TW202143980A - 人參皂甙ｍ１作為血管收縮素調節酶的調節劑及其在治療包括冠狀病毒引起的症狀之疾病或病徵的用途 - Google Patents

Abstract

本發明涉及一種人參皂甙M1作為血管收縮素調節酶的調節劑，以及使用人參皂甙M1治療冠狀病毒引起的感染之新用途。

Description

人參皂甙M1作為血管收縮素調節酶的調節劑及其在治療包括冠狀病毒引起的症狀之疾病或病徵的用途

相關申請案。本案主張於2020年2月20日提出申請之美國臨時申請第62/978,995號之權益，其全部內容透過引用合併於本文。

本發明涉及一種人參皂甙M1作為血管收縮素調節酶的調節劑之新用途及使用該人參皂甙M1之相關治療方法。具體而言，本發明提供一種使用人參皂甙M1治療與血管收縮素調節酶失衡有關的疾病或病徵之方法，包括由病毒感染引起且在器官或組織中造成損傷的疾病或病徵。

腎素-血管收縮素系統（Renin-Angiotensin System，RAS）或腎素-血管收縮素-醛固酮系統（Renin-Angiotensin-Aldosterone System，RAAS）為一種激素系統。當大量失血或血壓下降時，該系統將被活化，這是調節體內血壓與體液恆定的關鍵激素。血管收縮素轉換酶（angiotensin-converting enzyme，ACE）以及血管收縮素轉換酶2（angiotensin-converting enzyme 2，ACE2）在RAS中皆具有重要的作用。ACE2將生成血管收縮素I（angiotensin I，Ang I）至血管收縮素（Ang）-（1-9）或AngⅡ至Ang-（1-7），以達到流體平衡。RAS在許多心血管疾病中具有重要的作用。目前的研究顯示，ACE2缺乏症可導致急性或慢性肺損傷甚至肺纖維化。另一方面，AngⅡ的過度活化會導致血管及腎臟損傷，並發展為壞死及纖維化。因此，缺乏ACE2會導致過量的AngⅡ蓄積，進而導致對肺部與腎臟的損傷。然而，最新的研究顯示，新型冠狀病毒的S蛋白將與ACE2結合並侵入肺部。Ang II在體內過度蓄積，導致肺纖維化及腎臟損傷現象。[1]

冠狀病毒對人類及其他動物構成嚴重的健康威脅。自2002年至2003年，嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus，SARS-CoV）感染了8,000人，死亡率約為10%。自2012年以來，中東呼吸症候群冠狀病毒（Middle East respiratory syndrome coronavirus，MERS-CoV）已感染1,700多人，致死率約為36%。自2013年以來，豬流行性下痢冠狀病毒（porcine epidemic diarrhea coronavirus，PEDV）席捲整個美國，導致仔豬的死亡率幾乎達到100%，並在不到一年的時間裡撲殺超過10%的美國豬隻。此外，新型冠狀病毒（亦稱為SARS-CoV-2）引起COVID-19大流行。根據維基百科（Wikipedia）網站的數據，截至2021年2月6日，已有超過1.05億病例確診，其中因COVID-19造成的死亡超過229萬。

通常，冠狀病毒會在人類與其他動物體內引起廣泛的呼吸道、胃腸道，以及中樞神經系統疾病，威脅人類健康並造成經濟損失。冠狀病毒能夠透過突變及重組相對容易地適應新環境，因此可有效地改變宿主範圍及組織向性。因此，冠狀病毒對健康的威脅是經常且長期的。了解冠狀病毒的病毒學並控制其傳播對全球公衛及經濟穩定具有重要意義。

冠狀病毒屬於網巢病毒目（Nidovirales）中的冠狀病毒科（Coronaviridae）。其可分為四個屬：甲型冠狀病毒屬（Alphacoronavirus）、乙型冠狀病毒屬（Betacoronavirus）、丙型冠狀病毒屬（Gammacoronavirus），以及丁型冠狀病毒屬（Deltacoronavirus）。其中，甲型及乙型冠狀病毒屬感染哺乳動物，丙型冠狀病毒屬感染禽類，而丁型冠狀病毒屬感染哺乳動物及禽類。代表性的甲型冠狀病毒屬包括人類冠狀病毒NL63（HCoV-NL63）、豬傳染性胃腸炎冠狀病毒（transmissible gastroenteritis coronavirus，TGEV）、PEDV，以及豬呼吸道冠狀病毒（porcine respiratory coronavirus，PRCV）。代表性的乙型冠狀病毒屬包括SARS-CoV、MERS-CoV、蝙蝠冠狀病毒HKU4、小鼠肝炎冠狀病毒（mouse hepatitis coronavirus，MHV）、牛冠狀病毒（bovine coronavirus，BCoV），以及人類冠狀病毒OC43。代表性的丙型及丁型冠狀病毒屬分別包括禽類傳染性支氣管炎冠狀病毒（infectious bronchitis coronavirus，IBV）以及豬丁型冠狀病毒（porcine deltacoronavirus，PdCV）。冠狀病毒為大型、套膜的正股RNA病毒。其在所有RNA病毒中具有最大的基因組，通常介於27到32 kb之間。該基因組被包覆在由核鞘蛋白（N蛋白）形成的螺旋狀衣殼內部，並進一步被套膜包覆。與病毒套膜相關的是至少三種結構蛋白：膜蛋白（M蛋白）以及套膜蛋白（E蛋白）參與病毒組裝，而S蛋白調節病毒進入宿主細胞。某些冠狀病毒還編碼與套膜相關的血凝素-酯酶蛋白（hemagglutinin-esterase protein，HE蛋白）。在這些結構蛋白中，棘蛋白從病毒表面形成大突起，使冠狀病毒看起來像皇冠（因此得名；corona在拉丁文中表示皇冠）。除了調節病毒進入之外，棘蛋白為病毒宿主範圍及組織向性的關鍵決定因素，也是宿主免疫反應的主要誘導物。[2]

人參皂甙為人參的主要活性成分，已知具有多種藥理活性，例如抗腫瘤、抗脂肪、抗過敏，以及抗氧化活性。人參皂甙共有一個基本結構，該結構由在四個環中排列的具有17個碳原子的性脂烷類固醇環所組成。人參皂甙在體內被金屬化，最近的一些研究顯示，人參皂甙代謝物而非天然存在的人參皂甙易於在體內吸收並作為活性成分。其中，人參皂甙M1，亦稱為化合物K（Compound K，CK），為由人類腸道細菌透過人參皂甙途徑產生的原人參二醇型人參皂甙的一種代謝產物。直至今日，沒有現有技術參考文獻報導人參皂甙M1在調節血管收縮素調節酶中的作用及其在治療相關疾病或病徵中之用途。

於本發明中，意外地發現人參皂甙M1可有效調節血管收縮素調節酶，包括上調ACE2以及下調ACE，促進降解血管收縮素II並防止血管收縮素II蓄積，因此可用於治療與ACE及ACE2平衡異常或血管收縮素II蓄積有關的疾病或病徵，特別是由病毒，例如冠狀病毒，感染引起的器官或組織損傷。

因此，本發明提供一種人參皂甙M1在製備藥物中之用途，該藥物係於有其需要的個體中作為血管收縮素調節酶之調節劑。

於本發明之某些具體實施例中，該血管收縮素調節酶係選自由血管收縮素轉化酶（ACE）以及血管收縮素轉化酶2（ACE2）所組成之群組。

於某些具體實施例中，該調節劑為ACE抑制劑或ACE2活化劑或兩者皆是。

於某些具體實施例中，該調節劑能有效降解血管收縮素II以及預防血管收縮素II於該個體中的蓄積。

於某些具體實施例中，該藥物能有效治療與該個體體內ACE及ACE2失衡或血管收縮素II蓄積有關的疾病或病徵。

本發明亦提供一種在有需要的個體中治療與ACE及ACE2的平衡異常或血管收縮素II的蓄積有關的疾病或病徵之方法，該方法包括對該個體施用有效治療該個體的人參皂甙M1的量。

於某些具體實施例中，人參皂甙M1以在該個體中有效抑制ACE或活化ACE2或兩者的量施用。

於某些具體實施例中，人參皂甙M1以有效降解該個體血管收縮素II並防止血管收縮素II蓄積的量施用。

於某些具體實施例中，該待治療的疾病或病徵與ACE及ACE2的平衡異常或血管收縮素II的蓄積有關，包括在該個體的器官或組織中的損傷。

於某些具體實施例中，該損傷包括肺、胃腸道、脾臟、淋巴結、心臟、腎臟、膀胱、肝臟、膽囊、腎上腺，及/或睾丸的損傷。

於某些具體實施例中，該損傷係由冠狀病毒的感染所引起。

於某些具體實施例中，該冠狀病毒係選自嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒（SARS-CoV）、中東呼吸症候群冠狀病毒（MERS-CoV），以及新型冠狀病毒（2019-nCoV）。

於某些具體實施例中，人參皂甙M1與可用於降解血管收縮素II及防止血管收縮素II蓄積的一種或多種其他治療方法或藥劑組合施用。於一實施例中，此類一種或多種其他治療藥劑包括ACE2。

於某些具體實施例中，人參皂甙M1與一種或多種選自由皮質類固醇、非類固醇消炎止痛藥（non-steroidal anti-inflammatory drugs，NSAIDs）、細胞毒性藥物、免疫抑制劑，以及血管舒張劑所組成之群組的其他治療藥劑組合施用。

於某些具體實施例中，人參皂甙M1與一種或多種選自由抗生素、干擾素，以及抗病毒劑所組成之群組的其他治療藥劑組合施用。

特定而言，本發明提供人參皂甙M1於製備用於治療肺損傷的藥物中之用途。本發明亦提供透過對有此需要之個體施用有效量的人參皂甙M1來治療肺損傷之方法。具體而言，該肺損傷與該個體體內ACE及ACE2的平衡異常或血管收縮素II的蓄積有關。

於某些具體實施例中，該肺損傷包括肺泡炎、肺臟中的淋巴細胞浸潤及/或纖維化。

於某些具體實施例中，人參皂甙M1透過腸胃外或腸內途徑施用。

於以下之描述中闡述了本發明之一或多個具體實施例的細節。透過以下幾個具體實施例的詳細描述以及所附申請專利範圍，本發明的其他特徵或優點將變得顯而易見。

除非另有定義，否則本文中使用的所有技術及科學術語具有本發明所屬領域的技術人員通常理解之含義。如本文所用，除非另有說明，否則以下術語具有所賦予的含義。

冠詞「一」以及「一個」在本文中用於指代該冠詞的語法對象中的一個或多個（亦即，至少一個）。舉例而言，「一個元件」係指一個元件或一個以上的元件。

術語「包含（動詞）」或「包含（動名詞）」通常以包括（動詞）/包括（動名詞）的意義使用，表示包括一種或多種特徵、成分，或組成分的存在。術語「包含（動詞）」或「包含（動名詞）」涵蓋術語「包括」或「由…組成」。

人參皂甙M1，亦稱為化合物K（CK），20-O-β-D-吡喃葡萄糖基20（S）-原人參二醇，為本領域已知的皂甙代謝物之一。人參皂甙M1的化學結構如下：

人參皂甙M1為由人類腸道細菌透過人參皂甙途徑產生的原人參二醇型人參皂甙的一種代謝產物。攝入後在血液或尿液中可發現人參皂甙M1。人參皂甙M1可透過本領域已知的方法透過真菌發酵從人參植物製備，例如台灣專利申請第094116005號（專利號：I280982）以及美國專利第7,932,057號，其全部內容透過引用併入本文。於某些具體實施例中，用於製備人參皂甙M1的人參植物包括人參科（Araliaceae ），人參屬（Panax ），例如人參（P. ginseng ）以及假人參（P. pseudo-ginseng ）（亦稱為三七）。通常，人參皂甙M1的製備方法包括以下步驟：（a）提供人參植物材料的粉末（例如，葉或莖）；（b）提供一種用於發酵該人參植物材料的真菌，其發酵溫度為20-50℃，發酵濕度為70-100%，pH值為4.0-6.0，且發酵時間為5-15天；（c）萃取並收集該發酵產物；以及（d）從該發酵產物中分離出20-O-β-D-吡喃葡糖基-20（S）-原人參二醇。

當人參皂甙M1於本發明中被描述為「分離的」或「純化的」時，應理解為不是絕對分離或純化的，而是相對分離或純化的。例如，純化的人參皂甙M1係指相較於其天然存在的形式更純化的人參皂甙M1。於一具體實施例中，包含純化的人參皂甙M1之製劑可含有大於50%、大於60%、大於70%、大於80%、大於90%，或100%（w/w）的總製劑之量的人參皂甙M1。應當理解的是，當本文中使用一定數量來表示比率或劑量時，所述數量通常包括在該數量的上下10%以內，或更特定而言，在該數量的上下5%以內的範圍內。

本文使用之「個體」或「受試者」等詞包括人類及非人類動物，例如伴侶動物（例如，狗、貓等）、農場動物（例如，牛、綿羊、豬、馬等），或實驗動物（例如，大鼠、小鼠、豚鼠等）。

如本文所用，「治療」乙詞係指將包括一種或多種活性劑的組合物應用於或施用於患有疾病、該疾病之症狀或病徵、該疾病的進展，或有發展該疾病的風險之個體，其目的在於治療、治癒、減輕、緩解、改變、補救、改善、增進，或影響該疾病、該疾病之症狀或病徵、由該疾病引起之殘疾，或該疾病的發作或發展。

本文所用之「有效量」乙詞係指在被治療的個體中賦予期望的治療效果的活性成分的量。於某些具體實施例中，本文所用之有效量可為對下調ACE、上調ACE2、降解血管收縮素II，及/或防止血管收縮素II蓄積有效的量。於某些具體實施例中，本文所用之有效量可為對減輕或減少由血管收縮素II之蓄積所造成之器官或組織中的損傷，例如，肺損傷，如肺泡炎、淋巴細胞浸潤，及/或肺纖維化有效的量。

該治療有效量可根據各種原因而變化，例如給藥途徑及頻率、接受該藥物之個體的體重及物種，以及給藥之目的。本領域技術人員可基於本文所公開之內容、所建立之方法，及其自身的經驗來確定每種情況下的劑量。例如，於某些具體實施例中，本發明使用之人參皂甙M1的口服劑量為每日10至1,000 mg/kg。於某些實例中，本發明使用之人參皂甙M1的口服劑量為每天100至300 mg/kg、每天50至150 mg/kg、每天25至100 mg/kg、每天10至50 mg/kg，或每天5 至30 mg/kg。此外，於本發明之某些具體實施例中，人參皂甙M1在一定時間段內定期施用，例如每天施用至少施用15天、一個月或兩個月或更久。

於一具體實施例中，為了遞送及吸收之目的，可將一治療有效量的活性成分與一醫藥上可接受的載體一起配製成合適形式之醫藥組合物。根據給藥方式，本發明之醫藥組合物較佳包含約0.1重量%至約100重量%的活性成分，其中重量百分比基於整個組合物的重量計算。

如本文所用，「醫藥上可接受的」係指載體與組合物中的活性成分相容，且較佳地可使該活性成分穩定並對於接受治療的個體而言是安全的。該載體可為該活性成分的稀釋劑、載劑、賦形劑，或基質。合適的賦形劑的某些實例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖、甘露糖、澱粉、阿拉伯膠、磷酸鈣、藻酸鹽、黃耆膠、明膠、矽酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、無菌水、糖漿，以及甲基纖維素。該組合物可額外包含潤滑劑，例如，滑石粉、硬脂酸鎂，以及礦物油；以及潤濕劑；乳化劑與助懸劑；防腐劑，例如，羥基苯甲酸甲酯以及羥基苯甲酸丙酯；甜味劑；以及調味劑。在對患者施用後，本發明之組合物可提供活性成分的快速、持續或延遲釋放的效果。

根據本發明，該組合物之形式可為片劑、丸劑、粉末、口含錠、小包、錠劑、酏劑、懸浮液、洗劑、溶液、糖漿、軟硬明膠膠囊、栓劑、無菌注射液，以及包裝好的粉末。

本發明之組合物可透過任何生理上可接受的途徑遞送，例如口服、腸胃外（例如，肌肉內、靜脈內、皮下，以及腹膜內）、透皮、栓劑，以及鼻內方法。關於腸胃外給藥，較佳以無菌水溶液形式使用，其可包含足以使溶液與血液等滲的其他物質，例如，鹽或葡萄糖。可視需求該水溶液可被適當地緩沖（較佳的pH值為3至9）。於無菌條件下合適的腸胃外組合物之製備可透過本領域技術人員熟知之標準藥理技術來完成，且不需要額外的創造性勞力。

根據本發明，人參皂甙M1可作為治療與個體體內ACE及ACE2的平衡異常或血管收縮素II的蓄積有關的疾病或病徵之活性成分。於某些具體實施例中，這類疾病或病徵包括個體體內的器官或組織中的損傷，例如肺、胃腸道、脾臟、淋巴結、心臟、腎臟、膀胱、肝臟、膽囊、腎上腺，及/或睾丸中的器官或組織中的損傷。於某些實施例中，該損傷是由冠狀病毒感染引起的，包括但不限於SARS-CoV、MERS-CoV，以及2019-nCoV。

於某些具體實施例中，人參皂甙M1或含有以人參皂甙M1作為活性成分之組合物可與現有的治療方法或藥物組合使用，例如，那些如本文所述之用於治療與ACE及ACE2的平衡異常或血管收縮素II的蓄積有關的疾病或病徵之治療方法或藥物組合。在一實施例中，人參皂甙M1與ACE2一起施用。因此，如本文所述，將人參皂甙M1與ACE2的特定組合給予一有需要的個體。

於某些具體實施例中，人參皂甙M1或含有以人參皂甙M1作為活性成分之組合物可與皮質類固醇（例如，去氫皮質醇）、非類固醇消炎止痛藥（NSAIDs）、細胞毒性藥物（例如，環磷醯胺、苯丁酸氮芥，以及硫唑嘌呤）、免疫抑制劑（例如，環孢黴素以及黴酚酸酯），以及血管擴張藥（例如，血管收縮素轉化酶抑制劑（ACE抑制劑））組合使用。

於一特定具體實施例中，人參皂甙M1與ACE2組合施用，用於治療肺損傷，例如肺泡炎、淋巴細胞浸潤，及/或肺纖維化。

於某些具體實施例中，人參皂甙M1與抗生素、干擾素，以及抗病毒劑組合施用。

於一具體實施例中，該組合使用的藥物或治療方法可同時（平行）或依序使用。當藥物組合使用時，該藥物可以相同的配方混合或分別以不同的配方混合，例如分開的膠囊、丸劑、片劑，以及注射劑。

透過以下實施例進一步說明本發明，提供這些實施例是為了說明而非限制。根據本發明，本領域技術人員應當理解的是，可在所公開的特定具體實施例中進行許多改變，且在不脫離本發明之精神及範圍的情況下仍可獲得相同或相似的結果。

實施例

人參皂甙M1，亦稱為化合物K（CK），20-O-β-D-吡喃葡萄糖基20（S）-原人參二醇（以下稱為LCHK168），係透過本領域已知之方法所製備的，例如台灣專利申請第094116005號（專利號：I280982）及美國專利第7,932,057號中所述之方法。

根據先前之研究，冠狀病毒上的棘蛋白（S蛋白）將與ACE2結合，且ACE2的量將影響肺臟及腎臟的健康（感染2019-nCoV後腎臟及睾丸中的ACE2表現可能導致腎臟及睾丸受損，https://doi.org/10.1101/2020.02. 12.20022418，2020年2月13日公開；以及血管收縮素轉換酶2減輕博萊黴素誘導的小鼠肺纖維化，細胞生理學及生物化學期刊，2015年；36: 697-711）。這項研究使用人參皂甙M1來調節ACE2的含量，以維持身體健康。

血管收縮素II（Ang II）調節的腎損傷代表大多數慢性腎臟疾病的主要發病機制。我們發現人參皂甙M1透過上調腎臟組織中的血管收縮素轉化酶2（ACE2）來減弱Ang II之表現。我們在一項注射外源性Ang II產生腎損傷小鼠模型的研究中證實此發現，且在兩個模型中的結果一致。局部腎素-血管收縮素系統（RAS）的活化已顯示在特發性肺纖維化（idiopathic pulmonary fibrosis，IPF）的發病機理中具有重要的作用。據報導，ACE2可抑制RAS調節的上皮損傷及纖維形成，且ACE2缺乏會加重急性與慢性肺損傷。

1. 材料與方法

1.1 動物與處理

1.1.1 大鼠 （腎臟損傷）

將總共20隻Wistar-Kyoto大鼠（WKY）與20隻自發性高血壓大鼠（Spontaneously hypertensive rat，SHR）（雄性，16至17週齡）動物分為四組：WKY組（8隻WKY，口服0.5% CMC-Na）；SHR組（8隻SHR，口服0.5% CMC-Na）；WKY + 人參皂甙M1組（8 WKY，口服20 mg/kg人參皂甙M1）；SHR + 人參皂甙M1組（8 SHR，口服20 mg/kg人參皂甙M1）。每天一次施用人參皂甙M1或安慰劑，持續42天，之後犧牲動物並收集血液及腎臟組織樣品。腎臟組織標本以4%福馬林固定（組織病理學），或以液態氮迅速冷凍並維持於-80℃，以進行反轉錄定量即時聚合酶鏈反應（reverse transcription quantitative real-time polymerase chain reaction，RT-qPCR）以及酶聯結免疫吸附分析（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）。

1.1.2 小鼠（輸注模型）（腎臟損傷）

總共20隻C57BL/6小鼠（雄性，10週齡）在可任意獲取囓齒動物食物及飲水的環境下飼養。在頸背進行皮下植入一1002滲透性微型幫浦以輸注Ang II（1.5 mg/kg）或生理鹽水，動物分為四組：鹽水組（5隻小鼠，輸注生理鹽水並口服0.5% CMC-Na）；Ang II組（5隻小鼠，輸注Ang II並口服0.5% CMC-Na）；鹽水+人參皂甙M1組（5隻小鼠，輸注生理鹽水並口服20 mg·kg^-1 ·d^-1 人參皂甙M1）；Ang II + 人參皂甙M1組（5隻小鼠，輸注Ang II並口服20 mg/kg人參皂甙M1）。每天施用人參皂甙M1或安慰劑，持續14天，然後犧牲動物並收集血液及腎臟組織樣品。腎臟組織標本以4%福馬林固定（組織病理學）或以液態氮迅速冷凍並維持於-80℃（RT-qPCR及ELISA）。

1.1.3 小鼠（肺損傷）

將動物隨機分為5組：（1）鹽水組：透過尾靜脈注射0.9%的生理鹽水（200 µL）；（2）ACE2組：腹膜內注射ACE2（0.2 mg/kg）；（3）BLM組：透過尾靜脈單次注射150 mg/kg博萊黴素；（4）BLM + ACE2組：透過尾靜脈注射150 mg/kg博萊黴素，然後以腹膜內注射0.2 mg/kg ACE2；以及（5）BLM + ACE2 + M1組：透過尾靜脈注射150 mg/kg博萊黴素，然後腹膜內注射0.2 mg/kg ACE2以及60 mg/kg M1。給藥後，於第7、14及28天以頸椎脫位術對每組隨機選擇的十隻動物進行安樂死。

1.2 組織病理學評估。

腎臟組織標本分別以4%福馬林固定，石蠟包埋，切片為4 μm厚，並分別以蘇木精及曙紅（H&E）以及Masson三色染料染色。然後，使用Nikon E100光學顯微鏡進行分析。

1.3 免疫組織化學（ Immunohistochemistry ， IHC ）

ACE及ACE2一級抗體由Bioss Antibodies公司生產。與過氧化物酶連接的山羊抗兔二級抗體以及DAB以及兩步兔IHC套組由ZSGB-BIO公司提供。IHC依照ZSGB-BIO公司之建議進行。

1.4 腎臟組織中的 Ang II 以及 Ang - （ 1-7 ）含量評估

腎臟標本的上清液以下列方法製備。將總計100 mg的腎臟組織在900 μL冰冷的生理鹽水中均質，然後離心（於1000 g、4℃下離心15分鐘）。將所得的上清液保持於-80℃下，直到根據製造商的方法分別使用Ang II及Ang-（1-7）ELISA套組進行分析。

2. 結果

2.1 人參皂甙 M1 降低 SHR 腎臟組織中的 Ang II 含量

有兩種主要的ACE調節體內Ang II的含量，包括ACE及ACE2。ACE將血管收縮素I轉化為Ang II，而ACE2將Ang II轉化為Ang-（1-7）。因此，ACE的上調誘導Ang II增加，而ACE2的上調減弱Ang II增加。自發性高血壓大鼠（SHR）為遺傳性高血壓的動物模型。根據ELISA數據（圖1），SHR組腎臟組織中的Ang II含量顯著高於WKY以及WKY + 人參皂甙M1組。以人參皂甙M1處理顯著降低了SHR腎臟組織中的Ang II含量，而在WKY組中顯示出有限的效果。SHR組的Ang-（1-7）量顯著高於WKY以及WKY + 人參皂甙M1組，其中SHR + 人參皂甙M1組的數值甚至顯著高於SHR組。IHC結果（圖2）顯示，相較於兩個WKY組，兩個SHR組的ACE含量顯著升高。相較於WKY以及WKY + 人參皂甙M1組，SHR組腎臟組織中的ACE2含量被補償性上調。同時，以人參皂甙M1處理可進一步上調SHR腎臟組織中的ACE2，為人參皂甙M1治療SHR腎臟中下調Ang II並上調Ang-（1-7）的主要機制。同時，人參皂甙M1對WKY或SHR中的ACE表現均無顯著影響。

2.2 人參皂甙 M1 降低了輸注 Ang II 的小鼠腎臟組織中 Ang II 的含量

根據ELISA數據（圖3），Ang II輸注顯著提高了小鼠腎臟組織中的Ang II含量，而以人參皂甙M1處理可顯著減弱這種增加，儘管Ang II + 人參皂甙M1組的Ang II含量仍然顯著高於輸注生理鹽水的那兩組的含量。同時，Ang II組的Ang-（1-7）含量顯著高於鹽水組以及鹽水+人參皂甙M1組；Ang II + 人參皂甙M1組相較於Ang II組則有顯著增加。IHC數據（圖4）顯示各組之間的ACE表現無顯著差異。相較於其他三組，Ang II + 人參皂甙M1組的ACE2表現量顯著升高，這可能是降解外源性血管收縮素的主要機制。

2.3 以 M1 與 ACE2 治療肺泡炎及纖維化

如圖5所示，透過尾靜脈對小鼠單次注射150 mg/kg劑量的博萊黴素，於第7天誘導了輕度到中度的肺泡炎。施用博萊黴素為小鼠中肺泡炎或纖維化充分描述特徵的模型。使用Szapiel評分方法確定肺中的纖維化變化，評分越高表示疾病病徵越嚴重。肺部表現為肺泡炎的局部性分佈，主要分佈在胸膜下與血管周圍，其中肺泡間隔輕微增厚並伴隨水腫及發炎性細胞浸潤；沒有觀察到明顯的纖維化。同時，施用ACE2在第7天並無顯著改變病理變化。於第14天，BLM組顯現出疾病進展。肺部表現出中度至重度的肺泡炎以及中度纖維化，伴隨片狀發炎性固結以及膠原蛋白沉積，而施用ACE2則可顯著減輕肺泡炎及纖維化。於第28天，在BLM組中，肺泡炎自發性消退；然而，肺泡結構的紊亂仍持續，且纖維化持續存在，其特徵為擴散、緻密、濃密的膠原束，以及纖維母細胞病灶。ACE2在第28天顯著反映了長期治療的效果，BLM + ACE2組中的部分僅表現出輕度至中度的肺泡炎，BLM + ACE2 + M1組中的部分僅表現為輕度的肺泡炎且纖維化明顯減弱。在不同時間點的鹽水組或ACE2組中未發現肺泡炎或纖維化的跡象。參考文獻 1.     Journal of Molecular Medicine/October 2006, Volume 84, Issue 10,  pp 814–820| Cite as/Lessons from SARS: control of acute lung failure by the SARS receptor ACE2. Pharmacology & Therapeutics/Volume 128, Issue 1, October 2010, Pages 119-128/Trilogy of ACE2: A peptidase in the renin–angiotensin system, a SARS receptor, and a partner for amino acid transporters. 2.     Published in final edited form as:Annu Rev Virol. 2016 September 29; 3(1): 237–261. Doi:10.1146/annurev-virology-110615-042301. / Structure, Function, and Evolution of Coronavirus Spike Proteins/ Fang Li Department of Pharmacology, University of Minnesota Medical School, Minneapolis, Minnesota 55455 3.     Antioxidant Treatment and Alcoholism/Camila S. Silva PhD, … Helio Vannucchi MD, PhD, in Molecular Aspects of Alcohol and Nutrition, 2016 4.     Beta-Glucosidase From Penicillium/Gustavo Molina, … Gláucia M. Pastore, in New and Future Developments in Microbial Biotechnology and Bioengineering, 2018 5.     Ginseng and Gastrointestinal Protection*/Min-Hyun Kim, Hyeyoung Kim, in Gastrointestinal Tissue, 2017

為了說明本發明，在附圖中示出了具體實施例。然而，應當理解的是，本發明不限於所示之較佳具體實施例。於圖式中：

圖1：大鼠腎臟組織中的血管收縮素含量。腎臟組織中的Ang II含量（上圖）。腎臟組織中的Ang-（1-7）含量（下圖）。相同的上標字母表示各組之間無顯著差異（P ＞ 0.05）；沒有相同上標字母的組別之間存在顯著差異（P ＜ 0.05）。

圖2：大鼠腎臟組織中血管收縮素轉化酶的含量。IHC染色的定量結果以IOD/面積表示，並與ACE（上圖）及ACE2（下圖）的含量成正比。相同的上標字母表示各組之間無顯著差異（P ＞ 0.05）；沒有相同上標字母的組別之間存在顯著差異（P ＜ 0.05）。

圖3：小鼠腎臟組織中的血管收縮素含量（輸注模型）。腎臟組織中的Ang II（上圖）及Ang-（1-7）（下圖）含量。相同的上標字母表示各組之間無顯著差異（P ＞ 0.05）；沒有相同上標字母的組別之間存在顯著差異（P ＜ 0.05）。

圖4：小鼠腎臟組織中ACE的含量。IHC染色的定量結果以IOD/面積表示，並與ACE（上圖）及ACE2（下圖）的含量成正比。相同的上標字母表示各組之間無顯著差異（P ＞ 0.05）；沒有相同上標字母的組別之間存在顯著差異（P ＜ 0.05）。

圖5：局部肺臟腎素-血管收縮素系統。ACE2與M1改善了博萊黴素誘導的肺纖維化的組織學變化。在不同的組別中，重組小鼠ACE2或ACE2與M1及博萊黴素一起在第0天給藥。獲得Szapiel評分以量化肺泡炎（上圖）及纖維化（下圖）的程度以及ACE2及ACE2與M1一起施用的抑制效力。數據表示為平均值±SEM。相較於鹽水組，*p＜0.05，相較於BLM，#p＜0.05。

Claims (32)

1. 一種人參皂甙M1在製備藥物之用途，該藥物係於有其需要的個體中作為血管收縮素調節酶之調節劑。
2. 如請求項1所述之用途，其中該血管收縮素調節酶係選自由血管收縮素轉化酶（angiotensin-converting enzyme，ACE）以及血管收縮素轉化酶2（angiotensin-converting enzyme 2，ACE2）所組成之群組。
3. 如請求項1或2之用途，其中該調節劑為ACE抑制劑或ACE2活化劑或兩者皆是。
4. 如請求項3之用途，其中該調節劑能有效降解血管收縮素II以及預防血管收縮素II於該個體中的蓄積。
5. 如請求項1至4中任一項之用途，其中該藥物能有效治療與該個體體內ACE及ACE2平衡異常或血管收縮素II蓄積有關的疾病或病徵。
6. 如請求項5之用途，其中該疾病或病徵包括該個體的器官或組織中的損傷。
7. 如請求項6之用途，其中該損傷包括肺、胃腸道、脾臟、淋巴結、心臟、腎臟、膀胱、肝臟、膽囊、腎上腺，及/或睾丸的損傷。
8. 如請求項6或7之用途，其中該損傷係由冠狀病毒感染引起。
9. 如請求項8之用途，其中該冠狀病毒係選自嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒（SARS-CoV）、中東呼吸症候群冠狀病毒（MERS-CoV），以及新型冠狀病毒（2019-nCoV）。
10. 如請求項1之用途，其中該藥物係與可用於降解血管收縮素II及防止血管收縮素II蓄積的一種或多種其他治療方法或藥劑組合施用。
11. 如請求項10之用途，其中該一種或多種其他治療藥劑包括ACE2。
12. 如請求項1之用途，其中該藥物與一種或多種選自由皮質類固醇、非類固醇消炎止痛藥（non-steroidal anti-inflammatory drugs，NSAIDs）、細胞毒性藥物、免疫抑制劑，以及血管舒張劑所組成之群組的其他治療藥劑組合施用。
13. 如請求項1之用途，其中該藥物與一種或多種選自由抗生素、干擾素，以及抗病毒劑所組成之群組的其他治療藥劑組合施用。
14. 一種在有需要的個體中治療與ACE及ACE2的平衡異常或血管收縮素II的蓄積有關的疾病或病徵之方法，該方法包括對該個體施用有效治療該個體的人參皂甙M1的量。
15. 如請求項14之方法，其中人參皂甙M1以在該個體中有效抑制ACE或活化ACE2或兩者的量施用。
16. 如請求項14之方法，其中人參皂甙M1以有效降解該個體血管收縮素II並防止血管收縮素II蓄積的量施用。
17. 如請求項14之方法，其中該疾病或病徵包括該個體的器官或組織中的損傷。
18. 如請求項17之方法，其中該損傷包括肺、胃腸道、脾臟、淋巴結、心臟、腎臟、膀胱、肝臟、膽囊、腎上腺，及/或睾丸的損傷。
19. 如請求項17或18之方法，其中該損傷係由冠狀病毒的感染所引起。
20. 如請求項19之方法，其中冠狀病毒係選自嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒（SARS-CoV）、中東呼吸症候群冠狀病毒（MERS-CoV），以及新型冠狀病毒（2019-nCoV）。
21. 如請求項14之方法，其中人參皂甙M1與可用於降解血管收縮素II及防止血管收縮素II蓄積的一種或多種其他治療方法或藥劑組合施用。
22. 如請求項21之方法，其中該一種或多種其他治療藥劑包括ACE2。
23. 如請求項14之方法，其中人參皂甙M1與一種或多種選自由皮質類固醇、非類固醇消炎止痛藥（non-steroidal anti-inflammatory drugs，NSAIDs）、細胞毒性藥物、免疫抑制劑，以及血管舒張劑所組成之群組的其他治療藥劑組合施用。
24. 如請求項14之方法，其中該人參皂甙M1與一種或多種選自由抗生素、干擾素，以及抗病毒劑所組成之群組的其他治療藥劑組合施用。
25. 一種人參皂甙M1於製備用於治療肺損傷的藥物中之用途。
26. 如請求項25之用途，其中該肺損傷包括肺泡炎、肺臟中的淋巴細胞浸潤及/或纖維化。
27. 如請求項25或26之用途，其中該藥物與可用於降解血管收縮素II及防止血管收縮素II蓄積的一種或多種其他治療方法或藥劑組合施用。
28. 如請求項27之用途，其中該一種或多種其他治療藥劑包括ACE2。
29. 一種於有需要的個體中治療肺部損傷之方法，包含對該個體施用有效治療該個體的量的人參皂甙M1。
30. 如請求項29之方法，其中該該肺損傷包括肺泡炎、肺臟中的淋巴細胞浸潤及/或纖維化。
31. 如請求項29或30之方法，其中該人參皂甙M1與可用於降解血管收縮素II及防止血管收縮素II蓄積的一種或多種其他治療方法或藥劑組合施用。
32. 如請求項31之方法，其中該一種或多種其他治療藥劑包括ACE2。

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