KR100420632B1

KR100420632B1 - 한약추출물을 포함하는 베체트병 치료용 조성물

Info

Publication number: KR100420632B1
Application number: KR10-2000-0023725A
Authority: KR
Inventors: 손성향; 이승임; 권혁제; 이은소; 김장현; 하지용; 최서영; 방동식; 이성낙
Original assignee: 최서영; 김장현; 하지용; 권혁제; 이승임; 손성향; 이성낙; 이은소; 방동식
Priority date: 2000-05-03
Filing date: 2000-05-03
Publication date: 2004-03-02
Also published as: KR20010102650A

Abstract

본 발명은 한약추출물이 포함된 베체트병 치료용 조성물에 관한 발명으로, 활성성분으로 백작약, 당귀, 백출, 황기, 인진, 금은화, 호장근, 초용담, 시호, 연교, 현삼, 산치자, 포공영, 황련, 황금 및 황백 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 1 종이상의 추출물을 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 함유하는 베체트병 치료용 조성물에 관한 발명이다.

Description

한약추출물을 포함하는 베체트병 치료용 조성물{Composition comprising extract of medicinal herbs for treating Behcet's disease}

본 발명은 베체트병 치료용 조성물에 관한 발명으로, 더욱 상세하게는 활성성분으로 백작약, 당귀, 백출, 황기, 인진, 금은화, 호장근, 초용담, 시호, 연교, 현삼, 산치자, 포공영, 황련, 황금 및 황백 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 1 종이상의 추출물을 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 함유하는 베체트병 치료용 조성물에 관한 발명이다.

일반적으로, 베체트병은 일본, 한국 및 중국을 포함하는 아시아와 지중해 주위의 국가에서 가장 위협적인 질병 중의 하나로, 눈을 비롯한 여러 장기에 영향을 미치는 염증성의 질병이다. 베체트병 환자의 치료는 여러 가지 방법으로 진행되었다. 이런 치료에는 국부적, 전신적 또는 내과적 치료방법 등이 있으나, 이들은 만족스러운 결과를 얻지 못하였다. 여러 실험을 통하여, 베체트병의 발병기작 등에 있어서, 면역적 변화가 중요한 역할을 한다는 것이 알려졌다. 베체트병에서 나타나는 면역적 변화는 T 세포 활성 및 백혈구의 비정상적 기능을 포함한다. 면역학적 면에서, 점막의 병변(lesion)에는 먼저, CD4, CD8세포, 마크로파지 및 덴드리틱세포가 침투하고, 다음에 호중구(neutrophil)가 침투한다. 면역학적 과정이 베체트병의 발병의 일련의 경과에 관여하는 것 때문에, 면역반응을 조절하는 여러 약제들이 베체트병의 치료에 사용되어왔다. 이들 약제는 코티코스테로이드, 콜시친, 세포 독성 약제 및 시클로스포린과 같은 이무노필린(immunophilin) 리간드 등이 포함된다. 그러나 이런 약제는 오랜 기간 동안 사용하면, 심한 부작용을 일으킬 수 있는 문제점이 있었다.

따라서 본 발명의 발명자들은 본 발명자들이 이미 개발한 동물 모델을 이용하여 베체트병 치료에 유용한 한방 추출물을 포함하는 조성물을 개발할 필요성이 있었다.

본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하고, 상기한 필요성에 의하여 안출된 것으로, 본 발명의 목적은 베체트병 치료용 조성물을 제공하는 것이다.

상기한 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 활성성분으로 백작약, 당귀, 백출, 황기, 인진, 금은화, 호장근, 초용담, 시호, 연교, 현삼, 산치자, 포공영, 황련, 황금 및 황백 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 1 종 이상의 추출물을 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 함유하는 베체트병 치료용 조성물을 제공한다.

상기의 조성물은 콜히친을 포함하는 것이 더욱 바람직하다.

한편, 본 발명에 사용된 콜히친(이하 "col"이라 함)은 60g 마우스에 대해, 1.8 마이크로그램이상으로 투여할 경우에는 설사, 정자수의 감소 등의 부작용이 있을 수 있고, 0.6 마이크로그램이하에서는 효과가 거의 나타나지 않으므로, 60g 마우스에 하루 0.6∼1.8 ㎍을 투여하는 것이 바람직하다.

본 발명에서 사용하는 한약 추출물로는 한약을 추출용매, 바람직하게는 정제수, 에탄올, 메탄올, 부탄올, 에틸 아세테이트 및 아세톤 중에서 선택된 1 종이상의 용매를 첨가하여 추출하고 여과 하여 이를 추출물로 이용한다.

또한, 본 발명의 조성물은 통상적으로 사용되는 부형제, 붕해제, 감미제, 활택제, 향미제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 방법에 의해 정제, 캅셀제, 산제, 과립, 현탁제, 유화제, 시럽제, 액제 또는 비경구투여용 제제와 같은 단위투여용 또는 수회 투여용 약제학적 제제로 제형화될 수 있다.

본 발명의 조성물은 목적하는 바에 따라 비경구 투여하거나 경구투여할 수 있으며, 본 발명의 한약 추출물의 유효량은 한약1의 경우 8mg, 한약 2의 경우 6mg, 한약 3의 경우 6mg, 한약 4의 경우 3.6mg 이상에서 장기 복용할 경우 생쥐의 비장이 커지는 경우가 있고, 한약1의 경우 0.08mg, 한약 2의 경우 0.06mg, 한약 3의 경우 0.06mg, 한약 4의 경우 0.036mg 이하의 저농도에서는 효과를 보기 어렵기 때문에, 체중 60g에 1일 0.036∼8mg이 바람직하고, 1 내지 수회에 걸쳐 투여할 수 있다. 특정환자에 대한 투여용량 수준은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율, 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.

베체트병의 병인은 지금까지도 여러 가지로 주장되고 있다. 1937년 Dr. 베체트박사가 바이러스설을 주장한 이래, 연쇄상구균에 의한 감염설, HLA-B51을 가지고 있는 사람이 발병율이 높다는 유전학적 관련설, 마이코박테리아(mycobacteria)의 65kD 열 충격 단백질(heat shock protein)의 311-326 펩티드와 사람 60kD 열 충격 단백질 336-351 펩티드 사이에 60% 정도의 상동성(homology)를 보임으로, 스트레스 단백질이나 열 충격단백질이 면역반응 단백질로 작용한다는 면역학적 관련설, 농약 등의 환경오염물질에 의한 발병설 등이다. 아직은 이들 중 어느 한가지 이론으로 베체트병의 발병을 완전히 설명하기는 부족하다. 여러 연구 그룹에서 실험 동물을 이용하여 베체트병 동물모델을 만들고자 하였는데, 가장 먼저 보고된 동물은 환경오염물질을 사료와 함께 섭취한 축소형 돼지(miniature swine)이다. 그후 HLA-B51 트랜스제닉 마우스가 보고되었고, 열 충격 단백질 펩티드 절편을 주사한 루이스(Lewis) 랫트가 보고되었다. 마지막으로 단순포진 바이러스(herpes simplex virus: HSV)를 접종한 ICR 마우스가 우리 연구팀에 의하여 개발되고 보고되었다. ICR 마우스의 귀이개를 주사바늘로 scratch 하여 상처를 내고 그 부위에 4주 간격으로 두 차례에 걸쳐 바이러스를 접종하였다. 그 후 약 30%의 마우스에서 나타난 베체트병 증상으로는 수포와 딱지(skin crust)뿐만 아니라, 구강궤양, 외음부궤양, 피부궤양, 눈 증상, 관절 증상, 위장 침범, 신경계 침범 등이 있었고, 이 증상들은 자연적으로 호전되다가 악화되는 재발성 특징을 보였다. 조직학적 검사에서는 많은 염증세포들이 혈관 주변에 축적되어 있는 것이 관찰되었고, 이것은 환자의 조직검사에서 전형적으로 나타나는 형태이다.

최근, 단순포진바이러스를 ICR 마우스의 상처 낸 귀이개에 접종함으로써 베체트병 동물모델이 개발되었다. 이 마우스모델에서 사람 환자에서 나타나는 증상인 구강궤양, 외음부궤양, 피부궤양, 눈증상 등의 주 증상과 소화기계궤양, 관절염 등의 부 증상들이 나타난다.

본 발명의 발명자들은 베체트병 동물모델을 치료하기 위하여 4 가지의 한약과 베체트병 주 약제인 콜히친(colchicine)과 복합적으로 동물모델 마우스에 투여하여 그 효능을 알아보았다.

본 발명의 발명자들은 실험군을 I) 정상 마우스에 한약 구강투여, 콜히친 구강투여, 한약 구강투여 + 콜히친 투여, II) 베체트병 증상 동물모델에 한약 구강투여, 콜히친 구강투여, 한약 구강투여 + 콜히친 투여군으로 나누어 진행하였다.

베체트병 증상 동물 중에서 투여 후 증상이 호전되는 마우스에서 어떤 작용 메카니즘으로 베체트병 증상이 호전되는지 알아보기 위하여 마우스의 비장세포(splenocytes)에서 FACS 분석을 통하여 IL-4, IL-10, IFN-γ 사이토카인의 세포 내 발현된 단백질의 양의 변화를 조사하였고, 호전된 마우스의 비장에서 T 헬퍼 사이토카인의 발현을 알아보기 위하여 RNA를 추출하여 IL-4, IL-10, IL-12, IFN-γ 사이토카인에 관한 RT-PCR을 수행하여 Th1/Th2 사이토카인의 발현을 확인하는 방법을 이용하였다.

한약 투여를 위한 실험동물 구성은 I) 정상 마우스에 한약 구강투여, 콜히친 구강투여, 한약 구강투여 + 콜히친, II) 베체트병 증상 동물모델에 한약 구강투여, 콜히친 구강투여, 한약 구강투여 + 콜히친투여로 구성되었으며, 한약1, 2, 3, 4호방 각각과 한약2호방+ 콜히친, 한약3호방+ 콜히친, 한약4호방+ 콜히친의 병행요법으로 베체트병에 대한 효능을 알아보았다.

한약의 구성으로 베체트1호(이하 "한약1"이라 함)방은 주약으로 백작약(Paeoniae radix alba), 당귀(Angelicae gigantis radix), 백출(Atractylodis macrocephalae), 황기(Astragali radix), 인진(Artemisiae capillaries herba), 금은화(Lonicerae flos), 호장근(Poligoni cuspidate rhizoma)이, 부약으로 산치자(Gardeniae fructus), 연교(Forsythiae fructus), 자감초(Glycyrrhizae radix), 황련(Coptidis rhizoma), 산두근(Sophorae tonkinensis radix)을 사용하였고,

베체트2호(이하 "한약2"라 함)방은 주약으로 초용담(Gentianae radix), 시호(Bupleuri radix), 연교(Forsythiae fructus), 현삼(Scrophulariae radix), 산치자(Gardeniae fructus)이, 부약으로 자감초(Glycyrrhizae radix), 박하(Menthae herba), 산두근(Sophorae tonkinensis radix)을 사용하였으며,

베체트3호(이하 "한약3"이라 함)방은 포공영(Taraxaci herba)을 사용하였으며,

베체트4호(이하 "한약4"라 함)방은 황련(Coptidis rhizoma), 황금(Scutellariae radix), 황백(Phellodendri cortex)을 사용하였다.

이하 본 발명을 비한정적인 실시예를 통하여 상세하게 설명한다.

실시예 1

1) 베체트1호방(한약 1)의 구성성분으로:

주약으로는 백작약(Paeoniae radix alba) 4-16g; 당귀(Angelicae gigantis radix) 2-8g; 백출(Atractylodis macrocephalae) 2-8g; 황기(Astragali radix) 2-8g; 인진(Artemisiae capillaries herba) 6-24g; 금은화(Lonicerae flos) 5-20g; 호장근(Poligoni cuspidate rhizoma) 4-16g을 사용하였으며,

부약으로는 산치자(Gardeniae fructus), 연교(Forsythiae fructus), 자감초(Glycyrrhizae radix), 황련(Coptidis rhizoma), 산두근(Sophorae tonkinensis radix)을 사용하였다.

2) 한약 1의 제조 및 투여

약 전체 무게의 3배의 물을 넣고 2 시간에서 4시간 동안 감압 가열하여 끓인 다음, 약을 여과하고, 다시 물을 1.5배 넣고 재탕하여 여과하였다. 1차 여과한 약과 2차 여과한 약을 섞어 투여하였다. 마우스 당 8mg 씩 1일 1회 투여하는 경우를 100% 투여로 간주하였다.

실시예 2

1) 베체트2호방(한약2)의 구성성분으로:

주약으로는 초용담(Gentianae radix) 2-8g; 시호(Bupleuri radix) 2-8g; 연교(Forsythiae fructus) 2-8g; 현삼(Scrophulariae radix) 2-8g; 산치자(Gardeniae fructus) 1.5-6g을 사용하였고,

부약으로는 자감초(Glycyrrhizae radix), 박하(Menthae herba), 산두근(Sophorae tonkinensis radix)을 사용하였다.

2) 한약 2의 제조 및 투여

약 전체 무게의 3배의 물을 넣고 2 시간에서 4시간 동안 감압 가열하여 끓인 다음, 약을 여과하고, 다시 물을 1.5배 넣고 재탕하여 여과한다. 1차 여과한 약과2차 여과한 약을 섞어 투여한다. 마우스 당 6mg 씩 1일 1회 투여하는 경우를 100% 투여로 간주하였다.

실시예 3

베체트3호방(한약 3)의 구성성분과 제조 및 투여:

포공영(Taraxaci herba) 250g을 물 추출하여 건조시킨 후 마우스 당 1일 1회 6mg 투여하였고 이 경우를 100% 투여로 간주하였다.

실시예 4

베체트4호방(한약 4)의 구성성분과 제조 및 투여:

황련(Coptidis rhizoma), 황금(Scutellariae radix), 황백(Phellodendri cortex) 각각 120g 씩 섞어 물 추출하여 건조시킨 후 마우스당 3.6 mg 1일 1회 투여하는 경우를 100% 투여로 간주하였다.

실시예 5

콜히친(이하 "col"이라 함)은 60g 마우스에 하루에 1.2 마이크로그램씩 투여하였다.

실시예 6

실시예 2의 추출물과 콜히친을 같은 마우스에 복합 투여하였다. 양은 한약2는 마우스 당 6mg 씩, 콜히친은 1.2 마이크로그램씩 각각 1일 1회 투여 투여하는 경우를 100% 투여로 간주하였다.

실시예 7

실시예 3의 추출물에 콜히친을 혼합하여 투여하였다. 한약3은 마우스 당 1일1회 6mg 투여하였고, 콜히친은 1.2 마이크로그램씩 각각 1일 1회 투여 투여하는 경우를 100% 투여로 간주하였다.

실시예 8

실시예 4의 추출물에 콜히친을 혼합하여 투여하였다. 한약4는 마우스 당 1일 1회 3.6mg 투여하였고, 콜히친은 1.2 마이크로그램씩 각각 1일 1회 투여 투여하는 경우를 100% 투여로 간주하였다.

실시예 9

RT-PCR, FACS 결과:

베체트병 마우스(BD mouse)에 한약, 콜히친, 한약+콜히친을 20일간 경구 투여 한 후 비장조직에서는 RT-PCR로, 비장세포(splenocyte) 배양에서는 FACS로 사이토카인의 변화를 알아보았다.

[표 1] 한약과 콜히친 복합투여에 의한 베체트병 마우스의 호전 정도

처리방법 (호전/전체 쥐의 수)	쥐 번호(호전:o, 변화없음:x)
BD, 한약 1 (5/8)	263-3(o), 280-3(o), 287-1(x), 305-3(o), 315-4(o), 332-3(o), 332-4(x), 333-6(x)
BD, 한약 2 (5/9)	252-3(o), 273-5(o), 306-4(o), 331-1(o), 335-3(x), 336-1(x), 336-2(x), 337-1(o), 337-2(x)
BD, 한약 3 (2/3)	255-10(o), 257-5(x), 258-4(o)
BD, 한약 4 (4/6)	257-5(o), 265-9(o), 275-4(o), 280-5(x), 312-5(x), 314-5(o)
BD, col (1/3)	292-4(x), 292-5(o), 292-6(x)
BD, 한1+col (2/3)	275-4(x), 277-4(o), 280-4(o)
BD, 한2+col (2/4)	268-9(o), 285-6(x), 303-7(o), 307-4(x)
BD, 한3+col (3/3)	264-5(o), 270-6(o), 276-4(o)
BD, 한4+col (2/3)	263-5(o), 263-8(x), 267-5(o)

표 1의 결과를 종합하면, 콜히진을 단독투여 한 경우보다는 한약과 복합투여한 그룹들에서 베체트병 증상이 호전되는 비율이 더 높은 경향을 보인다.

[표 2] 한약과 콜히친 복합투여에 의한 베체트병 마우스의 싸이토카인의 변화

이 표의 결과를 종합하면,

1) 한약3과 한약4는 IL-10의 단백질 수준을 높이는 효과가 있다.

2) 콜히친은 TNF-α의 RNA 수준을 낮추는 효과가 있다. 한편, TNF-α는 베체트병의 염증 유발을 일으키는데 중요한 역할을 하므로 이것을 낮추는 것은 증상이 호전되는데 좋다.

3) 콜히친은 IL-4 의 단백질 수준을 높이는 효과가 있다.

4) 한약2와 콜히친을 같이 투여한 경우 IFN-γ는 낮추고 IL-10 수준은 높이는 효과가 있어 증상이 호전되는데 좋다.

[표 3] 한약과 콜히친 복합투여에 의한 증상의 호전 양상

처리방법	마우스번호	약 투여 전후의 증상 변화
한약1	280-3	안면 수포, 위장 증상, 귀이개 홍반(11/1)→ 약 투여 (11/1∼) → 귀, 안면 수포 호전(11/4) → 위장 증상 없어짐(11/29) → 희생(11/22)
한약1	305-3	안면 수포, 구강 궤양(11/1) → 약 투여 (11/1∼) → 호전(11/4) → 정상(11/7) → 희생(11/22)
한약2	252-3	안면 수포, 목덜미 궤양(12/13), 약 투여→안면 호전, 목덜미 지속(1/6) →희생(1/6)
	273-5	안면 수포(9/13)→안면 수포 지속(10/7)→지속(11/18)→안면 궤양(12/13)→약 투여 (12/13∼) →호전(12/22)→ 희생(12/22)
	306-4	목 궤양(10/25)→약 투여 (10/25∼) →진물 멈춤, 호전(11/4)→희생(11/6)
	331-1	안면 수포, 눈 증상(10/22)→약 투여 (10/22∼) →눈 증상 호전(10/29)→안면호전(11/4)→희생(11/4)
	337-1	왼쪽 안면 마비(10/18)→죽어감(10/19)→ 위장 증상(10/22) →약 투여 (10/22∼) →상태악화 (10/25)→귀이개 궤양(11/3)→ 호전(11/4)→ 희생(11/4)
한약3	255-10	양쪽 귀이개 궤양, 목덜미 궤양(11/29)→약 투여 (11/29∼)→호전(12/6)→체중 증가, 좌측 귀 호전, 목덜미 궤양 호전, 우측 귀 호전→희생(11/4)
한약3	258-4	좌측 안면 부종, 피부 궤양(6/25)→안면 수포(11/1)→안면 수포 지속 (11/29) →약 투여 (11/29∼)→피부 궤양 호전(12/13)→희생(12/22)
한약4	257-5	좌측 앞 다리 궤양, 안면 궤양 (11/29)→증상 지속→ 약 투여 (12/27∼) → 호전(1/20)→희생(1/31)
	265-9	좌측 귀이개 홍반(10/11)→지속(10/15)→홍반 호전, 목덜미 궤양 지속(11/29) → 약 투여 (11/29∼)→궤양호전, 안면 수포 지속(12/27)→희생(12/27)
	314-5	양측 귀이개 궤양, 목덜미 궤양(11/29)→약 투여 (11/29∼) →호전(12/6) →희생(12/8)
콜히진	292-5	등 피부 궤양, 안면 수포 (11/1)→안면 궤양(11/18)→ 약 투여(11/18∼)→ 호전(12/6)→ 희생(12/6)

한약1+콜히진	277-4	눈 주위 수포, 딱지, 좌측 귀이개 홍반, 궤양(11/29) →약 투여(11/29∼) →우측 눈 주위 호전(12/6), 좌측 눈 주위 호전(12/16)→ 희생(12/17)
한약1+콜히진	280-4	안면 수포(9/30)→안면 수포(10/7)→피부 궤양(11/29) →약 투여 (11/18∼) → 호전(12/6)→호전(12/13)→희생(12/13)
한약2+콜히진	268-9	안면 수포, 등 피부 궤양(11/29)→약 투여(11/29∼)→거의 완치→ 희생(12/8)
한약2+콜히진	303-7	양측 귀이개 궤양, 안면 수포(11/29)→약 투여(11/29∼)→양측 귀이개 궤양, 안면 수포 호전(12/6)→호전(12/13)→희생(12/13)
한약3+콜히진	264-5	옆구리 피부 궤양, 우측 눈 주위 피부 궤양 (12/13) →약 투여(12/13∼)→ 호전(12/22)→희생(12/22)
	270-6	목덜미 궤양, 양측 귀이개 홍반, 우측 귀이개 궤양(12/13)→약 투여(12/13∼)→목덜미 궤양 호전, 양측 귀이개 홍반 호전(12/20)
	276-4	안면 수포, 양측 귀이개 홍반(11/29)→목덜미 궤양, 좌측 귀이개 궤양(12/13)→약 투여(12/13∼)→궤양 크기 작아지기 시작(12/16)
한약4+콜히진	263-5	안면 수포(8/30), 우측 눈 주위 궤양(10/22)→우측 눈 증상, 안면 수포 (11/1)→우측 눈 주위 궤양 지속 (11/29)→약 투여(11/30∼)→호전 중(12/16)→희생(12/22)
한약4+콜히진	267-5	양측 눈 증상 (7/28)→증상 없어짐(8/19)→위장 증상(9/27)→안면 수포(10/15), 위장 증상 회복→좌측 귀이개 궤양, 안면 수포(12/6)→약 투여 (12/6∼)→호전 중(12/16)→ 희생(12/17)

표 3의 결과를 요약하면, 한약 또는 콜히친 단독 투여에 의하여 증상이 호전되기 시작하는 기간은 6 - 29 일이고, 한약과 콜히친 복합 투여에 의하여 호전되기 시작하는 기간은 3 - 25 일로 복합 투여가 호전 시기를 앞당기는 경향이 있고, 복합 투여에 의하여 호전되는 마우스 숫자는 단독 투여 보다 더 많았다(표 1 참고).

상기와 같은 구성에 따른 본 발명은 콜히진을 단독투여 한 경우보다는 한약과 복합투여한 그룹들에서 베체트병 증상이 호전되는 비율이 더 높은 경향을 보이며, 한약 3과 한약 4는 IL-10의 단백질 수준을 높여 베체트병 증상이 호전되는 효과가 있고, 한약과 콜히친 복합 투여하면, 호전 시기를 앞당기고, 호전되는 마우스 숫자는 단독 투여 보다 더 많았다.

Claims

활성성분으로 유효량의 백작약, 당귀, 백출, 황기, 인진, 호장근, 초용담, 시호, 연교, 현삼, 산치자, 포공영, 황금 및 황백 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 추출물을 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 함유하는 베체트병 치료용 조성물.
제 1 항에 있어서,

상기의 조성물은 60g 체중에 0.6∼1.8㎍/1일의 콜히친을 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 베체트병 치료용 조성물.
제 1 항 내지 제 2 항에 있어서,

상기의 한약추출물의 유효량은 60g 체중에 0.036∼8mg/1일인 것을 특징으로 하는 베체트병 치료용 조성물.
제 1 항에 있어서,

상기 조성물의 추출물은 초용담, 시호, 연교, 현삼 및 산치자 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하는 베체트병 치료용 조성물.
제 1 항에 있어서,

상기 조성물의 추출물은 포공영 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하는 베체트병 치료용 조성물.