KR20170007426A - 신장 섬유증을 억제하기 위한 진세노사이드 m1의 용도 - Google Patents

신장 섬유증을 억제하기 위한 진세노사이드 m1의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 신장 섬유증의 억제를 필요로 하는 대상체에서의 신장 섬유증을 억제하는 방법을 제공한다.

Description

신장 섬유증을 억제하기 위한 진세노사이드 M1의 용도{USE OF GINSENOSIDE M1 FOR INHIBITING RENAL FIBROSIS}
발명의 분야
본 발명은 신장 섬유증, 특히, 사이질 섬유증(interstitial fibrosis)을 억제하기 위한 진세노사이드 M1(gensenoside M1)의 새로운 용도에 관한 것이다.
발명의 배경
신장 섬유증은 신장 질환의 최종 단계이다. 신장 섬유증의 원인은 요관 폐쇄(ureteral obstruction)를 포함한다.
요관 폐쇄는 비뇨기과 전문의에게 직면하는 가장 일반적인 문제 중 하나 이다. 요관 막힘은 요관 내의 요의 흐름에 대한 방해의 원인이다. 가장 일반적으로는 폐쇄는 요관 신우 접합부(ureteropelvic junction)에서 발생한다. 더 광의의 용어 "폐쇄 요로병(obstructive uropathy)"이 신우(renal pelvis)와 요도 사이에서 발생하는 요의 흐름에 대한 어떠한 폐쇄를 지칭하기 위해서 사용될 수 있고, 이는 물콩팥증(hydronephrosis)의 발병과 그와 관련된 신장 장애(renal impairment)의 원인이다. 문제가 되는 경우는 요도 협착(Urethral strictures) 및 양성 전립선 비대증(benign prostatic hypertrophy)이다. 일측성 요관 폐쇄(unilateral ureteric obstruction: UUO)의 유발이 성인 1/1,000로 보고되어 있다. 요관 결석(Ureteric calculi)이 가장 일반적인 원인이고, 급성 폐쇄는 전형적으로는 주된 증상으로서 신산통(renal colic)과 함께 나타난다. 참조예[Docherty et al., evidence that inhibition of tubular cell apoptosis protects against renal damage and development of fibrosis following ureteric obstruction, Am J Physiol Renal Physiol. 2006 Jan; 290(1):F4-13].
UUO의 시작에서, 사이질은 시토카인, 예를 들어, TGF-β1 및 종양괴사인자--α(TNF-α)를 분비하는 대식세포에 대해 "전형적으로(classically)" 활성화되는 단핵구에 의해서 침윤된다. 그 다음에, TGF-β1은 요세관 상피 세포의 표현형 반응을 촉진하여 아폽토시스(apoptosis)(요세관 위축을 유도함)을 진행시키거나 상피-중간엽 전이(epithelial-mesenchymal transition: EMT)를 진행시켜서, 섬유모세포를 사이질로 이동되게 한다. 단핵구의 활성화에 의해서 생산된 앤지오텐신 II(ANG II)는 핵 인자-κB (NF-κB)의 생산을 자극하고, 이는 더 많은 대식세포의 동원뿐만 아니라 반응성 산소종의 생산을 유도하며, 이는 신장 요세관 손상을 악화시키킨다. 대조적으로, 다르게 활성화된 대식세포는 요세관 세포 생존 및 증식을 개선시킬 수 있다. 내피 세포는 내피-중간엽 전이(endothelial-mesenchymal transition: EndMT) 또는 아폽토시스를 진행할 수 있고, 이는 모세관 손실 및 이차 신장 허혈 및 저산소증을 유도한다. 상주 혈관주위세포 및 침윤 조혈 줄기 세포가 또한 섬유모세포로 분화할 수 있다. 사이토킨, 예컨대, 대식세포에 의해서 생산된 TGF-β1 또는 그 밖의 세포의 자극하에, 섬유모세포는 스트레스 섬유를 합성하고, 추가로 근섬유모세포가 되기 위해서 분화를 진행한다. 근섬유모세포는 수축성이고, 세포외 매트릭스(extracellular matrix: ECM)의 침착을 촉진하여, 진행성 사이질 섬유증을 유도한다. 이러한 과정은 결국 진행성 신장 섬유증 및 비가역성 신부전(renal failure)을 유도한다. 참조예[Chevalier et al., Ureteral obstruction as a model of renal interstitial fibrosis and obstructive nephropathy, Kidney Int. 2009 Jun; 75(11):1145-52].
인삼의 주요 활성 성분인 진세노사이드는 다양한 약리학적 활성, 예를 들어, 항종양, 항당뇨병, 항피로, 항알레르기 및 항산화 활성을 갖는 것으로 공지되어 있다. 진세노사이드는 4개의 고리 내에 배열된 17개의 탄소 원자를 갖는 고난 스테로이드(gonane steroid) 핵으로 구성된 기본 구조를 공유한다. 진세노사이드는 체내에 금속화되며, 다수의 최근의 연구는 천연 진세노사이드가 아닌 진세노사이드 대사물이 체내에 용이하게 흡수되고, 활성 성분으로서 작용하는 것을 암시한다. 이들 중에서, 진세노사이드 M1은 인간 장 박테리아에 의한 지페노사이드 경로(gypenoside pathway)를 통한 프로토파낙사디올-유형 진세노사이드의 한 대사물로 공지되어 있다. 이제까지는, 종래 참고문헌은 신장 섬유증의 치료에서 진세노사이드 M1의 효과를 보고하지 않았다.
발명의 간단한 요약
본 발명에서, 진세노사이드 M1이 신장 섬유증을 억제하는데 효과적임이 예상치 않게 발견되었다. 따라서, 본 발명은 대상체에서의 신장 섬유증의 치료 또는 예방을 위한 새로운 방법을 제공한다.
특히, 본 발명은 대상체에게 유효량의 진세노사이드 M1을 투여함을 포함하여 이를 필요로 하는 대상체에서 신장 섬유증을 억제하는 방법을 제공한다.
일부 구체예에서, 대상체는 폐쇄 신장병(obstructive nephropathy)을 앓고 있는 환자이다.
일부 구체예에서, 본 발명의 방법은, 이로 한정되는 것은 아니지만, 특히, 대상체의 요세관사이질 격실(tubulointerstitial compartment)에서의 단핵 백혈구 염증화(mononuclear leukocyte inflammation), 요세관 확장(tubular dilation), 요세관 위축(tubular atrophy), 요세관 상피 세포의 증식(proliferation of tubular epithelial cell), 섬유모세포(fibroblast) 또는 근섬유모세포의 활성화 및 콜라겐 침착(예, III 또는 IV)를 포함한 하나 이상의 증상 또는 상태를 경감 또는 완화시키기에 효과적이다.
일부 구체예에서, 본 발명의 방법은 대상체의 신장 사이질에서의 단핵 백혈구 침윤 또는 섬유증을 경감 또는 완화시키기에 효과적이다.
일부 구체예에서, 진세노사이드 M1는 비경구 또는 장관 경로에 의해서 투여된다.
일부 구체예에서, 진세노사이드 M1은 신장 섬유증의 발생 전에 또는 발생시에 투여된다.
일부 구체예에서, 진세노사이드 M1은 신장 섬유증의 발생 후에 투여된다.
또한, 신장 섬유증을 치료하기 위한 약제를 제조하기 위한 진세노사이드 M1의 용도가 제공된다.
본 발명의 하나 이상의 구체예에 대한 상세내용이 이하 설명에 기재되어 있다. 본 발명의 그 밖의 특징 또는 이점은 몇 가지 구체예에 대한 이하 상세한 설명 및 또한 청구범위로부터 자명할 것이다.
본 발명을 예시하는 목적상, 도면 내에 구체예가 제시된다. 그러나 본 발명은 제시된 바람직한 구체예로 제한되지 않음이 이해되어야 한다. 도면에서:
도 1은, (a) 실험 절차, (b) UUO 동물 모델의 수술 절차를 포함한, UUO 동물 모델의 확립을 도시하고 있으며, (b)에서, 왼쪽은 요관 결찰 후의 질병 신장이고, 오른쪽은 요관의 결찰이 없는 정상 신장이다.
도 2는 화살표가 확장된 요세관을 나타내고 있는 H&E 염색에 의한 신장 조직병리학적 평가를 도시하고 있다. (a) 신장 조직병리학적 평가를 위한 H&E 염색. "#"은 확장된 신장 요세관을 나타내고 있으며, "*"는 위축 신장 요세관을 나타내고 있다. 본래의 배율은 조직병리학을 위한 x400이었다. (b) 반-정량적 분석은 요세관사이질 손상 스코어(TIS)를 나타낸다. 백색, 검정색 및 회색 기둥은 각각 정상 대조군 마우스, 질병-대조군 마우스 및 LCHK168+UUO 마우스를 나타낸다. ***p < 0.005.
도 3은, (a) 화살표가 양성으로 염색된 세포를 나타내고 있는 면역조직화학적 염색에 의한 PCNA의 검출, 및 (b) 반-정량적 결과를 포함한, 신장 세포 아폽토시스 및 증식 평가를 도시하고 있다. 본래의 배율은 x400이었다. 백색, 검정색 및 회색 기둥은 각각 정상 대조군 마우스, 질병-대조군 마우스 및 LCHK168+UUO 마우스를 나타낸다. ***p < 0.005.
도 4는, (a) 메이슨 트리크롬 염색에 의한 신장 조직에서의 섬유성 콜라겐의 발현, (b) 면역조직화학적 염색에 의한 신장 조직에서의 평활근 α-액틴(α-SMA)의 발현, (c) 면역조직화학적 염색에 의한 신장 조직에서의 콜라겐 III의 발현, (d) 화살표가 양성으로 염색된 세포를 나타내고 있는 면역조직화학적 염색에 의한 신장 조직에서의 콜라겐 IV의 발현, 및 (e) 반-정량적 결과를 포함한, 섬유증 발현 평가를 도시하고 있다. 본래의 배율은 x400이었다. 백색, 검정색 및 회색 기둥은 각각 정상 대조군 마우스, 질병-대조군 마우스 및 LCHK168+UUO 마우스를 나타낸다. *p < 0.05, **p < 0.01, ***p< 0.005.
도 5는 (a) 화살표가 양성으로 염색된 세포를 나타내고 있는 면역조직화학적 염색에 의한 신장 조직에서의 NF-κB의 발현, 및 (b) 반-정량적 결과를 도시하고 있다. 본래의 배율은 x400이었다. 백색, 검정색 및 회색 기둥은 각각 정상 대조군 마우스, 질병-대조군 마우스 및 LCHK168+UUO 마우스를 나타낸다. ***p< 0.005.
도 6은, 화살표가 양성으로 염색된 세포를 나타내고 있는, 면역조직화학적 염색에 의한 (a) F4/80+ 단핵구/대식세포 및 (b) CD3+ T 세포의 검출, 및 (c) 반-정량적 결과를 포함한, 신장 조직에서의 단핵 백혈구 침윤을 도시하고 있다. 본래의 x400이었다. 백색, 검정색 및 회색 기둥은 각각 정상 대조군 마우스, 질병-대조군 마우스 및 LCHK168+UUO 마우스를 나타낸다. ***p< 0.005.
도 7은 LCHK168가 신우 요에서의 MCP-1, TNF-α 및 IL-1β의 발현 수준을 억제함을 도시하고 있다. (a) MCP-1, (b) TNF-α, 및 (c) IL-1β는 ELISA에 의해서 요 샘플에서 검출된다. 백색, 검정색 및 회색 기둥은 각각 정상 대조군 마우스, 질병-대조군 마우스 및 LCHK168+UUO 마우스를 나타낸다. *p < 0.05, **p < 0.01, ***p< 0.005.
도 8은, 흐름 세포측정에 의한 (a) CD3+ CD69+ T 세포 및 (b) CD19+ CD69+ T 세포의 검출을 포함한, 세포 면역의 활성화에 대한 평가를 도시하고 있다. 백색, 검정색 및 회색 기둥은 각각 정상 대조군 마우스, 질병-대조군 마우스 및 LCHK168+UUO 마우스를 나타낸다.
도 9는, 흐름 세포측정에 의한 (A) CD34+ 줄기 세포 및 (B) Sca-1+ 조혈 줄기 세포의 검출을 포함한, 조혈 줄기 세포의 활성화의 평가를 도시하고 있다. 백색, 검정색 및 회색 기둥은 각각 정상 대조군 마우스, 질병-대조군 마우스 및 LCHK168+UUO 마우스를 나타낸다.
발명에 대한 상세한 설명
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 의미를 갖는다. 본원에서 사용되는 바와 같은 하기 용어는 달리 특정되지 않는 한 이들로 기인되는 의미를 갖는다.
관사는 하나 또는 하나 초과(즉, 적어도 하나)의 상기 관사의 문법적 대상을 나타내기 위해 본원에서 사용된다. 예를 들어, "요소"는 하나의 요소 또는 하나 초과의 요소를 의미한다.
본 발명에서, 진세노사이드 M1이 신장 섬유증을 억제하기에 효과적이라는 것이 예기치 않게 발견되었다. 특히, 마우스 UUO 모델에서 신장 손상/염증이 감소되고 신장 섬유증에 대한 진행이 억제되거나 완화된다는 것이 발견되었다.
설치류에 대한 수술-개입 UUO 모델이 수십년 동안 UUO에 대한 대용량 처리 실험 모델(high-throughput experimental model)로서 사용되었다. 이러한 모델은 고혈압, 단백뇨 또는 고지질혈증에 의한 합병증이 없고, 어떠한 명백한 면역 또는 독성 신장 발작과 연루되지 않는다. 폐쇄의 기간에 따라서, UUO는 궁극적으로는 요세관사이질 섬유증을 유도하는 폐쇄성 신장병의 다양한 단계를 의태할 수 있다. 동물의 수명이 단축되지 않는데, 그 이유는 반쪽에서 일어나는 신장의 기능이 유지되거나 또한 상보적인 기능적 및 해부학적 비대의 결과로 증가하기 때문이다. 이러한 모델의 다른 이점은 신장 섬유증의 진행이 고도로 예측 가능하고 재현 가능하며 비교적 단기간(7-14일) 내에 상당한 섬유증 및 네프론 손실을 유도한다는 사실을 포함한다. 참조예[Eddy et al., Investigating mechanisms of chronic kidney disease in mouse models, Pediatr Nephrol. 2012 Aug; 27(8):1233-47; and Grande MT and Lopez-Novoa JM, Fibroblast activation and myofibroblast generation in obstructive nephropathy, Nat Rev Nephrol. 2009 Jun; 5(6):319-28].
이하 실시예 및 데이터는 (1) 신장 사이질 조직에서의 세포 아폽토시스 및 요세관 손상의 감소, (2) 신장 사이질 조직에서의 섬유증 및 콜라겔 침착의 예방, (3) NF-κB 활성화의 감소, (4) 신장의 대식세포 및 T 세포 침윤의 예방, 및 (5) 조혈 줄기 세포 및 전신 세포 면역의 정상적 기능의 유지를 포함한 진세노사이드 M1의 예상치 못한 효과를 나타내고 있다.
따라서, 본 발명은 대상체에 유효량의 진세노사이드 M1을 투여하여 이를 필요로 하는 대상체에서 신장 섬유증을 억제하는 새로운 방법을 제공한다.
진세노사이드 M1, 20-O-β-D-글루코피라노실-20(S)-프로토파낙사디올은 당 분야에 공지된 사포닌 대사물 중 하나이다. 진세노사이드 M1의 화학 구조는 하기와 같다:
Figure pct00001
진세노사이드 M1은 인간 장 박테리아에 의한 지페노사이드 경로를 통한 프로토파낙사디올-유형 진세노사이드의 한 대사물로 공지되어 있다. 진세노사이드 M1은 섭취 후에 혈액 또는 소변에서 발견될 수 있다. 진세노사이드 M1은 당 분야에 공지된 방법, 예를 들어, 전체내용이 참조로서 본원에 포함되는 대만 특허 출원 번호 094116005호(I280982) 및 미국 특허 번호 7,932,057호의 방법에 의해 진균 발효를 통해 인삼 식물로부터 제조될 수 있다. 특정 구현예에서, 진세노사이드 M1을 제조하기 위한 인삼 식물은 두릅나무과(Araliaceae family), 인삼속(Panax genus), 예를 들어, 고려인삼(P. ginseng) 및 히말라야삼(P. pseudo-ginseng)(삼칠근(Sanqi)으로도 언급됨)을 포함한다. 일반적으로, 진세노사이드 M1의 제조 방법은 (a) 인삼 식물 물질(예를 들어, 잎 또는 줄기)의 분말을 제공하는 단계; (b) 인삼 식물 물질을 발효시키기 위한 진균을 제공하는 단계로서, 발효 온도가 20-50℃ 범위이고, 발효 습도가 70-100% 범위이고, pH 값이 4.0-6.0 범위이고, 발효 기간이 5-15일 범위인 단계; (c) 발효 생성물을 추출하고 수거하는 단계; 및 (d) 발효 생성물로부터 20-O-β-D-글루코피라노실-20(S)-프로토파낙사디올을 분리시키는 단계를 포함한다.
진세노사이드 M1이 본 발명에서 "분리된" 또는 "정제된"으로 기재되는 경우, 이는 절대적으로 분리되거나 정제된 것이 아니라, 상대적으로 분리되거나 정제된 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 정제된 진세노사이드 M1은 이의 자연적으로 존재하는 형태에 비해 더욱 정제된 것을 나타낸다. 한 구현예에서, 정제된 진세노사이드 M1을 포함하는 제조물은 전체 제조물의 50% 초과, 60% 초과, 70% 초과, 80% 초과, 90% 초과, 또는 100%(w/w)의 양의 진세노사이드 M1을 포함할 수 있다. 비 또는 투여량을 나타내기 위해 특정 수가 본원에서 사용되는 경우, 상기 수는 일반적으로 상기 수보다 10% 더 많은 범위 및 더 적은 범위, 또는 더욱 특히 5% 더 많은 범위 및 더 적은 범위 내의 수를 포함하는 것이 이해되어야 한다.
본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 진세노사이드 M1을 투여함을 포함하여 신장 섬유증을 억제하는 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에서의 신장 섬유증을 억제하기 위한 약제를 제조하기 위한 진세노사이드 M1의 용도가 제공된다. 본 발명의 약제는, 특히, 대상체의 요세관사이질 격실에서의 단핵 백혈구 염증화, 요세관 확장, 요세관 위축, 요세관 상피 세포의 증식, 섬유모세포 또는 근섬유모세포의 활성화 및 콜라겐((예, III 또는 IV)의 침착을 포함하나 이로 제한되는 것은 아닌 하나 이상의 증상 또는 상태를 경감시키거나 완화시키는데 효과적이다. 특히, 본 발명의 약제는 대상체의 신장 사이질에서의 단핵 백혈구 침윤 또는 섬유증을 경감시키거나 완화시키는데 효과적이다.
본원에서 사용되는 용어 "개체" 또는 "대상체"는 인간 및 비인간 동물, 예를 들어, 반려 동물(예를 들어, 개, 고양이 등), 농장 동물(예를 들어, 소, 양, 돼지, 말 등), 또는 실험실 동물(예를 들어, 래트, 마우스, 기니아 피그 등)을 포함한다. 특정의 구현예에서, 본 발명의 방법에 의해서 치료되는 대상체는 폐쇄 신장병에 걸린 대상체이다.
본원에서 사용되는 용어 "치료하는" 또는 "치료"는 장애, 장애의 증상 또는 상태, 장애에 의해 유도된 무능력, 또는 장애의 진행 또는 이의 증상 또는 상태를 치료하거나, 치유하거나, 완화시키거나, 경감시키거나, 변경시키거나, 교정하거나, 개선하거나, 향상시키거나, 영향을 주기 위한 목적으로, 장애, 장애의 증상 또는 상태, 또는 장애의 진행을 갖는 대상체로의 하나 이상의 활성제를 포함하는 조성물의 적용 또는 투여를 나타낸다.
본원에서 사용된 용어 "예방하는" 또는 "예방"은 질환 또는 이의 증상 또는 상태에 민감거하나 그러한 성향이 있는 대상체에게 하나 이상의 활성제를 포함하는 조성물의 적용 또는 투여를 나타내며, 그에 따라서, 질환의 발생 또는 이의 증상 또는 상태 또는 이의 잠복된 원인을 예방하는 것과 관련이 있다.
본원에서 사용된 용어 "유효량"은 치료된 대상체에 요망되는 치료 효과를 부여하는 활성 성분의 양을 나타낸다. 예를 들어, 신장 섬유증을 치료하거나 예방하기 위한 유효량은 특히, 대상체의 요세관사이질 격실에서의 단핵 백혈구 염증화, 요세관 확장, 요세관 위축, 요세관 상피 세포의 증식, 섬유모세포 또는 근섬유모세포의 활성화 및 콜라겐((예, III 또는 IV)의 침착과 같은 하나 이상의 증상 또는 상태 또는 이의 진행을 억제하거나, 개선시키거나, 완화시키거나, 경감시키거나, 예방할 수 있는 양일 수 있다. 상기 증상은 다양한 질병 진행-관련 지표를 기초로 하여 당 분야에 공지된 방법을 이용하여, 예를 들어, 신장 절편을 염색을 통해서 분석함으로써 결정되고 평가될 수 있다. 치료적 유효량은 다양한 요인, 예를 들어, 투여 경로 및 빈도, 상기 의약을 투여받는 개체의 체중 및 종, 및 투여 목적에 따라 변화될 수 있다. 당업자는 본원의 개시, 확립된 방법, 및 그들 자신의 경험을 기초로 하여 각각의 경우에서 투여량을 결정할 수 있다. 예를 들어, 특정 구현예에서, 본 발명에서 사용되는 진세노사이드 M1의 경구 투여량은 매일 10 내지 1,000 mg/kg이다. 일부 예에서, 본 발명에서 사용되는 진세노사이드 M1의 경구 투여량은 매일 100 내지 300 mg/kg, 매일 50 내지 150 mg/kg, 매일 25 내지 100 mg/kg, 매일 10 내지 50 mg/kg, 또는 매일 5 내지 30 mg/kg이다. 또한, 본 발명의 일부 구현예에서, 진세노사이드 M1은 특정 기간 동안 주기적으로, 예를 들어, 적어도 5일, 10일 또는 15일, 1개월 또는 2개월 또는 그 초과 동안 매일 투여로 투여된다.
본 발명에 따르면, 진세노사이드 M1은 신장 섬유증을 치료하거나 예방하기 위한 활성 성분으로 사용될 수 있다. 한 구현예에서, 유효량의 활성 성분은 전달 및 흡수의 목적상 적절한 형태의 약학적 조성물로 약학적으로 허용되는 담체와 함께 제형화될 수 있다. 투여 방식에 따라, 본 발명의 약학적 조성물은 바람직하게는 약 0.1 중량% 내지 약 100 중량%의 활성 성분을 포함하며, 여기서, 중량 백분율은 전체 조성물의 중량을 기초로 하여 계산된다.
본원에서 사용되는 "약학적으로 허용되는"은 담체가 조성물 내의 활성 성분과 양립되고, 바람직하게는 상기 활성 성분을 안정화시킬 수 있으며, 치료를 받는 개체에 안전한 것을 의미한다. 상기 담체는 희석제, 비히클, 부형제, 또는 활성 성분에 대한 매트릭스일 수 있다. 적절한 부형제의 일부 예는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 소르보스, 만노스, 전분, 아라빅 검(Arabic gum), 칼슘 포스페이트, 알기네이트, 트래거캔쓰 검(tragacanth gum), 젤라틴, 칼슘 실리케이트, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 셀룰로스, 멸균수, 시럽, 및 메틸셀룰로스를 포함한다. 조성물은 윤활제, 예를 들어, 탤크(talc), 마그네슘 스테아레이트, 및 무기질유; 습윤제; 유화제 및 현탁제; 보존제, 예를 들어, 메틸 및 프로필 하이드록시벤조에이트; 감미제; 및 착향제를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물은 환자로의 투여 후 활성 성분의 신속하거나, 지속적이거나, 지연된 방출의 효과를 제공할 수 있다.
본 발명에 따르면, 상기 조성물의 형태는 정제, 환약, 분말, 로젠지(lozenge), 패킷(packet), 구내정(troche), 엘릭서(elixer), 현탁액, 로션, 용액, 시럽, 연성 및 경성 젤라틴 캡슐, 좌약, 멸균 주사액, 및 패키징된 분말일 수 있다.
본 발명의 조성물은 임의의 생리학적으로 허용되는 경로, 예를 들어, 경구, 비경구(예를 들어, 근내, 정맥내, 피하, 및 복막내), 경피, 좌약, 및 비내 방법을 통해 전달될 수 있다. 비경구 투여와 관련하여, 이는 바람직하게는 다른 물질, 예를 들어, 용액이 혈액과 등장성이 되도록 하기에 충분한 염 또는 글루코스를 포함할 수 있는 멸균 수용액의 형태로 이용된다. 수용액은 필요에 따라 적절하게 완충(바람직하게는, 3 내지 9의 pH 값을 가짐)될 수 있다. 멸균 조건하에서의 적절한 비경구 조성물의 제조는 당업자에게 널리 공지된 표준 약리학적 기술로 달성될 수 있으며, 추가의 창조적인 작업이 요구되지 않는다.
본 발명에 따르면, 진세노사이드 M1 또는 활성 성분으로서 진세노사이드 M1을 포함하는 조성물은 신장 섬유증을 치료하거나 예방하는데 사용될 수 있다. 특히, 진세노사이드 M1 또는 활성 성분으로서 진세노사이드 M1을 포함하는 조성물은 질병의 발생을 예방하거나, 증상을 개선하거나, 증상의 악화를 지연시키기 위해 신장 섬유증을 갖는 개체 또는 신장 섬유증을 획득할 위험을 갖는 개체에 투여될 수 있다. 특히, 진세노사이드 M1은 신장 섬유증의 발생 전에 또는 발생시에 투여될 수 있거나, 진세노사이드 M1은 신장 섬유증의 발생 후에 투여될 수 있다.
또한, 본 발명에 따르면, 진세노사이드 M1 또는 활성 성분으로서 진세노사이드 M1을 포함하는 조성물은 코르티코스테로이드(예를 들어, 프레드니솔론), 비스테로이드성 항염증성 약물(NSAID), 세포독성 약물(예를 들어, 사이클로포스파미드, 클로람부실, 및 아자티오프린), 면역억제제(예를 들어, 사이클로스포린 및 미코페놀레이트 모페틸), 및 혈관확장제(예를 들어, 앤지오텐신-전환-효소 억제제(ACE 억제제))를 포함하나, 이에 제한되지는 않는 현존하는 치료 방법 또는 약제, 예를 들어, 약학적 치료와 조합하여 사용될 수 있다. 한 구현예에서, 조합하여 사용되는 약제 또는 치료 방법은 동시에(병행) 또는 순차적으로 이용될 수 있다. 약제가 조합하여 사용되는 경우, 약제는 동일 처방으로 혼합될 수 있거나, 개별적으로 상이한 처방, 예를 들어, 별개의 캡슐, 환약, 정제, 및 주사로 배치될 수 있다.
본 발명은 제한이 아닌 예시의 목적으로 제공되는 하기 실시예에 의해 추가로 예시된다.
실시예
1. 재료 및 방법
1.1 동물 모델 및 실험 프로토콜
UUO(일측 요관 폐쇄) 동물 모델
숫컷 주령 8주의 C57BL/6 마우스를 National Laboratory Animal Breeding and Research Center(Taipei, Taiwan)로부터 구매하고 National Defense Medical Center(Taipei, Taiwan)의 동물 센터에서 유지시켰다. 모든 동물 실험은 Institutional Animal Care and Use Committee of The National Defense Medical Center, Taiwan의 승인하에 수행되었고, National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals에 따랐다.
마우스를 먼저 소듐 펜타바르비톨(sodium pentobarbital)(50 mg/kg, i.p.)로 마취시켰다. 왼쪽 옆구리 절제를 수행한 후에, 왼쪽 요관을 노출시키고, 6-0 견봉합사(silk suture)로 두 지점에서 결찰하고, 두 결찰부 사이를 잘랐다. 마지막으로, 복막 및 피부를 봉합하였다. 요관의 결찰 및 절단을 제외하고는 UUO-절차의 모든 단계에 따라서 대조군으로서 모의 수술을 수행하였다. (Xiao et al. Adenosine A2A receptor: a target for regulating renal interstitial fibrosis in obstructive nephropathy, PLoS One. 2013 Apr 9;8(4):e60173).
요약하면, 모든 마우스를 수술전 통각상실시켰고(50 mg/kg 부프레노르핀의 피하 주사(Temgesic, Shering-Plough)), 오른쪽 요관을 후속하여 2.0% 이소플루란-유도된 통각상실하에 6.0 실크로 작은 복부 절제를 통해서 결찰하였다. 복부를 두 층으로 폐쇄하고, 마우스를 통기 스토브에서 28℃에서 12시간 동안 수술후 회복되게 하였다. 마우스를 수술후 7 또는 14일에 희생시켰다(Pulskens, et al. Nlrp3 prevents early renal interstitial edema and vascular permeability in unilateral ureteral obstruction, PLoS One. 2014 Jan 15;9(1):e85775).
1.2 진세노사이드 M1 및 투여
진세노사이드 M1, 20-O-β-D-글루코피라노실-20(S)-프로토파낙사디올(하기에서 LCHK168로 언급됨)을 당 분야에 공지된 방법, 예를 들어, 대만 특허 출원 번호 094116005호(I280982) 및 미국 특허 번호 7,932,057호에 기재된 방법에 의해 제조하였다. LCHK168을 3% 크레모포어(cremophore)(Sigma-Aldrich)에 용해시켰다. UUO 수술 전 1일부터 시작하여, 마우스를 희생될 때까지 복강내 주사에 의해서 매일 LCHK168(30 mg/kg) 도즈를 주사하였다.
1.3 신장 조직병리학
파라핀-포매된 신장 조직을 절편화시키고 표준 원안을 사용하여 메이슨 트리크롬(Masson's trichrome) 및 헤마톡실린 및 에오신(H&E)으로 염색하였다. 조직병리학을 위해, 조직을 10% 완충 포르말린에 고정시키고, 파라핀에 포매시키고, 이후 절편(3 μm)을 제조하고, 헤마톡실린 및 에오신(H&E)으로 염색하였다.
절편은 모두 탑재 후에 검사된다. 반-정량적 분석 방법은 신장 요세관사이질 상의 염증 및 섬유증의 정도에 따르는 반면에, 스코어를 매기기 위해서 20개의 필드(field)를 무작위로 선택하였다. "0"은 정상 형태를 나타내고, "1"은 영향 면적이 10% 미만임을 나타내고, "2"는 영향 면적이 약 10 내지 30%임을 나타내고, "3"은 영향 면적이 약 30 내지 50%임을 나타내고, "4"는 영향 면적이 50% 초과임을 나타낸다.
1.4 면역조직화학( IHC ) 및 아폽토시스의 검출
IHC를 위해, 포르말린-고정된 및 파라핀-포매된 조직 절편을 DAKO 항체 희석 완충액(DAKO, Glostrup, Denmark)에 희석된, PCNA(Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA), CD3 (DAKO, Glostrup, Denmark), α-SMA(Thermo Fisher Scietific, Waltham, Massachusetts, USA), 콜라겐 Ⅲ, 콜라겐 IV(둘 모두, SouthernBiotech, Birmingham, AL, USA), F4/80(단핵구/대식세포; Serotec, Raleigh, NC, USA), 포스포-NF-κB p65(pNF-κB p65; Cell Signaling Technology, Beverly, MA, USA)에 대항하는 항체와 함께 4℃에서 밤새 인큐베이션시키고, 이어서, 동일한 완중액 중의 호스라디쉬 퍼옥시다제(horseradish peroxidase)(HRP)-컨쥬게이션된 이차 항체(DAKO) 또는 항-토끼 폴리머-HRP(BioGenex, Fremont, CA, USA)와 함께 실온에서 1시간 동안 인큐베이션시키고; 이어서, DAB(BioGenex)를 첨가하였다. 헤마톡실신을 사용하여 핵을 대조 염색시켰다. 아폽토시스의 검출을 위해, 말단 데옥시뉴클레오티딜 트랜스페라제-매개된 dUTP 닉-말단 라벨링(TUNEL)을 사용하였다. 포르말린-고정된 조직 절편을 제조자의 지시에 따라서 ApopTag Plus Peroxidase In Situ Apoptosis 검출 키트(Chemicon, Temecula, CA, USA)를 사용하여 염색시켰다. α-SMA, 콜라겐 Ⅲ, 콜라겐 IV의 존재비 또는 포스포릴화된 NF-κB p65+, PCNA+, F4/80+, CD3+ 및 아폽토시스 세포의 수를 Pax-It 정량적 이미지 분석 소프트웨어(Paxcam)에 의해 피질 영역에서 요세관사이질 격실의 무작위로 선택된 필드를 x400의 배율로 계수하였다.
1.5 흐름세포측정법
적혈구를 제거하기 위해 마우스로부터의 비장세포를 Tris-완충 암모늄 클로라이드으로 처리하고, 세척하고, 10% 소 태아 혈청, Hepes 완충액, L-글루타민, 및 페니실린/스트렙토마이신(모두, Invitrogen/Life Technologies, Grand Island, NY, USA)이 보충된 RPMI1640 배지에 재현탁시켰다. 이어서, 세포를 T 또는 B 세포의 표면 마커를 위해서, T 세포를 위한 FITC-컨쥬게이션된 항-마우스 CD3 항체(17A2) 및 B 세포를 위한 항-마우스 CD19 항체(1D3), 및 피코에리트린-컨주게이션된 항-마우스 CD69 항체(H1.2F3; 모두, BD Biosciences)를 사용하여 염색시켰다. 골수 세포 분석을 위해, 마우스로부터의 골수를 문헌[Takeshita S et al., 2014]에 기재된 바와 같이 분리하고, 마우스 Sca-1(BD Biosciences) 또는 CD34 (eBioscience, San Diego, CA, USA)에 대항하는 항체로 염색시켰다. 흐름 세포측정 분석을 FACSCalibur(BD Biosciences)를 사용하여 수행하였다.
1.6 메이슨 트리크롬 염색
3 μm의 신장 절편을 75℃에서 15분 동안 인큐베이션시켰다. 상기 슬라이드를 자일린 및 구배 알코올에 옮겼다. 헤마톡실린으로 1분 염색 후에 모르단트(Mordant)를 슬라이드 상에 장착하였다. 0.75% 오랜지 G 용액, 메이슨 염색 용액 B, 2.5% 포스포텅스텐산 용액, 및 아닐린 블루 염색 용액에 의한 염색 후에, 슬라이드를 1% 아세트산으로 2회 세척하고, 검 아라빅을 구비시켰다. 몇분 동안 공기 건조하고 염색된 절편을 광학 현미경상에서 검사하였다.
1.7 효소-결합 면역흡착 분석
요 샘플을 29G 인슐린 주사기에 의해서 신배(calyx) 및 신우(pelvis)로부터 수거하였다. 정상 대조군으로서, 요를 대사 케이지(metabolic cage)에 의해서 수거하였다. 이어서, MCP-1, TNF-α, 및 IL-1β를 지시 매뉴얼(eBioscience and R&D)에 따라서 ELISA에 의해서 검출하였다. 요약하면, 포획 항체를 96 웰 플레이트에서 밤새 코팅시켰다. PBST로 세척한 후에, 차단 완충액, 샘플, 검출 항체, 아비딘-HRP를 순서대로 적재하였다. TMB 기질 단계 후에 색상이 전개되었고, 이어서, 2N H2SO4를 첨가하여 반응을 중지시켰다. 마지막으로, O.D.450 nm를 측정하였다.
1.8 통계학적 분석
값은 평균 ±SD이다. 2개의 그룹 사이의 비교를 스튜던츠 t-검정을 이용하여 수행하였다. P 값 > 0.05를 통계적으로 유의한 것으로 간주하였다.
2. 결과
2.1 실험 UUO 모델의 확립
실험을 주령 8-10주의 C57BL/6 마우스에 대해서 수행하였다. 마우스를 모의 대조군, 질환 대조군 및 LCHK168 치료군으로 무작위로 나누고, 7 또는 14일 동안의 UUO 후에 희생시켰다. UUO 신장의 신우내의 요의 체류를 관찰하였고, 성공적으로 확립된 UUO 모델을 나타냈다. 도 1a 및 도 1b 참조
2.2 신장 조직병리학 평가
신장 조직을 수거하고, 고정시키고, H&E 염색을 진행시켰다. 도 2에 도시된 바와 같이, UUO 7일째에, 질환 대조군 마우스는 사이질 영역에서 유의한 단핵 백혈구 침윤 및 요세관 확장을 나타냈고, 이러한 조직병리학은 LCHK168 투여에 의해서 억제되었다. UUO 14일째에, 섬유증 및 요세관 위축이 관찰되었고, 이는 LCHK168 투여 후에 유의하게 억제되었다.
2.3 신장 세포 아폽토시스 및 증식 평가
UUO 신장에서, 기계적 스트레스가 요의 체류에 의해서 유발되었고, 그러한 스트레스에 대한 반응으로 신장 세포에 의한 사이토킨 및 ROS 방출이 세포에 대한 손상을 유발시킬 것이고, 이는 세포 자가-재생 또는 아폽토시스 반응을 유도한다. 아폽토시스 세포에 대한 신장 절편의 TUNNEL 염색은 UUO 신장 사이질 영역을 나타냈고, LCHK168 투여 후에 감소되었다. 도 3a 참조.
증식성 세포 핵 항원(proliferating cell nuclear antigen: PCNA), 즉 요세관 상피 세포의 증식 상태에 대해서뿐만 아니라 활성화된 근섬유모세포 및 염증 세포에 대한 마커에 의한 신장 절편의 면역조직화학적 염색은, 특히, 확장된 요세관에서, UUO 후에 증가된 유의성을 나타냈다. 그러나 PCNA 발현은 LCHK168의 투여 후에 감소하였다. 이들 결과는 LCHK168가 세포 아폽토시스 및 손산을 감소시킬 수 있음을 나타낸다. 도 3b 참조.
2.4 섬유증 발현 평가
UUO 신장에서, 섬유증은 신장 조직 손상에 대한 부적응 반응이고, 폐쇄가 ㅈ지속되면 비가역적 신장 기능장애로 발전할 것이다. 메이슨 트리크롬 염색에 의한 신장 절편의 조직화학적 염색은 모의 대조군에 비해서 UUO 사이질 영역에서의 성유증 조직의 유의한 증가를 나타냈고, LCHK168 투여 후에 감소되었다. 도 4a 참조. 추가의 검사를 α-SMA, 콜라겐 Ⅲ 및 Ⅳ에 대한 신장 절편의 면역조직화학적 염색에 의해서 수행하였고, 이는 UUO 사이질 영역에서 강하게 나타났으며, LCHK168 투여 후에 감소되었다. 도 4b 내지 도 4e 참조. 얻은 이들 데이터는 LCHK168가 신장 사이질에서의 근섬유모세포 활성화 및 신장 섬유증을 완화시킬 수 있음을 나타냈다.
2.5 NF - κB 조절된 염증성 반응
2.5.1 신장 조직에서의 NF - κB의 발현
NF-κB는 시토카인 및 세포-부착 분자의 자극을 위한 염증 관련된 인자의 조절을 위한 필수 핵 전사 인자이다. 앞선 연구는 NF-κB의 발현 수준이 신장 질환을 포함한 다양한 염증성 질환에서 상승함을 나타냈다. NF-κB의 신장 절편의 면역조직화학적 염색은 NF-κB 발현의 증가를 나타냈고, LCHK168 투여 후에 억제되었다. 도 5 참조. 이러한 데이터는 LCHK168가 UUO 신장에서 NF-κB를 억제할 수 있음을 나타냈다.
2.5.2 단핵 백혈구 침윤
앞선 연구는 염증성 세포가 UUO의 발병기전에 중요한 역할을 함을 나타냈다. 단핵 백혈구, 특히, 대식세포 및 T 림프구의 침윤은 UUO의 초기 단계에서 관찰될 수 있다. 폐쇄의 지속에 의해서, 활성화된 염증성 세포는 요세관 상피 세포 또는 다른 염증성 세포를 자극하여 다양한 시토카인 및 케모카인을 방출시키고, 더 많은 염증성 세포가 신장 사이질 영역에 동원되게 하고, 신장 염증 및 섬유증을 유도한다. 단핵 백혈구 침윤의 평가는 대식세포와 T 세포에 대한 마커인 F4/80 및 CD3+에 대한 신장 절편의 면역조직화학적 염색에 의해서 수행되었다. F4/80 및 CD3+의 발현이 UUO 후에 증가했으며, LCHK168 투여 후에 감소되었다. 도 6a 및 도 6b 참조. 얻은 데이터는 LCHK168가 신장 사이질에서의 대식세포 및 T 세포 침윤을 예방할 수 있음을 나타냈다.
2.5. 3 요 내의 MCP -1, TNF -α 및 IL- 1β의 발현의 평가
초기 단계에서, 시토카인 및 케모카인은 신장에서 집중적으로 방출되며 면역 세포를 동원할 수 있다. 그리고 동원된 면역 세포는 이어서 더욱더 많은 염증 인자를 방출한다. MCP-1, TNF-α, 및 IL-1β가 신우에서 검출되었다. UUO 및 UUO+LCHK 군 둘 모두가 7일째에 정상 대조군에 비해서 더 높은 MCP-1, TNF-α, 및 IL-1β를 발현하였다. 다만, 이들 시토카인 및 케모카인의 수준은 UUO 군에 비해서 UUO+LCHK 군에서 14일째에 유의하게 감소되었다. 도면은 LCHK168가 요 중의 MCP-1, TNF-α, 및 IL-1β 수준을 유의하게 감소시킬 수 있음을 나타냈다.
2.6 세포 면역의 활성화 및 조혈 줄기 세포 활성화
2.6.1 B 및 T 림프구의 활성화
LCHK168가 전신 세포 면역의 억제를 통한 국소 염증 및 섬유증을 예방하는지를 검사하기 위해서, 본 발명자들은 흐름 세포측정에 의해서 비장에서의 B 세포 및 T 세포 활성화를 검사하였다. 도 8a 및 도 8b에 도시된 바와 같이, 세 그룹 내의 CD3+CD69+(활성화된 팬 B)뿐만 아니라 CD19+CD69+(활성화된 팬 T)의 백분율에서 유의한 변화가 없었다. 얻은 데이터는 UUO에 의해서 유발된 신장병이 전신 세포 면역에 거의 영향이 없을 수 있고, LCHK168가 전신 세포 면역의 억제를 통한 국소 염증 및 섬유증을 예방할 수 없음을 나타냈다.
2.6.2 조혈 줄기 세포의 활성화
LCHK168가 조혈 줄기 세포 활성화의 억제를 통해서 국소 염증 및 섬유증을 예방하는지를 검사하기 위해서, 본 발명자들은 흐름 세포측정에 의해서 골수세포에서의 줄기 세포 및 조혈 줄기 세포 활성화를 검사하였다. 도 9a 및 도 9b에 도시된 바와 같이, 세 그룹 내의 줄기-세포 항원-1-양성 세포(조혈 줄기 세포) 및 CD34+ (줄기 세포)의 백분율에서의 유의한 변화가 없었다. 얻은 데이터는 UUO에 의해서 유발된 신장병이 조혈 줄기 세포 활성에 거의 영향이 없을 수 있고, LCHK168가 조혈 줄기 세포 활성의 억제를 통해서 국소 염증 및 섬유증을 예방할 수 없음을 나타냈다.
요컨대, 본 발명의 연구는 진세노사이드 M1이 UUO 모델에서의 신장 섬유증의 발병을 예방하는데 있어서 효과적인 것을 제시한다. 특히, 결과는 (1) 신장 사이질 조직에서의 세포 아폽토시스 및 요세관 손상의 감소, (2) 신장 사이질 조직에서의 섬유증 및 콜라겔 침착의 예방, (3) NF-κB 활성화의 감소, (4) 신장의 대식세포 및 T 세포 침윤의 예방, 및 (5) 조혈 줄기 세포 및 전신 세포 면역의 정상적 기능을 나타낸다. 모든 이들 발견은 진세노사이드 M이 신장 섬유증의 치료 또는 예방을 위한 새로운 후보 약물로 추가로 개발될 수 있음을 암시한다.
본 발명이 속하는 분야의 통상적인 지식의 사람이 추가의 예시를 필요로 하지 않고 본원의 설명을 기초로 하여 가장 광범위한 범위로 본 발명을 이용할 수 있을 것으로 생각된다. 따라서, 제공된 바와 같은 설명 및 청구항은 어떤 식으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것이 아닌 예시 목적으로 이해되어야 한다.

Claims (9)

  1. 유효량의 진세노사이드 M1(gensenoside M1)을 대상체에게 투여함을 포함하여 신장 섬유증(renal fibrosis)의 억제를 필요로 하는 대상체에서의 신장 섬유증을 억제하는 방법.
  2. 청구항 1에 있어서,
    대상체가 폐쇄 신장병(obstructive nephropathy)을 앓고 있는 환자인 방법.
  3. 청구항 1에 있어서,
    진세노사이드 M1이 대상체에서의 단핵 백혈구 염증화(mononuclear leukocyte inflammation), 요세관 확장(tubular dilation), 요세관 위축(tubular atrophy), 요세관 상피 세포의 증식(proliferation of tubular epithelial cell), 섬유모세포(fibroblast) 또는 근섬유모세포의 활성화 및 콜라겐 침착으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 증상 또는 상태를 경감 또는 완화시키는데 효과적인 양으로 투여되는 방법.
  4. 청구항 1에 있어서,
    진세노사이드 M1이 대상체의 신장 사이질에서의 단핵 백혈구 침윤 또는 섬유증을 경감 또는 완화시키는데 효과적인 양으로 투여되는 방법.
  5. 청구항 1에 있어서,
    진세노사이드 M1의 투여 전에 폐쇄 신장병을 앓고 있는 대상체를 진단하거나 확인함을 포함하는 방법.
  6. 신장 섬유증의 억제를 필요로 하는 대상체에서의 신장 섬유증을 억제하기 위한 약제를 제조하기 위한 진세노사이드 M1의 용도.
  7. 청구항 6에 있어서,
    대상체가 폐쇄 신장병을 앓고 있는 환자인 용도.
  8. 청구항 6에 있어서,
    약제가 대상체에서의 단핵 백혈구 염증화, 요세관 확장, 요세관 위축, 요세관 상피 세포의 증식, 섬유모세포 또는 근섬유모세포의 활성화 및 콜라겐 침착으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 증상 또는 상태를 경감 또는 완화시키는데 효과적인 용도.
  9. 청구항 6에 있어서,
    약제가 대상체의 신장 사이질에서의 단핵 백혈구 침윤 또는 섬유증을 경감 또는 완화시키는데 효과적인 용도.
KR1020167035138A 2014-05-16 2015-05-18 신장 섬유증을 억제하기 위한 진세노사이드 m1의 용도 KR102360315B1 (ko)

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100381441B1 (ko) * 2000-06-14 2003-04-26 기장 메디칼 주식회사 약쑥과 약재혼합쑥을 이용한 경피흡수제와 그 제조방법 및사용방법
US10172876B2 (en) * 2014-11-03 2019-01-08 Sheau-Long Lee Use of ginsenoside M1 for treating IgA nephropathy
EP3743077B1 (en) * 2018-04-23 2024-06-12 Sheau-Long Lee Use of ginsenoside m1 for treating huntington's disease
TW202143980A (zh) * 2020-02-20 2021-12-01 理筱龍 人參皂甙ｍ１作為血管收縮素調節酶的調節劑及其在治療包括冠狀病毒引起的症狀之疾病或病徵的用途

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050102326A1 (en) * 2003-10-22 2005-05-12 Nitzan Peleg Method and apparatus for performing conflict resolution in database logging
CN100402038C (zh) * 2004-03-09 2008-07-16 山东绿叶天然药物研究开发有限公司 人参皂苷c-k在制备治疗或预防肝纤维化的药物中的应用
WO2005102326A2 (en) * 2004-04-23 2005-11-03 Ab Science Use of c-kit inhibitors for treating renal diseases
CA2597098C (en) * 2005-02-08 2016-08-02 Steven R. Ledbetter Antibodies to tgfbeta
KR20060114774A (ko) * 2005-05-02 2006-11-08 에스케이케미칼주식회사 (20Ｓ)-진세노사이드 Ｒｇ3을 함유하는 주름 예방 및개선용 화장료
US7932057B2 (en) * 2007-07-09 2011-04-26 Sheau-Long Lee Method for preparing 20-O-β-D-glucopyranosyl-20(S)-protopanaxadiol (ginsenoside M1) by using sanqi leaves and stems
TW200930388A (en) * 2008-01-10 2009-07-16 Shih-Ming Chen Pharmaceutical composition for treating cisplatin induced nephropathy
US8080568B1 (en) * 2010-06-29 2011-12-20 Ewha University - Industry Collaboration Foundation 2-pyridyl substituted imidazoles as therapeutic ALK5 and/or ALK4 inhibitors
CN102942610A (zh) * 2012-11-26 2013-02-27 吉林农业大学 人参皂苷m1正丁酸酯的制备及其抗糖尿病医药用途
ES2704027T3 (es) * 2014-05-02 2019-03-13 Lee Sheau Long Uso de ginsenósido M1 para el tratamiento de nefritis lúpica
US10172876B2 (en) * 2014-11-03 2019-01-08 Sheau-Long Lee Use of ginsenoside M1 for treating IgA nephropathy

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Wang Dong, et al., Journal of Zhejiang Chinese Medical University, 2012, 36(8), 917-920. *

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