KR20160040795A - 소분자 다중-키나아제억제제인 도비티니브(Dovitinib, TKI258)을 유효성분으로 함유하는 골다공증 질환의 예방 및 치료용 조성물 및 이의 용도 - Google Patents

소분자 다중-키나아제억제제인 도비티니브(Dovitinib, TKI258)을 유효성분으로 함유하는 골다공증 질환의 예방 및 치료용 조성물 및 이의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 4-아미노-5-플루오로-3-[6-(4-메틸피페라진-1-일)-1H-벤즈이미다졸-2-일]-1H-퀴놀린-2-온 또는 그의 제약상 허용가능 염을 유효성분으로 포함하는 골다공증 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 (1) 사람 재조합 Bone morphogenic protein (BMP)-유도 조골세포(osteoblast)의 분화에 대한 영향실험을 통하여 조골세포(osteoblast)의 분화 및 성장 촉진활성을 확인하고 ; (2) 조골세포분화의 표지자로서 ALP 생성촉진 활성실험을 통하여 BMP-2-유도 ALP(alkaline phosphatase)의 활성을 촉진하였으며, (3) 관련 신호전달 기전인 ERK1/2, p38 MAPK 와 smad1/5/8 의 인산화에 대한 영향실험을 통하여 ERK1/2 및 p38 의 인산화를 촉진하고 smad1/5/8 의 인산화 및 핵으로의 이동도 증가시킴을 확인하여, 골다공증과 같은 골 관련 질환 치료 및 예방에 유용하다.

Description

소분자 다중-키나아제억제제인 도비티니브(Dovitinib, TKI258)을 유효성분으로 함유하는 골다공증 질환의 예방 및 치료용 조성물 및 이의 용도 {A composition comprising dovitinib (TKI258), a multi-kinase inhibitor, as an active ingredient for preventing or treating osteoporosis}
본 발명은 소분자 다중-키나아제억제제인 도비티니브(Dovitinib, TKI258)을 유효성분으로 함유하는 골다공증 질환의 예방 및 치료용 조성물 및 이의 용도에 관한 것이다.
[문헌 1] W.J. Boyle, W.S. Simonet, D.L. Lacey, Osteoclast differentiation and activation, Nature 423 (2003) 337-342.
[문헌 2] S. Harada, G.A. Rodan, Control of osteoblast function and regulation of bone mass, Nature 423 (2003) 349-355.
[문헌 3] F. Long, Building strong bones: molecular regulation of the osteoblast lineage, Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 13 (2012) 27-38.
[문헌 4] T. Katagiri, A. yamaguchi, M. Komaki, E. Abe, N. Takahashi, T. Ikeda, V. Rosen, J.M. Wozney, A. Fujisawa-Sehara, T. Suda, Bone morphogenetic protein-2 converts the differentiation pathway of C2C12 myoblasts into the osteoblast lineage, J. Cell Biol. 127 (1994) 1755-1766.
[문헌 5] G.A. Candeliere, F. Liu, J.E.Aubin, Individual osteoblasts in the developing calvaria express different gene repertoires, Bone 28 (2001) 351-361.
[문헌 6] H.J. Chae, B.J. Jeong, M.S. Ha, J.K. Lee, J.O. Byun, W.Y. Jung, Y.G. Yun, D.G. Lee, S.H. Oh, S.W. Chae, Y.G. Kwak, H.H. Kim, Z.H. Lee,H.R. Kim, ERK MAP kinase is required in 1, 25(OH)2D3-induced differentiation in human osteoblasts, Immunopharmacol. Immunotoxicol. 24 (2002) 31-41.
[문헌 7] A. Suzukim J. Guicheux, G. Palmer, Y. Miura, Y. Oiso, J.P. Bonjour, J. Caverzasio, Evidence for a role of p38 MAP kinase in expression of alkaline phosphatase during osteoblastic cell differentiation, Bone 30 (2002) 91-98.
[문헌 8] C.C. Wu, Y.S. Li, J.H. Haga, N. Wang, I.Y. Lian, F.C. Su, S. Usamim, S. Chien, Roles of MAP kinases in the regulation of bone matrixgene expressions in human osteoblasts by oscillatory fluid flow, J. Cell. Biochem. 98 (2006) 632-641.
[문헌 9] M. Phimphilai, Z. Zhao, H. Boules, H. Roca, R.T. Franceschi, BMP signaling is required for RUNX2-dependent induction of the osteoblst phenotype, J. Bone Miner. Res. 21 (2006) 637-646.
[문헌 10] D.O. Wagner, C. Sieber, R. Bhushan, J.H. Borgermann, D. Graf, P. Knaus, BMPs: from bone to body morphogenetic proteins, Sci. Signal 3 (2010) mr1.
[문헌 11] V. Rosen, BMP2 signaling in bone development and repair, CytokineGrowth Factor Rev. 20 (2009) 475-480.
[문헌 12] C.J. Rosen, J.P. Bilezikian, Clinical review 123: anabolic therapy for osteoporosis, J. Clin. Endocrinol.Metab. 86 (2001) 957-964.
[문헌 13] C. Garces, L.E. Garcia, Combination of anabolic and antiresorptive agents for the treatment of osteoporosis, Maturitas 54 (2006) 47-54.
[문헌 14] M. Ishiyama, Y. Miyazono, K. Sasamoto, Y. Ohkura and K. Ueno,A highly water-soluble disulfonated tetrazolium salt as a chromogenic indicator for NADH as well as cell viability, Talanta, 44 (1997) 1299-1305.
[문헌 15] H.J. Kim, S.H. Kim, Tanshinone IIA enhances BMP-2-stimulated commitment of C2C12 cells into osteoblasts via p38 activation, Amino Acids. 39 (2010) 1217-1226.
[문헌 16] R. Nishimura, Y. Kato, D. Chen, S.E. Harris, G.R. Mundy, T. Yoneda, Smad5 and DPC4 are key molecules in mediating BMP-2-induced osteoblastic differentiation of the
pluripotent mesenchymal precursor cell line C2C12. J. Biol. Chem. 273 (1998) 1872-1879.
본 발명은 소분자 다중-키나아제억제제인 도비티니브(Dovitinib, TKI258)을 유효성분으로 함유하는 골다공증 질환의 예방 및 치료용 조성물 및 이의 용도에 관한 것이다.
골다공증은 뼈의 기질이 감소하여 뼈의 질량 자체가 매우 적어진 상로, 뼈에 거친 경석이나 스펀지처럼 작은 구멍이 많이 나서 무르고 쉽게 부러지게 된다. 골다공증은 크게 일차성과 이차성 골다공증으로 나누며 일차성 골다공증은 제 1형 골다공증(postmenopausal)과 제 2형 골다공증(senile osteoporosis)으로 구분된다. 제 1형 골다공증은 폐경 후 에스트로겐의 결핍이 주된 원인으로 골흡수가 증가하면서 혈중 칼슘이 높아지고 이에 따라 부갑상선 호르몬의 분비가 감소되고, 따라서 장내의 칼슘 흡수가 낮아지는 결과로 발생하는 골다공증으로
50~65세의 여성에게 주로 발생한다. 발생기전은 에스트로겐 부족에 의해 조골세포에서 IL-1(Interleukin-1), IL-6 등의 사이토카인의 생성이 증가하고, 이들이 파골세포를 활성화시킴으로서 골소실이 발생한다. 이때는 주로 소골에서 뼈의 소실이 발생하므로 척추와 손목에서 골절이 빈발한다. 제 2형 골다공증은 65세 이후 남녀 노인에게 발생하는 골다공증으로, 발생기전은 신장에서 1, 25(OH)2D3 생성이 감소되어 장관내 칼슘 흡수가 줄고, 부갑상선 호르몬 분비가 많아져서 피질골의 손실이 증가되고 골아세포의 골형성이 감소되어 골다공증이 발생하는 것이다 (Roodman GD et al., Advances in bone biology: the osteoclast, Endocrinol Rev. 17, 308-332, 1996). 제 1형, 제 2형에 의한 정상적인 생리적 골 소실 외에도 유전적인 소인, 그릇된 생활습관 등 환경적인 요인과 호르몬의 부조화 등이 복합적으로 작용하여 초래되는 질환으로 골다공증 환자의 대부분이 여기에 속한다. 반면, 이차성 골다공증은 다른 질환 또는 약물에 의해 오는 골다공증을 의미하며, 병적인 원인으로는 각종 내분비 질환에 의해 생기는 골다공증을 말한다 (Avioli LV. et al., The osteoporotic syndrome; Detection, prevention & treatment. 3rd ed. Wielis, 1993).
골대사는 골 흡수와 골생성의 반복에 의해 구성되며 골량은 이 두 과정에 의해 결정된다. 그러나 폐경에 의해 여성호르몬의 결핍이 나타나면 이런 골의 재형성과정에 관여하는 조골세포와 파골세포에 직접, 간접적으로 영향을 미쳐 골손실을 유발한다. 골생성에 비하여 골흡수가 많아지면 골다공증의 원인이 되며, 이는 골절의 위험성을 높인다.
골다공증의 원인으로 명확히 밝혀진 것은 없으나, 분만횟수의 증가, 활동량의 감소, 에스트라디올 (estradiol)결핍, vitamin D 결핍, 호르몬장애, 플루오르화물(fluoride) 결핍, 반사장애(reflex dystrophy), 유전적 원인, 노인성 원인, 칼슘의 섭취 부족 또는 장에서의 흡수능력 저하 등이 있다. 이러한 요소들이 단독 또는 복합적으로 작용하여 골흡수를 강화 또는 골형성을 약화시켜 골다공증을 유발시킨다 (권재희 et al., 폐경 여성의 골밀도: 자연 폐경 군과 수술적 폐경 군간의 비교, 대한산부학회지, 2000).
골다공증에 의한 골절은 65세 이후의 노인에서 흔히 발생하며 넘어지는 정도의 가벼운 외상으로 발생하고 골절의 부위는 대퇴골의 경부나 전자부에 주로 발생하며 연령이 많을수록 전자부 골절이 많이 발생하며 다른 부위의 골절과는 달리 이환율과 사망률이 높고 치료가 어려운 골절이다. 또한 골절 후 6개월내 사망률이 높게는 약 30%에 달하며 회복되더라도 골절 이전의 상태로 회복되기는 힘들어서 약 70%에서 기능의 장애가 온다. 보고에 의하면 60세 이전 노인에서 골절발생률은 15%정도인데, 이 중 40% 정도가 골다공증에 의한 골절인데 반해 60~70세 여성의 경우는 골절 중 60%가 골다공증에 의한 골절이며, 50세 이상의 골밀도 감소 여성의 경우, 골밀도가 정상인 여성에 비해 골절 위험이 2배까지 증가한다고 한다 (대한골대사학회, 골다공증, 최신의학사, p17-63, 1991). 또한 2000년 상반기 건강보험심사평가원 발표에 의하면 국내 입원 환자 중 70대 이상에서는 대퇴골골절이 가장 높은 비율을 차지하는 것으로 나타났다. 그리고 골다공증으로 인한 사망 위험률이 유방암의 3배가 넘는 30%정도나 되어 우리나라 뿐만 아니라 많은 선진국에서도 중요한 보건문제로 대두되고 있다.
현재 골다공증의 일반적인 치료로는 칼슘, 비타민 D의 섭취, 운동 및 생활 습관의 변화를 요구하고 있으며, 약물치료로는 골흡수 억제제로 에스트라디올(estradiol), 칼시토닌(Calcitonin), 비스포스포네이트 (Bisphosphonates)등이 있고, 골형성 촉진제로 플루오르화물(fluoride), 부갑상선 호르몬 등이 있다. 하지만, 아직까지 일부 약물을 제외하고는 획기적인 약물로 알려진 것이 없다. 따라서 일차적으로 골밀도의 손실을 억제하고 이차적으로 골흡수를 억제시켜주는 약물 치료법이 절실히 필요하다.
도비티니브(Dovitinib; TKI258) 은 소분자 다중-키나아제 억제제로서 많은 종류의 암 치료제로서 개발되어 현재 임상 2, 3 상이 진행 중이다. 비록 도비티니브가 많은 키나아제를 나노몰 농도 수준에서 억제 가능하다고 알려져 있으나,
척추동물에서 조골세포 (osteoblast) 에 의한 골 (bone) 의 생성 및 파골세포 (osteoclast) 에 의한 골의 침식은 골 항상성 (bone homeostasis) 유지에 매우 중요하다.그러나 조골세포 활성의 감소 및 파골세포 활성의 증가는 골 무기질의 감소뿐만 아니라 골절 또는 골다공증과 같은 대사성골질환을 증가시킬 수 있는 가능성이 있다 [W.J. Boyle, W.S. Simonet, D.L. Lacey, Osteoclast differentiation and activation, Nature 423 (2003) 337-342; [2] S. Harada, G.A. Rodan, Control of osteoblast function and regulation of bone mass, Nature 423 (2003) 349-355.]. 조골세포는 중배엽성 줄기세포로부터 발생된 세포로서 골 무기질의 밀도 및 조골세포 표지자인 alkaline phosphatase (ALP), osteocalcin (OCN) 및 osteopontin (OPN)과 같은 bone matrix 단백질의 생성에 관여한다 [3] F. Long, Building strong bones: molecular regulation of the osteoblast lineage, Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 13 (2012) 27-38; [4] T. Katagiri, A. yamaguchi, M. Komaki, E. Abe, N. Takahashi, T. Ikeda, V. Rosen, J.M. Wozney, A. Fujisawa-Sehara, T. Suda, Bone morphogenetic protein-2 converts the differentiation pathway of C2C12 myoblasts into the osteoblast lineage, J. Cell Biol. 127 (1994) 1755-1766.]. 이러한 골 생성 표지자의 유도 및 발현은 주로 ERK, JNK, p38 과 같은 Mitogen activated protein kinase (MAPK) 관련 신호전달기전에 의해 조절되고 있다 [[5] G.A. Candeliere, F. Liu, J.E.Aubin, Individual osteoblasts in the developing calvaria express different gene repertoires, Bone 28 (2001) 351-361; [6] H.J. Chae, B.J. Jeong, M.S. Ha, J.K. Lee, J.O. Byun, W.Y. Jung, Y.G. Yun, D.G. Lee, S.H. Oh, S.W. Chae, Y.G. Kwak, H.H. Kim, Z.H. Lee,H.R. Kim, ERK MAP kinase is required in 1, 25(OH)2D3-induced differentiation in human osteoblasts, Immunopharmacol. Immunotoxicol. 24 (2002) 31-41; [7] A. Suzukim J. Guicheux, G. Palmer, Y. Miura, Y. Oiso, J.P. Bonjour, J. Caverzasio, Evidence for a role of p38 MAP kinase in expression of alkaline phosphatase during osteoblastic cell differentiation, Bone 30 (2002) 91-98; [8] C.C. Wu, Y.S. Li, J.H. Haga, N. Wang, I.Y. Lian, F.C. Su, S. Usamim, S. Chien, Roles of MAP kinases in the regulation of bone matrixgene expressions in human osteoblasts by oscillatory fluid flow, J. Cell. Biochem. 98 (2006) 632-641]. 또한 골 형성을 자극하는 인자들로는 bone morphogenetic proteins (BMPs), transforming growth factor-β(TGF-β) superfamily 등이 있으며 이러한 인자들은 조골세포의 분화와 골 무기질화를 촉진시키는 효과를 나타낸다 [[9] M. Phimphilai, Z. Zhao, H. Boules, H. Roca, R.T. Franceschi, BMP signaling is required for RUNX2-dependent induction of the osteoblst phenotype, J. Bone Miner. Res. 21 (2006) 637-646.]. 특히 BMP-2는 조골세포의 생성 및 골 재생을 조절하는 주요한 인자로 알려져 있다 [[10] D.O. Wagner, C. Sieber, R. Bhushan, J.H. Borgermann, D. Graf, P. Knaus, BMPs: from bone to body morphogenetic proteins, Sci. Signal 3 (2010) mr1; [11] V. Rosen, BMP2 signaling in bone development and repair, CytokineGrowth Factor Rev. 20 (2009) 475-480].
최근까지 골 형성 및 재흡수 사이의 균형을 유지시키기 위한 방법과 관련된 많은 연구가 진행되고 있다. 이에 따라, 조골세포의 분화를 촉진하거나 골 재흡수를 억제하는 활성을 가진 새로운 물질의 개발이 골 관련 질환을 치료 또는 예방하는데 중요한 역할을 할 것으로 생각된다 [[12] C.J. Rosen, J.P. Bilezikian, Clinical review 123: anabolic therapy for osteoporosis, J. Clin. Endocrinol. Metab. 86 (2001) 957-964; [13] C. Garces, L.E. Garcia, Combination of anabolic and antiresorptive agents for the treatment of osteoporosis, Maturitas 54 (2006) 47-54.]. 그러나, 기존에 사용되던 많은 골 질환 치료제들은 투여 방법, 비용 등에서 몇 가지 한계점이 있어 이를 보완할 새로운 치료제의 발명이 필요하다. 최근 많은 제약 회사들이 증가하는 R&D 비용을 절감하기 위해 기존에 사용하고 있는 치료제들을 검토하고 있으며 이러한 치료제들을 신약 재창출 (drug repositioning) 과정을 통해 골 관련 질환의 치료제로 적용하려고 하고 있다. 신약 재창출의 과정을 통해 많은 제약회사 또는 연구자들이 치료제 개발에 쓰이는 비용을 절감하고 약물의 독성, 동태 연구 및 임상 연구의 실패에 대한 위험도를 낮출 수 있다.
도비티니브(Dovitinib; TKI258) 은 소분자 다중-키나아제억제제 (multi-kinase inhibitor) 로서 현재 위암, 췌장암, 진행성 유방암, 골수종, 신장 세포암 등 다양한 암의 치료제로 임상 1, 2, 3 상이 진행중이다 (ClinicalTrials.gov). 또한 임상적으로 안정한 화합물이며 약물의 독성 및 동력학적 연구에서 좋은 결과를 보이고 여러 연구에서fibroblast growth factor receptor (FGFR) 및 platelet-derived growth factor receptor (PDGFR) 의 억제를 통한 항암 효과와 신생혈관 생성 억제를 나타냈다.
한국특허공개 제 10-2014-0023358호에는 티로신 수용체 키나제 (RTK)와 같은 소정의 단백질 키나제를 억제하는 것으로 알려진 하기 화학식 I의 도비티닙(dovitinib, 노바티스)으로도 지칭되는, 화합물 4-아미노-5-플루오로-3-[6-(4-메틸피페라진-1-일)-1H-벤즈이미다졸-2-일]-1H-퀴놀린-2-온 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 선양 낭성 암종에 걸린 대상체에서 고형 종양을 감소시키는 방법에 대해 개시된 바가 있다.
<화학식 I>
Figure pat00001

화합물 I, 그의 호변이성질체, 또는 모노-락트산 염을 포함한 제약상 허용되는 염에 대해서는 미국 특허 번호 제6,605,617, 6,774,237, 7,335,774 및 7,470,709, 및 미국 특허 출원 일련번호 10/982,757, 10/982,543 및 10/706,328호 그리고 PCT 출원 공개 WO 2006/127926 및 WO 2009/115562에 기술되어 있다. 조직학에 의해 선양낭성 암종 (ACC) 원발성 종양의 형태구조를 가지는 것으로 확인된 ACC 특이적 이종이식편(xenograft) 모델을 사용하였을 때, 도비티닙은 원발성 ACC 이종이식편에서 종양 성장을 억제하는 데에 효과적인 것으로 나타났다.
그러나 상기 문헌의 어디에도 도비티닙 (dovitinib, 노바티스)을 이용한 골 항상성 또는 골 관련 질환 치료효능에 대한 내용이 개시되거나 교시된 바는 없다.
본 발명에서는 경구용 소분자 화합물인 dovitinib를 사용하여 하였다. Dovitinib 는 조골세포분화의 표지자로서 ALP 생성을 촉진하였고, 관련 신호전달 기전인 ERK1/2, p38 MAPK 와 smad1/5/8 의 인산화를 증가시켰다. 이러한 발명을 통해 dovitinib 가 BMP-2 를 통한 조골세포의 분화와 골다공증과 같은 골 관련 질환의 치료제 개발을 위한 연구에 매우 유용할 것으로 생각된다.
이에, 본 발명자들은 도비티닙(dovitinib, 노바티스)의 BMP-2 유도에 의한 조골세포의 분화 및 관련 신호전달 기전의 활성 촉진 효과를 확인하기 위하여, (1) 사람 재조합 Bone morphogenic protein (BMP)-유도 조골세포(osteoblast)의 분화에 대한 영향실험을 통하여 조골세포(osteoblast)의 분화 및 성장 촉진활성을 확인하고 ; (2) 조골세포분화의 표지자로서 ALP 생성촉진 활성실험을 통하여 BMP-2-유도 ALP(alkaline phosphatase)의 활성을 촉진하였으며, (3) 관련 신호전달 기전인 ERK1/2, p38 MAPK 와 smad1/5/8 의 인산화에 대한 영향실험을 통하여 ERK1/2 및 p38 의 인산화를 촉진하고 smad1/5/8 의 인산화 및 핵으로의 이동도 증가시킴을 확인하여, 골다공증과 같은 골 관련 질환을 치료 가능함을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 4-아미노-5-플루오로-3-[6-(4-메틸피페라진-1-일)-1H-벤즈이미다졸-2-일]-1H-퀴놀린-2-온 또는 그의 제약상 허용가능 염을 유효성분으로 포함하는 골다공증 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
따라서 본 발명은 4-아미노-5-플루오로-3-[6-(4-메틸피페라진-1-일)-1H-벤즈이미다졸-2-일]-1H-퀴놀린-2-온 또는 그의 제약상 허용가능 염을 유효성분으로 포함하는 골다공증 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.
본원에서 정의되는 골다공증질환은 제 1형 골다공증(폐경 후 골다공증), 제 2형 골다공증(노인성 골다공증), 특발성 골다공증, 내분비질환과 골다공증, 소화기계 질환과 골다공증, 악성질환과 골다공증, 음주와 골다공증, 흡연과 골다공증 및 약물과 골다공증으로 이루어진 군으로 선택된 하나 이상의 질환, 바람직하게는 제 1형 골다공증(폐경 후 골다공증)을 포함하는 것임을 특징으로 한다.
본 발명의 화합물은 당해 기술분야에서 통상적인 방법에 따라 약학적으로 허용 가능한 염 및 용매화물로 제조될 수 있다.
약학적으로 허용 가능한 염으로는 유리산(free acid)에 의해 형성된 산부가염이 유용하다. 산부가염은 통상의 방법, 예를 들면 화합물을 과량의 산 수용액에 용해시키고, 이 염을 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴과 같은 수혼화성 유기 용매를 사용하여 침전시켜서 제조한다. 동일한 몰량의 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올(예, 글리콜 모노메틸에테르)을 가열하고 이어서 상기 혼합물을 증발시켜서 건조시키거나, 또는 석출된 염을 흡인 여과시킬 수 있다.
이 때, 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 인산, 황산, 질산, 주석산 등을 사용할 수 있고 유기산으로는 메탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 아세트산, 트리플루오로아 세트산, 시트르산, 말레인산(maleic acid), 숙신산, 옥살산, 벤조산, 타르타르산, 푸마르산, 만데르산, 프로피온산(propionic acid), 구연산(citric acid), 젖산(lactic acid), 글리콜산(glycollic acid), 글루콘산(gluconic acid), 갈락투론산, 글루탐산, 글루타르산(glutaric acid), 글루쿠론산(glucuronic acid), 아스파르트산, 아스코르빈산, 카본산, 바닐릭산 및 히드로 아이오딕산 등을 사용할 수 있다.
또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염은, 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리토 금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비 용해 화합물염을 여과한 후 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로서는 특히 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하며, 또한 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염을 적당한 은염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.
본 발명의 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염은, 달리 지시되지 않는 한, 본 발명의 화합물에 존재할 수 있는 산성 또는 염기성기의 염을 포함한다. 예를 들면, 약학적으로 허용 가능한 염으로는 히드록시기의 나트륨, 칼슘 및 칼륨염이 포함되며, 아미노기의 기타 약학적으로 허용 가능한 염으로는 하이드로브로마이드, 황산염, 수소 황산염, 인산염, 수소 인산염, 이수소 인산염, 아세테이트, 숙시네이트, 시트레이트, 타르트레이트, 락테이트, 만델레이트, 메탄설포 네이트(메실레이트) 및 p-톨루엔설포네이트(토실레이트) 염이 있으며, 당업계에서 알려진 염의 제조 방법이나 제조과정을 통하여 제조될 수 있다.
이하, 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.
본 발명의 화합물은 미국 특허 번호 제6,605,617, 6,774,237, 7,335,774 및 7,470,709, 및 미국 특허 출원 일련번호 10/982,757, 10/982,543 및 10/706,328호 그리고 PCT 출원 공개 WO 2006/127926 및 WO 2009/115562에 기술된 제조방법으로 제조가능하며 또한 시중 구입 가능하다.
본 발명의 화합물을 대상으로 BMP-2 유도에 의한 조골세포의 분화 및 관련 신호전달 기전의 활성 촉진 효과를 확인하기 위하여, (1) 사람 재조합 Bone morphogenic protein (BMP)-유도 조골세포(osteoblast)의 분화에 대한 영향실험을 통하여 조골세포(osteoblast)의 분화 및 성장 촉진활성을 확인하고 ; (2) 조골세포분화의 표지자로서 ALP 생성 촉진 활성실험을 통하여 BMP-2-유도 ALP(alkaline phosphatase)의 활성을 촉진하였으며, (3) 관련 신호전달 기전인 ERK1/2, p38 MAPK 와 smad1/5/8 의 인산화에 대한 영향실험을 통하여 ERK1/2 및 p38 의 인산화를 촉진하고 smad1/5/8 의 인산화 및 핵으로의 이동도 증가시킴을 확인하여, 골다공증과 같은 골 관련 질환 치료 및 예방에 유용함을 확인하였다.
본 발명의 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 화합물을 0.1 내지 50% 중량으로 포함한다.
그러나 상기와 같은 조성은 반드시 이에 한정되는 것은 아니고, 환자의 상태 및 질환의 종류 및 진행 정도에 따라 변할 수 있다.
본 발명의 화합물을 포함하는 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 화합물을 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 이에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 화합물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 화합물은 1일 0.01 mg/kg 내지 10 g/kg으로, 바람직하게는 1 mg/kg 내지 1 g/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수 있다. 그러므로 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구 및 직장, 또는 정맥 등의 방법을 통하여 투여 할 수 있다.
또한 본 발명은 4-아미노-5-플루오로-3-[6-(4-메틸피페라진-1-일)-1H-벤즈이미다졸-2-일]-1H-퀴놀린-2-온 또는 그의 제약상 허용가능 염을 유효성분으로 포함하는 골다공증 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명의 화합물을 포함하는 건강기능식품은 목적 질환의 예방 및 개선을 위한 약제, 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다.
본 발명의 화합물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.
본원에서 정의되는 "건강기능식품"은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.
본 발명의 목적 질환의 예방 또는 개선을 위한 건강기능식품은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 화합물을 0.01 내지 95%, 바람직하게는 1 내지 80% 중량백분율로 포함한다.
또한, 목적 질환의 예방 또는 개선을 위한 목적으로 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 환제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 등의 약학 투여형태 또는 티백제, 침출차, 건강 음료 등의 형태인 건강기능식품으로 제조 및 가공이 가능하다.
또한, 본 발명은 4-아미노-5-플루오로-3-[6-(4-메틸피페라진-1-일)-1H-벤즈이미다졸-2-일]-1H-퀴놀린-2-온 또는 그의 제약상 허용가능 염을 유효성분으로 포함하는 골다공증 질환의 예방 및 개선용 건강보조식품을 제공한다.
또한, 본 발명은 4-아미노-5-플루오로-3-[6-(4-메틸피페라진-1-일)-1H-벤즈이미다졸-2-일]-1H-퀴놀린-2-온 또는 그의 제약상 허용가능 염을 유효성분으로 포함하는 골다공증 질환의 예방 및 개선용 식품 또는 식품첨가물을 제공한다.
또한 상기 건강기능식품은 식품첨가물을 추가로 포함할 수 있으며, "식품첨가물"로서의 적합여부는 다른 규정이 없는 한 식품의약품안전처에 승인된 식품첨가물공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다.
상기 "식품첨가물공전"에 수재된 품목으로 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼륨, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성품, 감색소, 감초추출물, 결정셀롤로오스, 구아검 등의 천연첨가물, L-글루타민산나트륨제제, 면류첨가알칼리제, 보존료제제, 타르색소제제 등의 혼합 제제류들을 들 수 있다.
본 발명의 화합물이 포함된 기능성 식품으로는 빵, 떡류, 건과류, 캔디류, 초콜릿류, 츄잉껌, 쨈류와 같은 과자류 아이스크림류, 빙과류, 아이스크림 분말류와 같은 아이스크림 제품류 우유류, 저지방 우유류, 유당분해우유, 가공유류, 산양유, 발효유류, 버터유류, 농축유류, 유크림류, 버터유, 자연치즈, 가공치즈, 분유류, 유청류와 같은 유가공품류 식육가공품, 알가공품, 햄버거와 같은 식육제품류 어묵, 햄, 소세지, 베이컨 등의 어육가공품과 같은 어육제품류 라면류, 건면류, 생면류, 유탕면류, 호화건먼류, 개량숙면류, 냉동면류, 파스타류와 같은 면류 과실음료, 채소류음료, 탄산음료, 두유류, 요구르트 등의 유산균음료, 혼합음료와 같은 음료 간장, 된장, 고추장, 춘장, 청국장, 혼합장, 식초, 소스류, 토마토케첩, 카레, 드레싱과 같은 조미식품 마가린, 쇼트닝 및 피자를 들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 정제물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, (예를 들어, 포도당, 과당 등); 디사카라이드, (예를 들어 말토스, 슈크로스 등); 및 폴리사카라이드, (예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등)과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등)) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100㎖ 당 일반적으로 약 1~20g, 바람직하게는 약 5~12g 이다.
상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
또한, 본 발명의 화합물은 목적 질환의 예방 효과를 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 화합물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100㎖ 을 기준으로 0.02 내지 5g, 바람직하게는 0.3 내지 1g 의 비율로 가할 수 있다.
상기 건강기능식품을 제조하는 과정에서 음료를 포함한 식품에 첨가되는 본 발명에 따른 정제물은 필요에 따라 그 함량을 적절히 가감할 수 있다.
본 발명에 따른 화합물은 BMP-2 유도에 의한 조골세포의 분화 및 관련 신호전달 기전의 활성 촉진 효과를 확인하기 위하여, (1) 사람 재조합 Bone morphogenic protein (BMP)-유도 조골세포(osteoblast)의 분화에 대한 영향실험을 통하여 조골세포(osteoblast)의 분화 및 성장 촉진활성을 확인하고 ; (2) 조골세포분화의 표지자로서 ALP 생성촉진 활성실험을 통하여 BMP-2-유도 ALP(alkaline phosphatase)의 활성을 촉진하였으며, (3) 관련 신호전달 기전인 ERK1/2, p38 MAPK 와 smad1/5/8 의 인산화에 대한 영향실험을 통하여 ERK1/2 및 p38 의 인산화를 촉진하고 smad1/5/8 의 인산화 및 핵으로의 이동도 증가시킴을 확인하여, 골다공증과 같은 골 관련 질환 치료 및 예방에 활용될 수 있다.
도 1: 본 발명 시료의 세포독성실험 결과를 나타내는 그래프이며;
도 2: 본 발명 시료의 ALP 의 활성에 대한 영향을 나타내는 그래프이며;
도 3: 본 발명 시료의 인산화 된 Smad1/5/8 의 인산화 및 핵 내부로의 이동 촉진 효과를 나타내는 도이며;
도 4: 본 발명 시료의 인산화 된 ERK1/2, p38 의 발현 촉진 효과를 나타내는 도이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 더욱 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의하여 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 1> 시료 제조
도비티니브(Dovitinib)은 회사 (S1018, Selleck Chemicals, USA)에서 구입하여 시료료 사용하였다.
< 참고예 1> 실험 준비
1-1. 실험재료
재조합 사람 BMP (bone morphogenetic protein)-2 (#355-BM-010) 은 R&D systems, Inc. (USA) 에서 구매하였다. Fetal bovine serum (FBS, #16000044), 세포 배양용 배지 DMEM (#11995-065) 및 항생제 (100 U/ml penicillin 및 100 μg/ml streptomycin, #15070-063)를 포함한 세포배양용 재료는 Invitrogen, Inc. (USA) 에서 구매하였다. 인산화된 (p)-ERK1/2 (#4370), ERK1/2 (#9102), p-JNK (#9251), JNK (#9252), p-p38 (#9211), p38 (#9212) 들은 Cell Signaling Technology, Inc. (USA) 에서 구매하였다. p-Smad1/5/8 (#sc-12353), Smad1/5/8 (#sc-6131-R) 및 Actin (#sc-8432) 은 Santa Cruz Biotechnology, Inc. (USA) 에서 구매하였다. Alkaline phosphatase (ALP) staining kit (#EXTRA2A)는 Sigma (USA) 에서 구매하였다.
1-2. 세포배양 및 분화
Murine bi-potential mesenchymal precursor C2C12 (mouse myoblast cell line) 세포 (#CRL-1772) 는 ATCC (USA) 에서 구매하였으며 10% fetal bovine serum 및 1% 항생제를 포함하는 DMEM 배지(#11995-065, Invitrogen Inc., USA)에 5% CO2, 37 °C 조건에서 배양한다. 조골세포로의 분화를 위해 C2C12 세포를 96-well plate 에 깔고 48 시간 배양 후 BMP-2 (50 ng/ml) 를 5% FBS 를 포함하는 배양 배지에 처리한다. 배양 배지는 3일 마다 교체하였다.
< 실험예 1> 세포생장 검사 ( Cell viability assay )
상기 실시예 시료의 세포생장 검사 (Cell viability assay)를 통한 세포독성 효과을 확인하기 위하여, 문헌에 기재된 CCK-8 assay 방법을 응용하여 하기와 같이 실험하였다. [[14] M. Ishiyama, Y. Miyazono, K. Sasamoto, Y. Ohkura and K. Ueno,A highly water-soluble disulfonated tetrazolium salt as a chromogenic indicator for NADH as well as cell viability, Talanta, 44 (1997) 1299-1305].
C2C12 세포 (4x103 cells/well) 를 96-well plate 에 깔고 24 시간 배양한다. 세포를 BMP-2 (50 ng/ml) 또는 dovitinib와 함께 5% FBS 가 포함된 배지에 처리하고 72 시간 동안 배양한다. 세포 생장은 키트(Cell Counting Kit-8; Dojindo Molecular Technologies, Japan) 를 사용하여 흡광도를 측정하였다.
도비티니브 농도에 따른 세포독성 효과를 CCK-8 assay 를 통하여 확인하였고, 확인된 농도를 BMP-2-유도 조골세포로의 분화에 적용하였다.
상기 실험 결과, 도 1에 나타난 바와 같이, 96-well plate 에 24 시간 배양한 C2C12 세포에 BMP-2 (50 ng/ml) 와 dovitinib (0.003~10 μM) 을 처리한 후 72 시간 배양하였을 때, 3 μM 까지는 세포독성을 보이지 않는 반면, 10 μM 에서는 약 30% 정도의 세포독성을 보이는 것으로 확인되었다.
< 실험예 2> 사람 재조합 Bone morphogenic protein ( BMP )-유도 조골세포( osteoblast )의 분화에 대한 영향실험
상기 실시예 시료의 사람 재조합 Bone morphogenic protein (BMP)-유도 조골세포(osteoblast)의 분화에 대한 영향을 확인하기 위하여, 하기와 같이 실험하였다.
2-1. C2C12 세포 내 ALP 의 활성실험
상기 실시예 시료의 C2C12 세포 내 ALP 의 활성에 대한 영향을 확인하기 위하여, 문헌에 기재된 방법을 응용하여 하기와 같이 실험하였다. [[15] H.J. Kim, S.H. Kim, Tanshinone IIA enhances BMP-2-stimulated commitment of C2C12 cells into osteoblasts via p38 activation, Amino Acids. 39 (2010) 1217-1226.]
C2C12 세포 (4x103 cells/well) 를 96-well plate 에 깔고 24 시간 배양하였다. 세포를 BMP-2 (50 ng/ml) 또는 dovitinib(0.03~3 μM)와 함께 5% FBS 가 포함된 배지에 처리하고 72 시간 동안 배양한다. 배양 후, 세포를 3.7% formaldehyde 에 고정하고, PBS 로 세척한 뒤 ALP staining kit (#EXTRA2A, Sigma, USA)를 사용하여 염색한다. 염색 후 ALP-positive 세포는 inverted 현미경 (#IX-53, Olympus, Japan) 을 이용하여 확인하였다.
상기 실험 결과, 도 2에 나타난 바와 같이, Dovitinib 의 농도가 증가할수록 C2C12 세포 내 ALP 의 활성이 증가하는 것을 확인할 수 있다. ALP-positive 세포수를 직접 확인하기 위해 임의의 세 구역을 지정하여 세포수를 확인한 결과, BMP-2 만 처리한 경우 ALP-positive 세포는 평균 29 개 인데 반해, Dovitinib를 농도별로 (0.03~3 μM) 처리 하였을 경우, 평균 33, 35, 46, 49, 56 의 순으로 각각 증가하는 것을 확인할 수 있다.
< 실험예 3> 조골세포 분화 관련 신호전달 기전인 ERK1 /2, p38 MAPK 와 smad1 /5/ 8 의 인산화에 대한 영향실험
상기 실시예 시료의 조골세포 분화 관련 신호전달 기전인 ERK1/2, p38 MAPK 와 smad1/5/8 의 인산화에 대한 영향을 확인하기 위하여, 하기와 같이 실험하였다. [[15] H.J. Kim, S.H. Kim, Tanshinone IIA enhances BMP-2-stimulated commitment of C2C12 cells into osteoblasts via p38 activation, Amino Acids. 39 (2010) 1217-1226.]
BMP-2 (50 ng/ml) 는 C2C12 세포 내에서 Mitogen activated protein kinase (MAPK) 의 인산화 및 관련 신호전달을 촉진시키는 것으로 알려져 있으며, 조골세포의 분화와 관련이 있다. [[8] C.C. Wu, Y.S. Li, J.H. Haga, N. Wang, I.Y. Lian, F.C. Su, S. Usamim, S. Chien, Roles of MAP kinases in the regulation of bone matrixgene expressions in human osteoblasts by oscillatory fluid flow, J. Cell. Biochem. 98 (2006) 632-641.;[16] R. Nishimura, Y. Kato, D. Chen, S.E. Harris, G.R. Mundy, T. Yoneda, Smad5 and DPC4 are key molecules in mediating BMP-2-induced osteoblastic differentiation of the pluripotent mesenchymal precursor cell line C2C12. J. Biol. Chem. 273 (1998) 1872-1879.]
C2C12 세포 (4x103 cells/100 μl) 를 BMP-2 (50 ng/ml) 또는 dovitinib와 함께 5% FBS 가 포함된 배지에 처리하고 72 시간 동안 배양 후, 세포질과 핵부분의 용해물 (lysates)를 준비하였다. 각각의 용해물의 단백질을 4~15% polyacrylamide gels (#456-1083, BioRad, USA) 에서 분리하고 PVDF membrane (#IPVH08130, MerkeMillipore, Germany) 에 옮긴다. 조골세포 분화와 관련된 단백질의 발현을 확인하기 위해, 1차 항체를 membrane 에 붙인 후, HRP가 conjugation 된 2차 항체를 사용하여 반응을 확인하였다. 각각의 단백질의 발현을 나타내는 membrane 내의 band 는 기질 (#34095, SuperSignal West Femto Maximum Sensitivity Substrate, Thermo Scientific, USA) 을 사용하여 반응시키고, 분석 기기 (LAS-3000 luminescent image analyzer; Fuji Photo Film Co., Ltd., Japan)로 발현세기를 측정하였다.
상기 실험 결과, 도 3과 같이, Dovitinib 처리에 의한 인산화 된 Smad1/5/8 의 인산화 및 핵 내부로의 이동 촉진 효과를 Western blot 으로 확인하였다.
BMP-2 (50 ng/ml) 는 인산화 된 C2C12 세포의 Smad1/5/8을 핵 내부로 이동시키는 것을 유도한다. Dovitinib 의 처리를 통해 인산화 된 Smad1/5/8 의 핵으로의 이동을 촉진시켰음을 확인하였다.
또한, Dovitinib 처리에 의한 인산화 된 ERK1/2, p38 의 발현 촉진 효과를 Western blot 으로 확인하였다(도 4)
BMP-2 와 도비티니브를 함께 처리함으로써 특히 ERK 와 p38 의 인산화를 증가시켰음을 확인하였다. 이는 조골세포의 분화를 유도하는 BMP-2 관련 신호전달기전을 도비티니브가 촉진시켰음을 알 수 있다.
상기에 본 발명의 화합물을 포함하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
제제예 1. 산제의 제조
도비티니브 ------------------------------------- 20 mg
유당 ------------------------------------------ 100 mg
탈크 ------------------------------------------- 10 mg
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
제제예 2. 정제의 제조
도비티니브 ------------------------------------- 10 mg
옥수수전분 ------------------------------------ 100 mg
유당 ------------------------------------------ 100 mg
스테아린산 마그네슘 ----------------------------- 2 mg
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
제제예 3. 캅셀제의 제조
도비티니브 ------------------------------------- 10 mg
결정성 셀룰로오스 ------------------------------- 3 mg
락토오스 ------------------------------------- 14.8 mg
마그네슘 스테아레이트 ------------------------- 0.2 mg
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
제제예 4. 주사제의 제
도비티니브 ------------------------------------- 10 mg
만니톨 ---------------------------------------- 180 mg
주사용 멸균 증류수 --------------------------- 2974 mg
Na2HPO4,12H2O ---------------------------------- 26 mg
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.
제제예 5. 액제의 제조
도비티니브 ------------------------------------- 20 mg
이성화당 ---------------------------------------- 10 g
만니톨 ------------------------------------------- 5 g
정제수 ------------------------------------------ 적량
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.
제제예 6. 건강 식품의 제조
도비티니브 ----------------------------------- 1000 ㎎
비타민 혼합물 ----------------------------------- 적량
비타민 A 아세테이트 ---------------------------- 70 ㎍
비타민 E -------------------------------------0 1.0 ㎎
비타민 B1 ------------------------------------ 0.13 ㎎
비타민 B2 ------------------------------------ 0.15 ㎎
비타민 B6 ------------------------------------- 0.5 ㎎
비타민 B12 ------------------------------------ 0.2 ㎍
비타민 C --------------------------------------- 10 ㎎
비오틴 ----------------------------------------- 10 ㎍
니코틴산아미드 -------------------------------- 1.7 ㎎
엽산 ------------------------------------------- 50 ㎍
판토텐산 칼슘 --------------------------------- 0.5 ㎎
무기질 혼합물 ----------------------------------- 적량
황산제1철 ------------------------------------ 1.75 ㎎
산화아연 ------------------------------------- 0.82 ㎎
탄산마그네슘 --------------------------------- 25.3 ㎎
제1인산칼륨 ------------------------------------ 15 ㎎
제2인산칼슘 ------------------------------------ 55 ㎎
구연산칼륨 ------------------------------------- 90 ㎎
탄산칼슘 -------------------------------------- 100 ㎎
염화마그네슘 --------------------------------- 24.8 ㎎
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
제제예 7. 건강 음료의 제조
도비티니브 ------------------------------------ 1000 ㎎
구연산 ---------------------------------------- 1000 ㎎
올리고당 ---------------------------------------- 100 g
매실농축액 ---------------------------------------- 2 g
타우린 -------------------------------------------- 1 g
정제수를 가하여 --------------------------- 전체 900 ㎖
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

Claims (6)

  1. 4-아미노-5-플루오로-3-[6-(4-메틸피페라진-1-일)-1H-벤즈이미다졸-2-일]-1H-퀴놀린-2-온 또는 그의 제약상 허용가능 염을 유효성분으로 포함하는 골다공증 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 골다공증질환은 제 1형 골다공증(폐경 후 골다공증), 제 2형 골다공증(노인성 골다공증), 특발성 골다공증, 내분비질환과 골다공증, 소화기계 질환과 골다공증, 악성질환과 골다공증, 음주와 골다공증, 흡연과 골다공증 및 약물과 골다공증으로 이루어진 군으로 선택된 하나 이상의 질환인 약학 조성물.
  3. 제 2항에 있어서,
    상기 골다공증질환은 제 1형 골다공증(폐경 후 골다공증)인 약학 조성물.
  4. 4-아미노-5-플루오로-3-[6-(4-메틸피페라진-1-일)-1H-벤즈이미다졸-2-일]-1H-퀴놀린-2-온 또는 그의 제약상 허용가능 염을 유효성분으로 포함하는 골다공증 질환의 예방 또는 개선을 위한 건강기능식품.
  5. 제 4항에 있어서,
    상기 건강기능식품은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 환제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 등의 약학 투여형태 또는 티백제, 침출차, 건강 음료 등의 형태인 건강기능식품.
  6. 4-아미노-5-플루오로-3-[6-(4-메틸피페라진-1-일)-1H-벤즈이미다졸-2-일]-1H-퀴놀린-2-온 또는 그의 제약상 허용가능 염을 유효성분으로 포함하는 골다공증 질환의 예방 또는 개선을 위한 건강보조식품.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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KR20220123622A (ko) * 2018-11-29 2022-09-08 경희대학교 산학협력단 도인 추출물을 포함하는 골절 예방, 개선 또는 치료용 조성물

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