KR20150136599A

KR20150136599A - 품질 대조군이 구비되어 있는 현미경 슬라이드

Info

Publication number: KR20150136599A
Application number: KR1020157026263A
Authority: KR
Inventors: 루이 엔엠엔 첸; 젠규 팡; 콜린 맥컬로크; 마이클 스티븐 라자르; 로버트 존 필킨스; 피오나 진티
Original assignee: 클래리언트 다이아그노스틱 서비시즈, 인크.
Priority date: 2013-03-30
Filing date: 2014-03-20
Publication date: 2015-12-07
Also published as: CA2907417A1; RU2015139001A; CN105324654A; JP2016520814A; AU2014248479B2; JP6540686B2; EP2979078B1; AU2014248479A1; EP2979078A1; US20160274008A1; EP2979078A4; US10082451B2; WO2014165327A1; SG11201508139UA

Abstract

본 발명은 조직 샘플 분석용 현미경 슬라이드를 제공한다. 상기 슬라이드는 조직 샘플이 고정될 수 있는 샘플-고정 영역을 갖는 제1 주 표면을 포함하는 긴 평면 기판; 상기 샘플-고정 영역에 인접한 제1 위치에서 상기 제1 주 표면 상에 고정된 제1 양성 대조 샘플; 및 상기 샘플-고정 영역에 인접한 제2 위치에서 상기 제1 주 표면 상에 고정된 제2 양성 대조 샘플을 포함한다. 상기 제1 및 제2 위치는 제1 및 제2 양성 대조 샘플의 염색 품질이 조직 샘플의 염색 품질의 지표가 되도록 이격된다. 상기 현미경 슬라이드를 포함하는 키트, 및 상기 현미경 슬라이드의 제조 방법 및 사용 방법이 또한 제공된다.

Description

품질 대조군이 구비되어 있는 현미경 슬라이드 {MICROSCOPE SLIDES WITH QUALITY CONTROLS THEREON}

본 발명은 분자 병리학 분야에 관한 것이다. 더 구체적으로, 본 발명은 현미경 슬라이드 상에서 조직 샘플의 양질의 염색을 확인하기 위한 장치 및 방법에 관한 것이다.

조직 진단학이 환자 관리에 있어서 점점 더 중요해지고 있는데, 점증하는 처리량 수요를 충족하기 위해서는 더욱 더 많은 자동화를 필요로 한다. 자동화된 면역염색 기술은 대부분의 IHC 실험실에서 광범위하게 사용되고 있다. 기기들은 항원 재생, 항체 및 용액 적용, 인큐베이션 및 세척과 같은 중요한 단계들을 포함한 수동 면역염색 과정을 모방하여 설계된다. 서로 다른 시스템은 가변적인 정도의 유연성 및 슬라이드 용량을 가지나, 그들의 목표는 하기로 동일하다: 오차를 최소화하고 고품질의 염색을 제공함으로써, 환자 샘플로부터 일관된 해석이 도출될 수 있도록 하는 것.

그러나, 이러한 자동염색기들에서의 공학적인 제어 도구들의 준비에도 불구하고, 염색 용액의 올바르지 않은 분배, 그리고 기포 또는 두껍거나 느슨하거나 겹쳐져 있는 조직 절편의 존재로 인한 환자 샘플의 불완전한 포괄과 관련하여 문제가 발생하는 것은 드문 일이 아닌데, 이는 이후 분석시 잘못된 음성 염색 및 비-균일한 염색의 문제를 야기한다. 예를 들어, 문헌 [Shi, S.-R., Taylor, C.R., Antigen Retrieval Immunohistochemistry Based Research and Diagnostics, 2010, Wiley, Singapore]을 참조하라. 또한, 시판되고 있는 통상적인 자동염색기들은 염색 면적을 약 50 mm 길이로 제한하고 있다. 한 제조자의 커버슬립 기술은 염색 영역을 21×50 mm로 제한한다. 또 다른 제조자의 액체 보르텍스 공기 혼합 프로토콜은 25×50 mm의 염색 영역을 포괄한다. 이러한 특정 염색 영역 내의 전체 조직 절편이 동일하거나 완전하게 염색되는 것을 확인해주는 대조 방법은 현재 없다.

현재 슬라이드 상에서의 조직의 부적절한 염색은 소급으로만 식별된다. 많은 그렇게 분명하지 않은 사례가 알려지지 않고 지나갈 수 있다. 다코(Dako) 사의 헤르셉테스트(HercepTest)™에는 0, 1+ 및 3+의 염색 강도 점수를 가지는 3개의 펠릿화, 포르말린-고정, 파라핀-포매 인간 유방암 세포주를 포함하는 별도의 슬라이드가 들어 있는데, 이것이 각 염색 진행에 배치 대조군으로서 포함되어 있다. 그러나, 배치 대조군은 배치 내의 각 개별 슬라이드 상에서는 어떠한 염색 결함도 식별할 수 없다.

또 다른 이전의 접근법은 이미 양성 또는 음성 조직 또는 세포 대조군을 포함하고 있는 슬라이드의 상부에 환자 샘플 절편을 준비한다. 이러한 조직의 공급원은 시설에 따라 달라지며, 환자의 가변성으로 인하여 그의 염색 거동이 배치별로 달라지게 된다. 도 1에 나타낸 바와 같이, 선행 기술은 조직 샘플 (3) 및 세포 대조군 (4)이 고정되어 있는 평면 기판 (2)을 포함하는 조직 샘플 슬라이드 (1)를 제공한다. 세포 대조군 (4)은 샘플과 기판 (2)의 하나의 세로 단부 (5) 사이의 영역에서 슬라이드에 고정되어 있는 세포 펠릿의 형태이다. 도 2는 메릴랜드 로크빌 소재 바이오-퀵 코포레이션(Bio-Quick Corporation) 사에 의해 판매되며, 암 마커 IHC 검정을 위한 9-점 배열의 세포 대조군 4a-i를 포함하는 선행 기술의 또 다른 조직 샘플 슬라이드 (1')를 도시하고 있다 (http://www.bio-quick.com/qc-dots%C2%AE-cancer-array-ca-control-slides). 세포 대조군 4a-i에는 양성 및 음성 대조군이 포함될 수 있으나, 각각 서로 별도의 대조군인 것으로 나타나 있다. 슬라이드 (1')가 세포 펠릿 배열을 포함하고 있기는 하지만, 그것은 하나의 세포 펠릿을 포함하고 있는 슬라이드와 유사한 정보를 제공한다. 다시 말하자면, 상기 세포 펠릿 마커는 전적으로 분석되는 조직 샘플로부터 수득되는 신호의 보정에 사용된다. 슬라이드 (1)과 마찬가지로, 슬라이드 (1')는 샘플과 기판 (2')의 하나의 세로 단부 (5') 사이에 대조군 4a-I를 위치시킴으로써, 샘플의 크기 및 작업자의 기술에 따라 환자의 샘플에 근접하거나 그로부터 멀어질 수 있다. 따라서, 조직의 한 측면에 대한 이러한 대조군의 위치는 조직 샘플 자체가 완전히 균일하게 염색되었는지 여부에 대한 신뢰성 있는 지표를 제공하지 못한다.

따라서, 조직 샘플이 완전하고도 균일하게 전체적으로 염색된 것을 확인하는 방식으로 대조군을 사용하는 슬라이드는 업계에 없다.

본 발명은 샘플-고정 영역에 인접한 양성 대조 샘플이 구비된 현미경 슬라이드를 제공한다. 이러한 슬라이드는 병리학 염색과 같은 조직 샘플의 분석에 적합하며, 염색 품질에 대한 실시간 확인을 제공한다. 상기 양성 대조 샘플 또는 양성 대조군은 조직 샘플의 분석 동안 검출될 수 있는 하나 이상의 바이오마커를 포함한다. 따라서, 양성 대조군에서의 염색의 부재는 염색 실패의 실시간 확인을 제공하게 된다. 임의로, 음성 대조 샘플이 슬라이드 상에 포함될 수도 있다. 음성 대조 샘플 또는 음성 대조군은 양성 대조군에서 발견되는 상기 하나 이상의 바이오마커를 함유하지 않는다. 따라서, 음성 대조군에서의 염색 역시 염색 실패의 실시간 확인을 제공한다.

이에 따라, 한 측면에서, 본 발명은 염색될 조직 샘플을 위한 현미경 슬라이드를 제공한다. 상기 현미경 슬라이드는 긴 실질적으로 평면인 기판을 포함하며, 상기 기판은 조직 샘플이 고정될 수 있는 샘플-고정 영역을 포함하는 제1 주 표면을 포함한다. 상기 슬라이드는 또한 샘플-고정 영역에 인접한 제1 위치에서 제1 주 표면 상에 고정된 제1 양성 대조 샘플, 및 샘플-고정 영역에 인접한 제2 위치에서 제1 주 표면 상에 고정된 제2 양성 대조 샘플을 포함한다. 상기 제1 및 제2 위치는 제1 및 제2 양성 대조 샘플의 염색 품질이 조직 샘플의 염색 품질의 지표가 되도록 이격된다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 염색될 조직 샘플을 위한 현미경 슬라이드를 제공한다. 상기 현미경 슬라이드는 긴 실질적으로 평면인 기판을 포함하며, 상기 기판은 조직 샘플이 고정될 수 있는 샘플-고정 영역을 포함하는 제1 주 표면을 포함한다. 상기 슬라이드는 샘플-고정 영역에 인접한 제1 위치에서 제1 주 표면 상에 고정된 제1 양성 대조 샘플, 및 샘플-고정 영역에 인접한 제2 위치에서 제1 주 표면 상에 고정된 제2 양성 대조 샘플을 포함한다. 상기 제1 및 제2 위치는 샘플-고정 영역의 적어도 일부분이 기판의 세로 축을 따라 제1 및 제2 위치 사이로 연장되도록 이격된다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명 현미경 슬라이드의 제조 방법을 제공하며, 상기 방법은 제1 위치 및 제2 위치에서 현미경 슬라이드 상에 양성 대조 샘플의 박층을 전달하여 고정하는 단계를 포함하며, 여기서 상기 제1 및 제2 위치는 제1 및 제2 양성 대조 샘플의 염색 품질이 조직 샘플의 염색 품질의 지표가 되도록 이격된다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 분석 방법을 제공하며, 상기 방법은 각각 제1 및 제2 위치에 위치된 양성 대조 샘플들을 위한 검출 수단을 사용하여 본 발명의 현미경 슬라이드를 염색하는 단계를 포함한다. 상기 제1 및 제2 위치는 양성 대조 샘플들의 염색 품질이 조직 샘플의 염색 품질의 지표가 되도록, 그리고 적어도 제1 및 제2 위치로부터 양성 대조 샘플을 검출하도록 이격된다.

도 1은 슬라이드의 조직-고정 영역에 인접한 위치에 대조군으로서의 세포 펠릿을 갖는, 선행 기술의 슬라이드를 도시한다.
도 2는 슬라이드의 조직-고정 영역에 인접한 위치에 다수의 세포 펠릿들을 갖는, 선행 기술의 또 다른 슬라이드를 도시한다.
도 3은 슬라이드 조직-고정 영역의 일부분을 가로질러 위치되는 세포 펠릿들을 갖는, 본 발명의 실시양태에 따른 슬라이드를 도시한다.
도 4는 조직-고정 영역의 일부분을 가로질러 위치되는 세포 펠릿들을 갖는, 본 발명의 실시양태에 따른 또 다른 슬라이드를 도시한다.
도 5는 서로 조직-고정 영역을 대향하고 슬라이드의 대향 연부를 따라 위치되는 세포 펠릿들을 갖는, 본 발명의 실시양태에 따른 또 다른 슬라이드를 도시한다.
도 6은 세포 펠릿들 양자가 서로 세로로 이격되어 있으며, 슬라이드의 세로 축으로부터 가로로 이격되어 있는, 도 5 슬라이드의 대안적인 실시양태를 도시한다.
도 7은 슬라이드의 조직-고정 영역 주위에 위치되는 3개의 세포 펠릿들을 갖는, 본 발명의 또 다른 실시양태를 도시한다.
도 8은 슬라이드의 조직-고정 영역 주위에 위치되는 4개의 세포 펠릿들을 갖는, 본 발명의 실시양태에 따른 또 다른 슬라이드를 도시한다.
도 9는 서로 조직-고정 영역을 가로질러 위치되는 서로 다른 세포 펠릿들의 쌍들을 갖는, 본 발명의 실시양태에 따른 또 다른 슬라이드를 도시한다.
도 10은 슬라이드의 대향 연부를 따라, 그리고 조직-고정 영역에 인접하여 위치되는 다수의 서로 다른 세포 펠릿들의 쌍들을 갖는, 본 발명의 실시양태에 따른 또 다른 슬라이드를 도시한다.
도 11은 실질적으로 균일하게 이격된 세포 펠릿들에 의해 주변에 경계가 한정되는 조직-고정 영역을 갖는, 본 발명의 실시양태에 따른 대안적인 슬라이드를 도시한다.
도 12는 상이한 유형의 펠릿들에 의해 주변에 경계가 한정되는 조직-고정 영역을 갖는, 본 발명의 실시양태에 따른 또 다른 대안적인 슬라이드를 도시한다.
도 13은 슬라이드 상 조직-고정 영역 주위에 8개의 세포 펠릿들을 갖는, 본 발명의 실시양태에 따른 슬라이드를 도시한다.
도 14는 슬라이드의 조직-고정 영역 주위에 위치되는 세포 펠릿들이 추가로 현미경 슬라이드의 제1 주 표면 상 지지 플랫폼 상에 제공되는, 본 발명의 실시양태에 따른 또 다른 대안적인 슬라이드를 도시한다.
도 15는 슬라이드의 조직-고정 영역 주위에 위치되는 세포 펠릿들을 가지며, 여기서 조직 샘플은 현미경 슬라이드 제1 주 표면 상 평면인 오목한 영역 내에 고정되는, 본 발명의 실시양태에 따른 또 다른 대안적인 슬라이드를 도시한다.
도 16은 슬라이드의 조직-고정 영역 주위에 위치되는 세포 펠릿들을 가지며, 현미경 슬라이드가 추가로 샘플-고정 영역 위로 상승되어 있는 실질적으로 평면인 표지 영역을 포함하는, 본 발명의 실시양태에 따른 또 다른 대안적인 슬라이드를 도시한다.
도 17은 본 발명의 실시양태에 따른 슬라이드를 제조하기 위한 시스템을 도시한다.

본 발명은 슬라이드에 고정된 조직 샘플의 적정한 염색에 대한 더 높은 신뢰성을 제공하는 혁신적인 대조 샘플 배치구조를 포함하는 현미경 슬라이드를 제공한다. 본 발명의 슬라이드는 조직 샘플의 자동화된 염색 및 분석에 적합하다. 본 발명의 현미경 슬라이드는 조직 샘플의 자동화된 다-단계 다중 분석에 특히 적합하다. 이러한 슬라이드는 조직 영상화/분석시 염색 품질에 대한 확인을 가능케 한다. 이러한 슬라이드는 또한 각 염색 단계 후 제공되는 영상의 재검토에 의해, 모든 염색 단계가 완료된 후, 염색 품질의 확인을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본원에서 개시되는 현미경 슬라이드 및 방법은 구체적으로 조직화학, 면역염색, 면역조직화학, 면역검정, 면역형광 또는 형광 제자리 혼성화에 적용가능할 수 있다.

도 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 제1 측면은 그 위에 고정되어 있는 조직 샘플 (15)을 염색하기 위한 현미경 슬라이드 (10)를 제공한다. 슬라이드 (10)는 조직 샘플 (15)이 고정될 수 있는 샘플-고정 영역 (16) (그 경계가 은선으로 표시되어 있음)을 갖는 제1 주 표면 (14)이 구비된 긴 실질적으로 평면인 기판 (12)을 포함한다. 슬라이드 (10)는 또한 샘플-고정 영역 (16)에 인접한 제1 위치에서 제1 주 표면 (14) 상에 고정된 제1 양성 대조 샘플 (20a), 및 샘플-고정 영역 (16)에 인접한 제2 위치에서 제1 주 표면 (14) 상에 고정된 제2 양성 대조 샘플 (20b)을 제공한다. 상기 제1 및 제2 위치는 제1 및 제2 양성 대조 샘플 (20a) 및 (20b)의 염색 품질이 조직 샘플 (15)의 염색 품질의 지표가 되도록 이격된다. 다시 말하자면, 대조 샘플 (20a) 및 (20b)가 각각 조직 샘플 (15)과 기판 (12)의 세로 연부 (17a) 및 (17b) 사이에 위치되기 때문에, 조직 샘플 (15) 염색 후의 양 대조 샘플 (20a) 및 (20b)에서의 신호의 검출은 단일 인접부에 위치하는 하나의 대조 샘플만이 염색을 입증하는 경우에 비해 완전한 조직 샘플 (15) 염색의 더 우수한 징후로써, 염색 적용범위가 기판 (12)의 양 단부를 포함하였음을 표시한다. 기판의 조직-고정 영역 주위에 다수의 양성 대조 샘플을 제공하는 것에 의해, 조직 샘플 주위의 대조군 각각이 염색되었음이 입증될 경우, 본 발명은 완전한 조직 염색에 대한 더 큰 신뢰성을 제공한다. 양성 대조 샘플로부터의 검출 신호의 부재는 조직 샘플의 완전한 염색의 실패에 대한 지표가 되게 된다. 대조 샘플의 염색은 각 염색 단계 후 기판상에서의 조직의 영상화 동안 드러남으로써, 조직 자체가 적정하게 염색되었음에 대한 실시간 신뢰성을 제공하게 된다. 또한, 이후의 분석을 위하여 영상이 보관되게 되므로, 본 발명은 추가로 재검토해야 하는 대조 샘플 염색 기록의 비축이 보장되는 것을 가능케 하게 된다.

바람직하게는, 상기 제1 및 제2 위치는 샘플-고정 영역 (16)의 적어도 일부가 기판 (12)의 세로 축을 따라 제1 및 제2 위치 사이로 연장되도록 이격된다. "기판 (12)의 세로 축"이라는 용어는 대향 단부 (17a)와 (17b) 사이에 기판 (12)의 긴 길이를 따라 중앙으로 연장되는 선을 의미한다. 본 상세한 설명의 목적상, 기판 (12)의 세로 축은 또한 주 표면 (14)을 따라 연장되는 것을 의미한다. 따라서, 샘플-고정 영역 (16)의 적어도 일부가 그들 사이에 세로로 연장되도록 하는 위치들의 세로 이격이 존재하게 된다. 본원에서 기술될 바와 같이, 제1 및 제2 위치의 이와 같은 세로 이격은 또한 위치들 사이의 가로 이격, 즉 위치들 중 1개 이상이 기판 (12)의 세로 축과 긴 연부 (18a) 또는 (18b) 사이에서 이격되는 것을 포함할 수 있다. 이러한 실시양태들 각각에서, 제1 및 제2 위치는 어느 하나 또는 양자가 세로 축으로부터 가로로도 이격되어 있는 경우에도 슬라이드의 세로 축을 따라 이격되어 있는 것으로 간주된다. 본 발명의 각 실시양태에 있어서, 대조 샘플 (20a)와 (20b) 사이로 연장되는 선은 샘플-고정 영역 (16)을 통과하여 횡단하게 된다. 본 발명은 2개 대조 샘플들 사이의 선을 따라 조직 샘플의 일부분이 위치되는 경우에도 조직 샘플 (15)의 적정한 염색의 신뢰성이 여전히 더 높을 수 있을 것으로 생각한다.

본 발명은 현미경 슬라이드 (10)의 기판 (12)이 실험실 유리제품용으로 적합한 유리와 같이 조직 염색 및 분석에 적합한 물질로 형성되는 것을 고려한다. 기판 (12)은 바람직하게는 실질적으로 평면인 부재로써, 하기에서 주지되는 특정 실시양태 이외에는 바람직하게는 주 표면 (14)이 평면인 표면이다. 기판 (12)이 직사각형의 형상을 갖는 것으로 도시되어 있기는 하지만, 본 발명은 추가로 기판 (12)이 비-선형인 연부 또는 단일의 연속적인 비-선형 연부를 가지는 원형 형상 또는 다른 형상을 가질 수 있을 것으로 생각한다.

본 발명 현미경 슬라이드의 모든 실시양태에 있어서, 조직-고정 영역은 그의 지정된 경계를 나타내는 은선 (파선)으로 표시된다. 실제 조직-고정 영역이 주 표면 상의 선으로, 또는 주 표면에 에칭된 미세채널로 지정될 수 있음을 본 발명이 고려하고 있기는 하지만, 슬라이드 기판 주 표면 상에 선을 드러낼 필요는 없다. 또한, 조직-고정 영역의 형성이 전형적으로 실질적으로 직사각형인 것으로 나타나 있기는 하지만, 조직-고정 영역의 주변 경계 형상은 분석될 조직 샘플 (또는 그의 일부분)을 포함하기에 충분한 표면적을 제공하는 모든 형상 (예컨대 타원형 또는 원형)일 수 있다. 본 발명은 기판 주 표면 상에서의 대조 샘플의 위치지정이 사용자에게 조직 샘플이 본 발명에 따라 적정하게 위치되도록 고정되어야 하는 영역을 표시하게 될 것으로 생각한다. 마찬가지로, 환자 조직 샘플이 타원형 형상으로 일반적으로 도시되어 있기는 하지만, 환자 샘플은 원형, 정사각형, 직사각형 또는 불규칙형과 같은 임의의 형상일 수 있을 것으로 생각된다. 환자 샘플의 형상은 본 발명의 측면에 영향을 주지 않는다. 양성 대조 샘플의 배치구조는 환자 샘플의 치수 및 구성을 기준으로 원하는 효과, 즉 환자 샘플의 염색 가변성을 조절하는 것을 달성하도록 적절하게 조정될 수 있다.

또한, 본 발명은 본 발명에 의해 사용되는 양성 대조 샘플이 바람직하게는 세포 펠릿, 대조 조직 샘플, 또는 세포 균질물, 펩티드, 단백질 및 DNA와 같은 생체물질이 적재된 캐리어로부터 선택되는 것을 고려한다. 상기 캐리어는 입자, 겔 또는 다른 구성일 수 있다. 환자의 조직 샘플은 이러한 슬라이드 상에 절편화될 수 있으며, 거기에서 양성 대조 샘플이 일관되지 않는 염색 용액 분배 및 대형 조직 샘플에서의 경계 염색과 관련한 우려와 같은 염색 실패의 실시간 확인을 제공하게 된다.

제1 및 제2 양성 대조 샘플은 바람직하게는 하나 이상의 공통되는 바이오마커 (즉 마커)를 함유한다. 바이오마커 또는 마커는 검출 수단에 의해 검출될 수 있는 임의의 세포 성분을 포함하는 것을 의미한다. 대표적인 세포 성분에는 단백질, 핵산 분자 또는 탄수화물이 포함된다. 바람직하게는, 이와 같은 공통 바이오마커는 조직 샘플을 검출하는 것과 동일한 검출 수단에 의해 검출될 수 있다. 대안적으로, 제1 및 제2 양성 대조 샘플은 서로 다른 바이오마커를 함유할 수 있다. 본 발명은 양 양성 대조 샘플이 소정 검출 수단에 의해 모두 검출가능한 한, 본 발명의 목표, 즉 염색 실패의 확인이 완수되는 것으로 생각한다. 따라서, 본 발명은 그들이 공통적인 바이오마커를 함유하는 한, 제1 및 제2 양성 대조 샘플이 동일하거나, 또는 동일한 세포주로 형성되는 세포 펠릿을 포함할 필요는 없는 것으로 생각한다. 대안적으로, 제1 및 제2 양성 대조 샘플이 완전히 서로 다른 바이오마커를 함유한다 할지라도, 조직 샘플이 분석될 때 대조군들이 모두 검출될 수 있는 한, 본 발명의 방법을 사용하여 염색 실패가 확인될 수 있다.

본 발명은 또한 각 양성 대조 샘플 자체가 2종 이상의 서로 다른 종류의 바이오마커, 예컨대 항원을 함유할 수 있는 것으로 생각한다. 각 세포주가 다양한 검출 수단에 의해 검출될 수 있기는 하지만, 본 발명은 추가로 서로 다른 종류의 항원을 발현하는 세포주들이 함께 혼합되어 세포 펠릿을 생성할 수 있는 것으로 생각한다. 이러한 양성 대조 샘플은 다중화된 실험에 특히 유용하다. 따라서, 제1 마커는 양 양성 대조 샘플에서 다중화된 실험의 제1 단계에 대한 양성 대조군으로서 검출된다. 제2 마커는 양 양성 대조 샘플에서 다중화된 실험의 제2 단계에 대한 양성 대조군으로서 검출되는 등이다.

이리하여, 본 발명의 대조 샘플에서 제공되는 각 마커는 슬라이드 기판의 조직-고정 영역의 일부분을 가로질러 위치되는 상응하는 쌍으로 된 관련 마커를 포함하게 되는 것으로 이해될 것이다. 상기에서 논의된 바와 같이, 쌍으로 된 관련 마커들은 동일할 수 있다. 대안적으로, 쌍으로 된 관련 마커들은 조직 샘플이 분석될 때 그들이 모두 검출될 수 있는 한, 서로 다른 바이오마커일 수 있다.

도 4에 나타낸 바와 같이, 본 발명은 추가로 현미경 슬라이드 (110)를 제공하며, 여기서 동일한 번호표시는 본 발명의 다른 실시양태와 동일한 구성요소를 나타낸다. 본 발명의 모든 실시양태에 있어서, 적용되는 조직 샘플은 항상 '(15)'의 번호로 표시될 것이다. '동일한 번호표시'라는 용어는 해당 지칭 중 마지막 2-숫자를 공유하는 서로 다른 슬라이드 실시양태의 동일한 구성요소가 통상적으로 서로 유사하게 된다는 것을 표시한다. 마찬가지로, 해당 지칭에 있어서 동일한 마지막 2-숫자를 가지는 구성요소들은 또한 해당 구성요소들이 구성 또는 구조에 있어서 실질적으로 동일하나 별도로 제공됨을 표시하는 접미사 문자로 지칭될 수도 있다.

슬라이드 (110)는 평면인 주 표면 (114)을 갖는 실질적으로 평면인 기판 (112)을 포함한다. 주 표면 (114)은 통상적인 수단에 의해 조직 샘플 (15)이 고정될 수 있는 샘플-고정 영역 (116)을 포함한다. 슬라이드 (110)는 각각 주 표면 (114)의 제1 및 제2 위치에 제공되는 제1 및 제2 양성 대조 샘플 (120a) 및 (120b)를 포함한다. 제1 양성 대조 샘플 (120a)은 샘플-고정 영역 (116)과 기판 (112)의 제1 세로 연부 (117a) 사이에 존재하며, 제2 양성 대조 샘플 (120b)은 샘플-고정 영역 (16)과 가로로 나란히 위치된다. '가로로-나란히 위치되는'은 상기 위치가 샘플-고정 영역 (116)과 기판 (112)의 가로 연부 (118a) 및 (118b) 중 하나 사이에 기판 (112)의 긴 축에 대하여 가로인 선을 따라 위치된다는 것을 의미한다.

도 5에 나타낸 바와 같이, 본 발명은 추가로 제1 및 제2 양성 대조 샘플 (220a) 및 (220b)를 고정하기 위한 제1 및 제2 위치가 주 표면 (214) 상의 샘플-고정 영역 (216)의 대향하는 측면들에 존재하도록, 즉 상기 위치가 샘플-고정 영역 (216)을 가로질러 실질적으로 가로로 이격되도록 설계되는 현미경 슬라이드 (210)를 고려한다. 다시 한번, 동일한 번호표시는 본 발명의 동일한 구성요소를 나타낸다. 도 5에 나타낸 바와 같이, 대조 샘플 (220a)은 샘플 (15)과 기판 (212)의 연부 (218a) 사이에 위치되는 반면, 대조 샘플 (220b)은 샘플 (15)과 기판 (212)의 연부 (218b) 사이에 대향하여 위치된다.

도 6은 본 발명의 또 다른 현미경 슬라이드 (310)를 도시한다. 슬라이드 (310)는 분석될 조직 샘플을 수용하기 위한 조직 샘플-고정 영역 (316)을 갖는 제1 주 표면 (314)을 포함하는 실질적으로 평면인 기판 (312)을 포함한다. 슬라이드 (310)는 또한 각각 표면 (314) 상의 제1 및 제2 위치에 위치되는 제1 및 제2 대조 샘플 (320a) 및 (320b)를 포함한다. 제1 및 제2 위치는 모두 기판의 세로 축을 따라 세로로 이격되어 있음은 물론, 세로 축의 가로로, 또는 그의 어느 한쪽 측면으로도 이격된다. 다시 말하자면, 세로 단부 (317a) 및 연부 (318b)에 더 가깝게 위치되는 대조 샘플 (320b)에 비해, 대조 샘플 (320a)은 세로 단부 (317b) 및 연부 (318a)에 더 가깝게 위치되는 것으로 나타난다. 본 발명이 '대각선으로'라는 용어를 단순히 2개의 위치 사이에 그려지는 선이 조직 샘플의 경계를 한정하는 다각체의 2개의 비-인접 연부를 통과하는 것으로 지칭될 수 있음을 표시하는 것으로 생각하고 있기는 하지만, 상기 제1 및 제2 위치는 샘플-고정 영역 (316)을 서로 실질적으로 대각선으로 가로질러, 즉 샘플-고정 영역 (316)을 가로질러 세로 및 가로 모두로 이격된다.

도 7은 본 발명의 또 다른 현미경 슬라이드 (410)를 도시하며, 동일한 번호표시는 동일한 구성요소를 나타낸다. 슬라이드 (410)는 분석될 조직 샘플 (15)을 수용하기 위한 조직 샘플-고정 영역 (416)을 갖는 제1 주 표면 (414)을 포함하는 실질적으로 평면인 기판 (412)을 포함한다. 슬라이드 (410)는 또한 각각 표면 (414) 상 제1, 제2 및 제3 위치에 위치되는 제1, 제2 및 제3 대조 샘플 (420a), (420b) 및 (420c)를 포함한다. 대조 샘플 (420a), (420b) 및 (420c)의 세로 및 가로 이격은 바람직하게는 3개 위치들 사이에 연장되는 선분이 각각 샘플-고정 영역 (416)을 통과하는 것을 보장한다. 3개 모두가 염색으로 드러날 경우에서의 완전한 조직 염색의 추가적인 신뢰성을 제공하기 위해서는 3개의 대조 샘플들 중 어느 것도 공통적인 주 표면 (414) 상 세로좌표를 공유하지 않는 것이 바람직하기는 하지만, 본 발명은 또한 대조 샘플들 중 2개는 그들 사이의 선분이 샘플-고정 영역 (416)을 통과하지 않도록 서로 인접하여 위치될 수 있는 것으로 생각한다.

대조 샘플들 (420a-c)이 동일한 바이오마커를 포함하는 것으로 표시되어 있기는 하지만, 본 발명은 본 발명에서 벗어나지 않고도 대조 샘플들 각각이 서로 다른 바이오마커 조합을 추가로 제공할 수 있는 3개 이상의 조직 고정 영역 주위 대조 샘플들을 제공하는 실시양태 또한 고려하고 있다. 제한이 아닌 예시로써, 제1 대조 샘플은 바이오마커 "X" 및 "Y"를 포함할 수 있으며, 제2 대조 샘플은 바이오마커 "Y" 및 "Z"를 포함할 수 있는 반면, 제3 대조 샘플은 바이오마커 "Z" 및 "X"를 포함한다. 본 발명에 따른 3개의 그와 같은 별도의 조직 고정 영역 주위 대조 샘플들을 사용함으로써, 쌍을 이루는 바이오마커 "X", "Y" 및 "Z"는 더 높은 정도의 조직 샘플을 포괄하는 염색의 신뢰성을 제공할 수 있다. 따라서, 사용되는 각 대조 샘플이 하나 이상의 다른 대조 샘플과 동일한 조성을 갖는 것이 바람직할 수 있기는 하지만, 조직-고정 영역 주위에서의 대조 샘플들의 바이오마커의 분포가 본 발명에 따른 조직-고정 영역의 일부분을 가로질러 위치되는 2개 이상의 바이오마커를 제공하는 한, 대조 샘플들 내에서의 바이오마커의 조합은 가변적일 수 있다.

도 8은 본 발명의 또 다른 현미경 슬라이드 (510)를 도시한다. 슬라이드 (510)는 분석될 조직 샘플 (15)을 수용하기 위한 조직 샘플-고정 영역 (516)을 갖는 제1 주 표면 (514)을 포함하는 실질적으로 평면인 기판 (512)을 포함한다. 슬라이드 (510)는 또한 각각 표면 (514) 상 제1, 제2, 제3 및 제4 위치에 위치되는 제1, 제2, 제3 및 제4 양성 대조 샘플 (520a), (520b), (520c) 및 (520d)를 포함한다. 대조 샘플 (520a), (520b), (520c) 및 (520d)의 세로 및 가로 이격은 바람직하게는 4개 위치들 사이에 연장되는 선분이 각각 샘플-고정 영역 (516)을 통과하는 것을 보장한다. 4개 모두가 염색으로 드러날 경우에서의 완전한 조직 염색의 추가적인 신뢰성을 제공하기 위해서는 4개의 대조 샘플들 중 어느 것도 공통적인 주 표면 (514) 상 세로좌표를 공유하지 않는 것이 바람직하기는 하지만, 본 발명은 또한 대조 샘플들 중 2개 또는 3개는 그들 사이의 선분이 샘플-고정 영역 (516)을 통과하지 않도록 서로 인접하여 위치될 수 있는 것으로 생각한다.

통상의 기술자라면 알고 있을 바와 같이, 본 발명은 특정 실시양태에서는, 2개 이상의 양성 대조 샘플이 샘플-고정 영역의 전체 경계를 둘러싸는 실질적으로 연속 선을 형성할 수 있을 것으로도 생각한다. 따라서, 샘플-고정 영역의 주변으로 경계를 한정하는 데에 사용되는 대조 샘플들의 정밀한 수 및 이격은 원하는 대로 선택될 수 있다.

도 9에 나타낸 바와 같이, 본 발명은 또한 제1 및 제2 양성 대조 샘플 (620a) 및 (620b)를 고정하기 위한 제1 및 제2 위치에 더하여, 현미경 슬라이드 (610)가 추가로 제3 및 제4 대조 샘플 (622a) 및 (622b)를 고정하기 위한 제3 및 제4 위치를 포함하도록 설계되는 현미경 슬라이드 (610)를 고려한다. 다시 한번, 동일한 번호표시는 본 발명의 동일한 구성요소를 나타낸다. 도 9에 나타낸 바와 같이, 제1 및 제2 양성 대조 샘플 (620a) 및 (620b)는 동일한 검출 수단에 의해 검출될 수 있는 공통 바이오마커를 함유한다. 본 발명은 제3 및 제4 대조 샘플 (622a) 및 (622b)가 대조 샘플 (620a) 및 (620b)에서의 것과 상이한 공통 바이오마커를 함유할 수 있을 것으로 생각한다. 대안적으로, 제3 및 제4 대조 샘플 (622a) 및 (622b)는 비록 상이한 신호 수준이기는 하지만 제1 및 제2 양성 대조 샘플의 것과 동일한 바이오마커를 함유할 수 있다. 제3 및 제4 대조 샘플 (622a) 및 (622b)는 또한 제1 및 제2 양성 대조 샘플의 것과 같은 음성 대조군으로 기능할 수도 있다.

도 9에 나타낸 바와 같이, 슬라이드 (610)는 분석될 조직 샘플 (15)을 수용하기 위한 조직 샘플-고정 영역 (616)을 갖는 제1 주 표면 (614)을 포함하는 실질적으로 평면인 기판 (612)을 포함한다. 제1 및 제2 위치 양자는 기판의 세로 축을 따라 세로로 이격됨은 물론, 세로 축의 가로로, 즉 그의 또는 그와 관련하여 어느 한쪽 측면으로도 이격된다. 다시 말하자면, 세로 단부 (617b) 및 연부 (618b)에 더 가깝게 위치되는 대조 샘플 (620b)에 비해, 대조 샘플 (620a)은 세로 단부 (617a) 및 연부 (618a)에 더 가깝게 위치되는 것으로 나타난다. 본 발명이 영역 (616)을 가로질러 서로 정밀하게 대향하는 것으로 정밀한 위치가 기하학상 제한될 필요는 없다고 생각하고 있기는 하지만, 상기 제1 및 제2 위치는 샘플-고정 영역 (616)을 서로 실질적으로 대각선으로 가로질러, 즉 샘플-고정 영역 (616)을 가로질러 세로로 이격된다. 마찬가지로, 제3 및 제4 위치 양자는 기판의 세로 축을 따라 세로로 이격됨은 물론, 세로 축의 가로로, 또는 그의 어느 한쪽 측면으로도 이격된다. 다시 말하자면, 세로 단부 (617b) 및 연부 (618a)에 더 가깝게 위치되는 대조 샘플 (622b)에 비해, 대조 샘플 (622a)은 세로 단부 (617a) 및 연부 (618b)에 더 가깝게 위치되는 것으로 나타난다. 본 발명이 영역 (616)을 가로질러 서로 정밀하게 대향하는 것으로 정밀한 위치가 기하학상 제한될 필요는 없다고 생각하고 있기는 하지만, 상기 제3 및 제4 위치는 샘플-고정 영역 (616)을 서로 실질적으로 정반대로 가로질러, 즉 샘플-고정 영역 (616)을 가로질러 세로로 이격된다.

도 10에 나타낸 바와 같이, 본 발명은 또한 제1 및 제2 양성 대조 샘플 (720a) 및 (720b)를 고정하기 위한 제1, 제2 위치, 제3 및 제4 대조 샘플 (722a) 및 (722b)를 고정하기 위한 제3 및 제4 위치에 더하여 현미경 슬라이드 (710)가 추가로 제5 및 제6 대조 샘플 (724a) 및 (724b)를 고정하기 위한 제5 및 제6 위치를 포함하도록 설계되는 현미경 슬라이드 (710)를 고려한다. 다시 한번, 동일한 번호표시는 다른 본 발명 실시양태의 동일한 구성요소를 나타낸다. 도 10에 나타낸 바와 같이, 제1 및 제2 양성 대조 샘플 (720a) 및 (720b)는 동일한 검출 수단에 의해 검출될 수 있는 공통 바이오마커를 함유한다. 본 발명은 제3 및 제4 대조 샘플 (722a) 및 (722b)가 제1 및 제2 대조 샘플 (720a) 및 (720b)와 상이한 공통 바이오마커를 함유할 수 있을 것으로, 그리고 제5 및 제6 대조 샘플 (724a) 및 (724b)가 역시 상이한 공통 바이오마커를 함유할 수 있을 것으로 생각한다. 대안적으로, 제3 및 제4 대조 샘플 (722a) 및 (722b)는 물론 제5 및 제6 대조 샘플 (724a) 및 (724b)도 비록 상이한 신호 수준이기는 하지만 제1 및 제2 양성 대조 샘플의 것과 동일한 바이오마커를 함유할 수 있다. 제3 및 제4 대조 샘플 (722a) 및 (722b) 또는 제5 및 제6 대조 샘플 (724a) 및 (724b) 중 한 쌍이 음성 대조군으로서 사용될 수도 있다.

도 10에 나타낸 바와 같이, 슬라이드 (710)는 분석될 조직 샘플 (15)을 수용하기 위한 조직 샘플-고정 영역 (716)을 갖는 제1 주 표면 (714)을 포함하는 실질적으로 평면인 기판 (712)을 포함한다. 제1 및 제2 위치 양자는 기판의 세로 축을 따라 세로로 이격됨은 물론, 세로 축의 가로로, 또는 그의 어느 한쪽 측면으로도 이격된다. 다시 말하자면, 세로 단부 (717b) 및 연부 (718b)에 더 가깝게 위치되는 대조 샘플 (720b)에 비해, 대조 샘플 (720a)은 세로 단부 (717a) 및 연부 (718a)에 더 가깝게 위치되는 것으로 나타난다. 본 발명이 영역 (716)을 가로질러 서로 정밀하게 대향하는 것으로 정밀한 위치가 기하학상 제한될 필요는 없다고 생각하고 있기는 하지만, 상기 제1 및 제2 위치는 샘플-고정 영역 (716)을 서로 실질적으로 정반대로 가로질러, 즉 샘플-고정 영역 (716)을 가로질러 세로로 이격된다.

제3 및 제4 양성 대조 샘플 (722a) 및 (722b)를 고정하기 위한 상기 제3 및 제4 위치는 주 표면 (714) 상의 샘플-고정 영역 (716)의 대향하는 측면에 존재한다. 즉, 상기 위치들은 샘플-고정 영역 (716)을 가로질러 실질적으로 가로로 이격된다. 대조 샘플 (722a)은 샘플 (15)과 기판 (712)의 연부 (718a) 사이에 위치되는 반면, 대조 샘플 (722b)은 샘플 (15)과 기판 (712)의 연부 (718b) 사이에 대향하여 위치된다.

제1 및 제2 위치와 마찬가지로, 제5 및 제6 위치 양자는 기판의 세로 축을 따라 세로로 이격됨은 물론, 세로 축의 가로로, 또는 그의 어느 한쪽 측면으로도 이격된다. 다시 말하자면, 세로 단부 (717a) 및 연부 (718b)에 더 가깝게 위치되는 대조 샘플 (724b)에 비해, 대조 샘플 (724a)은 세로 단부 (717b) 및 연부 (718a)에 더 가깝게 위치되는 것으로 나타난다. 본 발명이 영역 (716)을 가로질러 서로 정밀하게 대향하는 것으로 정밀한 위치가 기하학상 제한될 필요는 없다고 생각하고 있기는 하지만, 상기 제5 및 제6 위치는 샘플-고정 영역 (716)을 서로 실질적으로 정반대로 가로질러, 즉 샘플-고정 영역 (716)을 가로질러 세로로 이격된다.

상기 도 9 및 10, 그리고 하기 도 12에 도시되어 있는 바와 같이, 서로 다른 바이오마커의 양, 예컨대 항원 수준 (이전에 논의되었던 서로 다른 유형의 바이오마커와는 대조됨)을 함유하는 2종 이상의 양성 대조 샘플이 현미경 슬라이드에 포함될 수 있다. 그와 같은 실시양태에서, 각 대조 샘플 유형은 적어도 쌍으로 제공되어 상기 대조 샘플의 쌍이 조직-고정 영역의 일부 부분을 가로질러 위치되도록 한다. 예를 들어, 서로 다른 항원 발현 수준을 갖는 서로 다른 세포주들이 개별 세포 펠릿을 생성시키기 위하여 선택될 수 있다. 대안적으로, 서로 다른 세포량을 갖는 동일한 세포주가 서로 다른 세포 펠릿을 생성시키기 위하여 선택될 수도 있다. 이러한 세포 펠릿들은 샘플-고정 영역 주위에 예정된 패턴으로 배열될 수 있다. 예컨대, 대조군들은 낮거나, 중간이거나, 또는 높은 수준의 특정 바이오마커를 함유할 수 있다. 대안적으로, 대조군들은 0이거나, 중간이거나, 또는 높은 수준의 특정 바이오마커를 함유할 수도 있다. 이들 대조 샘플은 정량된 후, 결과가 그의 예상 발현 수준 또는 세포의 양과 비교될 수 있다. 이러한 결과는 현미경 슬라이드 표면 전체에 걸친 충분하고 균일한 포괄이 존재하는지, 또는 샘플 항원이 적정하게 재생되었는지 (특히 대형 조직 샘플을 위한 효소 항원 재생법에서)를 확인해 줄 수 있다.

다른 실시양태에서는, 2종 이상의 서로 다른 종류의 바이오마커, 예컨대 항원을 함유하는 양성 대조 샘플이 현미경 슬라이드 상에 포함된다. 이러한 실시양태에서, 양성 대조 샘플 각각은 서로 다른 항원 수준을 함유할 수도 있다. 예를 들어, 서로 다른 단백질 발현 수준을 갖는 서로 다른 세포주들이 개별 세포 펠릿을 생성시키기 위하여 선택될 수 있다. 대안적으로는, 서로 다른 각 세포 펠릿이 서로 다른 양의 세포를 함유하도록, 서로 다른 종류의 항원을 함유하는 세포주들이 선택될 수 있다. 이러한 세포 펠릿들은 샘플-고정 영역 주위에 예정된 패턴으로 배열될 수 있다. 이들 양성 대조 샘플은 정량된 후, 결과가 그의 예상 발현 수준과 비교될 수 있다.

다중 실험의 경우에는, 모든 마커들에 걸친 일련의 염색 강도를 보장하기 위하여 다수의 세포 펠릿들이 사용될 수 있다. 이와 같은 경우, 대조군들은 선택된 후, 모든 마커들에 대한 공간적 패턴의 평가를 가능케 하도록 설계된 패턴으로 슬라이드 상에 배열될 수 있다.

서로 다른 바이오마커 수준 또는 서로 다른 종류의 바이오마커를 갖는 양성 대조 샘플 이외에도, 음성 대조 샘플 역시 첨가될 수 있다. 예컨대 특정 실시양태에서, 본 발명의 현미경 슬라이드는 양성 및 음성 대조 샘플 모두를 포함할 수 있다. 이에 따라, 본 발명의 현미경 슬라이드는 샘플-고정 영역에 인접한 위치에서 제1 주 표면 상에 고정된 1개 이상의 음성 대조 샘플을 포함할 수 있다.

하기 표 1은 본 발명의 특정 실시양태에 따른 세포 펠릿 대조군을 생성시키는 데에 유용한 대표적인 세포주들을 나타낸다. 세포주들은 서로 다른 HER2 발현 수준을 갖고 있다.

<표 1>

세포주 및 관련 Her2 단백질 발현

(^*) 문헌 [McCabe, A., et al., Automated Quantitative Analysis (AQUA) of In Situ Protein Expression, Antibody Concentration, and Prognosis. Journal of the National Cancer Institute, 2005. 97(24): p. 1808-1815].

도 11은 또 다른 본 발명의 현미경 슬라이드 (810)를 도시하고 있다. 다시 한번, 동일한 번호표시는 동일한 구성요소를 나타낸다. 슬라이드 (810)는 분석될 조직 샘플 (15)을 수용하기 위한 조직 샘플-고정 영역 (816)을 갖는 제1 주 표면 (814)을 포함하는 실질적으로 평면인 기판 (812)을 포함한다. 슬라이드 (810)는 또한 각각 표면 (814) 상 8개의 위치에 위치되는 8개의 대조 샘플 (820a) 내지 (820h)를 포함한다. 도 11에 나타낸 바와 같이, 현미경 슬라이드 (810)는 실질적으로 균일-이격된 세포 펠릿들에 의해 주변에 경계가 한정된 조직-고정 영역을 포함한다.

도 12는 또 다른 본 발명의 현미경 슬라이드 (910)를 도시하고 있으며, 동일한 번호표시는 동일한 구성요소를 나타낸다. 슬라이드 (910)는 분석될 조직 샘플 (15)을 수용하기 위한 조직 샘플-고정 영역 (916)을 갖는 제1 주 표면 (914)을 포함하는 실질적으로 평면인 기판 (912)을 포함한다. 슬라이드 (910)는 또한 각각 표면 (914) 상 8개의 위치에 대안적으로 위치된 8개의 대조 샘플 (920a) 내지 (920d) 및 (922a) 내지 (922d)를 포함한다. 도 12에 나타낸 바와 같이, 현미경 슬라이드 (910)는 실질적으로 균일-이격된 세포 펠릿들에 의해 주변에 경계가 한정된 조직-고정 영역을 포함한다. 바람직하게는, 양성 대조 샘플 (920a-d)은 동일한 검출 수단에 의해 검출될 수 있는 공통 바이오마커를 함유한다. 마찬가지로, 대조 샘플 (922a-d)은 (920ad)의 공통 바이오마커와 상이한 공통 바이오마커를 함유할 수 있다. 대안적으로, 대조 샘플 (922a-d)은 비록 상이한 검출 수준이기는 하지만 양성 대조 샘플들의 것과 동일한 바이오마커를 함유할 수 있다. 대조 샘플 (922ad)은 양성 대조 샘플 (920a-d)의 것과 비교되는 것으로서의 음성 대조군으로 기능할 수도 있다.

도 13은 또 다른 본 발명의 현미경 슬라이드 (1010)를 도시하고 있다. 슬라이드 (1010)는 분석될 조직 샘플 (15)을 수용하기 위한 조직 샘플-고정 영역 (1016)을 갖는 제1 주 표면 (1014)을 포함하는 실질적으로 평면인 기판 (1012)을 포함한다. 슬라이드 (1010)는 또한 각각 표면 (1014) 상 8개의 위치에 위치되는 8개의 양성 대조 샘플 (1020a) 내지 (1020h)를 포함한다. 도 13에 나타낸 바와 같이, 대조 샘플 (1020a), (1020h) 및 (1020g)는 조직 샘플 (15)과 세로 연부 (1017a) 사이에 위치됨으로써 세로 연부 (1017a)와 평행한 선분을 형성한다. 대조 샘플 (1020h)은 또한 대조 샘플 (1020a)와 (1020g) 사이의 실질적으로 중앙에 위치된다. 마찬가지로, 대조 샘플 (1020c), (1020d) 및 (1020e)는 조직 샘플 (15)과 세로 연부 (1017b) 사이에 위치됨으로써 세로 연부 (1017b)와 평행한 선분을 형성한다. 대조 샘플 (1020d)은 또한 대조 샘플 (1020c)와 (1020e) 사이의 실질적으로 중앙에 위치된다.

도 13에 나타낸 바와 같이, 대조 샘플 (1020b)은 대조 샘플 (1020a)와 (1020c) 사이의 실질적으로 중앙에 위치된다. 대조 샘플 (1020a), (1020b) 및 (1020c)는 조직 샘플 (15)과 연부 (1018a) 사이에 위치됨으로써 실질적으로 연부 (1018a)와 평행한 선분을 형성한다. 대조 샘플 (1020f)은 대조 샘플 (1020e)와 (1020g) 사이의 실질적으로 중앙에 위치된다. 대조 샘플 (1020e), (1020f) 및 (1020g)는 조직 샘플 (15)과 연부 (1018b) 사이에 위치됨으로써 실질적으로 연부 (1018b)와 평행한 선분을 형성한다.

도 14는 또 다른 본 발명의 현미경 슬라이드 (1110)를 도시하고 있으며, 동일한 번호표시는 동일한 구성요소를 나타낸다. 슬라이드 (1110)는 분석될 조직 샘플 (15)을 수용하기 위한 조직 샘플-고정 영역 (1116)을 갖는 제1 주 표면 (1114)을 포함하는 실질적으로 평면인 기판 (1112)을 포함한다. 슬라이드 (1110)는 또한 샘플-고정 영역 (1116) 주위에 위치되는 8개의 양성 대조 샘플 (1120a) 내지 (1120h)를 포함한다. 또한, 슬라이드 (1110)는 각각 실질적으로 평면인 플랫폼 표면 (1132a-h)을 각각 제공하는 주 표면 (1114)에 고정된 실질적으로 평면인 플랫폼 (1130a-h)을 포함한다. 따라서, 각 플랫폼 표면 (1132a-h)은 각각 그 위에 대조 샘플 (1120a-h)을 각각 지지한다. 플랫폼 표면 (1132a) 내지 (1132h)는 대조 샘플 (1120a-h)이 각각 성공적인 염색을 표시할 경우, 특히 염색 동안 슬라이드 (1110)가 위를 보고 배향되어 있는 경우 (즉 제1 주 표면 (1114)이 상향으로 향하는 경우)에, 조직 샘플 (15) 역시 적정하게 염색되었음에 대한 훨씬 더 큰 신뢰성이 존재하게 되도록, 제1 주 표면 (1114) 위로 상승되어 있다. 바람직하게는, 플랫폼 (1130a-h)은 조직 샘플을 초과하는 두께를 가지나, 본 발명은 어떠한 두께도 향상된 염색 신뢰성을 제공하게 될 것으로 생각한다.

대조 샘플 (1120a), (1120h) 및 (1120g) (는 물론 플랫폼 (1130a), (1130h) 및 (1130g))는 조직 샘플 (15)과 세로 연부 (1117a) 사이에 위치됨으로써 세로 연부 (1117a)와 평행한 선분을 형성한다. 대조 샘플 (1120h)은 또한 대조 샘플 (1120a)와 (1120g) 사이의 실질적으로 중앙에 위치된다. 마찬가지로, 대조 샘플 (1120c), (1120d) 및 (1120e) (는 물론 플랫폼 (1130c), (1130d) 및 (1130e))는 조직 샘플 (15)과 세로 연부 (1117b) 사이에 위치됨으로써 실질적으로 세로 연부 (1117b)와 평행한 선분을 형성한다. 대조 샘플 (1120d)은 또한 대조 샘플 (1120c)와 (1120e) 사이의 실질적으로 중앙에 위치된다.

대조 샘플 (1120b)은 대조 샘플 (1120a)와 (1120c) 사이의 실질적으로 중앙에 위치된다. 대조 샘플 (1120a), (1120b) 및 (1120c)는 조직 샘플 (15)과 연부 (1118a) 사이에 위치됨으로써 연부 (1118a)와 평행한 선분을 형성한다. 대조 샘플 (1120f)은 대조 샘플 (1120e)와 (1120g) 사이의 실질적으로 중앙에 위치된다. 대조 샘플 (1120e), (1120f) 및 (1120g)는 조직 샘플 (15)과 연부 (1118b) 사이에 위치됨으로써 실질적으로 연부 (1118b)와 평행한 선분을 형성한다.

도 15는 또 다른 본 발명의 현미경 슬라이드 (1210)를 도시하고 있으며, 동일한 번호표시는 동일한 구성요소를 나타낸다. 슬라이드 (1210)는 적용된 평면 기판 플랫폼 (1240)을 포함하는 실질적으로 평면인 기판 (1212)을 포함한다. 적용된 기판 플랫폼은 플랫폼 표면 (1242), 및 기판 (1212)의 제1 주 표면 (1214)과 오픈 레지스트리인 구멍 (1250)을 포함한다. 주 표면 (1214)은 분석될 조직 샘플 (15)을 수용하기 위하여 구멍 (1250)을 통하여 노출되는 조직 샘플-고정 영역 (1216)을 포함한다. 슬라이드 (1212)는 또한 구멍 (1250) 주위의 플랫폼 표면 (1242) 상에 위치되는 8개의 양성 대조 샘플 (1220a-h)을 포함한다. 구멍 (1250) 및 제1 주 표면 (1214)은 조직 샘플을 고정하기 위한 평면인 오목한 영역을 한정한다. 도 15에 나타낸 바와 같이, 대조 샘플 (1220a), (1220h) 및 (1220g)는 조직 샘플 (15)과 세로 연부 (1217a) 사이에 위치됨으로써 실질적으로 세로 연부 (1217a)와 평행한 선분을 형성한다. 대조 샘플 (1220h)은 또한 대조 샘플 (1220a)와 (1220g) 사이의 실질적으로 중앙에 위치된다. 마찬가지로, 대조 샘플 (1220c), (1220d) 및 (1220e)는 조직 샘플 (15)과 세로 연부 (1217b) 사이에 위치됨으로써 실질적으로 세로 연부 (1217b)와 평행한 선분을 형성한다. 대조 샘플 (1220d)은 또한 대조 샘플 (1220c)와 (1220e) 사이의 실질적으로 중앙에 위치된다.

대조 샘플 (1220b)은 대조 샘플 (1220a)와 (1220c) 사이의 실질적으로 중앙에 위치된다. 대조 샘플 (1220a), (1220b) 및 (1220c)는 조직 샘플 (15)과 연부 (1218a) 사이에 위치됨으로써 연부 (1218a)와 평행한 선분을 형성한다. 대조 샘플 (1220f)은 대조 샘플 (1220e)와 (1220g) 사이의 실질적으로 중앙에 위치된다. 대조 샘플 (1220e), (1220f) 및 (1220g)는 조직 샘플 (15)과 연부 (1218b) 사이에 위치됨으로써 연부 (1218b)와 평행한 선분을 형성한다. 본 발명은 또한 기판 플랫폼 (1240)이 추가로 염색 후 샘플-고정 영역 (1216)으로부터의 염색제의 배수를 돕도록 구멍 (1250)으로부터 기판 (1212) 연부로 유체 소통하여 연장되는 연장 채널 (미도시)을 한정할 수 있을 것으로 생각한다. 주 표면 (1214)이 위를 보고 배향되도록 슬라이드 (1210)가 염색되는 경우, 샘플-고정 영역 (1216)과 플랫폼 표면 (1242) 사이의 상대적 높이는 모든 대조 샘플 (1220a-h)이 그들이 염색되었음을 표시할 때 적정한 조직 샘플 (15) 염색의 추가적인 신뢰성을 제공한다.

도 16은 또 다른 본 발명의 현미경 슬라이드 (1310)를 도시하고 있으며, 동일한 번호표시는 동일한 구성요소를 나타낸다. 슬라이드 (1310)는 분석될 조직 샘플 (15)을 수용하기 위한 조직 샘플-고정 영역 (1316)을 갖는 제1 주 표면 (1314)을 포함하는 실질적으로 평면인 기판 (1312)을 포함한다. 일반적으로 도 13의 슬라이드 (1010)에 대하여 기술된 바와 같이, 슬라이드 (1310)는 또한 각각 표면 (1314) 상 8개의 위치에 위치되는 8개의 양성 대조 샘플 (1320a-h)을 포함한다. 슬라이드 (1310)는 또한 주 표면 (1314)에 고정된 표지 (1360)를 포함한다. 표지 (1360)는 슬라이드, 조직 샘플 또는 염색 과정과 관련된 정보와 같은 표시가 인쇄되어 있는 표지 표면 (1362)을 포함한다. 그와 같은 표시는 또한 표면 (1362) 상에 인쇄된 바코드 또는 거기에 고정된 또 다른 표지 중 어느 하나에 의해 제공될 수도 있다. 도 16에 나타낸 바와 같이, 표지 (1360)는 세로 연부 (1317a)와 대조 샘플 (1320a), (1320h) 및 (1320g) 사이에 위치된다. 본 발명은 표지 (1360)와 유사한 표지가 본 발명을 구현하는 어떠한 슬라이드에도 유사하게 제공될 수 있을 것으로 생각한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 조직 샘플 분석용 키트를 제공한다. 상기 키트는 본 발명의 특정 실시양태에 따른 하나 이상의 현미경 슬라이드를 포함한다. 상기 슬라이드는 분석될 조직 샘플을 수용하도록 적합화되어 있다. 바람직하게는, 슬라이드는 또한 수행될 분석과 관련된 표시를 포함하는 표지를 수용하도록 적합화되어 있다. 상기 키트는 또한 슬라이드에 관한 정보를 제공하고 슬라이드의 적정한 사용에 대해 지시하는 사용자 매뉴얼을 포함할 수 있다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 측면에 따른 현미경 슬라이드의 제조 방법을 제공하며, 상기 방법은 적어도 제1 위치 및 제2 위치에서 현미경 슬라이드 상에 양성 대조 샘플의 박층을 전달하여 고정하는 단계를 포함한다. 바람직하게는, 사용되는 슬라이드는 하전된 슬라이드이다. 바람직하게는, 현미경 슬라이드 상에의 양성 대조 샘플 박층의 전달 및 고정 후, 이어서 베이킹 단계가 포함된다.

특정 실시양태에서, 상기 박층 대조 샘플은 샘플의 약 5 마이크로미터 절편이다.

특정 실시양태에서, 양성 대조 샘플은 세포 펠릿을 포함한다. 바람직하게는, 상기 세포 펠릿은 용융된 파라핀 왁스에 현탁된 포르말린-고정 세포를 포함한다.

도 17은 본 발명의 현미경 슬라이드에 대조 샘플을 고정하기 위한 시스템 (1500)을 도시하고 있다. 시스템 (1500)은 그로부터 돌출되는 하나 이상의 인쇄 헤드 (1586)를 갖는 실질적으로 평면인 인쇄 헤드 면 (1584)이 구비된 스탬프 (1582)를 포함한다. 인쇄 헤드 (1586)는 슬라이드의 주 표면 상에 침착될 일정량의 대조 샘플 물질을 유지하기 위한 평면 표면을 제공한다. 시스템 (1500)은 용융된 파라핀 왁스 및 포르말린-고정 세포 펠릿의 현탁액을 함유하는 저장소 (1588)에 인쇄 헤드 (1586)를 침지한다. 세포 펠릿은 인쇄 헤드 (1586)에 부착되게 된다. 다음에, 시스템 (1500)은 스탬프 (1582)를 슬라이드 (1510)의 주 표면 (1514)으로 전달한다. 스탬프 (1582)는 주 표면 (1514)으로의 세포 펠릿의 전달을 수행하도록 표면 (1514)과 접촉된다. 인쇄 헤드 (1586)는 슬라이드 (1510)의 샘플-고정 영역 (1516) 주위에 본 발명의 대조 샘플에 해당하는 위치에 세포 펠릿을 침착시키도록 인쇄 면 (1584) 상에 정렬된다. 업계에 공지된 바와 같이, 슬라이드는 세포 펠릿의 전달을 더 잘 가능케 하도록 하전될 수 있다. 또한, 본 발명은 이후 슬라이드가 대조 샘플을 제자리에 고정하도록 베이킹될 수 있을 것으로 생각한다. 본 발명은 또한 슬라이드 샘플-고정 영역 주위의 다른 가용한 위치에 상이한 마커를 포함하는 대조 샘플을 침착시키도록 상이하게 정렬된 인쇄 헤드를 갖는 상이한 인쇄 헤드가 사용될 수 있을 것으로 생각한다. 통상적으로, 침착되는 세포의 두께는 단층 세포의 경우 약 5 마이크로미터 수준인데, 이는 슬라이드에 고정되는 조직 절편의 두께와 대체적으로 동일하다. 이와 같은 접촉 인쇄법은 고처리량이며, 간단하고, 저비용이다.

본 발명의 슬라이드 상에 대조 샘플을 침착시키기 위한 다른 방법에는 제한이 아닌 예시 목적상 용융된 왁스 용액 중 포르말린-고정 세포 펠릿의 분취물을 슬라이드 상에 첨가하는 미세분배 기술을 사용하는 것이 포함된다. 대안적으로, 대조 샘플의 세포는 슬라이드-크기조정된 블록에서 포르말린-고정된 후, 파라핀 포매될 수 있다. 블록으로부터의 전체 슬라이스가 슬라이드 상에 위치된 후, 기계적 또는 화학적 수단에 의해 나중에 샘플-고정 영역이 식각 제거될 수 있다. 역시 대안적으로, 슬라이드 샘플-고정 영역의 형상으로 구멍을 한정함으로써 샘플-고정 영역의 주변 윤곽만이 슬라이드에 적용되도록, 블록의 중심이 절단-제거될 수 있다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 분석 방법을 제공한다.

한 실시양태에서, 상기 분석 방법은 양성 대조 샘플용 검출 수단을 사용하여 본 발명의 실시양태에 따른 현미경 슬라이드를 염색하는 단계; 및 적어도 제1 및 제2 위치로부터 양성 대조 샘플을 검출하는 단계를 포함한다.

특정 실시양태에서, 양성 대조 샘플의 모든 위치로부터의 신호의 존재는 염색 품질의 실시간 확인을 제공한다. 따라서, 양성 대조 샘플의 일부 위치로부터의 신호의 부재는 염색 실패를 표시한다.

특정 실시양태에서, 슬라이드는 또한 샘플-고정 영역 (16)에 인접한 위치에서 제1 주 표면 상에 고정된 1개 이상의 음성 대조 샘플을 포함하며, 여기서 음성 대조 샘플의 일부 위치로부터의 신호의 존재는 염색 실패를 표시한다.

특정 실시양태에서, 현미경 슬라이드는 또한 조직 샘플을 포함한다.

특정 실시양태에서, 양성 대조 샘플은 세포 펠릿이며, 검출하는 단계는 세포 펠릿을 함유하지 않는 영상의 부분을 차폐 제거하고, 세포 펠릿의 각 세포 내부의 마커의 국재화를 해명하는 것을 포함한다. 바람직하게는, 상기 방법은 또한 세포 펠릿 중 각 세포의 핵 더하기 각 세포의 각 핵 주위 환상 영역을 설명하는 2-구획 영상 분할을 수행하는 단계를 포함한다. 바람직하게는, 상기 방법은 또한 시야에서 세포 펠릿의 각 세포의 양 구획에서의 각 마커의 평균 염색을 측정하고, 이러한 세포-수준 측정치를 요약하여 전체 시야 측정치를 생성시키는 단계를 포함한다. 상기 시야 측정치는 공지된 핵 마커의 평균 핵 발현을 포함할 수 있다. 더 구체적으로, 상기 방법은 또한 선형 통계 모델에서 계수를 조사하는 것에 의해 결함을 검출하고, 응답이 각 세포 펠릿에 대한 시야 수준 염색 측정치이며 예측인자가 슬라이드의 두 공간적 치수인 선형 통계 모델을 사용하여 공간적 염색 결함을 추정하는 단계를 포함한다. 더욱 더 바람직하게는, 상기 방법은 또한 불균일한 염색 프로파일을 추정하여 차감 제거하도록 피팅된 모델을 사용하는 것에 의해 부수적인 공간적 결함을 보정하는 단계를 포함한다.

본 발명의 구체적인 실시양태를 나타내고 기술하기는 하였지만, 통상의 기술자라면, 본 발명의 교시에서 벗어나지 않고도 변화 및 변형이 이루어질 수 있다는 것을 알고 있을 것이다. 전기한 상세한 설명 및 첨부 도면에서 제시된 것들은 제한으로서가 아니라 단지 예시로써 제공된다. 본 발명의 실제 영역은 선행 기술을 바탕으로 하는 그의 적정한 관점으로 볼 때, 하기의 청구범위에서 한정되는 것으로 한다.

Claims

조직 샘플이 고정될 수 있는 샘플-고정 영역을 갖는 제1 주 표면을 포함하는 긴 평면 기판;
상기 샘플-고정 영역에 인접한 제1 위치에서 상기 제1 주 표면 상에 고정된 제1 양성 대조 샘플;
상기 샘플-고정 영역에 인접한 제2 위치에서 상기 제1 주 표면 상에 고정된 제2 양성 대조 샘플
을 포함하며, 여기서 제1 및 제2 위치는 상기 제1 및 제2 양성 대조 샘플의 염색 품질이 조직 샘플의 염색 품질의 지표가 되도록 이격되어 있는 것인, 조직 샘플용 현미경 슬라이드.
제1항에 있어서, 제1 및 제2 위치는 상기 샘플-고정 영역의 적어도 일부분이 상기 기판의 세로 축을 따라 상기 제1 및 제2 위치 사이로 연장되도록 이격되어 있는 것인 현미경.
제1항에 있어서, 상기 제1 및 제2 위치 중 적어도 하나가 상기 샘플-고정 영역과 가로로 나란히 위치되어 있는 것인 현미경 슬라이드.
제1항에 있어서, 상기 제1 및 제2 위치 중 적어도 하나가 상기 샘플-고정 영역과 상기 기판의 긴 연부 사이에 가로로 위치되어 있는 것인 현미경 슬라이드.
제1항에 있어서, 상기 제1 및 제2 위치가 상기 샘플-고정 영역의 대향하는 측면에 있는 것인 현미경 슬라이드.
제1항에 있어서, 상기 제1 및 제2 위치가 상기 샘플-고정 영역을 정반대로 가로질러 있는 것인 현미경 슬라이드.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 샘플-고정 영역에 인접한 제3 위치에서 상기 제1 주 표면 상에 고정된 제3 양성 대조 샘플을 추가로 포함하는 현미경 슬라이드.
제7항에 있어서, 상기 샘플-고정 영역에 인접한 제4 위치에서 상기 제1 주 표면 상에 고정된 제4 양성 대조 샘플을 추가로 포함하는 현미경 슬라이드.
제8항에 있어서, 상기 샘플-고정 영역에 인접한 1개 이상의 다른 위치에서 상기 제1 주 표면 상에 고정된 1개 이상의 양성 대조 샘플을 추가로 포함하는 현미경 슬라이드.
제7항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 3개 이상의 양성 대조 샘플이 상기 샘플-고정 영역의 경계를 따라 실질적으로 동일하게 이격되어 있는 것인 현미경 슬라이드.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 2개 이상의 양성 대조 샘플이 상기 샘플-고정 영역의 전체 경계를 둘러싸는 연속 선을 형성하는 것인 현미경 슬라이드.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 양성 대조 샘플이 세포 펠릿, 대조 조직 샘플, 또는 생체물질이 적재된 캐리어로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 현미경 슬라이드.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 양성 대조 샘플 및 조직 샘플이 동일한 바이오마커를 포함하는 것인 현미경 슬라이드.
제13항에 있어서, 검출 수단이 면역검정이며, 양성 대조 샘플 및 조직 샘플이 동일한 종류의 항원 바이오마커를 포함하는 것인 현미경 슬라이드.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 및 제2 양성 대조 샘플이 공통되는 바이오마커를 함유하는 것인 현미경 슬라이드.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 및 제2 양성 대조 샘플이 서로 다른 바이오마커를 함유하며, 조직 샘플이 분석될 때 대조군들이 모두 검출가능한 것인 현미경 슬라이드.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 샘플-고정 영역에 인접한 위치에서 상기 제1 주 표면 상에 고정된 1개 이상의 음성 대조 샘플을 추가로 포함하는 현미경 슬라이드.
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 각 대조 샘플이 바이오마커를 포함하며, 이는 슬라이드 기판의 조직-고정 영역의 일부분을 가로질러 위치되는 또 다른 대조군에서의 상응하는 쌍으로 된 관련 바이오마커를 포함하는 것인 현미경 슬라이드.
제18항에 있어서, 2종의 쌍으로 된 관련 바이오마커가 동일한 바이오마커인 현미경 슬라이드.
제18항에 있어서, 2종의 쌍으로 된 관련 바이오마커가 서로 다르며, 조직 샘플이 분석될 때 모두 검출될 수 있는 것인 현미경 슬라이드.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 각 대조 샘플이 2종 이상의 서로 다른 종류의 바이오마커를 함유하는 것인 현미경 슬라이드.
제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 조직 고정 영역 주위에 3개 이상의 대조 샘플을 포함하며, 조직-고정 영역의 일부분을 가로질러 위치되는 대조 샘플 중 적어도 2개가 공통 바이오마커를 포함하는 것인 현미경 슬라이드.
제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 서로 다른 양의 바이오마커를 포함하는 대조 샘플이 현미경 슬라이드 상에 포함되며, 적어도 쌍으로 제공되어 상기 대조 샘플의 쌍이 조직-고정 영역의 일부 부분을 가로질러 위치되도록 하는 것인 현미경 슬라이드.
제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대조 샘플 중 적어도 1개가 상기 샘플-고정 영역 위로 상승되어 있는 것인 현미경 슬라이드.
제24항에 있어서, 대조 샘플이 위치되는 상기 위치에서 상기 제1 주 표면 상에 위치되는 적어도 1개의 지지 플랫폼을 추가로 포함하며, 상기 지지 플랫폼이 상기 제1 주 표면 위로 상승되어 있는 지지 표면을 포함하고, 상기 적어도 1개의 대조 샘플이 상기 지지 표면에 고정되어 있는 것인 현미경 슬라이드.
제24항에 있어서, 상기 샘플-고정 영역이 평면 오목 영역을 추가로 포함하며, 상기 기판이 상기 평면 오목 영역 및 상기 제1 주 표면 상의 개구부로부터 유체 소통하여 연장되는 오목부를 한정하는 것인 현미경 슬라이드.
제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 기판이 상기 샘플-고정 영역 위로 상승되어 있는 실질적으로 평면인 표지 영역을 추가로 포함하는 것인 현미경 슬라이드.
분석될 조직 샘플을 수용하도록 적합화된, 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 따른 현미경 슬라이드를 포함하는 키트.
제28항에 있어서, 슬라이드가 수행될 분석과 관련된 표시를 포함하는 표지를 수용하도록 추가로 적합화된 것인 키트.
제1 위치 및 제2 위치에서 현미경 슬라이드 상에 양성 대조 샘플의 박층을 전달하여 고정하는 단계
를 포함하는, 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항의 현미경 슬라이드의 제조 방법.
제30항에 있어서, 양성 대조 샘플이 세포 펠릿을 포함하는 것인 방법.
제31항에 있어서, 세포 펠릿이 용융된 파라핀 왁스에 현탁된 포르말린-고정 세포를 포함하는 것인 방법.
제30항에 있어서, 전달하는 단계가 접촉 인쇄를 포함하는 것인 방법.
제30항에 있어서, 전달하는 단계가 용융된 왁스 용액 중 포르말린-고정 세포 펠릿의 분취물을 미세분배 기술에 의해 슬라이드 상에 첨가하는 것을 포함하는 것인 방법.
제30항에 있어서, 전달하는 단계가
포르말린-고정 파라핀-포매 세포의 슬라이드-크기조정된 블록을 절편화하는 것;
상기 블록을 현미경 슬라이드 상에 전달하는 것; 및
블록의 일부를 제거하여 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항의 현미경 슬라이드를 생성시키는 것
을 포함하는 것인 방법.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항의 현미경 슬라이드를 염색하는 단계;
적어도 제1 및 제2 위치로부터 양성 대조 샘플을 검출하는 단계
를 포함하는 분석 방법.
제36항에 있어서, 양성 대조 샘플의 모든 위치로부터의 신호의 존재가 염색 품질의 확인을 제공하는 것인 방법.
제36항에 있어서, 양성 대조 샘플의 모든 위치로부터의 신호의 존재가 염색 품질의 실시간 확인을 제공하는 것인 방법.
제36항에 있어서, 양성 대조 샘플의 일부 위치로부터의 신호의 부재가 염색 실패를 표시하는 것인 방법.
제36항에 있어서, 슬라이드가 상기 샘플-고정 영역에 인접한 위치에서 상기 제1 주 표면 상에 고정된 1개 이상의 음성 대조 샘플을 추가로 포함하며, 음성 대조 샘플의 일부 위치로부터의 신호의 존재가 염색 실패를 표시하는 것인 방법.
제36항에 있어서, 양성 대조 샘플이 세포 펠릿이며, 검출하는 단계가 세포 펠릿을 함유하지 않는 영상의 부분을 차폐 제거하고, 세포 펠릿의 각 세포 내부의 마커의 국재화를 해명하는 것을 포함하는 것인 방법.
제41항에 있어서, 세포 펠릿 중 각 세포의 핵 더하기 각 세포의 각 핵 주위 환상 영역을 설명하는 2-구획 영상 분할을 수행하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
제42항에 있어서, 시야에서 세포 펠릿의 각 세포의 양 구획에서의 각 마커의 평균 염색을 측정하고, 이러한 세포-수준 측정치를 요약하여 전체 시야 측정치를 생성시키는 단계를 추가로 포함하는 방법.
제43항에 있어서, 상기 시야 측정치가 공지된 핵 마커의 평균 핵 발현을 포함하는 것인 방법.
제44항에 있어서,
선형 통계 모델에서 계수를 조사하는 것에 의해 결함을 검출하는 단계, 및
응답이 각 세포 펠릿에 대한 시야 수준 염색 측정치이며 예측인자가 슬라이드의 두 공간적 치수인 상기 선형 통계 모델을 사용하여 공간적 염색 결함을 추정하는 단계
를 추가로 포함하는 방법.
제45항에 있어서, 불균일한 염색 프로파일을 추정하여 차감 제거하도록 피팅된 모델을 사용하는 것에 의해 부수적인 공간적 결함을 보정하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
제36항에 있어서, 현미경 슬라이드가 조직 샘플을 추가로 포함하는 것인 방법.