KR20160115874A

KR20160115874A - 이고들빼기 발효 조성물의 제조방법과 이로부터 제조되는 이고들빼기 발효 조성물, 그리고 이를 포함하는 간 독성 해소 촉진용 약학 조성물 및 건강 기능 식품

Info

Publication number: KR20160115874A
Application number: KR1020160110184A
Authority: KR
Inventors: 이현구; 김순동
Original assignee: 이현구
Priority date: 2016-08-29
Filing date: 2016-08-29
Publication date: 2016-10-06
Also published as: KR101740035B1

Abstract

본 발명은, 발효 공정을 통해 이고들빼기의 약리 효과를 증진시킴으로써, 알코올에 의한 간 독성을 경감시켜, 손상을 입은 간 조직이 빠르게 회복될 수 있는 이고들빼기 발효 조성물의 제조방법과 이로부터 제조되는 이고들빼기 발효 조성물, 그리고 상기 이고들빼기 발효 조성물을 포함하는 간 독성 해소 촉진용 약학 조성물 및 건강 기능 식품에 관한 것이다.
구체적으로 본 발명은, 황국균을 포함한 균주를 이용하여 10℃ 내지 50℃의 온도에서 10 시간 내지 500시간 동안 이고들빼기를 포함한 식물을 발효하는 단계를 포함하는 이고들빼기 발효 조성물의 제조 방법에 관한 것이다.

Description

이고들빼기 발효 조성물의 제조방법과 이로부터 제조되는 이고들빼기 발효 조성물, 그리고 이를 포함하는 간 독성 해소 촉진용 약학 조성물 및 건강 기능 식품{PREPRATION METHOD OF YOUNGIA DENTICULATA HOUTT KITAMURA FERMENTATION COMPOSITION AND YOUNGIA DENTICULATA HOUTT KITAMURA FERMENTATION COMPOSITION USING THE SAME, PHARMACEUTICAL COMPOSITION AND FUNCTIONAL HEALTH FOOD FOR PROMOTING REDUCTION OF LIVER TOXICITY INCLUDING THE SAME}

본 발명은 이고들빼기 발효 조성물의 제조방법과 이로부터 제조되는 이고들빼기 발효 조성물, 그리고 이를 포함하는 간 독성 해소 촉진용 약학 조성물 및 건강 기능 식품에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 간단한 발효 공정을 통해 이고들빼기의 약리 효과를 증진시킴으로써, 알코올에 의한 간 독성을 경감시켜, 손상을 입은 간 조직이 빠르게 회복될 수 있는 이고들빼기 발효 조성물의 제조방법과 이로부터 제조되는 이고들빼기 발효 조성물, 그리고 상기 이고들빼기 발효 조성물을 포함하는 간 독성 해소 촉진용 약학 조성물 및 건강 기능 식품에 관한 것이다.

이고들빼기는 쌍떡잎식물 초롱꽃목 국화과의 한해살이 또는 두해살이 풀로써, 고들빼기속은 전세계에 약 29종이 자라고 있다. 고들빼기속에는 까치고들빼기, 이고들빼기, 강화이고들빼기, 뽀리뱅이(박주가리나물), 지리고들빼기, 고들빼기(씬나물, 좀두메고들빼기, 좀고들빼기)가 자라고 있다.

상기 이고들빼기는 우리나라의 산과 들의 건조한 곳에서 잘 자라며, 높이가 30∼70cm이고, 줄기는 가늘고 자줏빛이고, 가지가 퍼지며, 자르면 즙이 나온다. 뿌리에 달린 잎은 주걱 모양이며 꽃이 필 때 스러지고, 줄기에 달린 잎은 어긋나며 잎자루가 없다. 잎 길이는 6 내지 11㎝이고, 너비는 3 내지 7㎝이며 끝은 둔하다. 밑 부분은 귀처럼 되어 줄기를 반쯤 감싸고, 가장자리에 이 모양의 톱니가 드문드문 있다. 꽃은 8∼9월에 노란색으로 피고 두화는 지름 15㎜ 정도로서 산방꽃차례로 달리는데, 꽃이 필 때는 곧게 서고 진 다음 밑으로 처진다. 총포는 좁은 통처럼 생기고 총포조각은 긴 타원 모양 바소꼴로서 2줄로 늘어선다. 안조각은 줄 모양이며 8개이다. 열매는 수과(瘦果)로서 갈색이나 검은색이며 12개의 능선이 있다. 관모는 흰색이며 길이 약 3.5㎜ 이다.

이러한 이고들빼기를 약으로 사용할 경우, 청열, 해독, 배농, 지통(止痛)의 효능이 있고, 충수염, 장염, 이질, 화농성염증, 두통, 흉통, 치창을 치료하는데 효과적인 것으로 알려져 있다.

그러나, 상기 이고들빼기와 같은 천연 식물소재는 추출과 농축과정을 거치더라도 약리효과가 기대에 못미친다거나, 다양한 생리활성 물질과 항산화 물질을 함께 함유하고 있어 항노화, 항암, 항염, 면역 기능 개선 등 다양한 효과를 보이면서도, 때론 불안정하고 자극적이어서, 인체에 독성을 띄는 등의 한계가 있었다.

이에, 이고들빼기 또는 이의 추출물을 안정화시키거나, 독성을 줄이거나, 안정한 유도체로 전환시켜 약리적 효과를 증진시킬 수 있는 기술의 개발이 요구되고 있다.

본 발명은 간단한 발효 공정을 통해 이고들빼기의 약리 효과를 증진시킴으로써, 알코올에 의한 간 독성을 경감시켜, 손상을 입은 간 조직이 빠르게 회복될 수 있는 이고들빼기 발효 조성물의 제조방법을 제공하기 위한 것이다.

또한, 본 발명은 상기 이고들빼기 발효 조성물의 제조방법으로부터 제조되는 이고들빼기 발효 조성물을 제공하기 위한 것이다.

또한, 본 발명은 상기 이고들빼기 발효 조성물을 포함하는 간 독성 해소 촉진용 약학 조성물 및 건강 기능 식품을 제공하기 위한 것이다.

본 명세서에서는, 황국균을 포함한 균주를 이용하여 10℃ 내지 50℃의 온도에서 10 시간 내지 500시간 동안 이고들빼기를 포함한 식물을 발효하는 단계를 포함하는 이고들빼기 발효 조성물의 제조 방법이 제공된다.

본 명세서에서는 또한, 이고들빼기를 포함한 식물의 발효물을 포함하는 이고들빼기 발효 조성물이 제공된다.

본 명세서에서는 또한, 상기 이고들빼기 발효 조성물 또는 이의 추출물을 포함하는 간 독성 해소 촉진용 약학 조성물이 제공된다.

본 명세서에서는 또한, 상기 이고들빼기 발효 조성물을 포함하는 간 독성 해소 촉진용 건강 기능 식품이 제공된다.

이하 발명의 구체적인 구현예에 따른 이고들빼기 발효 조성물의 제조방법과 이로부터 제조되는 이고들빼기 발효 조성물, 그리고 이를 포함하는 간 독성 해소 촉진용 약학 조성물 및 건강 기능 식품에 대하여 보다 상세하게 설명하기로 한다.

발명의 일 구현예에 따르면, 황국균을 포함한 균주를 이용하여 10℃ 내지 50℃의 온도에서 10 시간 내지 500시간 동안 이고들빼기를 포함한 식물을 발효하는 단계를 포함하는 이고들빼기 발효 조성물의 제조 방법이 제공될 수 있다.

본 발명자들은 상술한 이고들빼기 발효 조성물의 제조 방법을 이용하면, 이고들빼기와 같은 천연 식물을 메주, 된장 및 간장과 같은 전통발효식품의 제조에 사용되어온 식용곰팡이인 황국균(Aspergillus oryzae)를 사용하여 발효시킴으로써, 발효시키지 않은 채로 사용할 때에 비하여 간 독성 해소의 약리 효과가 현저하게 증진된다는 점을 실험을 통하여 확인하고 발명을 완성하였다.

또한, 상술한 이고들빼기와 같은 천연 식물은 간염바이러스 증식 억제, 혈중 콜레스테롤 감소, 간손상 억제, 항당뇨효과, 항암활성 등의 약리효과를 나타낼 수 있어, 알코올에 의한 간 독성 해소를 촉진하는데있어, 탁월한 효능을 구현할 수 있다.

구체적으로, 상기 이고들빼기 발효 조성물의 제조 방법은 황국균을 포함한 균주를 이용하여 10℃ 내지 50℃, 또는 10℃ 내지 40℃, 또는 15℃ 내지 35℃의 온도에서 10 시간 내지 500시간, 또는 30 시간 내지 450시간, 또는 40 시간 내지 300시간, 또는 40 시간 내지 60시간, 또는 450 시간 내지 500시간 동안 이고들빼기를 포함한 식물을 발효하는 단계를 포함할 수 있다.

상기 균주는 간균(Bacillus), 자낭균(Monascus), 젖산균(Lactobacillus)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 더 포함할 수 있다. 즉, 상기 균주는 황국균뿐만 아니라 황국균, 간균, 자낭균, 젖산균 또는 이들의 2종 이상의 혼합물을 함께 포함하여 사용할 수 있다. 상기 황국균은 누룩곰팡이의 대표균으로 청주, 일본식 된장, 간장류 제조에 사용되는 고오지(국)제조 곰팡이를 의미한다.

또한, 상기 식물은 씀바귀, 민들레, 고들빼기 및 왕고들빼기로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 더 포함할 수 있다. 즉, 상기 식물은 이고들빼기뿐만 아니라 이고들배기, 씀바귀, 민들레, 고들빼기, 왕고들빼기 또는 이들의 2종 이상의 혼합물을 함께 포함하여 사용할 수 있다.

상기 씀바귀(Lxeris dentata)는 항암, 항스트레스, 항알레르기, 항노화, 해독, 간경화, 성인병 예방의 효과가 있으며, 고들빼기(Youngia sonchifolia Max.)는 바이러스성 간질환 및 간경화 예방의 효과, 왕고들빼기(Lactuca indica var. laciniata)는 항암, 해열, 건위의 효과뿐만 아니라 간질환 및 간경화 예방의 효과도 있다. 이고들빼기(Youngia denticulata)는 왕고들빼기와 유사한 효능이 있다.

상기 이고들빼기를 포함한 식물을 황국균을 포함한 균주를 이용하여 발효하는 방법의 예가 크게 한정되는 것은 아니며, 예를 들어, 상기 이고들빼기를 포함한 식물과 황국균을 포함한 균주를 혼합하는 방법을 사용할 수 있으며, 보다 구체적으로, 황국균을 다량의 물에 혼합한 다음 이고들빼기가 포함된 용기에 붓는 방법을 사용할 수 있다.

상기 혼합시 구체적인 혼합비율의 예가 크게 한정되는 것은 아니나, 바람직하게는 상기 황국균은 상기 이고들빼기 100 중량부에 대하여 0.01 중량부 내지 0.5 중량부, 또는 0.05 중량부 내지 0.3 중량부, 또는 0.07 중량부 내지 0.2 중량부로 첨가될 수 있다.

상기 이고들빼기와 황국균의 혼합물은 10℃ 내지 50℃의 온도에서 10 시간 내지 500시간 동안 발효시킬 수 있다. 효과적인 효소 활성을 위하여, 상기 이고들빼기와 황국균의 혼합물이 포함된 용기를 밀폐시키는 것이 바람직하다.

또한, 상기 이고들빼기 발효 조성물의 제조 방법은 상기 황국균을 포함한 균주를 이용하여 10℃ 내지 50℃의 온도에서 10 시간 내지 500시간 동안 이고들빼기를 포함한 식물을 발효하는 단계 이후에, 상기 식물 발효물의 순도를 향상시키기 위하여 상기 식물 발효물을 살균하는 단계, 건조하는 단계 또는 숙성시키는 단계를 더 포함할 수 있다.

상기 살균 방법의 예가 크게 한정되는 것은 아니나, 예를 들어, 100℃ 내지 140℃의 온도에서 0.5시간 내지 2시간동안 열처리하는 방법 등을 사용할 수 있다.

또한, 상기 건조 방법의 예는 크게 한정되지 않고, 약학 조성물 제조 관련 기술분야에서 널리 사용되는 다양한 방법을 제한없이 사용할 수 있다.

또한, 상기 숙성 방법의 예가 크게 한정되는 것은 아니나, 예를 들어, 상기 식물 발효물을 50℃ 내지 80℃, 또는 60℃ 내지 70℃의 온도에서 500 시간 내지 2000시간, 또는 600 시간 내지 1500시간 동안 숙성시키는 방법 등을 사용할 수 있다.

한편, 상기 일 구현예의 이고들빼기 발효 조성물의 제조 방법은 상기 이고들빼기 발효 조성물의 제조 방법은 상기 황국균을 포함한 균주를 이용하여 10℃ 내지 50℃의 온도에서 10 시간 내지 500시간 동안 이고들빼기를 포함한 식물을 발효하는 단계 이후에, 알코올을 포함한 용매를 이용하여 추출하는 단계를 더 포함할 수 있다.

상기 발효물 추출은 일반적으로 알려져 있는 추출방법을 사용할 수 있으며, 추출 용매로는 물, 탄소수 1 내지 3의 알코올 또는 그 혼합물을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 70% 농도의 에탄올수용액을 추출 용매로 사용할 수 있다.

상기 추출에 있어서, 추출 조건에는 특별한 제한은 없으며 일반적인 중탕법을 사용할 수 있다. 물을 용매로 사용하여 추출할 때 물의 양에는 특별히 제한이 없으나, 추출 온도 및 시간을 고려할 때 약용식물 중량에 대하여5배 내지 40 배를 사용할 수 있고, 추출 조건은 30℃ 내지 100℃, 또는 40℃ 내지 80℃, 또는 50℃ 내지 70℃의 온도에서 5시간 내지 20시간, 또는 7시간 내지 15시간, 또는 8 시간 내지 12시간 동안 추출할 수 있다.

또한, 상기 알코올을 포함한 용매를 이용하여 추출하는 단계는 1회 내지 10회, 또는 1회 내지 5회에 걸쳐서 추가로 반복 실시할 수 있다. 이를 통해, 추출물의 수율을 향상시킬 수 있다.

상기 발효물의 추출물에 대해서는 필요에 따라, 여과장치를 통해 여과를 거칠 수 있다.

또한, 상기 일 구현예의 이고들빼기 발효 조성물의 제조 방법은 상기 알코올을 포함한 용매를 이용하여 추출하는 단계 이후에, 상기 추출물을 농축하는 단계 또는 건조하는 단계를 더 포함할 수 있다. 상기 농축하는 단계만을 더 포함할 수도 있고, 상기 건조하는 단계만을 더 포함할 수도 있으며, 상기 농축단계 및 건조단계를 모두 더 포함할 수도 있다. 이에 따라, 발효물에 포함된 약리성분의 함량을 극대화시켜 약리효과를 증진시킬 수 있다.

상기 추출물의 농축 방법의 예가 크게 한정되는 것은 아니나, 예를 들어, 감압농축장치를 이용하여 발효물은 고형분의 농도가 20 Brix 내지 100 Brix, 또는 40 Brix 내지 90 Brix, 또는 60 Brix 내지 80 Brix 인 농축액을 제조할 수 있다. 상기 고형분이란 상기 농축액을 가열하여 수분을 증발시키고 남은 고형물질을 의미한다.

또한 상기 추출물의 건조 방법의 예가 크게 한정되는 것은 아니나, 스프레이 드라이, 진공건조, 동결 건조 등의 방법을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 -50℃ 내지 -100℃에서 급속 동결 건조하는 방법 등을 사용할 수 있다. 상기 동결 건조는 수용액 기타 함수물을 동결시켜 그 동결물의 수증기압 이하로 감압함으로써 물을 승화시켜 제거하고 건조물을 얻는 방법으로서, 이를 통해 상기 추출물을 분말 형태로 제조할 수 있다.

또한, 상기 이고들빼기 발효 조성물의 제조 방법은 상기 황국균을 포함한 균주를 이용하여 10℃ 내지 50℃의 온도에서 10 시간 내지 500시간 동안 이고들빼기를 포함한 식물을 발효하는 단계 이전에, 이고들빼기를 포함한 식물을 세척한 후 수분함량 1% 내지 10%, 또는 3% 내지 7% 로 건조하는 단계를 더 포함할 수 있다.

상기 식물을 세척한 후 건조하는 방법의 구체적인 예는 크게 한정되지 않으며, 약학 조성물 제조 관련 기술분야에서 널리 사용되는 다양한 방법을 제한없이 사용할 수 있다.

또한, 상기 식물을 세척한 후 수분함량 1% 내지 10% 로 건조하는 단계 이후에, 분쇄단계를 더 포함할 수 있다. 상기 분쇄 단계는 황국균에 의한 발효 과정이 더욱 용이하게 진행될 수 있도록 하기 위한 것으로서, 분쇄 단계로부터 얻어진 식물의 분쇄물은 40 메쉬 내지 80 메쉬, 또는 50 메쉬 내지 70 메쉬의 평균 입경을 가질 수 있다.

한편, 발명의 다른 구현예에 따르면, 이고들빼기를 포함한 식물의 발효물을 포함하는 이고들빼기 발효 조성물이 제공될 수 있다.

상기 이고들빼기 발효 조성물은 간염바이러스 증식 억제, 혈중 콜레스테롤 감소, 간손상 억제, 항당뇨효과, 항암활성 등이 우수하여, 간 독성 해소 촉진 효능을 갖는 다양한 약학 조성물, 화장품 조성물 또는 식품 조성물 등에 유효성분으로 함유될 수 있다.

상기 발효물은 황국균을 포함한 균주에 의한 발효물을 포함할 수 있다.

상기 이고들빼기 발효 조성물은 상기 일 구현예의 이고들빼기 발효 조성물 제조방법에 의해 제조될 수 있다.

상기 이고들빼기를 포함한 식물 및 이고들빼기 발효 조성물 제조방법에 관한 내용은 상기 일 구현예에 관하여 상술한 내용을 포함한다.

한편, 발명의 또 다른 구현예에 따르면, 상기 다른 구현예의 이고들빼기 발효 조성물 또는 이의 추출물을 포함하는, 간 독성 해소 촉진용 약학 조성물이 제공될 수 있다.

상기 이고들빼기 발효 조성물에 관한 내용은 상기 다른 구현예에서 상술한 내용을 포함한다.

상기 이고들빼기 발효 조성물의 추출물은 상기 이고들빼기 발효 조성물의 알코올 추출물을 포함할 수 있으며, 상기 추출에 관한 내용은 상기 일 구현예에서 상술한 내용을 포함한다.

또한, 상기 간 독성 해소 촉진용 약학 조성물은 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제, 보습제, 점증제, 무기염류, 유화제, 부형제, 합성 고분자 물질 등의 첨가제를 더 포함할 수 있을 뿐만 아니라, 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당 및 해초 엑기스 등의 보조 성분 및 기타 용매를 더 포함할 수 있다.

상기 첨가제, 보조성분 및 기타 용매의 구체적인 예가 크게 한정되는 것은 아니며, 그 첨가량 또한 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 크게 한정되지 않는다.

또한, 상기 간 독성 해소 촉진용 약학 조성물의 제형의 예가 크게 한정되는 것은 아니며, 예를 들어, 용액, 유화물, 점성형 혼합물, 타블렛, 분말 등의 다양한 형태일 수 있으며, 단순 음용, 주사 투여, 스프레이 방식 또는 스퀴즈 방식 등의 다양한 방법으로 투여될 수 있다.

한편, 발명의 또 다른 구현예에 따르면, 상기 다른 구현예의 이고들빼기 발효 조성물을 포함하는 간 독성 해소 촉진용 건강 기능 식품이 제공될 수 있다.

구체적으로, 상기 간 독성 해소 촉진용 건강 기능 식품은 상기 이고들빼기 발효 조성물의 건조물, 상기 이고들빼기 발효 조성물의 추출물의 농축액 및 상기 이고들빼기 발효 조성물의 추출물의 건조분말로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다.

상기 간 독성 해소 촉진용 건강 기능 식품은 상기 황국균을 포함한 균주를 이용하여 10℃ 내지 50℃의 온도에서 10 시간 내지 500시간 동안 이고들빼기를 포함한 식물을 발효하는 단계 이후에, 상기 식물 발효물을 건조하는 단계 또는 숙성시키는 단계를 더 포함하는 이고들빼기 발효 조성물의 제조 방법에 의해 제조된 이고들빼기 발효 조성물의 건조물을 포함할 수 있다.

또한, 상기 간 독성 해소 촉진용 건강 기능 식품은 상기 황국균을 포함한 균주를 이용하여 10℃ 내지 50℃의 온도에서 10 시간 내지 500시간 동안 이고들빼기를 포함한 식물을 발효하는 단계 이후에, 알코올을 포함한 용매를 이용하여 추출하는 단계; 및 상기 추출물을 농축하는 단계를 포함하는 이고들빼기 발효 조성물의 제조 방법에 의해 제조된 이고들빼기 발효 조성물의 추출물의 농축액을 포함할 수 있다.

또한, 상기 간 독성 해소 촉진용 건강 기능 식품은 상기 황국균을 포함한 균주를 이용하여 10℃ 내지 50℃의 온도에서 10 시간 내지 500시간 동안 이고들빼기를 포함한 식물을 발효하는 단계 이후에, 알코올을 포함한 용매를 이용하여 추출하는 단계; 및 상기 추출물을 건조하는 단계를 포함하는 이고들빼기 발효 조성물의 제조 방법에 의해 제조된 이고들빼기 발효 조성물의 추출물의 건조 분말을 포함할 수 있다.

상기 건강 기능 식품의 일일 권장 섭취량을 기준으로, 상기 이고들빼기 발효 조성물의 건조물을 0.1g 내지 10g, 또는 1g 내지 5g, 또는 1.1g 내지 3g의 함량으로 포함할 수 있다.

상기 건강 기능 식품의 일일 권장 섭취량을 기준으로, 상기 이고들빼기 발효 조성물의 추출물의 농축액을 10㎎ 내지 1,000㎎, 또는 100㎎ 내지 800㎎, 또는 200㎎ 내지 700㎎의 함량으로 포함할 수 있다. 이때, 상기 이고들빼기 발효 조성물의 추출물의 농축액의 농도는 20 Brix 내지 100 Brix, 또는 40 Brix 내지 90 Brix, 또는 60 Brix 내지 80 Brix일 수 있다.

상기 건강 기능 식품의 일일 권장 섭취량을 기준으로, 상기 이고들빼기 발효 조성물의 추출물의 건조분말을 10㎎ 내지 1,000㎎, 또는 140㎎ 내지 600㎎, 또는180㎎ 내지 400㎎의 함량으로 포함할 수 있다.

상기 건강 기능 식품의 제형의 예가 크게 한정되는 것은 아니며, 예를 들어, 용액, 유화물, 점성형 혼합물, 타블렛, 분말 등의 다양한 형태일 수 있으며, 단순 음용, 주사 투여, 스프레이 방식 또는 스퀴즈 방식 등의 다양한 방법으로 투여될 수 있다. 상기 건강 기능 식품의 구체적인 종류의 예로는 선식, 액상제품, 티백, 분말제품, 과립제품, 환제품 등을 들 수 있다. 상기 액상제품의 예가 크게 한정되는 것은 아니나, 예를 들어, 음료, 혼탁액, 겔타입 등을 포함할 수 있다.

본 발명에 따르면, 간단한 발효 공정을 통해 약리 효과를 증진시킴으로써, 알코올에 의한 간 독성을 경감시켜, 손상을 입은 간 조직이 빠르게 회복될 수 있는 간 독성 해소 촉진용 발효물 제조방법과 이로부터 제조되는 발효물, 그리고 상기 발효물을 포함하는 조성물 및 건강 기능 식품이 제공될 수 있다.

발명을 하기의 실시예에서 보다 상세하게 설명한다. 단, 하기의 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기의 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다.

< 제조예 : 이고들빼기 시료의 제조>

산야에 자생하는 이고들빼기(Youngia denticulata)의 잎과 뿌리를 함께 채취하여 흐르는 수돗물로 깨끗이 세척한 후, 50℃의 건조기에서 수분함량이 5%가 되도록 충분히 건조시켰다. 그리고, 분쇄기를 이용하여 60 메쉬 입도로 분쇄하여 폴리에틸렌 백에 넣어 4℃에 두어 이고들빼기 시료를 제조하였다.

< 실시예1 : 발효 이고들빼기 추출물의 제조>

(1) 발효 이고들빼기의 제조

상기 제조예의 이고들빼기 시료 1 ㎏을 3 L 플라스틱 용기(지름 60 ㎝, 높이 20 ㎝)에 넣고, 메주제조용 황국균 분말 1g을 골고루 혼합한 수돗물 700 ㎖을 상기 플라스틱 용기에 넣고 혼합하였다. 상기 플라스틱 용기를 폴리에틸렌필름으로 덮은 후 25℃에서 48시간 동안 발효시킨 다음, 폴리프로필렌백에 500g씩 담아 120℃에서 1시간 동안 살균하고, 100g씩 덩이로 만들어 75℃에서 1~2개월간 숙성시켜 발효 이고들빼기를 제조하였다.

(2) 발효 이고들빼기 농축액의 제조

상기 발효 이고들빼기 100g에 70% 에탄올 1L을 가하여 냉각관을 부착한 추출장치를 사용하여 60℃에서 10시간 동안 가열추출하였다. 이후3겹의 치즈크로즈로 여과시키고, 그 여과액은 감압농축장치를 이용하여 70 Brix의 농축액으로 제조하였다.

(3) 발효 이고들빼기 추출건조물의 제조

상기 농축액에 부형제를 넣고 -82℃에서 동결 건조하여 분말형태의 발효 이고들빼기 추출건조물 240g을 얻었다.

< 실시예2 : 간 독성 해소 촉진용 건강 기능 식품의 제조>

상기 실시예1의 (1)에서 제조한 발효 이고들빼기를 이용하여 캡슐, 타블렛, 액상제품, 티백, 선식을 제조하였다. 이때, 상기 발효 이고들빼기의 함량은 상기 건강 기능 식품의 일일 권장 섭취량을 기준으로 1.17g 내지 2.5g을 만족하도록 제조하였다.

< 실시예3 : 간 독성 해소 촉진용 건강 기능 식품의 제조>

상기 실시예1의 (3)에서 제조한 발효 이고들빼기 추출물의 동결건조분말을 이용하여 캡슐, 타블렛, 음료, 티백, 선식을 제조하였다. 이때, 상기 발효 이고들빼기 추출물의 동결건조분말의 함량은 상기 건강 기능 식품의 일일 권장 섭취량을 기준으로 200㎎ 내지 400㎎을 만족하도록 제조하였다.

< 실시예4 : 간 독성 해소 촉진용 건강 기능 식품의 제조>

상기 실시예1의 (2)에서 제조한 발효 이고들빼기 농축액을 이용하여 캡슐, 타블렛, 음료, 티백, 선식을 제조하였다. 이때, 상기 발효 이고들빼기 추출물의 농축액(70 Brix)의 함량은 상기 건강 기능 식품의 일일 권장 섭취량을 기준으로 250㎎ 내지 600㎎을 만족하도록 제조하였다.

< 비교예1 : 비발효 이고들빼기 추출물의 제조>

(1) 비발효 이고들빼기의 제조

상기 제조예의 이고들빼기 시료 1 ㎏을 100g씩 덩이로 만들어 1~2개월간 건조, 숙성시켜 비발효 이고들빼기를 제조하였다.

(2) 비발효 이고들빼기 추출물의 제조

상기 발효 이고들빼기 대신 비발효 이고들빼기를 사용한 점을 제외하고, 실시예1와 동일한 방법으로 비발효 이고들빼기 추출물을 제조하였다.

< 실험예 : 실시예1 및 비교예1에서 얻어진 이고들빼기 추출물의 효과 측정>

실험동물로 6주령의 평균체중이 150±10g인 흰쥐(Sprague-Dawly SPF/VAF outbred rats, 오리엔트, 대한민국 남시)를 1주일간 환경에 적응시킨 후 정상대조군(NC), 에탄올대조군(EC), 에탄올급여 및 상기 비교예1의 비발효 이고들빼기 추출물 0.5% 첨가식이 급여군(ENY), 에탄올급여 및 상기 실시예1의 발효 이고들빼기 추출물 0.5% 첨가식이 급여군(EFY)의 4개군(6마리/군)으로 나누어 4주간 사육하였다. 실험식이의 조성은 하기 표 1과 같다.

*4주간 사육한 실험동물은 공복 상태에서 일일 1회, 2일간 50% 에탄올 용액을 체중 ㎏당 5g씩 경구투여 하였으며, 마지막 투여 후 12시간이 경과한 다음 처치하였다. 사육장은 스테인레스 스틸 케이지를 사용하고, 온도 및 습도는 23±2℃, 60±5%로 조정하고, 명암주기는 12시간 간격으로 설정하고, 물과 사료의 섭취는 자유 섭취시켰다.

동물실험의 실험군 및 실험식이 조성

식이조성	실험군
식이조성	NC	EC	ENY	EFY
고형사료(PMI Nutrition, LLC, Brentwood, Mo, USA	100	100	95.5	95.5
50% 에탄올 5gx2/Kg BW/day : EtOH	-	○	○	○
EtOH + 비발효 이고들빼기 추출물 0.5% 함유	-	-	0.5	-
EtOH + 발효 이고들빼기 추출물 0.5% 함유	-	-	-	0.5

*고형 사료: 조단백 18%, 조지방 5%, 조섬유 5%, 조회분 8% 함유

상기 실험군의 식이 조성에 따른 효과를 하기 방법으로 측정하였으며, 그 결과를 표2 내지 표7에 각각 나타내었다. 각각의 결과는 실험동물 6마리의 평균치와 표준편차를 나타내며, 종으로 서로 다른 문자(a~c)는 Duncan의 다중검증결과 유의성이 있음을 나타낸다.

1. 체중과 간의 중량 측정

체중증가율은 전 실험 기간을 통하여 매일 일정한 시간에 측정하였으며 초기체중에 대하여 실험을 행한 4주간 동안 증가한 체중을 환산하였다.

또한, 실험식이로 4주간 사육한 흰쥐를 물은 자유롭게 먹게 하고, 12시간동안 절식시킨 후 에테르 마취 하에서 복부대동맥으로부터 채혈한 다음, 빙냉의 생리식염수로 간을 관류하고 장기를 적출한 후 습기를 제거하여 간의 무게를 측정하여, 그 결과를 하기 표 2에 기재하였다

발효 이고들빼기 추출물이 알코올 투여 흰쥐의 체중과 간 중량에 미치는 영향

실험군	체중증가량 (g/4주)	정상군에 대한 %	체중에 대한 간 중량(%)	정상군에 대한 %
NC	52.81 ± 3.45^a	100	3.38 ± 0.37^c	100
EC	37.13 ± 3.26^c	70.31	4.32 ± 0.22^a	127.81
ENY	45.18 ± 3.72^b	85.55	4.04 ± 0.27^ab	119.53
EFY	49.32 ± 3.63^ab	93.39	3.66 ± 0.33^bc	108.28

상기 표2에 나타난 바와 같이, 체중증가량에서, 에탄올 대조군(EC)은 정상군(NC)에 비하여 29.69%가 감소하였다. 그러나 비발효 이고들빼기 추출물 첨가군(ENY)과 발효 이고들빼기 추출물 첨가군(EFY)에서는 모두 EC군에 비하여 증가를 보여 에탄올에 대한 독성을 경감시키는 것으로 나타났다. 그리고 발효를 시키지 않은 이고들빼기 추출물을 급여한 ENY군의 경우는 에탄올 대조군인 EC군에 비하여는 체중증가를 나타내었으나 정상군에 미치지는 못하였다. 반면에 발효 이고들빼기 추출물을 급여한 EFY군은 ENY군과 비교하였을 때 평균치는 높았으나 유의미한 차이는 없었다. 그러나 정상군과도 유의미한 차이를 보이지 않아 결과적으로 발효 이고들빼기 추출물을 급여한 군이 비발효 이고들빼기 추출물을 급여한 군에 비하여 에탄올에 대한 독성을 경감시키는 효과가 큼을 확인할 수 있었다.

한편 체중에 대한 간의 중량 %는 EC군은 정상군에 비하여 27.81%가 증가되었다. 또, ENY군은 정상군에 비하여 19.53%가 증가되어 증가율로 볼 때 ENY군이 에탄올 투여로 인한 간의 비대현상을 완화시키는 효과가 있는 것으로 추측되나 유의미한 차이는 보이지 않았다. 반면에 EFY군은 ENY군과는 유의미한 차이를 보이지 않으나 에탄올 대조군인 EC에 비해 유의차가 있었고 정상군과도 차이를 보이지 않아 비발효군에 비하여 발효군에서 뚜렷한 효과가 있음을 나타내었다.

2. GOT 및 GPT의 측정

혈청중의 GOT(Glutamic Oxaloacetic Transaminase)와 GPT(Glutamic Pyruvic Transaminase) 는 간이 손상되면 간의 손상을 보완하기 위해 단백질을 합성하는 효소로써, 그 활성이 높을수록 간의 손상이 심함을 나타낸다. 상기 활성은 Reitman-Frankel법(A colorimetric method for the determination of serum glutamic oxaloacetic and glutamic pyruvic transaminase. Am.J.Clin.Pathol., 28,56(1957))에 따라 조제된 KIT(영동제약)를 사용하여 측정하였고, 그 결과를 하기 표 3에 기재하였다

발효 이고들빼기 추출물이 알코올 투여 흰쥐 간조직의 GOT 및 GPT 활성에 미치는 영향

실험군	GOT(IU/㎖)	정상군에 대한 %	GPT(IU/㎖)	정상군에 대한 %
NC	38.54±3.68^c	100	34.92±4.40^b	100
EC	72.42±2.53^a	187.91	54.83±8.10^a	157.02
ENY	54.51±7.87^b	141.44	42.27±3.96^b	121.04
EFY	42.01±3.85^c	109.00	38.32±5.08^b	109.74

상기 표3에 나타난 바와 같이, GOT 활성 실험 결과 에탄올 대조군인 EC군의 경우 급격히 증가하였으며, ENY군은 EC에 비해 많이 떨어졌으나 정상군에 비해 높은 차이를 보이고 있다. 반면 발효 이고들빼기 추출물 첨가군인 EFY군은 거의 정상군과 비슷한 수준으로 떨어졌다. 혈청중 GPT활성은 ENY와 EFY의 유의미한 차이가 없으며 EC와 비교했을 때 둘다 유의미한 감소를 보였다. 정상군과는 유의미한 차이가 없어 ENY, EFY 두군 모두 효과가 있는 것으로 나타났다.

3. LPO 및 GSH의 함량 측정

조직 손상 시 일정시간 경과 후에는 조직 손상을 방어 혹은 경감시키기 위하여 글루타치온(glutathione: GSH) 함량이 신속하게 증가하는 것으로 알려져 있으며(Wang RS, Nakajima T and Honma T:Different change patterns of the isozymes of cytochrome p450 and glutathione Stransferases in chemically induced liver damage in rat. Ind Health 37: 440-448, 2000) 글루타치온은 우리 몸에서 과산화지질(Lipid peroxide, LPO)을 무독화시키는 작용을 한다고 알려져 있다(Ohkawa H, Ohishi N and Yagi K: Assay for lipid peroxides in animal tissues by thiobarbituric acid reaction. Anal Biochem 95: 248-25, 1979).

과산화지질(Lipid peroxide, LPO)의 함량은 Satho의 방법(Satho K: Serum lipid peroxide in cerebrovascular disorders determined by a new colorimetric method. Clin Chim Acta 90(1): 37-43 1978)에 따라 간 조직 균질액에 티오바비투릭산(thiobarbituric acid, TBA) 용액을 가하여 반응시킨 후 부탄올(n-butanol)을 가해 이행되는 티오바비투릭산 반응물질(TBA-reactive substance)의 흡광도를 532 nm에서 측정, 분자흡광계수, ε=1.5 X 105 M^-1㎝^- ¹용하여 함량을 산출하였으며 간 조직 g당 nmole로 나타내었다.

간 조직 글루타치온(glutathione: GSH)의 함량은 Ellman의 방법(Ellman GL: Tissue sulfhydryl group. Arch Biochem Biophys 82(1): 70-77 1959)에 따라 적출한 동물의 간 조직균질액에 2-니트로벤조닉산(2-nitrobenzoic acid)를 가해 생성되는 티오페놀(thiophenol)의 측정하였으며 간 조직 g당 환원형 글루타치온 μmole로 나타내었다. 그 결과는 하기 표 4에 기재하였다

발효 이고들빼기 추출물이 알코올 투여 흰쥐 간조직 LPO 및 GSH의 함량에 미치는 영향

실험군	LPO(nmole/간조직 g)	정상군에 대한 %	GSH(μmole/간조직 g)	정상군에 대한 %
NC	13.21 ± 1.05^b	100	2.71 ± 0.14^a	100
EC	38.82 ± 2.72^a	293.87	2.17 ± 0.25^b	80.07
ENY	14.23 ± 1.89^b	107.72	2.38 ± 0.27^a	87.82
EFY	13.15 ± 1.59^b	99.54	2.59 ± 0.18^a	95.57

상기 표4에 나타난 바와 같이, 실험결과 EC군 과산화 지질이 급격히 증가하였으며 ENY군, EFY군은 정상군과 유의미한 차이가 없었다. 또한 글루타치온 실험 결과는 알코올에 피해를 입은 EC군의 간조직은 글루타치온이 감소하였으며 ENY군은 정상군과 유의미한 차이가 없었다. 따라서 비발효, 발효 이고들빼기 추출물은 과산화 지질실험과 글루타치온 실험에서 좋은 효과가 있는 것으로 나타났다.

4. 잔틴옥시다제(XO)의 측정

잔틴산화환원효소의 O 타입(Xanthine oxidoreductase(XOR) O type) 효소는 체내에서 활성산소종(ROS)를 생성함으로서 간을 비롯한 생체내 조직을 손상시키는 것으로 알려져 있다.

잔틴산화환원효소의 활성은 Stirpe F & Della Corte의 방법(Stirpe F, Della Corte E: The regulation of rat liver xanthine oxidase. J Biol Chem 244: 3855-3860, 1969)에 따라 토탈 타입(total type) 활성은 니코틴산아마이드의 존재 하에서, O 타입(O type) 활성은 니코틴산아마이드를 첨가하지 않은 상태에서 생성되는 요산의 함량을 파장 292㎚에서 측정하였으며, 활성도는 분당 단백 1 ㎎이 기질인 잔틴으로부터 생성되는 요산의 량을 nmole로 나타내었다. 그 결과는 하기 표 5에 기재하였다

발효 이고들빼기 추출물이 알코올 투여 흰쥐 간조직 XO의 활성에 미치는 영향

실험군	XO(nmole/mg portein)	정상군에 대한 %
NC	22.49 ± 2.52^b	100
EC	38.42 ± 3.22^a	170.83
ENY	22.92 ± 2.50^b	101.91
EFY	18.75 ± 2.01^b	83.37

상기 표 5에 나타난 바와 같이, 에탄올 대조군은 정상군보다 XO의 활성이 증가하였으나, ENY군, EFY군에서는 감소하였다.

5. 간 조직 중성지질 및 총콜레스테롤의 함량

알코올을 투여하면서 4주간 실험식이를 행한 후 간 조직의 중성지질 및 총콜레스테롤의 함량을 측정한 결과를 표 6에 기재하였다.

발효 이고들빼기 추출물이 알코올 투여 흰쥐 간 조직 중성지질 및 총콜레스테롤의 함량에 미치는 영향

실험군	중성지질 (㎎/g liver tissue)	정상군에 대한 %	총콜레스테롤 (㎎/g liver tissue)	정상군에 대한 %
NC	217.08 ± 64.21^c	100	115.97 ± 3.57^b	100
EC	385.34 ± 58.34^a	177.51	137.49 ± 8.32^a	118.56
ENY	321.17 ± 37.48^ab	147.95	106.64 ± 7.03^b	91.95
EFY	256.90 ± 42.67^bc	118.34	105.72 ± 7.70^b	91.16

상기 표 6에 나타난 바와 같이, 에탄올만 급성적으로 경구 투여한 에탄올 대조군 EC에서는 정상군 NC에 비해 간 조직 중성지방의 함량이 77.5%가량 현저히 증가하였으며, 비발효 이고들빼기 추출물 식이군은 에탄올 대조군에 비해 소량 감소하였으나 정상군에 비해서는 48% 증가한 것으로 나타났고, 발효 이고들빼기 추출물 식이군에서는 정상군에 비해 18% 증가하였다.

그러나 ENY군과 EFY군은 유의미한 차이가 없었으나 EFY군은 EC군과 비교하여 유의미한 감소를 보였으며 정상군과는 유의미한 차이가 없었다. 즉 발효군은 비발효군에 비하여 간의 중성지질을 감소시키는 효과가 있었다. 총콜레스테롤 함량은 알코올 대조군은 18.6% 상승하였으며 ENY군 EFY군 모두 알코올 대조군에 비해 유의적으로 감소하였으며 정상군과도 유의미한 차이가 없었다.

6. SOD 및 GST 활성

알코올을 투여하면서 4주간 실험식이를 행한 후 간 조직의 SOD 및 GST 활성을 측정한 결과를 하기 표 7에 기재하였다.

발효 이고들빼기 추출물이 알코올 투여 흰쥐 간조직 SOD 및 GST의 활성에 미치는 영향

실험군	SOD(헤마토자일렌의 자동산화를 50% 억제하는 단백의 ㎎)	정상군에 대한 %	GST(nmole/㎎ protein)	정상군에 대한 %
NC	34.27 ± 3.27^c	100	550.32 ± 29.34^a	100
EC	19.61 ± 3.24^d	57.22	545.16 ± 15.71^a	99.06
ENY	42.15 ± 3.10^b	122.99	557.03 ± 31.63^a	100.69
EFY	51.22 ± 3.89^a	149.46	549.43 ± 12.75^a	99.84

상기 표7에 나타난 바와 같이, 간 조직 슈퍼옥시드 디스무타아제의 활성은 비발효 이고들빼기 추출물 첨가군과 발효 이고들빼기 추출물 첨가군에서는 에탄올대조군에 비해 비해 현저히 증가하였다. 특히 발효 이고들빼기 추출물 첨가군에서는 정상군에 비해서도 현저히 증가하였다.

글루타치온 에스 트렌스퍼라제(GST)는 미처 제거하지 못한 활성산소종이 과산화지질을 만들었을 경우 글루타치온을 이용하여 이를 독성이 낮은 에탄올성지방으로 전환하여 무독화 시킨다.(Im MJ, Manson PN, Bulkley GB, Hoopes JE: Effects pf superoxide dismutase and allopurinol in survival of acute island skin flaps. Ann Surgery 201: 357-359, 1985; Jacoby JB: The glutathione S-transferase: a group of multifunctional detoxification proteins. Adv Enzymol Relat Areas Mol Biol 46: 383-414, 1978).

글루타치온 에스 트렌스퍼라제 활성의 경우 NC, EC, ENY, EFY군에서 유의한 변화가 없었다.

Claims

황국균을 이고들빼기와 혼합하여 15℃ 내지 35℃의 온도에서 40 시간 내지 60시간 동안 발효하는 단계로 이루어지고,
상기 황국균은 이고들빼기 100 중량부에 대하여 0.01 중량부 내지 0.5 중량부로 첨가되는 이고들빼기 발효 조성물의 제조 방법.
제1항에 있어서,
상기 이고들빼기 발효 조성물은 간 독성 해소 촉진 효과를 갖는, 이고들빼기 발효 조성물의 제조 방법.
제1항에 있어서,
상기 황국균을 이고들빼기와 혼합하여 15℃ 내지 35℃의 온도에서 40 시간 내지 60시간 동안 발효하는 단계 이후에,
탄소수 1 내지 3의 알코올을 포함한 용매를 이용하여 추출하는 단계를 더 진행하는, 이고들빼기 발효 조성물의 제조 방법.
제3항에 있어서,
상기 탄소수 1 내지 3의 알코올을 포함한 용매를 이용하여 추출하는 단계는,
30℃ 내지 100℃의 온도에서 5시간 내지 20시간 동안 진행되는, 이고들빼기 발효 조성물의 제조 방법.
제3항에 있어서,
상기 탄소수 1 내지 3의 알코올을 포함한 용매를 이용하여 추출하는 단계 이후에,
상기 추출 단계에서 얻어진 추출물을 농축하는 단계 또는 건조하는 단계를 더 진행하는, 이고들빼기 발효 조성물의 제조 방법.
제1항에 있어서,
상기 황국균을 이고들빼기와 혼합하여 15℃ 내지 35℃의 온도에서 40 시간 내지 60시간 동안 발효하는 단계 이전에,
이고들빼기를 세척한 후 건조하는 단계를 더 진행하는, 이고들빼기 발효 조성물의 제조 방법.
제1항의 이고들빼기 발효 조성물 제조방법에 의해 제조되며, 15℃ 내지 35℃의 온도에서 황국균에 의한 이고들빼기의 발효물을 포함하는, 이고들빼기 발효 조성물.
제7항의 이고들빼기 발효 조성물 또는 이의 추출물을 포함하는, 간 독성 해소 촉진용 약학 조성물.
제8항에 있어서,
상기 추출물은 상기 이고들빼기 발효 조성물의 알코올 추출물을 포함하는, 간 독성 해소 촉진용 약학 조성물
제7항의 이고들빼기 발효 조성물을 포함하는, 간 독성 해소 촉진용 건강 기능 식품.
제10항에 있어서,
상기 간 독성 해소 촉진용 건강 기능 식품은 상기 이고들빼기 발효 조성물의 건조물, 상기 이고들빼기 발효 조성물의 추출물의 농축액 및 상기 이고들빼기 발효 조성물의 추출물의 건조분말로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는, 간 독성 해소 촉진용 건강 기능 식품.
제11항에 있어서,
상기 건강 기능 식품의 일일 권장 섭취량을 기준으로, 상기 이고들빼기 발효 조성물의 건조물을 1g 내지 20g의 함량으로 포함하는, 건강 기능 식품.
제11항에 있어서,
상기 건강 기능 식품의 일일 권장 섭취량을 기준으로, 상기 이고들빼기 발효 조성물의 추출물의 농축액을 10 ㎎ 내지 1,000 ㎎의 함량으로 포함하는, 건강 기능 식품.
제13항에 있어서,
상기 이고들빼기 발효 조성물의 추출물의 농축액의 농도가 20 Brix 내지 100 Brix인, 건강 기능 식품.
제11항에 있어서,
상기 건강 기능 식품의 일일 권장 섭취량을 기준으로, 상기 이고들빼기 발효 조성물의 추출물의 건조분말을 10 ㎎ 내지 1,000 ㎎의 함량으로 포함하는, 건강 기능 식품.