KR20150096770A - 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체 및 이들의 용도 - Google Patents

티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체 및 이들의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20150096770A
KR20150096770A KR1020157019404A KR20157019404A KR20150096770A KR 20150096770 A KR20150096770 A KR 20150096770A KR 1020157019404 A KR1020157019404 A KR 1020157019404A KR 20157019404 A KR20157019404 A KR 20157019404A KR 20150096770 A KR20150096770 A KR 20150096770A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
compound
conjugate
mixed disulfide
thienopyridine
conjugates
Prior art date
Application number
KR1020157019404A
Other languages
English (en)
Other versions
KR101841332B1 (ko
Inventor
하오밍 장
폴 홀렌베르그
Original Assignee
더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 미시간
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 미시간 filed Critical 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 미시간
Publication of KR20150096770A publication Critical patent/KR20150096770A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101841332B1 publication Critical patent/KR101841332B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/04—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/68—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D211/72—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms, with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4525—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with oxygen as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4545—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pipamperone, anabasine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/50—Pyridazines; Hydrogenated pyridazines
    • A61K31/501—Pyridazines; Hydrogenated pyridazines not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/06—Tripeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A61K47/48023—
    • A61K47/48038—
    • A61K47/48061—
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/542—Carboxylic acids, e.g. a fatty acid or an amino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/545—Heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0819—Tripeptides with the first amino acid being acidic

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
  • Hydrogenated Pyridines (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

본 발명은 의료 화학의 분야에 있다. 특히, 본 발명은 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체, 그리고 심혈관 질환의 치료, 개선과 예방을 위한 치료제로서 이들의 용도에 관계한다.

Description

티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체 및 이들의 용도{MIXED DISULFIDE CONJUGATES OF THIENOPYRIDINE COMPOUNDS AND USES THEREOF}
연방 정부의 후원을 받은 연구 또는 개발에 관한 진술
본 발명은 국립보건원에 의해 수여된 AA020090 및 CA016954 하에 정부 지원을 받아 만들어졌다. 정부는 본 발명에서 일정한 권리를 갖는다.
발명의 분야
본 발명은 의료 화학의 분야에 있다. 특히, 본 발명은 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체, 그리고 심혈관 질환의 치료, 개선과 예방을 위한 치료제로서 이들의 용도에 관계한다.
도입
티에노피리디닐 화합물은 심장마비와 뇌졸중을 예방하기 위한 항혈소판 작용제로서 폭넓게 이용된다. 이러한 범주에서, 클로피도그렐 (Plavix), 티클로피딘 (Ticlid) 및 프라수그렐 (Effient)은 통상적으로 이용되는 3가지 전구약물이다. 이들 작용제는 다형성 시토크롬 (P450) 매개된 산화 생활성화를 필요로 한다. 이런 산화 생활성화는 치료 효과의 느린 시작 및 호중구감소증과 혈전성 혈소판감소성 자반병을 비롯한 여러 유해 효과를 유발한다.
다형성 시토크롬 (P450) 매개된 산화 생활성화를 필요로 하지 않는 향상된 항혈소판 작용제가 필요하다.
발명의 요약
클로피도그렐 (Plavix), 티클로피딘 (Ticlid) 및 프라수그렐 (Effient)은 심장마비와 뇌졸중을 예방하기 위한 항혈소판 작용제로서 폭넓게 이용되는 한 부류의 티에노피리디닐 화합물에 속한다. 하지만, 반응의 결여, 독성 및 과잉의 출혈을 비롯한 여러 심각한 결점이 이들 약물과 연관되었다. 이들 결점은 이들 모두 다형성 시토크롬 P450 효소 (P450s)에 의한 산화 생활성화를 필요로 하는 전구약물이라는 사실에 밀접하게 관련된다.
티에노피리딘 화합물 (클로피도그렐 (Plavix), 티클로피딘 (Ticlid) 및 프라수그렐 (Effient))과 연관된 결점을 극복하기 위해, 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체가 개발되었다. 실제로, 본 발명을 위한 구체예를 개발하는 과정 동안 수행된 실험은 본 발명의 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체가 P450에 의한 생활성화에 대한 필요 없이 내인성 글루타티온 (GSH)의 존재에서 활성 티에노피리딘 대사산물 (가령, 항혈소판 활성을 나타낼 수 있는 활성 티에노피리딘 대사산물)을 생산할 수 있다는 것을 증명하였다. 이러한 접근법은 P450에 의한 산화 생활성화 과정을 우회할 뿐만 아니라, 티에노피리디닐 약물과 연관된 많은 결점을 회피한다. 가령, 본 발명의 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체는 투약 일관성을 향상시키는데, 그 이유는 접합체로부터 활성 대사산물의 생산이 예측가능하기 때문이다. 이에 더하여, 항혈소판 작용제로서 본 발명의 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체의 이용은 독성을 감소시키는데, 그 이유는 독성 반응성 대사산물이 티올-교환 반응에 의해 생산되지 않기 때문이다. 이에 더하여, 본 발명의 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체에 대한 치료적 시작 시간이 단축되는데, 이것은 급성 심혈관 이벤트를 경험하는 환자에게 크게 이롭다. 가령, 티에노피리딘에 대한 표준 섭생은 환자를 3-5 일 동안 연속적으로 투약하는 것을 필요로 하는데, 그 이유는 섭취된 티에노피리딘 중에서 극히 작은 백분율만 활성 대사산물로 전환되기 때문이다. 대조적으로, 본 발명의 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체는 30 분 이내에 높은 수율에서 활성 대사산물을 방출한다. 이에 더하여, 본 발명의 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체는 활성 대사산물에 비하여 우수한 안정성을 갖고, 그리고 이런 이유로, 이들은 시험관내에서 기본적 연구와 임상적 연구를 위한 활성 대사산물을 정량적으로 산출하는데 이용될 수 있다.
따라서 일정한 구체예에서, 본 발명은 항혈소판 작용제 (가령, 클로피도그렐 (Plavix), 티클로피딘 (Ticlid) 및 프라수그렐 (Effient))로서 폭넓게 이용되는 티에노피리디닐 화합물과 연관된 이런 결점을 극복할 수 있는 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체를 제공한다. 본 발명은 티에노피리딘 화합물의 특정 혼합된 이황화물 접합체에 한정되지 않는다. 일부 구체예에서, 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체, 이들의 제약학적으로 허용되는 염, 이들의 용매화합물, 및/또는 이들의 전구약물은 화학식 I에 의해 설명된다:
[화학식 I]
Figure pct00001
; 여기서 R1, R2와 R3은 결과의 화합물이 내인성 글루타티온 (GSH)과의 상호작용 시에 활성 티에노피리딘 대사산물 (가령, 항혈소판 활성을 나타낼 수 있는 활성 티에노피리딘 대사산물)을 생산할 수 있게 만드는 임의의 화학적 모이어티를 독립적으로 포함한다.
일부 구체예에서, R1은 H, -CO-OCH3, 그리고
Figure pct00002
으로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예에서, R3은 염소 또는 불소이다.
일부 구체예에서, R2는 다음과 같이 구성된 군에서 선택된다:
Figure pct00003
,
Figure pct00004
,
Figure pct00005
,
Figure pct00006
,
Figure pct00007
,
Figure pct00008
,
Figure pct00009
,
Figure pct00010
,
Figure pct00011
, 그리고
Figure pct00012
.
일정한 구체예에서, 본 발명은 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체 및 제약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 제약학적 조성물을 제공한다.
일정한 구체예에서, 본 발명은 정맥내 (IV) 투여를 위해 형성된 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체를 포함하는 제약학적 조성물을 제공한다. 일부 구체예에서, 정맥내 (IV) 투여를 위해 형성된 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체를 포함하는 이런 제약학적 조성물은 죽상경화혈전증의 치료, 개선과 예방에서 이용된다. 일부 구체예에서, 정맥내 (IV) 투여를 위해 형성된 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체를 포함하는 이런 제약학적 조성물은 혈소판 응집의 신속한 저해를 위해 이용된다. 일부 구체예에서, 정맥내 (IV) 투여를 위해 형성된 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체를 포함하는 이런 제약학적 조성물은 혈소판 응집의 신속한 저해를 위한 경피 관상 개입 절차 (가령, 관상 혈관형성술) 동안 이용된다.
일정한 구체예에서, 본 발명은 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체의 치료 효과량을 환자에 투여하는 것을 포함하는, 심혈관 질환을 치료하거나, 개선하거나, 또는 예방하는 방법을 제공한다. 일부 구체예에서, 투여는 정맥내 투여이다. 일부 구체예에서, 심혈관 질환은 관상 동맥 질환, 말초 혈관 질환, 그리고 뇌혈관 질환으로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예에서, 상기 화합물은 혈소판의 응집을 감소시킨다 (가령, P2Y12 수용체에 비가역적 결합을 통해) (가령, ADP 수용체를 차단하는 것을 통해). 일부 구체예에서, 상기 화합물은 P450에 의한 생활성화에 대한 필요 없이 내인성 글루타티온의 존재에서 활성 티에노피리딘 대사산물을 생산할 수 있다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 HMG-CoA 환원효소 저해제, ACE 저해제, 칼슘 통로 차단제, 혈소판 응집 저해제, 다중불포화된 지방산, 피브린산 유도체, 담즙산 격리제, 항산화제, 그리고 항협심증 작용제로 구성된 군에서 선택되는 최소한 하나의 작용제의 공동투여를 더욱 포함한다.
일정한 구체예에서, 본 발명은 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체의 치료 효과량을 환자에 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 혈관 내로 혈소판의 응집을 치료하거나, 개선하거나, 또는 예방하는 방법을 제공한다. 일부 구체예에서, 투여는 정맥내 투여이다. 일부 구체예에서, 환자는 심혈관 질환 (가령, 관상 동맥 질환, 말초 혈관 질환, 그리고 뇌혈관 질환)이 발생했거나 또는 발생할 위험에 처해있다. 일부 구체예에서, 혈소판의 응집을 치료하거나, 개선하거나, 또는 예방하는 것은 P2Y12 수용체에 비가역적 결합을 통해 발생한다. 일부 구체예에서, 혈소판의 응집을 치료하거나, 개선하거나, 또는 예방하는 것은 ADP 수용체를 차단하는 것을 통해 발생한다. 일부 구체예에서, 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체는 P450에 의한 생활성화에 대한 필요 없이 내인성 글루타티온의 존재에서 활성 티에노피리딘 대사산물을 생산할 수 있다.
도면의 간단한 설명
도면 1은 클로피도그렐의 활성 대사산물 (AM)의 형성에 대한 티올 환원제의 효과를 보여준다. AM은 0.2 mg/ml HLM, 0.1 mM 2-옥소클로피도그렐, NADPH-재생 시스템, 그리고 티올 환원제를 내포하는 0.1 ml의 50 mM KP 완충액 (pH 7.4)에서 생산되었다. 티올 환원제의 농도는 각각 0.3 mM인 CPT, DFT와 NPT를 제외하고 1 mM이었다. 반응은 5 단위의 G6PD의 첨가에 의해 시작되고 37℃에서 20 분 동안 인큐베이션되었다. 활성 대사산물은 이후, 재료와 방법에서 설명된 바와 같이 MP 유도체로서 정량되었다. 보고된 비율은 3가지 별도의 계측에서 평균화되었다. 티올 화합물에 대한 약어는 표 1에서 제공된다.
도면 2는 클로피도그렐의 대표적인 혼합된 이황화물 접합체의 도출된 이온 크로마토그램 (EIC)을 보여준다. 혼합된 이황화물 접합체는 1 mg/ml HLM, 0.1 mM 2-옥소클로피도그렐, 다양한 티올 환원제 및 NADPH-재생 시스템을 내포하는 0.2 ml의 50 mM KPi 완충액 (pH 7.4)에서 37℃에서 30 분 동안 생산되었다. MS 분석은 재료와 방법에서 설명된 바와 같이 수행되었다. (A), m/z 432.06에서 BME 접합체에 대한 EIC; (B) m/z 482.08에서 DFT 접합체에 대한 EIC; (C) m/z 499.99에서 CPT 접합체에 대한 EIC; (D) m/z 510.08에서 NPT 접합체에 대한 EIC.
도면 3은 HLM에 의해 생산된 클로피도그렐의 AM과 티올 접합체의 상대적 양을 보여준다. AM과 접합체는 도면 2에서 설명된 바와 같이 0.2 ml의 50 mM KP (pH 7.4)에서 생산되었다. 이들 분석을 위해, 50 pmole의 (S)-클로피도그렐이 IS로서 각 표본 내로 스파이크되었다. AM과 티올 접합체 둘 모두 재료와 방법에서 설명된 바와 같이 의존성 스캔 양식에서 LC-MS/MS를 이용하여 분석되었다. 범례: 속이 빈 막대, m/z 356 (AM) 대 m/z 322 (IS)의 AUC 비율; 속이 찬 막대, 개별 접합체 대 IS의 AUC 비율.
도면 4는 CPT의 혼합된 이황화물 접합체의 MS와 MS2 스펙트럼을 보여준다. 접합체는 도면 2에서 설명된 바와 같이 생산되었다. MS와 MS2 스펙트럼은 재료와 방법에서 설명된 바와 같이 의존성-스캔 양식에서 LC-MS/MS를 이용하여 획득되었다. (A), CPT 접합체의 MS 스펙트럼; (B) CPT 접합체에 대한 부모 이온 m/z 499.99의 MS2 스펙트럼; (C), CPT 접합체에 대한 부모 이온 m/z 501.94의 MS2 스펙트럼; (D), 도면 4B에서 도시된 단편화 패턴에 대한 배정.
도면 5는 GSH에 의한 클로피도그렐의 혼합된 이황화물 접합체의 감소에 대한 동역학을 보여준다. 혼합된 이황화물 접합체는 재료와 방법에서 설명된 바와 같이 1 mg/ml HLM, 0.1 mM 2-옥소클로피도그렐, NADPH-재생 시스템 및 다양한 티올 환원제를 내포하는 반응 혼합물로부터 제조되고 SPE C18 카트리지를 이용하여 정제되었다. 정제된 접합체는 이후, 1 mM GSH 및 0.2 mg/ml 시토졸 (존재할 때)와 혼합되었다. 남아있는 접합체 및 형성된 AM은 LC-MS/MS를 이용하여 분석되었다. 범례: (A) 0.2 mg/ml 시토졸의 존재에서 1 mM GSH에 의한 BME (○), CPT (■), NAC (▼), DFT (▲), 그리고 NPT (□)의 접합체의 환원. (B) 0.2 mg/ml 시토졸의 존재와 부재에서 1 mM GSH에 의한 CPT 접합체의 환원. 범례: (○), 시토졸의 부재에서 AM의 형성; (△), 시토졸의 존재에서 AM의 형성; (●), 시토졸의 부재에서 접합체의 환원; (▲), 시토졸의 존재에서 접합체의 환원. 실선과 파선은 단일 지수 함수에 비선형 곡선 적합이다.
도면 6은 클로피도그렐의 혼합된 이황화물 접합체로부터 활성 대사산물 H4의 형성을 보여주는 m/z 504에서 관찰된 도출된 이온 크로마토그램을 보여준다. 혼합된 이황화물 접합체는 도면 3에서 설명된 바와 같이 HLM에서 생산되고 SPE 카트리지로 정제되었다. MS 분석에 앞서, 혼합된 이황화물 접합체는 DTT로 처리되어 AM을 방출하고, 이것은 이후, MPB로 차후 유도체화되었다. AM-MP 유도체는 재료와 방법에서 설명된 바와 같이 LC-MS/MS를 이용하여 분석되었다. 범례: A, 트랜스- (파선)와 시스-클로피도그렐-MP (실선) 표준; B, 1 mM GSH (파선)와 1 mM 아스코르브산 (실선)의 존재에서 획득된 AM-MP; C, CPT 접합체로부터 획득된 AM-MP; D, NPT 접합체로부터 획득된 AM-MP; E, DFT 접합체로부터 획득된 AM-MP. 진폭은 2에 의해 곱셈되었다.
도면 7은 클로피도그렐의 혼합된 이황화물 접합체에 의한 혈소판 응집의 저해를 보여준다. 혼합된 이황화물 접합체는 1 mM GSH, 티올 환원제 없음 또는 G6PD 없음을 내포하는 3가지 대조 표본과 함께, 0.3 mM CPT와 NPT의 존재에서 제조되고 반응 혼합물로부터 정제되었다. 모든 표본은 0.5 ml PPP에서 재현탁되었는데, 이들 중에서 일부는 1 mM GSH까지 처리되어 AM을 방출하였다. 혈소판 응집은 10 μM ADP의 첨가에 의해 시작되고 응집측정기로 기록되었다. 응집의 백분율은 PRP의 백분율에 대해 정규화되고 4가지 별도의 계측에서 평균화되었다. 상세를 위해, 재료와 방법을 참조한다. 범례: PRP, 처리되지 않은 혈소판-풍부한 혈장; GSH, PRP에서 1 mM GSH; -G6PD, G6PD의 부재에서 생산된 대사산물; -SH, 임의의 티올 환원제의 부재에서 생산된 대사산물; GSH, 1 mM GSH의 존재에서 생산된 대사산물; CPT, 0.3 mM CPT의 존재에서 생산된 대사산물; CPT+GSH, 0.3 mM CPT의 존재에서 생산되고, 그리고 이후, 1 mM GSH로 처리된 대사산물; NPT, 0.3 mM NPT의 존재에서 생산된 대사산물; NPT+GSH, 0.3 mM NPT의 존재에서 생산되고, 그리고 이후, 1 mM GSH로 처리된 대사산물.
도면 8은 실시예 X에서 설명된 바와 같이, 재구성된 시스템에서 생합성된 순수한 (S)-clopNPT의 전체 이온 크로마토그램을 제공한다. (S)-clopNPT의 3가지 부분입체이성질체는 7.9, 8.6, 그리고 9.5 분에서 용리되었다.
도면 9는 실시예 X에서 설명된 바와 같이, (S)-clopNPT의 IV 주사 이후에 수컷 NZ 백색 토끼의 혈소판 활성을 제공한다.
정의
용어 "티에노피리딘 화합물"은 본원에서 이용된 바와 같이, 그들의 항혈소판 활성을 위해 이용된 한 부류의 ADP 수용체/P2Y12 저해제를 지칭한다. 실례에는 클로피도그렐 (Plavix), 티클로피딘 (Ticlid), 그리고 프라수그렐 (Effient)이 포함되지만 이들에 한정되지 않는다.
용어 "티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체"는 본원에서 이용된 바와 같이, 내인성 글루타티온 (GSH)과의 접촉 시에 활성 티에노피리딘 대사산물을 생산할 수 있는 변형된 티에노피리딘 화합물을 지칭한다.
용어 "전구약물"은 본원에서 이용된 바와 같이, 활성 약물을 방출하거나, 또는 전구약물을 활성 약물로 전환 (가령, 효소적으로, 생리학적으로, 기계적으로, 전자기적으로)하기 위해 표적 생리학적 시스템 내에서 생체내변환 (가령, 자발적 또는 효소적)을 필요로 하는, 부모 "약물" 분자의 약리학적으로 비활성 유도체를 지칭한다. 전구약물은 안정성, 물 용해도, 독성, 특이성의 결여, 또는 제한된 생체이용률과 연관된 문제를 극복하도록 설계된다. 예시적인 전구약물은 활성 약물 분자 그 자체 및 화학적 가리움 기 (가령, 약물의 활성을 가역적으로 억제하는 기)를 포함한다. 일부 전구약물은 물질대사 조건 하에 개열가능한 기를 갖는 화합물의 변이 또는 유도체이다. 전구약물은 당분야에서 공지된 방법, 예를 들면, A Textbook of Drug Design and Development, Krogsgaard-Larsen and H. Bundgaard (eds.), Gordon & Breach, 1991, 특히 Chapter 5: "Design and Applications of Prodrugs"; Design of Prodrugs, H. Bundgaard (ed.), Elsevier, 1985; Prodrugs: Topical and Ocular Drug Delivery, K. B. Sloan (ed.), Marcel Dekker, 1998; Methods in Enzymology, K. Widder et al. (eds.), Vol. 42, Academic Press, 1985, 특히 pp. 309-396; Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery, 5th Ed., M. Wolff (ed.), John Wiley & Sons, 1995, 특히 Vol. 1과 pp. 172-178과 pp. 949-982; Pro-Drugs as Novel Delivery Systems, T. Higuchi and V. Stella (eds.), Am. Chem. Soc., 1975; 그리고 Bioreversible Carriers in Drug Design, E. B. Roche (ed.), Elsevier, 1987에서 설명된 것들을 이용하여 부모 화합물로부터 쉽게 제조될 수 있다.
예시적인 전구약물은 생리학적 조건 하에 가용매분해를 겪거나 또는 효소적 분해 또는 다른 생화학적 전환 (가령, 인산화, 수소화, 탈수소화, 당화)를 겪을 때, 생체내에서 또는 시험관내에서 제약학적으로 활성화된다. 전구약물은 종종, 포유류 생물체에서 물 용해도, 조직 적합성, 또는 지체된 방출의 이점을 제공한다 (가령, Bundgard, Design of Prodrugs, pp. 7-9, 21-24, Elsevier, Amsterdam (1985); 그리고 Silverman, The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action, pp. 352-401, Academic Press, San Diego, CA (1992)를 참조한다). 공통 전구약물은 산 유도체, 예를 들면, 부모 산과 적합한 알코올 (가령, 저급 알칸올)의 반응에 의해 제조된 에스테르 또는 부모 알코올과 적합한 카르복실산 (가령, 아미노산)의 반응에 의해 제조된 에스테르, 부모 산 화합물과 아민의 반응에 의해 제조된 아미드, 반응되면 아실화된 염기 유도체 (가령, 저급 알킬아미드)를 형성하는 염기성 기, 또는 인-내포 유도체, 예를 들면, 환상 인산염, 포스포네이트와 포스포라미데이트를 비롯하여 인산염, 포스포네이트와 포스포라미데이트 에스테르를 포함한다 (가령, US 특허 출원 공개 번호. US 2007/0249564 A1을 참조한다).
용어 "제약학적으로 허용되는 염"은 본원에서 이용된 바와 같이, 표적 동물 (가령, 포유동물)에서 생리학적으로 용인되는 본 발명의 화합물의 임의의 염 (가령, 산 또는 염기와의 반응에 의해 획득된)을 지칭한다. 본 발명의 화합물의 염은 무기 또는 유기 산과 염기로부터 유래될 수 있다. 산의 실례에는 염화수소산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 과염소산, 푸마르산, 말레산, 인산, 글리콜산, 젖산, 살리실산, 숙신산, 톨루엔-p-술폰산, 주석산, 아세트산, 구연산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 포름산, 벤조산, 말론산, 술폰산, 나프탈렌-2-술폰산, 벤젠술폰산, 기타 등등이 포함되지만 이들에 한정되지 않는다. 다른 산, 예를 들면, 옥살산은 그 자체로는 제약학적으로 허용되지 않지만, 본 발명의 화합물 및 이들의 제약학적으로 허용되는 산 부가염을 획득하는데 있어서 중간체로서 유용한 염의 제조에 이용될 수 있다.
염기의 실례에는 알칼리 금속 (가령, 나트륨) 수산화물, 알칼리성 토류 금속 (가령, 마그네슘) 수산화물, 암모니아, 그리고 화학식 NW4 +의 화합물 (여기서 W는 C1-4 알킬), 기타 등등이 포함되지만 이들에 한정되지 않는다.
염의 실례에는 다음이 포함되지만 이들에 한정되지 않는다: 아세트산염, 아디핀산염, 알긴산염, 아스파르트산염, 벤조산염, 벤젠술폰산염, 중황산염, 부티르산염, 구연산염, 캄포산염, 캄포술폰산염, 시클로펜탄프로피온산염, 디글루코네이트, 도데실술페이트, 에탄술폰산염, 푸마르산염, 플루코헵타노에이트, 글리세로포스페이트, 헤미술페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 염화물, 브롬화물, 요오드화물, 2-히드록시에탄술폰산염, 젖산염, 말레인산염, 메실레이트, 메탄술폰산염, 2-나프탈렌술폰산염, 니코티네이트, 옥살산염, 팔모에이트, 펙틴산염, 과황산염, 페닐프로피온산염, 피크르산염, 피발레이트, 프로피온산염, 숙신산염, 주석산염, 티오시안산염, 토실레이트, 운데카노에이트, 기타 등등. 염의 다른 실례는 적합한 양이온, 예를 들면, Na+, NH4 +, 그리고 NW4 + (여기서 W는 C1-4 알킬 기), 기타 등등으로 배합된 본 발명의 화합물의 음이온을 포함한다. 치료적 이용을 위해, 본 발명의 화합물의 염은 제약학적으로 허용되는 것으로 예기된다. 하지만, 비-제약학적으로 허용되는 산과 염기의 염 또한, 예로서 제약학적으로 허용되는 화합물의 제조 또는 정제에서 용도를 발견할 수 있다.
용어 "용매화합물"은 본원에서 이용된 바와 같이, 본 발명의 화합물과 유기 또는 무기인지에 상관없이 하나 또는 그 이상의 용매 분자의 물리적 연관을 지칭한다. 이러한 물리적 연관은 수소 결합을 종종 포함한다. 일정한 사례에서, 용매화합물은 예로서, 하나 또는 그 이상의 용매화합물 분자가 결정성 고체의 결정 격자에 통합될 때 단리될 수 있다. "용매화합물"은 용액-상과 단리가능한 용매화합물 둘 모두를 포괄한다. 예시적인 용매화합물은 수화물, 에타놀레이트, 그리고 메타놀레이트를 포함한다.
용어 "치료 효과량"은 본원에서 이용된 바와 같이, 장애의 하나 또는 그 이상의 증상의 개선을 유발하거나, 또는 장애의 진전을 예방하거나, 또는 장애의 퇴화를 유발하는데 충분한 치료제의 양을 지칭한다. 가령, 혈관 내로 혈소판 응집의 치료 및/또는 예방에 대하여, 한 구체예에서, 치료 효과량은 혈소판 응집을 최소한 5%, 최소한 10%, 최소한 15%, 최소한 20%, 최소한 25%, 최소한 30%, 최소한 35%, 최소한 40%, 최소한 45%, 최소한 50%, 최소한 55%, 최소한 60%, 최소한 65%, 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 90%, 최소한 95%, 또는 최소한 100% 감소시키고 및/또는 예방하는 치료제 (가령, 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체)의 양을 지칭할 것이다.
용어 "제약학적으로 허용되는 담체" 또는 "제약학적으로 허용되는 운반제"는 표준 제약학적 담체, 용매, 계면활성제, 또는 운반제 중에서 한 가지를 포괄한다. 적합한 제약학적으로 허용되는 운반제는 수성 운반제와 비수성 운반제를 포함한다. 표준 제약학적 담체 및 이들의 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA, 19th ed. 1995에서 설명된다.
발명의 상세한 설명
티에노피리디닐 항혈소판 작용제는 3가지 임상적으로 이용되는 약물, 클로피도그렐 (Plavix), 티클로피딘 (Ticlid), 그리고 프라수그렐 (Effient)을 포함한다. 클로피도그렐 (Plavix), 티클로피딘 (Ticlid), 그리고 프라수그렐 (Effient)에 대한 화학적 구조와 IUPAC 명칭은 다음과 같다:
Figure pct00013
(티클로피딘; 5-(2-클로로벤질)-4,5,6,7-테트라히드로티에노[3,2 c] 피리딘),
Figure pct00014
(클로피도그렐; (+)-(S)-메틸 2-(2-클로로페닐)-2-(6,7-디히드로티에노[3,2-c] 피리딘-5(4H)-일) 아세트산염), 그리고
Figure pct00015
(프라수그렐; (RS)-5-[2-시클로프로필-1-(2-플루오로페닐)-2-옥소에틸]-4,5,6,7-테트라히드로티에노[3,2-c] 피리딘-2-일 아세트산염).
티에노피리디닐 항혈소판 작용제는 심장마비와 뇌졸중을 예방하기 위해 급성 심혈관 증후군과 말초 혈관 질환을 앓는 환자, 특히 경피 관상 개입 (가령, 관상 혈관형성술)을 겪는 환자를 치료하는데 폭넓게 이용된다. 미국에서 매년 거의 2 백만 명의 환자가 관상과 경동맥 스텐트를 받고 있고, 그리고 Plavix 단독에 대한 연간 판매가 2010년에 6.5 십억 달러에 달하였다.
광범위한 이용에도 불구하고, 클로피도그렐은 효능에서 유의미한 개인간 가변성을 보여주었다 (가령, Freedman JE and Hylek EM (2009) New Engl J Med 360(4):411-413; Gurbel PA and Tantry US (2007) Thromb Res 120(3):311-321; Sofi F, et al., (2011) Pharmacogenomics J 11(3):199-206을 참조한다). 환자 중에서 거의 1/3이 클로피도그렐 요법에 응답하지 않는다 (가령, Mason PJ, Jacobs AK and Freedman JE (2005) J Am Coll Cardiol 46(6):986-993을 참조한다). 이러한 개인간 가변성을 극복하는 목적으로 반응의 결여와 상관하는 유전자 마커를 확인하려 시도하는 다수의 연구가 수행되었다. 클로피도그렐은 돌연변이체 CYP2C19*2 유전자를 보유하는 환자에서 덜 효과적인 것으로 밝혀졌다 (가령, Dick RJ, Dear AE and Byron KA (2011) Heart Lung Circ 20(10):657-658; Shuldiner AR, et al., (2009) JAMA 302(8):849-857; Sofi F, et al., (2011) Pharmacogenomics J 11(3):199-206을 참조한다). 하지만 CYP2C19*2 돌연변이 유전자는 반응에서 변이의 단지 12%만을 설명한다 (가령, Shuldiner AR, et al., (2009) JAMA 302(8):849-857을 참조한다). 다른 인자가 아마도 관련되지만, 확인되지 않았다.
실제로, 비록 항혈소판 작용제로서 폭넓게 이용되긴 하지만, 티에노피리디닐 항혈소판 작용제와 연관된 결점이 있다. 클로피도그렐에 대한 주요 단점은 투약 불일치이다. 가령, 환자의 거의 1/3이 클로피도그렐 치료에 응답하지 않는다. 티클로피딘은 피부 발진과 설사의 중등도 증상에서부터 심각하고 때때로 치명적인 증상, 예를 들면, 호중구감소증과 골수 형성부전증까지 범위에서 일련의 유해 효과를 유발할 수 있다. 희귀한 사례에서, 이것은 무과립구증의 심각한 특유한 이벤트를 유발한다. 과도한 출혈이 특히 나이든 환자에서 프라수그렐의 이용과 연관되었다.
티에노피리디닐 항혈소판 작용제와 연관된 이런 결점은 이들 3가지 약물 모두 반응식 1에서 예시된 바와 같이 다형성 시토크롬 P450 (P450s)에 의한 활성 대사산물 (AM)로의 산화 생활성화를 필요로 하는 전구약물이라는 사실에 밀접하게 관련된다. 이러한 산화 생활성화 과정 때문에, P450에 의해 생산된 활성 대사산물의 양은 각 환자의 간 P450의 유전자 구성에 따라 변한다. 게다가, 이들 약물은 P450에 의해 광범위하게 물질대사되어 복수의 대사산물을 생산하고, 이들 중에서 일부는 고도로 반응성이고 잠재적으로 독성이다. 티클로피딘으로 인한 심각한 특유한 이벤트는 반응성 대사산물의 생산과 연관되는 것으로 보고되었다.
[반응식 1]
Figure pct00016
지적된 바와 같이, 클로피도그렐 요법에 대한 가변 반응은 클로피도그렐이 시토크롬 P450 (P450s)에 의한 약리학적으로 활성 대사산물 (AM)로의 산화 생활성화를 필요로 하는 전구약물이라는 사실에 밀접하게 관련된다 (가령, Kazui M, et al., (2010) Drug Metab Dispos 38(1):92-99; Savi P, et al., (2000) Thromb Haemost 84(5):891-896을 참조한다). P450-매개된 생활성화는 2번의 연속 산화 단계를 수반하는 것으로 충분히 방증된다 (가령, Dansette PM, Thebault S, Bertho G and Mansuy D (2010) Chem Res Toxicol 23(7):1268-1274; Dansette PM, Rosi J, Bertho G and Mansuy D (2012) Chem Res Toxicol 25(2):348-356을 참조한다); 클로피도그렐은 먼저, 2-옥소클로피도그렐로 단일산소화되고, 이것은 차례로, 두 번째 단계에서 AM으로 산화된다. 비록 에스테르분해효소 PON1이 2-옥소클로피도그렐을 AM으로 전환하는 것을 책임지는 것으로 주장되긴 했지만 (가령, Bouman HJ, et al., (2011) Nat Med 17(1):110-116을 참조한다), 증가하는 증거는 2-옥소클로피도그렐이 반응식 2에서 예시된 바와 같이, 술펜산 중간물질을 거쳐 AM으로 전환된다는 개념을 뒷받침한다 (가령, Dansette PM, Libraire J, Bertho G and Mansuy D (2009) Chem Res Toxicol 22(2):369-373; Dansette PM, Rosi J, Bertho G and Mansuy D (2012) Chem Res Toxicol 25(2):348-356; Dansette PM, Rosi J, Debernardi J, Bertho G and Mansuy D (2012) Chem Res Toxicol 25(5):1058-1065; Dansette PM, Thebault S, Bertho G and Mansuy D (2010) Chem Res Toxicol 23(7):1268-1274를 참조한다).
[반응식 2]
Figure pct00017
반응식 2에 따라, 2-옥소클로피도그렐은 먼저, P450에 의해 술펜산 중간물질로 산화된다. 고도로 불안정한 술펜산은 이후, 글루타티온 (GSH)에 의해 급속히 환원되어 혼합된 이황화물 접합체 (RS-SG)를 형성하고, 이것은 차후에, 다른 GSH 분자에 의해 환원되어 AM을 형성한다. 이것은 GSH가 인간 간 마이크로솜 (HLMs)에서 AM의 형성을 위해 필요하다는 관찰 결과와 일치한다 (가령, Kazui M, et al., (2010) Drug Metab Dispos 38(1):92-99를 참조한다). AM은 혈소판 P2Y12 수용체의 공유 변형을 통한 혈소판 응집의 저해를 책임지는 것으로 폭넓게 인정된다 (가령, Ding Z, et al., (2003) Blood 101(10):3908-3914; Algaier I, et al., (2008) J Thromb Haemost 6(11):1908-1914를 참조한다). 혼합된 이황화물 접합체 RS-SG의 항혈소판 활성은 검증되지 않은 상태로 남아있다.
N-아세틸-L-시스테인 (NAC)과 L-시스테인의 존재에서 2-옥소클로피도그렐의 물질대사는 AM 및 혼합된 이황화물 접합체 둘 모두의 형성을 야기한다 (가령, Zhang H, Lau WC and Hollenberg PF (2012) Mol Pharmacol 82:302-309를 참조한다). 이에 더하여, NAC와 L-시스테인의 혼합된 이황화물 접합체는 GSH로 티올을 교환하고, 그리고 AM, AM 접합체와 GSH 사이에 평형은 그들의 산화환원 전위에 의해 지배되는 것으로 증명되었다. 술펜산 중간물질의 산화환원 전위는 높을 개연성이 있는데, 그 이유는 이것이 반응성 산화제이기 때문이다.
티에노피리딘 화합물과 연관된 결점을 극복하기 위해, 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체가 개발되었다. 본 발명의 구체예를 개발하는 과정 동안 수행된 실험은 본 발명의 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체가 반응식 3에서 예시된 바와 같이, P450에 의한 생활성화에 대한 필요 없이 내인성 글루타티온 (GSH)의 존재에서 활성 대사산물을 생산할 수 있다는 것을 증명하였다. 이러한 접근법은 P450에 의한 산화 생활성화 과정을 우회할 뿐만 아니라, 티에노피리디닐 약물의 많은 결점을 회피한다. 가령, 본 발명의 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체는 투약 일관성을 향상시키는데, 그 이유는 접합체로부터 활성 대사산물의 생산이 예측가능하기 때문이다. 이에 더하여, 항혈소판 작용제로서 본 발명의 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체의 이용은 독성을 감소시키는데, 그 이유는 독성 반응성 대사산물이 티올-교환 반응에 의해 생산되지 않기 때문이다. 이에 더하여, 본 발명의 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체에 대한 치료적 시작 시간이 단축될 것인데, 이것은 급성 심혈관 이벤트를 경험하는 환자에게 크게 이롭다. 티에노피리딘에 대한 표준 섭생은 환자를 3-5 일 동안 연속적으로 투약하는 것을 필요로 하는데, 그 이유는 섭취된 티에노피리딘 중에서 극히 작은 백분율만 활성 대사산물로 전환되기 때문이다. 대조적으로, 본 발명의 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체는 30 분 이내에 높은 수율에서 활성 대사산물을 방출할 수 있다. 이에 더하여, 본 발명의 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체는 활성 대사산물에 비하여 우수한 안정성을 갖고, 그리고 이런 이유로, 이들은 시험관내에서 기본적 연구와 임상적 연구를 위한 활성 대사산물을 정량적으로 산출하는데 이용될 수 있다.
[반응식 3]
Figure pct00018
반응식 3 내에서, SR의 실례에는
Figure pct00019
(6-클로로피리다진-3-티올 (CPT)),
Figure pct00020
3-니트로피리딘-2-티올 (NPT)),
Figure pct00021
(2,5-디메틸푸란-3-티올 (DFT)),
Figure pct00022
(L-시스테인 (CYS)),
Figure pct00023
(g-L-글루타밀-L-시스테인 (GC)),
Figure pct00024
(시스테인-글리신 (CG)),
Figure pct00025
(2-메르캅토에탄올 (BME)),
Figure pct00026
(시스테아민 (CYA)),
Figure pct00027
(N-아세틸-L-시스테인 (NAC)), 그리고
Figure pct00028
(글루타티온 (GSH))이 포함되지만 이들에 한정되지 않는다.
따라서, 본 발명은 P450에 의한 생활성화에 대한 필요 없이 내인성 글루타티온 (GSH)의 존재에서 활성 티에노피리딘 대사산물을 생산할 수 있는 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체에 관계한다. 본 발명은 환자, 예를 들면, 항혈소판 작용제 (가령, 클로피도그렐, 티클로피딘, 그리고 프라수그렐)에 반응성인 환자에서 심혈관 장애를 치료하거나, 개선하거나, 또는 예방하는 방법에 더욱 관계하고, 본 발명의 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체를 환자에 투여하는 것을 포함한다. 이런 장애에는 관상 동맥 질환, 말초 혈관 질환, 그리고 뇌혈관 질환이 포함되지만 이들에 한정되지 않는다. 일부 구체예에서, 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체는 예로서, ADP 수용체를 차단함으로써 (가령, 그렇게 함으로써, 피브리노겐에 혈소판 결합을 허용하는 당단백질 IIb/IIIa의 입체형태적 변화를 예방함으로써) 혈소판 막의 기능을 변화시켜 혈소판 응집을 저해하는데 이용된다. 일부 구체예에서, 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체는 P2Y12 수용체에 비가역적으로 결합함으로써 혈소판의 응집 ("응괴")을 감소시킨다. 일부 구체예에서, 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체는 정맥내 (IV) 투여를 위해 형성된 (가령, 항혈소판 작용제의 IV 투여를 필요로 하는 의학적 환경 (가령, 관상 혈관형성술)에서) 제약학적 조성물 내에 이용된다.
본 발명은 티에노피리딘 화합물의 특정 혼합된 이황화물 접합체에 한정되지 않는다. 일부 구체예에서, 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체, 이들의 제약학적으로 허용되는 염, 이들의 용매화합물, 및/또는 이들의 전구약물은 화학식 I에 의해 설명된다:
Figure pct00029
화학식 I은 R1, R2와 R3에 대한 특정 화학적 모이어티에 한정되지 않는다. 일부 구체예에서, R1, R2, R3은 각각 독립적으로, 결과의 화합물이 P450에 의한 생활성화에 대한 필요 없이 내인성 글루타티온 (GSH)의 존재에서 활성 티에노피리딘 대사산물을 생산할 수 있게 만드는 임의의 화학적 모이어티를 포함한다. 일부 구체예에서, R1, R2, R3은 각각 독립적으로, 결과의 화합물이 환자, 예를 들면, 항혈소판 작용제 (가령, 클로피도그렐, 티클로피딘, 그리고 프라수그렐)에 반응성인 환자에서 심혈관 장애 (가령, 관상 동맥 질환, 말초 혈관 질환, 그리고 뇌혈관 질환)을 치료하거나, 개선하거나, 또는 예방할 수 있게 만드는 임의의 화학적 모이어티를 포함한다. 일부 구체예에서, R1, R2, R3은 각각 독립적으로, 결과의 화합물이 예로서, ADP 수용체를 차단함으로써 (가령, 그렇게 함으로써, 피브리노겐에 혈소판 결합을 허용하는 당단백질 IIb/IIIa의 입체형태적 변화를 예방함으로써) 혈소판 막의 기능을 변화시켜 혈소판 응집을 저해할 수 있게 만드는 임의의 화학적 모이어티를 포함한다. 일부 구체예에서, R1, R2, R3은 각각 독립적으로, 결과의 화합물이 P2Y12 수용체에 비가역적으로 결합함으로써 혈소판의 응집 ("응괴")을 감소시킬 수 있게 만드는 임의의 화학적 모이어티를 포함한다.
일부 구체예에서, R1은 H, -CO-OCH3, 또는
Figure pct00030
이다.
일부 구체예에서, R3은 염소 또는 불소이다.
일부 구체예에서, R2는
Figure pct00031
(6-클로로피리다진-3-티올 (CPT)),
Figure pct00032
3-니트로피리딘-2-티올 (NPT)),
Figure pct00033
(2,5-디메틸푸란-3-티올 (DFT)),
Figure pct00034
(L-시스테인 (CYS)),
Figure pct00035
(g-L-글루타밀-L-시스테인 (GC)),
Figure pct00036
(시스테인-글리신 (CG)),
Figure pct00037
(2-메르캅토에탄올 (BME)),
Figure pct00038
(시스테아민 (CYA)),
Figure pct00039
(N-아세틸-L-시스테인 (NAC)), 그리고
Figure pct00040
(글루타티온 (GSH))에서 선택되지만 이들에 한정되지 않는다.
일부 구체예에서, 티에노피리딘 화합물의 다음 혼합된 이황화물 접합체가 화학식 I에 대해 예기된다:
Figure pct00041
,
Figure pct00042
,
Figure pct00043
,
Figure pct00044
,
Figure pct00045
,
Figure pct00046
,
Figure pct00047
,
Figure pct00048
,
Figure pct00049
,
Figure pct00050
,
Figure pct00051
,
Figure pct00052
,
Figure pct00053
,
Figure pct00054
,
Figure pct00055
,
Figure pct00056
,
Figure pct00057
,
Figure pct00058
,
Figure pct00059
,
Figure pct00060
,
Figure pct00061
,
Figure pct00062
,
Figure pct00063
,
Figure pct00064
,
Figure pct00065
,
Figure pct00066
,
Figure pct00067
,
Figure pct00068
,
Figure pct00069
,
Figure pct00070
,
Figure pct00071
,
Figure pct00072
,
Figure pct00073
,
Figure pct00074
,
Figure pct00075
,
Figure pct00076
,
Figure pct00077
,
Figure pct00078
,
Figure pct00079
,
Figure pct00080
,
Figure pct00081
,
Figure pct00082
,
Figure pct00083
,
Figure pct00084
,
Figure pct00085
,
Figure pct00086
,
Figure pct00087
,
Figure pct00088
,
Figure pct00089
,
Figure pct00090
,
Figure pct00091
,
Figure pct00092
,
Figure pct00093
,
Figure pct00094
,
Figure pct00095
,
Figure pct00096
,
Figure pct00097
,
Figure pct00098
,
Figure pct00099
,
Figure pct00100
,
Figure pct00101
,
Figure pct00102
,
Figure pct00103
,
Figure pct00104
,
Figure pct00105
,
Figure pct00106
,
Figure pct00107
,
Figure pct00108
,
Figure pct00109
,
Figure pct00110
, 그리고
Figure pct00111
.
일부 구체예에서, 티에노피리딘 화합물의 다음 혼합된 이황화물 접합체가 화학식 I에 대해 예기된다:
Figure pct00112
,
Figure pct00113
,
Figure pct00114
,
Figure pct00115
,
Figure pct00116
,
Figure pct00117
,
Figure pct00118
,
Figure pct00119
,
Figure pct00120
,
Figure pct00121
,
Figure pct00122
,
Figure pct00123
,
Figure pct00124
,
Figure pct00125
,
Figure pct00126
,
Figure pct00127
,
Figure pct00128
,
Figure pct00129
,
Figure pct00130
,
Figure pct00131
,
Figure pct00132
,
Figure pct00133
,
Figure pct00134
,
Figure pct00135
,
Figure pct00136
,
Figure pct00137
,
Figure pct00138
,
Figure pct00139
,
Figure pct00140
,
Figure pct00141
,
Figure pct00142
,
Figure pct00143
,
Figure pct00144
,
Figure pct00145
,
Figure pct00146
,
Figure pct00147
,
Figure pct00148
,
Figure pct00149
,
Figure pct00150
,
Figure pct00151
,
Figure pct00152
,
Figure pct00153
,
Figure pct00154
,
Figure pct00155
,
Figure pct00156
,
Figure pct00157
,
Figure pct00158
,
Figure pct00159
,
Figure pct00160
,
Figure pct00161
,
Figure pct00162
,
Figure pct00163
,
Figure pct00164
,
Figure pct00165
,
Figure pct00166
,
Figure pct00167
,
Figure pct00168
,
Figure pct00169
,
Figure pct00170
, 그리고
Figure pct00171
, 또는 이들의 제약학적으로 허용되는 염, 용매화합물, 또는 전구약물.
일부 구체예에서, 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체는 동물 (가령, 인간 및 수의학적 동물이 포함되지만 이들에 한정되지 않는 포유류 환자), 예를 들면, 항혈소판 작용제 (가령, 클로피도그렐, 티클로피딘, 그리고 프라수그렐)에 반응성인 동물에서 심혈관 장애를 치료하거나, 개선하거나, 또는 예방하는데 이용되고, 본 발명의 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체를 환자에 투여하는 것을 포함한다. 이런 장애에는 관상 동맥 질환, 말초 혈관 질환, 죽상경화혈전증, 그리고 뇌혈관 질환이 포함되지만 이들에 한정되지 않는다. 실제로, 일부 구체예에서, 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체는 혈소판 응집을 감소시키고 및/또는 혈전 형성을 저해하는데 이용된다. 이점에 관해서, 이런 질환과 병리는 본 발명의 방법과 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체를 이용한 치료 또는 예방에 순응한다.
일부 구체예에서, 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체는 증후성 죽상경화증을 앓는 환자에서 혈관 허혈성 이벤트의 예방에서 이용된다. 일부 구체예에서, 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체는 ST-분절 상승 없이 급성 관상 증후군을 치료하거나 예방하는데 이용된다. 일부 구체예에서, 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체는 관상동맥내 스텐트의 배치 후 혈전증의 예방에 이용된다. 일부 구체예에서, 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체는 예로서, ADP 수용체를 차단함으로써 (가령, 그렇게 함으로써, 피브리노겐에 혈소판 결합을 허용하는 당단백질 IIb/IIIa의 입체형태적 변화를 예방함으로써) 혈소판 막의 기능을 변화시켜 혈소판 응집을 저해하는데 이용된다. 일부 구체예에서, 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체는 P2Y12 수용체에 비가역적으로 결합함으로써 혈소판의 응집 ("응괴")을 감소시킨다. 일부 구체예에서, 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체는 출혈 시간을 연장하는데 이용된다. 일부 구체예에서, 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체는 고위험 환자에서 뇌졸중의 발생을 감소시키는데 이용된다.
일정한 구체예에서, 본 발명은 정맥내 (IV) 투여를 위해 형성된 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체를 포함하는 제약학적 조성물을 제공한다. 일부 구체예에서, 정맥내 (IV) 투여를 위해 형성된 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체를 포함하는 이런 제약학적 조성물은 죽상경화혈전증의 치료, 개선과 예방에서 이용된다. 일부 구체예에서, 정맥내 (IV) 투여를 위해 형성된 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체를 포함하는 이런 제약학적 조성물은 혈소판 응집의 신속한 저해를 위해 이용된다. 일부 구체예에서, 정맥내 (IV) 투여를 위해 형성된 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체를 포함하는 이런 제약학적 조성물은 혈소판 응집의 신속한 저해를 위한 경피 관상 개입 절차 (가령, 관상 혈관형성술) 동안 이용된다. 실제로, 항혈소판 요법은 죽상경화혈전증의 예방과 치료의 초석이다. 효현제, 예를 들면, 플라크 파열 및 스텐트로부터 순수한 압력 스트레스에 의한 혈소판 활성화는 죽상경화혈전증의 발달에서 중요한 역할을 한다. 환자가 급성 심혈관 증후군을 겪거나 또는 경피 심혈관 개입을 겪는 일정한 임상적 환경 하에, 혈소판 응집의 급속하고 완전한 저해가 심혈관 사망 및 허혈성 합병증을 예방하기 위해 필요하다. 이런 의학적 시나리오는 짧은 시작 시간을 소유하는 항혈소판 작용제의 정맥내 투여를 필요로 한다. 하지만, 충족되지 않은 의료 수요가 여전히 존재하는데, 그 이유는 현재 이용되는 항혈소판 작용제가 느린 시작 시간을 갖거나 또는 정맥내 투여될 수 없기 때문이다 (가령, Silvain, J., and Montalescot, G., (2012) Circ. Cariovasc. Interv. 5:328-331을 참조한다). 본 발명의 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체는 이러한 충족되지 않은 의료 수요를 실현하는데, 그 이유는 이런 화합물이 경구와 정맥내 둘 모두 투여될 수 있고 짧은 시작 시간을 소유하기 때문이다.
본 발명의 일부 구체예는 효과량의 본 발명의 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체 및 최소한 하나의 추가 치료제 (심혈관 장애를 치료하거나, 개선하거나, 또는 예방하는 것으로 공지된 치료제가 포함되지만 이들에 한정되지 않음), 및/또는 치료적 기술 (가령, 외과적 개입)을 투여하기 위한 방법을 제공한다. 심혈관 장애를 치료하거나, 개선하거나, 또는 예방하는 것으로 공지된 다수의 치료제가 본 발명의 방법에서 이용을 위해 예기된다. 실제로, 본 발명은 심혈관 장애를 치료하거나, 개선하거나, 또는 예방하는 것으로 공지된 다양한 치료제의 투여를 예기하지만, 이에 한정되지 않는다. 실례에는 HMG-CoA 환원효소 저해제 (가령, 아토르바스타틴 (Lipitor), 프라바스타틴 (Pravachol), 심바스타틴 (Zocor), 로수바스타틴 (Crestor), 피타바스타틴 (Livalo), 로바스타틴 (Mevacor, Altocor), 플루바스타틴 (Lescol)), ACE 저해제 (가령, 라미프릴 (Altace), 퀴나프릴 (Accupril), 캡토프릴 (Capoten), 에날라프릴 (Vasotec), 리시노프릴 (Zestril)), 칼슘 통로 차단제 (가령, 암로디핀 (Norvasc), 니페디핀 (Procardia), 베라파밀 (Calan), 펠로디핀 (Plendil), 딜티아젬 (Cardizem)), 혈소판 응집 저해제 (티클로피딘, 클로피도그렐, 그리고 프라수그렐 이외에) (가령, 아브식시맙 (ReoPro), 아스피린, 와파린 (Coumadin), 헤파린), 다중불포화된 지방산 (가령, 오메가-3 다중불포화된 지방산 (어류 오일)), 피브린산 유도체 (가령, 페노피브레이트 (Tricor), 겜피브로질 (Lopid)), 담즙산 격리제 (가령, 콜레스티폴 (Colestid), 콜레스티라민 (Questran)), 항산화제 (가령, 비타민 E), 니코틴산 유도체 (가령, 니아신 (Niaspan), 혈전용해약 (가령, 알테플라제 (Activase)), 그리고 항협심증 작용제 (가령, 라놀라진 (Ranexa))이 포함되지만 이들에 한정되지 않는다.
본 발명의 일부 구체예에서, 본 발명의 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체 및 하나 또는 그 이상의 추가 치료제는 다음 조건 중에서 하나 또는 그 이상 하에 환자에 투여된다: 상이한 주기성에서, 상이한 지속 시간에서, 상이한 농도에서, 상이한 투여 루트에 의해, 기타 등등. 일부 구체예에서, 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체는 추가 치료제에 앞서, 예를 들면, 추가 치료제의 투여에 앞서 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 12, 또는 18 시간, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6 일, 또는 1, 2, 3, 또는 4 주에 투여된다. 일부 구체예에서, 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체는 추가 치료제 후, 예를 들면, 추가 치료제의 투여 후 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 12, 또는 18 시간, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6 일, 또는 1, 2, 3, 또는 4 주에 투여된다. 일부 구체예에서, 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체 화합물 및 추가 치료제는 동시에, 하지만 상이한 일정에서 투여된다, 예를 들면, 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체는 매일 투여되는 반면, 추가 치료제는 주 1회, 2 주마다 1회, 3 주마다 1회, 또는 4 주마다 1회 투여된다. 다른 구체예에서, 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체는 주 1회 투여되는 반면, 추가 치료제는 매일, 주 1회, 2 주마다 1회, 3 주마다 1회, 또는 4 주마다 1회 투여된다.
본 발명의 범위 내에 조성물은 본 발명의 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체가 의도된 목적을 달성하는데 효과적인 양으로 내포되는 모든 조성물을 포함한다. 개별 요구가 변하긴 하지만, 각 성분의 효과량의 최적 범위의 결정은 당해 분야의 기술 범위 안에 있다. 전형적으로, 화합물은 아폽토시스의 유도에 반응성인 장애에 대해 치료되는 포유동물의 체중당 하루에 0.0025 내지 50 mg/kg, 또는 이의 제약학적으로 허용되는 염의 동등한 양의 경구 분량에서 포유동물, 예를 들면, 인간에 투여될 수 있다. 한 구체예에서, 이런 장애를 치료하거나, 개선하거나, 또는 예방하기 위해 약 0.01 내지 약 25 mg/kg이 경구 투여된다. 근육내 주사의 경우에, 분량은 일반적으로 경구 분량의 약 절반이다. 가령, 적합한 근육내 분량은 약 0.0025 내지 약 25 mg/kg, 또는 약 0.01 내지 약 5 mg/kg일 것이다.
단위 경구 분량은 약 0.01 내지 약 1000 mg, 예를 들면, 약 0.1 내지 약 100 mg의 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체를 포함할 수 있다. 단위 분량은 약 0.1 내지 약 10 mg, 편의하게는 약 0.25 내지 50 mg의 화합물 또는 이의 용매화합물을 각각 내포하는 하나 또는 그 이상의 정제 또는 캡슐로서 매일 1회 또는 그 이상 투여될 수 있다.
국소 제제에서, 화합물은 담체의 그램당 약 0.01 내지 100 mg의 농도에서 존재할 수 있다. 한 구체예에서, 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체 화합물은 약 0.07-1.0 mg/ml, 예를 들면, 약 0.1-0.5 mg/ml, 그리고 한 구체예에서, 약 0.4 mg/ml의 농도에서 존재한다.
티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체를 미가공 화학물질로서 투여하는 것에 더하여, 본 발명의 화합물은 제약학적으로 이용될 수 있는 제조물 내로 화합물의 처리를 용이하게 하는 부형제와 보조제를 포함하는 적합한 제약학적으로 허용되는 담체를 내포하는 제약학적 제조물의 일부로서 투여될 수 있다. 제조물, 특히 경구 또는 국소 투여될 수 있고 한 가지 유형의 투여를 위해 이용될 수 있는 제조물, 예를 들면, 정제, 당의정, 느린 방출 로젠지와 캡슐, 구강 린스와 구강 청결제, 겔, 액체 현탁액, 모발 린스, 모발 겔, 샴푸, 그리고 또한, 직장 투여될 수 있는 제조물, 예를 들면, 좌약뿐만 아니라 정맥내 주입, 주사, 국소 또는 경구 투여에 적합한 용액은 부형제와 함께, 약 0.01 내지 99 퍼센트, 한 구체예에서 약 0.25 내지 75 퍼센트의 활성 화합물(들)을 내포한다.
본 발명의 제약학적 조성물은 본 발명의 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체의 유익한 효과를 경험할 수 있는 임의의 환자에 투여될 수 있다. 이런 환자 중에서 포유동물, 예를 들면, 인간이 가장 중요하긴 하지만, 본 발명은 이렇게 한정되는 것으로 의도되지 않는다. 다른 환자는 수의학적 동물 (소, 양, 돼지, 말, 개, 고양이 등)을 포함한다.
화합물 및 이들의 제약학적 조성물은 그들의 의도된 목적을 달성하는 임의의 수단에 의해 투여될 수 있다. 가령, 투여는 비경구, 피하, 정맥내, 근육내, 복막내, 경피, 협측, 척수강내, 두개내, 비내 또는 국소 루트에 의할 수 있다. 대안으로, 또는 동시에, 투여는 경구 루트에 의할 수 있다. 투여된 용량은 수용자의 연령, 건강과 체중, 만약 있으면 동시 치료의 종류, 치료의 빈도, 그리고 원하는 효과의 성격에 의존할 것이다.
본 발명의 제약학적 제조물은 예로서, 전통적인 혼합, 과립화, 당의정-만듦, 용해, 또는 동결건조 과정에 의하여, 그 자체로 공지된 방식으로 제조된다. 따라서, 경구 이용을 위한 제약학적 제조물은 정제 또는 당의정 코어를 획득하기 위해 원하거나 또는 필요한 경우에 적합한 보조제를 첨가한 후, 활성 화합물을 고체 부형제와 합동하고, 임의선택적으로, 결과의 혼합물을 분쇄하고 과립의 혼합물을 처리함으로써 획득될 수 있다.
적합한 부형제는 특히, 충전제, 예를 들면, 사카라이드, 예를 들면, 락토오스 또는 수크로오스, 만니톨 또는 소르비톨, 셀룰로오스 제조물 및/또는 인산칼슘, 예를 들면, 인산삼칼슘 또는 칼슘 수소 인산염뿐만 아니라 결합제, 예를 들면, 예로서, 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분, 젤라틴, 트래거캔스, 메틸 셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 및/또는 폴리비닐 피롤리돈을 이용한 전분 페이스트이다. 원하는 경우에, 붕해제, 예를 들면, 전술한 전분 및 또한, 카르복시메틸-전분, 교차연결 폴리비닐 피롤리돈, 한천, 또는 알긴산 또는 이의 염, 예를 들면, 알긴산나트륨이 첨가될 수 있다. 보조제는 특히, 흐름-조절 작용제와 윤활제, 예를 들면, 실리카, 활석, 스테아르산 또는 이의 염, 예를 들면, 마그네슘 스테아르산염 또는 칼슘 스테아르산염, 및/또는 폴리에틸렌 글리콜이다. 당의정 코어는 적합한 코팅이 제공되는데, 원하는 경우에, 이들 코팅은 위액에 내성이다. 이런 목적으로, 농축된 사카라이드 용액이 이용될 수 있는데, 이들은 임의선택적으로, 아라비아 고무, 활석, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리에틸렌 글리콜 및/또는 티타늄 이산화물, 래커 용액 및 적합한 유기 용매 또는 용매 혼합물을 내포할 수 있다. 위액에 내성인 코팅을 생산하기 위해, 적합한 셀룰로오스 제조물, 예를 들면, 아세틸셀룰로오스 프탈산염 또는 히드록시프로필메틸-셀룰로오스 프탈산염의 용액이 이용된다. 염색제 스터프 또는 색소가 예로서, 확인을 위해 또는 활성 화합물 분량의 조합을 특징짓기 위해 정제 또는 당의정 코팅에 첨가될 수 있다.
경구 이용될 수 있는 다른 제약학적 제조물은 젤라틴으로 만들어진 밀어 맞춤 캡슐뿐만 아니라 젤라틴 및 가소제, 예를 들면, 글리세롤 또는 소르비톨로 만들어진 연한, 밀봉된 캡슐을 포함한다. 밀어 맞춤 캡슐은 충전제, 예를 들면, 락토오스, 결합제, 예를 들면, 전분, 및/또는 윤활제, 예를 들면, 활석 또는 마그네슘 스테아르산염 및 임의선택적으로, 안정제와 혼합될 수 있는 과립의 형태에서 활성 화합물을 내포할 수 있다. 연성 캡슐에서, 활성 화합물은 한 구체예에서, 적합한 액체, 예를 들면, 지방유, 또는 액체 파라핀에서 용해되거나 또는 현탁된다. 이에 더하여, 안정제가 첨가될 수 있다.
직장에 이용될 수 있는 가능한 제약학적 제조물은 예로서, 좌약을 포함하는데, 이들은 활성 화합물 중에서 하나 또는 그 이상 및 좌약 기제의 조합으로 구성된다. 적합한 좌약 기제는 예로서, 자연 또는 합성 트리글리세리드, 또는 파라핀 탄화수소이다. 이에 더하여, 활성 화합물 및 기제의 조합으로 구성되는 젤라틴 직장 캡슐을 이용하는 것이 또한 가능하다. 가능한 기제 물질은 예로서, 액체 트리글리세리드, 폴리에틸렌 글리콜, 또는 파라핀 탄화수소를 포함한다.
비경구 투여에 적합한 제제는 수용성 형태에서 활성 화합물의 수용액, 예를 들면, 수용성 염 및 알칼리 용액을 포함한다. 이에 더하여, 적절한 유성 주사 현탁액으로서 활성 화합물의 현탁액이 투여될 수 있다. 적합한 친유성 용매 또는 운반제는 지방유, 예를 들면, 참기름, 또는 합성 지방산 에스테르, 예를 들면, 에틸 올레산염 또는 트리글리세리드 또는 폴리에틸렌 글리콜-400을 포함한다. 수성 주사 현탁액은 예로서, 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 소르비톨, 및/또는 덱스트란을 비롯하여, 현탁액의 점성을 증가시키는 물질을 내포할 수 있다. 임의선택적으로, 현탁액은 또한, 안정제를 내포할 수 있다.
본 발명의 국소 조성물은 한 구체예에서, 적절한 담체의 선택에 의해 오일, 크림, 로션, 연고 등으로서 조제된다. 적합한 담체는 식물성 또는 무기질 오일, 백색 바셀린 (백색 연한 파라핀), 분지된 사슬 지방 또는 오일, 동물 지방 및 고분자량 알코올 (C12보다 큼)을 포함한다. 담체는 활성 성분이 가용성인 것들일 수 있다. 유화제, 안정제, 보습제와 항산화제뿐만 아니라 원하는 경우에, 칼라 또는 향기를 부여하는 작용제 역시 포함될 수 있다. 추가적으로, 경피 침투 증강제가 이들 국소 제제에서 이용될 수 있다. 이런 증강제의 실례는 U.S. 특허 번호 3,989,816과 4,444,762에서 발견될 수 있다.
연고는 식물성 오일, 예를 들면, 아몬드 오일에서 활성 성분의 용액을 따뜻한 연한 파라핀과 혼합하고 혼합물이 냉각할 수 있도록 함으로써 조제될 수 있다. 이런 연고의 전형적인 실례는 중량으로 약 30% 아몬드 오일 및 약 70% 백색 연한 파라핀을 포함하는 것이다. 로션은 활성 성분을 적합한 고분자량 알코올, 예를 들면, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜에서 용해함으로써 편의하게 제조될 수 있다.
당업자는 전술한 내용이 본 발명의 일정한 바람직한 구체예의 상술된 설명만을 나타낸다는 것을 쉽게 인식할 것이다. 앞서 설명된 조성물과 방법의 다양한 변형과 변경은 당분야에서 가용한 전문지식을 이용하여 쉽게 달성될 수 있고, 그리고 본 발명의 범위 내에 있다.
실시예
다음 실시예는 본 발명의 화합물, 조성물, 그리고 방법을 예시하고, 하지만 이들을 한정하지 않는다. 임상적 요법에서 정상적으로 목격되고 당업자에게 명백한 다양한 조건과 파라미터의 다른 적합한 변형과 적응은 발명의 사상과 범위의 범위 안에 있다.
실시예 I.
본 실시예는 클로피도그렐과 티클로피딘의 혼합된 이황화물 접합체의 합성을 설명한다.
클로피도그렐과 티클로피딘의 혼합된 이황화물 접합체의 합성은 반응식 4에 따라 인간 간 마이크로솜 (HLMs)을 이용하여 50 mM 인산칼륨 완충액에서 수행되었다.
[반응식 4]
Figure pct00172
반응식 4 내에서, RS (또는 -SR)는 다음에서 선택되지만 이들에 한정되지 않는 티올-내포 시약이다:
Figure pct00173
(6-클로로피리다진-3-티올 (CPT)),
Figure pct00174
3-니트로피리딘-2-티올 (NPT)),
Figure pct00175
(2,5-디메틸푸란-3-티올 (DFT)),
Figure pct00176
(L-시스테인 (CYS)),
Figure pct00177
(g-L-글루타밀-L-시스테인 (GC)),
Figure pct00178
(시스테인-글리신 (CG)),
Figure pct00179
(2-메르캅토에탄올 (BME)),
Figure pct00180
(시스테아민 (CYA)),
Figure pct00181
(N-아세틸-L-시스테인 (NAC)), 그리고
Figure pct00182
(글루타티온 (GSH)). 반응식 4 내에서, AM-SR은 본 발명의 혼합된 이황화물 접합체를 나타낸다.
결과는 10가지 RS 화합물 모두 개별 접합체를 형성한다는 것을 보여주었다. 이에 더하여, 반응물질 RS는 탠덤 질량 분광분석법을 이용하여, 혼합된 이황화 결합을 통해 활성 대사산물과 접합체를 형성하는 것으로 확증되었다. 이들 접합체는 역상 크로마토그래피를 이용하여 반응 혼합물로부터 정제되었다.
실시예 II.
본 실시예는 혼합된 이황화물 접합체 화합물로부터 활성 대사산물의 생산을 설명한다.
접합체 Clop-CPT
[
Figure pct00183
(Z)-2-(1-(2-클로로페닐)-2-메톡시-2-옥소에틸)-4-((6-클로로피리다진-3-일)디술파닐)피페리딘-3-일리덴)아세트산] 및 Tic-NPT
[
Figure pct00184
(Z)-2-(1-(2-클로로벤질)-4-((3-니트로피리딘-2-일)디술파닐)피페리딘-3-일리덴)아세트산]이 추가 연구를 위해 선택되었다.
글루타티온의 존재에서 활성 대사산물 (AM)을 생산하는 혼합된 이황화물 접합체 Clop-CPT와 Tic-NPT의 능력이 그 다음 검사되었다. Clop-CPT는 1 mM GSH에 의해 급속히 환원되고 클로피도그렐의 AM의 양에서 증가가 수반되었다. clop-CPT 접합체로부터 클로피도그렐의 AM의 생산에 대한 반감기는 단지 1.8 분이었다. 이것은 tic-NPT 접합체에서도 마찬가지이지만, 반감기가 14.7 분이었다.
실시예 III.
본 실시예는 본 발명의 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체에 의한 혈소판 응집의 저해를 설명한다.
본 발명의 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체가 GSH의 존재에서 혈소판 응집을 저해할 수 있다는 것을 증명하기 위해, 혈소판 응집 검정이 수행되었다. 대략 20 ml 혈액이 토끼로부터 뽑혀졌고, 그리고 혈소판이 원심분리에 의해 수집되고, 반면 상층액이 혈소판 불량한 혈장 (PPP)으로서 수집되었다. 저해 검정에 앞서, Clop-CPT와 Tic-NPT의 접합체는 활성 대사산물을 생산하기 위해 0.5 ml PPP에서 용해되고 37℃에서 30 분 동안 1 mM GSH와 함께 인큐베이션되었다. 혈소판은 이후, 활성 대사산물을 내포하는 PPP에서 부드럽게 재현탁되었다. 37℃에서 1 시간 동안 인큐베이션 후, 혈소판 응집은 5 μM의 효현제 ADP의 첨가에 의해 시작되었다. 혈소판 응집은 이후, 응집측정기를 이용하여 기록되었다.
Clop-CPT와 Tic-NPT의 접합체는 접합체를 내포하지 않는 음성 대조와 비교하여, 1 mM GSH의 존재에서 혈소판 응집을 대략 60% 저해하였다. 이러한 저해 수준은 인간 간 마이크로솜 (HLMs)으로부터 산출된 활성 대사산물을 내포하는 양성 대조와 거의 동일하였다.
실시예 IV.
본 실시예는 실례 5-9에 대한 재료와 방법을 설명한다.
화학물질 . (S)-클로피도그렐, 라세미 2-옥소클로피도그렐, 그리고 시스-클로피도그렐-MP는 Toronto Research Company (Ontario, Canada)로부터 구입되었다. 글루타티온 (GSH), γ-L-글루타밀-L-시스테인 (GC), Cys-Gly (CG), L-시스테인, β-메르캅토에탄올 (BME), N-아세틸-L-시스테인 (NAC), 시스테아민 (CYA) 염산염, 2,5-디메틸푸란-3-티올, 6-클로로피리다진-3-티올, 3-니트로피리딘-2-티올, 그리고 2-브로모-3'-메톡시아세토페논 (MPB)은 Sigma-Aldrich company (St. Louis, MO)로부터 구입되었다. 모아진 HLM과 시토졸은 XenoTech (Lenexa, KS)로부터 구입되었다.
다양한 티올 환원제의 존재에서 HLM에 의한 AM의 형성에 대한 속도에 대한 결정 . 활성 대사산물 (AM)의 형성에 대한 다양한 티올 환원제의 효과를 조사하기 위해, AM이 생산되는 속도가 결정되었다. AM의 생산은 0.2 mg/mL HLM, 0.1 mM 2-옥소클로피도그렐, NADPH-재생 시스템, 그리고 0.3 mM CPT, DFT, 또는 NPT가 이용된 점을 제외하고 1 mM의 각 티올 환원제를 내포하는 0.1 ml의 50 mM 인산칼륨 (KPi) 완충액 (pH 7.4)에서 수행되었다. 반응은 5 단위의 글루코오스-6-인산탈수소효소 (G6PD)의 첨가에 의해 시작되고 37℃에서 20 분 동안 인큐베이션되었다. AM은 이후, 실온에서 10 분 동안 4 mM MPB로 유도체화되고, 그 이후에 3% (v/v)까지 아세트산으로 산성화되었다. 정량을 위해, 50 pmole의 (S)-클로피도그렐이 내부 표준 (IS)으로서 각 반응 혼합물 내로 첨가되었다. 유도체화된 AM (AM-MP)은 LC-MS/MS를 이용하여 정량되었다.
반응 혼합물의 MS 분석은 기존에 (Zhang et al., 2012) 보고된 바와 같이 이온 트랩 질량분광계 (LCQ DecaXP, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA)에서 수행되었다. 간단히 말하면, 2-옥소클로피도그렐의 대사산물은 0.2 ml/분의 유속에서 이진수 이동상을 이용하여 역상 C18 칼럼 (2x100 mm, 3 μm, Phenemonex, CA)에서 분리되었다. C18 칼럼의 온도는 칼럼 가열기 (Restek Corporation, Lancaster, PA)를 이용하여 40℃에서 유지되었다. 질량분광계는 다음 세팅을 갖는 양성 전기분무 이온화 방식에서 작동되었다: 가열된 모세관 온도, 200℃; 분무 전압, +4.5 kV; 시스 가스 흐름, 60 (임의 단위); 보조 가스, 20 (임의 단위). AM-MP와 IS는 35% 에너지 수준에서 충돌-유도된 해리 (CID)를 통해 MS에서 단편화되었다. AM-MP의 경우에 m/z 504 → m/z 354 및 IS의 경우에 m/z 322 → m/z 212 전이가 다양한 농도의 시스-클로피도그렐-MP로 구성되는 교정 곡선에 기초하여 AM-MP의 양을 정량하는데 이용되었다.
LC-MS/MS를 이용하여 클로피도그렐의 혼합된 이황화물 접합체의 분석 . 혼합된 이황화물 접합체는 구조적 분석 및 반정량적 분석 둘 모두를 위해 HLM에 의해 생산되었다. 2-옥소클로피도그렐의 물질대사는 HLM의 농도가 1 mg/ml까지 증가된 점을 제외하고 앞서 설명된 바와 같이 0.2 ml의 50 mM KP 완충액 (pH 7.4)에서 수행되었다. 반응은 37℃에서 30 분 동안 인큐베이션되고, 그리고 이후, 0.1 ml의 아세토니트릴에서 10% 아세트산의 첨가에 의해 급냉되었다. 급냉된 표본은 HLM을 제거하기 위해 13,000 x에서 10 분 동안 원심분리되었다. 상층액의 50 μl의 분취량은 활성 대사산물과 접합체 대사산물 둘 모두를 분석하기 위해 질량분광계 위에 적하되었다.
MS 분석은 MS 검출기가 의존성 스캔 양식에서 작동된 점을 제외하고 앞서 설명된 바와 같이 수행되었다. 전구체 이온은 m/z 300-700에서 스캔되었고, 반면 MS2 스펙트럼은 4가지 가장 풍부한 이온에 대해 m/z 100 내지 700에서 획득되었다. 반정량적 분석을 위해, 50 pmole의 IS가 급냉되었던 각 표본 내로 스파이크되었다. AM 및 개별 접합체의 상대적 양은 IS의 AUC 비율에 대한 대사산물의 AUC 비율로서 계산되었다.
혼합된 이황화물 접합체의 AM으로의 전환에 대한 동역학의 결정 . 혼합된 이황화물 접합체의 반응성을 조사하기 위해, GSH에 의한 혼합된 이황화물 접합체의 환원에 대한 동역학이 결정되었다. 혼합된 이황화물 접합체는 1 mg/ml HLM, 0.1 mM 2-옥소클로피도그렐 및 0.3 또는 1 mM 티올 환원제를 내포하는 1 ml의 50 mM KPi 완충액 (pH 7.4) 완충액에서 산출되었다. 반응은 G6PD의 첨가에 의해 시작된 후, 37℃에서 50 분 동안 인큐베이션되었다. 반응 혼합물은 이후, HLM을 제거하기 위해 13,000 x에서 원심분리되고, 그리고 상층액은 전처리된 SPE 카트리지 (C18, 100 mg/1ml, Agilent Technologies, CA)에 적하되고, 그리고 혼합된 이황화물 접합체는 2 ml의 메탄올로 용리되었다. 용리액은 이후, Speedvac 농축기를 이용하여 건조되고, 그리고 건조된 표본은 이용 때까지 -80℃에서 보관되었다. 운동성 계측에 앞서, 건조된 표본은 먼저, 0.5 ml의 50 mM KPi 완충액 (pH 7.4)에서 재용해되고 그리고 이후, 37℃에서 5 분 동안 평형화되었다. 스톡 GSH와 시토졸 (존재할 때) 용액의 적은 분취량 (1-5 μl)이 티올-이황화물 교환 반응을 개시하기 위해, 각각 1 mM과 0.2 mg/ml에서 접합체 표본에 첨가되었다. 지정된 시점에서, 반응 혼합물의 50 μl의 분취량이 꺼내지고, 그리고 티올-이황화물 교환 반응을 종결하기 위해 25 μl의 아세토니트릴에서 10% 아세트산과 혼합되었다. t=0 표본이 GSH의 첨가 직전에 제조되었다. 혼합된 이황화물 접합체 및 AM의 양은 앞서 설명된 바와 같이 LC-MS/MS를 이용하여 분석되었다.
클로피도그렐의 혼합된 이황화물 접합체로부터 활성 대사산물 H4의 형성 . AM의 항혈소판 활성이 이의 입체화학에 밀접하게 관련되기 때문에, CPT, DFT 또는 NPT의 존재에서 형성된 혼합된 이황화물 접합체의 입체화학이 그들의 상대적으로 높은 산화환원 전위 때문에 조사되었다. AM의 입체이성질체에 대한 진정한 표준의 결여로 인해, GSH와의 혼합된 이황화물 접합체는 먼저, AM을 방출하도록 처리되고, 그리고 이후, AM-MP 유도체를 시스-클로피도그렐-MP 표준과 비교하기 위해 AM을 MPB로 유도체화시켰다. GSH와의 접합체의 제조와 환원은 앞서 설명된 바와 같이 수행되었다. 37℃에서 20 분 동안 1 mM GSH와 함께 인큐베이션 후, AM을 알킬화하기 위해 MPB가 4 mM에서 첨가되었다. 알킬화 반응은 절반 부피의 아세토니트릴에서 10% 아세트산의 첨가에 의해 10 분 내에 종결되었다. 반응 혼합물의 50 μl의 분취량은 AM의 정량에 대해 설명된 바와 같이 LC-MS/MS 분석에 종속되었다.
클로피도그렐의 혼합된 이황화물 접합체의 항혈소판 활성. 혼합된 이황화물 접합체의 충분한 양을 산출하기 위해, 2-옥소클로피도그렐의 물질대사가 1 mg/ml HLM, 0.1 mM 2-옥소클로피도그렐, NADPH-재생 시스템, 그리고 0.3 mM CPT 또는 NPT 또는 1 mM GSH를 내포하는 2-ml 반응 혼합물에서 수행되었다. 반응은 10 단위 G6PD의 첨가에 의해 시작되고 37℃에서 50 분 동안 인큐베이션되었다. 2가지 대조 표본이 병렬적으로 제조되었다. 한 대조 표본은 G6PD를 전혀 내포하지 않았는데 (-G6PD), 이것은 2-옥소클로피도그렐 및 HLM 내에 존재하는 다른 성분이 항혈소판 활성에 기여하는 지를 조사하도록 설계되었다. 다른 대조 (-SH)는 티올 환원제를 전혀 내포하지 않았는데, 이것은 AM 및 접합체 이외에 임의의 대사산물이 항혈소판 활성 검정을 간섭하는 지를 조사하는 것으로 의도되었다. 50 분의 인큐베이션 후, 반응 혼합물은 HLM을 제거하기 위해 13,000 xg에서 원심분리되었다. 상층액은 혼합된 이황화물 접합체를 농축하기 위해 SPE C18 카트리지 위에 적하되었다. 염 및 다른 수용성 대사산물을 제거하기 위해 물로 광범위한 세척 후, 접합체 표본은 2 ml의 메탄올로 용리되었다. 메탄올 분획물은 Speedvac 농축기를 이용하여 건조되고, 그리고 건조된 표본은 이후, 1 ml의 혈소판-불량한 혈장 (PPP)에서 재현탁되었다. 항혈소판 활성 검정에 앞서, 재현탁된 접합체는 2개의 동등한 부피 (각 0.5 ml)로 나누어지고, 이들 중에서 한 가지는 AM을 산출하기 위해 37℃에서 30 분 동안 1 mM GSH로 처리되었다. 양쪽 표본은 이후, 이용 때까지 얼음 위에서 배치되었다.
탈체 항혈소판 활성을 결정하는데 이용된 절차는 이전에 보고되었다 (가령, Abell LM and Liu EC (2011) J Pharm Exp Ther 339(2):589-596을 참조한다).
수컷 뉴질랜드 백색 토끼 (2.2-2.9 kg)가 공혈자로서 이용되었다. 전혈은 중심 귀 동맥으로부터, 항응고제로서 3.7% 구연산나트륨을 내포하는 플라스틱 주사기 내로 뽑혀졌다 (구연산염 대 혈액의 1:10 부피 비율). 전혈 세포 계산은 Medonic CA620 혈액학 분석기 (Clinical Diagnostic Solutions, Inc., Plantation, FL, USA)로 결정되었다. 100 x g에서 10 분 동안 전혈의 원심분리 후 존재하는 상층액인 혈소판-풍부한 혈장 (PRP)은 대략 300,000/μl의 혈소판 수치를 달성하기 위해 PPP로 희석되었다. 혈소판-불량한 혈장은 나머지 혈액을 1,500 x g에서 10 분 동안 원심분리하고 아래쪽 세포 층을 폐기함으로써 준비되었다. 희석된 PRP는 0.5 ml 표본으로 나누어지고, 170 x g에서 10 분 동안 다시 한 번 원심분리되고, 그리고 결과의 상층액은 폐기되었다. 혈소판 펠릿은 앞서 설명된 바와 같이 제조된 다양한 화학적 저해제를 내포하는 혈소판-불량한 혈장에서 재현탁되고, 그리고 P2Y12 수용체를 변경하기 위해 37℃에서 60 분 동안 온건하게 진탕하면서 인큐베이션되었다. 탈체 혈소판 응집은 37℃에서 유지된 PRP의 교반된 현탁액을 통한 광투과에서 증가를 기록함으로써, 4-통로 응집측정기 (BioData PAP-4; BioData Corp., Horsham, PA, USA)의 이용으로, 확립된 혼탁 방법에 의해 사정되었다. 혈소판 응집은 ADP (10 μM)로 유도되었다. 에피네프린 (550 nM)의 응집하 농도가 효현제의 첨가에 앞서 혈소판을 기폭하는데 이용되었다.
실시예 V.
본 실시예는 클로피도그렐의 활성 대사산물 (AM)의 형성에 대한 티올 환원제의 효과를 설명한다. 티올 환원제의 효과를 조사하기 위해, 다양한 티올 환원제의 존재에서 AM의 형성에 대한 항정 상태 속도가 결정되었다. 물질대사 반응물 내에 존재하는 티올 환원제의 농도는 CPT, DPT와 NPT를 제외하고 1 mM이었다. 대신에, 이들 3가지 티올 환원제의 농도는 그들의 낮은 Km 값 때문에 0.3 mM이었다. 도면 1에 나타나 있는 바와 같이, AM은 3가지를 제외한 모든 티올 환원제의 존재에서 형성된다. AM의 형성에 대한 가장 높은 속도는 인체에서 내인성 환원제인 GSH의 존재에서 관찰되었다. 구체적으로, 1 mM GSH의 존재에서, AM은 167 pmole AM/분/mg HLM의 속도에서 생산된다. 유사하게, L-시스테인은 AM을 생산하는데 있어서 GSH의 활성의 ~84%이다. 기존에 (가령, Zhang H, et al., (2012) Mol Pharmacol 82:302-309를 참조한다) 관찰된 바와 같이, 1 mM NAC의 존재에서 단지 낮은 수준의 AM만 형성되었다. 속도는 1 mM GSH의 존재에서 관찰된 것의 단지 ~7%이다. CPT, DFT, 그리고 NPT의 존재에서 AM은 전혀 관찰되지 않았다. 전반적으로, AM의 형성에 대한 속도는 GSH > CYS > CG > GC > CYA > BME > NAC >CPT 또는 DFT 또는 NPT의 순서로 감소한다. 이러한 넓은 범위의 속도는 AM의 형성에서 티올 환원제의 결정적인 역할을 강조한다.
실시예 VI.
본 실시예는 클로피도그렐의 혼합된 이황화물 접합체의 분석을 설명한다. AM의 형성은 존재하는 티올 환원제에 의해 크게 영향을 받았다. 이러한 실험에서, 혼합된 이황화물 접합체의 형성에 대한 티올 환원제의 효과가 조사되었다. 이것은 CPT, DFT, 그리고 NPT의 존재에서 형성된 임의의 AM 의 결여에 대한 원인을 이해하기 위해 특히 중요하다. AM에 대해 관찰된 것과 현저히 대조적으로, 혼합된 이황화물 접합체는 조사된 모든 티올 환원제의 존재에서 형성되었다. 부모 이온 MH+에 대한 m/z 및 이들 혼합된 이황화물 접합체의 체류 시간은 표 1에서 요약되고, 그리고 4가지 선별된 혼합된 이황화물 접합체의 도출된 이온 크로마토그램 (EICs)은 도면 2에서 제공된다. 관찰된 부모 이온 MH+는 이들 접합체에 대한 이론적 값과 훌륭하게 일치한다. β-메르캅토에탄올 (BME)의 존재에서, 4개의 접합체 피크가 8.9 내지 9.72 분에서 용리하는 m/z 432에서 관찰되었다 (도면 2A). 이들 4개의 AM 피크는 아마도, 기존에 (가령, Pereillo JM, et al. (2002) Drug Metab Dispos 30(11):1288-1295를 참조한다) 보고된 바와 같이 클로피도그렐의 복수의 입체이성질체의 형성에 기인한다. 2개의 주요 접합체 피크가 CPT와 NPT의 존재에서 관찰되었다 (각각, 도면 2C와 4D). 하지만, DFT의 존재에서, m/z 482를 갖는 하나의 우세한 접합체 피크가 15.8 분에서 관찰되었다 (도면 2B). CPT, NPT와 DFT 접합체의 형성에 대한 Km 값은 각각, 23, 51과 30 μM인 것으로 결정되었는데, 이것은 기존에 (가령, Zhang H, et al., (2012) Mol Pharmacol 82:302-309를 참조한다) 보고된 GSH에 대한 300 μM의 Km보다 훨씬 낮다.
LC-MS 분석에서 클로피도그렐의 혼합된 이황화물 접합체에 대해 관찰된 부모 이온 (MH+) 및 체류 시간 (RT).
티올 화합물 약어 MH +
(m/z) 		RT a
(분) 		MH + 이론치 b
(m/z)
글루타티온 GSH 661.05 5.47 661.02
L-시스테인 CYS 475.05c 5.60c 475.06
L-시스테인-L-글리신 CG 532.09 5.44 532.10
γ-L-글루타밀-L-시스테인 GC 604.09 5.71 604.12
시스테아민 CYA 431.05 6.33 431.09
β-메르캅토에탄올 BME 432.06 9.65 432.07
N-아세틸-L-시스테인 NAC 517.11 6.85 517.09
6-클로로피리다진-3-티올 CPT 499.99 11.97 500.03
2,5-디메틸푸란-3-티올 DFT 482.08 15.80 482.09
3-니트로피리딘-2-티올 NPT 510.08 12.82 510.06
a, 가장 강한 피크에 대한 체류 시간; b, 분자 화학식으로부터 계산된 정확한 질량; c, Zhang H, et al., (2012) Mol Pharmacol 82:302-309로부터 데이터.
이들 접합체의 각 EIC에 대한 곡선 아래 면적 (AUC)의 통합은 생산된 혼합된 이황화물 접합체의 상대적 양을 제공하였다. 도면 3에 나타나 있는 바와 같이, 혼합된 이황화물 접합체의 상대적 양은 서로로부터 실제적으로 변하였다. 단지 낮은 수준의 글루타티오닐 접합체만 형성되었는데, 이것은 GSH의 존재에서 2-옥소클로피도그렐의 물질대사가 AM의 형성을 크게 선호한다는 것을 지시한다. 비록 AM 및 혼합된 이황화물 접합체 둘 모두 BME의 존재에서 형성되긴 했지만, 접합체의 형성이 AM보다 선호된다는 것은 명확하다. AM의 형성의 결여에도 불구하고, CPT, DFT와 NPT의 혼합된 이황화물 접합체가 유의미한 양으로 형성되었다. 이들 접합체의 진정한 표준의 결여로 인해, 이것은 이들 접합체의 절대량을 정량할 수 없었다. AUC 비율에 기초된 접합체의 절대량을 비교하는데 있어서 주의가 발휘되어야 하는데, 그 이유는 이들 접합체가 MS 검출기에 상이하게 응답할 수 있기 때문이다.
이들 접합체의 화학적 구조를 결정하기 위해, MS와 MS2 스펙트럼이 획득되었다. 10가지 접합체 모두의 MS 스펙트럼은 클로피도그렐에서 1개의 Cl 원자의 존재의 특징을 이루는 한 쌍의 35Cl/37Cl 동위원소 피크와 함께, 표 1에서 요약된 바와 같이 예상된 m/z 비율에서 주요 MH+ 피크를 보여주었다. 이것에 유일한 예외는 2개의 염소 원자를 내포하는 CPT 접합체이다. 이의 MS와 MS2 스펙트럼은 도면 4에서 도시된다. 이러한 접합체는 m/z 499.99에서 관찰되었는데, 이것은 500.03의 예상된 m/z 값의 80 ppm의 실험적 오차 범위 안에 있다. 이에 더하여, 강한 동위원소 피크가 또한, 기본 피크의 강도의 ~ 75%로 501.94에서 관찰되었는데, 이것은 이러한 접합체 내에 2개 염소 원자의 존재를 지시한다. m/z 499.99에서 부모 이온의 MS2는 복수의 딸 이온의 형성을 보여주었다. 우세한 딸 이온은 m/z 353.99에서 관찰되었고 다른 중요하지 않은 딸 이온은 m/z 465.90, 211.93과 183.34에서 관찰되었다. 이러한 단편화 패턴은 35Cl/37Cl 동위원소 피크의 존재에 더하여, 도면 4D에서 도시된 혼합된 이황화 결합을 소유하는 접합체의 화학적 구조와 일치한다. 우세한 딸 이온 m/z 353.99는 GSH, NAC와 L-시스테인의 클로피도그렐과의 접합체에 대해 이전에 (가령, Zhang H, et al., (2012) Mol Pharmacol 82:302-309를 참조한다) 보고된 바와 같이, 혼합된 이황화 결합에서 개열된 더욱 큰 단편에 배정된다. m/z 212와 183에서 딸 이온 역시 클로피도그렐의 특징을 이룬다 (가령, Dansette PM, et al., (2010) Chem Res Toxicol 23(7):1268-1274; Pereillo JM, et al., (2002) Drug Metab Dispos 30(11):1288-1295). m/z 501.94에서 동위원소 피크의 MS2 스펙트럼은 이러한 배정에 대한 추가 증거를 제공한다. 도면 4C에 나타나 있는 바와 같이, 단일 이온 대신에 한 쌍의 딸 이온이 두 질량 단위 떨어져 관찰되었는데, 이것은 2개 염소 원자의 존재를 뒷받침한다. 이들 접합체 중에서 나머지에 대한 MS2 스펙트럼은 m/z 354에서 특징적인 딸 이온과 매우 유사한 단편화 패턴을 전시하였다.
실시예 VII.
본 실시예는 GSH에 의한 클로피도그렐의 혼합된 이황화물 접합체의 환원에 대한 동역학을 설명한다. 다양한 혼합된 이황화물 접합체 및 GSH 사이에 티올-이황화물 교환 반응에 대한 동역학이 결정되었고, 그리고 결과는 도면 5에서 도시된다. GSH와 시토졸과 함께 접합체의 인큐베이션은 혼합된 이황화물 접합체의 양에서 시간-의존성 감소를 야기하였다 (도면 5A). 운동성 데이터를 단일-지수 함수에 적합하는 것은 BME, CPT, NAC, DFT와 NPT의 혼합된 이황화물 접합체 각각의 손실에 대한 0.07, 0.79, 0.43, 1.65와 0.13 분-1의 일차 속도 상수를 제공하였다. 이들 동역학이 가성 일차 조건 하에 과잉의 GSH (1 mM)로 결정되었기 때문에, 이들 속도 상수는 각각, 1.2, 13, 7.2, 28과 2.2 M-1s-1의 이차 속도 상수에 동등하다. 데이터는 또한, GSH를 향한 이들 접합체의 가변적 반응성을 증명하였다. DFT와 CPT 접합체는 각각, BME 접합체보다 10 내지 20-배 더 반응성이다. 가령, BME 접합체 중에서 ~50%가 40 분의 인큐베이션 이후에도 여전히 남아있는 것으로 보이는데, 이것은 예로서, 이러한 접합체에 대한 티올-이황화물 교환이 평형에 도달하였다는 것을 지시한다.
시토졸의 효과를 조사하고 접합체와 AM을 동시에 모니터링하기 위해, AM의 형성 및 시토졸의 존재와 부재에서 CPT 접합체의 환원 둘 모두에 대한 동역학이 결정되었다. 도면 5B에 나타나 있는 바와 같이, CPT 접합체의 양에서 감소는 거의 동일한 속도 상수에서 AM의 양에서 수반성 증가와 함께 일어났다. 시토졸의 존재에서, 접합체의 환원 및 AM의 형성에 대한 속도 상수는 각각, 0.73과 0.50 분-1 이다. 시토졸의 부재에서, CPT 접합체의 환원은 대략 절반 속도인데, 속도 상수가 접합체의 환원의 경우에 0.39 분-1 및 AM의 형성의 경우에 0.35 분-1이다. 이것은 시토졸이 이전에 관찰된 바와 같이 티올-이황화물 교환 반응의 감소를 가속화한다는 것을 지시한다 (가령, Hagihara K, et al., (2012) Drug Metab Dispos 40(9):1854-1859; Hagihara K, et al., (2011) Drug Metab Dispos 39(2):208-214를 참조한다).
실시예 VIII.
본 실시예는 클로피도그렐의 혼합된 이황화물 접합체로부터 활성 대사산물 H4의 형성을 설명한다. 반응식 2에 나타나 있는 바와 같이, 활성 대사산물은 2개의 키랄 중심 (C7과 C4) 및 1개의 이중 결합 (C3-C16)을 내포한다. 이런 이유로, 라세미 2-옥소클로피도그렐의 물질대사는 최대 8개 입체이성질체를 잠재적으로 생산할 수 있었다. 하지만, 역사적으로 H1, H2, H3과 H4로서 지칭된, 이들 부분입체이성질체 중에서 단지 4가지만 전통적인 역상 C18 칼럼에서 분리될 수 있고, 반면 다른 4가지 입체이성질체는 거울상이성질체로서 공동용리한다. H4는 인간에서 항혈소판 활성을 책임지고, 그리고 H4의 이중 결합은 시스 형상에 있는 것으로 확립되었다 (가령, Pereillo JM, et al., (2002) Drug Metab Dispos 30(11):1288-1295; Savi P, et al., (2000) Thromb Haemost 84(5):891-896; Tuffal G, et al., (2011) Thromb Haemost 105(4):696-705를 참조한다). 이들 접합체의 치료적 잠재력를 평가하기 위해, H4가 혼합된 이황화물 접합체에서 형성되는 지가 조사되었고, 그리고 결과는 도면 6에서 제공되었다.
GSH의 존재에서 HLM에 의한 2-옥소클로피도그렐의 물질대사는 8 내지 11 분 사이에 용리하는 4가지 입체이성질체의 형성을 야기하였다 (파선, 도면 6B). 역상 C18 칼럼에서 AM-MP 유도체의 용리의 순서에 기초하여 (가령, Tuffal G, et al., (2011) Thromb Haemost 105(4):696-705를 참조한다), 10.2 분에서 용리하는 이성질체는 H4의 시스 이성질체일 확률이 크다. 이것은 도면 6A에서 도시된 시스-클로피도그렐-MP 표준의 체류 시간과 일치한다 (실선). 유사하게, DFT 접합체의 MP 유도체는 또한, GSH의 존재에서 관찰된 것들과 유사한 4개의 피크를 전시하였는데, 이것은 DFT 접합체가 티올-교환 반응 이후에 AM의 시스 이성질체를 생산한다는 것을 지시한다. 대조적으로, CPT와 NPT 접합체의 MP 유도체는 9.4와 10.2 분에서 2개의 주요 피크를 보여주었는데, 이것은 활성 이성질체 H4의 선별적인 형성과 일치한다 (도면 6C & D).
실시예 IX.
본 실시예는 CPT와 NPT의 혼합된 이황화물 접합체의 항혈소판 활성을 설명한다. 개념 증거로서, 혼합된 이황화물 접합체 중에서 2가지, CPT와 NPT 접합체의 항혈소판 활성이 여러 이유로 조사되었다. 첫 번째, 양쪽 접합체는 임의의 AM의 형성 없이 산출될 수 있는데, 이것은 항혈소판 활성 검정 동안 AM로부터 임의의 간섭을 제거한다. 두 번째, 양쪽 접합체는 상대적으로 빠른 속도에서 GSH로 티올을 교환하고, 이것은 AM의 잠재력 붕괴를 방지한다. 세 번째, 이들 두 접합체의 환원은 인간에서 항혈소판 활성을 책임지는 것으로 알려져 있는 H4 이성질체를 생산한다. 탈체 항혈소판 활성 검정에 대한 결과는 도면 7에서 도시된다. 응집의 백분율은 환경적 인자, 예를 들면, 혈액 공급원, PRP 제조물 등으로 인한 임의의 편차를 보상하기 위해 PRP의 것에 대해 정규화되었다. 나타나 있는 바와 같이, 3가지 대조 표본은 혈소판 응집의 저해 없음을 보여주었다. 첫 번째 대조는 유리 GSH가 1 mM 농도에서 혈소판 응집에 대한 효과가 없다는 것을 보여주었고 (GSH, 도면 7), 그리고 두 번째 대조는 반응 혼합물 내에 존재하는 비-대사산물 성분, 예를 들면, 2-옥소클로피도그렐 및 관련된 불순물이 혈소판 응집을 저해하지 않는다는 것을 보여주었다 (-G6PD, 도면 7). 클로피도그렐은 비효소적 산화작용에 의해 부산물로 분해될 수 있는 것으로 알려져 있다 (가령, Mohan A, et al., (2008) J Pharm Biomed Anal 47(1):183-189; Fayed AS, et al., (2009) J Pharm Biomed Anal 49(2):193-200을 참조한다). 이들 부산물은 혈소판 응집에 대한 저해 효과를 갖는 것으로 보이지 않는다. 세 번째 대조에서, 임의의 티올 환원제의 부재에서 반응 혼합물로부터 대사산물은 혈소판 응집에 대한 효과를 갖지 않는 것으로 증명되었다. 하지만, GSH를 내포하는 반응 혼합물로부터 제조된 표본 내에 혈소판 응집의 ~60% 저해가 관찰되었다 (AM, 도면 7). 이것은 예상된 것인데, 그 이유는 1 mM GSH의 존재에서 2-옥소클로피도그렐의 물질대사가 도면 1에 나타나 있는 바와 같이 AM을 산출하기 때문이다. CPT와 NPT 접합체와 함께 PRP의 인큐베이션은 혈소판 응집을 저해하지 않았는데, 이것은 이들 접합체 자체는 항혈소판 활성을 갖지 않는다는 것을 지시한다 (CPT & NPT, 도면 7). 현저히 대조적으로, 1 mM GSH로 처리된 CPT와 NPT 접합체와 함께 PRP의 인큐베이션은 혈소판 응집을 각각, 유의미하게 ~50와 70% 저해하였다. 이러한 저해 활성은 아마도, GSH에 의해 접합체로부터 방출된 AM으로부터 발생한다. 이들 결과는 클로피도그렐의 접합체가 항혈소판 활성을 갖지 않는다는 것을 증명하고, 그리고 또한, AM이 혈소판 응집의 저해를 오로지 책임진다는 것을 확증하였다. 게다가, 이들은 다형성 P450에 의한 생활성화에 대한 필요 없이 AM을 전달하는 것이 가능하다는 것을 증명한다. GSH, CPT+GSH, 그리고 NPT+GSH 표본에서 관찰된 응집의 백분율에서 편차가 아마도, AM의 농도에서 변이에 기인한다는 것을 지적하는 것은 주목할 만하다. 이들 표본에서 AM의 농도는 1-4 μM의 범위에 있는 것으로 추정되었다.
실시예 X.
본 실시예는 클로피도그렐의 혼합된 이황화물 접합체의 생체내 항혈소판 활성을 설명한다. 클로피도그렐의 혼합된 이황화물 접합체의 항혈소판 활성은 정맥내 주사를 통해 수컷 뉴질랜드 (NZ) 백색 토끼에서 결정되었다. 혼합된 이황화물 접합체는 다음 기술을 이용하여 생합성되었다.
부분 I. 클로피도그렐의 혼합된 이황화물 접합체의 생합성
클로피도그렐의 혼합된 이황화물 접합체는 재조합 시토크롬 P450 2C19 (CYP2C19) 및 다른 필수적인 성분을 내포하는 재구성된 시스템에서 합성되었다. CYP2C19는 재구성된 시스템에서 개별 티올 화합물의 존재에서, 2-옥소클로피도그렐을 혼합된 이황화물 접합체로 전환시켰다. 반응식 5는 클로피도그렐 및 clopNPT로서 지칭된 3-니트로피리딘-2-티올 사이에 혼합된 이황화물 접합체의 생합성을 예증한다.
[반응식 5]
클로피도그렐 clopNPT의 혼합된 이황화물 접합체의 생합성.
Figure pct00185
전형적인 반응에서, 50 nmole의 CYP2C19, 150 nmole의 P450 환원효소 및 250 nmole의 시토크롬 b5는 인지질 소포에서 재구성되어 활성 단백질 복합체를 형성하였다. 2-옥소클로피도그렐 및 3-니트로피린-2-티올이 각각, 0.05와 0.3 mM의 최종 농도에서 첨가되었다. clopNPT의 생합성은 1 mM NADPH의 첨가에 의해 시작되었다. 반응은 37℃에서 2 시간 동안 인큐베이션되었다.
clopNPT를 정화하기 위해, clopNPT를 내포하는 반응 혼합물은 먼저, 10 kDa의 컷오프를 갖는 막을 통해 여과되어 모든 단백질 성분이 제거되었다. clopNPT를 내포하는 여과액은 이후, 고체상 추출 (SPE) 카트리지에서 농축되었다. ClopNPT는 80% 메탄올/20% 물로 SPE 카트리지로부터 용리되었다. 용리액은 진공 하에 50℃에서 ~ 5ml까지 농축되었다. 농축된 혼합물은 예비 역상 C18 칼럼 위에 적하되고, 그리고 ClopNPT는 높은 압력 액체 크로마토그래피 (HPLC)를 이용하여 정제되었다. ClopNPT는 42% 메탄올/35% 아세토니트릴/22.9% 물/0.1% 포름산으로 구성되는 등용매 이동상으로 3 ml/분의 유속에서 예비 C18 칼럼으로부터 용리되었다. clopNPT를 내포하는 HPLC 분획물은 모아지고 진공 하에 건조되었다. 최종 수율은 ~25%이었다. 액체 크로마토그래피-탠덤 질량 분광분석법 (LC-MS/MS)으로 추정된 clopNPT의 순도는 도면 8에 나타나 있는 바와 같이 > 90%이었다.
부분 II. 클로피도그렐의 혼합된 이황화물 접합체의 항혈소판 활성
클로피도그렐의 혼합된 이황화물 접합체의 항혈소판 활성은 수컷 NZ 백색 토끼 (1.2-1.25 kg)를 이용하여 결정되었다.
정맥내 용액을 제조하기 위해, (S)-clopNPT는 5, 15와 80 (v/v) 비율에서 N,N-디메틸아세트아미드 (DMA), 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 400, 그리고 식염수의 혼합물에서 0.7 mg/ml에서 용해되었다. 수컷 NZ 백색 토끼는 2가지 상이한 방법을 이용하여 2 mg/kg의 (S)-clopNPT에서 투약되었다. 방법 1에서, 정맥내 용액은 먼저, 5 mM 글루타티온과 혼합되었다. (S)-clopNPT를 활성화시키기 위한 37℃에서 15 분의 인큐베이션 후, 혼합물은 경정맥을 거쳐 토끼에 정맥내 주사되었다. 방법 2에서, 수컷 NZ 백색 토끼는 세포 글루타티온 농도를 증가시키기 위해 3 일 동안 하루 1회 5 ml의 레아디솔브 글루타티온 용액으로 사양되었다. 세 번째 일자에, DMA/PEG400/식염수에서 용해된 (S)-clopNPT가 레아디솔브-처리된 토끼에 정맥내 주사되었다. 음성 대조로서, (S)-클로피도그렐 역시 2 mg/kg에서 수컷 NZ 백색 토끼에 정맥내 투약되었다. (S)-clopNPT 투약에 앞서 및 투약 후 1과 2 시간에, 전혈이 경동맥으로부터, 항응고제로서 3.7% 구연산나트륨을 내포하는 플라스틱 주사기 내로 뽑혀졌다 (구연산염 대 혈액의 1:10 부피 비율). 전혈 세포 계산은 Medonic CA620 혈액학 분석기 (Clinical Diagnostic Solutions, Inc., Plantation, FL, USA)로 결정되었다. 100 x g에서 10 분 동안 전혈의 원심분리 후 존재하는 상층액인 혈소판-풍부한 혈장 (PRP)은 대략 300,000/μl의 혈소판 수치를 달성하기 위해 혈소판-불량한 혈장 (PPP)으로 희석되었다. 혈소판-불량한 혈장은 나머지 혈액을 1,500 x g에서 10 분 동안 원심분리하고 아래쪽 세포 층을 폐기함으로써 준비되었다. 희석된 PRP는 0.5 ml 표본으로 나누어지고, 170 x g에서 10 분 동안 다시 한 번 원심분리되고, 그리고 결과의 상층액은 폐기되었다. 혈소판 응집은 37℃에서 유지된 PRP의 교반된 현탁액을 통한 광투과에서 증가를 기록함으로써, 4-통로 응집측정기 (BioData PAP-4; BioData Corp., Horsham, PA, USA)의 이용으로, 확립된 혼탁 방법에 의해 사정되었다. 혈소판 응집은 ADP (10 μM)로 유도되었다. 에피네프린 (550 nM)의 응집하 농도가 효현제의 첨가에 앞서 혈소판을 기폭하는데 이용되었다.
결과는 도면 9에서 제공된다. 나타나 있는 바와 같이, (S)-클로피도그렐은 2 mg/kg의 분량에서 혈소판 응집을 저해하지 않았다. 하지만, (S)-clopNPT는 혈소판 응집을 강하게 저해하였는데, 그 이유는 50% 보다 많은 혈소판 응집이 (S)-clopNPT가 글루타티온 또는 레아디솔브 글루타티온으로 투약되는 지에 상관없이, (S)-clopNPT에 의해 저해되었기 때문이다. 이들 결과는 (S)-clopNPT 접합체가 외래 글루타티온 또는 내인성 글루타티온에 의해 활성화될 수 있다는 것을 증명하였다. 내인성 글루타티온이 (S)-clopNPT를 활성화시키는데 더욱 효과적이라는 것은 분명한데, 그 이유는 레아디솔브-처리된 토끼의 혈소판 활성이 IV 주사의 1 시간 이내에 ~70% 저해되었기 때문이다. 다양한 연구는 심장병과 뇌졸중, 항산화성 스트레스, 노화 등에서 글루타티온의 유익한 효과를 보여주었다. 글루타티온 및 클로피도그렐의 혼합된 이황화물 접합체의 공동투여는 아마도, 항혈소판 작용제로서 (S)-clopNPT의 이익뿐만 아니라, 글루타티온 단독의 이용과 연관된 이익을 제공한다.
이들 결과는 클로피도그렐의 혼합된 이황화물 접합체가 클로피도그렐보다 더욱 효과적인 항혈소판 작용제라는 것을 증명한다.
지금까지 본 발명을 충분히 설명했기 때문에, 본 발명은 발명의 범위 또는 이의 임의의 구체예에 영향을 주지 않으면서, 조건, 제제, 그리고 다른 파라미터의 넓고 동등한 범위 내에서 수행될 수 있는 것으로 당업자에 의해 이해될 것이다. 본원에서 인용된 모든 특허, 특허 출원과 간행물은 본원에서 전체적으로 완전히 참조로서 편입된다.
참조로서 편입
본원에서 언급된 각 특허 문서와 과학 논문의 전체 개시는 모든 점에서 참조로서 편입된다.
등가물
본 발명은 사상 또는 필수적인 특징으로부터 벗어나지 않으면서 다른 특정한 형태에서 구현될 수 있다. 이런 이유로, 전술한 구체예는 모든 양상에서, 본원에서 설명된 발명을 한정하기 보다는 예시하는 것으로 고려된다. 따라서 본 발명의 범위는 전술한 설명보다는 첨부된 청구항에 의해 지시되고, 그리고 청구항의 등가의 의미와 범위의 범위 안에 있는 모든 변화는 그 안에 포섭되는 것으로 의도된다.

Claims (26)

  1. 화학식 I을 갖는 화합물, 이의 제약학적으로 허용되는 염, 이의 용매화합물, 및/또는 이의 전구약물:
    [화학식 I]:
    Figure pct00186
    ;
    여기서 R1, R2와 R3은 결과의 화합물이 내인성 글루타티온 (GSH)과의 상호작용 시에 활성 티에노피리딘 대사산물을 생산할 수 있게 만드는 임의의 화학적 모이어티를 독립적으로 포함한다.
  2. 청구항 1에 있어서, R1은 H, -CO-OCH3, 그리고
    Figure pct00187
    으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  3. 청구항 1에 있어서, R3은 염소 또는 불소인 것을 특징으로 하는 화합물.
  4. 청구항 1에 있어서, R2는 다음과 같이 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물:
    Figure pct00188
    ,
    Figure pct00189
    ,
    Figure pct00190
    ,
    Figure pct00191
    ,
    Figure pct00192
    ,
    Figure pct00193
    ,
    Figure pct00194
    ,
    Figure pct00195
    ,
    Figure pct00196
    , 그리고
    Figure pct00197
    .
  5. 청구항 1에 있어서, 상기 화합물은 다음과 같이 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물:
    Figure pct00198
    ,
    Figure pct00199
    ,
    Figure pct00200
    ,
    Figure pct00201
    ,
    Figure pct00202
    ,
    Figure pct00203
    ,
    Figure pct00204
    ,
    Figure pct00205
    ,
    Figure pct00206
    ,
    Figure pct00207
    ,
    Figure pct00208
    ,
    Figure pct00209
    ,
    Figure pct00210
    ,
    Figure pct00211
    ,
    Figure pct00212
    ,
    Figure pct00213
    ,
    Figure pct00214
    ,
    Figure pct00215
    ,
    Figure pct00216
    ,
    Figure pct00217
    ,
    Figure pct00218
    ,
    Figure pct00219
    ,
    Figure pct00220
    ,
    Figure pct00221
    ,
    Figure pct00222
    ,
    Figure pct00223
    ,
    Figure pct00224
    ,
    Figure pct00225
    ,
    Figure pct00226
    ,
    Figure pct00227
    ,
    Figure pct00228
    ,
    Figure pct00229
    ,
    Figure pct00230
    ,
    Figure pct00231
    ,
    Figure pct00232
    ,
    Figure pct00233
    ,
    Figure pct00234
    ,
    Figure pct00235
    ,
    Figure pct00236
    ,
    Figure pct00237
    ,
    Figure pct00238
    ,
    Figure pct00239
    ,
    Figure pct00240
    ,
    Figure pct00241
    ,
    Figure pct00242
    ,
    Figure pct00243
    ,
    Figure pct00244
    ,
    Figure pct00245
    ,
    Figure pct00246
    ,
    Figure pct00247
    ,
    Figure pct00248
    ,
    Figure pct00249
    ,
    Figure pct00250
    ,
    Figure pct00251
    ,
    Figure pct00252
    ,
    Figure pct00253
    ,
    Figure pct00254
    ,
    Figure pct00255
    ,
    Figure pct00256
    ,
    Figure pct00257
    ,
    Figure pct00258
    ,
    Figure pct00259
    ,
    Figure pct00260
    ,
    Figure pct00261
    ,
    Figure pct00262
    ,
    Figure pct00263
    ,
    Figure pct00264
    ,
    Figure pct00265
    ,
    Figure pct00266
    ,
    Figure pct00267
    , 그리고
    Figure pct00268
    .
  6. 청구항 1에 있어서, 상기 화합물은 다음과 같이 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물:
    Figure pct00269
    ,
    Figure pct00270
    ,
    Figure pct00271
    ,
    Figure pct00272
    ,
    Figure pct00273
    ,
    Figure pct00274
    ,
    Figure pct00275
    ,
    Figure pct00276
    ,
    Figure pct00277
    ,
    Figure pct00278
    ,
    Figure pct00279
    ,
    Figure pct00280
    ,
    Figure pct00281
    ,
    Figure pct00282
    ,
    Figure pct00283
    ,
    Figure pct00284
    ,
    Figure pct00285
    ,
    Figure pct00286
    ,
    Figure pct00287
    ,
    Figure pct00288
    ,
    Figure pct00289
    ,
    Figure pct00290
    ,
    Figure pct00291
    ,
    Figure pct00292
    ,
    Figure pct00293
    ,
    Figure pct00294
    ,
    Figure pct00295
    ,
    Figure pct00296
    ,
    Figure pct00297
    ,
    Figure pct00298
    ,
    Figure pct00299
    ,
    Figure pct00300
    ,
    Figure pct00301
    ,
    Figure pct00302
    ,
    Figure pct00303
    ,
    Figure pct00304
    ,
    Figure pct00305
    ,
    Figure pct00306
    ,
    Figure pct00307
    ,
    Figure pct00308
    ,
    Figure pct00309
    ,
    Figure pct00310
    ,
    Figure pct00311
    ,
    Figure pct00312
    ,
    Figure pct00313
    ,
    Figure pct00314
    ,
    Figure pct00315
    ,
    Figure pct00316
    ,
    Figure pct00317
    ,
    Figure pct00318
    ,
    Figure pct00319
    ,
    Figure pct00320
    ,
    Figure pct00321
    ,
    Figure pct00322
    ,
    Figure pct00323
    ,
    Figure pct00324
    ,
    Figure pct00325
    ,
    Figure pct00326
    ,
    Figure pct00327
    , 그리고
    Figure pct00328
    .
  7. 청구항 1 내지 6중 어느 한 항의 화합물 및 제약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 제약학적 조성물.
  8. 청구항 7에 있어서, 상기 제약학적 조성물은 정맥내 투여를 위해 형성되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  9. 환자에서 심혈관 질환을 치료하거나, 개선하거나, 또는 예방하는 방법에 있어서, 청구항 1 내지 7중 어느 한 항의 화합물의 치료 효과량을 상기 환자에 투여하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 청구항 9에 있어서, 상기 투여는 경구 투여 및 정맥내 투여로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 청구항 9에 있어서, 상기 심혈관 질환은 관상 동맥 질환, 말초 혈관 질환, 죽상경화혈전증, 그리고 뇌혈관 질환으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  12. 청구항 9에 있어서, 상기 화합물은 혈소판의 응집을 감소시키는 것을 특징으로 하는 방법.
  13. 청구항 12에 있어서, 상기 혈소판의 응집을 감소시키는 것은 P2Y12 수용체에 비가역적 결합을 통해 발생하는 것을 특징으로 하는 방법.
  14. 청구항 12에 있어서, 상기 혈소판의 응집을 감소시키는 것은 ADP 수용체를 차단하는 것을 통해 발생하는 것을 특징으로 하는 방법.
  15. 청구항 9에 있어서, 상기 화합물은 P450에 의한 생활성화에 대한 필요 없이 내인성 글루타티온의 존재에서 활성 티에노피리딘 대사산물을 생산할 수 있는 것을 특징으로 하는 방법.
  16. 청구항 9에 있어서, HMG-CoA 환원효소 저해제, ACE 저해제, 칼슘 통로 차단제, 혈소판 응집 저해제, 다중불포화된 지방산, 피브린산 유도체, 담즙산 격리제, 항산화제, 혈전용해약, 그리고 항협심증 작용제로 구성된 군에서 선택되는 최소한 하나의 작용제의 공동투여를 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  17. 환자에서 혈관 내로 혈소판의 응집을 치료하거나, 개선하거나, 또는 예방하는 방법에 있어서, 청구항 1 내지 7중 어느 한 항의 화합물의 치료 효과량을 상기 환자에 투여하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  18. 청구항 17에 있어서, 상기 투여는 경구 투여 및 정맥내 투여로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  19. 청구항 18에 있어서, 상기 혈소판의 응집을 치료하거나, 개선하거나, 또는 예방하는 것은 P2Y12 수용체에 비가역적 결합을 통해 발생하는 것을 특징으로 하는 방법.
  20. 청구항 18에 있어서, 상기 혈소판의 응집을 치료하거나, 개선하거나, 또는 예방하는 것은 ADP 수용체를 차단하는 것을 통해 발생하는 것을 특징으로 하는 방법.
  21. 청구항 18에 있어서, 상기 화합물은 P450에 의한 생활성화에 대한 필요 없이 내인성 글루타티온의 존재에서 활성 티에노피리딘 대사산물을 생산할 수 있는 것을 특징으로 하는 방법.
  22. 청구항 18에 있어서, HMG-CoA 환원효소 저해제, ACE 저해제, 칼슘 통로 차단제, 혈소판 응집 저해제, 다중불포화된 지방산, 피브린산 유도체, 담즙산 격리제, 항산화제, 혈전용해약, 그리고 항협심증 작용제로 구성된 군에서 선택되는 최소한 하나의 작용제의 공동투여를 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  23. 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체 청구항 1 내지 7중 어느 한 항의 화합물의 치료 효과량을 포함하는 제약학적 조성물에 있어서, 상기 제약학적 조성물은 정맥내 투여를 위해 형성되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  24. 청구항 23에 있어서, 상기 제약학적 조성물은 죽상경화혈전증의 치료, 개선과 예방에서 환자에 정맥내 투여되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  25. 청구항 23에 있어서, 상기 제약학적 조성물은 경피 관상 개입 절차 동안 환자에 정맥내 투여되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  26. 청구항 25에 있어서, 상기 경피 관상 개입 절차는 관상 혈관형성술인 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
KR1020157019404A 2013-01-09 2014-01-06 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체 및 이들의 용도 KR101841332B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361750633P 2013-01-09 2013-01-09
US61/750,633 2013-01-09
PCT/US2014/010348 WO2014109987A1 (en) 2013-01-09 2014-01-06 Mixed disulfide conjugates of thienopyridine compounds and uses thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20150096770A true KR20150096770A (ko) 2015-08-25
KR101841332B1 KR101841332B1 (ko) 2018-03-22

Family

ID=51167312

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020157019404A KR101841332B1 (ko) 2013-01-09 2014-01-06 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체 및 이들의 용도

Country Status (14)

Country Link
US (2) US9718778B2 (ko)
EP (1) EP2943482B1 (ko)
JP (2) JP6072938B2 (ko)
KR (1) KR101841332B1 (ko)
CN (1) CN105051025B (ko)
AU (1) AU2014205629B2 (ko)
CA (1) CA2897407C (ko)
DK (1) DK2943482T3 (ko)
HK (1) HK1218748A1 (ko)
IL (1) IL239823B (ko)
MX (1) MX2015008877A (ko)
NZ (1) NZ709744A (ko)
SG (2) SG10201700204TA (ko)
WO (1) WO2014109987A1 (ko)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10173980B2 (en) 2015-04-30 2019-01-08 The Regents Of The University Of Michigan Mixed disulfide conjugates of thienopyridine compounds and uses thereof
SG11202007273WA (en) * 2018-01-31 2020-08-28 Univ Michigan Regents Biocatalyst and methods for synthesizing mixed disulfide conjugates of thienopyridine compounds
US11642335B2 (en) * 2019-09-26 2023-05-09 Board Of Regents, The University Of Texas System Chemical synthesis of clopidogrel active metabolites and disulfide conjugate prodrugs
WO2021070200A2 (en) * 2019-10-08 2021-04-15 Ipca Laboratories Limited Stable compositions of (7as,2's)-2-oxoclopidogrel and its pharmaceutical salts
CN111484446A (zh) * 2020-04-02 2020-08-04 北京翼方生物科技有限责任公司 氯吡格雷代谢活性体二硫衍生物、其制备方法及医药用途
CN112851570A (zh) * 2021-01-13 2021-05-28 北京沃邦医药科技有限公司 不饱和环胺半胱氨酸二硫衍生物制备方法及其医药用途
CN112812098A (zh) * 2021-01-13 2021-05-18 北京沃邦医药科技有限公司 不饱和环胺吡啶二硫衍生物制备方法及其医药用途
CN115260086A (zh) * 2022-09-28 2022-11-01 吉林大学 一种氟代内标物及其应用和制备方法

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3989816A (en) 1975-06-19 1976-11-02 Nelson Research & Development Company Vehicle composition containing 1-substituted azacycloheptan-2-ones
US4444762A (en) 1980-04-04 1984-04-24 Nelson Research & Development Company Vehicle composition containing 1-substituted azacyclopentan-2-ones
PL200666B1 (pl) * 1998-02-27 2009-01-30 Sankyo Co Cykliczny związek aminowy lub jego farmakologicznie dopuszczalna sól i ich zastosowanie oraz kompozycja farmaceutyczna i środek zawierający cykliczny związek aminowy lub jego farmakologicznie dopuszczalna sól
US7205404B1 (en) 1999-03-05 2007-04-17 Metabasis Therapeutics, Inc. Phosphorus-containing prodrugs
JP2001131067A (ja) * 1999-08-26 2001-05-15 Sankyo Co Ltd 血小板凝集抑制剤又は動脈硬化進展抑制剤
US6710058B2 (en) * 2000-11-06 2004-03-23 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Monocyclic or bicyclic carbocycles and heterocycles as factor Xa inhibitors
JP4749702B2 (ja) * 2003-11-28 2011-08-17 第一三共株式会社 ヘテロアリール環を有する環状アミン誘導体
EP1889835A4 (en) * 2005-05-27 2010-04-28 Daiichi Sankyo Co Ltd CYCLIC AMINE DERIVATIVE WITH SUBSTITUTED ALKYL GROUP
JP2008156343A (ja) * 2006-11-27 2008-07-10 Daiichi Sankyo Co Ltd 置換アルキル基を有する環状アミン誘導体を含有する医薬組成物

Also Published As

Publication number Publication date
US10196356B2 (en) 2019-02-05
WO2014109987A1 (en) 2014-07-17
KR101841332B1 (ko) 2018-03-22
US20150353492A1 (en) 2015-12-10
AU2014205629B2 (en) 2016-12-22
US9718778B2 (en) 2017-08-01
NZ709744A (en) 2016-10-28
JP2017081968A (ja) 2017-05-18
AU2014205629A1 (en) 2015-07-23
JP6072938B2 (ja) 2017-02-01
SG10201700204TA (en) 2017-03-30
JP2016511229A (ja) 2016-04-14
IL239823A0 (en) 2015-08-31
CA2897407C (en) 2018-05-08
DK2943482T3 (en) 2019-04-15
HK1218748A1 (zh) 2017-03-10
SG11201505283RA (en) 2015-08-28
EP2943482A1 (en) 2015-11-18
CA2897407A1 (en) 2014-07-17
US20170334853A1 (en) 2017-11-23
CN105051025A (zh) 2015-11-11
EP2943482A4 (en) 2016-07-06
CN105051025B (zh) 2018-06-01
EP2943482B1 (en) 2019-03-13
MX2015008877A (es) 2015-12-07
IL239823B (en) 2020-04-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101841332B1 (ko) 티에노피리딘 화합물의 혼합된 이황화물 접합체 및 이들의 용도
US20230093056A1 (en) Compositions and methods of modulating s-nitrosylation
JP7448961B2 (ja) チエノピリジン化合物の混合ジスルフィド結合体及びそれらの使用
WO2015051276A1 (en) Small molecule securinine and norsecurinine analogs and their use in inhibiting myeloperoxidase
KR20160003196A (ko) ＂니코틴아미드 포스포리보실트랜스퍼라제의 억제제, 조성물, 제품 및 그의 용도＂
RU2612256C1 (ru) Гидразинотиазоловые производные усниновой кислоты, проявляющие ингибирующее действие в отношении фермента тирозил-ДНК-фосфодиэстеразы 1 человека
US20180055816A1 (en) Pyranonaphthoquinone compounds and methods of use thereof
RU2627764C1 (ru) 2-Ацетил-6-(2-(2-(4-бромбензилиден)гидразинил) тиазол-4-ил)-3, 7, 9-тригидрокси-8, 9b-диметилдибензо[b, d]фуран-1(9bH)-он, проявляющий ингибирующее действие в отношении фермента тирозил-ДНК-фосфодиэстеразы 1 человека
Deng et al. Abstract 2086 Preliminary pharmacokinetic study of OXi8007, an effective vascular disrupting agent, in an orthotopic RENCA tumor-bearing BALB/c mouse model
WO2022079637A1 (en) Analogues of oleuropein and oleacein and uses thereof
GR1010438B (el) Φαρμακευτικες ενωσεις που βασιζονται στο συνδυασμο ενος ανταγωνιστη της ισταμινης και ενος δοτη υδροθειου για χρηση στην αντιμετωπιση του κνησμου

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E90F Notification of reason for final refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant