CN104871002A - 用于检测前列腺基底细胞的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明的目的是提供一种通过搜寻在前列腺基底细胞中特异性表达的分子并分析这些分子来检测前列腺基底细胞的方法。该问题能够采用用于检测前列腺基底细胞的方法来解决,该方法的特征在于,其采用免疫组化染色使TRIM29(三重基序蛋白29)蛋白在前列腺基底细胞中的表达可视化。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于检测前列腺基底细胞的方法,一种用于识别前列腺基底细胞的存在、减少和消失的方法,以及一种用于检测前列腺基底细胞的免疫组化染色试剂盒。本发明使得能够可靠地检测前列腺基底细胞。本发明还使得能够可靠地确诊前列腺癌。
背景技术
正常的前列腺由腺细胞和基底细胞组成,观察组织学图片,基底细胞存在于腺细胞周围。
雄激素受体、细胞角蛋白8和细胞角蛋白18在腺细胞中特异性表达,且多数前列腺癌表达作为这些腺细胞的标记物的雄激素受体、细胞角蛋白8、或细胞角蛋白18。因此,前列腺癌被认为源于腺细胞。
已知基底细胞在前列腺癌中消失。因此,通过采用正常基底细胞中表达的p36或细胞角蛋白的抗体来执行前列腺的免疫组化染色并识别基底细胞的消失,从而进行前列腺癌的确诊。
引用列表
专利文献
专利文献1:国际公开WO2008/150512
专利文献2:国际公开WO2005/014781
专利文献3:国际公开WO2004/018711
专利文献4:国际公开WO2006/080597
专利文献5:国际公开WO2004/018711
发明内容
技术问题
关于上述基底细胞的免疫组化染色,仅通过采用p63抗体或细胞角蛋白抗体的免疫组化染色,有时难以确定基底细胞是否已经消失。
因此,本发明的目的是提供一种通过搜寻在前列腺基底细胞中特异表达的分子并分析这些分子来检测前列腺基底细胞的方法。
技术问题的解决方案
作为对正常前列腺组织基底细胞中特异表达的分子的大量研究的成果,本发明的发明人已经令人惊讶地发现,三重基序蛋白29(TRIM29)在正常前列腺组织的基底细胞中特异表达。且已经显示出,基底细胞能够通过免疫组化染色的方式使TRIM29在前列腺组织中的表达可视化从而进行检测。
本发明基于以下这些发现。
具体而言,本发明涉及:
[1]一种用于检测前列腺基底细胞的方法,包括通过免疫组化染色使三重基序蛋白29(TRIM29)蛋白在前列腺基底细胞中的表达可视化;
[2]根据[1]的用于检测前列腺基底细胞的方法,包括分析前列腺的腺组织结构的形态以及三重基序蛋白29(TRIM29)蛋白的可视化表达;
[3]根据[1]或[2]的用于检测前列腺基底细胞的方法,还包括通过免疫组化染色使细胞角蛋白和/或p63蛋白的表达可视化;
[4]根据[3]的用于检测前列腺基底细胞的方法,包括分析前列腺的腺组织结构的形态以及细胞角蛋白的可视化表达和/或p63细胞的可视化表达;
[5]一种用于识别前列腺基底细胞的存在、减少或消失的方法,包括采用上述[1]~[4]中任一项的用于检测前列腺基底细胞的方法;
[6]一种用于诊断前列腺癌的方法,包括通过免疫组化染色使用TRIM29抗体或其抗原结合片段在从受试者采集的前列腺组织中检测前列腺基底细胞的步骤;
[7]根据[6]的诊断方法,其中,与正常前列腺组织相比的前列腺基底细胞的减少或消失指示前列腺癌的存在;
[8]TRIM29抗体或其抗原结合片段,其用在前列腺癌的诊断中;
[9]一种用于诊断前列腺癌的诊断组合物,包含TRIM29抗体或其抗原结合片段;
[10]TRIM29抗体或其抗原结合片段在制备用于诊断前列腺癌的诊断组合物中的用途;
[11]一种用于检测前列腺基底细胞的免疫组化染色试剂盒,包含TRIM29抗体或其抗原结合片段;以及
[12]根据[11]的用于检测前列腺基底细胞的免疫组化染色试剂盒,还包含细胞角蛋白抗体或其抗原结合片段,和/或p63抗体或其抗原结合片段。
TRIM29的基因被报道为与肺癌、卵巢浆液性乳头状腺癌、以及宫颈上皮内瘤样病变有关(专利文献1~4)。还公开了一种通过检查包括TRIM29的80种mRNA来预测前列腺癌的预后的方法(专利文献5)。然而,还未报道TRIM29在正常前列腺的基底细胞中表达。
发明的有益效果
根据本发明的用于检测前列腺基底细胞的方法能够可靠地检测正常的前列腺基底细胞,并可用于前列腺的组织学研究。该方法与所表达细胞角蛋白和/或p63的免疫组化染色的结合能够更可靠地检测前列腺基底细胞。
根据本发明的用于检测前列腺基底细胞的方法,以及根据本发明的用于识别前列腺基底细胞的存在、减少和消失的方法,使得能够确诊前列腺癌。该方法与所表达的细胞角蛋白和/或p63的免疫组化染色的组合使得能够更可靠地确诊前列腺癌。
附图说明
[图1]图1是一系列显微图,其各个示出被施以TRIM29多克隆抗体或细胞角蛋白单克隆抗体(34βE12)的免疫组化染色的正常前列腺组织或前列腺癌组织。
[图2]图2是一对显微照图,其各个示出被施以TRIM29单克隆抗体的免疫组化染色的正常前列腺组织。
[图3]图3是一对显微图,其各个示出被施以TRIM29单克隆抗体或细胞角蛋白单克隆抗体(34βE12)的免疫组化染色的正常前列腺组织。
具体实施方式
[1]用于检测前列腺基底细胞的方法
根据本发明的用于检测前列腺基底细胞的方法包括通过免疫组化染色使三重基序蛋白29(TRIM29)蛋白在前列腺基底细胞中的表达可视化。根据该方法,源自前列腺的表达TRIM29的细胞能够基于其形态和蛋白表达而被确定为基底细胞。另外,该方法使得能够通过识别前列腺的腺组织结构的形态和TRIM29蛋白的可视化表达而检测构成部分腺组织结构的基底细胞。
具有可通过本发明的检测方法而检测的前列腺基底细胞的动物种类不受限制,只要其在前列腺中具有基底细胞;并且动物种类的实例包括哺乳动物,如人、猴、狗、猫、雪貂、牛、马、山羊、绵羊、豚鼠、仓鼠、沙鼠、小鼠或大鼠。本发明的检测方法还能够被用在分离的细胞中。例如,该方法还可以被应用于包括来自任何上述哺乳动物的分离基底细胞的原代培养细胞或传代细胞。
<前列腺>
前列腺是男性生殖系统中的腺体且位于膀胱下方和直肠前部。前列腺由两种类型的细胞组成:基底细胞和腺细胞。在组织学上,前列腺基底细胞存在于前列腺腺细胞的周围。
(前列腺腺细胞)
前列腺腺细胞特异性地表达雄激素受体、细胞角蛋白8和细胞角蛋白18,并且大多数前列腺癌源自于前列腺腺细胞。
(前列腺基底细胞)
可以通过本发明的检测方法检测的前列腺基底细胞不受限制,只要这些细胞表达TRIM29。然而,这并不排除不表达TRIM29的前列腺基底细胞的存在。
除TRIM29之外,基底细胞特异性地表达p63、细胞角蛋白5和细胞角蛋白14。p63被认为在前列腺的发育中发挥重要作用;基底细胞的核通过使用4A4的免疫组化染色而染色,其中4A4是一种p63单克隆抗体。细胞角蛋白5和细胞角蛋白14存在于细胞质中并通过使用34βE12的免疫组化染色而被染色,其中34βE12是一种细胞角蛋白单克隆抗体。单克隆抗体34βE12是对除细胞角蛋白5和细胞角蛋白14以及细胞角蛋白1和细胞角蛋白10显示出阳性反应的抗体。
<TRIM29>
三重基序蛋白29(TRIM29)属于TRIM基因家族,且还称为ATDC(共济失调毛细血管扩张症D相关蛋白)。人的TRIM29由588个氨基酸构成。TRIM29具有多个锌指基序和亮氨酸拉链基序并与DNA结合。TRIM29被认为可能作为分化过程中的转录调节因子。已知TRIM29与共济失调毛细血管扩张相关,且已被指出与抑制放射敏感性的功能有关。
根据本发明,编码可分析的人TRIM29蛋白(在下文中也称为人TRIM29基因)的核酸的碱基序列被示于SEQ ID NO:1,且人TRIM29蛋白的氨基酸序列被示于SEQ ID NO:2。然而,要分析的基因不限于具有SEQ ID NO:1中所示碱基序列的TRIM29基因,只要其在前列腺基底细胞中表达并能够与以下探针或引物杂交,其中该探针或引物能够与具有SEQ ID NO:1的碱基序列的TRIM29基因结合。要分析的蛋白也不限于具有SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列的TRIM29蛋白,只要其在前列腺基底细胞中表达且能够与以下抗体结合,其中该抗体能够与具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的蛋白结合。换言之,根据本发明,要分析的TRIM29可以是具有一个或多个突变的TRIM29,只要其在前列腺基底细胞中表达。其也不限于人TRIM29,且可以是哺乳动物TRIM29,包括例如,人、猴、狗、猫、雪貂、牛、马、山羊、绵羊、豚鼠、仓鼠、沙鼠、小鼠或大鼠的TRIM29。具有一个或多个突变的TRIM29蛋白的实例包括,当以人TRIM29作为例子时,由在SEQ ID NO:2的氨基酸序列中替换、缺失、插入或增补1到多个例如1、2、3、4、5、6、7、8或9个氨基酸的氨基酸序列构成的蛋白,以及由与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有80%或更高的序列同一性例如80%或更高、85%或更高、90%或更高、95%或更高、或者98%或更高序列同一性的氨基酸序列构成的蛋白。
<TRIM29蛋白的表达分析>
根据本发明的检测方法通过免疫组化染色的TRIM29表达分析涉及,但不限于,使TRIM29蛋白的表达可视化。通过TRIM29蛋白表达的可视化,可以在形态学上在相同的基底细胞中识别出前列腺基底细胞,且前列腺基底细胞和前列腺腺组织结构的形态能够在TRIM29蛋白表达的基础上被识别。换言之,本发明的检测方法优选地包括在构成部分腺组织结构的基底细胞中,分析在前列腺的腺组织结构的形态和TRIM29蛋白的可视化表达。
如本文所用,“可视化”不仅是指通过光学显微镜或荧光显微镜来总体地识别由免疫组化染色引起的着色或荧光,而且包括对例如着色、荧光、冷光或放射(即,信号)的机械检测,并接着识别通过使信号成像得到的图片等。
如本文所用,“分析前列腺的腺组织结构的形态以及三重基序蛋白29(TRIM29)蛋白的可视化表达”不仅包括同时观察前列腺腺组织结构的形态和TRIM29蛋白的表达,而且还包括,例如,与通过将信号成像得到的图片等相比较地观察前列腺腺组织结构的形态。
在前列腺基底细胞中的TRIM29蛋白的分析通过免疫组化染色进行。这是因为基底细胞在前列腺组织中的位置以及基底细胞的形态能够通过免疫组化染色进行识别。
(免疫组化染色)
免疫组化染色是已确立的技术,除使用对TRIM29特异的抗体外,能够基于已知方法进行。换言之,免疫组化染色是包括通过采用特异性识别抗原的抗体来检测在组织切片细胞中表达的特异性抗原的方法。
具体而言,免疫组化染色能够例如如下进行。将前列腺组织冰冻并切片,或将固定的、石蜡包埋的组织块切片以制备组织切片。识别TRIM29的抗体与组织切片的表面进行反应。TRIM29抗体能够用发出信号的物质做标记以检测在各个组织切片上的TRIM29蛋白。或者,TRIM29抗体的二抗可以用发出信号的物质做标记,而不标记TRIM29抗体。此外,生物素可以与TRIM29抗体或二抗结合,接下来使用发出信号的物质标记与生物素特异结合的抗生物素蛋白。
可以用于标记抗体的物质包括,但不限于,荧光染料(例如,若丹明、异硫氰酸荧光素(FITC)或稀土金属鳌合物)、放射性物质(例如,3H、14C或125I)、或酶(例如,过氧化物酶、碱性磷酸酶或β-D-半乳糖苷酶)。信号的检测能够采用,但不限于,荧光、放射(放射自显影)、发冷光以及着色进行。例如,当采用若丹明或FITC作为荧光染料时,信号能够用荧光显微镜检测。例如当采用碱性磷酸酶并用NBT/BCIP实施着色时,信号能够在光学显微镜下检测且能同时观察细胞形态。
具体地,常用方法包括过过氧化物酶-抗过氧化物酶法(PAP法)、抗生蛋白链菌素-生物素复合物法(sABC法)、二抗和标记酶被结合到高分子的高分子试剂法、以及采用FITC标记的一抗或采用HRP标记的FITC抗体作为二抗的方法。
(TRIM29抗体)
除采用TRIM29蛋白或其部分多肽作为免疫原之外,根据本发明的用于免疫组化染色的TRIM29抗体能够通过已知方法进行制备。TRIM29抗体可以是多克隆抗体或单克隆抗体;并且优选单克隆抗体。这是因为单克隆抗体通常与其他蛋白产生较少的交叉反应。还可以采用已知的或商业可得的抗体。
例如,单克隆抗体能够根据Koehler和Milstein(Nature 256:495-497,1975)的方法进行制备。对于多克隆抗体,例如,单独的NKG2D配体或与BSA或KLH结合的抗原可以与佐剂例如弗氏完全佐剂混合,并定期地皮下免疫接种至兔子,之后一旦血液中的抗体效价升高即采集血液,并且所采集的血液能够被用作抗血清,或者抗体可以在使用前通过已知方法进行纯化。
用于免疫分析法中的抗体还可以是包含针对TRIM29蛋白的抗原结合位点的抗体片段(抗原结合片段)。该抗体片段的实例包括F(ab')2、Fab'、Fab和Fv。这些抗体片段能够各自通过,例如,用蛋白酶(例如,胃蛋白酶或木瓜蛋白酶)通过常规方法消化抗体并随后通过用于分离和纯化蛋白的常规方法来纯化所得物而获得。
在根据本发明的用于检测前列腺基底细胞的方法中,除TRIM29蛋白的表达分析外,还优选实施细胞角蛋白和/或p63蛋白的表达分析。换言之,TRIM29蛋白和细胞角蛋白可以被分析;TRIM29蛋白和p63蛋白可以被分析;或者三种蛋白可以被分析。
根据本实施方式,2种或更多种蛋白可以在来自同一受试者(患者)的同一组织切片上分析。此外,2种或更多种蛋白可以在来自同一受试者(患者)的各个不同组织切片上分别分析。
<细胞角蛋白的表达分析>
在本发明检测方法中通过免疫组化染色进行的细胞角蛋白表达分析涉及,但不限于,使细胞角蛋白的表达可视化。通过细胞角蛋白表达的可视化,可以在形态学上在相同的基底细胞中识别出前列腺基底细胞,且前列腺基底细胞和前列腺腺组织结构的形态能够在细胞角蛋白表达的基础上被识别。换言之,本发明的检测方法优选地涉及,分析前列腺腺组织结构的形态,以及细胞角蛋白在形成部分腺组织结构的基底细胞中的可视化表达。
除采用对细胞角蛋白特异的抗体外,细胞角蛋白的表达分析可以基于已知方法来进行。具体地,除采用对细胞角蛋白特异的抗体外,分析可以根据“TR1M29蛋白的表达分析”中记载的方法进行。细胞角蛋白5的氨基酸序列在SEQ ID NO:4中示出,且细胞角蛋白14的氨基酸序列在SEQ ID NO:6中示出。编码细胞角蛋白5的碱基序列在SEQ ID NO:3中示出,且编码细胞角蛋白14的碱基序列在SEQ IDNO:5中示出。
对细胞角蛋白特异的抗体可以是多克隆抗体或单克隆抗体;并且优选单克隆抗体。这是因为单克隆抗体通常与其他蛋白产生较少的交叉反应。还可以采用已知或商业可得的抗体。例如,可以采用34βE12单克隆抗体,其是商业可得的细胞角蛋白单克隆抗体;该抗体识别细胞角蛋白1、5、10和14。
<p63蛋白的表达分析>
在本发明的检测方法中的p63表达分析涉及,但不限于,使p63蛋白的表达可视化。通过p63蛋白表达的可视化,可以在形态学上在相同的基底细胞中识别出前列腺基底细胞,且前列腺基底细胞和前列腺腺组织结构的形态可以在p63蛋白表达的基础上被识别。换言之,本发明的检测方法优选地涉及,分析前列腺腺组织结构的形态,以及p63蛋白在构成部分腺组织结构的基底细胞中的可视化表达。
除采用对p63特异的抗体之外,p63蛋白的表达分析可以基于已知方法进行。具体而言,除采用对p63特异的抗体外,分析可以根据“TRIM29蛋白的表达分析”记载的方法进行。p63的氨基酸序列在SEQID NO:8中示出,且编码p63的碱基序列在SEQ ID NO:7中示出。
对p63特异的抗体可以是多克隆抗体或单克隆抗体;并且优选单克隆抗体。这是因为单克隆抗体通常与其他蛋白产生较少的交叉反应。可以采用已知或商业可得的抗体。例如,可以采用4A4单克隆抗体,其是商业可得的p63单克隆抗体。
[2]用于识别前列腺基底细胞的存在、减少或消失的方法
根据本发明的用于识别前列腺基底细胞的存在、减少或消失的方法,包括采用根据本发明的用于检测前列腺基底细胞的方法,通过免疫组化染色的方式,使三重基序蛋白29(TRIM29)的表达可视化。在识别方法中,TRIM29蛋白的表达被检测。TRIM29蛋白的表达的检测可以以与在根据本发明的用于检测前列腺基底细胞的方法中的“TR1M29蛋白的表达分析”中记载的相同的方式进行。在检测前列腺基底细胞之后,前列腺基底细胞的存在、减少和消失被识别。
在根据本发明的用于识别前列腺基底细胞的存在、减少或消失的方法中,通过免疫组化染色的TRIM29蛋白表达的可视化,使得能够观察基底细胞形态和前列腺腺组织结构与TRIM29蛋白表达之间的关系,使得能够可靠地识别构成部分腺组织结构的前列腺基底细胞的存在、减少或消失。
例如,当在组织切片上识别前列腺基底细胞的存在、减少或消失时,在测试样本中TRIM29蛋白的“存在”、“减少”或“消失”可以在荧光显微镜或光学显微镜下基于与TRIM29蛋白在正常前列腺组织的基底细胞中的表达水平相比较的TRIM29蛋白的可视化表达水平而被目测确定。在用相机等拍摄的图像中的信号,如着色、冷光、荧光或放射,可以被机械地可视化以分析TRIM29蛋白的表达水平。这样的方法使得能够通过肉眼查看图片来确定测试样品中TRIM29蛋白的“存在”、“减少”或“消失”,并且还使得能够通过信号的机械数字化而确定TRIM29蛋白的“存在”、“减少”或“消失”。
例如,当与正常前列腺组织的基底细胞中的TRIM29蛋白的表达水平相比,测试样品中的TRIM29蛋白的水平为相当时,前列腺基底细胞可以被确定为“存在”于测试样品中。当在测试样品中几乎无法检测出TRIM29蛋白时,前列腺基底细胞可以被确定为“消失”。当测试样品中的TRIM29蛋白的水平介于“存在”和“消失”之间时,前列腺基底细胞可以被确定为“减少”。
<前列腺癌>
在前列腺癌中,前列腺基底细胞完全消失,或者减少为一些细胞留存。因此,根据本发明的用于检测前列腺基底细胞的方法以及用于识别前列腺基底细胞的存在、减少和消失的方法使得能够诊断或确诊前列腺癌。
[3]免疫组化染色试剂盒
根据本发明的用于检测前列腺基底细胞的免疫组化染色试剂盒包含TRIM29抗体。本发明的免疫组化染色试剂盒可以被用在检测前列腺基底细胞的方法中,用在识别前列腺基底细胞的存在、减少或消失的方法中,以及用在诊断前列腺癌的方法中。
本发明的免疫组化染色试剂盒优选地包含与TRIM29特异结合的抗体或以期望的形式具有其抗原结合位点的片段(抗原结合片段)。此处所用的TRIM29抗体可以是在“[1]用于检测前列腺基底细胞的方法”中记载的TRIM29抗体。换言之,抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体。抗体片段没有特别的限制,只要其具有与TRIM29特异结合的能力,即,其是具有抗原结合位点的片段(抗原结合片段)。此处所用的抗体片段可以是,例如,Fab、Fab’、F(ab’)2或Fv。
此外,根据本发明的用于检测前列腺基底细胞的免疫组化染色试剂盒优选地包含细胞角蛋白抗体和/或p63抗体。此处所用的细胞角蛋白抗体和p63抗体可以是在“[1]用于检测前列腺基底细胞的方法”中记载的细胞角蛋白抗体和p63抗体、或具有其抗原结合位点的片段(抗原结合片段)。
此外,根据本发明的用于检测前列腺基底细胞的免疫组化染色试剂盒可以包含一种酶,例如过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-D-半乳糖苷酶和葡萄糖氧化酶。该试剂盒还可以包含,例如,作为荧光底物的异硫氰酸荧光素或稀土金属鳌合物。试剂盒还可以包含放射性同位素如3H、14C和125I。根据本发明的试剂盒可以采用其他标记物质如生物素、抗生物素蛋白和化学发光物质。本发明的试剂盒可以包含,例如,酶的合适底物或化学发光物质。
本发明的试剂盒可以包含声明其用于检测前列腺基底细胞的说明书。对用于检测前列腺基底细胞的效果的说明可以存在于试剂盒用的容器上。可以声明该试剂盒用于前列腺癌的诊断或确诊。
TRIM29抗体可以被用于制造检测前列腺基底细胞的免疫组化染色试剂盒。细胞角蛋白抗体也可以被用于制造检测前列腺基底细胞的免疫组化染色试剂盒。此外,p63抗体可以被用于制造检测前列腺基底细胞的免疫组化染色试剂盒。
实施例
参考实施例在以下详细说明本发明,实施例并非意在限制本发明的范围。
<实施例1>
在此实施例中,采用TRIM29抗体进行前列腺组织(正常和癌症)的免疫组化染色。使用在北海道大学医学研究院癌症病理学系(Department of Cancer Pathology,Hokkaido University Graduate Schoolof Medicine)保存和管理的16个样本的前列腺标本来进行该免疫组化染色。供分析所用的前列腺标本的概况在表1中示出。对15个前列腺癌样本和1个前列腺上皮内瘤(PIN)样本进行分析。
[表1]
表1.在15个前列腺癌病例中的临床病理学发现
(1)用TRIM29兔多克隆抗体染色
将作为一抗的TRIM29兔多克隆抗体(由Santa Cruz制备的(ATDC(H-300)SC-33151)用稀释剂(含有1%BSA的PBS)稀释200倍,并加至各个组织切片。一抗反应在37℃进行30分钟。用洗涤溶液(PBS)将所得的组织切片洗涤三次,并向组织切片加入含有作为二抗的经过氧化物酶标记的抗兔抗体(Dako REALTM EnVisionTM Detection Reagentperoxidase rabbit/mouse(检测试剂过氧化物酶兔/小鼠))的试剂。二抗反应在室温进行30分钟。所得物用洗涤溶液洗涤3次,然后用着色液(Dako的REALTM DAB+CHROMOGEN(色原体))进行着色反应。(2)用细胞角蛋白单克隆抗体进行染色
另外,使用细胞角蛋白单克隆抗体34βE12作为一抗进行前列腺组织(正常和癌症)的免疫组化染色。重复以上(1)中所记载的步骤,除使用以1%BSA稀释2倍的34βE12(H1205Nichirei高分子细胞角蛋白单克隆抗体)代替稀释200倍的TRIM29兔多克隆抗体外。
如以上(1)和(2)中记载的免疫组化染色的结果在图1中示出。其表明,TRIM29抗体对正常前列腺组织中的腺细胞周围存在的基底细胞特异性地染色。表明在前列腺癌组织中,经TRIM29抗体染色的细胞和组织减少或消失。这些结果与采用34βE12进行免疫组化染色时得到的结果相当。34βE12和TRIM29抗体的组合使用能够增加前列腺癌诊断的可靠性。
<实施例2>
在此实施例中,使用TRIM29小鼠单克隆抗体(抗-ATDC(A-5)抗体)(sc-166718)作为一抗进行正常前列腺的免疫组化染色。
重复实施例1的(1)小节中记载的步骤,除使用TRIM29小鼠单克隆抗体A-5作为一抗,使用抗小鼠IgG抗体作为二抗,且仅使用正常前列腺组织作为样本外。
如图2所示,未观察到非特异性的染色且基底细胞被清楚地染色。
<实施例3>
在此实施例中,使用TRIM29小鼠单克隆抗体(抗-ATDC(A-5)抗体)(sc-166718)和细胞角蛋白单克隆抗体进行正常前列腺的免疫组化染色。
重复实施例2中所记载的关于TRIM29小鼠单克隆抗体的步骤,并重复实施例1的(2)小节中所记载的关于细胞角蛋白单克隆抗体的步骤,除仅使用正常的前列腺组织外。
如图3所示,用TRIM29小鼠单克隆抗体进行的染色提供了与用细胞角蛋白单克隆抗体染色极为相似的结果;且这两种免疫组化染色的组合使得能够可靠地鉴别前列腺基底细胞。
当对实施例1~3中的免疫组化染色结果进行分析时,发现对于所有前列腺癌病例,癌组织部分中的TRIM29表达均消失。相比之下,对于前列腺上皮内瘤,在基底细胞部分中观察到的TRIM29表达与正常前列腺一样。这些结果示于表2中。
[表2]
表2.前列腺癌中TRIM29染色的程度
工业实用性
根据本发明的用于检测前列腺基底细胞的方法可以用于前列腺的组织学研究。根据本发明的用于识别前列腺基底细胞的存在、减少或消失的方法使得能够确诊前列腺癌。此外,上述方法与细胞角蛋白表达分析的结合使得能够更加可靠地确诊前列腺癌。
Claims (12)
1.一种用于检测前列腺基底细胞的方法,包括通过免疫组化染色使三重基序蛋白29(TRIM29)蛋白在前列腺基底细胞中的表达可视化。
2.根据权利要求1所述的用于检测前列腺基底细胞的方法,包括分析前列腺的腺组织结构的形态以及三重基序蛋白29(TRIM29)蛋白的可视化表达。
3.根据权利要求1或2所述的用于检测前列腺基底细胞的方法,还包括通过免疫组化染色使细胞角蛋白和/或p63蛋白的表达可视化。
4.根据权利要求3所述的用于检测前列腺基底细胞的方法,包括分析前列腺的腺组织结构的形态以及细胞角蛋白的可视化表达和/或p63蛋白的可视化表达。
5.一种用于识别前列腺基底细胞的存在、减少或消失的方法,包括采用权利要求1~4中任一项所述的用于检测前列腺基底细胞的方法。
6.一种用于诊断前列腺癌的方法,包括通过免疫组化染色使用TRIM29抗体或其抗原结合片段,在从受试者采集的前列腺组织中检测前列腺基底细胞的步骤。
7.根据权利要求6所述的诊断方法,其中,与正常前列腺组织相比的前列腺基底细胞的减少或消失指示前列腺癌的存在。
8.一种TRIM29抗体或其抗原结合片段,其用在前列腺癌的诊断中。
9.一种用于诊断前列腺癌的诊断组合物,包含TRIM29抗体或其抗原结合片段。
10.TRIM29抗体或其抗原结合片段在制备用于诊断前列腺癌的诊断组合物中的用途。
11.一种用于检测前列腺基底细胞的免疫组化染色试剂盒,包含TRIM29抗体或其抗原结合片段。
12.根据权利要求11所述的用于检测前列腺基底细胞的免疫组化染色试剂盒,还包含细胞角蛋白抗体或其抗原结合片段、和/或p63抗体或其抗原结合片段。
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