KR20170020384A - Ｈｅｒ２ 에피토프에 대한 단클론 항체 및 이의 이용방법 - Google Patents

Ｈｅｒ２ 에피토프에 대한 단클론 항체 및 이의 이용방법 Download PDF

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에릭 엠. 클라우랜드
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Abstract

본 발명은 HER2를 인식하는 완전 인간 단클론 항체를 제공한다. 본 발명은 또한 다양한 치료, 진단 및 예방적 징후에서 이러한 단클론 항체를 이용하는 방법을 제공한다.

Description

ＨＥＲ２ 에피토프에 대한 단클론 항체 및 이의 이용방법{Monoclonal antibodies against HER2 epitope and methods of use thereof}
본 출원은 2014년 06월 18일자로 출원된 미국 예비출원 제62/013,944호; 2014년 08월 07일자로 출원된 제62/034,489호; 2015년 04월 15일자로 출원된 제62/147,960호; 및 2015년 04월 17일자로 출원된 제62/149,444호에 대해 우선권과 이익을 청구한다. 이들 각각의 출원 내용은 본원에 전체적으로 참고문헌으로 포함된다.
본 발명은 개괄적으로 인간 HER2 수용체를 인식하는 단클론 항체의 생산, 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인 내 특이 HER2 에피토프를 인식하는 단클론 항체, 및 치료제 및/또는 진단제로서 이들 단클론 항체의 이용방법에 관한 것이다.
수용체 티로신 키나아제의 ErbB 패밀리의 구성원은 세포 성장, 분화 및 생존의 중요한 매개체이다. 수용체 패밀리는 표피 생장 인자 수용체(EGFR 또는 ErbB1), HER2(ErbB2 또는 p185neu), HER3(ErbB3) 및 HER4(ErbB4 또는 tyro2)를 포함하여 4종의 특징적인 구성원들을 포함한다. 동형- 및 이형-이량체 둘 다 상이한 ErbB 수용체에 대해 바람직하고 가장 강력한 이량체화 파트너가 되는 HER2를 이용하여 EGFR 패밀리의 4종의 구성원에 의해 형성된다(Graus-Porta et al., Embo 3 1997; 16:1647-1655; Tao et al., J Cell Sci 2008; 121:3207-3217). HER2는 리간드로 알려져 있지는 않으나, 과발현될 때 동형이량체화에 의해 또는 ErbB 수용체와 결합된 다른 리간드와의 이형이량체화에 의해 활성화될 수 있다.
HER2 유전자(또는 HER2/neu 및 ErbB2 유전자로 일컬음)는 초기-단계의 유방암의 20-30%에서 증폭되어 세포막에서 표피 생장 인자(EGF) 수용체를 과발현시킨다(Bange, et al., Nature Medicine 7 (5): 548-552). 유방암 외에, HER2 발현은 또한 비-소세포성 폐암, 난소암, 유방암, 전립선암, 방광암, 대장암, 식도암 및 두경부의 편평세포암종을 포함하여 다른 인간 암종 타입과 연관되어 있다(Garcia de Palazzo et al., Int J Biol Markers 1993; 8:233-239; Ross et al., Oncologist 2003; 8:307-325; Osman et al., J Urol 2005; 174:2174-2177; Kapitanovic et al., Gastroenterology 1997; 112:1103-1113; Turken et al., Neoplasma 2003; 50:257-261; 및 Oshima et al., Int J Biol Markers 2001; 16:250-254).
트라스투주맙(Herceptin®)은 HER2 단백질의 도메인 IV에 대한 재조합, 인간화 단클론 항체로, 리간드-독립적인 HER2 동형이량체화를 차단하고, 높은 HER2 과발현 세포에서 다른 패밀리 구성원과 HER2의 이형이량체화를 더 적게 한다(Cho et al., Nature 2003; 421:756-760 및 Wehrman et al., Proc Natl Acad Sci USA 2006; 103:19063-19068). Herceptin®은 화학요법과 병용하거나, 하나 이상의 화학요법에 따라 단일 제제로서 HER2 과발현 전이성 유방암의 1차 치료 및 어쥬번트 처리 둘 다를 위해 승인을 받았다. 트라스투주맙은 HER2 과발현 유방 종양 환자의 20-50%에서만 효과적인 것으로 나타났고, 많은 초기 응답자들은 몇 달 후 재발을 보였다(Dinh et al., Clin Adv Hematol Oncol 2007; 5:707-717).
퍼투주맙 (Omnitar/Perjeta® 또한 2C4로 불림)은 HER 단백질의 도메인 II에 대한 다른 인간화 단클론 항체로, 리간드-유도된 이형이량체화(즉, 리간드가 결합하는 ErbB 패밀리의 다른 구성원과 HER2가 이량체화함)를 억제한다; 메커니즘은 엄격하게 높은 HER2 발현 수준을 요구하지는 않는다고 보고하고 있다(Franklin et al., Cancer Cell 2004; 5:317-328.). 퍼투주맙은 트라스투주맙 및 도세탁셀과 병용으로 HER2-양성 전이성 유방암의 치료를 위해 승인을 받았다.
HER2 항체 약물 컨쥬게이트(ADC), 트라스투주맙 엠탄신(아도-트라스투주맙 엠탄신, Kadcyla®)은 세포독성제 메탄신(DM1)에 결합된 단클론 항체 트라스투주맙 (Herceptin)으로 구성된 항체-약물 컨쥬게이트이다. 단일 제제로 Kadcyla는 이미 트라스투주맙과 탁신을 개별적으로 또는 병용으로 투여받은 HER2-양성(HER2+), 전이성 유방암(MBC) 환자들의 치료를 위해 승인을 받았다.
HER2 표적 치료를 위한 적당한 항체를 선별함에 있어 많은 인자가 포함되나, 전형적으로, 항체 결합 시 HER2-항체 복합체가 효율적으로 내재화하는 경우 ADC 접근을 위한 장점이 된다. 그러나, EGFR과 비교하여, HER2의 내재화는 제 기능을 못한다.
HER2의 기능을 조절하는 복잡한 메커니즘은 이 원암유전자(proto-oncogene)에 대한 새롭고 가장 효과적인 치료 전략에 대한 추가 연구를 보증한다.
따라서, HER2의 생물학적 활성을 표적으로 하는 치료에 대한 요구가 있다.
본 발명은 ErbB2, p185neu, 및/또는 HER2/neu로 알려져 있는 HER2를 특이적으로 인식하는 단클론 항체를 제공한다. 본원에 개시된 항체들은 인산화된 AKT의 수준을 감소시켜 세포 생존을 촉진하는 PI3K-Akt 경로를 조절, 예를 들어, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화 또는 아니면 방해하는 것에 유용할 수 있다. 본원에 개시된 항체들은 또한 HER2의 리간드-독립적인 동형이량체화 및/또는 이형이량체화를 조절, 예를 들어, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화 또는 아니면 방해하는 것에 유용할 수 있다. 본원에 개시된 항체들은 또한 가용성 HER2와 결합하는 항체들을 포함한다.
본 발명의 항체들은 종래기술에 개시된 항체들과는 다른 HER2 결합 특징들을 나타낸다. 특히, 본원에 개시된 항체들은 HER2의 다른 에피토프에 결합하고, HER2에 결합함으로써 트라스투주맙, 퍼투주맙, Fab37 또는 chA21와는 달리 서로 교차-차단한다. 더욱이, 공지의 항체들과는 반대로, 본원에 개시된 항체들은 세포 증식을 촉진하지 않고 HER2-발현 세포에 효과적으로 내재화할 수 있다.
본원에 개시된 항체들은 치료적 이용을 위해 새로운 에피토프에 결합하고, 및/또는 다른 유리한 특성들을 가지는 완전 인간 단클론 항체들이다. 예시 특성들은 높거나 낮은 수준으로 인간 HER2를 발현하는 암세포에 우선적으로 결합하는 특징, 재조합 인간 및 필리핀 원숭이 HER2에 대한 특이적 결합, HER2에 결합 시 효율적 내재화, 항체 약물 컨쥬게이트(ADC)로 투여될 때 HER2의 높거나 낮은 수준을 발현하는 암세포를 죽이는 높은 능력, HER2-발현 암세포의 증식에 대한 실질적인 효능적 효과가 없고, 효과적인 항체-의존적 세포성 세포독성(ADCC)을 매개로 한 HER2-발현 세포의 사멸, 그뿐만 아니라 상기 특징들의 임의의 조합을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 개시된 항체들은 또한 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 452-531 잔기, 예를 들어, SEQ ID NO: 38의 474-553 잔기 또는 SEQ ID NO: 39의 452-531 잔기를 포함하는 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
본원에 개시된 항체들은 인간 HER2 수용체의 도메인 IV의 N-말단의 적어도 한 부분에 결합하나, 인간 HER2 수용체의 에피토프 4D5에 결합하는 항체와 교차-경쟁하지 않는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 예를 들어, 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2 수용체와 결합하기 위해 인간 HER2 수용체의 에피토프 4D5와 결합하는 것으로 알려진 트라스투주맙과는 교차-경쟁하지 않는다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 인간 HER2 수용체의 에피토프 4D5는 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 529-627 아미노산 잔기, 예를 들어, SEQ ID NO: 38의 551-649 잔기 또는 SEQ ID NO: 39의 529-627 잔기를 의미한다. 일부 구체예에서, 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 또한 필리핀 원숭이 HER2 수용체의 적어도 하나의 에피토프에 결합한다.
본원에 개시된 항체들은 또한 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 452-500 잔기, 예를 들어, SEQ ID NO: 38의 474-522 잔기 또는 SEQ ID NO: 39의 452-500 잔기를 포함하는 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
본원에 개시된 항체들은 또한 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 아미노산 잔기 E521, L525 및 R530, 예를 들어, SEQ ID NO:　38의 543, 547 및 552 잔기, 및 SEQ ID NO:　39의 521, 525 및 530 잔기로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나의 아미노산 잔기를 포함하는 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 예를 들어, 본원에 개시된 항체들은 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 아미노산 잔기 E521, L525 및 R530으로 이루어진 군에서 선택된 적어도 두 개의 아미노산 잔기를 포함하는 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구체예에서, 임의의 또는 모든 이들 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 필리핀 원숭이 HER2 수용체의 적어도 하나의 에피토프에 결합한다.
본원에 개시된 항체들은 또한 인간 HER2 수용체의 도메인 IV의 N-말단의 적어도 한 부분 및 도메인 III의 적어도 한 부분에 결합하나, Fab37 단클론 항체 또는 인간 HER2 수용체의 에피토프 4D5에 결합하는 항체와 교차-경쟁하지 않는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 예를 들어, 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 Fab37 단클론 항체 및/또는 인간 HER2 수용체에 결합하는 트라스투주맙과 교차-경쟁하지 않는다. 일부 구체예에서, 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 또한 필리핀 원숭이 HER2 수용체의 적어도 하나의 에피토프에 결합한다.
본원에 개시된 항체들은 또한 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 520-531 잔기, 예를 들어, SEQ ID NO:　38의 542-553 잔기 또는 SEQ ID NO:　39의 520-531 잔기를 포함하는 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
본원에 개시된 항체들은 또한 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 잔기 C453, H456, H473, N476, R495, G496, H497 및 W499, 예를 들어, SEQ ID NO:　38의 잔기 475, 478, 495, 498, 517, 518, 519 및 521 또는 SEQ ID NO:　39의 잔기 453, 456, 473, 476, 495, 496, 497 및 499를 포함하는 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 예를 들어, 본원에 개시된 항체들은 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 아미노산 잔기 C453, H456, H473, N476, R495, G496, H497 및 W499로 이루어진 군에서 선택된 적어도 두 개의 아미노산 잔기를 포함하는 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 예를 들어, 본원에 개시된 항체들은 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 아미노산 잔기 C453, H456, H473, N476, R495, G496, H497 및 W499로 이루어진 군에서 선택된 적어도 세 개의 아미노산 잔기를 포함하는 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 예를 들어, 본원에 개시된 항체들은 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 아미노산 잔기 C453, H456, H473, N476, R495, G496, H497 및 W499로 이루어진 군에서 선택된 적어도 네 개의 아미노산 잔기를 포함하는 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 예를 들어, 본원에 개시된 항체들은 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 아미노산 잔기 C453, H456, H473, N476, R495, G496, H497 및 W499로 이루어진 군에서 선택된 적어도 다섯 개의 아미노산 잔기를 포함하는 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 예를 들어, 본원에 개시된 항체들은 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 아미노산 잔기 C453, H456, H473, N476, R495, G496, H497 및 W499로 이루어진 군에서 선택된 적어도 여섯 개의 아미노산 잔기를 포함하는 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 예를 들어, 본원에 개시된 항체들은 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 아미노산 잔기 C453, H456, H473, N476, R495, G496, H497 및 W499로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나의 아미노산 잔기를 포함하는 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구체예에서, 임의의 또는 모든 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 필리핀 원숭이 HER2 수용체의 적어도 하나의 에피토프에 결합한다.
본원에 개시된 항체들은 또한 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 잔기 C453, H473, N476, R495, H497 및 W499로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나의 아미노산 잔기, 예를 들어, SEQ ID NO:　38의 475, 495, 498, 517, 519 및 521 잔기 또는 SEQ ID NO:　39의 453, 473, 476, 495, 497 및 499 잔기를 포함하는 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 예를 들어, 본원에 개시된 항체들은 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 아미노산 잔기 C453, H473, N476, R495, H497 및 W499로 이루어진 군에서 선택된 적어도 두 개의 아미노산 잔기를 포함하는 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 예를 들어, 본원에 기재된 항체들은 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 아미노산 잔기 C453, H473, N476, R495, H497 및 W499로 이루어진 군에서 선택된 적어도 세 개의 아미노산 잔기를 포함하는 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 예를 들어, 본원에 기재된 항체들은 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 아미노산 잔기 C453, H473, N476, R495, H497 및 W499로 이루어진 군에서 선택된 적어도 네 개의 아미노산 잔기를 포함하는 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 예를 들어, 본원에 기재된 항체들은 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 아미노산 잔기 C453, H473, N476, R495, H497 및 W499로 이루어진 군에서 선택된 적어도 다섯 개의 아미노산 잔기를 포함하는 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 예를 들어, 본원에 기재된 항체들은 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 아미노산 잔기 C453, H473, N476, R495, H497 및 W499로 이루어진 군에서 선택된 적어도 여섯 개의 아미노산 잔기를 포함하는 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 예를 들어, 본원에 개시된 항체들은 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 적어도 하나의 아미노산 잔기 C453, H473, N476, R495, H497 및 W499를 포함하는 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구체예에서, 임의의 또는 모든 이들 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 또한 필리핀 원숭이 HER2 수용체의 적어도 하나의 에피토프에 결합한다.
본 발명의 이들 및 다른 양상들은 아래 추가로 구체적으로 기재된다.
본원에 개시된 예시적 단클론 항체는 예를 들어, 본원에 기재된 XMT 1517 항체, XMT 1518 항체, XMT 1519 항체 및 XMT 1520 항체를 포함한다. 아니면, 단클론 항체는 트라스투주맙, 퍼투주맙, Fab37 또는 chA21(각각 HER2의 도메인 IV, 도메인 II, 도메인 III 및 도메인 I의 특이 에피토프에 결합함) 또는 이의 바이오시밀러와 같은 에피토프에 결합하지 않고 서로 교차 차단하는 항체이다. 이들 항체들은 각각 여기에서 "HER2" 항체들로 언급된다. HER2 항체들은 인간화 단클론 항체 및 키메릭 항체들뿐만 아니라 완전 인간 단클론 항체들을 포함한다. 이들 항체들은 인간 HER2에 특이도를 보여주고, 인산화된 AKT의 수준을 감소시켜 세포 생존을 촉진하는 PI3K-Akt 경로를 조절, 예를 들어, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화 또는 아니면 방해하는 것을 보여주었다. 이들 항체들은 트라스투주맙 또는 이의 바이오시밀러가 내재화하는 비율과 같거나 실질적으로 유사한 비율로 HER2-발현 세포의 세포 표면으로부터 내재화한다. 예를 들어, 이들 항체 및 항원 결합 단편들은 시간 0에서 내재화되는 4시간까지 전체 표면의 약 50%의 내재화 비율을 갖는다.
본원에 개시된 항체들은 SEQ ID NOs: 1, 3, 5 및 7로 이루어진 군에서 선택된 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 SEQ ID NOs: 2, 4, 6 및　8로 이루어진 군에서 선택된 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다.
본원에 개시된 항체들은 (i) SEQ ID NO:　1의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　2의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 경쇄 아미노산 서열; (ii) SEQ ID NO:　3의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　4의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 경쇄 아미노산 서열; (iii) SEQ ID NO:　5의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　6의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 경쇄 아미노산 서열; 및 (iv) SEQ ID NO:　7의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　8의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 경쇄 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택된 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열의 조합을 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체들은 SEQ ID NO:　1의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　2의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체들은 SEQ ID NO:　3의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　4의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체들은 SEQ ID NO:　5의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　6의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체들은 SEQ ID NO:　7의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　8의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.
본원에 개시된 항체들은 각각 SEQ ID NOs: 1, 3, 5 및 7로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 SEQ ID NOs: 2, 4, 6 및　8로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다.
본원에 개시된 항체들은 (i) SEQ ID NO:　1의 중쇄 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　2의 경쇄 아미노산 서열; (ii) SEQ ID NO:　3의 중쇄 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　4의 경쇄 아미노산 서열; (iii) SEQ ID NO:　5의 중쇄 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　6의 경쇄 아미노산 서열; 및 (iv) SEQ ID NO:　7의 중쇄 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　8의 경쇄 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택된 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열의 조합을 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체들은 SEQ ID NO:　1의 중쇄 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　2의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체들은 SEQ ID NO:　3의 중쇄 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　4의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체들은 SEQ ID NO:　5의 중쇄 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　6의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체들은 SEQ ID NO:　7의 중쇄 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　8의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.
본원에 개시된 항체들은 SEQ ID NOs: 9, 11, 13 및 15로 이루어진 군에서 선택된 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NOs: 10, 12, 14 및 16으로 이루어진 군에서 선택된 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본원에 개시된 항체들은 (i) SEQ ID NO:　9의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　10의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 경쇄 가변 영역 아미노산 서열; (ii) SEQ ID NO:　11의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　12의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 경쇄 가변 영역 아미노산 서열; (iii) SEQ ID NO:　13의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　14의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 경쇄 가변 영역 아미노산 서열; 및 SEQ ID NO:　15의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　16의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 경쇄 가변 영역 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택된 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열의 조합을 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체들은 SEQ ID NO:　9의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　10의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체들은 SEQ ID NO:　11의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　12의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체들은 SEQ ID NO:　13의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　14의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체들은 SEQ ID NO:　15의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　16의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함한다.
본원에 개시된 항체들은 SEQ ID NOs: 9, 11, 13 및 15로 이루어진 군에서 선택된 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 SEQ ID NOs: 10, 12, 14 및 16으로 이루어진 군에서 선택된 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함한다.
본원에 개시된 항체들은 (i) SEQ ID NO:　9의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　10의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열; (ii) SEQ ID NO:　11의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　12의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열; (iii) SEQ ID NO:　13의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　14의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열; 및 (iv) SEQ ID NO:　15의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　16의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택된 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열의 조합을 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체들은 SEQ ID NO:　9의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　10의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체들은 SEQ ID NO:　11의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　12의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체들은 SEQ ID NO:　13의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　14의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체들은 SEQ ID NO:　15의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　16의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함한다.
본원에 개시된 항체들의 세 개의 중쇄 CDR은 SEQ ID NOs: 17, 25 및 30으로 이루어진 군에서 선택된 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 부위 1(CDRH1); SEQ ID NOs: 18, 23, 26 및 31로 이루어진 군에서 선택된 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 부위 2(CDRH2); SEQ ID NOs: 19 및 27로 이루어진 군에서 선택된 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 부위 3(CDRH3)을 포함한다.
본원에 개시된 항체들의 세 개의 경쇄 CDR은 SEQ ID NOs: 20 및 28로 이루어진 군에서 선택된 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 부위 1(CDRL1); SEQ ID NOs: 21 및 24로 이루어진 군에서 선택된 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 부위 2(CDRL2); SEQ ID NOs: 22 및 29로 이루어진 군에서 선택된 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 부위 3(CDRL3)을 포함한다.
항체들은 SEQ ID NOs: 17, 25 및 30으로 이루어진 군에서 선택된 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1; SEQ ID NOs: 18, 23, 26 및 31로 이루어진 군에서 선택된 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDRH2; SEQ ID NOs: 19 및 27로 이루어진 군에서 선택된 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDRH3; SEQ ID NOs: 20 및 28로 이루어진 군에서 선택된 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1; SEQ ID NOs: 21 및 24로 이루어진 군에서 선택된 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDRL2; 및 SEQ ID NOs: 22 및 29로 이루어진 군에서 선택된 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDRL3을 포함하는 중쇄 CDR 및 경쇄 CDR의 조합을 포함한다.
본원에 개시된 항체들의 세 개의 중쇄 CDR은 SEQ ID NOs: 17, 25 및 30으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1; SEQ ID NOs: 18, 23, 26 및 31로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDRH2; 및 SEQ ID NOs: 19 및 27로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDRH3을 포함한다.
본원에 개시된 항체들의 세 개의 경쇄 CDR은 SEQ ID NOs: 20 및 28로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1; SEQ ID NOs: 21 및 24로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDRL2; 및 SEQ ID NOs: 22 및 29로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDRL3을 포함한다.
본원에 개시된 항체들은 SEQ ID NOs: 17, 25 및 30으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDHR1; SEQ ID NOs: 18, 23, 26 및 31로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDHR2; SEQ ID NOs: 19 및 27로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDHR3; SEQ ID NOs: 20 및 28로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1; SEQ ID NOs: 21 및 24로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDRL2; 및 SEQ ID NOs: 22 및 29로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDRL3을 포함하는 중쇄 CDR 및 경쇄 CDR의 조합을 포함한다.
본원에 개시된 항체들은 (i) SEQ ID NO:　17의 CDRH1 아미노산 서열, SEQ ID NO:　18의 CDRH2 아미노산 서열, SEQ ID NO:　19의 CDRH3의 아미노산 서열, SEQ ID NO:　20의 CDRL1 아미노산 서열, SEQ ID NO:　21의 CDRL2 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　22의 CDRL3 아미노산 서열; (ii) SEQ ID NO:　17의 CDRH1 아미노산 서열, SEQ ID NO:　23의 CDRH2 아미노산 서열, SEQ ID NO:　19의 CDRH3의 아미노산 서열, SEQ ID NO:　20의 CDRL1 아미노산 서열, SEQ ID NO:　24의 CDRL2 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　22의 CDRL3 아미노산 서열; (iii) SEQ ID NO:　25의 CDRH1 아미노산 서열, SEQ ID NO:　26의 CDRH2 아미노산 서열, SEQ ID NO:　27의 CDRH3의 아미노산 서열, SEQ ID NO:　28의 CDRL1 아미노산 서열, SEQ ID NO:　21의 CDRL2 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　29의 CDRL3 아미노산 서열; 및 (iv) SEQ ID NO:　30의 CDRH1 아미노산 서열, SEQ ID NO:　31의 CDRH2 아미노산 서열, SEQ ID NO:　27의 CDRH3의 아미노산 서열, SEQ ID NO:　28의 CDRL1 아미노산 서열, SEQ ID NO:　21의 CDRL2 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　29의 CDRL3 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택된 중쇄 상보성 결정 부위 및 경쇄 상보성 결정 부위 아미노산 서열의 조합을 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체들은 SEQ ID NO:　17의 CDRH1 아미노산 서열, SEQ ID NO:　18의 CDRH2 아미노산 서열, SEQ ID NO:　19의 CDRH3의 아미노산 서열, SEQ ID NO:　20의 CDRL1 아미노산 서열, SEQ ID NO:　21의 CDRL2 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　22의 CDRL3 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체들은 SEQ ID NO:　17의 CDRH1 아미노산 서열, SEQ ID NO:　23의 CDRH2 아미노산 서열, SEQ ID NO:　19의 CDRH3의 아미노산 서열, SEQ ID NO:　20의 CDRL1 아미노산 서열, SEQ ID NO:　24의 CDRL2 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　22의 CDRL3 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체들은 SEQ ID NO:　25의 CDRH1 아미노산 서열, SEQ ID NO:　26의 CDRH2 아미노산 서열, SEQ ID NO:　27의 CDRH3의 아미노산 서열, SEQ ID NO:　28의 CDRL1 아미노산 서열, SEQ ID NO:　21의 CDRL2 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　29의 CDRL3 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체들은 SEQ ID NO:　30의 CDRH1 아미노산 서열, SEQ ID NO:　31의 CDRH2 아미노산 서열, SEQ ID NO:　27의 CDRH3의 아미노산 서열, SEQ ID NO:　28의 CDRL1 아미노산 서열, SEQ ID NO:　21의 CDRL2 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:　29의 CDRL3 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 HER2 항체는 또한 항체에 결합하는 제제를 포함한다. 일부 구체예에서, 제제는 치료제이다. 일부 구체예에서, 제제는 항신생물제(antineoplastic agent)이다. 일부 구체예에서, 제제는 독소 또는 이의 단편이다. 일부 구체예에서, 제제는 (a) 오리스타틴 화합물; (b) 칼리키아미신 화합물; (c) 듀오카르마이신 화합물; (d) SN38; (e) 피롤로벤조디아제핀; (f) 빈카 화합물; (g) 투부리신 화합물; (h) 비-천연 캄포테신 화합물; (i) 메이탄시노이드 화합물; (j) DNA 결합 약물; (k) 키나아제 억제제; (l) MEK 억제제; (m) KSP 억제제; (n) 토포이소머라아제 억제제; 및 이의 유사물 또는 이의 유사체이다. 일부 구체예에서, 제제는 링커에 의해 HER2 항체에 결합된다. 일부 구체예에서, 링커는 절단형 링커이다. 일부 구체예에서, 링커는 비-절단형 링커이다. 일부 구체예에서, 제제는 본원에 개시된 임의의 독소이다.
일 양상에서, 본원에 개시된 HER2 항체 컨쥬게이트는 하나 이상의 치료제 또는 진단제(D)에 직접 또는 간접적으로 결합되는 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구체예에서, HER2 항체 컨쥬게이트는 또한 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 결합되는 하나 이상의 고분자 스캐폴드를 포함하고, 하나 이상의 D 각각은 독립적으로 하나 이상의 고분자 스캐폴드에 의해 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 연결된다.
일부 구체예에서, 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 연결되는 하나 이상의 고분자 스캐폴드 각각은 독립적으로 약 2 kDa 내지 약 40 kDa 범위의 분자량을 갖는 폴리(1-하이드록시메틸에틸렌 하이드록시메틸-포밀)(PHF)를 포함한다.
일부 구체예에서, 하나 이상의 고분자 스캐폴드 각각은 독립적으로 화학식 (Ic)로 표시된다:
[화학식 Ic]
Figure pct00001
여기서,
LD1 은 카르보닐-함유 모이어티이고;
Figure pct00002
에서
Figure pct00003
의 각 존재는 독립적으로 생분해성 결합을 포함하는 제1 링커이고, 결합이 깨질 때, D는 이의 의도된 치료적 효과를 위한 활성형으로 방출되며; 및 LD1 과 D 사이의
Figure pct00004
에서
Figure pct00005
는 LD1과 D의 직접 또는 간접 부착을 표시하며;
Figure pct00006
의 각 존재는 독립적으로 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 아직 결합되지 않은 제2 링커이고, 여기서, LP2는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 기능기와 공유결합을 아직 형성하지 않는 기능기를 함유하는 모이어티이며, LD1과 LP2사이의
Figure pct00007
는 LD1과 LP2의 직접 또는 간접 부착을 표시하고, 제2 링커의 각 존재는 제1 링커의 각 존재와는 다르며;
Figure pct00008
의 각 존재는 독립적으로 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 각 D-운반 고분자 스캐폴드를 연결하는 제3 링커이고, 여기서, LP2에 부착된 말단
Figure pct00009
는 LP2의 기능기와 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 기능기 사이의 공유결합 형성 시 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 LP2의 직접 또는 간접 부착을 표시하고; 및 제3 링커의 각 존재는 제1 링커의 각 존재와는 다르며;
m은 1 내지 약 300의 정수이고;
m1은 1 내지 약 140의 정수이며;
m2는 1 내지 약 40의 정수이고;
m3는 0 내지 약 18의 정수이며;
m4 은 1 내지 약 10의 정수이고;
m, m1, m2, m3 및 m4의 합은 약 15 내지 약 300의 범위이며; 및
분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 연결된 LP2의 총 수는 10 이하이다.
본원에 개시된 컨쥬게이트는 다음의 하나 이상의 특징들을 포함할 수 있다:
예를 들어, 화학식 (Ic)에서, 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 40 kDa 이상의 분자량(예를 들어, 60 kDa 이상, 80 kDa 이상, 100 kDa 이상, 120 kDa 이상, 140 kDa 이상, 160 kDa 이상, 180 kDa 이상 또는 200 kDa 이상, 또는 약 40-200 kDa, 40-180 kDa, 40-140 kDa, 60-200 kDa, 60-180 kDa, 60-140 kDa, 80-200 kDa, 80-180 kDa, 80-140 kDa, 100-200 kDa, 100-180 kDa, 100-140 kDa 또는 140-150 kDa)을 갖는다. 일부 구체예에서, 명세서의 임의의 항체 또는 항원-결합 단편이 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편인 경우 비-제한적 예시의 방식으로, 본원에 개시된 XMT 1517 항체, XMT 1518 항체, XMT 1519 항체 및 XMT 1520 항체를 포함한다.
예를 들어, 화학식 (Ic)에서, m1은 1 내지 약 120의 정수(예를 들어, 약 1-90) 및/또는 m3는 1 내지 약 10의 정수(예를 들어, 약 1-8)이다.
예를 들어, 화학식 (Ic)에서 PHF가 약 6 kDa 내지 약 20 kDa의 범위의 분자량을 가질 때(즉, m, m1, m2, m3 및 m4의 합이 약 45 내지 약 150), m2는 2 내지 약 20이고, m3는 0 내지 약 9이며, m4는 1 내지 약 10의 정수이고, 및/또는 m1은 1 내지 약 75의 정수(예를 들어, m1은 약 4-45)이다.
예를 들어, 화학식 (Ic)에서 PHF가 약 8 kDa 내지 약 15 kDa의 범위의 분자량을 가질 때(즉, m, m1, m2, m3 및 m4의 합이 약 60 내지 약 110), m2는 2 내지 약 15이고, m3는 0 내지 약 7이며, m4는 1 내지 약 10의 정수이고, 및/또는 m1은 1 내지 약 55의 정수(예를 들어, m1은 약 4-30)이다.
예를 들어, 화학식 (Ic)에서 PHF가 약 2 kDa 내지 약 20 kDa의 범위의 분자량을 가질 때(즉, m, m1, m2, m3 및 m4의 합이 약 15 내지 약 150), m2는 1 내지 약 20이고, m3는 0 내지 약 10이며(예를 들어, m3는 0 내지 약 9), m4는 1 내지 약 8의 정수이고, 및/또는 m1은 1 내지 약 70의 정수이며, 및 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 연결된 LP2의 총 수는 약 2 내지 약 8(예를 들어, 약 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8)이다.
예를 들어, 화학식 (Ic)에서 PHF가 약 3 kDa 내지 약 15 kDa의 범위의 분자량을 가질 때(즉, m, m1, m2, m3 및 m4의 합이 약 20 내지 약 110), m2는 2 내지 약 15이고, m3는 0 내지 약 8이며(예를 들어, m3는 0 내지 약 7), m4는 1 내지 약 8의 정수이고, 및/또는 m1은 2 내지 약 50의 정수이며, 및 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 연결된 LP2의 총 수는 약 2 내지 약 8(예를 들어, 약 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8)이다.
예를 들어, 화학식 (Ic)에서 PHF가 약 5 kDa 내지 약 10 kDa의 범위의 분자량을 가질 때(즉, m, m1, m2, m3 및 m4의 합이 약 40 내지 약 75), m2는 2 내지 약 10이고(예를 들어, m2는 약 3-10), m3는 0 내지 약 5이며(예를 들어, m3는 0 내지 약 4), m4는 1 내지 약 8의 정수이고(예를 들어, m4는 1 내지 약 5), 및/또는 m1은 2 내지 약 35의 정수이며(예를 들어, m1은 약 5-35), 및 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 연결된 LP2의 총 수는 약 2 내지 약 8(예를 들어, 약 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8)이다.
예를 들어, D의 각 존재는 독립적으로 ≤5 kDa의 분자량을 갖는 치료제이다.
예를 들어, D의 각 존재는 독립적으로 빈카 알칼로이드, 오리스타틴, 투부리신, 듀오카르마이신, 비-천연 캄포테신 화합물, 메이탄시노이드, 칼리키아미신 화합물, 토포이소머라아제 억제제, DNA 결합 약물, 키나아제 억제제, MEK 억제제, KSP 억제제 및 이의 유사물로부터 선택된 항-암제이다.
예를 들어, 각
Figure pct00010
는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 연결되지 않을 때, 독립적으로 말단기 WP를 포함하고, 각 WP는 독립적으로 다음과 같다:
(1)
Figure pct00011
; (2)
Figure pct00012
; (3)
Figure pct00013
; (4)
Figure pct00014
; (5)
Figure pct00015
; (6)
Figure pct00016
; (7)
Figure pct00017
; (8)
Figure pct00018
; (9)
Figure pct00019
; (10)
Figure pct00020
; (11)
Figure pct00021
; (12)
Figure pct00022
; (13)
Figure pct00023
; (14)
Figure pct00024
; (15) ; (16)
Figure pct00026
; (17)
Figure pct00027
; (18)
Figure pct00028
; (19)
Figure pct00029
; (20)
Figure pct00030
; (21)
Figure pct00031
; (22)
Figure pct00032
; (23)
Figure pct00033
여기서,
R1K는 이탈기(예를 들어, 할로겐화물 또는 RC(O)O-, 여기서, R은 수소, 지방족, 헤테로지방족, 탄소 고리 또는 헤테로시클릭알킬 모이어티)이고, R1A는 황 보호기이며, 고리 A는 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬이고, R1J은 수소, 지방족, 헤테로지방족, 탄소 고리 또는 헤테로시클로알킬 모이어티이다.
예를 들어, 각 R1A는 독립적으로,
Figure pct00034
,
Figure pct00035
,
Figure pct00036
또는
Figure pct00037
이며, 여기서, r은 1 또는 2이고, Rs1, Rs2 및 Rs3 각각은 수소, 지방족, 헤테로지방족, 탄소 고리 또는 헤테로시클로알킬 모이어티이다.
예를 들어, 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 기능기와 공유결합을 형성하지 않는 LP2의 기능기는 -SRp, -S-S-LG,
Figure pct00038
및 할로겐으로부터 선택되고, 여기서, LG는 이탈기이며, Rp는 수소 또는 황 보호기이며, Xa 및 Xb 중 하나는 수소이고 다른 하나는 수용성 말레이미도 차단 모이어티이거나, Xa 및 Xb는 탄소 원자와 더불어 탄소-탄소 이중결합을 위해 붙어 있다. 예를 들어, 공유결합을 형성하지 않는 LP2의 기능기는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 기능기, 예를 들어, LP2의 기능기로서
Figure pct00039
과 반응하지 않으며, 여기서, Xa 및 Xb 중 하나는 수소이고, 다른 하나는 수용성 말레이미도 차단 모이어티이거나, Xa 및 Xb이다.
예를 들어, LD1는 ―X-(CH2)v-C(=O)―를 포함하고, X는 직접적으로
Figure pct00040
의 카르보닐기에 연결되고, 여기서, X는 CH2, O 또는 NH이고, v는 1 내지 6의 정수이다.
예를 들어,
Figure pct00041
의 각 존재는 독립적으로, ―C(=O)-X-(CH2)v-C(=O)-NH-(CH2)u-NH-C(=O)-(CH2)w-(OCH2)x-NHC(=O)-(CH2)y―M이고, 여기서, X는 CH2, O 또는 NH이고, v, u, w, x 및 y 각각은 독립적으로 1 내지 6의 정수이며, M은
Figure pct00042
이며, 여기서, Xa 및 Xb 중 하나는 수소이고, 다른 하나는 수용성 말레이미도 차단 모이어티이거나, Xa 및 Xb는 탄소 원자와 함께 탄소-탄소 이중결합을 위해 서로 붙어 있다.
예를 들어, v, u, w, x 및 y 각각은 2이다.
예를 들어, D 및 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 약 25:1, 24:1, 23:1, 22:1, 21:1, 20:1, 19:1, 18:1, 17:1, 16:1, 15:1, 14:1, 13:1, 12:1, 11:1, 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6;1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1 또는 1:1이다.
예를 들어, D 및 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 약 20:1, 15:1, 10:1, 5:1, 2:1 또는 1:1이다.
예를 들어, D 및 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 약 16:1, 15:1, 14:1, 13:1, 12:1, 11:1 또는 10:1이다.
예를 들어, D 및 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 약 15:1, 14:1, 13:1, 12:1 또는 11:1이다.
예를 들어, D 및 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 약 15:1, 14:1, 13:1 또는 12:1이다.
예를 들어, D 및 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 약 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1 또는 1:1이다.
예를 들어, 하나 이상의 D-탑재 고분자 스캐폴드 각각은 독립적으로 화학식 (Id)의 것이다:
[화학식 Id]
Figure pct00043
여기서,
m3a는 0 내지 약 17의 정수이고,
m3b는 1 내지 약 8의 정수이며, 및
말단
Figure pct00044
는 40 kDa 이상의 분자량을 갖는 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 하나 이상의 고분자 스캐폴드의 직접적인 부착을 표시한다.
화학식 (Id)의 스캐폴드는 다음의 하나 이상의 특징들을 포함할 수 있다:
m3a 및 m3b의 합은 1 내지 18이다.
화학식 (Id)에서 PHF가 약 2 kDa 내지 약 40 kDa의 범위의 분자량을 가질 때, m, m1, m2, m3a 및 m3b의 합은 약 15 내지 약 300이고, m1은 1 내지 약 140의 정수이며, m2는 1 내지 약 40의 정수이고, m3a는 0 내지 약 17의 정수이며, m3b는 1 내지 약 8의 정수이고, m3a 및 m3b의 합은 1 내지 약 18이며, PHF 및 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 10 이하이다.
화학식 (Id)에서 PHF가 약 2 kDa 내지 약 20 kDa의 범위의 분자량을 가질 때, m, m1, m2, m3a 및 m3b의 합은 약 15 내지 약 150이고, m1은 1 내지 약 70의 정수이며, m2는 1 내지 약 20의 정수이고, m3a는 0 내지 약 9의 정수이며, m3b는 1 내지 약 8의 정수이고, m3a 및 m3b의 합은 1 내지 약 10이며, PHF 및 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 2 내지 약 8의 정수이다.
화학식 (Id)에서 PHF가 약 3 kDa 내지 약 15 kDa의 범위의 분자량을 가질 때, m, m1, m2, m3a 및 m3b의 합은 약 20 내지 약 110이고, m1은 2 내지 약 50의 정수이며, m2는 2 내지 약 15의 정수이고, m3a는 0 내지 약 7의 정수이며, m3b는 1 내지 약 8의 정수이고, m3a 및 m3b의 합은 1 내지 약 8이며, PHF 및 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 2 내지 약 8의 정수(예를 들어, 약 2 내지 약 6 또는 약 2 내지 약 4)이다.
화학식 (Id)에서 PHF가 약 5 kDa 내지 약 10 kDa의 범위의 분자량을 가질 때, m, m1, m2, m3a 및 m3b의 합은 약 40 내지 약 75이고, m1은 2 내지 약 35의 정수이며, m2는 2 내지 약 10의 정수이고, m3a는 0 내지 약 4의 정수이며, m3b는 1 내지 약 5의 정수이고, m3a 및 m3b의 합은 1 내지 약 5이며, PHF 및 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 2 내지 약 8의 정수(예를 들어, 약 2 내지 약 6 또는 약 2 내지 약 4)이다.
특정 구체예에서, 오리스타틴 F 하이드록실프로필 아마이드("AF HPA") 및 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 약 30:1, 29:1, 28:1, 27:1, 26:1, 25:1, 24:1, 23:1, 22:1, 21:1, 20:1, 19:1, 18:1, 17:1, 16:1, 15:1, 14:1, 13:1, 12:1, 11:1, 10:1, 9:1, 8:1, 7:1 또는 6:1일 수 있다.
특정 구체예에서, AF HPA 및 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 약 25:1, 24:1, 23:1, 22:1, 21:1, 20:1, 19:1, 18:1, 17:1, 16:1, 15:1, 14:1, 13:1, 12:1, 11:1, 10:1, 9:1, 8:1, 7:1 또는 6:1일 수 있다.
다른 구체예에서, AF HPA 및 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 약 20:1, 19:1, 18:1, 17:1, 16:1, 15:1, 14:1, 13:1, 12:1, 11:1, 10:1, 9:1, 8:1, 7:1 또는 6:1일 수 있다.
일부 구체예에서, AF HPA 및 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 약 16:1, 15:1, 14:1, 13:1, 12:1, 11:1 또는 10:1일 수 있다.
일부 구체예에서, AF HPA 및 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 약 15:1, 14:1, 13:1, 12:1 또는 11:1일 수 있다.
일부 구체예에서, AF HPA 및 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 약 15:1, 14:1, 13:1 또는 12:1일 수 있다.
특정 구체예에서, PHF 및 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 약 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1 또는 1:1일 수 있다.
특정 구체예에서, PHF 및 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 약 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1 또는 2:1일 수 있다.
다른 구체예에서, PHF 및 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 약 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1 또는 1:1일 수 있다.
다른 구체예에서, PHF 및 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 약 6:1, 5:1, 4:1, 3:1 또는 2:1일 수 있다.
다른 구체예에서, PHF 및 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 약 6:1, 5:1, 4:1 또는 3:1일 수 있다.
일부 구체예에서, PHF 및 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 약 5:1, 4:1 또는 3:1일 수 있다.
일부 구체예에서, PHF 및 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 약 4:1, 3:1 또는 2:1일 수 있다.
수용성 말레이미도 차단 모이어티(예를 들어, Xa 또는 Xb)는 말레이미도기와 화학식 (II)의 티올-함유 화합물의 반응 시 두 개의 올레핀 탄소 원자 중 하나에 공유적으로 부착될 수 있는 모이어티이다:
[화학식 II]
R90-(CH2)d-SH
여기서,
R90는 NHR91, OH, COOR93, CH(NHR91)COOR93 또는 치환된 페닐기이고;
R93는 수소 또는 C1-4 알킬이며;
R91는 수소, CH3 또는 CH3CO 이고,
d는 1 내지 3의 정수이다.
일 구체예에서, 화학식 (II)의 수용성 말레이미도 차단 화합물은 시스테인, N-아세틸 시스테인, 시스테인 메틸 에스테르, N-메틸 시스테인, 2-머캅토에탄올, 3-머캅토프로판산, 2-머캅토아세트산, 머캅토메탄올(즉, HOCH2SH), 페닐이 하나 이상의 친수성 치환기로 치환된 벤질 티올, 또는 3-아미노프로판-1-티올일 수 있다. 페닐에 치환된 하나 이상의 친수성 치환기는 OH, SH, 메톡시, 에톡시, COOH, CHO, COC1-4 알킬, NH2, F, 시아노, SO3H, PO3H 등일 수 있다.
다른 양상에서, 수용성 말레이미도 차단 기는 -S-(CH2)d-R90이고, 여기서,
R90는 OH, COOH 또는 CH(NHR91)COOR93이고;
R93는 수소 또는 CH3이며;
R91는 수소 또는 CH3CO이고; 및
d는 1 또는 2이다.
다른 구체예에서, 수용성 말레이미도 차단 기는 -S-CH2-CH(NH2)COOH이다.
특정 구체예에서, 본원에 기재된 컨쥬게이트는 하나 이상의 D-탑재 PHF를 포함하고, 각각 독립적으로 화학식 (If)이며, 여기서, PHF는 약 2 kDa 내지 약 40 kDa의 범위의 분자량을 가진다:
[화학식 If]
Figure pct00045
여기서,
m은 1 내지 약 300의 정수이고,
m1은 1 내지 약 140의 정수이며,
m2는 1 내지 약 40의 정수이고,
m3a는 0 내지 약 17의 정수이며,
m3b는 1 내지 약 8의 정수이고;
m3a 및 m3b의 합은 1 내지 약 18이며; 및
m, m1, m2, m3a 및 m3b의 합은 약 15 내지 약 300이고;
말단
Figure pct00046
는 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 하나 이상의 고분자 스캐폴드의 부착을 표시하고, 여기서, 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 아미노산 서열 FTFSSYSMN(SEQ ID NO:　25)을 포함하는 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 1(CDRH1); 아미노산 서열 YISSSSSTIYYADSVKG(SEQ ID NO:　26)을 포함하는 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 2(CDRH2); 아미노산 서열 GHGYFDL(SEQ ID NO:　27)을 포함하는 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 3(CDRH3); 아미노산 서열 RASQSVSSSYLA(SEQ ID NO:　28)을 포함하는 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 1(CDRL1); 아미노산 서열 GASSRAT(SEQ ID NO:　21)을 포함하는 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 2(CDRL2); 아미노산 서열 QQYHHSPLT(SEQ ID NO:　29)을 포함하는 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 3(CDRL3)를 포함하는 분리된 항-HER2 항체이고;
PHF 및 항체의 비율은 10 이하이다.
화학식 (If)의 스캐폴드는 다음의 하나 이상의 특징을 포함할 수 있다:
화학식 (If)에서 PHF는 약 2 kDa 내지 약 20 kDa의 범위의 분자량을 가지며, m, m1, m2, m3a 및 m3b의 합은 약 15 내지 약 150이고, m1은 1 내지 약 70의 정수이며, m2는 1 내지 약 20의 정수이고, m3a는 0 내지 약 9의 정수이며, m3b는 1 내지 약 8의 정수이고, m3a 및 m3b의 합은 1 내지 약 10이며, PHF 및 항체의 비율은 2 내지 약 8의 정수이다.
화학식 (If)에서 PHF는 3 kDa 내지 약 15 kDa의 범위의 분자량을 가지며, m, m1, m2, m3a 및 m3b의 합은 약 20 내지 약 110이고, m1는 2 내지 약 50의 정수이며, m2는 2 내지 약 15의 정수이고, m3a는 0 내지 약 7의 정수이며, m3b는 1 내지 약 8의 정수이고, m3a 및 m3b의 합은 1 내지 약 8이고, PHF 및 항체의 비율은 2 내지 약 8의 정수(예를 들어, 약 2 내지 약 6 또는 약 2 내지 약 4)이다.
화학식 (If)에서 PHF는 약 5 kDa 내지 약 10 kDa의 범위의 분자량을 가지며, m, m1, m2, m3a 및 m3b의 합은 약 40 내지 약 75이고, m1는 약 2 내지 약 35의 정수이며, m2는 약 2 내지 약 10의 정수이고, m3a는 0 내지 약 4의 정수이며, m3b는 1 내지 약 5의 정수이고, m3a 및 m3b의 합은 1 내지 약 5이며, 및, PHF 및 항체의 비율은 2 내지 약 8의 정수(예를 들어, 약 2 내지 약 6 또는 약 2 내지 약 4)이다.
특정 구체예에서, 오리스타틴 F 하이드록시프로필 아마이드("AF HPA") 및 항체의 비율은 약 30:1, 29:1, 28:1, 27:1, 26:1, 25:1, 24:1, 23:1, 22:1, 21:1, 20:1, 19:1, 18:1, 17:1, 16:1, 15:1, 14:1, 13:1, 12:1, 11:1, 10:1, 9:1, 8:1, 7:1 또는 6:1일 수 있다.
다른 구체예에서, AF HPA 및 항체의 비율은 약 25:1, 24:1, 23:1, 22:1, 21:1, 20:1, 19:1, 18:1, 17:1, 16:1, 15:1, 14:1, 13:1, 12:1, 11:1, 10:1, 9:1, 8:1, 7:1 또는 6:1일 수 있다.
일부 구체예에서, AF HPA 및 항체의 비율은 약 20:1, 19:1, 18:1, 17:1, 16:1, 15:1, 14:1, 13:1, 12:1, 11:1, 10:1, 9:1, 8:1, 7:1 또는 6:1일 수 있다.
일부 구체예에서, AF HPA 및 항체의 비율은 약 16:1, 15:1, 14:1, 13:1, 12:1, 11:1 또는 10:1일 수 있다.
일부 구체예에서, AF HPA 및 항체의 비율은 약 15:1, 14:1, 13:1, 12:1 또는 11:1일 수 있다.
일부 구체예에서, AF HPA 및 항체의 비율은 약 15:1, 14:1, 13:1 또는 12:1일 수 있다.
특정 구체예에서, PHF 및 항체의 비율은 약 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1 또는 1:1일 수 있다.
특정 구체예에서, PHF 및 항체의 비율은 약 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1 또는 2:1일 수 있다.
다른 구체예에서, PHF 및 항체의 비율은 약 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1 또는 1:1일 수 있다.
다른 구체예에서, PHF 및 항체의 비율은 약 6:1, 5:1, 4:1, 3:1 또는 2:1일 수 있다.
다른 구체예에서, PHF 및 항체의 비율은 약 6:1, 5:1, 4:1 또는 3:1일 수 있다.
일부 구체예에서, PHF 및 항체의 비율은 약 5:1, 4:1 또는 3:1일 수 있다.
일부 구체예에서, PHF 및 항체의 비율은 약 4:1, 3:1 또는 2:1일 수 있다.
다른 양상에서, 본원에 기재된 컨쥬게이트는 화학식 (Ib)의 것이다:
[화학식 Ib]
Figure pct00047
여기서,
HER2 ANTIBODY는 본원에 기재된 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 표시하고;
LP2 및 HER2 ANTIBODY 사이의
Figure pct00048
는 LP2과 HER2 ANTIBODY의 직접 또는 간접 부착을 표시하고,
HER2 ANTIBODY의 각 존재는 200 kDa 미만의 분자량을 가지며,
m는 1 내지 약 2200의 정수이고,
m1는 1 내지 약 660의 정수이며,
m2는 3 내지 약 300의 정수이고,
m3는 0 내지 약 110의 정수이며,
m4는 1 내지 약 60의 정수이고,
m, m1, m2, m3 및 m4의 합은 약 150 내지 약 2200이다.
화학식 (Ib)에서, m1는 약 10 내지 약 660의 정수(예를 들어, 약 10-250)이다.
화학식 (Ib)에서 PHF는 약 50 kDa 내지 약 100 kDa의 범위의 분자량을 가질 때(즉, m, m1, m2, m3 및 m4의 합이 약 370 내지 약 740), m2는 5 내지 약 100의 정수이고, m3는 1 내지 약 40의 정수이며, m4는 1 내지 약 20의 정수이고, 및/또는 m1는 1 내지 약 220의 정수(예를 들어, m1는 약 15-80이 됨)이다.
화학식 (Ib)에서, 각 HER2 ANTIBODY는 독립적으로 120 kDa 이하, 80 kDa 이하, 70 kDa 이하, 60 kDa 이하, 50 kDa 이하, 40 kDa 이하, 30 kDa 이하, 20 kDa 이하, 10 kDa 이하, 또는 약 4 kDa 내지 80 kDa(예를 들어, 4-20 kDa, 20-30 kDa 또는 30-70 kDa)의 분자량을 가진다.
본 발명의 다른 양상은 본원에 기재된 컨쥬게이트의 제조방법을 특징으로 한다. 방법은 분리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 화학식 (Ia)의 고분자 스캐폴드를 반응시켜 컨쥬게이트를 형성하는 것을 포함한다:
[화학식 Ia]
Figure pct00049
여기서,
LD1 는 카르보닐-함유 모이어티이고;
Figure pct00050
in
Figure pct00051
에서
Figure pct00052
의 각 존재는 독립적으로 생분해성 결합을 포함하는 제1 링커이고, 상기 결합이 깨질 때, D는 이의 의도된 치료적 효과를 위한 활성형으로 방출되며; 및 LD1과 D 사이의
Figure pct00053
에서
Figure pct00054
는 LD1과 D의 직접 또는 간접 부착을 표시하며;
Figure pct00055
의 각 존재는 독립적으로 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 아직 결합되지 않은 제2 링커이고, 여기서, LP2는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 기능기와 공유결합을 아직 형성하지 않는 기능기를 함유하는 모이어티이며, LD1과 LP2사이의
Figure pct00056
는 LD1과 LP2의 직접 또는 간접 부착을 표시하고, 제2 링커의 각 존재는 제1 링커의 각 존재와는 다르며;
m은 1 내지 약 300의 정수이고;
m1은 1 내지 약 140의 정수이며;
m2는 1 내지 약 40의 정수이고;
m3는 0 내지 약 18의 정수이며;
m, m1, m2 및 m3의 합은 약 15 내지 약 300이다.
본원에 기재된 고분자 스캐폴드에 대한 화학식에서, 폴리아세탈 단위 사이의 단절 또는 갭은 이 단위가 임의의 순서로 서로 연결될 수 있음을 가리킨다. 다른 말로, 예를 들어, D, LP2 및 분리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 부속기는 고분자 백본을 따라 무작위로 분포될 수 있다.
본 발명은 또한 본원에 개시된 단클론 항체, 이의 단편, 및/또는 이의 컨쥬게이트를 그러한 치료 또는 예방이 필요한 대상체에 투여하여 HER2의 비정상적인 발현, 기능 및/또는 활성화와 관련된 하나 이상의 병리학의 증상을 치료, 예방, 진행 지연 또는 그렇지 않으면 완화하거나, 그러한 병리학과 관련된 증상을 경감하는 방법을 제공한다. 치료되는 대상체는 예를 들어, 인간이다. 단클론 항체, 이의 단편, 및/또는 이의 컨쥬게이트는 병리학과 관련된 증상을 치료, 예방 또는 경감하는 유효량으로 투여된다.
본 발명은 또한 본원에 개시된 단클론 항체, 이의 단편, 및/또는 이의 컨쥬게이트를 그러한 치료 또는 예방이 필요한 대상체에 투여하여 HER2의 발현, 기능 및/또는 활성화와 관련된 하나 이상의 병리학의 증상을 치료, 예방, 진행 지연 또는 그렇지 않으면 완화하거나, 그러한 병리학과 관련된 증상을 경감하는 방법을 제공한다. 치료되는 대상체는 예를 들어, 인간이다. 단클론 항체, 이의 단편, 및/또는 이의 컨쥬게이트는 병리학과 관련된 증상을 치료, 예방 또는 경감하는 유효량으로 투여된다.
본원에 개시된 단클론 항체, 이의 단편, 및/또는 이의 컨쥬게이트를 이용하여 치료 및/또는 예방되는 병리학은, 예를 들어, 암을 포함한다. 예를 들어, 본원에 개시된 항체, 이의 단편, 및/또는 이의 컨쥬게이트는 항문암, 성상세포종, 백혈병, 림프종, 두경부암, 간암, 고환암, 자궁경부암, 육종, 혈관종, 식도암(esophageal cancer), 안암, 후두암, 구강암(mouth cancer), 중피종, 피부암, 골수종, 구강암(oral cancer), 직장암, 인후암, 방광암, 유방암, 자궁암, 난소암, 전립선암, 폐암, 비-소세포성 폐암(NSCLC), 대장암, 췌장암, 신장암 및 위암으로 이루어진 군에서 선택된 암의 증상을 치료, 예방, 진행의 지연 또는 그렇지 않으면 완화하는데 유용하다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 이의 PBRM-고분자-약물 컨쥬게이트는 유방암의 증상을 치료, 예방, 진행의 지연 또는 그렇지 않으면 완화하는데 유용하다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 이의 PBRM-고분자-약물 컨쥬게이트는 위암의 증상을 치료, 예방, 진행의 지연 또는 그렇지 않으면 완화하는데 유용하다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 이의 PBRM-고분자-약물 컨쥬게이트는 비-소세포성 폐암(NSCLC)의 증상을 치료, 예방, 진행의 지연 또는 그렇지 않으면 완화하는데 유용하다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 이의 PBRM-고분자-약물 컨쥬게이트는 난소암의 증상을 치료, 예방, 진행의 지연 또는 그렇지 않으면 완화하는데 유용하다.
일부 구체예에서, 암(예를 들어, 항문암, 성상세포종, 백혈병, 림프종, 두경부암, 간암, 고환암, 자궁경부암, 육종, 혈관종, 식도암(esophageal cancer), 안암, 후두암, 구강암(mouth cancer), 중피종, 피부암, 골수종, 구강암(oral cancer), 직장암, 인후암, 방광암, 유방암, 자궁암, 난소암, 전립선암, 폐암, 비-소세포성 폐암(NSCLC), 대장암, 췌장암, 신장암 및 위암으로 이루어진 군에서 선택된 암)의 증상을 치료, 예방, 진행의 지연 또는 그렇지 않으면 완화하는데 유용한 HER2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, (1) 아미노산 서열 FTFSSYSMN(SEQ ID NO:　25)를 포함하는 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 1(CDRH1); 아미노산 서열 YISSSSSTIYYADSVKG(SEQ ID NO:　26)을 포함하는 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 2(CDRH2); 아미노산 서열 GGHGYFDL(SEQ ID NO:　27)을 포함하는 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 3(CDRH3); 및 아미노산 서열 RASQSVSSSYLA(SEQ ID NO:　28)을 포함하는 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 1(CDRL1); 아미노산 서열 GASSRAT(SEQ ID NO:　21)을 포함하는 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 2(CDRL2); 및 아미노산 서열 QQYHHSPLT(SEQ ID NO:　29); (2) 아미노산 서열 FTFSGRSMN(SEQ ID NO: 30)을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDRH1; 아미노산 서열 YISSDSRTIYYADSVKG(SEQ ID NO: 31)을 포함하는 CDRH2; 아미노산 서열 GGHGYFDL(SEQ ID NO: 27)을 포함하는 CDRH3; 아미노산 서열 RASQSVSSSYLA(SEQ ID NO: 28)을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDRL1; 아미노산 서열 GASSRAT(SEQ ID NO: 21)을 포함하는 CDRL2; 및 아미노산 서열 QQYHHSPLT (SEQ ID NO:　29)을 포함하는 CDRL3; (3) 아미노산 서열 FTFSSYGMH(SEQ ID NO:　17)을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDRH1; 아미노산 서열 VIWYDGSNKYYADSVKG(SEQ ID NO:　18)을 포함하는 CDRH2; 아미노산 서열 EAPYYAKDYMDV(SEQ ID NO:　19)을 포함하는 CDRH3, 및 아미노산 서열 RASQSVSSDYLA(SEQ ID NO:　20)을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDRL1; 아미노산 서열 GASSRAT(SEQ ID NO:　21)을 포함하는 CDRL2; 및 아미노산 서열 QQYVSYWT(SEQ ID NO:　22)를 포함하는 CDRL3; 또는 (4) 아미노산 서열 FTFSSYGMH(SEQ ID NO:　17)을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDRH1; 아미노산 서열 GIWWDGSNEKYADSVKG(SEQ ID NO:　23)를 포함하는 CDRH2; 아미노산 서열 EAPYYAKDYMDV(SEQ ID NO:　19)를 포함하는 CDRH3; 및 아미노산 서열 RASQSVSSDYLA(SEQ ID NO:　20)을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDRL1; 아미노산 서열 GASRRAT(SEQ ID NO:　24)를 포함하는 CDRL2; 및 아미노산 서열 QQYVSYWT(SEQ ID NO:　22)를 포함하는 CDRL3를 포함하는 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 3(CDRL3)를 포함하는 항체와 동일한 HER2의 에피토프와의 결합을 위해 경쟁한다.
다른 구체예에서, 암(예를 들어, 항문암, 성상세포종, 백혈병, 림프종, 두경부암, 간암, 고환암, 자궁경부암, 육종, 혈관종, 식도암(esophageal cancer), 안암, 후두암, 구강암(mouth cancer), 중피종, 피부암, 골수종, 구강암(oral cancer), 직장암, 인후암, 방광암, 유방암, 자궁암, 난소암, 전립선암, 폐암, 비-소세포성 폐암(NSCLC), 대장암, 췌장암, 신장암 및 위암으로 이루어진 군에서 선택된 암)의 증상을 치료, 예방, 진행의 지연 또는 그렇지 않으면 완화하는데 유용한 HER2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, (1) 아미노산 서열 FTFSSYSMN(SEQ ID NO:　25)를 포함하는 중쇄 가변 영역 CDRH1; 아미노산 서열 YISSSSSTIYYADSVKG(SEQ ID NO:　26)를 포함하는 CDRH2; 아미노산 서열 GGHGYFDL(SEQ ID NO:　27)를 포함하는 CDRH3; 및 아미노산 서열 RASQSVSSSYLA(SEQ ID NO:　28)을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDRL1; 아미노산 서열 GASSRAT(SEQ ID NO:　21)를 포함하는 CDRL2 및 아미노산 서열 QQYHHSPLT(SEQ ID NO:　29)를 포함하는 CDRL3; (2) 아미노산 서열 FTFSGRSMN(SEQ ID NO:　30)를 포함하는 중쇄 가변 영역 CDRH1; 아미노산 서열 YISSDSRTIYYADSVKG(SEQ ID NO:　31)를 포함하는 CDRH2; 아미노산 서열 GGHGYFDL(SEQ ID NO:　27)를 포함하는 CDRH3; 아미노산 서열 RASQSVSSSYLA(SEQ ID NO:　28)를 포함하는 경쇄 가변 영역 CDRL1; 아미노산 서열 GASSRAT(SEQ ID NO:　21)를 포함하는 CDRL2; 및 아미노산 서열 QQYHHSPLT(SEQ ID NO:　29)를 포함하는 CDRL3; (3) 아미노산 서열 FTFSSYGMH(SEQ ID NO:　17)를 포함하는 중쇄 가변 영역 CDRH1; 아미노산 서열 VIWYDGSNKYYADSVKG(SEQ ID NO:　18)를 포함하는 CDRH2; 아미노산 서열 EAPYYAKDYMDV(SEQ ID NO:　19)를 포함하는 CDRH3, 및 아미노산 서열 RASQSVSSDYLA(SEQ ID NO:　20)를 포함하는 경쇄 가변 영역 CDRL1; 아미노산 서열 GASSRAT(SEQ ID NO:　21)를 포함하는 CDRL2; 및 아미노산 서열 QQYVSYWT(SEQ ID NO:　22)를 포함하는 CDRL3; 또는 (4) 아미노산 서열 FTFSSYGMH(SEQ ID NO:　17)를 포함하는 중쇄 가변 영역 CDRH1; 아미노산 서열 GIWWDGSNEKYADSVKG(SEQ ID NO:　23)를 포함하는 CDRH2; 아미노산 서열 EAPYYAKDYMDV(SEQ ID NO:　19)를 포함하는 CDRH3; 및 아미노산 서열 RASQSVSSDYLA(SEQ ID NO:　20)를 포함하는 경쇄 가변 영역 CDRL1; 아미노산 서열 GASRRAT(SEQ ID NO:　24)를 포함하는 CDRL2; 및 아미노산 서열 QQYVSYWT(SEQ ID NO:　22)를 포함하는 CDRL3를 포함하는 항체와 동일한 HER2의 에피토프와의 결합을 위해 경쟁하며, 여기서, HER2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 적어도 하나의 치료제와 직접 또는 간접적으로 컨쥬게이트되며, 여기서, 치료제는 분자량이 약 ≤ 5 kDa, 약 ≤ 4 kDa, 약 ≤ 3 kDa, 약 ≤ 1.5 kDa, 또는 약 ≤ 1 kDa의 분자량을 갖는 저분자이다.
본 발명은 또한 본원에 개시된 HER2 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및/또는 이의 컨쥬게이트를 처리하기 전 HER2의 저발현 환자를 확인하여 본원에 개시된 HER2 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 이의 PBRM-고분자-약물 컨쥬게이트의 치료적 투여에 적당한 환자 집단을 확인 또는 그렇지 않으면 순화 예를 들어, 층화를 위한 키트 및/또는 방법을 제공한다. HER2 저발현은 예를 들어, 시험 세포 집단에서 세포에 대해 측정할 때 세포 당 100,000 이하, 90,000 이하, 또는 80,000 이하의 HER2 분자를 갖는 환자를 나타낸다. HER2 발현 수준, 즉, 세포 당 HER2의 수는 여기에 제공된 구현예(예를 들어, 실시예 18을 참조할 것)에서 보여주는 세포-기반 생존능 분석을 이용하는 것을 포함하여 임의의 종래-알려진 방법을 이용하여 측정될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명은 또한 본원에 개시된 HER2 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및/또는 이의 컨쥬게이트를 처리하기 전 대상체의 HER2 점수를 확인하여 본원에 개시된 HER2 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 이의 PBRM-고분자-약물 컨쥬게이트의 치료적 투여에 적당한 환자 집단을 확인 또는 그렇지 않으면 순화 예를 들어, 층화를 위한 키트 및/또는 방법을 제공한다. 일부 구체예에서, 대상체는 HER2 발현에 대해 1+ 또는 2+의 점수를 갖는 것으로 확인된다. 일부 구체예에서, 대상체는 시험 세포 집단에서 수행된 면역조직화학(IHC) 분석을 통해 측정할 때 및 HER2 유전자가 시험 세포 집단에서 증폭되지 않을 때 HER2 발현에 대해 1+ 또는 2+의 점수를 갖는 것으로 확인된다. 일부 구체예에서, 시험 세포 집단은 생검 샘플에서 얻은 신선하고 냉동시키지 않은 조직에서 유래된다. 일부 구체예에서, 시험 세포 집단은 생검 샘플의 냉동 조직에서 유래된다.
IHC 시험은 암 조직 샘플, 예를 들어, 유방암 조직 샘플 또는 위암 샘플에서 세포의 표면에 있는 HER2 수용체 단백질의 함량을 측정하고, 세포 표면 HER2 수용체의 측정된 수준을 HER2 점수, 0, 1+, 2+ 또는 3+으로 배당한다. 만약 대상체의 HER2 점수가 0 내지 1+인 경우, 암은 "HER2 음성"인 것으로 간주한다. 만약 점수가 2+인 경우, 암은 "경계선"임을 의미하고, 3+의 점수는 암이 "HER2 양성"임을 의미한다.
일부 구체예에서, 대상체는 HER2 발현에 대해 1+ 또는 2+의 점수를 갖는 것으로 확인되고, 표준 1차 화학 치료제를 포함하여 화학요법에 반응이 없다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 대상체는 인간 및 다른 포유동물을 포함한다. 일부 구체예에서, 대상체는 HER2 발현에 대해 1+ 또는 2+의 점수를 갖는 것으로 확인되고, 유방암, 위암, 비-소세포성 폐암 또는 난소암을 앓고 있다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 PBRM-고분자-약물 컨쥬게이트는 유전자 증폭, 예를 들어, FISH- (또는 형광 인 시츄 하이브리디제이션 네거티브) 없이 HER2 IHC 1+ 또는 HER2 IHC 2+를 갖는 환자에서 유방암의 증상을 치료, 예방, 진행의 지연 또는 그렇지 않으면 완화하는데 유용하다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 PBRM-고분자-약물 컨쥬게이트는 진행성 HER2 양성 유방암을 가지며 처리 전에 Kadcyla를 처치 받은 환자의 증상을 치료, 예방, 진행의 지연 또는 그렇지 않으면 완화하는데 유용하다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 PBRM-고분자-약물 컨쥬게이트는 진행성 HER2 양성 유방암을 가지며 처리 전에 Kadcyla를 처치 받은 적이 없는 환자의 증상을 치료, 예방, 진행의 지연 또는 그렇지 않으면 완화하는데 유용하다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 PBRM-고분자-약물 컨쥬게이트는 유전자 증폭, 예를 들어, FISH- 없이 HER2 IHC 1+ 또는 HER2 IHC 2+를 갖는 환자들에서 위암의 증상을 치료, 예방, 진행의 지연 또는 그렇지 않으면 완화하는데 유용하다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 PBRM-고분자-약물 컨쥬게이트는 HER2 IHC 2+, HER2 IHC 3+, 임의의 HER2 유전자 증폭 또는 돌연변이 현상을 겪는 환자들에서 비-소세포성 폐암의 증상을 치료, 예방, 진행의 지연 또는 그렇지 않으면 완화하는데 유용하다.
일부 구체예에서, 대상체는 표준 1차 화학 치료제를 포함하여 화학요법에 반응이 없다. 일부 구체예에서, 대상체는 Kadcyla 처치에 내성이 있다.
본원에 제공된 방법 및 용도에 대한 임의의 구체예에서 사용된 HER2 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 컨쥬게이트된 HER2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 질병의 임의의 병기에 투여될 수 있다. 예를 들어, 이러한 HER2 항체 및/또는 컨쥬게이트된 HER2 항체는 초기에서 전이까지 임의의 병기의 암을 앓고 있는 환자에 투여될 수 있다.
이들 방법 및 용도의 임의의 구체예에서 사용된 HER2 항체 및/또는 컨쥬게이트된 HER2 항체는 단독으로 또는 하나 이상의 화학 치료제 또는 다른 제제와 병용하여 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 제제는 본원에 기재된 임의의 독소이다. 일부 구체예에서, 제제는 (1) HER2 억제제, (2) EGFR 억제제 (예를 들어, 티로신 키나아제 억제제 또는 표적 항-EGFR 항체들), (3) BRAF 억제제, (4) ALK 억제제, (5) 호르몬 수용체 억제제, (6) mTOR 억제제, (7) VEGF 억제제, 또는 (8) 암 백신이다. 일부 구체예에서, 제제는 표준 1차 화학 치료제, 예를 들어, 트라스투주맙, 퍼투주맙, 아도-트라스투주맙 엠탄신(Kadcyla), 라파티닙, 아나스트로졸, 레트로졸, 엑스메스탄, 에베로리무스, 풀베스트란트, 타목시펜, 토레미펜, 메게스트롤 아세테이트, 플루옥시메스테론, 에티닐 에스트라디올, 파클리탁셀, 카페시타빈, 겜시타빈, 에리불린, 비노렐빈, 시클로포스파마이드, 카보플라틴, 도세탁셀, 알부민-결합 파클리탁셀, 시스플라틴, 에피루비신, 익사베필론, 독소루비신, 플루오로우라실, 옥살리플라틴, 플루오로피리미딘, 이리노테칸, 라무시루맙, 마이토마이신, 로이코보린, 세툭시맙, 베바시주맙, 엘로티닙, 아파티닙, 크리조티닙, 페르메트레세드, 세리티닙, 에토포사이드, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 이포스파마이드, 리포조말 독소루비신, 토포테칸, 알트레타민, 멜팔란 또는 루프롤라이드 아세테이트이다. 어떤 구체예에서, 제2 제제는 Kadcyla이다.
일부 구체예에서, 제제는 HER2에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 제1 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 구체예에서, HER2 항체 및/또는 컨쥬게이티드 HER2 항체는 HER2 항체, HER2 이량체화 억제제 항체 또는 HER2 항체 및 HER2 이량체화 억제제 항체의 조합, 예를 들어, 트라스투주맙 또는 퍼투주맙 또는 이의 조합과 병용으로 투여된다. 일부 구체예에서, HER2 항체 및/또는 컨쥬게이티드 HER2 항체는 트라스투주맙의 바이오시밀러 또는 퍼투주맙의 바이오시밀러 또는 이의 조합과 병용으로 투여된다.
HER2 항체 및/또는 컨쥬게이트된 HER2 항체의 이들 조합은 병리, 예를 들어, 암을 치료하는데 유용하다. 예를 들어, 트라스투주맙, 퍼투주맙 또는 트라스투주맙 및 퍼투주맙 둘 다 또는 트라스투주맙의 바이오시밀러, 퍼투주맙의 바이오시밀러, 또는 두 바이오시밀러와 병용으로, 본원에 개시된 HER2 항체 및/또는 컨쥬게이트된 HER2 항체의 이들 조합, 예를 들어, HER2 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 컨쥬게이트된 HER2 항체(예를 들어, HER2 항체-고분자-약물 컨쥬게이트)는 암(예를 들어, 암은 항문암, 성상세포종, 백혈병, 림프종, 두경부암, 간암, 고환암, 자궁경부암, 육종, 혈관종, 식도암(esophageal cancer), 안암, 후두암, 구강암(mouth cancer), 중피종, 피부암, 골수종, 구강암(oral cancer), 직장암, 인후암, 방광암, 유방암, 자궁암, 난소암, 전립선암, 폐암, 비-소세포성 폐암(NSCLC), 대장암, 췌장암, 신장암 및 위암으로 이루어진 군에서 선택된다)의 증상을 치료, 예방, 진행의 지연 또는 그렇지 않으면 완화하는데 유용하다.
이들 조합은 HER2-발현 세포가 이들 조합과 접촉될 때, HER2의 분해를 증가하는데 또한 유용하다. HER2 분해 수준은 본원에 제공된 구현예에서 도시된 바와 같이(예를 들어, 실시예 14를 참조할 것), HER2 항체(또는 이의 바이오시밀러)의 조합의 존재 및 부재하에서 HER2 분해 수준을 측정하는 것을 포함하여 HER2 분해를 측정하는 임의의 종래-알려진 방법을 이용하여 검출되나, 이에 제한되지는 않는다. 예를 들어, HER2 분해 수준은 HER2 항체의 조합이 처리되지 않은 HER2-발현 세포에서 HER2 분해 수준과 비교하여 HER2 항체의 조합이 처리된 HER2-발현 세포의 용해물의 웨스턴 분석을 이용하여 측정된다.
일부 구체예에서, HER2 항체 및/또는 컨쥬게이트된 HER2 항체 및 첨가제(들)은 단일 치료 조성물로 제형화되고, HER2 항체 및/또는 컨쥬게이트된 HER2 항체 및 첨가제는 동시에 투여된다. 그렇지 않으며, HER2 항체 및/또는 컨쥬게이트된 HER2 항체 및 첨가제는 서로 분리된다. 예를 들어, 각각은 개별 치료 조성물로 제형화되고, HER2 항체 및/또는 컨쥬게이트된 HER2 항체 및 첨가제는 치료 요법 동안 동시에 투여되거나, HER2 항체 및/또는 컨쥬게이트된 HER2 항체 및 첨가제는 다른 시간에 투여된다. 예를 들어, HER2 항체 및/또는 컨쥬게이트된 HER2 항체는 첨가제의 투여 전에 투여되고, HER2 항체 및/또는 컨쥬게이트된 HER2 항체는 첨가제의 투여 다음에 투여되거나, HER2 항체 및/또는 컨쥬게이트된 HER2 항체 및 첨가제는 교대로 투여된다. 본원에 기재된 바와 같이, HER2 항체 및/또는 컨쥬게이트된 HER2 항체 및 첨가제는 1회 용량 또는 복수 용량으로 투여된다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 본원에 개시된 항체, 이의 단편, 및/또는 이의 컨쥬게이트 및 적당한 담체를 포함할 수 있다. 이들 약학 조성물은 키트, 예를 들어, 진단 키트로 포함될 수 있다.
종래기술에 숙련된 자는 본원에 개시된 항체들이 다양한 용도를 가지는 것으로 이해할 것이다. 예를 들어, 본원에 개시된 단백질은 치료제로 이용된다. 본원에 개시된 항체들은 진단 키트에서 시약 또는 진단 도구로 이용되거나, 이들 항체는 치료제를 생산하기 위한 경쟁분석에 사용될 수 있다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 당업자들이 공통으로 이해하는 것과 같은 의미를 가진다. 명세서에서, 단수 형태는 문맥이 명백하게 적시하지 않는 한 복수 형태 역시 포함한다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 등가의 방법 및 시약들이 본 발명의 실행 또는 시험에 이용될 수 있다고는 하나, 적당한 방법 및 시약들은 아래에 기재된다. 분쟁이 있는 경우, 정의를 포함하여 본 명세서로 제한될 것이다. 더욱이, 시약, 방법 및 실시예들은 단지 예시일뿐이며, 이에 제한되어서는 안된다.
본 발명의 다른 특징 및 이점은 다음의 구체적인 설명 및 청구항에서 분명하게 보일 것이다.
도 1a는 옥텟 레드384 에피토프 비닝에 의한 항체 XMT 1517 및 XMT 1518에 대한 에피토프 비닝을 나타낸 것이다.
도 1b는 옥텟 레드384 에피토프 비닝에 의한 항체 XMT 1519 및 XMT 1520에 대한 에피토프 비닝을 나타낸 것이다.
도 2는 JIMT-1 세포와 항체 XMT 1517, XMT 1518, XMT 1519 및 XMT 1520의 세포 표면 결합을 나타낸 것이다.
도 3a는 재조합 인간 HER2 및 필리핀 원숭이 HER2와 항체 XMT 1517, XMT 1518의 결합 친화도를 나타낸 것이다.
도 3b는 재조합 인간 HER2 및 필리핀 원숭이 HER2와 항체 XMT 1519, XMT 1520의 결합 친화도를 나타낸 것이다.
도 3c는 재조합 인간 HER2와 XMT 1519 및 실시예 16H의 결합 친화도를 나타낸 것이다.
도 3d는 필리핀 원숭이 HER2와 XMT 1519 및 실시예 16H의 결합 친화도를 나타낸 것이다.
도 4는 항체 XMT 1518 및 XMT 1519가 HER2와의 결합을 위해 경쟁함을 나타낸 것이다.
도 5는 트라스투주맙 및 항체 XMT 1518, XMT 1519 및 XMT 1520에 대한 항체-의존적 세포성 세포독성(ADCC)을 나타낸 것이다.
도 6은 트라스투주맙 및 항체 XMT 1518, XMT 1519 및 XMT 1520에 대한 내재화 비율을 나타낸 것이다.
도 7은 SKBR3 세포에서 HER2 항체의 내재화를 나타낸 것이다.
도 8은 항-HER2 항체들의 조합에 의해 유도된 HER2 분해를 나타낸 것이다.
도 9는 NCI-N87 마우스 종양 이종이식 모델에서 측정된 실시예 16A, 트라스투주맙-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 및 실시예 16D, XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))의 항-종양 효능을 도시한 것이다.
도 10은 JIMT-1 마우스 종양 이종이식 모델에서 측정된 Kadcyla; 실시예 16A, 트라스투주맙-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))); 및 실시예 16D, XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))의 항-종양 효능을 도시한 것이다.
도 11은 JIMT-1 마우스 종양 이종이식 모델에서 측정된 Kadcyla; 퍼투주맙; Kadcyla 및 퍼투주맙의 조합; 및 실시예 16D, XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))의 항-종양 효능을 도시한 것이다.
도 12는 NCI-N87 마우스 종양 이종이식 모델에서 측정된 실시예 16F, XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))); 트라스투주맙 및 퍼투주맙의 조합; 또는 트라스투주맙; 퍼투주맙 및 실시예 16F, XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))의 3종 조합의 항-종양 효능을 도시한 것이다.
도 13은 SNU5 마우스 종양 이종이식 모델에서 측정된 Kadcyla, 실시예 16E, XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 및 실시예 17B, 리툭시맙-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))의 항-종양 효능을 도시한 것이다.
도 14는 TOV-21G 마우스 종양 이종이식 모델에서 측정된 Kadcyla 및 실시예 16E, XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))의 항-종양 효능을 도시한 것이다.
도 15는 H522 마우스 종양 이종이식 모델에서 Kadcyla, 실시예 16E, XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 및 실시예 17B, 리툭시맙-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))의 항-종양 효능을 도시한 것이다.
도 16은 SKOV3 마우스 종양 이종이식 모델에서 측정된 Kadcyla, 실시예 16E, XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 및 실시예 17B, 리툭시맙-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))의 항-종양 효능을 도시한 것이다.
도 17은 Calu-3 마우스 종양 이종이식 모델에서 측정된 실시예 16F, XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))의 항-종양 효능을 도시한 것이다.
도 18은 BRE-0333 HER2 1+ 환자에서 유래된 이종이식 모델에서 측정된 Kadcyla, 실시예 16H, XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 및 실시예 17B, 리툭시맙-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))의 항-종양 효능을 도시한 것이다.
도 19는 MAXF_1162 HER2 3+ 환자에서 유래된 이종이식 모델에서 측정된 Kadcyla, 실시예 16H, XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 및 실시예 17B, 리툭시맙-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))의 항-종양 효능을 도시한 것이다.
도 20은 BT474 마우스 종양 이종이식 모델에서 측정된 Kadcyla, 실시예 16H, XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 및 실시예 17C, 리툭시맙-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))의 항-종양 효능을 도시한 것이다.
본 발명은 가용성 형태 또는 막에 결합된 (즉, 세포 표면에 발현될 때) 인간 HER2에 특이적으로 결합하는 단클론 항체를 제공한다. 본 발명은 또한 HER2에 특이적으로 결합하는 단클론 항체를 제공한다. 이들 항체는 여기에서 전반적으로 "HER2" 항체들로 언급된다.
본 발명의 항체들은 ≤ 1 μM, 예컨대, ≤ 100 nM, 바람직하게는 ≤ 10 nM, 더 바람직하게는 ≤ 1 nM의 평형 해리 상수(Kd 또는 KD)를 갖는 HER2 에피토프에 결합한다. 예를 들어, 여기에 제공된 HER2 항체들은 대략 ≤ 1 nM 내지 약 1 pM에서 Kd를 나타낸다.
본원에 개시된 HER2 항체들은 HER2의 기능적 활성을 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화 또는 그렇지 않으면 방해를 제공한다. HER2의 기능적 활성은 예를 들어, PI3K-Akt 경로 활성의 조절을 포함한다. 예를 들어, HER2 항체들은 PI3K-Akt 경로 활성을 부분적으로 또는 완전히 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화 또는 그렇지 않으면 방해하여 HER2 기능적 활성을 완전히 또는 부분적으로 억제한다. PI3K-Akt 경로 활성은 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편의 여부에 따라 인산화된 Akt의 수준을 검출하는 것을 포함하여 PI3K-Akt 경로 활성을 검출하는 임의의 종래-알려진 방법을 이용하여 평가되나, 이에 제한되지는 않는다.
HER2 항체들은 HER2 항체의 존재에서 HER2 기능적 활성의 수준이 본원에 기재된 HER2 항체와의 결합이 없는 HER2 기능적 활성의 수준과 비교하여 적어도 95%, 예를 들어, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%로 감소할 때 HER2 기능적 활성을 완전히 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화 또는 그렇지 않으면 방해하는 것으로 간주한다. HER2 항체들은 HER2 항체의 존재에서 HER2 기능적 활성의 수준이 본원에 기재된 HER2 항체와의 결합이 없는 HER2 기능적 활성의 수준과 비교하여 95% 미만, 예를 들어, 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 75%, 80%, 85% 또는 90%로 감소할 때 HER2 기능적 활성을 부분적으로 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화 또는 그렇지 않으면 방해하는 것으로 간주한다.
정의
달리 정의하지 않는다면, 본 발명과 연계되어 사용된 과학적 및 기술적 용어들은 당업자들에게 공통으로 이해되는 의미를 갖는다. 더욱이, 문맥에서 다르게 요구되지 않는다면, 단수형 용어는 단수를 포함하여 복수 및 복수 용어를 포함한다. 일반적으로, 본원에 기재된 세포 및 조직배양, 분자 생물학 및 단백질 및 올리고- 또는 폴리뉴클레오타이드 화학 및 하이브리디제이션의 기술과, 관련하여 사용된 명명법은 잘 알려져 있고, 당업계에서 공통적으로 사용된다. 재조합 DNA, 올리고뉴클레오타이드 합성 및 조직 배양 및 형질전환(예를 들어, 전기천공, 리포펙션)을 위해 표준 기술이 이용된다. 효소 반응 및 정제 기술은 제조업체의 설명서에 따라, 또는 공통적으로 당업계에 확립된 대로 또는 본원에 기재된 대로 수행된다. 앞의 기술 및 과정은 일반적으로 당업계에 공지된 통상의 방법들에 따라 및 본 명세서 내내 인용되고 논의되는 다양한 일반적이고 훨씬 특이적인 참고문헌들에서 기재된 대로 수행된다. 예를 들어, Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989))를 참조할 것. 본원에 기재된 분석 화학, 합성 유기 화학 및 의학 및 약학 화학의 실험 과정 및 기술과 연계하여 사용된 명명법은 당업계에 공지되고 공통으로 사용되는 것들이다. 화학적 합성, 화학적 분석, 약학적 제조, 제형, 및 전달 및 환자의 치료에 표준 기술들이 사용된다.
본 명세서에 따라 사용된 바와 같이, 별도의 표시가 없다면, 다음 용어들은 아래의 의미를 갖는 것으로 이해되어야 한다:
여기에 이용된 바와 같이, 용어 "HER2"(또한 ErbB-2, NEU, HER-2, 및 CD340로 알려짐), 여기에서 이용될 때, 인간 표피 성장 인자 수용체 2(SwissProt P04626)를 의미하며, 종양세포를 포함하여 세포에서 자연적으로 발현되는 또는 HER2 유전자로 형질전환된 세포에서 발현되는 HER2의 임의의 변이체, 아이소폼 및 종 동족체를 포함한다. 종 동족체는 붉은털 원숭이의 HER2(macaca mulatta; Genbank accession No. GI:109114897)를 포함한다. 이들 용어는 동의어이고 상호 교환적으로 이용될 것이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "HER2 항체" 또는 "항-HER2 항체"는 항원 HER2에 특이적으로 결합하는 항체이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "항체"는 면역글로불린 분자 및 면역글로불린(Ig) 분자의 면역 활성 부분, 즉, 항원과 특이적으로 결합(면역 반응)하는 항원 결합 부위를 포함하는 분자를 의미한다. "특이적으로 결합하다" 또는 "~와 면역 반응하다" 또는 "~를 향하다"는 항체가 목적하는 항원의 하나 이상의 항원 결정체와 반응하나 다른 폴리펩타이드와 반응하지 않거나 훨씬 낮은 친화도(Kd > 10- 6)로 결합하는 것을 의미한다. 항체들은 다클론, 단클론, 키메릭, dAb(도메인 항체), 단일쇄, Fab, Fab ' 및 F(ab')2 단편, scFvs, 및 Fab 발현 라이브러리를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
기본 항체 구조 단위는 사합체를 포함하는 것으로 알려져 있다. 각 사합체는 두 개의 동일한 쌍의 폴리펩타이드 사슬로 구성되며, 각 쌍 중 하나는 "경쇄(약 25 kDa)" 및 하나는 "중쇄(약 50-70 kDa)"를 갖는다. 각 사슬의 아미노-말단 부분은 항원 인식을 위해 일차적으로 반응할 수 있는 약 100 내지 110 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함한다. 각 사슬의 카르복시-말단 부분은 효과기 기능을 위해 일차적으로 반응할 수 있는 불변 영역으로 정의한다. 일반적으로, 인간에게서 얻은 항체 분자는 분자에 존재하는 중쇄의 근원에 따라 서로 다른 임의의 분류, IgG, IgM, IgA, IgE 및 IgD와 관련이 있다. 특정 분류는 IgG1, IgG2과 같은 하위분류를 갖는다. 더욱이, 인간에서, 경쇄는 카파 사슬 또는 람다 사슬일 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "단클론 항체(mAb)" 또는 "단클론 항체 조성물"은 고유의 경쇄 유전자 산물 및 고유의 중쇄 유전자 산물로 구성된 항체 분자의 단지 한 분자 종을 포함하는 항체 분자의 집단을 의미한다. 특히, 단클론 항체의 상보성 결정 부위(CDR)는 집단 내 모든 분자들에서 동일하다. mAb는 그것에 대한 고유의 결합 친화도를 특징으로 하는 항원의 특정 에피토프와 면역 반응할 수 있는 항원 결합 부위를 포함한다.
일반적으로, 인간에게서 얻은 항체 분자들은 분자에 존재하는 중쇄의 근원에 따라 서로 다른 임의의 분류, IgG, IgM, IgA, IgE 및 IgD와 연관된다. 특정 분류는 IgG1, IgG2과 같은 하위분류를 갖는다. 더욱이, 인간에서, 경쇄는 카파 사슬 또는 람다 사슬일 수 있다.
용어 "항원-결합 부위" 또는 "결합 부분"은 항원 결합에 참여하는 면역글로불린 분자의 부분을 의미한다. 항원 결합 부위는 중쇄("H") 및 경쇄("L")의 N-말단 가변 영역("V")의 아미노산 잔기에 의해 형성된다. "초가변 영역"으로 언급된 중쇄 및 경쇄의 V 영역 내 세 개의 고도의 변이 구간은 "프레임워크 영역" 또는 "FR"로 알려진 훨씬 보존된 플랭킹 구간 사이에 배치된다. 그리하여, 용어 "FR"은 면역글로불린에서 초가변 영역 사이 및 근접하여 자연적으로 발견되는 아미노산 서열을 의미한다. 항체 분자에서, 경쇄의 세 개의 초가변 영역 및 중쇄의 세 개의 초가변 영역은 3차원 공간에서 서로 대응하여 배치되어 항원-결합 표면을 형성한다. 항원-결합 표면은 결합된 항원의 3차원 표면에 상보적이고, 중쇄 및 경쇄 각각의 세 개의 초가변 영역은 "상보성-결정 부위" 또는 "CDR"로 언급된다. 각 도메인에 해당하는 아미노산은 Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987 and 1991)), 또는 Chothia & Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987), Chothia et al. Nature 342:878-883 (1989)의 정의에 따른다.
용어 "단편", "항체 단편", "항원-결합 단편" 및 "항원 결합 단편"은 달리 특정되지 않는 한 여기에서 상호교환가능하게 사용된 대로 이용된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "에피토프"는 면역글로불린 또는 이의 단편 또는 T-세포 수용체에 특이적으로 결합할 수 있는 임의의 단백질 결정체를 포함한다. 용어 "에피토프"는 면역글로불린 또는 T-세포 수용체에 특이적으로 결합할 수 있는 임의의 단백질 결정체를 포함한다. 에피토프 결정체는 보통 특이 전하 특징들뿐만 아니라 아미노산 또는 당 측쇄 같은 분자의 화학적으로 활성이 있는 표면 그룹들로 구성되고, 보통 특정 3차원 구조적 특징들을 갖는다. 항체는 해리 상수가 ≤ 1 μM, 예를 들어, ≤ 100 nM, 바람직하게는, ≤ 10 nM 및 더욱 바람직하게는, ≤ 1 nM일 때 특이적으로 항원과 결합한다고 일컫는다.
둘 이상의 항체들의 맥락에서 여기에 사용될 때, 용어 "~와 경쟁하다" 또는 "~와 교차-경쟁하다"는 둘 이상의 항체들이 HER2와의 결합을 경쟁, 예를 들어, 실시예 5 또는 8에 기재된 분석에서 HER2 결합에 대해 경쟁함을 의미한다. 항체가 하나 이상의 다른 항체들과 25% 이상 경쟁할 때, 항체는 HER2와의 결합으로부터 하나 이상의 다른 항체들을 "차단" 또는 "교차-차단"하며, 바람직하게는, 실시예 5 및 8의 분석을 이용하여 측정될 때, 25%-74%는 "부분적 차단" 및 75%-400%는 "전체 차단"으로 나타낸다. 항체의 일부 쌍들의 경우, 실시예 5 및 8의 분석에서 경쟁 또는 차단은 항체 하나는 플레이트에 코팅되고, 다른 하나는 경쟁에 사용될 때에서만 관찰되며, 그 반대는 아니다. 문맥상 달리 정의되거나 부인하지 않는 한, 용어 "~와 경쟁하다" , "~와 교차-경쟁하다", "차단하다", 또는 "교차-차단하다"는 본원에서 사용할 때 그러한 항체 쌍들을 포함하는 것으로 보아야 한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "HER 이량체화를 억제하는" 항체는 HER 이량체의 형성을 억제 또는 방해하는 항체를 의미한다. 바람직하게는, 이러한 항체는 이의 이형이량체 결합 부위에서 HER2에 결합한다. 일 구체예에서, 본원의 이량체화 억제 항체는 퍼투주맙 또는 MAb 2C4이다. HER 이량체화를 억제하는 항체의 다른 예시로 EGFR에 결합하여 하나 이상의 다른 HER 수용체와 이의 이량체화를 억제하는 항체들, 예를 들어, 활성화되거나 "유리된" EGFR과 결합하는 EGFR 단클론 항체 806, MAb 806(Johns et al., J. Biol . Chem. 279(29):30375-30384 (2004)를 참조할 것); HER3에 결합하여 하나 이상의 상이한 HER 수용체와의 이의 이량체화를 억제하는 항체; 및 HER4와 결합하여 하나 이상의 다른 HER 수용체와의 이의 이량체화를 억제하는 항체를 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이 용어 "HER2 이량체화 억제제"는 HER2를 포함하는 이량체 또는 이형이량체의 형성을 억제하는 제제를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "내재화"는 HER2 항체의 전후관계에서 이용될 때, 항체가 세포-표면 및/또는 주변 배지로부터 HER2-발현 세포로 내재화되는 임의의 메커니즘, 예를 들어 엔도사이토시스를 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "면역학적 결합" 및 "면역학적 결합 특성들"은 면역글로불린 분자와 면역글로불린이 특이적인 항원 간에 일어나는 타입의 비-공유적 상호작용을 의미한다. 면역학적 결합 상호작용의 강도 또는 친화도는 상호작용의 해리 상수(Kd) 관점에서 표현될 수 있고, Kd이 작을수록 친화도는 더 크다. 선별된 폴리펩타이드의 면역학적 결합 특성들은 당업계에 공지된 방법들을 이용하여 정량화될 수 있다. 이러한 방법으로 항원-결합 부위/항원 복합체 형성 및 해리 속도를 측정하는 것을 수반하고, 이들 속도는 복합체 파트너의 농도, 상호작용의 친화도 및 양 방향에서 속도에 동등하게 영향을 주는 기하학적 파라미터에 달려있다. 그리하여, "시작 속도 상수"(Kon) 및 "종결 속도 상수"(Koff) 둘 다 농도 및 결합과 해리의 실제 속도를 계산하여 측정될 수 있다(Nature 361:186-87 (1993)를 참조할 것). Koff/Kon의 비율은 친화도와 연관되지 않은 모든 파라미터를 제거할 수 있고, 해리 상수 Kd와 같다(일반적으로 Davies et al. (1990) Annual Rev Biochem 59:439-473를 참조할 것). 본 발명의 항체는 당업자들에게 공지된 방사성리간드 결합 분석 또는 유사한 분석 같은 분석에 의해 측정될 때 평형 해리 상수(Kd 또는 KD)가 1 μM 이하, 바람직하게는, 100 nM 이하, 보다 바람직하게는, 10 nM 이하, 및 가장 바람직하게는 100 pM 이하 내지 약 1 pM일 때, HER2에 특이적으로 결합한다고 일컫는다.
본원에서 사용된 바와 같이 용어 "분리된 폴리뉴클레오타이드"는 게놈, cDNA 또는 합성 기원 또는 이의 일부 조합의 폴리뉴클레오타이드를 의미하며, 그것의 기원에 따라 "분리된 폴리뉴클레오타이드"는 (1) "분리된 폴리뉴클레오타이드"가 자연에서 발견되는 하나의 폴리뉴클레오타이드의 전체 또는 한 부분과 결합하지 않거나, (2) 하나의 폴리뉴클레오타이드에 작동 가능하게 연결되나 자연에서는 연결되지 않거나, (3) 더 큰 서열의 부분으로서 자연에서는 생기지 않는다. 본 발명에 따른 폴리뉴클레오타이드는 SEQ ID NOs: 1, 3, 5 및 7로 표현된 중쇄 면역글로불린 분자를 인코딩하는 핵산뿐만 아니라 SEQ ID NOs: 34 및 36의 핵산 서열과, SEQ ID NOs: 2, 4, 6 및 8로 표현된 경쇄 면역글로불린 분자를 인코딩하는 핵산 서열뿐만 아니라 SEQ ID NOs: 35 및 37의 핵산 서열을 포함한다.
여기에서 언급된 용어 "분리된 단백질"은 cDNA, 재조합 RNA 또는 합성 기원 또는 이의 일부 조합의 단백질을 의미하며, 그것의 기원, 또는 유도원에 따라, "분리된 단백질"은 (1) 자연에서 발견되는 단백질과는 결합하지 않거나, (2) 같은 근원에서 유래된 다른 단백질이 없거나, (3) 다른 종에서 유래된 세포에서 발현되거나, 또는 (4) 자연에서 생기지 않는다.
유전자 용어로서 여기에 사용된 용어 "폴리펩타이드"는 자연 그대로의 단백질, 단편 또는 폴리펩타이드 서열의 유사물을 의미한다. 그러므로, 자연 그대로의 단백질 단편 및 유사물은 폴리펩타이드 속의 종이다. 본 발명에 따른 폴리펩타이드는 경쇄 면역글로불린 분자, 예컨대, 카파 경쇄 면역글로불린 분자와 중쇄 면역글로불린 분자를 포함하는 조합에 의해 형성된 항체 분자뿐만 아니라 SEQ ID NOs:1, 3, 5, 및 7로 표현되는 중쇄 면역글로불린 분자 및 SEQ ID NOs: 2, 4, 6 및 8로 표현되는 경쇄 면역글로불린 분자, 및 단편 및 이의 유사물뿐만 아니라 반대의 경우를 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 목표에 적용될 때 용어 "자연적으로-발생하는"은 목표가 자연에서 발견될 수 있다는 사실을 의미한다. 예를 들어, 자연에서의 한 공급원으로부터 분리될 수 있는 생물체(바이러스 포함)에서 존재하고, 실험실에서 인간에 의해 의도적으로 변형되지 않는 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 서열 또는 그렇지 않으면 자연적으로-발생하는 것이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "작동 가능하게 연결된"은 그와 같이 기재된 성분들의 위치가 그들의 의도된 방식으로 기능을 수행하도록 연관되어 있음을 의미한다. 코딩 서열에 "작동 가능하게 연결된" 대조군 서열은 코딩 서열의 발현이 대조군 서열과 공존할 수 있는 조건에서 달성되는 그러한 방식으로 결찰된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "대조군 서열"은 그들이 결찰된 코딩 서열의 발현 및 프로세싱에 영향을 주는데 필수적인 폴리뉴클레오타이드 서열을 의미한다. 그러한 대조군 서열의 기원은 원핵생물에서 숙주 생물체에 따라 다르며, 그러한 대조군 서열을 일반적으로, 프로모터, 리보좀 결합 부위 및 진핵생물에서 전사 종결 서열을 포함하며, 일반적으로, 그러한 대조군 서열은 프로모터 및 전사 종결 서열을 포함한다. 용어 "대조군 서열"은 최소한으로 발현 및 프로세싱에 필수적인 존재를 갖는 모든 성분들을 포함할 의도를 지니며, 또한 존재가 장점인 부가 성분들, 예를 들어, 리더 서열 및 융합 파트너 서열을 포함할 수 있다. 본원에 언급된 바와 같이, 용어 "폴리뉴클레오타이드"는 적어도 10개의 염기를 갖는 리보뉴클레오타이드 또는 디옥시리보뉴클레오타이드 또는 뉴클레오타이드의 타입 중 어느 하나의 변형된 형태 중 어느 하나의 뉴클레오타이드의 고분자 붕소를 의미한다. 용어는 DNA의 단일 및 이중 가닥 형태를 포함한다.
본원에 언급된 용어 "올리고뉴클레오타이드"는 자연적으로 발생하는 것, 및 자연적으로 발생하여 서로 연결된 변형된 뉴클레오타이드, 및 비-자연적으로 발생하는 올리고뉴클레오타이드 결합을 포함한다. 올리고뉴클레오타이드는 200개 이하의 염기를 포함하는 일반적으로 폴리뉴클레오타이드 서브세트이다. 바람직하게는, 올리고뉴클레오타이드는 길이가 10 내지 60개의 염기이며, 가장 바람직하게는, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20 내지 40개의 염기이다. 비록 올리고뉴클레오타이드가 예를 들어, 유전자 돌연변이의 구축에 사용하기 위해 이중 가닥일 수 있으나, 올리고뉴클레오타이드는 보통 예를 들어, 프로브를 위해 단일 가닥이다. 본원에 개시된 올리고뉴클레오타이드는 센스 또는 안티센스 올리고뉴클레오타이드 중 어느 하나이다.
여기에 언급된 용어 "자연적으로 발생하는 뉴클레오타이드"는 디옥시리보뉴클레오타이드 및 리보뉴클레오타이드를 포함한다. 여기에 언급된 용어 "변형된 뉴클레오타이드"는 변형되거나 치환된 당 그룹 등을 갖는 뉴클레오타이드를 포함한다. 여기에 언급된 용어 "올리고뉴클레오타이드 결합"은 올리고뉴클레오타이드 결합, 예컨대, 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 포스포로셀레로에이트, 포스포로디셀레노에이트, 포스포로아닐로티오에이트, 포스포르아닐라데이트, 포스포론미데이트 등을 포함한다. 예를 들어, LaPlanche et al. Nucl . Acids Res. 14:9081 (1986); Stec et al. J. Am. Chem . Soc. 106:6077 (1984), Stein et al. Nucl. Acids Res. 16:3209 (1988), Zon et al. Anti Cancer Drug Design 6:539 (1991); Zon et al. Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, pp. 87-108 (F. Eckstein, Ed., Oxford University Press, Oxford England (1991)); Stec et al. 미국 특허 제5,151,510호; Uhlmann and Peyman Chemical Reviews 90:543 (1990)를 참조할 것. 올리고뉴클레오타이드는 원하는 경우 검출용 표지를 포함할 수 있다.
본원에 언급된 용어 "선택적으로 혼성화하다"는 검출 가능하게 그리고 특이하게 결합하는 것을 의미한다. 본 발명에 따른 폴리뉴클레오타이드, 올리고뉴클레오타이드 및 이의 단편은 비특이적인 핵산과의 검출 가능한 결합의 상당한 함량을 최소화하는 혼성화 및 세척 조건에서 핵산 가닥과 선택적으로 혼성화한다. 당업계에 공지되고 본원에서 논의된 바와 같이 선택적 혼성화 조건을 이루기 위해 매우 엄격한 조건이 사용될 수 있다. 일반적으로, 본원에 개시된 폴리뉴클레오타이드, 올리고뉴클레오타이드 및 단편과 목적 핵산 서열 간의 핵산 서열 상동성은 적어도 80%이고, 전형적으로 더욱 바람직하게는, 적어도 85%, 90%, 95%, 99%, 및 100%로 증가할 것이다. 그들 서열 사이에 부분적 또는 완전한 동일성이 있는 경우 두 개의 아미노산 서열은 일치한다. 예를 들어, 85% 상동성은 두 개의 서열이 최대 매칭을 위해 배열될 때 85%의 아미노산이 동일하다는 의미이다. 갭(매칭되는 두 개의 서열 중 어느 하나에서)은 바람직하게는 5 이하, 더욱 바람직하게는 2 이하의 매칭 갭 길이를 최대화하도록 허용된다. 대안으로 그리고 바람직하게는, 두 개의 단백질 서열(또는 적어도 30개의 아미노산에서 유래된 폴리펩타이드 서열)은 이 용어가 여기에서 이용될 때, 만약 그들이 돌연변이 데이터 매트릭스와 프로그램 ALIGN을 이용하여 5를 초과(표준 변이 단위에서)하는 배열 점수와 6 이상의 갭 패널티를 가지는 경우 일치한다. Dayhoff, M.O., in Atlas of Protein Sequence and Structure, pp. 101-110 (Volume 5, National Biomedical Research Foundation (1972)) and Supplement 2 to this volume, pp. 1-10를 참조할 것. 두 개의 서열 또는 이의 일부는 그들의 아미노산이 ALIGN 프로그램을 이용하여 최적으로 배열될 때 50% 이상 동일하다면 더욱 바람직하게는 일치한다. 여기에 사용된 용어 "~에 상응하는"은 폴리뉴클레오타이드 서열이 레퍼런스 폴리뉴클레오타이드 서열의 전체 또는 한 부분과 일치하거나(즉, 엄밀하게 진화적으로 연관되지 않으나 동일함), 레퍼런스 폴리뉴클레오타이드 서열의 전체 또는 한 부분과 일치함을 의미한다. 대조적으로, 여기에 사용된 용어 "~에 상보적인"은 상보적 서열이 레퍼런스 폴리뉴클레오타이드 서열의 전체 또는 한 부분과 일치함을 의미한다. 예를 들어, 뉴클레오타이드 서열 "TATAC"는 레퍼런스 서열 "TATAC"에 상응하고, 레퍼런스 서열 "GTATA"에 상보적이다.
다음의 용어는 두 개 이상의 폴리뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열 간의 서열 연관성을 묘사하는데 사용된다: "레퍼런스 서열", "비교창", "서열 일치도", 서열 일치도의 비율", 및 "실질적인 일치도". "레퍼런스 서열"은 서열 비교를 위한 근거로서 사용되는 특정 서열이며, 레퍼런스 서열은 더 큰 서열의 서브세트일 것이며, 예를 들어, 전장 cDNA의 세그먼트 또는 서열목록에서 제공된 유전자 서열이거나, 완전한 cDNA 또는 유전자 서열을 포함할 것이다. 일반적으로, 레퍼런스 서열은 적어도 18개의 뉴클레오타이드 또는 6개의 아미노산, 종종 적어도 24개의 뉴클레오타이드 또는 8개의 아미노산, 및 종종 적어도 48개의 뉴클레오타이드 또는 16개의 아미노산을 갖는다. 두 개의 폴리뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열은 각각 (1) 두 분자 간에 유사한 서열(즉, 전체 폴리뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열의 한 부분)을 포함하고, (2) 추가로 두 개의 폴리뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열 사이에서 갈라져 나온 서열을 포함할 것이며, 두 개(또는 그 이상)의 분자 간의 서열 비교는 전형적으로 "비교창"에서 두 개의 분자의 서열을 비교하여 수행되고 서열 유사성의 국소 영역을 확인하고 비교한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "비교창"은 적어도 18개의 인접하는 뉴클레오타이드 위치의 개념적 세그먼트 또는 6개의 아미노산을 의미하며, 여기서, 폴리뉴클레오타이드 서열 또는 아미노산 서열은 적어도 18개의 인접하는 뉴클레오타이드 또는 6개의 아미노산 서열의 레퍼런스 서열과 비교되고, 비교창에서 폴리뉴클레오타이드 서열의 그 부분은 두 개의 서열의 최적 배열을 위한 레퍼런스 서열(첨가 또는 결실을 포함하지 않는)과 비교하여 20% 미만의 첨가, 결실, 치환 등(예를 들어, 갭)을 포함할 것이다. 비교창을 배열하기 위한 서열의 최적 배열은 Smith and Waterman Adv . Appl . Math. 2:482 (1981)의 국소 상동성 알고리즘, Needleman and Wunsch J. Mol . Biol. 48:443 (1970)의 상동성 배열 알고리즘, Pearson and Lipman Proc . Natl . Acad . Sci. (U.S.A.) 85:2444 (1988)의 유사성 방법에 대한 검색, 이들 알고리즘의 컴퓨터화된 구현(GAP, BESTFIT, FASTA, and TFASTA in the Wisconsin Genetics Software Package Release 7.0, (Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, Wis., Geneworks, or MacVector software packages), 또는 면밀한 조사 및 선택된 다양한 방법들에 의해 산출된 최적 배열(즉, 비교창에서 상동의 최대 비율을 도출함)로 수행될 것이다.
용어 "서열 일치도"는 두 개의 폴리뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열이 비교창에서 동일하다는(즉, 뉴클레오타이드 대 뉴클레오타이드 또는 잔기 대 잔기를 기반으로 하여) 의미이다. 용어 "서열 일치도의 비율"은 비교창에서 두 개의 최적으로 배열된 서열을 비교하고, 동일한 핵산 염기(예를 들어, A, T, C, G, U 또는 I) 또는 잔기가 두 서열에서 발생하는 위치의 수를 측정하여 필적하는 위치의 수를 산출하고, 비교창(즉, 창 크기)에서 필적하는 위치의 수를 전체 위치 수로 나누고, 및 그 결과에 100을 곱하여 서열 일치도의 비율을 산출하여 계산한다. 본원에서 사용된 바와 같이 용어 "실질적인 일치도"는 폴리뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열의 특징을 뜻하며, 여기서, 폴리뉴클레오타이드 또는 아미노산은 적어도 18개의 뉴클레오타이드(6개 아미노산) 위치의 비교창, 빈번하게 적어도 24-48개의 뉴클레오타이드(8-16개의 아미노산) 위치의 창에서 레퍼런스 서열과 비교하여 적어도 85%의 서열 일치도, 바람직하게는, 적어도 90% 내지 95%의 서열 일치도, 보다 바람직하게는, 적어도 99% 서열 일치도를 갖는 서열을 포함하며, 여기서, 서열 일치도의 비율은 비교창에서 레퍼런스 서열의 전체 20% 이하로 결실 또는 부가를 포함하는 서열과 레퍼런스 서열을 비교하여 계산된다. 레퍼런스 서열은 더 큰 서열의 서브세트일 것이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 20개의 전통적인 아미노산 및 그들의 약어는 전통적인 관례를 따른다. Immunology - A Synthesis (2nd Edition, E.S. Golub and D.R. Gren, Eds., Sinauer Associates, Sunderland7 Mass. (1991))를 참조할 것. 20개의 전통적인 아미노산의 입체이성질체(예를 들어, D-아미노산), α-, α-이중치환된 아미노산, N-알킬 아미노산, 젖산 같은 비천연 아미노산, 및 다른 비전통적인 아미노산 역시 본 발명의 폴리펩타이드에 적당한 성분일 수 있다. 비전통적인 아미노산의 예시로, 4-하이드록시프롤린, η-카르복시글루타메이트, ε-N,N,N-트리메틸라이신, ε-N-아세틸라이신, O-포스포세린, N-아세틸세린, N-포밀메티오닌, 3-메틸히스티딘, 5-하이드록시라이신, σ-N-메틸아르기닌, 및 다른 유사한 아미노산 및 이미노산(예를 들어, 4-하이드록시프롤린)을 포함한다. 본원에 사용된 폴리펩타이드 표기법에서, 표준 사용 및 관례에 따르면 왼-손 방향은 아미노 말단 방향이고, 오른-손 방향은 카르복시-말단 방향이다.
유사하게, 달리 특정하지 않는 한, 단일-가닥의 폴리뉴클레오타이드 서열의 왼-손 말단은 5'-말단이고, 이중-가닥의 폴리뉴클레오타이드 서열의 왼-손 방향은 5' 방향을 의미한다. 신생 RNA 전사체의 5'에서 3' 부가 방향은 RNA와 같은 서열을 갖는 DNA 가닥과 "업스트림 서열"을 의미하는 5'에서 RNA 전사체의 5' 말단까지의 전사 방향 서열 영역, 같은 서열을 갖는 DNA 가닥과 "다운스트림 서열"을 의미하는 3'에서 RNA 전사체의 3' 말단까지의 서열 영역을 의미한다.
폴리펩타이드에 적용될 때, 용어 "실질적인 일치도"는 예컨대, 디폴트 갭 웨이트를 이용한 프로그램 GAP 또는 BESTFIT에 의해 최적으로 배열될 때, 두 개의 펩타이드 서열이 적어도 80%의 서열 일치도, 바람직하게는 적어도 90%의 서열 일치도, 보다 바람직하게는, 적어도 95%의 서열 일치도, 및 가장 바람직하게는, 적어도 99%의 서열 일치도를 공유함을 의미한다.
바람직하게는, 일치하지 않는 잔기 위치는 보존적인 아미노산 치환과는 다르다.
보존적인 아미노산 치환은 유사한 측쇄를 갖는 잔기와의 상호교환가능성을 의미한다. 예를 들어, 지방족 측쇄를 갖는 아미노산 그룹은 글리신, 알라닌, 발린, 루신, 및 이소루신; 지방족-하이드록실 측쇄를 갖는 아미노산 그룹은 세린 및 트레오닌; 아마이드-함유 측쇄를 갖는 아미노산 그룹은 아스파라긴 및 글루타민; 방향족 측쇄를 갖는 아미노산 그룹은 페닐알라닌, 티로신 및 트립토판; 염기성 측쇄를 갖는 아미노산 그룹은 리신, 아르기닌 및 히스티딘; 및 황-함유 측쇄를 갖는 아미노산 그룹은 시스테인 및 메티오닌이다. 바람직한 보존적인 아미노산 치환 그룹은 발린-루신-이소루신, 페닐알라닌-티로신, 리신-아르기닌, 알라닌, 발린, 글루탐산-아스파르트산 및 아스파라긴-글루타민이다.
본원에서 논의된 바와 같이, 항체 또는 면역글로불린 분자의 아미노산 서열에서 소수의 변이는 아미노산 서열에서의 변이가 적어도 75%, 더 바람직하게는 적어도 80%, 90%, 95% 및 가장 바람직하게는, 99% 유지한다면 본 발명에 포함되는 것으로 고려된다. 특히, 보존적인 아미노산 교체가 고려된다. 보존적인 교체는 측쇄에서 연관된 아미노산 패밀리 내에서 일어나는 것들이다. 유전적으로 암호화된 아미노산은 일반적으로 다음의 패밀리로 분류한다: (1) 산성 아미노산은 아스파르트산, 글루탐산; (2) 염기성 아미노산은 리신, 아르기닌, 히스티딘; (3) 비-극성 아미노산은 알라닌, 발린, 루신, 이소루신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판, 및 (4) 전하를 갖지 않은 극성 아미노산은 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 시스테인, 세린, 트레오닌, 티로신이다. 친수성 아미노산은 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 글루타민, 글루탐산, 히스티딘, 리신, 세린 및 트레오닌이다. 소수성 아미노산은 알라닌, 시스테인, 이소루신, 루신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린, 트립토판, 티로신 및 발린이다. 다른 아미노산 패밀리로, (i) 지방족-하이드록시 패밀리인 세린 및 트레오닌; (ii) 아마이드 함유 패밀리인 아스파라긴 및 글루타민; (iii) 지방족 패밀리인 알라닌, 발린, 루신 및 이소루신; 및 (iv) 방향족 패밀리인 페닐알라닌, 트립토판 및 티로신을 포함한다. 예를 들어, 루신의 이소루신 또는 발린으로의 불리된 교체, 아스파르트산의 글루탐산으로의 교체, 트레오닌의 세린으로의 교체, 또는 아미노산의 구조적으로 연관된 아미노산으로의 유사한 교체는 특히, 교체가 골격 부위 내 아미노산과 연관이 없는 경우라면, 결과로 얻은 분자의 결합 또는 특성들에 주요 영향을 주지는 않을 것으로 예상하는 것이 합리적이다. 아미노산이 기능적 펩타이드를 변화시키는지는 폴리펩타이드 유도체의 특이 활성을 분석함으로써 쉽게 측정될 수 있다. 분석은 본원에 구체적으로 기재되어 있다. 항체 또는 면역글로불린 분자의 단편 또는 유사물은 당업자에게 쉽게 제조될 수 있다. 바람직한 단편 또는 유사물의 아미노- 및 카르복시-말단은 기능적 도메인의 경계 근처에서 일어난다. 구조적 및 기능적 도메인은 공공 또는 사설 서열 데이터베이스에 대한 뉴클레오타이드 및/또는 아미노산 서열 데이터의 비교를 통해 확인될 수 있다. 바람직하게는, 알려진 구조 및/또는 기능을 갖는 다른 단백질에서 생기는 서열 모티프 또는 예상 단백질 입체구조 도메인을 확인하는 데 컴퓨터 기반 비교 방법들이 사용된다. 알려진 3차원 구조에 접힌 단백질 서열을 확인하기 위한 방법들이 공지되어 있다(Bowie et al. Science 253:164 (1991)). 따라서, 앞서 말한 예시들은 당업자가 본 발명에 따른 구조적 및 기능적 도메인을 규정하는데 사용될 서열 모티프 및 구조적 입체구조를 인식할 수 있음을 입증한다.
바람직한 아미노산 치환은 (1) 단백질분해에 대한 감수성을 줄이고, (2) 산화에 대한 감수성을 줄이며, (3) 결합 친화도를 바꾸고, 및 (4) 그러한 유사물의 다른 물리화학적 또는 기능적 특성들을 주거나 변형하는 것들이다. 유사물은 자연적으로-발생하는 펩타이드 서열과 다른 서열의 다양한 뮤테인을 포함할 수 있다. 예를 들어, 단일 또는 복수의 아미노산 치환(바람직하게는 보존적인 아미노산 치환)은 자연적으로-발생하는 서열(바람직하게는, 분자 간 접촉을 형성하는 도메인 외에 폴리펩타이드의 부분에서)에서 만들어질 것이다. 보존적인 아미노산 치환은 부모 서열의 구조적 특징들을 실질적으로 바꾸지 않아야 한다(예를 들어, 부모 서열에서 일어나는 나선을 깨거나, 부모 서열을 특징적인 2차 구조의 다른 타입을 붕괴하는 경향이 없는 아미노산 교체). 이미 알려진 폴리펩타이드의 2차 및 3차 구조의 예시는 Proteins, Structures and Molecular Principles (Creighton, Ed., W. H. Freeman and Company, New York (1984)); Introduction to Protein Structure (C. Branden and J. Tooze, eds., Garland Publishing, New York, N.Y. (1991)); and Thornton et at. Nature 354:105 (1991)에 기재되어 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "폴리펩타이드 단편"은 아미노 말단 및/또는 카르복시-말단 결실을 가지나, 남아있는 아미노산 서열이 예를 들어, 전장 cDNA 서열로부터 추정되는 자연적으로-발생하는 서열에서 해당 위치와 동일한 폴리펩타이드를 의미한다. 전형적으로 단편은 적어도 5, 6, 8 또는 10개의 아미노산, 바람직하게는, 적어도 14개의 아미노산, 더 바람직하게는, 적어도 20개의 아미노산, 보통 적어도 50개의 아미노산, 및 더욱 더 바람직하게는, 적어도 70개의 아미노산이다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "유사물"은 추정된 아미노산 서열의 한 부분과 실질적인 일치도를 갖고, 적당한 결합 조건에서 HER2와 특이적인 결합을 갖는 적어도 25개의 아미노산의 세그먼트로 이루어진 폴리펩타이드를 의미한다. 전형적으로, 폴리펩타이드 유사물은 자연적으로-발생하는 서열에 관한 보존적인 아미노산 치환(또는 부가 또는 결실)을 포함한다. 유사물은 전형적으로 적어도 20개의 아미노산, 바람직하게는 적어도 50개의 아미노산 또는 더 길며, 보통 자연적으로-발생하는 폴리펩타이드 전장 만큼일 수 있다.
펩타이드 유사물은 보통 주형 펩타이드의 것과 유사한 특성들을 갖는 비-펩타이드 약물로서 제약 산업에서 사용된다. 이들 타입의 비-펩타이드 화합물을 "펩타이드 모방체" 또는 "펩티도미메틱스"라 부른다. Fauchere, J. Adv . Drug Res. 15:29 (1986), Veber and Freidinger TINS p.392 (1985); 및 Evans et al. J. Med . Chem. 30:1229 (1987). 그러한 화합물은 보통 컴퓨터 기반 분자 모델링의 도움으로 개발된다. 치료적으로 유용한 펩타이드와 구조적으로 유사한 펩타이드 모방체는 등가의 치료 또는 예방 효과를 생산하는데 이용될 것이다. 일반적으로, 펩티도미메틱스는 패러다임 폴리펩타이드(즉, 생화학적 특성 또는 약학적 활성을 갖는 폴리펩타이드), 예컨대, 인간 항체와 구조적으로 유사하나 하나 이상의 펩타이드 결합이 당업계에 공지된 방법들에 의해 선택적으로 --CH2NH--, --CH2S-, --CH2-CH2--, --CH=CH--(시스 및 트랜스), --COCH2--, CH(OH)CH2-- 및 -CH2SO--로 이루어진 군에서 선택된 결합으로 대체되어 있다. 공통 서열(consensus sequence)의 하나 이상의 아미노산이 같은 타입의 D-아미노산(예를 들어, L-리신 대신 D-리신)으로의 조직적인 치환이 훨씬 안정한 펩타이드를 생산하기 위해 사용될 것이다. 게다가, 공통 서열 또는 실질적으로 동일한 공통 서열 변이를 포함하는 부자연스러운 펩타이드는 당업계에 공지된 방법들, 예를 들어, 펩타이드를 고리화하는 분자 내 이황화 결합을 형성할 수 있는 내부의 시스테인 잔기를 첨가하여 생성될 것이다(Rizo and Gierasch Ann. Rev. Biochem. 61:387 (1992)).
본원에 사용된 용어 "제제"는 화학적 화합물, 화학적 화합물의 혼합물, 생물학적 거대분자, 또는 생물학적 물질들로부터 제조된 추출물을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "표지" 또는 "표지된"은 검출 가능한 마커의 결합, 예를 들어, 방사성표지된 아미노산의 결합 또는 표식이 된 아비딘에 의해 검출될 수 있는 바이오티닐 모이어티와 폴리펩타이드의 부착(예를 들어, 형광 마커를 함유하는 스트렙타비딘 또는 광학적 또는 비색 방법들에 의해 검출될 수 있는 효소적 활성)을 의미한다. 어떤 조건에서, 표지 또는 마커는 또한 치료제일 수 있다. 폴리펩타이드 및 당단백질의 다양한 표지화 방법은 당업계에 공지되어 있어 이용할 수 있다. 폴리펩타이드용 표지의 예로, 방사성동위원소 또는 방사성핵종(예를 들어, 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I), 형광 표지(예를 들어, FITC, 로다민, 란타나이드 인광체), 효소적 표지(예를 들어, 호스래디쉬 페록시다아제, p-갈락토시다아제, 루시퍼라아제, 알칼라인 포스파타아제), 화학발광체, 바이오티닐기, 2차 리포터에 의해 인식되는 미리 결정된 폴리펩타이드 에피토프(예를 들어, 루신 지퍼 쌍 서열, 2차 항체에 대한 결합 부위, 금속 결합 도메인, 에피토프 태그)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 어떤 구체예에서, 표지는 다양한 길이의 스페이서 완에 의해 부착되어 잠재적 입체 장애를 감소시킨다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "약학적 제제 또는 약물"은 환자에게 적절히 투여될 때 원하는 치료 효과를 유도할 수 있는 화학적 화합물 또는 조성물을 의미한다.
본원에서 다른 화학 용어들은 The McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (Parker, S., Ed., McGraw-Hill, San Francisco (1985))의 예와 같이 당업계의 전통적인 사용에 따라 이용된다.
본원에서 사용된 바와 같이, "실질적으로 순수한"은 목적하는 종이 현재 우세한 종(즉, 몰 농도에 기초하여 조성물에서 임의의 다른 개별 종들보다 훨씬 풍부한)으로 나타난다는 의미이고, 바람직하게는, 실질적으로 정제된 분획은 목적하는 종이 현재 모든 거대분자 종의 적어도 약 50%(몰 농도에 기초하여)를 포함하는 조성물이다.
일반적으로, 실질적으로 순수한 조성물은 조성물에서 현재 모든 거대분자 종의 약 80% 이상, 보다 바람직하게는, 약 85%, 90%, 95%, 및 99% 이상을 포함할 것이다. 가장 바람직하게는, 목적 종이 반드시 균질하게 정제되고(오염 종이 전통적인 검출 방법에 의한 조성물에서 검출될 수 없다), 조성물은 반드시 단일 거대분자 종으로 구성된다.
다음 명세서 및 청구항 둘 다에서 본원에서 달리 지적하지 않거나 전후관계에서 명백하게 모순되지 않는 한, 관사 "a", "an" 및 "the"의 사용은 단일 및 복수 둘 다를 포함하는 것으로 해석된다. 용어 "포함하는", "가지는", "화학 수식의 존재"에서처럼 "존재", "포함하는" 및 "함유하는"은 달리 기록하지 않는 한, 열린 용어(즉, "포함하나 이에 제한되지는 않는"을 의미하는)로 이해된다. 예를 들어, 특정 화학식의 고분자 스캐폴드는 화학식에서 보여주는 단량체 단위 모두를 포함하고, 화학식에서 보여주지 않는 추가적인 단량체 단위 역시 포함할 것이다. 추가로 "포함하는" 또는 다른 열린-말미로 된 용어가 구체예에서 이용될 때마다, 같은 구체예가 중간 용어 "필수적으로 구성하는" 또는 닫힌 용어 "구성하는"을 이용하여 훨씬 더 좁게 청구될 수 있는 것으로 이해된다.
수치 값과 연관하여 사용될 때, 용어 "약", "대략" 또는 "대강의"는 값의 집합 또는 범위가 포함됨을 의미한다. 예를 들어, "약 X"는 X의 ±20%, ±10%, ±5%, ±2%, ±1%, ±0.5%, ±0.2%, 또는 ±0.1%인 수치 범위를 포함하고, 여기서 X는 수치 값이다. 일 구체예에서, 용어 "약"은 지정된 값보다 5% 이상 또는 미만인 값의 범위를 의미한다. 다른 구체예에서, 용어 "약"은 지정된 값보다 2% 이상 또는 미만인 값의 범위를 의미한다. 다른 구체예에서, 용어 "약은 지정된 값보다 1% 이상 또는 미만인 값의 범위를 의미한다.
값의 범위의 열거는 본원에서 달리 지적하지 않는 한, 단지 범위 내 감소하는 각 독립된 값을 개별적으로 언급하는 속기 방법으로 제공할 의도를 지니며, 각 독립된 값은 본원에서 개별적으로 열거되는 것처럼 명세서에 포함된다. 본원에 사용된 범위는 달리 지정하지 않는 한, 범위의 두 한계치를 포함한다. 예를 들어, 표현 "x가 1 및 6 사이의 정수이다" 및 "x는 1 내지 6의 정수이다" 둘 다 "x는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6"을 의미한다. 즉, 용어 "X 및 Y 사이" 및 "X 내지 Y의 범위"는 X 및 Y와 그 사이의 정수를 포함한다.
본원에 기재된 모든 방법들은 본원에 달리 지적되지 않거나 전후관계에서 명백하게 모순되지 않는 한 임의의 적당한 순서로 수행될 수 있다. 본원에 제공된 임의의 그리고 모든 실시예, 또는 예시적 언어(예를 들어, "예컨대")는 단지 본 발명을 더 좋게 설명하고자 하는 의도를 지니고 있으며, 명시적으로 달리 청구되지 않는 한 청구항의 범주에 제한되는 것으로 이해되어서는 안된다. 명세서에서 없는 언어는 임의의 청구되지 않는 요소가 청구된 것에 필수적임을 지적하는 것으로 이해된다.
"단백질 기반 인식-분자(Protein based recognition-molecule)" 또는 " PBRM "은 세포 표면 마커 또는 수용체, 예컨대, 막투과 단백질, 표면 고정 단백질, 또는 프로토글리칸을 인식하고 결합하는 분자를 의미한다. PBRM의 예시로, 다른 항체들(예를 들어, 트라스투주맙, 세툭시맙, 리툭시맙, 베바시주맙, 데프라투주맙, 벨투주맙, 라베투주맙, B7-H4, B7-H3, CA125, CD33, CXCR2, EGFR, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, HER2, NaPi2b, c-Met, MUC-1, NOTCH1, NOTCH2, NOTCH3, NOTCH4, PD-L1-및-항-5T4)뿐만 아니라, 본원에 기재된 XMT 1517 항체, XMT 1518 항체, XMT 1519 항체 및 XMT 1520 항체, 항체 또는 본원에 기재된 이의 항원 결합 단편, 또는 펩타이드(LHRH 수용체 표적 펩타이드, EC-1 펩타이드), 리포칼린, 예를 들어, 안티칼린, 예컨대 인터페론, 림포카인, 성장 인자, 콜로니 자극 인자 등의 단백질, 펩타이드 또는 펩타이드 모방체 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 특정 세포, 조직 또는 위치에 대해 변형된 고분자 컨쥬게이트를 표적으로 할 뿐만 아니라 단백질 기반 인식 분자는 특정 치료 효과, 예컨대 표적 세포 또는 경로에 대한 항증식(세포증식 억제 및/또는 세포독성) 활성을 가질 것이다. 단백질 기반 인식 분자는 적어도 하나의 화학적 반응기, 예컨대, -COOH, 일차 아민, 이차 아민, -NHR, -SH 또는 화학적으로 반응하는 아미노산 모이어티 또는 측쇄, 예컨대, 티로신, 히스티딘, 시스테인 또는 리신을 포함하거나, 포함하도록 변형될 것이다.
본원에서 사용된 바와 같이, " 생체적합한 "은 체액 또는 살아있는 세포 또는 조직과 접촉하는 한편 최소한으로 해가 되거나 숙주 반응 효과를 나타내는 화합물을 기재하는데 사용된다. 그리하여, 본원에서 사용된 바와 같이, 생체적합한 그룹은 지방족, 시클로알킬, 헤테로지방족, 헤테로시클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 모이어티를 의미하며, 상기 및 본원에서 명시된 바와 같이, 용어, 생체적합한의 정의 내에 포함된다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "생체적합성"은 또한 그러한 상호작용이 특히 바람직하지 않은 한 화합물이 인식 단백질, 예를 들어, 자연적으로 발생하는 항체, 세포 단백질, 세포 및 생물학적 시스템의 다른 성분들과 최소한의 상호작용을 나타냄을 의미한다. 그리하여, 특이적으로 상기 최소한의 상호작용, 예를 들어, 약물 및 전구 약물(prodrug)을 유도하고자 하는 기질 및 기능기는 생체적합성이 있는 것으로 간주한다. 바람직하게는(세포독성이 있는 화합물, 예를 들어, 항암제를 제외하고), 만약 정상세포에 목적하는 전신적인 인 비보 농도와 유사한 농도로 인 비트로에서 첨가된다면, 화합물은 "생체적합한" 것으로, 인 비보에서 화합물의 반감기(예를 들어, 인 비보에서 투여된 화합물의 50%가 제거/깨끗해지는데 필요한 시간)에 해당하는 시간 동안 1% 이하로 세포 죽음을 유발하고, 인 비보에서 그들의 투여는 최소한의 의학적으로 허용 가능한 염증, 이물질 반응, 면역독성, 화학적 독성 및/또는 다른 그러한 역효과를 유도한다. 상기 문장에서, 용어 "정상세포"는 시험 화합물에 의해 파괴되거나 그렇지 않으면 유의적으로 영향을 받지 않는 세포를 의미한다.
"생분해성": 본원에서 사용된 바와 같이 "생분해성" 고분자는 인 비보에서 생물학적 프로세싱에 민감한 고분자이다. 본원에서 사용된 바와 같이, "생분해성" 화합물 또는 모이어티는 세포에 의해 둘러싸일 때, 리소좀 또는 다른 화학적 장치에 의해 또는 세포에 대한 유의적인 독성 효과 없이 세포가 재사용하거나 처분하는 성분들로 가수분해되어 분해될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "생물절단성"은 "생분해성"과 같은 의미를 갖는다. 바람직하게는, 분해 단편은 인 비보에서 거의 또는 기관 또는 세포의 초과 적재 또는 그러한 초과 적재 또는 다른 역효과에 의해 유발되는 병리적 과정을 유도하지 않는다. 생분해 과정의 예시로 효소적 및 비-효소적 가수분해, 산화 및 환원을 포함한다. 본원에 기재된 생분해성 단백질-고분자-약물 컨쥬게이트(또는 그들의 성분, 예를 들어, 생분해성 고분자 담체 및 담체와 항체 또는 약물 분자 사이의 링커)의 비-효소적 가수분해를 위한 적당한 조건은 예를 들어, 리소좀의 세포내 구획의 pH 및 온도에서 생분해성 컨쥬게이트의 물로의 노출을 포함한다. 일부 단백질-고분자-약물 컨쥬게이트(또는 그들의 성분, 예를 들어, 생분해성 고분자 담체 및 담체와 항체 또는 약물 분자 사이의 링커)의 생분해는 또한 동물체의 낮은 pH 지역, 예를 들어, 염증 부위에서, 활성화 대식세포 또는 분해 활성 인자를 방출하는 다른 세포의 근접 부위에서 세포외적으로 향상될 수 있다. 바람직한 특정 구체예에서, pH ~7.5에서 고분자 담체의 효과적인 크기는 1 내지 7일 내내 검출 가능하게 변화를 보이지 않으며, 적어도 몇 주 동안 원래의 고분자 크기의 50% 이내를 유지한다. 반면 pH ~5에서, 고분자 담체는 바람직하게는 1 내지 5일에 검출 가능하게 분해되며, 몇 주에서 몇 달 동안 낮은 분자량의 단편으로 완전히 변형된다. 그러한 시험에서 고분자의 원래 상태는 예를 들어, 크기 배제 HPLC에 의해 측정될 수 있다. 어떤 경우에 더 빠른 분해가 바람직할 수 있으나, 일반적으로 세포에 의한 대사율 또는 고분자 단편의 배설을 능가하지 않는 속도로 세포에서 고분자가 분해되는 것이 훨씬 바람직할 것이다. 바람직한 구체예에서, 고분자 및 고분자 생분해 부산물은 생체적합하다.
" 말레이미도 차단 화합물": 본원에서 사용된 바와 같이, 말레이미드와 반응하여 석신이미드로 전환할 수 있는 화합물을 의미하며, "말레이미도 차단 모이어티"는 전환 시 석신이미드에 부착된 화학적 모이어티를 의미한다. 특정 구체예에서, 말레이미도 차단 화합물은 말레이미드와 반응하기 위한 말단 티올기를 갖는 화합물이다. 일 구체예에서, 말레이미도 차단 화합물은 시스테인, N-아세틸 시스테인, 시스테인 메틸 에스테르, N-메틸 시스테인, 2-머캅토에탄올, 3-머캅토프로판산, 2-머캅토아세트산, 머캅토메탄올(즉, HOCH2SH), 페닐이 하나 이상의 친수성 치환기로 치환된 벤질 티올, 또는 3-아미노프로판-1-티올이다.
"친수성": 치환기와 연관될 때, 예를 들어, 고분자 단량체 단위 또는 그들을 친수성 또는 수용성으로 만드는 말레이미도 차단 모이어티에서 용어 "친수성"은 당업계에서 이 용어의 일반적인 의미와 본질적으로 다르지는 않으며, 이온화, 극성, 또는 극성화 원자를 포함하거나, 그렇지 않으면, 물 분자에 의해 용매화될 화학적 모이어티를 의미한다. 그리하여, 본원에서 사용된 바와 같이, 친수성기는 상기 명시된 바와 같이, 용어 친수성의 정의 내에 포함되는 지방족, 시클로알킬, 헤테로지방족, 헤테로시클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴 모이어티를 의미한다. 적당한 특이 친수성 유기 모이어티의 예시로, 약 1 내지 12개의 원자의 범위에서 원자들의 사슬을 포함하는 지방족 또는 헤테로지방족기, 하이드록실, 하이드록시알킬, 아민, 카르복실, 아마이드, 카르복실릭 에스테르, 티오에스테르, 알데히드, 니트릴, 이소니트릴, 니트로소, 하이드록실아민, 머캅토알킬, 헤테로사이클, 카바메이트, 카르복실산 및 이의 염, 황산 및 이의 염, 황산 에스테르, 인산 및 이의 염, 인산 에스테르, 폴리글리콜 에테르, 폴리아민, 폴리카르복실레이트, 폴리에스테르 및 폴리티오에스테르를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 어떤 구체예에서, 친수성 치환기는 카르복실기(COOH), 알데히드기(CHO), 케톤기(COC1 -4 alkyl), 메틸롤(CH2OH) 또는 글리콜(예를 들어, CHOH-CH2OH 또는 CH-(CH2OH)2), NH2, F, 시아노, SO3H, PO3H, 등)을 포함한다.
본원에 개시된 고분자와 연관될 때 용어 "친수성"은 일반적으로 당업계에서 이 용어의 사용과 다르지 않으며, 상기 명시된 바와 같이 친수성 기능기를 포함하는 고분자를 의미한다. 바람직한 구체예에서, 친수성 고분자는 수용성 고분자이다. 고분자의 친수성은 수화 에너지의 측정, 또는 두 개의 액체상 사이의 조사를 통한 측정, 또는 소수성, 예를 들어, C4 또는 C18로 알려진 고체상에서 크로마토그래피에 의해 직접적으로 측정될 수 있다.
"고분자 담체 ": 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 고분자 담체는 지정된 링커와 하나 이상의 약물 및/또는 지정된 링커와 하나 이상의 PBRM과 공유적으로 부착하기에 적당하거나, 공유적으로 부착될 수 있는 고분자 또는 변형된 고분자를 의미한다.
"생리적 조건": 본원에서 사용된 바와 같이, 문구 "생리적 조건"은 살아있는 조직의 세포외 체액에서 마주치게 될 것 같은 화학적 조건(예를 들어, pH, 이온력) 및 생화학적 조건(예를 들어, 효소 농도)의 범위와 연관된다. 대부분의 정상 조직의 경우, 생리적 pH는 약 7.0 내지 7.4이다. 순환 혈장 및 정상 간질액은 정상 생리적 조건의 전형적인 예시를 나타낸다.
"약물": 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "약물"은 생물학적으로 활성이 있고 그것을 필요로 하는 대상체에 투여 후 원하는 생리적 효과를 제공하는 화합물을 의미한다(예를 들어, 약학적 활성 성분).
"세포독성": 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "세포독성"은 세포 또는 선별된 세포 집단(예를 들어, 암세포)에 대한 독성을 의미한다. 독성 효과는 세포 죽음 및/또는 세포 용해를 유발할 것이다. 특정 예시에서, 독성 효과는 세포에 치사량에 가까운 파괴적인 효과, 예를 들어, 세포 생장을 늦추거나 멈추게 하는 것일 것이다. 세포독성 효과를 달성하기 위해, 약물 또는 전구 약물은 DNA 손상 제제, 미세관 붕괴제, 또는 세포독성 단백질 또는 펩타이드 등으로 이루어진 군에서 선택될 것이다.
"세포증식억제": 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "세포증식억제"는 세포 생장 및/또는 증식을 억제하거나 멈추게하는 약물 또는 다른 화합물을 의미한다.
" 저분자 ": 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "저분자"는 상대적으로 저분자량을 갖는 자연적으로-발생하거나 인위적으로 만든 분자(예를 들어, 화학적 합성에 의해)를 의미한다. 바람직한 저분자는 그들이 동물, 바람직하게는, 포유동물, 더욱 바람직하게는, 인간에서 국소 또는 전신 효과를 생산하는 생물학적 활성이 있다. 특정 바람직한 구체예에서, 저분자는 약물이고, 저분자는 "약물 분자" 또는 "약물" 또는 "치료제"로 언급된다. 특정 구체예에서, 약물 분자는 약 5 kDa 이하의 분자량을 갖는다. 다른 구체예에서, 약물 분자는 약 1.5 kDa 이하의 분자량을 갖는다. 구체예에서, 약물 분자는 빈카 알칼로이드, 오리스타틴, 듀오카마이신, 튜불리신, 비-천연 캄토테신 화합물, 토포이소머라아제 억제제, DNA 결합 약물, 키나아제 억제제, MEK 억제제, KSP 억제제, 칼리케아미신, SN38, 피롤로벤조디아제핀스 및 이의 유사물로부터 선택된다. 바람직하게는, 반드시 그런 것은 아니라, 약물은 적당한 정부기관 또는 기구, 예를 들어, FDA에 의해 사용에 안전하고 효과적인 것으로 이미 간주하는 것이다. 예를 들어, 그 내용이 본원에 참고문헌으로 포함되어 있는 21 C.F.R. §§330.5, 331 내지 361, 및 440 내지 460 하에서 FDA에 나열된 인간 사용을 위한 약물; 21 C.F.R. §§ 500 내지 589 하에서 FDA에 나열된 동물용 약물이 본 친수성 고분자로 사용하기에 모두 적당한 것으로 고려된다.
"약물 유도체" 또는 "변형 약물" 등은 본원에서 사용된 바와 같이 본원에 개시된 컨쥬게이트 및 약물 분자를 고분자 담체에 부착할 수 있는 기능기에 의해 전달되는 약물을 포함하는 화합물을 의미한다.
"활성형"은 본원에서 사용된 바와 같이, 인 비보 또는 인 비트로에서 의도된 약학적 효능을 나타내는 화합물의 형태를 의미한다. 특히, 본원에 개시된 컨쥬게이트에 의해 전달되는 약물 분자가 컨쥬게이트로부터 방출될 때, 활성형은 약물 자체 또는 그것의 유도체일 수 있고, 의도된 치료적 특성들을 나타낸다. 컨쥬게이트로부터 약물의 방출은 약물이 고분자 담체에 부착하는 링커의 생분해성 결합의 절단에 의해 달성될 수 있다. 따라서, 활성 약물 유도체는 링커 부분을 포함할 수 있다.
" PHF "는 폴리(1-하이드록시메틸에틸렌 하이드록시메틸-포말)을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "고분자 단위", "단량체의 단위", "단량체", "단량체 단위", "단위"는 모두 고분자의 반복 구조 단위를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 고분자 또는 고분자 담체/스캐폴드 또는 고분자 컨쥬게이트의 "분자량" 또는 "MW"는 달리 특정되지 않는 한 변형되지 않은 고분자의 중량 평균 분자량을 의미한다.
본 발명은 본 화합물에서 나타나는 원자의 모든 동위원소를 포함한다. 동위원소는 같은 원자 수를 가지나 질량 수가 다른 원자들을 포함한다. 일반적인 예시 및 제한 없는 방식으로, 수소의 동위원소는 삼중수소 및 중수소를 포함한다. 탄소의 동위원소는 C-13 및 C-14를 포함한다.
본 발명은 화합물의 광학 이성질체 및 상호변환 이성질체를 의미하거나 이를 포함하는 모든 이성질체를 포함하고, 광학 이성질체는 거울 이성질체 및 부분입체 이성질체, 키랄성 이성질체 및 비-키랄성 이성질체를 포함하고, 광학 이성질체는 라세미체 및 비-라세미체 혼합물을 포함하는 광학 이성질체의 혼합물뿐만 아니라 분리된 광학 이성질체를 포함하고, 이성질체는 분리된 형태 또는 하나 이상의 다른 이성질체의 혼합물로 존재할 것이다.
HER2 항체
본원에 개시된 단클론 항체는 HER2-매개된 PI3K-Akt 경로 활성을 억제하는 능력을 갖는다.
본원에 개시된 예시 항체로, 예를 들어, XMT 1517 항체, XMT 1518 항체, XMT 1519 항체, 및 XMT 1520 항체를 포함한다. 이들 항체는 인간 HER2에 대한 특이도를 보여주며, 그들은 인 비트로에서 HER2의 기능적 활성을 억제함을 보여주었다.
본원에 기재된 HER2 단클론 항체 각각은 아래에 제시하는 아미노산 및 해당 핵산 서열에서 보여주는 바와 같이, 중쇄(HC), 중쇄 가변 영역(VH), 경쇄(LC), 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 각 항체에서 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역은 아래 아미노산 서열에서 음영으로 표시된다. 중쇄 및 경쇄의 상보성 결정 부위(CDR)는 아래에 제시된 아미노산 서열에서 밑줄로 표시된다. 상보성 결정 부위를 포함하는 아미노산은 E.A. Kabat et al. (Kabat, E.A., et al., Sequences of Protein of immunological interest, Fifth Edition, US Department of Health and Human Services, US Government Printing Office (1991)를 참조할 것)에 명시된 바와 같다.
>XMT 1517 중쇄 아미노산 서열(중쇄 가변 영역(SEQ ID NO:　9) + IgG1 중쇄 불변 영역(SEQ ID NO:　32))
Figure pct00057
>XMT 1517 중쇄 가변 영역 핵산 서열
Figure pct00058
>XMT 1517 경쇄 아미노산 서열(경쇄 가변 영역(SEQ ID NO:　10) + 경쇄 불변 영역(SEQ ID NO:　33))
Figure pct00059
>XMT 1517 경쇄 가변 영역 핵산 서열
Figure pct00060
>XMT 1518 중쇄 아미노산 서열(중쇄 가변 영역(SEQ ID NO:　11) + IgG1 중쇄 불변 영역(SEQ ID NO:　32))
Figure pct00061
>XMT 1518 경쇄 아미노산 서열(경쇄 가변 영역(SEQ ID NO:　12) + 경쇄 불변 영역(SEQ ID NO:　33))
Figure pct00062
>XMT 1519 중쇄 아미노산 서열(중쇄 가변 영역(SEQ ID NO:　13) + IgG1 중쇄 불변 영역(SEQ ID NO:　32))
Figure pct00063
>XMT 1519 중쇄 가변 영역 핵산 서열
Figure pct00064
>XMT 1519 경쇄 아미노산 서열(경쇄 가변 영역(SEQ ID NO:　14) + 경쇄 불변 영역(SEQ ID NO:　33))
Figure pct00065
>XMT 1519 경쇄 가변 영역 핵산 서열
Figure pct00066
>XMT 1520 중쇄 아미노산 서열(중쇄 가변 영역(SEQ ID NO:　15) + IgG1 중쇄 불변 영역(SEQ ID NO:　32))
Figure pct00067
>XMT 1520 경쇄 아미노산 서열(경쇄 가변 영역(SEQ ID NO:　16) + 경쇄 불변 영역(SEQ ID NO:　33))
Figure pct00068
본 발명에서 본원에 기재된 항체 및 이의 항원 결합 단편과 같은 에피토프와 결합하거나 같은 에피토프와 결합하기 위해 교차 경쟁하는 항체 및 이의 항원 결합 단편 역시 포함된다. 예를 들어, 본원에 개시된 항체 및 항원 결합 단편은 특이적으로 HER2에 결합하고, 여기서, 항체 또는 단편은 인간 HER2에 있는 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프와 결합한다(예를 들어, GenBank Accession No. P04626.1)
본원에 개시된 항체 및 이의 항원 결합 단편은 아미노산 서열을 포함하는 인간 HER2 수용체 전장에서 에피토프와 특이적으로 결합한다:
Figure pct00069
본원에 개시된 항체 및 이의 항원 결합 단편은 아미노산 서열을 포함하는 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인(ECD)에서 에피토프에 특이적으로 결합한다:
Figure pct00070
당업자들은 단클론 항체가 본원에 개시된 단클론 항체(예를 들어, XMT 1517, XMT 1518, XMT 1519, 및 XMT 1520)와 같은 특이도를 가지는 경우 전자가 자연 그대로의 결합 파트너 또는 HER2와 결합하는 것으로 알려진 다른 분자와 후자의 결합을 방해하는지를 확인하여 과도한 실험 없이 측정하는 것이 가능할 것으로 인식할 것이다. 만약 시험 단클론 항체가 본원에 개시된 단클론 항체와 경쟁한다면, 본원에 개시된 단클론 항체에 의한 결합이 감소함을 보여줄 때, 그러면, 두 개의 단클론 항체는 같거나, 가깝게 연관된 에피토프에 결합한다.
단클론 항체가 본원에 개시된 단클론 항체의 특이도를 가지는지를 측정하는 또 다른 방법은 본원에 개시된 단클론 항체와 가용성 HER2(정상적으로 반응하여)를 미리 반응시키고 나서, 시험 단클론 항체를 첨가하여 시험 단클론 항체가 HER2와 결합하는 그것의 능력이 억제되는지를 측정하는 것이다. 만약 시험 단클론 항체가 십중팔구 억제된다면, 본원에 개시된 단클론 항체와 같거나, 기능적으로 등가의 에피토프 특이도를 가진다.
본원에 개시된 단클론 항체의 스크리닝은 또한 예를 들어, HER2-매개로 한 PI3K-Akt 경로 활성을 측정하고, 시험 단클론 항체가 PI3K-Akt 경로 활성을 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화 또는 그렇지 않으면 방해할 수 있는지를 측정하여 수행될 수 있다.
HER2 항체들은 예를 들어, 본원에 제공된 실시예에서 기재된 방법들을 이용하여 생산된다. 그 대신에 또는 추가로, HER2, 또는 이의 유도체, 유사물, 동족체 또는 오솔로그에 대한 단클론 항체를 생산하기 위해, 당업계에 공지된 다양한 과정들이 이용될 것이다(예를 들어, 그 내용이 본원에 참고문헌으로 포함되어 있는, Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow E, and Lane D, 1988, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY를 참조할 것). 완전 인간 항체들은 CDR을 포함하여 경쇄 및 중쇄 둘 다의 전장 서열이 인간 유전자로부터 유래한 항체 분자들이다. 그러한 항체들을 여기에서 "인간 항체" 또는 "완전 인간 항체"로 명명된다. 인간 단클론 항체들은 예를 들어, 아래에 제공된 실시예들에 기재된 과정들을 이용하여 제조된다. 인간 단클론 항체는 트리오마 기술을 이용하여 또한 제조될 수 있다: 인간 B-세포 하이브리도마 기술(Kozbor, et al., 1983 Immunol Today 4: 72)를 참조할 것); 및 인간 단클론 항체를 생산하기 위한 EBV 하이브리도마 기술(Cole, et al., 1985 In: Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96를 참조할 것). 인간 단클론 항체는 인간 하이브리도마를 이용하거나(Cote, et al., 1983. Proc Natl Acad Sci USA 80: 2026-2030를 참조할 것), 인 비트로에서 엡스테인 바 바이러스로 인간 B-세포를 형질전환하여(Cole, et al., 1985 In: Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96를 참조할 것) 이용 및 생산될 것이다.
항체는 공지된 기술, 예를 들어, 일차적으로 면역 혈청의 IgG 분획을 제공하는 단백질 A 또는 단백질 G를 이용한 친화도 크로마토그래피로 정제된다. 이어서, 또는 그 대신에, 면역글로불린의 표적이 되는 특이 항원 또는 이의 에피토프를 컬럼에 고정하여 면역친화도 크로마토그래피를 통해 면역 특이 항체를 정제한다. 면역글로불린의 정제는 예를 들어, D. Wilkinson(The Scientist, published by The Scientist, Inc., Philadelphia PA, Vol. 14, No. 8 (April 17, 2000), pp. 25-28)에서 다루고 있다.
HER2가 매개하는 PI3K-Akt 경로 활성을 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화 또는 그렇지 않으면 방해하는 단클론 항체는 예를 들어, 막 결합 및/또는 가용성 HER2, 예를 들어, 마우스, 랫트 또는 인간 HER2, 또는 이의 면역성 단편, 유도체 또는 변이체로 동물을 면역화하여 생산된다. 또는, HER2를 인코딩하는 핵산 분자를 포함하는 벡터로 세포를 형질감염시켜 HER2가 발현되고 형질감염된 세포의 표면에 결합하도록 하여 이 세포로 동물을 면역화시킨다. 또는, 항체 또는 HER2와 결합하는 항원 결합 단편 서열을 포함하는 라이브러리를 스크리닝하여 항체를 얻는다. 이 라이브러리는 예를 들어, 단백질 또는 펩타이드가 조립된 파지 입자의 표면에서 발현되고 인코딩 DNA 서열이 파지 입자 내에 포함되는 박테리오파지 코트 단백질에 융합될 때 박테리오파지에서 제조된다(즉, "파지 디스플레이드 라이브러리"). 그리고 나서, 골수종/B 세포 융합으로 생긴 하이브리도마는 HER2에 대한 반응성에 대해 검사된다. 추가로, Blaise L, Wehnert A, Steukers MP, van den Beucken T, Hoogenboom HR, Hufton SE; Construction and diversification of yeast cell surface displayed libraries by yeast mating: application to the affinity maturation of Fab antibody fragments. Gene. 2004 Nov 24;342(2):211-8; Boder ET, Wittrup KD. Yeast surface display for screening combinatorial polypeptide libraries. Nat Biotechnol. 1997 Jun;15(6):553-7; Kuroda K, Ueda M. Cell surface engineering of yeast for applications in white biotechnology. Biotechnol Lett. 2011 Jan;33(1):1-9. doi: 10.1007/s10529-010-0403-9. Review; Lauer TM, Agrawal NJ, Chennamsetty N, Egodage K, Helk B, Trout BL. Developability index: a rapid in silico tool for the screening of antibody aggregation propensity. J Pharm Sci . 2012 Jan;101(1):102-15; Orcutt K.D. and Wittrup K.D. (2010), 207-233 doi: 10.1007/978-3-642-01144-3_15; Rakestraw JA, Aird D, Aha PM, Baynes BM, Lipovsek D. Secretion-and-capture cell-surface display for selection of target-binding proteins. Protein Eng Des Sel . 2011 Jun;24(6):525-30; US 8,258,082; US 6,300,064; US 6,696,248; US 6,165,718; US 6,500,644; US 6,291,158; US 6,291,159; US 6,096,551; US 6,368,805; US 6,500,644에 개시된 바와 같이, 항체는 효모 항체 디스플레이 라이브러리 및 효모 라이브러리 제시 시스템에서 선별되고 선택적으로 최적화된다. 예시적 효모 라이브러리 제시 시스템은 예를 들어, WO2008118476; WO2009/036379; WO2010105256; 및 WO2012009568에 기재된다. 특정 구체예에서, 그러한 효모 항체 디스플레이 라이브러리 또는 효모 라이브러리 제시 시스템은 인간 전면역 항체 레퍼토리의 다양성 특징을 모방하거나 반영하도록 설계된다. 특정 구체예에서, 그러한 효모 항체 디스플레이 라이브러리 다양성 또는 효모 라이브러리 제시 시스템 다양성은 실리코에서 생산된다. 특정 구체예에서, 그러한 효모 항체 디스플레이 라이브러리 또는 효모 라이브러리 제시 시스템은 사카로마이세스(Saccharomyces) 효모 세포, 예를 들어, 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces Cerevisiae) 세포를 포함한다. 특정 구체예에서, 그러한 효모 항체 디스플레이 라이브러리 또는 효모 라이브러리 제시 시스템은 피치아(Pichia) 세포를 포함한다.
단클론 항체는 예를 들어, 하이브리도마 방법, 예컨대, Kohler and Milstein, Nature, 256:495 (1975)에 기재된 방법을 이용하여 제조된다. 하이브리도마 방법에서, 마우스, 햄스터, 또는 다른 적당한 숙주 동물은 전형적으로 면역제로 면역화되어 면역제에 특이적으로 결합할 항체를 생산하거나 생산할 수 있는 림프구를 유도한다. 또는, 림프구는 인 비트로에서 면역화될 수 있다.
면역제는 전형적으로 단백질 항원, 이의 단편, 또는 이의 융합 단백질을 포함할 것이다. 일반적으로, 인간 유래의 세포가 고려되는 경우에는 말초혈액림프구가 사용되거나, 비-인간 포유동물 기원이 고려되는 경우에는 비장 세포 또는 림프절 세포가 사용된다. 그리고 나서, 림프구는 적당한 융합제, 예를 들어, 폴리에틸렌글리콜을 이용하여 불멸화된 세포주와 융합하여 하이브리도마 세포를 형성한다(Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press, (1986) pp. 59-103). 불멸화된 세포주는 보통 형질전환된 포유동물 세포, 특히 설치류, 소 및 인간 기원의 골수종 세포이다. 보통, 쥐 또는 마우스 골수종 세포주가 사용된다. 하이브리도마 세포는 적당한 배양 배지, 바람직하게는 융합되지 않고 불멸화된 세포의 생장 또는 생존을 억제하는 하나 이상의 기질을 포함하는 배양 배지에서 배양될 수 있다. 예를 들어, 모세포가 효소, 하이포잔틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라아제(HGPRT 또는 HPRT)이 없는 경우, 하이브리도마를 위한 배양 배지는 전형적으로 기질로 HGPRT-결핍 세포의 생장을 방해하기 위한 하이포잔틴, 아미노프테린 및 티미딘을 포함할 것이다("HAT 배지").
바람직한 불멸화된 세포주는 효과적으로 융합하고, 선별된 항체-생산 세포에 의해 항체의 안정한 고수준의 발현을 지원하고, 배지, 예컨대, HAT 배지에 민감한 것들이다. 보다 바람직한 불멸화된 세포주는 예를 들어, Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, California and the American Type Culture Collection, Manassas, Virginia로부터 얻을 수 있는 마우스 골수종 세포주(line)이다. 단클론 항체의 생산을 위한 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주에 대해서도 기재되어 있다(Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, Marcel Dekker, Inc., New York, (1987) pp. 51-63)를 참조할 것).
하이브리도마 세포가 배양되는 배양 배지는 항원에 대한 단클론 항체의 존재에 대해 분석될 수 있다. 바람직하게는, 하이브리도마 세포에 의해 생산된 단클론 항체의 결합 특이도는 면역침전 또는 인 비트로 결합 분석, 예컨대, 방사면역분석(RIA) 또는 ELISA에 의해 측정된다. 이러한 기술 및 분석은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 단클론 항체의 결합 친화도는 Munson and Pollard, Anal. Biochem., 107:220 (1980)의 스캐챠드 분석(Scatchard analysis)에 의해 측정될 수 있다. 더욱이, 단클론 항체의 치료적 적용 시 표적 항원에 대한 높은 특이도 정도 및 높은 결합 친화도를 갖는 항체를 확인하는 것이 중요하다.
목적하는 하이브리도마 세포를 확인한 후, 제한적 희석 과정을 통해 클론을 서브클로닝하고, 표준 방법에 따라 배양한다(Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press, (1986) pp. 59-103를 참조할 것). 이러한 목적을 위한 적당한 배양으로, 예를 들어, Dulbecco's Modified Eagle's Medium 및 RPMI-1640 배지를 포함한다. 또는, 하이브리도마 세포는 포유동물의 복수(ascites)처럼 인 비보에서 자랄 수 있다.
서브클론에 의해 분비된 단클론 항체는 전통적인 면역글로불린 정제 과정, 예를 들어, 단백질 A-세파로우즈, 하이드록시아파타이트 크로마토그래피, 젤 전기영동, 투석 또는 친화도 크로마토그래피에 의해 배양 배지 또는 복수액으로부터 분리 또는 정제할 수 있다.
또한, 단클론 항체는 재조합 DNA 방법, 예를 들어, 미국 특허 제4,816,567호에 기재된 것에 따라 제조될 수 있다. 본원에 개시된 단클론 항체를 인코딩하는 DNA는 전통적인 과정(예를 들어, 마우스 항체의 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오타이드 프로브를 이용하여)을 이용하여 쉽게 분리하고 시퀀싱할 수 있다. 본원에 개시된 하이브리도마 세포는 그러한 DNA의 바람직한 공급원으로서 제공한다. 분리될 때, DNA는 발현 벡터에 포함될 수 있고, 숙주 세포, 예컨대, 원숭이 COS 세포, CHO 세포, 그렇지 않으면 면역글로불린 단백질을 생산하지 않는 골수종 세포에 형질감염되어 재조합 숙주 세포에서 단클론 항체의 합성을 얻는다. 또한, DNA는 예를 들어, 상동의 마우스 서열 대신에 인간 중쇄 및 경쇄 불변 도메인을 코딩하는 서열을 치환하여(미국 특허 제4,816,567호; Morrison, Nature 368, 812-13 (1994)를 참조할 것), 또는, 비-면역글로불린 폴리펩타이드에 대한 코딩 서열의 전체 또는 일부를 면역글로불린 코딩 서열에 공유적으로 결합시켜 변형(수식)할 수 있다. 그러한 비-면역글로불린 폴리펩타이드는 본원에 개시된 항체의 불변 도메인에 치환되거나, 본원에 개시된 항체의 항원-결합 부위의 가변 도메인에 치환되어 키메릭 2가 항체를 생산한다.
본원에 개시된 단클론 항체는 완전 인간 항체 또는 인간화 항체를 포함한다. 이들 항체는 투여된 면역글로불린에 대해 인간에 의한 면역 반응을 일으키지 않고 인간에 투여하기에 적당하다.
인간화 또는 완전 인간 HER2 항체는 예를 들어, 아래 제공되는 실시예에서 기재된 과정을 이용하여 생산된다.
다른, 대체 방법들에서, HER2 항체는 예를 들어, 인간 서열만을 포함하는 항체를 이용하는 파지-디스플레이 방법을 이용하여 개발된다. 그러한 접근은 종래기술, 예를 들어, 그 내용이 본원에 참고문헌으로 포함되어 있는 WO92/01047 및 미국 특허 제6,521,404호에 공지되어 있다. 이 접근에서, 경쇄 및 중쇄의 무작위 쌍을 전달하는 파지의 조합 라이브러리는 HER2 또는 이의 단편의 천연 또는 재조합 공급원을 이용하여 선별된다. 다른 접근에서, HER2 항체는 인간 HER2 단백질로 형질전환된 비-인간 동물을 면역화하는 것을 포함하는 적어도 하나의 단계의 과정에 의해 생산될 수 있다. 이 접근에서, 이러한 이종의 비-인간 동물의 어떤 내인성 중쇄 및/또는 카파 경쇄 유전자좌(locus)는 항원에 대한 반응에서 면역글로불린을 인코딩하는 유전자를 생산하는데 필요한 재배열을 하지 못하게 하고 무능하게 한다. 또한, 적어도 하나의 인간 중쇄 유전자좌 및 적어도 하나의 인간 경쇄 유전자좌는 안정하게 동물에 형질감염된 바 있다. 그리하여, 투여된 항원에 대한 반응에서, 인간 유전자좌는 항원에 대해 면역특이적인 인간 가변 영역을 인코딩하는 유전자를 제공하기 위해 재배열한다. 그러므로, 면역화 시 이종마우스는 완전 인간 면역글로불린을 분비하는 B-세포를 생산한다.
이종의 비-인간 동물을 생산하기 위한 다양한 기술들이 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 그 내용이 본원에 참고문헌으로 포함되어 있는 미국 특허 제6,075,18호를 참조할 것. 이 일반적인 전략은 1994년에 공개된 최초의 XenoMouse™ 균주의 생산과 관련하여 입증되어 있다. Green et al. Nature Genetics 7:13-21 (1994)를 참조할 것. 또한, 미국 특허 제6,162,963호, 제6,150,584호, 제6,114,598호, 제6,075,181호 및 제5,939,598호; 일본 특허 제3 068 180 B2호, 제3 068 506 B2호 및 제3 068 507 B2호; 유럽 특허 EP 0 463 151 B1; 및 국제특허출원 WO 94/02602, WO 96/34096, WO 98/24893, WO 00/76310 및 연관된 패밀리 특허를 참조할 것이며, 그 내용은 본원에 참고문헌으로 포함된다.
다른 접근에서, Ig 유전자좌의 조각(개별 유전자)의 봉입을 통해 외인성의 Ig 유전자좌가 모방되는 "미니로커스, minilocus" 접근을 이용하였다. 그리하여, 하나 이상의 VH 유전자, 하나 이상의 DH 유전자, 하나 이상의 JH 유전자, mu 불변 영역 및 제2 불변 영역(바람직하게는, 감마 불변 영역)이 동물로의 삽입 구조물에 형성된다. 미국 특허 제5,545,806호, 제5,545,807호, 제5,591,669호, 제5,612,205호, 제5,625,825호, 제5,625,126호, 제5,633,425호, 제5,643,763호, 제5,661,016호, 제5,721,367호, 제5,770,429호, 제5,789,215호, 제5,789,650호, 제5,814,318호, 제5,877; 397호, 제5,874,299호, 제6,023,010호 및 제6,255,458호; 유럽 특허 제0 546 073 B1호; 및 국제특허출원 WO 92/03918, WO 92/22645, WO 92/22647, WO 92/22670, WO 93/12227, WO 94/00569, WO 94/25585, WO 96/14436, WO 97/13852 및 WO 98/24884, 그리고, 연관된 패밀리 특허를 참조할 것.
또한, 미세세포 융합, 염색체의 큰 조각, 또는 전체 염색체를 통해 도입된 마우스 유래의 인간 항체의 생산이 입증되어 있다. 유럽특허출원 제773 288호 및 제843 961호를 참조할 것.
인간 항-마우스 항체(HAMA) 반응은 키메릭 또는 그렇지 않으면 인간화 항체를 제조하는 산업을 선도하고 있다. 키메릭 항체는 인간 불변 영역과 면역 가변 영역을 가지는 한편, 특정 인간 항-키메릭 항체(HACA) 반응이 특히 항체의 만성 또는 복수 투여 용량 이용 시 관찰될 것으로 예상된다. 그리하여, HAMA 또는 HACA 반응의 염려 및/또는 효과를 손상 또는 그렇지 않으면 완화하기 위해 HER2에 대한 완전 인간 항체를 제공하는 것이 바람직할 것이다.
감소한 면역원성을 갖는 항체의 생산은 또한 인간화, 키메릭화 및 적당한 라이브러리를 이용한 디스플레이 기술에 의해 달성된다. 마우스 항체 또는 다른 종 유래의 항체들은 당업계에 공지된 기술을 이용하여 인간화 또는 영장류화될 수 있는 것으로 인식될 것이다. 예를 들어, Winter and Harris Immunol Today 14:43 46 (1993) 및 Wright et al. Crit , Reviews in Immunol . 12125-168 (1992)를 참조할 것. CH1, CH2, CH3, 힌지 도메인, 및/또는 골격 도메인을 해당 인간 서열로 치환하기 위해 재조합 DNA 기술에 의해 목적 항체를 가공할 것이다(WO 92102190 및 미국 특허 제5,530,101호, 제5,585,089호, 제5,693,761호, 제5,693,792호, 제5,714,350호 및 제5,777,085호를 참조할 것). 또한, 키메릭 면역글로불린 유전자의 구축을 위한 Ig cDNA의 이용은 당업계에 공지되어 있다(Liu et al. P.N.A.S. 84:3439 (1987) 및 J. Immunol . 139:3521 (1987)). mRNA는 항체를 생산하는 하이브리도마 또는 다른 세포로부터 분리되어 cDNA를 생산하는데 이용된다. 목적 cDNA는 특정 프라이머를 이용하여 PCR을 통해 증폭될 것이다(미국 특허 제4,683,195호 및 제4,683,202호). 또는, 라이브러리는 목적 서열을 분리하기 위해 제조 및 선별된다. 그리고 나서, 항체의 가변 영역을 인코딩하는 DNA 서열은 인간 불변 영역 서열에 융합된다. 인간 불변 영역 유전자의 서열은 Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of immunological Interest, N.I.H. publication no. 91-3242에서 볼 수 있다. 인간 C 영역 유전자는 공지의 클론으로부터 쉽게 이용할 수 있다. 아이소타입의 선택은 목적하는 효과기 기능, 예컨대, 보체 고정, 또는 항체-의존적 세포성 세포독성에서의 활성에 의해 유도될 것이다. 바람직한 아이소타입으로 IgG1, IgG3 및 IgG4이다. 인간 경쇄 불변 영역, 카파 또는 람다 중 어느 하나가 이용될 것이다. 그리고 나서, 키메릭, 인간화 항체는 전통적인 방법들에 의해 발현된다.
항체 단편, 예컨대, Fv, F(ab')2 및 Fab는 본래의 단백질의 절단, 예를 들어, 프로테아제 또는 화학적 절단을 통해 제조될 것이다. 또는, 끝이 잘린 유전자가 설계된다. 예를 들어, F(ab')2 단편의 한 부분을 인코딩하는 키메릭 유전자는 CH1 도메인 및 H 사슬의 힌지 영역을 인코딩하는 DNA 서열을 포함할 것이며, 이어서, 전사 종결 코돈을 통해 끝이 잘린 분자를 산출한다.
H 및 L J 영역의 공통 서열은 인간 C 영역 세그먼트에 V 영역 세그먼트의 다음의 연결을 위한 J 영역에 유용한 제한효소 자리를 도입하기 위한 프라이머로서 이용하기 위해 올리고뉴클레오타이드를 설계하는데 이용될 것이다. C 영역의 cDNA는 인간 서열에서 유사한 위치에 제한효소 자리를 위치시키는 위치 지정 돌연변이(site directed mutagenesis)에 의해 변형될 것이다.
발현 벡터는 플라스미드, 레트로바이러스, YACs, EBV 유래된 에피좀 등을 포함한다. 편리한 벡터는 임의의 VH 또는 VL 서열이 쉽게 삽입 및 발현되도록 가공된 적당한 제한효소 부위와 함께 기능적으로 완전한 인간 CH 또는 CL 면역글로불린 서열을 인코딩하는 것이다. 그러한 벡터에서, 스플라이싱은 보통 삽입된 J 영역과 인간 C 영역 앞의 스플라이스 수용체 부위 사이, 및 또한, 인간 CH 엑손 내에서 일어나는 스플라이스 영역에서 일어난다. 폴리아데닐화 및 전사 종결은 코딩 영역의 네이티브 염색체 부위 다운스트림에서 일어난다. 결과로 얻은 키메릭 항체는 레트로바이러스 LTR, 예를 들어, SV-40 어얼리 프로모터(Okayama et al. Mol . Cell. Bio. 3:280 (1983)), 라우스 사코마 바이러스 LTR(Gorman et al. P.N.A.S . 79:6777 (1982)), 및 멀로니 뮤린 류케미아 바이러스 LTR(Grosschedl et al. Cell 41:885 (1985))를 포함하여 임의의 강력한 프로모터에 결합할 것이다. 또한, 알 수 있는 바와 같이, 네이티브 Ig 프로모터 등이 이용될 것이다.
추가로, 인간 항체 또는 다른 종 유래의 항체는 파지 디스플레이, 레트로바이러스 디스플레이, 리보좀 디스플레이를 포함하는 디스플레이 타입의 기술 및 당업계에 공지된 기술을 이용한 다른 기술을 통해 생산될 수 있으나, 이에 제한되지는 않으며, 결과로 얻은 분자는 당업계에 공지된 기술, 예컨대, 친화도 성숙화 등에 의한 추가적인 성숙화를 받을 수 있다. Wright et al. Crit, Reviews in Immunol. 12125-168 (1992), Hanes and Pluckthun PNAS USA 94:4937-4942 (1997) (ribosomal display), Parmley and Smith Gene 73:305-318 (1988) (phage display), Scott, TIBS, vol. 17:241-245 (1992), Cwirla et al. PNAS USA 87:6378-6382 (1990), Russel et al. Nucl . Acids Research 21:1081-1085 (1993), Hoganboom et al. Immunol . Reviews 130:43-68 (1992), Chiswell and McCafferty TIBTECH; 10:80-8A (1992), 및 미국 특허 제5,733,743호. 만약 디스플레이 기술이 인간이 아닌 항체를 생산하는데 이용되는 경우, 그러한 항체는 상기 기재된 바와 같이 인간화될 수 있다.
이들 기술을 이용하여, 항체는 HER2 발현 세포, HER2의 가용성 형태, 이의 에피토프 또는 펩타이드 및 거기에 덧붙여 발현 라이브러리로 생산될 수 있으며(미국 특허 제5,703,057호를 참조할 것), 이후 본원에 기재된 활성들에 대해 상기 기재된 바와 같이 선별된다.
본원에 개시된 HER2 항체는 상기 기재된 단일쇄 항체를 인코딩하는 DNA 세그먼트를 포함하는 벡터에 의해 발현될 수 있다.
이들은 벡터, 리포좀, 네이키드 DNA, 어쥬번트-결합된 DNA, 유전자 건, 카테터 등을 포함할 수 있다. 벡터는 예컨대, WO 93/64701에 기재된 표적 모이어티(예를 들어, 세포 표면 수용체에 대한 리간드) 및 핵산 모이어티(예를 들어, 폴리리신)를 갖는 화학적 컨쥬게이트, 바이러스 벡터(예를 들어, DNA 또는 RNA 바이러스 벡터), PCT/US 95/02140 (WO 95/22618)에 기재된 표적 모이어티(예를 들어, 표적 세포에 특이적인 항체) 및 핵산 결합 모이어티(예를 들어, 프로타민)을 포함하는 융합 단백질과 같은 융합 단백질, 플라스미드, 파지 등을 포함한다. 벡터는 염색체, 비-염색체 또는 합성일 수 있다.
바람직한 벡터로 바이러스 벡터, 융합 단백질 및 화학적 컨쥬게이트를 포함한다. 레트로바이러스 벡터는 멀로니 뮤린 류케미아 바이러스(moloney murine leukemia viruses)를 포함한다. DNA 바이러스 벡터가 바람직하다. 이들 벡터는 폭스 벡터, 예컨대, 오소폭스 또는 아비폭스 벡터, 허피스바이러스 벡터, 예컨대, 허피스 심플렉스 I 바이러스(HSV) 벡터(Geller, A. I. et al., J. Neurochem , 64:487 (1995); Lim, F., et al., in DNA Cloning: Mammalian Systems, D. Glover, Ed. (Oxford Univ. Press, Oxford England) (1995); Geller, A. I. et al., Proc Natl . Acad. Sci.: U.S.A. 90:7603 (1993); Geller, A. I., et al., Proc Natl . Acad . Sci USA 87:1149 (1990)를 참조할 것), 아데노바이러스 벡터(LeGal LaSalle et al., Science, 259:988 (1993); Davidson, et al., Nat. Genet 3:219 (1993); Yang, et al., J. Virol. 69:2004 (1995)를 참조할 것) 및 아데노-연관 바이러스 벡터(Kaplitt, M. G. et al., Nat. Genet. 8:148 (1994)를 참조할 것)를 포함한다.
폭스 바이러스 벡터는 유전자를 세포질에 도입한다. 아비폭스 바이러스 벡터는 단기간에만 핵산 발현을 유도한다. 신경 세포에 핵산을 도입하기 위해서는 아데노바이러스 벡터, 아데노-연관 바이러스 벡터 및 허피스 심플렉스 바이러스(HSV) 벡터가 바람직하다. 아데노바이러스 벡터는 아데노-연관 바이러스(약 넉 달)보다 더 짧은 기간(약 두 달) 발현을 유도하여 HSV 벡터보다 짧다. 선택된 특정 벡터는 표적 세포와 처리 조건에 의존할 것이다. 도입은 표준 기술, 예를 들어, 감염, 형질감염, 형질도입 또는 형질전환에 의해 수행될 수 있다. 유전자 전달 방식의 예시로, 예를 들어, 네이키드 DNA, CaPO4 침전 DEAE 덱스트란, 전기천공, 원형질체 융합, 리포펙션, 세포 미세주입, 및 바이러스 벡터를 포함한다.
벡터는 필수적으로 임의의 목적하는 표적 세포를 표적화하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 벡터(예를 들어, 아데노바이러스, HSV)를 목적하는 위치로 인도하는데 정위 주사(stereotaxic injection)가 사용될 수 있다. 추가로, 미니펌프 주입 시스템, 예를 들어, SynchroMed Infusion System을 이용한 뇌혈관내(intracerebroventricular, icv) 주입에 의해 입자가 전달될 수 있다. 벌크 플로우, 이른바 대류(convection)에 근거한 방법이 또한 뇌의 확장된 지역으로 거대 분자를 전달하는데 효과적임을 입증하였는바 표적 세포에 벡터를 전달하는데 유용할 것이다(Bobo et al., Proc . Natl . Acad . Sci. USA 91:2076-2080 (1994); Morrison et al., Am. J. Physiol . 266:292-305 (1994)를 참조할 것). 사용될 수 있는 다른 방법으로, 카테터, 정맥, 비경구, 복막 및 피하 주사, 및 구강 또는 다른 공지의 투여 경로를 포함한다.
이들 벡터는 다양한 방식에서 사용될 수 있는 다량의 항체를 발현하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 샘플에서 HER2의 존재를 검출하기 위해. 항체는 또한 HER2-연관된 신호전달을 붕괴하거나 결합하려는 시도에 사용될 수 있다.
본원에 개시된 항원 단백질에 특이적인 단일-쇄 항체들의 생산을 위해 기술들이 조정될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제4,946,778호를 참조할 것). 게다가, 단백질 또는 이의 유도체, 단편, 유사물 또는 동족체에 대해 목적하는 특이도를 갖는 단클론 Fab 단편의 빠르고 효과적인 확인을 위해, Fab 발현 라이브러리의 구축을 위한 방법들이 조정될 수 있다(예를 들어, Huse, et al., 1989 Science 246: 1275-1281를 참조할 것). 단백질 항원에 대한 유전자형을 포함하는 항체 단편은 당업계에 공지된 기술에 의해 생산되며, (i) 항체 분자의 펩신 소화에 의해 생산된 F(ab')2 단편; (ii) F(ab')2 단편의 이황화 결합을 환원시켜 생산된 Fab 단편; (iii) 파파인 및 환원제를 항체 분자에 처리하여 생산된 Fab 단편 및 (iv) Fv 단편을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명은 또한 Fv, Fab, Fab ' 및 F(ab')2 항-HER2 단편 또는 항-HER2 단편, 단일쇄 항-HER2 항체, 적어도 하나의 완(arm)이 HER2에 결합하는 복합특이적인 항체 및 헤테로컨쥬게이트 항-HER2 항체를 포함한다.
이중특이성 항체들은 적어도 두 개의 상이한 항원에 결합 특이도를 갖는 항체들이다. 본 사례에서, 결합 특이도의 하나는 HER2에 대한 것이다. 두 번째 결합 표적은 세포-표면 단백질 또는 수용체 또는 수용체 서브유닛을 포함하여 임의의 다른 항원이다.
이중특이성 항체를 제조하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 전통적으로, 이중특이성 항체의 재조합 생산은 두 개의 면역글로불린 중쇄/경쇄 쌍의 공동-발현에 기초하며, 두 개의 중쇄가 다른 특이도를 갖는다(Milstein and Cuello, Nature, 305:537-539 (1983)). 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 무작위적인 분류로 인해, 이들 하이브리도마(쿼드로마)는 10개의 다른 항체 분자의 잠재적 혼합물을 생산하고, 단지 한 개가 올바른 이중특이성 구조를 가진다. 올바른 분자의 정제는 보통 친화도 크로마토그래피 단계에 의해 달성된다. 유사한 과정이 1993년 5월 13일자로 공개된 WO 93/08829, 및 Traunecker et al., EMBO J., 10:3655-3659 (1991)에 개시되어 있다.
목적하는 결합 특이도(항체-항원 결합 부위)를 갖는 항체 가변 도메인은 면역글로불린 불변 도메인 서열에 융합될 수 있다. 바람직하게는, 융합은 힌지, CH2 및 CH3 영역의 적어도 한 부분을 포함하여 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 갖는다. 융합의 적어도 하나에서 존재하는 경쇄 결합을 위한 필수적인 부위를 포함하는 제1 중쇄 불변 영역(CH1)을 갖는 것이 바람직하다. 면역글로불린 중쇄 융합을 인코딩하는 DNA 및 원하는 경우, 면역글로불린 경쇄가 개별 발현 벡터에 삽입되고, 적당한 숙주 생물에 공동으로 형질감염된다. 추가로 이중특이성 항체를 생산하는 구체적인 내용은 예를 들어, Suresh et al., Methods in Enzymology , 121:210 (1986)를 참조할 것.
WO 96/27011에 기재된 다른 접근에 따르면, 재조합 세포 배양으로부터 회수된 이형이량체의 비율을 최대화하기 위해 한 쌍의 항체 분자 간의 인터페이스를 가공할 수 있다. 바람직한 인터페이스는 항체 불변 도메인의 CH3 영역의 적어도 한 부분을 포함한다. 이 방법에서, 제1 항체 분자의 인터페이스로부터 하나 이상의 작은 아미노산 측쇄를 더 큰 측쇄(예를 들어, 티로신 또는 트립토판)로 대체한다. 큰 아미노산 측쇄를 더 작은 것(예를 들어, 알라닌 또는 트레오닌)으로 치환함으로써 제2 항체 분자의 인터페이스에 큰 측쇄와 동일하거나 유사한 크기의 보상성 "공동"이 생긴다. 이는 다른 원치않는 최종 산물, 예컨대, 동형이량체에 대해 이형이량체의 산출을 증가시키기 위한 메커니즘을 제공한다.
이중특이성 항체는 전장 항체 또는 항체 단편(예를 들어, F(ab')2 이중특이성 항체)으로 제조될 수 있다. 항체 단편으로부터 이중특이성 항체를 생산하는 기술은 문헌에 기재되어 있다. 예를 들어, 이중특이성 항체는 화학적 결합을 이용하여 제조할 수 있다. Brennan et al., Science 229:81 (1985)은 본래의 항체가 단백질가수분해적으로 절단되어 F(ab')2 단편을 생산하는 과정을 개시하고 있다. 이들 단편은 디티올 착화제, 소듐 아르세나이트의 존재에서 환원되어 비시날 디티올(vicinal dithiols)을 안정화하고, 분자간 이황화 형성을 방해한다. 그리고 나서, 생산된 Fab' 단편은 티오니트로벤조에이트(TNB) 유도체로 전환된다. 그리고 나서, Fab'-TNB 유도체 중 하나는 머캅토에틸아민과의 환원에 의해 Fab'-티올로 다시 전환되고, 동량의 다른 Fab'-TNB 유도체와 혼합하여 이중특이성 항체를 형성한다. 생산된 이중특이성 항체는 효소의 선택적 고정화를 위한 제제로 이용될 수 있다.
추가로, Fab' 단편은 대장균으로부터 직접적으로 회수할 수 있고, 화학적으로 결합하여 이중특이성 항체를 형성할 수 있다. Shalaby et al., J. Exp . Med . 175:217-225 (1992)는 완전히 인간화된 이중특이성 항체 F(ab')2 분자의 생산을 기재하고 있다. 각 Fab' 단편은 개별적으로 대장균에서 분비되고, 인 비트로에서 직접적으로 화학적 커플링을 받아 이중특이성 항체를 형성한다. 그리하여, 이중특이성 항체는 인간 유방 종양 표적에 대해 인간 세포독성 림프구의 용해 활성을 유발할 뿐만 아니라 ErbB2 수용체를 과발현하는 세포와 정상 인간 T 세포에 결합할 수 있다.
재조합 세포 배양으로부터 직접적으로 이중특이성 항체 단편을 제조 및 분리하는 다양한 기술이 또한 기재되어 있다. 예를 들어, 이중특이성 항체는 류신 지퍼를 이용하여 생산된바 있다(Kostelny et al., J. Immunol . 148(5):1547-1553 (1992)). Fos 및 Jun 단백질 유래의 류신 지퍼 펩타이드는 유전자 융합에 의해 두 개의 다른 항체의 Fab' 부분에 연결된다. 항체 동형이량체는 힌지 영역에서 환원되어 단량체를 형성하고 나서, 다시-산화되어 항체 이형이량체를 형성한다. 이 방법은 또한 항체 동형이량체의 생산에 이용될 수 있다. Hollinger et al., Proc . Natl. Acad . Sci . USA 90:6444-6448 (1993)에 기재된 "2가 항체 절편(diabody)"은 이중특이성 항체 단편을 만드는 또 다른 메커니즘을 제공하였다. 단편은 같은 사슬에서 두 개의 도메인 사이에 쌍을 이룰 수 있는 정도로 짧은 링커에 의해 경쇄 가변 도메인(VL)에 결합된 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다. 따라서, 하나의 단편의 VH 및 VL 도메인은 다른 단편의 상보적 VL 및 VH 도메인과 쌍을 이루도록 강요당해, 두 개의 항원-결합 부위를 형성한다. 단일쇄 Fv (sFv) 이량체를 사용하여 이중특이성 항체 단편을 제조하는 다른 전략이 또한 보고되어 있다. Gruber et al., J. Immunol. 152:5368 (1994)를 참조할 것.
이중특이성 항체의 예시로, 두 개의 상이한 에피토프와 결합할 수 있고, 적어도 하나는 본원에 개시된 단백질 항원에서 기원한다. 또는, 면역글로불린 분자의 항-항원성 완(arm)은 특이 항원을 발현하는 세포에 대한 세포성 방어 메커니즘에 집중하기 위해 백혈구에서 자극 분자, 예를 들어, T-세포 수용체 분자(예를 들어, CD2, CD3, CD28, 또는 B7), 또는 IgG (FcγR)에 대한 Fc 수용체, 예를 들어, FcγRI (CD64), FcγRII (CD32) 및 FcγRIII (CD16)에 결합하는 완에 결합될 수 있다. 또한, 이중특이성 항체들은 특이 항원을 발현하는 세포에 세포독성제를 도입하는데 이용될 수 있다. 이들 항체는 항원-결합 완과 세포독성제 또는 방사성핵종 킬레이터, 예컨대, EOTUBE, DPTA, DOTA, 또는 TETA에 결합하는 완을 가지고 있다. 목적하는 다른 이중특이성 항체는 본원에 기재된 단백질 항원에 결합하고 추가로 조직 인자(TF)에 결합한다.
헤테로컨쥬게이트 항체 역시 본 발명의 범주 내에 있다. 헤테로컨쥬게이트 항체는 두 개의 공유적으로 결합된 항체로 구성된다. 그러한 항체는 예를 들어, 원치 않는 세포에 대해 면역계 세포를 표적화하거나(미국 특허 제4,676,980호를 참조할 것) 및 HIV 감염을 치료하기 위해(WO 91/00360; WO 92/200373; EP 03089를 참조할 것) 제안되어 왔다. 항체는 가교결합제를 필요로 하는 것들을 포함하여 합성 단백질 화학에서 공지된 방법들을 이용하여 인 비트로에서 제조될 수 있는 것으로 고려된다. 예를 들어, 면역독소는 이황화 교환 반응을 이용하거나 티오에테르 결합을 형성하여 구축될 수 있다. 이러한 목적을 위한 적당한 시약의 예시로, 이미노티올레이트 및 메틸-4-머캅토부티르이미데이트를 포함하고, 이들은 예를 들어, 미국 특허 제4,676,980호에 개시되어 있다.
예를 들어, 비정상적인 HER2 발현 및/또는 활성과 연관된 질병 및 장애를 치료함에 있어 항체의 유효성을 향상시키기 위해 효과기 기능에 관해 본원에 개시된 항체를 변형하는 것이 바람직할 수 있다. 예를 들어, 시스테인 잔기(들)이 Fc 영역에 도입될 수 있고, 이로 인해, 이 영역에서 사슬 간 이황화 결합이 형성될 수 있다. 그리하여, 생산된 동형이량체 항체는 내재화 능력 및/또는 증가된 보체-매개된 세포 살해 및 항체-의존적 세포성 세포독성(ADCC)을 개선할 수 있다(Caron et al., J. Exp Med ., 176: 1191-1195 (1992) 및 Shopes, J. Immunol ., 148: 2918-2922 (1992)를 참조할 것). 또는, 이중 Fc 영역을 갖도록 항체를 가공할 수 있고, 이로 인해, 보체 용해 및 ADCC 능력이 향상된다(Stevenson et al., Anti-Cancer Drug Design, 3: 219-230 (1989)를 참조할 것).
HER2 항체 컨쥬게이트 :
본 발명은 또한 세포독성제, 예를 들어, 독소(예를 들어, 세균, 곰팡이, 식물 또는 동물 기원의 효소적으로 활성이 있는 독소 또는 이의 단편) 또는 방사성 동위원소(즉, 방사성컨쥬게이트)에 컨쥬게이트된 항체를 포함하는 면역컨쥬게이트에 관한 것이다.
사용될 수 있는 효소적으로 활성이 있는 독소 및 이의 단편은 디프테리아 A 사슬, 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, 엑소톡신 A 사슬(슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 유래), 리신 A 사슬, 아브린 A 사슬, 모데신 A 사슬, 알파-사르신, 유동나무(Aleurites fordii) 단백질, 디안틴 단백질, 파이토라카 아메리카나(Phytolaca americana) 단백질(PAPI, PAPII, 및 PAP-S), 여주(Momordica charantia) 억제제, 쿠르신(curcin), 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스(Sapaonaria officinalis) 억제제, 겔로닌, 미토겔린, 리스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신 및 트리코테센을 포함한다. 다양한 방사성핵종은 방사성동위원소가 결합된 항체(radioconjugated antibodies)의 생산에 이용할 수 있다. 예시로, 212Bi, 131I, 131In, 90Y, 및 186Re를 포함한다.
항체 및 세포독성제의 컨쥬게이트는 다양한 이중기능성 단백질-커플링제, 예를 들어, N-석신이미딜-3-(2-피리딜디티올) 프로피오네이트(SPDP), 이미노티올란(IT), 이미도에스테르의 이중기능성 유도체(예를 들어, 디메틸 아디피미데이트 HCl), 활성 에스테르(예를 들어, 디석신이미딜 수버레이트), 알데히드(예를 들어, 글루타알데히드), 비스-아지도 화합물(예를 들어, 비스(p-아지도벤조일) 헥산디아민), 비스-디아조니움 유도체(예를 들어, 비스-(p-디아조니움벤조일)-에티리렌디아민), 디이소시아네이트(예를 들어, 톨리엔 2,6-디이소시아네이트) 및 비스-활성 플루오린 화합물(예를 들어, 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠)을 이용하여 제조된다. 예를 들어, 리신 면역독소는 Vitetta et al., Science 238: 1098 (1987)에 기재된 대로 제조될 수 있다. 탄소-14-표지된 1-이소티오시아나토벤질-3-메틸디에틸렌 트리아민펜타아세트산(MX-DTPA)는 항체와 방사성핵종의 결합을 위한 예시 킬레이팅제이다(WO94/11026를 참조할 것).
당업자들은 다양한 가능한 모이어티가 본원에 개시된 합성 항체들에 커플링될 수 있음을 인정할 것이다(예를 들어, 그 내용이 본원에 참고문헌으로 포함되어 있는 "Conjugate Vaccines", Contributions to Microbiology and Immunology, J. M. Cruse and R. E. Lewis, Jr (eds), Carger Press, New York, (1989)를 참조할 것).
커플링은 항체 및 다른 모이어티가 그들의 각각의 활성들을 보유하는 한 두 개의 분자와 결합하는 임의의 화학 반응에 의해 달성될 것이다. 이 결합은 많은 화학적 메커니즘, 예를 들어, 공유결합, 친화도 결합, 인터킬레이션, 배위결합 및 복합체 형성을 포함할 수 있다. 그러나, 바람직한 결합은 공유결합이다. 공유결합은 존재하는 측쇄의 직접 축합이나, 외부의 결합 분자의 결합 중 어느 하나에 의해 달성될 수 있다. 많은 2가 또는 다가 연결제(linking agent)는 단백질 분자, 예를 들어, 본 발명의 항체를 다른 분자에 커플링 하는데 유용하다. 예를 들어, 대표적인 커플링제로 유기 화합물, 예를 들어, 티오에스테르, 카보디이미드, 석신이미드 에스테르, 디이소시아네이트, 글루타알데히드, 디아조벤젠 및 헥사메틸렌 디아민을 포함할 수 있다. 이 목록은 당업계에 알려진 다양한 부류의 커플링제를 포괄하고자 하는 것은 아니고, 오히려, 훨씬 일반적인 커플링제의 예시일뿐이다(Killen and Lindstrom, Jour. Immun . 133:1335-2549 (1984); Jansen et al., Immunological Reviews 62:185-216 (1982); 및 Vitetta et al., Science 238:1098 (1987)를 참조할 것).
바람직한 링커는 문헌에 기재되어 있다(예를 들어, MBS(M-maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester)의 이용을 개시하는 Ramakrishnan, S. et al., Cancer Res. 44:201-208 (1984)를 참조할 것). 또는, 올리고펩타이드 링커를 이용하여 항체에 커플링된 할로겐화된 아세틸 하이드라자이드 유도체를 개시하는 미국 특허 제5,030,719호를 참조할 것. 특히 바람직한 링커로, (i) EDC(1-ethyl-3-(3-dimethylamino-propyl) carbodiimide hydrochloride; (ii) SMPT(4-succinimidyloxycarbonyl-alpha-methyl-alpha-(2-pridyl-dithio)-toluene(Pierce Chem. Co., Cat. (21558G); (iii) SPDP(succinimidyl-6 [3-(2-pyridyldithio) propionamido]hexanoate (Pierce Chem. Co., Cat.# 21651G); (iv) Sulfo-LC-SPDP(sulfosuccinimidyl 6 [3-(2-pyridyldithio)-propianamide] hexanoate (Pierce Chem. Co. Cat.# 2165-G); 및 (v) EDC에 컨쥬게이트된 sulfo-NHS(N-hydroxysulfo-succinimide: Pierce Chem. Co., Cat.# 24510)를 포함한다.
상기 기재된 링커는 다른 특성들이 있는 화합물을 포함하여 컨쥬게이트에게 다른 물리-화학적 특성들을 부여한다. 예를 들어, 알킬 카르복실레이트의 sulfo-NHS 에스테르는 방향족 카르복실레이트의 sulfo-NHS 에스테르보다 더 안정하다. 링커를 함유하는 NHS-에스테르는 sulfo-NHS 에스테르보다 덜 안정하다. 추가로, 링커 SMPT는 입체적으로 장애가 있는 이황화 결합을 포함하고, 증가된 안정성을 갖는 컨쥬게이트를 형성할 수 있다. 이황화 결합이 인 비트로에서 절단되므로 이황화 결합은 일반적으로 다른 결합에 비해 덜 안정하여 결과적으로 덜 안정한 컨쥬게이트를 형성한다. Sulfo-NHS는 특히 카보이미드 커플링의 안정성을 향상시킬 수 있다. 카보이미드 커플링(예를 들어, EDC)는 Sulfo-NHS와 함께 사용될 때, 카보이미드 커플링 반응 단독에 비해 가수분해에 대해 훨씬 저항적인 에스테르를 형성한다.
본원에 개시된 항체는 또한 면역리포좀으로 제형화할 수 있다. 항체를 함유하는 리포좀은 Epstein et al., Proc . Natl . Acad . Sci. USA, 82: 3688 (1985); Hwang et al., Proc . Natl Acad . Sci. USA, 77: 4030 (1980); 및 미국 특허 제485,045호 및 제4,544,545호에 기재된 바와 같이 당업계에 공지된 방법들로 제조한다. 향상된 순환 시간을 갖는 리포좀이 미국 특허 제5,013,556호에 개시되어 있다.
특히 유용한 리포좀은 포스파티딜콜린, 콜레스테롤 및 PEG-유도체화된 포스파티딜에탄올아민(PEG-PE)을 포함하는 지질 조성물에 의한 역-상 증발법에 따라 생산될 수 있다. 리포좀은 명시된 기공 크기의 필터를 통해 배출되어 목적하는 직경을 갖는 리포좀을 산출한다. Martin et al., J. Biol . Chem., 257: 286-288 (1982)에 기재된 바와 같이 본 발명의 항체의 Fab' 단편은 이황화-상호교환 반응에 의해 리포좀에 결합할 수 있다.
일 양상에 있어서, 본원에 기재된 컨쥬게이트는 분자량이 약 2 kDa 내지 약 40 kDa인 폴리(1-하이드록시메틸에틸렌 하이드록시메틸-포말)(PHF)을 독립적으로 포함하는 하나 이상의 D-탑재 고분자 스캐폴드에 직접 또는 간접적으로 연결된 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하고, 하나 이상의 D-탑재 고분자 스캐폴드 각각은 독립적으로 화학식 (Ic)의 것이다:
[화학식 Ic]
Figure pct00071
여기서,
LD1은 카르보닐-함유 모이어티이고;
Figure pct00072
에서
Figure pct00073
의 각 존재는 독립적으로 생분해성 결합을 포함하는 제1 링커이고, 결합이 깨질 때, D는 이의 의도된 치료적 효과를 위한 활성형으로 방출되며; 및 LD1과 D 사이의
Figure pct00074
에서
Figure pct00075
는 LD1과 D의 직접 또는 간접 부착을 표시하며;
Figure pct00076
의 각 존재는 독립적으로 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 아직 결합되지 않은 제2 링커이고, 여기서, LP2는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 기능기와 공유결합을 아직 형성하지 않는 기능기를 함유하는 모이어티이며, LD1과 LP2사이의
Figure pct00077
는 LD1과 LP2의 직접 또는 간접 부착을 표시하고, 제2 링커의 각 존재는 제1 링커의 각 존재와는 다르며;
Figure pct00078
의 각 존재는 독립적으로 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 각 D-운반 고분자 스캐폴드를 연결하는 제3 링커이고, 여기서, LP2에 부착된 말단
Figure pct00079
는 LP2의 기능기와 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 기능기 사이의 공유결합 형성 시 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 LP2의 직접 또는 간접 부착을 표시하고; 및 제3 링커의 각 존재는 제1 링커의 각 존재와는 다르며;
m은 1 내지 약 300의 정수이고;
m1은 1 내지 약 140의 정수이며;
m2는 1 내지 약 40의 정수이고;
m3는 0 내지 약 18의 정수이며;
m4은 1 내지 약 10의 정수이고;
m, m1, m2, m3 및 m4의 합은 약 15 내지 약 300이며; 및
분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 연결된 LP2의 총 수는 10 이하이다.
컨쥬게이트는 다음의 특징을 하나 이상 포함할 것이다.
예를 들어, 화학식 (Ic)에서, m1은 1 내지 약 120의 정수(예를 들어, 약 1-90), 및/또는 m3는 1 내지 약 10의 정수(예를 들어, 약 1-8)이다.
예를 들어, 화학식 (Ic)에서 PHF가 약 6 kDa 내지 약 20 kDa의 범위의 분자량을 가질 때(즉, m, m1, m2, m3, 및 m4의 합이 약 45 내지 약 150), m2는 2 내지 약 20의 정수, m3는 0 내지 약 9의 정수, m4는 1 내지 약 10의 정수, 및/또는 m1은 1 내지 약 75의 정수(예를 들어, m1이 약 4-45가 됨).
예를 들어, 화학식 (Ic)에서 PHF가 약 8 kDa 내지 약 15 kDa의 범위의 분자량을 가질 때(즉, m, m1, m2, m3, 및 m4의 합이 약 60 내지 약 110), m2는 2 내지 약 15의 정수, m3는 0 내지 약 7의 정수, m4는 1 내지 약 10의 정수, 및/또는 m1은 1 내지 약 55의 정수(예를 들어, m1이 약 4-30가 됨).
예를 들어, 화학식 (Ic)에서 PHF가 약 2 kDa 내지 약 20 kDa의 범위의 분자량을 가질 때(즉, m, m1, m2, m3, 및 m4의 합이 약 15 내지 약 150), m2는 1 내지 약 20의 정수, m3는 0 내지 약 10의 정수(예를 들어, m3는 0 내지 약 9), m4는 1 내지 약 8의 정수, 및/또는 m1은 1 내지 약 70의 정수, 및 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 연결된 LP2의 총 수는 약 2 내지 약 8이다(예를 들어, 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8).
예를 들어, 화학식 (Ic)에서 PHF가 약 3 kDa 내지 약 15 kDa의 범위의 분자량을 가질 때(즉, m, m1, m2, m3, 및 m4의 합이 약 20 내지 약 110), m2는 2 내지 약 15의 정수, m3는 0 내지 약 8의 정수(예를 들어, m3는 0 내지 약 7), m4는 1 내지 약 8의 정수, 및/또는 m1은 2 내지 약 50의 정수, 및 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 연결된 LP2의 총 수는 약 2 내지 약 8이다(예를 들어, 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8).
예를 들어, 화학식 (Ic)에서 PHF가 약 5 kDa 내지 약 10 kDa의 범위의 분자량을 가질 때(즉, m, m1, m2, m3, 및 m4의 합이 약 40 내지 약 75), m2는 약 2 내지 약 10의 정수(예를 들어, 약 3-10), m3는 0 내지 약 5의 정수(예를 들어, m3는 0 내지 약 4), m4 는 1 내지 약 8의 정수(예를 들어, m4는 1 내지 약 5), 및/또는 m1은 약 2 내지 약 35의 정수(예를 들어, m1은 약 5-35가 됨), 및 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 연결된 LP2의 총 수는 약 2 내지 약 8이다(예를 들어, 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8).
예를 들어, PHF가 2 kDa 내지 40 kDa의 범위의 분자량을 가질 때(예를 들어, 약 6-20 kDa 또는 약 8-15 kDa, 약 2-20 kDa, 또는 약 3-15 kDa, 또는 약 5-10 kDa), PHF 당 약물의 수(예를 들어, m2)는 1 내지 약 40의 정수(예를 들어, 1-20, 또는 약 2-15, 또는 약 3-10, 또는 약 2-10)이다. 이 스캐폴드는 예를 들어, 분자량이 40 kDa 이상(예를 들어, 60 kDa 이상; 80 kDa 이상; 100 kDa 이상; 120 kDa 이상; 140 kDa 이상; 160 kDa 이상; 180 kDa 이상, 또는 200 kDa 이상, 또는 약 40-200 kDa, 40-180 kDa, 40-140 kDa, 60-200 kDa, 60-180 kDa, 60-140 kDa, 80-200 kDa, 80-180 kDa, 80-140 kDa, 100-200 kDa, 100-180 kDa, 100-140 kDa 또는 140-150 kDa)인 분리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 컨쥬게이팅하기 위해 이용될 수 있다. 이 구체예에서, PHF 대한 분리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 약 1:1 내지 약 1:10, 약 1:1 내지 약 1:9, 약 1:1 내지 약 1:8, 약 1:1 내지 약 1:7, 약 1:1 내지 1:6, 약 1:1 내지 1:5, 약 1:1 내지 1:4, 약 1:1 내지 1:3, 약 1:1 내지 약 1:2, 약 1:2 내지 약 1:4, 약 1:2 내지 약 1:3, 약 1:3 내지 약 1:4, 또는 약 1:3 내지 약 1:5이다.
예를 들어, PHF가 2 kDa 내지 40 kDa의 범위(예를 들어, 약 6-20 kDa 또는 약 8-15 kDa, 약 2-20 kDa, 또는 약 3-15 kDa, 또는 약 5-10 kDa)의 분자량을 가질 때, PHF 당 약물의 수(예를 들어, m2)는 1 내지 약 40의 정수(예를 들어, 약 1-20, 또는 약 2-15, 또는 약 3-10 또는 약 2-10)이다. 이 스캐폴드는 예를 들어, 분자량이 140 kDa 내지 180 kDa 또는 140 kDa 내지 150 kDa인 분리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 컨쥬게이트 하는데 이용될 수 있다. 이 구체예에서, PHF 대한 분리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 약 1:1 내지 약 1:10, 약 1:1 내지 약 1:9, 약 1:1 내지 약 1:8, 약 1:1 내지 약 1:7, 약 1:1 내지 약 1:6, 약 1:1 내지 1:5, 약 1:1 내지 약 1:4, 약 1:1 내지 약 1:3, 약 1:1 내지 약 1:2, 약 1:2 내지 약 1:4, 약 1:2 내지 약 1:3, 약 1:3 내지 약 1:4 또는 약 1:3 내지 약 1:5이다.
이 분자량 범위에서 분리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 예를 들어, 전장 길이의 항체, 예를 들어, IgG, IgM를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
예를 들어, PHF가 2 kDa 내지 40 kDa 범위의 분자량을 가질 때, PHF 당 약물의 수 (예를 들어, m2)는 1 내지 약 40의 정수 (예를 들어, 약 1-20 또는 약 2-15 또는 약 3- 10 또는 약 2-10). 이 스캐폴드는 예를 들어, 60 kDa 내지 120 kDa의 분자량을 갖는 분리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 컨쥬게이트 할 때 사용될 수 있다. 이 구체예에서, PHF 대한 분리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 약 1:1 내지 약 1:10, 약 1:1 및 약 1:9, 약 1:1 및 약 1:8, 약 1:1 내지 약 1:7, 약 1:1 내지 약 1:6, 약 1:1 및 약 1:5, 약 1:1 및 약 1:4, 약 1:1 내지 1:3, 1:1 내지 1:2, 1:2 내지 1:4, 1:2 내지 1:3, 1:3 내지 1:4, 또는 약 1:3 내지 약 1:5이다.
이 분자량 범위에서 분리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 예를 들어, 항체 단편, 예를 들어, Fab2 및 카멜리드를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
특정 구체예에서, D는 치료제이다. 특정 구체예에서, 치료제는 분자량이 약 5 kDa 이하, 4 kDa 이하, 3 kDa 이하, 약 1.5 kDa 이하, 또는 약 1 kDa 이하인 저분자이다.
특정 구체예에서, 치료제는 약 1 nM 미만의 IC50를 갖는다.
다른 구체예에서, 치료제는 약 1 nM를 초과하는 IC50를 가지며, 예를 들어, 치료제는 약 1 내지 50 nM의 IC50를 갖는다.
약 1 nM를 초과하는 IC50를 갖는 어떤 치료제(예를 들어, "덜 강력한 약물")는 이미 공지된 컨쥬게이션 기술을 이용한 항체와의 컨쥬게이션에 적당하지 않다. 이론에 구애됨이 없이, 그러한 치료제는 전통적인 기술을 이용한 표적화 항체-약물 컨쥬게이트에 이용하기에 충분하지 않는 효능을 가진다. 왜냐하면, 충분한 카피의 약물(예를 들어, 8 이상)이 이미 알려진 기술을 이용하여 컨쥬게이트의 감소된 약동학 및 물리화학적 특성들을 유도하지 않고 컨쥬게이트 될 수는 없기 때문이다. 그러나, 본원에 기재된 컨쥬게이션 전략을 이용하여 이들 덜 강력한 약물의 충분히 높은 로딩이 달성될 수 있으며, 그리하여 바람직한 약동학 및 물리화학적 특성들을 유지하면서 치료제의 높은 로딩을 유도한다. 그리하여, 본 발명은 또한 분리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편, PHF 및 적어도 8개의 치료제 모이어티를 포함하는 항체-고분자-약물 컨쥬게이트에 관한 것으로, D는 오리스타틴, 돌라스타틴, 모노메틸오리스타틴 E(MMAE), 모노메틸오리스타틴 F(MMAF), 오리스타틴 F, AF HPA, 페닐렌디아민(AFP)이다.
예를 들어, 듀오카르마이신 또는 이의 유사물은 듀오카르마이신 A, 듀오카르마이신 B1, 듀오카르마이신 B2, 듀오카르마이신 C1, 듀오카르마이신 C2, 듀오카르마이신 D, 듀오카르마이신 SA, CC-1065, 아도젤레신, 비젤레신 또는 카르젤레신이다.
D의 다른 예시로, 전체 내용이 여기에 포함되어 있는 미국 특허 공개 제2013-0101546호 및 미국 특허 제8,815,226호; 및 계류중인 출원으로 2014년 10월 10일자로 출원된 미국 출원 제14/512,316호, 2014년 5월 2일자로 출원된 제61/988,011호 및 2014년 6월 11일자로 출원된 제62/010,972호에 기재된 것을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체에 컨쥬게이트 될 수 있는 D-탑재 고분자 스캐폴드의 수는 유리 시스테인 잔기의 수에 의해 제한된다. 일부 구체예에서, 유리 시스테인 잔기는 본원에 기재된 방법들에 의해 항체 아미노산에 도입된다. 본원에 개시된 예시 컨쥬게이트는 1, 2, 3 또는 4개의 가공된 시스테인 아미노산을 갖는 항체를 포함할 수 있다(Lyon, R. et al (2012) Methods in Enzym. 502:123-138). 일부 구체예에서, 하나 이상의 유리 시스테인 잔기는 가공의 사용 없이 이미 항체에 존재하고, 유리 시스테인 잔기가 존재하는 경우 D-탑재 고분자 스캐폴드에 항체를 컨쥬게이트할 때 이용될 것이다. 어떤 구체예에서, 항체는 하나 이상의 유리 시스테인 잔기를 생산하기 위해 항체의 컨쥬게이션 전에 환원 조건에 노출된다.
특정 구체예에서, 본원에 기재된 컨쥬게이트에서, 화학식 (Ic)의 D-탑재 고분자 스캐폴드는 화학식 (Ie)의 것이다:
[화학식 Ie]
Figure pct00080
여기서,
PHF는 약 2 kDa 내지 약 40 kDa 범위의 분자량을 가지고;
D의 각 존재는 독립적으로 5 kDa 이하의 분자량을 갖는 치료제이고, D와 크로보닐기 사이의
Figure pct00081
는 카르보닐기와 D의 직접 또는 간접 부착을 의미하며,
X는 CH2, O, 또는 NH이고;
Xa 및 Xb 중 하나는 수소이고, 다른 하나는 수용성 말레이미도 차단 모이어티이거나, Xa 및 Xb는 둘 다 탄소 원자이고, 그들은 탄소-탄소 이중 결합을 위해 부착된다.
m1는 1 내지 약 140의 정수이고,
m7는 1 내지 약 40의 정수이고, m1 및 m7의 합은 약 2 내지 약 180이며,
m은 1 내지 약 300의 정수이고,
m3a은 0 내지 약 17의 정수이며,
m3b는 1 내지 약 8의 정수이고, m3a 및 m3b의 합은 1 내지 18이고, 및
m, m1, m7, m3a, 및 m3b의 합은 약 15 내지 약 300이다.
특정 구체예에서, 본원에 기재된 컨쥬게이트에서, 화학식 (Ie)의 D-탑재 고분자 스캐폴드는 화학식 (Id)의 것이다:
[화학식 Id]
Figure pct00082
여기서,
Xa 및 Xb 중 하나는 수소이고, 다른 하나는 수용성 말레이미도 차단 모이어티이거나, Xa 및 Xb는 둘 다 탄소 원자로, 그들은 탄소-탄소 이중 결합을 위해 부착되며;
m3a은 0 내지 약 17의 정수이고,
m3b은 1 내지 약 8의 정수이며, m3a 및 m3b의 합은 1 내지 18이고, 및
m, m1, m2, m3a, 및 m3b의 합은 약 15 내지 약 300의 범위이다.
예를 들어, m2 및 m3b의 비율은 1:1 보다 크고 10:1 이하이다.
예를 들어, m2 및 m3b의 비율은 약 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 또는 2:1이다.
예를 들어, m2 및 m3b의 비율은 약 2:1 내지 8:1이다.
예를 들어, m2 및 m3b의 비율은 약 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 또는 2:1이다.
예를 들어, m2 및 m3b의 비율은 2:1 내지 4:1이다.
예를 들어, m2 및 m3b의 비율은 약 4:1, 3:1, 또는 2:1이다.
예를 들어, m2 및 m3b의 비율은 약 3:1 및 5:1이다.
예를 들어, m2 및 m3b의 비율은 약 3:1, 4:1 또는 5:1이다.
예를 들어, 화학식 (Id)에서 PHF가 약 2 kDa 내지 약 20 kDa 범위의 분자량을 가질 때, m, m1, m2, m3a and m3b의 합은 약 15 내지 약 150의 범위이고, m1은 1 내지 약 70의 정수이고, m2는 1 내지 약 20의 정수이며, m3a는 0 내지 약 9의 정수이고, m3b는 1 내지 약 8의 정수이며, PHF 및 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 2 내지 약 8의 정수이다.
예를 들어, 화학식 (Id)에서 PHF가 약 3 kDa 내지 약 15 kDa의 범위의 분자량을 가질 때, m, m1, m2, m3a and m3b의 합은 약 20 내지 약 110의 범위이고, m1은 2 내지 약 50의 정수이고, m2는 2 내지 약 15의 정수이며, m3a는 0 내지 약 7의 정수이고, m3b는 1 내지 약 8의 정수이며, PHF 및 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 2 내지 약 8의 정수(예를 들어, 2 내지 약 6의 정수 또는 2 내지 약 4의 정수)이다.
예를 들어, 화학식 (Id)에서 PHF가 약 5 kDa 내지 약 10 kDa의 범위의 분자량을 가질 때, m, m1, m2, m3a and m3b의 합은 약 40 내지 약 75의 범위이고, m1은 2 내지 약 35의 정수이고, m2는 2 내지 약 10의 정수이며, m3a는 0 내지 약 4의 정수이고, m3b는 1 내지 약 5의 정수이며, PHF 및 분리된 HER2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 2 내지 약 8의 정수(예를 들어, 2 내지 약 6의 정수 또는 2 내지 약 4의 정수)이다.
예를 들어, 수용성 말레이미도 차단 모이어티는 화학식 (II)의 티올-함유 화합물과 말레이미도기의 반응 시 두 개의 올레핀 탄소 원자 중 하나에 공유적으로 부착될 수 있는 모이어티들이다:
[화학식 II]
R90-(CH2)d-SH
여기서,
R90는 NHR91, OH, COOR93, CH(NHR91)COOR93 또는 치환된 페닐기이고;
R93는 수소 또는 C1-4 알킬이며;
R91는 수소, CH3 또는 CH3CO이고,
d는 1 내지 3의 정수이다.
예를 들어, 화학식 (II)의 수용성 말레이미도 차단 화합물은 시스테인, N-아세틸 시스테인, 시스테인 메틸 에스테르, N-메틸 시스테인, 2-머캅토에탄올, 3-머캅토프로피온산, 2-머캅토아세트산, 머캅토메탄올(즉, HOCH2SH), 페닐이 하나 이상의 친수성 치환기로 치환된 벤질 티올, 또는 3-아미노프로판-1-티올일 수 있다. 페닐에의 하나 이상의 친수성 치환기는 OH, SH, 메톡시, 에톡시, COOH, CHO, COC1 -4 알킬, NH2, F, 시아노, SO3H, PO3H 등을 포함한다.
예를 들어, 수용성 말레이미도 차단기는 -S-(CH2)d-R90이고, R90는 OH, COOH, 또는 CH(NHR91)COOR93이고; R93는 수소 또는 CH3이며; R91는 수소 또는 CH3CO이고; 및 d는 1 또는 2이다.
예를 들어, 수용성 말레이미도 차단기는 -S-CH2-CH(NH2)COOH이다.
예를 들어, PHF가 2 kDa 내지 40 kDa의 범위의 분자량을 가질 때(예를 들어, 약 2-20 kDa, 또는 약 3-15 kDa, 또는 약 5-10 kDa), PHF 당 약물의 수(예를 들어, m2)는 1 내지 약 40의 정수이다(예를 들어, 약 1-20 또는 약 2-15 또는 약 3-10 또는 약 2-10). 이 스캐폴드는 예를 들어, 40 kDa 이상의 분자량(예를 들어, 60 kDa 이상; 80 kDa 이상; 또는 100 kDa 이상; 120 kDa 이상; 140 kDa 이상; 160 kDa 이상, 180 kDa 이상, 또는 200 kDa 이상, 또는 약 40-200 kDa, 40-180 kDa, 40-140 kDa, 60-200 kDa, 60-180 kDa, 60-140 kDa, 80-200 kDa, 80-180 kDa, 80-140 kDa, 100-200 kDa, 100-180 kDa, 100-140 kDa 또는 140-150 kDa)를 갖는 분리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 컨쥬게이트 하기 위해 사용될 수 있다. 이 구체예에서, PHF 대한 분리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 약 1:1 내지 약 1:10, 약 1:1 내지 약 1:9, 약 1:1 내지 약 1:8, 약 1:1 내지 약 1:7, 약 1:1 내지 약 1:6, 약 1:1 내지 약 1:5, 약 1:1 내지 약 1:4, 약 1:1 내지 약 1:3, 약 1:1 내지 약 1:2, 약 1:2 내지 약 1:8, 약 1:2 내지 약 1:6, 약 1:2 내지 약 1:5, 약 1:2 내지 약 1:4, 약 1:2 내지 약 1:3, 약 1:3 내지 약 1:4, 또는 약 1:3 내지 약 1:5이다.
예를 들어, PHF가 2 kDa 내지 40 kDa의 범위의 분자량을 가질 때(예를 들어, 약 2-20 kDa, 또는 약 3-15 kDa, 또는 약 5-10 kDa), PHF 당 약물의 수(예를 들어, m2)는 1 내지 약 40의 정수(예를 들어, 약 1-20 또는 약 2-15 또는 약 3-10 또는 약 2-10)이다. 이 스캐폴드는 예를 들어, 140 kDa 내지 180 kDa 또는 140 kDa 내지 150 kDa의 분자량을 갖는 분리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 컨쥬게이트 하는데 사용될 수 있다. PHF 대한 분리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 약 약 1:1 내지 약 1:10, 약 1:1 내지 약 1:9, 약 1:1 내지 약 1:8, 약 1:1 내지 약 1:7, 약 1:1 내지 약 1:6, 약 1:1 내지 약 1:5, 약 1:1 내지 약 1:4, 약 1:1 내지 약 1:3, 약 1:1 내지 약 1:2, 약 1:2 내지 약 1:8, 약 1:2 내지 약 1:6, 약 1:2 내지 약 1:5, 약 1:2 내지 약 1:4, 약 1:2 내지 약 1:3, 약 1:3 내지 약 1:4, 또는 약 1:3 내지 약 1:5이다.
이 분자량의 범위에서 분리된 항체 또는 항원-결합 단편은 예를 들어, 전장 길이의 항체, 예를 들어, IgG, IgM를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
예를 들어, PHF가 2 kDa 내지 40 kDa의 범위의 분자량을 가질 때(예를 들어, 약 2-20 kDa, 또는 약 3-15 kDa, 또는 약 5-10 kDa), PHF 당 약물의 수(예를 들어, m2) 는 1 내지 약 40의 정수이다(예를 들어, 약 1-20 또는 약 2-15 또는 약 3-10 또는 2-10). 이 스캐폴드는 예를 들어, 60 kDa 내지 120 kDa의 분자량을 갖는 분리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 컨쥬게이트 하는데 이용될 수 있다. 이 구체예에서, PHF 대한 분리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 약 약 1:1 내지 약 1:10, 약 1:1 내지 약 1:9, 약 1:1 내지 약 1:8, 약 1:1 내지 약 1:7, 약 1:1 내지 약 1:6, 약 1:1 내지 약 1:5, 약 1:1 내지 약 1:4, 약 1:1 내지 약 1:3, 약 1:1 내지 약 1:2, 약 1:2 내지 약 1:8, 약 1:2 내지 약 1:6, 약 1:2 내지 약 1:5, 약 1:2 내지 약 1:4, 약 1:2 내지 약 1:3, 약 1:3 내지 약 1:4, 또는 약 1:3 내지 약 1:5이다.
이 분자량의 범위에서 분리된 항체 또는 항원-결합 단편은 예를 들어, 항체 단편, 예컨대, Fab2, scFcFv 및 카멜리드를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
예를 들어, PHF가 2 kDa 내지 40 kDa의 범위의 분자량을 가질 때(예를 들어, 2-20 kDa, 또는 약 3-15 kDa, 또는 약 5-10 kDa), PHF 당 약물의 수(예를 들어, m2) 는 1 내지 약 40의 정수이다(예를 들어, 약 1-20 또는 약 2-15 또는 약 3-10 또는 2-10). 이 스캐폴드는 예를 들어, 40 kDa 내지 80 kDa의 분자량을 갖는 분리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 컨쥬게이트 하는데 이용될 수 있다. 이 구체예에서, PHF 대한 분리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 비율은 약 약 1:1 내지 약 1:10, 약 1:1 내지 약 1:9, 약 1:1 내지 약 1:8, 약 1:1 내지 약 1:7, 약 1:1 내지 약 1:6, 약 1:1 내지 약 1:5, 약 1:1 내지 약 1:4, 약 1:1 내지 약 1:3, 약 1:1 내지 약 1:2, 약 1:2 내지 약 1:8, 약 1:2 내지 약 1:6, 약 1:2 내지 약 1:5, 약 1:2 내지 약 1:4, 약 1:2 내지 약 1:3, 약 1:3 내지 약 1:4, 또는 약 1:3 내지 약 1:5이다.
이 분자량 범위, 즉, 약 40 kDa 내지 약 80 kDa에서 분리된 항체 또는 항원-결합 단편은 예를 들어, 항체 단편, 예컨대, Fabs를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
특정 구체예에서, 본원에 기재된 컨쥬게이트에서, 화학식 (Ie)의 D-탑재 고분자 스캐폴드는 화학식 (If)의 것이며, 여기서, 고분자는 약 2 kDa 내지 약 40 kDa의 범위의 분자량을 갖는 PHF이다:
[화학식 If]
Figure pct00083
여기서,
m은 1 내지 약 300의 정수이고,
m1은 1 내지 약 140의 정수이며,
m2는 1 내지 약 40의 정수이고.
m3a는 0 내지 약 17의 정수이며,
m3b는 1 내지 약 8의 정수이고;
m3a 및 m3b의 합은 1 내지 약 18의 범위이며;
m, m1, m2, m3a, 및 m3b의 합은 약 15 내지 약 300의 범위이고;
말단의
Figure pct00084
는 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하고,
아미노산 서열 FTFSSYSMN(SEQ ID NO:　25)를 포함하는 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 1(complementarity determining region 1(CDRH1)); 아미노산 서열 YISSSSSTIYYADSVKG(SEQ ID NO:　26)을 포함하는 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 2(CDRH2); 아미노산 서열 GGHGYFDL(SEQ ID NO:　27)을 포함하는 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 3(CDRH3); 아미노산 서열 RASQSVSSSYLA(SEQ ID NO:　28)을 포함하는 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 1(CDRL1); 아미노산 서열 GASSRAT(SEQ ID NO:　21)을 포함하는 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 2(CDRL2); 및 아미노산 서열 QQYHHSPLT(SEQ ID NO:　29)를 포함하는 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 3(CDRL3)를 포함하는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 하나 이상의 고분자 스캐폴드의 부착을 표시하고; 및
PHF 및 항체 간의 비율은 10 이하이다.
화학식 (If)의 스캐폴드는 다음의 특징을 하나 이상 포함할 수 있다:
화학식 (If)에서 PHF가 약 2 kDa 내지 약 20 kDa의 범위의 분자량을 가질 때, m1, m2, m3a 및 m3b의 합은 약 15 내지 약 150의 범위이며, m1은 1 내지 약 70의 정수이고, m2는 1 내지 약 20의 정수이며, m3a는 0 내지 약 9의 정수이고, m3b는 1 내지 약 8의 정수이며, m3a 및 m3b의 합은 1 내지 약 10의 범위이고, PHF 및 항체 간의 비율은 2 내지 약 8의 정수이다.
화학식 (If)에서 PHF가 약 3 kDa 내지 약 15 kDa의 범위의 분자량을 가질 때, m, m1, m2, m3a 및 m3b의 합은 약 20 내지 약 110의 범위이고, m1은 2 내지 약 50의 정수이며, m2는 2 내지 약 15의 정수이고, m3a는 0 내지 약 7의 정수이며, m3b은 1 내지 약 8의 정수이고, m3a 및 m3b의 합은 1 내지 약 8의 범위이며; 및 PHF 및 항체 간의 비율은 2 내지 약 8의 정수(예를 들어, 약 2 내지 6 또는 약 2 내지 약 4)이다.
화학식 (If)에서 PHF가 약 5 kDa 내지 약 10 kDa의 범위의 분자량을 가질 때, m, m1, m2, m3a 및 m3b의 합은 약 40 내지 약 75의 범위이고, m1은 약 2 내지 약 35의 정수이며, m2는 약 2 내지 약 10의 정수이고, m3a는 0 내지 약 4의 정수이며, m3b은 1 내지 약 5의 정수이고, m3a 및 m3b의 합은 1 내지 약 5의 범위이며; 및 PHF 및 항체 간의 비율은 2 내지 약 8의 정수(예를 들어, 약 2 내지 6 또는 약 2 내지 약 4)이다.
특정 구체예에서, 오리스타틴 F 하이드록실프로필 아마이드("AF HPA") 및 항체 간의 비율은 약 30:1, 29:1, 28:1, 27:1, 26:1, 25:1, 24:1, 23:1, 22:1, 21:1, 20:1, 19:1, 18:1, 17:1, 16:1, 15:1, 14:1, 13:1, 12:1, 11:1, 10:1, 9:1, 8:1, 7:1 또는 6:1일 수 있다.
특정 구체예에서, AF HPA 및 항체 간의 비율은 약 25:1, 24:1, 23:1, 22:1, 21:1, 20:1, 19:1, 18:1, 17:1, 16:1, 15:1, 14:1, 13:1, 12:1, 11:1, 10:1, 9:1, 8:1, 7:1 또는 6:1일 수 있다.
다른 구체예에서, AF HPA 및 항체 간의 비율은 약 20:1, 19:1, 18:1, 17:1, 16:1, 15:1, 14:1, 13:1, 12:1, 11:1, 10:1, 9:1, 8:1, 7:1 또는 6:1일 수 있다.
일부 구체예에서, AF HPA 및 항체 간의 비율은 약 16:1, 15:1, 14:1, 13:1, 12:1, 11:1 또는 10:1일 수 있다.
일부 구체예에서, AF 및 항체 간의 비율은 약 15:1, 14:1, 13:1, 12:1 또는 11:1일 수 있다.
일부 구체예에서, AF HPA 및 항체 간의 비율은 약 15:1, 14:1, 13:1 또는 12:1일 수 있다.
특정 구체예에서, PHF 및 항체 간의 비율은 약 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1 또는 1:1일 수 있다.
특정 구체예에서, PHF 및 항체 간의 비율은 약 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1 또는 2:1일 수 있다.
다른 구체예에서, PHF 및 항체 간의 비율은 약 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1 또는 1:1일 수 있다.
다른 구체예에서, PHF 및 항체 간의 비율은 약 6:1, 5:1, 4:1, 3:1 또는 2:1일 수 있다.
다른 구체예에서, PHF 및 항체 간의 비율은 약 6:1, 5:1, 4:1 또는 3:1일 수 있다.
일부 구체예에서, PHF 및 항체 간의 비율은 약 5:1, 4:1 또는 3:1일 수 있다.
일부 구체예에서, PHF 및 항체 간의 비율은 약 4:1, 3:1 또는 2:1일 수 있다.
이 분자량의 범위에서 분리된 항체 또는 항원-결합 단편은 예를 들어, 항체 단편, 예컨대, Fabs를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
항체-고분자 약물 컨쥬게이트의 다른 구체예는 예를 들어, 전체 내용이 여기에 본 명세서에 포함되어 있는 미국 특허 제8,815,226호 및 2014년 10월 10일자로 출원된 미국 출원 번호 제14/512,316호 및 2014년 5월 2일자로 출원된 제61/988,011호에 기재된 것들이다.
본 발명은 또한 고분자 담체가 없는 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 직접적으로 컨쥬게이트 될 수 있도록 변형된 약물 유도체, 및 이의 약물-항체 컨쥬게이트에 관한 것이다.
일부 구체예에서, 항체-약물 컨쥬게이트는 약물 모이어티에 컨쥬게이트된 즉, 공유적으로 부착된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 링커, 예를 들어, 비-고분자 링커를 통해 약물 모이어티에 공유적으로 부착된다.
항체-약물 컨쥬게이트(ADC)의 약물 모이어티(D)는 여기에 명시된 바와 같이 세포독성 또는 세포증식억제 효과를 갖는 임의의 화합물, 모이어티 또는 기를 포함한다. 일부 구체예에서, 항체-약물 컨쥬게이트(ADC)는 종양 세포를 표적으로 하는 항체(Ab), 약물 모이어티(D) 및 D에 Ab를 부착하는 링커 모이어티(L)를 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 하나 이상의 아미노산 잔기, 예컨대 리신 및/또는 시스테인을 통해 링커 모이어티(L)에 부착된다.
특정 구체예에서, ADC는 화학식 (Ig)를 갖는다:
[화학식 Ig]
Ab-(L-D)p
여기서, p는 1 내지 약 20이다.
일부 구체예에서, 항체에 컨쥬게이트 될 수 있는 약물 모이어티의 수는 유리 시스테인 잔기의 수에 의해 제한된다. 일부 구체예에서, 유리 시스테인 잔기는 본원에 기재된 방법들에 의해 항체 아미노산 서열에 도입된다. 화학식 (Ig)의 예시 ADC는 1, 2, 3 또는 4개의 가공된 시스테인 아미노산을 갖는 항체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다(Lyon, R. et al (2012) Methods in Enzym . 502:123-138). 일부 구체예에서, 하나 이상의 유리 시스테인 잔기는 가공의 사용 없이 항체에 이미 존재하며, 유리 시스테인 잔기가 존재하는 경우 항체를 약물에 컨쥬게이트하는데 이용될 것이다. 일부 구체예에서, 항체는 하나 이상의 유리 시스테인 잔기를 생산하기 위해 항체의 컨쥬게이션 전에 환원 조건에 노출된다.
일부 구체예에서, "링커"(L)는 하나 이상의 약물 모이어티(D)를 항체(Ab)에 연결하여 화학식 (Ig)의 항체-약물 컨쥬게이트(ADC)를 형성하는데 이용될 수 있는 이중기능성 또는 다기능성 모이어티이다. 일부 구체예에서, 항체-약물 컨쥬게이트(ADC)는 약물 및 항체에 공유적으로 부착하기 위한 반응성 기능성을 갖는 링커를 이용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 항체(Ab)의 시스테인 티올은 링커 또는 약물-링커 중간체의 반응성 기능기와 결합을 형성하여 ADC를 만들 수 있다.
일 양상에 있어서, 링커는 항체에 존재하는 유리 시스테인과 반응하여 공유결합을 형성할 수 있는 기능성을 갖는다. 그러한 반응성 기능성의 비제한적 예시로 말레이미드; 할로아세타마이드; α-할로아세틸; 활성화된 에스테르, 예컨대, 석신이미드 에스테르, 4-니트로페닐 에스테르, 펜타플루오로페닐 에스테르, 테트라플루오로페닐 에스테르; 무수물; 산 클로라이드; 설포닐 클로라이드; 이소시아네이트; 및 이소티오시아네이트를 포함한다. 예를 들어, Klussman, et al (2004), Bioconjugate Chemistry 15(4):765-773의 766페이지 및 본원에 개시된 실시예의 컨쥬게이션 방법을 참조할 것.
일부 구체예에서, 링커는 항체에 존재하는 친전자기와 반응할 수 있는 기능성을 갖는다. 그러한 친전자기의 예시로 알데히드 및 케톤 카르보닐기를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일부 구체예에서, 링커의 반응성 기능성의 헤테로완은 항체의 친전자기와 반응할 수 있고, 항체 단위와 공유결합을 형성한다. 그러한 반응성 기능성의 비제한적 예시로, 하이드라자이드, 옥심, 아미노, 하이드라진, 티오세미카바존, 하이드라진 카르복실레이트 및 아릴하이드라자이드를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
링커는 하나 이상의 링커 성분을 포함할 것이다. 예시적 링커 성분으로, 6-말레이미도카프로일("MC"), 말레이미도프로파노일("MP"), 발린-시트룰린("val-cit" 또는 "vc"), 알라닌-페닐알라닌("ala-phe"), p-아미노벤질옥시카보닐("PAB"), N-석신이미딜 4-(2-피리딜티오) 펜타노에이트("SPP"), 및 4-(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1 카르복실레이트("MCC")를 포함한다. 다양한 링커 성분들이 당업계에 공지되어 있고, 일부는 아래에 기재된다.
링커는 약물의 방출을 촉진하는 "절단성 링커"일 수 있다. 절단성 링커의 비제한적 예시로, 산-불안정형 링커(예를 들어, 하이드라존을 포함), 프로테아제-민감성(예를 들어, 펩티다아제-민감성) 링커, 광불안정형 링커, 또는 이황화-함유 링커(Chari et al., Cancer Research 52:127-131 (1992); U.S. 특허 제5,208,020호)를 포함한다.
특정 구체예에서, 링커는 하기 화학식 (IIg)를 갖는다:
[화학식 IIg]
-Aa-Ww―Yy
여기서,
A는 "스트레처 단위" 및 a는 0 내지 1의 정수이고;
W는 "아미노산 단위" 및 w는 0 내지 12의 정수이며;
Y는 "스페이서 단위", 및 y는 정수 0, 1, 또는 2이다. 화학식 (IIg)의 링커를 포함하는 ADC는 화학식 I(A)를 갖는다: Ab-(Aa-Ww-Yy-D)p, 여기서, Ab, D, 및 p는 상기 화학식 (Ig)에서와 같이 명시된다. 그러한 링커의 예시 구체예는 미국 특허 제7,498,298호에 기재되어 있으며, 그 내용은 본원에 참고문헌으로 포함된다.
일부 구체예에서, 링커 성분은 항체를 다른 링커 성분 또는 약물 모이어티에 연결하는 "스트레처 단위"(A)를 포함한다. 스트레처 단위의 비제한적 예시는 아래에 도시된다(여기서, 물결 선은 항체, 약물 또는 추가 링커 성분에의 공유적 부착 부위를 의미한다):
Figure pct00085
Figure pct00086
MC MP
Figure pct00087
mPEG 또는
Figure pct00088
일부 구체예에서, 링커 성분은 "아미노산 단위"(W)를 포함한다. 일부 그러한 구체예에서, 아미노산 단위는 프로테아제에 의한 링커의 절단을 허용하여 세포내 프로테아제, 예를 들어, 리소좀의 효소에 노출될 때 면역컨쥬게이트로부터 약물의 방출을 촉진한다(Doronina et al. (2003) Nat. Biotechnol . 21:778-784). 예시적 아미노산 단위는 디펩타이드, 트리펩타이드, 테트라펩타이드 및 펜타펩타이드를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 예시적 디펩타이드는 발린-시트룰린(vc 또는 val-cit), 알라닌-페닐알라닌(af 또는 ala-phe); 페닐알라닌-리신(fk 또는 phe-lys); 페닐알라닌-호모리신(phe-homolys); 및 N-메틸-발린-시트룰린(Me-val-cit)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 예시적 트리펩타이드는 글리신-발신-시트룰린(gly-val-cit) 및 글리신-글리신-글리신(gly-gly-gly)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 아미노산 단위는 자연적으로 생기는 아미노산 잔기 및/또는 마이너 아미노산 및/또는 비-자연적으로 생기는 아미노산 유사물, 예를 들어, 시트룰린을 포함할 것이다. 아미노산 단위는 특이 효소, 예를 들어, 종양-관련 프로테아제, 카텝신 B, C 및 D 또는 플라스민 프로테아제에 의한 효소적 절단을 위해 설계되고 최적화될 수 있다.
전형적으로, 펩타이드-타입 링커는 두 개 이상의 아미노산 및/또는 펩타이드 단편 사이의 펩타이드 결합을 형성하여 제조될 수 있다. 그러한 펩타이드 결합은 예를 들어, 액체상 합성법(예를 들어, E. Schrider and K. Lubke (1965) "The Peptides", volume 1, pp 76-136, Academic Press)에 따라 제조될 수 있다.
일부 구체예에서, 링커 성분은 직접적으로 또는 스트레처 단위 및/또는 아미노산 단위를 통해 약물 모이어티에 항체를 연결하는 "스페이서" 단위를 포함한다. 스페이서 단위는 "자기-희생" 또는 "비-자기-희생"일 것이다. "비-자기-희생" 스페이서 단위는 스페이서 단위의 부분 또는 전체가 ADC의 절단 시 약물 모이어티에 결합되어 남아있는 것이다. 비-자기-희생 스페이서 단위의 예시는 글리신 스페이서 단위 및 글리신-글리신 스페이서 단위를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 어떤 구체예에서, 종양-세포 연관된 프로테아제에 의한 글리신-글리신 스페이서 단위를 함유하는 ADC의 효소적 절단은 ADC의 나머지로부터 글리신-글리신-약물 모이어티의 방출을 유도한다. 어떤 그러한 구체예에서, 글리신-글리신-약물 모이어티는 종양 세포에서 가수분해 단계를 거쳐 약물 모이어티로부터 글리신-글리신 스페이서 단위를 절단한다.
"자기-희생" 스페이서 단위는 약물 모이어티의 방출을 허용한다. 어떤 구체예에서, 링커의 스페이서 단위는 p-아미노벤질 단위를 포함한다. 어떤 그러한 구체예에서, p-아미노벤질 알코올은 아마이드 결합에 의해 아미노산 단위에 부착되며, 카바메이트, 메틸카바메이트 또는 카보네이트는 벤질 알코올 및 약물 사이에 만들어진다(Hamann et al. (2005) Expert Opin . Ther . Patents (2005) 15:1087-1103). 일부 구체예에서, 스페이서 단위는 p-아미노벤질옥시카르보닐(PAB)을 포함한다. 일부 구체예에서, 자기-희생 링커를 포함하는 ADC는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00089
여기서,
Q는 -C1-C8 알킬, -O-(C1-C8 알킬), 할로겐, 니트로 또는 시아노이고;
n6는 0 내지 4의 정수이며;
Xa는 하나 이상의 추가적인 스페이서 단위이거나 없으며; 및
p는 1 내지 약 20의 정수이다.
일부 구체예에서, p는 1 내지 10, 1 내지 7, 1 내지 5 또는 1 내지 4의 정수이다. 비제한적 예시의 Xa 스페이서는 다음을 포함한다:
Figure pct00090
및
Figure pct00091
여기서,
R101 및 R102는 수소 및 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택된다. 일부 구체예에서, R101 및 R102는 각각 -CH3이다.
자기-희생 스페이서의 다른 예시는 PAB 기와 전자적으로 유사한 방향족 화합물, 예를 들어, 2-아미노이미다졸-5-메탄올 유도체(미국 특허 제7,375,078호; Hay et al. (1999) Bioorg . Med . Chem . Lett. 9:2237) 및 오쏘- 또는 파라-아미노벤질아세탈을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일부 구체예에서, 스페이서는 아마이드 결합 가수분해 시 고리화, 예를 들어, 치환된 및 비치환된 4-아미노부티르산 아마이드(Rodrigues et al (1995) Chemistry Biology 2:223), 적절하게 치환된 바이시클로[2.2.1] 및 바이시클로[2.2.2] 고리 시스템(Storm et al (1972) J. Amer . Chem. Soc . 94:5815) 및 2-아미노페닐프로피온산 아마이드(Amsberry, et al (1990) J. Org . Chem. 55:5867)에 이용될 수 있다. 글리신 잔기의 α-탄소에의 약물의 결합은 ADC에서 유용할 자기-희생 스페이서의 다른 예시이다(Kingsbury et al (1984) J. Med. Chem. 27:1447).
일부 구체예에서, 링커 L은 분기한 다기능성 링커 모이어티를 통해 항체와 하나 이상의 약물 모이어티의 공유 부착을 위한 수지상 타입의 링커일 것이다(Sun et al (2002) Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 12:2213-2215; Sun et al (2003) Bioorganic & Medicinal Chemistry 11:1761-1768). 수지상 링커는 약물 대 항체의 몰 비율, 즉, ADC의 효능에 연관된 로딩을 증가할 수 있다. 그리하여, 항체가 단지 하나의 반응성 시스테인 티올기를 가지는 곳에서 많은 약물 모이어티는 수지상 링커를 통해 부착될 것이다.
비제한적 예시적 링커는 화학식 (Ig)의 ADC에 대해 아래에서 보여준다:
Figure pct00092
Val-cit
Figure pct00093
MC-val-cit
Figure pct00094
MC-val-cit-PAB
Figure pct00095
;
Figure pct00096
Phe-Lys-PAB-Ab
여기서, R101 및 R102는 수소 및 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택되고;
n5는 0 내지 12의 정수이다.
일부 구체예에서, n은 2 내지 10의 정수이다. 일부 구체예에서, n은 4 내지 8의 정수이다.
일부 구체예에서, R101 및 R102는 각각 -CH3이다.
추가로 비제한적 예시의 ADC는 다음 구조를 포함한다:
Figure pct00097
,
Figure pct00098
Figure pct00099
Figure pct00100
여기서, Xa는 다음과 같다:
Figure pct00101
,
Figure pct00102
,
Figure pct00103
;
Figure pct00104
,
Figure pct00105
,
Figure pct00106
, 또는
Figure pct00107
;
Y는 다음과 같다:
Figure pct00108
or
Figure pct00109
;
각 R103는 독립적으로 수소 또는 C1-C6 알킬이고; 및 n7은 1 내지 12의 정수이다.
일부 구체예에서, 링커는 가용성 및/또는 반응성을 조절하는 기로 치환된다. 비제한적 예시로, 하전된 치환기, 예를 들어, 설포네이트(-SO3 -) 또는 암모늄은 링커제의 물 용해도를 증가하고, ADC를 제조하기 위해 사용된 합성 루트에 따라 항체 및/또는 약물 모이어티와 링커제의 커플링 반응을 촉진하거나, D와 Ab-L(항체-링커 중간체) 또는 Ab와 D-L(약물-링커 중간체)의 커플링 반응을 촉진할 것이다. 일부 구체예에서, 링커의 한 부분이 항체에 커플링되며 링커의 한 부분은 약물에 커플링되어 Ab-(링커 부분)a 이 약물-(링커 부분)b에 커플링되어 화학식 (Ig)의 ADC를 형성한다.
본원에 개시된 화합물은 다음의 링커제로 제조된 ADC를 특별히 고려하나. 이에 제한되지는 않는다: 비스-말레이미도-트리옥시에틸렌 글리콜(BMPEO), N-(β-말레이미도프로필록시)-N-하이드록시 석신이미드 에스테르(BMPS), N-(ε-말레이미도카프로일록시) 석신이미드 에스테르(EMCS), N-[γ-말레이미도부틸릴록시] 석신이미드 에스테르(GMBS), 1,6-헥산-비스-비닐설폰(HBVS), 석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1-카르복시-(6-아미도카프로에이트)(LC-SMCC), m-말레이미도벤조일-N-하이드록시석신이미드 에스테르(MBS), 4-(4-N-말레이미도페닐)부티르산 하이드라자이드(MPBH), 석신이미딜 3-(브로모아세트아미도)프로피오네이트(SBAP), 석신이미딜 아이오도아세테이트(SIA), 석신이미딜 (4-아이오도아세틸)아미노벤조에이트(SIAB), N-석신이미딜-3-(2-피리딜디티오) 프로피오네이트(SPDP), N-석신이미딜-4-(2-피리딜티오)펜타노에이트(SPP), 석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)시클록산-1-카르복실레이트(SMCC), 석신이미딜 4-(p-말레이미도페닐)부틸레이트(SMPB), 석신이미딜 6-[(β-말레이미도프로피온아미도)헥사노에이트] (SMPH), 이미노티올란(IT), sulfo-EMCS, sulfo-GMBS, sulfo-KMUS, sulfo-MBS, sulfo-SIAB, sulfo-SMCC, 및 sulfo-SMPB, 및 석신이미딜-(4-비닐설폰)벤조에이트(SVSB), 및 비스-말레이미드제를 포함하여: 디티오비스말레이미도에탄(DTME), 1,4-비스말레이미도부탄(BMB), 1,4 비스말레이미딜-2,3-디하이드록시부탄(BMDB), 비스말레이미도헥산(BMH), 비스말레이미도에탄(BMOE), BM(PEG)2 (아래에 도시됨), 및 BM(PEG)3 (아래에 도시됨); 이미도에스테르의 이중기능성 유도체(예를 들어, 디메틸 아디피미데이트 HCl), 활성 에스테르(예를 들어, 디석신이미딜 수버레이트), 알데히드(예를 들어, 글루타알데히드), 비스-아지도 화합물(예를 들어, 비스-(p-아지도벤조일)헥산디아민), 비스-디아조니움 유도체(예를 들어, 비스-(p-디아조니움벤조일)-에틸렌디아민), 이이소시아네이트(예를 들어, 톨루엔 2,6-디이소시아네이트) 및 비스-활성 플루오린 화합물(예를 들어, 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠). 어떤 구체예에서, 비스-말레이미드 시약은 항체에서 시스테인의 티올기의 티올-함유 약물 모이어티, 링커 또는 링커-약물 중간체에의 부착을 허용한다. 티올기와 반응하는 다른 기능기는 아이오도아세타마이드, 브로모아세타마이드, 비닐 피리딘, 디설파이드, 피리딜 디설파이드, 이소시아네이트 및 이소티오시아네이트를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
Figure pct00110
BM(PEG)2
Figure pct00111
BM(PEG)3
특정 유용한 링커제는 다양한 상업적 근원, 예를 들어, Pierce Biotechnology, Inc. (Rockford, Ill.), Molecular Biosciences Inc.(Boulder, Colo.)로부터 얻거나, 종래기술에 기재된 과정에 따라 합성될 수 있다; 예를 들어, Toki et al (2002) J. Org . Chem. 67:1866-1872; Dubowchik, et al. (1997) Tetrahedron Letters, 38:5257-60; Walker, M. A. (1995) J. Org . Chem. 60:5352-5355에서; Frisch et al (1996) Bioconjugate Chem. 7:180-186; 미국 특허 제6,214,345호; WO 02/088172; US 2003130189; US2003096743; WO 03/026577; WO 03/043583; 및 WO 04/032828.
탄소-14-표지된 1-이소티오시아나토벤질-3-메틸디에틸렌 트리아민펜타아세트산(MX-DTPA)은 항체에 방사성핵종의 컨쥬게이션을 위한 예시적 킬레이팅제이다. 예를 들어, WO 94/11026를 참조할 것.
HER2 항체 컨쥬게이트의 제조방법:
특정 구체예에서, 컨쥬게이트는 몇 개의 단계에서 형성된다. 이들 단계는 (1) 약물 또는 이의 유도체의 기능기와 반응할 수 있는 기능기를 함유하도록 고분자를 변형하고; (2) 약물이 고분자에 연결되도록 변형된 고분자와 약물 또는 이의 유도체를 반응시키고; (3) 고분자가 분리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 이의 유도체의 기능기와 반응할 수 있는 기능기를 포함하도록 고분자-약물 컨쥬게이트를 변형하고; 및 (4) 변형된 고분자-약물 컨쥬게이트와 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 반응시켜 본원에 개시된 컨쥬게이트를 형성하는 것을 포함한다. 단계 (1)에 의해 생산된 변형된 고분자가 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 기능기와 반응할 수 있는 반응기를 포함하는 경우 단계 (3) 은 생략될 것이다.
다른 구체예에서, 컨쥬게이트는, (1) 제1 약물 또는 이의 유도체의 기능기와 반응할 수 있는 기능기를 포함하도록 고분자를 변형하고; (2) 제1 약물이 고분자에 연결되도록 변형된 고분자와 제1 약물 또는 이의 유도체를 반응시키고; (3) 제2 약물 또는 이의 유도체의 기능기와 반응할 수 있는 다른 기능기를 포함하도록 고분자-약물 컨쥬게이트를 변형하고; (4) 제2 약물이 고분자-약물 컨쥬게이트에 연결되도록 변형된 고분자-약물 컨쥬게이트와 제2 약물 또는 이의 유도체를 반응시키고; (5) 고분자가 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 기능기와 반응할 수 있는 기능기를 포함하도록 두 개의 다른 약물을 함유하는 고분자-약물 컨쥬게이트를 변형하고; 및 (6) 단계 (5)의 변형된 고분자-약물 컨쥬게이트와 분리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 이의 유도체와 반응시켜 본원에 개시된 컨쥬게이트를 형성하는 몇 개의 단계를 거쳐 형성된다. 단계 (5) 및 (6) 은 두 개의 다른 분리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 이의 유도체가 두 개의 다른 약물과 두 개의 다른 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 고분자-약물 컨쥬게이트를 형성하기 위해 컨쥬게이트되는 경우 반복될 것이다.
또 다른 구체예에서, 컨쥬게이트는 몇 개의 단계를 거쳐 형성된다. 이들 단계는, (1) 약물 또는 이의 유도체의 기능기와 반응할 수 있는 기능기를 갖도록 고분자를 변형하고; (2) 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 기능기와 반응할 수 있는 기능기를 포함하도록 고분자를 추가로 변형하고; (3) 약물이 고분자에 연결되도록 변형된 고분자와 약물 또는 이의 유도체를 반응시키고; 및 (4) 변형된 고분자-약물 컨쥬게이트와 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 반응시켜 본원에 개시된 컨쥬게이트를 형성하는 것을 포함한다. 단계 (1) 및 (2) 의 순서 또는 단계 (3) 및 (4) 의 순서는 바뀔 수 있다. 추가로, 단계 (1) 또는 (2) 중 어느 하나는 변형된 고분자가 약물 또는 이의 유도체의 기능기와 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 기능기 둘 다와 반응할 수 있는 기능기를 포함하는 경우 생략될 것이다.
다른 구체예에서, 컨쥬게이트는, (1) 제1 약물 또는 이의 유도체의 기능기와 반응할 수 있는 기능기를 포함하도록 고분자를 변형하고; (2) 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 기능기와 반응할 수 있는 기능기를 포함하도록 고분자를 추가로 변형하고; (3) 제1 약물이 고분자에 연결되도록 변형된 고분자와 제1 약물 또는 이의 유도체를 반응시키고; (4) 제2 약물 또는 이의 유도체의 기능기와 반응할 수 있는 다른 기능기를 포함하도록 고분자-약물 컨쥬게이트를 변형하고; (5) 제2 약물이 고분자-약물 컨쥬게이트에 연결되도록 변형된 고분자-약물 컨쥬게이트와 제2 약물 또는 이의 유도체를 반응시키고; (6) 두 개의 다른 약물을 포함하는 변형된 고분자-약물 컨쥬게이트와 분리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 이의 유도체를 반응시켜 본원에 개시된 컨쥬게이트를 형성하는 몇 개의 단계를 거쳐 형성된다. 단계 (6)은 두 개의 다른 분리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 그들의 유도체가 컨쥬게이트되어 두 개의 다른 약물 및 두 개의 다른 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 고분자-약물 컨쥬게이트를 형성하는 경우 반복될 것이다. 단계 (4)는 변형된 고분자가 두 개의 다른 약물 또는 그들의 유도체와 반응할 수 있는 두 개의 다른 기능기를 포함하도록 단계 (1) 이후에 시행될 것이다. 이 구체예에서, 두 개의 다른 약물 또는 그들의 유도체와 반응할 수 있는 두 개의 다른 기능기를 함유하는 변형된 고분자는 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 기능기와 반응할 수 있는 기능기를 포함하도록 추가로 변형될 수 있다; 두 개의 다른 약물(단계 (3) 및 단계 (5) 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편 단계(6) 중 어느 하나와 변형된 고분자의 반응 전에.
특정 예시 구체예에서, 본원에 개시된 컨쥬게이트는 약물 전달 및 조직 공학과 같은 생물의학적 용도에 사용되며, 고분자 담체는 생체적합성 및 생분해성이다. 특정 구체예에서, 담체는 가용성 고분자, 나노입자, 젤, 리포좀, 마이셀, 슈쳐(suture), 임플란트 등이다. 특정 구체예에서, 용어 "가용성 고분자"는 폴리알(예, 친수성 폴리아세탈 또는 폴리케탈)과 같은 생분해성 생체적합성 고분자를 포함한다. 다른 특정 구체예에서, 담체는 전적으로 합성, 반-합성 또는 자연적으로-발생하는 고분자이다. 다른 특정 구체예에서, 담체는 친수성이다. 본원에 개시된 컨쥬게이트를 생산하기 위한 적당한 고분자 담체의 예시는 미국 특허 제8,815,226호에 기재되어 있고, 그 내용은 본원에 참고문헌으로 포함된다.
일 구체예에서, 고분자 담체는 화학식 (IV)의 단위를 포함한다:
[화학식 IV]
Figure pct00112
여기서,
X'는 고분자 백본의 하이드록시기에 대한 치환기를 나타낸다. 화학식 (IV) 및 본원에 기재된 다른 화학식에 나타난 바와 같이, 각 폴리아세탈 단위는 단위의 글리세롤 모이어티에 부착된 단일 하이드록시기 및 단위의 글리콜알데히드 모이어티에 부착된 X'기를 갖는다. 이는 단지 편리를 위한 것으로, 화학식 (IV) 및 본원에 기재된 다른 화학식의 단위를 갖는 고분자가 하나는 글리콜알데히드 모이어티에 부착되고 다른 하나는 단위의 글리세롤 모이어티에 부착된 것과 두 개의 X'기(또는 말레이미드 말단을 포함하는 링커 같은 다른 치환기)를 갖는 단위뿐만 아니라 단위의 글리콜알데히드 모이어티에 부착된 X'기(또는 말레이미드 말단을 포함하는 링커 같은 다른 치환기)를 갖는 단위 및 단위의 글리세롤 모이어티에 부착된 단일 X'기(또는 말레이미드 말단을 포함하는 링커 같은 다른 치환기)를 갖는 것들의 무작위 분포를 포함할 수 있는 것으로 해석되어야 한다.
일 구체예에서, 본 발명을 실행하기에 적합한 생분해성 생체적합성 폴리알은 약 0.5 내지 약 300 kDa의 분자량을 갖는다. 예를 들어, 생분해성 생체적합성 폴리알은 약 1 내지 약 300 kDa(예, 약 1 내지 약 200 kDa, 약 2 내지 약 300 kDa, 약 2 내지 약 200 kDa, 약 5 내지 약 100 kDa, 약 10 내지 약 70 kDa, 약 20 내지 약 50 kDa, 약, 20 내지 약 300 kDa, 약 40 내지 약 150 kDa, 약 50 내지 약 100 kDa, 약 2 내지 약 40 kDa, 약 6 내지 약 20 kDa, 또는 약 8 내지 약 15 kDa)의 분자량을 갖는다. 예를 들어, 본원에 개시된 고분자 스캐폴드 또는 컨쥬게이트에 사용된 생분해성 생체적합성 폴리알은 약 2 내지 약 40 kDa(예, 약 2-20 kDa, 3-15 kDa, 또는 5-10 kDa)의 분자량을 갖는 PHF이다.
수식자에 대한 컨쥬게이션에 적당한 고분자 담체(예, 생체적합성, 생분해성 고분자 담체)의 제조방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 합성 지침은 미국 특허 제5,811,510호; 제5,863,990호; 제5,958,398호; 제7,838,619호; 제7,790,150호; 및 제8,685,383호에서 볼 수 있다. 숙련된 당업자는 본 발명의 실시에 사용하는 고분자 담체를 제조하기 위해 이들 방법을 적응시키는 방법을 알 것이다.
일 구체예에서, 본 발명의 생분해성 생체적합성 폴리알 컨쥬게이트의 형성 방법은 적당한 다당류를 유효량의 글리콜-특이 산화제와 결합시켜 알데히드 중간체를 형성하는 과정을 포함한다. 폴리알 그 자체인 알데히드 중간체는 그리고 나서 해당 폴리올로 환원되고, 숙시닐화되고, 하나 이상의 적당한 수식자와 결합하여 숙신아미드-함유 결합을 포함하는 생분해성 생체적합성 폴리알 컨쥬게이트를 형성한다.
다른 바람직한 구체예에서, 본 발명에 사용되기 위한 완전 합성 생분해성 생체적합성 폴리알은 적당한 개시제를 적당한 전구체 화합물과 반응시켜 제조될 수 있다.
예를 들어, 완전 합성 폴리알은 보호된 치환 디올과 비닐 에테르의 축합에 의해 제조될 것이다. 다른 방법으로, 예컨대, 고리 열림 중합이 이용될 것이며, 방법의 효능은 치환의 정도 및 보호기의 벌키성에 달려있다.
Figure pct00113
당업자는 고분자량의 생성물을 수득하기 위해 용매 시스템, 촉매 및 다른 인자가 최적화될 수 있음을 알 것이다.
특정 구체예에서, 담체는 PHF이다.
구체예에서, 고분자 담체는 ≤ 1.5, 예를 들어, < 1.4, < 1.3, < 1.2 또는 < 1.1의 다분산지수(PDI)를 갖는 PHF이다.
예를 들어, 40 kDa 내지 200 kDa의 분자량을 갖는 분리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편를 컨쥬게이트 하기 위한 스캐폴드의 고분자 담체는 폴리아세탈, 예를 들어, 약 2 kDa 내지 약 40 kDa 범위(예, 약 2-20 kDa, 또는 약 3-15 kDa, 또는 약 5-10 kDa)의 분자량을 갖는 PHF이다(즉, 변형되지 않은 PHF의 분자량).
예를 들어, 40 kDa 내지 80 kDa의 분자량을 갖는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 컨쥬게이트 하기 위한 본원에 개시된 스캐폴드의 고분자 담체는 폴리아세탈, 에를 들어, 약 2 kDa 내지 약 40 kDa 범위(예, 약 2-20 kDa, 또는 약 3-15 kDa, 또는 약 5-10 kDa)의 분자량을 갖는 PHF이다(즉, 변형되지 않은 PHF의 분자량). 예를 들어, PHF는 약 5 kDa, 6 kDa, 7 kDa, 8 kDa, 9 kDa, 10 kDa, 11 kDa, 12 kDa, 13 kDa, 14 kDa, 또는 15 kDa의 분자량을 갖는다.
이 분자량 범위에서 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 예를 들어, 항체 단편, 예컨대 Fabs를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
예를 들어, 60 kDa 내지 120 kDa의 분자량을 갖는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 컨쥬게이트 하기 위한 본원에 개시된 스캐폴드의 고분자 담체는 폴리아세탈, 예를 들어, 약 2 kDa 내지 약 40 kDa 범위(예, 약 2-20 kDa, 또는 약 3-15 kDa, 또는 약 5-10 kDa)의 분자량을 갖는 PHF이다(즉, 변형되지 않은 PHF의 분자량). 예를 들어, PHF는 약 5 kDa, 6 kDa, 7 kDa, 8 kDa, 9 kDa, 10 kDa, 11 kDa, 12 kDa, 13 kDa, 14 kDa, 또는 15 kDa의 분자량을 갖는다.
이 분자량 범위에서 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 예를 들어, 항체 단편, 예컨대 카멜리드, Fab2, scFvFc 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
예를 들어, 140 kDa 내지 180 kDa 또는 140 kDa 내지 150 kDa의 분자량을 갖는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 컨쥬게이트 하기 위한 본원에 개시된 스캐폴드의 고분자 담체는 폴리아세탈, 에를 들어, 약 2 kDa 내지 약 40 kDa 범위(예, 약 2-20 kDa, 또는 약 3-15 kDa, 또는 약 5-10 kDa)의 분자량을 갖는 PHF이다(즉, 변형되지 않은 PHF의 분자량). 예를 들어, PHF는 약 5 kDa, 6 kDa, 7 kDa, 8 kDa, 9 kDa, 10 kDa, 11 kDa, 12 kDa, 13 kDa, 14 kDa, 또는 15 kDa의 분자량을 갖는다.
이 분자량 범위에서 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 예를 들어, 전장 항체, 예컨대 IgG, IgM을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 개시된 생분해성 생체적합성 컨쥬게이트는 생분해성 및 친수성의 목적하는 요구조건을 충족하기 위해 제조될 수 있다. 예를 들어, 생리적 조건에서, 생분해성 및 안정성 간의 균형이 도달될 수 있다. 예를 들어, 특정 한계치 아래의 분자량을 갖는 분자(일반적으로, 40-100 kDa 이상, 분자의 물리적 형태에 달려있음)는 저분자처럼 신장을 통해 배설되지 않으며, 단지 세포에 섭취되고 세포내 구획, 주로 리소좀에서 분해되어 체내에서 제거될 수 있음이 알려져 있다. 이 관찰은 기능적으로 안정하지만 생분해성 물질이 일반 생리 조건 (pH=7.5±0.5) 및 리소좀의 pH(pH 5 근처)에서 어떻게 그들의 안정성을 조절하여 설계될 수 있는지를 보여준다. 예를 들어, 아세탈 및 케탈기의 가수분해는 산에 의해 촉매되는 것으로 알려져 있고, 그러므로, 폴리알은 예를 들어, 혈장보다 산성의 리소좀 환경에서 일반적으로 덜 안정할 것이다. 예를 들어, 수성 매질에서 37℃에서 pH=5 및 pH=7.5에서 고분자 분해 프로파일을 비교하기 위한 시험을 설계할 수 있고, 따라서, 세포에 의한 섭취 후 정상적인 생리 환경과 "소화성" 리소좀 구획에서 고분자 안정성의 예상 균형을 측정할 수 있다. 이러한 시험에서 고분자 완전성은 예를 들어 크기 배제 HPLC에 의해 측정될 수 있다. 당업자는 본원에 개시된 분해된 컨쥬게이트의 다양한 단편을 연구하기 위한 다른 적당한 방법을 선택할 수 있다.
많은 경우에서, pH=7.5에서 고분자의 유효 크기는 1 내지 7일 동안 검출 가능하게 변하지 않고 적어도 몇 주 동안 원래의 50% 내에 남아있는 것이 바람직할 것이다. 한편, pH=5에서, 고분자는 바람직하게는 1 내지 5일 동안 검출 가능하게 분해되어야 하고, 2주 내지 수개월 기간 내에 완전히 저분자량 단편으로 변형되어야 한다. 어떤 경우에는 더 빠른 분해가 바람직할 수 있지만, 일반적으로 고분자가 세포에 의한 고분자 단편의 대사 또는 배설 속도를 초과하지 않는 속도로 세포에서 분해되는 것이 더 바람직할 수 있다. 따라서, 특정 구체예에서, 본 발명의 컨쥬게이트는 생분해성, 특히 세포에 의한 흡수 및 생물학적 시스템과 관련하여 상대적으로 "비활성"인 것으로 예상된다. 담체 분해의 생성물은 바람직하게는 환경의 pH를 크게 이동시키지 않는다. 풍부한 알코올기는 세포 수용체, 특히 식세포의 수용체에 의한 고분자 인식의 낮은 비율을 제공할 것으로 제안된다. 본 발명의 고분자 백본은 일반적으로 에피토프(예를 들어, 일부 다당류 및 폴리펩타이드에 대해 특징적)를 거의 포함하지 않고, 일반적으로 후자가 바람직하지 않은 한, 인 비보에서 "키 고정식" 유형의 상호작용에 관여할 수 있는 견고한 구조를 포함하지 않는다. 따라서, 본원에 개시된 가교결합된 고체 컨쥬게이트는 낮은 독성 및 생체접착성을 가지며, 이로써 여러 생물의학적 이용에 적합할 것으로 예측된다.
본 발명의 특정 구체예에서, 생분해성 생체적합성 컨쥬게이트는 선형 또는 분지형 구조를 형성할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 생분해성 생체적합성 폴리알 컨쥬게이트는 키랄(선택적으로 활성이 있는)일 수 있다. 선택적으로, 본 발명의 생분해성 생체적합성 폴리알 컨쥬게이트는 비-라세미체(scalemic)일 수 있다.
특정 구체예에서, 본원에 개시된 컨쥬게이트는 수용성이다. 특정 구체예에서, 본원에 개시된 컨쥬게이트는 수-불용성이다. 특정 구체예에서, 본 발명의 컨쥬게이트는 고형이다. 특정 구체예에서, 본원에 개시된 컨쥬게이트는 콜로이드이다. 특정 구체예에서, 본원에 개시된 컨쥬게이트는 입자형이다. 특정 구체예에서, 본원에 개시된 컨쥬게이트는 젤형이다.
하기 반응식 1은 본원에 개시된 고분자 약물 스캐폴드를 제조하는 합성 반응식을 나타낸다. 일 구체예에서, 컨쥬게이트는 몇 단계에서 형성된다: (1) 고분자, PHF는 COOH 모이어티(예, -C(O)-X-(CH2)2-COOH)를 포함하기 위해 변형된다; (2) 그리고 나서, 고분자는 PBRM의 기능기와 반응할 수 있는 말레이미도 모이어티(예, EG2-MI)를 포함하도록 추가로 변형된다; (3) 두 개의 다른 기능기를 포함하는 변형된 고분자는 약물 또는 이의 유도체(예, AF-HPA-Ala)의 기능기와 반응하여 고분자-약물 컨쥬게이트를 형성한다; (4) PBRM의 이황화 결합이 환원된다; (5) 그리고 나서, 환원된 PBRM은 고분자-약물 컨쥬게이트와 반응하여 단백질-고분자-약물 컨쥬게이트를 형성한다; 및 (6) 남아있는 말레이미도 모이어티는 선택적으로 말레이미도 차단 화합물(예, 시스테인)과 반응한다.
다른 구체예에서, 단계 (2) 및 (3) 의 순서는 하기 반응식 1에서 우측 경로에 묘사된 바와 같이 바뀔 수 있다.
[반응식 1]
Figure pct00114
Figure pct00115
또 다른 구체예에서, 상기 단계 (2) 및 (3)은 하기 반응식 2에서 묘사된 바와 같이 동시에 수행된다.
[반응식 2]
Figure pct00116
Figure pct00117
HER2에 대한 항체의 이용
본 발명에 따른 치료적 실체의 투여는 개선된 전이, 전달, 내성 등을 제공하기 위해 제형에 혼입되는 적당한 담체, 부형제 및 다른 제제와 함께 투여될 수 있음을 이해할 것이다. 다양한 적당한 제형들이 모든 약학자들에게 알려져 있다: Remington's Pharmaceutical Sciences (15th ed, Mack Publishing Company, Easton, PA (1975)), particularly Chapter 87 by Blaug, Seymour, therein. 이들 제형은 예를 들어, 분말, 페이스트, 연고, 젤리, 왁스, 오일, 지질, 지질 함유 비히클(양이온 또는 음이온)(예를 들어, Lipofectin™), DNA 컨쥬게이트, 무수 흡수 페이스트, 수중유형 및 유중수형 에멀젼, 에멀젼 카보왁스(다양한 분자량의 폴리에틸렌 글리콜), 반-고체 젤 및 카보왁스를 함유하는 반-고체 혼합물을 포함한다. 전술한 임의의 혼합물은 본 발명에 따른 치료 및 요법에 적절할 수 있지만, 제형 중의 활성 성분이 제형에 의해 불활성화되지 않고, 제형이 생리적으로 양립 가능하고 투여 경로에 견딜 수 있어야 한다. 또한, Baldrick P. "Pharmaceutical excipient development: the need for preclinical guidance." Regul. Toxicol Pharmacol. 32(2):210-8 (2000), Wang W. "Lyophilization and development of solid protein pharmaceuticals." Int . J. Pharm. 203(1-2):1-60 (2000), Charman WN "Lipids, lipophilic drugs, and oral drug delivery-some emerging concepts." J Pharm Sci. 89(8):967-78 (2000), Powell et al. "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA J Pharm Sci Technol . 52:238-311 (1998) 및 제제학자에게 잘 알려진 제형, 부형제 및 담체와 관련된 추가 정보가 들어 있는 인용문헌을 참조할 것.
일 구체예에서, 본원에 개시된 항체, 이의 단편, 및/또는 컨쥬게이트는 치료제로 이용될 것이다. 그러한 제제는 일반적으로 대상체에서 예를 들어, 비정상적인 HER2 활성 및/또는 발현과 연관된 질병 또는 병리의 진단, 예측, 관찰, 치료, 경감, 예방, 및/또는 진행을 지연하기 위해 사용될 것이다. 치료 요법은 표준 방법을 이용하여 대상체, 예를 들어, 비정상적인 HER2 활성 및/또는 발현과 관련된 질병 또는 장애, 예를 들어, 암을 앓고 있는(또는 발병 위험이 있는) 인간 환자를 확인함으로써 수행된다. 항체 제제, 바람직하게는 그의 표적 항원에 대해 높은 특이도와 높은 친화도를 갖는 것이 대상체에 투여되고, 일반적으로, 표적과의 결합으로 인해 효과를 나타낼 것이다. 항체의 투여는 표적의 신호전달 기능을 배제하거나 억제하거나 방해할 것이다. 항체의 투여는 그것이 자발적으로 결합하는 내인성 리간드와 표적의 결합을 배제하거나 저해하거나 방해할 것이다. 예를 들어, 항체는 표적에 결합하고, HER2 활성 및/또는 발현을 조절, 차단, 억제, 감소, 길항, 중화 또는 방해한다.
비정상적인 HER2 활성 및/또는 발현과 연관된 질병 또는 장애는 암을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 표적 암은 항문, 성상세포종, 백혈병, 림프종, 두경부, 간, 고환, 자궁경부, 육종, 혈관종, 식도, 눈, 후두, 입, 중피종, 피부, 골수종, 구강, 직장, 목구멍, 방광, 유방, 자궁, 난소, 전립선, 폐, 대장, 췌장, 신장 또는 위암일 수 있다.
다른 양상에 있어서, 질병 또는 장애는 유방암, 위암, 비-소세포성 폐암(NSCLC) 및 난소암으로부터 선택된 암이다.
일반적으로, 질병 또는 장애의 경감 또는 치료는 질병 또는 장애와 관련된 하나 이상의 증상 또는 의학적 문제의 완화를 포함한다. 예를 들어, 암의 경우, 약물의 치료적 유효량은 다음 중 하나 또는 그 조합을 달성할 수 있다: 암세포의 수를 감소하고; 종양 크기를 줄이고; 말초 기관으로의 암세포 침윤을 억제하고(즉, 어느 정도 감소 및/또는 중지); 종양 전이를 억제하고; 어느 정도 종양 생장을 억제하고; 및/또는 암과 관련된 하나 이상의 증상을 어느 정도 완화하는 것. 일부 구체예에서, 본원에 개시된 조성물은 대상체에서 질병 또는 장애의 발병 또는 재발을 방지하기 위해 사용될 수 있다.
본원에 개시된 항체, 이의 단편, 및/또는 이의 컨쥬게이트의 치료적 유효량은 일반적으로 치료 목적을 달성하는데 필요한 양에 관한 것이다. 상기한 바와 같이, 이것은 항체와 그것의 표적 항원 사이의 결합 상호작용일 수 있고, 어떤 경우에서는 표적의 기능을 방해한다. 투여될 필요가 있는 양은 또한 그것의 특이 항원에 대한 항체의 결합 친화도에 달려있으며, 투여된 항체가 투여되는 다른 대상체의 자유 부피에서 고갈되는 속도에 의존할 것이다. 본원에 개시된 항체 또는 항체 단편, 및/또는 이의 컨쥬게이트의 치료적으로 효과적인 투여를 위한 일반적인 범위는 비제한적 예로, 약 0.1 mg/kg 체중 내지 약 50 mg/kg 체중, 약 0.1 mg/kg 체중 내지 약 100 mg/kg 체중, 또는 약 0.1 mg/kg 체중 내지 약 150 mg/kg 체중일 것이다. 통상적인 투여 빈도는 예를 들어, 1일 2회에서 1개월에 1회(예를 들어, 1일 1회, 1주일에 1회, 2주에 1회, 3주 또는 매월 1회)의 범위일 수 있다. 예를 들어, 본원에 개시된 XMT 1519의 컨쥬게이트, 예컨대, XMT 1519-(EG2-MI-(PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 컨쥬게이트 또는 XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 컨쥬게이트는 약 0.1 mg/kg 내지 약 20 mg/kg(예를 들어, 0.2 mg/kg, 0.5 mg/kg, 0.67 mg/kg, 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 6 mg/kg, 7 mg/kg, 8 mg/kg, 9 mg/kg, 10 mg/kg, 11 mg/kg, 12 mg/kg, 13 mg/kg, 14 mg/kg, 15 mg/kg, 16 mg/kg, 17 mg/kg, 18 mg/kg, 19 mg/kg, 또는 20 mg/kg)로 투여될 수 있다(예를 들어, 매주, 2주 마다, 3주 마다, 또는 매월 단일투여량으로서). 예를 들어, 본원에 개시된 XMT 1519의 컨쥬게이트, 예를 들어, XMT 1519-(EG2-MI-(PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 컨쥬게이트 또는 XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 컨쥬게이트는 HER2-저발현 유방암 또는 HER2-저발현 위암을 치료하기 위해 약 0.1 mg/kg 내지 약 20 mg/kg(예를 들어, 0.2 mg/kg, 0.5 mg/kg, 0.67 mg/kg, 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 6 mg/kg, 7 mg/kg, 8 mg/kg, 9 mg/kg, 10 mg/kg, 11 mg/kg, 12 mg/kg, 13 mg/kg, 14 mg/kg, 15 mg/kg, 16 mg/kg, 17 mg/kg, 18 mg/kg, 19 mg/kg, 또는 20 mg/kg)로 투여될 수 있다(예를 들어, 매주, 2주 마다, 3주 마다, 또는 매월 단일투여량으로서).
치료의 효능은 특정 HER2-관련 장애를 진단 또는 치료하기 위한 임의의 공지된 방법과 관련하여 결정된다. HER2-관련 장애의 하나 이상의 증상의 경감은 항체가 임상적 이점을 부여한다는 것을 알 수 있다.
목적하는 특이도를 갖는 항체의 스크리닝 방법은 ELISA(enzyme linked immunosorbent assay) 및 당업계에 공지된 다른 면역학적으로 매개된 기술을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
다른 구체예에서, HER2에 대해 유도된 항체는 HER2의 위치 측정 및/또는 정량화에 관한 당업계에 공지된 방법에서 사용될 것이다(예를 들어, 적당한 생리적 샘플 내에서 HER2의 수준을 측정하는데 사용하기 위해, 진단 방법에 사용하기 위해, 단백질을 이미징하는데 사용하기 위해, 등). 주어진 구체예에서, 항체 유래된 항원 결합 도메인을 포함하는 HER2에 특이적인 항체 또는 이의 유도체, 단편, 유사물 또는 동족체는 약학적 활성 화합물(이하 "치료제"라 칭한다)로 이용된다.
다른 구체예에서, HER2에 특이적인 항체는 표준 기술, 예컨대, 면역친화도 크로마토그래피 또는 면역침적에 의해 HER2 폴리펩타이드를 분리하는데 이용된다. HER2 단백질에 대해 유도된 항체(또는 이의 단편)는 예를 들어, 주어진 치료 요법의 효능을 결정하기 위해 임상 시험 과정의 일부로서 조직 내 단백질 수준을 관찰하기 위해 진단학적으로 사용될 수 있다. 항체를 검출 가능한 기질에 커플링(즉, 물리적으로 연결)시킴으로써 검출을 용이하게 할 수 있다. 검출 가능한 기질의 예시로, 다양한 효소, 보철기, 형광물질, 발광물질, 생물발광물질 및 방사성물질을 포함한다. 적당한 효소의 예시로, 호스래디쉬 페록시다아제, 알칼라인 포스파타아제, β-갈락토시다아제 또는 아세틸콜린스테라아제를 포함한다; 적당한 보철기의 예시로, 스트렙타비딘/비오틴 및 아비딘/비오틴을 포함한다; 적당한 형광물질의 예시로, 엄벨리페론, 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 디클로로트리아지닐아민 플루오레세인, 단실 클로라이드 또는 파이코에리트린을 포함한다; 발광물질의 예시로, 루미놀을 포함한다; 생물발광물질의 예시로 루시퍼라아제, 루시페린 및 에쿼린을 포함한다; 적당한 방사성 물질의 예시로, 125I, 131I, 35S 또는 3H를 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명에 따른 항체는 샘플에서 HER2 단백질(또는 이의 단편)의 존재를 검출하기 위한 제제로 이용될 수 있다. 일부 구체예에서, 항체는 검출 가능한 표지를 포함한다. 항체는 다클론 또는 바람직하게는 단클론이다. 손상되지 않은 항체 또는 이의 단편(예를 들어, Fab, scFv, 또는 F(ab)2)이 사용된다. 프로브 또는 항체와 관련하여, 용어 "표지된"은 프로브 또는 항체에 검출 가능한 물질을 커플링(즉, 물리적으로 결합시킴) 함으로써 프로브 또는 항체를 직접적으로 표지하는 것뿐만 아니라 직접적으로 표지된 다른 시약과의 반응성에 의해 프로브 또는 항체의 간접적 표지를 포함하는 것으로 의도된다. 간접적 표지의 예시로, 형광-표지된 2차 항체를 이용한 1차 항체의 검출 및 형광-표지된 스트렙타비딘으로 검출될 수 있도록 비오틴으로 DNA 프로브의 말단-표지를 포함한다. 용어 "생물학적 샘플"은 대상체에서 분리된 조직, 세포 및 생물학적 체액뿐만 아니라, 대상체내에 존재하는 조직, 세포 및 체액을 포함하는 것으로 의도된다. 그러므로, 용어 "생물학적 샘플"의 이용에는 혈액 및 혈청, 혈장 또는 림프구를 포함하는 혈액의 분획 또는 성분을 포함한다. 즉, 본원에 개시된 검출 방법은 인 비보뿐만 아니라 인 비트로에서 생물학적 샘플 내 분석물질 mRNA, 단백질 또는 게놈 DNA를 검출하는데 이용될 수 있다. 예를 들어, 분석물질 mRNA의 검출을 위한 인 비트로 기술로, 노던 하이브리디제이션 및 인 시츄 하이브리디제이션을 포함한다. 분석물질 단백질의 검출을 위한 인 비트로 기술로, ELISA, 웨스턴 블랏, 면역침전 및 면역형광을 포함한다. 분석물질 게놈 DNA의 검출을 위한 인 비트로 기술은 서던 하이브리디제이션을 포함한다. 면역분석을 수행하는 과정은 예를 들어, "ELISA: Theory and Practice: Methods in Molecular Biology", Vol. 42, J. R. Crowther (Ed.) Human Press, Totowa, NJ, 1995; "Immunoassay", E. Diamandis and T. Christopoulus, Academic Press, Inc., San Diego, CA, 1996; and "Practice and Theory of Enzyme Immunoassays", P. Tijssen, Elsevier Science Publishers, Amsterdam, 1985에 기재되어 있다. 추가로, 분석물질 단백질의 검출을 위한 인 비보 기술은 표지된 항-분석물질 단백질 항체를 대상체에 도입하는 것을 포함한다. 예를 들어, 항체는 표준 이미징 기술에 의해 대상체에서 존재 및 위치가 검출될 수 있는 방사성 마커로 표지될 수 있다.
HER2 항체의 치료적 투여 및 제형
본원에 개시된 항체, 이의 유도체, 단편, 유사물 및 동족체 및/또는 이의 컨쥬게이트(또한, 본원에서 "활성 화합물"로 지칭됨)는 투여에 적당한 약학적 조성으로 혼입될 수 있다. 이러한 조성물의 제조에 포함된 원리 및 고려 사항뿐만 아니라, 성분의 선택에 대한 지침은 예를 들어, Remington's Pharmaceutical Sciences: The Science And Practice Of Pharmacy 19th ed. (Alfonso R. Gennaro, et al., editors) Mack Pub. Co., Easton, Pa.: 1995; Drug Absorption Enhancement: Concepts, Possibilities, Limitations, And Trends, Harwood Academic Publishers, Langhorne, Pa., 1994; and Peptide And Protein Drug Delivery (Advances In Parenteral Sciences, Vol. 4), 1991, M. Dekker, New York에서 제공된다.
이러한 조성물은 전형적으로 항체, 이의 단편, 및/또는 이의 컨쥬게이트 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다. 항체 단편이 사용되는 경우, 표적 단백질의 결합 도메인에 특이적으로 결합하는 가장 작은 억제 단편이 바람직하다. 예를 들어, 항체의 가변-영역 서열에 기초하여, 표적 단백질 서열에 결합하는 능력을 보유하도록 펩타이드 분자를 설계할 수 있다. 이러한 펩타이드는 화학적으로 합성되거나, 및/또는 재조합 DNA 기술에 의해 생산될 수 있다(예를 들어, Marasco et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 7889-7893 (1993)를 참조할 것).
본원에 사용된 용어 "약학적으로 허용 가능한 담체"는 약학적 투여와 양립할 수 있는 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 항균 및 항진균제, 등장액 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 적당한 담체는 이 분야의 표준 참고문헌인 Remington's Pharmaceutical Sciences의 최신판에 기재되어 있으며, 이는 본원에 참고문헌으로 인용된다. 이러한 담체 또는 희석제의 바람직한 예시로, 물, 식염수, 링거액, 덱스트로즈 용액 및 5% 인간 혈청 알부민을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 리포좀 및 비-수성 비히클, 예컨대, 고정 오일이 또한 사용될 수 있다. 약학적으로 활성이 있는 물질을 위한 그러한 매질 및 제제의 사용은 당업계에 공지되어 있다. 임의의 통상적인 매질 또는 제제가 활성 화합물과 양립하지 않는 경우를 제외하고는, 조성물에서 이의 용도가 고려된다.
인 비보 투여에 사용되는 제형은 무균이어야 한다. 이것은 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 쉽게 달성된다.
본원에 개시된 약학 조성물은 의도된 투여 경로와 양립할 수 있도록 제형화된다. 투여 경로의 예시로, 비경구, 예를 들어, 정맥 내, 피내, 피하, 경구(예 : 흡입), 경피(즉, 국소), 경점막 및 직장 투여를 포함한다. 비경구, 피내 또는 피하 적용에 사용되는 용액 또는 현탁액은 하기 성분을 포함할 수 있다: 주사 용수, 식염수, 고정 유, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 다른 합성 용매와 같은 멸균 희석제; 항균제, 예컨대 벤질 알콜 또는 메틸 파라벤; 아스코르브산 또는 소듐 바이설파이트 같은 항산화제; 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA) 같은 킬레이팅제; 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트 같은 완충용액; 및 소듐 클로라이드 또는 덱스트로우즈 같은 장력 조절제. pH는 염산 또는 수산화나트륨과 같은 산 또는 염기로 조절할 수 있다. 비경구 제제는 유리 또는 플라스틱으로 제조된 앰플, 일회용 주사기 또는 다중용량 바이알에 넣을 수 있다.
주사 가능한 사용에 적합한 약학 조성물은 멸균된 주사 가능한 용액 또는 분산액의 즉석 제조용 멸균 수용액(수용성인 경우) 또는 분산액 및 멸균 분말을 포함한다. 정맥내 투여를 위해, 적합한 담체는 생리식염수, 정균수, Cremophor EL™ (BASF, Parsippany, N.J.) 또는 인산염 완충 식염수(PBS)를 포함한다. 모든 경우에서, 조성물은 멸균되어야 하고, 용이한 주사가능성이 존재할 정도로 유동적이어야 한다. 그것은 제조 및 저장 조건 하에서 안정해야 하며, 세균 및 곰팡이와 같은 미생물의 오염 작용에 대해 보존되어야 한다. 담체는 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등) 및 이들의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 적절한 유동성은 예를 들어, 레시틴과 같은 코팅제의 사용, 분산의 경우 요구되는 입자 크기의 유지, 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 미생물 작용의 방지는 다양한 항균 및 항 곰팡이 제제, 예를 들어 파라벤, 클로로 부탄올, 페놀, 아스코르브산, 티메로 살 등에 의해 달성될 수 있다. 많은 경우, 등장제, 예를 들어 설탕, 만니톨, 소르비톨, 염화나트륨과 같은 폴리알코올을 조성물에 포함하는 것이 바람직할 것이다. 주사 가능한 조성물의 장기 흡수는 조성물에 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들어 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 포함함으로써 초래될 수 있다.
멸균 주사용 용액은 필요에 따라 활성 화합물을 적절한 용매에 상기 열거된 성분 중 하나 또는 조합과 혼합하고, 이어서 여과 멸균함으로써 제조할 수 있다. 일반적으로, 분산액은 활성 화합물을 염기성 분산 매질 및 상기 열거된 것들 중 필요한 다른 성분을 함유하는 멸균 비히클에 혼입시킴으로써 제조된다. 멸균 주사 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우, 제조 방법은 활성 성분의 분말 + 이전에 멸균 여과된 용액으로부터 임의의 추가의 원하는 성분을 생성하는 진공 건조 및 동결 건조이다.
경구 조성물은 일반적으로 불활성 희석제 또는 식용 담체를 포함한다. 이들은 젤라틴 캡슐에 담겨 있거나 정제로 압축될 수 있다. 구강 치료적 투여를 위해, 활성 화합물은 부형제와 혼입될 수 있고 정제, 트로키제 또는 캡슐의 형태로 사용될 수 있다. 경구 조성물은 또한 구강 세척제로서 사용하기 위해 유체 담체를 사용하여 제조될 수 있으며, 유체 담체 내의 화합물은 경구로 도포되고 씻기거나 뱉거나 삼키게 된다. 약학적으로 양립할 수 있는 결합제 및/또는 어쥬번트 물질은 조성물의 일부로서 포함될 수 있다. 정제, 환제, 캡슐제, 트로키제 등은 다음의 성분 또는 유사한 성질의 화합물을 함유할 수 있다: 미세결정 셀룰로오스, 트라가칸트 고무 또는 젤라틴과 같은 바인더; 부형제, 예컨대 전분 또는 락토오스, 붕해제, 예컨대 알긴산, 프리모겔 (Primogel) 또는 옥수수 전분; 마그네슘 스테아레이트 또는 스테로테트와 같은 윤활제; 콜로이드성 이산화규소와 같은 활택제; 수크로스 또는 사카린과 같은 감미제; 또는 페퍼민트, 메틸 살리실레이트 또는 오렌지 향료와 같은 향미제를 포함할 수 있다.
흡입에 의한 투여를 위해, 화합물은 적당한 추진체, 예를 들어 이산화탄소와 같은 기체 또는 분무기를 함유하는 압력 용기 또는 분배기로부터의 에어로졸 분무 형태로 전달된다.
전신 투여는 또한 경점막 또는 경피 수단에 의해 수행될 수 있다. 점막 또는 경피 투여의 경우, 침투되는 장벽에 적합한 침투제가 제형에 사용된다. 이러한 침투제는 당업계에 일반적으로 공지되어 있으며, 예를 들어, 점막 투여, 세제, 담즙 염 및 푸시딘산 유도체를 포함한다. 경점막 투여는 비강 스프레이 또는 좌약의 사용을 통해 수행될 수 있다. 경피 투여를 위해, 활성 화합물은 당 업계에 일반적으로 공지된 바와 같이 연고, 연고, 겔 또는 크림으로 제형화된다.
화합물은 또한 직장 전달용 좌제(예 : 코코아 버터 및 기타 글리세리드와 같은 통상의 좌약 기제를 사용) 또는 보류 관장 형태로 제조될 수 있다.
일 구체예에서, 활성 화합물은 임플란트 및 미세 캡슐화 전달 시스템을 포함하는 서방형/제어 방출 제형과 같이 신체에서의 신속한 제거로부터 화합물을 보호하는 담체와 함께 제조된다. 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리안하이드라이드, 폴리 글리콜산, 콜라겐, 폴리오쏘에스테르 및 폴리락트산과 같은 생분해성, 생체적합성 고분자가 사용될 수 있다. 이러한 제형의 제조 방법은 당업자에게 명백할 것이다.
예를 들어, 활성 성분은 콜로이드성 약물 전달 시스템(예를 들어, 리포좀, 알부민 마이크로스피어, 마이크로에멀젼, 나노-입자 및 나노캡슐) 또는 마크로에멀젼에서 각각 코아세르베이션 기술에 의해 또는 계면 중합에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예컨대 하이드록시메틸셀룰로즈 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐에서 유용할 수 있다.
서방형 제제를 준비할 수 있다. 서방형 제제의 적당한 예시로, 항체를 함유하는 고체 소수성 고분자의 반투과 매트릭스를 포함하며, 상기 매트릭스는 성형된 물품, 예를 들어, 필름 또는 마이크로캡슐의 형태이다. 서방형 매트릭스의 예시로,
폴리에스테르, 하이드로젤(예를 들어, 폴리(2-하이드록시에틸-메타크릴레이트), 또는 폴리(비닐알코올)), 폴리락타이드(미국 특허 제3,773,919호), L-글루탐산 및 γ-에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비-분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 분해성 락트산-글리콜산 공중합체, 예컨대, LUPRON DEPOTTM(락트산-글리콜산 공중합체 및 루프로라이드 아세테이트로 구성된 주사용 마이크로스피어), 및 폴리-D-(-)-3-하이드록시부티르산을 포함한다. 에틸렌-비닐 아세테이트 및 락트산-글리콜산과 같은 고분자는 100일 이상 분자를 방출할 수 있지만, 특정 하이드로젤은 보다 짧은 시간 동안 단백질을 방출한다.
이 물질은 또한 Alza Corporation 및 Nova Pharmaceuticals, Inc.로부터 상업적으로 입수할 수 있으며, 리포좀성 현탁액(바이러스 항원에 대한 단클론 항체로 감염된 세포를 표적으로 하는 리포좀을 포함)을 함유할 수 있으며 또한 약학적으로 허용 가능한 담체로 사용될 수 있다. 이들은 예를 들어 미국 특허 제4,522,811호에 기재된 바와 같이 당업자에게 공지된 방법에 따라 제조될 수 있다.
투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 투여 단위 형태로 경구 또는 비경 구 조성물을 제형화하는 것이 특히 바람직하다. 본원에서 사용되는 투여 단위 형태는 치료될 대상체에 대한 단일 투여량으로 적합한 물리적으로 분리된 단위를 의미한다; 각 단위는 요구되는 약학적 담체와 관련하여 원하는 치료 효과를 생성하도록 계산된 활성 화합물의 설정 정량을 함유한다. 본원에 개시된 투여 단위 형태에 대한 명세서는 활성 화합물의 고유한 특성 및 달성될 특정 치료 효과에 따라 그리고, 개인의 치료를 위한 그러한 활성 화합물을 배합하는 분야에 내재된 한계를 구술하고 있다.
약학 조성물은 투여 지침과 함께 용기, 팩 또는 디스펜서에 포함될 수 있다.
제형은 또한 치료되는 특정 징후에 필요한 하나 이상의 활성 화합물, 바람직하게는 서로에게 악영향을 미치지 않는 보완 활성을 갖는 활성 화합물을 함유할 수 있다. 대안으로, 또는 부가적으로, 조성물은 예를 들어 세포독성제, 사이토카인, 화학요법제 또는 성장-억제제와 같은 그의 기능을 강화시키는 제제를 포함할 수 있다. 이러한 분자는 의도된 목적에 효과적인 양으로 적절하게 조합하여 존재한다.
일 구체예에서, 활성 화합물은 병리 상태 또는 장애, 예를 들어 다양한 형태의 암, 자가 면역 질환 및 염증성 질환을 치료하는데 유용한 병용 요법, 즉, 다른 제제, 예를 들어, 치료제와 함께 투여된다. 이 문맥에서의 "병용"은 제제를 동시에 또는 순차적으로 동시에 수행된다는 것을 의미한다. 순차적으로 주어지면, 제2 화합물의 투여 개시시, 두 화합물 중 제1 화합물은 바람직하게는 치료 부위에서 여전히 유효한 농도로 여전히 검출 가능하다.
예를 들어, 병용 요법은 하나 이상의 추가 항체, 예를 들어, HER2 항체, HER2 이량체화 억제제 항체 또는 HER2 항체 및 HER2 이량체화 억제제 항체의 조합, 예를 들어, 트라스투주맙, 퍼투주맙 또는 트라스투주맙 및 퍼투주맙의 조합, 또는 트라스투주맙 및/또는 퍼투주맙의 바이오시밀러 또는 바이오시밀러의 조합과 함께 제형화되거나, 및/또는 함께 투여되는 본원에 개시된 하나 이상의 항체, 이의 단편 및/또는 이의 컨쥬게이트를 포함할 수 있다.
예를 들어, 병용 요법은 하나 이상의 추가 치료제, 예를 들어, 탁산(파클리탁셀 또는 도세탁셀), 안트라사이클린(독소루비신 또는 에피루비신), 시클로포스파마이드, 카페시타빈, 타목시펜, 레트로졸, 카보플라틴, 겜시타빈, 시스플라틴, 얼로티닙, 이리노테칸, 플루오로우라실 또는 옥살리플라틴과 함께 제형화되거나, 및/또는 함께 투여되는 본원에 개시된 하나 이상의 항체, 이의 단편, 및/또는 이의 컨쥬게이트를 포함할 수 있다. 그러한 병용 요법은 유리하게는 투여된 치료제의 저용량을 이용하여 다양한 단일요법과 관련된 가능한 독성 또는 합병증을 피할 수 있다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 항체, 이의 단편 및/또는 이의 컨쥬게이트와 조합하여 사용되는 추가의 치료제(들)는 면역 및/또는 염증 반응의 상이한 단계에서 간섭하는 제제이다. 일 구체예에서, 본원에 개시된 하나 이상의 항체는 하나 이상의 추가 제제와 함께 제형화되거나 및/또는 함께 투여될 것이다.
진단 및 예방용 제형
본원에 개시된 HER2 항체, 이의 항원-결합 단편, 및/또는 이의 컨쥬게이트는 진단 및 예방용 제형으로 이용된다. 일 구체예에서, 본원에 개시된 HER2 항체, 이의 항원-결합 단편 및/또는 이의 컨쥬게이트는 전술한 하나 이상의 질병들, 예를 들어, 이에 제한되지는 않으나, 암이 발병할 위험이 있는 환자에게 투여된다. 전술한 하나 이상의 적응증에 대한 환자 또는 기관의 질병소질은 유전형, 혈청학적 또는 생화학적 마커를 이용하여 결정될 수 있다.
본 발명의 다른 구체예에서, 본원에 개시된 HER2 항체, 이의 항원-결합 단편, 및/또는 이의 컨쥬게이트는 전술한 하나 이상의 질병들, 예를 들어, 이에 제한되지는 않으나, 암과 관련된 임상적 적응증을 앓고 있는 것으로 진단된 인간 개인에 투여된다. 진단 시, 본원에 개시된 HER2 항체, 이의 항원-결합 단편, 및/또는 이의 컨쥬게이트는 전술한 하나 이상의 질병과 연관된 임상적 적응증의 효과를 완화하거나 역전시키기 위해 투여된다.
본 발명의 다른 구체예에서, 본원에 개시된 컨쥬게이트로 치료하기 쉬운 유방암 환자를 동정하는 방법은 환자로부터 수득한 종양 샘플에서의 특정 특성의 상태를 측정하고, 종양 샘플에서의 특정 특성의 상태에 기초하여 치료를 위해 환자를 확인하는 것을 포함한다.
본원에 개시된 항체는 또한 환자 샘플에서 HER2의 검출에 유용하며 따라서 진단에 유용하다. 예를 들어, 본원에 개시된 HER2 항체는 환자 샘플에서 HER2 수준을 검출하기 위한 인 비트로 분석, 예를 들어 ELISA에 사용된다.
일 구체예에서, 본원에 개시된 HER2 항체는 고체 지지체(예를 들어, 마이크로타이터 플레이트의 웰) 상에 고정화된다. 고정화된 항체는 시험 샘플에 존재할 수있는 임의의 HER2에 대한 포획 항체로서 작용한다. 고정화된 항체를 환자 샘플과 접촉시키기 전에, 고체 지지체를 헹구고 우유 단백질 또는 알부민과 같은 차단제로 처리하여 분석물질의 비특이적 흡착을 방지한다.
이어서, 항원을 함유하는 것으로 의심되는 시험 샘플 또는 표준량의 항원을 함유하는 용액으로 웰을 처리한다. 그러한 샘플은 예를 들어, 병리학의 진단으로 간주되는 순환 항원 수준을 갖는 것으로 의심되는 개체의 혈청 샘플이다. 시험 샘플 또는 표준물질을 헹군 후, 고체 지지체를 검출 가능하게 표지된 제2 항체로 처리한다. 표지된 제2 항체는 검출 항체로서 작용한다. 검출 가능한 표지의 수준을 측정하고, 표준 샘플로부터 개발된 표준 곡선과 비교하여 시험 샘플 중의 HER2 항원의 농도를 결정한다.
인 비트로 진단 분석에서 본원에 개시된 HER2 항체를 사용하여 얻어진 결과에 기초하여, HER2 항원의 발현 수준에 기초하여 대상체에서 질병을 발병시키는 것이 가능하다는 것을 이해할 것이다. 주어진 질병에 대해, 혈액의 샘플은 질병의 진행 단계 및/또는 질병의 치료적 치료의 다양한 시점에서 진단되는 대상으로부터 취해진다. 진행 또는 치료의 각 단계에 대해 통계적으로 중요한 결과를 제공하는 샘플 집단을 사용하여 각 단계의 특성으로 간주 될 수 있는 항원 농도의 범위가 지정된다.
본원에 인용된 모든 간행물 및 특허 문헌은, 그러한 간행물 또는 문헌 각각이 구체적으로 및 개별적으로 본원에 참고로 인용된 것처럼 참고로 여기에 통합된다. 출판물 및 특허 문서의 인용은 해당 선행 기술이 관련이 있다는 것을 인정하는 것이 아니며 그 내용이나 일자에 대한 승인을 구성하지도 않는다. 본 발명은 서술된 설명에 의해 기술되었지만, 당업자는 본 발명이 다양한 실시예들에서 실시될 수 있고 이하의 설명 및 예들은 예시의 목적을 위한 것이며 하기의 청구항들로 제한되는 것이 아님을 인식할 것이다.
실시예
하기 실시예는 링커, 약물 분자 및 PBRM 및 이를 제조하는 방법을 예시한다. 이들은 제한하려는 의도가 아니며, 다른 시약 또는 방법이 이용될 수 있다는 것은 당업자에게 용이하게 이해될 것이다.
약어
다음의 약어가 하기 반응식 및 합성 예에서 사용된다. 이 목록은 유기 합성 분야의 당업자가 쉽게 이해할 수 있는 추가의 표준 약어가 합성 도식 및 실시예에서 사용될 수 있기 때문에 출원서에 사용된 약어의 포괄적인 목록일 의도는 아니다.
AF-HPA Auristatin F-hydroxypropylamide
BSA Bovine serum albumin
DMEM Dulbecco's Modified Eagle's medium
FBS Fetal bovine serum
HRP Horseradish peroxidase
PBS Phosphate buffered saline, 0.9% NaCl
TMB 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine
일반적인 정보
Genentech에서 제조한 주사용 Kadcyla® (아도-트라스투주맙 엠탄신)를 구입하였다.
CDR은 Kabat 번호 체계에 의해 확인되었다.
종양 성장 억제(% TGI)는 처리군과 대조군 사이의 종양 체적의 중간 값 (MTV)의 차이로 정의하였다.
치료 효능은 연구 동안 관찰된 종양 크기의 회귀 반응의 발생률 및 강도로부터 결정되었다. 치료는 동물의 종양의 부분 회귀(PR) 또는 완전 회귀(CR)를 유발할 수 있다. PR 반응에서 연구 기간 동안 3회 연속 측정시 종양 체적은 1일 체적의 50% 이하였고, 3회 측정 중 하나 이상에 대해 13.5mm3 이상이었다. CR 반응에서 연구 기간 동안 3회 연속 측정시 종양 체적은 13.5mm3 미만이었다. 연구 종결 시점에서 CR 반응을 보인 동물은 종양이 없는 생존자(TFS)로 분류되었다. 회귀 분석을 위해 동물을 관찰하였다.
HPLC 정제는 Phenomenex Gemini 5 ㎛ 110Å, 250 × 10 mm, 5 micron, semi-preparation column에서 수행되었다.
SEC는 Tosoh Biosciences TSK 겔 G5000 컬럼(7.8mm × 30cm, 10㎛) 또는 Superose 12 컬럼(GE Healthcare)에서 수행하였다.
WCX는 ProPac WCX-10(94mm × 250mm) 컬럼(ThermoFisher)에서 수행되었다.
가능할 때마다, 컨쥬게이트의 약물 함량을 분광 광도법으로 측정하고 그렇지 않으면 약물 함량의 정량적 측정을 위해 LC/MS 또는 1H-NMR을 수행하였다.
단백질-고분자-약물 컨쥬게이트의 단백질 함량을 280 nm에서 또는 ELISA에 의해 분광 광도계로 측정하였다.
고분자 컨쥬게이트의 분자량(겉보기 중량 평균 분자량 또는 피크 분자량으로보고 됨)은 다당류 또는 단백질 분자량 표준을 갖는 SEC에 의해 결정되었다. 보다 구체적으로, 고분자 또는 고분자-약물 컨쥬게이트의 경우, 다당류 분자량 표준이 사용되고, 단백질-약물-고분자 컨쥬게이트의 경우, 단백질 표준이 사용된다. 특별히 언급하지 않는 한, 보고된 고분자 담체 분자량은 PHF의 중량 평균 분자량이며; 및 고분자-약물 컨쥬게이트 분자량 및 단백질-고분자-약물 컨쥬게이트는 피크 분자량이다. HER2-고분자-약물 컨쥬게이트는 약 170 kDa 내지 약 230 kDa의 피크 분자량을 갖는다. 합성/측정된 고분자 및 고분자 컨쥬게이트는 전형적으로 다분산지수≤1.5를 갖는다.
Her2-고분자-약물 컨쥬게이트는 광범위한 정용여과(diafiltration)를 통해 잔류 미반응 약물-고분자 컨쥬게이트와 분리되었다. 필요한 경우, 크기 배제 크로마토그래피 및/또는 WCX 크로마토그래피에 의한 추가 정제를 수행하여 임의의 응집된 Her2-고분자-약물 컨쥬게이트를 제거하였다. 일반적으로, Her2-고분자-약물 컨쥬게이트는 전형적으로 SEC에 의해 측정 시 <5% (w/w, 예를 들어 <2% w/w)의 응집된 분획을 함유하고; RP-HPLC 또는 LC-MS/MS에 의해 측정시 <0.5%(w/w, 예를 들어, <0.1% w/w)의 유리 (비공유) 약물; SEC 및/또는 RP-HPLC에 의해 측정 시 <1% (w/w)의 유리 고분자-약물 컨쥬게이트와 HIC-HPLC 및/또는 WCX HPLC에 의해 측정 시 <2% (w/w, 예를 들어, <1% w/w)의 컨쥬게이트되지 않은 Her2. 환원되거나 부분적으로 환원된 항체는 문헌 [Francisco et al., Blood 102 (4):1458-1465 (2003)] 참조 문헌에 기재된 과정을 사용하여 제조하였다. 총 약물(컨쥬게이트되고 컨쥬게이트되지 않은)의 농도는 LC-MS/MS에 의해 측정하였다.
일반 과정
일반 과정 A. 링커 또는 약물과 고분자의 컨쥬게이션
일반적으로, 고분자(PHF-BA 또는 PHF-GA)와 아민 함유 링커, 예를 들어 EG2- 말레이미드 또는 아민 함유 링커 약물, 예를 들어 AF-HPA -Ala, HPA-Ala는 예를 들어 EDC·HCl과 같은 활성화제의 존재에서 수성 또는 10-90% 유기/수성 용매 혼합물 중에서 수행된다. 전형적인 유기 용매는 예를 들어 DMSO, DMF, DMA, NMP 및 ACN과 같은 물과 혼합할 수 있는 용매를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 커플링을 촉진시키기 위해, 예를 들어 NHS와 같은 공-활성화제가 첨가된다. 고분자를 먼저 아미노-함유 화합물과 혼합한 다음 공-활성화제(NHS)를 첨가한 후 활성화제 (EDC·HCl)를 첨가한다. 반응은 상온에서 1시간 내지 24시간 동안 0 내지 10℃, pH 4.5 내지 7.5에서 수행된다. 생성된 고분자 컨쥬게이트 생성물을 정용여과 또는 SEC로 정제한다. 생성물을 2 내지 50 mg/mL로 농축시키고, pH를 4.5 내지 6.5로 조정하여 약물-고분자 링커 안정성을 보장하고, 컨쥬게이트는 추후 사용하기까지 -20 내지 -80℃에서 냉동 보관한다.
고분자와 아민-함유 링커 또는 약물의 컨쥬게이션은 임의의 순서로 또는 동시에 순차적으로 수행될 수 있다.
일반 과정 B. 단백질( HER2 항체)의 부분 선택적 환원
고분자-약물 컨쥬게이트와 컨쥬게이션하기 전에 관련 HER2 항체에서 사슬 간 이황화기 또는 짝이 없는 이황화물의 부분 선택적 환원은 예를 들어 TCEP, DTT 또는 β-머캅토에탄올과 같은 환원제를 사용함으로써 달성된다. 과량의 환원제로 환원시키는 경우, 환원제는 SEC에 의한 컨쥬게이션 전에 제거된다. HER2 이황화기의 반응성 설피드릴기로의 전환율은 HER2의 화학량론, 환원제, pH, 온도 및/또는 반응 지속 시간에 의존한다. PBRM의 이황화기 전부는 아니지만 일부가 환원될 때, 환원된 PBRM은 부분적으로 환원된 HER2이다.
일반 과정 C. 부분적으로 환원된 HER2와 고분자 약물 컨쥬게이트의 컨쥬게이션
부분적으로 환원된 PBRM과 고분자-약물 컨쥬게이트의 컨쥬게이션은 중성 또는 약간 염기성 조건(pH 6.5-8.5)하에 1-10 mg/mL의 농도의 PBRM 및 0.5-10 mg/mL의 농도의 고분자-약물 컨쥬게이트에서 수행한다. 고분자-약물 컨쥬게이트는 전형적으로 목적하는 단백질-고분자-약물 컨쥬게이트 화학양론에 비해 1 ~ 5.0 배 초과로 사용된다. PBRM이 고분자-약물 컨쥬게이트의 말레이미도기에 컨쥬게이트되는 경우, 컨쥬게이션은 수용성 말레이미도 차단 화합물, 예를 들어 N-아세틸 시스테인, 시스테인 메틸 에스테르, 3-머캅토프로판산, 2-머캅토아세트산, 머캅토메탄올(즉, HOCH2SH), 벤질 티올 등을 첨가하여 선택적으로 종결된다.
생성된 HER2-고분자-약물 컨쥬게이트는 전형적으로 임의의 컨쥬게이트되지 않은 고분자-약물 컨쥬게이트, 컨쥬게이트되지 않은 약물 및 저분자 불순물을 제거하기 위해 정용여과를 통해 정제된다. 대안으로 또는 부가적으로, 적당한 크로마토그래피 분리 과정, 예컨대, 크기-배제 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 이온 크로마토그래피, 예를 들어 WCX 크로마토그래피; 역상 크로마토그래피, 하이드록실 아파타이트 크로마토그래피, 친화도 크로마토그래피 또는 이들의 조합을 사용하여 HER2-고분자-약물 컨쥬게이트를 정제할 수 있다. 생성된 정제된 HER2-고분자-약물 컨쥬게이트는 전형적으로 pH 5.0 내지 6.5의 완충용액에서 제형화된다.
실시예 1: HER2 항체에 대한 FACS 선별
본원에 개시된 HER2 항체 중 2개, XMT 1517 및 XMT 1519를 하기 기재된 절차를 사용하여 선별하였다. 각각 ~ 109개의 상이한 8개의 나이브 인간 합성 효모 라이브러리를 이전에 기술된 바와 같이 증식시켰다(예를 들어, WO 2009036379; WO 2010105256; WO 2010/12/009568; 및 Xu et al., Protein Eng Des Sel. 2013 Oct; 26 (10)): 663-70). 첫 번째 두 라운드 선별을 위해, Miltenyi MACs 시스템을 이용한 자기 비드 정렬 기술을 기재된 바와 같이 수행하였다(Siegel et al., J Immunol Methods. 2004 Mar; 286 (1-2): 141-53). 간단히 말하면, 효모 세포(~ 1010 세포/라이브러리)를 0.1% BSA가 함유된 FACS 세척 완충용액 PBS에서 실온에서 15분 동안 200 nM의 비오틴이 결합된 단량체 HER2 항원 또는 10 nM의 비오틴이 결합된 HER2-Fc 융합 항원과 함께 인큐베이션하였다(EZ-Link Sulfo-NHS-Biotinylation Kit, Thermo Scientific, Cat.# 21425를 사용하여 비오틴화를 수행하였다). 50 mL의 차가운 세척 완충용액으로 1회 세척한 후, 세포 펠렛을 40 mL의 세척 완충용액에 재현탁하고, 500 ㎕의 Streptavidin MicroBeads(Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany, Cat. # 130-048-101)를 효모에 첨가하여 4℃에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 다음으로, 효모를 펠렛화하고, 5 mL의 세척 완충용액에 재현탁시키고, MACS LS 컬럼(Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany, Cat. # 130-042-401) 상에 로딩하였다. 5 mL이 로딩된 후, 칼럼을 3 mL의 FACS 세척 완충용액으로 3회 세척하였다. 칼럼을 자기장으로부터 제거하고, 효모를 5 mL의 성장 배지로 용출시키고 밤새 성장시켰다. 유세포 분석기를 이용하여 다음의 3회 분류를 수행하였다. 약 1×108 효모를 펠렛화하고, 세척 완충용액으로 3회 세척하고, 실온에서 10분 동안 200 nM, 100 nM 또는 10 nM의 비오틴이 결합된 HER2와 각각 인큐베이션하였다. 효모를 두 번 세척한 후 1:100로 희석한 염소 항-인간 F(ab') 2 카파-FITC(Southern Biotech, Birmingham, Alabama, Cat. # 2062-02) 및 1:500으로 희석된 스트렙타비딘-알렉사 Fluor 633(Life Technologies, Grand Island, NY, Cat.# S21375) 또는 1:50으로 희석된 엑스트라비딘-파이코에리트린(Sigma-Aldrich, St Louis, Cat. # E4011) 중 어느 하나의 2차 시약을 4℃에서 15분간 처리하였다. 빙냉의 세척 완충용액으로 2회 세척한 후, 세포 펠릿을 0.4 mL의 세척 완충용액에 재현탁하고 스트레이너로 덮은 선별 튜브로 옮겼다. 분류는 FACS ARIA 분류기(BD Biosciences)를 사용하여 수행하였고, 정렬 게이트는 두 라운드 동안 HER2 결합 클론만을 선택하고 세 번째 라운드는 시약 바인더를 감소시키는 음성 정렬이었다. 최종 정렬 라운드 후, 효모를 플레이팅하고 특성규명을 위해 개별 콜로니를 골랐다.
실시예 2: HER2 항체의 친화성 성숙화
본원에 개시된 친화성 성숙화된 HER2 항체인 XMT 1518 및 XMT 1520은 하기 기술된 절차를 사용하여 제조하였다. 5회 라운드를 거친 결합 집단을 경쇄 배치 분산(LCBD)에 사용하였다. 중쇄 플라스미드를 추출하여 1×106의 다른 경쇄 라이브러리에 형질전환시켰다. 라운드마다 10 nM 또는 1 nM의 비오틴이 결합된 항원을 사용하여 1회 MACS 소팅 및 2회 FACS 소팅으로 상기 기재된 바와 같이 선별을 수행하였다.
LCBD의 최상 클론에 대해 친화도 성숙화를 수행하였다. 이들 클론의 중쇄의 CDRH3 각각은 1×108의 다른 변이체를 갖는 미리 준비된 라이브러리에 개별적으로 재조합되고, 상기 기재된 바와 같이 선별을 수행하였다. 가장 높은 친화성 항체를 선별하기 위해 시간대별로 부모 Fab과 항원 항체 효모 복합체를 인큐베이션함으로써 친화도 압력을 가하였다.
친화성 성숙화의 세 번째 라운드에는 중쇄와 경쇄의 오류가 발생하기 쉬운 PCR이 포함되었다. 선별은 3회의 모든 라운드에 대해 FACS 소팅을 사용하고 Fab 압력에 대해 시간을 증가하여 이전 사이클과 유사하게 수행되었다.
실시예 3: 항체 생산 및 정제
효모 클론을 포화 상태까지 성장시킨 다음 30℃에서 48시간 동안 진탕배양하였다. 유도 후, 효모 세포를 펠렛화하고, 상등액을 수확하여 정제하였다. IgGs는 단백질 A 컬럼을 이용하여 정제하고, 아세트산, pH2.0으로 용출하였다. Fab 단편은 파파인 소화에 의해 생산하고, KappaSelect(GE Healthcare LifeSciences, Cat.# 17-5458-01)로 정제하였다.
IgG의 포유동물 발현은 항체를 새로운 발현 벡터로 서브클로닝하여 HEK에서의 일시적인 형질감염 및 발현에 의해 수행되었다. 간단히 말하면, 목적 항체를 함유하는 발현 벡터는 형질감염 시약과 혼합하여 형질감염시킨 다음 HEK 세포에 1시간 동안 노출시킨 후 배양 배지로 최종 밀도 4,000,000개/mL로 희석하였다. 그 후 세포를 48시간마다 신선한 사료 배지로 7일 동안 배양한다. 7일 후, 원심분리 후 상등액을 수집하고, 단백질 A를 사용하여 정제를 수행하고, 필요하다면 > 95% 단량체에 도달하도록 CHT 컬럼 정제를 추가하였다.
실시예 4: HER2 항체의 친화도 측정
HER2 항체에 대한 친화도는 ForteBio 또는 MSD-SET로 KD를 측정하여 결정하였다. ForteBio 친화도 측정은 이전에 설명한 대로 일반적으로 수행되었다(Estep　 et al., MAbs. 2013 Mar-Apr;5(2):270-8). 간략하게, ForteBio 친화도 측정은 IgG를 AHQ 센서 상에 온라인으로 로딩함으로써 수행하였다. 센서를 30분 동안 분석 완충용액에서 오프라인으로 평형시킨 다음 기준선 형성을 위해 60초 동안 온라인으로 모니터링하였다. 로딩된 IgG를 가진 센서를 100 nM의 항원에 5분 동안 노출시킨 후, 오프-레이트(off-rate) 측정을 위해 5분 동안 분석 완충용액으로 옮겼다. 동역학은 1:1 결합 모델을 사용하여 분석하였다.
평형 친화도 측정은 이전에 기술된 대로 수행되었다(Estep et al., 2013). 용액 평형 적정(SET)을 항원이 50 pM으로 일정하게 유지된 PBS + 0.1% IgG-없는 BSA(PBSF)에서 수행하고, 10 nM에서 시작하는 항체의 3배 내지 5배 연속 희석 배양액으로 배양하였다. 항체(PBS 중 20 nM)를 4℃에서 밤새 또는 실온에서 30분 동안 표준 결합 MSD-ECL 플레이트 상에 코팅하였다. 이어서, 플레이트를 700 rpm으로 진탕하면서 30분 동안 블로킹한 후, 세척 완충용액(PBSF + 0.05% 트윈(Tween) 20)으로 3회 세척하였다. SET 샘플을 적용하고, 700 rpm에서 진탕하고 1회 세척한 후 150℃에서 플레이트상에서 인큐베이션하였다. 플레이트 상에 포획된 항원은 플레이트상에서 3분 동안 인큐베이션함으로써 PBSF 중 250 ng/mL의 설포태그-표지된 스트렙타비딘으로 검출되었다. 플레이트를 세척 완충액으로 3회 세척한 후 계면활성제와 함께 1× 판독 완충용액 T를 사용하여 MSD Sector Imager 2400 장치에서 판독하였다. 유리 항원 비율을 프리즘(Prism)에서 적정된 항체의 함수로서 플롯하고 2차 방정식에 맞추어 KD를 추출하였다. 처리량을 향상시키기 위해 SET 샘플 준비를 포함하여 MSD-SET 실험 전반에 액체 취급 로봇을 사용하였다. 표 1은 ForteBio 및 MSD-SET 친화도 측정 결과를 나타낸다.
Figure pct00118
1 ForteBio 기기로 측정됨. 팁 상의 IgG 및 용액 내 인간 HER2 단량체.
2 Meso Scale Discovery 장비에서 측정됨. 비오틴이 결합된 인간 HER2 단량체에 대한 IgG
실시예 5: 옥텟 레드384 에피토프 비닝
항체의 에피토프 비닝은 표준 샌드위치 포맷 비닝 분석을 이용하여 ForteBio 옥텟 레드384 시스템(Pall Forte Bio Corporation, Menlo Park, CA)에서 수행되었다. 대조군 항-표적 IgG는 AHQ 센서 상에 로딩되었고, 센서에서 점유되지 않은 Fc-결합 부위는 비-관련 인간 IgG1 항체로 차단되었다. 이어서, 센서를 100 nM의 표적 항원에 노출시킨 후 제2 항-표적 항체를 노출시켰다. 데이터는 ForteBio의 데이터 분석 소프트웨어 7.0을 사용하여 처리하였다. 항원 결합 후 제2 항체에 의한 부가적인 결합은 비어있는 에피토프(비 경쟁자)를 나타내지만, 결합은 에피토프 차단 (경쟁자)을 나타내지 않는다. 이 과정은 4개의 대조군 항체에 대해 반복되었다: (i) HER2의 도메인 IV에 결합하는 트라스투주맙(Cho et al., Nature. 2003 Feb 13;421(6924):756-60); (ii) HER2의 도메인 II에 결합하는 퍼투주맙(Franklin et al., Cancer Cell. 2004 Apr; 5(4):317-28); (iii) HER2의 도메인 III에 결합하는 Fab37(Fisher et al., J Mol Biol . 2010 Sep 10;402(1):217-29); 및 (iv) HER2의 도메인 I에 결합하는 chA21(Zhou et al., J Biol Chem . 2011 Sep 9;286(36):31676-83.; Cheng et al., Cell Res. 2003 Feb;13(1):35-48). 대조군 항체의 서열은 아래에 도시된다:
>트라스투주맙 중쇄 가변 영역 아미노산 서열
Figure pct00119
(SEQ ID NO: 40)
>트라스투주맙 경쇄 가변 영역 아미노산 서열
Figure pct00120
(SEQ ID NO: 41)
>퍼투주맙 중쇄 가변 영역 아미노산 서열
Figure pct00121
(SEQ ID NO: 42)
>퍼투주맙 경쇄 가변 영역 아미노산 서열
Figure pct00122
(SEQ ID NO: 43)
>Fab37 중쇄 가변 영역 아미노산 서열
Figure pct00123
>Fab37 경쇄 가변 영역 아미노산 서열
Figure pct00124
>chA21 중쇄 가변 영역 아미노산 서열
Figure pct00125
>chA21 경쇄 가변 영역 아미노산 서열
Figure pct00126
4개의 대조군 항체와 경쟁하지 않은 가장 높은 친화도를 갖는 항체 XMT 1519, XMT 1520, XMT 1517, XMT 1518을 선별하였다.
도 1a에 나타난 바와 같이, XMT 1517 및 XMT 1518 항체와 도 1b에서 볼 수 있듯이 XMT 1519 및 XMT 1520 항체는 4개의 대조군 항체와 경쟁하지 않았다.
실시예 6: JIMT -1 세포를 이용한 항체 결합 상수 측정
JIMT-1 세포에 대한 HER2 항체의 세포 표면 결합은 Macsquant 유동 세포 계측기(Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany)를 사용하여 평가하였다. 10% FBS(Gibco®, Life Technologies, Grand Island, NY)를 갖는 DMEM 배지(ATCC, Manassas, VA)에서 대략 90% 컨플루언트 배양으로 밤새 배양한 JIMT-1 세포를 Accutase 세포 탈착 용액(Innovative Cell Technologies, San Diego, CA)을 처리하여 플레이트 표면으로부터 방출되었다. 분리된 세포를 6% 염소 혈청을 함유하는 빙냉 배지로 한 번 세척하고 동일한 배지에 재현탁시켰다. V-바닥으로 된 96-웰 플레이트의 웰당 100,000개의 세포를 분주하고 6% 염소 혈청을 함유한 150 ㎕의 DMEM에서 3시간 동안 HER2 항체 농도(0.05-100 nM)의 범위로 배양하였다. 이어서, 세포를 빙냉 PBS로 1회 세척하고, 2% 염소 혈청 및 2차 형광 표지 항체인 Alexa Fluor® 647-표지된 염소 항-인간 IgG(Life Technologies Cat.# A-21445) 6 ㎍/mL를 함유하는 100 ㎕ DMEM에서 얼음에서 1시간 동안 재현탁시켰다. 세포를 빙냉 PBS(Gibco®, Life Technologies, Cat. # 10010049)로 1회 세척하고, 1% 파라포름 알데히드를 함유하는 빙냉된 PBS 200 ㎕에 현탁시켰다. 세포 당 결합된 형광의 양은 유동 세포 계측기에서 각 처리를 위해 5000개의 세포를 작동시킴으로써 결정되었다. 각각의 처리에 대한 형광 중앙값을 그래프로 나타내었고, 해리 상수 Kd를 단일 사이트, 특이적 결합 모델을 사용하여 비선형 회귀에 의해 Graphpad Prism 소프트웨어로 각 항체에 대해 계산하였다. 도 2는 JIMT-1 세포에 대한 HER2 항체의 결합을 나타낸다. 계산된 Kd 값은 XMT 1517에 대해 3.4 nM, XMT 1518에 대해 0.4 nM, XMT 1519에 대해 1.2 nM 및 XMT 1520에 대해 1.1 nM이었다.
실시예 7: ELISA에 의해 측정된 항체 친화도
재조합 인간 및 필리핀 원숭이의 HER2에 대한 항체의 친화도는 ELISA 분석에 의해 측정되었다. 인간 유래(아미노산 23-652, Acro Biosystems Cat.# HE2-H5225) 또는 필리핀 원숭이 유래(아미노산 1-652, Sino Biological, Cat.# 90295-C08H) 중 어느 하나의 정제된 재조합 HER2 세포외 도메인은 각 웰을 실온에서 2시간 동안 50 mM 중탄산 완충용액(pH 9.0) 중 1 ㎍/mL 용액 50 ㎕와 함께 인큐베이션시킴으로써 96 웰 플레이트의 표면에 코팅되었다. TTBS(50 mM Tris-HCl, pH 7.4, 150 mM NaCl 및 0.05% Tween 20)로 4회 세척하였다. 웰은 5% 소 혈청 알부민을 함유하는 50 ㎕의 TTBS와 1시간 동안 배양하여 차단하였다. 이어서, 각각의 시험 항체 또는 실시 예 16H의 희석 범위(0.005 내지 10 nM, 3배 단계 희석)를 3% BSA를 갖는 50 ㎕의 TTBS 중에서 실온에서 2시간 동안 첨가하였다. 결합되지 않은 시험 항체를 TTBS 세척(4배)으로 제거하였다. HRP(Bethyl Laboratories, # A80-115P)에 컨쥬게이트된 2차 항-인간 IgG를 3% BSA를 갖는 TTBS 중의 0.2 ㎍/mL의 농도로 1시간 동안 각각의 웰에서 배양하였다. 4TTBS 세척에 의해 결합되지 않은 2차 항체를 제거하였다. HRP 기질, TMB Bethyl Laboratories # E102)를 각 웰에 첨가하고 황색이 보일 때까지 배양하였다. 0.2 N 황산 50 ㎕의 첨가에 의해 반응을 중단시켰다. 450 nm에서의 흡광도를 플레이트 판독기(Molecular Devices, Spectramax M5)에서 측정하였다. GraphPad Prism 소프트웨어를 사용하여 값을 플로팅하였다. Kd는 하나의 부위, 특이적 결합 모델을 사용하여 비선형 회귀에 의해 결정되었다.
도 3a는 인간 HER2 및 필리핀 원숭이 HER2에 대한 항-HER2 항체 XMT 1517, XMT 1518의 결합 결과를 나타낸다. 도 3b는 인간 HER2 및 필리핀 원숭이 HER2에 대한 항-HER2 항체 XMT 1519, XMT 1529의 결합 결과를 제시한다. 계산된 Kd 값은 표 2에 나와있다.
Figure pct00127
인간 HER2 및 필리핀 원숭이 HER2에 대한 4가지 시험 항체에 대한 결합 친화도는 유사하였다.
도 3c 및 3d는 각각 인간 HER2 및 필리핀 원숭이 HER2에 대한 항-HER2 항체 XMT 1519 및 실시예 16H의 결합 결과를 나타낸다. 계산된 Kd 값은 아래 표 2A에 주어진다.
〔표 2A〕
Figure pct00128
인간 HER2 및 필리핀 원숭이 HER2에 대한 XMT 1519 및 실시예 16H에 대한 결합 친화도는 유사하였다.
실시예 8: JIMT -1 세포를 이용한 항체 경쟁 분석
XMT 1518 및 XMT 1519 항체가 중첩 에피토프에 결합한다는 것을 확인하기 위해 항체를 JIMT-1 세포에 대한 경쟁 결합 분석법으로 분석하였다. JIMT-1 세포를 실시예 6에 기재된 바와 같이 성장시켰다. 50 ㎕의 50,000개의 세포를 V-바닥으로 된 96-웰 플레이트의 웰마다 나누었다. 25 ㎕의 배지에서 Alexa Fluor®-647에 컨쥬게이트된 30 nM 항체 XMT 1519를 단독으로 첨가하거나 비 표지된 두 번째 항체(XMT 1518, XMT 1519 또는 트라스투주맙)와 혼합하여 농도(0.05-100 nM)로 처리하고 얼음에서 3시간 동안 배양하였다. 이어서, 세포를 빙냉 PBS로 1회 세척하고 2% 염소 혈청 및 염소 Alexa Fluor® 647-표지된 항-인간 IgG(Life Technologies, Cat. # A-21445) 6 ㎍/mL를 함유하는 100 ㎕의 DMEM에 얼음에서 1시간 동안 재현탁시켰다. 세포를 빙냉 PBS로 1회 세척하고, 1% 파라포름알데히드를 함유하는 200 ㎕의 빙냉 PBS에 현탁시켰다. 세포 당 결합된 형광의 양은 MacsQuant 유동 세포 계측기(Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany)에서 각 처리에 대해 5000 세포를 실행하여 측정하였다. 각 처리에 대한 형광 중앙값을 그래프로 나타내었고, 단일 사이트, 특이적 결합 모델을 사용하여 비선형 회귀에 의해 GraphPad Prism으로 각 항체에 대해 계산된 해리 상수 KD를 계산하였다. 도 4에 나타낸 바와 같이, 항체 XMT 1518은 Alexa Fluor® 647-표지된 XMT 1519의 결합을 표지되지 않은 XMT 1519와 유사한 정도로 경쟁하여, 두 항체 모두 HER2 상의 중첩된 에피토프를 인식한다는 것을 나타내었지만, 트라스투주맙은 Alexa Fluor® 647로 표지된 XMT 1519의 결합과 경쟁하지 않았다.
실시예 9: 항체-의존적 세포- 매개된 세포독성 분석
항-HER2 항체의 항체-의존적 세포-매개된 세포독성(ADCC) 활성을 BT474 세포에서 정량화하였다. 5000개의 세포를 96-웰 플레이트의 웰 당 10% FBS를 함유하는 DMEM 배지에 플레이팅하고 37℃에서 5% CO2에서 밤새 배양하였다. 0.001 내지 100 nM (8 연속, 5배 희석)의 XMT 1518, XMT 1519, XMT 1520 또는 트라스투주맙에 대한 항체 농도의 범위를 세포에 첨가하고, ADCC 활성은 ADCC 활성의 리포터로서 루시퍼라제 효소를 생산하도록 조작된 효과기 세포를 사용하는 Promega(Cat. # G7018)의 생물 검정 키트로 측정하였다. 루시퍼라아제 활성을 분광 광도계(Molecular Devices, Spectramax M5)에서 측정하였다. 수치는(항체 처리된 세포의 각 샘플로부터의 루시퍼라아제 활성 대 항체 처리되지 않은 세포의 샘플의 루시퍼라아제 활성의 비로 표현되는 값)는 작동 제 대수의 로그, 가변적인 기울기, GraphPad Prism 소프트웨어를 사용하는 4개의 매개 변수 모델을 이용한 비선형 회귀에 의해 플롯팅되었다.
도 5는 ADCC 값을 나타내는 그래프이다. XMT 1519와 XMT 1520은 트라스투주맙과 비슷한 최대 활동을 보여준다: 항체가 없는 신호에 대한 항체가 있는 신호의 비율은 XMT 1519에서는 30.1이고 XMT 1520에서는 29.7인 반면 트라스투주맙의 신호는 34.6이다. XMT 1518의 최대 활성은 11.0이다. ADCC 활성에 대한 EC50 (절반 최대 결합) 값은 XMT 1518에 대해 0.16 nM, XMT 1519에 대해 0.18 nM, XMT 1520에 대해 0.54 nM 및 트라스투주맙에 대해 각각 0.07 nM이다.
실시예 10: MCF7 세포에서 리간드-의존적 HER2 신호전달
MCF7 세포(ATCC, HTB-22)에서의 HER2 신호전달에 대한 항-HER2 항체의 효과는 HER3 리간드인 뉴레귤린-β1로 세포를 처리한 후 인산화된 AKT의 양을 측정하여 결정하였다. 6-웰 배양 접시의 각 웰에 300,000개 MCF7 세포를 0.01 mg/mL의 소 인슐린과 10% FBS를 포함하는 MEM 배지에 플레이팅하고, 5% CO2 분위기에서 37℃에서 밤새 성장시켰다. 배지를 제거하고 10 ㎍/mL의 시험 항체를 함유하는 새로운 배지로 교체하고 1시간 동안 인큐베이션한 후 40 pM 뉴레귤린-β1(R&D Systems, Minneapolis, MN, Cat.# 377-HB-050)으로 15분 처리하였다. 세포를 빙냉된 PBS로 1회 세척하고, 50 mM Tris HCl, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1% Triton X-100, cOmplete 프로테아제 저해제 칵테일 정제(Roche, Indianapolis, IN) 및 PhosSTOP 포스파타아제 억제제 칵테일 정제(Roche, Indianapolis, IN)를 함유하는 200 ㎕의 완충용액을 첨가하여 용해되었다. 용해물을 4℃에서 15,000 rpm에서 15분 동안 원심 분리하여 불용성 잔해를 제거하였다. 인산화된 AKT의 수준은 제조사의 지침에 따라 Cell Signaling Technology PathScan® Phospho-Akt1(Ser473) 샌드위치 ELISA 키트를 사용하여 측정하였다.
표 3은 MCF7 세포의 뉴레귤린 처리에 의해 유도된 AKT 인산화의 증가를 비 자극 세포에서 측정된 백분율로 나타낸 것이다.
Figure pct00129
뉴레귤린으로 처리하면 인산화된 AKT의 수준이 5배 증가했다(비자극된 세포에 비해 522%). XMT 1517, XMT 1518, XMT 1519 및 XMT 1520은 트라스투주맙(369%)와 유사한 564, 441, 381 및 439%의 뉴레귤린 유도된 AKT 인산화 증가를 거의 또는 전혀 유발하지 않았다. 리간드-의존적 신호전달을 억제하는 것으로 나타난 퍼투주맙(Franklin et al., Cancer Cell. 2004 April 19; 5:317-28)은 비자극된 세포와 가깝게 뉴레귤린 자극을 감소시켰다(127%). 이러한 결과는 시험 항체가 뉴레귤린에 의해 촉진되고 퍼투주맙에 의해 억제되는 HER2 및 HER3의 이종이량체화를 억제함으로써 작용하지 않는다는 것을 시사한다.
실시예 11: MCF7 , SKBR3 , 및 JIMT -1 세포에서 리간드-독립적 HER2 신호전달
MCF7(ATCC, HTB-22), SKBR3(ATCC, HTB-30), JIMT-1(ATCC, HTB-30) 세포에서의 HER2 신호전달에 대한 항-HER2 항체의 효과는 4시간 항체 처리 후 인산화된 AKT의 함량에서의 변화를 측정하여 결정하였다. 세포를 6 웰 배양 접시의 각 웰에 10% FBS가 함유된 세포 특이 배지에 도말하고 5% CO2 대기에서 37℃에서 밤새 배양하였다. 배지를 제거하고 10 ㎍/mL의 시험 항체를 함유하는 새로운 배지로 대체하고 4시간 동안 배양하였다. 세포를 빙냉 PBS로 1회 세척하고, 50 mM Tris HCl, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1% Triton X-100, cOmplete 프로테아제 억제제 칵테일 정제(Roche, Indianapolis, IN) 및 PhosSTOP 포스파타제 억제제 칵테일 정제(Roche, 인디아나 폴리스, IN)를 포함하는 200 ㎕의 완충용액을 첨가하여 용해시켰다. 용해물은 4℃에서 15,000 rpm에서 15분 동안 원심분리하여 불용성 잔해를 제거하였다. 인산화된 AKT의 수준은 제조업체의 설명서에 따라 Cell Signaling Technology PathScan® Phospho-Akt1 (Ser473) Sandwich ELISA Kit를 사용하여 측정되었다.
표 4는 AKT 인산화의 양으로 표시되는 MCF7, SKBR3 및 JIMT-1 세포에서의 리간드 독립적인 HER2 신호전달의 억제를 나타낸다. 결과는 처리되지 않은 세포의 백분율에 비례하여 제시된다.
Figure pct00130
시험 항-HER2 항체는 SKBR3 세포에서 HER2 신호전달의 강력한 억제를 유발했으며, 트라스투주맙에 의해 유발된 64%로의 감소와 비교하여 XMT 1517, XMT 1518, XMT 1519 및 XMT 1520은 인산화 AKT의 수준을 미처리된 세포에서 생기는 것의 43%, 59%, 34% 및 29%로 감소시켰다.
항-HER2 항체는 JIMT-1 세포에서 HER2 신호전달을 억제하였고, 트라스투주맙에 의해 유발된 56%로의 감소와 유사한 정도로 XMT 1517, XMT 1518, XMT 1519 및 XMT 1520에 대해 인산화 AKT의 수준을 미처리된 세포에서 생기는 것의 66%, 62%, 84%, 및 69%로 감소시켰다.
MCF7 세포에서, 트라스투주맙과 같이 XMT 1518은 HER2 신호전달을 억제하지 않았지만, XMT 1517, XMT 1519 및 XMT 1520은 신호전달에서 AKT 인산화를 미처리된 세포에서 생기는 것의 79%, 76%, 및 66%로 감소하여 완만한 감소를 유발하였다.
실시예 12: BT474 세포에서 리간드-독립적 HER2 신호전달
BT474 세포(ATCC, HTB-20)에서 HER2 신호전달에 대한 항-HER2 항체의 효과는 4시간 동안 항체 처리 후 인산화된 AKT의 함량에서의 변화를 측정하여 결정하였다. BT474 세포(300,000개의 세포)는 6-웰 배양 접시의 각 웰에 10% FBS를 포함하는 DMEM 배지에서 플레이팅하고, 5% CO2 대기에서 37℃에서 밤새 성장시켰다. 배지를 제거하고, 10 ㎍/mL의 시험 항체를 함유하는 새로운 배지로 대체하고 4시간 동안 배양하였다. 세포를 빙냉 PBS로 1회 세척하고, 50 mM Tris HCl, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1% Triton X-100, cOmplete 프로테아제 저해제 칵테일 정제(Roche, Indianapolis, IN) 및 PhosSTOP 포스파타아제 억제제 칵테일 정제(Roche, Indianapolis, IN)를 함유하는 200 ㎕의 완충용액을 첨가하여 용해시켰다. 용해물을 4℃에서 15,000 rpm에서 15분 동안 원심분리하여 불용성 잔해를 제거하였다. 인산화된 AKT의 수준은 웨스턴 분석을 통해 측정하였다. 각 추출물 20 ㎕를 7 ㎕의 NUPAGE 로딩 염료(Life Technologies, Cat. # NP0007) 및 2 ㎕의 10× 환원제(Life Technologies Cat. # NP0004)와 혼합하고, MOPS 러닝 완충용액(Life Technologies Cat.# NP000102) 에서 120V에서 90분 동안 작동시킨 4-12% 비스-트리스 폴리아크릴아마이드 젤(Life Technologies, Cat.# NP0341)에 로딩하였다. 분리된 단백질은 반-건조 전기영동 전이 시스템(Bio-Rad, Transblot system)에서 10% 메탄올을 함유하는 전달 완충용액(Life Technologies, Cat.# NP0006)에서 10V에서 30분 동안 니트로셀룰로즈 멤브레인으로 옮겼다. 멤브레인은 차단 완충용액(Li-cor, Cat.# 927-40000)에서 1시간 동안 인큐베이션하고, 이어서 같은 차단 완충용액에서 1:1000으로 희석된 AKT 단백질을 인식하는 마우스 항체(Cell Signaling Technology, #2920), 세린 473에서 인산화된 AKT를 인식하는 토끼 항체(Cell Signaling Technology, #4060) 및 1:5000으로 희석된 액틴을 인식하는 토끼 항체(LiCor, Cat.# 926-42210)과 함께 1시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후 멤브레인을 10mL의 TTBS로 3회 세척하고, 이어서 2차 항체와 1시간 동안 인큐베이션하였다: 차단 완충용액에서 둘 다 1:10,000으로 희석된 IRdye® 800CW에 컨쥬게이트된 염소 항-토끼 IgG(Li-Cor, Cat. # 926-32211) 및 IRdye® 680RD에 컨쥬게이트된 염소 항-마우스 IgG(Li-Cor, Cat. # 926-68070). 멤브레인을 다시 10 mL의 TTBS로 3회 세척하고 Li-Cor Odyssey 스캐너로 스캐닝하였다. 스캐너 소프트웨어를 사용하여 AKT, phospho-AKT 및 액틴에 상응하는 밴드를 정량화하였다. 각 phospho-AKT 밴드를 총 AKT 밴드로 정규화하고, 임의의 항-HER2 항체로 처리하지 않은 세포로부터의 phospho-AKT 단백질의 백분율로서 나타내었다.
HER3 인산화에 대한 항 HER2 항체의 효과 또한 동일한 실험에서 조사되었다. 상기 기재된 니트로 셀룰로오스 블롯을 또한 차단 완충용액에서 1:1000으로 희석된 티로신 1289(Cell Signaling Technology, #4791)에서 인산화된 HER3를 인식하는 토끼 항체로 1시간 동안 탐침하였다. 배양 후 멤브레인을 10 mL의 TTBS로 3회 세척 한 다음 블로킹 완충용액에서 1:10,000으로 희석한 IRdye® 800CW에 컨쥬게이트된 염소 항-토끼 IgG(Li-Cor, Cat. # 926-32211)와 1시간 동안 인큐베이션하였다. 멤브레인을 다시 10 mL의 TTBS로 3회 세척하고 Li-Cor Odyssey 스캐너로 스캐닝하였다. phospho-HER3 및 액틴에 해당하는 밴드를 스캐너 소프트웨어를 사용하여 정량화하였다. 각각의 phospho-HER3 밴드를 총 AKT 밴드로 정규화하고, 임의의 항-HER2 항체로 처리하지 않은 세포로부터 phospho-HER3 단백질의 백분율로서 나타내었다.
표 5는 AKT 인산화 또는 Her3 인산화의 양에 의해 결정된 BT474 세포에서의 리간드 독립적 HER2 신호전달의 억제를 나타낸다. 결과는 자극받지 않은 세포의 백분율을 기준으로 표시된다.
Figure pct00131
항-HER2 항체 XMT 1519는 미처리된 세포의 약 31%로의 감소를 유발하는 트라스투주맙과 약 44%로의 감소를 유발하는 퍼투주맙과 비교하여, HT19B 세포에서 AKT 인산화를 미처리된 세포에서 보이는 것의 약 21%로, BT474 세포에서 약 30%로 감소시켰다. HER3 인산화는 모든 항체들에 의해 완만하게 영향을 받았다: XMT 1519, XMT 1520, 트라스투주맙 및 퍼투주맙 각각에 의해 미처리된 세포에서 보여지는 것의 71%, 76%, 80% 및　85%.
실시예 13: 내재화 비율 측정
각 항체 XMT 1518, XMT 1519, XMT 1520 및 트라스투주맙이 SKBR3 세포의 세포 표면으로부터 내재화되는 비율은 96-웰 기반 분석에서 형광에 의해 측정되었다. SKBR3 세포를 96-웰 플레이트에 씨딩하고, 10% 우태아 혈청(FBS)(Gibco®, Life Technologies, Grand Island, NY, Cat.# 16140-071)을 포함하는 DMEM 배지(ATCC, Manassas, VA, Cat.# 30-2002)에서 5% CO2에서 37℃에서 밤새 성장시켜 부착되도록 하였다. 세포를 얼음 상에 10 ㎍/mL의 항체를 함유하는 배지에서 1시간 동안 인큐베이션한 후, 빙냉 배지로 세척하고, 1 ㎍/mL의 Alexa Fluor®-647에 컨쥬게이트된 염소 항-인간 IgG 1가 Fab 단편(Rockland Immunochemicals, Gilbertsville, PA, Cat.# 809-1102)을 함유하는 75 ㎕의 배지와 1시간 동안 인큐베이션하였다. 세척 후, 세포를 시간대별로 내재화되도록 37℃ 배양기로 옮겼다. 플레이트는 Odyssey 스캐너(Li-Cor Biosciences, Lincoln, NE)에서 700nm 채널을 사용하여 스캔하였다. 이후 얼음에서 플레이트를 100 mM glycine, 20 mM MgSO4, 50 mM KCl, pH 2.2와 인큐베이션하여 산-세척하여 세포 표면에 결합된 항체를 제거하고, 빙냉 PBS로 세척하고, 다시 스캔하여 세포에 의해 내재화된 형광의 양을 측정하였다. 도 6은 4시간 동안 항체의 내재화 비율을 보여준다. 모든 항체의 내재화 비율은 트라스투주맙과 거의 동일하다. 0시간에서 4시간까지 내재화된 전체 표면의 약 50%를 차지한다(도 6).
실시예 13A: SKBR3 세포에서 HER2 내재화
SKBR3 세포의 HER2 내재화에 대한 항-HER2 항체의 조합의 효과를 형광 현미경으로 조사하였다. 트라스투주맙은 Alexa Fluor-647과 컨쥬게이트되어 트라스투주맙의 위치와 아마도 세포 내 HER2의 위치를 시각화하는 데 사용되었다. SKBR3 세포를 4 챔버 현미경 슬라이드에 씨딩하고, 10% 우태아혈청(FBS)(Gibco®, Life Technologies, Grand Island, NY, Cat.# 16140-071)를 함유한 DMEM 배지(ATCC, Manassas, VA, Cat.# 30-2002)에서 5% CO2에서 37℃에서 밤새 성장시켜 부착하도록 하였다. SKRB3 세포를 (i) 트라스투주맙-Alexa-647 및 퍼투주맙의 조합 또는 (ii)트라스투주맙-Alexa-647 및 퍼투주맙 및 HER2 항체 XMT 1519의 조합 중 어느 하나를 포함하는 배지에서 90분 동안 배양하였다. 트라스투주맙의 위치는 형광 현미경을 사용하여 시각화하였다. 도 7에 나타난 바와 같이, 퍼투주맙 단독과의 조합에서 대부분의 트라스투주맙-Alexa Fluor-627는 세포 마스크 오렌지와 함께 위치하여, 세포막 위치를 시사하며, 퍼투주맙과 XMT 1519의 조합에서 대부분의 트라스투주맙-Alexa Fluor-647는 리소트랙커에 함께 위치하여 리소좀 위치를 시사한다. 이 결과는 트라스투주맙 및 퍼투주맙과의 조합에서 XMT 1519의 존재는 리소좀으로의 HER2의 트래피킹 및 국소화를 촉진함을 시사한다.
실시예 13B: 항- HER2 항체 조합을 이용한 내재화 비율 측정
상이한 에피토프를 인식하는 다수의 항-HER2 항체의 조합이 HER2 내재화의 비율에 미치는 효과를 실시예 13에 기재된 것과 유사하게 96 웰 플레이트 기반 분석으로 측정하였다. 이 실험에서, 세포에 시험 HER2 항체 단독, 트라스투주맙과의 조합으로 또는 트라스투주맙 및 퍼투주맙과의 조합으로 처리하고, 시간대별로 내재화된 항-HER2 항체의 함량을 측정하였다.
분석을 위해, 40,000개의 SKBR3 세포를 3개의 96 웰 플레이트(투명 바닥으로 된 웰을 갖는 검은색 플레이트)의 각 웰에 10% FBS를 포함하는 DMEM 배지에서 도말하고, 5% CO2에서 37℃에서 밤새 부착되도록 하였다. 다음날 세포에 다음과 같이 항체를 처리하였다. 각 웰의 배지를 시험용 HER2 항체 중 하나, 또는 트라스투주맙 5 ㎍/mL를 함유하는 신선한 냉랭 배지로 교체하고, 얼음에서 1시간 동안 배양하였다. 냉랭 배지로 2회 세포를 세척하여 결합되지 않은 항체를 제거하였다. 검출을 위해, 5 ㎍/mL의 Alexa 647 표지된 항-인간 IgG Fab 단편을 빙냉 배지에서 각 웰에 첨가하고 얼음에서 1시간 동안 배양하였다. 냉랭 배지로 각 웰을 2회 세척하여 결합되지 않은 2차 항체를 제거하였다. 다음으로, 5 ㎍/mL의 트라스투주맙, 5 ㎍/mL의 트라스투주맙 및 퍼투주맙을 함유하거나 추가 항체가 없는 배지를 각 웰에 첨가하였다. 각 처리는 3반복으로 수행되었다. 한 세트의 웰은 Alexa 647 표지된 항-인간 IgG 1가 Fab 단편으로 처리하고, 이들 웰에서 측정된 형광을 사용하여 배경 형광을 감하였다.
하나의 플레이트는 각 처리에 대해 시간 0의 값을 결정하기 위해 얼음 위에 두고, 다른 플레이트는 37℃에서 배양하였다. 1.5시간 후, 37℃에서 하나의 플레이트, 시간 0의 플레이트를 빙냉 PBS로 2회 세척하고 Licor Odyssey 스캐너의 680 nm 채널을 사용하여 스캔하였다. 각 웰에서 측정된 형광은 각 처리에 대한 총 형광으로 사용된다. 그 다음, 세포를 100 mM 글리신, 50 mM KCl 및 20 mM MgSO4 (pH 2.2)로 2회 산 세척하고, 빙냉 PBS로 2회 세척하여 표면 결합 항체를 제거하였다. 플레이트를 다시 스캔하여 각 웰에서 내재화된 형광의 양을 측정하였다. 24시간 플레이트는 다음날 같은 방식으로 분석되었다.
내재화된 각 HER2 항체 (또는 대조군 웰에서 트라스투주맙)의 백분율은 배경을 빼고, 3반복의 각각 평균한 다음 내재된 형광을 각 처리에 대한 전체 형광으로 나누고 100을 곱하여 계산한다.
표 5A에서 볼 수 있듯이, XMT 1518, XMT 1519 및 XMT 1520의 80-90%는 트라스투주맙과 퍼투주맙과 병용할 때 1시간 반 이내에 내재화된다. XMT 1517은 60%의 내재화를 보여 주며, 아마도 매우 높은 오프 비율로 인해 인큐베이션 동안 세포로부터 확산되게 한다. 트라스투주맙과 병용하면 각 시험 항체가 1시간 반 이내에 내재화되고 각 시험 항체가 단독으로 존재할 때 약 15%가 내재화된다. 트라스투주맙은 1시간 반 동안 약 15%의 내재화를 보여주고 퍼트주맙과 병용할 때 약 30%의 내재화를 보여준다.
따라서, 3가지 HER2 항체의 조합, 즉, 시험용 HER2 항체 중 임의의 하나, 트라스투주맙 및 퍼투주맙은 항체 내재화 비율을 증가시키고, HER2 엔도사이토시스의 비율을 증가시킬 가능성이 가장 높다.
〔표 5A〕
Figure pct00132
실시예 14: HER2 분해
SKBR3 세포에서 HER2 분해에 대한 항-HER2 항체의 효과는 항체 처리 후 웨스턴 분석에 의해 측정되었다. 300,000 SKBR3 세포를 6웰 배양 접시의 각 웰에 10% FBS를 포함하는 DMEM 배지에서 도말하고, 5% CO2 대기에서 37℃에서 밤새 성장시켰다. 배지를 제거하고, 10 ㎍/mL의 각 항체를 포함하는 신선 배지로 교체하고 4시간 동안 배양하였다. 빙냉 PBS로 1회 세포를 세척하고, 50 mM Tris HCl, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1% Triton X-100, cOmplete 프로테아제 억제제 칵테일 정제(Roche, Indianapolis, IN) 및 PhosSTOP 포스파타아제 억제제 칵테일 정제(Roche, Indianapolis, IN)를 포함하는 200 ㎕의 완충용액을 첨가하여 용해시켰다. 용해물을 4℃에서 15,000 rpm 에서 15분 동안 원심분리하여 불용성 잔해를 제거하였다. 20 ㎕의 각 추출물을 7 ㎕의 NUPAGE 로딩 염료(Life Technologies, Cat.# NP0007) 및 2 ㎕의 10×환원제(Life Technologies Cat.# NP0004)와 혼합하고, MOPS 러닝 완충용액(Life Technologies Cat.# NP000102)에서 120V에서 90분 동안 작동되는 4-12% 비스-트리스 폴리아크릴아마이드 젤(Life Technologies, Cat.# NP0341)에 로딩하였다. 분리된 단백질은 10% 메탄올을 포함하는 전달 완충용액(Life Technologies, Cat.# NP0006)에서 10V에서 30분 동안 반-건조 전기영동 전달 시스템(Bio-Rad, Transblot system)에서 니트로셀룰로즈 멤브레인으로 옮겼다. 멤브레인을 차단 완충용액(Li-cor, Cat.# 927-40000)에서 1시간 동안 인큐베이션하고 나서, 같은 차단 완충용액에서 1:1000으로 희석된 HER2 단백질을 인식하는 토끼 항체(Cell Signaling Technology, Cat.# 2165) 및 1:5000으로 희석된 액틴을 인식하는 토끼 항체(LiCor, Cat.# 926-42210)와 1시간 동안 인큐베이션 하였다. 인큐베이션 후 멤브레인을 10 mL의 TTBS로 3회 세척하고 2차 항체와 1시간 동안 인큐베이션하였다: IRdye® 800CW에 컨쥬게이트된 염소 항-토끼 IgG(Li-Cor, Cat.# 926-32211) 및 IRdye® 680RD에 컨쥬게이트된 염소 항-마우스 IgG(Li-Cor, Cat.# 926-68070)로 둘 다 차단 완충용액에서 1:10,000으로 희석됨. 멤브레인을 10 mL의 TTBS로 다시 3회 세척하고 Li-Cor Odyssey scanner에서 스캔하였다. 전장 HER2 단백질과 액틴에 해당하는 밴드는 스캐너 소프트웨어를 이용하여 정량화하였다. 각 HER2 밴드는 액틴 밴드로 정규화하고, 임의의 항-HER2 항체가 처리되지 않은 세포의 HER2 단백질의 백분율로 표현하였다.
도 8은 SKBR3 세포에 시험 항체 단독 또는 트라스투주맙과의 병용 처리 시 전장 HER2를 각각 78% 및 68%로 감소시키고, 저분자량 분해 생성물의 출현을 야기시키는 XMT 1518 및 XMT 1520를 제외하고는, HER2 수준에는 거의 또는 전혀 효과가 없다. 그러나, 트라스투주맙, 퍼투주맙 및 시험 HER2 항체 중 하나의 세 가지 병용 처리 시, HER2의 과도한 분해가 야기될 뿐만 아니라, HER2 분해 생성물이 출현하였다. 가장 큰 감소는 XMT 1518, 또는 XMT 1520이 트라스투주맙 및 퍼투주맙과 병용 처리될 때 20% 또는 31% HER2가 남아있음을 보여준다. 항체 XMT 1517 또는 XMT 1519가 트라스투주맙 및 퍼투주맙과 병용 처리될 때 각각 남아있는 정상 HER2 함량의 40% 또는 42% 감소한다.
실시예 15: 에피토프 매핑
항체 XMT 1517과 XMT 1519의 에피토프 매핑은 Shotgun Mutagenesis Technology를 사용하여 Integral Molecular Inc., 3711 Market Street, Suite 900, 미국 펜실바니아 주 필라델피아에서 수행되었다. Shotgun Mutagenesis는 진핵세포 내에서 돌연변이된 표적 단백질의 대형 라이브러리의 발현 및 분석을 가능케 하는 독점적인 높은 처리량의 세포 발현 기술을 이용한다. 기능의 변화를 분석하기 위해 단백질의 모든 잔기가 개별적으로 여러 개의 다른 아미노산으로 돌연변이된다. 단백질은 표준 포유동물 세포주에서 발현되므로 진핵세포의 번역 또는 번역 후 프로세싱이 필요한 어려운 단백질도 매핑할 수 있다.
Shotgun Mutagenesis Mapping은 XMT 1517이 HER2의 도메인 III의 C- 말단 및 도메인 IV의 N-말단에 XMT 1517이 결합함을 나타내는 XMT 1517 결합(C453, H473, N476, R495, H497 및 W499)에 대한 6개의 중요한 아미노산을 확인하였다. H456과 G496에서의 두 개의 2차 임계 돌연변이는 XMT 1517과 HER2의 결합에도 관여할 수 있다.
XMT1519 결합(E521, L525 및 R530)에 대한 3가지 중요한 아미노산이 확인되어 XMT 1519가 Her2의 도메인 IV의 N-말단 부위에 결합함을 가리킨다.
실시예 16: HER2 -(EG2-MI- (10 kDa PHF-BA- ( AF -HPA-Ala)))의 합성
Figure pct00133
HER2-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 컨쥬게이트는 2014년 10월 10일에 출원된 미국 특허 출원 제14/512,316호에 기재된 방법을 사용하여 제조되었다. 표 6은 항체-고분자 약물 컨쥬게이트의 세부 사항을 제시한다.
Figure pct00134
HER2-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 컨쥬게이트는 약 170 kDa 내지 약 230 kDa의 피크 분자량을 갖는다. 합성/측정된 고분자 및 고분자 컨쥬게이트는 전형적으로 다분산지수가 1.5 이하이다. 상기 고분자-약물 컨쥬게이트(즉, 항체에 결합된 약물-전달 고분자 사슬)는 약 27% 내지 약 33% 몰의 베타-알라닌, 약 6.4% 내지 약 9.6%의 AF-HPA-Ala 및 약 1.5% mol 내지 약 4% mol EG2-MI를 포함하였다.
실시예 17: 리툭시맙 -(EG2-MI- (10 kDa PHF-BA- ( AF -HPA-Ala)))의 합성
Figure pct00135
리툭시맙-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 컨쥬게이트(비-결합 대조군)은 2014년 10월 10일자로 출원된 미국 출원 번호 제14/512,316호에 기재된 과정을 이용하여 제조하였다. 표 7은 항체-고분자 약물 컨쥬게이트의 세부 사항을 제시한다.
Figure pct00136
HER2-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 컨쥬게이트는 약 170 kDa 내지 약 230 kDa의 피크 분자량을 갖는다. 합성/측정된 고분자 및 고분자 컨쥬게이트는 전형적으로 다분산지수가 1.5 이하이다. 상기 고분자-약물 컨쥬게이트(즉, 항체에 결합된 약물-전달 고분자 사슬)는 약 27% 내지 약 33% 몰의 베타-알라닌, 약 6.4% 내지 약 9.6%의 AF-HPA-Ala 및 약 1.5% mol 내지 약 4% mol EG2-MI를 포함하였다.
실시예 18: HER2 -(EG2-MI-(10 kDa PHF - BA -( AF -HPA-Ala))) 컨쥬게이트에 대한 세포독성 분석
HER2-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 컨쥬게이트는 Cell Titer-Glo (Promega Corp)를 이용하여 인 비트로에서 종양세포주에서 그들의 항증식 특성을 평가하였다. JIMT-1(HER2 중간 발현 세포, DSMZ, Braunschweig, Germany, Cat.# ACC589), MDA-MB-361(HER2 중간 발현 인간 유방암세포, ATCC, Cat.# HTB-27), MDA-MB-453 세포(트리플 음성 유방암세포주, ATCC, Cat.# HTB-131)는 10% FBS(Gibco®, Life Technologies, Grand Island, NY, Cat.# 16140-071)이 첨가된 DMEM 배지(ATCC, Manassas, VA, Cat.# 30-2002)에서 배양하였다. NCI-H522(비소세포성폐암세포주, 증폭되지 않음, ATCC, Cat.# CRL-5810), 및 NCI-H2170(비소세포성폐암세포주, ATCC, Cat.# CRL-5928) 세포는 RPMI-1640 배지(ATCC, Cat.# 30-2001)에서 배양하였다. NCI-H1581(비-소세포성 폐암 중간 발현 세포주, 증폭되지 않음, ATCC, Cat.# CRL-5878) 세포는 DMEM:F12 배지 (ATCC, Cat.# 30-2006)에서 배양하였다. SNU5(위암세포주, 증폭되지 않음, ATCC, Cat.# CRL-5973)는 20% FBS가 첨가된 Iscove's Modified Dulbecco's Medium (Invitrogen Life Technologies, Cat.# 12440053)에서 배양하였다. 20% FBS. OVCAR3(난소선암세포주, 증폭되지 않음, ATCC, Cat.# HTB-161)는 20% FBS이 첨가된 RPMI 배지에서 배양하였다. MDA-MB-175-VII(인간 유방암세포주, 증폭되지 않음, ATCC, Cat.# HTB-25)는 20% FBS가 첨가된 Leibovitz's L-15 배지에서 배양하였다. CAMA-1(인간 유방암세포주, 증폭되지 않음, ATCC, Cat.# HTB-21)는 90% ATCC-formulated Eagle's Minimum Essential Medium에서 배양하였다. ZR75-1(인간 유방암세포주, 증폭되지 않음, ATCC, Cat.# CRL-1500)는 RPMI-1640 배지에서 배양하였다. HCC1187(인간 유방암세포주, 증폭되지 않음, ATCC, Cat.# CRL-2322)는 RPMI-1640 배지에서 배양하였다. HCC38(인간 유방암세포주, 증폭되지 않음, ATCC, Cat.# CRL-2314)는 RPMI-1640 배지에서 배양하였다. T47D(인간 유방암세포주, 증폭되지 않음, ATCC, Cat.# HTB-133)는 RPMI-1640 배지에서 배양하였다. HCC70(인간 유방암세포주, 증폭되지 않음, ATCC, Cat.# CRL-2315)는 RPMI-1640 배지에서 배양하였다. MDA-MB-231(인간 유방암세포주, 증폭되지 않음, ATCC, Cat.# HTB-26)는 DMEM 배지에서 배양하였다. CALU3(인간 폐 선암종 세포주, ATCC, Cat.# HTB-55)는 ATCC-formulated Eagle's Minimum Essential Medium에서 배양하였다. A549(인간 폐 선암종 세포주, 증폭되지 않음, ATCC, Cat.# CCL-185)는 F12K 배지에서 배양하였다. NCI-H2122(인간 폐 선암종 세포주, 증폭되지 않음, ATCC, Cat.# CRL-5985)는 RPMI-1640 배지(ATCC, Cat.# 30-2001)에서 배양하였다. NCI-H460(인간 폐 암종 세포주, 증폭되지 않음, ATCC, Cat.# HTB-177)는 PMI-1640 배지(ATCC, Cat.# 30-2001)에서 배양하였다. SHP-77(인간 소세포성 폐암세포주, 증폭되지 않음, ATCC, Cat.# CRL-2195)는 RPMI-1640 배지(ATCC, Cat.# 30-2001)에서 배양하였다. KATO III(인간 위암종 세포주, 증폭되지 않음, ATCC, Cat.# HTB-103)는 20% FBS가 첨가된 Iscove's Modified Dulbecco's Medium에서 배양하였다. MKN-45 III(인간 위암 선암 세포주, 증폭되지 않음, DSMZ, Braunschweig, Germany, Cat.# ACC409)는 RPMI-1640 배지(ATCC, Cat.# 30-2001)에서 배양하였다. SKOV3(인간 난소 선암종 세포주, ATCC, Cat.# HTB-77)는 McCoy's 5a 배지에서 배양하였다. TOV-21G(인간 난소 선암 세포주, 증폭되지 않음, ATCC, Cat.# CRL-11730는 최종 농도 1.5 g/L의 소듐 바이카보네이트를 포함하는 MCDB 105 배지 및 최종 농도 2.2 g/L의 소듐 바이카보네이트를 포함하는 Medium 199의 1:1 혼합물에서 배양하였다. BT474(HER2 고발현 인간 유방암세포, ATCC, Cat.# HTB-20)는 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지에서 배양하였다. NCI-N87(HER2 고발현 위암세포주, ATCC, Cat.# CRL-5822)는 10% FBS가 첨가된 RPMI-1640 배지에서 성장시켰다.
세포독성 분석을 위해, 96 웰 플레이트에 웰당 3000개의 세포의 밀도로 세포를 씨딩하고, 5% CO2의 존재에서 37℃에서 밤새 인큐베이션동안 부착되도록 하였다. 이후 배지를 HER2-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 컨쥬게이트(100 nM 내지 0.1 pM) 또는 Kadcyla(Genentech)를 포함하는 신선 배지로 교체하고, 세포를 5% CO2의 존재에서 37℃에서 72시간 또는 6일 동안 인큐베이션하였다. 세포 생존은 CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay(Promega, Madison, WI)를 이용하여 키트 설명서에 기재된 바와 같이 측정하였다. 세포 생존능은 미처리 대조군으로 정규화하고, 백분율로 나타내었다. 값을 플롯하고 IC50 값을 Graphpad Prism 소프트웨어(San Diego, CA)로 4 파라미터, 가변 슬로프, 투여량 반응 곡선 피팅 알고리즘을 사용하여 계산하였다. 표 8은 HER2-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 컨쥬게이트 및 Kadcyla의 세포 독성에 대한 예시적인 결과를 제공한다.
Figure pct00137
ND = 측정 안됨
b = 실시예 16B 대신 실시예 16C가 분석에 사용됨
c = 무관한 항체 대조군과 동등한 효능
표 8에 나타낸 바와 같이, 모든 HER2 항체-고분자-약물 컨쥬게이트는 모든 시험된 세포주에서 Kadcyla보다 더 강력하다.
실시예 19: 돌연변이 HER2를 갖는 세포주에서 HER2 -(EG2-MI-(10 kDa PHF - BA -(AF-HPA-Ala))) 컨쥬게이트에 대한 세포독성 분석
HER2-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 컨쥬게이트는 Cell Titer-Glo (Promega Corp)를 이용하여 인 비트로에서 종양세포주에서 그들의 항증식 특성에 대해 평가하였다. NCI-H1781(HER2 돌연변이를 발현하는 인간 폐암세포, ATCC, Cat.# CRL-5894)는 10% FBS를 포함하는 RPMI-1640 배지에서 배양하였다.
세포독성 분석을 위해, 96 웰 플레이트에 웰당 3000개의 세포의 밀도로 세포를 씨딩하고, 5% CO2의 존재에서 37℃에서 밤새 인큐베이션동안 부착되도록 하였다. 이후, 배지를 HER2-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 컨쥬게이트(100 nM 내지 0.1 pM), 실시예 17A(rituximab-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))), 또는 Kadcyla (Genentech)를 포함하는 신선 배지로 교체하고, 5% CO2의 존재에서 37℃에서 72시간 동안 인큐베이션하였다. 세포 생존은 CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay(Promega, Madison, WI)를 이용하여 키트 설명서에 기재된 바와 같이 측정하였다. 세포 생존능은 미처리 대조군으로 정규화하고, 백분율로 나타내었다. 값을 플롯하고 IC50 값을 Graphpad Prism 소프트웨어(San Diego, CA)로 4 파라미터, 가변 슬로프, 투여량 반응 곡선 피팅 알고리즘을 사용하여 계산하였다. 표 9는 HER2-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 컨쥬게이트 및 Kadcyla의 세포 독성에 대한 예시적인 결과를 제공한다. 표 9는 이들 분석 결과를 제공한다.
Figure pct00138
표 9에 나타낸 바와 같이, 모든 HER2 항체-고분자-약물 컨쥬게이트는 시험된 세포주에서 리툭시맙 항체-고분자-약물 컨쥬게이트 또는 Kadcyla보다 더 강력하다.
실시예 20: PBRM -고분자-약물 컨쥬게이트의 투여에 대한 종양 생장 반응
암컷 CB-17 SCID 마우스에 NCI-N87 세포(각 그룹당 10마리), JIMT-1 세포(각 그룹당 10마리), SNU-5 세포(각 그룹당 10마리), H522 세포(각 그룹당 10마리), SKOV3 세포(각 그룹당 10마리), Calu-3 세포(각 그룹당 10마리), NCI-N87 Kadcyla 내성 세포(각 그룹당 10마리), NCI-N87-MSA Kadcyla 내성 세포(각 그룹당 10마리) 또는 BT474 종양 조각(각 그룹당 10마리)을 피하접종하였다. 암컷 NCr nu/nu에 TOV-21G 세포(각 그룹당 10마리)를 피하접종하였다. 시험 화합물 또는 비히클을 1일 1회 또는 지시된 대로 1회 투약하였다. 종양 크기는 디지털 캘리퍼스를 사용하여 도 8 내지 도 18에 표시된 시간에서 측정하였다. 종양 체적을 계산하여 종양 생장 지연을 결정하는데 사용하였다. 종양이 800-1500 mm3 크기에 도달하면 마우스를 희생시켰다. 종양 체적은 각 그룹의 평균±SEM으로 보고한다.
도 9는 비히클의 IV 투여 후 NCI-N87 세포를 피하접종한 마우스(각 그룹당 10마리)에서 종양 반응에 대한 결과를 제공한다; 실시예 16A, 0.67 mg/kg의 트라스투주맙-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))); 또는 1일 단일투여량으로, 실시예 16D, 0.67 mg/kg의 XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))). 비히클 및 트라스투주맙-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))는 종양 체적의 증가를 보였다. XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))는 29일에 종양 생장 억제 분석에 기초하여 60% 부분 회귀를 보여 치료적 활성 가능성(TGI 88%)을 유도하였다.
도 10은 비히클의 IV 투여 후 JIMT-1 세포를 피하접종한 마우스(각 그룹당 10마리)에서 종양 반응에 대한 결과를 제공한다; 20 mg/kg의 Kadcyla; 실시예 16A, 0.67 mg/kg의 트라스투주맙-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))); 또는 1일 단일투여량으로, 실시예 16D, 0.67 mg/kg의 XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))). 비히클 및 Kadcyla는 종양 체적의 증가를 보였다. 트라스투주맙-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 및 XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 컨쥬게이트는 치료 가능성을 보였고, 각각 40% 및 70% 회귀를 가졌다. XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))는 69일에 연구 종료 시점에 종양이 없는 생존자로 남아있는 5마리는 부분 회귀 및 2마리는 완전 회귀를 보였다.
도 11은 비히클의 IV 투여 후 JIMT-1 세포를 피하접종한 마우스(각 그룹당 10마리)에서 종양 반응에 대한 결과를 제공한다; 1일 단일투여량으로, 10 mg/kg의 Kadcyla; 3주 동안 매주 10 mg/kg의 Kadcyla 및 15 mg/kg의 퍼투주맙의 조합; 또는 1일 단일투여량으로, 실시예 16D, 0.67 mg/kg의 XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))). 비히클, Kadcyla 및 Kadcyla과 퍼투주맙의 조합 모두 종양 체적의 증가를 보였다. XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 컨쥬게이트는 60% 부분 회귀를 보여 가장 효과적이었다.
도 12는 비히클의 IV 투여 후 NCI-N87 세포를 피하접종한 마우스(각 그룹당 10마리)에서 종양 반응에 대한 결과를 제공한다; 실시예 16F, 1일 단일투여량으로, 0.67 mg/kg의 XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))); 3주 동안 매주(즉, 1, 8 및 15일) 투여된, 15 mg/kg의 트라스투주맙과 15 mg/kg의 퍼투주맙의 조합; 또는 3주 동안 매주(즉, 1, 8 및 15일) 투여된, 1일 단일투여량으로, 0.67 mg/kg 의 실시예16F, XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))과 함께 15 mg/kg의 트라스투주맙과 15 mg/kg의 퍼투주맙의 트리플 조합. 비히클은 종양 체적의 증가를 보였다. XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 단독 또는 조합 모두 가장 효과적이고 100% 부분 회귀를 보이는 트라스투주맙; 퍼투주맙 및 실시예 16F의 트리플 조합과 함께 종양의 감소를 보이는 반면, 실시예 16F 단독 또는 트라스투주맙과 퍼투주맙의 조합 각각은 10마리 중 하나의 부분 반응을 유도하였다. 트리플렛은 수치적으로 부분 반응의 비율이 더 높았고, 실시예 16F 단일치료 또는 트라스투주맙+퍼투주맙 더블렛 중 어느 하나와 비교하여 종양 체적에서 유의적으로 더 큰 감소로 이어진다(p<.05, Mann-Whitney test). 부분 반응은 최소 3회의 연속 종양 측정을 통해 유지되는 기준선 종양 체적의 50% 미만으로의 회귀로 정의된다.
퍼투주맙과 트라스투주맙의 조합에서 XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))에 대한 전체 생존 이점은 XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 단독 투여(P < 0.011, logrank test)에 비해 유의적으로 달랐고, 퍼투주맙과 트라스투주맙의 조합에 의해 달성된 결과(P < 0.273, logrank test) 또는 XMT-1519 항체, 퍼투주맙 및 트라스투주맙의 삼중 조합(P < 0.05, logrank test)보다 높았다.
도 13은 비히클의 IV 투여 후 SNU-5 세포를 피하접종한 마우스(각 그룹당 10마리)에서 종양 반응에 대한 결과를 제공한다: 단일투여량으로, 10 mg/kg의 Kadcyla; 단일투여량으로, 5 mg/kg, 2 mg/kg 또는 0.67 mg/kg의 실시예 16E, XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))); 또는 1일 단일투여량으로, 5 mg/kg의 실시예 17B, 리툭시맙-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))). 18일에 비히클은 종양 체적의 증가를 보였다. XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 컨쥬게이트는 종양 감소를 보여 Kadcyla 또는 리툭시맙-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 보다 더 효과적이므로 5 mg/kg 및 2 mg/kg의 투여 시 100% 종양이 없는 생존자와 0.67 mg/kg 투여 시 90% 종양이 없는 생존자를 보였다.
도 14는 비히클의 IV 투여 후 TOV-21G 세포를 피하접종한 마우스(각 그룹당 10마리)에서 종양 반응에 대한 결과를 제공한다; 단일투여량으로, 10 mg/kg의 Kadcyla; 1일 단일투여량으로, 5 mg/kg 또는 2 mg/kg의 실시예 16E, XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))). XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 컨쥬게이트는 종양 지연을 보여 치료 활성에 대해 한계치에 도달하지 않은 Kadcyla 보다 더 효과적이었다.
도 15는 비히클의 IV 투여 후 H522 세포를 피하접종한 마우스(각 그룹당 10마리)에서 종양 반응에 대한 결과를 제공한다; 단일투여량으로, 10 mg/kg의 Kadcyla; 단일투여량으로, 5 mg/kg의 실시예 16E, XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))); 또는 1일 단일투여량으로, 5 mg/kg의 실시예 17B, 리툭시맙-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))). XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 컨쥬게이트는 종양 지연을 보여주었고, 치료 활성에 대한 한계치에 도달하지 않은 Kadcyla 및 리툭시맙-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))보다 더 효과적이었다.
도 16은 비히클의 IV 투여 후 SKOV3 세포를 피하접종한 마우스(각 그룹당 10마리)에서 종양 반응에 대한 결과를 제공한다; 단일투여량으로, 10 mg/kg의 Kadcyla; 단일투여량으로, 5 mg/kg의 실시예 16E, XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))); 또는 1일 단일투여량으로, 5 mg/kg의 실시예 17B, 리툭시맙-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))). XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))는 10 완전 반응으로 이루어진 100% 회귀를 보여주며, 치료 활성에 대해 한계치에 도달하지 않은 Kadcyla 또는 리툭시맙-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)보다 더 효과적이었다.
도 17은 비히클의 IV 투여 후 Calu-3 세포를 피하접종한 마우스(각 그룹당 10마리)에서 종양 반응에 대한 결과를 제공한다; 또는 1일 단일투여량으로, 5 mg/kg의 실시예 16F, XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))). XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))는 두 개의 부분 반응 및 8개의 완전 반응으로 이루어진 100% 회귀 반응을 보이며, 60일에 6마리는 종양이 없이 남아있었다.
도 18은 비히클의 IV 투여 후 환자 유래 이종이식모델 BRE-0333 HER2 1+(각 그룹당 8마리)에서 종양 반응에 대한 결과를 제공한다; 단일투여량으로, 10 mg/kg의 Kadcyla; 단일투여량으로, 3 mg/kg의 실시예 16H, XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 또는 1일에 3 mg/kg의 실시예 17B, 리툭시맙-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))). XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 컨쥬게이트는 Kadcyla 또는 리툭시맙-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 보다 더 효과적이었다.
도 19는 비히클의 IV 투여 후 환자 유래 이종이식모델 MAXF_1162 HER2 3+ (각 그룹당 10마리)에서 종양 반응에 대한 결과를 제공한다; 단일투여량으로, 10 mg/kg의 Kadcyla; 1일 단일투여량으로, 1 또는 3 mg/kg의 실시예 16H, XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 또는 3 mg/kg의 실시예 17B, 리툭시맙-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))). 1 및 3 mg/kg 둘 다에서 XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))는 100% 회귀 반응 및 종양이 없는 생존자를 보였고, 3 mg/kg에서 Kadcyla 또는 리툭시맙-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 보다 더 효과적이었다.
도 20은 비히클의 IV 투여 후 BT474 종양 조각을 피하접종한 마우스(각 그룹당 10마리)에서 종양 반응에 대한 결과를 제공한다; 단일투여량으로, 5 mg/kg의 Kadcyla; 1일 단일투여량으로, 5 mg/kg 또는 2 mg/kg의 실시예 16H, XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))); 1일 단일투여량으로, 5 mg/kg의 실시예 17C, 리툭시맙-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 또는 단일투여량으로, 5 mg/kg의 XMT 1519. XMT 1519-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 컨쥬게이트는 완전 종양 회귀를 보여주었고, Kadcyla, 리툭시맙-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 또는 XMT-1519보다 더 효과적이었다.
XMT 1519-(EG2-MI-(PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 컨쥬게이트의 1 mg/kg 또는 0.67 mg/kg의 단일투여량은 아도-트라스투주맙 엠탄신(Kadcyla)이 10 mg/kg 이상의 투여량에서 활성이 없는 HER2-저발현 유방암 및 위암 모델에서 완전 회귀를 나타냈다. HER2-유도된 종양 모델에서, XMT 1519-(EG2-MI-(PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 컨쥬게이트는 항-HER2 치료에 널리 사용되는 트라스투주맙 및 퍼투주맙과의 조합에서 시너지 효능을 나타냈다. XMT 1519-(EG2-MI-(PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 컨쥬게이트는 우수한 약동학 프로파일을 입증하였고, 치료 용량에서 비-인간 영장류에서 잘 용인되었다.
전임상 자료에 따르면, XMT 1519-(EG2-MI-(PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) 컨쥬게이트는 HER2-표적 치료로부터 혜택을 볼 수 있는 환자의 수를 크게 늘릴 가능성을 가지고 있다. 컨쥬게이트는 다른 치료법이 비활성인 곳에서 10,000개 미만의 HER2 수용체가 있는 암에서 효율적인 약물 전달을 제공한다.
다른 구체예
본 발명은 그 상세한 설명과 관련하여 설명되었지만, 전술한 설명은 예시하기 위한 것이지 첨부된 청구범위에 의해 한정되는 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니다. 다른 양상들, 장점들 및 변형들은 다음의 청구항들의 범위 내에 있다.
<110> Mersana Therapeutics, Inc. <120> MONOCLONAL ANTIBODIES AGAINST HER2 EPITOPE AND METHODS OF USE <130> I16O10C0079P/US <150> US 62/013,944 <151> 2014-06-18 <150> US 62/034,489 <151> 2014-08-07 <150> US 62/147,960 <151> 2015-04-15 <150> US 62/149,444 <151> 2015-04-17 <160> 47 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 1 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Glu Ala Pro Tyr Tyr Ala Lys Asp Tyr Met Asp Val Trp Gly 100 105 110 Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 225 230 235 240 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 325 330 335 Glu Lys 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Pro Ile Trp Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala Cys Gln 610 615 620 Pro Cys Pro Ile Asn Cys Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp Asp Lys 625 630 635 640 Gly Cys Pro Ala Glu Gln Arg Ala Ser Pro Leu Thr Ser Ile Ile Ser 645 650 655 Ala Val Val Gly Ile Leu Leu Val Val Val Leu Gly Val Val Phe Gly 660 665 670 Ile Leu Ile Lys Arg Arg Gln Gln Lys Ile Arg Lys Tyr Thr Met Arg 675 680 685 Arg Leu Leu Gln Glu Thr Glu Leu Val Glu Pro Leu Thr Pro Ser Gly 690 695 700 Ala Met Pro Asn Gln Ala Gln Met Arg Ile Leu Lys Glu Thr Glu Leu 705 710 715 720 Arg Lys Val Lys Val Leu Gly Ser Gly Ala Phe Gly Thr Val Tyr Lys 725 730 735 Gly Ile Trp Ile Pro Asp Gly Glu Asn Val Lys Ile Pro Val Ala Ile 740 745 750 Lys Val Leu Arg Glu Asn Thr Ser Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile Leu 755 760 765 Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Gly Val Gly Ser Pro Tyr Val Ser Arg 770 775 780 Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser Thr Val Gln Leu Val Thr Gln Leu 785 790 795 800 Met Pro Tyr Gly Cys Leu Leu Asp His Val Arg Glu Asn Arg Gly Arg 805 810 815 Leu Gly Ser Gln Asp Leu Leu Asn Trp Cys Met Gln Ile Ala Lys Gly 820 825 830 Met Ser Tyr Leu Glu Asp Val Arg Leu Val His Arg Asp Leu Ala Ala 835 840 845 Arg Asn Val Leu Val Lys Ser Pro Asn His Val Lys Ile Thr Asp Phe 850 855 860 Gly Leu Ala Arg Leu Leu Asp Ile Asp Glu Thr Glu Tyr His Ala Asp 865 870 875 880 Gly Gly Lys Val Pro Ile Lys Trp Met Ala Leu Glu Ser Ile Leu Arg 885 890 895 Arg Arg Phe Thr His Gln Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Val Thr Val 900 905 910 Trp Glu Leu Met Thr Phe Gly Ala Lys Pro Tyr Asp Gly Ile Pro Ala 915 920 925 Arg Glu Ile Pro Asp Leu Leu Glu Lys Gly Glu Arg Leu Pro Gln Pro 930 935 940 Pro Ile Cys Thr Ile Asp Val Tyr Met Ile Met Val Lys Cys Trp Met 945 950 955 960 Ile Asp Ser Glu Cys Arg Pro Arg Phe Arg Glu Leu Val Ser Glu Phe 965 970 975 Ser Arg Met Ala Arg Asp Pro Gln Arg Phe Val Val Ile Gln Asn Glu 980 985 990 Asp Leu Gly Pro Ala Ser Pro Leu Asp Ser Thr Phe Tyr Arg Ser Leu 995 1000 1005 Leu Glu Asp Asp Asp Met Gly Asp Leu Val Asp Ala Glu Glu Tyr Leu 1010 1015 1020 Val Pro Gln Gln Gly Phe Phe Cys Pro Asp Pro Ala Pro Gly Ala Gly 1025 1030 1035 1040 Gly Met Val His His Arg His Arg Ser Ser Ser Thr Arg Ser Gly Gly 1045 1050 1055 Gly Asp Leu Thr Leu Gly Leu Glu Pro Ser Glu Glu Glu Ala Pro Arg 1060 1065 1070 Ser Pro Leu Ala Pro Ser Glu Gly Ala Gly Ser Asp Val Phe Asp Gly 1075 1080 1085 Asp Leu Gly Met Gly Ala Ala Lys Gly Leu Gln Ser Leu Pro Thr His 1090 1095 1100 Asp Pro Ser Pro Leu Gln Arg Tyr Ser Glu Asp Pro Thr Val Pro Leu 1105 1110 1115 1120 Pro Ser Glu Thr Asp Gly Tyr Val Ala Pro Leu Thr Cys Ser Pro Gln 1125 1130 1135 Pro Glu Tyr Val Asn Gln Pro Asp Val Arg Pro Gln Pro Pro Ser Pro 1140 1145 1150 Arg Glu Gly Pro Leu Pro Ala Ala Arg Pro Ala Gly Ala Thr Leu Glu 1155 1160 1165 Arg Pro Lys Thr Leu Ser Pro Gly Lys Asn Gly Val Val Lys Asp Val 1170 1175 1180 Phe Ala Phe Gly Gly Ala Val Glu Asn Pro Glu Tyr Leu Thr Pro Gln 1185 1190 1195 1200 Gly Gly Ala Ala Pro Gln Pro His Pro Pro Pro Ala Phe Ser Pro Ala 1205 1210 1215 Phe Asp Asn Leu Tyr Tyr Trp Asp Gln Asp Pro Pro Glu Arg Gly Ala 1220 1225 1230 Pro Pro Ser Thr Phe Lys Gly Thr Pro Thr Ala Glu Asn Pro Glu Tyr 1235 1240 1245 Leu Gly Leu Asp Val Pro Val 1250 1255 <210> 39 <211> 630 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 39 Thr Gln Val Cys Thr Gly Thr Asp Met Lys Leu Arg Leu Pro Ala Ser 1 5 10 15 Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu Arg His Leu Tyr Gln Gly Cys Gln 20 25 30 Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu Thr Tyr Leu Pro Thr Asn Ala Ser 35 40 45 Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln Glu Val Gln Gly Tyr Val Leu Ile 50 55 60 Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val Pro Leu Gln Arg Leu Arg Ile Val 65 70 75 80 Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp Asn Tyr Ala Leu Ala Val Leu Asp 85 90 95 Asn Gly Asp Pro Leu Asn Asn Thr Thr Pro Val Thr Gly Ala Ser Pro 100 105 110 Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu Arg Ser Leu Thr Glu Ile Leu Lys 115 120 125 Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg Asn Pro Gln Leu Cys Tyr Gln Asp Thr 130 135 140 Ile Leu Trp Lys Asp Ile Phe His Lys Asn Asn Gln Leu Ala Leu Thr 145 150 155 160 Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg Ala Cys His Pro Cys Ser Pro Met 165 170 175 Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly Glu Ser Ser Glu Asp Cys Gln Ser 180 185 190 Leu Thr Arg Thr Val Cys Ala Gly Gly Cys Ala Arg Cys Lys Gly Pro 195 200 205 Leu Pro Thr Asp Cys Cys His Glu Gln Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly 210 215 220 Pro Lys His Ser Asp Cys Leu Ala Cys Leu His Phe Asn His Ser Gly 225 230 235 240 Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala Leu Val Thr Tyr Asn Thr Asp Thr 245 250 255 Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu Gly Arg Tyr Thr Phe Gly Ala Ser 260 265 270 Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn Tyr Leu Ser Thr Asp Val Gly Ser 275 280 285 Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His Asn Gln Glu Val Thr Ala Glu Asp 290 295 300 Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys Ser Lys Pro Cys Ala Arg Val Cys 305 310 315 320 Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu Arg Glu Val Arg Ala Val Thr Ser 325 330 335 Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly Cys Lys Lys Ile Phe Gly Ser Leu 340 345 350 Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp Gly Asp Pro Ala Ser Asn Thr Ala 355 360 365 Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln Val Phe Glu Thr Leu Glu Glu Ile 370 375 380 Thr Gly Tyr Leu Tyr Ile Ser Ala Trp Pro Asp Ser Leu Pro Asp Leu 385 390 395 400 Ser Val Phe Gln Asn Leu Gln Val Ile Arg Gly Arg Ile Leu His Asn 405 410 415 Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln Gly Leu Gly Ile Ser Trp Leu Gly 420 425 430 Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu Gly Ser Gly Leu Ala Leu Ile His His 435 440 445 Asn Thr His Leu Cys Phe Val His Thr Val Pro Trp Asp Gln Leu Phe 450 455 460 Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu His Thr Ala Asn Arg Pro Glu Asp 465 470 475 480 Glu Cys Val Gly Glu Gly Leu Ala Cys His Gln Leu Cys Ala Arg Gly 485 490 495 His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr Gln Cys Val Asn Cys Ser Gln Phe 500 505 510 Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu Glu Cys Arg Val Leu Gln Gly Leu 515 520 525 Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg His Cys Leu Pro Cys His Pro Glu 530 535 540 Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val Thr Cys Phe Gly Pro Glu Ala Asp 545 550 555 560 Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr Lys Asp Pro Pro Phe Cys Val Ala 565 570 575 Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro Asp Leu Ser Tyr Met Pro Ile Trp 580 585 590 Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala Cys Gln Pro Cys Pro Ile Asn Cys 595 600 605 Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp Asp Lys Gly Cys Pro Ala Glu Gln 610 615 620 Arg Ala Ser Pro Leu Thr 625 630 <210> 40 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 40 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 41 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 41 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly <210> 42 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 42 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 43 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 43 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 44 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 44 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Ile Trp Trp Ser 20 25 30 Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Ser Pro Ser Ser Gly Trp Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Trp Ser Ser Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 45 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 45 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Ser Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Trp Trp Trp Pro Ser 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 46 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 46 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Thr Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Phe Ile Asn Trp Val Lys Lys Asn Ser Gly Lys Ser Pro Glu Trp Ile 35 40 45 Gly His Ile Ser Ser Ser Tyr Ala Thr Ser Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Lys Ala Ala Phe Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Phe 65 70 75 80 Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Ser Gly Asn Tyr Glu Glu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 47 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 47 Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Leu Pro Val Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Lys Ser Ser Gln Thr Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Asn Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Ser Trp Ala Phe Thr Arg Lys Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Gly Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Ser Asn Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Ile 100 105 110 Lys

Claims (80)

  1. 인간 HER2 수용체의 도메인 IV의 N-말단의 적어도 한 부분에 결합하나, 인간 HER2 수용체의 에피토프 4D5에 결합하는 항체와는 교차-경쟁하지 않으며, 다음의 특징을 하나 이상 나타내는 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    (i) 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 아미노산 잔기 452 내지 531을 포함하는 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하고;
    (ii) 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하고, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2 수용체에 결합하는 트라스투주맙(트라스투주맙)과는 교차-경쟁하지 않으며;
    (iii) 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2 수용체의 도메인 III의 C-말단의 적어도 한 부분과 도메인 IV의 N-말단의 적어도 한 부분에 특이적으로 결합하나, Fab37 단클론 항체와는 교차-경쟁하지 않고;
    (iv) 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2 수용체의 도메인 III의 C-말단의 적어도 한 부분과 도메인 IV의 N-말단의 적어도 한 부분에 특이적으로 결합하나, Fab37 단클론 항체와 교차-경쟁하지 않고, 인간 HER2 수용체에 결합하는 트라스투주맙(트라스투주맙)과도 교차-경쟁하지 않으며;
    (v) 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하고, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2 수용체에 결합하는 트라스투주맙 또는 퍼투주맙 또는 Fab37 단클론 항체 또는 chA21 단클론 항체와는 경쟁하지 않고; 및
    (vi) 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 또한 필리핀 원숭이 HER2 수용체의 에피토프에 결합한다.
  2. 제1항에 있어서,
    분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 아미노산 잔기 520 내지 531을 포함하는 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하는, 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 아미노산 잔기 E521, L525 및 R530을 포함하는 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하는, 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 이의 항원 결합 단편은 아미노산 서열 FTFSSYSMN(SEQ ID NO:　25)를 포함하는 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 1(complementarity determining region 1(CDRH1)); 아미노산 서열 YISSSSSTIYYADSVKG(SEQ ID NO:　26)을 포함하는 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 2(CDRH2); 아미노산 서열 GGHGYFDL(SEQ ID NO:　27)을 포함하는 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 3(CDRH3); 아미노산 서열 RASQSVSSSYLA(SEQ ID NO:　28)을 포함하는 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 1(CDRL1); 아미노산 서열 GASSRAT(SEQ ID NO:　21)을 포함하는 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 2(CDRL2); 및 아미노산 서열 QQYHHSPLT(SEQ ID NO:　29)를 포함하는 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 3(CDRL3)를 포함하는, 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO:13의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  6. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  7. 제1항에 있어서,
    분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 아미노산 잔기 452 내지 500을 포함하는 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하는, 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  8. 제1항 또는 제7항에 있어서,
    분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 아미노산 잔기 C453, H473, N476, R495, H497 및 W499를 포함하는 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하는, 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  9. 제1항, 제7항 및 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 이의 항원 결합 단편은 아미노산 서열 FTFSSYGMH(SEQ ID NO:　17)를 포함하는 CDRH1; 아미노산 서열 VIWYDGSNKYYADSVKG(SEQ ID NO:　18)를 포함하는 CDRH2; 아미노산 서열 EAPYYAKDYMDV(SEQ ID NO:　19)를 포함하는 CDRH3; 아미노산 서열 RASQSVSSDYLA(SEQ ID NO:　20)를 포함하는 CDRL1; 아미노산 서열 GASSRAT(SEQ ID NO:　21)을 포함하는 CDRL2; 및 아미노산 서열 QQYVSYWT(SEQ ID NO:　22)을 포함하는 CDRL3를 포함하는, 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  10. 제1항, 제7항 및 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역과 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  11. 제1항, 제7항 및 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 이의 항원 결합 단편은 단클론 항체, 도메인 항체, 단일쇄 항체, Fab 단편, F(ab')2 단편, 단일쇄 가변 단편(scFv), scFv-Fc 단편, 단일쇄 항체(scAb), 도메인 항체(dAb), 단일 도메인 중쇄 항체, 또는 단일 도메인 경쇄 항체인, 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  13. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 이의 항원 결합 단편은 토끼, 마우스, 키메릭, 인간화 또는 완전 인간 단클론 항체인, 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  14. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 이의 항원 결합 단편은 IgG 아이소타입인, 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  15. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 이의 항원 결합 단편은 IgG1 아이소타입인, 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  16. 인간 HER2 수용체와의 특이적 결합을 위해 제4항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 경쟁하는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  17. 제16항에 있어서,
    항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2 수용체에 결합하는 트라스투주맙 또는 퍼투주맙 또는 Fab37 단클론 항체 또는 chA21 단클론 항체와는 경쟁하지 않는, 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  18. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 인코딩하는 분리된 핵산 분자.
  19. 제18항의 분리된 핵산 분자를 포함하는 벡터.
  20. 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 발현으로 이어지는 조건에서 제19항의 벡터를 포함하는 세포를 배양하여 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 생산하는 방법.
  21. 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 하나 이상의 치료제 또는 진단제(D)를 포함하고, 각각은 독립적으로 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 직접 또는 간접적으로 연결되며, 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2 수용체의 도메인 IV의 N-말단의 적어도 한 부분에 결합하나 인간 HER2 수용체의 에프토프 4D5에 결합하는 항체와는 교차-경쟁하지 않으며, 다음의 특징을 하나 이상 포함하는 컨쥬게이트:
    (i) 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 아미노산 잔기 452 내지 531을 포함하는 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하고;
    (ii) 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하고, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2 수용체에 결합하는 트라스투주맙과는 교차-경쟁하지 않으며;
    (iii) 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2 수용체의 도메인 III의 C-말단의 적어도 한 부분과 도메인 IV의 N-말단의 적어도 한 부분에 특이적으로 결합하나, Fab37 단클론 항체와는 교차-경쟁하지 않고;
    (iv) 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2 수용체의 도메인 III의 C-말단의 적어도 한 부분과 도메인 IV의 N-말단의 적어도 한 부분에 특이적으로 결합하나, Fab37 단클론 항체와 교차-경쟁하지 않고, 인간 HER2 수용체에 결합하는 트라스투주맙과도 교차-경쟁하지 않으며;
    (v) 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하고, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2 수용체에 결합하는 트라스투주맙 또는 퍼투주맙 또는 Fab37 단클론 항체 또는 chA21 단클론 항체와는 경쟁하지 않고; 및
    (vi) 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 또한 필리핀 원숭이 HER2 수용체의 에피토프에 결합한다.
  22. 제21항에 있어서,
    분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 아미노산 잔기 520 내지 531을 포함하는 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하는, 컨쥬게이트.
  23. 제21항 또는 제22항에 있어서,
    분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 HER2 수용체의 세포외 도메인의 아미노산 잔기 E521, L525 및 R530를 포함하는 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하는, 컨쥬게이트.
  24. 제21항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 이의 항원 결합 단편은 아미노산 서열 FTFSSYSMN(SEQ ID NO:　25)를 포함하는 CDRH1; 아미노산 서열 YISSSSSTIYYADSVKG(SEQ ID NO:　26)을 포함하는 CDRH2; 아미노산 서열 GGHGYFDL(SEQ ID NO:　27)을 포함하는 CDRH3; 아미노산 서열 RASQSVSSSYLA(SEQ ID NO:　28)을 포함하는 CDRL1; 아미노산 서열 GASSRAT(SEQ ID NO:　21)을 포함하는 CDRL2; 및 아미노산 서열 QQYHHSPLT(SEQ ID NO:　29)를 포함하는 CDRL3을 포함하는, 컨쥬게이트.
  25. 제21항 제23항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 컨쥬게이트.
  26. 제21항 제23항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 컨쥬게이트.
  27. 제21항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 이의 항원 결합 단편은 단클론 항체, 도메인 항체, 단일쇄 항체, Fab 단편, F(ab')2 단편, scFv, scFv-Fc, scAb, dAb, 단일 도메인 중쇄 항체, 또는 단일 도메인 경쇄 항체인, 컨쥬게이트.
  28. 제21항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 이의 항원 결합 단편은 토끼, 마우스, 키메릭, 인간화 또는 완전 인간 단클론 항체인, 컨쥬게이트.
  29. 제21항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 이의 항원 결합 단편은 IgG 아이소타입인, 컨쥬게이트.
  30. 제21항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체 또는 이의 항원 결합 단편은 IgG1 아이소타입인, 컨쥬게이트.
  31. 제21항에 있어서,
    항체 또는 이의 항원 결합 단편에 둘 다 결합된 하나 이상의 고분자 스캐폴드를 더 포함하고, 하나 이상의 D 각각은 독립적으로 하나 이상의 고분자 스캐폴드에 의해 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 연결되는, 컨쥬게이트.
  32. 제31항에 있어서,
    하나 이상의 고분자 스캐폴드 각각은 독립적으로 약 2 kDa 내지 약 40 kDa의 범위의 분자량을 갖는 폴리(1-하이드록시메틸에틸렌 하이드록시메틸-포말(PHF)을 포함하는, 컨쥬게이트.
  33. 제32항에 있어서,
    하나 이상의 고분자 스캐폴드 각각은 독립적으로 화학식 (Ic)인, 컨쥬게이트:
    [화학식 Ic]
    Figure pct00139

    여기서,
    LD1 은 카르보닐-함유 모이어티이고;
    Figure pct00140
    에서
    Figure pct00141
    의 각 존재는 독립적으로 생분해성 결합을 포함하는 제1 링커이고, 결합이 깨질 때, D는 이의 의도된 치료적 효과를 위한 활성형으로 방출되며; 및 LD1과 D 사이의
    Figure pct00142
    에서
    Figure pct00143
    는 LD1과 D의 직접 또는 간접 부착을 표시하며;
    Figure pct00144
    의 각 존재는 독립적으로 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 아직 결합되지 않은 제2 링커이고, 여기서, LP2는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 기능기와 공유결합을 아직 형성하지 않는 기능기를 함유하는 모이어티이며, LD1과 LP2사이의
    Figure pct00145
    는 LD1과 LP2의 직접 또는 간접 부착을 표시하고, 제2 링커의 각 존재는 제1 링커의 각 존재와는 다르며;
    Figure pct00146
    의 각 존재는 독립적으로 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 각 D-운반 고분자 스캐폴드를 연결하는 제3 링커이고, 여기서, LP2에 부착된 말단
    Figure pct00147
    는 LP2의 기능기와 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 기능기 사이의 공유결합 형성 시 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 LP2의 직접 또는 간접 부착을 표시하고; 및 제3 링커의 각 존재는 제1 링커의 각 존재와는 다르며;
    m은 1 내지 약 300의 정수이고;
    m1은 1 내지 약 140의 정수이며;
    m2는 1 내지 약 40의 정수이고;
    m3는 0 내지 약 18의 정수이며;
    m4은 1 내지 약 10의 정수이고;
    m, m1, m2, m3 및 m4의 합은 약 15 내지 약 300이며; 및
    분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 연결된 LP2의 총 수는 10 미만이다.
  34. 제33항에 있어서,
    m, m1, m2, m3 및 m4의 합은 15 내지 150이고, m1은 1 내지 70이며, m2는 1 내지 20이고, m3는 0 내지 10이며, 및 PHF는 약 2 kDa 내지 약 20 kDa의 범위의 분자량을 갖는, 컨쥬게이트.
  35. 제33항에 있어서,
    m, m1, m2, m3 및 m4의 합은 20 내지 110이고, m1은 2 내지 50이며, m2는 2 내지 15이고, m3는 0 내지 8이며, 및 PHF는 약 3 kDa 내지 약 15 kDa의 범위의 분자량을 갖는, 컨쥬게이트.
  36. 제33항에 있어서,
    m, m1, m2, m3 및 m4의 합은 40 내지 75이고, m1은 2 내지 35이며, m2는 2 내지 10이고, m3는 0 내지 5이며, 및 PHF는 약 5 kDa 내지 약 10 kDa의 범위의 분자량을 갖는, 컨쥬게이트.
  37. 제33항에 있어서,
    LP2의 기능기는 -SRp, -S-S-LG,
    Figure pct00148
    및 할로겐으로부터 선택되고, 여기서, LG는 이탈기이며, Rp는 수소 또는 황 보호기이며, Xa 및 Xb 중 하나는 수소이고 다른 하나는 수용성 말레이미도 차단 모이어티이거나, Xa 및 Xb는 탄소 원자와 더불어 탄소-탄소 이중결합을 위해 붙어 있다.
  38. 제33항에 있어서,
    LD1는 ―X-(CH2)v-C(=O)―를 포함하고, X는
    Figure pct00149
    의 카르보닐기에 직접적으로 연결되고, 여기서, X는 CH2, O, 또는 NH이며, v는 1 내지 6의 정수이다.
  39. 제33항에 있어서,
    Figure pct00150
    의 각 존재는 독립적으로 ―C(=O)-X-(CH2)v-C(=O)-NH-(CH2)u-NHC(=O)-(CH2)w-(OCH2)x-NHC(=O)-(CH2)y―M이고, 여기서, X는 CH2, O, 또는 NH이고, v, u, w, x 및 y 각각은 독립적으로 1 내지 6의 정수이며, M은
    Figure pct00151
    이고, 여기서, Xa 및 Xb 중 하나는 수소이고, 다른 하나는 수용성 말레이미도 차단 모이어티이거나, Xa 및 Xb는 탄소 원자와 함께 탄소-탄소 이중결합을 위해 붙어 있다.
  40. 제39항에 있어서,
    v, u, w, x 및 y 각각은 2인, 컨쥬게이트.
  41. 제21항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서,
    하나 이상의 D 각각은 ≤ 5 kDa의 분자량을 갖는 치료제인, 컨쥬게이트.
  42. 제40항에 있어서,
    하나 이상의 고분자 스캐폴드 각각은 독립적으로 화학식 (Id)의 것인, 컨쥬게이트:
    [화학식 (Id)]
    Figure pct00152

    여기서,
    m3a 는 0 내지 약 17의 정수이고,
    m3b 는 1 내지 약 8의 정수이며, 및
    말단
    Figure pct00153
    는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 하나 이상의 고분자 스캐폴드의 직접적인 부착을 표시한다.
  43. 제21항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서,
    하나 이상의 D의 적어도 하나는 진단제인, 컨쥬게이트.
  44. 제21항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서,
    분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 40 kDa 이상의 분자량을 갖는, 컨쥬게이트.
  45. 제21항에 있어서,
    하나 이상의 D 각각은 독립적으로 비-고분자 연결 모이어티에 의해 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 연결되는, 컨쥬게이트.
  46. 제32항에 있어서,
    하나 이상의 고분자 스캐폴드 각각은 독립적으로 화학식 (If)인, 컨쥬게이트:
    [화학식 If]
    Figure pct00154

    여기서,
    m 은 1 내지 약 300의 정수이고,
    m1은 1 내지 약 140의 정수이며,
    m2는 1 내지 약 40의 정수이고,
    m3a는 0 내지 약 17의 정수이며,
    m3b는 1 내지 약 8의 정수이고;
    m3a 및 m3b의 합은 1 내지 약 18이며; 및
    m, m1, m2, m3a 및 m3b의 합은 약 15 내지 약 300이고;
    말단
    Figure pct00155
    는 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 하나 이상의 고분자 스캐폴드의 부착을 표시하고, 여기서, 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 아미노산 서열 FTFSSYSMN(SEQ ID NO:　25)을 포함하는 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 1(CDRH1); 아미노산 서열 YISSSSSTIYYADSVKG(SEQ ID NO:　26)을 포함하는 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 2(CDRH2); 아미노산 서열 GHGYFDL(SEQ ID NO:　27)을 포함하는 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 3(CDRH3); 아미노산 서열 RASQSVSSSYLA(SEQ ID NO:　28)을 포함하는 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 1(CDRL1); 아미노산 서열 GASSRAT(SEQ ID NO:　21)을 포함하는 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 2(CDRL2); 아미노산 서열 QQYHHSPLT(SEQ ID NO:　29)을 포함하는 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 부위 3(CDRL3)를 포함하는 분리된 항-HER2 항체이고;
    PHF 및 항체의 비율은 10 이하이다.
  47. 제46항에 있어서,
    화학식 (If)에서 PHF는 약 2 kDa 내지 약 20 kDa의 범위의 분자량을 가지며, m, m1, m2, m3a 및 m3b의 합은 약 15 내지 약 150이고, m1은 1 내지 약 70의 정수이며, m2는 1 내지 약 20의 정수이고, m3a는 0 내지 약 9의 정수이며, m3b는 1 내지 약 8의 정수이고, m3a 및 m3b의 합은 1 내지 약 10이며, PHF 및 분리된 항-HER2 항체의 비율은 2 내지 약 8의 정수인, 컨쥬게이트.
  48. 제46항에 있어서,
    화학식 (If)에서 PHF는 3 kDa 내지 약 15 kDa의 범위의 분자량을 가지며, m, m1, m2, m3a 및 m3b의 합은 약 20 내지 약 110이고, m1는 2 내지 약 50의 정수이며, m2는 2 내지 약 15의 정수이고, m3a는 0 내지 약 7의 정수이며, m3b는 1 내지 약 8의 정수이고, m3a 및 m3b의 합은 1 내지 약 8이고, PHF 및 분리된 항-HER2 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 비율은 2 내지 약 8의 정수인, 컨쥬게이트.
  49. 제46항에 있어서,
    화학식 (If)에서 PHF는 약 5 kDa 내지 약 10 kDa의 범위의 분자량을 가지며, m, m1, m2, m3a 및 m3b의 합은 약 40 내지 약 75이고, m1는 약 2 내지 약 35의 정수이며, m2는 약 2 내지 약 10의 정수이고, m3a는 0 내지 약 4의 정수이며, m3b는 1 내지 약 5의 정수이고, m3a 및 m3b의 합은 1 내지 약 5이며, 및, PHF 및 분리된 항-HER2 항체의 비율은 2 내지 약 8의 정수인, 컨쥬게이트.
  50. 제46항에 있어서,
    화학식 (If)에서 PHF는 약 5 kDa 내지 약 10 kDa의 범위의 분자량을 가지며, m, m1, m2, m3a 및 m3b의 합은 약 40 내지 약 75이고, m1은 약 2 내지 약 35의 정수이며, m2는 약 2 내지 약 10의 정수이고, m3a는 0 내지 약 4의 정수이며, m3b는 1 내지 약 5의 정수이고, m3a 및 m3b의 합은 1 내지 약 5이며, PHF 및 분리된 항-HER2 항체의 비율은 2 내지 약 6의 정수인, 컨쥬게이트.
  51. 제46항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서,
    분리된 항-HER2 항체는 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 컨쥬게이트.
  52. 제46항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서,
    분리된 항-HER2 항체는 SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 컨쥬게이트.
  53. 인간 HER2 수용체의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 화학식 (Ia)의 고분자 스캐폴드를 반응시켜 다음의 컨쥬게이트를 형성하는 단계를 포함하는 제21항 내지 제52항 중 어느 한 항에 따른 컨쥬게이트의 제조방법:
    [화학식 Ia]
    Figure pct00156

    여기서,
    LD1 는 카르보닐-함유 모이어티이고;
    Figure pct00157
    in
    Figure pct00158
    에서
    Figure pct00159
    의 각 존재는 독립적으로 생분해성 결합을 포함하는 제1 링커이고, 상기 결합이 깨질 때, D는 이의 의도된 치료적 효과를 위한 활성형으로 방출되며; 및 LD1과 D 사이의
    Figure pct00160
    에서
    Figure pct00161
    는 LD1과 D의 직접 또는 간접 부착을 표시하며;
    Figure pct00162
    의 각 존재는 독립적으로 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 아직 결합되지 않은 제2 링커이고, 여기서, LP2는 분리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 기능기와 공유결합을 아직 형성하지 않는 기능기를 함유하는 모이어티이며, LD1과 LP2사이의
    Figure pct00163
    는 LD1과 LP2의 직접 또는 간접 부착을 표시하고, 제2 링커의 각 존재는 제1 링커의 각 존재와는 다르며;
    m은 1 내지 약 300의 정수이고;
    m1은 1 내지 약 140의 정수이며;
    m2는 1 내지 약 40의 정수이고;
    m3는 0 내지 약 18의 정수이며;
    m, m1, m2 및 m3의 합은 약 15 내지 약 300이다.
  54. 제21항 내지 제52항 중 어느 한 항에 따른 컨쥬게이트를 암의 증상을 경감하기에 충분한 양으로 대상체에 투여하는 것을 포함하는 그것을 필요로 하는 대상체에서 암의 증상을 경감하는 방법.
  55. 제54항에 있어서,
    대상체는 인간인, 방법.
  56. 제54항에 있어서,
    암은 항문암, 성상세포종, 백혈병, 림프종, 두경부암, 간암, 고환암, 자궁경부암, 육종, 혈관종, 식도암(esophageal cancer), 안암, 후두암, 구강암(mouth cancer), 중피종, 피부암, 골수종, 구강암(oral cancer), 직장암, 인후암, 방광암, 유방암, 자궁암, 난소암, 전립선암, 폐암, 비-소세포성 폐암(NSCLC), 대장암, 췌장암, 신장암 및 위암으로 이루어진 군에서 선택된, 방법.
  57. 제54항에 있어서,
    암은 유방암, 위암, 비-소세포성 폐암(NSCLC) 및 난소암으로 이루어진 군에서 선택된, 방법.
  58. 제54항에 있어서,
    제2 제제를 대상체에 투여하는 것을 더 포함하는, 방법.
  59. 제58항에 있어서,
    제2 제제는 HER2에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편인, 방법.
  60. 제59항에 있어서,
    제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 HER2 항체, HER2 이량체화 억제제 항체, 또는 HER2 항체 및 HER2 이량체화 억제제 항체의 조합인, 방법.
  61. 제60항에 있어서,
    HER2 항체, HER2 이량체화 억제제 항체 또는 HER2 항체 및 HER2 이량체화 억제제 항체의 조합은 트라스투주맙 또는 퍼투주맙 또는 이의 조합을 포함하는, 방법.
  62. 제54항에 있어서,
    대상체는 HER2 저발현을 갖는 것으로 확인되는, 방법.
  63. 제54항에 있어서,
    대상체는 시험 세포 집단에서 수행된 면역조직화학 분석으로 검출될 때 HER2 발현에 대해 1+ 또는 2+의 점수를 갖는 것으로 확인되고, 여기서, HER2 유전자는 시험 세포 집단에서 증폭되지 않는, 방법.
  64. 제54항에 있어서,
    대상체는 화학요법에 대해 반응이 없는, 방법.
  65. 제54항에 있어서,
    대상체는 Kadcyla 처치에 내성이 있는, 방법.
  66. 제54항에 있어서,
    대상체는 Kadcyla 처치에 내성이 없는, 방법.
  67. 제54항에 있어서,
    대상체는 시험 세포 집단에서 수행된 면역조직화학 분석으로 검출될 때 HER2 발현에 대해 2+ 또는 3+의 점수를 갖는 것으로 확인되고, 여기서, HER2 유전자는 시험 세포 집단에서 증폭되거나 돌연변이되는, 방법.
  68. 대상체에서 암의 증상을 경감하는 의약의 제조에서의 제21항 내지 제52항 중 어느 한 항에 따른 컨쥬게이트의 용도.
  69. 제68항에 있어서,
    암은 항문암, 성상세포종, 백혈병, 림프종, 두경부암, 간암, 고환암, 자궁경부암, 육종, 혈관종, 식도암(esophageal cancer), 안암, 후두암, 구강암(mouth cancer), 중피종, 피부암, 골수종, 구강암(oral cancer), 직장암, 인후암, 방광암, 유방암, 자궁암, 난소암, 전립선암, 폐암, 비-소세포성 폐암(NSCLC), 대장암, 췌장암, 신장암 및 위암으로 이루어진 군에서 선택되는, 용도.
  70. 제68항에 있어서,
    암은 유방암, 위암, 비-소세포성 폐암(NSCLC) 및 난소암으로 이루어진 군에서 선택되는, 용도.
  71. 제68항에 있어서,
    제2 제제를 대상체에 투여하는 것을 더 포함하는, 용도.
  72. 제71항에 있어서,
    제2 제제는 HER2에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편인, 용도.
  73. 제72항에 있어서,
    제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 HER2 항체, HER2 이량체화 억제제 항체, 또는 HER2 항체 및 HER2 이량체화 억제제 항체의 조합인, 용도.
  74. 제72항에 있어서,
    HER2 항체, HER2 이량체화 억제제 항체 또는 HER2 항체 및 HER2 이량체화 억제제 항체의 조합은 트라스투주맙 또는 퍼투주맙 또는 이의 조합을 포함하는, 용도.
  75. 제68항에 있어서,
    대상체는 HER2 저발현을 갖는 것으로 확인되는, 용도.
  76. 제68항에 있어서,
    대상체는 시험 세포 집단에서 수행된 면역조직화학 분석으로 검출될 때 HER2 발현에 대해 1+ 또는 2+의 점수를 갖는 것으로 확인되고, 여기서, HER2 유전자는 시험 세포 집단에서 증폭되지 않는, 용도.
  77. 제68항에 있어서,
    대상체는 화학요법에 반응이 없는, 용도.
  78. 제68항에 있어서,
    대상체는 Kadcyla 처치에 내성이 있는, 용도.
  79. 제68항에 있어서,
    대상체는 Kadcyla 처치에 내성이 없는, 용도.
  80. 제68항에 있어서,
    대상체는 시험 세포 집단에서 수행된 면역조직화학 분석으로 검출될 때 HER2 발현에 대해 2+ 또는 3+의 점수를 갖는 것으로 확인되고, 여기서, HER2 유전자는 시험 세포 집단에서 증폭되거나 돌연변이되는, 용도.
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Families Citing this family (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2928503B1 (en) 2012-12-10 2019-02-20 Mersana Therapeutics, Inc. Conjugates of auristatin compounds
US9872918B2 (en) 2012-12-12 2018-01-23 Mersana Therapeutics, Inc. Hydroxyl-polymer-drug-protein conjugates
EP3054991B1 (en) 2013-10-11 2019-04-03 Mersana Therapeutics, Inc. Protein-polymer-drug conjugates
JP6427564B2 (ja) * 2013-10-11 2018-11-21 アサナ・バイオサイエンシズ，リミテッド・ライアビリティ・カンパニー タンパク質−ポリマー−薬物共役体
WO2015195925A1 (en) 2014-06-18 2015-12-23 Mersana Therapeutics, Inc. Protein-polymer-drug conjugates and methods of using same
TWI695011B (zh) 2014-06-18 2020-06-01 美商梅爾莎納醫療公司 抗ｈｅｒ２表位之單株抗體及其使用之方法
CA2967595A1 (en) 2014-11-12 2016-05-19 Siamab Therapeutics, Inc. Glycan-interacting compounds and methods of use
MX2018005061A (es) 2015-11-12 2019-02-28 Siamab Therapeutics Inc Compuestos de interacción con glicanos y métodos de uso.
PE20181953A1 (es) * 2016-03-02 2018-12-17 Eisai Randd Man Co Ltd Conjugados de anticuerpo y farmaco basados en eribulina y metodos para su uso
ITUA20162242A1 (it) 2016-04-01 2017-10-01 St Biochimico Italiano Giovanni Lorenzini Spa Un nuovo anticorpo anti-erbb2
MA45328A (fr) 2016-04-01 2019-02-06 Avidity Biosciences Llc Compositions acide nucléique-polypeptide et utilisations de celles-ci
CN109476744B (zh) * 2016-05-12 2023-04-11 新加坡科技研究局 抗erbb-2抗体及其用途
US11401330B2 (en) 2016-11-17 2022-08-02 Seagen Inc. Glycan-interacting compounds and methods of use
US11135307B2 (en) 2016-11-23 2021-10-05 Mersana Therapeutics, Inc. Peptide-containing linkers for antibody-drug conjugates
WO2018150029A1 (en) 2017-02-17 2018-08-23 Institut Pasteur Generation of monoclonal antibodies targeting respiratory syncytial virus (rsv) using regulatory b cells from newborns (nbregs)
US20180271996A1 (en) 2017-02-28 2018-09-27 Mersana Therapeutics, Inc. Combination therapies of her2-targeted antibody-drug conjugates
CN110913903B (zh) 2017-03-03 2024-03-01 思进股份有限公司 聚糖相互作用化合物和使用方法
EP3641826B1 (en) 2017-06-22 2023-12-06 Mersana Therapeutics, Inc. Methods of producing drug-carrying polymer scaffolds and protein-polymer-drug conjugates
JP7072825B2 (ja) * 2017-09-13 2022-05-23 三菱電機ソフトウエア株式会社 コピー数計測装置、コピー数計測プログラムおよびコピー数計測方法
CA3075798A1 (en) * 2017-09-20 2019-03-28 Mersana Therapeutics, Inc. Compositions and methods for predicting response to napi2b-targeted therapy
EP3717021A1 (en) 2017-11-27 2020-10-07 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates
AU2018378812A1 (en) 2017-12-06 2020-07-09 Avidity Biosciences, Inc. Compositions and methods of treating muscle atrophy and myotonic dystrophy
JP2021506883A (ja) 2017-12-21 2021-02-22 メルサナ セラピューティクス インコーポレイテッド ピロロベンゾジアゼピン抗体結合体
SG10201801219VA (en) 2018-02-13 2019-09-27 Agency Science Tech & Res Anti-HER2 Antibodies
CA3093740A1 (en) 2018-03-22 2019-09-26 Surface Oncology, Inc. Anti-il-27 antibodies and uses thereof
CN108484772A (zh) * 2018-04-11 2018-09-04 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 抗her2抗原的人源化抗体h5l5及其应用
CN110790840A (zh) * 2018-08-01 2020-02-14 三生国健药业（上海）股份有限公司 结合人her2的抗体、其制备方法和用途
EA202191175A1 (ru) 2018-10-29 2021-09-08 Мерсана Терапьютикс, Инк. Сконструированные с цистеином конъюгаты антитело-лекарственное средство, содержащие пептидсодержащие линкеры
EP3842460A1 (en) * 2019-03-01 2021-06-30 RemeGen Co., Ltd. Antibody for her2 concomitant diagnosis immunohistochemical detection and application thereof
TW202120500A (zh) 2019-08-02 2021-06-01 美商梅爾莎納醫療公司 干擾素基因刺激蛋白（ｓｔｉｎｇ）激動劑化合物及用途
CN110396130B (zh) * 2019-08-23 2020-06-30 北京鼎成肽源生物技术有限公司 一种鼠抗人ErbB2单克隆抗体10A6、编码基因及其制备方法和应用
MX2022008437A (es) 2020-01-09 2022-08-19 Mersana Therapeutics Inc Conjugados fármaco-anticuerpo específicos de sitio con enlazadores que contienen péptidos.
IL296387B1 (en) 2020-03-19 2024-04-01 Avidity Biosciences Inc Preparations and methods for the treatment of facial, back and arm muscle atrophy
IL296901A (en) 2020-04-02 2022-12-01 Mersana Therapeutics Inc Antibody-drug conjugates comprising sting agonists
CN111606996B (zh) * 2020-06-05 2020-12-25 北京鼎成肽源生物技术有限公司 一种靶向4d5的鼠源单克隆抗体及其制备方法和应用
TW202400241A (zh) 2022-03-07 2024-01-01 美商梅爾莎納醫療公司 包含ｓｔｉｎｇ促效劑之抗體藥物共軛物、組合及使用方法
CN114561358B (zh) * 2022-03-09 2023-10-03 广州源井生物科技有限公司 一种提高细胞慢病毒感染率的增强感染培养基及方法
CN117701625A (zh) * 2023-12-12 2024-03-15 合肥润初生物科技有限公司 基于转基因植株的Her-2抗体生产方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120321583A1 (en) * 2011-06-10 2012-12-20 Mersana Therapeutics, Inc. Protein-Polymer-Drug Conjugates

Family Cites Families (110)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
FR2413974A1 (fr) 1978-01-06 1979-08-03 David Bernard Sechoir pour feuilles imprimees par serigraphie
US4485045A (en) 1981-07-06 1984-11-27 Research Corporation Synthetic phosphatidyl cholines useful in forming liposomes
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4544545A (en) 1983-06-20 1985-10-01 Trustees University Of Massachusetts Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
DE3788058T2 (de) 1986-08-28 1994-04-21 Teijin Ltd Zelltoxischer antikörperkomplex und verfahren zu seiner herstellung.
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5175384A (en) 1988-12-05 1992-12-29 Genpharm International Transgenic mice depleted in mature t-cells and methods for making transgenic mice
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US6291158B1 (en) 1989-05-16 2001-09-18 Scripps Research Institute Method for tapping the immunological repertoire
US6291159B1 (en) 1989-05-16 2001-09-18 Scripps Research Institute Method for producing polymers having a preselected activity
ES2096590T3 (es) 1989-06-29 1997-03-16 Medarex Inc Reactivos biespecificos para la terapia del sida.
US5013556A (en) 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US6673986B1 (en) 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
SG48759A1 (en) 1990-01-12 2002-07-23 Abgenix Inc Generation of xenogenic antibodies
US5151510A (en) 1990-04-20 1992-09-29 Applied Biosystems, Inc. Method of synethesizing sulfurized oligonucleotide analogs
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5165424A (en) 1990-08-09 1992-11-24 Silverman Harvey N Method and system for whitening teeth
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
ATE352612T1 (de) 1990-08-29 2007-02-15 Pharming Intellectual Pty Bv Homologe rekombination in säugetier-zellen
US5874299A (en) 1990-08-29 1999-02-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US6300129B1 (en) 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US6255458B1 (en) 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5877397A (en) 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
EP0546073B1 (en) 1990-08-29 1997-09-10 GenPharm International, Inc. production and use of transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
CA2102511A1 (en) 1991-05-14 1992-11-15 Paul J. Higgins Heteroconjugate antibodies for treatment of hiv infection
WO1992022670A1 (en) 1991-06-12 1992-12-23 Genpharm International, Inc. Early detection of transgenic embryos
WO1992022645A1 (en) 1991-06-14 1992-12-23 Genpharm International, Inc. Transgenic immunodeficient non-human animals
WO1993004169A1 (en) 1991-08-20 1993-03-04 Genpharm International, Inc. Gene targeting in animal cells using isogenic dna constructs
EP0666923A1 (en) 1991-09-05 1995-08-16 The University Of Connecticut Targeted delivery of poly- or oligonucleotides to cells
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
DE69233782D1 (de) 1991-12-02 2010-05-20 Medical Res Council Herstellung von Autoantikörpern auf Phagenoberflächen ausgehend von Antikörpersegmentbibliotheken
AU3328493A (en) 1991-12-17 1993-07-19 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5777085A (en) 1991-12-20 1998-07-07 Protein Design Labs, Inc. Humanized antibodies reactive with GPIIB/IIIA
US5667988A (en) 1992-01-27 1997-09-16 The Scripps Research Institute Methods for producing antibody libraries using universal or randomized immunoglobulin light chains
ATE208374T1 (de) 1992-02-18 2001-11-15 Otsuka Kagaku Kk Beta-laktam und cepham verbindungen und ihre herstellung
US5714350A (en) 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
AU4541093A (en) 1992-06-18 1994-01-24 Genpharm International, Inc. Methods for producing transgenic non-human animals harboring a yeast artificial chromosome
AU675661B2 (en) 1992-07-24 1997-02-13 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
DK0669836T3 (da) 1992-11-13 1996-10-14 Idec Pharma Corp Terapeutisk anvendelse af kimære og radioaktivt mærkede antistoffer og humant B-lymfocytbegrænset differentieringsantigen til behandling af B-cellelymfom
JPH08509612A (ja) 1993-04-26 1996-10-15 ジェンファーム インターナショナル インコーポレイテッド 異種抗体を産生することができるトランスジェニック非ヒト動物
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
US5625825A (en) 1993-10-21 1997-04-29 Lsi Logic Corporation Random number generating apparatus for an interface unit of a carrier sense with multiple access and collision detect (CSMA/CD) ethernet data network
EP0745134A1 (en) 1994-02-22 1996-12-04 Danafarber Cancer Institute Nucleic acid delivery system, method of synthesis and uses thereof
US5643763A (en) 1994-11-04 1997-07-01 Genpharm International, Inc. Method for making recombinant yeast artificial chromosomes by minimizing diploid doubling during mating
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5703057A (en) 1995-04-07 1997-12-30 Board Of Regents The University Of Texas System Expression library immunization
US5811510A (en) 1995-04-14 1998-09-22 General Hospital Corporation Biodegradable polyacetal polymers and methods for their formation and use
CA2219486A1 (en) 1995-04-28 1996-10-31 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6706484B1 (en) 1995-08-18 2004-03-16 Morphosys Ag Protein/(poly)peptide libraries
ES2176484T3 (es) 1995-08-18 2002-12-01 Morphosys Ag Bancos de proteinas/(poli)peptidos.
KR100308764B1 (ko) 1995-08-29 2001-12-17 마나배게이사꾸 키메라동물및그의제작법
US6165718A (en) 1996-01-10 2000-12-26 Novo Nordisk A/S Novo Alle Method for in vivo production of a mutant library in cells
US7371376B1 (en) 1996-10-18 2008-05-13 Genentech, Inc. Anti-ErbB2 antibodies
ES2301183T3 (es) 1996-12-03 2008-06-16 Amgen Fremont Inc. Anticuerpo completamente humano que se une al receptor del egfr.
US6159688A (en) 1997-03-18 2000-12-12 Novo Nordisk A/S Methods of producing polynucleotide variants
US7244826B1 (en) * 1998-04-24 2007-07-17 The Regents Of The University Of California Internalizing ERB2 antibodies
US6833268B1 (en) 1999-06-10 2004-12-21 Abgenix, Inc. Transgenic animals for producing specific isotypes of human antibodies via non-cognate switch regions
AU2002249854B2 (en) 2000-12-18 2007-09-20 Dyax Corp. Focused libraries of genetic packages
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
ITRM20010408A1 (it) * 2001-07-10 2003-01-10 Univ Napoli Federico Ii Mini-anticorpo umano citotossico per cellule tumorali che esprimono il recettore erbb2.
US7091186B2 (en) 2001-09-24 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. p-Amidobenzylethers in drug delivery agents
WO2003026577A2 (en) 2001-09-24 2003-04-03 Seattle Genetics, Inc. P-amidobenzylethers in drug delivery agents
EP1482972A4 (en) 2001-11-20 2005-11-23 Seattle Genetics Inc TREATMENT OF IMMUNOLOGICAL DISORDERS USING ANTI-CD30 ANTIBODIES
US7838619B2 (en) 2002-01-14 2010-11-23 The General Hospital Corporation Biodegradable polyketal polymers and methods for their formation and use
US20050180972A1 (en) 2002-07-31 2005-08-18 Wahl Alan F. Anti-CD20 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer and immune disorders
ATE507845T1 (de) 2003-09-05 2011-05-15 Gen Hospital Corp Polyacetal-arzneimittelkonjugate als freisetzungssystem
SG10201701737XA (en) 2003-11-06 2017-04-27 Seattle Genetics Inc Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands
WO2005082023A2 (en) 2004-02-23 2005-09-09 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
JP2006316040A (ja) 2005-05-13 2006-11-24 Genentech Inc Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）補助療法
PL2511301T3 (pl) * 2006-08-04 2018-05-30 Medimmune Limited Ludzkie przeciwciała do ErbB2
WO2008118476A2 (en) 2007-03-26 2008-10-02 Codon Devices, Inc. Cell surface display, screening and production of proteins of interest
CA3187687A1 (en) 2007-09-14 2009-03-19 Adimab, Llc Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
US8877688B2 (en) 2007-09-14 2014-11-04 Adimab, Llc Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
TWI472339B (zh) 2008-01-30 2015-02-11 Genentech Inc 包含結合至ｈｅｒ２結構域ii之抗體及其酸性變異體的組合物
BRPI0812682A2 (pt) 2008-06-16 2010-06-22 Genentech Inc tratamento de cáncer de mama metastático
JP6082344B2 (ja) * 2010-05-27 2017-02-15 ゲンマブ エー／エス Ｈｅｒ２エピトープに対するモノクローナル抗体
DK2593594T3 (en) 2010-07-16 2017-12-11 Adimab Llc ANTIBODY LIBRARIES
US8815226B2 (en) 2011-06-10 2014-08-26 Mersana Therapeutics, Inc. Protein-polymer-drug conjugates
AU2013255537B2 (en) * 2012-05-02 2018-02-15 Symphogen A/S Humanized pan-her antibody compositions
EP2928503B1 (en) 2012-12-10 2019-02-20 Mersana Therapeutics, Inc. Conjugates of auristatin compounds
US9872918B2 (en) 2012-12-12 2018-01-23 Mersana Therapeutics, Inc. Hydroxyl-polymer-drug-protein conjugates
US9111624B2 (en) 2013-03-22 2015-08-18 Katsuyuki Fujita Semiconductor memory device
KR101453462B1 (ko) 2013-05-16 2014-10-23 앱클론(주) Her2에 특이적으로 결합하는 항체
US9738726B2 (en) 2013-06-11 2017-08-22 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services HER2-specific monoclonal antibodies and conjugates thereof
JP6427564B2 (ja) 2013-10-11 2018-11-21 アサナ・バイオサイエンシズ，リミテッド・ライアビリティ・カンパニー タンパク質−ポリマー−薬物共役体
EP3054991B1 (en) 2013-10-11 2019-04-03 Mersana Therapeutics, Inc. Protein-polymer-drug conjugates
RU2769700C2 (ru) 2014-01-10 2022-04-05 Байондис Б.В. Дуокармициновые adc, демонстрирующие улучшенную противоопухолевую активность in vivo
KR20160099725A (ko) 2014-01-10 2016-08-22 신톤 바이오파머슈티칼즈 비.브이. 자궁내막암의 치료에서 사용하기 위한 듀오카르마이신 adc
CA2928794C (en) 2014-01-31 2019-08-13 Daiichi Sankyo Company, Limited Anti-her2 antibody-drug conjugate
EP3130608B1 (en) 2014-04-10 2019-09-04 Daiichi Sankyo Co., Ltd. (anti-her2 antibody)-drug conjugate
EP3607996B1 (en) 2014-04-25 2023-01-04 Pierre Fabre Medicament Antibody-drug-conjugate and its use for the treatment of cancer
WO2015164665A1 (en) 2014-04-25 2015-10-29 Genentech, Inc. Methods of treating early breast cancer with trastuzumab-mcc-dm1 and pertuzumab
WO2015195925A1 (en) 2014-06-18 2015-12-23 Mersana Therapeutics, Inc. Protein-polymer-drug conjugates and methods of using same
TWI695011B (zh) 2014-06-18 2020-06-01 美商梅爾莎納醫療公司 抗ｈｅｒ２表位之單株抗體及其使用之方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120321583A1 (en) * 2011-06-10 2012-12-20 Mersana Therapeutics, Inc. Protein-Polymer-Drug Conjugates

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Clinical Cancer Research, 제8권, 1720-1730면(2002.6.)* *
Structure, 제21권, 제11호, 1979-1991면(2013.11.5.)* *

Also Published As

Publication number Publication date
ZA201608305B (en) 2022-06-29
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