KR20170007334A - 항-ｌｙｓｔ 면역조절을 위한 조성물 및 방법 - Google Patents

항-ｌｙｓｔ 면역조절을 위한 조성물 및 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20170007334A
KR20170007334A KR1020167033755A KR20167033755A KR20170007334A KR 20170007334 A KR20170007334 A KR 20170007334A KR 1020167033755 A KR1020167033755 A KR 1020167033755A KR 20167033755 A KR20167033755 A KR 20167033755A KR 20170007334 A KR20170007334 A KR 20170007334A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
leu
ser
lyst
glu
val
Prior art date
Application number
KR1020167033755A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102492647B1 (ko
Inventor
크리스토퍼 브로이어
나루토시 히비노
비두 가그
카메론 베스트
Original Assignee
리서치 인스티튜트 앳 네이션와이드 칠드런스 하스피탈
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 리서치 인스티튜트 앳 네이션와이드 칠드런스 하스피탈 filed Critical 리서치 인스티튜트 앳 네이션와이드 칠드런스 하스피탈
Publication of KR20170007334A publication Critical patent/KR20170007334A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102492647B1 publication Critical patent/KR102492647B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B17/00—Surgical instruments, devices or methods, e.g. tourniquets
    • A61B17/34—Trocars; Puncturing needles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
    • A61F2/00—Filters implantable into blood vessels; Prostheses, i.e. artificial substitutes or replacements for parts of the body; Appliances for connecting them with the body; Devices providing patency to, or preventing collapsing of, tubular structures of the body, e.g. stents
    • A61F2/02—Prostheses implantable into the body
    • A61F2/04—Hollow or tubular parts of organs, e.g. bladders, tracheae, bronchi or bile ducts
    • A61F2/06—Blood vessels
    • A61F2/07—Stent-grafts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4704—2-Quinolinones, e.g. carbostyril
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/507—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials for artificial blood vessels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/54—Biologically active materials, e.g. therapeutic substances
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L29/00—Materials for catheters, medical tubing, cannulae, or endoscopes or for coating catheters
    • A61L29/14—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. lubricating compositions
    • A61L29/16—Biologically active materials, e.g. therapeutic substances
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L31/00—Materials for other surgical articles, e.g. stents, stent-grafts, shunts, surgical drapes, guide wires, materials for adhesion prevention, occluding devices, surgical gloves, tissue fixation devices
    • A61L31/14—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L31/16—Biologically active materials, e.g. therapeutic substances
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L33/00—Antithrombogenic treatment of surgical articles, e.g. sutures, catheters, prostheses, or of articles for the manipulation or conditioning of blood; Materials for such treatment
    • A61L33/06—Use of macromolecular materials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
    • A61M25/00—Catheters; Hollow probes
    • A61M25/10—Balloon catheters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
    • A61M5/00—Devices for bringing media into the body in a subcutaneous, intra-vascular or intramuscular way; Accessories therefor, e.g. filling or cleaning devices, arm-rests
    • A61M5/178—Syringes
    • A61M5/31—Details
    • A61M5/32—Needles; Details of needles pertaining to their connection with syringe or hub; Accessories for bringing the needle into, or holding the needle on, the body; Devices for protection of needles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
    • A61L2300/252—Polypeptides, proteins, e.g. glycoproteins, lipoproteins, cytokines
    • A61L2300/256—Antibodies, e.g. immunoglobulins, vaccines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
    • A61L2300/258—Genetic materials, DNA, RNA, genes, vectors, e.g. plasmids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
    • A61L2300/41—Anti-inflammatory agents, e.g. NSAIDs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
    • A61L2300/42—Anti-thrombotic agents, anticoagulants, anti-platelet agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Abstract

조직 손상 위치에서의 염증 및 응혈 촉진 메커니즘의 과도한 또는 반복된 활성화는 반흔 조직의 발생에 기여하며, 이는 내막 과다형성 및 섬유증 질병을 야기할 수 있다. LYST 단백질의 억제가 조직 손상 위치에서 감소된 염증 반응 및 감소된 혈소판 활성화와 관련이 있는 것이 확립되었다. LYST 단백질의 발현 및 기능의 억제를 위한 조성물 및 방법이 기재된다. 조성물 및 방법은 대식구, 혈소판 및 자연 살해 세포 기능을 변경시켜, 재생 유발 면역 반응을 생성함으로써 신생내막의 형성 및 섬유증식성 장애에 기여하는 면역 과정을 조절하는데 유용할 수 있다.

Description

항-ＬＹＳＴ 면역조절을 위한 조성물 및 방법{COMPOSITIONS AND METHODS FOR ANTI-LYST IMMUNOMODULATION}
관련 출원과의 상호 참조
본 출원은 내용 전체가 참조로 포함되는 2014년 5월 2일에 출원된 발명의 명칭이 "Compositions and Methods For Anti-Lyst Immunomodulation"인 미국 가출원 제61/987,910호에 대한 우선권을 주장한다.
서열 목록에 대한 참조
2015년 5월 1일에 생성되고, 51,000바이트의 크기를 갖고, 텍스트 파일명 "NWCH100 PCT_ST25.txt"로서 2015년 5월 4일에 제출된 서열 목록이 본원에 참조로 포함된다.
연방정부 후원 연구 또는 개발에 관한 진술
본 발명은 미국국립보건원에 의하여 크리스토퍼 브로이어(Christopher Breuer)에게 수여된 NIH 보조금 R01 HL098228 하에 정부 지원으로 이루어졌다. 정부는 본 발명에 소정의 권리를 갖는다.
기술 분야
본 발명의 분야는 일반적으로 혈관 조직 재생을 증진시킬 뿐 아니라, 신생내막 과다형성(neointimal hyperplasia) 및 섬유증식성 질병과 관련된 이환율 및 사망률을 감소시키기 위한 조성물, 장치 및 방법에 관한 것이다.
조직 회복은 손상 위치에서 국소 염증 유발(pro-inflammatory) 세포로부터의 자극성 사이토카인 신호전달에 반응하여 죽은 또는 손상된 세포의 정렬된 제거 및 교체를 용이하게 하는 복잡한 단계적인 과정이다(문헌[Wynn and Baron, Semin Liver Dis., 30(3):245-257 (2010)]; 문헌[Wynn, Clin . Invest. 117:524-529 (2007)]). 그러나, 예를 들어, 만성 질병 또는 반복된 손상에 반응하는 조직-회복 반응이 적절하지 않거나 연장된 기간 동안 지속되는 경우, 정상적인 재생 메커니즘은 손상 위치에서의 과도한 신생조직 성장 및 세포외 매트릭스(ECM) 성분의 축적으로부터 초래되는 병적 상태를 야기할 수 있다.
혈관 손상 위치에서의 염증 및 응혈 촉진(pro-coagulant) 메커니즘의 과도한 또는 반복된 활성화는 내막 과다형성의 발생에 유의미하게 기여하는 것으로 생각된다. 병적 상태 하에서, 혈관 손상은 내피층의 노출을 야기하고, 다양한 성장 인자 및 염증성 사이토카인의 생성을 특징으로 하는 일련의 급성 및 만성 염증 반응을 촉발시킨다(문헌[Murakami, et al., Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol., 272:L197-L202 (1997)]; 문헌[Cotran, et al., J Am Soc Nephrol., 1:225-235 (1990)]). 관상 및/또는 말초 동맥 질병을 위한 외과술 절차, 예를 들어, 혈관성형술 및 스텐트 시술(stenting), 외과적 우회술 또는 동맥내막절제술 후에 발생하는 내막 과다형성은 환자의 최대 80%에서 혈관의 재협착증을 야기할 수 있다(문헌[Seedial, et al., J Vasc Surg., 57(5):1403-1414 (2013)]; 문헌[Glagov, Circulation, 89:2888-2891 (1994)]). 신생내막 형성이 외래 물질, 예를 들어, 혈관 내의 인공삽입물(prostheses)의 존재에 의해 가속화될 수 있으며, 조절되지 않은 신생내막 과다형성이 심혈관 중재술의 장기간 임상 효능을 제한하는 주요 장애물인 것으로 나타났다(문헌[Frank, et al., Curr . Opin . Lipidol., 15:523 (2004)]). 또한, 신생내막 형성은 죽상동맥경화증, 고혈압 및 당뇨성 혈관 합병증을 포함하는 몇몇의 증식성 심혈관 질병의 발생 및 진행과 관련이 있다.
내피층의 재생은 신생내막의 발생을 억제하고, 혈관 회복을 용이하게 한다(문헌[Bauters, et al., Prog . Cardiovasc . Dis., 40:107-116 (1997)]; 문헌[Kinlay, et al., Curr . Opin . Lipidol., 12:383 (2001)]). 그러나, 현재 이용가능한 항-신생내막 약물은 내피 세포(EC) 및 평활근 세포(SMC) 둘 모두의 증식을 무차별적으로 차단하여, 손상된 재-내피화를 초래하고, 상처 치유 과정을 연장시킨다. SMC-감수성인 항증식 전략을 개발하는 것이 필요하다.
또한, 반복된 조직 손상에 대한 비조절된 염증 반응은 조직 및 기관, 예를 들어, 피부, 간, 심장 및 폐의 병적 섬유증을 야기할 수 있다(문헌[Huang and Ogawa, Connect Tissue Res., 53(3):187-196 (2012)]). 간 조직의 만성 손상 및 염증은 과도한 반흔(scar) 형성을 야기하고, 간 구조를 변형시키는 ECM 단백질의 축적을 야기하며, 이는 차례로 간경화 및 간부전을 야기한다(문헌[Battler and Brenner, J Clin Invest., 115:209-218 (2005)]). 이와 같이, 폐 내의 과도한 섬유증 조직의 침착은 진행성 반흔형성(scarring) 및 폐 구조의 비가역적인 파괴를 야기하며, 이는 궁극적으로 기관 기능장애, 기체 교환의 붕괴, 및 호흡 부전으로부터의 사망을 야기한다.
활성화된 혈소판은 손상된 내피로의 백혈구 유착을 증가시키고, 내피 상의 케모카인의 침착을 통하여 백혈구 활성화를 촉진시킨다. 이것은 백혈구가 혈관벽에 견고하게 부착되고, 내피하 조직으로 이동되게 할 수 있다. 그러나, 혈소판-유래 케모카인은 또한 신생내막 증식, 동맥 손상 후의 재협착증 및 죽상동맥경화증에서도 역할을 수행하는 것으로 알려져 있다(문헌[Chandrasekar, et al., J Am College Cardiology, Vol 35, No. 3, pp. 555-562 (2000)]). 신장병, 당뇨병 및 고지질혈증을 갖는 것들을 포함하는 비정상적인 혈소판 기능을 갖는 특정 환자 그룹도 또한 재협착증에 대한 위험이 증가된다.
섬유증식성 장애는 미국에서 이환율 및 사망률의 주된 원인이다(문헌[Bitterman and Henke, Chest, 99(3):s81-s84 (1991)]). 특히, 간 및 폐 섬유증 질병은 전형적으로 치료에 불응성이며, 높은 사망률을 갖는다. 확립된 간 경화증은 10년 사망률이 34 내지 66%이고, 미국에서만 매년 대략 27,000건의 사망의 원인이다. 특발성 폐 섬유증(IPF)의 유병률은 100,000명당 14 내지 42.7명으로 추정되며, 이러한 수치는 지난 30년 동안 시간이 지날수록 증가하고 있다(문헌[Olson, et al., Am J Respir Crit Care Med. 176:277-2843 (2007)]; 문헌[Gribbin, et al., Thorax, 61:980-985 (2006)]). 현재 간 또는 폐 섬유증에 가장 효과적인 치료는 기관 이식이다.
따라서, 대상체에서 신생내막 형성, 협착증, 재협착증 또는 그들의 조합을 감소시키기나 예방하기 위해 면역 과정을 조절하기 위한 조성물, 장치, 이식편 및 그들의 이용 방법을 제공하는 것이 본 발명의 목적이다.
또한, 대상체에서 부적절한 또는 유해한 혈소판 활성화를 감소시키거나 예방하기 위한 조성물, 장치, 이식편 및 그들의 이용 방법을 제공하는 것이 본 발명의 목적이다.
또한, 대상체에서 이식가능한 인공삽입물에 대한 면역 반응을 감소시키거나 예방하기 위한 조성물, 방법 및 장치를 제공하는 것이 본 발명의 목적이다.
대상체에서 반흔 형성, 유착 및 섬유증식성 질병의 치유를 촉진시키고 그를 억제하기 위한 조성물, 방법 및 장치를 제공하는 것이 본 발명의 추가의 목적이다.
요약
리소좀 수송 조절제("LYST") 단백질의 억제가 조직 손상 위치에서의 감소된 염증 반응과 관련이 있는 것이 확립되었다. LYST 단백질의 발현 및 기능의 억제를 위한 조성물 및 방법이 기재된다. 당해 조성물 및 방법은 대식구, 혈소판 및 자연 살해 세포 기능을 변경시켜, 재생 유발(pro-regenerative) 면역 반응을 생성함으로써 신생내막 및 섬유증식성 장애의 형성에 기여하는 면역 과정을 조절하는데 유용할 수 있다.
대상체에서 반흔 조직의 형성을 감소시키거나 예방하기에 유효한 양으로 하나 이상의 LYST 억제제를 포함하는 조성물이 개시된다. 또한, 대상체에서 혈소판의 활성화를 감소시키거나 예방하기에 유효한 양으로 하나 이상의 LYST 억제제를 포함하는 조성물이 개시된다.
전형적으로, 조성물은 생리학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 바람직한 구현예에서, 하나 이상의 LYST 억제제의 양은 대상체에서 혈관 신생조직 형성을 방지하지 않는다. 전형적으로, 조성물은 0.1 내지 1000 ㎎/㎏(인간의 체중)의 양으로 하나 이상의 LYST 억제제를 포함한다.
일 구현예에서, 하나 이상의 LYST 억제제는 항체이다.
다른 구현예에서, 하나 이상의 LYST 억제제는 기능성 핵산이다. 예시적인 기능성 핵산은 안티센스 분자, siRNA, miRNA, 압타머(aptamer), 리보자임, 트리플렉스 형성 분자, RNAi 및 외부 가이드 서열을 포함한다. 하나 이상의 기능성 핵산은 발현 벡터로부터 발현될 수 있다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 LYST 억제제의 조성물은 전달 비히클을 포함한다. 예시적인 전달 비히클은 나노입자, 마이크로입자, 미셀, 합성 지질단백질 입자, 리포좀 및 탄소 나노튜브를 포함한다. 또한, 개시된 조성물은 하나 이상의 추가의 치료제를 포함할 수 있다. 하나 이상의 LYST 억제제를 포함하는 혈관 이식편 및 의료 장치가 개시된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 LYST 억제제의 조성물은 이식편 또는 장치 상으로 코팅되거나, 그 내로 혼입된다. 예시적인 의료 장치는 스텐트(stent), 이식물(implant), 니들(needle), 캐뉼라(cannula), 카테터(catheter), 션트(shunt), 풍선(balloon) 및 판막(valve)을 포함한다. 의료 장치는 스텐트, 예를 들어, 하나 이상의 LYST 억제제의 조성물을 용출시키는 약물 용출 스텐트일 수 있다. 예시적인 혈관 이식편은 자가, 보존된 자가, 동종이계, 이종 또는 합성 이식편을 포함한다.
또한, 하나 이상의 LYST 억제제를 포함하는 조성물을 반흔 조직의 형성의 감소 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서의 반흔 조직의 형성의 감소 또는 예방 방법이 제공된다. 대상체에서의 정맥 혈전증 또는 동맥 혈전증의 발생의 감소 또는 예방 방법은 하나 이상의 LYST 억제제를 포함하는 조성물을 정맥 혈전증 또는 동맥 혈전증의 발생의 감소 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체는 재협착증 또는 다른 혈관 증식 장애가 발생할 위험이 있거나, 이것이 발생한 적이 있다. 추가의 구현예에서, 대상체는 혈관 외상, 혈관성형술, 혈관 외과술 또는 이식 동맥병증을 겪은 적이 있거나, 이를 겪고 있거나, 이를 겪을 것이다. 당해 방법은 미처리 대조군 대상체에 비하여 대상체에서 비대성 반흔형성, 켈로이드 또는 유착의 치유를 촉진시키거나, 그의 발생을 감소시키거나, 예방하거나, 간의 섬유증, 폐의 섬유증, 심장의 섬유증 또는 신장의 섬유증을 감소시키거나, 예방하거나, 신생내막 형성, 협착증 또는 재협착증을 감소시키거나, 예방하거나, 그들의 임의의 조합일 수 있다. 당해 방법은 하나 이상의 인공삽입 장치, 예를 들어, 심박 조율기, 신경 자극기, 심박 조율기 유도(lead), 대치 심장 판막 및 인공 관절 또는 그들의 조합의 통합을 촉진시키지만, 그의 캡슐화를 차단할 수 있다. 당해 방법은 미처리 대조군 대상체에 비하여 대상체에서 혈관 이식물의 이식 위치, 혈관 손상의 위치 또는 외과술 위치에서 신생내막 형성을 치료하거나 예방하는데 유효할 수 있다. 당해 방법은 미처리 대조군 대상체에 비하여 대상체에서 혈소판 유래 성장 인자, 형질전환 성장 인자 베타 또는 그의 임의의 조합의 발현을 감소시키거나 예방하는데 유효할 수 있다.
도 1은 beige 마우스(bg; 흑색 그래프) 및 야생형 마우스(WT; 회색 그래프)로의 이식 후 2주에 생분해성 도관 이식편 내의 도관의 직경(㎜)을 보여주는 히스토그램이다. 각각 beige 마우스 및 야생형 마우스에 대하여 N=10 및 N=25.
도 2는 이식 후 2주에, 각각 beige 마우스(Bg; 회색 그래프) 및 야생형 마우스(WT; 흑색 그래프)로부터 외식된 생분해성 도관 이식편 내의 대식구 세포의 수(세포/HPF)를 보여주는 히스토그램이다. P = 0.0048.
도 3은 엑손 52 상의 LYST 유전자에서, 야생형(WT) 및 Beige(Bg) 마우스의 뉴클레오티드 서열(상측) 간의 차이를 보여주는 개략도이다. WT 및 Bg 마우스의 LYST 단백질의 아미노산 서열 간의 상응하는 차이도 또한, 아미노산 서열 정렬에 나타나 있다(중간). 아미노산 서열 정렬(하측)은 인간, 마우스 및 랫트로부터의 LYST 폴리펩티드의 아미노산 서열 간의 보존을 보여준다. Beige(Bg) 마우스의 LYST 내의 결실의 위치는 *로 나타나 있다. 핵산 및 아미노산은 각각의 표준 단일-문자 코드를 사용하여 표현된다.
도 4는 각각 야생형 마우스(WT-1(1); WT-2(2)), Beige 마우스(Beige-1(3); Beige-2(4)) 또는 표준 "Raw" 세포주(5)로부터 수득된 세포에서 각각 5개의 상이한 올리고뉴클레오티드 프라이머(LYST-1, LYST-3, LYST-4, LYST-5 및 LYST-6)를 사용하여 증폭된 LYST 유전자 산물에 상응하는 mRNA의 상대 수준을 보여주는 히스토그램이다.
도 5는 이식 2주 후에 각각 C57BL/6(야생형) 마우스 및 C57BL/6 Lysttm1b 낙아웃 마우스(n=5)에서 협착증의 발병률(%)을 보여주는 히스토그램이다. ***p = 0.0001.
도 6은 각각 휴지(대조군) 및 트롬빈 활성화 C57BL/6(야생형) 마우스 및 C57BL/6 Beige(Bg) 마우스에서 PRP로부터 분비되는 혈소판 유래 성장 인자(PDGF)의 양(㎍/㎖)을 보여주는 히스토그램이다. 각 그룹(n=7)으로부터의 분비된 PDGF의 총 농도를 휴지, 비-활성화 대조군(n=5)과 비교하였다.
상세한 설명
I. 정의
용어 "협착증"은 혈관 벽(내피)에 대한 손상 후에 발생하는 혈관의 비정상적인 협착을 말한다. 일부 구현예에서, 협착증은 내강의 50% 이상의 원주의 감소를 수반한다. 용어 "재협착증"은 이전의 협착증 위치에서의 협착증 또는 중재적 시술 후의 혈관 또는 합성 이식편의 내강의 협착을 말한다. 본원에 사용되는 바와 같은 재협착증은 폐색을 포함한다. 협착증 또는 재협착증을 초래하는 예시적인 손상은 죽상경화 병변에 대한 외상(혈관성형술 또는 스텐트로 관찰되는 바와 같음), 병변의 절제(동맥내막절제술로 관찰되는 바와 같음), 외부적 외상(예를 들어, 교차-클램핑 손상) 또는 외과적 문합을 포함한다.
용어 "신생내막 협착증"은 신생내막 형성으로부터 초래되는 혈관의 비정상적인 협착을 말한다.
용어 "신생내막"은 손상된 내피 세포로부터의 신호에 반응하여 혈관에서 형성되는 내막(내부 라이닝)의 재생된 또는 비대된 층을 말한다.
용어 "반흔 조직" 및 "반흔형성"은 손상 후에 손상된 조직을 대체하기 위해 생성되는 섬유성 조직을 말한다.
용어 "섬유증식성 장애", "FPD" 및 "섬유증 질병은 상호교환가능하게 사용되며, 연결 조직의 비정상적인 및 과도한 침착으로부터 초래되는 양성 및 악성 질병 또는 질환을 포함한다.
용어 "혈소판 활성화"는 조직 손상, 예를 들어, 내피의 손상 또는 장애에 반응하여 순환하는 혈소판의 유착 및 응집을 야기하는 단계식 생리학적 과정이다. 혈소판 활성화는 주화성 작용제, 예를 들어, 혈소판 유래 성장 인자(PDGF) 및 형질전환 성장 인자 베타(TGFβ)의 발현 및 분비를 야기한다.
"약제학적으로 허용되는 담체"는 표준 약제학적 담체, 예를 들어, 인산염 완충 염수 용액, 물 및 에멀젼, 예를 들어, 유/수 또는 수/유 에멀젼 및 다양한 유형의 습윤화제 중 임의의 것을 포함한다.
"억제한다" 또는 "억제하는" 또는 "억제"와 같은 상기 단어의 다른 형태는 특정 특징을 저해하거나 저지하는 것을 의미한다. 이것이 전형적으로 몇몇 표준 또는 예상치에 비한 것이며, 즉, 그것은 상대적이지만, 표준 또는 상대치가 항상 언급될 필요가 없음이 이해된다. 예를 들어, "LYST를 억제한다"는 표준 또는 대조군에 비하여 LYST 유전자의 활성을 저해하거나, 그를 간섭하거나, 그를 저지하는 것을 의미한다. 또한, "LYST를 억제한다"는 표준 또는 대조군에 비하여 LYST 단백질의 합성, 발현 또는 기능을 저해하거나 저지하는 것을 의미할 수 있다.
"치료" 또는 "치료하는"은 요망되지 않는 질환(예를 들어, 재협착증 또는 섬유증식성 장애)을 갖는 대상체 또는 시스템으로 조성물을 투여하는 것을 의미한다. 질환은 질병을 포함할 수 있다. "예방" 또는 "예방하는"은 질환 위험이 있는 대상체 또는 시스템으로 조성물을 투여하는 것을 의미한다. 질환은 질병에 대한 소인일 수 있다. 대상체로의 조성물의 투여의 (치료 및/또는 예방) 효과는 비제한적으로 질환의 특정 증상의 중단, 질환의 증상의 감소 또는 예방, 질환의 중증도의 감소, 질환의 완전한 제거, 특정 사건 또는 특징의 발생 또는 진행의 안정화 또는 지연, 또는 특정 사건 또는 특징이 발생할 기회의 최소화일 수 있다.
본원에 사용되는 용어 "항체"는 명백히 다르게 언급되지 않는 한, 가장 넓은 의미로 사용된다. 따라서, "항체"는 천연 발생 또는 인공, 예를 들어, 통상의 하이브리도마 기술에 의해 생성되는 모노클로널 항체일 수 있다. 항체는 모노클로널 및 폴리클로널 항체, 및 이들 항체의 항원-결합 도메인 및/또는 하나 이상의 상보성 결정 영역을 함유하는 단편을 포함한다. "항체"는 임의의 형태의 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 말하며, 모노클로널 항체(전장 모노클로널 항체 포함), 폴리클로널 항체, 다중-특이적 항체(예를 들어, 이중특이적 항체) 및 항체 단편을 포함한다.
II. 조성물
조직 회복 과정이 LYST 유전자의 발현 및 기능의 조작에 의해 매개될 수 있는 것이 확립되었다. 구체적으로, LYST 유전자 산물의 기능의 소실은 특정 면역 세포의 비정상적인 기능을 야기하여, 면역 기능장애 및 관련된 증식 장애의 감소를 초래한다. LYST 유전자 또는 LYST 단백질의 조절에 의해 영향을 받을 수 있는 면역 세포는 선천성 면역 세포, 대식구 및 혈소판을 포함한다.
선천성 면역 세포
염증, 손상된 세포 및 데브리스의 제거, 및 신생조직의 발생 및 기타 상처 회복 메커니즘을 포함하는 선천성 면역 과정은 손상에 대한 생리학적 반응의 중요한 요소이다. 조직 회복은 a) 응고/응혈; b) 염증; c) 섬유아세포 이동/증식; 및 d) 정상 조직 구조가 복구되는 최종 리모델링 단계를 포함하는 4개의 별개의 단계를 갖는다. 조직 손상 후 가장 조기의 단계에서, 상피 세포 및/또는 내피 세포는 염증 매개체를 방출하며, 이는 항섬유소용해-응혈 캐스케이드를 개시하여, 응고 및 일시적인 세포외 매트릭스(ECM)의 발생을 촉발시킨다. 혈소판의 응집 및 이후의 탈과립은 혈관 확장을 촉진시키고, 투과성을 증가시켜, 손상된 조직으로의 염증 세포, 예를 들어, 호중구, 대식구, 림프구 및 호산구의 효율적인 동원을 가능하게 한다. 호중구는 가장 조기의 상처 치유 단계에서 가장 풍부한 염증 세포이지만, 호중구 탈과립 후에 신속하게 대식구로 대체된다. 활성화된 대식구 및 호중구는 상처의 괴사 조직을 제거하고(debride), 임의의 침입 유기체를 제거하고, 염증 반응을 증폭시키는 다양한 사이토카인 및 케모카인을 생성할 뿐 아니라, 섬유아세포 증식 및 동원을 촉발시킨다. 섬유아세포는 활성화시에, α-평활근 액틴 및 ECM 성분을 분비하는 근섬유아세포로 전환한다. 마지막으로, 리모델링 단계에서, 상피/내피 세포는 분열하고, 임시의 매트릭스 위로 이동하여, 손상된 조직을 재생시킨다. 따라서, 치유 및 신생조직 생성은 과도한 비대 및 협착증 또는 섬유증 없이, 조직을 재생하고 혈관 벽을 비대시키는 요구의 균형을 유지하는 미세하게 조절된 과정이다.
대식구
순환하는 단핵구 및 침윤 대식구의 존재가 상처 치유 및 신생조직 발생에 결정적인 것으로 나타났다(문헌[Arras, et al., J Clin Invest, 101(1): 40-50 (1998)]). 그러나, 조직 손상 위치에서의 대식구 침윤의 정도는 또한, 증식 이상조절 및 신생내막 형성과 관련이 있다(문헌[Hibino, et al., FASEB J. 25(12):4253-63 (2011)]). 추가로, 수많은 연구에 의해, 대식구 및 섬유아세포가 섬유증의 발병에 연루되는 주요 이펙터 세포인 것으로 나타났다(문헌[Wynn, Nat Rev Immunol. 4(8):583-94 (2004)]에 검토).
혈관 손상 후에, 염증성 단핵 세포(인간에서 CD16-hi, CD64-hi 및 CD14-hi; 마우스에서 CD115+, CD11b+ 및 Ly6c-hi)는 손상된 조직으로 동원되고, 국소 성장 인자, 염증 유발 사이토카인 및 미생물 화합물로의 노출시에 활성화된 대식구(인간에서 Emr1-hi; 마우스에서 F4/80-hi)로 분화한다(문헌[Geissmann et al., Science 327: 656-661 (2010)]). 과도한 대식구 침윤은 협착증을 초래하는 한편, 대식구 침윤의 완전한 억제는 신생조직 형성을 방지한다(문헌[Hibino, et al., FASEB J. 25(12):4253-63 (2011)]).
대식구에 대한 2개의 별개의 양극화 활성화 상태가 정의되었다: 통상적으로 활성화된(M1) 대식구 표현형 및 대안적으로 활성화된(M2) 대식구 표현형(문헌[Gordon and Taylor, Nat. Rev. Immunol . 5: 953-964 (2005)]; 문헌[Mantovani et al., Trends Immunol. 23: 549-555 (2002)]). 통상적으로 활성화된(M1) 대식구의 역할은 TH1 세포 면역 반응에서의 이펙터 세포인 한편, 대안적으로 활성화된(M2) 대식구는 면역억제 및 상처 치유/조직 회복에 수반되는 것으로 나타났다. M1 및 M2 대식구는 별개의 케모카인 및 케모카인 수용체 프로파일을 가지며, M1은 TH1 세포-유인 케모카인 CXCL9 및 CXCL10을 분비하고, M2 대식구는 케모카인 CCL17, CCL22 및 CCL24를 발현한다.
M2 대식구의 존재는 신생-내막 발생 및 협착증과 관련이 있다(문헌[Hibino, et al., FASEB J. 25(12):4253-63 (2011)]). 조직 이식편 이식 후 특정 시점에, 대식구 침윤, 신생조직 형성 및 협착증의 정도 간의 상관관계에 의해, 대식구 활성의 조절을 통해 협착증을 예방하는 수단이 제공된다.
추가로, 대식구는 전형적으로 콜라겐-생성 근섬유아세포에 가까이 위치하며, 단핵구-유래 대식구는 섬유증을 위한 전제조건으로서 손상 후에 염증 반응을 결정적으로 영속시키는 것이 밝혀졌다(문헌[Wynn and Barron, Semin Liver Dis., 30(3):245-257 (2010)]). 대식구는 혈소판-유래 성장 인자(PDGF), 강력한 주화성 작용제 및 형질전환 성장 인자 베타(TGF-B)를 포함하는, 섬유아세포를 활성화시키는 섬유증 유발(pro-fibrotic) 매개체를 생성한다. 구체적으로, 대식구의 비-통상적인 M2(CD14+, CD16+) 서브셋의 현저한 증가는 만성 간 질병을 앓고 있는 환자에서의 염증 유발 사이토카인 및 임상적 진행과 상관관계가 있다. 섬유증 진행 동안, 단핵구-유래 대식구는 만성 염증을 영속시키는 사이토카인을 방출시킬 뿐 아니라, 간 성상 세포(HSC)를 직접 활성화시켜, 그들의 증식 및 콜라겐-생성 근섬유아세포로의 이형-분화를 초래한다(문헌[Zimmermann, et al., PLOS One, 5(6):e11049 (2010)]).
혈소판
응집된 혈소판은 주변 연결 조직으로부터 상처 영역으로 섬유아세포를 유인하는 화학물질을 분비하여, 상처를 치유함으로써 혈관의 회복에 도움이 되거나, 이상조절된 염증 반응의 경우에, 반흔 조직을 형성한다. 조직 손상에 반응하여, 혈소판은 활성화되고, 세포외 매트릭스, 예를 들어, 혈소판-유래 성장 인자(PDGF), 강력한 주화성 작용제 및 형질전환 성장 인자 베타(TGF-β)의 침착을 자극하는 다수의 성장 인자를 방출시킨다. 이들 성장 인자 둘 모두는 연결 조직의 회복 및 재생에서 유의미한 역할을 수행하는 것으로 나타났다. PDGF는 섬유아세포 및 염증 세포의 유입을 유의미하게 증강시킬 뿐 아니라 세포 증식 및 유전자 발현을 자극하는 일차 미토겐 및 화학유인물질로 기능한다. PDGF는 백혈구가 혈관벽으로 견고하게 부착되고, 최종적으로, 내피하 조직으로 이동할 수 있게 한다. 그러나, 혈소판-유래 케모카인은 또한, 평활근 세포(SMC) 증식을 유도하고, 신생내막 증식 및 기관 섬유증에서 역할을 수행하는 것으로 알려져 있다(문헌[Chandrasekar, et al., J Am College Cardiology, Vol 35, No. 3, pp. 555-562 (2000)]). PDGF 및 그의 수용체의 증가된 발현은 피부경화증 폐 및 피부 조직과 관련이 있다. 구체적으로, 피부경화증 폐 및 피부 섬유아세포에서 자가분비 PDGF-수용체 매개의 신호전달 루프에 대한 증거가 존재하여, 피부경화증의 만성 섬유증에서 TGF-β 및 PDGF 경로 둘 모두를 연루시킨다(문헌[Trojanowska, Rheumatology;47:v2-v4 (2008)]). 또한, PDGF 신호전달의 조절완화는 심혈관 적응증, 예를 들어, 폐 고혈압 및 죽상경화증과 관련이 있다.
손상-유도 PDGF에 대한 반응에서 중간층 평활근 세포(SMC) 증식 및 이동은 신생내막 비대에 기여하는 필수 사건이며(문헌[Fingerle, et al., Proc Natl Acad Sci., 86:8412 (1989)]; 문헌[Clowes, et al., Circ. Res., 56:139-145 (1985)]), 결국에는 혈관 협착 및 협착증을 야기한다.
혈소판에 의해 방출되는 다른 치유-관련 성장 인자는 염기성 섬유아세포 성장 인자, 인슐린-유사 성장 인자 1, 혈소판-유래 상피 성장 인자 및 혈관 내피 성장 인자를 포함한다.
따라서, LYST 유전자 및 LYST 단백질의 억제제는 상처 치유를 증진시키고, 증식 장애, 예를 들어, 내막 과다형성, 과도한 반흔 조직의 발생 및 섬유증 질병을 예방하는 재생 유발 면역 환경을 생성할 수 있다. 또한, LYST의 조절에 의해, 혈소판 활성 및 기능을 조절할 수 있다. 따라서, LYST 유전자 및/또는 LYST 단백질의 억제제를 사용하여, 혈소판의 생물학적 기능, 예를 들어, 혈소판 응집 및 혈소판 유래 성장 인자(PDGF)의 생성/발현을 감소시키거나 예방할 수 있다.
LYST 단백질의 발현 및/또는 기능의 차단에 의해 조직 재생을 촉진시키고, 과도한 반흔 조직의 형성을 특징으로 하는 질병을 예방하거나 감소시키기 위한 조성물이 개시된다.
A. LYST
리소좀 수송 조절제(LYST) 유전자 산물은 리소좀으로의 세포내 물질의 수송과 관련된 편재성 단백질이다. LYST 단백질의 기능을 감소시키거나 억제하는 돌연변이가 대식구의 정상 기능을 간섭하고, 자연 살해(NK) 세포 및 혈소판의 생물학적 활성에 영향을 미치는 것이 확립되었다. LYST 단백질의 조절이 혈관 증식 장애, 신생내막 형성, 섬유증 및 과도한 반흔형성을 야기하는 면역 과정을 조절하는 수단을 제공하는 것으로 여겨진다.
1. LYST 유전자
인간 LYST 유전자는 염색체 1에 위치한다(세그먼트 1q42.1-q42.2; 염기쌍 235,661,030 내지 235,883,707)(문헌[Barrat, et al., Am. J. Hum. Genet, 59:625-632 (1996)]). LYST 유전자 산물에 대한 핵산 서열은 해당 분야에 알려져 있다. 예를 들어, 핵산 서열을 제공하는 NCBI 참조 서열: NM_000081.3, 호모 사피엔스(Homo sapiens) 리소좀 수송 조절제(LYST), 전사물 변이체 1, mRNA를 참조한다:
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
SEQ ID NO: 1과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열도 또한 개시된다.
2. LYST 단백질
LYST 폴리펩티드는 대략 429 kDa의 분자량을 갖는 3,801개 아미노산 세포질 단백질(리소좀 수송 조절제, CHS 단백질, CHS1 또는 LYST 단백질로도 알려져 있음)이다(문헌[Barbosa, et al., Nature, 382(6588): 262-265 (1996)]).
LYST 단백질은 3개의 아이소형 중 하나로 존재하며, 나선 구조를 채용하는 것으로 예측된다(문헌[Barbosa, et al., Nature, 382(6588): 262-265 (1996)]).
LYST 단백질은 포유류 종에 걸쳐 고도로 보존되며, 모든 세포 유형에서 낮은 수준으로 발현되지만, 성인 및 태아 흉선, 말초 혈액 백혈구, 골수 및 성인 뇌의 몇몇 영역에서 풍부하게 발현된다(문헌[Dotta, et al., Orphanet Journal of Rare Diseases, 8:168 (2013)]에 의한 검토 및 상기 문헌의 참조문헌 참조).
인간 LYST 단백질의 아미노산 서열은 해당 분야에 알려져 있다. 예를 들어, GenBank 수탁 번호 U67615를 참조한다:
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
SEQ ID NO: 2와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 아미노산 동일성을 갖는 LYST 폴리펩티드가 개시된다.
비록 LYST 단백질이 많은 다양한 세포 활성과 관련되지만, 특히, 엔도좀 및 리소좀에서의 세포내 단백질 수송에서, LYST 단백질의 생물학적 기능은 대부분 알려져 있지 않다.
LYST 유전자 산물의 비정상적인 발현 및 기능이 자가면역 질병, 과다증식 장애 및 혈소판 기능이상을 포함하는 수많은 병리학적 장애에 연루된다. 구체적으로, LYST 유전자의 돌연변이는 인간 질병 체디악-히가시(Chediak-Higashi) 증후군(CHS)과 관련이 있다(문헌[Barrat, et al., Am. J. Hum. Genet, 59:625-632 (1996)]). CHS 환자에서, LYST 유전자는 코딩 도메인의 뉴클레오티드 117 내지 118에 프레임-시프트 돌연변이를 함유한다.
CHS는 다양한 세포 유형에서 저색소 침착, 중증 면역학적 결핍, 출혈 경향, 신경학적 비정상, 리소좀 및 거대 봉입체로의, 그리고 그로부터의 비정상적인 세포내 수송을 특징으로 하는 희귀 리소좀 저장 장애이다. LYST 유전자의 적어도 30개의 돌연변이가 체디악-히가시 증후군이 있는 사람들에서 확인되었다. 이들 돌연변이는 리소좀 수송 조절제 단백질의 정상적인 기능을 손상시키며, 이는 리소좀 및 세포 내의 관련 구조의 크기, 구조 및 기능을 방해한다. LYST 돌연변이가 있는 사람들은 신체의 도처에서 비정상적으로 큰 리소좀 및 관련 세포 내 구조를 갖는다. 이들 확장된 구조는 정상적인 세포 기능을 간섭한다. 면역계 세포, 예를 들어, 대식구에서의 확장된 리소좀은 이들 세포가 박테리아 및 다른 외래 침입제에 적절하게 반응하지 못하게 하고; 큰 핵주변 리소좀은 CHS가 있는 사람의 대식구 세포 내에 관상 방식으로 배열된다. 이환된 호중구 및 단핵구는 정상 세포의 능력의 약 40%의 주화성 및 이동 능력을 갖는다. 또한, 이환된 환자는 혈소판 기능이상으로 인하여 출혈 경향을 갖는다. 주화성 자극에 대한 감소된 반응의 결과로서, 면역계의 기능장애는 중증, 재발성 감염으로부터 신체를 보호할 수 없다. CHS는 환자가 면역약화되고, 감염에 대한 효율적인 면역 반응을 시작할 수 없기 때문에, 종종 치명적이다.
Beige(Bg) 마우스 종류에서, LYST의 마우스 상동체("Lyst")는 기능성 Lyst 단백질의 발현을 못하게 하는 결실에 의해 파괴된다. Bg 마우스는 야생형 마우스에 비하여, 혈관 조직 이식편의 이식 후에, 더 낮은 협착증의 비를 포함하여, 감소된 증식 질병을 나타내는 것으로 관찰되었다. Bg 마우스에서의 기능이상 Lyst 단백질의 영향은 골수 이식 실험에 의해 결정되는 바와 같이, 고도로 대식구-특이적이다(실시예 참조).
C. LYST의 억제제
LYST 단백질의 차단에 의해 혈관 증식 장애, 섬유증식 질병 및 손상 후의 과도한 반흔 조직을 야기하는 면역 과정을 감소시키거나 예방할 수 있는 것이 확립되었다. LYST 단백질의 전사, 번역 또는 기능을 억제하거나 감소시키는 면역-조절제가 개시된다.
LYST의 억제제는 LYST 유전자에 또는 LYST 단백질에 결합하고, 직접적으로 또는 간접적으로 LYST 단백질의 생물학적 기능을 차단할 수 있다. 또한, 억제제는 LYST의 하류 생물학적 기능을 이루는 하나 이상의 신호전달 경로의 생물학적 기능을 차단할 수 있다. 일부 구현예에서, LYST의 억제제는 LYST 단백질의 내인성 리간드가 LYST 단백질과 상호작용하거나 그에 직접 결합하는 것을 방지함으로써 기능한다. 억제제는 LYST 단백질을 수반하는 단백질-단백질 상호작용을 차단할 수 있거나, 그들은 LYST 단백질 및 리간드의 복합체의 기능적 활성을 예방하거나 감소시킬 수 있다. LYST 단백질에 직접 결합하는 억제제는 LYST 단백질 상의 활성 위치의 직접적인 폐쇄에 의해 또는 간접적인 폐쇄를 통해, 예를 들어, LYST 상호작용의 입체적 차단에 의해 작용할 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 억제제는 단백질 상호작용 도메인, 예를 들어, WD40 반복 모티프의 탠덤 카피에 의해 형성되는 솔레노이드 단백질 도메인의 기능을 방해하거나 막는다. 다른 구현예에서, 억제제는 활성 위치와 공간적으로 상이한 위치에 결합한다.
LYST 단백질에 결합하는 억제제는 이량체화 유도, 올리고머화 유도, 입체형태 변화의 유도, 촉매 기능의 방지, 분해 유도, 면역 세포에 의한 흡수 유도, 표적 세포에 의한 흡수 방지, 리간드 결합 방지, 인산화 방지, 변성 유도, 하나 이상의 번역후 변형 방지 또는 다르게는 LYST 단백질의 고유 3차 구조의 변경을 포함하나 이들에 한정되지 않는 메커니즘에 의해 LYST 기능을 방지할 수 있다.
LYST에 의한 세포 신호전달 경로의 개시 또는 도입이 LYST 단백질로의 리간드의 결합을 필요로 할 수 있음이 이해된다. 따라서, LYST를 수반하는 신호 전달 경로를 차단하고, 임의로 LYST 및 그의 수용체의 동시-라이게이션을 방지하는 단백질, 항체 또는 소분자는 유용한 면역-조절제이다. 하기 논의된 LYST 억제제의 부류는 항체 및 기능성 핵산을 포함한다.
1. 항체
LYST 단백질, 그의 리간드 또는 그의 보조 분자로의 직접적인 결합에 의해 LYST의 기능을 억제하는 항체가 개시된다. 임의의 특이적인 항체가 본원에 제공된 방법 및 조성물에 사용될 수 있다. 항체는 LYST 단백질 상의 에피토프에 결합하는 항원 결합 부위를 포함할 수 있다. LYST로의 항체의 결합은 하나 이상의 별개의 메커니즘을 통해 LYST 단백질의 기능을 억제하거나 감소시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열에 의해 인코딩되는 단백질 내의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 에피토프는 선형 에피토프일 수 있으며, SEQ ID NO: 2의 일차 서열의 하나 이상의 연속 아미노산을 포함할 수 있다. 다른 구현예에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 LYST 단백질의 3차원 표면 특징부, 형상 또는 3차 구조를 포함하는 입체형태 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 3차원 표면 특징부는 SEQ ID NO: 2의 임의의 수의 아미노산 또는 상동체, 오솔로그(ortholog), 파라로그(paralog) 또는 그의 변이체의 상응하는 잔기를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열에 의해 인코딩되는 단백질 내의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열에 의해 인코딩되는 단백질이 리간드 또는 소분자에 의해 결합되지 않는 경우에만 결합할 수 있다.
임의의 분류의 전체 면역글로불린, 그의 단편 및 적어도 항체의 항원 결합 가변 도메인을 함유하는 합성 단백질을 포함하는 다양한 유형의 항체 및 항체 단편이 개시된 조성물 및 방법에서 사용될 수 있다. 항체는 IgG 항체, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4일 수 있다. 항체는 Fab 단편, F(ab')2 단편, 단쇄 가변 영역 등을 포함하는 항원 결합 단편의 형태로 존재할 수 있다. 항체는 폴리클로널 또는 모노클로널(mAb)일 수 있다. 모노클로널 항체는 표적 항원에 특이적으로 결합하고/거나 요망되는 생물학적 활성을 나타내는 한, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부분이 특정 종으로부터 유래되거나, 특정 항체 부류 또는 하위 부류에 속하는 항체에서의 상응하는 서열과 동일하거나 그와 상동성인 한편, 쇄(들)의 나머지가 다른 종으로부터 유래되거나, 다른 항체 부류 또는 하위 부류에 속하는 항체 및 그러한 항체의 단편에서의 상응하는 서열과 동일하거나, 그와 상동성인 "키메라" 항체를 포함한다(미국 특허 제4,816,567호; 및 문헌[Morrison, et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 81: 6851-6855 (1984)]). 또한, 개시된 항체는 재조합 수단에 의해, 예를 들어, 아미노산의 결실, 부가 또는 치환에 의해 변형되어, 요망되는 기능의 매개에서의 항체의 효능을 증가시킬 수 있다. 치환은 보존적 치환일 수 있다. 예를 들어, 항체의 불변 영역 내의 적어도 하나의 아미노산은 상이한 잔기로 대체될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제5,624,821호; 미국 특허 제6,194,551호; WO 9958572호; 및 문헌[Angal, et al., Mol. Immunol. 30:105-08 (1993)] 참조). 일부 경우에, 요망되지 않는 활성, 예를 들어, 보체-의존성 세포독성을 감소시키기 위한 변화가 이루어진다. 항체는 적어도 2개의 상이한 항원 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 이중특이적 항체일 수 있다. 일 구현예에서, 에피토프는 동일한 항원으로부터의 에피토프이다. 다른 구현예에서, 에피토프는 2개의 상이한 항원으로부터의 에피토프이다. 이중특이적 항체는 이중특이적 항체 단편을 포함할 수 있다(예를 들어, 문헌[Hollinger, et al., Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A., 90:6444-48 (1993)]; 문헌[Gruber, et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)] 참조).
인간 LYST 단백질에 결합하는 다양한 항체는 다수의 공급원, 예를 들어, Santa Cruz Biotechnology(CA, USA, Cat. No. sc-136746)로부터 상업적으로 입수가능하다. 항체는 해당 분야에 알려져 있는 임의의 수단에 의해 생성될 수 있다. 항체 생성 및 생산을 위한 예시적인 일부 수단은 문헌[Delves, Antibody Production: Essential Techniques (Wiley, 1997)]; 문헌[Shephard, et al., Monoclonal Antibodies (Oxford University Press, 2000)]; 문헌[Goding, Monoclonal Antibodies: Principles And Practice (Academic Press, 1993)]; 및 문헌[Current Protocols In Immunology (John Wiley & Sons, most recent edition)]을 포함한다. 무손상 Ig 분자의 단편은 효소 분해 및 재조합 수단을 포함하는 해당 분야에 널리 알려져 있는 방법을 사용하여 생성될 수 있다.
2. 기능성 핵산
LYST 유전자 산물의 전사, 번역 또는 기능을 억제하는 기능성 핵산이 개시된다. 기능성 핵산은 특정 기능을 갖는, 예를 들어, 표적 분자에 결합하거나, 특정 반응을 촉매작용시키는 핵산 분자이다. 하기에 더욱 상세히 논의된 바와 같이, 기능성 핵산 분자는 하기의 비제한적인 범주로 나뉠 수 있다: 안티센스 분자, siRNA, miRNA, 압타머, 리보자임, 트리플렉스 형성 분자, RNAi 및 외부 가이드 서열. 기능성 핵산 분자는 표적 분자가 지니는 특정 활성의 이펙터, 억제제, 조절제 및 자극제로 작용하거나, 기능성 핵산 분자는 임의의 다른 분자와 독립적으로 새로이(de novo) 활성을 지닐 수 있다.
기능성 핵산 분자는 임의의 거대분자, 예를 들어, DNA, RNA, 폴리펩티드 또는 탄수화물 쇄와 상호작용할 수 있다. 따라서, 기능성 핵산은 LYST 폴리펩티드의 mRNA 또는 게놈 DNA와 상호작용하거나, 그들은 LYST 폴리펩티드 그 자체와 상호작용할 수 있다. 기능성 핵산은 종종 표적 분자와 기능성 핵산 분자 간의 서열 상동성에 기초하여 다른 핵산과 상호작용하도록 설계된다. 다른 상황에서, 기능성 핵산 분자와 표적 분자 간의 특이적인 인식은 기능성 핵산 분자와 표적 분자 간의 서열 상동성에 기초하지 않고, 오히려, 특이적인 인식이 발생하게 하는 3차 구조의 형성에 기초한다. 따라서, 개시된 조성물은 LYST 단백질의 발현 또는 기능을 감소시키도록 설계된 하나 이상의 기능성 핵산을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 조성물은 LYST mRNA를 표적화하고, 그의 발현 또는 번역을 감소시키거나 억제하도록; 또는 LYST 단백질의 발현을 감소시키거나 억제하거나, 그의 활성을 감소시키거나, 그의 분해를 증가시키도록 설계된 기능성 핵산 또는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 조성물은 기능성 핵산의 생체내 발현에 적합한 벡터를 포함한다.
일부 구현예에서, 기능성 핵산 또는 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산, 또는 그의 상보체, 또는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산과 65%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 동일한 핵산 서열을 갖는 그의 변이체의 세그먼트를 표적화하도록 설계된다.
다른 구현예에서, 기능성 핵산 또는 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 1의 핵산 서열, 또는 그의 상보체, 또는 SEQ ID NO: 1과 적어도 65%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 동일한 핵산 서열을 갖는 그의 변이체의 세그먼트를 표적화하도록 설계된다.
일부 구현예에서, 기능성 핵산은 예를 들어, 엄격한 조건하에서 SEQ ID NO: 1의 핵산 또는 그의 상보체에 혼성화한다. 일부 구현예에서, 기능성 핵산은 예를 들어, 엄격한 조건하에서 SEQ ID NO: 2를 인코딩하는 핵산 서열 또는 그의 상보체에 혼성화한다.
개시된 기능성 핵산, 예를 들어, 안티센스 올리고뉴클레오티드, siRNA, shRNA, miRNA, EGS, 리보자임 및 압타머의 생체내 발현을 위한 벡터의 제조 및 이용 방법이 해당 분야에 알려져 있다.
i. 안티센스 분자
기능성 핵산은 안티센스 분자일 수 있다. 안티센스 분자는 정규 또는 비정규 염기 쌍형성을 통해 표적 핵산 분자와 상호작용하도록 설계된다. 안티센스 분자와 표적 분자의 상호작용은 예를 들어, RNAse H 매개의 RNA-DNA 하이브리드 분해를 통해 표적 분자의 파괴를 촉진시키도록 설계된다. 대안적으로, 안티센스 분자는 표적 분자에서 정상적으로 일어날 수 있는 처리 기능, 예를 들어, 전사 또는 복제를 방해하도록 설계된다. 안티센스 분자는 표적 분자의 서열에 기초하여 설계될 수 있다. 표적 분자의 가장 접근하기 쉬운 영역을 찾음으로써 안티센스 효능을 최적화하기 위한 수많은 방법이 존재한다. 예시적인 방법은 시험관내 선택 실험 및 DMS 및 DEPC를 사용한 DNA 변형 연구를 포함한다. 안티센스 분자가 10-6, 10-8, 10-10 또는 10-12 이하의 해리 상수(Kd)로 LYST 표적 분자에 결합하는 것이 바람직하다.
ii. 압타머
기능성 핵산은 압타머일 수 있다. 압타머는 바람직하게는 특이적인 방식으로 표적 분자와 상호작용하는 분자이다. 전형적으로, 압타머는 정의된 2차 및 3차 구조, 예를 들어, 스템-루프 또는 G-쿼텟(quartet)으로 폴딩되는 15 내지 50개 염기 길이 범위의 작은 핵산이다. 압타머는 소분자, 예를 들어, ATP 및 테오필린, 및 큰 분자, 예를 들어, 역전사효소 및 트롬빈에 결합할 수 있다. 압타머는 표적 분자로부터의 10-12 M 미만의 Kd로 매우 단단하게 결합할 수 있다. 압타머가 10-6, 10-8, 10-10 또는 10-12 미만의 Kd로 LYST 표적 분자에 결합하는 것이 바람직하다. 압타머는 매우 높은 특이성 정도로 표적 분자와 결합할 수 있다. 예를 들어, 표적 분자, 및 분자 상의 오직 단일의 위치만 상이한 다른 분자 간의 결합 친화성에 10,000배 초과의 차이를 갖는 압타머가 단리된다. 압타머가 백그라운드 결합 분자와의 Kd보다 적어도 10, 100, 1000, 10,000 또는 100,000배 더 낮은, LYST 표적 분자와의 Kd를 갖는 것이 바람직하다. 분자, 예를 들어, 폴리펩티드에 대한 비교를 행하는 경우, 백그라운드 분자가 상이한 폴리펩티드인 것이 바람직하다.
iii. 리보자임
기능성 핵산은 리보자임일 수 있다. 리보자임은 분자 내에서 또는 분자 간에 화학 반응을 촉매작용시킬 수 있는 핵산 분자이다. 리보자임이 분자간 반응을 촉매작용시키는 것이 바람직하다. 천연 계에서 관찰되는 리보자임, 예를 들어, 귀상어 리보자임에 기초한 뉴클레아제 또는 핵산 중합효소-유형 반응을 촉매작용시키는 상이한 유형의 리보자임이 개시된다. 천연 계에서 관찰되지 않지만, 새로이 특이적 반응을 촉매작용시키도록 조작된 리보자임도 또한 개시된다. 바람직한 리보자임은 RNA 또는 DNA 기질을 절단하고, 더욱 바람직하게는 RNA 기질을 절단한다. 리보자임은 전형적으로, 표적 기질의 인식 및 결합과 함께 이후의 절단을 통해 핵산 기질을 절단한다. 이러한 인식은 종종 대부분 정규 또는 비-정규 염기 쌍 상호작용에 기초한다. 이러한 특성은 리보자임이 핵산의 특이적인 절단을 표적화하기 위한 특히 우수한 후보물질이 되게 하는데, 그 이유는 표적 기질의 인식이 표적 기질 서열에 기초하기 때문이다.
iv. 트리플렉스 형성 올리고뉴클레오티드
기능성 핵산은 트리플렉스 형성 올리고뉴클레오티드 분자일 수 있다. 트리플렉스 형성 기능성 핵산 분자는 이중-가닥 또는 단일-가닥 핵산과 상호작용할 수 있는 분자이다. 트리플렉스 분자가 표적 영역과 상호작용하는 경우, 트리플렉스로 지칭되는 구조가 형성되며, 여기서, 왓슨-크릭(Watson-Crick) 및 후그스틴(Hoogsteen) 염기-쌍형성 둘 모두에 따라 복합체를 형성하는 3개의 가닥의 DNA가 존재한다. 트리플렉스 분자가 바람직한데, 그 이유는 그들이 높은 친화성 및 특이성으로 표적 영역에 결합할 수 있기 때문이다. 트리플렉스 형성 분자가 10-6, 10-8, 10-10 또는 10-12 미만의 Kd로 표적 분자에 결합하는 것이 바람직하다.
v. 외부 가이드 서열
기능성 핵산은 외부 가이드 서열일 수 있다. 외부 가이드 서열(EGS)은 복합체를 형성하는 표적 핵산 분자에 결합하는 분자이며, 복합체는 RNase P에 의해 인식되고, 이는 이어서, 표적 분자를 절단한다. EGS는 선택된 RNA 분자를 특이적으로 표적화하도록 설계될 수 있다. RNAse P는 세포 내의 전달 RNA(tRNA)의 처리를 돕는다. 박테리아 RNAse P를 동원하여, EGS를 사용하여, 표적 RNA:EGS 복합체를 야기하여 천연 tRNA 기질을 모방함으로써 사실상 어떠한 RNA 서열도 절단할 수 있다. 유사하게, RNA의 진핵 EGS/RNAse P-유도 절단을 사용하여, 진핵 세포 내에서 요망되는 표적을 절단할 수 있다. 다양한 상이한 표적 분자의 절단을 용이하게 하는 EGS 분자의 제조 및 이용 방법의 대표적인 예가 해당 분야에 알려져 있다.
vi. RNA 간섭
일부 구현예에서, 기능성 핵산은 RNA 간섭(siRNA)을 통해 유전자 침묵을 유도한다. LYST 유전자의 발현은 RNA 간섭을 통하여 매우 특이적인 방식으로 효율적으로 침묵화될 수 있다.
유전자 침묵화는 원래 이중 가닥 RNA(dsRNA)의 첨가로 관찰되었다(문헌[Fire, et al. (1998) Nature, 391:806-11]; 문헌[Napoli, et al. (1990) Plant Cell 2:279-89]; 문헌[Hannon, (2002) Nature, 418:244-51]). 일단 dsRNA가 세포에 유입되면, 그것은 다이서(Dicer)로 지칭되는 RNase III-유사 효소에 의해, 3' 말단에 2개 뉴클레오티드 오버행을 함유하는 21 내지 23개 뉴클레오티드 길이의 이중 가닥 작은 간섭 RNA(siRNA)로 절단된다(문헌[Elbashir, et al., Genes Dev., 15:188-200 (2001)]; 문헌[Bernstein, et al., Nature, 409:363-6 (2001)]; 문헌[Hammond, et al., Nature, 404:293-6 (2000)]; 문헌[Nykanen, et al., Cell, 107:309-21 (2001)]; 문헌[Martinez, et al., Cell, 110:563-74 (2002)]). iRNA 또는 siRNA의 효과 또는 그들의 용도는 어떠한 유형의 메커니즘에도 제한되지 않는다.
일 구현예에서, siRNA는 siRNA 및 표적 LYST RNA 둘 모두 사이의 서열 동일성 영역 내에서, 상동성 LYST RNA 분자, 예를 들어, LYST mRNA의 특이적인 분해를 촉발시킨다.
서열 특이적 유전자 침묵화는 효소 다이서에 의해 생성되는 siRNA를 모방하는 합성, 짧은 이중-가닥 RNA를 사용하여 포유류 세포에서 달성될 수 있다(문헌[Elbashir, et al., Nature, 411:494-498 (2001)])(문헌[Ui-Tei, et al., FEBS Lett, 479:79-82 (2000)]).
siRNA는 화학적으로 또는 시험관내 합성되거나, 세포 내측에서 짧은 이중-가닥 헤어핀-유사 RNA(shRNA)가 siRNA로 처리된 결과일 수 있다. 예를 들어, WO 02/44321호는 3' 오버행 말단과 염기-쌍을 형성하는 경우, 표적 mRNA를 서열-특이적으로 분해할 수 있는 siRNA를 개시하며, 이들 siRNA의 제조 방법을 위하여 본원에 참조로 포함된다. 합성 siRNA는 일반적으로 알고리즘 및 통상의 DNA/RNA 합성기를 사용하여 설계된다. 공급처는 Ambion(Austin, Texas), ChemGenes(Ashland, Massachusetts), Dharmacon(Lafayette, Colorado), Glen Research(Sterling, Virginia), MWB Biotech(Esbersberg, Germany), Proligo(Boulder, Colorado) 및 Qiagen(Vento, The Netherlands)을 포함한다. 또한, siRNA는 키트, 예를 들어, Ambion의 SILENCER® siRNA 작제 키트를 사용하여 시험관내에서 합성될 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물은 기능성 핵산을 발현하는 벡터를 포함한다. 벡터로부터의 siRNA의 생성은 가장 통상적으로 짧은 헤어핀 RNAse(shRNA)의 전사를 통해 행해진다. shRNA를 포함하는 벡터의 생성을 위한 키트, 예를 들어, Imgenex의 GENESUPPRESSOR™ 작제 키트 및 Invitrogen의 BLOCK-IT™ 유도성 RNAi 플라스미드 및 렌티바이러스 벡터가 이용가능하다. 일부 구현예에서, 기능성 핵산은 siRNA, shRNA 또는 miRNA이다.
B. 부형제, 전달 비히클 및 장치
LYST 억제제는 전달 비히클의 보조와 함께 또는 이것 없이 대상체의 세포 내로 투여되거나, 흡수될 수 있다. 개시된 억제제에 적절한 전달 비히클은 해당 분야에 알려져 있으며, 특정 억제제에 적합하도록 선택될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 억제제는 주사에 의해 정맥내, 피하, 복강내 또는 국소 전달된다. 전형적인 담체는 염수, 인산염 완충 염수 및 다른 주사가능한 담체이다.
전달 비히클과 함께 또는 이것 없이 하나 이상의 LYST 억제제를 포함하는 제형이 개시된다. 개시된 LYST 억제제는 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물로 제형화될 수 있다. 약제학적 조성물은 억제제 및 의도되는 용도에 따라 상이한 투여 메커니즘을 위해 제형화될 수 있다. 비경구(근육내, 복강내, 정맥내(IV) 또는 피하 주사), 국소 또는 경피(수동적으로 또는 이온토포레시스(iontophoresis) 또는 전기천공법 사용) 투여 경로에 의한 또는 생침식성(bioerodible) 삽입물을 사용하는 투여를 위해 제형화된 약제학적 조성물이 개시된다.
1. 비경구 투여
일부 구현예에서, 하나 이상의 LYST 억제제 및 임의로 전달 비히클은 비경구 주사에 의한 수성 용액에서의 투여를 위해 제형화된다. 또한, 제형은 현탁액 또는 에멀젼의 형태로 존재할 수 있다. 일반적으로, 유효량의 활성 작용제, 표적화 모이어티 및 임의로 전달 비히클을 포함하는 약제학적 조성물이 제공되며, 이는 임의로 약제학적으로 허용되는 희석제, 보존제, 가용화제, 유화제, 애쥬번트 및/또는 담체를 포함한다. 그러한 조성물은 희석제, 멸균수, 다양한 완충제 내용물(예를 들어, Tris-HCl, 아세트산염, 인산염), pH 및 이온 세기의 완충된 염수 및 임의로, 첨가제, 예를 들어 세제 및 가용화제(예를 들어, 폴리소르베이트 20 또는 80으로도 지칭되는 TWEEN® 20, TWEEN® 80), 항산화제(예를 들어, 아스코르브산, 메타중아황산나트륨), 및 보존제(예를 들어, 티메르솔, 벤질 알코올) 및 충전 물질(예를 들어, 락토스, 만니톨)을 포함한다. 비-수성 용매 또는 비히클의 예는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 오일, 예를 들어 올리브유 및 옥수수유, 젤라틴, 및 주사가능한 유기 에스테르, 예를 들어 에틸 올레에이트이다. 제형은 동결건조되고, 사용 직전에 재용해/재현탁화될 수 있다. 제형은 예를 들어 박테리아 보유 필터를 통한 여과에 의해, 멸균제를 조성물에 혼입함으로써, 조성물에 방사선을 조사함으로써, 또는 조성물을 가열함으로써 멸균될 수 있다.
2. 폐 및 점막 투여
추가의 구현예에서, 하나 이상의 LYST 억제제 및 임의로 전달 비히클은 점막, 예를 들어, 입, 눈, 폐, 비강, 구강(설하, 협측), 질 또는 직장 점막으로의 투여를 위해 제형화된다.
점막으로의 투여를 위한 제형은 전형적으로 분무 건조된 약물 입자일 것이며, 이는 정제, 겔, 캡슐, 현탁액 또는 에멀젼 내로 혼입될 수 있다. 표준 약제학적 부형제는 임의의 조제사로부터 입수가능하다.
일 구현예에서, 화합물은 폐 전달, 예를 들어, 비강내 투여 또는 경구 흡입을 위해 제형화된다. 기도는 대기와 혈류 간의 기체의 교환에 수반되는 구조이다. 상기도 및 하기도는 전도 기도로 지칭된다. 말단 세기관지는 호흡 세기관지로 갈라지고, 이는 이어서 최종 호흡 구역인 폐포 또는 심폐(deep lung)로 이어진다. 심폐 또는 폐포는 전신 약물 전달을 위한 흡입형 치료 에어로졸의 주요 표적이다. 폐에서 활성인 치료제는 전신 투여되고, 폐 흡수를 통해 표적화될 수 있다. 본원에 사용되는 용어 에어로졸은 추진제를 사용하여 생성되든지, 그렇지 않든지, 용액 또는 현탁액에 존재할 수 있는 입자의 미세한 미스트의 임의의 제제를 지칭한다. 에어로졸은 표준 기술, 예를 들어, 초음파처리 또는 고압 처리를 사용하여 생성될 수 있다.
폐 제형을 위한 담체는 건조 분말 제형을 위한 것 및 용액으로서의 투여를 위한 것으로 나뉠 수 있다. 기도로의 치료제의 전달을 위한 에어로졸이 해당 분야에 알려져 있다. 상기도를 통한 투여를 위하여, 제형은 용액, 예를 들어, 물 또는 완충 또는 비완충된 등장성 염수 내로 또는 현탁액으로서 제형화될 수 있으며, 비강내 투여를 위해 점적액으로서 또는 분무로서 제형화될 수 있다. 바람직하게는, 그러한 용액 또는 현탁액은 코 분비액에 대해 등장성이며, 예를 들어 약 pH 4.0 내지 약 pH 7.4 또는 pH 6.0 내지 pH 7.0 범위의 거의 동일한 pH를 갖는다. 완충제는 생리학적으로 적합해야 하며, 예를 들어 간단히 인산염 완충제를 포함한다. 당업자는 비강 및/또는 상기도 투여에 무해한 수성 용액에 적합한 염수 함량 및 pH를 용이하게 결정할 수 있다.
조성물은 흡입 동안 폐로 전달될 수 있으며, 약 5 미크론 미만의 공기역학 직경을 갖는 에어로졸 또는 분무 건조 입자로 전달되는 경우, 폐 상피 내층을 가로질러 혈류로 횡단한다.
큰 입자 크기를 갖는 건조 분말 제형("DPF")은 더욱 적은 응집, 더욱 용이한 에어로졸화, 및 잠재적으로 더욱 적은 식균작용과 같은 개선된 유동성 특성을 가진다. 흡입 치료법을 위한 건조 분말 에어로졸은 주로 5 미크론 미만 범위의 평균 직경으로 일반적으로 생성되지만, 바람직한 범위는 공기역학 직경이 1 내지 10 미크론이다. 큰 "담체" 입자(약물 미함유)는 치료적 에어로졸과 동시-전달되어, 다른 가능한 이익 중에 효율적인 에어로졸화를 달성하는데 도움을 준다. 폐 전달을 위한 제형은 단층 인지질 소포, 리포좀 또는 지질단백질 입자를 포함한다. 핵산을 함유하는 제형 및 그러한 제형의 제조 방법은 당업자에게 널리 알려져 있다. 분무기, 계량 용량 흡입기 및 분말 흡입기를 포함하나 이들에 한정되지 않는 치료적 생성물의 폐 전달을 위해 설계된 매우 다양한 기계적 장치가 사용될 수 있으며, 이들 모두는 당업자에게 친숙하다.
3. 국부 및 경피 투여
활성 작용제 및 임의의 전달 비히클이 국부 적용될 수 있다. 국부 투여는 예를 들어, 피부로의 직접적인 투여에 의한, 또는 외과술 동안의 혈관구조로의, 또는 조직 또는 인공삽입물로의 직접적인 적용을 포함할 수 있다.
또한, 경피 제형이 제조될 수 있다. 이들은 전형적으로 연고, 로션, 분무 또는 패치일 것이며, 이들 모두는 표준 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 경피 제형은 침투 증진제를 포함할 수 있다. 국부 또는 경피 투여를 위한 표준 약제학적 부형제는 임의의 조제사로부터 입수가능하다.
4. 조절 전달형 매트릭스
조절 방출형 폴리머 장치는 폴리머 장치(막대, 원통, 필름, 디스크)의 이식 또는 주사(마이크로입자) 후에 전신 장기간 방출을 위해 제조될 수 있다. 매트릭스는 마이크로입자, 예를 들어 미소구체의 형태로 존재할 수 있고, 여기서 LYST 억제제는 고체 폴리머 매트릭스 또는 마이크로캡슐 내에 분산되고, 여기서 코어는 폴리머 쉘과 상이한 물질의 것이고, 하나 이상의 LYST 억제제(들)는 자연 상태에서 액체 또는 고체일 수 있는 코어에 분산되거나 현탁화된다. 본원에서 구체적으로 정의되지 않으면, 마이크로입자, 미소구체, 및 마이크로캡슐은 상호교환가능하게 사용된다. 대안적으로, 폴리머는 수 나노미터 내지 4 센티미터 범위의 얇은 슬래브(slab) 또는 필름, 연마 또는 다른 표준 기술에 의해 제조된 분말, 또는 심지어 겔, 예를 들어 하이드로겔로서 제조될 수 있다.
비-생분해성 또는 생분해성 매트릭스는 개시된 LYST의 억제제의 전달을 위해 사용될 수 있지만, 생분해성 매트릭스가 바람직하다. 이들은 천연 또는 합성 폴리머일 수 있지만, 분해 및 방출 프로파일의 더 나은 특성화로 인하여, 합성 폴리머가 바람직하다. 폴리머는 방출이 요망되는 기간에 기초하여 선택된다. 일부 경우에, 선형 방출이 가장 유용할 수 있지만, 다른 경우에, 펄스 방출 또는 "벌크 방출"은 더욱 효율적인 결과를 제공할 수 있다. 폴리머는 (전형적으로 최대 약 90 중량%의 물을 흡수하는) 하이드로겔의 형태로 존재할 수 있으며, 임의로 다가 이온 또는 폴리머와 가교될 수 있다.
매트릭스는 용매 증발, 분무 건조, 용매 추출 및 당업자에게 알려진 다른 방법에 의해 형성될 수 있다. 생침식성 미소구체는 예를 들어 문헌[Mathiowitz and Langer, J. Controlled Release 5:13-22 (1987)]; 문헌[Mathiowitz, et al., Reactive Polymers 6:275-283 (1987)]; 및 문헌[Mathiowitz, et al., J. Appl . Polymer Sci . 35:755-774 (1988)]에 기재된 바와 같이 약물 전달을 위한 미소구체를 제조하기 위해 개발된 임의의 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 장치는 이식 또는 주사 영역을 치료하기 위하여 국소 방출을 위해 제형화될 수 있으며, 이는 전형적으로 전신의 치료를 위한 투여량보다 훨씬 더 적은 투여량을 전달할 것이다. 또한, 장치는 국소 또는 전신 전달을 위해 제형화될 수 있다.
혈관구조, 혈관 평활근 세포 또는 위치 또는 혈병 또는 혈전증에 카고(cargo), 예를 들어, 약물 및 항체를 전달하기 위해 설계된 마이크로 및 나노입자가 해당 분야에 알려져 있다. 예를 들어, 온라인 공개된(2005년 12월) 문헌[Wickline, et al., Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology, 26:435-441 (2006)] 및 미국 공개 출원 제2002/0168320호, 제2003/0086867호, 제2003/0129136호, 제2004/0058951호, 제2004/0115192호, 제2006/0147380호, 제2006/0239919호, 제2007/0140965호, 제2007/0202040호, 제2007/0258908호, 제2008/0175792호, 제2008/0247943호 및 제2013/0064765호를 참조한다.
예를 들어, 이전에 인공 대용 혈액으로 고려되는 퍼플루오로카본 나노입자기 분자적 영상화 및 표적화된 약물 전달을 위한 플랫폼 기술, 즉, 소위 "치료진단" 기술로 개발되었다. 직경이 공칭 250 ㎚인 이들 지질-캡슐화 입자는 정맥내 투여될 수 있으며, 전형적으로 크기에 의해 온전한 혈관구조에 제한된다.
일부 구현예에서, 전달 비히클은 리포좀이다. LYST 억제제가 항체, 단백질 또는 소분자이면, 바람직한 전달 비히클은 리포좀일 수 있다. 리포좀은 특정 세포 유형, 예를 들어, 대식구 세포로의 개시된 LYST 억제제의 직접적인 전달을 위해 개시된다. 대식구 세포는 리포좀을 내재화시켜, 대식구의 세포내 구획으로의 하나 이상의 억제제의 전달을 야기할 수 있다. 리포좀의 제조에 적합한 방법, 재료 및 지질은 해당 분야에 알려져 있다. 리포좀 전달 비히클은 다수의 공급처로부터 상업적으로 입수가능하다. 리포좀은 단일의 지질 이중층(즉, 리포좀은 단층일 수 있음) 또는 몇몇의 동심원 지질 이중층(즉, 리포좀은 다층일 수 있음)으로부터 형성될 수 있다. 리포좀은 단일의 지질로부터 형성될 수 있지만; 일부 구현예에서, 리포좀은 1개 초과의 지질의 조합으로부터 형성된다. 지질은 생리학적 pH에서 중성, 음이온 또는 양이온일 수 있다.
적합한 중성 및 음이온성 지질은 스테롤 및 지질, 예를 들어, 콜레스테롤, 인지질, 리소지질, 리소인지질 및 스핑고지질을 포함한다. 중성 및 음이온성 지질은 1,2-디아실-글리세로-3-포스포콜린을 포함하는 포스파티딜콜린(PC)(예를 들어, 난 PC, 대두 PC); 포스파티딜세린(PS), 포스파티딜글리세롤, 포스파티딜이노시톨(PI); 당지질; 스핑고인지질, 예를 들어, 스핑고미엘린, 스핑고당지질(1-세라미딜 글루코시드로도 알려져 있음), 예를 들어, 세라미드 갈락토피라노시드, 강글리오시드 및 세레브로시드; 지방산, 카르복실산 기를 함유하는 스테롤, 예를 들어, 콜레스테롤 또는 그의 유도체; 및 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민 또는 1,2-디올레오일글리세릴 포스파티딜에탄올아민(DOPE), 1,2-디헥사데실포스포에탄올아민(DHPE), 1,2-디스테아로일포스파티딜콜린(DSPC), 1,2-디팔미토일포스파티딜콜린(DPPC) 및 1,2-디미리스토일포스파티딜콜린(DMPC)을 포함하는 1,2-디아실-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민을 포함하나 이들에 한정되지 않는다. 트리메틸 암모늄 염은 TAP 지질로, 예를 들어, 메틸설페이트 염으로도 지칭된다. 적합한 TAP 지질은 DOTAP(디올레오일-), DMTAP(디미리스토일-), DPTAP(디팔미토일-) 및 DSTAP(디스테아로일-)를 포함하나 이들에 한정되지 않는다. 다른 적합한 양이온성 지질은 디메틸디옥타데실 암모늄 브로마이드(DDAB), 1,2-디아실옥시-3-트리메틸암모늄 프로판, N-[1-(2,3-디올로일옥시)프로필]-N,N-디메틸 아민(DODAP)을 포함한다. 다른 적합한 지질은 상기 기재된 중성, 음이온성 및 양이온성 지질의 PEG화 유도체를 포함한다. 하나 이상의 PEG화 지질 유도체의 혼입은 그의 표면 상에 폴리에틸렌 글리콜 쇄를 나타내는 리포좀을 초래할 수 있다. 생성된 리포좀은 그들의 표면 상에 PEG 쇄가 결여된 리포좀과 비교하여, 생체내에서 증가된 안정성 및 순환 시간을 가질 수 있다.
LYST 억제제가 핵산 또는 벡터이면, 전달 비히클은 바이러스 벡터, 예를 들어, 상업적으로 입수가능한 제제, 예를 들어, 아데노바이러스 벡터(Quantum Biotechnologies, Inc. (Laval, Quebec, Canada))일 수 있다. 바이러스 벡터 전달은 바이러스 시스템, 예를 들어, 재조합 레트로바이러스 게놈을 포장할 수 있는 레트로바이러스 벡터 시스템을 통해 이루어질 수 있다(예를 들어, 문헌[Pastan et al., (1988) Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A. 85:4486]; 문헌[Miller et al., (1986) Mol. Cell. Biol. 6:2895] 참조). 그 다음, 재조합 레트로바이러스를 사용하여, 감염시키고, 그에 의해, 감염된 세포에 LYST 억제제를 인코딩하는 핵산을 전달할 수 있다. 포유류 세포로의 변경된 핵산의 정확한 도입 방법은 물론 레트로바이러스 벡터의 이용에 제한되지 않는다. 아데노바이러스 벡터(문헌[Mitani et al., Hum. Gene Ther . 5:941-948 (1994)]), 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터(문헌[Goodman et al., Blood 84:1492-1500 (1994)]), 렌티바이러스 벡터(문헌[Naidini et al., Science 272:263-267 (1996)]), 위형(pseudotyped) 레트로바이러스 벡터(문헌[Agrawal et al., Exper . Hematol . 24:738-747 (1996)])의 이용을 포함하는 다른 기술이 이러한 절차를 위해 광범위하게 이용가능하다.
또한, 물리적 형질도입 기술, 예를 들어, 리포좀 전달 및 수용체-매개된 및 다른 엔도시토시스 메커니즘이 이용될 수 있다(예를 들어, 문헌[Schwartzenberger et al., Blood 87:472-478 (1996)] 참조). 상업적으로 입수가능한 리포좀 제제, 예를 들어, LIPOFECTIN, LIPOFECTAMINE(GIBCO-BRL, Inc., Gaithersburg, Md.), SUPERFECT(Qiagen, Inc. Hilden, Germany) 및 TRANSFECTAM(Promega Biotec, Inc., Madison, Wis.) 및 해당 분야의 표준 절차에 따라 개발된 다른 리포좀이 널리 알려져 있다. 또한, 개시된 핵산 또는 벡터는 전기천공법, Genetronics, Inc.(San Diego, Calif.)로부터 이용가능한 기술에 의해, 및 소노포레이션(sonoporation) 또는 초음파분해 장치(ImaRx Pharmaceutical Corp., Tucson, Ariz.)의 수단에 의해 생체내에서 전달될 수 있다. 개시된 조성물 및 방법은 이들 또는 다른 통상적으로 사용되는 임의의 유전자 전달 방법과 함께 사용될 수 있다.
5. 이식편 및 의료 장치
LYST의 억제에 의한 면역조절을 위한 개시된 조성물은 의료 장치상으로 코팅되거나, 그 내로 혼입되거나, 생체 외에서 이식가능한 혈관 이식편을 전처리하기 위하여 사용될 수 있다.
이식편
LYST 억제제를 사용하여 대상체에서의 이식 이전에 생체 외에서 혈관 이식편을 전처리할 수 있다. 하나 이상의 LYST 억제제 및 임의로 전달 비히클을 포함하는 조성물은 그들이 부착되고, 약물 치료를 위한 최적의 위치에 조직 또는 이식편의 도처에 분포되게 보장하는 방법에 의해 조직에 적용될 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 LYST 억제제(들)는 관심 영역으로 부착되거나, 연장된 기간 동안 국소 치료를 제공하기에 충분한 약물 로드를 지니거나, 요망되는 속도 또는 일정으로 LYST 억제제를 방출시키거나, 최적의 정도로 조직 또는 이식편 내로 침투되거나, 그들의 조합이도록 설계된 나노입자, 마이크로입자, 리포좀, 미셀, 에멀젼, 겔 또는 코팅을 사용하여 전달된다.
또한, 외과술에 사용하기 위한 이식편은 세포를 생체외에서 생분해성 스캐폴드상으로 씨딩함으로써 형성될 수 있다. 이식편은 자가, 예를 들어, 복재 정맥 또는 노동맥; 보존된 자가, 예를 들어, 동결보존된 정맥; 동종이계; 이종; 또는 합성, 예를 들어, 우븐(woven) 폴리에스테르, 폴리우레탄(LYCRA®), 폴리테트라플루오로에틸렌(PTFE), GORE-TEX® 또는 폴리에틸렌 테레프탈레이트(DACRON®)일 수 있다. 내흉동맥, 노동맥 또는 하복 동맥을 사용한 동맥 동종이식편은 유용한 내구성 혈관 도관의 예이다. 예시적인 이식편은 하기에 논의되어 있다.
조직 조작 혈관 이식편
LYST의 하나 이상의 억제제를 포함하는 조직 조작 혈관 이식편(TEVG)이 개시된다. 조직-조작 혈관 이식편(TEVG)은 선천적 심장 외과술의 분야의 진전에 있어서 장래성이 크며, 여기서, 그들의 성장 능력은 그의 가장 완전한 능력까지 사용될 수 있다. 예를 들어, TEVG는 변형된 폰탄 외과술(modified Fontan surgery)을 겪고 있는 환자에서 하대 정맥을 폐 동맥으로 연결하는 혈관 도관으로 사용하기 위해 설계될 수 있다. 단일의 심실 비정상을 갖는 25명의 환자에서 TEVG의 이용을 평가하는 파일롯 연구의 장기간(10년 초과) 결과에 의해, 이식편 관련 사망 또는 이식편 기능상실이 입증되지 않았다. 또한, 그것은 TEVG의 성장능을 확인시켜주며, 이는 그것이 성장능을 갖는 처음의 인공 이식편이 되게 한다. 주요 이식편-관련 합병증은 환자의 대략 30%에 영향을 미치는 협착증이었으며, 16%(4/25)가 위험 협착증을 치료하기 위해 혈관성형술을 필요로 하였다.
일 구현예에서, TEVG는 폴리글리콜산-섬유 튜브로부터 제작된 생분해성 관상 스캐폴드로부터 형성된다. 튜브는 코폴리머, 예를 들어, 50:50 비의 폴리락트산(PLA) 및 폴리-카프로락톤으로 코팅될 수 있다. 대상체로의 이식 이전에 스캐폴드에 세포가 씨딩될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포는 의도된 수여자로부터의 자가 세포이다.
조직 조작 혈관 이식편(TEVG)으로의 대식구의 과도한 침윤이 반흔형성을 촉진시켜, 혈관 비대, 폐색 및 협착증을 초래하는 것이 확립되어 있다. 따라서, 본원에 기재된 조성물 및 방법을 사용하여 하나 이상의 LYST 억제제를 국소로, 그리고 조절된 방식으로 TEVG에 전달하여, 대식구에 의한 침윤을 예방하거나 억제할 수 있다.
우회로 이식편
LYST의 하나 이상의 억제제를 포함하는 우회로 이식편이 개시된다. 통상의 형태의 우회술은 관상동맥으로의 자가-이식을 위해 다리로부터 복재 정맥을 절제하는 것을 포함한다. 유의미한 수의 경우에, 이들 이식편은 대개 신생내막 과다형성에 의해 야기되는 재협착증으로 인하여 실패한다. 본원에 기재된 조성물 및 방법을 사용하여 하나 이상의 LYST 억제제를 국소로, 그리고 조절된 방식으로 자가 이식편에 전달할 수 있다. 억제제는 외과술 이전에, 그와 동시에, 및/또는 그 직후에 투여될 수 있다. 복재 정맥의 절제 후에, 조직은 (종종) 흉부 개방 및 이식편 이식을 위한 준비 동안 수시간 동안 염수 중 현탁화될 수 있다. 하나 이상의 LYST 억제제 및 임의의 표적화 신호, 전달 비히클 또는 그들의 조합을 포함하는 조성물은 이러한 기간 동안 복재 정맥과 인큐베이션될 수 있다.
동정맥 이식편
LYST의 하나 이상의 억제제를 포함하는 동정맥 이식편이 개시된다. 미국에서 말기 신장병이 증가하고 있다. 혈액투석 접근의 이환율은 환자를 위한 주요 삶의 질 문제를 남겨두고; 그것은 또한, 사회에 상당한 비용을 제시한다. 고유 동정맥루(AVF)는 선택된 도관을 남겨 두어, 혈액투석을 위한 접근을 제공하고, 다른 옵션, 예를 들어, 인공삽입 AVG와 비교하여 뛰어난 결과를 제공한다. 불행히도, 각 개체는 제한된 수의 적합한 위치 및 혈관으로 인하여 생성될 수 있는 고유 AVF의 수가 제한된다. 말기 신장병이 있는 환자가 통상 중증 동반이환을 가져, 삶을 위한 진단 및 치료를 위한 광범위한 정맥천자를 필요로 하기 때문에 접근 위치가 제한된다. 일차 AVF에 대한 모든 옵션을 소모한 환자에서, 새로운 접근 위치는 AV 이식편을 사용해야 한다. 이들 이식편은 신생내막 과다형성에 의한 재협착증에 감수성이어서, 그들의 효율성이 제한된다. 하나 이상의 LYST 억제제를 포함하고, 임의로, 표적화 신호, 전달 비히클 또는 그의 조합을 포함하는 조성물을 이식편 상에서 인큐베이션시키는 것은 외과술시에 행해질 수 있다.
의료 장치
일부 구현예에서, 하나 이상의 LYST 억제제를 포함하는 조성물이 의료 장치 또는 그의 요소 상으로 코팅되거나 또는 그 내로(예를 들어, 혈관 스텐트 내의 폴리머 저장소 내로) 혼입되어, 대상체에서 혈관 증식 장애, 예를 들어, 신생내막 형성을 감소시키거나 억제한다. 장치는 대상체 내로 일시적으로 삽입되는 장치, 또는 영구적으로 이식되는 장치일 수 있다. 일부 구현예에서, 장치는 외과술 장치이다.
의료 장치의 예는 니들, 캐뉼라, 카테터, 션트, 풍선 및 이식물, 예를 들어, 스텐트 및 밸브를 포함하나 이들에 한정되지 않는다.
일부 구현예에서, LYST 억제제 또는 약제학적 조성물은 억제제를 재협착증 또는 다른 혈관 증식 장애와 같은 질환을 예방하거나 치료하기 위한 위치에 바로 적용할 수 있는 의료 장치상으로의 그의 혼입을 가능하게 하도록 제형화될 수 있다. LYST 억제제 또는 그의 약제학적 조성물은 그것을 의료 장치 상의 코팅 내에 포함시킴으로써 제형화될 수 있다. 사용될 수 있는 다양한 코팅, 예를 들어, 규정된 기간에 걸쳐 억제제를 방출할 수 있는 폴리머 코팅이 존재한다. 억제제 또는 그의 약제학적 조성물은 의료 장치 내에 직접 매립될 수 있다. 일부 구현예에서, LYST 억제제는 그의 방출 및 전달을 용이하게 하는 전달 비히클, 예를 들어, 마이크로입자 또는 리포좀에서 장치 상으로 또는 그 내로 코팅된다.
스텐트
일부 구현예에서, 의료 장치는 혈관 이식물, 예를 들어, 스텐트이다. 스텐트는 혈관 제약을 예방하거나 제거하기 위해 의약에 사용된다. 스텐트는 제한된 혈관이 넓어지도록 제한된 혈관 내로 삽입될 수 있다. 그러한 혈관 이식물을 사용한 경험은, 인접 세포의 과도한 성장이 특히 이식물의 말단에서 다시 혈관의 제한을 초래하는 것을 나타내며, 이것은 이식물의 효율성의 감소를 초래한다. 스텐트가 동맥경화 협착증의 제거를 위하여 인간 동맥 내로 삽입되면, 혈관 이식물의 말단에서 내막 과다형성이 1년 내에 발생할 수 있으며, 재생된 협착증을 초래한다.
따라서, 일부 구현예에서, 스텐트는 LYST 억제제 및 임의로 전달 비히클을 포함하는 조성물이 코팅되거나 로딩된다.
많은 스텐트는 상업적으로 입수가능하거나 다르게는 해당 분야에 알려져 있다. 스텐트는 적합한 물질의 얇은 관으로부터, 또는 적합한 물질의 얇은 판으로부터 형성, 즉, 에칭되거나 절단되고, 관으로 감길 수 있다.
스텐트에 적합한 물질은 스테인리스 강, 이리듐, 백금, 금, 텅스텐, 탄탈, 팔라듐, 은, 니오븀, 지르코늄, 알루미늄, 구리, 인듐, 루테늄, 몰리브데늄, 니오븀, 주석, 코발트, 니켈, 아연, 철, 갈륨, 망간, 크롬, 티탄, 알루미늄, 바나듐 및 탄소 및 그의 조합, 합금 및/또는 적층물을 포함하나 이들에 한정되지 않는다. 예를 들어, 스텐트는 코발트 합금, 예를 들어, L605 또는 MP35N®, 니티놀(Nitinol)(니켈-티탄 형상 기억 합금), ABI(팔라듐-은 합금), Elgiloy®(코발트-크롬-니켈 합금) 등으로부터 형성될 수 있다. 또한, 스텐트가 함께 적층되는 2개 이상의 물질, 예를 들어, MP35N®과 적층되는 탄탈으로부터 형성될 수 있음이 고려된다. 또한, 스텐트는 동심 층의 상이한 금속, 합금 또는 다른 물질을 갖는 와이어로부터 형성될 수 있다. 또한, 스텐트의 구현예는 중공관 또는 다른 물질이 충전된 관으로 형성될 수 있다. 상기 언급된 물질 및 적층물은 예로 의도되며, 어떠한 방식으로든 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
스텐트는 약물-용출 스텐트일 수 있다. 치료 위치에 치료 물질을 동시에 전달하면서, 벽 조직에 인공의 방사상 지지체를 제공하는 다양한 약물 용출 스텐트가 해당 분야에 알려져 있다. 스텐트를 포함하는 관강내 장치는 그들의 외면 상에 물질, 예를 들어, 약물 방출제, 성장 인자, 항체 등으로 코팅될 수 있다. 또한, 중심 관강으로부터의 약물 용출을 가능하게 하도록 측벽을 통과하여 절단된 홀(hole) 또는 포트(port)를 갖는 중공관형 구조를 갖는 스텐트가 개발되었다. 비록 스텐트의 중공 성질은 약물 용액이 중심 관강에 로딩되어, 스텐트의 측벽의 포트 또는 홀을 통해 전달되게 하지만, 중공관형 구조는 혈관 내에 적당한 스캐폴딩을 제공하기에 적합한 기계적 세기를 갖지 않을 수 있다.
LYST 억제제를 용출시키는 스텐트가 개시된다. 일부 구현예에서, 장치에는 또한, LYST 억제제, 및 항-혈소판제, 항응고제, 항미생물제 및 항대사제를 포함하나 이들에 한정되지 않는 하나 이상의 추가의 치료제가 코팅되거나 함침된다.
본원에 개시된 조성물 및 방법으로 사용될 수 있는 예시적인 스텐트는 미국 특허 제5,891,108호, 제6,918,929호, 제6,923,828호, 제6,945,992호, 제6,986,785호, 제7,060,090호, 제7,144,419호, 제7,163,555호, 제7,323,008호, 제7,651,527호, 제7,655,034호, 제7,678,141호, 제7,744,645호, 제7,942,917호, 제8,001,925호, 제8,001,925호, 제8,034,099호, 제8,048,149호, 제8,066,760호, 제8,100,960호, 제8,157,855호, 제8,172,893호, 제8,182,524호, 제8,187,284호, 제8,187,322호, 제8,197,528호, 제8,206,432호, 제8,221,490호, 제8,231,669호, 제8,236,044호, 제8,252,048호, 제8,252,065호, 제8,257,425호, 제8,257,431호, 제8,292,945호, 제8,298,278호, 제8,298,280호, 제8,348,991호, 제8,348,992호, 제8,348,993호, 제8,353,952호, 제8,359,998호, 제8,361,140호, 제8,372,134호, 제8,372,138호, 제8,377,112호, 제8,388,676호, 제8,398,695호, 제8,414,637호, 제8,414,639호 및 제8,414,656호에 기재된 것들을 포함하나 이들에 한정되지 않는다.
생체인공삽입물
심장 판막, 인공 관절, 심박 조율기, 유치 카테터 및 미용 이식물을 포함하나 이들에 한정되지 않는 다수의 다른 인공삽입 장치는 하나 이상의 LYST의 억제제를 포함할 수 있다.
개시된 LYST 억제제가 생체인공삽입물의 존재와 관련된 염증 반응 및 섬유증식성 장애를 감소시키거나 억제할 수 있는 것으로 여겨진다. 따라서, 일부 구현예에서, 생체인공삽입물에는 LYST 억제제 및 임의로 전달 비히클을 포함하는 조성물이 코팅되거나 로딩된다.
IV. 사용 방법
개시된 LYST 억제제의 사용 방법이 제공된다. 당해 방법은 유효량의 하나 이상의 LYST 억제제를 포함하는 조성물을 대상체에게 투여하여, 대상체에서 LYST의 발현 또는 기능을 예방하거나, 감소시키거나, 억제하는 단계; 의료 장치 또는 혈관 이식편을 대상체로의 장치 또는 이식편의 삽입 또는 이식 후에, 유효량의 LYST 억제제를 포함하는 조성물로 전처리하여, 신생내막 형성을 예방하거나, 감소시키거나, 억제하는 단계; 또는 그들의 조합을 포함할 수 있다.
A. 치료할 장애 및 질병
LYST 억제제를 사용하여, 대식구, 혈소판 및 자연 살해 세포 기능을 포함하나 이들에 한정되지 않는 면역 기능을 변경시켜, 재생 유발 면역 환경을 생성할 수 있다. LYST 단백질의 전사, 번역 또는 기능을 억제하거나 차단하도록 설계된 방법을 포함하나 이들에 한정되지 않는 LYST 억제제의 사용 방법을 사용하여 면역 반응을 조절할 수 있다. 일부 구현예에서, 당해 방법은 예를 들어, 혈관 외과술 후에, 혈관 신생조직 형성을 촉진시키고, 신생내막의 형성을 억제하고, 혈관 개통성(patency)을 개선시킨다. 생물학적 및 합성 혈관 도관 둘 모두에서 내막 및 신생내막 과다형성을 예방하기 위한 LYST 억제제의 사용 방법이 제공된다. 당해 방법은 TEVG 협착증을 감소시키거나 예방하고, TEVG 기능을 개선시킬 수 있다.
추가로, LYST 억제제는 조직 재생을 촉진시키고, 상처 치유를 개선시키고, 이물질 반응을 조절하기 위하여 더 넓은 영향을 가질 수 있다. 따라서, 재생 의약 응용에 대한 부가물로서의 LYST 억제제의 사용 방법도 또한 기재된다. 일부 구현예에서, LYST 억제제의 사용 방법은 치유를 촉진시키고, 반응 형성을 예방하여, 예를 들어, 복부 외과술 후에 치유를 촉진시키고, 유착을 방지할 수 있다.
당해 방법은 조직 손상의 결과로서 생성되는 혈소판 유래 성장 인자(PDGF)의 양을 조절할 수 있다. 따라서, 당해 방법은 PDGF의 과도한 또는 원치 않는 발현과 관련된 질병을 치료할 수 있다.
또한, 당해 방법은 과도한 섬유증으로부터 초래되는 질병, 예를 들어, 간, 폐 또는 심장의 섬유증 질병을 예방하거나 치료할 수 있다. 마지막으로, 항-LYST 치료 방법은 이물질 반응을 변경시키고, 생체인공삽입물의 통합을 촉진시키지만, 그의 캡슐화를 차단하는 면역 조절을 초래할 수 있으며, 이에 따라, 장치, 예를 들어, 심박 조율기 또는 신경 자극기의 기능 및 수명 또는 대치 심장 판막 또는 인공 관절의 통합을 개선시킨다.
바람직한 구현예에서, 하나 이상의 LYST 억제제는 대상체에서 질병, 장애 또는 질환의 하나 이상의 증상을 감소시키거나, 억제하거나, 지연시키는데 효과적이다. 개시된 LYST 억제제는 매우 다양한 치료적 및 예방적 용도를 가지며, 예를 들어, 그들을 사용하여 손상 또는 다양한 외과술 절차 후의 혈관 증식 장애, 반흔형성 및 섬유증 질병을 치료하거나 예방할 수 있다. 과도한 반흔 또는 섬유증 조직의 존재를 특징으로 하는 질병을 치료하기 위한 LYST의 하나 이상의 억제제의 사용 방법이 기재된다. 항-혈소판 치료법을 위한, 예를 들어, 비정상적인, 과도한 또는 다르게는 바람직하지 않은 혈소판 활성 또는 PDGF 신호전달로부터 초래되는 질병을 치료하기 위한 하나 이상의 LYST 억제제의 사용 방법도 또한 제공된다.
혈관 증식 장애
일부 구현예에서, 개시된 LYST 억제제를 사용하여 혈관 증식 장애를 치료하거나 예방할 수 있다. 그러한 장애의 예는 죽상경화증에 수반되는 혈관 증식, 혈관내 장치 이식 후의 혈관 증식, 일반적으로 혈관재형성 절차 또는 A-V 션트 후에 발생하는 바와 같은 혈관 문합 위치에서의 혈관 증식, 경동맥내막절제술 후의 혈관 증식 및 이식 혈관병증을 포함하나 이들에 한정되지 않는다.
하나 이상의 LYST 억제제의 투여에 의한 혈관 증식 장애의 치료 또는 예방 방법이 제공된다. 당해 방법은 전형적으로, 대조군에 비하여, 대식구 세포의 침윤 또는 M1으로부터 M2 표현형으로의 대식구 세포의 전환, 또는 둘 모두를 감소시키거나 억제한다. 일부 구현예에서, 당해 방법은 혈관 신생조직 발생을 감소시키거나 억제하지 않고, 대식구 세포의 증식을 감소시키거나 억제한다. 대상체는 협착증, 재협착증 또는 다른 혈관 증식 장애를 갖거나, 재협착증 또는 다른 혈관 증식 장애의 위험이 있는 것으로 확인될 수 있으며, 예를 들어, 대상체는 혈관 외상, 혈관성형술, 외과술 또는 이식 동맥병증 등을 겪은 적이 있거나, 그를 겪고 있거나, 그를 겪을 것이다. 개시된 조성물을 사용하여 치료될 수 있는 질병, 장애 및 질환은 하기에 더욱 상세히 논의된다.
혈관 손상
일부 구현예에서, 하나 이상의 LYST 억제제는 혈관 외상 이전에, 그와 동시에, 또는 그 이후에 적용될 수 있다.
혈관 손상은 내피 노출 또는 기능이상, 염증 및 혈관 평활근 세포(VSMC)의 활성화 및 증식을 포함하는 사건의 캐스케이드를 촉발시킨다. 다수의 성장 인자 및 사이토카인은 기능이상 내피 세포, 염증 세포, 혈소판 및 VSMC에 의해 방출된다. 이들 성장 인자 및 사이토카인은 주화성, 세포 이동, 증식, 아폽토시스 및 매트릭스 조절을 매개하며, 다수의 혈관 증식 장애에 연루된다.
혈관 증식 질병 및 장애는 혈관벽에 대한 기계적, 생화학적 또는 면역학적 손상에 의해 개시될 수 있다. 전형적인 혈관 외상은 열상, 자창, 압궤 손상, 총상, 베인 상처, 직업적 상해, 낙하 및 자동차 사고 및 의료 중재술, 예를 들어, 외과술 또는 혈관성형술을 포함하나 이들에 한정되지 않는 둔기 손상 및 관통상 둘 모두와 관련된 것들을 포함한다.
일부 구현예에서, 대상체는 외과술을 겪은 적이 있거나, 이를 겪고 있거나, 이를 겪을 것이다. 외과술은 침습, 최소 침습 또는 경피 외과술을 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 대상체는 복부 대동맥류, 경동맥 협착증, 정맥류, 말초 동맥 폐쇄병, 급성 사지 허혈 또는 대동맥 박리를 치료하거나 회복하기 위한 외과술을 겪는다. 통상의 혈관 외과술은 개방 복부 대동맥류 복구, 혈관내 동맥류 복구(EVAR), 경동맥 내막절제술, 경동맥 스텐트 시술, 정맥 스트리핑, 경화요법 및 폼(foam) 경화요법, 정맥내 레이저 치료, 고주파 정맥 절제, 외래 정맥절제술, 스텐트 시술과 함께/없이 혈관성형술, 우회술 동맥내막절제술 죽종제거술, 풍선 색전제거술, 혈전제거술, 우회술, 개방 복구, 흉부 혈관내 동맥류 복구(TEVAR)를 포함하지만, 이들에 한정되지 않는다. 외과의는 하나 이상의 LYST 억제제를 외과술시에, 외과술 이전에 또는 외과술 이후에 외과술 위치에 적용하여, 상처 치유의 과정을 증진시키거나, 혈관 증식 장애, 예를 들어, 협착증 또는 재협착증을 야기하는 것들의 발생을 예방할 수 있다.
내막 과다형성
내막 과다형성은 혈관의 내피의 손상에 대한 생리학적 치유 반응이다. 내피층에 대한 손상은 혈소판의 응집, 섬유소의 침착을 촉발시키는 일련의 급성 및 만성 염증 반응을 촉발시키고, 백혈구를 상기 영역으로 유인한다(문헌[Murakami, et al., Am J Physiol ., 272:L197-L202 (1997)]; 문헌[Cotran, et al., J Am Soc Nephrol ., 1:225-235 (1990)]). 따라서, 신생혈관 형성 및 내막 과다형성을 유발하는 재생 과정은 면역-매개의 현상인 것으로 보이며, 이는 다른 인간 혈관 생물학적 과정, 예를 들어, 정맥 이식편 적응에서 단핵구-대식구에 대하여 제안된 역할과 유사하다(문헌[Ratliff and Myles, Arch. Pathol . Lab. Med. 113:772-776 (1989)]; 문헌[Motwani and Topol, Circulation 97:916-931 (1998)]).
협착증
내막 과다형성은 혈관의 투니카(Tunica) 내막의 비대를 야기하여, 혈관의 협착증의 합병증을 야기할 수 있다. 염증 및 응혈 유발 메커니즘의 활성화는 협착증의 개시 및 발생에 유의미하게 기여하는 것으로 여겨진다. 평활근 세포는 수 주 내지 수 개월 범위의 기간에 걸쳐, 손상된 혈관의 내측 영역으로부터 내막 영역으로 재배치된다. 이들 세포는 증식하고, 세포외 매트릭스를 침착시켜, 반흔 형성과 유사한 과정에서, 손상 위치에서 신생-내막을 형성한다(문헌[Fingerle, et al., Proc Natl Acad Sci., 86:8412 (1989)]; 문헌[Clowes, et al., Circ . Res., 56:139-145 (1985)]). 따라서, 강력한 치유 반응은 혈관벽의 내부 비대(내막 과다형성)를 야기하며, 결국에는 혈관 내강을 감소시켜, 협착증을 야기한다. 내막 과다형성의 형성은 이물질, 예를 들어, 혈관 내의 이식삽입물의 존재에 의해 가속화될 수 있으며, 혈관성형술, 우회술 및 이식 동맥병증 등을 포함하는 혈관내 중재술로부터 초래될 수 있다(문헌[Glagov, Circulation, 89:2888-2891 (1994)]).
따라서, 개시된 LYST 억제제를 사용하여, 내막 과다형성 및 협착증을 예방하는 방법이 제공된다.
재협착증
심장 혈관구조 또는 말초 순환계의 재협착증의 예방 또는 감소 방법이 제공된다. 혈관의 재협착증은 전형적으로 내막 과다형성에 기인한다. 외과술 장치, 예를 들어, 스텐트를 삽입하여, 협착된 혈관을 개방할 수 있지만, 스텐트 그 자체가 추가의 내막 과다형성을 자극할 수 있기 때문에, 이것은 문제가 있다. 또한, 과다형성 내막 조직은 맨 스텐트의 간극을 통해 성장하고, 혈관을 재협착시킬 수 있다. 피막형 스텐트는 이것이 발생하는 것을 예방할 수 있지만, 내막 과다형성이 여전히 스텐트의 말단에서 발생할 수 있으며, 스텐트의 말단에는, 혈관의 대부분의 자극이 존재한다. 내막 과다형성 유래의 협착증이 치료하기 종종 어렵기 때문에, 스텐트 내 재협착증이 있는 환자는 중증 합병증의 위험이 있다. 연질 죽상경화반과 달리, 이들 협착증은 경질이고, 풍선으로 확장시키기 위해 연장된 높은 팽창 압을 필요로 한다. 협착증은 종종 재발하며, 혈관의 반복된 확장은 반복된 내막 손상을 야기하고, 내막 치유 반응을 영속화시킨다.
따라서, 개시된 조성물, 장치 또는 이식편을 신생내막 형성을 감소시키거나 억제하여, 그에 의해, 대상체에서 재협착증 및 다른 혈관 증식 장애를 치료하거나 예방하기에 유효한 양으로 대상체에게 투여하여, 평활근 세포 증식, 이동 및 그들의 조합을 감소시키거나 억제할 수 있다. 일부 구현예에서, LYST 억제제를 함유하는 조성물을 사용하여 이식편 및 장치의 개통성을 증가시킬 수 있다. 따라서, LYST 억제제를 함유하는 조성물을 이식 이전에 또는 이식 이후에, 장치 및 이식편으로 또는 대상체로 투여하는 방법이 제공된다.
죽상경화증
죽상경화증은 염증, 혈관 증식 및 매트릭스 변경을 포함하는 다수의 과정을 포함한다(문헌[Dzau, et al., Nat Med,. 8(11) (2002)]에 검토). 죽상경화증에서, VSMC는 염증, 혈액으로부터 지질단백질의 보유, 및 반을 구성하는 섬유성 침착물의 발생을 야기한다. 염증은 죽상경화증의 모든 단계를 매개하는 것으로 보인다: 죽상반의 발생에서, VSMC는 염증 유발 매개체, 예를 들어, 단핵구 주화성 단백질을 생성하고, 혈액으로부터 지질단백질의 보유를 야기하는 매트릭스 분자를 합성하고; 반의 발생 후에, 국소 염증 환경은 콜라게나제 발현을 유도하고, 단백질 분해 억제제의 발현을 억제하여, 섬유성 캡을 약하게 하고, 파열되기 쉽게 할 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 개시된 LYST 억제제를 사용하여, 대상체에서 혈관 증식 장애를 치료하거나, 감소시키거나, 억제하거나 예방한다.
혈관성형술
일부 구현예에서, 대상체는 혈관성형술을 겪은 적이 있거나, 그것을 겪고 있거나, 그것을 겪을 것이다. 혈관성형술은 협착되거나 폐색된 동맥, 예를 들어, 죽상경화증의 결과로서 폐색된 동맥을 기계적으로 넓히는 기술이다. 일반적으로, 혈관성형술은 협착된 위치 내로 통과한 다음, 고정된 크기로 팽윤되는 풍선 카테터로 알려져 있는 가이드 와이어 상의 빈 찌부러진 풍선을 대상체의 혈관구조 내로 삽입하는 것을 포함한다. 풍선은 내부 백혈구/혈병 반 침착물 및 주변 근육 벽의 팽창을 강제하여, 개선된 흐름을 위해 혈관을 개방하고, 이어서, 풍선을 수축시키고, 철수시킨다. 혈관이 계속 개방되게 보장하기 위하여, 스텐트를 풍선삽입 시에 삽입하거나 삽입하지 않을 수 있다. 혈관성형술은 말초 혈관성형술(즉, 관상 동맥 외측, 예를 들어, 복부 또는 다리의 혈관), 관상동맥 혈관성형술, 신장 동맥 혈관성형술, 경동맥 혈관성형술 및 대뇌 동맥 혈관성형술을 포함한다.
일부 구현예에서, 대상체는 경피 경관 관상동맥 혈관성형술(PTCA)을 겪은 적이 있거나, 그것을 겪고 있거나, 그것을 겪을 것이다. PTCA의 이용은 심근 경색을 앓는 환자에서 치사율을 크게 감소시킨다(문헌[Fischman, et al., N Engl J Med., 331:496-501 (1994)]; 문헌[Elezi, et al., Circulation 98:1875-1880 (1998)]; 문헌[Bennett and O'Sullivan, Pharmacol Ther., 91:149-166 (2001)]). PTCA 동안, 내강 직경을 증가시키고, 흐름을 개선시키려는 시도로, 동맥벽을 그들의 원래의 직경의 수배로 확장시킨다. 불행히도, 이러한 기술은 시술 6개월 이내에 환자의 30 내지 40%에서 발생하는 높은 혈관 재협착 또는 재협착증의 발병률에 의해 방해받는다(문헌[Anderson et al., J Interv . Cardiol ., 6:187-202 (1993)]; 문헌[Fischman et al., N Engl J Med , 331:496-501 (1994)]; 문헌[Elezi et al., Circulation 98:1875-1880 (1998)]; 문헌[Bennett and O'Sullivan, Pharmacol Ther, 91:149-166 (2001)]; 문헌[Heckenkamp et al., J Cardiovasc . Surg . (Torino), 43:349-357 (2002)]).
성공적인 PTCA 후의 재협착증의 예방은 폐색성 관상 동맥 질병의 치료에서 가장 도전적인 업무 중 하나로 남아 있다. 이러한 증식 반응을 개선하기 위한 시도는 관상동맥 스텐트의 이용을 수반하며, 이는 관상동맥 혈관재형성 중재술 절차 후에 단기간 및 장기간 결과 둘 모두를 유의미하게 개선시킨다. 스텐트 배치를 사용하여 재협착증 비율의 감소에도 불구하고, 재협착증은 여전히 6개월 이내에 환자의 15 내지 30%에서 발생한다(문헌[Fischman et al., N Engl J Med , 331:496-501 (1994)]; 문헌[Elezi et al., Circulation, 98:1875-1880 (1998)]). 관상동맥 스텐트 시술이 더욱 빈번하게 되고, 덜 이상적인 병변에서 사용됨에 따라, 이러한 스텐트 내 재협착증의 발병률은 증가될 것으로 예상된다. 개시된 LYST 억제제를 사용하여, 혈관성형술 후에 재협착증, 복부 유착 및 반흔형성을 치료하거나 예방할 수 있다.
이식 동맥병증
일부 구현예에서, 대상체는 이식을 겪은 적이 있거나, 그를 겪고 있거나, 그를 겪을 것이다. 만성 이식 동맥병증(CTA)은 심장 또는 신장 이식 후의 후기 동종이식편 소실의 주요 원인이다(문헌[Taylor, et al., J. Heart Lung Transplant., 24:945-955 (2005)], 문헌[Burke, et al., Transplantation, 60:1413-1417 (1995)]; 문헌[Cornell and Colvin, Curr. Opin. Nephrol Hypertens., 14:229-234 (2005)]). 따라서, 일부 구현예에서, 개시된 LYST 억제제를 사용하여 이식 수여자에서 이식 동맥병증을 감소시키거나, 억제하거나, 예방한다.
과도한 반흔형성
개시된 LYST 억제제를 사용하여, 예를 들어, 손상, 질병 또는 외과술 절차 후에, 켈로이드의 형성 및 복부 유착을 포함하는, 반흔형성을 치료하거나, 지연시키거나, 예방할 수 있다.
하나 이상의 LYST 억제제를 사용하여, 손상 또는 외과술 위치에서 혈관 성장의 양을 감소시키기 위한 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 당해 방법은 반흔형성, 켈로이드 또는 유착을 유발하는 고밀도 세포 및 연결 조직의 형성을 예방하거나 감소시킨다. 바람직하게는, 하나 이상의 LYST 억제제의 양은 상처 치유를 방지하지 않는다.
비대성 반흔형성
일부 구현예에서, 개시된 LYST 억제제를 사용하여, 비대성 반흔을 치료하거나, 감소시키거나, 억제하거나, 그의 발생을 예방한다. 조직 반응이 정상적인 회복 및 치유에 필요한 반흔 조직의 양과의 비율을 벗어나는 경우에 과도한 반흔형성이 발생할 수 있다. 심부 상처가 유의미한 진피의 소실을 포함하는 경우, 비대성 반흔 조직이 상처 위치에 침착될 수 있다. 반흔 조직은 고밀도의 세포, 증가된 부피의 연결 조직 및 증가된 혈관의 수로부터 초래되는 증가된 혈관 공급을 함유한다. 비대성 반흔은 조직 회복의 리모델링 단계에서의 결함의 결과로 발생할 수 있다(문헌[Ehrlich and Kelley, Plast Reconstr Surg., 90:993-998 (1992)]).
개시된 LYST 억제제를 사용하여, 상처 영역에서 혈관의 발생을 약화시키거나 예방하여, 비대성 반흔형성의 발생을 감소시키거나, 지연시키거나, 예방할 수 있다.
켈로이드
일부 구현예에서, 개시된 LYST 억제제를 사용하여 켈로이드 반흔을 치료하거나, 그를 감소시키거나, 그를 억제하거나, 그의 발생을 예방한다. 켈로이드 반흔은 손상의 경계를 넘어서 융기되거나 비대된 반흔이며, 연장된 기간에 걸쳐 계속 발생하고, 확대될 수 있다. 켈로이드 성장의 발생 동안, 상처 회복에 사용되는 콜라겐은 과다성장하여, 원래의 반흔의 것보다 수배 더 큰 덩어리를 생성한다.
LYST 억제제를 사용하여 피부 손상, 예를 들어, 귀 피어싱, 열상, 화상, 백신접종 또는 염증 과정과 관련된 켈로이드 발생을 예방할 수 있다. LYST 억제제는 필요에 따라 국소 또는 국부 적용될 수 있다.
유착
유착은 종종 외과술 동안 손상의 결과로서 조직과 기관 사이에 형성하는 섬유대(fibrous band)이다. 그들은 통상 가상 공간, 예를 들어, 복강을 가로질러, 보통 연결되지 않는 조직을 연결시키는 내부 반흔 조직으로 생각될 수 있다. 복부 외과술 또는 외상 후에, 섬유소 용해 효소의 생성 또는 활성은 손상 때문에 절충될 수 있으며, 섬유성 유착이 발생한다. 이것이 발생된다면, 조직 회복 세포, 예를 들어, 대식구, 섬유아세포 및 기타 혈관 세포는 섬유성 유착물을 침투하여 콜라겐 및 다른 매트릭스 물질을 침착시켜, 영구적인 섬유성 유착물을 형성한다.
개시된 LYST 억제제에 의해 치료되거나, 감소되거나, 예방될 수 있는 예시적인 유착은 복부 유착, 자궁내막증으로부터 초래되는 골반 유착을 포함하는 골반 유착, 심막 유착, 경막외 유착 및 힘줄주위 유착을 포함한다. 유착의 증상은 유착 위치에서의 복부 통증, 봉쇄, 만성 골반통, 경련, 구역, 제한된 유연성 및 염증 또는 팽윤을 포함할 수 있다.
다른 섬유증식성 질병
일부 구현예에서, 하나 이상의 LYST 억제제를 적용하여, 섬유증식성 질병을 치료할 수 있다.
섬유증은 염증 및/또는 손상에 반응하여 기관 또는 조직에서 과도한 섬유성 연결 조직이 침착하는 것이다(문헌[Wynn, Nat Rev Immunol., 4(8): 583-594 (2004)]). 손상된 조직의 회복은 조직 손상 위치에서의 세포외 매트릭스 성분의 생성을 포함한다. 대식구 및 손상된 조직은 사이토카인 및 TGF 베타를 방출시키며, 이는 세포를 자극하여, 콜라겐 및 글리코사미노글리칸을 포함하는 연결 조직을 축적시킨다. 그러나, 이러한 과정의 조절이상은 이러한 연결 조직의 과도한 침착을 야기할 수 있으며, 이는 기저 기관의 구조 및 기능을 철폐시켜, 섬유증 질병의 병적 측면을 야기할 수 있다. 섬유증은 간, 폐, 심장 및 신장을 포함하는 신체 내의 많은 조직에서 발생할 수 있다. 주요-기관 섬유증 및 섬유증식성 장애의 치료 방법이 제공된다.
간 경화증
간의 섬유증은, 간세포가 경화증으로 알려져 있는 과정에서 비기능성 반흔 조직으로 대체됨에 따라, 간 손상을 야기한다(문헌[Masuoka, et al. Ann NY Acad . Sci., 1281:106-122 (2013)]). 간 섬유증 및 생성된 경화증은 사실상 모든 만성 간 질병의 최종 공통 경로를 나타내며, 간 기능부전, 간암 및 간-관련 사망을 야기할 수 있다. 반흔 조직이 정상 유조직을 대체함에 따라 간 경화증이 발생한다. 급성 간 손상(예를 들어, 바이러스성 간염) 후에, 유조직 세포는 재생하고, 염증 반응과 관련된 과정에서 괴사 또는 아폽토시스 세포를 대체한다. 간 손상이 지속된다면, 간 재생 과정은 결국 실패하고, 간세포는 섬유성 콜라겐을 포함하는 풍부한 세포외 매트릭스로 대체된다. 진행된 섬유증은 섬유성 콜라겐(주로 콜라겐 I 및 콜라겐 III)이 풍부한 세포외 기질 단백질의 축적을 특징으로 한다(문헌[Iredale, J Clin Invest., 117(3):529-548 (2007)]; 문헌[Bataller and Brenner, J Clin Invest, 115(2):209-218 (2005)]에 검토). 간 성상 세포(HSC)를 활성화시켜, 콜라겐을 분비하는 염증 세포는 섬유증 간 질병에서의 중요한 인자이다. 단핵구 수의 증가는 질병 진행, 구체적으로, 비-경화성으로부터 경화성 질병으로의 진행과 관련이 있다.
유효량의 하나 이상의 LYST 억제제를 대상체에게 투여하여, 미처리 대조군 대상체에 비하여 간 질병의 하나 이상의 증상을 감소시키거나, 줄이거나, 제한하거나, 예방하는 단계를 포함하는 대상체에서의 간 섬유증의 치료 방법이 제공된다. 간 질병의 전형적인 증상은 증가된 복부 종괴, 피로, 복부 통증, 악액질, 황달, 림프 폐색 및 복수의 축적을 포함하는 폐쇄성 증후군, 빈혈 및 요통을 포함하지만 이들에 한정되지 않는다(문헌[Sun, et al., Clin J. Oncol. Nurs., 12:759-766 (2008)]). 일부 구현예에서, 하나 이상의 LYST 억제제는 미처리 대조군 대상체에 비하여 간 질병이 있는 대상체에서 간 기능을 개선시키거나, 염증을 감소시키거나, 섬유증을 감소시키거나, 그들의 조합이다.
폐 섬유증
폐 섬유증은 현저한 구조적 왜곡 및 폐포 공간의 소실을 야기하는 폐 내의 과도한 섬유성 조직의 침착을 특징으로 하며, 이는 기관 기능상실 및 궁극적으로 호흡 기능상실로 인한 사망을 야기한다. 폐 섬유증은 정상 폐 유조직이 섬유성 조직으로 점진적으로 교환되는 것을 포함하여, 산소 확산 능력의 비가역적인 감소를 야기한다.
폐 섬유증(잠재 섬유성 폐포염으로도 알려져 있음)은 간질성 폐 질병(ILD), 예를 들어, 연결 조직 질병 또는 만성 염증 질병(예를 들어, 류마티스 관절염), 감염, 특발성 폐 질병 및 악성종양과 관련이 있다. 흡입된 독소, 약제 및 방사선 요법에 대한 환경적 노출도 또한 폐 섬유증과 관련이 있다.
유효량의 하나 이상의 LYST 억제제를 대상체에게 투여하여, 미처리 대조군 대상체에 비하여 폐 섬유증의 하나 이상의 증상을 감소시키거나, 줄이거나, 제한하거나, 예방하는 단계를 포함하는 대상체에서의 폐 섬유증의 치료 또는 예방 방법이 제공된다. 전형적인 증상은 만성적인 마른 기침, 숨가쁨, 피로 및 쇠약, 흉부 불편, 식욕 감소 및 체중 감소를 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 LYST 억제제는 미처리 대조군 대상체에 비하여 폐 섬유증이 있는 대상체에서 호흡 기능을 개선시키거나, 염증을 감소시키거나, 섬유증을 감소시키거나, 그들의 조합이다.
기타 섬유증 질병
유효량의 하나 이상의 LYST 억제제를 대상체에게 투여하여, 미처리 대조군 대상체에 비하여 과도한 섬유증의 하나 이상의 증상을 감소시키거나, 줄이거나, 제한하거나, 예방하는 단계를 포함하는 대상체에서의 과도한 섬유증을 특징으로 하는 질병의 치료 또는 예방 방법이 제공된다. 개시된 방법에 의해 치료될 수 있는 예시적인 질병 및 장애는 신장경화증, 피부경화증, 샤프 증후군, 신경섬유종증, 골수섬유증, 전신 경화증, 듀피트렌 구축(Dupuytren's contracture) 및 황반 변성을 포함한다. 또한, 수술 합병증과 관련된 반흔형성 및 섬유증, 화학치료제 또는 다른 약물-유도 섬유증, 방사선-유도 섬유증, 상해 및 화상으로부터 초래되는 섬유증의 치료 방법이 제공된다.
혈소판 기능과 관련된 질병
과도한 또는 유해한 혈소판 활성화 및/또는 혈소판 유래 성장 인자(PDGF) 매개의 신호전달을 특징으로 하는 질병의 치료 또는 예방 방법이 제공된다. 혈소판이 혈액 응고 과정에 중요한 역할을 수행하기 때문에, 혈소판에 대해 지향된 치료법은 심장 및 뇌의 혈관 질병에 대한 전투에서 가장 중요한 것 중 하나이다. 혈소판의 부적절한 또는 과도한 활성화는 무손상 혈관 내에 혈병 형성을 야기할 수 있다(혈전증). 떨쳐 나와 신체 주변을 이동하기 시작한 혈병(혈전 색전증)은 혈관 폐쇄 또는 폐색, 울혈, 허혈, 뇌졸중 및/또는 사망을 야기할 수 있다.
감소된 LYST가 감소된 혈소판 활성화 및 감소된 PDGF의 발현을 야기하는 것이 확립되었다(실시예 7 참조). 따라서, LYST-억제제는 항-혈소판 약물로 사용되어, 유해한 혈소판 응집 및 혈전 형성을 감소시키거나 예방할 수 있다. 유효량의 하나 이상의 LYST 억제제를 대상체에게 투여하여, 미처리 대조군 대상체에 비하여 유해한 또는 과도한 혈소판 응집의 하나 이상의 증상을 감소시키거나, 줄이거나, 제한하거나, 예방하는 단계를 포함하는 대상체에서의 유해한 또는 과도한 혈소판 활성화를 특징으로 하는 질병의 치료 또는 예방 방법이 제공된다. 따라서, LYST 억제제를 사용하여, 요망되지 않거나, 유해한 혈소판 기능과 관련된 질병 또는 장애를 치료하거나 예방할 수 있다. 부적절한/유해한 혈소판의 활성화로부터 초래되는 장애의 예는 혈소판 과다-응집 또는 증가된 평균 혈소판 부피(MPV) 및 혈소판증가 동맥 혈전증; 정맥 혈전증(버드-키아리 증후군; 해면정맥굴 혈전증; 뇌정맥동 혈전증; 심부 정맥 혈전증; 파젯-슈로터(Paget-Schroetter) 질병; 간문맥 혈전증; 경정맥 혈전증; 신정맥 혈전증); 및 미소순환 혈전증을 포함한다. 동맥 혈전증은 혈류를 부분적으로 또는 완전하게 폐색시켜, 하류 허혈, 뇌졸중 또는 심근 경색을 야기할 수 있다.
혈소판 유래 성장 인자(PDGF)의 증가된 또는 조절되지 않은 과발현 및 조절되지 않은 PDGF 신호전달은 암 세포의 성장, 혈관신생 및 전이, 및 예를 들어, 종양의 발생, 생존 및 전이와 관련된 질병에 연루된다(문헌[Andrae, et al., Genes Dev., 22:pp1276-1312 (2008)]에 검토). PDGF의 억제는 신경교종 세포 성장을 감소시키는 것으로 보인다. PDGFR-매개의 신호전달의 몇몇의 억제제, 예를 들어, 이마티닙(imatinib)은 다양한 악성종양의 치료를 위한 임상 시험을 시작하였다. 따라서, 하나 이상의 LYST 억제제를 사용하여 증가된 또는 상향조절된 PDGF의 발현 및/또는 조절되지 않은 PDGF 신호전달과 관련된 임의의 질병을 치료하거나 예방할 수 있다. 예시적인 질병은 암, 예를 들어, 교모세포종(예를 들어, 역형성 희소돌기아교세포종) 및 육종(예를 들어, 진피 육종; 식도 편평 세포 육종), 및 망막 혈관 질병(예를 들어, 허혈성 망막병증)을 포함한다.
B. 치료 방법
LYST의 억제는 국소 또는 전신 전달을 통한 치료적 메커니즘으로 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물은 전신 투여된다. 억제제를 특정 위치 또는 세포 유형에 표적화하기 위하여 전달 비히클이 선택되고 사용될 수 있다. 다른 구현예에서, 억제제는 장치 또는 이식편, 예를 들어, 상기 논의된 것들을 사용하여 혈관구조에 직접 투여된다. 추가의 구현예에서, 투여 경로는 억제제를 직접적으로 특정 기관에 또는 국소 손상 위치에 표적화한다.
혈관 증식 및 염증의 과정이 관련이 있는 것으로 확립되었다. LYST가 증식 장애, 예를 들어, 재협착증 과정에 기여하는 면역 과정을 조정하는 것으로 여겨진다. 조기의 약리학적 개입은 만성 치료법 및 만성 치료법과 관련된 임의의 잠재적으로 유해한 부작용을 방해할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 조성물은 신생내막 형성을 감소시키거나, 예방할 수 있지만, 신생-조직 성장이 발생하게 할 수 있다. 임의로 전달 비히클을 포함하는 개시된 LYST 억제제를 사용한 질병 및 장애의 치료 및 예방 방법이 하기에 더욱 상세히 논의된다.
대조군
LYST 억제제의 효과를 대조군과 비교할 수 있다. 적합한 대조군은 해당 분야에 알려져 있으며, 예를 들어, 미처리 세포 또는 미처리 대상체를 포함한다. 일부 구현예에서, 대조군은 처리된 대상체로부터의 미처리된 조직이거나, 또는 미처리 대상체로부터의 것이다. 바람직하게는, 대조군 세포 또는 조직은 처리된 세포 또는 조직과 동일한 조직으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 미처리 대조군 대상체는 처리된 대상체와 동일한 질병 또는 질환을 앓는다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 항-LYST 치료에 의해 영향을 받는 약리학적 또는 생리학적 마커 또는 경로 중 하나 이상은 미처리 대조군 세포 또는 미처리 대조군 대상체에서의 동일한 약리학적 또는 생리학적 마커 또는 경로와 비교된다. 예를 들어, 항-LYST 처리된 대상체는 신생내막 형성의 다른 억제제, 예를 들어, 라파마이신(rapamycin)으로 처리된 대상체와 비교될 수 있다. 신생내막 형성의 다른 억제제로 처리된 대상체는 LYST 억제제로 처리된 대상체가 그러한 것보다 더 큰 수술후 협착증의 발병률 또는 감소된 신생-혈관 조직의 형성을 가질 수 있다.
하나 이상의 LYST 억제제를 포함하는 약제학적 조성물은 국소 치료가 요망되는지, 전신 치료가 요망되는지에 따라, 그리고 치료할 영역에 따라 다양한 방식으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 개시된 조성물은 정맥내, 복강내, 근육내, 피하, 공동내 또는 경피 투여될 수 있다. 조성물은 비경구(예를 들어, 정맥내), 근육내 주사에 의해, 복강내 주사에 의해, 경피, 체외, 국부 비강내 투여 또는 흡입에 의한 투여를 포함하여 국부 등으로 투여될 수 있다.
조성물의 비경구 투여는 사용된다면, 일반적으로 주사를 특징으로 한다. 주사가능한 제형은 통상적인 형태로, 액체 용액 또는 현탁액, 주사 이전 액체 중 현탁 용액에 적합한 고체 형태로 또는 에멀젼으로 제조될 수 있다. 일정한 투여량이 유지되게 하는 서방형 또는 지속 방출형 시스템의 사용을 포함하는 투여도 또한 논의된다.
특정 구현예에서, 조성물은 국소, 예를 들어, 치료할 위치로의 직접적인 주사에 의해 투여된다. 약물의 국소 전달은 전신 전달과 관련된 부작용 또는 독성을 감소시킬 수 있으며, 증가된 국소화된 용량으로 인한 증진된 치료 결과를 초래할 수 있다.
개시된 LYST의 억제제의 국소(즉, 국소 약물 전달, LDD를 통한) 투여 방법이 제공된다. 특정 구현예에서, LYST 억제제는 유해한 전신 효과를 일으키지 않고, 치료되는 조직, 예를 들어, 동맥 또는 정맥에 직접 투여될 수 있다. 추가의 구현예에서, 조성물은 하나 이상의 외과술 위치에 직접 주사되거나 다르게는 투여된다. 전형적으로, 국소 주사는 전신 투여에 의해 달성될 수 있는 것보다 더 큰 조성물의 증가된 국소화 농도를 야기한다. 바람직한 구현예에서, 조성물은 국소 주사 또는 국부 투여에 의해 조직, 인공삽입물, 이식편 또는 의료 장치로 직접 전달된다. 일부 구현예에서, 국소 전달되는 LYST 억제제는 동일한 화합물의 전신 투여에 의해 달성되는 것의 2배, 10배, 100배, 500배, 1000배 또는 1000배 초과의 농도를 초래한다. 일부 구현예에서, 국소 투여되는 LYST 억제제는 소정의 기간에 걸쳐 일정한 속도로 전달 위치에 일정하게 방출된다. 바람직하게는 일정한 방출은 전달 위치에서 요망되는 LYST 억제제의 농도를 유지한다.
개시된 LYST 억제제는 질병 증상의 발생 이전, 그 동안 또는 그 후의 기간 동안 또는 하나 이상의 질병 증상의 발생 이전, 그 동안 또는 그 후의 기간의 임의의 조합 동안 투여될 수 있다. 예를 들어, 대상체에는 질병 증상의 발생 이전에 1, 2, 3, 4, 5, 6 7, 14, 21, 28, 35 또는 48일마다 1회 이상의 용량의 조성물이 투여될 수 있다. 대상체에는 질병 증상의 발생 이후에 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 14, 21, 28, 35 또는 48일마다 1회 이상의 용량의 조성물이 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 질병 상태의 개선이 명백하기 이전에 다수의 용량의 조성물이 투여된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 대상체는 질병 또는 질환의 개선이 명백하기 이전 1, 2, 3, 4, 5, 6 7, 14, 21, 28, 35 또는 48일 또는 주의 기간에 걸쳐 1, 2, 3, 4, 5, 6 7, 14, 21, 28, 35 또는 48회 제공 받는다.
따라서, 하나 이상의 LYST 억제제를 포함하는 개시된 조성물은 치료할 질병 또는 장애에 따라, 진단, 예후, 외과술 또는 손상과 관련하여 상이한 시간에 투여될 수 있다. 항-LYST 치료법의 시작 시기는 대상체의 요구에 기초하여 결정되어야 하며, 외과술 또는 손상 시로부터 외과술 또는 손상 후 1일 이상, 1주 이상 또는 1개월 이상까지 달라질 수 있다. LYST 억제제의 지연된 방출을 위한 제형의 이용 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 일단, 혈관 신생-조직 성장이 발생하면, LYST의 억제제를 사용한 치료법이 중단될 수 있다.
일부 구현예에서, 단일의 용량의 LYST의 하나 이상의 억제제를 1회 이상의 볼루스 용량으로서 대상체에게 전달하여, 하나 이상의 억제제의 혈중 농도를 요망되는 수준으로 증가시킨다. 볼루스는 임의의 수단에 의해, 예를 들어, 주사를 통해 제공될 수 있다. 볼루스 용량의 배치는 요망되는 효과 및 치료할 표적 기관 또는 조직에 따라 달라질 수 있다. 특정 구현예에서, 다른 투여형, 예를 들어, 박동형 방출 투여형의 투여 이전에 볼루스가 제공된다. 따라서, 하나 이상의 LYST 억제제의 요망되는 혈중 농도는 즉시, 지연 또는 박동 방출을 위한 제형의 조합을 사용하여 요망되는 기간 동안 유지될 수 있다.
유착의 경우에, 정상의 해부학적 구조 사이의 연결 조직의 침착은 필수적이지 않고, 이에 따라, 혈관 조직의 발생의 예방은 유해하지 않다. 따라서, 유착의 예방 및 감소를 위하여, LYST 억제제는 전형적으로 외과술 시에 또는 그 직후에, 예를 들어, 1주 내에 적용될 것이다. 신생내막 형성, 예를 들어, 조직 이식편 또는 스텐트의 협착증 또는 재협착증의 위험이 있는 외과술 절차의 경우에, 하나 이상의 LYST 억제제가 외과술 시에 투여될 수 있다. 피부를 포함하는 손상 또는 외과술의 경우에, LYST 억제제는 피부의 표면의 재상피화 후에 적용될 수 있다.
이식편 및 장치 상으로의 코팅
하나 이상의 LYST 억제제는 억제제(들)를 장치의 구조적 재료 또는 밀봉재 내로 또는 그 상으로 로딩함으로써 하나 이상의 억제제를 의료 장치, 예를 들어, 스텐트 또는 다른 인공삽입물 내로 혼입시킴으로써 국소 전달될 수 있다. 억제제(들)의 방출 속도는 흡수가능한 물질 대 작용제의 비, 흡수가능한 물질의 분자량, 억제제(들)의 조성, 흡수가능한 폴리머의 조성, 코팅 두께, 코팅 층의 수 및 그들의 상대 두께, 억제제 농도, 및/또는 장치 또는 밀봉재로의 억제제(들)의 물리적 또는 화학적 결합 또는 연결 중 하나 이상을 달라지게 하는 것을 포함하는 수많은 방법에 의해 조절될 수 있다. 또한, 흡수가능한 폴리머를 포함하는 폴리머 및 다른 물질의 탑 코트(top coat)는 하나 이상의 억제제의 방출 속도를 조절하기 위해 적용될 수 있다.
일부 구현예에서, 장치 또는 이식편 조직 상에 존재하는 LYST 억제제의 양은 전달 비히클을 변경시킴으로써 조정될 수 있다. 또한, 조직의 도처에서의 억제제의 침투도 조정될 수 있다. 이러한 방식으로, 이식 위치에서 국소 방출되는 약물의 양은 세심하게 조절될 수 있다. 전형적으로, LYST 억제제 또는 억제제를 지니는 전달 비히클은 생체외에서 장치 또는 이식편 물질과 접촉된다. 접촉은 온건한 진탕 또는 억제제가 장치 또는 이식편 조직에 부착하거나 그를 침투하는 것을 보장하기 위한 당업계에 알려져 있는 다른 방법의 부재 또는 존재하에 발생할 수 있다. 진탕은 예를 들어, 오비탈 쉐이커(orbital shaker)에서의 인큐베이션에 의해, 또는 수직 회전에 의해, 예를 들어, 혼성화 오븐의 수직 캐러셀(carousel)에서의 인큐베이션에 의해 달성될 수 있다. 인큐베이션 프로토콜을 달라지게 하여, 장치 또는 이식편 상의 입자의 배치에 영향을 미칠 수 있다. 또한, 장치 또는 이식편으로의 전달 비히클, 예를 들어, 입자의 부착의 양 및 국소화는 표적화 리간드, 예를 들어, 비히클 상에 제시된, 기재된 것들 및 부착의 유형 및 밀도를 달라지게 함으로써 달라질 수 있다. 생체외에서 약물을 혈관 이식편으로 전달하기 위한 예시적인 조성물 및 방법은 미국 출원 공개 제2006/0002971호, 제2010/0151436호 및 미국 특허 제7,534,448호에 논의되어 있다.
당해 조성물 및 방법을 사용하여 추가의 침습적 절차, 예를 들어, 혈관 이식편 또는 스텐트의 배치의 요건과 함께 또는 이것 없이, LYST 억제제를 이식편에 국소 전달할 수 있다.
C. 투여량 및 유효량
일부 생체내 방법에서, LYST 억제제의 조성물은 치료적 유효량으로 대상체에게 투여된다. 본원에 사용되는 용어 "유효량" 또는 "치료적 유효량"은 치료할 장애의 하나 이상의 증상을 치료하거나, 억제하거나, 완화시키거나, 다르게는 요망되는 약리학적 및/또는 생리학적 효과를 제공하기에 충분한 투여량을 의미한다. 정확한 투여량은 다양한 요인, 예를 들어, 대상체-의존적 변수(예를 들어, 연령, 면역계 건강 등), 질병 또는 장애 및 시행 중인 치료에 따라 달라질 것이다.
모든 개시된 화합물에 있어서, 추가의 연구가 행해짐에 따라, 다양한 환자에서의 다양한 질환의 치료를 위한 적절한 투여량 수준에 관한 정보가 나올 것이며, 당업자는 치료적 상황, 수여자의 연령 및 일반적 건강을 고려하여, 적절한 용량을 확인할 수 있을 것이다. 선택된 투여량은 요망되는 치료 효과, 투여 경로 및 요망되는 치료 기간에 따라 달라진다. 일반적으로, 매일 0.001 내지 100 ㎎/㎏(체중)의 투여량 수준은 포유류, 가장 바람직하게는, 인간에게 투여된다. 일반적으로, 정맥내 주사 또는 주입을 위하여, 투여량은 더 낮을 수 있다. 바람직하게는 조성물은 치료가 요망되는 위치에서 약 1 내지 약 1000 μM의 LYST 억제제 혈청 수준을 달성하도록 제형화된다.
일부 구현예에서, LYST 억제제는 면역 세포, 예를 들어, 대식구, 혈소판 및 NK 세포의 정상적인 생물학적 활성을 예방하기에 효과적이다. 예를 들어, 하나 이상의 억제제는 대식구의 이동 또는 주화성 활성을 감소시키거나 예방하기에 유효한 양으로 존재할 수 있다.
일 구현예에서, 하나 이상의 LYST 억제제는 대상체에서 신생내막 형성을 예방하거나 감소시키기에 유효한 양으로 존재한다. 바람직한 구현예에서, 하나 이상의 LYST 억제제의 양은 미처리 대조군에 비하여 대상체에서 상처 치유 또는 신생조직의 형성을 예방하지 않는다. 바람직하게는, 하나 이상의 LYST 억제제의 양은 미처리 대조군에 비하여 대상체에서 신생내막 형성을 예방하거나 감소시키고, 상처 치유를 증진시키기에 유효하다.
다른 구현예에서, 하나 이상의 LYST 억제제는 손상 또는 외과술 위치에서 혈관 성장의 양을 감소시키고, 섬유증, 반흔형성, 켈로이드 또는 유착을 야기하는 고밀도 세포 및 연결 조직의 형성을 예방하거나 감소시키기에 유효한 양으로 존재한다. 바람직하게는, 하나 이상의 LYST 억제제의 양은 상처 치유를 예방하지 않는다.
다른 구현예에서, 하나 이상의 LYST 억제제는 혈소판 활성화를 감소시키거나 억제하기에 유효한 양으로 존재한다. 예를 들어, LYST 억제제는 손상 또는 외과술 위치에서 부적절한 혈소판 응집 및 케모카인의 분비를 예방하거나 억제하기에 유효한 양으로 존재할 수 있다. 추가의 구현예에서, 하나 이상의 LYST 억제제는 손상 또는 외과술 위치에서 트롬빈에 의한 활성화에 반응하여 세포에 의해 생성되거나 분비되는 혈소판 유래 성장 인자(PDGF) 및/또는 형질전환 성장 인자 베타(TGFβ)의 양을 감소시키기에 유효한 양으로 존재한다. 하나 이상의 LYST 억제제는 PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C 또는 PDGF-D의 생성 또는 분비를 감소시키기에 유효할 수 있다. 따라서, 하나 이상의 LYST 억제제는 혈청 중 생물학적 활성 PDGF의 양을 감소시키기에 유효할 수 있다. 예를 들어, PDGF-AA, PDGF-BB, PDGF-CC, PDGF-DD 또는 PGDF-AB의 양은 미처리 대조군에서의 양에 비하여 감소될 수 있다. 따라서, 하나 이상의 LYST 억제제는 PDGF의 결과로서, 또는 PDGF에 의해 조절되는 하류 신호전달 사건의 결과로서 발생하는 하나 이상의 생물학적 활성을 감소시키거나 예방하는데 유효할 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 LYST 억제제는 하나 이상의 티로신 키나제 수용체, 예를 들어, PDGF 수용체 α(PDGFRα); PDGF 수용체 β(PDGFRβ); 및/또는 PDGF 수용체 αβ(PDGFαβ)의 활성화를 감소시키거나 예방하는데 유효할 수 있다. LYST 억제제는 하나 이상의 PDGF의 활성을 감소시키거나 예방함으로써, 세포 증식, 주화성 및 액틴 재편성을 포함하는 세포 활성을 조절하는 몇몇의 신호전달 경로의 PDGF-매개의 유도를 감소시키거나 예방할 수 있다.
다른 구현예에서, 하나 이상의 LYST 억제제는 섬유증, 반흔형성, 켈로이드 또는 유착을 초래하는 고밀도 세포 및 연결 조직의 형성을 예방하거나 감소시키기에 유효한 양으로 존재한다. 바람직하게는 하나 이상의 LYST 억제제의 양은 상처 치유를 방지하지 않는다.
D. 병용 요법
LYST 억제제를 포함하는 개시된 조성물, 장치 및 이식편은 단독으로, 또는 치료적 또는 예방적 치료 섭생법의 부분으로서 하나 이상의 추가의 활성 작용제(들)와 병용하여 투여될 수 있다. 예를 들어, 조성물은 제1일, 제2일, 제3일 또는 제4일 또는 그들의 조합에 투여될 수 있다. 조성물은 제2 활성 작용제와 동일한 날에, 또는 그와 상이한 날에 투여될 수 있다.
용어 "병용" 또는 "병용된"은 2개 이상의 작용제의 동시의, 일시의 또는 순차적 투여를 지칭하기 위해 사용된다. 따라서, 병용은 동시에(예를 들어, 혼합물로서), 따로, 그러나 일시에(예를 들어, 동일한 대상체로의 개별 정맥내 라인을 통해), 또는 순차적으로(예를 들어, 화합물 또는 작용제 중 하나를 먼저 제공한 다음 두번째를 제공) 투여될 수 있다.
추가의 치료제는 문헌[Tanguay et al. Current Status of Biodegradable Stents, Cardiology Clinics, 12:699-713 (1994)], 문헌[J. E. Sousa, P. W. Serruys and M. A. Costa, Circulation 107 (2003) 2274 (Part I), 2283 (Part II)], 문헌[K. J. Salu, J. M. Bosmans, H. Bult and C. J. Vrints, Acta Cardiol 59 (2004) 51]에 기재된 다른 항-신생내막 작용제, 화학치료제, 항체, 항생제, 항바이러스제, 스테로이드 및 비-스테로이드 항염증제, 통상의 면역치료제, 면역-억제제, 사이토카인, 케모카인 및/또는 성장 인자, 신생내막 형성 또는 재협착증을 치료하거나 예방하기 위하여 설계된 항-증식 또는 항-이동 작용제, 이동 및 세포외 매트릭스 생성에 영향을 미치는 작용제, 혈소판 침착 또는 혈전의 형성에 영향을 미치는 작용제, 및 혈관 치유 및 재-내피화를 촉진시키는 작용제일 수 있다.
예시적인 항-트롬빈 작용제는 헤파린(Heparin)(저분자량 헤파린 포함), R-히루딘(R-Hirudin), 히루로그(Hirulog), 아르가트로반(Argatroban), 에페가트란(Efegatran), 틱(Tick) 항응혈 펩티드 및 Ppack를 포함하나 이들에 한정되지 않는다.
예시적인 항증식제는 파클리탁셀(Paclitaxel)(탁솔(Taxol)), QP-2 빈크리스틴(Vincristin), 메토트렉세이트(Methotrexat), 안지오펩틴(Angiopeptin), 미토마이신(Mitomycin), BCP 678, 안티센스(Antisense) c-myc, ABT 578, 액티노마이신(Actinomycin)-D, RestenASE, 1-클로르-데옥시아데노신, PCNA 리보자임(Ribozym) 및 셀레콕시브(Celecoxib)를 포함하나 이들에 한정되지 않는다.
세포 복제/증식을 조절하는 예시적인 작용제는 라파마이신 표적(TOR) 억제제(시롤리무스(sirolimus), 에베롤리무스(everolimus) 및 ABT-578 포함), 파클리탁셀(paclitaxel) 및 알킬화제(예를 들어, 사이클로포스파미드(cyclophosphamide), 메클로르에타민(mechlorethamine), 클로람부실(chlorambucil), 멜팔란(melphalan), 카르무스틴(carmustine), 로무스틴(lomustine), 이포스파미드(ifosfamide), 프로카르바진(procarbazine), 다카르바진(dacarbazine), 테모졸로미드(temozolomide), 알트레타민(altretamine), 시스플라틴(cisplatin), 카르보플라틴(carboplatin) 및 옥살리플라틴(oxaliplatin)), 항종양 항생제(예를 들어, 블레오마이신(bleomycin), 액티노마이신(actinomycin) D, 미트라마이신(mithramycin), 미토마이신(mitomycin) C, 에토포시드(etoposide), 테니포시드(teniposide), 암사크린(amsacrine), 토포테칸(topotecan), 이리노테칸(irinotecan), 독소루비신(doxorubicin), 다우노루비신(daunorubicin), 이다루비신(idarubicin), 에피루비신(epirubicin), 미톡산트론(mitoxantrone) 및 미톡산트론(mitoxantrone)), 항대사물질(예를 들어, 데옥시코포르마이신(deoxycoformycin), 6-머캅토푸린(mercaptopurine), 6-티오구아닌(thioguanine), 아자티오프린(azathioprine), 2-클로로데옥시아데노신(chlorodeoxyadenosine), 하이드록시우레아, 메토트렉세이트, 5-플루오로우라실, 카페시타빈(capecitabine), 시토신 아라비노시드(cytosine arabinoside), 아자시티딘(azacytidine), 젬시타빈(gemcitabine), 플루다라빈 포스페이트(fludarabine phosphate) 및 아스파라기나제), 항유사분열제(예를 들어, 빈크리스틴(vincristine), 빈블라스틴(vinblastine), 비노렐빈(vinorelbine), 도세탁셀(docetaxel), 에스트라무스틴(estramustine)) 및 분자 표적화 작용제(예를 들어, 이마티닙(imatinib), 트레티노인(tretinoin), 벡사로텐(bexarotene), 베바시주맙(bevacizumab), 젬투주맙 오고미신(gemtuzumab ogomicin) 및 데니류킨 디프티톡스(denileukin diftitox)를 포함하는 항신생물제를 포함한다.
예시적인 항-재협착증 작용제는 면역조절제, 예를 들어, 시롤리무스(라파마이신), 타크롤리무스(Tacrolimus), 비오레스트(Biorest), 미조리빈(Mizoribin), 사이클로스포린(Cyclosporin), 인터페론.감마.1b, 레플루노미드(Leflunomid), 트라닐라스트(Tranilast), 코르티코스테로이드(Corticosteroide), 마이코페놀산(Mycophenolic acid) 및 비포스포네이트를 포함하나 이들에 한정되지 않는다.
예시적인 항-이동 작용제 및 세포외 매트릭스 조절제는 할로푸지논(Halofuginone), 프로필-하이드록실라제-억제제, C-프로테이나제-억제제, MMP-억제제, 바티마스타트(Batimastat), 프로부콜(Probucol)을 포함하나 이들에 한정되지 않는다. 항혈소판 작용제의 예는 헤파린을 포함하나 이들에 한정되지 않는다.
일부 구현예에서, 추가의 치료제는 미국 특허 제8,029,815호에 기재된 바와 같은 N-3,4-트리하이드록시벤즈아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염 또는 에스테르, 디독스(didox), 이미데이트(imidate) 또는 하이드록시우레아이다.
추가의 치료제는 대상체에게 국소 또는 전신 투여되거나, 장치 또는 이식편 상으로 또는 그 내로 코팅되거나 혼입될 수 있다. 추가의 치료 시약은 동일한 또는 상이한 경로에 의해, 그리고 상이한 수단에 의해 투여될 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 LYST 억제제는 상이한 수단에 의해, 예를 들어, 전신 전달되는 파클리탁셀, 탁소테르(taxotere) 및 다른 탁소이드 화합물, 메토트렉세이트, 안트라사이클린, 예를 들어, 독소루비신, 에베롤리무스, 세롤리무스, 라파마이신 또는 라파마이신 유도체와 병용하여 국소 전달될 수 있다.
추가의 구현예에서, 하나 이상의 LYST 억제제를 사용하여, 하나 이상의 추가의 치료제의 이용과 관련된 원치않는 부작용을 감소시키거나 예방할 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 LYST 억제제를 항-신생물제 블레오마이신과 함께 사용하여, 블레오마이신과 관련된 폐 섬유증을 예방할 수 있다.
본 발명은 하기의 비제한적인 실시예를 참조하여 추가로 이해될 것이다.
실시예
실시예 1: beige 돌연변이는 조직 이식편에서 협착증을 감소시킨다
방법 및 재료
자가 골수-유래 단핵 세포를 폴리 락트산 및 폴리카프로락톤의 50:50 코폴리머가 코팅된 폴리글리콜산-섬유 튜브로부터 제작된 생분해성 관상 스캐폴드로 씨딩함으로써 조직 조작 혈관 이식편(TEVG)을 발생시켰다.
TEVG의 형성의 기초를 이루는 세포 및 분자 메커니즘을 설명하기 위한 일환으로 TEVG 기능을 평가하기 위한 쥣과 모델을 개발시켰다. 하대 정맥(IVC) 간치 이식편 모델은 폰탄 순환과 유사한 저압, 고 유량 순환계에서의 혈관 이식편의 이용을 조사하기 위하여 입증된 모델이다. 이러한 모델은 TEVG에서 신생조직 형성을 연구하기 위하여 광범위하게 사용되었다.
PGA-PCL/LA로 이루어진 생분해성 도관 이식편을 세포 씨딩 없이 각각 야생형 마우스 및 beige 돌연변이 마우스의 하대 정맥 내로 이식하였다. 이식편을 수술 후 2주에 외식하고, 섹션화시키고, 혈관의 직경에 대하여 측정하고, 개통성에 대하여 평가하였다.
결과
마우스의 종류에 따라, TEVG를 IVC 간치 이식편으로 이식하는 경우, 협착증 비율의 유의미한 변화가 관찰되었다. 구체적으로, beige 돌연변이를 갖는 마우스에 이식된 TEVG가 특별히 낮은 협착증 비율을 가졌음이 주목되었다. IVC 간치 이식편으로서 이식된 TEVG의 개통성 및 관강내 직경을 C57B6(야생형 마우스)(N=25) 및 beige 돌연변이체(N=10) 둘 모두에서 비교하였다(표 1). 야생형 마우스는 80% 협착증을 나타내었으며, 관강내 직경이 0.33 ㎜로 측정되는 한편, beige 마우스는 10% 협착증 비율을 나타내었으며, 관강내 직경이 0.71 ㎜로 측정되었다(T-검정 <0.001 및 카이-제곱(Chi-square) 0.0002)(도 1).
[표 1]
Figure pct00016
실시예 2: beige 돌연변이는 조직 이식편으로의 대식구 침윤을 감소시킨다
방법 및 재료
쥣과 모델을 사용하여, 혈관 신생조직 형성이 숙주로부터 유래된 세포로부터 발생하며, 혈관 신생조직 형성의 과정이 면역계, 구체적으로 숙주-유래의 대식구에 의해 조정되는 것이 이전에 입증되었다. 과도한 대식구 침윤은 협착증을 야기하는 한편, 대식구 침윤의 억제는 신생조직 형성을 예방한다.
실시예 1에 상기 기재된 외식된 이식편에서의 대식구의 수를 beige 및 야생형 마우스 둘 모두에서 측정하였다. CD31 세포 마커에 특이적인 항체를 사용하여, 면역조직화학을 각 이식편의 조직 섹션에서 수행하여, 각 그룹에서 내피 세포의 수 및 형태를 특성화시켰다.
결과
beige 마우스에 이식된 TEVG는 외과술 후 2주에, 야생형 마우스에 이식된 TEVG보다 유의미하게 더 낮은 대식구 침윤을 나타내었다. 도 2를 참조한다. 현저하게, 내피 세포에 대한 면역조직화학(CD 31에 특이적인 항체 사용)은 야생형 및 beige 마우스로부터의 이식편 섹션 간에 어떠한 차이도 보이지 않았으며, 이는 둘 모두의 그룹에서 신생조직 형성이 유사하였음을 나타낸다.
실시예 3: beige 표현형은 LYST 유전자 내의 돌연변이로부터 야기된다
방법 및 재료
beige 돌연변이는 LYST 유전자의 자발적 돌연변이로부터 야기된다(도 3). 단백질 발현의 분석을 위하여, 각각 LYST1, LYST3, LYST4, LYST5 및 LYST6으로 명명된 6개의 상이한 프라이머를 완전한 LYST 유전자 영역을 포괄하도록 설계하였다. LYST-5 프라이머는 beige 마우스 유전형에서 확인된 아미노산 돌연변이를 포함하는 엑손 52의 영역을 포괄하였다. Raw 세포를 표준물로 사용하여, 상대적 mRNA 수준을 계산하였다.
결과
Beige 마우스에서 beige 표현형의 원인이 되는 특정 돌연변이를 확인하였다. 전장 LYST 유전자는 3801개 아미노산 폴리펩티드를 인코딩한다. LYST의 돌연변이는 엑손 52에서 발생하여, 아미노산 이소류신의 결실(ile3741del)을 초래한다(도 3).
분자적 분석에 의해, 둘 모두의 그룹 간에 mRNA의 발현의 유의미한 차이가 존재하지 않음이 입증되었다. 야생형 및 돌연변이 단백질의 동등한 전사 수준에도 불구하고, 돌연변이 단백질의 번역이 존재하지 않았다.
추가로, LYST 단백질 발현은 면역조직화학 및 웨스턴 블롯팅에 의해 beige 돌연변이 마우스에서 고갈되었다(도 4). 이들 결과는 beige 마우스에서의 LYST 유전자 돌연변이가 유전자로부터의 번역 후에, 단백질 변형 수준에 영향을 미치는 것을 나타낸다.
실시예 4: LYST 유전자 내의 beige 돌연변이는 면역 과정을 변경시킨다
방법 및 재료
beige 돌연변이가 면역계의 조절에 의해 TEVG 협착증의 형성을 억제한다는 가설을 시험하였다. 골수를 C57B6(야생형) 마우스로부터 beige 돌연변이 마우스로, 그리고 그 역으로 이식하였다. FACS 분석을 수행하여, Beige 및 야생형 마우스에서 LYST 단핵구의 백분율을 결정하였다. 또한, 섬유소로의 자극 시에 혈소판 활성화의 능력은 야생형에 비하여 beige 돌연변이 마우스에서 감소되었다.
결과
TEVG 협착증의 유의미한 억제가 beige 마우스로부터의 골수로 이식된 야생형 마우스에서 입증되었다. 유사하게, TEVG가 야생형 마우스 유래의 골수로 이식된 beige 마우스에 이식되는 경우, 그들은 높은 비율의 TEVG 협착증을 나타내었다. 이들 관찰은 beige 돌연변이가 면역계에서의 그의 효과를 통해 TEVG 협착증을 억제하는 것을 나타내었다. 각각 야생형 및 Beige 마우스로부터의 단핵구 및 대식구의 FACS 분석에 의해, 표현형 집단의 차이가 입증되었다. 분석적 유세포분석의 대표적인 결과를 보여주는 일련의 산점도는 각각 WT3, WT4, bg3 및 bg4 마우스로부터의 CD115(Y-축) 및 CD11b(X-축)에 대해 염색된 단핵구 세포의 비율을 보여준다. 각각 WT3, WT4, bg3 및 bg4 마우스로부터의 LYC6 및 F4/80에 대해 염색된 세포의 분포도 또한 결정하였다. LYC6 "Hi" 및 LYC6 "lo"로 표기된 세포의 백분율을 계산하였다. 결과는 티오글리콜레이트로의 자극 후 3일의 복막 대식구를 나타내며, 죽은 세포 및 데브리스를 배제하도록 게이트시킨다(gated).
산점도는 각각 야생형 마우스 및 Beige 마우스로부터의 FITC-A 형광(X-축)에 대하여 PE-A(Y-축)에 대해 염색된 세포를 플롯팅시킨 분석적 유세포분석의 대표적인 결과를 보여주었다. 섬유소로의 자극 이후 혈소판 활성화 후 죽은 세포 및 데브리스를 배제하도록 세포를 게이트시켰다. 티오글리콜레이트로의 자극 후 3일에 복막 대식구에서의 LY6C "hi" 단핵구의 수는 야생형 그룹(WT3, WT4)에서 더 높은 한편, Ly6C "low" 단핵구의 수는 beige 그룹(bg 3, bg)에서 더 높았다.
또한, FACS 분석에 의해, 섬유소로의 세포의 자극시에 혈소판 활성화의 능력이 야생형 마우스에 비하여 beige 돌연변이 마우스에서 감소되었음이 입증되었다.
실시예 5: LYST -매개의 면역조절은 LYST 단백질에 대한 항체를 사용하여 달성될 수 있다
방법 및 재료
LYST 단백질의 차단 효과를 항-LYST 항체를 사용하여 조사하였다. C57B6 마우스를 항-LYST 항체로 처리한 다음, TEVG로 이식하였다. 항-LYST 항체를 외과술 1일 전에, 그리고 외과술 후 1주에 3개의 상이한 처리군(0 ㎎/㎏(대조군), 10 ㎎/㎏ 또는 50 ㎎/㎏)의 각각에서, 야생형 마우스의 복막 내로 주사하였다. 마우스를 희생시키고, 이식편 및 비장을 수술 후 2주에 외식하였다. 이식편의 헤마톡실린 및 에오신 염색(HE 염색)을 사용하여 조직학을 수행하였다. 비장 조직을 LYST 단백질에 특이적인 항체를 사용하여 웨스턴 블롯팅에 의해 분석하여, 각 처리군에서 LYST 단백질의 상대적 유효량을 결정하였다.
결과
항-LYST 항체의 전신 주사는 용량 의존적 방식으로 이식편 개통술의 개선을 보였다. 대식구 침윤의 현저한 억제 및 감소된 TEVG 협착증이 관찰되었다. 이러한 개통성의 용량-의존적 증가는 면역조직화학에 의해 결정시 비장 조직 내의 LYST 단백질의 존재의 용량-의존적 감소에 의해 달성되었다. 따라서, 개선된 신생조직 형성 및 TEVG 협착증의 형성의 억제를 초래하는 면역조절 방법이 확립되었다.
실시예 6: 기능성 Lyst 유전자가 결여된 트랜스제닉 마우스는 TEVG의 협착증을 나타내지 않는다
방법 및 재료
기능성 LYST 단백질이 결여된 C57BL/6 트랜스제닉 마우스를 생성하였다. 이들 마우스를 C57BL/6 Lysttm1b로 표기하였다. 이러한 낙아웃 균주를 생성하기 위해 사용되는 기술은 LacZ 리포터를 사용한다. LacZ에 대한 PCR에 의해, 낙아웃 모델이 확인되었다.
C57BL/6Lysttm1b 낙아웃 마우스가 TEVG 이식 후에 협착증이 발생하는지를 결정하기 위하여, 5마리의 C57BL/6 Lysttm1b 마우스 및 5마리의 C57BL/6 야생형 마우스에 씨딩되지 않은 TEVG를 이식하였다. TEVG를 외식하고, 이식 후 2주에 시험하였다.
결과
Lysttm1b 낙아웃 마우스(n=5)에서 이식된 100%의 씨딩되지 않은 조직 조작 혈관 이식편(TEVG)은 2주 이식 후에 개통되었다(도 5; 표 1 참조). 대조적으로, C57BL/6 야생형 마우스는 대략 90%의 협착증의 발병률을 나타내었다.
실시예 7: Lyst는 활성화에 반응하여 혈소판 기능을 조절한다
방법 및 재료
Lyst 단백질은 혈소판 기능에 수반되는 것으로 이해되며, 체디악 히가시 증후군, 인간 상관물은 "혈소판 저장 풀 결핍"으로 특성화된다. 혈소판 풍부 혈장(PRP)을 Beige(Bg) 및 야생형(WT) 마우스로부터 수득하였다. 시료를 트롬빈에 의해 활성화시키고, 각 그룹(n=7)으로부터 분비된 PDGF(혈소판 유래 성장 인자)의 총 농도를 휴지, 비-활성화 대조군(n=5)과 비교하였다.
결과
활성화 및 휴지 그룹 둘 모두에서, 트롬빈 활성화는 유의미하게 더 큰 농도의 PDGF를 초래하였다. 그러나, 활성화된 혈소판으로부터의 PDGF 분비는 야생형에 비하여 Beige 그룹에서 유의미하게 감소되었다(도 6 참조). 따라서, Lyst 활성의 감소는 또한 PDGF를 감소시켰으며, 이는 Lyst 활성을 감소시키는 작용제가 항-혈소판 작용제로도 기능할 수 있음을 나타낸다.
SEQUENCE LISTING <110> Nationwide Children's Hospital Breuer, Christopher Hibino, Narutoshi Garg, Vidu Best, Cameron <120> Compositions and Methods for Anti-Lyst Immunomodulation <130> NWCH 100 PCT <150> US 61/987,910 <151> 2014-05-02 <160> 2 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 13503 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 gtgcgcggcg gcggcggcag cggcgtcggc tcggggttct ccgggagagg gggagtgcgc 60 ggcggccgca gctgccacaa accaggtgaa gctttgttct aagaatattt gtttcatcta 120 gtttatgagt ccaaatgata tagactgtaa atgtcacagc agtggtgaaa gactgctcgg 180 tcatgagcac cgacagtaac tcactggcac gtgaatttct gaccgatgtc aaccggcttt 240 gcaatgcagt ggtccagagg gtggaggcca gggaggaaga agaggaggag acgcacatgg 300 caacccttgg acagtacctt gtccatggtc gaggatttct attacttacc aagctaaatt 360 ctataattga tcaggcattg acatgtagag aagaactcct gactcttctt ctgtctctcc 420 ttccactggt atggaagata cctgtccaag aagaaaaggc aacagatttt aacctaccgc 480 tctcagcaga tataatcctg accaaagaaa agaactcaag ttcacaaaga tccactcagg 540 aaaaattaca tttagaagga agtgccctgt ctagtcaggt ttctgcaaaa gtaaatgttt 600 ttcgaaaaag cagacgacag cgtaaaatta cccatcgcta ttctgtaaga gatgcaagaa 660 agacacagct ctccacctca gattcagaag ccaattcaga tgaaaaaggc atagcaatga 720 ataagcatag aaggccccat ctgctgcatc attttttaac atcgtttcct aaacaagacc 780 accccaaagc taaacttgac cgcttagcaa ccaaagaaca gactcctcca gatgctatgg 840 ctttggaaaa ttccagagag attattccaa gacaggggtc aaacactgac attttaagtg 900 agccagctgc cttgtctgtt atcagtaaca tgaacaattc tccatttgac ttatgtcatg 960 ttttgttatc tttattagaa aaagtttgta agtttgacgt taccttgaat cataattctc 1020 ctttagcagc cagtgtagtg cccacactaa ctgaattcct agcaggcttt ggggactgct 1080 gcagtctgag cgacaacttg gagagtcgag tagtttctgc aggttggacc gaagaaccgg 1140 tggctttgat tcaaaggatg ctctttcgaa cagtgttgca tcttctgtca gtagatgtta 1200 gtactgcaga gatgatgcca gaaaatctta ggaaaaattt aactgaattg cttagagcag 1260 ctttaaaaat tagaatatgc ctagaaaagc agcctgaccc ttttgcacca agacaaaaga 1320 aaacactgca ggaggttcag gaagattttg tgttttcaaa gtatcgtcat agagcccttc 1380 ttttacctga gcttttggaa ggagttcttc agattctgat ctgttgtctt caaagtgcag 1440 cttcaaatcc cttctacttc agtcaagcca tggatttggt tcaagaattc attcagcatc 1500 atggatttaa tttatttgaa acagcagttc ttcaaatgga atggctggtt ttaagagatg 1560 gagttcctcc cgaggcctca gagcatttga aagccctaat aaatagtgtg atgaaaataa 1620 tgagcactgt caaaaaagtg aaatcagagc aacttcatca ttcgatgtgt acaagaaaaa 1680 ggcacagacg atgtgaatat tctcatttta tgcatcatca ccgagatctc tcaggtcttc 1740 tggtttcggc ttttaaaaac caggtttcca aaaacccatt tgaagagact gcagatggag 1800 atgtttatta tcctgagcgg tgctgttgca ttgcagtgtg tgcccatcag tgcttgcgct 1860 tactacagca ggcttccttg agcagcactt gtgtccagat cctatcgggt gttcataaca 1920 ttggaatatg ctgttgtatg gatcccaaat ctgtaatcat tcctttgctc catgctttta 1980 aattgccagc actgaaaaat tttcagcagc atatattgaa tatccttaac aaacttattt 2040 tggatcagtt aggaggagca gagatatcac caaaaattaa aaaagcagct tgtaatattt 2100 gtactgttga ctctgaccaa ctagcccaat tagaagagac actgcaggga aacttatgtg 2160 atgctgaact ctcctcaagt ttatccagtc cttcttacag atttcaaggg atcctgccca 2220 gcagtggatc tgaagatttg ttgtggaaat gggatgcttt aaaggcttat cagaactttg 2280 tttttgaaga agacagatta catagtatac agattgcaaa tcacatttgc aatttaatcc 2340 agaaaggcaa tatagttgtt cagtggaaat tatataatta catatttaat cctgtgctcc 2400 aaagaggagt tgaattagca catcattgtc aacacctaag cgttacttca gctcaaagtc 2460 atgtatgtag ccatcataac cagtgcttgc ctcaggacgt gcttcagatt tatgtaaaaa 2520 ctctgcctat cctgcttaaa tccagggtaa taagagattt gtttttgagt tgtaatggag 2580 taagtcaaat aatcgaatta aattgcttaa atggtattcg aagtcattct ctaaaagcat 2640 ttgaaactct gataatcagc ctaggggagc aacagaaaga tgcctcagtt ccagatattg 2700 atgggataga cattgaacag aaggagttgt cctctgtaca tgtgggtact tcttttcatc 2760 atcagcaagc ttattcagat tctcctcaga gtctcagcaa attttatgct ggcctcaaag 2820 aagcttatcc aaagagacgg aagactgtta accaagatgt tcatatcaac acaataaacc 2880 tattcctctg tgtggctttt ttatgcgtaa gtaaagaagc agagtctgac agggagtcgg 2940 ccaatgactc agaagatact tctggctatg acagcacagc cagcgagcct ttaagtcata 3000 tgctgccatg tatatctctc gagagccttg tcttgccttc tcctgaacat atgcaccaag 3060 cagcagacat ttggtctatg tgtcgttgga tctacatgtt gagttcagtg ttccagaaac 3120 agttttatag gcttggtggt ttccgagtat gccataagtt aatatttatg ataatacaga 3180 aactgttcag aagtcacaaa gaggagcaag gaaaaaagga gggagataca agtgtaaatg 3240 aaaaccagga tttaaacaga atttctcaac ctaagagaac tatgaaggaa gatttattat 3300 ctttggctat aaaaagtgac cccataccat cagaactagg tagtctaaaa aagagtgctg 3360 acagtttagg taaattagag ttacagcata tttcttccat aaatgtggaa gaagtttcag 3420 ctactgaagc cgctcccgag gaagcaaagc tatttacaag tcaagaaagt gagacctcac 3480 ttcaaagtat acgacttttg gaagcccttc tggccatttg tcttcatggt gccagaacta 3540 gtcaacagaa gatggaattg gagttaccta atcagaactt gtctgtggaa agtatattat 3600 ttgaaatgag ggaccatctt tcccagtcaa aggtgattga aacacaacta gcaaagcctt 3660 tatttgatgc cctgcttcga gttgccctcg ggaattattc agcagatttt gaacataatg 3720 atgctatgac tgagaagagt catcaatctg cagaagaatt gtcatcccag cctggtgatt 3780 tttcagaaga agctgaggat tctcagtgtt gtagttttaa acttttagtt gaagaagaag 3840 gttacgaagc agatagtgaa agcaatcctg aagatggcga aacccaggat gatggggtag 3900 acttaaagtc tgaaacagaa ggtttcagtg catcaagcag tccaaatgac ttactcgaaa 3960 acctcactca aggggaaata atttatcctg agatttgtat gctggaatta aatttgcttt 4020 ctgctagtaa agccaaactt gatgtgcttg cccatgtatt tgagagtttt ttgaaaatta 4080 ttaggcagaa agaaaagaat gtttttctgc tcatgcaaca gggaactgtg aaaaatcttt 4140 taggagggtt cttgagtatt ttaacacagg atgattctga ttttcaagca tgccagagag 4200 tattggtgga tcttttggta tctttgatga gttcaagaac atgttcagaa gagctaaccc 4260 ttcttttgag aatatttctg gagaaatctc cttgtacaaa aattcttctt ctgggtattc 4320 tgaaaattat tgaaagtgat actactatga gcccttcaca gtatctaacc ttccctttac 4380 tgcacgctcc aaatttaagc aacggtgttt catcacaaaa gtatcctggg attttaaaca 4440 gtaaggccat gggtttattg agaagagcac gagtttcacg gagcaagaaa gaggctgata 4500 gagagagttt tccccatcgg ctgctttcat cttggcacat agccccagtc cacctgccgt 4560 tgctggggca aaactgctgg ccacacctat cagaaggttt cagtgtttcc ctgtggttta 4620 atgtggagtg tatccatgaa gctgagagta ctacagaaaa aggaaagaag ataaagaaaa 4680 gaaacaaatc attaatttta ccagatagca gttttgatgg tacagagagc gacagaccag 4740 aaggtgcaga gtacataaat cctggtgaaa gactcataga agaaggatgt attcatataa 4800 tttcactggg atccaaagcg ttgatgatcc aagtgtgggc tgatccccac aatgccactc 4860 ttatctttcg tgtgtgcatg gattcaaatg atgacatgaa agctgtttta ctagcacagg 4920 ttgaatcaca ggagaatatt ttcctcccaa gcaaatggca acatttagta ctcacctact 4980 tacagcagcc ccaagggaaa aggaggattc atgggaaaat ctccatatgg gtctctggac 5040 agaggaagcc tgatgttact ttggatttta tgcttccaag aaaaacaagt ttgtcatctg 5100 atagcaataa aacattttgc atgattggcc attgtttatc atcccaagaa gagtttttgc 5160 agttggctgg aaaatgggac ctgggaaatt tgcttctctt caacggagct aaggttggtt 5220 cacaagaggc cttttatctg tatgcttgtg gacccaacca tacatctgta atgccatgta 5280 agtatggcaa gccagtcaat gactactcca aatatattaa taaagaaatt ttgcgatgtg 5340 aacaaatcag agaacttttt atgaccaaga aagatgtgga tattggtctc ttaattgaaa 5400 gtctttcagt tgtttataca acttactgtc ctgctcagta taccatctat gaaccagtga 5460 ttagacttaa aggtcaaatg aaaacccaac tctctcaaag acccttcagc tcaaaagaag 5520 ttcagagcat cttattagaa cctcatcatc taaagaatct ccaacctact gaatataaaa 5580 ctattcaagg cattctgcac gaaattggtg gaactggcat atttgttttt ctctttgcca 5640 gggttgttga actcagtagc tgtgaagaaa ctcaagcatt agcactgcga gttatactct 5700 cattaattaa atacaaccaa caaagagtac atgaattaga aaattgtaat ggactttcta 5760 tgattcatca ggtgttgatc aaacaaaaat gcattgttgg gttttacatt ttgaagaccc 5820 ttcttgaagg atgctgtggt gaagatatta tttatatgaa tgagaatgga gagtttaagt 5880 tggatgtaga ctctaatgct ataatccaag atgttaagct gttagaggaa ctattgcttg 5940 actggaagat atggagtaaa gcagagcaag gtgtttggga aactttgcta gcagctctag 6000 aagtcctcat cagagcagat caccaccagc agatgtttaa tattaagcag ttattgaaag 6060 ctcaagtggt tcatcacttt ctactgactt gtcaggtttt gcaggaatac aaagaggggc 6120 aactcacacc catgccccga gaggtttgta gatcatttgt gaaaattata gcagaagtcc 6180 ttggatctcc tccagatttg gaattattga caattatctt caatttcctt ttagcagttc 6240 accctcctac taatacttac gtttgtcaca atcccacgaa cttctacttt tctttgcaca 6300 tagatggcaa gatctttcag gagaaagtgc ggtcaatcat gtacctgagg cattccagca 6360 gtggaggaag gtcccttatg agccctggat ttatggtaat aagcccatct ggttttactg 6420 cttcaccata tgaaggagag aattcctcta atattattcc acaacagatg gccgcccata 6480 tgctgcgttc tagaagccta ccagcattcc ctacttcttc actactaacg caatcacaaa 6540 aactgactgg aagtttgggt tgtagtatcg acaggttaca aaatattgca gatacttatg 6600 ttgccaccca atcaaagaaa caaaattctt tggggagttc cgacacactg aaaaaaggca 6660 aagaggacgc attcatcagt agctgtgagt ctgcaaaaac tgtttgtgaa atggaagctg 6720 tcctctcagc ccaggtctct gtcagtgatg tcccaaaggg agtgctggga tttccagtgg 6780 tcaaagcaga tcataaacag ttgggagcag aacccaggtc agaagatgac agtcctgggg 6840 atgagtcctg cccacgccga cctgattacc taaagggatt ggcctccttc cagcgaagcc 6900 acagcactat tgcaagcctt gggctagctt ttccttcaca gaacggatct gcagctgttg 6960 gccgttggcc aagtcttgtt gatagaaaca ctgatgattg ggaaaacttt gcctattctc 7020 ttggttatga gccaaattac aaccgaactg caagtgctca cagtgtaact gaagactgtt 7080 tggtacctat atgctgtgga ttatatgaac tcctaagtgg ggttcttctt atcctgcctg 7140 atgttttgct tgaagatgtg atggacaagc ttattcaagc agatacactt ttggtcctcg 7200 ttaaccaccc atcaccagct atacaacaag gtgttattaa actattagat gcatattttg 7260 ctagagcatc taaggaacaa aaagataaat ttctgaagaa tcgtggattt tccttgctag 7320 ccaaccagtt gtatcttcat cgaggaactc aagaattgtt agaatgcttc atcgaaatgt 7380 tctttggtcg acatattggc cttgatgaag aatttgatct ggaagatgtg agaaacatgg 7440 gattgtttca gaagtggtct gtcattccta ttctgggact aatagagacc tctctatatg 7500 acaacatact cttgcataat gctcttttac ttcttctcca aattttaaat tcttgttcta 7560 aggtagcaga tatgttgctg gataatggtc tactctatgt gttatgtaat acagtagcag 7620 ccctgaatgg attagaaaag aacattccca tgagtgaata taaattgctt gcttgtgata 7680 tacagcaact tttcatagca gttacaattc atgcttgcag ttcctcaggc tcacaatatt 7740 ttagggttat tgaagacctt attgtaatgc ttggatatct tcaaaatagc aaaaacaaga 7800 ggacacaaaa tatggctgtt gcactacagc ttagagttct ccaggctgct atggaattta 7860 taaggaccac cgcaaatcat gactctgaaa acctcacaga ttcactccag tcaccttctg 7920 ctccccatca tgcagtagtt caaaagcgga aaagcattgc tggtcctcga aaatttcccc 7980 ttgctcaaac tgaatcgctt ctgatgaaaa tgcgttcagt ggcaaatgat gagcttcatg 8040 tgatgatgca acggagaatg agccaagaga accctagcca agcaactgaa acggaacttg 8100 cgcagagact acagaggctc actgttttag cagtcaacag gattatttat caagaattta 8160 attcagacat tattgacatt ttgagaactc cagaaaatgt aactcaaagc aagacctcag 8220 ttttccagac cgaaatttct gaggaaaata ttcatcatga acagtcttct gttttcaatc 8280 catttcagaa agaaattttt acatatctgg tagaaggatt caaagtatct attggttcaa 8340 gtaaagccag tggttccaag cagcaatgga ctaaaattct gtggtcttgt aaggagacct 8400 tccgaatgca gcttgggaga ctactagtgc atattttgtc gccagcccac gctgcacaag 8460 agagaaagca aatttttgaa atagttcatg aaccaaatca tcaggaaata ctacgagact 8520 gtctcagccc atccctacaa catggagcca agttagtttt gtatttgtca gagttgatac 8580 ataatcacca aggtgaattg actgaagaag agctaggcac agcagaactg cttatgaatg 8640 ctttgaagtt atgtggtcac aagtgcatcc ctcccagtgc atcaacaaaa gcagacctta 8700 ttaaaatgat caaagaggaa caaaagaaat atgaaactga agaaggagtg aataaagctg 8760 cttggcagaa aacagttaac aataatcaac aaagtctctt tcagcgtctg gattcaaaat 8820 caaaggatat atctaaaata gctgcagata tcacccaggc agtgtctctc tcccaaggaa 8880 atgagagaaa aaaggtgatc cagcatatta gaggaatgta taaagtagat ttgagtgcca 8940 gcagacattg gcaggaactt attcagcagc tgacacatga tagagcagta tggtatgacc 9000 ccatctacta tccaacctca tggcagttgg atccaacaga agggccaaat cgagagagga 9060 gacgtttaca gagatgttat ttaactattc caaataagta tctccttagg gatagacaga 9120 aatcagaaga tgttgtcaaa ccaccactct cttacctgtt tgaagacaaa actcattctt 9180 ctttctcttc tactgtcaaa gacaaagctg caagtgaatc tataagagtg aatcgaagat 9240 gcatcagtgt tgcaccatct agagagacag ctggtgaatt gttactaggt aaatgtggaa 9300 tgtattttgt ggaagataat gcttctgata cagttgaaag ttcgagcctt cagggagagt 9360 tggaaccagc atcattttcc tggacatatg aagaaattaa agaagttcac aagcgttggt 9420 ggcaattgag agataatgct gtagaaatct ttctaacaaa tggcagaaca ctcctgttgg 9480 catttgataa caccaaggtt cgtgatgatg tataccacaa tatactcaca aataacctcc 9540 ctaatcttct ggaatatggt aacatcaccg ctctgacaaa tttatggtat actgggcaaa 9600 ttactaattt tgaatatttg actcacttaa acaaacatgc tggccgatcc ttcaatgatc 9660 tcatgcagta tcctgtgttc ccatttatac ttgctgacta cgttagtgag acacttgacc 9720 tcaatgatct gttgatatac agaaatctct ctaaacctat agctgttcag tataaagaaa 9780 aagaagatcg ttatgtggac acatacaagt acttggagga agagtaccgc aaaggagcca 9840 gagaagatga ccccatgcct cccgtgcagc cctatcacta tggctcccac tattccaata 9900 gcggcactgt gcttcacttc ctggtcagga tgcctccttt cactaaaatg tttttagcct 9960 atcaagatca aagttttgac attccagaca gaacttttca ttctacaaat acaacttggc 10020 gactctcatc ttttgaatct atgactgatg tgaaagaact tatcccagag tttttctatc 10080 ttccagagtt cctagttaac cgtgaaggtt ttgattttgg tgtgcgtcag aatggtgaac 10140 gggttaatca cgtcaacctt cccccttggg cgcgtaatga tcctcgtctt tttatcctca 10200 tccatcggca ggctctagag tctgactacg tgtcgcagaa catctgtcag tggattgact 10260 tggtgtttgg gtataagcaa aaggggaagg cttctgttca agcgatcaat gtttttcatc 10320 ctgctacata ttttggaatg gatgtctctg cagttgaaga tccagttcag agacgagcgc 10380 tagaaaccat gataaaaacc tacgggcaga ctccccgtca gctgttccac atggcccatg 10440 tgagcagacc tggagccaag ctcaatattg aaggagagct tccagctgct gtggggttgc 10500 tagtgcagtt tgctttcagg gagacccgag aacaggtcaa agaaatcacc tatccgagtc 10560 ctttgtcatg gataaaaggc ttgaaatggg gggaatacgt gggttccccc agtgctccag 10620 tacctgtggt ctgcttcagc cagccccacg gagaaagatt tggctctctc caggctctgc 10680 ccaccagagc aatctgtggt ttgtcacgga atttctgtct tctgatgaca tatagcaagg 10740 aacaaggtgt gagaagcatg aacagtacgg acattcagtg gtcagccatc ctgagctggg 10800 gatatgctga taatatttta aggttgaaga gtaaacaaag tgagcctcca gtaaacttta 10860 ttcaaagttc acaacagtac caggtgacta gttgtgcttg ggtgcctgac agttgccagc 10920 tgtttactgg aagcaaatgc ggtgtcatca cagcctacac aaacagattt acaagcagca 10980 cgccatcaga aatagaaatg gagactcaaa tacatctcta tggtcacaca gaagagataa 11040 ccagcttatt tgtttgcaaa ccatacagta tactgataag tgtgagcaga gacggaacct 11100 gcatcatatg ggatttaaac aggttatgct atgtacaaag tctggcggga cacaaaagcc 11160 ctgtcacagc tgtctctgcc agtgaaacct caggtgatat tgctactgtg tgtgattcag 11220 ctggcggagg cagtgacctc agactctgga cggtgaacgg ggatctcgtt ggacatgtcc 11280 actgcaggga gatcatctgt tccgtggctt tctccaacca gcctgaggga gtatctatca 11340 atgtaatcgc tgggggatta gaaaatggaa ttgtaaggtt atggagcaca tgggacttaa 11400 agcctgtgag agaaattaca tttcccaaat caaataagcc catcatcagc cttacatttt 11460 cttgtgatgg ccaccatttg tacacagcaa acagtgatgg gaccgtgatt gcctggtgtc 11520 ggaaggacca gcagcgcttg aaacagccaa tgttctattc cttccttagc agctatgcag 11580 ccgggtgaat gcgaatgaac ttcacgttct ccaaagcact ttaactccaa actagatttg 11640 ttgacttcac cagttttagg aggttgaacc taaagaaatg gatgactgga caaaccatcc 11700 aaataatgat aaagtctatt catctgcaca aaattctgaa gagtcacatg atcctaagag 11760 gaaagttctg ttctatttta gtgataatct ggaagattgt gtcaatatgc actagccaac 11820 aagttttaag cctcgcatgg tacattaaaa tgatattctt aaaatttttt cccaccaagg 11880 tattccaaag aaaatattaa ggtctcccct ttttctatga ttccaaaagg accagtagaa 11940 tttaaattgg ttggttgatt gtttatataa aacacactaa aattatattt taaaagttta 12000 ctgccatgaa atactcctcc caccacacac acatgctcca aaagaggaaa gaaaaaaaga 12060 taatttttag gacttgataa ttgctttctt tgagaagcaa attattcagt aggtgcctct 12120 gtaccaaata ttttatggaa tatctaaata ctaaaataaa ctatgaatga atctcaaaat 12180 taggcagttt ttgccagttg ctttcttagc tcaaaggaga accagaattt ttttgacagc 12240 cacaaacaag aatacaggta tcttggattt cagacacatt ctgtttcttc ataaaaattt 12300 tacttaaaat ctgtaacgct agatattgac tatccttagt tgagtcactg aggtttaaac 12360 acaatggtaa gtcttaaagt ctgctattta cagagcattg aatctgtacc aatttgcaat 12420 agaaagcctt cagtatgcaa gaagtttgca tgggtattaa gaacacagcc taaataaggc 12480 atttgatcta atctgcagga agaattttct tccccaaaac agaattataa aagcttactt 12540 taaacaggag gcagaataat tcttttagga aaccatttca ttctgtttct actaacctat 12600 accatctgag aattctagga agaataataa aatctcgtgt attccacagc aaacttacat 12660 accataaaga cagaattcct aaacatcttg gagccgtctg tctctcccat atgatggctg 12720 tctgtatatt tttacttggg gtgctgcttt attggctttg aaaacactgt cagataagct 12780 cagtaatatg ttaccatggg ataaaaatat gtatccctgc ctaagaataa cttgtgcatt 12840 tgttatggaa atttaattca tatggtgttt acagtactac ttttgtaact tccagacttt 12900 ctaaaacatt ctgcttaaaa accatataaa atataattcc aaagtctctg ctgtcaagat 12960 agattcgaga gaaagcacgt ggccatgtat gctttaacct taaactgcat acacatgtag 13020 tgatacctag gctgcattta gatcaccgtg tgctcaggcc aggtgtgaat cctgaggtcc 13080 atggaggtgc agagatgaga ttactcctat tcacgttgaa gtgatttgct ttgttaacaa 13140 aaaattgcag ctattgtcta gctttcattt ttttactgag aactttaaat tagtccccta 13200 ttagaatagg gttgctactc atcttttttt aaaaaccgaa tttcatcatt tatctaaaga 13260 gaaaatatgc agaataactg gtcttgttaa gagtgcaata ttatattttt atgtaaaaat 13320 aaaaattaat ttggggggat tatttattca gcatgaaacc taatatgtat atgtttgaaa 13380 tacttcataa tgtgcatgtt gtagcaaaca tttctgtaaa ttatcacaag ctctgttacc 13440 tttatataca ctgcctcttc aatttggaaa taaatttcat aaaaatagat gtaaacaaaa 13500 aaa 13503 <210> 2 <211> 3801 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Ser Thr Asp Ser Asn Ser Leu Ala Arg Glu Phe Leu Thr Asp Val 1 5 10 15 Asn Arg Leu Cys Asn Ala Val Val Gln Arg Val Glu Ala Arg Glu Glu 20 25 30 Glu Glu Glu Glu Thr His Met Ala Thr Leu Gly Gln Tyr Leu Val His 35 40 45 Gly Arg Gly Phe Leu Leu Leu Thr Lys Leu Asn Ser Ile Ile Asp Gln 50 55 60 Ala Leu Thr Cys Arg Glu Glu Leu Leu Thr Leu Leu Leu Ser Leu Leu 65 70 75 80 Pro Leu Val Trp Lys Ile Pro Val Gln Glu Glu Lys Ala Thr Asp Phe 85 90 95 Asn Leu Pro Leu Ser Ala Asp Ile Ile Leu Thr Lys Glu Lys Asn Ser 100 105 110 Ser Ser Gln Arg Ser Thr Gln Glu Lys Leu His Leu Glu Gly Ser Ala 115 120 125 Leu Ser Ser Gln Val Ser Ala Lys Val Asn Val Phe Arg Lys Ser Arg 130 135 140 Arg Gln Arg Lys Ile Thr His Arg Tyr Ser Val Arg Asp Ala Arg Lys 145 150 155 160 Thr Gln Leu Ser Thr Ser Asp Ser Glu Ala Asn Ser Asp Glu Lys Gly 165 170 175 Ile Ala Met Asn Lys His Arg Arg Pro His Leu Leu His His Phe Leu 180 185 190 Thr Ser Phe Pro Lys Gln Asp His Pro Lys Ala Lys Leu Asp Arg Leu 195 200 205 Ala Thr Lys Glu Gln Thr Pro Pro Asp Ala Met Ala Leu Glu Asn Ser 210 215 220 Arg Glu Ile Ile Pro Arg Gln Gly Ser Asn Thr Asp Ile Leu Ser Glu 225 230 235 240 Pro Ala Ala Leu Ser Val Ile Ser Asn Met Asn Asn Ser Pro Phe Asp 245 250 255 Leu Cys His Val Leu Leu Ser Leu Leu Glu Lys Val Cys Lys Phe Asp 260 265 270 Val Thr Leu Asn His Asn Ser Pro Leu Ala Ala Ser Val Val Pro Thr 275 280 285 Leu Thr Glu Phe Leu Ala Gly Phe Gly Asp Cys Cys Ser Leu Ser Asp 290 295 300 Asn Leu Glu Ser Arg Val Val Ser Ala Gly Trp Thr Glu Glu Pro Val 305 310 315 320 Ala Leu Ile Gln Arg Met Leu Phe Arg Thr Val Leu His Leu Leu Ser 325 330 335 Val Asp Val Ser Thr Ala Glu Met Met Pro Glu Asn Leu Arg Lys Asn 340 345 350 Leu Thr Glu Leu Leu Arg Ala Ala Leu Lys Ile Arg Ile Cys Leu Glu 355 360 365 Lys Gln Pro Asp Pro Phe Ala Pro Arg Gln Lys Lys Thr Leu Gln Glu 370 375 380 Val Gln Glu Asp Phe Val Phe Ser Lys Tyr Arg His Arg Ala Leu Leu 385 390 395 400 Leu Pro Glu Leu Leu Glu Gly Val Leu Gln Ile Leu Ile Cys Cys Leu 405 410 415 Gln Ser Ala Ala Ser Asn Pro Phe Tyr Phe Ser Gln Ala Met Asp Leu 420 425 430 Val Gln Glu Phe Ile Gln His His Gly Phe Asn Leu Phe Glu Thr Ala 435 440 445 Val Leu Gln Met Glu Trp Leu Val Leu Arg Asp Gly Val Pro Pro Glu 450 455 460 Ala Ser Glu His Leu Lys Ala Leu Ile Asn Ser Val Met Lys Ile Met 465 470 475 480 Ser Thr Val Lys Lys Val Lys Ser Glu Gln Leu His His Ser Met Cys 485 490 495 Thr Arg Lys Arg His Arg Arg Cys Glu Tyr Ser His Phe Met His His 500 505 510 His Arg Asp Leu Ser Gly Leu Leu Val Ser Ala Phe Lys Asn Gln Val 515 520 525 Ser Lys Asn Pro Phe Glu Glu Thr Ala Asp Gly Asp Val Tyr Tyr Pro 530 535 540 Glu Arg Cys Cys Cys Ile Ala Val Cys Ala His Gln Cys Leu Arg Leu 545 550 555 560 Leu Gln Gln Ala Ser Leu Ser Ser Thr Cys Val Gln Ile Leu Ser Gly 565 570 575 Val His Asn Ile Gly Ile Cys Cys Cys Met Asp Pro Lys Ser Val Ile 580 585 590 Ile Pro Leu Leu His Ala Phe Lys Leu Pro Ala Leu Lys Asn Phe Gln 595 600 605 Gln His Ile Leu Asn Ile Leu Asn Lys Leu Ile Leu Asp Gln Leu Gly 610 615 620 Gly Ala Glu Ile Ser Pro Lys Ile Lys Lys Ala Ala Cys Asn Ile Cys 625 630 635 640 Thr Val Asp Ser Asp Gln Leu Ala Gln Leu Glu Glu Thr Leu Gln Gly 645 650 655 Asn Leu Cys Asp Ala Glu Leu Ser Ser Ser Leu Ser Ser Pro Ser Tyr 660 665 670 Arg Phe Gln Gly Ile Leu Pro Ser Ser Gly Ser Glu Asp Leu Leu Trp 675 680 685 Lys Trp Asp Ala Leu Lys Ala Tyr Gln Asn Phe Val Phe Glu Glu Asp 690 695 700 Arg Leu His Ser Ile Gln Ile Ala Asn His Ile Cys Asn Leu Ile Gln 705 710 715 720 Lys Gly Asn Ile Val Val Gln Trp Lys Leu Tyr Asn Tyr Ile Phe Asn 725 730 735 Pro Val Leu Gln Arg Gly Val Glu Leu Ala His His Cys Gln His Leu 740 745 750 Ser Val Thr Ser Ala Gln Ser His Val Cys Ser His His Asn Gln Cys 755 760 765 Leu Pro Gln Asp Val Leu Gln Ile Tyr Val Lys Thr Leu Pro Ile Leu 770 775 780 Leu Lys Ser Arg Val Ile Arg Asp Leu Phe Leu Ser Cys Asn Gly Val 785 790 795 800 Ser Gln Ile Ile Glu Leu Asn Cys Leu Asn Gly Ile Arg Ser His Ser 805 810 815 Leu Lys Ala Phe Glu Thr Leu Ile Ile Ser Leu Gly Glu Gln Gln Lys 820 825 830 Asp Ala Ser Val Pro Asp Ile Asp Gly Ile Asp Ile Glu Gln Lys Glu 835 840 845 Leu Ser Ser Val His Val Gly Thr Ser Phe His His Gln Gln Ala Tyr 850 855 860 Ser Asp Ser Pro Gln Ser Leu Ser Lys Phe Tyr Ala Gly Leu Lys Glu 865 870 875 880 Ala Tyr Pro Lys Arg Arg Lys Thr Val Asn Gln Asp Val His Ile Asn 885 890 895 Thr Ile Asn Leu Phe Leu Cys Val Ala Phe Leu Cys Val Ser Lys Glu 900 905 910 Ala Glu Ser Asp Arg Glu Ser Ala Asn Asp Ser Glu Asp Thr Ser Gly 915 920 925 Tyr Asp Ser Thr Ala Ser Glu Pro Leu Ser His Met Leu Pro Cys Ile 930 935 940 Ser Leu Glu Ser Leu Val Leu Pro Ser Pro Glu His Met His Gln Ala 945 950 955 960 Ala Asp Ile Trp Ser Met Cys Arg Trp Ile Tyr Met Leu Ser Ser Val 965 970 975 Phe Gln Lys Gln Phe Tyr Arg Leu Gly Gly Phe Arg Val Cys His Lys 980 985 990 Leu Ile Phe Met Ile Ile Gln Lys Leu Phe Arg Ser His Lys Glu Glu 995 1000 1005 Gln Gly Lys Lys Glu Gly Asp Thr Ser Val Asn Glu Asn Gln Asp 1010 1015 1020 Leu Asn Arg Ile Ser Gln Pro Lys Arg Thr Met Lys Glu Asp Leu 1025 1030 1035 Leu Ser Leu Ala Ile Lys Ser Asp Pro Ile Pro Ser Glu Leu Gly 1040 1045 1050 Ser Leu Lys Lys Ser Ala Asp Ser Leu Gly Lys Leu Glu Leu Gln 1055 1060 1065 His Ile Ser Ser Ile Asn Val Glu Glu Val Ser Ala Thr Glu Ala 1070 1075 1080 Ala Pro Glu Glu Ala Lys Leu Phe Thr Ser Gln Glu Ser Glu Thr 1085 1090 1095 Ser Leu Gln Ser Ile Arg Leu Leu Glu Ala Leu Leu Ala Ile Cys 1100 1105 1110 Leu His Gly Ala Arg Thr Ser Gln Gln Lys Met Glu Leu Glu Leu 1115 1120 1125 Pro Asn Gln Asn Leu Ser Val Glu Ser Ile Leu Phe Glu Met Arg 1130 1135 1140 Asp His Leu Ser Gln Ser Lys Val Ile Glu Thr Gln Leu Ala Lys 1145 1150 1155 Pro Leu Phe Asp Ala Leu Leu Arg Val Ala Leu Gly Asn Tyr Ser 1160 1165 1170 Ala Asp Phe Glu His Asn Asp Ala Met Thr Glu Lys Ser His Gln 1175 1180 1185 Ser Ala Glu Glu Leu Ser Ser Gln Pro Gly Asp Phe Ser Glu Glu 1190 1195 1200 Ala Glu Asp Ser Gln Cys Cys Ser Phe Lys Leu Leu Val Glu Glu 1205 1210 1215 Glu Gly Tyr Glu Ala Asp Ser Glu Ser Asn Pro Glu Asp Gly Glu 1220 1225 1230 Thr Gln Asp Asp Gly Val Asp Leu Lys Ser Glu Thr Glu Gly Phe 1235 1240 1245 Ser Ala Ser Ser Ser Pro Asn Asp Leu Leu Glu Asn Leu Thr Gln 1250 1255 1260 Gly Glu Ile Ile Tyr Pro Glu Ile Cys Met Leu Glu Leu Asn Leu 1265 1270 1275 Leu Ser Ala Ser Lys Ala Lys Leu Asp Val Leu Ala His Val Phe 1280 1285 1290 Glu Ser Phe Leu Lys Ile Ile Arg Gln Lys Glu Lys Asn Val Phe 1295 1300 1305 Leu Leu Met Gln Gln Gly Thr Val Lys Asn Leu Leu Gly Gly Phe 1310 1315 1320 Leu Ser Ile Leu Thr Gln Asp Asp Ser Asp Phe Gln Ala Cys Gln 1325 1330 1335 Arg Val Leu Val Asp Leu Leu Val Ser Leu Met Ser Ser Arg Thr 1340 1345 1350 Cys Ser Glu Glu Leu Thr Leu Leu Leu Arg Ile Phe Leu Glu Lys 1355 1360 1365 Ser Pro Cys Thr Lys Ile Leu Leu Leu Gly Ile Leu Lys Ile Ile 1370 1375 1380 Glu Ser Asp Thr Thr Met Ser Pro Ser Gln Tyr Leu Thr Phe Pro 1385 1390 1395 Leu Leu His Ala Pro Asn Leu Ser Asn Gly Val Ser Ser Gln Lys 1400 1405 1410 Tyr Pro Gly Ile Leu Asn Ser Lys Ala Met Gly Leu Leu Arg Arg 1415 1420 1425 Ala Arg Val Ser Arg Ser Lys Lys Glu Ala Asp Arg Glu Ser Phe 1430 1435 1440 Pro His Arg Leu Leu Ser Ser Trp His Ile Ala Pro Val His Leu 1445 1450 1455 Pro Leu Leu Gly Gln Asn Cys Trp Pro His Leu Ser Glu Gly Phe 1460 1465 1470 Ser Val Ser Leu Trp Phe Asn Val Glu Cys Ile His Glu Ala Glu 1475 1480 1485 Ser Thr Thr Glu Lys Gly Lys Lys Ile Lys Lys Arg Asn Lys Ser 1490 1495 1500 Leu Ile Leu Pro Asp Ser Ser Phe Asp Gly Thr Glu Ser Asp Arg 1505 1510 1515 Pro Glu Gly Ala Glu Tyr Ile Asn Pro Gly Glu Arg Leu Ile Glu 1520 1525 1530 Glu Gly Cys Ile His Ile Ile Ser Leu Gly Ser Lys Ala Leu Met 1535 1540 1545 Ile Gln Val Trp Ala Asp Pro His Asn Ala Thr Leu Ile Phe Arg 1550 1555 1560 Val Cys Met Asp Ser Asn Asp Asp Met Lys Ala Val Leu Leu Ala 1565 1570 1575 Gln Val Glu Ser Gln Glu Asn Ile Phe Leu Pro Ser Lys Trp Gln 1580 1585 1590 His Leu Val Leu Thr Tyr Leu Gln Gln Pro Gln Gly Lys Arg Arg 1595 1600 1605 Ile His Gly Lys Ile Ser Ile Trp Val Ser Gly Gln Arg Lys Pro 1610 1615 1620 Asp Val Thr Leu Asp Phe Met Leu Pro Arg Lys Thr Ser Leu Ser 1625 1630 1635 Ser Asp Ser Asn Lys Thr Phe Cys Met Ile Gly His Cys Leu Ser 1640 1645 1650 Ser Gln Glu Glu Phe Leu Gln Leu Ala Gly Lys Trp Asp Leu Gly 1655 1660 1665 Asn Leu Leu Leu Phe Asn Gly Ala Lys Val Gly Ser Gln Glu Ala 1670 1675 1680 Phe Tyr Leu Tyr Ala Cys Gly Pro Asn His Thr Ser Val Met Pro 1685 1690 1695 Cys Lys Tyr Gly Lys Pro Val Asn Asp Tyr Ser Lys Tyr Ile Asn 1700 1705 1710 Lys Glu Ile Leu Arg Cys Glu Gln Ile Arg Glu Leu Phe Met Thr 1715 1720 1725 Lys Lys Asp Val Asp Ile Gly Leu Leu Ile Glu Ser Leu Ser Val 1730 1735 1740 Val Tyr Thr Thr Tyr Cys Pro Ala Gln Tyr Thr Ile Tyr Glu Pro 1745 1750 1755 Val Ile Arg Leu Lys Gly Gln Met Lys Thr Gln Leu Ser Gln Arg 1760 1765 1770 Pro Phe Ser Ser Lys Glu Val Gln Ser Ile Leu Leu Glu Pro His 1775 1780 1785 His Leu Lys Asn Leu Gln Pro Thr Glu Tyr Lys Thr Ile Gln Gly 1790 1795 1800 Ile Leu His Glu Ile Gly Gly Thr Gly Ile Phe Val Phe Leu Phe 1805 1810 1815 Ala Arg Val Val Glu Leu Ser Ser Cys Glu Glu Thr Gln Ala Leu 1820 1825 1830 Ala Leu Arg Val Ile Leu Ser Leu Ile Lys Tyr Asn Gln Gln Arg 1835 1840 1845 Val His Glu Leu Glu Asn Cys Asn Gly Leu Ser Met Ile His Gln 1850 1855 1860 Val Leu Ile Lys Gln Lys Cys Ile Val Gly Phe Tyr Ile Leu Lys 1865 1870 1875 Thr Leu Leu Glu Gly Cys Cys Gly Glu Asp Ile Ile Tyr Met Asn 1880 1885 1890 Glu Asn Gly Glu Phe Lys Leu Asp Val Asp Ser Asn Ala Ile Ile 1895 1900 1905 Gln Asp Val Lys Leu Leu Glu Glu Leu Leu Leu Asp Trp Lys Ile 1910 1915 1920 Trp Ser Lys Ala Glu Gln Gly Val Trp Glu Thr Leu Leu Ala Ala 1925 1930 1935 Leu Glu Val Leu Ile Arg Ala Asp His His Gln Gln Met Phe Asn 1940 1945 1950 Ile Lys Gln Leu Leu Lys Ala Gln Val Val His His Phe Leu Leu 1955 1960 1965 Thr Cys Gln Val Leu Gln Glu Tyr Lys Glu Gly Gln Leu Thr Pro 1970 1975 1980 Met Pro Arg Glu Val Cys Arg Ser Phe Val Lys Ile Ile Ala Glu 1985 1990 1995 Val Leu Gly Ser Pro Pro Asp Leu Glu Leu Leu Thr Ile Ile Phe 2000 2005 2010 Asn Phe Leu Leu Ala Val His Pro Pro Thr Asn Thr Tyr Val Cys 2015 2020 2025 His Asn Pro Thr Asn Phe Tyr Phe Ser Leu His Ile Asp Gly Lys 2030 2035 2040 Ile Phe Gln Glu Lys Val Arg Ser Ile Met Tyr Leu Arg His Ser 2045 2050 2055 Ser Ser Gly Gly Arg Ser Leu Met Ser Pro Gly Phe Met Val Ile 2060 2065 2070 Ser Pro Ser Gly Phe Thr Ala Ser Pro Tyr Glu Gly Glu Asn Ser 2075 2080 2085 Ser Asn Ile Ile Pro Gln Gln Met Ala Ala His Met Leu Arg Ser 2090 2095 2100 Arg Ser Leu Pro Ala Phe Pro Thr Ser Ser Leu Leu Thr Gln Ser 2105 2110 2115 Gln Lys Leu Thr Gly Ser Leu Gly Cys Ser Ile Asp Arg Leu Gln 2120 2125 2130 Asn Ile Ala Asp Thr Tyr Val Ala Thr Gln Ser Lys Lys Gln Asn 2135 2140 2145 Ser Leu Gly Ser Ser Asp Thr Leu Lys Lys Gly Lys Glu Asp Ala 2150 2155 2160 Phe Ile Ser Ser Cys Glu Ser Ala Lys Thr Val Cys Glu Met Glu 2165 2170 2175 Ala Val Leu Ser Ala Gln Val Ser Val Ser Asp Val Pro Lys Gly 2180 2185 2190 Val Leu Gly Phe Pro Val Val Lys Ala Asp His Lys Gln Leu Gly 2195 2200 2205 Ala Glu Pro Arg Ser Glu Asp Asp Ser Pro Gly Asp Glu Ser Cys 2210 2215 2220 Pro Arg Arg Pro Asp Tyr Leu Lys Gly Leu Ala Ser Phe Gln Arg 2225 2230 2235 Ser His Ser Thr Ile Ala Ser Leu Gly Leu Ala Phe Pro Ser Gln 2240 2245 2250 Asn Gly Ser Ala Ala Val Gly Arg Trp Pro Ser Leu Val Asp Arg 2255 2260 2265 Asn Thr Asp Asp Trp Glu Asn Phe Ala Tyr Ser Leu Gly Tyr Glu 2270 2275 2280 Pro Asn Tyr Asn Arg Thr Ala Ser Ala His Ser Val Thr Glu Asp 2285 2290 2295 Cys Leu Val Pro Ile Cys Cys Gly Leu Tyr Glu Leu Leu Ser Gly 2300 2305 2310 Val Leu Leu Ile Leu Pro Asp Val Leu Leu Glu Asp Val Met Asp 2315 2320 2325 Lys Leu Ile Gln Ala Asp Thr Leu Leu Val Leu Val Asn His Pro 2330 2335 2340 Ser Pro Ala Ile Gln Gln Gly Val Ile Lys Leu Leu Asp Ala Tyr 2345 2350 2355 Phe Ala Arg Ala Ser Lys Glu Gln Lys Asp Lys Phe Leu Lys Asn 2360 2365 2370 Arg Gly Phe Ser Leu Leu Ala Asn Gln Leu Tyr Leu His Arg Gly 2375 2380 2385 Thr Gln Glu Leu Leu Glu Cys Phe Ile Glu Met Phe Phe Gly Arg 2390 2395 2400 His Ile Gly Leu Asp Glu Glu Phe Asp Leu Glu Asp Val Arg Asn 2405 2410 2415 Met Gly Leu Phe Gln Lys Trp Ser Val Ile Pro Ile Leu Gly Leu 2420 2425 2430 Ile Glu Thr Ser Leu Tyr Asp Asn Ile Leu Leu His Asn Ala Leu 2435 2440 2445 Leu Leu Leu Leu Gln Ile Leu Asn Ser Cys Ser Lys Val Ala Asp 2450 2455 2460 Met Leu Leu Asp Asn Gly Leu Leu Tyr Val Leu Cys Asn Thr Val 2465 2470 2475 Ala Ala Leu Asn Gly Leu Glu Lys Asn Ile Pro Met Ser Glu Tyr 2480 2485 2490 Lys Leu Leu Ala Cys Asp Ile Gln Gln Leu Phe Ile Ala Val Thr 2495 2500 2505 Ile His Ala Cys Ser Ser Ser Gly Ser Gln Tyr Phe Arg Val Ile 2510 2515 2520 Glu Asp Leu Ile Val Met Leu Gly Tyr Leu Gln Asn Ser Lys Asn 2525 2530 2535 Lys Arg Thr Gln Asn Met Ala Val Ala Leu Gln Leu Arg Val Leu 2540 2545 2550 Gln Ala Ala Met Glu Phe Ile Arg Thr Thr Ala Asn His Asp Ser 2555 2560 2565 Glu Asn Leu Thr Asp Ser Leu Gln Ser Pro Ser Ala Pro His His 2570 2575 2580 Ala Val Val Gln Lys Arg Lys Ser Ile Ala Gly Pro Arg Lys Phe 2585 2590 2595 Pro Leu Ala Gln Thr Glu Ser Leu Leu Met Lys Met Arg Ser Val 2600 2605 2610 Ala Asn Asp Glu Leu His Val Met Met Gln Arg Arg Met Ser Gln 2615 2620 2625 Glu Asn Pro Ser Gln Ala Thr Glu Thr Glu Leu Ala Gln Arg Leu 2630 2635 2640 Gln Arg Leu Thr Val Leu Ala Val Asn Arg Ile Ile Tyr Gln Glu 2645 2650 2655 Phe Asn Ser Asp Ile Ile Asp Ile Leu Arg Thr Pro Glu Asn Val 2660 2665 2670 Thr Gln Ser Lys Thr Ser Val Phe Gln Thr Glu Ile Ser Glu Glu 2675 2680 2685 Asn Ile His His Glu Gln Ser Ser Val Phe Asn Pro Phe Gln Lys 2690 2695 2700 Glu Ile Phe Thr Tyr Leu Val Glu Gly Phe Lys Val Ser Ile Gly 2705 2710 2715 Ser Ser Lys Ala Ser Gly Ser Lys Gln Gln Trp Thr Lys Ile Leu 2720 2725 2730 Trp Ser Cys Lys Glu Thr Phe Arg Met Gln Leu Gly Arg Leu Leu 2735 2740 2745 Val His Ile Leu Ser Pro Ala His Ala Ala Gln Glu Arg Lys Gln 2750 2755 2760 Ile Phe Glu Ile Val His Glu Pro Asn His Gln Glu Ile Leu Arg 2765 2770 2775 Asp Cys Leu Ser Pro Ser Leu Gln His Gly Ala Lys Leu Val Leu 2780 2785 2790 Tyr Leu Ser Glu Leu Ile His Asn His Gln Gly Glu Leu Thr Glu 2795 2800 2805 Glu Glu Leu Gly Thr Ala Glu Leu Leu Met Asn Ala Leu Lys Leu 2810 2815 2820 Cys Gly His Lys Cys Ile Pro Pro Ser Ala Ser Thr Lys Ala Asp 2825 2830 2835 Leu Ile Lys Met Ile Lys Glu Glu Gln Lys Lys Tyr Glu Thr Glu 2840 2845 2850 Glu Gly Val Asn Lys Ala Ala Trp Gln Lys Thr Val Asn Asn Asn 2855 2860 2865 Gln Gln Ser Leu Phe Gln Arg Leu Asp Ser Lys Ser Lys Asp Ile 2870 2875 2880 Ser Lys Ile Ala Ala Asp Ile Thr Gln Ala Val Ser Leu Ser Gln 2885 2890 2895 Gly Asn Glu Arg Lys Lys Val Ile Gln His Ile Arg Gly Met Tyr 2900 2905 2910 Lys Val Asp Leu Ser Ala Ser Arg His Trp Gln Glu Leu Ile Gln 2915 2920 2925 Gln Leu Thr His Asp Arg Ala Val Trp Tyr Asp Pro Ile Tyr Tyr 2930 2935 2940 Pro Thr Ser Trp Gln Leu Asp Pro Thr Glu Gly Pro Asn Arg Glu 2945 2950 2955 Arg Arg Arg Leu Gln Arg Cys Tyr Leu Thr Ile Pro Asn Lys Tyr 2960 2965 2970 Leu Leu Arg Asp Arg Gln Lys Ser Glu Asp Val Val Lys Pro Pro 2975 2980 2985 Leu Ser Tyr Leu Phe Glu Asp Lys Thr His Ser Ser Phe Ser Ser 2990 2995 3000 Thr Val Lys Asp Lys Ala Ala Ser Glu Ser Ile Arg Val Asn Arg 3005 3010 3015 Arg Cys Ile Ser Val Ala Pro Ser Arg Glu Thr Ala Gly Glu Leu 3020 3025 3030 Leu Leu Gly Lys Cys Gly Met Tyr Phe Val Glu Asp Asn Ala Ser 3035 3040 3045 Asp Thr Val Glu Ser Ser Ser Leu Gln Gly Glu Leu Glu Pro Ala 3050 3055 3060 Ser Phe Ser Trp Thr Tyr Glu Glu Ile Lys Glu Val His Lys Arg 3065 3070 3075 Trp Trp Gln Leu Arg Asp Asn Ala Val Glu Ile Phe Leu Thr Asn 3080 3085 3090 Gly Arg Thr Leu Leu Leu Ala Phe Asp Asn Thr Lys Val Arg Asp 3095 3100 3105 Asp Val Tyr His Asn Ile Leu Thr Asn Asn Leu Pro Asn Leu Leu 3110 3115 3120 Glu Tyr Gly Asn Ile Thr Ala Leu Thr Asn Leu Trp Tyr Thr Gly 3125 3130 3135 Gln Ile Thr Asn Phe Glu Tyr Leu Thr His Leu Asn Lys His Ala 3140 3145 3150 Gly Arg Ser Phe Asn Asp Leu Met Gln Tyr Pro Val Phe Pro Phe 3155 3160 3165 Ile Leu Ala Asp Tyr Val Ser Glu Thr Leu Asp Leu Asn Asp Leu 3170 3175 3180 Leu Ile Tyr Arg Asn Leu Ser Lys Pro Ile Ala Val Gln Tyr Lys 3185 3190 3195 Glu Lys Glu Asp Arg Tyr Val Asp Thr Tyr Lys Tyr Leu Glu Glu 3200 3205 3210 Glu Tyr Arg Lys Gly Ala Arg Glu Asp Asp Pro Met Pro Pro Val 3215 3220 3225 Gln Pro Tyr His Tyr Gly Ser His Tyr Ser Asn Ser Gly Thr Val 3230 3235 3240 Leu His Phe Leu Val Arg Met Pro Pro Phe Thr Lys Met Phe Leu 3245 3250 3255 Ala Tyr Gln Asp Gln Ser Phe Asp Ile Pro Asp Arg Thr Phe His 3260 3265 3270 Ser Thr Asn Thr Thr Trp Arg Leu Ser Ser Phe Glu Ser Met Thr 3275 3280 3285 Asp Val Lys Glu Leu Ile Pro Glu Phe Phe Tyr Leu Pro Glu Phe 3290 3295 3300 Leu Val Asn Arg Glu Gly Phe Asp Phe Gly Val Arg Gln Asn Gly 3305 3310 3315 Glu Arg Val Asn His Val Asn Leu Pro Pro Trp Ala Arg Asn Asp 3320 3325 3330 Pro Arg Leu Phe Ile Leu Ile His Arg Gln Ala Leu Glu Ser Asp 3335 3340 3345 Tyr Val Ser Gln Asn Ile Cys Gln Trp Ile Asp Leu Val Phe Gly 3350 3355 3360 Tyr Lys Gln Lys Gly Lys Ala Ser Val Gln Ala Ile Asn Val Phe 3365 3370 3375 His Pro Ala Thr Tyr Phe Gly Met Asp Val Ser Ala Val Glu Asp 3380 3385 3390 Pro Val Gln Arg Arg Ala Leu Glu Thr Met Ile Lys Thr Tyr Gly 3395 3400 3405 Gln Thr Pro Arg Gln Leu Phe His Met Ala His Val Ser Arg Pro 3410 3415 3420 Gly Ala Lys Leu Asn Ile Glu Gly Glu Leu Pro Ala Ala Val Gly 3425 3430 3435 Leu Leu Val Gln Phe Ala Phe Arg Glu Thr Arg Glu Gln Val Lys 3440 3445 3450 Glu Ile Thr Tyr Pro Ser Pro Leu Ser Trp Ile Lys Gly Leu Lys 3455 3460 3465 Trp Gly Glu Tyr Val Gly Ser Pro Ser Ala Pro Val Pro Val Val 3470 3475 3480 Cys Phe Ser Gln Pro His Gly Glu Arg Phe Gly Ser Leu Gln Ala 3485 3490 3495 Leu Pro Thr Arg Ala Ile Cys Gly Leu Ser Arg Asn Phe Cys Leu 3500 3505 3510 Leu Met Thr Tyr Ser Lys Glu Gln Gly Val Arg Ser Met Asn Ser 3515 3520 3525 Thr Asp Ile Gln Trp Ser Ala Ile Leu Ser Trp Gly Tyr Ala Asp 3530 3535 3540 Asn Ile Leu Arg Leu Lys Ser Lys Gln Ser Glu Pro Pro Val Asn 3545 3550 3555 Phe Ile Gln Ser Ser Gln Gln Tyr Gln Val Thr Ser Cys Ala Trp 3560 3565 3570 Val Pro Asp Ser Cys Gln Leu Phe Thr Gly Ser Lys Cys Gly Val 3575 3580 3585 Ile Thr Ala Tyr Thr Asn Arg Phe Thr Ser Ser Thr Pro Ser Glu 3590 3595 3600 Ile Glu Met Glu Thr Gln Ile His Leu Tyr Gly His Thr Glu Glu 3605 3610 3615 Ile Thr Ser Leu Phe Val Cys Lys Pro Tyr Ser Ile Leu Ile Ser 3620 3625 3630 Val Ser Arg Asp Gly Thr Cys Ile Ile Trp Asp Leu Asn Arg Leu 3635 3640 3645 Cys Tyr Val Gln Ser Leu Ala Gly His Lys Ser Pro Val Thr Ala 3650 3655 3660 Val Ser Ala Ser Glu Thr Ser Gly Asp Ile Ala Thr Val Cys Asp 3665 3670 3675 Ser Ala Gly Gly Gly Ser Asp Leu Arg Leu Trp Thr Val Asn Gly 3680 3685 3690 Asp Leu Val Gly His Val His Cys Arg Glu Ile Ile Cys Ser Val 3695 3700 3705 Ala Phe Ser Asn Gln Pro Glu Gly Val Ser Ile Asn Val Ile Ala 3710 3715 3720 Gly Gly Leu Glu Asn Gly Ile Val Arg Leu Trp Ser Thr Trp Asp 3725 3730 3735 Leu Lys Pro Val Arg Glu Ile Thr Phe Pro Lys Ser Asn Lys Pro 3740 3745 3750 Ile Ile Ser Leu Thr Phe Ser Cys Asp Gly His His Leu Tyr Thr 3755 3760 3765 Ala Asn Ser Asp Gly Thr Val Ile Ala Trp Cys Arg Lys Asp Gln 3770 3775 3780 Gln Arg Leu Lys Gln Pro Met Phe Tyr Ser Phe Leu Ser Ser Tyr 3785 3790 3795 Ala Ala Gly 3800

Claims (24)

  1. a) 대상체에서 대상체에서 대식구 침윤을 감소시키거나 예방하기 위한 또는 혈소판 활성화를 감소시키거나 예방하기 위한 유효량의 LYST의 하나 이상의 억제제; 및
    b) 생리학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물로서,
    상기 유효량의 LYST의 하나 이상의 억제제가 상기 대상체에서 혈관 신생조직 형성을 예방하지 않는 약제학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 하나 이상의 LYST 억제제를 0.1 내지 1000 ㎎/㎏(인간의 체중)의 양으로 전달하는 투여 제형의 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 대식구 침윤을 감소시키거나 예방하기 위한 유효 용량의 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 혈소판 활성화를 감소시키거나 예방하기 위한 유효 용량의 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 하나 이상의 LYST 억제제가 항-LYST 항체의 결합 특이성을 갖는 항체, 항체 단편 또는 단백질인 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 하나 이상의 LYST 억제제가 안티센스 분자, siRNA, miRNA, 압타머(aptamer), 리보자임, 트리플렉스 형성 분자, RNAi 및 외부 가이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 기능성 핵산인 조성물.
  7. 제6항에 있어서, 하나 이상의 기능성 핵산이 발현 벡터로부터 발현되는 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 나노입자, 마이크로입자, 미셀(micelle), 에멀젼, 합성 지질단백질 입자, 리포좀, 탄소 나노튜브, 겔 또는 코팅으로 이루어진 군으로부터 선택되는 전달 비히클을 추가로 포함하는 조성물.
  9. 제1항에 있어서, 다른 항-신생내막 작용제, 화학치료제, 스테로이드 및 비-스테로이드 항염증제, 통상의 면역치료제, 면역-억제제, 사이토카인, 케모카인 및 성장 인자로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추가의 치료제를 추가로 포함하는 조성물.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는 혈관 이식편 또는 의료 장치.
  11. 제10항에 있어서, 상기 조성물이 상기 이식편 또는 장치 상으로 코팅되거나, 그 내로 혼입되는 혈관 이식편 또는 의료 장치.
  12. 제11항에 있어서, 상기 장치가 스텐트(stent), 이식물(implant), 니들(needle), 캐뉼라(cannula), 카테터(catheter), 션트(shunt), 풍선(balloon) 및 판막(valve)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 의료 장치.
  13. 제12항에 있어서, 상기 장치가 스텐트인 의료 장치.
  14. 제13항에 있어서, 상기 스텐트가 상기 조성물을 용출시키는 약물 용출 스텐트인 의료 장치.
  15. 제10항에 있어서, 상기 이식편이 자가, 보존된 자가, 동종이계, 이종 또는 합성 이식편인 혈관 이식편.
  16. 제1항 또는 제3항 내지 제9항 중 어느 한 항의 조성물 또는 제10항 내지 제15항 중 어느 한 항의 장치를 반흔(scar) 형성 또는 협착증을 야기할 수 있는 대식구 침윤의 감소 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서의 반흔 형성 또는 협착증을 야기할 수 있는 대식구 침윤의 감소 또는 예방 방법.
  17. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 조성물 또는 제10항 내지 제15항 중 어느 한 항의 장치를 동맥 또는 정맥 혈전증을 야기할 수 있는 혈소판 활성화의 감소 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서의 동맥 또는 정맥 혈전증을 야기할 수 있는 혈소판 활성화의 감소 또는 예방 방법.
  18. 제16항 또는 제17항에 있어서, 상기 대상체가 재협착증 또는 기타 혈관 증식 장애의 위험이 있거나, 재협착증 또는 기타 혈관 증식 장애를 갖는 방법.
  19. 제16항 또는 제17항에 있어서, 상기 대상체가 혈관 외상, 혈관성형술, 혈관 외과술 또는 이식 동맥병증을 겪은 적이 있거나, 이를 겪고 있거나, 이를 겪을 것인 방법.
  20. 제16항 또는 제17항에 있어서, 상기 조성물 또는 장치가 미처리 대조군 대상체에 비하여 대상체에서 반흔 조직의 형성을 감소시키거나 예방하거나, 치유를 촉진시키거나, 비대성 반흔형성(scarring), 켈로이드 또는 유착의 발생을 감소시키거나 예방하거나, 간의 섬유증, 폐의 섬유증, 심장의 섬유증 또는 신장의 섬유증을 감소시키거나 예방하거나, 신생내막 형성, 협착증 또는 재협착증을 감소시키거나 예방하거나, 혈전증을 감소시키거나 예방하거나, 이들의 임의의 조합을 위하여 사용되는 방법.
  21. 제16항에 있어서, 반흔 조직의 형성의 감소 또는 예방이 심박 조율기, 신경 자극기, 대치 심장 판막 및 인공 관절로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 생체-인공삽입 장치의 통합을 촉진시키지만, 그의 캡슐화를 차단하는 방법.
  22. 제16항에 있어서, 반흔 조직의 형성의 감소 또는 예방이 미처리 대조군 대상체에 비하여 대상체에서 혈관 이식물의 이식 위치, 혈관 손상 위치 또는 외과술 위치에서, 신생내막 형성을 치료하거나 예방하기에 유효한 방법.
  23. 제17항에 있어서, 상기 조성물 또는 장치가 미처리 대조군 대상체에 비하여 대상체에서 혈소판 유래 성장 인자, 형질전환 성장 인자 베타 또는 그의 임의의 조합의 발현을 감소시키거나 예방하기 위해 사용되는 방법.
  24. 이식편을 대상체 내로 이식하기 이전에, 상기 이식편을 생체외에서 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 조성물로 처리하는 단계를 포함하는 혈관 이식편의 협착증 또는 재협착증의 감소 방법.
KR1020167033755A 2014-05-02 2015-05-04 항-ｌｙｓｔ 면역조절을 위한 조성물 및 방법 KR102492647B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201461987910P 2014-05-02 2014-05-02
US61/987,910 2014-05-02
PCT/US2015/029014 WO2015168674A1 (en) 2014-05-02 2015-05-04 Compositions and methods for anti-lyst immunomodulation

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20170007334A true KR20170007334A (ko) 2017-01-18
KR102492647B1 KR102492647B1 (ko) 2023-01-30

Family

ID=53190038

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020167033755A KR102492647B1 (ko) 2014-05-02 2015-05-04 항-ｌｙｓｔ 면역조절을 위한 조성물 및 방법

Country Status (11)

Country Link
US (2) US20170073401A1 (ko)
EP (1) EP3137054B1 (ko)
JP (2) JP6533797B2 (ko)
KR (1) KR102492647B1 (ko)
CN (1) CN106456771B9 (ko)
AU (2) AU2015252805B2 (ko)
CA (1) CA2947494C (ko)
ES (1) ES2883837T3 (ko)
IL (1) IL248513B (ko)
RU (1) RU2728703C2 (ko)
WO (1) WO2015168674A1 (ko)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11541149B2 (en) 2015-12-11 2023-01-03 Research Institute At Nationwide Children's Hospital Systems and methods for optimized patient specific tissue engineering vascular grafts
CN109112211A (zh) * 2018-05-15 2019-01-01 广州达瑞生殖技术有限公司 一种人类胚胎Chediak-Higashi综合征LYST基因突变检测的引物组合及方法
CN112385651A (zh) * 2020-11-30 2021-02-23 南开沧州渤海新区绿色化工研究有限公司 草铵膦保湿增效组合物及制备方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999051741A2 (en) * 1998-04-03 1999-10-14 Curagen Corporation Lyst protein complexes and lyst interacting proteins

Family Cites Families (72)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
US5133732A (en) 1987-10-19 1992-07-28 Medtronic, Inc. Intravascular stent
US5891108A (en) 1994-09-12 1999-04-06 Cordis Corporation Drug delivery stent
DE69637527D1 (de) 1995-03-01 2008-06-26 Boston Scient Scimed Inc Längsflexibler und expandierbarer stent
US6821506B2 (en) 1995-06-08 2004-11-23 Barnes-Jewish Hospital Site specific binding system, imaging compositions and methods
US5922554A (en) * 1995-10-30 1999-07-13 The Regents Of The University Of California Inhibition of cellular uptake of cholesterol
EP0880586A1 (en) * 1996-02-01 1998-12-02 The University Of Florida Lyst1 and lyst2 gene compositions and methods of use
US6520983B1 (en) 1998-03-31 2003-02-18 Scimed Life Systems, Inc. Stent delivery system
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
US6261319B1 (en) 1998-07-08 2001-07-17 Scimed Life Systems, Inc. Stent
US6042597A (en) 1998-10-23 2000-03-28 Scimed Life Systems, Inc. Helical stent design
US8257425B2 (en) 1999-01-13 2012-09-04 Boston Scientific Scimed, Inc. Stent with protruding branch portion for bifurcated vessels
US20080247943A1 (en) 1999-09-24 2008-10-09 Gregory Lanza Blood Clot-Targeted Nanoparticles
US7220401B2 (en) 1999-09-24 2007-05-22 Barnes-Jewish Hospital Blood clot-targeted nanoparticles
EP1132060A2 (en) 2000-03-09 2001-09-12 LPL Systems Inc. Expandable stent
AU2001267075A1 (en) 2000-06-13 2001-12-24 Scimed Life Systems, Inc. Disintegrating stent and method of making same
US6676963B1 (en) 2000-10-27 2004-01-13 Barnes-Jewish Hospital Ligand-targeted emulsions carrying bioactive agents
JP4095895B2 (ja) 2000-12-01 2008-06-04 マックス−プランク−ゲゼルシャフト ツール フォーデルング デル ヴィッセンシャフテン エー．ヴェー． Ｒｎａ干渉を媒介する短鎖ｒｎａ分子
US7014654B2 (en) 2001-11-30 2006-03-21 Scimed Life Systems, Inc. Stent designed for the delivery of therapeutic substance or other agents
WO2003062198A1 (en) 2002-01-24 2003-07-31 Barnes Jewish Hospital Integrin targeted imaging agents
US7789903B2 (en) 2002-04-04 2010-09-07 Boston Scientific Scimed, Inc. Stent-graft with adjustable length
US6986785B2 (en) 2002-05-03 2006-01-17 Medtronic Vascular, Inc. Stent balloon assembly and methods of making same
DE10221076A1 (de) 2002-05-11 2003-11-27 Ruesch Willy Gmbh Stent
US20040002752A1 (en) 2002-06-26 2004-01-01 Scimed Life Systems, Inc. Sacrificial anode stent system
US7144419B2 (en) 2003-01-24 2006-12-05 Medtronic Vascular, Inc. Drug-polymer coated stent with blended phenoxy and styrenic block copolymers
US6918929B2 (en) 2003-01-24 2005-07-19 Medtronic Vascular, Inc. Drug-polymer coated stent with pegylated styrenic block copolymers
US7163555B2 (en) 2003-04-08 2007-01-16 Medtronic Vascular, Inc. Drug-eluting stent for controlled drug delivery
US6945992B2 (en) 2003-04-22 2005-09-20 Medtronic Vascular, Inc. Single-piece crown stent
WO2005011561A2 (en) 2003-08-04 2005-02-10 Labcoat, Ltd. Stent coating apparatus and method
US8298280B2 (en) 2003-08-21 2012-10-30 Boston Scientific Scimed, Inc. Stent with protruding branch portion for bifurcated vessels
ATE382377T1 (de) * 2003-09-29 2008-01-15 Hemoteq Ag Biokompatible, biostabile beschichtung von medizinischen oberflächen
US7744645B2 (en) 2003-09-29 2010-06-29 Medtronic Vascular, Inc. Laminated drug-polymer coated stent with dipped and cured layers
US7060090B2 (en) 2003-10-15 2006-06-13 Medtronic Vascular, Inc. Stent with increased longitudinal flexibility and scaffolding
US8157855B2 (en) 2003-12-05 2012-04-17 Boston Scientific Scimed, Inc. Detachable segment stent
CA2564868C (en) 2004-04-28 2013-11-26 Molecules For Health, Inc. Methods for treating or preventing restenosis and other vascular proliferative disorders
WO2005112570A2 (en) 2004-05-12 2005-12-01 Medtronic Vascular, Inc. Drug-polymer coated stent
US8048149B2 (en) 2004-05-13 2011-11-01 Medtronic Vascular, Inc. Intraluminal stent including therapeutic agent delivery pads, and method of manufacturing the same
JP2008512350A (ja) 2004-07-01 2008-04-24 イェール ユニバーシティ 標的化され、そして高密度で薬物が負荷されるポリマー性物質
US7323008B2 (en) 2004-08-09 2008-01-29 Medtronic Vascular, Inc. Flexible stent
WO2006096499A2 (en) 2005-03-04 2006-09-14 Washington University Mr coronary angiography with a fluorinated nanoparticle contrast agent at 1.5 t
US7396366B2 (en) 2005-05-11 2008-07-08 Boston Scientific Scimed, Inc. Ureteral stent with conforming retention structure
US8231669B2 (en) 2005-09-22 2012-07-31 Boston Scientific Scimed, Inc. Tether guided stent side branch
EP1968441A2 (en) 2005-12-02 2008-09-17 Barnes-Jewish Hospital Methods to ameliorate and image angioplasty-induced vascular injury
US8298278B2 (en) 2006-03-07 2012-10-30 Boston Scientific Scimed, Inc. Bifurcated stent with improvement securement
US8348991B2 (en) 2006-03-29 2013-01-08 Boston Scientific Scimed, Inc. Stent with overlap and high expansion
US8066760B2 (en) 2006-04-18 2011-11-29 Medtronic Vascular, Inc. Stent with movable crown
US7678141B2 (en) 2006-04-18 2010-03-16 Medtronic Vascular, Inc. Stent graft having a flexible, articulable, and axially compressible branch graft
AU2007244705A1 (en) 2006-04-27 2007-11-08 Barnes-Jewish Hospital Detection and imaging of target tissue
WO2008005111A1 (en) 2006-06-30 2008-01-10 Boston Scientific Limited Stent design with variable expansion columns along circumference
JP2009544627A (ja) * 2006-07-21 2009-12-17 プロミックス・ピーティーワイ・リミテッド 内膜過形成および関連する状態に対する治療
US8414637B2 (en) 2006-09-08 2013-04-09 Boston Scientific Scimed, Inc. Stent
US8257431B2 (en) 2006-11-01 2012-09-04 Boston Scientific Scimed, Inc. Multi-furcated ePTFE grafts and stent-graft prostheses and methods of making the same
US8398695B2 (en) 2006-11-03 2013-03-19 Boston Scientific Scimed, Inc. Side branch stenting system using a main vessel constraining side branch access balloon and side branching stent
US8052732B2 (en) 2006-11-14 2011-11-08 Medtronic Vascular, Inc. Delivery system for stent-graft with anchoring pins
US7651527B2 (en) 2006-12-15 2010-01-26 Medtronic Vascular, Inc. Bioresorbable stent
KR20090122202A (ko) * 2007-01-30 2009-11-26 헤모텍 아게 생분해성 혈관 지지체
WO2008109347A2 (en) 2007-03-02 2008-09-12 Yale University Methods for ex vivo administration of drugs to grafts using polymeric nanoparticles
US8187284B2 (en) 2007-04-23 2012-05-29 Boston Scientific Scimed, Inc. Intraluminary stent relocating apparatus
US8372138B2 (en) 2007-06-12 2013-02-12 Boston Scientific Scimed, Inc. Shape memory polymeric stent
US8252048B2 (en) 2008-03-19 2012-08-28 Boston Scientific Scimed, Inc. Drug eluting stent and method of making the same
US8100960B2 (en) 2008-03-20 2012-01-24 Medtronic Vascular, Inc. Bloused stent-graft and fenestration method
US8034099B2 (en) 2008-03-27 2011-10-11 Medtronic Vascular, Inc. Stent prosthesis having select flared crowns
US8414639B2 (en) 2008-07-08 2013-04-09 Boston Scientific Scimed, Inc. Closed-cell flexible stent hybrid
US8414656B2 (en) 2008-12-05 2013-04-09 Boston Scientific Scimed, Inc. Porous ureteral stent
US7942917B2 (en) 2009-04-17 2011-05-17 Medtronic Vascular, Inc. Hollow helical stent system
US9764043B2 (en) 2009-12-17 2017-09-19 Washington University Antithrombotic nanoparticle
US8361140B2 (en) 2009-12-29 2013-01-29 Boston Scientific Scimed, Inc. High strength low opening pressure stent design
WO2011123203A1 (en) 2010-03-29 2011-10-06 Boston Scientific Scimed, Inc. Flexible stent design
US8353952B2 (en) 2010-04-07 2013-01-15 Medtronic Vascular, Inc. Stent with therapeutic substance
RU2440128C1 (ru) * 2010-05-17 2012-01-20 Государственное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования "Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ДПО СПбМАПО Росздрава) Способ комплексной патогенетической терапии острых форм вирусного гепатита в и микст-гепатитов (в+с, в+d, в+с+d)

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999051741A2 (en) * 1998-04-03 1999-10-14 Curagen Corporation Lyst protein complexes and lyst interacting proteins

Also Published As

Publication number Publication date
AU2018205184A1 (en) 2018-08-02
WO2015168674A1 (en) 2015-11-05
IL248513B (en) 2022-02-01
RU2016147083A (ru) 2018-06-05
JP2017514844A (ja) 2017-06-08
RU2728703C2 (ru) 2020-07-31
ES2883837T3 (es) 2021-12-09
KR102492647B1 (ko) 2023-01-30
RU2016147083A3 (ko) 2018-06-05
CA2947494A1 (en) 2015-11-05
CN106456771B (zh) 2021-06-15
US20170073401A1 (en) 2017-03-16
EP3137054A1 (en) 2017-03-08
AU2015252805A1 (en) 2016-11-03
BR112016025559A2 (pt) 2018-01-16
JP2019135267A (ja) 2019-08-15
AU2015252805B2 (en) 2018-05-10
CA2947494C (en) 2020-10-20
AU2018205184B2 (en) 2020-04-30
JP7343305B2 (ja) 2023-09-12
EP3137054B1 (en) 2021-07-07
IL248513A0 (en) 2016-12-29
CN106456771B9 (zh) 2021-07-20
CN106456771A (zh) 2017-02-22
JP6533797B2 (ja) 2019-06-19
US20210238266A1 (en) 2021-08-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20210238266A1 (en) Compositions and methods for anti-lyst immunomodulation
JP6683686B2 (ja) チャネル調節剤
MXPA04002848A (es) Prevencion y tratamiento de restenosis por administracion local de medicamento.
JP2017512813A (ja) 詰め替え可能な薬物送達デバイスおよびその使用方法
US20160310645A1 (en) Compositions and Methods for Treating and Preventing Neointimal Stenosis
WO2009079451A2 (en) Compositions and methods of promoting wound healing
JP2021523103A (ja) Ｉｌ−３３を含有するマトリックス結合型小胞（ｍｂｖｓ）およびそれらの使用
EP2525806B1 (en) Angiopoietin-like-protein-4 (ANGPTL4) for the preservation of vascular endothelial-cell barrier integrity
WO2014186435A9 (en) Compositions, medical devices and grafts comprising ctp synthase 1 inhibitors and their use for reducing neointima formation
JP2016516071A (ja) 瘢痕形成を軽減するためのｓｄｆ−１の使用
EP3316871A1 (en) Talc-bound compositions and uses thereof
WO2002009735A2 (en) Methods and devices to modulate the wound response
US20030129214A1 (en) Methods of enhancing the biocompatibility of an implantable medical device
KR102191695B1 (ko) 전이 억제제
US20160083522A1 (en) Arginine-Grafted Bioreducible Polymer Systems and Use in Treatment of Cardiac Conditions
BR112016025559B1 (pt) Composição farmacêutica, enxerto vascular, stent, ou implante, composição para a redução ou prevenção da infiltração de macrófagos, da ativação de plaquetas e de estenose ou reestenose de um enxerto vascular
US20230190959A1 (en) Nucleic acid-based compositions and methods for treating small vessel diseases
WO2010053561A2 (en) Compositions and methods for dendritic cell modulation in post-ischemic wounds
Mentkowski Exploring Extracellular Vesicles as Therapeutic Vectors: From Surface Engineering for Enhanced Cardiac Retention to Immunomodulation
Lisella Polymeric Nanoparticles for the Controlled Administration of Bioactive Protein Agents
EP2943212A1 (en) Methods and pharmaceutical compositions for the cardioprotection

Legal Events

Date Code Title Description
AMND Amendment
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
X091 Application refused [patent]
AMND Amendment
X701 Decision to grant (after re-examination)