JP2023515084A - アンジオテンシン調節酵素のモジュレーターとしてのジンセノサイドｍ１、およびコロナウイルスによって引き起こされる症状を含む疾患または病気の治療のためのその使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、アンジオテンシン調節酵素のモジュレーターとしてのジンセノサイドＭ１の新規な使用、およびジンセノサイドＭ１を用いたコロナウイルスによって引き起こされる感染症の治療に関する。

Description

関連出願
本出願は、２０２０年２月２０日に出願された米国仮出願第６２／９７８，９９５号の利益を主張し、その内容の全体は参照により本明細書に組み込まれる。

本発明は、アンジオテンシン調節酵素のモジュレーターとしてのジンセノサイドＭ１の新規の使用、およびそれを使用する関連の治療方法に関する。特に、本発明は、ジンセノサイドＭ１を用いて、ウイルス感染およびその結果生じる臓器または組織の損傷によって引き起こされるものを含む、アンジオテンシン調節酵素の不均衡に関連する疾患または病気を治療する方法を提供する。

レニン－アンジオテンシン系（ＲＡＳ）またはレニン－アンジオテンシン－アルドステロン系（ＲＡＡＳ）は、ホルモン系である。大量の失血や血圧の低下が起こると、この系は活性化され、これは、体内の血圧と体液を一定に調節する重要なホルモンである。アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）およびアンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）は、どちらも、ＲＡＳにおいて重要な役割を果たす。ＡＣＥ２は、体液のバランスをとるために、アンジオテンシンＩ（Ａｎｇ Ｉ）からアンジオテンシン（Ａｎｇ）－（１－９）、またはＡｎｇ ＩＩからＡｎｇ－（１－７）を生成する。ＲＡＳは、多くの心血管疾患で重要な役割を果たしている。現在の研究では、ＡＣＥ２の欠乏が、急性または慢性の肺損傷、またはさらに肺線維症を引き起こす可能性があることが示されている。一方、Ａｎｇ ＩＩの過剰な活性化は、血管や腎臓の損傷、壊死や線維化への進行につながる可能性がある。したがって、ＡＣＥ２が不足すると、Ａｎｇ ＩＩが過剰に蓄積し、肺や腎臓に損傷をもたらす可能性がある。しかしながら、最新の研究により、新型コロナウイルスのＳタンパク質は、ＡＣＥ２に結合し、肺に侵入することが示されている。体内にＡｎｇ ＩＩが過剰に蓄積すると、肺線維症および腎障害の現象を引き起こす。［１］

コロナウイルスは、ヒトおよび他の動物に深刻な健康上の脅威をもたらす。２００２年から２００３年にかけて、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）は、８，０００人に感染し、致死率は～１０％であった。２０１２年以降、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）は、１，７００人以上に感染し、致死率は～３６％であった。２０１３年以降、豚流行性下痢コロナウイルス（ＰＥＤＶ）が米国全土を席巻し、子豚の致死率はほぼ１００％に達し、１年足らずで米国の豚の個体数の１０％以上が一掃された。さらに、新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２とも称される）は、ＣＯＶＩＤ－１９パンデミックを引き起こしている。ウィキペディアのウェブサイトによると、２０２１年２月６日の時点で、１億５００万件を超える症例が確認されており、２２９万人を超える死者がＣＯＶＩＤ－１９に起因するとされている。

一般に、コロナウイルスは、ヒトおよび他の動物に、広範な呼吸器、胃腸および中枢神経系の疾患を引き起こし、ヒトの健康を脅かし、経済的損失をもたらす。コロナウイルスは、比較的容易に変異と組換えをすることによって新しい環境に適応することができるため、宿主範囲と組織向性を効率的に変更するようにプログラムされている。したがって、コロナウイルスによる健康への脅威は、継続的で長期的である。コロナウイルスのウイルス学を理解し、その拡散を制御することは、世界の健康と経済の安定に重要な意味を有する。

コロナウイルスは、ニドウイルス目（order）でコロナウイルス科（family）に属する。それらは、アルファコロナウイルス、ベータコロナウイルス、ガンマコロナウイルス、およびデルタコロナウイルスの、４つの属（genera）に分類できる。それらの中で、アルファコロナウイルスおよびベータコロナウイルスは、哺乳類に感染し、ガンマコロナウイルスは、鳥類に感染し、デルタコロナウイルスは、哺乳類と鳥類の両方に感染する。代表的なアルファコロナウイルスとしては、ヒトコロナウイルスＮＬ６３（ＨＣｏＶ－ＮＬ６３）、ブタ伝染性胃腸炎コロナウイルス（ＴＧＥＶ）、ＰＥＤＶ、およびブタ呼吸器コロナウイルス（ＰＲＣＶ）が挙げられる。代表的なベータコロナウイルスとしては、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、コウモリコロナウイルスＨＫＵ４、マウス肝炎コロナウイルス（ＭＨＶ）、ウシコロナウイルス（ＢＣｏＶ）、およびヒトコロナウイルスＯＣ４３が挙げられる。代表的なガンマコロナウイルスおよびデルタコロナウイルスとしては、それぞれ、鳥類伝染性気管支炎コロナウイルス（ＩＢＶ）およびブタデルタコロナウイルス（ＰｄＣＶ）が挙げられる。コロナウイルスは、エンベロープを持つ大型のプラス鎖ＲＮＡウイルスである。それらは、すべてのＲＮＡウイルスの中で最大のゲノムを持ち、通常は２７～３２ｋｂの範囲である。ゲノムは、ヌクレオカプシドタンパク質（Ｎタンパク質）によって形成された螺旋状のカプシド内に詰め込まれ、さらにエンベロープに囲まれている。ウイルスのエンベロープには少なくとも３つの構造タンパク質が関連している。膜タンパク質（Ｍタンパク質）およびエンベロープタンパク質（Ｅタンパク質）は、ウイルスの組み立てに関与し、一方、Ｓタンパク質は、宿主細胞へのウイルスの侵入を仲介する。一部のコロナウイルスは、エンベロープ関連赤血球凝集素エステラーゼタンパク質（ＨＥタンパク質）もコードしている。これらの構造タンパク質の中で、スパイクは、ウイルスの表面から大きな突起を形成し、コロナウイルスにクラウンを持っているような外観を与える（そのため、その名称；ラテン語のコロナはクラウンを意味する）。ウイルスの侵入を仲介することに加えて、スパイクは、ウイルス宿主の範囲と組織向性の重要な決定要因であり、宿主免疫応答の主要な誘導因子である。［２］

高麗人参（ｇｉｎｓｅｎｇ、オタネニンジン）の主要な有効成分であるジンセノサイド（ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ）は、様々な薬理活性、例えば、抗腫瘍、抗疲労、抗アレルギー、および抗酸化作用など、を有することが知られている。ジンセノサイドは、４つの環に１７個の炭素原子が配置されたゴナンステロイド核で構成される基本構造を共有している。ジンセノサイドは、体内で金属化されており、最近の多くの研究では、天然に存在するジンセノサイドよりも、ジンセノサイド代謝物が体内に容易に吸収され、有効成分として作用することが示唆されている。その中でも、ジンセノサイドＭ１は、化合物Ｋ（ＣＫ）とも称され、ヒト腸内細菌によるジペノシド（ｇｙｐｅｎｏｓｉｄｅ）経路を介したプロトパナキサジオール型ジンセノサイドの代謝物の１つとして知られている。これまで、アンジオテンシン調節酵素の調節におけるジンセノサイドＭ１の効果、および関連する疾患または病気の治療のためのその使用を報告する、先行技術文献はない。

本発明において、予想外にも、ジンセノサイドＭ１が、ＡＣＥ２のアップレギュレーションおよびＡＣＥのダウンレギュレーション、アンジオテンシンＩＩの分解の促進、およびアンジオテンシンＩＩの蓄積の防止を含む、アンジオテンシン調節酵素の調節に有効であり、したがって、ＡＣＥとＡＣＥ２の異常なバランス、またはアンジオテンシンＩＩの蓄積、特にウイルス感染（例えばコロナウイルス）によって引き起こされる臓器または組織の損傷、に関連する疾患または病気の治療に有用であることが見いだされた。

したがって、本発明は、必要とする対象におけるアンジオテンシン調節酵素のモジュレーターとしての、医薬を製造するための、ジンセノサイドＭ１の使用を提供する。

本発明のいくつかの実施形態において、アンジオテンシン調節酵素は、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）、およびアンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）からなる群から選択される。

いくつかの実施形態において、モジュレーターは、ＡＣＥ阻害剤、またはＡＣＥ２活性化剤、またはその両方である。

いくつかの実施形態において、モジュレーターは、対象において、アンジオテンシンＩＩの分解、およびアンジオテンシンＩＩの蓄積の防止に有効である。

いくつかの実施形態において、医薬は、対象において、ＡＣＥとＡＣＥ２のアンバランス（不均衡）、またはアンジオテンシンＩＩの蓄積に関連する、疾患または病気の治療に有効である。

本発明はまた、対象を治療するのに有効な量のジンセノサイドＭ１を対象に投与することを含む、必要とする対象において、ＡＣＥとＡＣＥ２の異常なバランスまたはアンジオテンシンＩＩの蓄積に関連する、疾患または病気を治療する方法を提供する。

いくつかの実施形態において、ジンセノサイドＭ１は、対象において、ＡＣＥを阻害する、またはＡＣＥ２を活性化する、またはその両方に有効な量で、投与される。

いくつかの実施形態において、ジンセノサイドＭ１は、対象において、アンジオテンシンＩＩを分解し、アンジオテンシンＩＩの蓄積を防止するのに有効な量で、投与される。

いくつかの実施形態において、治療される疾患または病気は、ＡＣＥとＡＣＥ２の異常なバランスまたはアンジオテンシンＩＩの蓄積に関連するものであり、対象の臓器または組織の損傷が含まれる。

いくつかの実施形態において、損傷には、肺、胃腸管、脾臓、リンパ節、心臓、腎臓、膀胱、肝臓、胆嚢、副腎および／または精巣における、損傷が含まれる。

いくつかの実施形態において、損傷は、コロナウイルスの感染によって引き起こされる。

いくつかの実施形態において、コロナウイルスは、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、および新型コロナウイルス（２０１９－ｎＣｏＶ）から選択される。

いくつかの実施形態において、ジンセノサイドＭ１は、アンジオテンシンＩＩを分解し、アンジオテンシンＩＩの蓄積を防止するのに有用な、１つ以上の追加の治療方法または治療剤と組み合わせて、投与される。一例では、そのような１つ以上の追加の治療剤には、ＡＣＥ２が含まれる。

いくつかの実施形態において、ジンセノサイドＭ１は、コルチコステロイド、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、細胞毒性薬（cytotoxic drug）、免疫抑制薬、および血管拡張薬からなる群から選択される、１つ以上の追加の治療剤と組み合わせて、投与される。

いくつかの実施形態において、ジンセノサイドＭ１は、抗生物質、インターフェロン、および抗ウイルス剤からなる群から選択される、１つ以上の追加の治療剤と組み合わせて、投与される。

具体的には、本発明は、肺損傷を治療するための医薬を製造するための、ジンセノサイドＭ１の使用を提供する。本発明はまた、それを必要とする対象に、有効量のジンセノサイドＭ１を投与することによって、肺損傷を治療する方法を提供する。特に、肺損傷は、対象における、ＡＣＥとＡＣＥ２の異常なバランス、またはアンジオテンシンＩＩの蓄積に関連している。

いくつかの実施形態において、肺損傷には、肺における、肺胞炎、リンパ球浸潤および／または線維症が含まれる。

いくつかの実施形態において、ジンセノサイドＭ１は、非経口または経腸経路によって、投与される。

本発明の１つ以上の実施形態の詳細は、以下の説明に記載されている。本発明の他の特徴または利点は、以下のいくつかの実施形態の詳細な説明、および添付の特許請求の範囲から明らかになるであろう。

本発明を説明する目的で、図面に実施形態が示されている。しかしながら、本発明は、示された好ましい実施形態に限定されるものではないことが理解されるべきである。図面は、次のとおりである。

ラットの腎組織におけるアンジオテンシンのレベルを示す。腎組織のＡｎｇ ＩＩレベル（上の図）。腎組織のＡｎｇ－（１－７）レベル（下の図）。同じ上付き文字は、群間に有意差がないことを示す（Ｐ＞０．０５）。同じ上付き文字を持たない群間には、有意差があった（Ｐ＜０．０５）。

ラットの腎組織におけるアンジオテンシン変換酵素のレベルを示す。ＩＨＣ染色の定量的結果は、ＩＯＤ／領域として表され、ＡＣＥレベル（上の図）およびＡＣＥ２レベル（下の図）に比例していた。同じ上付き文字は、群間に有意差がないことを示す（Ｐ＞０．０５）。同じ上付き文字を持たない群間には、有意差があった（Ｐ＜０．０５）。

マウス（注入モデル）の腎組織におけるアンジオテンシンのレベルを示す。腎組織のＡｎｇ ＩＩレベル（上の図）およびＡｎｇ－（１－７）レベル（下の図）。同じ上付き文字は、群間に有意差がないことを示す（Ｐ＞０．０５）。同じ上付き文字を持たない群間には、有意差があった（Ｐ＜０．０５）。

マウスの腎組織におけるＡＣＥのレベルを示す。ＩＨＣ染色の定量的結果は、ＩＯＤ／領域として表され、ＡＣＥレベル（上の図）およびＡＣＥ２レベル（下の図）に比例していた。同じ上付き文字は、群間に有意差がないことを示す（Ｐ＞０．０５）。同じ上付き文字を持たない群間には、有意差があった（Ｐ＜０．０５）。

局所肺レニン－アンジオテンシン系を示す。ＡＣＥ２およびＭ１は、ブレオマイシン誘発肺線維症の組織学的変化を改善した。異なる群において、組み換えマウスに、ＡＣＥ２、または、Ｍ１およびブレオマイシンと一緒のＡＣＥ２を、０日目に投与した。Ｓｚａｐｉｅｌスコアを得て、肺胞炎（上の図）および線維症（下の図）の程度と、ＡＣＥ２、およびＭ１と一緒のＡＣＥ２の阻害効力を定量化した。データは、平均±ＳＥＭとして表される。生理食塩水群と比較して、＊ｐ＜０．０５、ＢＬＭと比較して、＃ｐ＜０．０５、である。

特に断りのない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般的に理解される意味を有する。本明細書で使用される場合、以下の用語は、特に断りのない限り、それらに帰する意味を有する。

冠詞「ａ」および「ａｎ」は、本明細書では、冠詞の文法上の目的対象の１つまたは複数（すなわち、少なくとも１つ）を指すために使用される。例として、「要素」（ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ）は、１つの要素または２つ以上の要素を意味する。

「含む」または「含むこと」という用語は、一般に、包含する／包含の意味で使用され、１つ以上の特徴、成分、または構成要素の存在を可能にすることを意味する。「含む」または「含むこと」という用語は、「からなる」または「からなること」という用語を包含する。

化合物Ｋ（ＣＫ）、２０－Ｏ－β－Ｄ－グルコピラノシル－２０（Ｓ）－プロトパナキサジオールとも称される、ジンセノサイドＭ１は、当技術分野で知られているサポニン代謝物の１つである。ジンセノサイドＭ１の化学構造は、下記のとおりである。

ジンセノサイドＭ１は、ヒトの腸内細菌によるジペノシド経路を介したプロトパナキサジオール型ジンセノサイドの代謝物の１つとして知られている。ジンセノサイドＭ１は、摂取後、血中または尿中で検出することができる。ジンセノサイドＭ１は、台湾特許出願第０９４１１６００５号（Ｉ２８０９８２）および米国特許第７，９３２，０５７号など（その内容は全て参照により本明細書に組み込まれる）の当技術分野で知られている方法による菌発酵により、高麗人参植物から製造することができる。特定の実施形態において、ジンセノサイドＭ１を製造するための高麗人参植物として、ウコギ（Ａｒａｌｉａｃｅａｅ）科、トチバニンジン（Ｐａｎａｘ）属、例えば、高麗人参（Ｐ．ｇｉｎｓｅｎｇ；オタネニンジン）、およびヒマラヤニンジン（Ｐ．ｐｓｅｕｄｏ－ｇｉｎｓｅｎｇ）（別名Ｓａｎｑｉ）が挙げられる。一般に、ジンセノサイドＭ１の製造方法は、（ａ）高麗人参植物材料（例えば、葉または茎）の粉末を提供する工程；（ｂ）高麗人参植物材料を発酵させるために菌を提供する工程であって、発酵温度は２０～５０℃の範囲であり、発酵湿度は７０～１００％の範囲であり、ｐＨ値は４．０～６．０の範囲であり、発酵期間は５～１５日の範囲である、工程；（ｃ）発酵生成物を抽出および収集する工程；および、（ｄ）発酵生成物から、２０－Ｏ－β－Ｄ－グルコピラノシル－２０（Ｓ）－プロトパナキサジオールを単離する工程、を含む。

本発明においてジンセノサイドＭ１が「単離された」または「精製された」と記載される場合、それは、完全に単離または精製されたものではなく、ある程度、単離または精製されたものとして理解されるべきである。例えば、精製されたジンセノサイドＭ１は、天然に存在する形態と比較してより精製されたものを表す。一実施形態において、精製されたジンセノサイドＭ１を含む製剤は、製剤総量の、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、または１００％（ｗ／ｗ）の量のジンセノサイドＭ１を含み得る。本明細書において特定の数を用いて比率または用量を示す場合、その数は、一般に、その数よりも１０％の多いおよび少ない範囲、より具体的には、５％の多いおよび少ない範囲内の数を含むものと理解すべきである。

本明細書において、「個体」または「対象」との用語には、ヒト、および、ペット動物（イヌ、ネコなど）、家畜（ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマなど）、または実験動物（ラット、マウス、モルモットなど）などの、ヒト以外の動物、が含まれる。

本明細書において、「治療する」との用語は、障害、障害の症状または状態、障害の進行、または障害のリスクのある対象に対して、障害、障害の症状または状態、障害によって誘発される弊害、または、障害の発症または進行を、治療、治癒、軽減、緩和、変化、療養、寛解、改善し、または影響を与える目的で、１つ以上の活性剤を含む組成物を、適用または投与することを意味する。

本明細書において、「有効量」との用語は、治療対象に所望の治療効果を与えるための有効成分の量を意味する。いくつかの実施形態において、本明細書における有効量は、ＡＣＥのダウンレギュレーション、ＡＣＥ２のアップレギュレーション、アンジオテンシンＩＩの分解、および／またはアンジオテンシンＩＩの蓄積の防止に有効な量であり得る。いくつかの実施形態において、本明細書における有効量は、アンジオテンシンＩＩの蓄積によって引き起こされる臓器または組織の損傷、例えば肺損傷（肺胞炎、肺リンパ球浸潤および／または肺線維症など）を、緩和または軽減するのに有効な量であり得る。

治療有効量は、投与経路および頻度、該医薬を摂取する個体の体重および種、および投与の目的などの、様々な理由に応じて変化し得る。当業者は、本明細書の開示、確立された方法、および自身の経験に基づいて、それぞれの場合における投与量を決定することができる。例えば、特定の実施形態において、本発明において使用されるジンセノサイドＭ１の経口投与量は、１日あたり１０～１，０００ｍｇ／ｋｇである。いくつかの例において、本発明において使用されるジンセノサイドＭ１の経口投与量は、１日あたり１００～３００ｍｇ／ｋｇ、１日あたり５０～１５０ｍｇ／ｋｇ、１日あたり２５～１００ｍｇ／ｋｇ、１日あたり１０～５０ｍｇ／ｋｇ、または、１日あたり５～３０ｍｇ／ｋｇ、である。さらに、本発明のいくつかの実施形態において、ジンセノサイドＭ１は、特定の期間、例えば、少なくとも、１５日、１ヶ月、または２ヶ月、またはそれ以上、毎日の投与によって、定期的に投与される。

一実施形態において、治療有効量の活性成分は、薬学的に許容される担体と共に、送達および吸収の目的のための適切な形態の医薬組成物に、製剤化され得る。投与方法に応じて、本発明の医薬組成物は、好ましくは、約０．１重量％～約１００重量％の活性成分を含み、ここで、重量パーセントは、組成物全体の重量に基づいて計算される。

本明細書において、「薬学的に許容される」とは、担体が、組成物において活性成分と適合性があり、好ましくは、前記活性成分を安定化でき、治療を受ける個体に安全であることを意味する。前記担体は、活性成分に対する、希釈剤、ビヒクル、賦形剤、またはマトリックスであり得る。適切な賦形剤のいくつかの例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルボース、マンノース、デンプン、アラビアガム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガントガム、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、滅菌水、シロップ、およびメチルセルロース、が挙げられる。組成物は、さらに、タルク、ステアリン酸マグネシウム、および鉱油などの潤滑剤；湿潤剤；乳化剤および懸濁剤；ヒドロキシ安息香酸メチルおよびプロピルなどの保存剤；甘味料；および香料、を含み得る。本発明の組成物は、患者への投与後、活性成分の、急速、継続または遅延の放出作用を与えることが可能である。

本発明によれば、前記組成物の形態は、錠剤、ピル剤、粉末、飴（lozenge）、包装（packet）、トローチ、エリキシル剤、懸濁液、ローション、溶液、シロップ、ソフトおよびハードゼラチンカプセル、坐剤、滅菌注射液、および、包装粉末、であってもよい。

本発明の組成物は、経口、非経口（筋肉内、静脈内、皮下、および腹腔内など）、経皮、坐剤、および鼻腔内の方法などの、生理学的に許容される経路を介して送達することができる。非経口投与に関しては、血液に対して等張する溶液を形成するのに十分な塩またはグルコースなどの他の物質を含み得る、滅菌水溶液の形態で使用することが好ましい。水溶液は、必要に応じて、適切に（好ましくはｐＨ値３～９に）緩衝化されていてもよい。無菌条件下での適切な非経口組成物の製造は、当業者に周知の標準的な薬理学的技術を用いて行うことができ、追加の創造的な労力は必要ではない。

本発明によれば、ジンセノサイドＭ１は、対象における、ＡＣＥとＡＣＥ２の異常なバランス、またはアンジオテンシンＩＩの蓄積に関連する、疾患または病気を治療するための有効成分として使用され得る。いくつかの実施形態において、そのような疾患または病気には、肺、胃腸管、脾臓、リンパ節、心臓、腎臓、膀胱、肝臓、胆嚢、副腎および／または精巣の損傷などの、対象の臓器または組織の損傷が含まれる。特定の例において、損傷は、コロナウイルスの感染によって引き起こされ、これに限定されるものではないが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、および２０１９－ｎＣｏＶが挙げられる。

いくつかの実施形態において、ジンセノサイドＭ１またはジンセノサイドＭ１を有効成分として含む組成物は、既存の治療方法または治療剤、例えば、本明細書に記載されているようなＡＣＥとＡＣＥ２の異常なバランスまたはアンジオテンシンＩＩの蓄積に関連する疾患または病気を治療するためのもの、と組み合わせて、使用され得る。一例において、ジンセノサイドＭ１は、ＡＣＥ２と共に投与される。したがって、ジンセノサイドＭ１とＡＣＥ２との特定の組み合わせが、本明細書に記載されるように、必要とする対象に、投与される。

いくつかの実施形態において、ジンセノサイドＭ１またはジンセノサイドＭ１を有効成分として含む組成物は、コルチコステロイド（プレドニゾロンなど）、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、細胞毒性薬（シクロホスファミド、クロラムブシル、およびアザチオプリンなど）、免疫抑制薬（シクロスポリン、およびミコフェノール酸モフェチルなど）、および血管拡張薬（アンジオテンシン変換酵素阻害剤（ＡＣＥ阻害剤）など）と組み合わせて、使用することができる。

特定の一実施形態において、ジンセノサイドＭ１は、肺損傷、例えば、肺における、肺胞炎、リンパ球浸潤および／または線維症の治療に使用するために、ＡＣＥ２と組み合わせて、投与される。

いくつかの実施形態において、ジンセノサイドＭ１は、抗生物質、インターフェロン、および抗ウイルス剤と組み合わせて、投与される。

一実施形態において、組み合わせて使用される薬剤または治療方法は、同時に（並行して）または連続的に使用され得る。薬剤を組み合わせて使用する場合、薬剤は、同じ製剤で混合されてもよいし、別々のカプセル、ピル剤、錠剤、および注射剤など、別々の製剤に入れられてもよい。

以下、本発明をさらに実施例によって説明するが、これらは、説明する目的で提供されるものであり、これによって限定されるものではない。当業者は、本開示に照らして、開示される具体的な実施形態において多くの変更を行うことができ、また、本発明の意図および範囲から逸脱することなく、同様または類似の結果を得ることができることを理解するはずである。

化合物Ｋ（ＣＫ）とも称される、ジンセノサイドＭ１、２０－Ｏ－β－Ｄ－グルコピラノシル－２０（Ｓ）－プロトパナキサジオール（以下、ＬＣＨＫ１６８と称する）は、台湾特許出願第０９４１１６００５号（Ｉ２８０９８２）および米国特許第７，９３２，０５７号に記載されているものなど、当技術分野で知られている方法により製造した。

以前の研究によれば、コロナウイルス上のスパイクタンパク質（Ｓタンパク質）は、ＡＣＥ２に結合し、ＡＣＥ２の量は、肺および腎臓の健康に影響を与える（ACE2 Expression in Kidney and Testis May Cause Kidney and Testis Damage After 2019-nCoV Infection https://doi.org/10.1101/2020.02. 12.20022418, Posted February 13, 2020；および、Angiotensin-Converting Enzyme 2 Attenuates Bleomycin-Induced Lung Fibrosis in Mice, Cellular Physiology and Biochemistry, 2015; 36: 697-711）。この研究では、ジンセノサイドＭ１を使用して、ＡＣＥ２の含有量を調節し、健康な体を維持する。

アンジオテンシンＩＩ（Ａｎｇ ＩＩ）介在性腎障害は、ほとんどの慢性腎疾患における主要な病原メカニズムを表す。我々は、ジンセノサイドＭ１が、腎組織のアンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）をアップレギュレートすることにより、Ａｎｇ ＩＩ発現を減衰させることを見出した。外因性のＡｎｇ ＩＩを注入した腎臓損傷のマウスモデルでこの発見を確認し、結果は２つのモデルで一貫していることを示した。局所レニン－アンジオテンシン系（ＲＡＳ）活性化は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）の病因において重要な役割を果たすことが示される。ＡＣＥ２は、ＲＡＳを介した上皮損傷および線維形成を阻害する可能性があり、ＡＣＥ２欠乏は、急性および慢性の肺損傷を悪化させる可能性があることが報告される。

１． 材料および方法
１．１ 動物および処置
１．１．１ ラット（腎損傷）
合計２０匹のＷｉｓｔａｒ－Ｋｙｏｔｏラット（ＷＫＹ）および２０匹のＳＨＲ（オス、１６～１７週齢）動物を、次の４群に分けた。ＷＫＹ群（８ＷＫＹ、０．５％ＣＭＣ－Ｎａを経口投与）；ＳＨＲ群（８ＳＨＲ、０．５％ＣＭＣ－Ｎａを経口投与）；ＷＫＹ＋ジンセノサイドＭ１群（８ＷＫＹ、２０ｍｇ／ｋｇでジンセノサイドＭ１を経口投与）；ＳＨＲ＋ジンセノサイドＭ１群（８ＳＨＲ、２０ｍｇ／ｋｇでジンセノサイドＭ１を経口投与）。ジンセノサイドＭ１またはプラセボの投与を、１日１回、４２日間実施した後、動物を屠殺し、血液および腎組織のサンプルを採取した。腎組織の標本は、４％ホルマリンで固定するか（組織病理学）、または、液体窒素で急速凍結し、逆転写定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ｑＰＣＲ）および酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）のために、－８０℃で保管した。

１．１．２ マウス（注入モデル）（腎損傷）
合計２０匹のＣ５７ＢＬ／６マウス（オス、１０週齢）を齧歯動物用飼料と水で自由に飼育した。Ａｎｇ ＩＩ（１．５ｍｇ／ｋｇ）を首の背部に１００２浸透圧ミニポンプで皮下移植するか、通常の生理食塩水を注入した動物を、次の４群に割り当てた。生理食塩水群（マウス５匹、生理食塩水を注入し、０．５％ＣＭＣ－Ｎａを経口投与）；Ａｎｇ ＩＩ群（マウス５匹、Ａｎｇ ＩＩを注入し、０．５％ＣＭＣ－Ｎａを経口投与）；生理食塩水＋ジンセノサイドＭ１群（マウス５匹、生理食塩水を注入し、２０ｍｇ／ｋｇ－１・ｄ－１でジンセノサイドＭ１を経口投与）；Ａｎｇ ＩＩ＋ジンセノサイドＭ１群（マウス５匹、Ａｎｇ ＩＩを注入し、２０ｍｇ／ｋｇでジンセノサイドＭ１を経口投与）。ジンセノサイドＭ１またはプラセボの投与を、１４日間毎日行い、続いて動物を屠殺し、血液および腎組織のサンプルを採取した。腎組織の標本は、４％ホルマリンで固定するか（組織病理学）、液体窒素で急速凍結し、－８０℃で保管した（ＲＴ－ｑＰＣＲおよびＥＬＩＳＡ）。

１．１．３ マウス（肺損傷）
動物を次の５群に無作為に分けた。（１）生理食塩水群：０．９％生理食塩水（２００μＬ）を尾静脈から注射した；（２）ＡＣＥ２群：ＡＣＥ２（０．２ｍｇ／ｋｇ）を単回腹腔内注射した；（３）ＢＬＭ群：１５０ｍｇ／ｋｇのブレオマイシンを尾静脈から単回注射した；（４）ＢＬＭ＋ＡＣＥ２群：１５０ｍｇ／ｋｇのブレオマイシンを尾静脈から注射した後、０．２ｍｇ／ｋｇのＡＣＥ２を腹腔内注射した；（５）ＢＬＭ＋ＡＣＥ２＋Ｍ１群：１５０ｍｇ／ｋｇのブレオマイシンを尾静脈から注射した後、０．２ｍｇ／ｋｇのＡＣＥ２および６０ｍｇ／ｋｇのＭ１を腹腔内注射した。投与後、各群から無作為に選択した１０匹の動物を、７日目、１４日目、および２８日目に頸椎脱臼により安楽死させた。

１．２ 組織病理学的評価
腎組織標本は、４％ホルマリンで固定し、パラフィン包埋し、４μｍで切片化し、ヘマトキシリンおよびエオシン染色（Ｈ＆Ｅ）、およびマッソントリクローム染色で、それぞれ染色した。次いで、Ｎｉｋｏｎ Ｅ１００光学顕微鏡で分析を行った。

１．３ 免疫組織化学（ＩＨＣ）
ＡＣＥおよびＡＣＥ２一次抗体は、Ｂｉｏｓｓ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓによって製造された。ペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ウサギ二次抗体、ＤＡＢおよび２ステップ－ウサギＩＨＣキットは、ＺＳＧＢ－ＢＩＯから提供された。ＩＨＣは、ＺＳＧＢ－ＢＩＯの提案に従って実施した。

１．４ 腎組織におけるＡｎｇ ＩＩおよびＡｎｇ－（１－７）レベルの評価
腎標本の上清は、以下のように調製した。合計１００ｍｇの腎組織を９００μＬの氷冷生理食塩水でホモジナイズし、遠心分離（１０００ｇ、４℃で１５分間）にかけた。得られた上清は、製造元のプロトコルに従って、Ａｎｇ ＩＩおよびＡｎｇ－（１－７）ＥＬＩＳＡキットでそれぞれ分析するまで、－８０℃で保管した。

２．結果
２．１ ジンセノサイドＭ１はＳＨＲの腎組織におけるＡｎｇ ＩＩレベルを低下させる：
インビボでＡｎｇ ＩＩのレベルを調節する２つの主なＡＣＥがあり、ＡＣＥおよびＡＣＥ２が含まれる。ＡＣＥは、アンジオテンシンＩをＡｎｇ ＩＩに変換し、ＡＣＥ２は、Ａｎｇ ＩＩをＡｎｇ－（１－７）に変換する。したがって、ＡＣＥのアップレギュレーションはＡｎｇ ＩＩの増加を誘発し、一方、ＡＣＥ２のアップレギュレーションはＡｎｇ ＩＩの増加を弱める。自然発症高血圧ラット（ＳＨＲ）は、遺伝性高血圧の動物モデルである。ＥＬＩＳＡのデータ（図１）によると、ＳＨＲ群の腎組織におけるＡｎｇ ＩＩレベルは、ＷＫＹ群およびＷＫＹ＋ジンセノサイドＭ１群よりも、有意に高かった。ジンセノサイドＭ１による処置は、ＳＨＲの腎組織のＡｎｇ ＩＩレベルを大幅に低下させ、一方、ＷＫＹ群では限定的な効果を示した。ＳＨＲ群のＡｎｇ－（１－７）量は、ＷＫＹ群およびＷＫＹ＋ジンセノサイドＭ１群の値よりも有意に高く、ＳＨＲ＋ジンセノサイドＭ１群は、ＳＨＲ群と比較して、さらに有意に高い値を示した。ＩＨＣの結果（図２）は、ＡＣＥレベルが２つのＷＫＹ群と比較して２つのＳＨＲ群で著しく上昇していることを示した。腎組織のＡＣＥ２量は、ＷＫＹ群およびＷＫＹ＋ジンセノサイドＭ１群と比較して、ＳＨＲ群で代償的にアップレギュレートした。一方、ジンセノサイドＭ１処置は、ＳＨＲの腎組織におけるＡＣＥ２をさらにアップレギュレートすることができた。これは、ジンセノサイドＭ１処置が、ＳＨＲの腎臓において、Ａｎｇ ＩＩをダウンレギュレートし、Ａｎｇ－（１－７）をアップレギュレートさせた主なメカニズムであった。一方、ジンセノサイドＭ１は、ＷＫＹまたはＳＨＲのいずれにおいても、ＡＣＥ発現に有意な影響を与えなかった。

２．２ ジンセノサイドＭ１は、Ａｎｇ ＩＩを注入したマウスの腎組織におけるＡｎｇ ＩＩレベルを低下させる：
ＥＬＩＳＡのデータ（図３）によると、Ａｎｇ ＩＩ注入は、マウスの腎組織におけるＡｎｇ ＩＩレベルを有意に増加させ、ジンセノサイドＭ１処置は、この増加を有意に弱めることができたが、Ａｎｇ ＩＩ＋ジンセノサイドＭ１群におけるＡｎｇ ＩＩレベルは、生理食塩水を注入した２つの群のものよりも、依然として有意に高かった。一方、Ａｎｇ ＩＩ群のＡｎｇ－（１－７）レベルは、生理食塩水群および生理食塩水＋ジンセノサイドＭ１群のレベルよりも有意に高かった。Ａｎｇ ＩＩ＋ジンセノサイドＭ１群は、Ａｎｇ ＩＩ群と比較して有意な増加を示した。ＩＨＣデータ（図４）では、さまざまな群のペアにおいてＡＣＥ発現に顕著な違いは見られなかった。Ａｎｇ ＩＩ＋ジンセノサイドＭ１群のＡＣＥ２発現レベルは、他の３つの群と比較して著しく上昇しており、これが外因性アンジオテンシン分解の主要なメカニズムである可能性がある。

２．３ Ｍ１およびＡＣＥ２による肺胞炎および線維症の治療：
図５に示すように、マウスの尾静脈を介して、１５０ｍｇ／ｋｇの用量でブレオマイシンを単回注射すると、７日目に軽度から中等度の肺胞炎が誘発された。ブレオマイシンの投与は、マウスにおける肺胞炎または線維症の十分に特徴付けられたモデルである。肺の線維性変化は、Ｓｚａｐｉｅｌスコア法を用いて決定され、スコアが高いほど疾患状態が大きいことを示す。肺は、主に胸膜下および血管周囲である局所的分布の肺胞炎を示し、肺胞中隔は、浮腫および炎症細胞浸潤で軽度に肥厚していたが、明らかな線維症は観察されなかった。同時に、ＡＣＥ２の投与は、７日目において病理学的変化を有意に変化させなかった。１４日目に、ＢＬＭ群は疾患の進行を示した。肺は、中等度から重度の肺胞炎と、斑状の炎症硬化とコラーゲン沈着を伴う中等度の線維症を示したが、ＡＣＥ２の投与により、肺胞炎と線維症の両方が大幅に軽減された。２８日目に、ＢＬＭ群では、肺胞炎が自然に解消したが、しかしながら、肺胞構造の異常は続き、線維症は持続し、びまん性で高密度の厚いコラーゲン束と線維芽細胞病巣が特徴となっていた。ＡＣＥ２は、２８日目に長期的な治療効果を顕著に反映し、ＢＬＭ＋ＡＣＥ２群の切片は、軽度から中等度の肺胞炎のみを示し、ＢＬＭ＋ＡＣＥ２＋Ｍ１群の切片は、軽度の肺胞炎のみを示し、線維症の有意な減少を示した。生理食塩水群またはＡＣＥ２群では、さまざまな時点で肺胞炎または線維症の兆候は見られなかった。

参考文献
1. Journal of Molecular Medicine/October 2006, Volume 84, Issue 10, pp 814-820| Cite as/Lessons from SARS: control of acute lung failure by the SARS receptor ACE2. Pharmacology & Therapeutics/Volume 128, Issue 1, October 2010, Pages 119-128/Trilogy of ACE2: A peptidase in the renin-angiotensin system, a SARS receptor, and a partner for amino acid transporters.
2. Published in final edited form as:Annu Rev Virol. 2016 September 29; 3(1): 237-261. doi:10.1146/annurev-virology-110615-042301./ Structure, Function, and Evolution of Coronavirus Spike Proteins/ Fang Li Department of Pharmacology, University of Minnesota Medical School, Minneapolis, Minnesota 55455
3. Antioxidant Treatment and Alcoholism/Camila S. Silva PhD, ... Helio Vannucchi MD, PhD, in Molecular Aspects of Alcohol and Nutrition, 2016
4. Beta-Glucosidase From Penicillium/Gustavo Molina, ... Glaucia M. Pastore, in New and Future Developments in Microbial Biotechnology and Bioengineering, 2018
5. Ginseng and Gastrointestinal Protection*/Min-Hyun Kim, Hyeyoung Kim, in Gastrointestinal Tissue, 2017

Claims (32)

1. 必要とする対象におけるアンジオテンシン調節酵素のモジュレーターとしての、医薬を製造するための、ジンセノサイドＭ１の使用。
2. アンジオテンシン調節酵素が、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）、およびアンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）からなる群から選択される、請求項１に記載の使用。
3. モジュレーターが、ＡＣＥ阻害剤、またはＡＣＥ２活性化剤、またはその両方である、請求項１または２に記載の使用。
4. モジュレーターが、対象において、アンジオテンシンＩＩの分解、およびアンジオテンシンＩＩの蓄積の防止に有効である、請求項３に記載の使用。
5. 医薬が、対象において、ＡＣＥとＡＣＥ２の異常なバランス、またはアンジオテンシンＩＩの蓄積に関連する、疾患または病気の治療に有効である、請求項１～４のいずれか１項に記載の使用。
6. 疾患または病気が、対象の臓器または組織の損傷を含む、請求項５に記載の使用。
7. 損傷が、肺、胃腸管、脾臓、リンパ節、心臓、腎臓、膀胱、肝臓、胆嚢、副腎および／または精巣における、損傷を含む、請求項６に記載の使用。
8. 損傷が、コロナウイルスの感染によって引き起こされる、請求項６または７に記載の使用。
9. コロナウイルスが、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、および新型コロナウイルス（２０１９－ｎＣｏＶ）から選択される、請求項８に記載の使用。
10. 医薬が、アンジオテンシンＩＩを分解し、アンジオテンシンＩＩの蓄積を防止するのに有用な、１つ以上の追加の治療方法または治療剤と組み合わせて、投与される、請求項１に記載の使用。
11. １つ以上の追加の治療剤が、ＡＣＥ２を含む、請求項１０に記載の使用。
12. 医薬が、コルチコステロイド、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、細胞毒性薬、免疫抑制薬、および血管拡張薬からなる群から選択される、１つ以上の追加の治療剤と組み合わせて、投与される、請求項１に記載の使用。
13. 医薬が、抗生物質、インターフェロン、および抗ウイルス剤からなる群から選択される、１つ以上の追加の治療剤と組み合わせて、投与される、請求項１に記載の使用。
14. 対象を治療するのに有効な量のジンセノサイドＭ１を対象に投与することを含む、必要とする対象において、ＡＣＥとＡＣＥ２の異常なバランスまたはアンジオテンシンＩＩの蓄積に関連する、疾患または病気を治療する方法。
15. ジンセノサイドＭ１が、対象において、ＡＣＥを阻害する、またはＡＣＥ２を活性化する、またはその両方に有効な量で、投与される、請求項１４に記載の方法。
16. ジンセノサイドＭ１が、対象において、アンジオテンシンＩＩを分解し、アンジオテンシンＩＩの蓄積を防止するのに有効な量で、投与される、請求項１４に記載の方法。
17. 疾患または病気が、対象の臓器または組織の損傷を含む、請求項１４に記載の方法。
18. 損傷が、肺、胃腸管、脾臓、リンパ節、心臓、腎臓、膀胱、肝臓、胆嚢、副腎および／または精巣における、損傷を含む、請求項１７に記載の方法。
19. 損傷が、コロナウイルスの感染によって引き起こされる、請求項１７または１８に記載の方法。
20. コロナウイルスが、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、および新型コロナウイルス（２０１９－ｎＣｏＶ）から選択される、請求項１９に記載の方法。
21. ジンセノサイドＭ１が、アンジオテンシンＩＩを分解し、アンジオテンシンＩＩの蓄積を防止するのに有用な、１つ以上の追加の治療方法または治療剤と組み合わせて、投与される、請求項１４に記載の方法。
22. １つ以上の追加の治療剤が、ＡＣＥ２を含む、請求項２１に記載の方法。
23. ジンセノサイドＭ１が、コルチコステロイド、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、細胞毒性薬、免疫抑制薬、および血管拡張薬からなる群から選択される、１つ以上の追加の治療剤と組み合わせて、投与される、請求項１４に記載の方法。
24. ジンセノサイドＭ１が、抗生物質、インターフェロン、および抗ウイルス剤からなる群から選択される、１つ以上の追加の治療剤と組み合わせて、投与される、請求項１４に記載の方法。
25. 肺損傷を治療するための医薬を製造するための、ジンセノサイドＭ１の使用。
26. 肺損傷が、肺における、肺胞炎、リンパ球浸潤および／または線維症を含む、請求項２５に記載の使用。
27. 医薬が、アンジオテンシンＩＩを分解し、アンジオテンシンＩＩの蓄積を防止するのに有用な、１つ以上の追加の治療方法または治療剤と組み合わせて、投与される、請求項２５または２６に記載の使用。
28. １つ以上の追加の治療剤が、ＡＣＥ２を含む、請求項２７に記載の使用。
29. 対象を治療するのに有効な量のジンセノサイドＭ１を対象に投与することを含む、それを必要とする対象において、肺損傷を治療する方法。
30. 肺損傷が、肺における、肺胞炎、リンパ球浸潤および／または線維症を含む、請求項２９に記載の方法。
31. ジンセノサイドＭ１が、アンジオテンシンＩＩを分解し、アンジオテンシンＩＩの蓄積を防止するのに有用な、１つ以上の追加の治療方法または治療剤と組み合わせて、投与される、請求項２９または３０に記載の方法。
32. １つ以上の追加の治療剤がＡＣＥ２を含む、請求項３１に記載の方法。

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