KR20150011875A - 신규 트리테르펜 글루코사이드 화합물 및 이를 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학조성물 - Google Patents

신규 트리테르펜 글루코사이드 화합물 및 이를 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR20150011875A
KR20150011875A KR1020130086763A KR20130086763A KR20150011875A KR 20150011875 A KR20150011875 A KR 20150011875A KR 1020130086763 A KR1020130086763 A KR 1020130086763A KR 20130086763 A KR20130086763 A KR 20130086763A KR 20150011875 A KR20150011875 A KR 20150011875A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
triterpene glucoside
glucoside compound
compound
inflammatory
pharmaceutical composition
Prior art date
Application number
KR1020130086763A
Other languages
English (en)
Other versions
KR101490033B1 (ko
Inventor
정일민
김승현
아메드
김은혜
손은숙
박혜란
Original Assignee
건국대학교 산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 건국대학교 산학협력단 filed Critical 건국대학교 산학협력단
Priority to KR20130086763A priority Critical patent/KR101490033B1/ko
Publication of KR20150011875A publication Critical patent/KR20150011875A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101490033B1 publication Critical patent/KR101490033B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20—Carbocyclic rings
    • C07H15/24—Condensed ring systems having three or more rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/30—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof containing carbohydrate syrups; containing sugars; containing sugar alcohols, e.g. xylitol; containing starch hydrolysates, e.g. dextrin

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

본 발명은 신규 트리테르펜 글루코사이드 화합물 및 이를 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학조성물에 관한 것으로, 상기 트리테르펜 글루코사이드 화합물은 폐기처분되는 홍삼박으로부터 추출된 것으로서 대식세포에서 LPS 유도 NO 생성을 억제하며, 더불어 iNOS, COX, TNF-α, IL-1β, IL-6 등 전염증성 매개인자의 mRNA 발현을 억제하는 항염증 활성을 나타내므로, 염증성 질환 치료 또는 예방에 유용하게 사용할 수 있다.

Description

신규 트리테르펜 글루코사이드 화합물 및 이를 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학조성물{New triterpene glucoside compound and pharmaceutical composition for preventing or treating for inflammatory disease comprising the same}
본 발명은 LPS로 활성화된 RAW 264.7세포에서 NO, iNOS, COX-2, IL-6 및 TNF-α와 같은 염증성 매개물의 생성을 억제함으로써 염증 질환의 치료제로서 유용하게 이용될 수 있는 신규 트리테르펜 글루코사이드 화합물 및 이를 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학조성물에 관한 것이다.
염증반응의 조절이 염증 관련 질환의 병인과 밀접하게 관련되며, 이러한 염증 반응은 다양한 신호전달 예를들어, 사이클로옥시게나아제-2(cyclooxygenase-2; COX-2), 유도 산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthase; iNOS), 사이토카인 등의 순차적인 활성화와 관련된다.
NO(nitric oxide), 인터루킨-6(interleukin-6; IL-6) 및 인터루킨-1β(interleukin-1β; IL-1β)와 같은 인터루킨, 종양괴사인자-α(tumor necorsis factor-alpha; TNF-α)를 포함한 염증 매개물의 과도한 생성은 류마티스 관절염, 염증성 장질환, 골다공증, 건선, 내독소혈증, 독성쇼크증후군과 같은 염증질환을 매개한다.
인체에서 발생하는 염증 반응은 크게 급성 염증 반응(Acute inflammation)과 만성 염증 반응(Chronic inflammation)으로 구분할 수 있다. 급성 염증 반응은 외부로부터 유입된 항원으로부터 신체를 보호하기 위해 급속하게 발생하는 반응이다.
급성 염증 과정의 시작은 IL-1β, IL-6, TNF-α와 같은 염증성 사이토카인의 분비와, iNOS 및 COX-2 등과 같은 염증 매개 물질 합성 유전자들의 증가를 동반하게 된다.
이처럼 분비된 염증 조절 물질에 의해 활성화된 대식 세포들이 유입된 항원을 효과적으로 제거하게 되며 항원이 모두 제거되면 더 이상의 진행은 멈추게 된다.
그러므로 급성 염증 반응이 인체 질환으로 발전할 가능성은 매우 희박하나, 백일해(pertussis) 등 일부 만성염증질환으로 발전하는 경우에는 IL-23의 발현이 증가하여 만성염증으로 진행된다.
급성과 달리 만성 염증 반응은 외부 항원보다는 인체 내부적 요인에 의해 장기간 동안 진행되는 염증 반응으로 대식 세포에 의한 단순 염증 반응이 아닌 대식 세포, 호중구와 T 림프구가 포함된 염증 반응으로 IL-17 및 IL-23의 발현이 증가되고 이로 인한 TNF-α 등 염증성 사이토카인들이 지속적으로 발현되어 일어난다.
이와 같은 만성염증질환의 치료는 고전적으로 프레드니솔론과 같은 스테로이드에 의한 염증 억제제, 나프록센과 같은 비스테로이드성 항염치료제(nonsteroidal anti-inflammatory drugs; NSAID) 및 사이클로스포린이나 FK506과 같이 칼슘 및 칼모듈린 의존성 단백인산화 효소인 칼시뉴린(calcineurin)에 결합하여 그 작용을 억제하는 면역억제제가 가장 많이 사용되고 왔다.
그러나 이러한 스테로이드를 비롯한 면역억제제들은 신독성, 감염, 임파종, 당뇨병, 진전(tremor), 두통, 설사, 고혈압, 오심, 신기능 장애 등의 부작용이 따르게 된다.
한편, 한국공개특허 제2012-0129474호에서는 홍삼 추출물을 유효성분으로 함유하는 알레르기성 염증질환 치료 및 예방용 조성물을 제공할지라도, 본 발명과 같은 트리테르펜 글루코사이드 화합물을 전혀 개시하지 못하고 있다.
그러므로, 현재 사용되는 염증질환 치료제의 부작용을 줄이면서도 염증 매개물의 과잉발현을 억제하는 효과적인 염증질환 치료제의 개발이 시급한 실정이다.
본 발명의 목적은 LPS로 활성화된 RAW 264.7세포에서 NO, IL-6 및 TNF-α와 같은 염증성 매개물의 생성을 억제함으로써 염증성 질환의 치료제로서 유용하게 이용될 수 있는 신규 화합물을 폐기처분되는 홍삼박으로부터 분리하여 이러한 화합물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 치료제 또는 염증성 질환 개선용 건강식품을 개발하는 데에 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 하기 화학식 1 또는 화학식 3로 표시되는 트리테르펜 글루코사이드 화합물을 제공한다:
[화학식 1]
Figure pat00001
[화학식 3]
Figure pat00002
또한, 본 발명은 화학식 1로 표시되는 트리테르펜 글루코사이드 화합물, 화학식 3로 표시되는 트리테르펜 글루코사이드 화합물 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 약학조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 화학식 1로 표시되는 트리테르펜 글루코사이드 화합물, 화학식 3로 표시되는 트리테르펜 글루코사이드 화합물 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 건강식품을 제공한다.
본 발명에 따른 트리테르펜 글루코사이드 화합물은 폐기처분되는 홍삼박으로부터 추출된 것으로서 대식세포에서 LPS 유도 NO 생성을 억제하며, 더불어 iNOS, COX, TNF-α, IL-1β, IL-6 등 전염증성 매개인자의 mRNA 발현을 억제하는 항염증 활성을 나타내므로, 염증성 질환 치료 또는 예방에 유용하게 사용할 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 트리테르펜 글루코사이드 화합물의 산 가수분해 결과로 분리되는 당분획과 아글리콘 분획을 나타낸 것이고,
도 2는 본 발명에 따른 트리테르펜 글루코사이드 화합물의 대식세포에서의 세포독성을 나타낸 것이고,
도 3은 본 발명에 따른 트리테르펜 글루코사이드 화합물의 대식세포에서의 NO 발현 억제 효과를 나타낸 것이다.
이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.
본 발명에 따른 트리테르펜 글루코사이드 화합물은 폐기처분되는 홍삼박으로부터 추출하여 분리할 수 있지만, 이에 한정되는 것은 아니고 일반적인 합성방법을 통해서도 제조할 수 있다.
상기 트리테르펜 글루코사이드 화합물은 대식세포에서 LPS 유도 NO 생성을 억제하며, 더불어 iNOS, COX, TNF-α, IL-1β, IL-6 등 전염증성 매개인자의 mRNA 발현을 억제하는 항염증 활성을 나타내므로, 본 발명에서는 화학식 1로 표시되는 트리테르펜 글루코사이드 화합물, 화학식 3로 표시되는 트리테르펜 글루코사이드 화합물, 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학조성물을 제공한다.
상기 염증성 질환으로는 골관절염, 류마티스 관절염, 통풍, 강직성척추염, 건염, 건막염, 루프스, 섬유근통(fibromyalgia), 염증성 장질환, 골다공증, 건선, 아토피, 내독소혈증, 독성쇼크증후군 및 궤양성 대장염으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 질환일 수 있다.
본 발명에 따른 트리테르펜 글루코사이드 화합물은 약학조성물 총 100 중량부에 대하여 0.5 내지 15 중량부로 함유되는 것이 바람직하다. 만약, 상기 화합물이 상기 범위를 벗어나 소량으로 함유되면 약효 발생의 저하가 야기될 수 있는 반면, 다량으로 함유되면 비경제적일 뿐만 아니라 상용량의 범위를 벗어나므로 역시 바람직하지 않은 부작용이 나타날 우려가 발생한다.
또한, 본 발명에 따른 약학조성물은 약학조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명에서 사용가능한 담체, 부형제 또는 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유 등을 들 수 있다.
본 발명에 따른 염증질환 치료제는, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물은 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제한다.
또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 트리테르펜 글루코사이드 화합물의 사용량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으나, 0,01 내지 10 mg/㎏의 양을 일일 1회 내지 수회 투여할 수 있다.
또한, 이러한 화합물의 투여량은 투여경로, 질병의 정도, 성별, 체중, 나이 등에 따라서 증감될 수 있다.　 따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
상기 약학조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular)주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명에 따른 트리테르펜 글루코사이드 화합물은 고농도에서도 대식세포에서 세포독성을 나타내지 않는 안전한 화합물로 확인되었다.
또한, 본 발명은 화학식 1로 표시되는 트리테르펜 글루코사이드 화합물, 화학식 3로 표시되는 트리테르펜 글루코사이드 화합물, 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 개선용 건강식품을 제공한다.
상기 염증성 질환으로는 골관절염, 류마티스 관절염, 통풍, 강직성척추염, 건염, 건막염, 루프스, 섬유근통(fibromyalgia), 염증성 장질환, 골다공증, 건선, 아토피, 내독소혈증, 독성쇼크증후군 및 궤양성 대장염으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 질환일 수 있다.
상기 건강식품은 상기 트리테르펜 글루코사이드 화합물 이외에 다른 식품 또는 식품 첨가물과 함께 사용되고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 그의 사용 목적 예를들어 예방, 건강 또는 치료적 처치에 따라 적합하게 결정될 수 있다.
상기 건강식품에 함유된 화합물의 유효용량은 상기 치료제의 유효용량에 준해서 사용할 수 있으나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있음은 확실하다.
상기 건강식품의 종류에는 특별한 제한이 없고, 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등을 들 수 있다.
본 발명의 이해를 돕기 위하여 일 실시예를 하기에 제시한다. 그러나 이러한 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐 본 발명이 하기의 실시예에 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 화합물 1 내지 3 수득
1. 홍삼박 추출물 준비
강화도에서 재배한 땅속 건뿌리 인삼(6년산)을 신선한 인삼으로 사용하였고, 대조표본(voucher specimen; No. PG-R-11)은 건국대학 응용생명과학부에 비치해 두었다. 껍질을 벗기지 않은 신선한 인삼을 멸균기에서 98℃에서 2시간 동안 스팀처리하여 홍삼을 준비하였다. 상기 홍삼으로부터 추출물을 추출한 후, 잔사를 홍삼박으로 사용하였다. 상기 홍삼박을 건조하여 분말 형태(297.8g)로 제조하였다.
상기 준비된 홍삼박(297.8g)을 실온 메탄올(3 x 1L)에서 3일 동안 침지시킨 후, 진공 하에서 농축하여 상등액(30.1g)을 얻었다. 상기 상등액을 물에 현탁시키고 헥산, 에틸아세테이트 및 n-부탄올로 추출시켜 헥산 추출물(5g), 에틸아세테이트 추출물(8.9g) 및 n-부탄올 추출물(14.2g)을 각각 준비하였다.
2. 분석
녹는점은 전기화학공학(Electrochemical Engineering) 모델 IA9100 녹는점 장치를 이용하여 측정하였다. 선광성은 AA-10 편광계(Instrument Ltd., Seoul, Korea)를 이용하여 측정하였다. IR 분석은 Thermo Mattson Scientific FT-IR 모델 Nicolet 6700 (USA) 분광광도계 상에서 기록하였다. 1H-NMR 및 13C-NMR은 Bruker Avance-600 분광계를 이용하여 600 MHz 및 150 MHz에서 각각 분석하였다. 이때, NMR 분석은 내부표준물질로 테트라메틸실란(TMS)을 이용하여 중수소 클로로포름, d5-피리딘 및 d4-메탄올에서 수행하였다. FAB/MS 데이터는 JMS-700 (Jeol, Japan) 분광장치에서 기록하였다. 고해상도 ESI/FT 질량 분석은 Dionex U 3000 HPLC system (NICEM, Seoul National University)를 장착한 자동원소분석기(Thermo-Finnigan LTQ-Orbitrap instrument; Thermo Scientific, USA)를 사용하였다. 박막 크로마토그래피(TLC)는 피복 실리카겔 60 F254 플레이트(Merck) 상에서 수행하였고, TLC 플레이트는 C2H5OH 분무액 중 5% H2SO4을 이용하여 시각화 하였다. 컬럼 크로마토그래피는 실리카겔(70-230 mesh) 및 LiChroprep RP-18(40-63 μm; ODS 실리카겔)을 이용하여 수행하였다.
3. 화합물 분리
n-부탄올 추출물(14.2 g)을 실리카겔 컬럼(70 - 230 mesh, 500 g, 4.5 x 95 cm) 상에서 분리하였고, 농도구배된 n-헥산-CHCl3을 이용하여 용출하여 34개의 분획(각 250 mL)을 얻었다: n-헥산으로 용출한 분획 1-4; n-헥산-CHCl3 (7.5:2.5)으로 용출한 분획 5-6; n-헥산-CHCl3 (1:1)으로 용출한 분획 7-8; n-헥산-CHCl3 (2.5:7.5)으로 용출한 분획 9-10; CHCl3으로 용출한 분획 11-12; CHCl3-MeOH (99:1)으로 용출한 분획 13-14; CHCl3-MeOH (98:2)으로 용출한 분획 15-16; CHCl3-MeOH (97:3)으로 용출한 분획 17-18; CHCl3-MeOH (96:4)으로 용출한 분획 19-20; CHCl3-MeOH (95:0.5)으로 용출한 분획 21-22; CHCl3-MeOH (94:6)으로 용출한 분획 23-24; CHCl3-MeOH (93:7)으로 용출한 분획 25-26; CHCl3-MeOH (92:8)으로 용출한 분획 27-28; CHCl3-MeOH (9:1)으로 용출한 분획 29-30; CHCl3-MeOH (8.8:1.2)으로 용출한 분획 31-32; CHCl3-MeOH (8.5:1.5)으로 용출한 분획 33-34. 상기 분획 27-28(0.6g)을 컬럼 크로마토그래피에 의한 정제 후 결정화하여 β-시토스테롤-β-D-글루코사이드(30 mg)를 얻었다. 분획 31-32(1.4g)을 LiChroprep RP-18(ODS 실리카겔; 40-63 μm: 100 g; 각 분획 100 ml)를 통해 재정제 하였다.
상기 분획 31-32 용출액에 메탄올과 물을 연속적으로 처리한 후 10개 분획을 얻었다: H2O-MeOH (1:1)으로 용출한 분획 1-2; H2O-MeOH (2:8)으로 용출한 분획 3-4; H2O-MeOH (1:9)으로 용출한 분획 5-6; MeOH으로 용출한 분획 7-10. 상기 분획 1-2(2.1 g, 분획 100 ml)는 클로로포름 및 메탄올로 실리카겔 상에서 재정제하였다. 상기 용출액에 0.5 %, 1% 및 1.2% 클로로포름을 각각 처리하여 3개의 신규 화합물인 화합물 1(19 mg), 화합물 2(21 mg) 및 화합물 3(23 mg)을 얻었다.
1) 우르산-3 β , 19 α ,22 β -트리올-3 β -D-글루코피라노실(2'→1'')- β -D-글루코피라노사이드 [Ursan-3 β , 19 α , 22 β -triol-3 β -D-glucopyranosyl (2'→1'')- β -D-glucopyranoside; 1]
노란색 반고체; Rf 0.45 (CHCl3:MeOH; 9:1); [α]D 22- 60.04°(c 0.3, MeOH); IR (KBr) νmax: 3490, 3365, 3287, 2925, 2845, 1465, 1371, 1260, 1123, 1015 cm-1; 1H 및 13C NMR 분광분석 데이터 (표 1 참조); FABMS m/z (rel. int.): 785 [M+H]+ (C42H73O10); 729(1.2), (1.6), 639(3.9), 603(4.1), 477(3.8), 459(7.8), 441(10.9), 423(29.5), 405(8.6), 207(8.1), 203(30.1), 189(22.3), 163(50.1); 154(100); HR-ESI/FTMS m/z 785.5088 [M]+ (calcd.for C42H73O13;785.5052).
[화학식 1]
Figure pat00003
Figure pat00004
2) 우르산-3 α ,11 β -디올-3 α -D-글루코피라노실-(6'→1'')- α -D-글루코피라노실--(6''→1''')- α -D-글루코피라노실-(6'''→1'''')-α-D-글루코피라노사이드 [Ursan-3 α , 11 β -diol-3 α -D-glucopyranosyl-(6'→1'')- α -D-glucopyranosyl--(6''→1''')- α -D-glucopyranosyl-(6'''→1'''')-α-D-glucopyranoside; 2]
노란색 반고체; [α]D 22- 80.01°(c 0.2, MeOH); Rf 0.67 (CHCl3:MeOH; 8.8:1.2); IR (KBr) νmax: 3410, 3365, 3280, 2925, 2843, 1463, 1260, 1120, 1035 cm-1; 1H 및 13C NMR 분광분석 데이터(표 2 참조); FABMS m/z (rel. int.) 1093 [M+H]+; 859(0.8), 659(1.6), 595(1.2), 577(1.8), 551(3.1), 535(5.6), 495(4.1), 481(3.1), 450(2.1), 432(6.7), 418(18.3); HR-ESI/FTMS m/z 1093.6165 [M]+ (calcd. C54H93O32;1093.6159).
[화학식 2]
Figure pat00005
Figure pat00006
3) 라노스트-5,24-디엔-3 β -올-3 β -D-글루코피라노실-(6'→1'')- β -D-글루코피라노실-(6''→1''')- β -D-글루코피라노사이드 [Lanost-5, 24-dien-3 β -ol-3 β -D-glucopyranosyl-(6'→1'')- β -D-glucopyranosyl-(6''→1''')- β -D-glucopyranoside; 3]
노란색 결정; mp 221-224°; Rf 0.46 (CHCl3:MeOH; 8.8:1.2); [α]D 22- 67.01°(c 0.3, MeOH); IR (KBr) νmax: 3475, 3360, 3285, 2951, 2844, 1635, 1460, 1365, 1258, 1080 cm-1; 1H 및 13C NMR 분광분석 데이터(표 3 참조); FABMS m/z (rel. int.): 913 [M+H] (C48H81O16) (2.1), 867(8.9), 823(11.2), 807(24.6), 789(77.7), 663(55.6), 647(57.9), 607(16.7), 554(8.9), 535(10.2), 425(11.6), 408(21.2); HR-ESI/FTMS m/z 913.5526 [M+H]+ (calcd. C48H81O16; 913.5519).
[화학식 3]
Figure pat00007
Figure pat00008
4. 화합물 1 내지 3의 산 가수분해
화합물 1 내지 3 각각의 용액(5mg)을 70-80℃ 수욕상에서 4시간 동안 1M 염산:다이옥산 용액(1:1, v/v) 2ml와 환류 반응시켰다. 상기 반응혼합물을 물로 희석한 후 Amberlite IRA-35(column)를 통과시켜 중화시키고 증발시켜 건조하였다. 이렇게 얻어진 산물을 H2O:MeOH(4:1, 10ml)를 이용하여 LiChroprep RP-18 (ODS silica gel; 40-63 μm)로 컬럼 크로마토그래피를 수행한 후, 메탄올(10ml)로 처리하여 도 1과 같이 각각 나누어지는 당분획(화합물 1, 1.9mg; 화합물 2, 1.7mg; 화합물 3, 1.2mg)과 아글리콘 분획(화합물 1, 1.6mg; 화합물 2, 1.8mg; 화합물 3, 2.2mg)을 얻었다. 아글리콘 분획의 아글리콘의 TLC 분석을 통해 확인되지 않은 인공산물이 포함됨을 확인하였다. 당분획에서 단당류 성분은 관련된 1-[(S)-N-아세틸-α-메틸벤질아미노]-1-데옥시알디톨 아세테이트 유도체로 변환시킨 후, GC를 통해 분석하였다. D-글루코즈 유도체는 문헌(Chem. Pharm. Bull. 2003, 51, 92-95)에 알려진 바와 같이 검출하였다.
<실험예 1> 세포독성 분석
ATCC (Rockville, MD)로부터 구매한 마우스 대식세포 RAW 264.7를 10% (v/v) 열활성화된 태아소혈청(FBS), 1% 항생제/항진균제[페니실린(100 U/mL), 암포테리신D(25 ㎍/ml), 스트렙토마이신(100 ㎍/mL) 포함]와 1.5% 중탄산나트륨을 보강한 DMEM(Dulbecco' modified Eagle' medium) 배지에서 배양하였다. 이때, 37℃에서 5% CO2 분위기 하에서 배양하였다.
세포생존율은 종래 알려진 MTT 분석법(Planta Medica. 1998, 64,594-597)을 통해 평가하였다. 즉, 세포에 1 μg/ml의 LPS 단독과, 1 μg/ml의 LPS와 다양한 농도의 화합물 1 내지 3을 함께 처리하여 24시간 동안 반응시킨 후, 10 ㎕의 MTT 용액(5 mg/ml in PBS)을 첨가하고 세포를 4시간 동안 반응시켰다. 그후, 얻어진 포마잔을 ELISA 플레이트 리더(TECAN, Salzburg, Austria)를 이용하여 570 nm에서 흡광도를 측정하여 정량하였다.
그 결과, 도 2와 같이 화합물 1과 화합물 3은 120 ㎍/ml의 농도에서조차 어떠한 세포독성을 나타내지 않은 반면, 화합물 2는 세포독성을 나타내었으며, 화합물 1 및 화합물 3은 120 ㎍/ml 이하의 농도에서 안전한 것으로 확인되었다.
<실험예 2> 산화질소(NO) 정량
세포 상등액 중 산화질소 함량은 종래 알려진 방법(The Journal of immunology. 1988, 141, 2407-2412)에 따라 100 μl의 그리스 시약(Promega, Madison, WI)을 각 시료 100 μl에 첨가하고 실온에서 10분 동안 반응시켜 분석하였다. ELISA 플레이트 리더를 이용하여 550 nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때, 상기 시료는 세포에 1 μg/ml의 LPS 단독과, 1 μg/ml의 LPS와 다양한 농도의 화합물 1 및 화합물 3을 함께 처리하여 24시간 동안 반응시켜 사용하였다. 아질산염 농도(μM)는 아질산나트륨 표준곡선으로부터 산출하였고, 분석의 검출한계는 0.5μM이다.
도 3과 같이 LPS 처리에 의해 세포 내 NO가 증가하였고, 화합물 1 및 3의 처리에 의해 농도의존적으로 NO 생성을 억제하였다.
<실험예 3> RT-PCR 분석
마우스 대식세포 RAW 264.7를 TRIzol 시약에서 균질화하고 진탕한 후, 1/10 부피의 클로로포름을 첨가하였다. 상기 반응혼합물을 20분 동안 얼음에서 반응시킨 후, 시료를 4℃, 12,000 rpm에서 20분 동안 원심분리 하였다. 이때, 상기 시료는 세포에 1 μg/ml의 LPS 단독과, 1 μg/ml의 LPS와 다양한 농도의 화합물 1 및 화합물 3을 함께 처리하여 24시간 동안 반응시켜 사용하였다. 얻어진 수용액 부분을 1.5ml 마이크로원심분리 튜브에 옮겼다. 상기 튜브에 동량의 이소플로필 알콜을 혼합시켜 수용액 부분으로부터 RNA를 침전시키고, 4℃, 12,000 rpm에서 15분 동안 원심분리 한 후, 얼음 상에서 60분 동안 반응시켰다. 침전된 RNA 펠렛을 70% 에틸 알콜로 세정하고 DEPC-처리수(Biosesang, Seoul, Korea)에서 다시 용해시켰다. 2 ㎍의 RNA의 RT 반응은 DEPC-처리수에 1 ㎕의 ImProme-II 역전사효소(200U/μl; Intron), 4.0μl의 5X RT 완충액(Intron), 2.0 μl의 dNTP 혼합물(10mM; BM), 0.5μl의 RNasin(RNase inhibitor, 40U/μl; Intron) 및 1.0μl의 올리고 dT(50μM)를 함유한 20 ㎕ RT 반응혼합물에서 수행하였다. 상기 반응을 25℃에서 60분 동안, 그리고 70℃에서 10분 동안 수행하여 역전사효소를 불활성화 시켰다. 이렇게 얻어진 cDNA를 PCR 반응의 주형으로 사용하고, 다음과 같은 프라이머를 사용하여 RT-PCR 반응을 수행하였다.
유전자 프라이머 서열 단편 크기(bp)
GAPDH F 5’-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3’ (서열1) 225
R 5’-GAAGATGGTGATGGGATTTC-3’ (서열2)
iNOS F 5’-CCCTTCCGAAGTTTCTGGCAGCAGC-3’ (서열3) 496
R 5’-GGCTGTCAGAGCCTCGTGGCTTTGG-3’ (서열4)
COX-2 F 5’-CACTACATCCTGACCCACTT-3’ (서열5) 696
R 5’-ATGCTCCTGCTTGAGTATGT-3’ (서열6)
TNF- F 5’-TTGACCTCAGCGCTGAGTTG-3’ (서열7) 364
R 5’-CCTGTAGCCCACGTCGTAGC-3’ (서열8)
IL-1 F 5’-CAGGATGAGGACATGAGCACC-3’ (서열9) 447
R 5’-CTCTGCAGACTCAAACTCCAC-3’ (서열10)
IL-6 F 5’-GTACTCCAGAAGACCAGAGG-3’ (서열11) 308
R 5’-TGCTGGTGACAACCACGGCC-3’ (서열12)
그 결과, 하기 표 5와 같이 화합물 1은 농도의존적으로 iNOS 생성을 억제하였고, 화합물 3은 COX-2의 생성에 대해 억제 효과를 나타내었다. 따라서, 화합물 1 및 화합물 3은 iNOS 및 COX-2 유전자 발현을 조절하여 NO 생성을 억제함을 알 수 있다. 그리고, 화합물 1은 40 ㎍/ml의 농도에서 TNF-α의 mRNA 발현을 억제하며, 화합물 3은 40 ㎍/ml의 농도에서 IL-6의 생성에 대한 억제 효과를 나타내었다.
Figure pat00009
이하, 본 발명의 화합물을 함유하는 염증성 질환 치료제의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
<제제예 1> 주사제의 제조
화합물 1 10 mg, 소디움 메타비설파이트 3.0 ㎎, 메틸파라벤 0.8 ㎎, 프로필파라벤 0.1 ㎎ 및 주사용 멸균증류수 적량을 혼합하고 통상의 방법으로 최종 부피가 2㎖이 되도록 제조한 후, 2㎖용량의 앰플에 충전하고 멸균하여 주사제를 제조하였다.
<제제예 2> 정제의 제조
화합물 1 10 ㎎, 유당 100 ㎎, 전분 100 ㎎ 및 스테아린산 마그네슘 적량을 혼합하고 통상의 정제 제조방법에 따라 타정하여 정제를 제조하였다.
<제제예 3> 캡슐제의 제조
화합물 1 10 ㎎, 유당 50 ㎎, 전분 50 ㎎, 탈크 2 ㎎ 및 스테아린산 마그네슘 적량을 혼합하고 통상의 캡슐제 제조방법에 따라 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<제제예 4> 건강식품의 제조
화합물 1 0.5 ㎎, 비타민 혼합물 적량(비타민 A 아세테이트 70 ㎍, 비타민 E 1.0 ㎎, 비타민 B 1 0.13 ㎎, 비타민 B 2 0.15 ㎎, 비타민 B 6 0.5 ㎎, 비타민 B 12 0.2 ㎍, 비타민 C 10 ㎎, 비오틴 10 ㎍, 니코틴산아미드 1.7 ㎎, 엽산 50 ㎍, 판토텐산 칼슘 0.5 ㎎) 및 무기질 혼합물 적량(황산제1철 1.75 ㎎, 산화아연 0.82 ㎎, 탄산마그네슘 25.3 ㎎, 제1인산칼륨 15 ㎎, 제2인산칼슘 55 ㎎, 구연산칼륨 90 ㎎, 탄산칼슘 100 ㎎, 염화마그네슘 24.8 ㎎)을 혼합한 다음 과립을 제조하고 통상의 방법에 따라 건강식품을 제조하였다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (7)

  1. 하기 화학식 1 또는 화학식 3로 표시되는 트리테르펜 글루코사이드 화합물:
    [화학식 1]
    Figure pat00010

    [화학식 3]
    Figure pat00011
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 트리테르펜 글루코사이드 화합물은 홍삼박으로부터 추출한 것을 특징으로 하는 트리테르펜 글루코사이드 화합물.
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 트리테르펜 글루코사이드 화합물은 염증성 질환 치료 효과를 갖는 것을 특징으로 하는 트리테르펜 글루코사이드 화합물.
  4. 하기 화학식 1로 표시되는 트리테르펜 글루코사이드 화합물, 하기 화학식 3로 표시되는 트리테르펜 글루코사이드 화합물, 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학조성물:
    [화학식 1]
    Figure pat00012

    [화학식 3]
    Figure pat00013
  5. 청구항 4에 있어서, 상기 트리테르펜 글루코사이드 화합물은 홍삼박으로부터 추출한 것을 특징으로 하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학조성물.
  6. 청구항 4에 있어서, 상기 염증성 질환으로는 골관절염, 류마티스 관절염, 통풍, 강직성척추염, 건염, 건막염, 루프스, 섬유근통 (fibromyalgia), 염증성 장질환, 골다공증, 건선, 아토피, 내독소혈증, 독성쇼크증후군 및 궤양성 대장염으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 질환인 것을 특징으로 하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학조성물.
  7. 하기 화학식 1로 표시되는 트리테르펜 글루코사이드 화합물, 하기 화학식 3로 표시되는 트리테르펜 글루코사이드 화합물, 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 개선용 건강식품:
    [화학식 1]
    Figure pat00014

    [화학식 3]
    Figure pat00015
KR20130086763A 2013-07-23 2013-07-23 신규 트리테르펜 글루코사이드 화합물 및 이를 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학조성물 KR101490033B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20130086763A KR101490033B1 (ko) 2013-07-23 2013-07-23 신규 트리테르펜 글루코사이드 화합물 및 이를 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학조성물

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20130086763A KR101490033B1 (ko) 2013-07-23 2013-07-23 신규 트리테르펜 글루코사이드 화합물 및 이를 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학조성물

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20150011875A true KR20150011875A (ko) 2015-02-03
KR101490033B1 KR101490033B1 (ko) 2015-02-09

Family

ID=52488112

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR20130086763A KR101490033B1 (ko) 2013-07-23 2013-07-23 신규 트리테르펜 글루코사이드 화합물 및 이를 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학조성물

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101490033B1 (ko)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20200019077A (ko) * 2018-08-13 2020-02-21 (주)아모레퍼시픽 신규 진세노사이드, 및 이를 포함하는 항염 조성물
KR20200019078A (ko) * 2018-08-13 2020-02-21 (주)아모레퍼시픽 신규 진세노사이드를 포함하는 항산화 조성물

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101126276B1 (ko) * 2008-10-02 2012-03-20 제주대학교 산학협력단 트리테르페노이드 사포닌계 화합물을 함유하는 심혈관계 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물
KR101031889B1 (ko) 2009-08-26 2011-05-02 한국생명공학연구원 주오닌비 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 및 치료용 조성물
KR20130064662A (ko) * 2011-12-08 2013-06-18 계명대학교 산학협력단 트리테르펜 화합물을 유효성분으로 함유하는 골 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20200019077A (ko) * 2018-08-13 2020-02-21 (주)아모레퍼시픽 신규 진세노사이드, 및 이를 포함하는 항염 조성물
KR20200019078A (ko) * 2018-08-13 2020-02-21 (주)아모레퍼시픽 신규 진세노사이드를 포함하는 항산화 조성물

Also Published As

Publication number Publication date
KR101490033B1 (ko) 2015-02-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US9895337B2 (en) Compositions containing monoacetyldiacylglycerol compound as an active ingredient for preventing or treating rheumatoid arthritis
KR101621851B1 (ko) 모노아세틸디아실글리세롤 화합물을 유효성분으로 함유하는 혈액암 또는 암전이 억제용 조성물
KR101715274B1 (ko) 감국 추출물 또는 분획물을 유효성분으로 포함하는 염증 질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물
WO2018070854A2 (ko) 모노아세틸디아실글리세롤 화합물을 함유하는 간염의 예방 또는 치료용 조성물
KR101509554B1 (ko) 골질환의 예방 및/또는 치료용 의약 조성물, 그 조성물을 함유하는 기능성 식품 또는 건강 식품, 그리고 그 조성물을유효 성분으로 하는 의약 제제
KR101490033B1 (ko) 신규 트리테르펜 글루코사이드 화합물 및 이를 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학조성물
KR101761285B1 (ko) 모노아세틸디아실글리세롤 화합물을 유효성분으로 함유하는 천식의 예방 또는 치료용 조성물
KR101706156B1 (ko) 청미래덩굴로부터 분리된 화합물을 포함하는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR101779391B1 (ko) 짚신나물로부터 분리된 화합물을 포함하는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR101449575B1 (ko) 테뉴폴리사이드 ａ를 유효성분으로 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 조성물
JP2010270096A (ja) グルコース吸収抑制剤
KR102078818B1 (ko) 지충이 유래 화합물을 유효성분으로 함유하는 간염의 예방 또는 치료용 약학 조성물
KR101663609B1 (ko) 식용피 추출물 또는 분획물을 유효성분으로 포함하는 염증 질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물
KR100696647B1 (ko) 플라티코딘 ｄ 프로사포제닌 메틸에스테르를 유효성분으로함유하는 염증 질환 및 면역 질환 예방 및 치료제
KR101798586B1 (ko) 백미 추출물을 포함하는 아토피 피부염 치료용 조성물
EP3698805A1 (en) Fraction ofzanthoxylum piperitum
KR101794924B1 (ko) 퉁퉁마디 유래 비알코올성 지방간 질환 예방 또는 치료용 이소람네틴의 분리방법
KR101470613B1 (ko) 라티폴린을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR101648400B1 (ko) 카페오일글리콜산 메틸 에스테르 또는 1-o-카페오일글리세롤을 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR101540957B1 (ko) 모자반크로마놀 b를 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR101396387B1 (ko) 재조합 아밀로수크라제를 이용한 바이칼레인-6-알파-d-글루코사이드의 제조방법, 및 이에 의해 제조된 바이칼레인-6-알파-d-글루코사이드를 유효성분으로 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR20140026091A (ko) 가는잎산들깨 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 알레르기 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR101904087B1 (ko) 염증 질환의 치료 또는 예방에 유효한 수수 발효물
KR20230105319A (ko) 강직성척추염 질환특이 진단과 치료 테라그노시스를 위한 마이크로바이옴과 대사체 조성물
JP6209062B2 (ja) 抗菌性ペプチドの分泌促進剤

Legal Events

Date Code Title Description
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20180102

Year of fee payment: 4

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20190114

Year of fee payment: 5

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20200102

Year of fee payment: 6