KR20160018517A - 혈소판의 기능을 유지하기 위한 조성물 - Google Patents
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Abstract
하기 일반식 (I)：
[식 중, 고리 A, R1, R2, R3 및 R4 는, 명세서 중에 기재된 정의를 나타낸다.] 로 나타내는 피리돈 유도체 또는 그 염을 유효 성분으로 하는, 혈소판의 기능을 유지하기 위한 조성물.
[식 중, 고리 A, R1, R2, R3 및 R4 는, 명세서 중에 기재된 정의를 나타낸다.] 로 나타내는 피리돈 유도체 또는 그 염을 유효 성분으로 하는, 혈소판의 기능을 유지하기 위한 조성물.
Description
본 발명은, 피리돈 유도체를 이용한, 혈소판의 기능을 유지하기 위한 조성물, 혈소판을 조제하기 위한 방법, 혈소판을 포함하는 혈액 제제, 그리고 혈액 제제에 있어서의 혈소판의 기능을 유지하기 위한 방법에 관한 것이다.
혈소판은 혈액 응고 (지혈) 에 있어서 필수이기 때문에, 백혈병, 골수 이식, 항암 치료 등에 있어서의 수요가 매우 높다.
혈소판의 제조는, 헌혈 혈액으로부터 채취하는 방법, 제대혈 또는 골수 세포로부터 거핵구를 분화시키는 방법, 조혈 전구세포를 생체 외에 있어서 증식시키고, 이들 전구세포로부터 혈소판을 조제하는 방법 등이 시도되고 있다. 예를 들어, 본 발명자들에 의해, 인간 배성 간세포 (ES 세포) 로부터 조혈 전구세포를 내포하는 네트형 구조물을 조제하고, 이 네트형 구조물로부터 비교적 대량으로 또한 효율적으로 혈소판의 산생을 실시하는 방법 (특허문헌 1) 이나, 인공 다능성 간세포 (iPS 세포) 로부터 인비트로의 배양계에 의해, 성숙 거핵세포 및 혈소판을 효율적으로 조제하는 방법 (특허문헌 2) 등이 보고되어 있다.
혈소판과 세포외 매트릭스의 결합은, 혈액 응고 (지혈, 혈전 형성 등) 가 유도되는 데 있어서 중요한 과정이다. 이 과정은, 혈소판 수용체 GPIb (glycoprotein Ib, 당 단백질 Ib) 가, α 서브유닛 (GPIbα) 을 통해서 폰·빌레브란트 인자 (von Willebrand factor：VWF) 와 결합함으로써, 개시되는 것으로 생각되고 있다. 그러나, 37 ℃ 부근의 조건하에 있어서는, 메탈로프로테아제의 ADAM17 (a disintegrin and metallopeptidase domain 17) 이 GPIbα 의 세포외 영역을 쉐딩 (Shedding, 절단하여 제거) 해 버림으로써, GPIbα 와 VWF 의 회합이 저해되고, 혈소판의 혈액 응고 기능이 소실되어 버리는 것이 보고되어 있다 (비특허문헌 1 및 비특허문헌 2).
이 때문에 인비트로에 있어서 조제한 혈소판의 기능을 유지하기 위해서는, 적어도 ADAM17 의 활성을 억제할 필요가 있는 것이 예상된다. 실제, 본 발명자들에 의해, 메탈로프로테아제 활성을 직접 저해하는 저해제 (GM6001 등) 를 타이밍 좋게 첨가함으로써, 인비트로에 있어서 조제한 혈소판의 기능을 유지할 수 있는 것이 보고되어 있다 (특허문헌 3). 또, ADAM17 저해 활성을 갖는 N-하이드록시포름아미드 유도체에서도 혈소판 기능을 유지할 수 있는 것이 보고되어 있다 (특허문헌 4). 이 보고에서는, ADAM17 선택성을 높임으로써, 기능적 혈소판의 산생 수를 높이는 것을 분명히 하고 있다.
이와 같이, 혈소판 기능을 유지하는 방법은, 혈소판의 제조나 수혈용 혈소판 제제의 보존법으로서 중요하여, 본 발명자들에 의한 연구를 비롯하여, 연구가 이루어지고 있다.
Bergmeier 등, Circulation Research, 2004년, 95 권, 677 ∼ 683 페이지
Bergmeier 등, Blood, 2003년, 102 권, 4229 ∼ 4235
상기 서술한 바와 같이 혈소판 자체를 세포외에 있어서 조제하는 방법의 연구는 진전되고 있기는 하지만, 조제된 혈소판의 기능을 유지하는 작용을 갖는 새로운 화합물에 대한 수요는 여전히 계속 존재하고 있다.
따라서, 본 발명의 목적은, ADAM17 의 메탈로프로테아제 활성을 특이적으로 억제하고, GPIbα 의 쉐딩을 억제함으로써, 혈소판의 기능을 유지하는 것을 가능하게 하는 새로운 화합물을 특정하는 데에 있다. 추가적인 본 발명의 목적은, 당해 특정한 화합물을 이용하여, 혈소판의 기능을 유지하는 조성물을 제공하는 것, 효율적으로 혈소판을 산생하는 것, 및 혈액 제제의 품질 유지의 향상을 가능하게 하는 것에 있다.
본 발명자들은, 상기 목적을 달성하기 위해서, iPS 세포 등에서 유래하는 조혈 전구세포로부터 거핵구로의 분화 유도나, 그 거핵구로부터의 혈소판 산생의 배양에 있어서 발생하는 ADAM17 에 의한 GPIbα 의 쉐딩을 특이적으로 억제할 수 있는 화합물의 탐색을 실시하였다. 그 결과, 어느 특정한 구조를 갖는 화합물군이, ADAM17 에 대해 특이적인 저해 작용을 갖는 것, 나아가서는 당해 화합물을, 혈소판을 산생시키는 배양계나 인간 말초혈 유래의 혈소판에 첨가한 경우, GPIbα 의 쉐딩이 억제되고, 37 ℃ 부근의 온도 조건하에 있어서도 혈소판의 기능이 유지되는 것을 알아내었다. 즉, 당해 화합물의 이와 같은 작용으로부터, 당해 화합물 및 그 유연체가 효율적인 혈소판의 산생이나 혈소판을 포함하는 혈액 제제의 품질 유지의 향상 등에 있어서 매우 유용한 것을 알아내고, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
보다 상세하게는, 본 발명은 적어도 이하의 발명에 관한 것이다.
(1) 하기 일반식 (I)：
[화학식 1]
[식 중, 고리 A 는, 아릴, 헤테로아릴 또는 하기 일반식 (a) 로 나타내는 기：
[화학식 2]
(식 중, Z1 및 Z2 는, 각각 독립적으로 -CH2- 또는 -O-, n1 은, 1 ∼ 3 의 정수를 나타낸다.),
R1 은, 수소 원자, 할로겐 원자, 수산기, 시아노기, 니트로기, C1 ∼ C6 할로알킬기, 카르복실기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시기, 치환되어도 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시카르보닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로헥실알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 혹은 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기, 또는
-J1-X1-R5
[식 중, J1 은 단결합, 알킬렌, 알케닐렌 혹은 알키닐렌, X1 은 단결합, 산소 원자, 황 원자, SO, SO2, -CO-, -NR6-, -NR6SO2-, -SO2NR6-, -NR6CO-, -CONR6-, -NR6COO-, -OCONR6-, -NR6CONR7- 혹은 -NR6SO2NR7- (식 중, R6 및 R7 은 각각 독립적으로 수소 원자 혹은 C1 ∼ C6 알킬기를 나타낸다.),
R5 는 수소 원자, 트리플루오로메틸기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 하기 일반식 (b) 로 나타내는 기：
[화학식 3]
(식 중, n2 는, 1 ∼ 3, n3 은, 0 ∼ 3 의 정수를 나타낸다.),
치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 혹은 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기를 나타낸다.],
R2 는 수소 원자, 할로겐 원자, 시아노기, 니트로기, C1 ∼ C6 할로알킬기, 카르복실기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, C1 ∼ C6 알콕시기, C1 ∼ C6 알콕시카르보닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로헥실알킬알킬, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 또는 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기,
R3 은 수소 원자, 할로겐 원자 또는 C1 ∼ C6 알킬기,
R4 는 수소 원자, 할로겐 원자, 시아노기, C1 ∼ C6 할로알킬기, C1 ∼ C6 알콕시기, 하이드록시메틸기, C1 ∼ C6 알킬기 또는 C2 ∼ C6 알케닐기를 나타낸다.]
로 나타내는 피리돈 유도체 또는 그 염을 유효 성분으로 하는, 혈소판의 기능을 유지하기 위한 조성물.
(2) 상기 일반식 (I) 로 나타내는 화합물이,
(＋)-5-(3,4-디플루오로페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온
인, (1) 에 기재된 조성물.
(3) 혈소판의 기능을 유지하기 위한 시약 또는 혈소판을 포함하는 혈액 제제로의 첨가제인, (1) 또는 (2) 에 기재된 조성물.
(4) 거핵구로 분화할 수 있는 세포로부터 거핵구로 분화 유도시키고, 그 거핵구로부터 혈소판을 산생시키는 배양계에, 하기 일반식 (I)：
[화학식 4]
[식 중, 고리 A 는, 아릴, 헤테로아릴 또는 하기 일반식 (a) 로 나타내는 기：
[화학식 5]
(식 중, Z1 및 Z2 는, 각각 독립적으로 -CH2- 또는 -O-, n1 은, 1 ∼ 3 의 정수를 나타낸다.),
R1 은, 수소 원자, 할로겐 원자, 수산기, 시아노기, 니트로기, C1 ∼ C6 할로알킬기, 카르복실기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시카르보닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로헥실알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 혹은 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기, 또는
-J1-X1-R5
[식 중, J1 은 단결합, 알킬렌, 알케닐렌 혹은 알키닐렌, X1 은 단결합, 산소 원자, 황 원자, SO, SO2, -CO-, -NR6-, -NR6SO2-, -SO2NR6-, -NR6CO-, -CONR6-, -NR6COO-, -OCONR6-, -NR6CONR7- 혹은 -NR6SO2NR7- (식 중, R6 및 R7 은 각각 독립적으로 수소 원자 혹은 C1 ∼ C6 알킬기를 나타낸다.),
R5 는 수소 원자, 트리플루오로메틸기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 하기 일반식 (b) 로 나타내는 기：
[화학식 6]
(식 중, n2 는, 1 ∼ 3, n3 은, 0 ∼ 3 의 정수를 나타낸다.),
치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 혹은 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기를 나타낸다.],
R2 는 수소 원자, 할로겐 원자, 시아노기, 니트로기, C1 ∼ C6 할로알킬기, 카르복실기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, C1 ∼ C6 알콕시기, C1 ∼ C6 알콕시카르보닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로헥실알킬알킬, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 또는 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기,
R3 은 수소 원자, 할로겐 원자 또는 C1 ∼ C6 알킬기,
R4 는 수소 원자, 할로겐 원자, 시아노기, C1 ∼ C6 할로알킬기, C1 ∼ C6 알콕시기, 하이드록시메틸기, C1 ∼ C6 알킬기 또는 C2 ∼ C6 알케닐기를 나타낸다.]
로 나타내는 피리돈 유도체 또는 그 염을 첨가하는 것을 포함하는, 혈소판을 조제하기 위한 방법.
(5) 상기 일반식 (I) 로 나타내는 화합물이,
(＋)-5-(3,4-디플루오로페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온
인, (4) 에 기재된 방법.
(6) 상기 배양계에 있어서의 배양 온도가 35 ∼ 39 ℃ 인 것을 포함하는, (4) 또는 (5) 에 기재된 방법.
(7) 거핵구로 분화할 수 있는 세포로부터 거핵구로 분화 유도시키고, 그 거핵구로부터 혈소판을 산생시키는 배양계에, 하기 일반식 (I)：
[화학식 7]
[식 중, 고리 A 는, 아릴, 헤테로아릴 또는 하기 일반식 (a) 로 나타내는 기：
[화학식 8]
(식 중, Z1 및 Z2 는, 각각 독립적으로 -CH2- 또는 -O-, n1 은, 1 ∼ 3 의 정수를 나타낸다.),
R1 은, 수소 원자, 할로겐 원자, 수산기, 시아노기, 니트로기, C1 ∼ C6 할로알킬기, 카르복실기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시카르보닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로헥실알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 혹은 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기, 또는
-J1-X1-R5
[식 중, J1 은 단결합, 알킬렌, 알케닐렌 혹은 알키닐렌, X1 은 단결합, 산소 원자, 황 원자, SO, SO2, -CO-, -NR6-, -NR6SO2-, -SO2NR6-, -NR6CO-, -CONR6-, -NR6COO-, -OCONR6-, -NR6CONR7- 혹은 -NR6SO2NR7- (식 중, R6 및 R7 은 각각 독립적으로 수소 원자 혹은 C1 ∼ C6 알킬기를 나타낸다.),
R5 는 수소 원자, 트리플루오로메틸기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 하기 일반식 (b) 로 나타내는 기：
[화학식 9]
(식 중, n2 는, 1 ∼ 3, n3 은, 0 ∼ 3 의 정수를 나타낸다.),
치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 혹은 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기를 나타낸다.],
R2 는 수소 원자, 할로겐 원자, 시아노기, 니트로기, C1 ∼ C6 할로알킬기, 카르복실기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, C1 ∼ C6 알콕시기, C1 ∼ C6 알콕시카르보닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로헥실알킬알킬, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 또는 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기,
R3 은 수소 원자, 할로겐 원자 또는 C1 ∼ C6 알킬기,
R4 는 수소 원자, 할로겐 원자, 시아노기, C1 ∼ C6 할로알킬기, C1 ∼ C6 알콕시기, 하이드록시메틸기, C1 ∼ C6 알킬기 또는 C2 ∼ C6 알케닐기를 나타낸다.]
로 나타내는 피리돈 유도체 또는 그 염을 첨가한 배양물.
(8) 상기 일반식 (I) 로 나타내는 화합물이,
(＋)-5-(3,4-디플루오로페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온
인, (7) 에 기재된 배양물.
(9) 하기 일반식 (I)：
[화학식 10]
[식 중, 고리 A 는, 아릴, 헤테로아릴 또는 하기 일반식 (a) 로 나타내는 기：
[화학식 11]
(식 중, Z1 및 Z2 는, 각각 독립적으로 -CH2- 또는 -O-, n1 은, 1 ∼ 3 의 정수를 나타낸다.),
R1 은, 수소 원자, 할로겐 원자, 수산기, 시아노기, 니트로기, C1 ∼ C6 할로알킬기, 카르복실기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시카르보닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로헥실알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 혹은 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기, 또는
-J1-X1-R5
[식 중, J1 은 단결합, 알킬렌, 알케닐렌 혹은 알키닐렌, X1 은 단결합, 산소 원자, 황 원자, SO, SO2, -CO-, -NR6-, -NR6SO2-, -SO2NR6-, -NR6CO-, -CONR6-, -NR6COO-, -OCONR6-, -NR6CONR7- 혹은 -NR6SO2NR7- (식 중, R6 및 R7 은 각각 독립적으로 수소 원자 혹은 C1 ∼ C6 알킬기를 나타낸다.),
R5 는 수소 원자, 트리플루오로메틸기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 하기 일반식 (b) 로 나타내는 기：
[화학식 12]
(식 중, n2 는, 1 ∼ 3, n3 은, 0 ∼ 3 의 정수를 나타낸다.),
치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 혹은 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기를 나타낸다.],
R2 는 수소 원자, 할로겐 원자, 시아노기, 니트로기, C1 ∼ C6 할로알킬기, 카르복실기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, C1 ∼ C6 알콕시기, C1 ∼ C6 알콕시카르보닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로헥실알킬알킬, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 또는 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기,
R3 은 수소 원자, 할로겐 원자 또는 C1 ∼ C6 알킬기,
R4 는 수소 원자, 할로겐 원자, 시아노기, C1 ∼ C6 할로알킬기, C1 ∼ C6 알콕시기, 하이드록시메틸기, C1 ∼ C6 알킬기 또는 C2 ∼ C6 알케닐기를 나타낸다.]
로 나타내는 피리돈 유도체 또는 그 염이 첨가된, 혈소판을 포함하는 혈액 제제.
(10) 상기 일반식 (I) 로 나타내는 화합물이,
(＋)-5-(3,4-디플루오로페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온
인, (9) 에 기재된 혈액 제제.
(11) 하기 일반식 (I)：
[화학식 13]
[식 중, 고리 A 는, 아릴, 헤테로아릴 또는 하기 일반식 (a) 로 나타내는 기：
[화학식 14]
(식 중, Z1 및 Z2 는, 각각 독립적으로 -CH2- 또는 -O-, n1 은, 1 ∼ 3 의 정수를 나타낸다.),
R1 은, 수소 원자, 할로겐 원자, 수산기, 시아노기, 니트로기, C1 ∼ C6 할로알킬기, 카르복실기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시카르보닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로헥실알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 혹은 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기, 또는
-J1-X1-R5
[식 중, J1 은 단결합, 알킬렌, 알케닐렌 혹은 알키닐렌, X1 은 단결합, 산소 원자, 황 원자, SO, SO2, -CO-, -NR6-, -NR6SO2-, -SO2NR6-, -NR6CO-, -CONR6-, -NR6COO-, -OCONR6-, -NR6CONR7- 혹은 -NR6SO2NR7- (식 중, R6 및 R7 은 각각 독립적으로 수소 원자 혹은 C1 ∼ C6 알킬기를 나타낸다.),
R5 는 수소 원자, 트리플루오로메틸기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 하기 일반식 (b) 로 나타내는 기：
[화학식 15]
(식 중, n2 는, 1 ∼ 3, n3 은, 0 ∼ 3 의 정수를 나타낸다.),
치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 혹은 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기를 나타낸다.],
R2 는 수소 원자, 할로겐 원자, 시아노기, 니트로기, C1 ∼ C6 할로알킬기, 카르복실기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, C1 ∼ C6 알콕시기, C1 ∼ C6 알콕시카르보닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로헥실알킬알킬, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 또는 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기,
R3 은 수소 원자, 할로겐 원자 또는 C1 ∼ C6 알킬기,
R4 는 수소 원자, 할로겐 원자, 시아노기, C1 ∼ C6 할로알킬기, C1 ∼ C6 알콕시기, 하이드록시메틸기, C1 ∼ C6 알킬기 또는 C2 ∼ C6 알케닐기를 나타낸다.]
로 나타내는 피리돈 유도체 또는 그 염을, 혈소판을 포함하는 혈액 제제에 첨가하는 것을 포함하는, 혈액 제제에 있어서의 혈소판의 기능을 유지하기 위한 방법.
(12) 상기 일반식 (I) 로 나타내는 화합물이,
(＋)-5-(3,4-디플루오로페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온
인, (11) 에 기재된 방법.
본 발명의 피리돈 유도체에 의하면, ADAM17 의 메탈로프로테아제 활성을 특이적으로 억제하고, GPIbα 의 쉐딩을 억제함으로써, 37 ℃ 부근의 온도 조건하에 있어서도 혈소판의 기능을 유지하는 것이 가능하다. 따라서, 당해 유도체에 의하면, 인비트로에 있어서, 기능적으로 안정된 혈소판을 생산하는 것이 가능하고, 또, 혈소판을 포함하는 혈액 제제의 품질의 안정화가 가능해진다.
도 1 은, ＜프로토콜 1＞ 은, iPS 세포 유래의 조혈 전구세포로부터 거핵구/혈소판으로의 유도하는 과정에 있어서, 본 발명에 관련된 화합물 (S-108470) 등을 첨가한 시기를 나타낸다. ＜프로토콜 2＞ 는, 인간의 말초혈로부터 세정 혈소판을 조제하고, 본 발명에 관련된 화합물 (S-108470) 등을 첨가한 것을 나타낸다.
도 2 는, S-108470 의 iPS 세포 유래 혈소판의 산생 수에 미치는 영향을 나타내는 그래프이다. iPS 세포로부터 혈소판을 유도하고, 표면 마커 CD41a(＋) CD42a(＋) 세포를 계수하였다. 7 회 실험을 반복하고, 그 평균＋표준 편차를 나타낸다.
도 3 은, S-108470 의 iPS 세포 유래 혈소판에 대한 기능 유지 효과를 나타내는 그래프이다. 세로축은, CD41a(＋) CD42a(＋) 혈소판에 있어서의 CD42b (GPIbα)(＋) 세포의 비율을 나타낸다. 도 중, ** 는, 매체 대조 (DMSO) 에 비해 p ＜ 0.01 인 것을 나타내고, S-108470 은, CD42b(＋) 세포의 비율을 증가시켰다.
도 4 는, S-108470 의 농도 의존적인 말초혈 유래 혈소판에 대한 기능 유지 효과를 나타내는 그래프이다. 세로축은, CD41a(＋) 혈소판에 있어서의 CD42b (GPIbα)(＋) 세포수의 비율을 나타낸다. 신선 혈소판을 CCCP 처리하면, 혈소판의 CD42b (GPIbα) 는 쉐딩되고, 매체 대조 (DMSO) 군과 같이 CD42b (GPIbα)(＋) 세포수의 비율은 저하된다. 이것을 S-108470 은 농도 의존적으로 억제하였다.
도 2 는, S-108470 의 iPS 세포 유래 혈소판의 산생 수에 미치는 영향을 나타내는 그래프이다. iPS 세포로부터 혈소판을 유도하고, 표면 마커 CD41a(＋) CD42a(＋) 세포를 계수하였다. 7 회 실험을 반복하고, 그 평균＋표준 편차를 나타낸다.
도 3 은, S-108470 의 iPS 세포 유래 혈소판에 대한 기능 유지 효과를 나타내는 그래프이다. 세로축은, CD41a(＋) CD42a(＋) 혈소판에 있어서의 CD42b (GPIbα)(＋) 세포의 비율을 나타낸다. 도 중, ** 는, 매체 대조 (DMSO) 에 비해 p ＜ 0.01 인 것을 나타내고, S-108470 은, CD42b(＋) 세포의 비율을 증가시켰다.
도 4 는, S-108470 의 농도 의존적인 말초혈 유래 혈소판에 대한 기능 유지 효과를 나타내는 그래프이다. 세로축은, CD41a(＋) 혈소판에 있어서의 CD42b (GPIbα)(＋) 세포수의 비율을 나타낸다. 신선 혈소판을 CCCP 처리하면, 혈소판의 CD42b (GPIbα) 는 쉐딩되고, 매체 대조 (DMSO) 군과 같이 CD42b (GPIbα)(＋) 세포수의 비율은 저하된다. 이것을 S-108470 은 농도 의존적으로 억제하였다.
본 발명의 조성물은,
하기 일반식 (I)：
[화학식 16]
[식 중, 고리 A 는, 아릴, 헤테로아릴 또는 하기 일반식 (a) 로 나타내는 기：
[화학식 17]
(식 중, Z1 및 Z2 는, 각각 독립적으로 -CH2- 또는 -O-, n1 은, 1 ∼ 3 의 정수를 나타낸다.),
R1 은, 수소 원자, 할로겐 원자, 수산기, 시아노기, 니트로기, C1 ∼ C6 할로알킬기, 카르복실기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시카르보닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로헥실알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 혹은 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기, 또는
-J1-X1-R5
[식 중, J1 은 단결합, 알킬렌, 알케닐렌 혹은 알키닐렌, X1 은 단결합, 산소 원자, 황 원자, SO, SO2, -CO-, -NR6-, -NR6SO2-, -SO2NR6-, -NR6CO-, -CONR6-, -NR6COO-, -OCONR6-, -NR6CONR7- 혹은 -NR6SO2NR7- (식 중, R6 및 R7 은 각각 독립적으로 수소 원자 혹은 C1 ∼ C6 알킬기를 나타낸다.),
R5 는 수소 원자, 트리플루오로메틸기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 하기 일반식 (b) 로 나타내는 기：
[화학식 18]
(식 중, n2 는, 1 ∼ 3, n3 은, 0 ∼ 3 의 정수를 나타낸다.),
치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 혹은 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기를 나타낸다.],
R2 는 수소 원자, 할로겐 원자, 시아노기, 니트로기, C1 ∼ C6 할로알킬기, 카르복실기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, C1 ∼ C6 알콕시기, C1 ∼ C6 알콕시카르보닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로헥실알킬알킬, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 또는 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기,
R3 은 수소 원자, 할로겐 원자 또는 C1 ∼ C6 알킬기,
R4 는 수소 원자, 할로겐 원자, 시아노기, C1 ∼ C6 할로알킬기, C1 ∼ C6 알콕시기, 하이드록시메틸기, C1 ∼ C6 알킬기 또는 C2 ∼ C6 알케닐기를 나타낸다.]
로 나타내는 피리돈 유도체 또는 그 염을 유효 성분으로 하는, 혈소판의 기능을 유지하기 위한 조성물이다.
상기 일반식 (I) 에 있어서의 각 치환기에 대하여 설명하는 데, 동 (同) 각 치환의 정의에 있어서 사용되는 용어의 의미는 이하와 같다.
「할로겐 원자」 란, 불소 원자, 염소 원자, 브롬 원자 또는 요오드 원자이다.
「C1 ∼ C6 알킬기」 란, 직사슬 또는 분기형의 탄소 원자수 1 ∼ 6 의 알킬기를 의미하며, 구체예로는, 메틸기, 에틸기, n-프로필기, 이소프로필기, n-부틸기, 이소부틸기, tert-부틸기, sec-부틸기, n-펜틸기, tert-펜틸기, 3-메틸부틸기 (이소펜틸기), 네오펜틸기, n-헥실기 등을 들 수 있다.
「C1 ∼ C6 할로알킬기」 란, 상기 C1 ∼ C6 알킬기로 1 개 또는 그 이상의 상기 할로겐 원자가 치환 가능한 임의의 위치에서 치환된 것을 의미하며, 구체예로는, 트리플루오로메틸기, 펜타플루오로에틸기, 트리클로로메틸기, 3-클로로프로필기, 4-브로모부틸기, 1,1,1,3,3,3-헥사플루오로프로판-2-일기 등을 들 수 있다.
「C1 ∼ C6 알콕시기」 란, 알킬 부분이, 상기 C1 ∼ C6 알킬기와 동일한 의미인 알콕시기를 의미하며, 예를 들어, 메톡시기, 에톡시기, n-프로폭시기, 이소프로폭시기, n-부톡시기, 이소부톡시기, tert-부톡시기, sec-부톡시기, n-펜틸옥시기, tert-아밀옥시기, 3-메틸부톡시기, 네오펜틸옥시기, n-헥실옥시기 등의 직사슬 또는 분기형의 알콕시기를 들 수 있다.
「C1 ∼ C6 알콕시카르보닐기」 란, 알킬 부분이, 상기 C1 ∼ C6 알킬기인 알콕시카르보닐기를 의미하며, 예를 들어, 메톡시카르보닐기, 에톡시카르보닐기, n-프로폭시카르보닐기, 이소프로폭시카르보닐기, n-부톡시카르보닐기, 이소부톡시카르보닐기, tert-부톡시카르보닐기, sec-부톡시카르보닐기, n-펜틸옥시카르보닐기, tert-아밀옥시카르보닐기, 3-메틸부톡시카르보닐기, 네오펜틸옥시카르보닐기, n-헥실옥시카르보닐기 등의 직사슬 또는 분기형의 C1 ∼ C6 의 알콕시카르보닐기를 들 수 있다.
「시클로알킬기」 란, 탄소 원자수 3 ∼ 7 의 단고리의 포화 탄소 고리를 나타내고, 예를 들어 시클로프로필기, 시클로부틸기, 시클로펜틸기, 시클로헥실기, 시클로헵틸기 등을 들 수 있다.
「탄소 고리」 란, 3 ∼ 10 원자의 단고리형 또는 2 고리형의 탄소 원자로 이루어지는 고리를 나타내고, 구체예로는, 시클로펜텐 고리, 시클로헥센 고리, 벤젠 고리 등을 들 수 있지만, 이들에 한정되지 않는다.
또한, 본 명세서에 있어서 탄소 고리란, 상기 「탄소 고리」 를 의미하는 것이다.
「시클로알킬알킬기」 란, 상기 C1 ∼ C6 알킬기로 상기 시클로알킬기가 치환한 것으로, 이들은 치환 가능한 모든 위치에서 결합할 수 있다. 예를 들어, 시클로프로필메틸기, 시클로부틸메틸기, 시클로펜틸메틸기, 시클로펜틸에틸기 (예를 들어, 2-시클로펜틸에틸기), 시클로헥실메틸기, 시클로헥실프로필기 (예를 들어, 3-시클로헥실프로필기) 등을 들 수 있다. 이들의 시클로알킬 부분에는, 임의의 치환기를 갖고 있어도 된다.
「헤테로시클로알킬기」 란, 포화의 단고리의 복소 고리를 나타낸다. 예를 들어, 피롤리디닐기 (예를 들어, 1-피롤리디닐기, 2-피롤리디닐기, 3-피롤리디닐기), 피페리디닐기 (예를 들어, 1-피페리디닐기, 4-피페리디닐기), 호모피페리디닐기 (예를 들어, 1-호모피페리디닐기, 4-호모피페리디닐기), 테트라하이드로푸라닐기 (예를 들어, 2-테트라하이드로푸라닐기, 3-테트라하이드로푸라닐기), 테트라하이드로피라닐기 (예를 들어, 4-테트라하이드로피라닐기), 피페라지닐기 (예를 들어, 1-피페라지닐기), 호모피페라지닐기 (1-호모피페라지닐기) 등을 들 수 있다.
「복소 고리」 란, 탄소 원자 및 N, O 또는 S 에서 선택되는 1 ∼ 3 개의 헤테로원자로 이루어지는, 3 ∼ 10 원자의 단고리형 또는 2 고리형의 고리를 나타내고, N 및 S 는 산화되어 있어도 되고, N 은 4 급화되어 있어도 되고, 치환되어 있어도 되고, 탄소 고리 또는 다른 복소 고리와 축합하고 있어도 되며, 치환 가능한 모든 위치에서 결합할 수 있다. 구체예로는, 디옥솔 고리, 옥사티올 고리, 디하이드로옥사티인 고리, 디하이드로디옥신 고리, 디하이드로푸란 고리, 디하이드로티오펜 고리, 디하이드로피롤 고리, 푸란 고리, 티오펜 고리, 피롤 고리, 옥사졸 고리, 티아졸 고리, 피리딘 고리 등을 들 수 있지만, 이들에 한정되지 않는다.
또한, 본 명세서에 있어서 복소 고리라고 할 때는 상기 「복소 고리」 를 의미하는 것이다.
「헤테로시클로알킬알킬기」 란, 상기 C1 ∼ C6 알킬기로 상기 헤테로시클로알킬기가 치환한 것으로, 이들은 치환 가능한 모든 위치에서 결합할 수 있다. 예를 들어, 피롤리디닐메틸기 (예를 들어, 1-피롤리디닐메틸기, 2-피롤리디닐메틸기, 3-피롤리디닐메틸기), 피페리디닐메틸기 (예를 들어, 1-피페리디닐메틸기, 4-피페리디닐메틸기), 피페리디닐에틸기 (예를 들어, 1-피페리디닐-2-에틸기, 4-피페리디닐-2-에틸기), 호모피페리디닐메틸기 (예를 들어, 1-호모피페리디닐메틸기, 4-호모피페리디닐메틸기), 테트라하이드로푸라닐메틸기 (예를 들어, 2-테트라하이드로푸라닐메틸기, 3-테트라하이드로푸라닐메틸기), 테트라하이드로피라닐메틸기 (예를 들어, 4-테트라하이드로피라닐메틸기), 피페라지닐메틸기 (예를 들어, 1-피페라지닐메틸기), 호모피페라지닐메틸기 (1-호모피페라지닐메틸기) 등을 들 수 있다.
「아릴기」 란, 방향족 탄소 고리를 나타내고, 예를 들어, 페닐기, 나프틸기 등을 들 수 있다.
「아르알킬기」 란, 상기 C1 ∼ C6 알킬기로 상기 아릴기가 치환한 것으로, 이들은 치환 가능한 모든 위치에서 결합할 수 있다. 예를 들어, 벤질기, 페네틸기, 1-페닐에틸기, 1-페닐프로필기, 3-페닐프로필기, α-나프틸메틸기, β-나프틸메틸기, 1-(α-나프틸)에틸기, 2-(α-나프틸)에틸기 등을 들 수 있다. 이들의 아릴 부분에는 임의의 치환기를 갖고 있어도 된다.
「헤테로아릴기」 란, 5 ∼ 10 원자의 단고리형 또는 2 고리형의 방향족 복소 고리를 나타낸다. 예를 들어, 피롤릴기 (예를 들어, 2-피롤릴기), 푸릴기 (예를 들어, 3-푸릴기), 티에닐기 (예를 들어, 2-티에닐기), 이미다졸릴기 (예를 들어, 4-이미다졸릴기), 피라졸릴기 (예를 들어, 3-피라졸릴기), 옥사졸릴기 (예를 들어, 2-옥사졸릴기), 이소옥사졸릴기 (예를 들어, 3-이소옥사졸릴기), 티아졸릴기 (예를 들어, 2-티아졸릴기), 이소티아졸릴기 (예를 들어, 3-이소티아졸릴기), 피리딜기 (예를 들어, 2-피리딜기, 3-피리딜기, 4-피리딜기), 피리다지닐기 (예를 들어, 3-피리다지닐기), 피리미딜기 (예를 들어, 4-피리미딜기), 피라지닐기 (예를 들어, 2-피라지닐기), 인돌릴기 (예를 들어, 2-인돌릴기, 3-인돌릴기, 4-인돌릴기), 벤조푸릴기 (예를 들어, 2-벤조푸릴기, 5-벤조푸릴기), 벤조티에닐기 (예를 들어, 2-벤조티에닐기, 5-벤조티에닐기), 벤조이미다졸릴기 (예를 들어, 2-벤조이미다졸릴기), 인다졸릴기 (예를 들어, 4-인다졸릴기), 벤조옥사졸릴기 (예를 들어, 4-벤조옥사졸릴기), 벤조티아졸릴기 (예를 들어, 4-벤조티아졸릴기), 벤조이소옥사졸릴기 (예를 들어, 4-벤조이소옥사졸릴기), 벤조이소티아졸릴기 (예를 들어, 4-벤조이소티아졸릴기), 퀴놀릴기 (예를 들어, 2-퀴놀릴기, 4-퀴놀릴기, 5-퀴놀릴기, 8-퀴놀릴기), 이소퀴놀릴기 (예를 들어, 1-이소퀴놀릴기, 4-이소퀴놀릴기, 5-이소퀴놀릴기, 8-이소퀴놀릴기), 신놀리닐기 (예를 들어, 4-신놀리닐기, 5-신놀리닐기, 8-신놀리닐기), 퀴나졸리닐기 (예를 들어, 4-퀴나졸리닐기, 5-퀴나졸리닐기, 8-퀴나졸리닐기), 테트라졸릴기 (예를 들어, 2H-테트라졸-5-일기) 등을 들 수 있다. 이들 헤테로아릴기에는 임의의 치환기를 갖고 있어도 된다.
「헤테로아릴알킬기」 란, 상기 C1 ∼ C6 알킬기로 상기 헤테로아릴기가 치환한 것으로, 이들은 치환 가능한 모든 위치에서 결합할 수 있다. 예를 들어, 피리딜메틸기 (예를 들어, 2-피리딜메틸기), 옥사졸릴에틸기 (예를 들어, 2-옥사졸릴-2-에틸기), 티아졸릴메틸기 (예를 들어, 4-티아졸릴메틸기), 인돌릴메틸기 (예를 들어, 2-인돌릴메틸기, 3-인돌릴메틸기, 4-인돌릴메틸기), 벤조푸릴메틸기 (예를 들어, 3-벤조푸릴메틸기, 4-벤조푸릴메틸기), 벤조티에닐메틸기 (예를 들어, 3-벤조티에닐메틸기, 4-벤조티에닐메틸기), 벤조티아졸릴메틸기 (예를 들어, 2-벤조티아졸릴메틸기), 퀴놀릴메틸기 (예를 들어, 2-퀴놀릴메틸기, 4-퀴놀릴메틸기, 5-퀴놀릴메틸기, 8-퀴놀릴메틸기), 이소퀴놀릴메틸기 (예를 들어, 1-이소퀴놀릴메틸기, 4-이소퀴놀릴메틸기, 5-이소퀴놀릴메틸기, 8-이소퀴놀릴메틸기), 신놀리닐메틸기 (예를 들어, 4-신놀리닐메틸기, 5-신놀리닐메틸기, 8-신놀리닐메틸기), 퀴나졸리닐메틸기 (예를 들어, 4-퀴나졸리닐메틸기, 5-퀴나졸리닐메틸기, 8-퀴나졸리닐메틸기) 등을 들 수 있다. 이들 헤테로아릴기에는 임의의 치환기를 갖고 있어도 된다.
「C2 ∼ C6 알케닐기」 란, 1 개 또는 그 이상의 이중 결합을 갖는 직사슬 또는 분기형의 탄소 원자수 2 ∼ 6 의 알케닐기를 의미하며, 구체예로는, 비닐기, 1-프로페닐기, 이소프로페닐기, 1-부테닐기, 이소부테닐기, 1,3-부타디에닐기, 2-메틸-1-프로페닐기, 1-메틸-1-프로페닐기, 1-펜테닐기, 1-헥세닐기 등을 들 수 있다.
「알케닐알킬기」 란, 상기 C1 ∼ C6 알킬기로 상기 C2 ∼ C6 알케닐기가 치환한 것으로, 이들은 치환 가능한 모든 위치에서 결합할 수 있다. 예를 들어 알릴기, 2-펜테닐기, 4-펜테닐기, 프레닐기, 2-헥세닐기, 5-헥세닐기, 2-메틸알릴기, 부트-3-엔-1-일기, 2-메틸부트-3-엔-1-일기 등을 들 수 있다.
「헤테로시클로알케닐기」 란, 고리 내의 임의의 위치에 이중 결합을 1 개 갖는 단고리의 복소 고리를 나타낸다. 예를 들어, 디하이드로푸릴기 (예를 들어, 2,5-디하이드로푸란-3-일기), 디하이드로피라닐기 (예를 들어, 5,6-디하이드로-2H-피란-4-일기), 디하이드로피롤릴기 (예를 들어, 3-피롤린-3-일기), 테트라하이드로피리딜기 (예를 들어, 1,2,3,6-테트라하이드로피리딘-4-일기), 디하이드로티에닐기 (예를 들어, 2,5-디하이드로티오펜-3-일기), 디하이드로티오피라닐기 (예를 들어, 5,6-디하이드로-2H-티오피란-4-일기), 데하이드로호모피페리디닐기 (예를 들어, 4,5-데하이드로호모피페리딘-4-일기) 등을 들 수 있다.
「헤테로시클로알케닐알킬기」 란, 상기 C1 ∼ C6 알킬기로 상기 헤테로시클로알케닐기가 치환한 것으로, 이들은 치환 가능한 모든 위치에서 결합할 수 있다. 예를 들어, 디하이드로푸릴메틸기 (예를 들어, 2,5-디하이드로푸란-3-일메틸기), 디하이드로피라닐메틸기 (예를 들어, 5,6-디하이드로-2H-피란-4-일메틸기), 디하이드로피롤릴메틸기 (예를 들어, 3-피롤린-3-일메틸기), 테트라하이드로피리딜메틸기 (예를 들어, 1,2,3,6-테트라하이드로피리딘-4-일메틸기), 테트라하이드로피리딜에틸기 (예를 들어, 1,2,3,6-테트라하이드로피리딘-4-일-2-에틸기), 디하이드로티에닐메틸기 (예를 들어, 2,5-디하이드로티오펜-3-일메틸기), 디하이드로티오피라닐메틸기 (예를 들어, 5,6-디하이드로-2H-티오피란-4-일메틸기), 데하이드로호모피페리디닐메틸기 (예를 들어, 4,5-데하이드로호모피페리딘-4-일메틸기) 등을 들 수 있다.
「C2 ∼ C6 알키닐기」 란, 1 개 또는 그 이상의 삼중 결합을 갖는 직사슬 또는 분기형의 탄소 원자수 2 ∼ 6 의 알키닐기를 의미하며, 구체예로는, 에티닐기, 1-프로피닐기, 1-부티닐기, 3-메틸-1-부티닐기, 1,3-부타디이닐기, 1-펜티닐기, 3-메틸-1-펜티닐기, 1-헥시닐기 등을 들 수 있다.
「알키닐알킬기」 란, 상기 C1 ∼ C6 알킬기로 상기 C2 ∼ C6 알키닐기가 치환한 것으로, 이들은 치환 가능한 모든 위치에서 결합할 수 있다. 예를 들어, 2-프로피닐기, 2-부티닐기, 2-펜티닐기, 4-메틸-2-펜티닐기 등을 들 수 있다.
「알킬렌」 이란, 직사슬 또는 분기형의 탄소 원자수 1 ∼ 6 의 알킬렌기를 의미하며, 구체예로는, -CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2-, -CH2CH(CH3)CH2- 등을 들 수 있다.
「알케닐렌」 이란, 1 개 또는 그 이상의 이중 결합을 갖는 직사슬 또는 분기형의 탄소 원자수 2 ∼ 6 의 알케닐렌기를 의미하며, 구체예로는, -CH=CH-, -CH=CH-CH2-, -CH=CH-CH2-CH2-, -CH=C(CH3)-CH2- 등을 들 수 있다.
「알키닐렌」 이란, 1 개 또는 그 이상의 삼중 결합을 갖는 직사슬 또는 분기형의 탄소 원자수 2 ∼ 6 의 알키닐렌기를 의미하며, 구체예로는,
[화학식 19]
등을 들 수 있다.
「치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기」, 「치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기」, 「치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기」, 「치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기」, 「치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기」, 「치환되어 있어도 되는 시클로알킬기」, 「치환되어 있어도 되는 시클로알킬알킬기」, 「치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기」, 「치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기」, 「치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐기」 및 「치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐알킬기」 에 있어서의 치환기란, 수산기, 할로겐 원자, 시아노기, 니트로기, 트리플루오로메틸기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시기, 시클로알킬기, 카르복실기, C1 ∼ C6 알콕시카르보닐기, -NR8R9 {식 중, R8 및 R9 는, 각각 독립적으로 수소 원자, C1 ∼ C6 알킬기, 포르밀기, 치환되어 있어도 되는 아실기, -CONR10R11 [식 중, R10 및 R11 은, 각각 독립적으로 수소 원자, C1 ∼ C6 알킬기, R12 로 치환되어 있어도 되는 아릴기 (R12 는, C1 ∼ C6 알킬기, C1 ∼ C6 알콕시기 또는 할로겐 원자이다), R12 로 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기 (R12 는 상기와 동일), 또는 R10 및 R11가 결합하고 있는 질소 원자와 하나가 되어 함질소 복소 고리를 형성하고 있다], 시클로알킬기, 또는 R8 및 R9 가 결합하고 있는 질소 원자와 하나가 되어 함질소 복소 고리를 형성하고 있다}, 또는 -OCOR13 [식 중, R13 은, C1 ∼ C6 알킬기, R12 로 치환되어 있어도 되는 아릴기 (R12 는 상기와 동일), R12 로 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기 (R12 는 상기와 동일), 또는 -NR14R15 (식 중, R14 및 R15 는, 각각 독립적으로 수소 원자, C1 ∼ C6 알킬기, R12 로 치환되어 있어도 되는 아릴기 (R12 는 상기와 동일), R12 로 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기 (R12 는 상기와 동일), 또는 R14 및 R15 가 결합하고 있는 질소 원자와 하나가 되어 함질소 복소 고리를 형성하고 있다)] 등을 들 수 있다. 이들은, 모든 가능한 위치에서 1 개 이상 치환할 수 있다.
「아실기」 란, 알킬 부분이, 상기 C1 ∼ C6 알킬기와 동일한 의미인 알킬카르보닐기를 의미하며, 예를 들어, 아세틸기, 프로피오닐기, 부티릴기, 이소부티릴기, 발레릴기, 이소발레릴기, 피발로일기 등의 직사슬 또는 분기형의 알킬카르보닐기를 들 수 있다.
「함질소 복소 고리」 란, 적어도 1 개의 N 을 포함하는, 포화 또는 불포화의 복소 고리를 나타낸다. 구체예로는, 아제티딘 고리, 피롤리딘 고리, 피페리딘 고리, 티아졸리딘 고리, 모르폴린 고리, 티오모르폴린 고리, 디하이드로피롤 고리 등을 들 수 있지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 치환기의 예로는, C1 ∼ C6 알킬기, C1 ∼ C6 알콕시기, 수산기, 니트로기, 시아노기, 트리플루오로메틸기, 하이드록시메틸기 등을 들 수 있다.
「치환되어 있어도 되는 아릴기」, 「치환되어 있어도 되는 아르알킬기」, 「치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기」 및 「치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기」 에 있어서의 방향 고리 상의 치환기란, 수산기, 할로겐 원자, 시아노기, 니트로기, 트리플루오로메틸기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시기, 시클로알킬기, 카르복실기, C1 ∼ C6 알콕시카르보닐기, -NR14R15 (식 중, R14 및 R15 는 상기와 동일), 및 -OCOR13 (식 중, R13 은 상기와 동일하다) 등을 들 수 있다. 이들은, 모든 가능한 위치에서 1 개 이상 치환할 수 있다.
「치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시기」, 「치환되어 있어도 되는 아실기」 및 「치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시카르보닐기」 에 있어서의 치환기란, 수산기, 할로겐 원자, 시아노기, 니트로기 및 C1 ∼ C6 알콕시기 등을 들 수 있다. 이들은, 모든 가능한 위치에서 1 개 이상 치환할 수 있다.
일반식 (I) 로 나타내는 화합물은, 적어도 1 개의 부제 탄소가 존재하지만, 그 라세미체 (즉, 개개의 광학 활성체의 혼합물), 디아스테레오 이성체 또는 개개의 광학 활성체 중 어느 형태여도 된다. 또 기하 이성체가 존재하는 경우에는, (E) 체, (Z) 체 또는 그 혼합물 중 어느 형태여도 된다.
또, 일반식 (I) 로 나타내는 본 발명의 피리돈 유도체의 염으로는, 약리학적으로 허용되는 염이면 특별히 한정되지 않고, 예를 들어, 무기 염기와의 염, 유기 염기와의 염 등을 들 수 있다. 무기 염기와의 염의 예로는, 리튬염, 나트륨염, 칼륨염, 마그네슘염, 칼슘염, 바륨염 등의 알칼리 금속염 및 알칼리 토금속염 등을 들 수 있다. 유기 염기와의 염의 예로는, 트리에틸아민염, 피리딘염, 에탄올아민염, 시클로헥실아민염, 디시클로헥실아민염, 디벤질에탄올아민염, 벤질아민염, 2-메틸벤질아민염, α-메틸벤질아민염, 브루신염, 키니네염, 퀴니딘염, 신코닌염, 신코니딘염, 아르기닌염 등을 들 수 있다.
다음에, 일반식 (I) 로 나타내는 화합물의 제조 방법에 대하여 서술하는데, 동 (同) 화합물은, 다양한 방법으로 제조할 수 있는 바, 예를 들어 이하에 나타내는 제조 방법에 의해 효율적으로 제조할 수 있다.
이하의 제조 방법에 있어서 사용되는 「보호기」 의 구체예로는, 수산기 또는 카르복실기의 보호기로서, tert-부틸기, 벤질기, o-메틸벤질기, p-니트로벤질기, p-메톡시벤질기, o-클로로벤질기, 2,4-디클로로벤질기, p-브로모벤질기, 알릴기, tert-부톡시카르보닐기, 벤질옥시카르보닐기, o-메틸벤질옥시카르보닐기, p-니트로벤질옥시카르보닐기, p-메톡시벤질옥시카르보닐기, o-클로로벤질옥시카르보닐기, 2,4-디클로로벤질옥시카르보닐기, p-브로모벤질옥시카르보닐기, 알릴옥시카르보닐기, 메톡시메틸기, 테트라하이드로피라닐기 등을 들 수 있으며, 카르보닐기의 보호기로서, 예를 들어 에탄디올, 프로판디올, 메르캅토에탄올, 메르캅토프로판올, 에탄디티올, 프로판디티올 등에서 유도되는 보호기를 들 수 있다.
일반식 (I) 로 나타내는 화합물은, 하기의 스킴 1 (공정 1 ∼ 2) 에 나타내는 방법에 의해 제조할 수 있다.
[화학식 20]
(식 중, A, R1, R2, R3 및 R4 는 상기와 동일；X 는 염소 원자, 브롬 원자, 요오드 원자를 나타낸다.)
＜공정 1＞
공정 1 에 있어서는, 일반식 (II) 로 나타내는 화합물과 일반식 (III) 으로 나타내는 화합물을 염기의 존재하 반응시켜, 일반식 (IV) 로 나타내는 화합물을 제조한다. 일반식 (III) 으로 나타내는 화합물 대신에, 일반식 (III) 으로 나타내는 화합물의 호변 이성체인 일반식 (V)
[화학식 21]
로 나타내는 화합물을 사용해도 동일하게 제조할 수 있다. 적합한 염기로는, 탄산칼륨, 탄산나트륨, 탄산세슘 또는 수소화나트륨 등을 들 수 있다. 반응을 원활히 실시하기 위해서 첨가물을 공존시켜도 되며, 첨가물로서, 요오드화칼륨, 요오드화나트륨, 테트라부틸암모늄요오드, 브롬화칼륨, 브롬화나트륨 또는 테트라부틸암모늄브로마이드 등을 첨가할 수 있다. 반응 용매로는, 반응을 현저하게 저해하지 않는 용매이면 특별히 한정되지 않지만, N,N-디메틸포름아미드, 디메틸술폭시드, 아세톤, 아세토니트릴, 메탄올, 에탄올, 테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 2-메톡시에탄올 또는 그들의 혼합 용매 등이 바람직하다. 또, 반응 용매에 물을 첨가할 수도 있다. 물을 첨가하는 경우, 물의 첨가량은 특별히 한정되지 않고, 예를 들어, 반응 용매에 대해 10 ％ 이하가 바람직하다. 반응 온도는 특별히 한정되지 않고, 예를 들어 실온 ∼ 60 ℃ 가 바람직하다. 반응 시간은, 1 시간 ∼ 2 일간이 바람직하다.
＜공정 2＞
공정 2 에 있어서는, 일반식 (IV) 로 나타내는 화합물 (이하, 「화합물 (IV)」 와 같이 기재하는 경우가 있다. 다른 일반식에 의해 나타내는 화합물에 대해서도 동일.) 을 염 존재하, 시안화물과의 반응을 거쳐 화합물 (I) 을 제조한다. 적합한 염으로는, 탄산암모늄 또는 탄산수소암모늄 등을 들 수 있다. 적합한 시안화물로는, 시안화칼륨 또는 시안화나트륨 등을 들 수 있다. 반응 용매로는, 반응을 현저하게 저해하지 않는 용매이면 특별히 한정되지 않지만, 물, 암모니아수, 메탄올, 에탄올, 테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, N,N-디메틸포름아미드 또는 그들의 혼합 용매 등이 바람직하다. 반응 온도는 특별히 한정되지 않고, 예를 들어 50 ℃ ∼ 120 ℃ 가 바람직하다. 반응 시간은, 1 시간 ∼ 10 일간이 바람직하다. 본 공정에 있어서 얻어지는 일반식 (I) 로 나타내는 화합물은, 반응 종료 후의 처리 방법에 따라, 그 염의 형태로서 얻을 수도 있다.
상기 화합물 (IV) 는, 하기의 스킴 2 (공정 3 ∼ 공정 7) 에 나타내는 방법에 의해서도 제조할 수 있다.
[화학식 22]
(식 중, A, R1, R2, R3 및 R4 는 상기와 동일；X 는 염소 원자, 브롬 원자, 요오드 원자；Y 는
[화학식 23]
등의 아민 유도체기；P 는 보호기；M 은 MgBr, MgCl, Li, ZnBr 또는 ZnCl 을 나타낸다.)
＜공정 3＞
공정 3 에 있어서는, 일반식 (III) 으로 나타내는 화합물과 일반식 (VI) 로 나타내는 화합물을 염기의 존재하 반응시켜, 일반식 (VII) 로 나타내는 화합물을 제조한다. 일반식 (III) 으로 나타내는 화합물 대신에, 일반식 (III) 으로 나타내는 화합물의 호변 이성체인 일반식 (V)
[화학식 24]
로 나타내는 화합물을 사용해도 동일하게 제조할 수 있다. 적합한 염기로는, 탄산칼륨, 탄산나트륨, 탄산세슘 또는 수소화나트륨 등을 들 수 있다. 반응을 원활히 실시하기 위해서 첨가물을 공존시켜도 되며, 첨가물로서, 요오드화칼륨, 요오드화나트륨, 테트라부틸암모늄요오드, 브롬화칼륨, 브롬화나트륨 또는 테트라부틸암모늄브로마이드 등을 첨가할 수 있다. 반응 용매로는, 반응을 현저하게 저해하지 않는 용매이면 특별히 한정되지 않지만, N,N-디메틸포름아미드, 디메틸술폭시드, 아세톤, 아세토니트릴, 메탄올, 에탄올, 테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 2-메톡시에탄올 또는 그들의 혼합 용매 등이 바람직하다. 반응 온도는 특별히 한정되지 않고, 예를 들어 실온 ∼ 60 ℃ 가 바람직하다. 반응 시간은, 1 시간 ∼ 2 일간이 바람직하다.
＜공정 4＞
공정 4 에 있어서는, 일반식 (VII) 로 나타내는 화합물을 무기 염기 수용액의 존재하에 가수 분해하여, 화합물 (VIII) 을 제조한다. 적합한 무기 염기 수용액으로는, 수산화나트륨 수용액, 수산화칼륨 수용액 또는 수산화리튬 수용액 등을 들 수 있다. 반응 용매로는, 반응을 현저하게 저해하지 않는 용매이면 특별히 한정되지 않지만, 물, 메탄올, 에탄올, 테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산 또는 그들의 혼합 용매 등이 바람직하다. 반응 온도는 특별히 한정되지 않고, 예를 들어 실온 ∼ 60 ℃ 가 바람직하다. 반응 시간은, 1 시간 ∼ 96 시간이 바람직하다. 본 공정에 있어서 얻어지는 일반식 (VIII) 로 나타내는 화합물의 형태는, 카르복실산, 카르복실산나트륨, 카르복실산칼륨, 카르복실산리튬, 무기염 (염화나트륨, 염화칼륨 또는 염화리튬) 과 카르복실산의 혼합물 등이다.
＜공정 5＞
공정 5 에 있어서는, 공정 4 에서 얻어진 화합물 (VIII) 을 활성화된 카르복실산 유도체로 하고, 아민 또는 그 염과 반응시켜, 화합물 (IX) 로 나타내는 화합물을 제조한다. 활성화된 카르복실산 유도체로는, 예를 들어, 화합물 (VIII) 을 염화티오닐, 옥시염화인, 5염화인, 염화옥살릴, 브롬화티오닐 등으로 처리함으로써 얻어지는 산 할로겐화물；화합물 (VIII) 을 1-에틸-3'-(3'-디메틸아미노프로필)카르보디이미드염산염 또는 디시클로헥실카르보디이미드 등의 축합제와 축합함으로써 얻어지는 활성 에스테르；화합물 (VIII) 을 클로로탄산에틸, 피발로일클로라이드, 클로로탄산이소부틸 등과 반응시킴으로써 얻어지는 혼합 산 무수물 등을 들 수 있다. 또, 상기 반응에 있어서는, 필요에 따라 염기를 공존시킬 수 있다. 염기로는, 예를 들어, 트리에틸아민, tert-부틸아민, 피리딘, N-메틸모르폴린 등의 유기 아민을 들 수 있으며, 바람직하게는 트리에틸아민, 피리딘 또는 N-메틸모르폴린이다. 반응 용매로는, 반응을 현저하게 저해하지 않는 용매이면 특별히 한정되지 않지만, N,N-디메틸포름아미드, 테트라하이드로푸란, 디클로로메탄 또는 클로로포름 등이 바람직하다. 반응 온도는 특별히 한정되지 않고, 예를 들어 0 ℃ ∼ 60 ℃ 가 바람직하다. 반응 시간은, 1 시간 ∼ 96 시간이 바람직하다.
＜공정 6＞
공정 6 에 있어서는, 공정 5 에서 얻어진 화합물 (IX) 와 일반식 (X) 으로 나타내는 화합물을 반응시켜 화합물 (IV) 를 제조한다. 화합물 (X) 으로는, 일반식 (XI) 로 나타내는 화합물
[화학식 25]
(구조식 중, X1 은, 염소 원자, 브롬 원자 또는 요오드 원자를 나타낸다.)
을 원료로 하고, 노르말부틸리튬, sec-부틸리튬, tert-부틸리튬 등의 염기를 사용한 할로겐-금속 교환 반응에 의해 조제한 리튬 시약；마그네슘, 이소프로필마그네슘브로마이드 또는 이소프로필마그네슘클로라이드 등을 사용하여 조제한 그리냐르 시약；활성화한 아연, 브롬화아연 또는 염화아연 등을 사용하여 조제한 아연 시약 등을 들 수 있다. 반응 용매로는, 반응을 현저하게 저해하지 않는 용매이면 특별히 한정되지 않지만, 테트라하이드로푸란, 디에틸에테르, 1,4-디옥산 또는 디메톡시에탄 등이 바람직하다. 반응 온도는 특별히 한정되지 않고, 예를 들어 －100 ℃ ∼ 실온이 바람직하다. 반응 시간은, 1 시간 ∼ 24 시간이 바람직하다.
＜공정 7＞
공정 7 에 있어서는, 공정 6 과 동일하게 하여, 일반식 (VII) 로 나타내는 화합물과 일반식 (X) 으로 나타내는 화합물을 반응시켜 화합물 (IV) 를 제조한다.
또, 상기 화합물 (II) 는, 이하에 나타내는 바와 같이, 스킴 3 (공정 8 ∼ 10) 에 나타내는 방법에 의해 제조할 수 있다.
[화학식 26]
(식 중, A, R1, R2, R3 및 R4 는 상기와 동일；X 는 염소 원자, 브롬 원자, 요오드 원자를 나타낸다.)
＜공정 8＞
공정 8 에 있어서는, 일반식 (XII) 로 나타내는 화합물을, 일반식 (XIV) 로 나타내는 중간체와 반응시켜, 화합물 (II) 를 제조한다. 중간체 (XIV) 는, 산 할라이드와 루이스 산으로부터 얻어지는 활성 중간체；산 무수물과 루이스 산으로부터 얻어지는 활성 중간체；카르복실산과 탈수제로부터 얻어지는 활성 중간체를 들 수 있다. 산 할라이드로는, 클로로아세틸클로라이드, 클로로아세틸브로마이드, 브로모아세틸브로마이드, 브로모아세틸클로라이드 또는 요오드아세틸클로라이드 등을 들 수 있다. 산 무수물로는, 클로로아세트산 무수물, 브로모아세트산 무수물 또는 요오드아세트산 무수물 등을 들 수 있다. 카르복실산으로는, 클로로아세트산, 브로모아세트산 또는 요오드아세트산을 들 수 있다. 루이스 산으로는, 염화알루미늄, 염화아연 등을 들 수 있다. 탈수제로는, 5산화인 등을 들 수 있다. 반응 용매로는, 반응을 현저하게 저해하지 않는 용매이면 특별히 한정되지 않지만, 디클로로메탄, 디클로로에탄 등이 바람직하고, 반응 용매를 사용하지 않아도 된다. 반응 온도는 특별히 한정되지 않고, 예를 들어 0 ℃ ∼ 100 ℃ 가 바람직하다. 반응 시간은, 1 시간 ∼ 24 시간이 바람직하다.
＜공정 9＞
공정 9 에 있어서는, 일반식 (XII) 로 나타내는 화합물을, 일반식 (XV) 로 나타내는 중간체와 반응시켜, 화합물 (XIII) 을 제조한다. 중간체 (XV) 는, 아세트산 할라이드와 루이스 산으로부터 얻어지는 활성 중간체；아세트산 무수물과 루이스 산으로부터 얻어지는 활성 중간체；아세트산과 탈수제로부터 얻어지는 활성 중간체를 들 수 있다. 아세트산 할라이드로는, 염화아세틸, 브롬화아세틸 또는 요오드화아세틸을 들 수 있다. 루이스 산으로는, 염화알루미늄, 염화아연 등을 들 수 있다. 탈수제로는, 5산화인 등을 들 수 있다. 반응 용매로는, 반응을 현저하게 저해하지 않는 용매이면 특별히 한정되지 않지만, 디클로로메탄, 디클로로에탄 등이 바람직하고, 반응 용매를 사용하지 않아도 된다. 반응 온도는 특별히 한정되지 않고, 예를 들어 0 ℃ ∼ 100 ℃ 가 바람직하다. 반응 시간은, 1 시간 ∼ 24 시간이 바람직하다.
＜공정 10＞
공정 10 에 있어서는, 일반식 (XIII) 으로 나타내는 화합물을, 할로겐화제와 반응시켜, 화합물 (II) 를 제조한다. 할로겐화제로는, N-클로로숙신산이미드, N-브로모숙신산이미드, N-요오드숙신산이미드 또는 벤질트리메틸암모늄트리브로마이드 등을 들 수 있다. 반응에 적당한 산을 사용함으로써 반응이 촉진된다. 반응 용매로는, 반응을 현저하게 저해하지 않는 용매이면 특별히 한정되지 않지만, 테트라하이드로푸란, 디클로로메탄, 디클로로에탄 등이 바람직하다. 반응 온도는 특별히 한정되지 않고, 예를 들어 0 ℃ ∼ 100 ℃ 가 바람직하다. 반응 시간은, 1 시간 ∼ 72 시간이 바람직하다.
전술한 방법으로 제조되는 화합물은 유리 (遊離) 화합물, 그 염, 그 수화물 (水和物) 혹은 에탄올화물 등의 각종 용매화물 또는 결정 다형의 물질로서 단리 정제된다. 본 발명 화합물의 약리학적으로 허용되는 염은 통상적인 방법의 조염 반응에 의해 제조할 수 있다. 단리 정제는 추출 분별, 결정화, 각종 분획 크로마토그래피 등의 화학 조작을 적용하여 실시된다.
광학 활성체는, 예를 들어, 하기 스킴 4 (공정 11) 에 나타내는 방법으로, 라세미체로부터 통상적인 방법의 광학 분할에 의해 입체 화학적으로 순수한 이성체로서 얻을 수 있다.
[화학식 27]
(식 중, A, R1, R2, R3 및 R4 는 상기와 동일하고, 아스테리스크 (*) 는 광학적으로 순수한 형태인 것 의미한다.)
＜공정 11＞
공정 11 에 있어서는, 라세미체로서 제조된 화합물 (I) 을, 키랄 칼럼을 사용하여 광학 분할하고, (＋) 혹은 (－) 이성체를 제조한다. 키랄 칼럼을 사용한 광학 분할은, 당업자에게 있어서의 공지된 방법 (예를 들어, 「광학 이성체의 분리」 (계간 화학 총설 No. 6 1989 일본 화학회편 학회 출판 센터) 등 참조) 에 준하여 실시하면 된다. 또, 사용하는 키랄 칼럼은 다양한 것이 시판되고 있으며, 적당히 적절한 것을 선택하면 된다.
본 발명의 조성물은, 상기 화합물, 혹은 그 염 (이하, 「상기 일반식 (I) 로 나타내는 화합물 등」 이라고도 칭한다) 을 유효 성분으로 하는, 혈소판의 기능을 유지하기 위한 조성물이다. 본 발명에 있어서 「혈소판의 기능을 유지한다」 는 것은, 주로, 혈소판의 지혈이나 혈전 형성과 같은 혈액 응고에 관한 기능을 실질적으로 유지하는 것을 의미한다. 당해 기능은, 본 발명의 조성물에 의해, ADAM17 에 의한 GPIbα 의 쉐딩 (Shedding, 절단하여 제거) 을 억제함으로써 달성할 수 있다.
「혈소판의 기능 유지」 는, 예를 들어, 국제 공개 2009/119105호나 국제 공개 2012/036257호에 기재되어 있는 바와 같은, 플로우 챔버 시스템을 이용하여 혈소판의 폰·빌레브란트 인자 (von Willebrand factor, VWF) 에 대한 접착능을 평가하는 방법, 혈소판 감소 마우스를 사용하여 혈소판의 생체내 수명을 평가하는 방법, 트롬빈 존재하 피브리노겐 코트 커버 글래스 상의 혈소판의 형상을 관찰하는 방법, 혹은, 레이저 조사와 헤마토포르피린 등을 사용하여 혈전 형성 모델 동물을 제조하고, 이 모델 동물 내에 있어서의 혈소판의 동태를 단일 레벨로 관찰하는 생체 분자 이미징 수법 등을 이용하여, 평가할 수 있다.
ADAM17 (a disintegrin and metallopeptidase domain 17) 은, 구조상 디스인테그린 도메인을 가지며, 메탈로프로테아제 활성을 갖는 단백질이다. GPIbα (glycoprotein Ib alpha, 당 단백질 Ibα) 이외에도 막형의 TNF-α (Tumor necrosis factor-alpha, 종양 괴사 인자-α) 를 쉐딩하고, 가용형의 TNF-α 를 산생하기 때문에, TACE (TNF-alpha converting enzyme, TNF-α 변환 효소) 라고도 칭해지는 단백질이다. 전형적으로는, 인간 유래의 ADAM17 로서, ACCESSION No. NP＿003174.3 (No. NM＿003183.4) 으로 특정되는 단백질 (유전자) 을 들 수 있다.
또, GPIbα 는, 혈소판의 막 단백질이며, VWF 의 수용체로서 기능하고 있다. 또, GPIbα 는 CD42b 항원이라고도 칭해지며, 인간 체내에 있어서 혈소판에만 발현하고 있기 때문에, 혈소판의 표면 마커로서도 이용되고 있다. 전형적으로는, 인간 유래의 GPIbα 로서, ACCESSION No. NP＿000164.5 (No. NM＿000173.5) 로 특정되는 단백질 (유전자) 을 들 수 있다.
ADAM17 및 GPIbα 의 전형예로서 GenBank 에 등록되어 있는 각각의 Reference Sequence 를 상기했지만, 이들은 어디까지나 예시로서 단백질의 아미노산 배열은, 자연계에 있어서 (즉, 비인공적으로) 변이할 수 있다. 따라서, 본 발명의 조성물의 작용 기전에 관련되는, ADAM17 및 GPIbα 에는, 이와 같은 천연의 변이체도 포함되는 것을 이해했으면 한다.
본 발명에 있어서의 「ADAM17 에 의한 GPIbα 의 쉐딩의 억제」 에는, ADAM17 에 의한 쉐딩의 완전한 억제 (저해) 및 부분적인 억제의 쌍방이 포함된다. 또, 후술하는 시험예 3 에 있어서 나타내는 바와 같이, 본 발명의 조성물의 존재하에 있어서의 혈소판 총수에 대한 CD42b (GPIbα)(＋) 혈소판 수의 비율을 산출하고, 본 발명의 조성물의 비존재하에 있어서의 그 비율과 비교하여, 큰 값인 경우에는, 본 발명의 조성물이 ADAM17 에 의한 GPIbα 의 쉐딩을 억제하는 것으로 평가할 수 있다. 본 발명의 조성물에 의한 GPIbα 의 쉐딩의 억제의 정도로는, 본 발명의 조성물의 존재하에 있어서의 CD42b(＋) 혈소판 수의 비율이 보다 클수록 바람직하며, 당해 비율이, 60 ％ 이상인 것은 바람직하고, 70 ％ 이상인 것은 보다 바람직하고, 80 ％ 이상인 것은 보다 더 바람직하다.
또한, 본 발명의 조성물에 의한 GPIbα 의 쉐딩을 억제하는 능력을, 후술하는 시험예 1 에 있어서 나타내는 방법을 이용하여 평가한 경우에는, 50 ％ 억제 농도 (IC50) 가 1000 n㏖/ℓ 미만인 것이 바람직하고, 500 n㏖/ℓ 미만인 것은 보다 바람직하고, 보다 더 바람직하게는 100 n㏖/ℓ 미만이다.
본 발명의 조성물의 유효 성분인 상기 일반식 (I) 로 나타내는 화합물은 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어,
5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]-5-페닐이미다졸리딘-2,4-디온,
5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]-5-(4-페녹시페닐)이미다졸리딘-2,4-디온,
5-(3,4-디플루오로페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온,
5-(4-벤질페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온, 및
(＋)-5-(3,4-디플루오로페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온
등을 들 수 있다.
이들 화합물 중, (＋)-5-(3,4-디플루오로페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온은, 후술하는 실시예 및 시험예에 있어서의 「(＋)-I-10」 또는 「S-108470」 이다.
본 발명의 조성물의 형태로는, 예를 들어, 연구 개발 목적 (예를 들어, 인비트로나 인비보의 연구 개발) 으로 사용되는 시약이나, 의약품 첨가제를 들 수 있다.
본 발명의 조성물은, ADAM17 에 의한 GPIbα 의 쉐딩을 억제함으로써 혈소판의 기능을 유지하는 작용을 갖기 때문에, 혈소판의 기능을 유지하기 위한 시약 (예를 들어, 거핵구로 분화할 수 있는 세포로부터 거핵구로 분화 유도시키고, 그 거핵구로부터 혈소판을 산생시키는 배양계에 사용하는 시약이나 생산한 혈소판에 첨가하여 그 기능을 유지하기 위한 시약) 이나 수혈용 혈소판을 포함하는 혈액 제제에 첨가되는 의약품 첨가제로서 적합하게 사용할 수 있다. 본 발명의 조성물을 상기 첨가제나 시약으로서 사용하는 경우에는, 유효 성분인 상기 일반식 (I) 로 나타내는 화합물 등 외에, 예를 들어 안정화제나 용제 등의 추가 성분이 함유되어 있어도 된다. 또, 본 발명의 조성물은, 목적에 따라 상기 일반식 (I) 로 나타내는 화합물 등 자체여도 된다.
본 발명의 조성물의 제품 (예를 들어, 시약이나 의약품 첨가제) 또는 그 설명서는, 혈소판의 기능을 유지하기 위해서 사용되는 취지의 표시를 붙인 것일 수 있다. 여기서 「제품 또는 설명서에 표시를 붙였다」 라는 것은, 제품의 본체, 용기, 포장 등에 표시를 붙인 것, 혹은 제품의 정보를 개시하는 설명서, 첨부 문서, 선전물, 그 밖의 인쇄물 등에 표시를 붙인 것을 의미한다. 혈소판의 기능을 유지하기 위해서 사용되는 취지의 표시에 있어서는, 본 발명의 조성물의 유효 성분인 상기 일반식 (I) 로 나타내는 화합물 등이 혈소판의 기능을 유지하는 효과를 발휘하는 데 이를 때까지의 기전에 대한 정보를 포함할 수 있다. 기전에 대한 정보로는, 예를 들어, ADAM17 에 의한 GPIbα 의 쉐딩을 억제함으로써, 혈소판의 기능을 유지하는 것에 관한 정보를 들 수 있다. 또, 혈소판의 기능을 유지하기 위해서 사용되는 취지의 표시에 있어서는, 혈소판의 제조 또는 보존을 위해 등에 사용되는 것에 관한 정보를 포함할 수 있다.
상기 일반식 (I) 로 나타내는 화합물 등은, 상기 본 발명의 조성물을 제조하기 위한 유효 성분이 된다. 따라서, 본 발명은, 상기 본 발명의 조성물을 제조하기 위해서 사용되는, 상기 일반식 (I) 로 나타내는 화합물 등, 및 상기 일반식 (I) 로 나타내는 화합물 등을 사용하는 것을 포함하는, 상기 본 발명의 조성물의 제조 방법도 제공하는 것이다.
또, 본 발명은, 거핵구로 분화할 수 있는 세포로부터 거핵구로 분화 유도시키고, 그 거핵구로부터 혈소판을 산생시키는 배양계에, 상기 일반식 (I) 로 나타내는 화합물 등을 첨가한 배양물을 제공하는 것이다. 또한, 본 발명은, 거핵구로 분화할 수 있는 세포로부터 거핵구로 분화 유도시키고, 그 거핵구로부터 혈소판을 산생시키는 배양계에, 상기 일반식 (I) 로 나타내는 화합물 등을 첨가하는 것을 포함하는, 혈소판을 조제하기 위한 방법을 제공하는 것이다.
본 발명에 있어서의 「거핵구」 는, 혈소판 전구세포, 거핵세포라고도 칭해지며, 그 세포질을 분리함으로써, 혈소판을 산생하는 세포이다.
본 발명에 있어서 「거핵구로 분화할 수 있는 세포」 는, 거핵구로 분화 유도할 수 있는 세포이면 특별히 한정되지는 없고, 예를 들어, 수정란, 배성 간세포 (ES 세포), 인공 다능성 간세포 (iPS 세포), 배성 생식 세포 (EG 세포) 와 같은 만능 간세포, 조혈 간세포, 조혈 전구세포, 거핵아구, 지방 세포를 들 수 있다. 조혈 간세포나 조혈 전구세포는, 골수나 제대혈 등으로부터 채취되는 것이어도 된다. 또한, 이들 중에서는, 배 (胚) 를 파괴하는 경우가 없기 때문에 윤리적인 문제가 없고, 본 발명에 의해 조제된 혈소판을 수혈하는 환자와 인간 백혈구형 항원 (HLA) 의 형태를 적합시키기 쉽다는 관점에서, iPS 세포가 바람직하다.
또한, 본 발명의 방법에 사용하는 상기 세포가 유래하는 동물종은 특별히 한정되지 않고, 예를 들어, 인간, 마우스, 래트, 개, 고양이, 소, 말, 양 등을 들 수 있는데, 바람직하게는 마우스, 래트, 인간이고, 보다 바람직하게는 마우스 또는 인간이고, 보다 더 바람직하게는 인간이다.
본 발명에 있어서 「거핵구로 분화할 수 있는 세포로부터 거핵구로 분화 유도시키고, 그 거핵구로부터 혈소판을 산생시키는 배양계」 로는, 예를 들어, 혈소판에 이르는 도중의 단계에서 배양체 (胚樣體) (분화 유도한 중배엽계 미분화 세포를 포함하는 세포 집단) 를 형성시키는 배양계 (Eto 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2002년, 99 권, 12819-12824 페이지 등), 조혈 전구세포를 내포하는 네트형 구조물 (sac 구조체) 을 형성시키는 배양계 (특허문헌 1 ∼ 3 등 참조), 제대혈 유래의 조혈 전구세포로부터 혈소판을 산생시키는 배양계 (Robert 등, 「Glycoprotein Ibalpha receptor instability is associated with loss of quality of platelets produced in culture.」, Stem Cells Development, 2010년 5월 26일 온라인판 등 참조) 등을 들 수 있다 (그 외, Fujimoto 등, Blood, 2003년, 102 권, 4044-4051 페이지：Hiroyama 등, Exp. Hematol., 2006년, 34 권, 760-769 페이지：Gaur 등, J Thromb Haemost., 2005년, 4 권, 436-442 페이지 등 참조) 를 들 수 있다. 이들 중에서는, 네트형 구조물 내에 조혈 전구세포가 농축되어 존재하고 있고, 생체외에 있어서 효율적으로 거핵구나 혈소판 등을 산생시킬 수 있기 때문에, 네트형 구조물을 형성시키는 배양계가 바람직하다.
본 발명에 관련된 배양계의 배양 조건으로는, 거핵구의 배양 및 혈소판의 산생에 적절한 조건이면 특별히 한정되지 않는다.
또한, 본 발명에 관련된 「거핵구로 분화할 수 있는 세포」 를 배양할 때 (특히, 거핵구를 분화 유도하는 과정에 있어서), 피더 세포와 공배양하는 것이 바람직하다. 여기서 사용하는 「피더 세포」 로는, 「거핵구로 분화할 수 있는 세포」 의 분화 유도에 기여하는 것이면 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 마우스배 선유아 세포, 바람직하게는, 10T1/2 세포주, OP9 세포 등을 사용할 수 있다. 불사화한 주화 세포 이외의 세포로는, 인간 골수 유래의 간엽계 간세포 (인간 골수로부터 직접 조제하고 배양하여 얻은 세포) 를 들 수 있으며, 당해 간엽계 간세포를 피더 세포로서 사용한 경우에도, 인간 ES 세포 또는 iPS 세포로부터의 거핵구 성숙 및 혈소판 산생이 가능하다. 매트리겔 등의 세포외 기질 상에서 배양함 경우에도 혈소판을 유도하는 것이 가능하다. 「피더 세포」 를 사용할 때에는, 방사선을 조사하는 등 하여, 세포의 증식을 억제하는 것이 바람직하다.
상기 일반식 (I) 로 나타내는 화합물 등의 상기 배양계에 대한 첨가량 (농도) 은, 0.01 ∼ 100 μM 인 것이 바람직하다. 상기 첨가량을 상기 하한 이상으로 함으로써 혈소판에 있어서의 GPIbα 의 절단이 적합하게 억제되고, 상기 상한 이하로 함으로써, 화합물의 영향에 의한 세포 증식 억제를 적합하게 회피할 수 있다.
이하에, 본 발명의 배양계에 적합하게 사용되는 네트형 구조물을 형성시키는 방법의 일례로서, 본 발명의 혈소판을 조제하기 위한 방법을 보다 구체적으로 설명한다.
먼저, 네트형 구조물 (sac 구조체) 을 형성시키는 방법에 대하여 설명한다. 네트형 구조물을 조제하기 위해서 적합한 배양 조건은, 사용하는 ES 세포 또는 iPS 세포에 따라 다르지만, 예를 들어, 배지로는, 최종 농도 15 ％ 의 FBS 를 첨가한 이스코브 개변 둘베코 배지 (IMDM) 를 사용하고, 그 외 무혈청의 경우에 있어서도 적절히 증식 인자 및 서플리먼트 등을 첨가한 것을 사용할 수 있다. 또한, 네트형 구조물을 효율적으로 형성시키기 위해서, 혈관 내피 증식 인자 (VEGF) 를 0 ∼ 300 ng/㎖ 정도, 보다 바람직하게는, 20 ng/㎖ 정도 첨가하는 것이 좋다. 배양의 환경으로는, 사용하는 ES 세포 또는 iPS 세포의 종류에 따라 다르지만, 바람직하게는, 5 ％ CO2, 35 ∼ 39 ℃, 보다 바람직하게는 36 ∼ 38 ℃, 보다 더 바람직하게는 37 ℃ 의 조건이다. 네트형 구조물이 형성될 때까지의 배양 기간은, ES 세포 또는 iPS 세포의 종류에 따라 다르지만, 피더 세포 상에 파종하고 나서, 15 일째경 (약 14 ∼ 약 16 일 후) 에 조혈 전구세포를 효율적으로 취득할 수 있게 된다.
형성된 네트형 구조물은, 여포상 (濾胞狀) 구조로 되어 있으며, 내부에는, 조혈 전구세포, 특히 CD34 양성의 세포가 농축된 상태로 존재하고 있다. 네트형 구조물의 내부에 존재하는 조혈 전구세포는, 물리적인 수단, 예를 들어, 멸균이 끝난 체 형상 기구 (예를 들어, 셀 스트레이너 등) 에 통과시킴으로써, 분리할 수 있다.
다음으로, 네트형 구조물로부터 분리한 조혈 전구세포로부터 혈소판을 조제하는 방법에 대하여 설명한다. 분리하여 얻어진 조혈 전구세포를 피더 세포 상에 파종하고, 거핵구 및 혈소판을 산생시키는 데에 적합한 조건으로 배양을 실시한다. 여기서 「거핵구 및 혈소판을 산생시키는 데에 적합한 조건」 이란, 예를 들어, 트롬보포에틴 (TPO, 10 ∼ 200 ng/㎖, 바람직하게는 100 ng/㎖ 정도) 의 존재하에서, 또는 간세포 인자 (SCF, 10 ∼ 200 ng/㎖, 바람직하게는 50 ng/㎖ 정도), 헤파린 (Heparin, 10 ∼ 100 U/㎖, 바람직하게는 25 U/㎖ 정도) 및 TPO (10 ∼ 200 ng/㎖, 바람직하게는 100 ng/㎖ 정도) 의 존재하에서, 7 ∼ 15 일간 정도 배양하는 것을 들 수 있다. 배양 환경으로는, 바람직하게는, 5 ％ CO2, 35 ∼ 39 ℃, 보다 바람직하게는 36 ∼ 38 ℃, 보다 더 바람직하게는 37 ℃ 의 조건이다.
또, 상기 배양계에 있어서, CD42b (GPIbα) 는, 시간의 경과와 함께 발현되고, 그 발현량이 증가하기는 하지만, 이 과정은 세포 사이에서 불균일하다. 따라서, CD42b (GPIbα) 의 쉐딩을 보다 유효적으로 억제하기 위해서, 조혈 전구세포를 피더 세포 상에 다시 파종할 때에 상기 일반식 (I) 로 나타내는 화합물 등을 상기 배양계에 첨가하는 것은 바람직하다.
또한, 본 발명의 방법에 있어서는, 거핵구로부터 방출된 혈소판이 풍부하게 존재하는 배양액의 획분 (예를 들어, 네트형 구조물을 형성시키는 방법에 있어서는, 인간 iPS 세포 또는 ES 세포의 배양 후 22 ∼ 28 일째 정도의 획분) 을 회수하고, 백혈구 제거 필터 (예를 들어, 테루모사, 아사히 화성 메디컬사 등에서 구입 가능) 등을 사용하여 혈소판 이외의 성분 (거핵구, 그 밖의 혈액 세포) 의 제거를 실시함으로써, 혈소판을 조제할 수 있다.
전술한 바와 같이, 상기 일반식 (I) 로 나타내는 화합물 등은, ADAM17 에 의한 GPIbα 의 쉐딩을 억제하고, 혈소판의 기능을 유지하는 작용을 갖는다. 따라서, 본 발명은, 상기 일반식 (I) 로 나타내는 화합물 등이 첨가된 혈소판을 포함하는 혈액 제제, 그리고, 상기 일반식 (I) 로 나타내는 화합물 등을, 혈소판을 포함하는 혈액 제제에 첨가하는 것을 포함하는, 혈액 제제에 있어서의 혈소판의 기능을 유지하기 위한 방법도 제공하는 것이다.
또, 상기 일반식 (I) 로 나타내는 화합물 등은, 혈소판을 포함하는 혈액 제제를 제조하기 위한 유효 성분이 된다. 따라서, 본 발명은, 상기 본 발명의 혈액 제제를 제조하기 위해서 사용되는 의약품 첨가제로서, 상기 일반식 (I) 로 나타내는 화합물 등도 제공하는 것이다.
본 발명에 있어서의 혈액 제제에 포함되는 혈소판으로는 특별히 한정되지 않고, 전술한 본 발명의 혈소판을 조제하기 위한 방법에 의해 얻어진 혈소판이어도 되고, 또 채혈에 의해 얻어진 말초혈 등 유래의 혈소판이어도 된다. 혈액 제제를 조제하는 데에 있어서는, 혈소판이 보존에 대해 불안정한 것 등을 고려하여, 혈소판의 안정화에 이바지하는 다른 성분을 함유시킬 수도 있다. 혈소판을 안정화시키는 조건은, 본 기술 분야에 있어서의 통상적인 지식을 갖는 자에게 공지된 방법을 선택해도 된다. 예를 들어, 혈소판의 기능을 유지하기 위해서 필요한 용액 중 (예를 들어, ACD-A 액 (시트르산나트륨/시트르산/포도당으로부터 조제되는 액) 등, 경우에 따라서는, 신선 동결 혈장 등을 적절히 첨가한다) 에, 적당한 농도 (예를 들어, 1 × 108 ∼ 1 × 1010 혈소판/㎖ 정도, 바람직하게는, 1 × 109 혈소판/㎖ 정도) 로 현탁하여 제제화할 수 있다. 또한, 혈소판을 포함하는 제제를 수납하는 용기는, 유리와 같이 혈소판을 활성화하는 재질의 것을 피하는 것이 바람직하다. 상기 일반식 (I) 로 나타내는 화합물 등의 첨가량 (농도) 은, 0.01 ∼ 100 μ㏖/ℓ 인 것이 바람직하다. 상기 첨가량을 상기 하한 이상으로 함으로써 혈소판의 접착 기능을 적합하게 유지하는 것이 가능해지고, 상기 상한 이하로 함으로써, 수혈했을 때의 안전성을 보다 높일 수 있다.
실시예
이하, 실시예 및 시험예에 기초하여 본 발명을 보다 구체적으로 설명하는데, 본 발명은 이하의 실시예에 한정되는 것은 아니다.
＜피험화합물의 제조 방법＞
이하에, 본 발명의 조성물의 유효 성분인 일반식 (I) 로 나타내는 화합물의 대표적인 제조예를 실시예로서 나타낸다. 이하의 실시예에 나타내는 재료, 사용량, 비율, 처리 내용, 처리 순서 등은 본 발명의 취지를 일탈하지 않는 한 적절히 변경할 수 있다. 따라서, 본 발명의 범위는 이하에 나타내는 구체예에 의해 한정적으로 해석되어야 하는 것은 아니다.
또한, 이하에 나타내는 1H-NMR 스펙트럼은, 중클로로포름 (CDCl3) 또는 중디메틸술폭시드 (DMSO-d6) 를 용매로 하고, 테트라메틸실란 (TMS) 을 내부 표준으로 하여, JNM-ECA400 형 스펙트럼 미터 (400 ㎒, 닛폰 전자 (주) 제조) 로 측정하였다. 화학 시프트의 측정 결과는, δ 값을 ppm 으로 나타내며, 결합 상수의 J 값을 ㎐ 로 나타내었다. 약호 s 는 singlet, d 는 doublet, t 는 triplet, q 는 quartet, m 은 multiplet, br 은 broad 를 의미한다. 질량 스펙트럼 (일렉트로 스프레이 이온화법：ESI-MS) 측정에는, 서모 피셔 사이언티픽 (주) 제조 Exactive 를 사용하였다. 비선광도 (比旋光度) 의 측정에는, 선광도계 (SEPA-300 형, (주) 호리바 제작소) 를 사용하였다.
실시예 1
5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]-5-페닐이미다졸리딘-2,4-디온 (I-1) 의 제조
[화학식 28]
공정 1
3-메틸-2-피리돈 (III-1) (5.0 g, 45.8 m㏖) 의 N,N-디메틸포름아미드 (91 ㎖) 용액에, 60 ％ 수소화나트륨 (1.8 g, 45.8 m㏖) 을 첨가하고, 실온에서 10 분간 교반하였다. 반응액에 브롬화페나실 (II-1) (9.1 g, 45.8 m㏖) 을 첨가하고, 실온에서 1.5 시간 교반하였다. 반응액에 물을 천천히 첨가한 후, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 물로 세정한 후, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 화합물 (IV-1) (500 ㎎, 2.2 m㏖) 을 황색 고체로서 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (IV-1) (7.0 g, 30.8 m㏖), 시안화칼륨 (2.7 g, 41.5 m㏖) 및 탄산암모늄 (11.8 g, 123 m㏖) 의 에탄올 (30 ㎖) 및 물 (30 ㎖) 현탁액을 밀폐하고, 90 ℃ 에서 89 시간 교반하였다. 방랭 후, 반응 용액을 물로 희석하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 물 및 포화 식염수로 순차 세정한 후, 황산나트륨으로 건조시켰다. 감압하에서 용매를 증류 제거한 후, 클로로포름을 첨가하고, 여과 채취하여, 클로로포름으로 세정하고, 건조시킴으로써, 화합물 (I-1) (수량 (收量) 1.14 g, 수율 26 ％) 을 황색 고체로서 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 2
5-(4-메톡시페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-2) 의 제조
[화학식 29]
공정 1
상기 화합물 (III-1) (227 ㎎, 2.1 m㏖) 의 N,N-디메틸포름아미드 (10 ㎖) 용액에, 탄산세슘 (745 ㎎, 2.3 m㏖) 과 4'-메톡시페나실브로마이드 (II-2) (500 ㎎, 2.2 m㏖) 를 첨가하고, 실온에서 3.5 시간 교반하였다. 빙랭하에서 물을 첨가하여 반응을 정지하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 식염수로 세정한 후, 황산마그네슘으로 건조시켰다. 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 화합물 (IV-2) (수량 440 ㎎, 수율 82 ％) 를 엷은 황색 고체로서 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (IV-2) (436 ㎎, 1.7 m㏖), 시안화칼륨 (132 ㎎, 2.0 m㏖) 및 탄산암모늄 (651 ㎎, 6.8 m㏖) 의 에탄올 (1.5 ㎖) 현탁액에, 물 (1.5 ㎖) 을 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 45 시간 교반하였다. 방랭 후, 반응 용액을 물로 희석하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정한 후, 황산나트륨으로 건조시켰다. 감압하에서 용매를 증류 제거함으로써, 화합물 (I-2) (수량 370 ㎎, 수율 67 ％) 를 담황색 고체로서 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 3
4-{4-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]-2,5-디옥소이미다졸리딘-4-일}벤조니트릴 (I-3) 의 제조
[화학식 30]
공정 1
상기 화합물 (III-1) (232 ㎎, 2.1 m㏖) 의 N,N-디메틸포름아미드 (10 ㎖) 용액에, 탄산세슘 (762 ㎎, 2.4 m㏖) 및 4'-시아노페나실브로마이드 (II-3) (500 ㎎, 2.2 m㏖) 을 첨가하고, 실온에서 3 시간 교반하였다. 빙랭하에서 물을 첨가하여 반응을 정지하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정한 후, 황산마그네슘으로 건조시켰다. 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 로 정제함으로써, 화합물 (IV-3) (수량 440 ㎎, 수율 82 ％) 을 엷은 황색 고체로서 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (I-2) 와 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (IV-3) 으로부터 화합물 (I-3) (수량 35 ㎎, 수율 10 ％) 을 담황색 고체로서 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 4
5-(3-메톡시페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-4) 의 제조
[화학식 31]
상기 화합물 (IV-3) 과 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (III-1) 과 화합물 (II-4) 로부터 화합물 (IV-4) (수량 496 ㎎, 수율 93 ％) 를 황색 유상물로서 얻었다.
상기 화합물 (I-2) 와 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (IV-4) 로부터 화합물 (I-4) (수량 425 ㎎, 수율 67 ％) 를 담황색 고체로서 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 5
5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]-5-(티오펜-3-일)이미다졸리딘-2,4-디온 (I-5) 의 제조
[화학식 32]
공정 1
상기 화합물 (III-1) (253 ㎎, 2.3 m㏖) 의 N,N-디메틸포름아미드 (10 ㎖) 용액에, 60 ％ 수소화나트륨 (102 ㎎, 2.6 m㏖) 을 첨가한 후, 3-(브로모아세틸)티오펜 (II-5) (500 ㎎, 2.4 m㏖) 을 첨가하고, 실온에서 16 시간 교반하였다. 빙랭하에서 물을 첨가하여 반응을 정지하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정한 후, 황산마그네슘으로 건조시켰다. 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 화합물 (IV-5) (수량 371 ㎎, 수율 69 ％) 를 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (I-2) 와 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (IV-5) 로부터 화합물 (I-5) (수량 270 ㎎, 수율 56 ％) 를 담황색 고체로서 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 6
5-(벤조푸란-2-일)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-6) 의 제조
[화학식 33]
공정 1
상기 화합물 (III-1) (217 ㎎, 2.0 m㏖) 의 N,N-디메틸포름아미드 (10 ㎖) 용액에, 60 ％ 수소화나트륨 (88 ㎎, 2.2 m㏖) 을 첨가한 후, 2-(2-브로모아세틸) 벤조푸란 (II-6) (500 ㎎, 2.1 m㏖) 을 첨가하고, 실온에서 16 시간 교반하였다. 빙랭하에서 물을 첨가하여 반응을 정지하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정한 후, 황산마그네슘으로 건조시켰다. 감압하에서 용매를 증류 제거한 후, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 로 정제하고, 화합물 (IV-6) (수량 115 ㎎, 수율 22 ％) 을 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (I-2) 와 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (IV-6) 으로부터 화합물 (I-6) (수량 58 ㎎, 수율 40 ％) 을 무색 고체로서 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 7
5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]-5-(피리딘-2-일)이미다졸리딘-2,4-디온 (I-7) 의 제조
[화학식 34]
공정 1
상기 화합물 (III-1) (370 ㎎, 3.4 m㏖) 의 N,N-디메틸포름아미드 (10 ㎖) 용액에, 60 ％ 수소화나트륨 (339 ㎎, 8.5 m㏖) 을 첨가한 후, 2-(브로모아세틸)피리딘브롬화수소염 (II-7) (1.0 g, 3.6 m㏖) 을 첨가하고, 실온에서 4.5 시간 교반하였다. 빙랭하에서 물을 첨가하여 반응을 정지하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정한 후, 황산마그네슘으로 건조시켰다. 감압하에서 용매를 증류 제거한 후, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 로 정제하고, 화합물 (IV-7) (수량 70 ㎎, 수율 9.1 ％) 을 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (IV-7) (70 ㎎, 0.31 m㏖), 시안화칼륨 (24 ㎎, 0.37 m㏖) 및 탄산암모늄 (118 ㎎, 1.22 m㏖) 의 에탄올 (0.3 ㎖) 현탁액에, 물 (0.3 ㎖) 을 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 65 시간 교반하였다. 방랭 후, 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 메탄올을 첨가하고 석출한 고체를 여과에 의해 제거하였다. 감압하 여과액의 용매를 증류 제거하고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 로 정제하고, 화합물 (I-7) (수량 35 ㎎, 수율 38 ％) 을 무색 고체로서 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 8
5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]-5-(피리딘-3-일)이미다졸리딘-2,4-디온 (I-8) 의 제조
[화학식 35]
공정 1
상기 화합물 (IV-7) 과 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (III-1) 과 3-(브로모아세틸)피리딘브롬화수소산염 (II-8) 로부터 화합물 (IV-8) (수량 469 ㎎, 수율 61 ％) 을 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (IV-8) (469 ㎎, 2.1 m㏖), 시안화칼륨 (160 ㎎, 2.5 m㏖) 및 탄산암모늄 (789 ㎎, 8.2 m㏖) 의 에탄올 (1 ㎖) 현탁액에, 물 (1 ㎖) 을 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 65 시간 교반하였다. 방랭 후, 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 메탄올을 첨가하고 석출한 고체를 여과에 의해 제거하였다. 감압하 여과액의 용매를 증류 제거하고, 소량의 클로로포름에 용해한 후, 헥산을 첨가하고 석출한 고체를 여과 채취하였다. 고체를 클로로포름으로 세정함으로써, 화합물 (I-8) (수량 295 ㎎, 수율 48 ％) 을 무색 고체로서 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 9
5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]-5-(4-페녹시페닐)이미다졸리딘-2,4-디온 (I-9) 의 제조
[화학식 36]
공정 1
4'-페녹시아세토페논 (XIII-1) (1.0 g, 4.7 m㏖) 의 테트라하이드로푸란 (5 ㎖) 용액에, 페닐트리메틸암모늄트리브로마이드 (1.8 g, 4.7 m㏖) 를 첨가하고, 실온에서 14 시간 교반한 후, 8 시간 가열 환류하였다. 방랭 후, 반응 용액을 물로 희석하고 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 황산마그네슘으로 건조시켰다. 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 로 정제함으로써, 화합물 (II-9) (수량 1.0 g, 수율 69 ％) 를 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (IV-3) 과 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (III-1) 과 상기 화합물 (II-9) 로부터 화합물 (IV-9) (수량 218 ㎎, 수율 42 ％) 를 얻었다.
공정 3
상기 화합물 (IV-9) (218 ㎎, 0.68 m㏖), 시안화칼륨 (53 ㎎, 0.82 m㏖) 및 탄산암모늄 (262 ㎎, 2.73 m㏖) 의 에탄올 (0.7 ㎖) 현탁액에, 물 (0.7 ㎖) 을 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 66 시간 교반하였다. 방랭 후, 반응 용액을 물로 희석하고 석출한 고체를 여과 채취하였다. 물로 세정한 후, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 로 정제함으로써, 화합물 (I-9) (수량 160 ㎎, 수율 58 ％) 를 무색 고체로서 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 10
5-(3,4-디플루오로페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-10) 의 제조
[화학식 37]
공정 1
상기 화합물 (III-1) (133 ㎎, 1.2 m㏖) 의 N,N-디메틸포름아미드 (10 ㎖) 용액에, 탄산세슘 (436 ㎎, 1.3 m㏖) 과 3',4'-디플루오로페나실브로마이드 (II-10) (300 ㎎, 1.3 m㏖) 을 첨가하고, 실온에서 3 시간 교반하였다. 반응 용액을 물로 희석하고, 석출한 고체를 여과 채취하였다. 물로 세정함으로써, 화합물 (IV-10) (수량 206 ㎎, 수율 64 ％) 을 황색 고체로서 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (IV-10) (206 ㎎, 0.78 m㏖), 시안화칼륨 (61 ㎎, 0.94 m㏖) 및 탄산암모늄 (301 ㎎, 3.13 m㏖) 의 에탄올 (0.8 ㎖) 현탁액에, 물 (0.8 ㎖) 을 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 67 시간 교반하였다. 방랭 후, 반응액을 물로 희석하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압하에서 용매를 증류 제거하였다. 잔류물에 클로로포름을 첨가하고, 석출한 고체를 여과 채취함으로써, 화합물 (I-10) (수량 119 ㎎, 수율 46 ％) 을 무색 고체로서 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 11
5-(4-브로모페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-11) 의 제조
[화학식 38]
공정 1
상기 화합물 (III-1) (250 ㎎, 2.3 m㏖) 의 디메틸술폭시드 (4.6 ㎖) 용액에, 탄산칼륨 (791 ㎎, 5.7 m㏖) 과 4'-브로모페나실브로마이드 (II-11) (636 ㎎, 2.3 m㏖) 을 첨가하고, 실온에서 교반하였다. TLC 에 의해 반응의 완결을 확인 후, 반응 용액을 물로 희석하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 에 의해 정제함으로써, 화합물 (IV-11) (수량 553 ㎎, 수율 79 ％) 을 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (IV-11) (300 ㎎, 0.98 m㏖), 시안화칼륨 (77 ㎎, 1.18 m㏖) 및 탄산암모늄 (377 ㎎, 3.92 m㏖) 의 에탄올 (0.98 ㎖) 현탁액에, 물 (0.98 ㎖) 을 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 48 시간 교반하였다. 방랭 후, 반응액에 물을 첨가하고 석출한 고체를 여과 채취하고, 클로로포름으로 세정함으로써, 화합물 (I-11) (수량 230 ㎎, 수율 62 ％) 을 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 12
5-(4-플루오로-3-메톡시페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-12) 의 제조
[화학식 39]
공정 1
상기 화합물 (IV-10) 과 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (III-1) 과 2-브로모-4'-플루오로-3'-메톡시아세토페논 (II-12) 로부터 화합물 (IV-12) (수량 153 ㎎, 수율 48 ％) 를 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (IV-12) (153 ㎎, 0.56 m㏖), 시안화칼륨 (43 ㎎, 0.67 m㏖) 및 탄산암모늄 (213 ㎎, 2.22 m㏖) 의 에탄올 (1.0 ㎖) 현탁액에, 물 (1.0 ㎖) 을 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 66 시간 교반하였다. 방랭 후, 반응 용액에 물을 첨가하고 석출한 고체를 여과 채취하고, 물로 세정함으로써, 화합물 (I-12) (수량 129 ㎎, 수율 67 ％) 를 무색 고체로서 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 13
5-[4-(메톡시메톡시)페닐]-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-13) 의 제조
[화학식 40]
공정 1
빙랭하, 4'-하이드록시아세토페논 (XIII-2) (2.0 g, 14.6 m㏖) 및 디이소프로필에틸아민 (5.1 ㎖, 29.4 m㏖) 의 디클로로메탄 용액 중에, 메톡시메틸클로라이드 (1.3 ㎖, 17.6 m㏖) 를 적하하고 실온에서 14 시간 교반하였다. 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 로 정제함으로써, 화합물 (XIII-3) (수량 2.7 g, 수율 99 ％) 을 무색 유상물로서 얻었다.
공정 2
빙랭하, 상기 화합물 (XIII-3) (2.7 g, 15.0 m㏖) 의 테트라하이드로푸란 (30 ㎖) 용액에, 페닐트리메틸암모늄트리브로마이드 (5.6 g, 15.0 m㏖) 를 첨가하고, 실온에서 1 시간 교반하였다. 반응액을 물로 희석하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 황산마그네슘으로 건조시켰다. 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 로 정제함으로써, 화합물 (II-13) (수량 312 ㎎, 수율 8.0 ％) 을 얻었다.
공정 3
상기 화합물 (II-3) 과 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (III-1) 과 상기 화합물 (II-13) 으로부터 화합물 (IV-13) (수량 147 ㎎, 수율 45 ％) 을 얻었다.
공정 4
상기 화합물 (I-12) 와 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (IV-13) 으로부터 화합물 (I-13) (수량 38 ㎎, 수율 26 ％) 을 황색 고체로서 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 14
5-(3-플루오로-4-메톡시페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-14) 의 제조
[화학식 41]
공정 1
상기 화합물 (IV-5) 와 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (III-1) 과 2-브로모-3'-플루오로-4'-메톡시아세토페논 (II-14) 로부터 화합물 (IV-14) (수량 239 ㎎, 수율 75 ％) 를 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (IV-14) (237 ㎎, 0.86 m㏖), 시안화칼륨 (67 ㎎, 1.03 m㏖) 및 탄산암모늄 (331 ㎎, 3.44 m㏖) 의 에탄올 (950 ㎕) 현탁액에, 28 ％ 암모니아수 (950 ㎕) 를 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 64 시간 교반하였다. 방랭 후, 반응 용액을 물로 희석한 후, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정한 후, 황산나트륨으로 건조시켰다. 감압하에서 용매를 증류 제거한 후, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 로 정제함으로써, 화합물 (I-14) (수량 98 ㎎, 수율 33 ％) 를 황색 고체로서 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 15
5-(4-플루오로페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-15) 의 제조
[화학식 42]
공정 1
상기 화합물 (III-1) (2.1 g, 19.1 m㏖) 의 아세톤 (30 ㎖) 용액에, 탄산칼륨 (3.1 g, 22.6 m㏖) 과 4'-플루오로페나실클로라이드 (II-15) (3.0 g, 17.4 m㏖) 를 첨가하고, 19 시간 가열 환류하였다. 방랭 후, 반응 용액을 물로 희석하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정한 후, 황산마그네슘으로 건조시켰다. 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 로 정제함으로써, 화합물 (IV-15) (수량 2.6 g, 수율 61 ％) 를 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (IV-15) (200 ㎎, 0.82 m㏖), 시안화칼륨 (64 ㎎, 0.98 m㏖) 및 탄산암모늄 (313 ㎎, 3.26 m㏖) 의 에탄올 (0.8 ㎖) 현탁액에, 28 ％ 암모니아 수용액 (0.8 ㎖) 을 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 64 시간 교반하였다. 방랭 후, 반응 용액을 물로 희석하고 석출한 고체를 여과 채취하고, 물로 세정함으로써, 화합물 (I-15) (수량 178 ㎎, 수율 69 ％) 를 무색 고체로서 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 16
5-(3,4-디메톡시페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-16) 의 제조
[화학식 43]
공정 1
상기 화합물 (III-1) 과 동일한 제조 방법에 의해, 화합물 (III-1) 과 2-브로모-1-(3,4-디메톡시페닐)에탄온 (II-16) 으로부터 화합물 (IV-16) (수량 231 ㎎, 수율 73 ％) 을 무색 고체로서 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (IV-16) (230 ㎎, 0.80 m㏖), 시안화칼륨 (83 ㎎, 0.98 m㏖) 및 탄산암모늄 (308 ㎎, 3.20 m㏖) 의 에탄올 (0.8 ㎖) 현탁액에, 28 ％ 암모니아 수용액 (0.8 ㎖) 을 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 65 시간 교반하였다. 방랭 후, 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 메탄올을 첨가하고 석출한 고체를 여과에 의해 제거하였다. 감압하 여과액의 용매를 증류 제거하고, 소량의 클로로포름에 용해하였다. 헥산을 첨가하고 석출한 고체를 여과 채취한 후, 클로로포름으로 세정함으로써, 화합물 (I-16) (수량 46 ㎎, 수율 16 ％) 을 무색 고체로서 얻었다.
실시예 17
5-[4-(tert-부틸)페닐]-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-17) 의 제조
[화학식 44]
공정 1
상기 화합물 (III-1) (330 ㎎, 3.0 m㏖) 의 디메틸술폭시드 (5.5 ㎖) 용액에 탄산칼륨 (950 ㎎, 6.9 m㏖) 과 4'-tert-부틸페나실클로라이드 (II-17) (300 ㎎, 2.7 m㏖) 을 첨가하고, 실온에서 교반하였다. TLC 에 의해 반응의 완결을 확인 후, 반응 용액을 물로 희석하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 에 의해 정제함으로써, 화합물 (IV-17) (수량 723 ㎎, 수율 93 ％) 을 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (IV-17) (300 ㎎, 1.1 m㏖), 시안화칼륨 (83 ㎎, 1.3 m㏖) 및 탄산암모늄 (407 ㎎, 4.2 m㏖) 의 에탄올 (1.1 ㎖) 현탁액에, 28 ％ 암모니아 수용액 (1.1 ㎖) 을 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 64 시간 교반하였다. 방랭 후, 반응 용액을 물로 희석하고 석출한 고체를 여과 채취하고, 클로로포름으로 세정함으로써, 화합물 (I-17) (수량 301 ㎎, 수율 80 ％) 을 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 18
5-(2,4-디메톡시페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-18) 의 제조
[화학식 45]
공정 1
상기 화합물 (IV-11) 과 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (III-1) 과 2',4'-디메톡시페나실브로마이드 (II-18) 로부터 화합물 (IV-18) (수량 594 ㎎, 수율 90 ％) 을 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (IV-18) (300 ㎎, 1.0 m㏖), 시안화칼륨 (82 ㎎, 1.3 m㏖) 및 탄산암모늄 (401 ㎎, 4.2 m㏖) 의 에탄올 (1.0 ㎖) 현탁액에, 28 ％ 암모니아 수용액 (1.0 ㎖) 을 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 64.25 시간 교반하였다. 방랭 후, 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 잔류물에 메탄올을 첨가하고 석출한 고체를 여과에 의해 제거하였다. 감압하 여과액의 용매를 증류 제거한 후, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 에 의해 정제함으로써, 화합물 (I-18) (수량 285 ㎎, 수율 76 ％) 을 얻었다.
실시예 19
5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]-5-[3-(트리플루오로메틸)페닐]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-19) 의 제조
[화학식 46]
공정 1
상기 화합물 (IV-3) 과 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (III-1) 과 3'-(트리플루오로메틸)페나실브로마이드 (II-19) 로부터 화합물 (IV-19) (수량 355 ㎎, 수율 64 ％) 를 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (I-18) 과 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (IV-19) 로부터 화합물 (I-19) (수량 207 ㎎, 수율 56 ％) 를 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 20
5-(2,5-디메톡시페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-20) 의 제조
[화학식 47]
공정 1
상기 화합물 (IV-3) 과 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (III-1) 과 2',5'-디메톡시페나실브로마이드 (II-20) 으로부터 화합물 (IV-20) (수량 595 ㎎, 수율 72 ％) 을 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (I-18) 과 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (IV-20) 으로부터 화합물 (I-20) (수량 170 ㎎, 수율 46 ％) 을 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 21
5-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-21) 의 제조
[화학식 48]
공정 1
상기 화합물 (IV-3) 과 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (III-1) 과 4'-플루오로-2'-메톡시페나실브로마이드 (II-21) 로부터 화합물 (IV-21) (수량 192 ㎎, 수율 60 ％) 을 무색 고체로서 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (IV-21) (192 ㎎, 0.70 m㏖), 시안화칼륨 (55 ㎎, 0.84 m㏖) 및 탄산암모늄 (288 ㎎, 2.80 m㏖) 의 에탄올 (0.7 ㎖) 현탁액에, 28 ％ 암모니아 수용액 (0.7 ㎖) 을 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 63 시간 교반하였다. 방랭 후, 반응 용액을 물로 희석하고 석출한 고체를 여과 채취하였다. 물 및 클로로포름으로 세정함으로써, 화합물 (I-21) (수량 176 ㎎, 수율 73 ％) 을 무색 고체로서 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 22
5-(벤조푸란-5-일)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-22) 의 제조
[화학식 49]
공정 1
상기 화합물 (IV-3) 과 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (III-1) 과 5-(2-브로모아세틸)벤조푸란 (II-22) 로부터 화합물 (IV-22) (수량 224 ㎎, 수율 70 ％) 를 무색 고체로서 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (I-15) 와 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (IV-22) 로부터 화합물 (I-22) (수량 219 ㎎, 수율 77 ％) 를 무색 고체로서 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 23
5-(벤조[b]티오펜-5-일)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-23) 의 제조
[화학식 50]
공정 1
상기 화합물 (IV-2) 와 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (III-1) 과 1-(1-벤조티오펜-5-일)-2-브로모-1-에탄온 (II-23) 으로부터 화합물 (IV-23) (수량 241 ㎎, 수율 76 ％) 을 무색 고체로서 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (I-15) 와 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (IV-23) 으로부터 화합물 (I-23) (수량 262 ㎎, 수율 64 ％) 을 담황색 고체로서 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 24
5-[2-메톡시-5-(트르플루오로메톡시)페닐]-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-24) 의 제조
[화학식 51]
공정 1
상기 화합물 (II-13) 과 동일한 제조 방법에 의해, 2'-메톡시-5'-(트리플루오로메톡시)아세토페논 (XIII-4) 로부터 화합물 (II-24) (수량 820 ㎎, 수율 93 ％) 를 무색 고체로서 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (IV-3) 과 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (III-1) 과 상기 화합물 (II-24) 로부터 화합물 (IV-24) (수량 102 ㎎, 수율 33 ％) 를 얻었다.
공정 3
상기 화합물 (IV-24) (102 ㎎, 0.30 m㏖), 시안화칼륨 (23 ㎎, 0.36 m㏖) 및 탄산암모늄 (115 ㎎, 1.20 m㏖) 의 에탄올 (0.3 ㎖) 현탁액에, 28 ％ 암모니아 수용액 (0.3 ㎖) 을 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 64 시간 교반하였다. 방랭 후, 반응 용액을 물로 희석하고 석출한 고체를 여과 채취하고, 물로 세정하였다. 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 에 의해 정제함으로써, 화합물 (I-24) (수량 45 ㎎, 수율 37 ％) 를 무색 고체로서 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 25
5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]-5-[4-(메틸술포닐)페닐]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-25) 의 제조
[화학식 52]
공정 1
상기 화합물 (IV-3) 과 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (III-1) 과 4'-(메틸술포닐)페나실브로마이드 (II-25) 로부터 화합물 (IV-25) (수량 175 ㎎, 수율 21 ％) 를 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (I-17) 과 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (IV-25) 로부터 화합물 (I-25) (수량 86 ㎎, 수율 63 ％) 를 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 26
5-(크로만-6-일)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-26) 의 제조
[화학식 53]
공정 1
상기 화합물 (IV-15) 와 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (III-1) 과 2-클로로-1-크로만-6-일-에탄온 (II-26) 으로부터 화합물 (IV-26) (수량 256 ㎎, 수율 99 ％) 을 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (I-21) 과 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (IV-26) 으로부터 화합물 (I-26) (수량 81 ㎎, 수율 25 ％) 을 무색 고체로서 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 27
5-(5-클로로-2-메톡시페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-27) 의 제조
[화학식 54]
공정 1
상기 화합물 (IV-13) 과 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (III-1) 과 2-브로모-5'-클로로-2'-메톡시아세토페논 (II-27) 로부터 화합물 (IV-27) (수량 228 ㎎, 수율 72 ％) 을 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (I-17) 과 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (IV-27) 로부터 화합물 (I-27) (수량 61 ㎎, 수율 23 ％) 을 베이지색 고체로서 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 28
5-(3-플루오로페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-28) 의 제조
[화학식 55]
공정 1
상기 화합물 (IV-3) 과 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (III-1) 과 3'-플루오로페나실브로마이드 (II-28) 로부터 화합물 (IV-28) (수량 195 ㎎, 수율 46 ％) 을 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (IV-28) (195 ㎎, 0.80 m㏖), 시안화칼륨 (78 ㎎, 1.19 m㏖) 및 탄산암모늄 (306 ㎎, 3.18 m㏖) 의 에탄올 (0.9 ㎖) 현탁액에, 28 ％ 암모니아 수용액 (0.9 ㎖) 을 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 64 시간 교반하였다. 방랭 후, 반응 용액을 물로 희석하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 감압하에서 용매를 증류 제거한 후, 아세트산에틸-헥산 (2：1) 을 첨가하고, 석출한 고체를 여과 채취함으로써, 화합물 (I-28) (수량 140 ㎎, 수율 56 ％) 을 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 29
5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]-5-(2,4,5-트리플루오로페닐)이미다졸리딘-2,4-디온 (I-29) 의 제조
[화학식 56]
공정 1
상기 화합물 (IV-15) 와 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (III-1) 과 2',4',5'-트리플루오로페나실브로마이드 (II-29) 로부터 화합물 (IV-29) (수량 130 ㎎, 수율 25 ％) 를 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (IV-29) (140 ㎎, 0.50 m㏖), 시안화칼륨 (49 ㎎, 0.75 m㏖) 및 탄산암모늄 (192 ㎎, 2.00 m㏖) 의 에탄올 (0.8 ㎖) 현탁액에, 28 ％ 암모니아 수용액 (0.8 ㎖) 을 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 64 시간 교반하였다. 방랭 후, 반응 용액을 물로 희석하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 에 의해 정제함으로써, 화합물 (I-29) (수량 56 ㎎, 수율 32 ％) 를 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 30
5-(4-플루오로-3-메틸페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-30) 의 제조
[화학식 57]
공정 1
상기 화합물 (III-1) (3 g, 27.49 m㏖) 및 탄산칼륨 (9.50 g, 68.73 m㏖) 의 디메틸술폭시드 (27.5 ㎖) 현탁액에 tert-부틸2-브로모아세테이트 (VI-1) (4.81 ㎖, 32.99 m㏖) 을 첨가하고, 실온에서 3.25 시간 교반하였다. 반응액에 물을 첨가하고 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 화합물 (VII-1) (수량 5.76 g, 수율 94 ％) 을 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (VII-1) (5.76 g, 25.8 m㏖) 의 클로로포름 (26 ㎖) 용액에 트리플루오로아세트산 (26 ㎖) 을 첨가하고 실온에서 15 시간 교반하였다. 감압하 용매를 증류 제거하고, 화합물 (VIII-1) (수량 4.52 g, 수율 99 ％) 을 얻었다.
공정 3
상기 화합물 (VIII-1) (4.31 g, 25.8 m㏖), N,O-디메틸하이드록실아민염산염 (3.02 g, 30.96 m㏖), N-메틸모르폴린 (8.51 ㎖, 77.40 m㏖) 및 1-하이드록시벤조트리아졸·1 수화물 (4.77 g, 30.96 m㏖) 을 N,N-디메틸포름아미드 (25.8 ㎖) 에 용해한 후, 수용성 카르보디이미드염산염 (5.94 g, 30.96 m㏖) 을 첨가하고, 실온에서 194.25 시간 교반하였다. 반응액에 물을 첨가하고 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 로 정제함으로써 화합물 (IX-1) (수량 4.63 g, 수율 85 ％) 을 백색 고체로서 얻었다.
공정 4
－78 ℃ 로 냉각시킨 상기 화합물 (IX-1) 의 테트라하이드로푸란 (10 ㎖) 용액에, 4-플루오로-3-메틸페닐마그네슘브로마이드 (X-1) 의 1.0 ㏖/ℓ 테트라하이드로푸란 용액 (1.1 ㎖, 1.1 m㏖) 을 적하하고, －78 ℃ 에서 30 분간 교반하였다. 반응액에 2 ㏖/ℓ 염산을 첨가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압하에서 용매를 증류 제거하였다. 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 로 정제하고, 화합물 (IV-30) (수량 90 ㎎, 수율 34 ％) 을 무색 유상물로서 얻었다.
공정 5
상기 화합물 (IV-17) 과 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (IV-30) 으로부터 화합물 (I-30) (수량 30 ㎎, 수율 26 ％) 을 무색 고체로서 얻었다.
실시예 31
5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]-5-[4-(피리딘-4-일)페닐]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-31) 의 제조
[화학식 58]
공정 1
상기 화합물 (IV-11) (400 ㎎, 1.32 m㏖), (4-피리딘)사이클릭트리올보레이트나트륨염 (320 ㎎, 1.44 m㏖) 및 트리페닐포스핀 (34 ㎎, 0.13 m㏖) 의 N,N-디메틸포름아미드 (6.5 ㎖) 용액을 탈기한 후, 아르곤 분위기하, 아세트산팔라듐 (15 ㎎, 0.065 m㏖), 요오드화구리 (50 ㎎, 0.26 m㏖) 를 첨가하고, 90 ℃ 에서 15.5 시간 가열하였다. 반응액에 포화 염화암모늄 수용액을 첨가하고 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 감압하에서 용매를 증류 제거한 후, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하고, 화합물 (IV-31) (수량 109 ㎎, 수율 22 ％) 을 얻었다.
공정 2
오토클레이브 용기에 상기 화합물 (IV-31) (90 ㎎, 0.30 m㏖), 시안화칼륨 (23 ㎎, 0.36 m㏖), 탄산암모늄 (114 ㎎, 1.18 m㏖), 에탄올 (0.3 ㎖) 및 포화 암모니아수 (0.3 ㎖) 를 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 63.75 시간 교반하였다. 감압하에서 용매를 증류 제거한 후, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하고, 화합물 (I-31) (수량 42 ㎎, 수율 38 ％) 을 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 32
5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]-5-[4-(피리딘-3-일)페닐]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-32) 의 제조
[화학식 59]
공정 1
상기 화합물 (IV-11) (500 ㎎, 1.63 m㏖), 3-피리딜보론산 (221 ㎎, 1.80 m㏖) 및 인산3칼륨 (555 ㎎, 2.61 m㏖) 의 1,4-디옥산 (3.3 ㎖) 현탁액을 탈기한 후, 아르곤 분위기하, 테트라키스트리페닐포스핀팔라듐 (94 ㎎, 0.082 m㏖) 을 첨가하고, 90 ℃ 에서 22.5 시간 가열하였다. 반응액에 물을 첨가하고 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 감압하에서 용매를 증류 제거한 후, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하고, 화합물 (IV-32) (수량 232 ㎎, 수율 47 ％) 를 얻었다.
오토클레이브 용기에 상기 화합물 (IV-32) (196 ㎎, 0.64 m㏖), 시안화칼륨 (50 ㎎, 0.77 m㏖), 탄산암모늄 (248 ㎎, 2.58 m㏖), 에탄올 (0.64 ㎖) 및 포화 암모니아수 (0.64 ㎖) 를 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 66 시간 교반하였다. 반응액에 물을 첨가하고, 석출한 고체를 여과 채취함으로써, 화합물 (I-32) (수량 184 ㎎, 수율 76 ％) 를 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 33
5-[4-(3,3-디메틸부트-1-인-1-일)페닐]-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-33) 의 제조
[화학식 60]
공정 1
상기 화합물 (IV-11) (500 ㎎, 1.63 m㏖), 3,3-디메틸부트-1-인 (222 ㎕, 1.80 m㏖) 및 트리에틸아민 (250 ㎕, 1.80 m㏖) 의 테트라하이드로푸란 (3.3 ㎖) 용액을 탈기한 후, 아르곤 분위기하, 테트라키스트리페닐포스핀팔라듐 (94 ㎎, 0.082 m㏖) 및 요오드화구리 (31 ㎎, 0.16 m㏖) 를 첨가하고 22.25 시간 가열 환류하였다. 반응액에 물을 첨가하고 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 감압하에서 용매를 증류 제거한 후, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하고, 상기 화합물 (IV-33) (수량 531 ㎎, 정량적) 을 얻었다.
상기 화합물 (I-32) 와 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (IV-33) 으로부터 화합물 (I-33) (수량 270 ㎎, 수율 73 ％) 을 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 34
5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]-5-[4-(p-톨릴옥시)페닐]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-34) 의 제조
[화학식 61]
공정 1
상기 화합물 (IV-15) (150 ㎎, 0.61 m㏖), 4-메틸페놀 (66 ㎎, 0.61 m㏖), 탄산칼륨 (127 ㎎, 0.92 m㏖) 의 N,N-디메틸아세트아미드 현탁액을 3 시간 가열 환류하였다. 방랭 후, 반응 용액을 물로 희석하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 에 의해 정제함으로써, 화합물 (IV-34) (수량 122 ㎎, 수율 60 ％) 를 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (IV-34) (122 ㎎, 0.37 m㏖), 시안화칼륨 (29 ㎎, 0.44 m㏖) 및 탄산암모늄 (141 ㎎, 1.46 m㏖) 의 에탄올 (0.35 ㎖) 현탁액에, 28 ％ 암모니아 수용액 (0.35 ㎖) 을 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 63 시간 교반하였다. 방랭 후, 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 메탄올을 첨가하고 석출한 고체를 흡인 여과에 의해 제거하였다. 감압하, 여과액의 용매를 증류 제거한 후, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 에 의해 정제함으로써, 화합물 (I-34) (수량 56 ㎎, 수율 38 ％) 를 무색 고체로서 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 35
5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]-5-[4-(o-톨릴옥시)페닐]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-35) 의 제조
[화학식 62]
공정 1
상기 화합물 (IV-34) 와 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (IV-15) 로부터 화합물 (IV-35) (수량 188 ㎎, 수율 92 ％) 를 녹색 유상물로서 얻었다.
상기 화합물 (IV-35) (188 ㎎, 0.56 m㏖), 시안화칼륨 (44 ㎎, 0.68 m㏖) 및 탄산암모늄 (217 ㎎, 2.27 m㏖) 의 에탄올 (0.6 ㎖) 현탁액에, 28 ％ 암모니아 수용액 (0.6 ㎖) 을 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 63 시간 교반하였다. 방랭 후, 반응 용액을 물로 희석, 석출한 고체를 여과 채취하였다. 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 에 의해 정제함으로써, 화합물 (I-35) (수량 101 ㎎, 수율 45 ％) 를 무색 고체로서 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 36
5-[4-(시클로헥세-2-엔-1-일옥시)페닐]-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-36) 의 제조
[화학식 63]
공정 1
상기 화합물 (III-1) (681 ㎎, 6.2 m㏖) 의 N,N-디메틸포름아미드 (20 ㎖) 용액에, 탄산세슘 (2.2 g, 6.9 m㏖) 및 1-[4-(벤질옥시)페닐]-2-브로모에탄온 (II-30) (2.0 g, 6.6 m㏖) 을 첨가하고, 실온에서 2.5 시간 교반하였다. 빙랭하에서 물을 첨가하고 석출한 고체를 여과 채취하고, 물로 세정함으로써 화합물 (IV-36) (수량 1.9 g, 수율 89 ％) 을 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (IV-36) (1.3 g, 3.9 m㏖) 의 클로로포름 (10 ㎖) 용액에 트리플루오로아세트산 (10 ㎖) 을 첨가하고, 14 시간 가열 환류하였다. 방랭 후, 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 아세트산에틸을 첨가하고 석출한 고체를 여과 채취하고, 헥산으로 세정함으로써, 화합물 (IV-37) (수량 813 ㎎, 수율 86 ％) 을 얻었다.
공정 3
상기 화합물 (IV-37) (100 ㎎, 0.41 m㏖) 과 탄산칼륨 (85 ㎎, 0.62 m㏖) 의 N,N-디메틸포름아미드 (5.0 ㎖) 현탁액에 3-브로모시클로헥센 (50 ㎕, 0.43 m㏖) 을 첨가하고, 실온에서 23 시간 교반하였다. 반응 용액을 물로 희석하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 에 의해 정제함으로써, 화합물 (IV-38) (수량 115 ㎎, 수율 86 ％) 을 황색 아모르퍼스로서 얻었다.
공정 4
상기 화합물 (I-34) 와 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (IV-38) 로부터 화합물 (I-36) (수량 77 ㎎, 수율 52 ％) 을 무색 고체로서 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 37
5-[4-(시클로헥실옥시)페닐]-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-37) 의 제조
[화학식 64]
공정 1
상기 화합물 (I-36) (50 ㎎, 0.13 m㏖) 의 메탄올 (2.0 ㎖) 용액에, 10 ％ 팔라듐 탄소 (20 mg) 를 첨가하고, 수소 분위기하 4 시간 교반하였다. 반응액을 셀라이트 여과하고, 메탄올로 세정하였다. 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 에 의해 정제함으로써, 화합물 (I-37) (36 ㎎, 수율 72 ％) 을 무색 고체로서 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 38
5-[4-(시클로헥세-2-엔-1-일옥시)-1-메틸페닐]-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-38) 의 제조
[화학식 65]
공정 1
1-(4-하이드록시-3-메틸페닐)에탄온 (XIII-4) (1.2 g, 8.0 m㏖) 의 N,N-디메틸포름아미드 (10 ㎖) 용액에, 60 ％ 수소화나트륨 (384 ㎎, 9.6 m㏖) 을 첨가하고, 실온에서 30 분 교반하였다. 3-브로모시클로헥센 (1.5 g, 9.6 m㏖) 을 첨가하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 빙수를 첨가하고 반응을 정지하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 물로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 에 의해 정제함으로써, 화합물 (XIII-5) (수량 1.71 g, 수율 88 ％) 를 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (XIII-5) (1.0 g, 4.1 m㏖) 의 테트라하이드로푸란 (40 ㎖) 용액에, 페닐트리메틸암모늄트리브로마이드 (1.7 g, 4.0 m㏖) 를 첨가하고 실온에서 2 시간 교반 후, 4 시간 가열 환류하였다. 방랭 후, 석출한 고체를 여과하고, 감압하에서 여과액의 용매를 증류 제거함으로써 미정제 화합물 (II-31) (수량 1.2 g) 을 얻었다.
상기 화합물 (III-1) (407 ㎎, 3.7 m㏖) 의 N,N-디메틸포름아미드 (7.5 ㎖) 용액에, 탄산세슘 (1.5 g, 4.1 m㏖) 및 미정제 상기 화합물 (II-31) (1.2 g) 을 첨가하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 용액을 물로 희석 후, 아세트산에틸로 추출하고, 유기층을 포화 식염수로 세정하였다. 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 에 의해 정제함으로써, 화합물 (IV-39) (수량 449 ㎎, 2 단계, 통산 수율 33 ％) 를 얻었다.
공정 4
상기 화합물 (IV-39) (449 ㎎, 1.3 m㏖), 시안화칼륨 (130 ㎎, 2.0 m㏖) 및 탄산암모늄 (511 ㎎, 5.3 m㏖) 의 에탄올 (1.5 ㎖) 현탁액에, 28 ％ 암모니아 수용액 (1.5 ㎖) 을 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 교반하였다. 방랭 후, 반응액에 물을 첨가하고 아세트산에틸로 추출 후, 유기층을 물로 세정하였다. 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압하에서 용매를 증류 제거함으로써, 화합물 (I-38) (수량 410 ㎎, 수율 76 ％) 을 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 39
5-[4-(시클로펜틸옥시)-3-메틸페닐]-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-39) 의 제조
[화학식 66]
공정 1
상기 화합물 (XIII-6) (800 ㎎, 5.3 m㏖) 의 N,N-디메틸포름아미드 (8.0 ㎖) 용액에, 60 ％ 수소화나트륨 (235 ㎎, 5.9 m㏖) 을 첨가하고 실온에서 교반하였다. 요오드화시클로펜틸 (1.2 g, 5.9 m㏖) 을 첨가하고 60 ℃ 에서 3 시간 교반 후, 80 ℃ 에서 4 시간 교반하였다. 빙수를 첨가하고 반응을 정지 후, 아세트산에틸로 추출하고, 유기층을 물로 세정하였다. 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 에 의해 정제함으로써, 화합물 (XIII-7) (수량 635 ㎎, 수율 52 ％) 을 얻었다.
실시예 38 기재의 상기 화합물 (I-38) 과 동일한 제조 방법 (실시예 38 의 공정 2 ∼ 4) 에 의해, 상기 화합물 (XIII-7) 로부터 3 단계로 화합물 (I-39) (수량 490 ㎎, 3 단계, 통산 수율 45 ％) 를 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 40
5-(4-벤질페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-40) 의 제조
[화학식 67]
공정 1
상기 화합물 (III-1) (180 ㎎, 1.6 m㏖) 의 N,N-디메틸포름아미드 (5.0 ㎖) 용액에, 탄산세슘 (590 ㎎, 1.8 m㏖) 및 1-(4-벤질페닐)-2-브로모에탄온 (II-33) (500 ㎎, 1.7 m㏖) 을 첨가하고, 실온에서 3 시간 교반하였다. 반응 용액에 물을 첨가함으로써 석출하는 고체를 여과 채취하고, 물로 세정함으로써, 화합물 (IV-41) (수량 475 ㎎, 수율 91 ％) 을 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (IV-41) (475 ㎎, 1.5 m㏖), 시안화칼륨 (117 ㎎, 1.8 m㏖) 및 탄산암모늄 (575 ㎎, 6.0 m㏖) 의 에탄올 (1.5 ㎖) 현탁액에, 28 ％ 암모니아 수용액 (1.5 ㎖) 을 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 64 시간 교반하였다. 방랭 후, 반응액에 물을 첨가하고 아세트산에틸로 추출 후, 유기층을 물로 세정하였다. 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 에 의해 정제함으로써, 화합물 (I-40) (수량 466 ㎎, 수율 80 ％) 을 무색 고체로서 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 41
5-[4-(4-플루오로벤질)페닐]-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-41) 의 제조
[화학식 68]
공정 1
빙랭하, 1-벤질-4-플루오로벤젠 (XII-1) (1.0 g, 5.4 m㏖) 의 디클로로메탄 (5.4 ㎖) 용액에, 클로로아세틸클로라이드 (427 ㎕, 5.4 m㏖) 및 염화알루미늄 (716 ㎎, 5.4 m㏖) 을 첨가하고 15 분간 교반하였다. 반응 용액에 물을 첨가하고 클로로포름으로 추출 후, 포화 중조수, 포화 식염수로 순차 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 감압하에서 용매를 증류 제거함으로써 미정제 화합물 (II-34) 를 얻었다.
공정 2
미정제 상기 화합물 (II-34) 를 N,N-디메틸포름아미드 (3.0 ㎖) 에 용해시키고, 탄산칼륨 (1.9 g, 13.4 m㏖) 을 첨가한 후, 상기 화합물 (III-1) (586 ㎎, 5.4 m㏖) 의 N,N-디메틸포름아미드 (2.4 ㎖) 용액을 적하하고, 실온에서 2 시간 교반하였다. 반응 용액을 물로 희석한 후, 아세트산에틸로 추출하고, 유기층을 포화 식염수로 세정하였다. 황산나트륨으로 건조 후, 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 에 의해 정제함으로써, 화합물 (IV-43) (수량 1.5 g, 2 단계, 수율 84 ％) 을 얻었다.
공정 3
상기 화합물 (IV-43) (1.4 g, 4.2 m㏖), 시안화칼륨 (326 ㎎, 5.0 m㏖) 및 탄산암모늄 (1.6 g, 16.7 m㏖) 의 에탄올 (4.2 ㎖) 현탁액에, 물 (4.2 ㎖) 을 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 16 시간 교반하였다. 방랭 후, 반응액에 물을 첨가하고 석출한 고체를 여과 채취하고, 클로로포름으로 세정함으로써, 화합물 (I-41) (수량 1.6 g, 수율 95 ％) 을 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 42
5-[4-(2H-테트라졸-5-일)페닐]-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-42) 의 제조
[화학식 69]
공정 1
상기 화합물 (I-3) (221 ㎎, 0.69 m㏖), 염화암모늄 (110 ㎎, 2.06 m㏖) 및 아지화나트륨 (124 ㎎, 2.06 m㏖) 에 N,N-디메틸포름아미드 (3.4 ㎖) 를 첨가하고 80 ℃ 에서 1 시간, 110 ℃ 에서 12.5 시간 가열 교반하였다. 반응액을 방랭 후, 2 ㏖/ℓ 염산을 첨가하고 석출한 고체를 여과 채취하였다. 고체를 용해 후, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하고, 화합물 (I-42) (수량 101 ㎎, 수율 40 ％) 를 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 43
5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]-5-(4-비닐페닐)이미다졸리딘-2,4-디온 (I-43) 의 제조
[화학식 70]
공정 1
상기 화합물 (IV-11) (400 ㎎, 1.3 m㏖), 4,4,5,5-테트라메틸-2-비닐-1,3,2-디옥사보롤란 (242 ㎎, 1.6 m㏖) 및 인산3칼륨 (695 ㎎, 3.3 m㏖) 의 1,4-디옥산 (6.5 ㎖) 현탁액을 탈기한 후, 아르곤 분위기하, 테트라키스트리페닐포스핀팔라듐 (76 ㎎, 0.066 m㏖) 을 첨가하고 90 ℃ 에서 가열 교반하였다. TLC 로 반응 종료를 확인 후, 반응액에 물을 첨가하고 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압하에서 용매를 증류 제거하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔) 로 정제하고, 화합물 (IV-44) (수량 253 ㎎, 수율 76 ％) 를 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (I-17) 과 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (IV-44) 로부터 화합물 (I-43) (수량 182 ㎎, 수율 59 ％) 을 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 44
5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]-5-(3,4,5-트리플루오로페닐)이미다졸리딘-2,4-디온 (I-44) 의 제조
[화학식 71]
공정 1
상기 화합물 (IV-3) 과 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (III-1) 과 2-브로모-3',4',5'-트리플루오로아세토페논 (II-35) 로부터 화합물 (IV-45) (수량 189 ㎎, 수율 19 ％) 를 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (I-11) 과 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (IV-45) 로부터 화합물 (I-44) (수량 158 ㎎, 수율 70 ％) 를 담황색 고체로서 얻었다.
실시예 45
5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]-5-(4-프로필페닐)이미다졸리딘-2,4-디온 (I-45) 의 제조
[화학식 72]
공정 1
상기 화합물 (II-31) 과 동일한 제조 방법에 의해, 4'-프로필아세토페논 (XIII-8) 로부터 화합물 (II-36) (수량 743 ㎎, 수율 ＞ 99 ％) 을 무색 유상물로서 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (IV-4) 와 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (III-1) 과 화합물 (II-36) 으로부터 화합물 (IV-46) (수량 294 ㎎, 수율 69 ％) 을 얻었다.
공정 3
상기 화합물 (I-24) 와 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (IV-46) 으로부터 화합물 (I-45) (수량 21 ㎎, 수율 5.8 ％) 를 무색 고체로서 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 46
5-[(2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]-5-페닐이미다졸리딘-2,4-디온 (I-46) 의 제조
[화학식 73]
공정 1
피리딘-2-올 (V-1) (300 ㎎, 3.15 m㏖) 및 탄산세슘 (1.13 g, 3.47 m㏖) 에 N,N-디메틸포름아미드 (6.3 ㎖) 를 첨가한 후, 상기 화합물 (II-1) (691 ㎎, 3.47 m㏖) 을 첨가하고 실온에서 1 시간 교반하였다. 반응액에 물을 첨가하고 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 감압하에서 용매를 증류 제거한 후, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하고, 화합물 (IV-47) (수량 602 ㎎, 수율 90 ％) 을 얻었다.
공정 2
오토클레이브 용기에 상기 화합물 (IV-47) (300 ㎎, 1.41 m㏖), 시안화칼륨 (110 ㎎, 1.69 m㏖), 탄산암모늄 (542 ㎎, 5.64 m㏖) 및 에탄올 (1.4 ㎖), 물 (1.4 ㎖) 을 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 21.5 시간 교반하였다. 반응액에 물을 첨가하고, 석출한 고체를 여과 채취함으로써, 화합물 (I-46) (수량 226 ㎎, 수율 57 ％) 을 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 47
5-(4-메톡시페닐)-5-[(2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-47) 의 제조
[화학식 74]
공정 1
상기 화합물 (IV-47) 과 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (V-1) 및 상기 화합물 (II-2) 로부터 화합물 (IV-48) (수량 384 ㎎, 수율 90 ％) 을 얻었다.
공정 2
오토클레이브 용기에 상기 화합물 (IV-48) (300 ㎎, 1.23 m㏖), 시안화칼륨 (96 ㎎, 1.48 m㏖), 탄산암모늄 (474 ㎎, 4.93 m㏖) 및 에탄올 (1.2 ㎖), 포화 암모니아수 (1.2 ㎖) 를 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 63.75 시간 교반하였다. 반응액에 물을 첨가하고, 석출한 고체를 여과 채취하여 클로로포름으로 세정함으로써, 화합물 (I-47) (수량 112 ㎎, 수율 29 ％) 을 얻었다.
실시예 48
5-[(3-플루오로-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]-5-(4-플루오로페닐)이미다졸리딘-2,4-디온 (I-48) 의 제조
[화학식 75]
공정 1
3-플루오로피리딘-2-올 (V-2) (300 ㎎, 3.15 m㏖) 및 탄산세슘 (1.13 g, 3.47 m㏖) 에 아세톤 (6.3 ㎖) 을 첨가한 후, 2-클로로-1-(4-플루오로페닐)에탄온 (II-37) (691 ㎎, 3.47 m㏖) 을 첨가하고 1 시간 가열 환류하였다. 반응액을 여과 후, 감압하에서 용매를 증류 제거하였다. 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하고, 화합물 (IV-49) (수량 395 ㎎, 수율 90 ％) 를 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (I-46) 과 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (IV-49) 로부터 화합물 (I-48) (수량 166 ㎎, 수율 43 ％) 을 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 49
5-([1,1'-비페닐]-4-일)-5-[(3-플루오로-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-49) 의 제조
[화학식 76]
공정 1
상기 화합물 (V-2) (226 ㎎, 2.00 m㏖) 및 탄산칼륨 (628 ㎎, 4.54 m㏖) 에 디메틸술폭시드 (3.6 ㎖) 를 첨가한 후, 1-([1,1'-비페닐]-4-일)-2-브로모에탄온 (II-38) (500 ㎎, 1.87 m㏖) 을 첨가하고 실온에서 1.25 시간 교반하였다. 반응액에 물을 첨가하고, 석출한 고체를 여과 채취하고, 화합물 (IV-50) (수량 665 ㎎, 정량적) 을 얻었다.
공정 2
오토클레이브 용기에 상기 화합물 (IV-50) (300 ㎎, 0.98 m㏖), 시안화칼륨 (76 ㎎, 1.17 m㏖), 탄산암모늄 (375 ㎎, 3.90 m㏖) 및 에탄올 (0.98 ㎖), 물 (0.98 ㎖) 을 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 43 시간 교반하였다. 반응액에 물을 첨가하고, 석출한 고체를 여과 채취하여 클로로포름으로 세정함으로써, 화합물 (I-49) (수량 176 ㎎, 수율 48 ％) 를 얻었다.
실시예 50
5-[(3-클로로-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]-5-페닐이미다졸리딘-2,4-디온 (I-50) 의 제조
[화학식 77]
공정 1
상기 화합물 (IV-47) 과 동일한 제조 방법에 의해, 3-클로로피리딘-2-올 (V-3) 및 상기 화합물 (II-1) 로부터 화합물 (IV-51) (수량 529 ㎎, 수율 92 ％) 을 얻었다.
공정 2
오토클레이브 용기에 상기 화합물 (IV-51) (300 ㎎, 1.21 m㏖), 시안화칼륨 (95 ㎎, 1.45 m㏖), 탄산암모늄 (465 ㎎, 4.84 m㏖) 및 에탄올 (1.2 ㎖), 물 (1.2 ㎖) 을 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 62.25 시간 교반하였다. 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피로 정제함으로써, 화합물 (I-50) (수량 323 ㎎, 수율 84 ％) 을 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 51
5-(벤조푸란-2-일)-5-[(3-클로로-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-51) 의 제조
[화학식 78]
공정 1
상기 화합물 (IV-50) 과 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (V-3) 및 1-(벤조푸란-2-일)-2-브로모에탄온 (II-39) 로부터 화합물 (IV-52) (수량 277 ㎎, 수율 50 ％) 를 얻었다.
오토클레이브 용기에 상기 화합물 (IV-52) (250 ㎎, 0.87 m㏖), 시안화칼륨 (68 ㎎, 1.04 m㏖), 탄산암모늄 (334 ㎎, 3.48 m㏖) 및 에탄올 (0.87 ㎖), 포화 암모니아수 (0.87 ㎖) 를 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 64.75 시간 교반하였다. 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피로 정제함으로써, 화합물 (I-51) (수량 163 ㎎, 수율 52 ％) 을 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 52
5-[(3-브로모-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]-5-(4-메톡시페닐)이미다졸리딘-2,4-디온 (I-52) 의 제조
[화학식 79]
공정 1
3-브로모피리딘-2-올 (V-4) (2.0 g, 11.49 m㏖) 및 탄산세슘 (4.49 g, 13.79 m㏖) 에 N,N-디메틸포름아미드 (23 ㎖) 를 첨가한 후, 상기 화합물 (II-2) (2.90 g, 12.64 m㏖) 를 첨가하고 실온에서 1.75 시간 교반하였다. 반응액에 물을 첨가하고 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 감압하에서 용매를 증류 제거한 후, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하고, 화합물 (IV-53) (수량 2.09 g, 수율 56 ％) 을 얻었다.
상기 화합물 (I-47) 과 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (IV-53) 으로부터 화합물 (I-52) (수량 144 ㎎, 수율 39 ％) 를 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
실시예 53
5-[(3-에틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]-5-(4-메톡시페닐)이미다졸리딘-2,4-디온 (I-53) 의 제조
[화학식 80]
공정 1
상기 화합물 (IV-53) (500 ㎎, 1.55 m㏖), 에틸보론산 (126 ㎎, 1.71 m㏖) 및 인산3칼륨 (822 ㎎, 3.88 m㏖) 의 1,4-디옥산 (7.8 ㎖) 현탁액을 탈기하였다. 아르곤 분위기하 테트라키스트리페닐포스핀팔라듐 (90 ㎎, 0.078 m㏖) 을 첨가하고 90 ℃ 에서 17 시간 가열 교반하였다. 반응액에 물을 첨가하고 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 감압하에서 용매를 증류 제거한 후, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하고, 화합물 (IV-54) (수량 286 ㎎, 수율 68 ％) 를 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (I-47) 과 동일한 제조 방법에 의해, 상기 화합물 (IV-54) 로부터 화합물 (I-53) (수량 113 ㎎, 수율 31 ％) 을 얻었다.
실시예 54
5-(3-하이드록시페닐)-5-[(3-메틸-2-옥시피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (I-54) 의 제조
[화학식 81]
공정 1
1-(2-(3-(벤질옥시)페닐)-2-옥소에틸)-3-메틸피리딘-2(1H)-온 (IV-55) (361 ㎎, 1.08 m㏖) 의 클로로포름 (1 ㎖) 용액에 트리플루오로아세트산 (1 ㎖) 을 첨가하고 실온에서 14.5 시간 교반 후, 23.5 시간 가열 환류하였다. 반응액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 감압하에서 용매를 증류 제거한 후, 클로로포름을 첨가하고 석출한 고체를 여과 채취함으로써, 화합물 (IV-56) (수량 116 ㎎, 수율 44 ％) 으로 얻었다.
공정 2
상기 화합물 (IV-56) (100 ㎎, 0.41 m㏖), 시안화칼륨 (32 ㎎, 0.49 m㏖), 탄산암모늄 (158 ㎎, 1.64 m㏖) 및 에탄올 (0.41 ㎖), 포화 암모니아수 (0.41 ㎖) 를 첨가하여 밀폐하고, 100 ℃ 에서 65 시간 교반하였다. 감압하에서 용매를 증류 제거하고, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피로 정제함으로써, 화합물 (I-54) (수량 93 ㎎, 수율 72 ％) 를 얻었다. 물성값을 이하에 나타낸다.
화합물 I-7 과 동일한 제조 방법으로, 화합물 I-55 를 합성하였다. 화합물의 구조와 물성값을 표 1 에 나타낸다.
화합물 I-10 과 동일한 제조 방법으로, 화합물 I-145, I-146, I-147, I-148, I-151, I-153, I-154, I-155, I-156, I-157 을 합성하였다. 각 화합물의 구조와 물성값을 표 12 및 표 13 에 나타낸다.
화합물 I-11 과 동일한 제조 방법으로, 화합물 I-56, I-57 을 합성하였다. 각 화합물의 구조와 물성값을 표 1 에 나타낸다.
화합물 I-15 와 동일한 제조 방법으로, 화합물 I-59, I-77 을 합성하였다. 각 화합물의 구조와 물성값을 표 1 및 표 3 에 나타낸다.
화합물 I-16 과 동일한 제조 방법으로, 화합물 I-60 을 합성하였다. 화합물의 구조와 물성값을 표 1 에 나타낸다.
화합물 I-18 과 동일한 제조 방법으로, 화합물 I-61 을 합성하였다. 화합물의 구조와 물성값을 표 1 에 나타낸다.
화합물 I-19 와 동일한 제조 방법으로, 화합물 I-69, I-70 을 합성하였다. 각 화합물의 구조와 물성값을 표 2 에 나타낸다.
화합물 I-20 과 동일한 제조 방법으로, 화합물 I-105 를 합성하였다. 화합물의 구조와 물성값을 표 7 에 나타낸다.
화합물 I-21 과 동일한 제조 방법으로, 화합물 I-65, I-67 을 합성하였다. 각 화합물의 구조와 물성값을 표 2 에 나타낸다.
화합물 I-22 와 동일한 제조 방법으로, 화합물 I-76, I-120 을 합성하였다. 각 화합물의 구조와 물성값을 표 3 및 표 8 에 나타낸다.
화합물 I-24 와 동일한 제조 방법으로, 화합물 I-66, I-119 를 합성하였다. 각 화합물의 구조와 물성값을 표 2 및 표 8 에 나타낸다.
화합물 I-25 와 동일한 제조 방법으로, 화합물 I－78, I-79, I-89, I-125, I-126, I-127, I-128 을 합성하였다. 각 화합물의 구조와 물성값을 표 3, 표 5 및 표 9 에 나타낸다.
화합물 I-31 과 동일한 제조 방법으로, 화합물 I-92, I-93, I-94, I-95 를 합성하였다. 각 화합물의 구조와 물성값을 표 5 에 나타낸다.
화합물 I-32 와 동일한 제조 방법으로, 화합물 I-62, I-72, I-73, I-74, I-75, I-90, I-91, I-96, I-109 를 합성하였다. 각 화합물의 구조와 물성값을 표 1, 표 2, 표 3, 표 5 및 표 7 에 나타낸다.
화합물 I-33 과 동일한 제조 방법으로, 화합물 I-58, I-63, I-71, I-106, I-110 을 합성하였다. 각 화합물의 구조와 물성값을 표 1, 표 2 및 표 7 에 나타낸다.
화합물 I-34 와 동일한 제조 방법으로, 화합물 I-64, I-68, I-80, I-81, I-86, I-97, I-100, I-113 을 합성하였다. 각 화합물의 구조와 물성값을 표 2, 표 3, 표 4, 표 6 및 표 8 에 나타낸다.
화합물 I-35 와 동일한 제조 방법으로, 화합물 I-82, I-83, I-84, I-85, I-87, I-98, I-99, I-101, I-102, I-103, I-104, I-111, I-112, I-114, I-122, I-123 을 합성하였다. 각 화합물의 구조와 물성값을 표 4, 표 6, 표 7, 표 8 및 표 9 에 나타낸다.
화합물 I-36 과 동일한 제조 방법으로, 화합물 I-88 을 합성하였다. 화합물의 구조와 물성값을 표 4 에 나타낸다.
화합물 I-37 과 동일한 제조 방법으로, 화합물 I-107, I-115, I-116, I-117, I-118, I-131 을 합성하였다. 각 화합물의 구조와 물성값을 표 7, 표 8 및 표 10 에 나타낸다.
화합물 I-39 와 동일한 제조 방법으로, 화합물 I-124, I-129 를 합성하였다. 각 화합물의 구조와 물성값을 표 9 및 표 10 에 나타낸다.
화합물 I-40 과 동일한 제조 방법으로, 화합물 I-149, I-150, I-152 를 합성하였다. 각 화합물의 구조와 물성값을 표 13 에 나타낸다.
화합물 I-41 과 동일한 제조 방법으로, 화합물 I-130 을 합성하였다. 화합물의 구조와 물성값을 표 10 에 나타낸다.
화합물 I-43 과 동일한 제조 방법으로, 화합물 I-108 을 합성하였다. 화합물의 구조와 물성값을 표 7 에 나타낸다.
화합물 I-45 와 동일한 제조 방법으로, 화합물 I-121 을 합성하였다. 화합물의 구조와 물성값을 표 9 에 나타낸다.
화합물 I-46 과 동일한 제조 방법으로, 화합물 I-132, I-133, I-134, I-137, I-138, I-139, I-140 을 합성하였다. 각 화합물의 구조와 물성값을 표 11 및 표 12 에 나타낸다.
화합물 I-47 과 동일한 제조 방법으로, 화합물 I-141, I-142 를 합성하였다. 각 화합물의 구조와 물성값을 표 12 에 나타낸다.
화합물 I-49 와 동일한 제조 방법으로, 화합물 I-135 를 합성하였다. 화합물의 구조와 물성값을 표 11 에 나타낸다.
화합물 I-50 과 동일한 제조 방법으로, 화합물 I-136, I-143 을 합성하였다. 각 화합물의 구조와 물성값을 표 11 및 표 12 에 나타낸다.
화합물 I-53 과 동일한 제조 방법으로, 화합물 I-144 를 합성하였다. 화합물의 구조와 물성값을 표 12 에 나타낸다.
실시예 55
(＋)-5-(3,4-디플루오로페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 및 (－)-5-(3,4-디플루오로페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온의 제조
[화학식 82]
(식 중, 아스테리스크 (*) 는, 광학적으로 순수한 형태인 것을 의미한다.)
고속 액체 크로마토그래프 (LaChrom Elite, 히타치 하이테크놀로지즈 (주)) 에 분취용 칼럼 (CHIRALPAK AD) 을 장착하고, 노르말헥산-에탄올 (30：70) 을 칼럼 온도 40 ℃, 유속 8 ㎖/min 으로 1 시간 통액 (通液) 시키고, 평형화하였다. 실시예 10 에서 제조한 화합물 (I-10；라세미체, (±)-I-10 이라고도 기재한다) (14 mg) 의 노르말헥산-에탄올 (30：70, 2 ㎖) 용액을 주입후, UV 검출기를 관찰하면서, 제 1 피크 (대략 12.5 분 후 ∼ 대략 15.5 분 후) 및 제 2 피크 (대략 18 분 후 ∼ 대략 23 분 후) 를 각각 분취하였다. 동일한 조작을 반복한 후, 각각 감압하 용매를 증류 제거하였다. 제 1 피크를 나타내는 화합물로서 (＋)-5-(3,4-디플루오로페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온((＋)-I-10) (수량 86 ㎎, 광학 순도 > 99.9 ％ee) 및 제 2 피크를 나타내는 화합물로서 (－)-5-(3,4-디플루오로페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온 (수량 84 ㎎, 광학 순도 99.8 ％ee) 을 얻었다.
각각의 물성값을 이하에 나타낸다.
(＋)-5-(3,4-디플루오로페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온((＋)-I-10)
HPLC 유지 시간 14.4 분
(분석 조건, 칼럼：CHIRALPAK AD-H 4.6 φ × 250 ㎜, 이동상：n-헥산：에탄올 = 40：60, 유속：0.5 ㎖/min, 칼럼 온도：30 ℃, 검출 파장：254 ㎚)
(－)-5-(3,4-디플루오로페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온((－)-I-10)
HPLC 유지 시간 33.8 분
(분석 조건, 칼럼：CHIRALPAK AD-H 4.6φ × 250 ㎜, 이동상：n-헥산：에탄올 = 40：60, 유속：0.5 ㎖/min, 칼럼 온도：30 ℃, 검출 파장：254 ㎚)
(시험예 1) TACE (ADAM17) 저해 실험
상기 실시예에 있어서 얻어진 피리돈 유도체의 TACE 에 대한 저해 작용의 유무를 조사하였다.
TACE 의 염기 배열은 모스 (Moss) 등에 의해 보고되어 있다 (Moss, M. L. et al., Nature 1997년, 385 권, 733-736 페이지). 이 정보를 기초로 THP-1 세포 등으로부터 정법 (定法) 에 따라 TACE 의 cDNA 를 취득하고, 이것을 발현 벡터에 삽입하고, 이어서 이 벡터를 포유 동물 세포 혹은 곤충 세포로 형질 전환하고, TACE 단백질을 발현시켰다. TACE 단백질을 단리하고, 효소로서 사용하였다. 또, 기질로는, 막결합형 TNF 의 TACE 절단 배열을 포함한 형광 합성 기질 Nma (N-메틸안트라닐산)-Leu-Ala-Gln-Ala-Val-Arg-Ser-Ser-Lys(Dnp(디니트로페닐))-D-Arg-NH2 를 사용하였다. 효소 반응은, 어세이 버퍼 B (200 mM 염화나트륨, 5 mM 염화칼슘, 10 μM 황산아연, 0.05 ％ PLURONIC F-68 을 포함하는, 50 mM 트리스-염산 완충액 (pH 7.5)) 으로 20 μM 로 조제한 형광 합성 기질 90 ㎕ 에, 피험물질 용액 1.8 ㎕ 를 첨가하고, 그 후에 어세이 버퍼 A (200 mM 염화나트륨, 5 mM 염화칼슘, 10 μM 황산아연, 2 ㎎/㎖ 우혈청 알부민을 포함하는, 50 mM 트리스-염산 완충액 (pH 7.5)) 으로 조제한 TACE 효소액 90 ㎕ 를 혼합하고, 37 ℃ 에서 1.5 시간 반응시켰다. 이 후, 형광 강도계 (Labsystems, Fluoroskan Ascent) 로 여기 파장 355 ㎚, 측정 파장 460 ㎚ 의 조건으로 측정하고, 효소 활성을 구하였다. 피험물질의 존재하 및 비존재하의 효소 활성을 비교하여, 피험물질의 저해율을 구하고, 50 ％ 저해 농도 (IC50) 를 산출하였다. 또한, 이 IC50 을 그 강도에 따라, 100 nM 미만을 A, 100 nM 이상 1000 nM 미만을 B 라고 평점하였다.
표 14 (1) 및 (2) 그리고 표 15 (1) 및 (2) 에 라세미체인 화합물 I-1 ∼ I-157 의 결과를 나타낸다.
또, 실시예 55 에 기재된 방법으로 얻어진 화합물 (＋)-I-10 (광학 활성체) 은, IC50 값이 100 nM 미만인 TACE 저해 활성을 나타내고, 그 평점은 「A」 였다.
이상의 결과로부터 분명한 바와 같이, 본 발명에 관련된 화합물 (피리돈 유도체) 은 모두 저농도로 TACE (ADAM17) 의 효소 활성을 저해하는 것이 확인되었다.
(시험예 2) iPS 세포 유래의 혈소판에 대한 기능 유지 효과의 검증
＜인간 iPS 세포 및 피더 세포의 조제＞
인간 iPS 세포 (hiPS cells) 는, 토쿄 대학에서 인간 유래의 피부 세포에 Oct4, Klf4, Sox2, 및 c-Myc 를 도입하여 수립한 iPS 세포주 (TkDA3-4) 를, 0.1 mM 비필수 아미노산 (Invitrogen 사 제조), PSG (100 U/㎖ 페니실린, 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신, 2 mM L-글루타민) (Invitrogen 사 제조), 20 ％
녹아웃 혈청 대체 첨가물 (KSR, Invitrogen 사 제조), 0.1 mM 2-메르캅토에탄올 (Invitrogen 사 제조), 및 5 ng/㎖ 염기성 선유아 세포 증식 인자 (bFGF, 와코 쥰야쿠 주식회사 제조) 를 첨가한 둘베코 변법 이글 배지와 햄 F-12 배지 (Sigma 사 제조) 의 혼합 배지 (혼합 비율 1：1) 중, 10 ㎍/㎖ 마이토마이신 C (와코 쥰야쿠 주식회사 제조) 처리에 의해 비활성화한 마우스 선유아 세포 상에서 배양하고, 3 ∼ 7 일 마다 계대하여, 미분화 상태를 유지한 것을 사용하였다.
또한, 리켄 바이오 리소스 센터로부터 구입한 마우스 태아 유래의 선유아 세포 C3H10T1/2 세포주 (이하, 「10T1/2 세포」 라고도 칭한다) 를 10 ％ 우태아 혈청 (FBS, Biological Industries 사 제조) 및 PSG (100 U/㎖ 페니실린, 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신, 2 mM L-글루타민) (Invitrogen 사 제조) 를 첨가한 이글 기초 배지 (BME, Invitrogen 사 제조) 중에서 배양하였다. 그리고, 마이토마이신 C 처리에 의해 미리 비활성화한 10T1/2 세포를 세포수 8 × 105 개/10 ㎝ 디쉬가 되도록 파종한 것을 피더 세포로서 사용하였다.
＜거핵구 및 혈소판의 산생, 그리고 이들의 해석＞
상기 피더 세포 상에, 인간 iPS 세포를 파종하고 (기준으로서 세포수 5 × 104 ∼ 1 × 105 개/10 ㎝ 디쉬), 15 ％ FBS (Invitrogen 사 제조), PSG (100 U/㎖ 페니실린, 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신, 2 mM L-글루타민) (Invitrogen 사 제조), ITS 서플리먼트 (10 ㎍/㎖ 인슐린, 5.5 ㎎/㎖ 인간 트랜스페린, 6.7 ng/㎖ 아셀렌산나트륨) (Invitrogen 사 제조), 50 ㎍/㎖ 아스코르브산 (Sigma 사 제조), 0.45 mM 의 α-모노티오글리세롤 (MTG, Sigma 사 제조), 20 ng/㎖ 혈관 내피 증식 인자 (VEGF, R ＆ D systems 사 제조) 를 첨가한 이스코브 개변 둘베코 배지 (IMDM, Sigma 사 제조) 중에서 배양하였다. 또, 이 배양은 CO2 인큐베이터 (제품명：HERA CELL 150i, Thermo SCIENTIFIC 사 제조) 를 사용하여, 37 ℃, 5 ％ CO2 하에서 실시하였다. 그리고, 3 ∼ 4 일마다 배지 교환을 실시하고, 내부에 조혈 전구세포를 포함한 sac 구조체 (네트형 구조물) 가 다수 확인되는 14 ∼ 15 일째까지, 이러한 조건으로 배양하였다.
다음으로, sac 구조체를 디쉬로부터 떼어내어 파쇄하고, 40 μM 셀 스트레이너 (BD 사 제조) 를 통과시킨 후에, 1500 rpm, 8 분간 원심 분리하여 조혈 전구세포를 회수하고, 3 ％ FBS 를 포함하는 인산 완충액 (PBS) 에 현탁한 후에 세포수를 카운트하였다. 새로, 6 웰 (well) 플레이트에 준비한 마이토마이신 C 처리가 끝난 10T1/2 세포 (6 × 105 개/6 웰 플레이트 1 매) 상에 조혈 전구세포를 2 ∼ 3 × 104 개/웰로 파종하고, 15 ％ FBS (제품명：Invitrogen 사 제조), PSG (100 U/㎖ 페니실린, 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신, 2 mM L-글루타민) (Invitrogen 사 제조), ITS 서플리먼트 (10 ㎍/㎖ 인슐린, 5.5 ㎎/㎖ 인간 트랜스페린, 6.7 ng/㎖ 아셀렌산나트륨) (Invitrogen 사 제조), 50 ㎍/㎖ 아스코르브산 (Invitrogen 사 제조), 0.45 mM MTG (Sigma 사 제조), 100 ng/㎖ 인간 트롬보포에틴 (인간 TPO, R ＆ D systems 사 제조), 50 ng/㎖ 인간 간세포 인자 (인간 SCF, R ＆ D systems 사 제조) 및 25 U/㎖ 헤파린을 첨가한 IMDM (Sigma 사 제조) 중에서 추가로 9 ∼ 10 일간 배양하고, 거핵구/혈소판을 유도하였다.
유도한 거핵구/혈소판을 항응고제액 (Acid Citrate Dextrose, ACD) 으로 회수한 후, 각 웰의 1/25 량의 회수액을 항체를 사용하여 염색하였다. 사용한 항체는, allophycocyanin (APC) 표지항 CD41a (인테그린 αIIbβ3 복합체, HIP8 clone, Biolegend 사 제조) 항체, Phycoerythrin (PE) 수식항 인간 CD42b (GPIbα, HIP1 clone, eBioscience 사 제조) 항체 및 eFluor (등록상표) 450 수식항 인간 CD42a (GPIX, GR-P clone, eBioscience 사 제조) 항체이다. 해석하는 세포수의 절대수를 정확하게 측정하기 위해서, TruCount Tubes (BD Bioscience 사 제조) 를 사용하여, 각 튜브의 세포수의 1/10 량 (즉, 각 웰당 세포수의 1/250) 의 세포를 플로우 사이토메트리로 해석하였다. 사용한 플로우 사이토메트리는 Becton Dickinson 사 제조의 FACSAriaII 및 FACSVerse 이다. 또한, 혈소판에는 10 종류 이상의 접착 분자가 존재하고 있지만, CD41a (GPIIb/IIIa) 는, 거핵구, 혈소판과 일부의 조혈 전구세포에, CD42a (GPIX) 및 CD42b (GPIbα) 는, 거핵구·혈소판에 국한적으로 발현하고, 혈소판 마커로서 범용되는 혈소판막 당단백으로서 알려져 있다. 그래서, 유도된 혈소판을 세기 위해서, CD41a(＋) CD42a(＋) 세포는, 인간 말초혈로부터 얻어진 신선 혈소판과 동일한 크기이며, 또한, CD41a 및 CD42a 양성인 혈소판이 포함되도록 게이팅을 실시하였다. 또한, CD41a(＋) CD42a(＋) CD42b(＋) 세포는, CD41a(＋) CD42a(＋) 세포 중, 신선 혈소판의 99 ％ 이상의 혈소판이 포함되는 CD42b 발현량으로 게이팅을 실시하여, 계수하였다.
＜본 발명 화합물의 평가＞
전술한 바와 같이 하여 얻어진 iPS 세포 유래의 조혈 전구세포에 대해, 도 1 ＜프로토콜 1＞ 에 나타낸 조건하에서 혈소판의 유도를 실시하였다. iPS 세포 유래의 조혈 전구세포를 다시 파종하고 나서, 프로토콜 1 에 있어서 나타내는 「d14 혹은 d15」 에 피험물질을 배지에 첨가하고, 9 ∼ 10 일간 처리하였다. 피험물질은, 본 발명에 관련된 화합물의 대표예로서 화합물 (＋)-I-10 (이하, S-108470 으로 나타낸다) 을, 양성 대조로서 국제 공개 2012/036257호에 기재되어 있는 TACE 저해제 (이하, 「TACE 저해제 S」 라고 하는 경우가 있다) 를, 각각 사용하였다. 음성 대조는, DMSO (매체 대조) 로 하였다. 배양 종료 후에 전술한 바와 같이 세포를 회수하여, 플로우 사이토메트리로, CD41a(＋) CD42a(＋) 혈소판과 CD41a(＋) CD42a(＋) CD42b(＋) 혈소판을 계수하였다. 실험 1 회마다, 각 군에 1 웰씩 형성하고, 실험을 7 회 반복하고, 얻어진 데이터의 평균＋표준 편차로 나타내었다.
얻어진 CD41a(＋) CD42a(＋) 혈소판 수는, 도 2 에 나타내는 바와 같이, 매체 대조군에 비해 S-108470 군 (10 및 30 μM) 에서 약간 많기는 하지만, 군간에 큰 차를 인정하지 않았다. 또한, TACE 저해제 S (15 μM) 군에 있어서도, 매체 대조군에 비해, 얻어진 CD41a(＋) CD42a(＋) 혈소판 수는, 군간에 큰 차를 인정하지 않았다 (도시하지 않음). 다음으로, 각 군에 있어서의 CD41a(＋) CD42a(＋) CD42b(＋) 혈소판의 비율을 검토하였다. 도 3 에 나타내는 바와 같이, 매체 대조군에 비해, S-108470 군 (10 및 30 μM) 군은, 유의하게 CD41a(＋) CD42a(＋) CD42b(＋) 혈소판의 비율이 증가하고 있었다. 이 결과로부터 분명한 바와 같이, 본 발명에 관련된 화합물인 S-108470 은, iPS 세포를 사용한 배양계에 있어서, 세포 장애성을 나타내지 않고, 혈소판의 분화에 영향을 주지 않고, ADAM17 에 의한 GPIbα 의 쉐딩을 저해하는 것이 확인되었다. 즉, 본 발명에 관련된 화합물인 S-108470 을 배양액 중에 첨가함으로써, 혈소판의 기능이 유지되는 것이 확인되었다.
또한, TACE 저해제 S (15 μM) 군에 있어서도 유의하게 CD41a(＋) CD42a(＋) CD42b(＋) 혈소판의 비율이 증가하고 있었다 (도시하지 않음).
(시험예 3) 인간 말초혈 유래의 혈소판에 대한 기능 유지 효과에 있어서의 농도 의존성에 대한 검증
전술한 바와 같은 배양계를 사용하여 얻어진 혈소판 뿐만 아니라, 채혈에 의해 얻어진 말초혈 유래의 혈소판에 있어서도, 본 발명에 관련된 화합물은 기능 유지 효과를 발휘하는지를 검증하였다. 먼저, 채혈하여 얻어진 인간 말초혈에 그 1/10 량의 ACD 를 첨가하고, 브레이크 없음, 900 rpm 으로 10 분간 원심하였다. 원심하여 얻어진 상청액을 또한 브레이크 없음, 1500 rpm 으로 15 분간 원심한 후, 상청액을 제거하였다. 얻어진 침전물을 Tyrode-HEPES 버퍼 (칼슘 포함하지 않음) 에 현탁하고, 현탁액 중의 혈소판 수를 세어, 일정 수 (약 5 × 107 개)/Tyrode-HEPES 버퍼 (칼슘 포함하지 않음) 200 ㎕ 가 되도록 혈소판을 포함하는 현탁액 (세정 혈소판, Washed Platelet) 을 조제하였다. 다음으로, 도 1 에 나타낸 프로토콜 2 와 같이, 얻어진 세정 혈소판에 100 μM CCCP (Carbonyl cyanide m-chlorophenyl hydrazone) 와 함께, S-108470 (0.1 ∼ 100 μM), TACE 저해제 S (50 μM) 또는 DMSO 를 첨가하고, 37 ℃ 에서 20 시간 인큐베이션하고, 플로우 사이토메트리로 CD41a(＋) 혈소판에 있어서의 CD42b (GPIbα)(＋) 의 세포수를 측정하였다. 또한, CCCP 의 첨가에 의해, 혈소판 표면 상의 GPIbα 의 쉐딩은 항진되는 것이 알려져 있다 (Bergmeier 등, Blood, 2003년, 102 권, 4229 ∼ 4235 페이지 참조).
도 4 에 나타내는 바와 같이, S-108470 (0.1 ∼ 100 μM) 은, 농도 의존적으로 GPIbα 의 쉐딩을 저해하였다. 이와 같이, 본 발명에 관련된 화합물인 S-108470 은, 인간 말초혈 유래의 혈소판에 대한 기능 유지 효과를 갖고 있는 것이 확인되었다.
또한, TACE 저해제 S (50 μM) 군에 있어서도 GPIbα 의 쉐딩의 저해가 확인되었다 (도시하지 않음).
산업상 이용가능성
이상 설명한 바와 같이, 본 발명에 의하면, ADAM17 의 메탈로프로테아제 활성을 특이적으로 억제하고, GPIbα 의 쉐딩을 억제함으로써, 혈소판의 기능을 유지하는 것이 가능해진다. 따라서, 본 발명의 조성물은, 기능적으로 안정되고, 안전성이 높은 혈소판을, 번잡한 작용을 필요로 하지 않고, 효율적으로 대량으로 생산하기 위한 시약이나, 혈액 제제에 있어서의 혈소판의 기능을 유지하고, 그 품질의 안정화를 도모하기 위한 의약품 첨가제 등으로서 유용하다.
Claims (12)
- 하기 일반식 (I)：
[화학식 1]
[식 중, 고리 A 는, 아릴, 헤테로아릴 또는 하기 일반식 (a) 로 나타내는 기：
[화학식 2]
(식 중, Z1 및 Z2 는, 각각 독립적으로 -CH2- 또는 -O-, n1 은, 1 ∼ 3 의 정수를 나타낸다.),
R1 은, 수소 원자, 할로겐 원자, 수산기, 시아노기, 니트로기, C1 ∼ C6 할로알킬기, 카르복실기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시카르보닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로헥실알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 혹은 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기, 또는
-J1-X1-R5
[식 중, J1 은 단결합, 알킬렌, 알케닐렌 혹은 알키닐렌, X1 은 단결합, 산소 원자, 황 원자, SO, SO2, -CO-, -NR6-, -NR6SO2-, -SO2NR6-, -NR6CO-, -CONR6-, -NR6COO-, -OCONR6-, -NR6CONR7- 혹은 -NR6SO2NR7- (식 중, R6 및 R7 은 각각 독립적으로 수소 원자 혹은 C1 ∼ C6 알킬기를 나타낸다.),
R5 는 수소 원자, 트리플루오로메틸기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 하기 일반식 (b) 로 나타내는 기：
[화학식 3]
(식 중, n2 는, 1 ∼ 3, n3 은, 0 ∼ 3 의 정수를 나타낸다.),
치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 혹은 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기를 나타낸다.],
R2 는 수소 원자, 할로겐 원자, 시아노기, 니트로기, C1 ∼ C6 할로알킬기, 카르복실기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, C1 ∼ C6 알콕시기, C1 ∼ C6 알콕시카르보닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로헥실알킬알킬, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 또는 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기,
R3 은 수소 원자, 할로겐 원자 또는 C1 ∼ C6 알킬기,
R4 는 수소 원자, 할로겐 원자, 시아노기, C1 ∼ C6 할로알킬기, C1 ∼ C6 알콕시기, 하이드록시메틸기, C1 ∼ C6 알킬기 또는 C2 ∼ C6 알케닐기를 나타낸다.]
로 나타내는 피리돈 유도체 또는 그 염을 유효 성분으로 하는, 혈소판의 기능을 유지하기 위한 조성물. - 제 1 항에 있어서,
상기 일반식 (I) 로 나타내는 화합물이,
(＋)-5-(3,4-디플루오로페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온
인, 조성물. - 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
혈소판의 기능을 유지하기 위한 시약 또는 혈소판을 포함하는 혈액 제제로의 첨가제인, 조성물. - 거핵구로 분화할 수 있는 세포로부터 거핵구로 분화 유도시키고, 그 거핵구로부터 혈소판을 산생시키는 배양계에, 하기 일반식 (I)：
[화학식 4]
[식 중, 고리 A 는, 아릴, 헤테로아릴 또는 하기 일반식 (a) 로 나타내는 기：
[화학식 5]
(식 중, Z1 및 Z2 는, 각각 독립적으로 -CH2- 또는 -O-, n1 은, 1 ∼ 3 의 정수를 나타낸다.),
R1 은, 수소 원자, 할로겐 원자, 수산기, 시아노기, 니트로기, C1 ∼ C6 할로알킬기, 카르복실기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시카르보닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로헥실알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 혹은 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기, 또는
-J1-X1-R5
[식 중, J1 은 단결합, 알킬렌, 알케닐렌 혹은 알키닐렌, X1 은 단결합, 산소 원자, 황 원자, SO, SO2, -CO-, -NR6-, -NR6SO2-, -SO2NR6-, -NR6CO-, -CONR6-, -NR6COO-, -OCONR6-, -NR6CONR7- 혹은 -NR6SO2NR7- (식 중, R6 및 R7 은 각각 독립적으로 수소 원자 혹은 C1 ∼ C6 알킬기를 나타낸다.),
R5 는 수소 원자, 트리플루오로메틸기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 하기 일반식 (b) 로 나타내는 기：
[화학식 6]
(식 중, n2 는, 1 ∼ 3, n3 은, 0 ∼ 3 의 정수를 나타낸다.),
치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 혹은 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기를 나타낸다.],
R2 는 수소 원자, 할로겐 원자, 시아노기, 니트로기, C1 ∼ C6 할로알킬기, 카르복실기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, C1 ∼ C6 알콕시기, C1 ∼ C6 알콕시카르보닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로헥실알킬알킬, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 또는 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기,
R3 은 수소 원자, 할로겐 원자 또는 C1 ∼ C6 알킬기,
R4 는 수소 원자, 할로겐 원자, 시아노기, C1 ∼ C6 할로알킬기, C1 ∼ C6 알콕시기, 하이드록시메틸기, C1 ∼ C6 알킬기 또는 C2 ∼ C6 알케닐기를 나타낸다.]
로 나타내는 피리돈 유도체 또는 그 염을 첨가하는 것을 포함하는, 혈소판을 조제하기 위한 방법. - 제 4 항에 있어서,
상기 일반식 (I) 로 나타내는 화합물이,
(＋)-5-(3,4-디플루오로페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온
인, 방법. - 제 4 항 또는 제 5 항에 있어서,
상기 배양계에 있어서의 배양 온도가 35 ∼ 39 ℃ 인 것을 포함하는, 방법. - 거핵구로 분화할 수 있는 세포로부터 거핵구로 분화 유도시키고, 그 거핵구로부터 혈소판을 산생시키는 배양계에, 하기 일반식 (I)：
[화학식 7]
[식 중, 고리 A 는, 아릴, 헤테로아릴 또는 하기 일반식 (a) 로 나타내는 기：
[화학식 8]
(식 중, Z1 및 Z2 는, 각각 독립적으로 -CH2- 또는 -O-, n1 은, 1 ∼ 3 의 정수를 나타낸다.),
R1 은, 수소 원자, 할로겐 원자, 수산기, 시아노기, 니트로기, C1 ∼ C6 할로알킬기, 카르복실기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시카르보닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로헥실알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 혹은 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기, 또는
-J1-X1-R5
[식 중, J1 은 단결합, 알킬렌, 알케닐렌 혹은 알키닐렌, X1 은 단결합, 산소 원자, 황 원자, SO, SO2, -CO-, -NR6-, -NR6SO2-, -SO2NR6-, -NR6CO-, -CONR6-, -NR6COO-, -OCONR6-, -NR6CONR7- 혹은 -NR6SO2NR7- (식 중, R6 및 R7 은 각각 독립적으로 수소 원자 혹은 C1 ∼ C6 알킬기를 나타낸다.),
R5 는 수소 원자, 트리플루오로메틸기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 하기 일반식 (b) 로 나타내는 기：
[화학식 9]
(식 중, n2 는, 1 ∼ 3, n3 은, 0 ∼ 3 의 정수를 나타낸다.),
치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 혹은 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기를 나타낸다.],
R2 는 수소 원자, 할로겐 원자, 시아노기, 니트로기, C1 ∼ C6 할로알킬기, 카르복실기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, C1 ∼ C6 알콕시기, C1 ∼ C6 알콕시카르보닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로헥실알킬알킬, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 또는 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기,
R3 은 수소 원자, 할로겐 원자 또는 C1 ∼ C6 알킬기,
R4 는 수소 원자, 할로겐 원자, 시아노기, C1 ∼ C6 할로알킬기, C1 ∼ C6 알콕시기, 하이드록시메틸기, C1 ∼ C6 알킬기 또는 C2 ∼ C6 알케닐기를 나타낸다.]
로 나타내는 피리돈 유도체 또는 그 염을 첨가한 배양물. - 제 7 항에 있어서,
상기 일반식 (I) 로 나타내는 화합물이,
(＋)-5-(3,4-디플루오로페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온
인, 배양물. - 하기 일반식 (I)：
[화학식 10]
[식 중, 고리 A 는, 아릴, 헤테로아릴 또는 하기 일반식 (a) 로 나타내는 기：
[화학식 11]
(식 중, Z1 및 Z2 는, 각각 독립적으로 -CH2- 또는 -O-, n1 은, 1 ∼ 3 의 정수를 나타낸다.),
R1 은, 수소 원자, 할로겐 원자, 수산기, 시아노기, 니트로기, C1 ∼ C6 할로알킬기, 카르복실기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시카르보닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로헥실알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 혹은 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기, 또는
-J1-X1-R5
[식 중, J1 은 단결합, 알킬렌, 알케닐렌 혹은 알키닐렌, X1 은 단결합, 산소 원자, 황 원자, SO, SO2, -CO-, -NR6-, -NR6SO2-, -SO2NR6-, -NR6CO-, -CONR6-, -NR6COO-, -OCONR6-, -NR6CONR7- 혹은 -NR6SO2NR7- (식 중, R6 및 R7 은 각각 독립적으로 수소 원자 혹은 C1 ∼ C6 알킬기를 나타낸다.),
R5 는 수소 원자, 트리플루오로메틸기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 하기 일반식 (b) 로 나타내는 기：
[화학식 12]
(식 중, n2 는, 1 ∼ 3, n3 은, 0 ∼ 3 의 정수를 나타낸다.),
치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 혹은 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기를 나타낸다.],
R2 는 수소 원자, 할로겐 원자, 시아노기, 니트로기, C1 ∼ C6 할로알킬기, 카르복실기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, C1 ∼ C6 알콕시기, C1 ∼ C6 알콕시카르보닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로헥실알킬알킬, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 또는 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기,
R3 은 수소 원자, 할로겐 원자 또는 C1 ∼ C6 알킬기,
R4 는 수소 원자, 할로겐 원자, 시아노기, C1 ∼ C6 할로알킬기, C1 ∼ C6 알콕시기, 하이드록시메틸기, C1 ∼ C6 알킬기 또는 C2 ∼ C6 알케닐기를 나타낸다.]
로 나타내는 피리돈 유도체 또는 그 염이 첨가된, 혈소판을 포함하는 혈액 제제. - 제 9 항에 있어서,
상기 일반식 (I) 로 나타내는 화합물이,
(＋)-5-(3,4-디플루오로페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온
인, 혈액 제제. - 하기 일반식 (I)：
[화학식 13]
[식 중, 고리 A 는, 아릴, 헤테로아릴 또는 하기 일반식 (a) 로 나타내는 기：
[화학식 14]
(식 중, Z1 및 Z2 는, 각각 독립적으로 -CH2- 또는 -O-, n1 은, 1 ∼ 3 의 정수를 나타낸다.),
R1 은, 수소 원자, 할로겐 원자, 수산기, 시아노기, 니트로기, C1 ∼ C6 할로알킬기, 카르복실기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시카르보닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로헥실알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 혹은 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기, 또는
-J1-X1-R5
[식 중, J1 은 단결합, 알킬렌, 알케닐렌 혹은 알키닐렌, X1 은 단결합, 산소 원자, 황 원자, SO, SO2, -CO-, -NR6-, -NR6SO2-, -SO2NR6-, -NR6CO-, -CONR6-, -NR6COO-, -OCONR6-, -NR6CONR7- 혹은 -NR6SO2NR7- (식 중, R6 및 R7 은 각각 독립적으로 수소 원자 혹은 C1 ∼ C6 알킬기를 나타낸다.),
R5 는 수소 원자, 트리플루오로메틸기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알콕시기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 하기 일반식 (b) 로 나타내는 기：
[화학식 15]
(식 중, n2 는, 1 ∼ 3, n3 은, 0 ∼ 3 의 정수를 나타낸다.),
치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 혹은 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기를 나타낸다.],
R2 는 수소 원자, 할로겐 원자, 시아노기, 니트로기, C1 ∼ C6 할로알킬기, 카르복실기, 치환되어 있어도 되는 C1 ∼ C6 알킬기, C1 ∼ C6 알콕시기, C1 ∼ C6 알콕시카르보닐기, 치환되어 있어도 되는 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 시클로헥실알킬알킬, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알킬알킬기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 아르알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 헤테로시클로알케닐알킬기, 치환되어 있어도 되는 C2 ∼ C6 알키닐기 또는 치환되어 있어도 되는 알키닐알킬기,
R3 은 수소 원자, 할로겐 원자 또는 C1 ∼ C6 알킬기,
R4 는 수소 원자, 할로겐 원자, 시아노기, C1 ∼ C6 할로알킬기, C1 ∼ C6 알콕시기, 하이드록시메틸기, C1 ∼ C6 알킬기 또는 C2 ∼ C6 알케닐기를 나타낸다.]
로 나타내는 피리돈 유도체 또는 그 염을, 혈소판을 포함하는 혈액 제제에 첨가하는 것을 포함하는, 혈액 제제에 있어서의 혈소판의 기능을 유지하기 위한 방법. - 제 11 항에 있어서,
상기 일반식 (I) 로 나타내는 화합물이,
(＋)-5-(3,4-디플루오로페닐)-5-[(3-메틸-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸]이미다졸리딘-2,4-디온인, 방법.
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