤테로사이클릴이고;
L2는 결합 또는 제 2 자가-희생 링커이며;
L3은 펩티드 링커이고;
L4는 결합 또는 스페이서이며; 및
A는 아실 단위이다.
본 개시는 화합물 X:
Figure pct00124
와 p-니트로페닐 클로로포르메이트를 반응시켜서 화합물 Y:
Figure pct00125
를 형성하는 단계; 및
화합물 Y를, L1-D를 포함하는 화합물과 반응시키는 단계를 포함하는, 화합물 Z:
Figure pct00126
(화합물 Z) 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체의 제조 방법을 제공하며; 식에서:
D는 약물 부분이고;
R1은 수소, 비치환 또는 치환된 C1-3 알킬 또는 비치환 또는 치환된 헤테로사이클릴이며;
L1은 결합, 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커이고;
L2는 결합 또는 제 2 자가-희생 링커이며;
이때 만약 L1이 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커라면 L2는 결합이고;
L2가 제 2 자가-희생 링커라면 L1은 결합이며;
L3은 펩티드 링커이고;
L4는 결합 또는 스페이서이며; 및
A는 아실 단위이다.
본 개시는 화합물 W1: L3-L2와 화합물 I:
Figure pct00127
를 반응시키는 단계를 포함하는, 화합물 X1:
Figure pct00128
(화합물 X1)
또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체의 제조 방법을 제공하며, 식에서:
R1은 수소, 비치환 또는 치환된 C1-3 알킬 또는 비치환 또는 치환된 헤테로사이클릴이고;
L2는 결합 또는 제 2 자가-희생 링커이며;
L3은 펩티드 링커이다.
본 개시는 화합물 X1:
Figure pct00129
과, L1-D를 포함하는 화합물을 반응시키는 단계를 포함하는, 화합물 Y1:
Figure pct00130
(화합물 Y1)
또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체의 제조 방법을 제공하며, 식에서:
R1은 수소, 비치환 또는 치환된 C1-3 알킬 또는 비치환 또는 치환된 헤테로사이클릴이고;
D는 약물 부분이며;
L1은 결합, 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커이고;
L2는 결합 또는 제 2 자가-희생 링커이며;
이때 만약 L1이 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커라면 L2는 결합이고;
L2가 제 2 자가-희생 링커라면 L1은 결합이며;
L3은 펩티드 링커이다.
본 개시는 화합물 Y1:
Figure pct00131
과, A-L4를 포함하는 화합물을 반응시키는 단계를 포함하는, 화합물 Z:
Figure pct00132
(화합물 Z)
또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체의 제조 방법을 제공하며, 식에서:
D는 약물 부분이고;
R1은 수소, 비치환 또는 치환된 C1-3 알킬 또는 비치환 또는 치환된 헤테로사이클릴이며;
L1은 결합, 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커이고;
L2는 결합 또는 제 2 자가-희생 링커이며;
이때 만약 L1이 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커라면 L2는 결합이고;
L2가 제 2 자가-희생 링커라면 L1은 결합이며;
L3은 펩티드 링커이고;
L4는 결합 또는 스페이서이며; 및
A는 아실 단위이다.
본 개시는 다음 식의 화합물:
Figure pct00133
(화합물 X)
또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체를 제공하며;
식에서:
R1은 수소, 비치환 또는 치환된 C1-3 알킬 또는 비치환 또는 치환된 헤테로사이클릴이고;
L2는 결합 또는 제 2 자가-희생 링커이며;
L3은 펩티드 링커이고;
L4는 결합 또는 스페이서이며; 및
A는 아실 단위이다.
본 개시는 다음 식의 화합물:
Figure pct00134
(화합물 Z)
또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체를 제공하며;
식에서:
R1은 수소, 비치환 또는 치환된 C1-3 알킬 또는 비치환 또는 치환된 헤테로사이클릴이고;
D는 약물 부분이며;
L1은 결합, 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커이고;
L2는 결합 또는 제 2 자가-희생 링커이며;
이때 만약 L1이 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커라면 L2는 결합이고;
L2가 제 2 자가-희생 링커라면 L1은 결합이며;
L3은 펩티드 링커이고;
L4는 결합 또는 스페이서이며; 및
A는 아실 단위이다.
본 개시는 다음 식의 화합물:
Figure pct00135
(화합물 X1)
또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체를 제공하며;
식에서:
R1은 수소, 비치환 또는 치환된 C1-3 알킬 또는 비치환 또는 치환된 헤테로사이클릴이고;
L2는 결합 또는 제 2 자가-희생 링커이며;
L3은 펩티드 링커이다.
본 개시는 다음 식의 화합물:
Figure pct00136
(화합물 Y1)
또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체를 제공하며;
식에서:
R1은 수소, 비치환 또는 치환된 C1-3 알킬 또는 비치환 또는 치환된 헤테로사이클릴이고;
D는 약물 부분이며;
L1은 결합, 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커이고;
L2는 결합 또는 제 2 자가-희생 링커이며;
이때 만약 L1이 제 2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커라면 L2는 결합이고;
L2가 제 2 자가-희생 링커라면 L1은 결합이며;
L3은 펩티드 링커이다.
명세서는 기술분야의 숙련자가 발명을 실시하는 것을 가능하게 하기에 충분한 것으로 여겨진다. 본원에 제시되고 기술된 것들에 더불어 발명의 다양한 변형이 전술한 설명으로부터 기술분야의 숙련자들에게 명백해질 것이고 첨부된 청구범위의 범주에 속할 것이다. 본원에서 인용된 모든 공보, 특허 및 특허 출원은 모든 목적에 대해 전체 내용이 참조로 본원에 포함된다.
실시예
발명은 예시에 의해 제공되고 한정하는 것을 의미하는 것이 아닌 다음의 실시예들을 참조로 한층 더 이해될 수 있다.
실시예 1: 실시예 2 내지 6에 대한 물질 및 방법
링커-약물의 합성
화합물 Tap-18H의 합성을 아래의 계획도에 나타낸다. 중간 화합물 M 및 O의 합성 또한 아래의 계획도에 나타낸다.
화합물 M의 합성
Figure pct00137
화합물 O의 합성
Figure pct00138
화합물 TAP-18H의 합성
Figure pct00139
화합물 Tap-18H의 합성 계획도를 참조하면, 상업적으로 입수 가능한 4-니트로페닐글리옥실산을 PCl5 , 또는 EDCI의 어느 하나 및 DMF 중의 NiPr2Et를 사용하여, 또는 CH2Cl2 중의 2-클로로-4,6-다이메톡시-1,3,5-트라이아진 및 커플링제로서 N-메틸모르폴린을 사용하여 N-메틸피페라진으로 축합하여 원하는 케토아미드를 생성하였다. 전형적인 과정으로, CH2Cl2(20 ml), N-메틸모르폴린 (15 mmol) 중의 2-클로로-4,6-다이메톡시-1,3,5-트라이아진 (5 mmol)의 용액을 0℃에서 연속적인 교반하에 첨가하였다. 백색 현탁액이 30 내지 40분 후에 형성되었고, 이 혼합물에 CH2Cl2 (10 ml) 중의 4-니트로페닐글리옥실산을 첨가하였고, 그 결과 투명한 용액이 형성되었다. 혼합물을 1시간 동안 혼합한 후, N-메틸피페라진 (5mmol)을 실온에서 첨가하였다. 반응이 완료된 후 (TLC, 10분), 혼합물을 10% 수성 NaHCO3 용액 (2×10 ml)으로 세척하고 이어서 H2O (3×10 ml)로 세척하였다. 유기층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰고, 감압하에 용매를 제거하여 미정제 생성물을 완성하였고, 그것을 추가로 재결정화 또는 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트=8:2)에 의해 정제하였다.
케토아미드 화합물을 THF 또는 DIBAL-H 또는 나트륨 보로하이드라이드의 존재하에 0.5 동등량의 LiAlH4에 의해 추가로 환원하여 니트로 화합물 C를 제조하였다 [B. P. Bandgar and S. S. Pandit, Tetrahedron Letters 44 (2003) 3855-3858].
니트로 화합물 C를 실온에서 6 내지 11시간 동안 SnCl2로의 처리 또는 메탄올 중의 촉매로서 Pd/C (10% w/w)를 사용하는 촉매적 수소화에 의해 아닐린 화합물 I로 환원시켰고 수율은 65 내지 81%였다. RB04-50 반응기 B가 포함된 MultiMaxIR 시스템을 사용하여 다음의 과정을 통해 얻을 수 있었다. 반응기를 처음에 35 ml의 메탄올, 0.03 mg의 10% Pd/C 및 0.0252 mol의 니트로 화합물 C로 채웠고 수소를 6.3 바 (H2, 일정)에서의 압력까지 반응기에 첨가하였다.
화합물 M의 합성 계획도를 참조하면, Boc-보호된 L-발린을 DCM 중의 N-하이드록시석신이미드 및 EDAC-HCl로 또는 DCM 중의 N-하이드록시석신이미드 및 EDC로 처리하여 석신이미드 에스테르를 얻었다. 이 활성화된 에스테르를 L-시트룰린 및 CH3CN, H2O, NaHCO3과 반응시켜서 Boc-보호된 화합물 M을 완성하였다.
화합물 Tap-18H의 합성 계획도를 참조하면, 아닐린 화합물 I를 실온에서 32시간 동안 DMF 중의 DCC/HOBt에 의해 Boc-보호된 화합물 M과 커플링시켜서 화합물 N (수율 78 내지 82%)을 얻거나, 또는 PS-카르보다이이미드를 사용하여, 그 반응에서 화합물 N의 합성을 100 mg의 화합물 M으로부터 출발하여 1.5 당량의 아닐린 화합물 I로 2 당량의 PS-카르보다이이미드 및 1.7 당량의 DCM 중의 HOBt의 존재하에 24시간 동안 수행하였다. LC/MS에 의한 분석은 원하는 질량 및 대략 50 내지 60% 변환율을 가지는 피크를 나타냈다.
그런 다음 커플링된 생성 화합물 N을 DCM 중의 2,6-루티딘의 존재하에 4-니트로페닐 클로로포르메이트와 실온에서 8시간 동안 반응시켜서 카보네이트 화합물 P를 생성하였고, LC/MS는 원하는 질량을 가지는 피크를 나타냈다.
카보네이트 화합물 P의 DMF 중의 HOAt 및 Et3N의 존재하에서의 모노메틸 돌라스타틴 10으로의 처리는 화합물 Q의 형성을 초래하였다.
화합물 O의 합성 계획도를 참조하면, β-알라닌을 DMF 중의 말레산 무수물로 처리하였고 그렇게 얻어진 산을 DCC 커플링하에서 N-하이드록시석신이미드 (NHS)와 반응시켜서 NHS-에스테르를 생성하였다. 상업적으로 입수 가능한 t-boc-N-아미도-dPEG4-산의 BOC 보호기를 TFA로의 처리에 의하여 제거하여 아민의 TFA염을 얻었고, 그것을 앞서 합성한 NHS 에스테르와 반응시켰다. 그렇게 얻어진 카르복실산을 분리하고 EDCI를 사용하여 N-하이드록시석신이미드와 커플링시켜서 NHS 에스테르 화합물 O를 완성시켰다.
화합물 Tap-18H의 합성 계획도를 참조하면, 화합물 Q의 BOc-기를 TFA로 제거하였고 유리 아민을 무수 아세토니트릴 및 NaHCO3 중에서 NHS 에스테르 화합물 O와 실온에서 12 내지 36시간 동안 커플링시켜서 최종 생성물 Tap-18H를 35 내지 45%의 수율로 생성하였다.
도 1은 Tap-18H의 NMR 스펙트럼을 도시한다.
화합물 TAP- 18Hr1의 합성
아래에 나타낸 식을 가지는 Tap-18Hr1을 합성하였다. 도 2는 Tap-18Hr1의 NMR스펙트럼을 도시한다.
Figure pct00140
화합물 TAP- 18Hr2의 합성
아래에 나타낸 식을 가지는 Tap-18Hr2를 합성하였다. 도 3은 Tap-18Hr2의 NMR스펙트럼을 도시한다.
Figure pct00141
셀라인
난소암 세포 SK-OV-3 (ATCC®, Cat. No. HTB-77TM)을 10% FBS (HYCLONE®, Cat. No. SH30071.03) 및 100 U/mL 페니실린/100 μg/mL 스트렙토마이신 (GIBCO®, Cat. No. 15140)이 첨가된 McCoy's 5A 배지 (GIBCO®, Cat. No. 16600)에서 배양하였다. 난소암 세포 OVCAR-3 (Bioresource Collection and Research Center®, Cat. No. 60551)을 20% FBS, 1 mM 피루브산 나트륨 (GIBCO®, Cat. No. 11360), 0.01 mg/mL 소 인슐린 (SIGMA®, Cat. No.I6634) 및 100 U/mL 페니실린/100 μg/mL 스트렙토마이신이 첨가된 RPMI 배지 1640 (GIBCO®, Cat. No. 22400)에서 배양하였다. 난소암 세포 OVCAR-3B를 OVCAR-3으로부터 채택하여 10% FBS, 1 mM 피루브산 나트륨 (GIBCO®, Cat. No. 11360) 및 100 U/mL 페니실린/100 μg/mL 스트렙토마이신이 첨가된 RPMI 배지 1640 (GIBCO®, Cat. No. 22400)에서 배양하였다. 췌장암 세포 Panc 02.03B를 Panc 02.03 (ATCC®, Cat. No. CRL-2553TM)으로부터 채택하고, 15% FBS, 1 mM 피루브산 나트륨 및 100 U/mL 페니실린/100 μg/mL 스트렙토마이신이 첨가된 RPMI 배지 1640에서 인슐린 없이 배양하였다. 폐암 세포 NCI-H2110 (ATCC®, Cat. No. CRL-5924TM)를 10% FBS, 1 mM 피루브산 나트륨, 2.5 g/l D-글루코오스 (SIGMA®, Cat. No. G8270) 및 100 U/mL 페니실린/100 μg/mL 스트렙토마이신이 첨가된 RPMI 배지 1640에서 배양하였다. 폐암 세포 NCI-H292 (BIORESOURCE COLLECTION AND RESEARCH CENTER®, Cat. No. 60372)를 10% FBS, 1 mM 피루브산 나트륨 및 100 U/mL 페니실린/100 μg/mL 스트렙토마이신이 첨가된 RPMI 배지 1640에서 배양하였다.
시약
DTT 및 DTPA를 SIGMA-ALDRICH® (St. Louis, MO)로부터 얻었다. TCEP를 Acros (Morris Plains, NJ)로부터 얻었다. DTNB를 Thermo Scientific (Rockford, IL)으로부터 얻었다. 인산 나트륨, 붕산 나트륨 및 염화나트륨을 J.T. BAKER™ (Center Valley, PA)로부터 얻었다. 시스테인은 ALFA AESAR® (Ward Hill, MA)로부터 얻었다.
항- FRA 항체 hLK26의 아미노산 서열
SEQ ID NO. 설명
1 hLK26-IgG1 중쇄
2 hLK26-IgG4p 중쇄
3 hLK26-카파 경쇄
SEQ ID NO:1 (hLK26-IgG1 중쇄)
EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCSASGFTFS GYGLS WVRQAPGKGLEWVA MISSGGSYTYYADSVKG RFAIS
RDNAKNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCAR HGDDPAWFAY WGQGTPVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTA
ALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKV
DKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGV
EVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP
SRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS
CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:2 (hLK26-IgG4p 중쇄)
EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCSASGFTFS GYGLS WVRQAPGKGLEWVA MISSGGSYTYYADSVKG RFAIS
RDNAKNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCAR HGDDPAWFAY WGQGTPVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTA
ALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKV
DKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVH
NAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQE
EMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSV
MHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:3 (hLK26-카파 경쇄)
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCSVSSSISSNNLHWYQQKPGKAPKPWIYGTSNLASGVPSRFSGSGSGTD
YTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSYPYMYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF
YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFN
RGEC
hLK26 -시스테인 변이체의 생성
시스테인 잔기를 부위-특정 돌연변이생성 방법으로 hLK26 항체의 중쇄 (CH) 또는 카파 경쇄 (CL)의 불변 영역에 도입하였다. 간단히 설명하면, 돌연변이생성을 중첩 PCR에 의해 수행하였다. 원하는 염기의 특정 변화를 뉴클레오티드 변화된 프라이머들을 통합시킴으로써 도입할 수 있다. 프라이머들이 연장됨에 따라, 결과적으로 생성되는 암플리콘에 돌연변이가 생성되었다. 아미노산들의 돌연변이 위치 (EU 넘버링) 및 플랭킹 서열은 아래의 표 6에 열거한다.
Figure pct00142
hLK26 - Cys 변이체를 발현하는 안정한 셀라인의 제조
hLK26-시스테인 (hLK26-Cys) 변이체들을 Flp-In CHO 세포 (InvitrogenTM, Cat. No: R758-07)에서 안정하게 발현시키고 생성하였다. 시스테인 치환된 항체 변이체들의 DNA 서열을 판매사에 의해 제공된 표준 과정을 따라 pcDNA5/FRT 벡터 (InvitrogenTM, Cat. No: V6010-20)에 삽입하고 pOG44 (InvitrogenTM, Cat. No V6005-20)와 함께 공-트랜스펙션하였다. 수립된 셀라인의 배양 상층액을 수집하고 단백질 A 세파로오스 비즈 (GE Healthcare, Cat. No: 17-5280-04)로 정제하였다. 정제된 단백질을 SDS-PAGE 및 크기 축출 크로마토그래피 둘 다로 분석하여 항체의 품질을 보증하였다.
hLK26 - IgG1 항체의 종래의 컨쥬게이션
종래의 약물 컨쥬게이트를 링커 유효하중을 항체에 4개의 사슬-간 이황화 결합의 환원을 통해 컨쥬게이팅함으로써 이루었고, 따라서 컨쥬게이션은 유리 시스테인의 8개의 노출된 설프하이드릴기에 제한된다. 항체 당 링커-약물은 0 내지 8의 범위일 수 있다. hLK26-IgG1 항체를 0.025 M 나트륨 보레이트 pH 8, 0.025 M NaCl, 1 mM DTPA 중에서 1.85 당량의 TCEP로 2시간 동안 37℃에서 환원시켰다. 단백질 농도를 1.0 mg/mL 용액에 대해 280 nm에서 1.616의 흡광도 값을 사용하여 정량하였고, 몰 농도를 145,055 g/mol의 분자량을 사용하여 측정하였다. 생성된 mAb-시스테인 티올의 농도를 DTNB 로 적정함으로써 측정하였다. 전형적으로 3.22 티올/mAb를 얻었다. 부분적으로 환원된 항체를 1.0 몰의 말레이미도카프로일-약물 (Tap18Hr1, Tap-18Hr1/mAb-시스테인 티올 또는 말레이미도-약물/mAb-시스테인 티올로 알킬화하였다. 알킬화 반응을 4℃에서 12 내지 16시간 동안 수행하였다. 시스테인 (최종 1 mM)을 사용하여 어떠한 미반응된, 과량의 말레이미도카프로일-약물 또는 말레이미도-약물을 퀀칭하였다. 컨쥬게이션 혼합물을 먼저 결합 완충액, 10 mM 인산 나트륨, 10 mM NaCl, 5% DMSO, pH 7.0으로 5배로 희석하고, 하이드록시아파타이트 칼럼 (Macroprep ceramic type I 40 μm, BioRad®, Hercules, CA)에 20 mg의 컨쥬게이트된 항체 당 1 mL의 하이드록시아파타이트의 로딩 용량으로 적용하였다. 칼럼을 미리 5 칼럼 부피의 결합 완충액으로 평형화하였다. 샘플 적용 후에, 칼럼을 3 칼럼 부피의 결합 완충액으로 세척한 다음 5 칼럼 부피의 10 mM 인산 나트륨, 10 mM NaCl, pH 7.0으로 평형화하였다. 그런 다음 결합 ADC를 200 mM 인산 나트륨, 10 mM NaCl, pH 7.0으로 용출하였다. 용출 후에, 완충액을 HIPREPTM 26/10 탈염 칼럼을 사용하여 둘베코 인산염 완충된 식염수로 교환하였다 (선택적).
hLK26 - Cys 변이체의 부위-특이적 컨쥬게이션
부위-특이적 약물 컨쥬게이트를 링커 유효하중 (즉 약물 부분에 연결된 링커를 포함하는 분자)을 항체 (CH 또는 CL)의 불변 도메인에 2개의 엔지니어링된 시스테인 잔기의 환원을 통해 컨쥬게이팅함으로써 이루었고, 따라서 컨쥬게이션은 유리 시스테인의 2개의 노출된 설프하이드릴기에 제한된다. 도입된 시스테인 상에 링커 유효하중을 특이적으로 컨쥬게이팅하기 위하여, 환원/산화 과정을 사용하였다. 배양 상태 동안에 발생될 수 있을 도입된 시스테인 부위 상의 시스테인 또는 글루타티온을 제거하기 위하여, hLK26-Cys 변이체-Trp18Hr1 및 hLK26-T155C 및 hLK26-S442C의 중쇄 돌연변이들을 먼저 10 내지 15배 몰 과잉량의 TCEP (ACROS ORGANICS®, Cat. No:363830100)로 37℃에서 2 내지 5시간 동안 1mM DTPA (SIGMA-ALDRICH®, Cat. No:D6518)를 함유하는 PBS에서 처리하였다. 그런 다음 항체를 단백질에 대해 20 내지 30배 몰 과잉량의 데하이드로아스코르브산 (DHA) (SIGMA-ALDRICH®, Cat.No:261556)으로 실온에서 3 내지 5시간 동안 재-산화하여 사슬-간 이황화 결합의 재형성을 보장하였다. 샘플을 PBS로 완충액을 교환하였다. 그런 다음 말레이미드-연결된 약물 유효하중, Tap18Hr1을 첨가하여 처리된 항체 상의 유리-티올과 반응시켰다. 과잉 유효하중을 N-아세틸-L-시스테인 (SIGMA-ALDRICH®, Cat.No:A7250)으로 퀀칭하였고 CHT 세라믹 하이드록시아파타이트 비즈 (BIO-RAD®, Cat.No:157-0040)를 사용하여 부위-특이적 컨쥬게이트된 hLK26-Cys 변이체-Trp18Hr1, hLK26-T155C-Tap18Hr1 및 hLK26-S442C-Tap18Hr1을 정제하였다.
중쇄의 T199 및 카파 경쇄의 L201 및 T206에서 도입된 시스테인 상에 링커 유효하중을 특이적으로 컨쥬게이팅하기 위해 환원/산화 과정을 또한 약간 변형시켜서 사용하였다. T199C의 hLK26 중쇄 돌연변이 및 L201C 및 T206C의 경쇄 돌연변이를 먼저 10 내지 15배 몰 과잉량의 TCEP (ACROS ORGANICS®, Cat. No:363830100)로 37℃에서 2 내지 5시간 동안 1mM DTPA (SIGMA-ALDRICH®, Cat. No:D6518)를 함유하는 PBS에서 처리하였다. 그런 다음 과량의 TCEP를 제거한 후, 항체를 단백질에 대해 50 내지 70배 몰 과잉량의 데하이드로아스코르브산 (DHA) (SIGMA-ALDRICH®, Cat.No:261556)으로 4℃에서 2 내지 5시간 동안 재-산화하여 사슬-간 이황화 결합의 재형성을 보장하였다. 샘플을 PBS로 완충액을 교환하였다. 그런 다음 말레이미드-연결된 약물 유효하중, Tap18Hr1을 첨가하여 처리된 항체 상의 유리-티올과 반응시켰다. 과잉 유효하중을 N-아세틸-L-시스테인 (SIGMA-ALDRICH®, Cat.No:A7250)로 퀀칭하였고 CHT 세라믹 하이드록시아파타이트 비즈 (BIO-RAD®, Cat.No:157-0040)를 사용하여 이들 부위-특이적 ADC를 정제하였다.
역상 HPLC 분석에 의한 약물 항체 비율 (DAR) 측정
환원 및 변성 역-상 HPLC (RP-HPLC)로 구성되는 방법을 개발하여 컨쥬게이트된 ADC의 다양한 경쇄 및 중쇄 종을 분리하고 정량하였다. HPLC 분석 전에, 컨쥬게이트 샘플을 6M 구아니딘 염산염 및 20 mM DTT로 15분 동안 50℃ 가열하에 처리하였다. 100 μg의 처리된 컨쥬게이트 샘플을 PLRP-S 칼럼 (2.1 x 150 mm, 8 μm, 1000Å, Aligent)에 적용하였다. 유속을 0.8 mL/분으로 설정하였고 칼럼 온도를 분석 전체를 통해 일정하게 80℃로 설정하였다. 용매 A는 Milli Q 물 중의 0.05% 트라이플루오로아세트산이었고, 용매 B는 아세토니트릴 중의 0.04% 트라이플루오로아세트산이었다. 방법은 다음으로 구성되었다: 3 ml에 대하여 등용매 25% B, 50% B로의 25 ml의 선형 구배, 95% B로의 2 ml의 선형 구배, 25% B로의 1 ml의 선형 구배 및 2ml에 대하여 등용매 25% B. 이 방법으로, 과잉량의 DTT로의 ADC의 사전처리는 사슬간- 및 사슬내-이황화를 깨트리고, 0, 1, 2 또는 3 약물 (H0, H1, H2 및 H3)을 가지는 중쇄로부터 0 또는 1 약물 (L0 및 L1)을 가지는 경쇄의 분리를 허용한다. 각각의 분리된 종의 피크를 그것들의 용출 시간 및 UV 스펙트럼에 의해 배정하였다 (A248/280 비율은 약물 로딩으로 증가한다). 시험된 ADC에 대한 RP-HPLC 프로필의 개별적인 피크의 구역을 기반으로 계산된 DAR을 표 7A 및 7B에 나타낸다.
Figure pct00143
hLK26 - Cys - 변이체 및 Tap18Hr1 컨쥬게이트의 암세포에의 결합
v자형-바닥의 96-웰 플레이트의 웰당 1×105 세포를 시딩하고 적정된 농도의 50 μl의 컨쥬게이트되지 않은 Ab 또는 ADC와 함께 또는 10 μg/mL의 아이소타입 대조 항체 인간 IgG와 함께 인큐베이션하였다. 4℃에서 60분 동안 인큐베이션한 후에, 세포를 200 μl의 FACS 완충액 (1% FBS를 함유하는 1x PBS)으로 1회 세척하고, 50 μl의 1 μg/ml의 염소 F(ab')2-항-인간 IgG (H+L)-RPE 또는 염소 항-인간 IgG-RPE(SOUTHERN BIOTECH®, Cat. No. 2043-09)로 FACS 완충액 중에서 염색한 다음, 4℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 FACS 완충액으로 1회 세척하고 유동 세포분석기 (BD LSR, BD Life Sciences)에 의해 분석하였다.
시험관 내 WST -8 세포독성 분석
SK-OV-3, OVCAR-3, OVCAR-3B 및 Panc 02.03B 세포를 96-웰 미소적정 플레이트의 웰당 각각 1x103 내지 1x104 세포로 시딩하였다. Tap18Hr 컨쥬게이트된 ADC 또는 컨쥬게이트되지 않은 항체들을 최종 부피 200 μL/웰에 최종 표시된 농도로, SK-OV-3 및 Panc02.03B에 대해서는 2.5-배 또는 3-배 연속적으로 희석하면서 600 nM 내지 0.03 nM (90 μg/ml 내지 0.005 μg/ml)의 범위로 및 OVCAR-3 및 OVCAR-3B에 대해서는 3-배 연속적으로 희석하면서 200 nM 내지 0.01 nM (30 μg/ml 내지 0.005 μg/ml)의 범위로 3중 또는 5중 한 벌로 첨가하였다. 그런 다음 세포를 37℃에서 및 5% CO2에서 인큐베이션하였다. OVCAR-3에 대해서는 3일 동안, 그리고 SK-OV-3, Panc02.03B 및 OVCAR-3B에 대해서는 3 내지 6일 동안 인큐베이션한 후에, 세포 생존성을 세포 카운팅 키트-8 (Dojindo, Cat. No. CK04)에 의해 제조사의 지시를 따라 측정하였다. 간단하게 설명하면, 인큐베이션이 끝났을 때 100 μL/웰의 배지를 제거하고 10 μL/웰의 시약 염료 (WST-8)을 각 웰에 첨가하였다. 최적의 색이 발생한 후 (미처리 대조표준의 OD450이 ≥ 1일 때), 450 nm에서의 흡광도 (OD450 값)를 분광계 (MOLECULAR DEVICES®, VERSAMAXTM 미소플레이트 판독기)에 의해 측정하였다. 반복 실험의 평균을 얻었고 바탕값 (중간 대조표준)을 뺐다. 그런 다음 그 결과의 OD450 값을 사용하여 다음 식에 따라 % 성장 억제를 계산하였다: [OD450 미처리 - OD450 샘플] / [OD450 미처리] * 100.
암 이종이식편 모델에서 ADC 처리
hLK26 - IgG1 - Tap18Hr1로 처리된 난소 종양 SK- OV -3
피하 이종이식편 모델을 수립하기 위하여, 25% BD MATRIGELTM 기저막 매트릭스 고농도 (BD Biosciences, Cat. No. 354248)를 함유하고 있는 120 μL의 PBS 중의 1x107 SK-OV-3 세포를 생후 6주 된 암컷 C.B-17 SCID 마우스 (Lasco, Taipei, Taiwan)의 우측 옆구리에 이식하였다. 종양 세포 접종 후 대략 1시간 후에 hLK26-IgG1-Tap18Hr1을 100 μL 중의 3 mg/kg으로 정맥 내 주사하였다 (1일로 표시함). 종양 부피를 주마다 1회 캘리퍼스로 2 수직 차원으로 측정하였고, 식 (0.52*길이*폭*폭)에 따라 계산하였다. 처리된 마우스에서 잠재적인 약물 독성을 측정하기 위하여, 체중을 주마다 기록하였다.
Tap18Hr1과 컨쥬게이트된 hLK26 - Cys 변이체로 처리된 난소 종양 SK- OV -3
피하 이종이식편 모델을 수립하기 위하여, 50% BD MATRIGELTM 기저막 매트릭스 (BD Biosciences, Cat. No. 354234)를 함유하고 있는 100 μL의 PBS 중의 1x107 SK-OV-3 세포를 생후 6주 된 암컷 C.B-17 SCID 마우스 (Lasco, Taipei, Taiwan)의 우측 옆구리에 이식하였다. 종양 세포 접종 후 대략 2시간 후에 부위-특이적 ADC hLK26-Cys 변이체-Tap18Hr1을 각각 150 μL 중의 5 mg/kg으로 정맥 내 주사하였다 (1일로 표시함). 종양 부피를 주마다 1회 캘리퍼스로 2 수직 차원으로 측정하였고, 식 (0.52*길이*폭*폭)에 따라 계산하였다. 처리된 마우스에서 잠재적인 약물 독성을 측정하기 위하여, 체중을 주마다 기록하였다.
종래의 hKL -26- IgG1 - Tap18Hr1 및 부위-특이적 컨쥬게이트된 hLK26 - Cys 변이 체-TapHr1로 처리된 폐 종양 NCI-H2110
피하 이종이식편 모델을 수립하기 위하여, 100 μL의 PBS 중의 5x106의 NCI-H2110 세포를 생후 6주 된 암컷 C.B-17 SCID 마우스 (Lasco, Taipei, Taiwan)의 우측 옆구리에 이식하였다. 종양 세포 접종 후 대략 6시간 후에 종래의 컨쥬게이트된 hLK26-IgG1-Tap18Hr1 및 부위-특이적 hLK26-Cys 변이체-Tap18Hr1을 각각 150 μL 중의 5 mg/kg으로 정맥 내 주사하였다 (1일로 표시함). 종양 부피를 주마다 1회 캘리퍼스로 2 수직 차원으로 측정하였고, 식 (0.52*길이*폭*폭)에 따라 계산하였다. 처리된 마우스에서 잠재적인 약물 독성을 측정하기 위하여, 체중을 주마다 기록하였다.
실시예 2: 난소 및 폐 암세포에서 hLK26 기반 항체 약물 컨쥬게이트 ( ADC )의 결합 활성
hLK26 - IgG1 - Tap18Hr1 결합 활성
hLK26-IgG1 네이키드 Ab 및 hLK26-IgG1-Tap18Hr1의 결합 활성을 FRA-발현 SK-OV-3, OVCAR-3, NCI-H2110 및 NCI-H292 세포에서 유동 세포분석 분석법에 의해 평가하였다. 결과 (표 8)는 가장 최적의 결합이 일련의 Ab/ADC 농도로 이루어진 때의 평균 형광 세기 (MFI)로서 나타난다. hLK26-IgG1-Tap18Hr1은 시험한 모든 FRA 발현 셀라인에 포지티브하게 결합하고, 네이키드 Ab hLK26-IgG1과 동등한 결합 능력을 나타낸다. 이들 데이터는 종래의 ADC hLK26-IgG1-Tap18Hr1이 hLK26-IgG1의 항원 반응성을 보유하고 FRA-발현 암세포들에 효과적으로 결합하는 것을 증명한다.
hLK26 - IgG1 - Tap18Hr1 및 컨쥬게이트되지 않은 hLK26 - IgG1의 암세포에의 결합
hLK26-IgG1 -Tap18Hr1
(1.1 μg/mL)		 hLK26-IgG1
(1.1 μg/mL)		 아이소타입 대조표준 (10 μg/mL)
난소암 세포 OVCAR-3 1114 1154 7
SK-OV-3 2973 3174 6
폐암 세포 NCI-H2110 666 644 5
NCI-H292 1420 1398 6
hLK26-Cys 변이체-Tap18Hr1의 부위-특이적 컨쥬게이트들의 결합 활성을 난소암 SK-OV-3 및 OVCAR-3B (표 9 및 10) 및 폐암 NCI-H2110 및 NCI-H292 (표 11 및 12)에서 유동 세포분석 분석법에 의해 평가하였다. 표에서 평균 형광 세기 (MFI) 값들은 시험한 농도에서 ADC의 결합 활성을 나타낸다. IgG1 변이체들 중에서, hLK26-T155C-IgG1-Tap18Hr1 및 hLK26-T206C-IgG1-Tap18Hr1은 야생형인 네이키드 hLK26-IgG1과 비교할만하게 결합하였지만, hLK26-S442C-IgG1-Tap18Hr1은 결합 반응성에서 약간의 감소를 나타냈다. IgG4p 변이체-Tap18Hr1 컨쥬게이트들은 또한 여기서 시험한 모든 FRA 포지티브 암세포에 결합하지만, 형광 세기는 일반적으로 IgG1 변이체들로 관찰된 것들보다 낮았다. 이런 결합 활성의 감소는 시스테인 돌연변이보다는 IgG4p 아이소타입에 기인하는 것으로 보인다. 전체적으로, 부위-특이적 컨쥬게이트된 hLK2-CyS 변이체들은 시험한 난소 및 폐암 세포들에 대한 항원 반응성을 보유한다.
Figure pct00144
컨쥬게이트되지 않은 hLK26 - IgG1 및 hLK26 - Cys 변이체 - Tap18Hr1의 OVCAR -3B 세포에의 결합
항체 (1.1 μg/mL) MFI
hLK26-T155C-IgG4p-Tap18Hr1 806
hLK26- S442C-IgG4p-Tap18Hr1 769
hLK26-T155C-IgG1-Tap18Hr1 1062
hLK26- S442C-IgG1-Tap18Hr1 967
hLK26-IgG1 1154
2nd Ab 단독 5
Figure pct00145
컨쥬게이트되지 않은 hLK26 - IgG1 및 hLK26 - Cys 변이체 - Tap18Hr1의 NCI-H292 세포에의 결합
항체 (3.3 μg/mL) MFI
hLK26-T155C-IgG4p-Tap18Hr1 1179
hLK26- S442C-IgG4p-Tap18Hr1 1087
hLK26-T155C-IgG1-Tap18Hr1 1447
hLK26- S442C-IgG1-Tap18Hr1 1281
hLK26-IgG1 1455
2nd Ab 단독 6
실시예 3: FRA -발현 셀라인에서 hLK26 - IgG1 - Tap18Hr1 ADC 및 hLK26 - IgG1의 시험관 내 세포독성
hLK26-IgG1-Tap18Hr1의 시험관 내 세포독성 활성을 FRA 포지티브 암 셀라인 (나OV-3 및 OVCAR-3) 및 FRA 네거티브 셀라인 (Panc 02.03B)에서 평가하였다. 네이키드 hLK26-IGG1 항체에 의한 세포독성을 또한 나란히 시험하였다. ADC hLK26-IgG1-TapHr1은 FRA 포지티브 암 세포 (SK-OV-3 및 OVCAR-3)에 대해 특이적이고 용량-의존성 성장 억제를 유도한 한편, FRA 네거티브 세포 Panc 02.03B에 대해서는 훨씬 많이 적은 성장 억제 효과를 나타냈는데, 이것은 이 세포독성의 항원 특이성을 증명한다 (표 13). ADC와 비교하여, 네이키드 Ab hLK26-IgG1은 처리된 세포의 생존률에 대해 무시할만한 영향을 나타냈다.
hLK26 - IgG1 - Tap18Hr1 및 hLK26 - IgG1의 시험관 내 세포독성 활성
% 성장 억제
시험한 Ab/ADC의 농도 3 μg/mL 1 μg/mL
SK-OV-3 hLK26-IgG1-Tap18Hr1 87.2 79.6
hLK26-IgG1 3.1 1.0
OVCAR-3 hLK26-IgG1-Tap18Hr1 99.2 98.3
hLK26-IgG1 18.0 8.2
Panc 02.03B hLK26-IgG1-Tap18Hr1 15.9 6.5
hLK26-IgG1 5.1 1.3
부위-특이적 컨쥬게이트된 hLK26 Cys 변이체-Tap18Hr1의 시험관 내 세포독성 활성을 또한 SK-OV-3 및 OVCAR-3B 세포에서 평가하였다. 표 14는 IgG1 변이체들을 나타내고 표 15는 IgG4p 변이체들을 나타낸다. 종래의 컨쥬게이트된 ADC (표 13)와 마찬가지로, hLK26 Cys 변이체-Tap18Hr1은 FRA 포지티브 암 세포 (SK-OV-3 및 OVCAR-3)에 대해 특이적이고 용량-의존성 성장 억제를 유도하였다. 그것들은 FRA 네거티브 세포 Panc 02.03B에 대해서는 훨씬 많이 적은 성장 억제 효과를 나타냈는데, 이것은 이 세포독성의 항원 특이성을 증명한다 (표 14 및 15). 이들 결과는 종래의 및 부위-특이적 컨쥬게이트된 hLK26-Tap18Hr1 ADC 둘 다 항원 특이성을 가지고 표적 암세포에 세포독성 약물을 전달할 수 있음을 증명한다.
컨쥬게이트된 hLK26 IgG1 Cys 변이체들의 시험관 내 세포독성 활성
% 성장 억제
시험한 ADC의 농도 10 μg/mL 3 μg/mL
SK-OV-3 hLK26-S442C-IgG1-Tap18Hr1 79.1 34.9
hLK26-T155C-IgG1-Tap18Hr1 85.9 53.1
OVCAR-3B hLK26-S442C-IgG1-Tap18Hr1 108.0 74.4
hLK26-T155C-IgG1-Tap18Hr1 99.9 85.3
Panc 02.303B hLK26-S442C-IgG1-Tap18Hr1 17.5 5.5
hLK26-T155C-IgG1-Tap18Hr1 26.1 10.7
컨쥬게이트된 hLK26 IgG4p Cys 변이체들의 시험관 내 세포독성 활성
% 성장 억제
시험한 ADC의 농도 10 μg/mL 3 μg/mL
SK-OV-3 hLK26-T155C-IgG4P-Tap18Hr1 78.6 41.6
hLK26-S442C-IgG4P-Tap18Hr1 58.7 27.0
OVCAR-3B hLK26-T155C-IgG4P-Tap18Hr1 99.5 52.4
hLK26-S442C-IgG4P-Tap18Hr1 89.5 21.6
Panc 02.03B hLK26-T155C-IgG4P-Tap18Hr1 25.2 7.2
hLK26-S442C-IgG4P-Tap18Hr1 6.7 6.5
실시예 4: 난소암에서 종래의 ADC hLK26 - IgG1 - Tap18Hr1의 생체 내 효능
hLK26-Tap18Hr1-IgG1의 효능을 난소암 세포 SK-OV-3으로부터 유도된 생체 내 이종이식편 모델에서 평가하였다. 종양 세포 이식 후 대략 1시간 후에 마우스들을 3 mg/kg의 비히클 (PBS) 또는 단일 용량의 ADC로 정맥 내로 처리하였다 (1일로서 표시함, 도 4의 화살표 참조). 따라서 1일에 종양 크기는 세포-마트리겔 혼합물의 접종 부피로 인해 120 mm3로 기록되었다. 주입된 마트리겔은 15일째에 흡수된 것으로 나타났고, 그 동안에 종양은 수립되었으며 비히클 대조 그룹에서 관찰되는 바 꾸준하게 성장하였다. 57일째에, 비히클 대조그룹의 평균 종양 크기는 500 mm3를 초과하였고 (도 4), 한편 연구가 끝날 때에 hLK26-Tap18Hr1-IgG1로 처리된 마우스 그룹에서는 (6마리 중 6마리에서) 종양 성장이 검출되지 않았다. 두 그룹의 체중이 차이를 보이지 않고 유지된 것으로 보아 독성은 관찰되지 않았다 (데이터는 제시하지 않음). 그러므로, 이 연구는 hLK26-Tap18Hr1-IgG1 ADC 단독으로 난소암에 대한 강력한 항종양제인 것을 증명하였다.
실시예 5: 난소암에서 부위 특이적 ADC hLK26 Cys 변이체 - Tap18Hr1의 생체 내 효능
SCID 마우스에서의 SK-OV-3 이종이식 모델을 또한 사용하여 부위-특이적 컨쥬게이트된 hLK26 Cys 변이체-Tap18Hr1의 생체 내 항종양 효과를 평가하였다. 암세포를 SCID 마우스에 피하로 이식하였고 단일 용량의 5 mg/kg의 ADC 또는 비히클 대조표준을 종양 세포 이식 후 대략 2시간 후에 주입하였다 (1일로 표시함). 4개의 처리 그룹을 비교하였다: hLK26-S442C-IgG1-Tap18Hr1, hLK26-T155C-IgG4P-Tap18Hr1, hLK26-S442C-IgG4P-Tap18Hr1 및 비히클 대조표준, 각 처리 그룹에 6마리 마우스를 배분함. 종양의 크기를 매주 1회 측정하였다. 그 결과를 도 5에 나타낸다. 1일의 종양 크기는 접종된 세포-마트리겔 혼합물의 부피로 인해 100 mm3으로 기록되었다. 비히클 대조표준에 비교하여, 단일 용량의 5 mg/kg의 hLK26 Cys 변이체-Tap18Hr1은 모든 ADC 처리된 그룹에서 종양 성장을 상당히 지연시켰다 (처리 후 16일 째 이후 p 값 <0.005). 도 5의 화살표는 제공된 처리 시점을 나타낸다. 또한 모든 그룹의 체중 증가가 차이 없이 유지된 것으로 보아 ADC로 처리된 마우스 그룹들에서 명백한 독성은 관찰되지 않는다 (데이터는 제시하지 않음). 이 연구는 일부 변이체들에서 세포 결합 활성의 약간의 감소가 나타나긴 했지만, 부위-특이적 컨쥬게이트된 hLK26 Cys 변이체-Tap18Hr1이 난소암에 대한 효과적인 항종양제인 것을 증명한다.
실시예 6: 폐암에 대한 항- FRA 기반 Tap18Hr1 컨쥬게이트들의 생체 내 항-종양 활성
종래의 및 부위-특이적 항-FRA-Tap18Hr1 컨쥬게이트들의 효능을 폐암 세포 NCI-H2110으로부터 유도된 이종이식 모델에서 생체 내에서 평가하였다. 암세포를 SCID 마우스에 피하로 이식하고 hLK26-IgG1-Tap18Hr1, hLK26-T206C-IgG1-Tap18Hr1, LK26-T155C-IgG4p-Tap18hr1, hLK26-T199C-IgG4p-Tap18Hr1 및 hLK26-L201C-IgG4p-Tap18Hr1을 포함한 5 mg/kg의 ADC 또는 비히클 대조표준의 단일 용량을 종양 세포 이식 후 대략 6시간 후에 제공하였다 (1일로 표시함, 도 6에서 화살표 참조). 1일의 종양 크기는 접종된 세포-마트리겔 혼합물의 부피로 인해 100 mm3으로 기록되었다. 5마리 동물이 포함된 각각의 처리 그룹의 종양 크기를 매주 1회 측정하였다. 단일 용량의 5 mg/kg의 종래의 hLK26-IgG1-Tap18Hr1 또는 부위-특이적 hLK26 Cys 변이체-Tap18Hr1 컨쥬게이트는 처리된 마우스에서 종양 성장을 완전히 억제하였다. 모든 ADC 처리 그룹에서 29일까지 종양 성장이 검출되지 않았다. 대조적으로, 비히클 그룹의 종양은 빠르게 성장하였고 29일째에 1000 mm3 이상에 도달하였다 (처리 후 7일 이후 p 값<0.05). 모든 그룹의 체중 증가가 차이 없이 유지된 것으로 보아 ADC로 처리된 마우스 그룹들에서 명백한 독성은 관찰되지 않는다 (데이터는 제시하지 않음). 이 연구는 종래의 또는 부위-특이적 항-FRA 기반 Tap18Hr1 컨쥬게이트들이 단독으로, 폐암에 대한 강력한 항종양제인 것을 증명하였다.
참고문헌
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Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 22 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 22 Gly Thr His Tyr Phe Asp Tyr 1 5 <210> 23 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 23 Arg Thr Ser Glu Asn Ile Phe Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 24 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 24 Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu 1 5 <210> 25 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 25 Gln His His Tyr Ala Phe Pro Trp Thr 1 5 <210> 26 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 26 Gly Tyr Phe Met Asn 1 5 <210> 27 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 27 Arg Ile His Pro Tyr Asp Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 28 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 28 Tyr Asp Gly Ser Arg Ala Met Asp Tyr 1 5 <210> 29 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 29 Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Phe Ala Gly Thr Ser Leu Met His 1 5 10 15 <210> 30 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 30 Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ala 1 5 <210> 31 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 31 Gln Gln Ser Arg Glu Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 32 <211> 330 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 32 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 33 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 33 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 34 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 34 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 35 <211> 257 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 35 Met Ala Gln Arg Met Thr Thr Gln Leu Leu Leu Leu Leu Val Trp Val 1 5 10 15 Ala Val Val Gly Glu Ala Gln Thr Arg Ile Ala Trp Ala Arg Thr Glu 20 25 30 Leu Leu Asn Val Cys Met Asn Ala Lys His His Lys Glu Lys Pro Gly 35 40 45 Pro Glu Asp Lys Leu His Glu Gln Cys Arg Pro Trp Arg Lys Asn Ala 50 55 60 Cys Cys Ser Thr Asn Thr Ser Gln Glu Ala His Lys Asp Val Ser Tyr 65 70 75 80 Leu Tyr Arg Phe Asn Trp Asn His Cys Gly Glu Met Ala Pro Ala Cys 85 90 95 Lys Arg His Phe Ile Gln Asp Thr Cys Leu Tyr Glu Cys Ser Pro Asn 100 105 110 Leu Gly Pro Trp Ile Gln Gln Val Asp Gln Ser Trp Arg Lys Glu Arg 115 120 125 Val Leu Asn Val Pro Leu Cys Lys Glu Asp Cys Glu Gln Trp Trp Glu 130 135 140 Asp Cys Arg Thr Ser Tyr Thr Cys Lys Ser Asn Trp His Lys Gly Trp 145 150 155 160 Asn Trp Thr Ser Gly Phe Asn Lys Cys Ala Val Gly Ala Ala Cys Gln 165 170 175 Pro Phe His Phe Tyr Phe Pro Thr Pro Thr Val Leu Cys Asn Glu Ile 180 185 190 Trp Thr His Ser Tyr Lys Val Ser Asn Tyr Ser Arg Gly Ser Gly Arg 195 200 205 Cys Ile Gln Met Trp Phe Asp Pro Ala Gln Gly Asn Pro Asn Glu Glu 210 215 220 Val Ala Arg Phe Tyr Ala Ala Ala Met Ser Gly Ala Gly Pro Trp Ala 225 230 235 240 Ala Trp Pro Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Met Leu Leu Trp Leu Leu 245 250 255 Ser <210> 36 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 36 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Cys Val Ser Trp 1 5 10 15 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 20 25 <210> 37 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 37 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Cys Trp Asn Ser 1 5 10 15 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 20 25 <210> 38 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 38 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Cys Gly Val His 1 5 10 15 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 20 25 <210> 39 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 39 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Cys Phe Pro Ala 1 5 10 15 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 20 25 <210> 40 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 40 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Cys Tyr Ile Cys 1 5 10 15 Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 20 25 <210> 41 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 41 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Cys Tyr Thr Cys 1 5 10 15 Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 20 25 <210> 42 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 42 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Cys Tyr Thr Cys 1 5 10 15 Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 20 25 <210> 43 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 43 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Cys Tyr Thr Cys 1 5 10 15 Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 20 25 <210> 44 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 44 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Cys Cys 1 5 10 15 Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 20 25 <210> 45 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 45 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Cys Cys 1 5 10 15 Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 20 25 <210> 46 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 46 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Cys Cys 1 5 10 15 Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 20 25 <210> 47 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 47 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Cys Cys 1 5 10 15 Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 20 25 <210> 48 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 48 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Cys Leu Ser Pro 1 5 10 15 Gly Lys <210> 49 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 49 Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Cys Leu Ser Pro 1 5 10 15 Gly Lys <210> 50 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 50 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Cys Leu Ser Leu 1 5 10 15 Gly Lys <210> 51 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 51 Glu Val Thr His Gln Gly Cys Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn 1 5 10 15 Arg Gly Glu Cys 20 <210> 52 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 52 Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Cys Lys Ser Phe Asn 1 5 10 15 Arg Gly Glu Cys 20 <210> 53 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 53 Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Cys Thr Lys Ser Phe Asn 1 5 10 15 Arg Gly Glu Cys 20

Claims (78)

  1. 식 (I)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체:
    Figure pct00146

    식에서:
    D는 약물 부분이고;
    T는 인간 폴레이트 수용체 알파 (FRA)에 특이적으로 결합하는 항체인 표적화 부분이며;
    X는 친수성 자가-희생 링커이고;
    L1은 결합, 제2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커이며;
    L2는 결합 또는 제2 자가-희생 링커이고;
    이때 만약 L1이 제2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커라면 L2는 결합이며;
    L2가 제2 자가-희생 링커라면 L1은 결합이고;
    L3은 펩티드 링커이며;
    L4는 결합 또는 스페이서이고; 및
    A는 아실 단위이다.
  2. 식 (II)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체:
    Figure pct00147

    식에서:
    D는 약물 부분이고;
    T는 인간 폴레이트 수용체 알파 (FRA)에 특이적으로 결합하는 항체인 표적화 부분이며;
    R1은 수소, 비치환 또는 치환된 C1-3 알킬 또는 비치환 또는 치환된 헤테로사이클릴이고;
    L1은 결합, 제2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커이며;
    L2는 결합 또는 제2 자가-희생 링커이고;
    이때 만약 L1이 제2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커라면 L2는 결합이며;
    L2가 제2 자가-희생 링커라면 L1은 결합이고;
    L3은 펩티드 링커이며;
    L4는 결합 또는 스페이서이고; 및
    A는 아실 단위이다.
  3. 식 (Ia)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체:
    Figure pct00148
    (Ia)
    식에서:
    p는 1 내지 20이고;
    D는 약물 부분이며;
    T는 인간 폴레이트 수용체 알파 (FRA)에 특이적으로 결합하는 항체인 표적화 부분이고;
    X는 친수성 자가-희생 링커이며;
    L1은 결합, 제2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커이고;
    L2는 결합 또는 제2 자가-희생 링커이며;
    이때 만약 L1이 제2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커라면 L2는 결합이고;
    L2가 제2 자가-희생 링커라면 L1은 결합이며;
    L3은 펩티드 링커이고;
    L4는 결합 또는 스페이서이며; 및
    A는 아실 단위이다.
  4. 식 (IIa)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체:
    Figure pct00149
    (IIa)
    식에서:
    p는 1 내지 20이고;
    D는 약물 부분이며;
    T는 인간 폴레이트 수용체 알파 (FRA)에 특이적으로 결합하는 항체인 표적화 부분이고;
    R1은 수소, 비치환 또는 치환된 C1-3 알킬 또는 비치환 또는 치환된 헤테로사이클릴이며;
    L1은 결합, 제2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커이고;
    L2는 결합 또는 제2 자가-희생 링커이며;
    이때 만약 L1이 제2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커라면 L2는 결합이고;
    L2가 제2 자가-희생 링커라면 L1은 결합이며;
    L3은 펩티드 링커이고;
    L4는 결합 또는 스페이서이며; 및
    A는 아실 단위이다.
  5. 제3 항 또는 제4 항에 있어서, p는 1 내지 4인 것을 특징으로 하는 화합물.
  6. 제1 항 내지 제5 항 중 어느 한 항에 있어서, L1은 결합인 것을 특징으로 하는 화합물.
  7. 제1 항 내지 제5 항 중 어느 한 항에 있어서, L1은 제2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커인 것을 특징으로 하는 화합물.
  8. 제7 항에 있어서, L1은 아미노벤질옥시카르보닐 링커인 것을 특징으로 하는 화합물.
  9. 제7 항에 있어서, L1은
    Figure pct00150
    ,
    Figure pct00151
    ,
    Figure pct00152
    및
    Figure pct00153
    (식에서 n은 1 또는 2임)으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  10. 제7 항에 있어서, L1은
    Figure pct00154
    ,
    Figure pct00155
    및
    Figure pct00156
    으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  11. 제1 항 내지 제10 항 중 어느 한 항에 있어서, L2는 결합인 것을 특징으로 하는 화합물.
  12. 제6 항에 있어서, L2는 제2 자가-희생 링커인 것을 특징으로 하는 화합물.
  13. 제12 항에 있어서, L2는 아미노벤질옥시카르보닐 링커인 것을 특징으로 하는 화합물.
  14. 제12 항에 있어서, L2는
    Figure pct00157
    ,
    Figure pct00158
    ,
    Figure pct00159
    및
    Figure pct00160
    (식에서 n은 1 또는 2임)으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  15. 제1 항 내지 제14 항 중 어느 한 항에 있어서, L3은 1 내지 10 아미노산 잔기의 펩티드 링커인 것을 특징으로 하는 화합물.
  16. 제15 항에 있어서, L3은 2 내지 4 아미노산 잔기의 펩티드 링커인 것을 특징으로 하는 화합물.
  17. 제1 항 내지 제14 항 중 어느 한 항에 있어서, L3은 적어도 하나의 라이신 또는 아르기닌 잔기를 포함하는 펩티드 링커인 것을 특징으로 하는 화합물.
  18. 제1 항 내지 제16 항 중 어느 한 항에 있어서, L3은 라이신, D-라이신, 시트룰린, 아르기닌, 프롤린, 히스티딘, 오르니틴 및 글루타민으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함하는 펩티드 링커인 것을 특징으로 하는 화합물.
  19. 제1 항 내지 제16 항 중 어느 한 항에 있어서, L3은 발린, 아이소류신, 페닐알라닌, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 알라닌, 류신, 트립토판 및 타이로신으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함하는 펩티드 링커인 것을 특징으로 하는 화합물.
  20. 제15 항에 있어서, L3은 발린-시트룰린, 프롤린-라이신, 메티오닌-D-라이신, 아스파라긴-D-라이신, 아이소류신-프롤린, 페닐알라닌-라이신 및 발린-라이신으로부터 선택된 다이펩티드 단위인 것을 특징으로 하는 화합물.
  21. 제20 항에 있어서, L3은 발린-시트룰린인 것을 특징으로 하는 화합물.
  22. 제1 항 내지 제21 항 중 어느 한 항에 있어서, L4는 결합인 것을 특징으로 하는 화합물.
  23. 제1 항 내지 제21 항 중 어느 한 항에 있어서, L4는 스페이서인 것을 특징으로 하는 화합물.
  24. 제23 항에 있어서, 스페이서는 폴리알킬렌 글리콜, 알킬렌, 알케닐렌, 알키닐렌 또는 폴리아민인 것을 특징으로 하는 화합물.
  25. 제23 항에 있어서, L4는 L4a-C(O), L4a-C(O)-NH, L4a-S(O)2 또는 L4a-S(O)2-NH이고, 여기서 각각의 L4a는 독립적으로 폴리알킬렌 글리콜, 알킬렌, 알케닐렌, 알키닐렌 또는 폴리아민인 것을 특징으로 하는 화합물.
  26. 제23 항에 있어서, L4는 L4a-C(O)이고, 여기서 L4a는 폴리알킬렌 글리콜, 알킬렌, 알케닐렌, 알키닐렌 또는 폴리아민인 것을 특징으로 하는 화합물.
  27. 제23 항에 있어서, L4는 L4a-C(O)이고, 여기서 L4a는 폴리알킬렌 글리콜인 것을 특징으로 하는 화합물.
  28. 제23 항에 있어서, L4는 L4a-C(O)이고, 여기서 L4a는 폴리에틸렌 글리콜인 것을 특징으로 하는 화합물.
  29. 제23 항에 있어서, 스페이서는 식 -CH2-(CH2-O-CH2)m-CH2-C(O)-의 것이고, 식에서 m은 0 내지 30의 정수인 것을 특징으로 하는 화합물.
  30. 제23 항에 있어서, L4는 L4a-C(O)이고, 여기서 L4a는 알킬렌인 것을 특징으로 하는 화합물.
  31. 제1 항 내지 제30 항 중 어느 한 항에 있어서, A는 다음으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물:
    Figure pct00161
    ,
    Figure pct00162
    ,
    Figure pct00163
    ,
    Figure pct00164
    ,
    Figure pct00165
    ,
    Figure pct00166
    ,
    Figure pct00167
    및
    Figure pct00168
    ;
    식에서 각각의 Q2는 NH 또는 O이며, 각각의 q는 독립적으로 1 내지 10의 정수이고, 각각의 q1은 독립적으로 1 내지 10의 정수이다.
  32. 제31 항에 있어서, A는
    Figure pct00169
    및
    Figure pct00170

    으로부터 구성되는 군으로부터 선택되고, 식에서 각각의 Q2는 독립적으로 NH 또는 O이며, 각각의 q는 독립적으로 1 내지 10의 정수인 것을 특징으로 하는 화합물.
  33. 제32 항에 있어서, q는 2, 3, 4 또는 5인 것을 특징으로 하는 화합물.
  34. 제1 항 내지 제30 항 중 어느 한 항에 있어서, A는
    Figure pct00171
    ,
    Figure pct00172
    ,
    Figure pct00173
    ,
    Figure pct00174
    ,
    Figure pct00175
    및
    Figure pct00176
    (식에서 각각의 Q2는 독립적으로 NH 또는 O임)으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  35. 제1 항 내지 제34 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체의 중쇄의 하나 이상의 아미노산 잔기는 시스테인 잔기로 대체되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  36. 제35 항에 있어서, 항체는 중쇄 불변 영역을 포함하고, 중쇄 불변 영역의 하나 이상의 아미노산 잔기는 시스테인 잔기로 대체되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  37. 제36 항에 있어서, 항체는 중쇄 불변 영역을 포함하고, 중쇄 불변 영역의 위치 155, 157, 165, 169, 197, 199 및 442에서의 하나 이상의 아미노산 잔기는 시스테인 잔기로 대체되며, 넘버링은 Kabat의 EU 색인을 따르는 것을 특징으로 하는 화합물.
  38. 제1 항 내지 제37 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체의 경쇄의 하나 이상의 아미노산 잔기는 시스테인 잔기로 대체되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  39. 제38 항에 있어서, 항체는 경쇄 불변 영역을 포함하고, 항체의 경쇄 불변 영역의 하나 이상의 아미노산 잔기는 시스테인 잔기로 대체되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  40. 제39 항에 있어서, 항체는 경쇄 불변 영역을 포함하고, 경쇄 불변 영역의 위치 201 및 206에서의 하나 이상의 아미노산 잔기는 시스테인 잔기로 대체되며, 넘버링은 Kabat의 EU 색인을 따르는 것을 특징으로 하는 화합물.
  41. 제35 항 내지 제40 항 중 어느 한 항에 있어서, D는 첨가된 시스테인 잔기를 통해 T에 연결되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  42. 제1 항 내지 제41 항 중 어느 한 항에 있어서, D는 아미노-함유 약물 부분이고, 약물은 아미노기를 통해 L1 또는 X에 연결되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  43. 제42 항에 있어서, D는 듀오카르마이신, 돌라스타틴, 튜불라이신, 독소루비신 (DOX), 파클리탁셀 또는 미토마이신 C (MMC) 또는 그것들의 아미노산 유도체인 것을 특징으로 하는 화합물.
  44. 제42 항에 있어서, D는
    Figure pct00177
    및
    Figure pct00178
    으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  45. 제42 항에 있어서, D는:
    Figure pct00179
    인 것을 특징으로 하는 화합물.
  46. 제1 항 내지 제5 항 중 어느 한 항에 있어서, -A-L4-L3-L2-는
    Figure pct00180
    ,
    Figure pct00181
    ,
    Figure pct00182
    ,
    Figure pct00183
    또는
    Figure pct00184
    인 것을 특징으로 하는 화합물.
  47. 제1 항 내지 제5 항 중 어느 한 항에 있어서, -A-L4-L3-L2-X-L1-D는
    Figure pct00185

    인 것을 특징으로 하는 화합물.
  48. 제1 항 내지 제5 항 중 어느 한 항에 있어서, -A-L4-L3-L2-X-L1-D는
    Figure pct00186
    인 것을 특징으로 하는 화합물.
  49. 제1 항 내지 제5 항 중 어느 한 항에 있어서, -A-L4-L3-L2-X-L1-D는
    Figure pct00187
    인 것을 특징으로 하는 화합물.
  50. 제1 항 내지 제49 항 중 어느 한 항에 있어서, 항-폴레이트 수용체 알파 (FRA) 항체는 인간화된 항체, 키메라 항체 또는 인간 항체인 것을 특징으로 하는 화합물.
  51. 제1 항 내지 제49 항 중 어느 한 항에 있어서, 항-폴레이트 수용체 알파 (FRA) 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고,
    (1) 중쇄 가변 영역은 항체 hLK26의 3개의 중쇄 HVR을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 항체 hLK26의 3개의 경쇄 HVR을 포함하거나;
    (2) 중쇄 가변 영역은 항체 26B3의 3개의 중쇄 HVR을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 항체 26B3의 3개의 경쇄 HVR을 포함하거나; 또는
    (3) 중쇄 가변 영역은 항체 hMov19의 3개의 중쇄 HVR을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 항체 hMov19의 3개의 경쇄 HVR을 포함하는
    것을 특징으로 하는 화합물.
  52. 제1 항 내지 제49 항 중 어느 한 항에 있어서, 항-폴레이트 수용체 알파 (FRA) 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고,
    (1) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:8의 아미노산 서열을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:9의 아미노산 서열을 포함하거나;
    (2) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:10의 아미노산 서열을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:11의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    (3) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:12의 아미노산 서열을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:13의 아미노산 서열을 포함하는
    것을 특징으로 하는 화합물.
  53. 제1 항 내지 제52 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 SEQ ID NO:32 또는 SEQ ID NO:33의 아미노산 서열을 포함하는 인간 중쇄 불변 영역 및 SEQ ID NO:34의 아미노산 서열을 포함하는 인간 경쇄 불변 영역을 포함하고, 중쇄 불변 영역의 위치 T155, S157, S165, T169, T197, T199 및 S442에서의 하나 이상의 아미노산 잔기 및 경쇄 불변 영역의 위치 L201 및 T206에서의 하나 이상의 아미노산 잔기는 시스테인 잔기로 대체되며, 여기서 넘버링은 Kabat의 EU 색인을 따르는 것을 특징으로 하는 화합물.
  54. 제1 항 내지 제52 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 Fab, Fab', F(ab')2, Fv 및 ScFv로 구성되는 군으로부터 선택된 항원-결합 단편인 것을 특징으로 하는 화합물.
  55. 제1 항 내지 제54 항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체; 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물.
  56. 제1 항 내지 제54 항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체의, 세포를 사멸하기에 충분한 양을 세포에 투여하는 단계를 포함하는, 인간 폴레이트 수용체 알파 (FRA)를 발현하는 세포의 사멸 방법.
  57. 제56 항에 있어서, 세포는 암세포인 것을 특징으로 하는 방법.
  58. 제57 항에 있어서, 암세포는 난소암 세포, 폐암 세포, 자궁암 세포, 고환 융모막 암종 세포, 상의세포종 세포, 중피종 세포, 유방암 세포, 대장암 세포 또는 신장 세포 암종 세포인 것을 특징으로 하는 방법.
  59. 제1 항 내지 제54 항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체의 유효량을 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 개체의 암 치료 방법.
  60. 제59 항에 있어서, 암은 난소암, 폐암, 자궁암, 고환 융모막 암종, 상의세포종, 중피종, 유방암, 대장암 또는 신장 세포 암종인 것을 특징으로 하는 방법.
  61. 제1 항 내지 제54 항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체를 포함하는 키트.
  62. 제61 항에 있어서, 암 치료에 사용하기 위한 지침서를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
  63. 항체를 화합물 Z:
    Figure pct00188
    (화합물 Z)
    또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체와 반응시키는 단계를 포함하는, 식 (II)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체의 제조 방법:
    Figure pct00189

    식에서:
    D는 약물 부분이고;
    T는 인간 폴레이트 수용체 알파 (FRA)에 특이적으로 결합하는 항체인 표적화 부분이며;
    R1은 수소, 비치환 또는 치환된 C1-3 알킬 또는 비치환 또는 치환된 헤테로사이클릴이고;
    L1은 결합, 제2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커이며;
    L2는 결합 또는 제2 자가-희생 링커이고;
    이때 만약 L1이 제2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커라면 L2는 결합이며;
    L2가 제2 자가-희생 링커라면 L1은 결합이고;
    L3은 펩티드 링커이며;
    L4는 결합 또는 스페이서이고; 및
    A는 아실 단위이다.
  64. 항체를 화합물 Z:
    Figure pct00190
    (화합물 Z)
    또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체와 반응시키는 단계를 포함하는, 식 (IIa)의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체의 제조 방법:
    Figure pct00191
    (IIa)
    식에서;
    p는 1 내지 20이고;
    D는 약물 부분이며;
    T는 인간 폴레이트 수용체 알파 (FRA)에 특이적으로 결합하는 항체인 표적화 부분이고;
    R1은 수소, 비치환 또는 치환된 C1-3 알킬 또는 비치환 또는 치환된 헤테로사이클릴이며;
    L1은 결합, 제2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커이고;
    L2는 결합 또는 제2 자가-희생 링커이며;
    이때 만약 L1이 제2 자가-희생 링커 또는 고리화 자가-제거 링커라면 L2는 결합이고;
    L2가 제2 자가-희생 링커라면 L1은 결합이며;
    L3은 펩티드 링커이고;
    L4는 결합 또는 스페이서이며; 및
    A는 아실 단위이다.
  65. 제63 항 또는 제64 항에 있어서, 항체는 하나 이상의 설프하이드릴기를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  66. 제63 항 내지 제65 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체의 중쇄의 하나 이상의 아미노산 잔기는 시스테인 잔기로 대체되는 것을 특징으로 하는 방법.
  67. 제66 항에 있어서, 항체는 중쇄 불변 영역을 포함하고, 중쇄 불변 영역의 하나 이상의 아미노산 잔기는 시스테인 잔기로 대체되는 것을 특징으로 하는 방법.
  68. 제67 항에 있어서, 항체는 중쇄 불변 영역을 포함하고, 중쇄 불변 영역의 위치 155, 157, 165, 169, 197, 199 및 442에서의 하나 이상의 아미노산 잔기는 시스테인 잔기로 대체되며, 여기서 넘버링은 Kabat의 EU 색인을 따르는 것을 특징으로 하는 방법.
  69. 제63 항 내지 제68 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체의 경쇄의 하나 이상의 아미노산 잔기는 시스테인 잔기로 대체되는 것을 특징으로 하는 방법.
  70. 제69 항에 있어서, 항체는 경쇄 불변 영역을 포함하고, 항체의 경쇄 불변 영역의 하나 이상의 아미노산 잔기는 시스테인 잔기로 대체되는 것을 특징으로 하는 방법.
  71. 제70 항에 있어서, 항체는 경쇄 불변 영역을 포함하고, 경쇄 불변 영역의 위치 201 및 206에서의 하나 이상의 아미노산 잔기는 시스테인 잔기로 대체되며, 여기서 넘버링은 Kabat의 EU 색인을 따르는 것을 특징으로 하는 방법.
  72. 제66 항 내지 제71 항 중 어느 한 항에 있어서, D는 첨가된 시스테인 잔기를 통해 T에 연결되는 것을 특징으로 하는 방법.
  73. 제63 항 내지 제72 항 중 어느 한 항에 있어서, 항-폴레이트 수용체 알파 (FRA) 항체는 인간화된 항체, 키메라 항체 또는 인간 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
  74. 제63 항 내지 제72 항 중 어느 한 항에 있어서, 항-폴레이트 수용체 알파 (FRA) 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고,
    (1) 중쇄 가변 영역은 항체 hLK26의 3개의 중쇄 HVR을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 항체 hLK26의 3개의 경쇄 HVR을 포함하거나;
    (2) 중쇄 가변 영역은 항체 26B3의 3개의 중쇄 HVR을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 항체 26B3의 3개의 경쇄 HVR을 포함하거나; 또는
    (3) 중쇄 가변 영역은 항체 hMov19의 3개의 중쇄 HVR을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 항체 hMov19의 3개의 경쇄 HVR을 포함하는
    것을 특징으로 하는 방법.
  75. 제63 항 내지 제72 항 중 어느 한 항에 있어서, 항-FRA 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고,
    (1) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:8의 아미노산 서열을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:9의 아미노산 서열을 포함하거나;
    (2) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:10의 아미노산 서열을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:11의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    (3) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:12의 아미노산 서열을 포함하고 및/또는 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO:13의 아미노산 서열을 포함하는
    것을 특징으로 하는 방법.
  76. 제63 항 내지 제75 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 SEQ ID NO:32 또는 SEQ ID NO:33의 아미노산 서열을 포함하는 인간 중쇄 불변 영역 및 SEQ ID NO:34의 아미노산 서열을 포함하는 인간 경쇄 불변 영역을 포함하고, 중쇄 불변 영역의 T155, S157, S165, T169, T197, T199 및 S442에서의 하나 이상의 아미노산 잔기 및경쇄 불변 영역의 위치 L201 및 T206에서의 하나 이상의 아미노산 잔기는 시스테인 잔기로 대체되며, 여기서 넘버링은 Kabat의 EU 색인을 따르는 것을 특징으로 하는 방법.
  77. 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체로서, 화합물은 제63 항 내지 제76 항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조되고, 항체는 하나 이상의 설프하이드릴기를 포함하는 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체.
  78. 제77 항의 화합물 또는 그것의 염 또는 용매 화합물 또는 입체 이성질체, 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물.
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