KR20160091848A - 약학 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 백출 및 포공영 혼합 추출물, 이를 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환 예방 또는 치료용 약학 조성물, 이를 이용한 염증성 장 질환의 예방 또는 치료 방법, 및 이의 용도에 관한 것이다.
본 발명에 따른 백출 및 포공영 혼합 추출물은 염증성 장질환에 대한 염증 억제 및 치료 효과를 가짐으로써 염증성 장질환 예방 또는 치료에 우수한 효과를 보인다.
본 발명에 따른 백출 및 포공영 혼합 추출물은 염증성 장질환에 대한 염증 억제 및 치료 효과를 가짐으로써 염증성 장질환 예방 또는 치료에 우수한 효과를 보인다.
Description
본 발명은 백출 및 포공영 혼합 추출물, 이를 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환 예방 또는 치료용 약제학적 조성물에 관한 것이다.
백출(Atractylodes Rhizome white)은 비위의 기능이 허약해서 소식하는 사람, 권태감이 생기고 얼굴빛이 황색인 사람, 대변을 묽게 보거나 설사하는 사람에 좋으며 수분이 정체되어 전신이 붓고 소화가 안 될 때 수분 배설을 돕는다. 가슴 뜀, 기침, 맑은 가래 등에도 쓰며, 임신구토에도 사용한다. 위장 장애가 있는 감기, 사지동통에도 쓴다. 약리적으로 생쥐의 체중 증가와 지구력 증가, 탐식 능력을 증가, 세포 면역 기능 촉진이 보고되었다. 또한 장관 억제 작용과 흥분 작용의 조절, 항궤양 및 간 기능 보호 작용, 면역 기능 항진작용, 혈관 확장 작용, 이뇨 작용 및 혈당 강하 작용, 항암 작용 등이 보고되었다.
포공영(Taraxacum Herba)은 민들레, 서영민들레, 털민들레, 흰민들레의 전초로써, 해열, 소염, 이뇨, 건위의 효능이 있다고 하여, 감기 때문에 열이 나는 증상, 인후염, 기관지염, 임파선염, 안질, 유선염, 간염, 담낭염, 소화불량, 소변불리, 변비, 정창의 치료제로 이용한다. 또, 뿌리와 줄기를 자르면 하얀 젖 같은 물이 흘러서 민간에서는 최유제로 이용하기도 한다. 뿌리에 들어 있는 물질은 베헨산(behenic acid)과 같은 지방산 및 이눌린(inulin)이 있고, 타락세롤(taraxerol), 베타시토스테롤(β·sitosterol), 카페산(caffeic acid) 등의 화합물도 함유한다.
장 질환의 종류에는 여러 가지가 있다. 예를 들어, 기능적 장애에 의한 질환으로 여겨지고 있는 과민성 대장 증후군(irritable bowel syndrome)은 대장 내시경이나 엑스선 검사로 원인이 되는 기질적 질환이 확인되지 않지만 식사나 가벼운 스트레스 후 복통, 복부 팽만감과 같은 불쾌한 소화기 증상이 반복되며, 설사 혹은 변비 등의 배변장애 증상을 가져오는 만성적인 질환이다. 질환의 약물 치료를 위해서는 일반적으로 진경제, 완하제 및 약간의 신경안정제 등이 사용되고 있다.
한편, 염증성 장질환(Inflammatory bowel disease, IBD)은 궤양성 대장염·크론병·베체트병 등의 질환을 포함하는 질환으로, 염증 세포의 활성화가 중요한 병인인 것으로 알려져 있고 항염증제, 면역 억제제 등으로 염증 세포의 활성화 억제 등을 통한 치료가 필요하다.
즉, 장질환이라고 하더라도 그 구체적 병인 등에 따라 치료방법이 달리되어야 하며, 특히 염증성 장질환의 경우 염증 관련 증상에 대한 억제 및 완화 방안의 마련이 질환 치료에 가장 중요한 인자이다.
장면역계의 지속적이거나 부적절한 활성화는 만성 점막성 염증의 병리생리에서 중요한 역할을 하며, 특히 호중구, 대식세포, 림프구 및 비만세포의 침윤에 의해 결국 점막 파괴 및 궤양을 초래한다.
침윤되고 활성화된 호중구는 활성산소질소종의 중요한 원인이 되며, 이러한 활성종은 세포독성 물질로서 가교 단백질, 지질 및 핵산에 의해 세포성 산화 스트레스를 유도하고 상피성 기능장애 및 손상을 초래한다.
염증성 장 질환이 있으면 장관의 점막에서 다양한 염증성 사이토카인들이 분비된다. TNF-α는 궤양성 대장염 환자의 대장 루멘과 대장 상피세포에서 높게 나타나며, 최근 연구에 의하면, TNF-α는 궤양성 대장염의 병인으로 중요한 역할을 한다고 알려졌다. 항-TNF-α 항체인 인플릭시맵(infliximab)은 종기의 치료 뿐 아니라, 기존에 치료되지 않던 크론병의 치료에 효과적이라고 알려졌다. 그러나, 이러한 치료법은 비용이 많이 들고, 일부 환자에게서는 수액 반응 또는 전염성 합병증과 같은 부작용이 야기된다.
현재 염증성 장질환 치료제로는 프로스타글란딘(prostaglandins)의 생성을 차단하는 5-아미노살리실산(5-aminosalicylic acid; 5-ASA) 계통 약물 예를 들어, 설파살라진 등을 이용하거나 스테로이드류의 면역억제제를 사용하고 있다.
설파살라진은 복부허실(fullness), 두통, 발진, 간질환, 백혈구 감소증, 무과립구증, 남성 불임 등과 같은 부작용 또는 역효과를 일으키기 쉽다. 또한, 설파살라진이 장의 환부를 절개한 환자 또는 차도가 있는 환자에게 충분한 재발 억제 효과가 있는지는 불분명하다.
스테로이드류의 면역억제제는 부신피질 스테로이드로서, 단기적인 효과는 인정받고 있지만, 장기적인 예후를 향상시킬 수는 없으며, 유도된 감염성 질환, 2차 부신피질 부전증, 소화성 궤양, 당뇨병, 정신장애, 스테로이드성 신장병 등과 같은 부작용의 측면에서 단지 급성인 경우에만 사용되어야 하는 한계가 있다.
한편, 천연 추출물 및 이를 이용한 제형들이 기침, 감기에서부터 기생충 감염 및 염증에 이르는 다양한 질환을 완화하고 치료하는데 사용되어 왔다. 오늘날 시장에서 이용되는 항암제의 60% 이상 그리고 감염성 질환의 75% 이상이 천연물에서 기원하고 있다. 이는 천연물이 매우 다양하며 높은 특이적인 생리적 활성을 제공하기 때문이다.
그러나, 염증성 장질환에 대해 아직까지 신뢰할 만한 치료요법은 없으며 이러한 질환에 대해 효과적인 치료제의 개발이 요구되고 있고, 이를 위하여 염증성 장질환에 유용한 천연 추출물이 필요하다.
본 발명의 목적은 백출 및 포공영 혼합 추출물을 제공하는 데에 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 백출 및 포공영 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공하는 데에 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 백출 및 포공영 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환 개선용 식품 조성물을 제공하는 데에 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 염증성 장질환의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서 백출 및 포공영 혼합 추출물의 용도를 제공하는 데에 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 백출 및 포공영 혼합 추출물을 포함하는 약제학적 조성물의 치료학적으로 유효량의 투여를 포함하는 염증성 장질환의 치료 방법을 제공하는 데에 있다.
본 발명은 백출(Atractylodes Rhizome white) 및 포공영(Taraxacum Herba) 혼합 추출물을 제공한다.
본 발명에서 백출(Atractylodes Rhizome white)은 아트락틸로드 자포니카(Atractylodes japonica), 아트락틸로드 메크로세팔라(Atractylodes macrocephala), 아트락틸로드 오바타(Atractylodes ovata) 등을 포함하는 식물의 뿌리 줄기 또는 주피를 제거한 것을 의미하며, 바람직하게는 큰꽃삽주(Atractylodes macrocephala)로부터 유래된 백출이다. 한국, 중국, 일본 등의 국내외 시장에서 구입하여 일반적으로 구입하여 사용할 수 있다.
본 발명에서 포공영(Taraxacum Herba)은 민들레, 서양민들레, 털민들레, 흰민들레의 전초로써 예를 들어, 타라사쿰 플라티카르품(Taraxacum platycarpum), 타라사쿰 오피시네일(Taraxacum officinale), 타라사쿰 몬고리쿰(Taraxacum mongolicum), 타라사쿰 코레아눔(Taraxacum coreanum), 타라사쿰 알비둠(Taraxacum albidum), 타라사쿰 글라프리스쿠아뮴(Taraxacum glabrisquamum), 타라사쿰 프세우도알비둠(Taraxacum pseudoalbidum), 타라사쿰 타쿠에틸(Taraxacum taquetii) 등의 식용가능한 타라시쿰 속 식물로부터 유래된 것을 포함한다. 한국, 중국, 일본 등의 국내외 시장에서 구입하여 사용할 수 있는 것으로, 일반적으로 타라시쿰 속에 따른 활성의 차이가 적기 때문에 구입시에도 다양한 종의 혼합 재료로 판매된다.
본 발명에서 백출 및 포공영 혼합 추출물은 백출 및 포공영을 먼저 혼합한 후 추출한 혼합추출물이거나, 백출 및 포공영을 각각 추출한 후 이를 혼합한 혼합 추출물일 수 있다. 본 발명에서 백출 및 포공영 혼합 추출물은 농축된 액상일 수도 있고, 동결건조된 분말형태일 수도 있다.
본 발명의 백출 및 포공영 혼합 추출물은 백출 또는 포공영의 건조 중량의 1~30배 부피량의 증류수, 탄소수 1 내지 4의 알코올, 에틸아세테이트, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜 및 이들의 혼합용매(예를 들어, 함수알코올, 함수글리세린, 함수에틸렌글리콜, 함수프로필렌글리콜, 함수 부틸렌글리콜) 중에서 선택된 용매로 추출될 수 있으며, 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 4의 무수알코올 또는 함수알코올에서 선택된 용매로 추출할 수 있으며, 보다 바람직하게는 물을 사용한다. 백출 또는 포공영 추출물은 30∼120 ℃에서 1∼48시간 동안, 보다 바람직하게 80℃ ~ 100℃에서 2 ~ 4시간 동안 가열 추출할 수 있으며, 1 내지 5회 반복하여 추출이 가능하다. 마지막으로 추출 용매를 감압농축기로 농축하여 수득될 수 있다.
또한, 본 발명의 백출 및 포공영 혼합 추출물은 백출 및 포공영을 혼합한 후 상기 방법으로 제조하여 수득할 수도 있다.
또한, 위에서 열거한 추출용매에 공지된 초음파 추출법 등을 이용하여 제조할 수 있다.
본 발명에서 백출 및 포공영 혼합 추출물의 혼합 중량비는 다양하게 변할 수 있으나, 건조 중량비로 1:2 내지 2:1로 혼합된 것이 바람직하며, 백출 및 포공영 혼합 추출물의 혼합 건조 중량비는 1:1로 혼합된 것이 보다 더 바람직하다.
본 발명은 백출 및 포공영 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.
백출 및 포공영은 상기 언급된 종으로부터 유래된 것이라면 어느 것이라도 무방하며, 바람직하게는 큰꽃 삽주(Atractylodes macrocephala) 유래 백출이 포공영과 혼합 추출물로 사용될 때 염증성 장질환에 더욱 현저한 예방 및 치료 효과를 가진다.
본 발명의 백출 및 포공영 혼합 추출물은 염증성 장질환의 염증 반응을 크게 억제함으로써 염증성 장질환의 예방 및 치료 효과를 가진다.
백출 및 포공영을 혼합하여 사용하는 것이 백출 추출물 또는 포공영 추출물 각각을 사용하는 것보다 염증 억제 및 치료에 있어 더욱 우수한 효과를 가진다. 즉, 백출 및 포공영 혼합 추출물이, 각각의 추출물을 사용할 때보다 더욱 우수한 염증성 장질환의 예방 및 치료 효과를 가진다.
본 발명에서 백출 및 포공영 혼합 추출물은 조성물의 총 중량에 대하여 분말형태 또는 액상 형태로 0.1 ~ 80 중량%, 보다 바람직하게 20~ 40 중량 %로 포함하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 첨가제를 추가적으로 포함할 수 있으며, 이때 약제학적으로 허용 가능한 첨가제로는 전분, 젤라틴화 전분, 미결정셀룰로오스, 유당, 포비돈, 콜로이달실리콘디옥사이드, 인산수소칼슘, 락토스, 만니톨, 엿, 아라비아고무, 전호화전분, 옥수수전분, 분말셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 오파드라이, 전분글리콜산나트륨, 카르나우바 납, 합성규산알루미늄, 스테아린산, 스테아린산마그네슘, 스테아린산알루미늄, 스테아린산칼슘, 백당, 덱스트로스, 소르비톨 및 탈크 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 약제학적으로 허용 가능한 첨가제는 백출 및 포공영 혼합 추출물 100 중량부에 대해 0.1 ~ 90 중량부, 보다 바람직하게 10 ~ 50 중량부 포함되는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.
즉, 본 발명의 조성물은 실제 임상 투여 시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 백출 및 포공영 혼합 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(Calciumcarbonate), 수크로스(Sucrose), 락토오스(Lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 및 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함될 수 있다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여시 피부 외용 또는 복강내주사, 직장내주사, 피하주사, 정맥주사, 근육 내 주사 또는 흉부 내 주사 주입방식을 선택하는 것이 바람직하다.
본 발명의 조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하며, 일일 투여량은 백출 및 포공영 혼합 추출물의 양을 기준으로 0.0001 내지 200 ㎎/㎏으로 투여하는 것이 바람직하다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 다만, 상기 투여량의 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
아울러, 본 발명은 백출 및 포공영 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 장질환 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 백출 및 포공영 혼합 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 백출 및 포공영 혼합 추출물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 초콜릿, 캔디류, 스넥류, 면류, 껌류, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
상기 외에 본 발명의 백출 및 포공영 혼합 추출물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 백출 및 포공영 혼합 추출물은 천연 과일주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다.
본 발명은 백출 및 포공영 혼합 추출물의 치료학적으로 유효한 양의 투여를 포함하는 염증성 장 질환을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 “치료학적으로 유효한 양”이라는 용어는 염증성 장 질환의 예방 또는 치료에 유효한 백출 및 포공영 혼합 추출물의 양을 나타낸다.
본 발명의 염증성 장 질환의 예방 또는 치료 방법은 상기 백출 및 포공영 혼합 추출물을 투여함으로써, 징후의 발현 전에 질병 그 자체를 다룰뿐만 아니라, 이의 징후를 저해하거나 피하는 것을 또한 포함한다. 질환의 관리에 있어서, 특정 활성 성분의 예방적 또는 치료학적 용량은 질병 또는 상태의 본성(nature)과 심각도, 그리고 활성 성분이 투여되는 경로에 따라 다양할 것이다. 용량 및 용량의 빈도는 개별 환자의 연령, 체중 및 반응에 따라 다양할 것이다. 적합한 용량 용법은 이러한 인자를 당연히 고려하는 이 분야의 통상의 지식을 가진 자에 의해 쉽게 선택될 수 있다. 또한, 본 발명의 염증성 장 질환의 예방 또는 치료 방법은 상기 백출 및 포공영 혼합 추출물과 함께 질환 치료에 도움이 되는 추가적인 활성 제제의 치료학적으로 유효한 양의 투여를 더 포함할 수 있으며, 추가적인 활성제제는 상기 백출 및 포공영 혼합 추출물과 함께 시너지 효과 또는 보조적 효과를 나타낼 수 있다.
본 발명은 또한 염증성 장 질환의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서 상기 백출 및 포공영 혼합 추출물의 용도를 제공하고자 한다. 약제의 제조를 위한 상기 백출 및 포공영 혼합 추출물은 허용되는 보조제, 희석제, 담체 등을 혼합할 수 있으며, 기타 활성제제와 함께 복합 제제로 제조되어 활성 성분들의 상승 작용을 가질 수 있다.
본 발명의 용도, 조성물, 치료 방법에서 언급된 사항은 서로 모순되지 않는 한 동일하게 적용된다.
본 발명의 백출 및 포공영 혼합 추출물은 염증성 장질환에 있어 염증 억제 효과를 가짐으로써, 염증성 장질환의 예방 또는 치료에 효과적이다.
도 1은 궤양성 대장염 동물 모델에 백출 및 포공영 혼합 추출물 투여에 따른 몸무게 변화를 측정한 결과이다.
도 2는 궤양성 대장염 동물 모델에 백출 및 포공영 혼합 추출물 투여에 따른 대장 길이 변화를 측정한 결과이다.
도 3은 궤양성 대장염 동물 모델에 백출 및 포공영 혼합 추출물 투여에 따른 조직학적 변화를 확인한 결과이다.
도 4는 궤양성 대장염 동물 모델에서 백출 및 포공영 혼합 추출물 투여에 따른 질병 활성 지수를 측정한 결과이다.
도 5는 궤양성 대장염 동물 모델에서 백출 및 포공영 혼합 추출물 투여에 따른 미엘로퍼옥시다아제 활성을 측정한 결과이다.
도 2는 궤양성 대장염 동물 모델에 백출 및 포공영 혼합 추출물 투여에 따른 대장 길이 변화를 측정한 결과이다.
도 3은 궤양성 대장염 동물 모델에 백출 및 포공영 혼합 추출물 투여에 따른 조직학적 변화를 확인한 결과이다.
도 4는 궤양성 대장염 동물 모델에서 백출 및 포공영 혼합 추출물 투여에 따른 질병 활성 지수를 측정한 결과이다.
도 5는 궤양성 대장염 동물 모델에서 백출 및 포공영 혼합 추출물 투여에 따른 미엘로퍼옥시다아제 활성을 측정한 결과이다.
이하, 하기 실시예에 의해 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 하기 실시예는 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니며, 이는 본 발명의 이해를 돕기 위한 것으로 해석되어야 할 것이다.
<실시예 1> 백출 및 포공영 혼합 추출물의 제조
1. 백출 및 포공영 혼합 추출물의 제조
백출 (Atractylodes macrocephala 유래; 원산지: 중국, 대우약업사로부터 구매) 50 g에 10배 중량의 물을 넣고 100 ℃에서 3시간 동안 2회 반복 추출하였다.
상기 추출물의 여과액을 40 brix로 감압농축 후 동결건조하여 분말상태로 백출 추출물 19.4 g(수율 38.8 %)을 제조하였다.
포공영 추출물(Taraxacum Herba; 원산지: 중국, 대우약업사로부터 구매) 역시 백출과 동일한 방법으로 제조하였으며, 50 g의 포공영을 사용하여 8.48 g(수율 17.0 %)의 포공영 추출물을 제조하였다.
제조된 백출 추출물과 포공영 추출물을 하기 표 1과 같은 구성과 중량비가 되도록 혼합하여 추출물을 제조하였다.
[표 1]
2. 백출 추출물의 제조 (비교예 1)
백출 50 g (Atractylodes macrocephala 유래; 원산지: 중국)에 10배 중량의 물을 넣고 100 ℃에서 3시간 동안 2회 반복 추출하였다. 상기 추출물의 여과액을 40 brix로 감압농축 후 동결건조하여 분말상태로 백출 추출물 19.4 g(수율 38.8 %)을 제조하였다.
3. 포공영 추출물의 제조 (비교예 2)
포공영 50 g (Taraxacum Herba; 원산지: 중국)에 10배 중량의 물을 넣고 100 ℃에서 3시간 동안 2회 반복 추출하였다. 상기 추출물의 여과액을 40 brix로 감압농축 후 동결건조하여 분말상태로 포공영 추출물 8.48 g(수율 17.0 %)을 제조하였다.
<실시예 2> 백출 및 포공영 혼합 추출물의 염증성 장질환 치료 효과 확인
8주령 웅성 생쥐(C57BL/6, (주) 샘타코 BIO Korea)에 5 % Dextran Sulfate Sodium(DSS)의 수용액을 7일간 자유 음수시킴으로써 궤양성 대장염을 유발하였다.
DSS 투여에 따라, 궤양성 대장염을 유발한 후에, 백출 및 포공영 혼합 추출물 투여에 따른 염증성 장질환 치료 효과를 확인하였으며, 실험군 및 각 실험군 별 투여 추출물은 하기 표 2와 같이 설정하였다.
[표 2]
약물 투여는 1일 2회 경구투여로 7일간 진행하였으며, 마우스의 생존 환경은 온도 22 ± 2 ℃, 상대습도 50 ± 10 %, 명암 싸이클(07:00 점등 19:00 소등)로 조절하였다. 실험진행 기간 동안 1일 1회 몸무게 측정을 하였고, 마지막으로 모든 실험군을 희생하여 대장의 길이를 측정하여 대장 길이(cm)를 백분율(%)로 환산하여 분석하였다.
그 결과를 도 1 및 도 2에 나타내었다.
도 1은 백출 및 포공영 혼합 추출물 투여에 따른 몸무게 회복 효과를 보여주는 결과이다. 투여군 별로 7일간 시료를 투여한 결과, 백출 추출물 및 포공영 혼합 추출물 100 mg/kg 투여군의 몸무게(g)는 대조군과 대비하여 각각 7.1 %, 5.6 %로 증가하였으나, 통계적으로 유의적이지 않았다. 그러나 백출 및 포공영 혼합 추출물 100 mg/kg 투여군의 몸무게(g)는 7.9 %로 대조군과 대비(23.4 ± 0.74 g vs 17.0 ± 1.08 g, P < 0.1)(mean ± SD)하여 유의적으로 증가한 것을 확인하였으며, 이는 백출 추출물 또는 포공영 추출물 각각을 사용하는 것보다도 효과가 현저함을 보여준다.
도 2는 백출 및 포공영 혼합 추출물 투여에 따른 염증 치료 효과를 보여주는 결과이다. DSS 투여에 따른 염증 반응에 의해 대장 길이가 줄어들게 되는 바, 대장 길이의 변화를 확인함으로써 백출 및 포공영 혼합 추출물의 치료효과를 확인할 수 있다.
DSS로 유발된 대조군은 정상군에 비해 조직의 손상으로 인해 대장 길이(%)가 크게 감소한 것을 확인할 수 있었으며, 이와 함께 백출 및 포공영 혼합 추출물 처리시 회복 효과를 보이는 것을 육안상으로 확인할 수 있었다. 실제 대장 길이 변화를 백분율로 환산한 결과 역시, 백출 및 포공영 혼합 추출물 투여군에서 대조군과 대비하여 유의적으로 25.9 % (65.5 ± 3.6 % vs 82.4 ± 7.4 %, P<0.01) 증가했으며, 백출 추출물 또는 포공영 추출물 각각을 사용하는 것보다 월등히 우수한 효과를 보였다. 이는 백출 추출물 또는 포공영 추출물 각각을 사용하는 것보다 백출 및 포공영 혼합 추출물을 사용하는 것이 염증성 장질환 치료에 효과가 현저함을 보여주는 결과이다.
<실시예 3> 백출 및 포공영 혼합 추출물 투여에 따른 장의 조직학적 변화 확인
상기 실시예 2에서 취한 대장을 이용하여 대장 조직의 조직 변화를 확인하였다.
실험동물을 희생시키고, 결장 조직을 적출하여 PBS로 세척하고 4% 완충 포르말린에 고정시킨 후 에탄올 탈수 과정을 거쳐 파라핀으로 포매하고, 절편하여 Hematoxylin-Eosin(H&E) 염색 후 현미경으로 관찰하였다.
그 결과를 도 3에 나타내었다. 도 3에 나타낸 바와 같이, 대조군에서는 상피 점막층 여러 곳에서 선와 부위와 술잔 세포가 파괴되어 대장 조직이 선명하지 않았으나 실시예 1의 백출 및 포공영 혼합 추출물 투여군(30 mg/kg, 100 mg/kg)은 대조군에 비하여 대장의 조직의 구조가 선명하게 나타났으며 정상군의 대장조직과 비슷한 수준의 조직 형태를 보이는 것을 확인할 수 있었다.
<실시예 4> 백출 및 포공영 혼합 추출물 투여에 따른 질병 활성 지수 확인
상기 실시예 2의 궤양성 대장염 모델에서 질병활성 지수를 분석하였다. 질병 활성 지수 (Disease activity index)는 행동, 입모 정도, 설사 및 출혈, 및 대장 적출 후 결장부종을 하기 표 3의 기준과 같이 측정하여 분석하였다. 행동, 입모정도, 설사 및 출혈은 시료투여 7일간 매일 측정하였으며, 대장의 결장 부종은 희생 후 바로 측정하였다.
[표 3] 질병 활성 지수
그 결과를 도 4에 나타내었다. 도 4에 나타낸 바와 같이, 농도 의존적으로 질병 활성 지수가 감소하는 것을 확인할 수 있었으며, 대조군과 대비하여 실시예 1의 백출 및 포공영 혼합 추출물 투여군(30 mg/kg, 100 mg/kg) 각각에서 3.80 ± 0.36 또는 2.53 ± 0.36로 농도 의존적으로 유의하게 감소하였다.
<실시예 5> 백출 및 포공영 혼합 추출물 투여에 따른 미엘로퍼옥시다아제 활성 변화 확인
다형핵백혈구의 침착정도를 확인하기 위하여 미엘로퍼옥시다아제 활성 변화를 상기 실시예 2에서 적출된 대장 조직을 이용하여 확인하였다.
미엘로퍼옥시다아제 활성 측정을 위해 결장 조직을 0.5% 헥사-데실-트리메틸-암모늄브로마이드(hexa-decyl-trimethyl-ammonium bromide,HETAB)를 함유한 50 mM 인산칼륨 완충용액(Potassium phosphate buffer, pH 6.5)에 현탁하여 균질화하고, 동결-해동 및 초음파 처리를 3회 반복한 후 20,000 rpm에서 30 분간 4 ℃에서 원심분리하여 상등액을 얻고, 이를 효소액으로 사용하였다. 제조된 효소액 10μl을 O-디아니시딘(O-dianisidine) 및 과산화수소(H2O2) 함유 190 μl의 50 mM의 인산 칼륨 완충 용액(pH 6.0)에 넣고 3분간 반응시킨 후 470nm에서 ELISA microplate reader (SpectraMax Plus384, Molecular Devices, Sunnyvale, USA)로 흡광도를 측정하였다. 결과는 조직 1 mg 당 미엘로퍼옥시다아제(MPO) unit 으로 나타내었으며, 1 unit은 1 μmol의 과산화수소를 물로 환원시킬 수 있는 활성으로 정의된다.
본 실험 결과를 도 5에 나타내었다. 도 5에 나타낸 바와 같이, 미엘로퍼옥시다아제 활성은 대조군과 대비하여 실시예 1의 백출 및 포공영 혼합 추출물 투여군(30 mg/kg, 100 mg/kg) 에서 각각 5.67 ± 5.66 또는 3.26 ± 3.0 로 농도 의존적으로 유의하게 감소하였다.
Claims (8)
- 백출 및 포공영 혼합 추출물.
- 제1항에 있어서, 상기 백출은 아트락틸로드 자포니카(Atractylodes japonica), 아트락틸로드 메크로세팔라(Atractylodes macrocephala) 또는 아트락틸로드 오바타(Atractylodes ovata) 중에서 선택된 어느 하나 이상으로부터 유래되며, 상기 포공영은 타라사쿰 플라티카르품(Taraxacum platycarpum), 타라사쿰 오피시네일(Taraxacum officinale), 타라사쿰 몬고리쿰(Taraxacum mongolicum), 타라사쿰 코레아눔(Taraxacum coreanum), 타라사쿰 알비둠(Taraxacum albidum), 타라사쿰 글라프리스쿠아뮴(Taraxacum glabrisquamum), 타라사쿰 프세우도알비둠(Taraxacum pseudoalbidum) 또는 타라사쿰 타쿠에틸(Taraxacum taquetii) 중에서 선택된 어느 하나 이상으로부터 유래된 백출 및 포공영 혼합 추출물.
- 제2항에 있어서, 상기 백출은 아트락틸로드 메크로세팔라(Atractylodes macrocephala)로부터 유래된 백출인 백출 및 포공영 혼합 추출물.
- 제3항에 있어서, 상기 백출 및 포공영 혼합 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합물 중에서 선택된 하나 이상의 용매로 추출된 것인 백출 및 포공영 혼합추출물.
- 제4항에 있어서, 상기 백출 및 포공영 혼합 추출물의 혼합 건조 중량비는 1:2 내지 2:1인 백출 및 포공영 혼합추출물.
- 제1항 내지 제5항에 따른 백출 및 포공영 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
- 제6항에 있어서, 상기 백출 및 포공영 혼합 추출물을 조성물 총 중량에 대하여 0.1 내지 80 중량% 포함하는 염증성 장질환 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
- 제1항 내지 제5항에 따른 백출 및 포공영 혼합 추출물을 포함하는 염증성 장질환 개선용 식품 조성물.
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| KR101787082B1 (ko) | 유효 사포닌 함량이 증가된 도라지 추출물을 유효성분으로 함유하는 류마티스 관절염 치료용 약학적 조성물 | |
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| KR102252129B1 (ko) | 닥나무 추출물을 포함하는 염증성 장질환의 예방 또는 치료용 조성물 | |
| KR102379395B1 (ko) | 황련 및 형개 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환 예방 또는 치료용 약제학적 조성물 | |
| KR102227261B1 (ko) | 고욤 효소처리물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 | |
| KR102588240B1 (ko) | 헬리코박터 파일로리균 감염증 개선, 예방 또는 치료용 조성물 | |
| KR20180112561A (ko) | 노근 및 율초 추출물을 유효성분으로 하는 지방간, 고지혈증 및 변비 예방, 개선 또는 치료용 조성물 | |
| KR101333715B1 (ko) | 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물 | |
| KR101485505B1 (ko) | 대황 추출물 또는 대황 분말을 유효성분으로 함유하는 변비 예방 또는 개선용 식품 조성물 및 약학 조성물 | |
| KR20230040032A (ko) | 배초향 추출물을 포함하는 염증성 장질환 개선, 예방 또는 치료용 조성물 | |
| KR20200069079A (ko) | 고욤 효소처리물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 |
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