KR20150099775A

KR20150099775A - 전립선 기저세포의 검출 방법

Info

Publication number: KR20150099775A
Application number: KR1020157018385A
Authority: KR
Inventors: 시게츠구 하타케야마; 신야 다나카
Original assignee: 국립대학법인 홋가이도 다이가쿠; 엘에스아이피 환도 운에이고우도우가이샤
Priority date: 2012-12-20
Filing date: 2013-12-18
Publication date: 2015-09-01
Also published as: CN104871002A; US20160195535A1; JPWO2014098135A1; WO2014098135A1; EP2937696B1; ES2676893T3; EP2937696A4; JP6381034B2; CA2893453A1; EP2937696A1

Abstract

본 발명의 목적은, 전립선의 기저세포에 특이적으로 발현해 있는 분자를 탐색하고, 그 분자를 해석함에 의해 전립선 기저세포의 검출 방법을 제공하는 것이다. 상기 과제는, 전립선의 기저세포에 있어서의 트리파르타이트 모티프-함유 단백질 29(TRIM29) 단백질의 발현을 면역 조직 염색에 의해 가시화하는 것을 포함하는 전립선 기저세포의 검출 방법에 의해, 해결할 수 있다.

Description

전립선 기저세포의 검출 방법{METHOD FOR DETECTING PROSTATIC BASAL CELLS}

본 발명은, 전립선 기저세포의 검출 방법, 전립선 기저세포의 존재, 감소 또는 소실의 확인 방법 및 전립선 기저세포의 검출용 면역 조직 염색 키트에 관한 것이다. 본 발명에 따르면, 전립선 기저세포를 확실히 검출할 수 있다. 또한, 전립선암의 확정 진단을 확실히 행할 수 있다.

정상인 전립선은, 선세포(腺細胞) 및 기저세포(基底細胞)로 이루어져 있으며, 선세포의 주위에 기저세포가 존재하는 조직상(組織像)이 관찰된다.

선세포에는, 안드로겐 수용체(Androgen receptor), 사이토케라틴8(cytokeratin 8), 및 사이토케라틴18(cytokeratin 18)이 특이적으로 발현해 있지만, 전립선암의 대부분은, 이들 선세포의 마커인 안드로겐 수용체, 사이토케라틴8, 또는 사이토케라틴18을 발현하고 있다. 따라서 전립선암은 선세포에 유래하는 것으로 생각되고 있다.

한편, 기저세포는 전립선암에 있어서, 소실하는 것이 알려져 있다. 그 때문에, 정상인 기저세포에 발현해 있는 p63 또는 사이토케라틴에 대한 항체를 사용해서, 전립선의 면역 조직 염색을 행하며, 그리고 기저세포의 소실을 확인함에 의하여, 전립선암의 확정 진단이 행해지고 있다.

국제공개 제2008/150512호 공보 국제공개 제2005/014781호 공보 국제공개 제2004/018711호 공보 국제공개 제2006/080597호 공보 국제공개 제2004/018711호 공보

그러나, 상기한 기저세포의 면역 조직 염색에 있어서, 항p63 항체, 또는 항사이토케라틴 항체를 사용한 면역 조직 염색만으로는, 기저세포가 소실해 있는지의 여부의 판단이 곤란한 경우가 있었다.

따라서, 본 발명의 목적은, 전립선의 기저세포에 특이적으로 발현해 있는 분자를 탐색하고, 그 분자를 해석함에 의해 전립선 기저세포의 검출 방법을 제공하는 것이다.

본 발명자는, 정상 전립선 조직의 기저세포에 특이적으로 발현해 있는 분자에 대하여, 예의 연구한 결과, 놀랍게도, 정상 전립선 조직의 기저세포에 트리파르타이트 모티프-함유 단백질 29(Tripartite motif-containing protein)(TRIM29)이 특이적으로 발현해 있음을 알아냈다. 그리고, TRIM29의 전립선 조직에 있어서의 발현을 면역 조직 염색에 의해 가시화함에 의해, 기저세포를 검출할 수 있음을 알 수 있었다.

본 발명은, 이러한 지견에 의거한 것이다.

따라서, 본 발명은,

[1] 전립선의 기저세포에 있어서의 트리파르타이트 모티프-함유 단백질 29(Tripartite motif-containing protein)(TRIM29) 단백질의 발현을 면역 조직 염색에 의해 가시화하는 것을 포함하는 전립선 기저세포의 검출 방법,

[2] 전립선의 선조직(腺組織) 구조의 형태 및 가시화된 트리파르타이트 모티프-함유 단백질 29(TRIM29) 단백질의 발현을 해석하는 것을 포함하는, [1]에 기재된 전립선 기저세포의 검출 방법,

[3] 사이토케라틴 및/또는 p63 단백질의 발현을 면역 조직 염색에 의해 가시화하는 것을 추가로 포함하는, [1] 또는 [2]에 기재된 전립선 기저세포의 검출 방법,

[4] 전립선의 선조직 구조의 형태, 그리고 가시화된 사이토케라틴 단백질의 발현 및/또는 가시화된 p63 단백질의 발현을 해석하는 것을 포함하는, [3]에 기재된 전립선 기저세포의 검출 방법,

[5] 상기 [1]∼[4] 중 어느 하나에 기재된 전립선 기저세포의 검출 방법을 사용하는 것을 포함하는, 전립선 기저세포의 존재, 감소 또는 소실의 확인 방법,

[6] 항TRIM29 항체 또는 그 항원 결합 단편을 사용하는 면역 조직 염색에 의해, 대상으로부터 채취된 전립선 조직에 있어서의 전립선 기저세포를 검출하는 공정을 포함하는, 전립선암의 진단 방법,

[7] 정상인 전립선 조직과의 비교에 있어서의 전립선 기저세포의 감소 또는 소실이 전립선암의 존재를 나타내는, [6]에 기재된 진단 방법,

[8] 전립선암의 진단에 있어서 사용하기 위한, 항TRIM29 항체 또는 그 항원 결합 단편,

[9] 전립선암의 진단을 위한, 항TRIM29 항체 또는 그 항원 결합 단편을 포함하는 진단 조성물,

[10] 전립선암의 진단을 위한 진단 조성물의 제조에 있어서의, 항TRIM29 항체 또는 그 항원 결합 단편의 사용,

[11] 항TRIM29 항체 또는 그 항원 결합 단편을 포함하는, 전립선 기저세포의 검출용 면역 조직 염색 키트, 및

[12] 항사이토케라틴 항체 혹은 그 항원 결합 단편 및/또는 항p63 항체 혹은 그 항원 결합 단편을 추가로 포함하는, [11]에 기재된 전립선 기저세포의 검출용 면역 조직 염색 키트,

에 관한 것이다.

또, 상기 TRIM29의 유전자는, 폐암, 난소장액성 유두상 선암(卵巢漿液性乳頭狀腺癌), 및 자궁경부 상피내 종양과의 관련이 보고되어 있다(특허문헌 1∼4). 또한, TRIM29를 포함하는 80의 mRNA를 조사함에 의해, 전립선암의 예후를 예측하는 방법이 개시되어 있다(특허문헌 5). 그러나, 정상 전립선의 기저세포에 있어서 TRIM29가 발현해 있는 것은, 보고되어 있지 않았다.

본 발명의 전립선 기저세포의 검출 방법에 따르면, 정상인 전립선 기저세포를 확실히 검출할 수 있어, 전립선의 조직학적인 연구에 유용하다. 또한, 발현된 사이토케라틴 및/또는 p63의 면역 조직 염색을 병용함에 의해, 더 정확하게 전립선 기저세포를 검출하는 것이 가능하다.

또한, 본 발명의 전립선 기저세포의 검출 방법, 및 본 발명의 전립선 기저세포의 존재, 감소 또는 소실의 확인 방법에 따르면, 전립선암의 확정 진단을 행할 수 있다. 또한, 사이토케라틴 및/또는 p63의 발현의 면역 조직 염색을 병용함에 의해, 더 정확하게 전립선암의 확정 진단을 행할 수 있다.

도 1은 정상 전립선 또는 전립선암의 각각의 조직을, 항TRIM29 폴리클로널 항체 또는 항사이토케라틴 모노클로널 항체(34βE12)에 의하여 면역 조직 염색을 행한 일련의 현미경 사진.
도 2는 정상 전립선의 조직을, 항TRIM29 모노클로널 항체에 의하여 면역 조직 염색을 행한 1쌍의 현미경 사진.
도 3은 정상 전립선 조직을, 항TRIM29 모노클로널 항체 또는 항사이토케라틴 모노클로널 항체(34βE12)에 의하여 면역 조직 염색한 1쌍의 현미경 사진.

[1] 전립선 기저세포의 검출 방법

본 발명의 전립선 기저세포의 검출 방법은, 전립선의 기저세포에 있어서의 트리파르타이트 모티프-함유 단백질 29(TRIM29) 단백질의 발현을 면역 조직 염색에 의해 가시화하는 것을 포함한다. 본 방법에 따르면, 전립선 유래의 TRIM29가 발현해 있는 세포를 그 형태 및 단백질의 발현으로부터 기저세포로 판단할 수 있는 것이다. 추가로, 본 방법은 전립선의 선조직 구조의 형태 및 가시화된 TRIM29 단백질의 발현을 확인함에 의해 선조직 구조의 일부를 구성하는 기저세포를 검출할 수 있는 것이다.

본 발명의 검출 방법에 의하여 검출되는 전립선 기저세포를 갖는 동물종은, 전립선에 기저세포를 갖는 한에 있어서 한정되는 것은 아니며, 포유동물, 예를 들면 인간, 원숭이, 개, 고양이, 페렛, 소, 말, 염소, 양, 모르모트, 햄스터, 모래쥐(jird), 마우스, 또는 래트를 들 수 있다. 또한, 본 발명의 검출 방법은, 분리된 세포에 사용할 수도 있다. 예를 들면, 상기한 포유동물의 분리된 기저세포를 포함하는 초대(初代) 배양 세포, 또는 계대(繼代) 세포에 사용할 수도 있다.

《전립선》

전립선은, 남성(수컷) 생식기계의 선(腺)으로서, 방광의 아래이며 직장의 앞에 있다. 전립선은 기저세포와 선세포와의 2종류의 세포에 의하여 구성되어 있다. 조직학적으로는, 전립선 선세포의 주위에 전립선 기저세포가 존재해 있다.

(전립선 선세포)

전립선 선세포는, 안드로겐 수용체(androgen receptor), 사이토케라틴8(cytokeratin 8), 및 사이토케라틴18(cytokeratin 18)을 특이적으로 발현하고 있으며, 대부분의 전립선암은 전립선 선세포 유래이다.

(전립선 기저세포)

본 발명의 검출 방법에 의하여 검출할 수 있는 전립선 기저세포는, 그 세포가 TRIM29를 발현하는 한에 있어서 한정되지 않는다. 그러나, TRIM29가 발현해 있지 않은 전립선 기저세포의 존재를 부정하는 것은 아니다.

기저세포에는, TRIM29 이외에, p63, 사이토케라틴5(cytokeratin 5), 및 사이토케라틴14(cytokeratin 14)가 특이적으로 발현해 있다. p63은 전립선의 발달에 중요한 역할을 수행하는 것으로 생각되고 있으며, 항p63 모노클로널 항체인 4A4를 사용한 면역 조직 염색으로는 기저세포의 핵이 염색된다. 또한, 사이토케라틴5 및 사이토케라틴14는 세포질에 존재하며, 항사이토케라틴 모노클로널 항체인 34βE12에 의한 면역 조직 염색으로 염색된다. 또, 모노클로널 항체 34βE12는, 사이토케라틴5 및 사이토케라틴14 이외에도, 사이토케라틴1 및 사이토케라틴10에도 양성 반응을 나타내는 항체이다.

《TRIM29》

트리파르타이트 모티프-함유 단백질 29(Tripartite motif-containing protein)(TRIM29)는, TRIM 유전자 패밀리에 속하며, 별명을 ATDC(ataxia-telangiectasia group D-associated protein)라 한다. 인간 TRIM29는 588아미노산으로 이루어진다. TRIM29는, 복수의 징크 핑거 모티프(zinc finger motifs) 및 류신 지퍼 모티프(leucine zipper motif)를 갖고 있으며, DNA에 결합한다. TRIM29는 분화 과정에 있어서 전사 제어 인자로서 작용할 가능성이 생각되고 있다. TRIM29는, 모세혈관 확장성 운동실조(ataxia-telangiectasia)에 관련하는 것이 알려져 있으며, 방사선 감수성의 억제 기능과의 관련이 지적되고 있다.

본 발명에 있어서, 분석할 수 있는 인간의 TRIM29 단백질을 코딩하는 핵산(이하, 인간 TRIM29 유전자라고도 함)의 염기 서열을 서열 번호1에, 당해 인간 TRIM29 단백질의 아미노산 서열을 서열 번호2에 나타낸다. 그러나, 분석 대상의 유전자는, 전립선 기저세포에 발현하며, 또한 서열 번호1의 염기 서열의 TRIM29 유전자에 결합할 수 있는 프로브 또는 프라이머와 하이브리다이즈할 수 있는 한에 있어서, 서열 번호1에 기재된 염기 서열을 갖는 TRIM29 유전자로 한정되지 않는다. 또한, 분석 대상의 단백질은, 전립선 기저세포에 발현하며, 서열 번호2의 아미노산 서열을 갖는 단백질과 결합할 수 있는 항체와 결합할 수 있는 한에 있어서, 서열 번호2에 기재된 아미노산 서열을 갖는 TRIM29 단백질로 한정되지 않는다. 즉, 본 발명에 있어서, 분석되는 TRIM29는, 전립선 기저세포에 발현하는 한에 있어서, 변이(들)를 갖는 TRIM29여도 된다. 또한, 인간의 TRIM29로 한정되는 것은 아니며, 포유동물의 TRIM29여도 되고, 예를 들면 인간, 원숭이, 개, 고양이, 페렛, 소, 말, 염소, 양, 모르모트, 햄스터, 모래쥐, 마우스, 또는 래트의 TRIM29를 들 수 있다. 변이(들)를 갖는 TRIM29 단백질의 예로서는, 인간 TRIM29를 예로 들면, 서열 번호2의 아미노산 서열에 있어서, 1개 내지 몇 개, 예를 들면 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 또는 9개의 아미노산이 치환, 결실(缺失), 삽입 또는 부가된 아미노산 서열로 이루어지는 단백질; 서열 번호2의 아미노산 서열과 80% 이상의 서열 동일성, 예를 들면 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 또는 98% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열로 이루어지는 단백질 등을 들 수 있다.

《TRIM29 단백질 발현 해석》

본 발명의 검출 방법에 있어서의 면역 조직 염색에 의한 TRIM29 발현 해석은, 한정되는 것은 아니지만, TRIM29 단백질의 발현을 가시화하는 것이다. TRIM29 단백질의 발현을 가시화함에 의해, 동일한 기저세포에 있어서, 전립선 기저세포를 형태적으로 확인할 수 있으며, 또한 전립선 기저세포 및 전립선의 선조직 구조의 형태를 TRIM29 단백질의 발현에 의해 확인할 수 있다. 즉, 본 발명의 검출 방법은, 바람직하게는 전립선의 선조직 구조의 형태 및 상기 가시화된 TRIM29 단백질의 발현을, 선조직 구조의 일부를 구성하는 기저세포에 있어서 해석하는 것이다.

또, 본 명세서에 있어서 「가시화」란, 면역 조직 염색에 의한 발색 또는 형광을 광학 현미경 또는 형광 현미경을 통하여, 육안에 의해 확인하는 것만을 의미하는 것은 아니며, 예를 들면 발색, 형광, 발광, 또는 방사선(즉, 시그널)을 기계적으로 검출하고, 그 시그널을 이미지화한 영상 등을 확인하는 것을 포함하는 것이다.

또한, 본 명세서에 있어서, 「전립선의 선조직 구조의 형태 및 상기 가시화된 트리파르타이트 모티프-함유 단백질 29(TRIM29) 단백질의 발현을 해석함」이란, 전립선의 선조직 구조의 형태와, TRIM29 단백질의 발현을 동시에 관찰하는 것뿐만 아니라, 예를 들면, 전립선의 선조직 구조의 형태와, 상기한 시그널을 이미지화한 영상 등을 비교하여 관찰하는 것을 포함하는 것이다.

전립선 기저세포에 있어서의 TRIM29 단백질의 해석은, 면역 조직 염색에 의하여 행한다. 전립선 조직에 있어서의 기저세포의 위치, 또는 기저세포의 형태를 면역 조직 염색에 의해 확인할 수 있기 때문이다.

(면역 조직 염색)

면역 조직 염색은, 확립된 기술이며, TRIM29에 특이적인 항체를 사용하는 것을 제외하고는, 공지의 방법에 의거해서 행하는 것이 가능하다. 즉, 면역 조직 염색이란, 조직 절편의 세포에 발현해 있는 특정의 항원을, 그 항원을 특이적으로 인식하는 항체에 의하여 검출하는 방법이다.

구체적으로는, 면역 조직 염색은, 예를 들면 이하와 같이 행할 수 있다. 전립선 조직을 동결하여 박절(薄切), 또는 고정 후 파라핀 포매한 조직 블록을 박절하여, 조직 절편을 제작한다. 그 조직 절편의 표면을 TRIM29를 인식하는 항체와 반응시킨다. 이 항TRIM29 항체를, 시그널을 발하는 물질로 표지해 둠에 의해, TRIM29 단백질을 각 조직 절편 상에 있어서 검출할 수 있다. 또는, 항TRIM29 항체를 표지하지 않고, 항TRIM29 항체에 대한 제2 항체를, 시그널을 발하는 물질로 표지해도 된다. 추가로, 항TRIM29 항체, 또는 제2 항체에 비오틴을 결합시키고, 비오틴에 특이적으로 결합하는 아비딘을 시그널을 발하는 물질로 표지해도 된다.

항체의 표지에 사용되는 물질도 한정되는 것은 아니지만, 형광 색소(예를 들면, 로다민, 플루오레세인이소티오시아네이트(FITC), 희토류 금속 킬레이트), 방사성 물질(예를 들면, ³H, ¹⁴C, 또는 ¹²⁵I), 효소(예를 들면, 퍼옥시다아제, 알칼리포스파타아제, 또는 β-D-갈락토시다아제) 등을 사용할 수 있다. 또한, 시그널의 검출도 한정되는 것은 아니지만, 형광, 방사선(오토라디오그래피), 발광, 또는 발색 등에 의하여 검출하는 것이 가능하다. 형광 색소로서, 로다민 또는 FITC 등을 사용한 경우는, 형광 현미경을 사용해서 시그널을 검출할 수 있다. 또한, 알칼리포스파타아제를 사용하여, NBT/BCIP 등으로 발색한 경우는, 광학 현미경 하에서 시그널을 검출할 수 있어, 세포의 형태도 동시에 관찰하는 것이 가능하다.

구체적인 방법으로서는, 퍼옥시다아제 항퍼옥시다아제법(PAP법), 스트렙트아비딘-비오틴 복합체법(sABC법), 이차 항체와 표지 효소가 폴리머에 결합된 폴리머 시약법, 또는 FITC로 표지한 일차 항체를 사용하거나 또는 이차 항체로서 HRP 표지 항FITC 항체를 사용하는 방법 등이, 일반적으로 사용되고 있다.

(항TRIM29 항체)

본 발명에 있어서의 면역 조직 염색에 사용하는 항TRIM29 항체는, 면역원으로서 TRIM29 단백질 또는 그 부분 펩티드를 사용하는 것 이외는, 공지의 방법에 의하여 작성하는 것이 가능하다. 항TRIM29 항체는, 폴리클로널 항체여도 되고 모노클로널 항체여도 되지만, 모노클로널 항체가 바람직하다. 모노클로널 항체 쪽이, 다른 단백질과의 교차 반응이 적은 경우가 많기 때문이다. 기존 또는 시판의 항체를 사용할 수도 있다.

예를 들면, 모노클로널 항체는, Koehler와 Milstein의 방법(Nature 256 : 495-497, 1975)에 따라서 제작할 수 있다. 또한, 폴리클로널 항체는, 예를 들면 토끼의 피내(皮內)에, NKG2D 리간드를 단독 또는 BSA, KLH 등과 결합시킨 항원으로서, 프로인트 완전 애주번트 등의 애주번트와 혼합해서 정기적으로 면역하고, 혈중의 항체가(抗體價)가 상승한 시점에서 채혈하여 그대로 항혈청으로 하거나, 또는 항체를 공지의 방법으로 정제해서 사용할 수 있다.

또한, 면역학적 분석 방법에 사용하는 항체로서, TRIM29 단백질에 대한 항원 결합 부위를 함유하는 항체 단편(항원 결합 단편)을 사용하는 것도 가능하다. 이러한 항체 단편으로서는, 예를 들면, F(ab')₂, Fab', Fab, 또는 Fv 등을 들 수 있다. 이들 항체 단편은, 예를 들면, 항체를 통상의 방법에 의해 단백질 분해 효소(예를 들면, 펩신 또는 파파인 등)에 의하여 소화하고, 계속해서, 통상의 방법의 단백질의 분리 정제의 방법에 의해 정제함에 의해, 얻을 수 있다.

본 발명의 전립선 기저세포의 검출 방법에 있어서는, 상기 TRIM29 단백질 발현 분석에 더하여, 사이토케라틴 단백질의 발현 분석 및/또는 p63 단백질의 발현 분석을 행하는 것이 바람직하다. 즉, TRIM29 단백질 및 사이토케라틴 단백질을 해석해도 되며, TRIM29 단백질 및 p63 단백질을 해석해도 되고, 또는 상기 세 단백질을 해석해도 된다.

본 실시태양에 있어서는, 동일 대상(환자)의 동일 조직 절편에 있어서, 2개 이상의 단백질을 해석해도 된다. 또한, 동일 대상(환자)의 다른 조직 절편에 있어서, 2개 이상의 단백질을, 각각 개별적으로 해석해도 된다.

《사이토케라틴 단백질 발현 해석》

본 발명의 검출 방법에 있어서의 면역 조직 염색에 의한 사이토케라틴 발현 해석은, 한정되는 것은 아니지만, 사이토케라틴 단백질의 발현을 가시화하는 것이다. 사이토케라틴 단백질의 발현을 가시화함에 의해, 동일한 기저세포에 있어서, 전립선 기저세포를 형태적으로 확인할 수 있으며, 또한 전립선 기저세포 및 전립선의 선조직 구조의 형태를 사이토케라틴 단백질의 발현에 의해 확인할 수 있다. 즉, 본 발명의 검출 방법은, 바람직하게는 전립선의 선조직 구조의 형태 및 상기 가시화된 사이토케라틴 단백질의 발현을, 선조직 구조의 일부를 구성하는 기저세포에 있어서 해석하는 것을 포함하는 것이다.

사이토케라틴의 단백질의 발현 해석은, 사이토케라틴에 특이적인 항체를 사용하는 것을 제외하고는, 공지의 방법에 의거해서 행하는 것이 가능하다. 즉, 사이토케라틴에 특이적인 항체를 사용하는 것을 제외하고는, 상기 「TRIM29 단백질 발현 해석」에 기재된 방법에 따라서, 분석을 실시할 수 있다. 사이토케라틴5의 아미노산 서열을 서열 번호4에, 그리고 사이토케라틴14의 아미노산 서열을 서열 번호6에 나타낸다. 사이토케라틴5를 코딩하는 염기 서열을 서열 번호3에, 사이토케라틴14를 코딩하는 염기 서열을 서열 번호5에 나타낸다.

사이토케라틴에 특이적인 항체는, 폴리클로널 항체여도 되고 모노클로널 항체여도 되지만, 모노클로널 항체가 바람직하다. 모노클로널 항체 쪽이, 다른 단백질과의 교차 반응이 적은 경우가 많기 때문이다. 기존 또는 시판의 항체를 사용할 수도 있다. 예를 들면, 시판의 항사이토케라틴 모노클로널 항체인 34βE12 모노클로널 항체를 사용할 수 있으며, 이 항체는 사이토케라틴1, 5, 10, 및 14를 인식하는 항체이다.

《p63 단백질 발현 해석》

본 발명의 검출 방법에 있어서의 p63 단백질 발현 해석은, 한정되는 것은 아니지만, p63 단백질의 발현을 가시화하는 것이다. p63 단백질의 발현을 가시화함에 의해, 동일한 기저세포에 있어서, 전립선 기저세포를 형태적으로 확인할 수 있으며, 또한 전립선 기저세포 및 전립선의 선조직 구조의 형태를 p63 단백질의 발현에 의해 확인할 수 있다. 즉, 본 발명의 검출 방법은, 바람직하게는 전립선의 선조직 구조의 형태 및 상기 가시화된 p63 단백질의 발현을, 선조직 구조의 일부를 구성하는 기저세포에 있어서 해석하는 것을 포함하는 것이다.

p63 단백질의 발현 분석은, p63에 특이적인 항체를 사용하는 것을 제외하고는, 공지의 방법에 의거해서 행하는 것이 가능하다. 즉, p63에 특이적인 항체를 사용하는 것을 제외하고는, 상기 「TRIM29 단백질 발현 해석」에 기재된 방법에 따라서, 실시할 수 있다. p63의 아미노산 서열을 서열 번호8에 나타내고, p63을 코딩하는 염기 서열을 서열 번호7에 나타낸다.

p63에 특이적인 항체는, 폴리클로널 항체여도 되고 모노클로널 항체여도 되지만, 모노클로널 항체가 바람직하다. 모노클로널 항체 쪽이, 다른 단백질과의 교차 반응이 적은 경우가 많기 때문이다. 기존 또는 시판의 항체를 사용할 수도 있다. 예를 들면, 시판의 항p63 모노클로널 항체인 4A4모노클로널 항체를 사용할 수 있다.

[2] 전립선 기저세포의 존재, 감소 또는 소실의 확인 방법

본 발명의 전립선 기저세포의 존재, 감소 또는 소실의 확인 방법은, 본 발명의 전립선 기저세포의 검출 방법을 사용해서, 전립선 조직에 있어서의 트리파르타이트 모티프-함유 단백질 29(TRIM29) 단백질의 발현을 면역 조직 염색에 의해 가시화하는 것을 포함한다. 상기 확인 방법에 있어서, TRIM29 단백질의 발현을 검출한다. 이 TRIM29 단백질 발현의 검출은, 상기 본 발명의 전립선 기저세포의 검출 방법에 있어서의 「TRIM29 단백질 발현 해석」과 마찬가지로 실시할 수 있다. 그리고, 상기 전립선 기저세포의 검출 후에, 전립선 기저세포의 존재, 감소 또는 소실을 확인한다.

본 발명의 전립선 기저세포의 존재, 감소 또는 소실의 확인 방법에 있어서는, TRIM29 단백질의 발현을 면역 조직 염색에 의해 가시화함에 의해, 기저세포 및 전립선의 선조직 구조의 형태와, TRIM29 단백질의 발현과의 관계를 관찰하는 것이 가능하며, 확실히 선조직 구조의 일부를 구성하는 전립선 기저세포의 존재, 감소 또는 소실을 확인하는 것이 가능하다.

예를 들면, 조직 절편 상에 있어서, 전립선 기저세포의 존재, 감소 또는 소실을 확인할 경우, 정상 전립선 조직의 기저세포에 있어서의 TRIM29 단백질의 발현량과 비교해서, 피검 시료의 TRIM29 단백질의 「존재」, 「감소」 또는 「소실」을 형광 현미경 하, 또는 광학 현미경 하에 있어서의 가시화한 TRIM29 단백질의 발현량을 목시(目視)에 의하여 판정할 수 있다. 또한, 카메라 등으로 촬영한 이미지 중의 발색, 발광, 형광, 또는 방사선 등의 시그널을, 기계적으로 가시화하여, 그 TRIM29 단백질의 발현량을 해석할 수 있다. 이러한 방법에 따르면, 피검 시료의 TRIM29 단백질의 「존재」, 「감소」, 또는 「소실」을, 이미지를 육안으로 봄에 의하여 판단할 수도 있으며, 또한 상기 시그널을 기계적으로 수치화하여 판단하는 것도 가능하다.

예를 들면, 정상 전립선 조직의 기저세포에 있어서의 TRIM29 단백질의 발현량과 비교해서, 피검 시료의 TRIM29 단백질의 양이 동등할 경우, 당해 피검 시료에 있어서 전립선 기저세포가 「존재」해 있는 것으로 판단할 수 있다. 또한 피검 시료의 TRIM29 단백질의 양을 거의 검출할 수 없을 경우, 전립선 기저세포는 「소실」해 있는 것으로 판단할 수 있다. 또한, 피검 시료의 TRIM29 단백질의 양이 「존재」와 「소실」의 중간의 양인 경우, 전립선 기저세포가 「감소」해 있는 것으로 판단할 수 있다.

《전립선암》

전립선암의 경우, 전립선 기저세포가 완전히 소실하거나, 일부 세포를 남기고 감소해 있다. 따라서, 본 발명의 전립선 기저세포의 검출 방법, 및 전립선 기저세포의 존재, 감소 또는 소실의 확인 방법에 의하여, 전립선암의 진단, 또는 확정 진단을 행하는 것이 가능하다.

[3] 면역 조직 염색 키트

본 발명의 전립선 기저세포의 검출용 면역 조직 염색 키트는, 항TRIM29 항체를 포함하는 것이다. 본 발명의 면역 조직 염색 키트는, 상기 전립선 기저세포의 검출 방법, 전립선 기저세포의 존재, 감소 또는 소실의 확인 방법, 및 전립선암의 진단 방법에 사용할 수 있다.

본 발명의 면역 조직 염색 키트는, TRIM29에 특이적으로 결합하는 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 단편(항원 결합 단편)이, 원하는 형태로 포함되어 있는 것이 바람직하다. 항TRIM29 항체로서는, 「[1] 전립선 기저세포의 검출 방법」에 기재된 항TRIM29 항체를 사용할 수 있다. 즉, 모노클로널 항체 및 폴리클로널 항체 중 어느 것이어도 된다. 항체 단편으로서는, TRIM29에의 특이적 결합능을 갖는 것, 즉 항원 결합 부위를 갖는 것(항원 결합 단편)이면 특히 한정되는 것은 아니다. 이러한 항체 단편으로서는, 예를 들면, Fab, Fab', F(ab')₂, 또는 Fv를 사용할 수 있다.

또한, 본 발명의 전립선 기저세포의 검출용 면역 조직 염색 키트는, 항사이토케라틴 항체 및/또는 항p63 항체를 포함하는 것이 바람직하다. 항사이토케라틴 항체 및 항p63 항체도, 「[1] 전립선 기저세포의 검출 방법」에 기재된 항사이토케라틴 항체 및 항p63 항체, 또는 그 항원 결합 부위를 갖는 단편(항원 결합 단편)을 사용할 수 있다.

본 발명의 전립선 기저세포의 검출용 면역 조직 염색 키트는, 효소로서는, 퍼옥시다아제, 알칼리포스파타아제, β-D-갈락토시다아제, 또는 글루코오스옥시다아제 등을 추가로 포함해도 된다. 또한, 형광 물질로서, 플루오레세인이소티오시아네이트 또는 희토류 금속 킬레이트 등을 포함해도 된다. 또한, 상기 키트는 방사성 동위체로서, ³H, ¹⁴C, 또는 ¹²⁵I 등을 포함해도 된다. 또, 본 발명에 따른 키트에서는, 그 밖의 표지 물질로서, 비오틴, 아비딘, 또는 화학 발광 물질 등을 사용해도 된다. 또한, 본 발명의 키트는, 효소 또는 화학 발광 물질에 대한 적당한 기질 등을 포함하고 있어도 된다.

또한, 본 발명의 키트는, 전립선 기저세포의 검출용인 것을 명기한 사용설명서를 포함하고 있어도 된다. 전립선 기저세포의 검출용이라는 취지의 기재는, 키트의 용기에 붙여져 있어도 된다. 또한, 전립선암의 진단, 또는 확정 진단에 사용한다는 것이 기재되어 있어도 된다.

상기 항TRIM29 항체는, 전립선 기저세포의 검출용 면역 조직 염색 키트의 제조를 위하여 사용할 수 있다. 또한, 상기 항사이토케라틴 항체는, 전립선 기저세포의 검출용 면역 조직 염색 키트의 제조를 위하여 사용할 수 있다. 또한, 항p63 항체는 전립선 기저세포의 검출용 면역 조직 염색 키트의 제조를 위하여 사용할 수 있다.

[실시예]

이하, 실시예에 의하여 본 발명을 구체적으로 설명하지만, 이들은 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

《실시예 1》

본 실시예에서는, 항TRIM29 항체를 사용한 전립선 조직(정상 및 암)의 면역 조직 염색을 행했다. 홋카이도 대학 대학원 의학 연구과 병리학 강좌 종양 병리학 분야에 보관 및 관리되고 있는 16검체의 전립선 표본을 사용해서, 면역 조직 염색을 행했다. 해석에 제공한 전립선 표본의 개요를 표 1에 나타낸다. 전립선암을 갖는 15검체 및 전립선 상피내 종양(Prostatic Intraepithelial Neoplasia: PIN)을 갖는 1검체를 해석했다.

[표 1]

(1) 항TRIM29 토끼 폴리클로널 항체에 의한 염색

1차 항체로서 항TRIM29 토끼 폴리클로널 항체(산타크루즈사제 ATDC(H-300)SC-33151)를, 희석액(1% BSA를 함유한 PBS)으로 200배로 희석하여, 각각의 조직 절편에 첨가했다. 1차 반응은, 37℃, 30분으로 행했다. 세정액(PBS)으로, 3회 세정 후, 2차 항체로서, 퍼옥시다아제 표지된 항토끼 항체를 함유하는 시약(Dako REAL^TMEnvision^TM Detection Reagent peroxidase rabbit/mouse)을 조직 절편에 첨가했다. 2차 반응은, 실온, 30분으로 행했다. 세정액으로 3회 세정 후, 발색액(Dako사 REAL^TM DAB+CHROMOGEN)으로 발색 반응을 행했다.

(2) 항사이토케라틴 모노클로널 항체에 의한 염색

추가로 1차 항체로서, 항사이토케라틴 모노클로널 항체인 34βE12를 사용해서, 전립선 조직(정상 및 암)의 면역 조직 염색을 행했다. 200배로 희석한 항TRIM29 토끼 폴리클로널 항체 대신에, 1% BSA로 2배 희석한 34βE12(H1205 니치레이 항고분자 사이토케라틴 모노클로널 항체)를 사용한 것을 제외하고는, 상기 (1)의 조작을 반복했다.

상기 (1) 및 (2)의 면역 조직 염색의 결과를 도 1에 나타낸다. 항TRIM29 항체는 정상 전립선 조직의 선세포의 주위에 존재하는 기저세포를 특이적으로 염색한 것으로 판명되었다. 전립선암 조직에 있어서, 항TRIM29 항체에 의하여 염색되는 세포 및 조직이 감소 혹은 소실되는 것으로 판명되었다. 이들 결과는, 34βE12를 사용해서 면역 조직 염색을 행한 경우와 동등했다. 또한, 34βE12 및 항TRIM29 항체를 조합하여 사용함으로써 전립선암의 진단의 신뢰도를 높일 수 있다.

《실시예 2》

본 실시예에서는, 1차 항체로서 항TRIM29 마우스 모노클로널 항체(항ATDC(A-5) 항체)(sc-166718)를 사용해서, 정상 전립선의 면역 조직 염색을 행했다.

1차 항체로서, 항TRIM29 마우스 모노클로널 항체A5를 사용하고, 2차 항체로서, 항마우스 IgG 항체를 사용한 것, 그리고 검체로서 정상 전립선 조직만을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 1(1)의 조작을 반복했다.

도 2에 나타내는 바와 같이, 비특이적인 염색이 없이, 기저세포가 명료하게 염색되었다.

《실시예 3》

본 실시예에서는, 항TRIM29 마우스 모노클로널 항체(항ATDC(A-5) 항체)(sc-166718) 및 항사이토케라틴 모노클로널 항체를 사용해서, 정상 전립선의 면역 조직 염색을 행했다.

항TRIM29 마우스 모노클로널 항체에 대해서는, 실시예 2의 조작을, 항사이토케라틴 모노클로널 항체에 대해서는, 정상 전립선 조직만을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 1(2)의 조작을 반복했다.

도 3에 나타내는 바와 같이, 항TRIM29 마우스 모노클로널 항체와 항사이토케라틴 모노클로널 항체에 의한 염색은, 매우 유사한 것이지만, 2개의 면역 염색을 조합함에 의해, 확실히 전립선 기저세포를 확인할 수 있었다.

또한, 실시예 1∼3의 면역 조직 염색의 결과를 해석한 바, 전립선암의 모든 예에 관하여, 암 조직 부분에 있어서는 TRIM29의 발현이 소실해 있었다. 한편, 전립선 상피내 종양에 관해서는, 정상 전립선과 마찬가지로 기저세포 부분에서 TRIM29의 발현이 확인되었다. 이들 결과를 표 2에 나타낸다.

[표 2]

본 발명의 전립선 기저세포의 검출 방법은, 전립선의 조직학적인 연구에 사용할 수 있다. 본 발명의 전립선 기저세포의 존재, 감소 또는 소실의 확인 방법에 따르면, 전립선암의 확정 진단을 행할 수 있다. 또한, 사이토케라틴의 발현의 분석을 병용함에 의해, 더 정확하게 전립선암의 확정 진단을 행할 수 있다.

SEQUENCE LISTING <110> NATIONAL UNIVERSITY CORPORATION HOKKAIDO UNIVERSITY <120> A method for detecting basal cells of postate gland <130> 671812/P2012-103-WO01/LP0056 <150> JP 2012-277980 <151> 2012-12-20 <160> 8 <170> PatentIn version 3.1 <210> 1 <211> 1767 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 atggaagctg cagatgcctc caggagcaac gggtcgagcc cagaagccag ggatgcccgg 60 agcccgtcgg gccccagtgg cagcctggag aatggcacca aggctgacgg caaggatgcc 120 aagaccacca acgggcacgg cggggaggca gctgagggca agagcctggg cagcgccctg 180 aagccagggg aaggtaggag cgccctgttc gcgggcaatg agtggcggcg acccatcatc 240 cagtttgtcg agtccgggga cgacaagaac tccaactact tcagcatgga ctctatggaa 300 ggcaagaggt cgccgtacgc agggctccag ctgggggctg ccaagaagcc acccgttacc 360 tttgccgaaa agggcgagct gcgcaagtcc attttctcgg agtcccggaa gcccacggtg 420 tccatcatgg agcccgggga gacccggcgg aacagctacc cccgggccga cacgggcctt 480 ttttcacggt ccaagtccgg ctccgaggag gtgctgtgcg actcctgcat cggcaacaag 540 cagaaggcgg tcaagtcctg cctggtgtgc caggcctcct tctgcgagct gcatctcaag 600 ccccacctgg agggcgccgc cttccgagac caccagctgc tcgagcccat ccgggacttt 660 gaggcccgca agtgtcccgt gcatggcaag acgatggagc tcttctgcca gaccgaccag 720 acctgcatct gctacctttg catgttccag gagcacaaga atcatagcac cgtgacagtg 780 gaggaggcca aggccgagaa ggagacggag ctgtcattgc aaaaggagca gctgcagctc 840 aagatcattg agattgagga tgaagctgag aagtggcaga aggagaagga ccgcatcaag 900 agcttcacca ccaatgagaa ggccatcctg gagcagaact tccgggacct ggtgcgggac 960 ctggagaagc aaaaggagga agtgagggct gcgctggagc agcgggagca ggatgctgtg 1020 gaccaagtga aggtgatcat ggatgctctg gatgagagag ccaaggtgct gcatgaggac 1080 aagcagaccc gggagcagct gcatagcatc agcgactctg tgttgtttct gcaggaattt 1140 ggtgcattga tgagcaatta ctctctcccc ccacccctgc ccacctatca tgtcctgctg 1200 gagggggagg gcctgggaca gtcactaggc aacttcaagg acgacctgct caatgtatgc 1260 atgcgccacg ttgagaagat gtgcaaggcg gacctgagcc gtaacttcat tgagaggaac 1320 cacatggaga acggtggtga ccatcgctat gtgaacaact acacgaacag cttcgggggt 1380 gagtggagtg caccggacac catgaagaga tactccatgt acctgacacc caaaggtggg 1440 gtccggacat cataccagcc ctcgtctcct ggccgcttca ccaaggagac cacccagaag 1500 aatttcaaca atctctatgg caccaaaggt aactacacct cccgggtctg ggagtactcc 1560 tccagcattc agaactctga caatgacctg cccgtcgtcc aaggcagctc ctccttctcc 1620 ctgaaaggct atccctccct catgcggagc caaagcccca aggcccagcc ccagacttgg 1680 aaatctggca agcagactat gctgtctcac taccggccat tctacgtcaa caaaggcaac 1740 gggattgggt ccaacgaagc cccatga 1767 <210> 2 <211> 588 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Glu Ala Ala Asp Ala Ser Arg Ser Asn Gly Ser Ser Pro Glu Ala 1 5 10 15 Arg Asp Ala Arg Ser Pro Ser Gly Pro Ser Gly Ser Leu Glu Asn Gly 20 25 30 Thr Lys Ala Asp Gly Lys Asp Ala Lys Thr Thr Asn Gly His Gly Gly 35 40 45 Glu Ala Ala Glu Gly Lys Ser Leu Gly Ser Ala Leu Lys Pro Gly Glu 50 55 60 Gly Arg Ser Ala Leu Phe Ala Gly Asn Glu Trp Arg Arg Pro Ile Ile 65 70 75 80 Gln Phe Val Glu Ser Gly Asp Asp Lys Asn Ser Asn Tyr Phe Ser Met 85 90 95 Asp Ser Met Glu Gly Lys Arg Ser Pro Tyr Ala Gly Leu Gln Leu Gly 100 105 110 Ala Ala Lys Lys Pro Pro Val Thr Phe Ala Glu Lys Gly Glu Leu Arg 115 120 125 Lys Ser Ile Phe Ser Glu Ser Arg Lys Pro Thr Val Ser Ile Met Glu 130 135 140 Pro Gly Glu Thr Arg Arg Asn Ser Tyr Pro Arg Ala Asp Thr Gly Leu 145 150 155 160 Phe Ser Arg Ser Lys Ser Gly Ser Glu Glu Val Leu Cys Asp Ser Cys 165 170 175 Ile Gly Asn Lys Gln Lys Ala Val Lys Ser Cys Leu Val Cys Gln Ala 180 185 190 Ser Phe Cys Glu Leu His Leu Lys Pro His Leu Glu Gly Ala Ala Phe 195 200 205 Arg Asp His Gln Leu Leu Glu Pro Ile Arg Asp Phe Glu Ala Arg Lys 210 215 220 Cys Pro Val His Gly Lys Thr Met Glu Leu Phe Cys Gln Thr Asp Gln 225 230 235 240 Thr Cys Ile Cys Tyr Leu Cys Met Phe Gln Glu His Lys Asn His Ser 245 250 255 Thr Val Thr Val Glu Glu Ala Lys Ala Glu Lys Glu Thr Glu Leu Ser 260 265 270 Leu Gln Lys Glu Gln Leu Gln Leu Lys Ile Ile Glu Ile Glu Asp Glu 275 280 285 Ala Glu Lys Trp Gln Lys Glu Lys Asp Arg Ile Lys Ser Phe Thr Thr 290 295 300 Asn Glu Lys Ala Ile Leu Glu Gln Asn Phe Arg Asp Leu Val Arg Asp 305 310 315 320 Leu Glu Lys Gln Lys Glu Glu Val Arg Ala Ala Leu Glu Gln Arg Glu 325 330 335 Gln Asp Ala Val Asp Gln Val Lys Val Ile Met Asp Ala Leu Asp Glu 340 345 350 Arg Ala Lys Val Leu His Glu Asp Lys Gln Thr Arg Glu Gln Leu His 355 360 365 Ser Ile Ser Asp Ser Val Leu Phe Leu Gln Glu Phe Gly Ala Leu Met 370 375 380 Ser Asn Tyr Ser Leu Pro Pro Pro Leu Pro Thr Tyr His Val Leu Leu 385 390 395 400 Glu Gly Glu Gly Leu Gly Gln Ser Leu Gly Asn Phe Lys Asp Asp Leu 405 410 415 Leu Asn Val Cys Met Arg His Val Glu Lys Met Cys Lys Ala Asp Leu 420 425 430 Ser Arg Asn Phe Ile Glu Arg Asn His Met Glu Asn Gly Gly Asp His 435 440 445 Arg Tyr Val Asn Asn Tyr Thr Asn Ser Phe Gly Gly Glu Trp Ser Ala 450 455 460 Pro Asp Thr Met Lys Arg Tyr Ser Met Tyr Leu Thr Pro Lys Gly Gly 465 470 475 480 Val Arg Thr Ser Tyr Gln Pro Ser Ser Pro Gly Arg Phe Thr Lys Glu 485 490 495 Thr Thr Gln Lys Asn Phe Asn Asn Leu Tyr Gly Thr Lys Gly Asn Tyr 500 505 510 Thr Ser Arg Val Trp Glu Tyr Ser Ser Ser Ile Gln Asn Ser Asp Asn 515 520 525 Asp Leu Pro Val Val Gln Gly Ser Ser Ser Phe Ser Leu Lys Gly Tyr 530 535 540 Pro Ser Leu Met Arg Ser Gln Ser Pro Lys Ala Gln Pro Gln Thr Trp 545 550 555 560 Lys Ser Gly Lys Gln Thr Met Leu Ser His Tyr Arg Pro Phe Tyr Val 565 570 575 Asn Lys Gly Asn Gly Ile Gly Ser Asn Glu Ala Pro 580 585 <210> 3 <211> 1773 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 atgtctcgcc agtcaagtgt gtccttccgg agcgggggca gtcgtagctt cagcaccgcc 60 tctgccatca ccccgtctgt ctcccgcacc agcttcacct ccgtgtcccg gtccgggggt 120 ggcggtggtg gtggcttcgg cagggtcagc cttgcgggtg cttgtggagt gggtggctat 180 ggcagccgga gcctctacaa cctggggggc tccaagagga tatccatcag cactagtggt 240 ggcagcttca ggaaccggtt tggtgctggt gctggaggcg gctatggctt tggaggtggt 300 gccggtagtg gatttggttt cggcggtgga gctggtggtg gctttgggct cggtggcgga 360 gctggctttg gaggtggctt cggtggccct ggctttcctg tctgccctcc tggaggtatc 420 caagaggtca ctgtcaacca gagtctcctg actcccctca acctgcaaat cgaccccagc 480 atccagaggg tgaggaccga ggagcgcgag cagatcaaga ccctcaacaa taagtttgcc 540 tccttcatcg acaaggtgcg gttcctggag cagcagaaca aggttctgga caccaagtgg 600 accctgctgc aggagcaggg caccaagact gtgaggcaga acctggagcc gttgttcgag 660 cagtacatca acaacctcag gaggcagctg gacagcatcg tgggggaacg gggccgcctg 720 gactcagagc tgagaaacat gcaggacctg gtggaagact tcaagaacaa gtatgaggat 780 gaaatcaaca agcgtaccac tgctgagaat gagtttgtga tgctgaagaa ggatgtagat 840 gctgcctaca tgaacaaggt ggagctggag gccaaggttg atgcactgat ggatgagatt 900 aacttcatga agatgttctt tgatgcggag ctgtcccaga tgcagacgca tgtctctgac 960 acctcagtgg tcctctccat ggacaacaac cgcaacctgg acctggatag catcatcgct 1020 gaggtcaagg cccagtatga ggagattgcc aaccgcagcc ggacagaagc cgagtcctgg 1080 tatcagacca agtatgagga gctgcagcag acagctggcc ggcatggcga tgacctccgc 1140 aacaccaagc atgagatctc tgagatgaac cggatgatcc agaggctgag agccgagatt 1200 gacaatgtca agaaacagtg cgccaatctg cagaacgcca ttgcggatgc cgagcagcgt 1260 ggggagctgg ccctcaagga tgccaggaac aagctggccg agctggagga ggccctgcag 1320 aaggccaagc aggacatggc ccggctgctg cgtgagtacc aggagctcat gaacaccaag 1380 ctggccctgg acgtggagat cgccacttac cgcaagctgc tggagggcga ggaatgcaga 1440 ctcagtggag aaggagttgg accagtcaac atctctgttg tcacaagcag tgtttcctct 1500 ggatatggca gtggcagtgg ctatggcggt ggcctcggtg gaggtcttgg cggcggcctc 1560 ggtggaggtc ttgccggagg tagcagtgga agctactact ccagcagcag tgggggtgtc 1620 ggcctaggtg gtgggctcag tgtggggggc tctggcttca gtgcaagcag tggccgaggg 1680 ctgggggtgg gctttggcag tggcgggggt agcagctcca gcgtcaaatt tgtctccacc 1740 acctcctcct cccggaagag cttcaagagc taa 1773 <210> 4 <211> 590 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Ser Arg Gln Ser Ser Val Ser Phe Arg Ser Gly Gly Ser Arg Ser 1 5 10 15 Phe Ser Thr Ala Ser Ala Ile Thr Pro Ser Val Ser Arg Thr Ser Phe 20 25 30 Thr Ser Val Ser Arg Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Phe Gly Arg 35 40 45 Val Ser Leu Ala Gly Ala Cys Gly Val Gly Gly Tyr Gly Ser Arg Ser 50 55 60 Leu Tyr Asn Leu Gly Gly Ser Lys Arg Ile Ser Ile Ser Thr Ser Gly 65 70 75 80 Gly Ser Phe Arg Asn Arg Phe Gly Ala Gly Ala Gly Gly Gly Tyr Gly 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Ala Gly Ser Gly Phe Gly Phe Gly Gly Gly Ala Gly 100 105 110 Gly Gly Phe Gly Leu Gly Gly Gly Ala Gly Phe Gly Gly Gly Phe Gly 115 120 125 Gly Pro Gly Phe Pro Val Cys Pro Pro Gly Gly Ile Gln Glu Val Thr 130 135 140 Val Asn Gln Ser Leu Leu Thr Pro Leu Asn Leu Gln Ile Asp Pro Ser 145 150 155 160 Ile Gln Arg Val Arg Thr Glu Glu Arg Glu Gln Ile Lys Thr Leu Asn 165 170 175 Asn Lys Phe Ala Ser Phe Ile Asp Lys Val Arg Phe Leu Glu Gln Gln 180 185 190 Asn Lys Val Leu Asp Thr Lys Trp Thr Leu Leu Gln Glu Gln Gly Thr 195 200 205 Lys Thr Val Arg Gln Asn Leu Glu Pro Leu Phe Glu Gln Tyr Ile Asn 210 215 220 Asn Leu Arg Arg Gln Leu Asp Ser Ile Val Gly Glu Arg Gly Arg Leu 225 230 235 240 Asp Ser Glu Leu Arg Asn Met Gln Asp Leu Val Glu Asp Phe Lys Asn 245 250 255 Lys Tyr Glu Asp Glu Ile Asn Lys Arg Thr Thr Ala Glu Asn Glu Phe 260 265 270 Val Met Leu Lys Lys Asp Val Asp Ala Ala Tyr Met Asn Lys Val Glu 275 280 285 Leu Glu Ala Lys Val Asp Ala Leu Met Asp Glu Ile Asn Phe Met Lys 290 295 300 Met Phe Phe Asp Ala Glu Leu Ser Gln Met Gln Thr His Val Ser Asp 305 310 315 320 Thr Ser Val Val Leu Ser Met Asp Asn Asn Arg Asn Leu Asp Leu Asp 325 330 335 Ser Ile Ile Ala Glu Val Lys Ala Gln Tyr Glu Glu Ile Ala Asn Arg 340 345 350 Ser Arg Thr Glu Ala Glu Ser Trp Tyr Gln Thr Lys Tyr Glu Glu Leu 355 360 365 Gln Gln Thr Ala Gly Arg His Gly Asp Asp Leu Arg Asn Thr Lys His 370 375 380 Glu Ile Ser Glu Met Asn Arg Met Ile Gln Arg Leu Arg Ala Glu Ile 385 390 395 400 Asp Asn Val Lys Lys Gln Cys Ala Asn Leu Gln Asn Ala Ile Ala Asp 405 410 415 Ala Glu Gln Arg Gly Glu Leu Ala Leu Lys Asp Ala Arg Asn Lys Leu 420 425 430 Ala Glu Leu Glu Glu Ala Leu Gln Lys Ala Lys Gln Asp Met Ala Arg 435 440 445 Leu Leu Arg Glu Tyr Gln Glu Leu Met Asn Thr Lys Leu Ala Leu Asp 450 455 460 Val Glu Ile Ala Thr Tyr Arg Lys Leu Leu Glu Gly Glu Glu Cys Arg 465 470 475 480 Leu Ser Gly Glu Gly Val Gly Pro Val Asn Ile Ser Val Val Thr Ser 485 490 495 Ser Val Ser Ser Gly Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Tyr Gly Gly Gly Leu 500 505 510 Gly Gly Gly Leu Gly Gly Gly Leu Gly Gly Gly Leu Ala Gly Gly Ser 515 520 525 Ser Gly Ser Tyr Tyr Ser Ser Ser Ser Gly Gly Val Gly Leu Gly Gly 530 535 540 Gly Leu Ser Val Gly Gly Ser Gly Phe Ser Ala Ser Ser Gly Arg Gly 545 550 555 560 Leu Gly Val Gly Phe Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ser Ser Ser Val Lys 565 570 575 Phe Val Ser Thr Thr Ser Ser Ser Arg Lys Ser Phe Lys Ser 580 585 590 <210> 5 <211> 1419 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 5 atgaccacct gcagccgcca gttcacctcc tccagctcca tgaagggctc ctgcggcatc 60 gggggcggca tcgggggcgg ctccagccgc atctcctccg tcctggccgg agggtcctgc 120 cgcgccccca gcacctacgg gggcggcctg tctgtctcat cctcccgctt ctcctctggg 180 ggagcctacg ggctgggggg cggctatggc ggtggcttca gcagcagcag cagcagcttt 240 ggtagtggct ttgggggagg atatggtggt ggccttggtg ctggcttggg tggtggcttt 300 ggtggtggct ttgctggtgg tgatgggctt ctggtgggca gtgagaaggt gaccatgcag 360 aacctcaatg accgcctggc ctcctacctg gacaaggtgc gtgctctgga ggaggccaac 420 gccgacctgg aagtgaagat ccgtgactgg taccagaggc agcggcctgc tgagatcaaa 480 gactacagtc cctacttcaa gaccattgag gacctgagga acaagattct cacagccaca 540 gtggacaatg ccaatgtcct tctgcagatt gacaatgccc gtctggccgc ggatgacttc 600 cgcaccaagt atgagacaga gttgaacctg cgcatgagtg tggaagccga catcaatggc 660 ctgcgcaggg tgctggacga actgaccctg gccagagctg acctggagat gcagattgag 720 agcctgaagg aggagctggc ctacctgaag aagaaccacg aggaggagat gaatgccctg 780 agaggccagg tgggtggaga tgtcaatgtg gagatggacg ctgcacctgg cgtggacctg 840 agccgcattc tgaacgagat gcgtgaccag tatgagaaga tggcagagaa gaaccgcaag 900 gatgccgagg aatggttctt caccaagaca gaggagctga accgcgaggt ggccaccaac 960 agcgagctgg tgcagagcgg caagagcgag atctcggagc tccggcgcac catgcagaac 1020 ctggagattg agctgcagtc ccagctcagc atgaaagcat ccctggagaa cagcctggag 1080 gagaccaaag gtcgctactg catgcagctg gcccagatcc aggagatgat tggcagcgtg 1140 gaggagcagc tggcccagct ccgctgcgag atggagcagc agaaccagga gtacaagatc 1200 ctgctggacg tgaagacgcg gctggagcag gagatcgcca cctaccgccg cctgctggag 1260 ggcgaggacg cccacctctc ctcctcccag ttctcctctg gatcgcagtc atccagagat 1320 gtgacctcct ccagccgcca aatccgcacc aaggtcatgg atgtgcacga tggcaaggtg 1380 gtgtccaccc acgagcaggt ccttcgcacc aagaactga 1419 <210> 6 <211> 472 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Met Thr Thr Cys Ser Arg Gln Phe Thr Ser Ser Ser Ser Met Lys Gly 1 5 10 15 Ser Cys Gly Ile Gly Gly Gly Ile Gly Gly Gly Ser Ser Arg Ile Ser 20 25 30 Ser Val Leu Ala Gly Gly Ser Cys Arg Ala Pro Ser Thr Tyr Gly Gly 35 40 45 Gly Leu Ser Val Ser Ser Ser Arg Phe Ser Ser Gly Gly Ala Tyr Gly 50 55 60 Leu Gly Gly Gly Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Ser Ser Ser Ser Ser Phe 65 70 75 80 Gly Ser Gly Phe Gly Gly Gly Tyr Gly Gly Gly Leu Gly Ala Gly Leu 85 90 95 Gly Gly Gly Phe Gly Gly Gly Phe Ala Gly Gly Asp Gly Leu Leu Val 100 105 110 Gly Ser Glu Lys Val Thr Met Gln Asn Leu Asn Asp Arg Leu Ala Ser 115 120 125 Tyr Leu Asp Lys Val Arg Ala Leu Glu Glu Ala Asn Ala Asp Leu Glu 130 135 140 Val Lys Ile Arg Asp Trp Tyr Gln Arg Gln Arg Pro Ala Glu Ile Lys 145 150 155 160 Asp Tyr Ser Pro Tyr Phe Lys Thr Ile Glu Asp Leu Arg Asn Lys Ile 165 170 175 Leu Thr Ala Thr Val Asp Asn Ala Asn Val Leu Leu Gln Ile Asp Asn 180 185 190 Ala Arg Leu Ala Ala Asp Asp Phe Arg Thr Lys Tyr Glu Thr Glu Leu 195 200 205 Asn Leu Arg Met Ser Val Glu Ala Asp Ile Asn Gly Leu Arg Arg Val 210 215 220 Leu Asp Glu Leu Thr Leu Ala Arg Ala Asp Leu Glu Met Gln Ile Glu 225 230 235 240 Ser Leu Lys Glu Glu Leu Ala Tyr Leu Lys Lys Asn His Glu Glu Glu 245 250 255 Met Asn Ala Leu Arg Gly Gln Val Gly Gly Asp Val Asn Val Glu Met 260 265 270 Asp Ala Ala Pro Gly Val Asp Leu Ser Arg Ile Leu Asn Glu Met Arg 275 280 285 Asp Gln Tyr Glu Lys Met Ala Glu Lys Asn Arg Lys Asp Ala Glu Glu 290 295 300 Trp Phe Phe Thr Lys Thr Glu Glu Leu Asn Arg Glu Val Ala Thr Asn 305 310 315 320 Ser Glu Leu Val Gln Ser Gly Lys Ser Glu Ile Ser Glu Leu Arg Arg 325 330 335 Thr Met Gln Asn Leu Glu Ile Glu Leu Gln Ser Gln Leu Ser Met Lys 340 345 350 Ala Ser Leu Glu Asn Ser Leu Glu Glu Thr Lys Gly Arg Tyr Cys Met 355 360 365 Gln Leu Ala Gln Ile Gln Glu Met Ile Gly Ser Val Glu Glu Gln Leu 370 375 380 Ala Gln Leu Arg Cys Glu Met Glu Gln Gln Asn Gln Glu Tyr Lys Ile 385 390 395 400 Leu Leu Asp Val Lys Thr Arg Leu Glu Gln Glu Ile Ala Thr Tyr Arg 405 410 415 Arg Leu Leu Glu Gly Glu Asp Ala His Leu Ser Ser Ser Gln Phe Ser 420 425 430 Ser Gly Ser Gln Ser Ser Arg Asp Val Thr Ser Ser Ser Arg Gln Ile 435 440 445 Arg Thr Lys Val Met Asp Val His Asp Gly Lys Val Val Ser Thr His 450 455 460 Glu Gln Val Leu Arg Thr Lys Asn 465 470 <210> 7 <211> 2043 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 7 atgaattttg aaacttcacg gtgtgccacc ctacagtact gccctgaccc ttacatccag 60 cgtttcgtag aaaccccagc tcatttctct tggaaagaaa gttattaccg atccaccatg 120 tcccagagca cacagacaaa tgaattcctc agtccagagg ttttccagca tatctgggat 180 tttctggaac agcctatatg ttcagttcag cccattgact tgaactttgt ggatgaacca 240 tcagaagatg gtgcgacaaa caagattgag attagcatgg actgtatccg catgcaggac 300 tcggacctga gtgaccccat gtggccacag tacacgaacc tggggctcct gaacagcatg 360 gaccagcaga ttcagaacgg ctcctcgtcc accagtccct ataacacaga ccacgcgcag 420 aacagcgtca cggcgccctc gccctacgca cagcccagct ccaccttcga tgctctctct 480 ccatcacccg ccatcccctc caacaccgac tacccaggcc cgcacagttt cgacgtgtcc 540 ttccagcagt cgagcaccgc caagtcggcc acctggacgt attccactga actgaagaaa 600 ctctactgcc aaattgcaaa gacatgcccc atccagatca aggtgatgac cccacctcct 660 cagggagctg ttatccgcgc catgcctgtc tacaaaaaag ctgagcacgt cacggaggtg 720 gtgaagcggt gccccaacca tgagctgagc cgtgaattca acgagggaca gattgcccct 780 cctagtcatt tgattcgagt agaggggaac agccatgccc agtatgtaga agatcccatc 840 acaggaagac agagtgtgct ggtaccttat gagccacccc aggttggcac tgaattcacg 900 acagtcttgt acaatttcat gtgtaacagc agttgtgttg gagggatgaa ccgccgtcca 960 attttaatca ttgttactct ggaaaccaga gatgggcaag tcctgggccg acgctgcttt 1020 gaggcccgga tctgtgcttg cccaggaaga gacaggaagg cggatgaaga tagcatcaga 1080 aagcagcaag tttcggacag tacaaagaac ggtgatggta cgaagcgccc gtttcgtcag 1140 aacacacatg gtatccagat gacatccatc aagaaacgaa gatccccaga tgatgaactg 1200 ttatacttac cagtgagggg ccgtgagact tatgaaatgc tgttgaagat caaagagtcc 1260 ctggaactca tgcagtacct tcctcagcac acaattgaaa cgtacaggca acagcaacag 1320 cagcagcacc agcacttact tcagaaacag acctcaatac agtctccatc ttcatatggt 1380 aacagctccc cacctctgaa caaaatgaac agcatgaaca agctgccttc tgtgagccag 1440 cttatcaacc ctcagcagcg caacgccctc actcctacaa ccattcctga tggcatggga 1500 gccaacattc ccatgatggg cacccacatg ccaatggctg gagacatgaa tggactcagc 1560 cccacccagg cactccctcc cccactctcc atgccatcca cctcccactg cacaccccca 1620 cctccgtatc ccacagattg cagcattgtc agtttcttag cgaggttggg ctgttcatca 1680 tgtctggact atttcacgac ccaggggctg accaccatct atcagattga gcattactcc 1740 atggatgatc tggcaagtct gaaaatccct gagcaatttc gacatgcgat ctggaagggc 1800 atcctggacc accggcagct ccacgaattc tcctcccctt ctcatctcct gcggacccca 1860 agcagtgcct ctacagtcag tgtgggctcc agtgagaccc ggggtgagcg tgttattgat 1920 gctgtgcgat tcaccctccg ccagaccatc tctttcccac cccgagatga gtggaatgac 1980 ttcaactttg acatggatgc tcgccgcaat aagcaacagc gcatcaaaga ggagggggag 2040 tga 2043 <210> 8 <211> 680 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Met Asn Phe Glu Thr Ser Arg Cys Ala Thr Leu Gln Tyr Cys Pro Asp 1 5 10 15 Pro Tyr Ile Gln Arg Phe Val Glu Thr Pro Ala His Phe Ser Trp Lys 20 25 30 Glu Ser Tyr Tyr Arg Ser Thr Met Ser Gln Ser Thr Gln Thr Asn Glu 35 40 45 Phe Leu Ser Pro Glu Val Phe Gln His Ile Trp Asp Phe Leu Glu Gln 50 55 60 Pro Ile Cys Ser Val Gln Pro Ile Asp Leu Asn Phe Val Asp Glu Pro 65 70 75 80 Ser Glu Asp Gly Ala Thr Asn Lys Ile Glu Ile Ser Met Asp Cys Ile 85 90 95 Arg Met Gln Asp Ser Asp Leu Ser Asp Pro Met Trp Pro Gln Tyr Thr 100 105 110 Asn Leu Gly Leu Leu Asn Ser Met Asp Gln Gln Ile Gln Asn Gly Ser 115 120 125 Ser Ser Thr Ser Pro Tyr Asn Thr Asp His Ala Gln Asn Ser Val Thr 130 135 140 Ala Pro Ser Pro Tyr Ala Gln Pro Ser Ser Thr Phe Asp Ala Leu Ser 145 150 155 160 Pro Ser Pro Ala Ile Pro Ser Asn Thr Asp Tyr Pro Gly Pro His Ser 165 170 175 Phe Asp Val Ser Phe Gln Gln Ser Ser Thr Ala Lys Ser Ala Thr Trp 180 185 190 Thr Tyr Ser Thr Glu Leu Lys Lys Leu Tyr Cys Gln Ile Ala Lys Thr 195 200 205 Cys Pro Ile Gln Ile Lys Val Met Thr Pro Pro Pro Gln Gly Ala Val 210 215 220 Ile Arg Ala Met Pro Val Tyr Lys Lys Ala Glu His Val Thr Glu Val 225 230 235 240 Val Lys Arg Cys Pro Asn His Glu Leu Ser Arg Glu Phe Asn Glu Gly 245 250 255 Gln Ile Ala Pro Pro Ser His Leu Ile Arg Val Glu Gly Asn Ser His 260 265 270 Ala Gln Tyr Val Glu Asp Pro Ile Thr Gly Arg Gln Ser Val Leu Val 275 280 285 Pro Tyr Glu Pro Pro Gln Val Gly Thr Glu Phe Thr Thr Val Leu Tyr 290 295 300 Asn Phe Met Cys Asn Ser Ser Cys Val Gly Gly Met Asn Arg Arg Pro 305 310 315 320 Ile Leu Ile Ile Val Thr Leu Glu Thr Arg Asp Gly Gln Val Leu Gly 325 330 335 Arg Arg Cys Phe Glu Ala Arg Ile Cys Ala Cys Pro Gly Arg Asp Arg 340 345 350 Lys Ala Asp Glu Asp Ser Ile Arg Lys Gln Gln Val Ser Asp Ser Thr 355 360 365 Lys Asn Gly Asp Gly Thr Lys Arg Pro Phe Arg Gln Asn Thr His Gly 370 375 380 Ile Gln Met Thr Ser Ile Lys Lys Arg Arg Ser Pro Asp Asp Glu Leu 385 390 395 400 Leu Tyr Leu Pro Val Arg Gly Arg Glu Thr Tyr Glu Met Leu Leu Lys 405 410 415 Ile Lys Glu Ser Leu Glu Leu Met Gln Tyr Leu Pro Gln His Thr Ile 420 425 430 Glu Thr Tyr Arg Gln Gln Gln Gln Gln Gln His Gln His Leu Leu Gln 435 440 445 Lys Gln Thr Ser Ile Gln Ser Pro Ser Ser Tyr Gly Asn Ser Ser Pro 450 455 460 Pro Leu Asn Lys Met Asn Ser Met Asn Lys Leu Pro Ser Val Ser Gln 465 470 475 480 Leu Ile Asn Pro Gln Gln Arg Asn Ala Leu Thr Pro Thr Thr Ile Pro 485 490 495 Asp Gly Met Gly Ala Asn Ile Pro Met Met Gly Thr His Met Pro Met 500 505 510 Ala Gly Asp Met Asn Gly Leu Ser Pro Thr Gln Ala Leu Pro Pro Pro 515 520 525 Leu Ser Met Pro Ser Thr Ser His Cys Thr Pro Pro Pro Pro Tyr Pro 530 535 540 Thr Asp Cys Ser Ile Val Ser Phe Leu Ala Arg Leu Gly Cys Ser Ser 545 550 555 560 Cys Leu Asp Tyr Phe Thr Thr Gln Gly Leu Thr Thr Ile Tyr Gln Ile 565 570 575 Glu His Tyr Ser Met Asp Asp Leu Ala Ser Leu Lys Ile Pro Glu Gln 580 585 590 Phe Arg His Ala Ile Trp Lys Gly Ile Leu Asp His Arg Gln Leu His 595 600 605 Glu Phe Ser Ser Pro Ser His Leu Leu Arg Thr Pro Ser Ser Ala Ser 610 615 620 Thr Val Ser Val Gly Ser Ser Glu Thr Arg Gly Glu Arg Val Ile Asp 625 630 635 640 Ala Val Arg Phe Thr Leu Arg Gln Thr Ile Ser Phe Pro Pro Arg Asp 645 650 655 Glu Trp Asn Asp Phe Asn Phe Asp Met Asp Ala Arg Arg Asn Lys Gln 660 665 670 Gln Arg Ile Lys Glu Glu Gly Glu 675 680

Claims

전립선의 기저세포에 있어서의 트리파르타이트 모티프-함유 단백질 29(TRIM29) 단백질의 발현을 면역 조직 염색에 의해 가시화하는 것을 포함하는 전립선 기저세포의 검출 방법.
제1항에 있어서,
전립선의 선조직(腺組織) 구조의 형태 및 가시화된 트리파르타이트 모티프-함유 단백질 29(TRIM29) 단백질의 발현을 해석하는 것을 포함하는, 전립선 기저세포의 검출 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서,
사이토케라틴 및/또는 p63 단백질의 발현을 면역 조직 염색에 의해 가시화하는 것을 추가로 포함하는, 전립선 기저세포의 검출 방법.
제3항에 있어서,
전립선의 선조직 구조의 형태, 그리고 가시화된 사이토케라틴 단백질의 발현 및/또는 가시화된 p63 단백질의 발현을 해석하는 것을 포함하는, 전립선 기저세포의 검출 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 기재된 전립선 기저세포의 검출 방법을 사용하는 것을 포함하는, 전립선 기저세포의 존재, 감소 또는 소실의 확인 방법.
항TRIM29 항체 또는 그 항원 결합 단편을 사용하는 면역 조직 염색에 의해, 대상으로부터 채취된 전립선 조직에 있어서의 전립선 기저세포를 검출하는 공정을 포함하는, 전립선암의 진단 방법.
제6항에 있어서,
정상인 전립선 조직과의 비교에 있어서의 전립선 기저세포의 감소 또는 소실이 전립선암의 존재를 나타내는, 진단 방법.
전립선암의 진단에 있어서 사용하기 위한, 항TRIM29 항체 또는 그 항원 결합 단편.
전립선암의 진단을 위한, 항TRIM29 항체 또는 그 항원 결합 단편을 포함하는 진단 조성물.
전립선암의 진단을 위한 진단 조성물의 제조에 있어서의, 항TRIM29 항체 또는 그 항원 결합 단편의 사용.
항TRIM29 항체 또는 그 항원 결합 단편을 포함하는, 전립선 기저세포의 검출용 면역 조직 염색 키트.
제11항에 있어서,
항사이토케라틴 항체 혹은 그 항원 결합 단편 및/또는 항p63 항체 혹은 그 항원 결합 단편을 추가로 포함하는, 전립선 기저세포의 검출용 면역 조직 염색 키트.