KR20140133721A

KR20140133721A - 포스파티딜콜린을 포함하는 지방 분해용 조성물 및 이의 제조방법

Info

Publication number: KR20140133721A
Application number: KR20130053117A
Authority: KR
Inventors: 이기택
Original assignee: 주식회사 아미팜
Priority date: 2013-05-10
Filing date: 2013-05-10
Publication date: 2014-11-20
Also published as: US9474765B2; WO2014181990A1; KR101545706B1; EP2995309A1; EP2995309A4; US20160058780A1

Abstract

본 발명은 포스파티딜콜린을 포함하는 지방 분해용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 전체 조성물을 기준으로 포스파티딜콜린(Phosphatidyl choline) 2 내지 12%(w/v); 유상용제 5 내지 12%(w/v) 및 잔량의 물을 포함하는 지방 분해용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명의 포스파티딜콜린, 유상용제 및 물로 이루어진 지방 분해용 조성물은 부종, 홍반, 조직 괴사, 염증을 일으키지 않으면서도 지방을 용해하는데 효과적이다.

Description

포스파티딜콜린을 포함하는 지방 분해용 조성물 및 이의 제조방법{Composition comprising phosphatidylcholine for lipolysis and manufacturing method thereof}

본 발명은 포스파티딜콜린을 포함하는 지방 분해용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 전체 조성물을 기준으로 포스파티딜콜린(Phosphatidyl choline) 2 내지 12%(w/v); 유상용제 5 내지 12%(w/v) 및 잔량의 물을 포함하는 지방 분해용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.

포스파티딜콜린(Phosphatidylcholines)은 인지질의 일종으로 헤드 그룹으로 콜린(choline)이 포함된 것을 말한다. 동물, 식물, 효모, 및 곰팡이류에 널리 존재하며, 레시틴이라고도 한다. 포유동물의 막구성 인지질로서 주로 뇌수, 신경, 혈구, 난황 등에 들어 있다. 식물에서는 대두 해바라기씨, 밀배아 등에 함유되어 있다. 일반적으로 글리세롤의 1번 위치에는 포화지방산, 2번 위치에는 불포화지방산이 결합되어 있는 것이 많다.

인체 내에는 약 200억 개나 되는 지방세포(adipocytes)가 존재하고 있으며, 이는 포유류의 생체 내에서 에너지를 축적하거나 방출하는 역할을 담당하고 있다. 이 세포 내에는 에너지의 축적과 방출에 대한 복잡한 조절 원리가 존재하며, 에너지의 수요보다 공급이 월등히 많은 경우 지방세포 내에 중성지방(triglycerides)으로 저장되었다가 에너지가 고갈되었을 때 다시 글리세롤(glycerol)과 유리 지방산(free fatty acids)으로 분해되어 사용된다. 그러나 현대인들은 에너지 섭취가 과다한 반면, 육체적 활동이 적어서 지방세포가 다량 축적되었고, 특히 앉아서 생활을 많이 하다 보니 복부 또는 하체 등 국소적인 부위에 지방이 몰리는 형태를 보인다. 따라서 지방 분해, 특히 국소 지방 분해 작용이 탁월한 물질이 필요한 실정이다.

본 발명자는 부종, 홍반, 조직괴사,염증 등의 부작용이 없으면서, 국소 지방 분해능이 우수한 조성물을 찾아 본 발명을 완성하였다.

따라서 본 발명의 목적은 전체 조성물을 기준으로

포스파티딜콜린(Phosphatidyl choline) 1 내지 15%(w/v);

유상용제 1 내지 30%(w/v); 및

잔량의 물을 포함하는 지방 분해용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 조성물을 유효성분으로 포함하는 지방 분해용 주사제를 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은

(a) 전체 조성물을 기준으로 포스파티딜콜린(Phosphatidyl choline) 1 내지 15%(w/v)를 60 내지 80℃ 온도에서 30분 내지 2시간동안 교반하는 단계;

(b) 상기 (a)단계에서 교반한 혼합물에 60 내지 80℃로 가온한 유상용제를 전체 조성물에 대하여 1 내지 30%(w/v)로 혼합하는 단계; 및

(c) 물로 총 부피를 맞추고 교반하는 단계

를 포함하는 지방 분해용 조성물의 제조방법을 제공하는 것이다.

상기 본 발명의 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 전체 조성물을 기준으로 포스파티딜콜린(Phosphatidyl choline) 1 내지 15%(w/v); 유상용제 1 내지 30%(w/v); 및 잔량의 물을 포함하는 지방 분해용 조성물을 제공한다.

본 발명의 다른 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 상기 조성물을 유효성분으로 포함하는 지방 분해용 주사제를 제공한다.

본 발명의 다른 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 (a) 전체 조성물을 기준으로 포스파티딜콜린(Phosphatidyl choline) 1 내지 15%(w/v)를 60 내지 80℃ 온도에서 30분 내지 2시간동안 교반하는 단계; (b) 상기 (a)단계에서 교반한 혼합물에 60 내지 80℃로 가온한 유상용제를 전체 조성물에 대하여 1 내지 30%(w/v)로 혼합하는 단계; 및 (c) 물로 총 부피를 맞추고 교반하는 단계를 포함하는 지방 분해용 조성물의 제조방법을 제공한다.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 전체 조성물을 기준으로 포스파티딜콜린(Phosphatidyl choline) 1 내지 15%(w/v); 유상용제 1 내지 30%(w/v); 및 잔량의 물을 포함하는 지방 분해용 조성물 및 상기 조성물을 유효성분으로 포함하는 지방 분해용 주사제를 제공한다.

본 발명의 상기 지방 분해용 조성물 및 주사제는 국소적 부위에 적용할 수 있고, 그 부위가 이에 한정하지는 않지만, 바람직하게는 복부, 턱밑, 팔뚝, 허벅지, 허리, 엉덩이 부위에 적용할 수 있다.

본 발명의 지방 분해용 조성물은 포스파티딜콜린을 1 내지 15%(w/v) 포함하는데, 상기 포스파티딜콜린의 농도는 2 내지 12% (w/v)인 것이 더 바람직할 수 있고, 가장 바람직하게는 2 내지 18%(w/v)일 수 있다. 포스파티딜콜린의 농도가 1%(w/v) 미만 이면, 지방 분해 효과가 없고, 15%(w/v)를 초과할 때는, 염증, 조직괴사, 부종 등의 부작용이 심하게 발생할 수 있다.

본 발명의 일실시예에서 본 발명의 조성물을 주사제로 제조하여 지방세포의 크기 및 염증반응에 미치는 영향을 측정한 결과, 조직 괴사 및 염증을 일으키지도 않으면서, 지방 분해 효과가 우수하였다(실시예 3 참조).

본 발명에서 조성물에 포함되는 포스파티딜콜린(필수인지질성물질)은 레시틴(Lecithin)이라고도 하여 가장 대표적인 인지방질로 난황에는 총 인지방질의 약 70%, 인간혈청에는 총 인지방질의 약 60%를 차지한다. 대두의 레시틴은 보통의 레시틴과는 달리, 2개의 지방산과 리놀레산으로 이루어지는 성분을 포함한다.

본 발명의 지방 분해용 조성물은 유상용제 1 내지 30%(w/v)를 포함하고, 더 바람직하게는 5 내지 12%(w/v)일 수 있다.

본 발명의 조성물에 포함되는 유상용제는 당업계에 공지된 약학적 제제의 제조에 적합한 유상용제이고, 이에 한정하지는 않지만, 그 예로 식물유, 중쇄중성지방(MCTs), 콜레스테롤, 스테아린산 글리세린일 수 있다. 이 중 바람직하게는 식물유, 콜레스테롤, 스테아린산 글리세린일 수 있고, 더욱 바람직하게는 식물유 일 수 있다. 상기 식물유는 면실유, 옥수수유, 참깨유, 대두유, 올리브유, 분별된 코코넛유, 땅콩유, 해바라기유, 잇꽃유, 아몬드유, 아보카도유, 팜유, 팜핵유, 바바수유, 너도밤나무 열매유, 아마인유, 평지유 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 가장 바람직하게는 대두유 일 수 있다.

대두유(soybean oil)는 콩의 종자에서 용제를 추출하여 얻은 (반)건성유로 콩기름이라고도 하며 종자의 대두유 함유량은 13∼26％로서 식용기름, 마가린, 도료에 이용된다. 요오드값은 대부분 125∼135이며, 올레익산(oleic acid)을 주성분으로 하고 그 이외에 리놀산과 팔미드산이 미량 함유되어 있다.

상기와 같은 포스파티딜콜린, 유상용제 및 물로 이루어진 포스파티딜콜린을 포함하는 지방 분해용 조성물은 본 발명에서 최초로 제공하는 것이다.

한편 본 발명의 조성물은 전제 조성물을 전체 조성물을 기준으로 0.1 내지 5%(w/v)의 등장화제, 0.01 내지 5%(w/v)의 비이온성 계면활성제, 0.1 내지 5%(w/v)의 안정화제 및 0.1 내지 5%(w/v)의 보존제로 이루어진 그룹에서 선택되는 하나 이상의 물질을 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 등장화제는 포스파티딜콜린을 포함하는 본 발명의 조성물을 체내에 투여할 때에 삼투압을 적절하게 유지하는 역할을 하며, 포스파티딜콜린을 용액상에서 더욱 안정화시키는 부수적인 효과도 나타낸다.

등장화제는 약학적으로 허용되는 당, 염 또는 이의 임의의 조합 또는 혼합물 일 수 있으며, 그 예로는 당으로 글루코오스, 또는 수용성 무기염으로 염화나트륨, 염화칼슘, 황산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜(propylene glycol), 분자량 1000 이하의 폴리에틸렌글리콜(polyethylene glycol) 등 일 수 있으며 더욱 바람직하게는 글리세린(Glycerin)일 수 있다. 이들은 하나 또는 둘 이상의 조합 형태로 사용될 수 있다. 상기 등장화제의 농도는 바람직하게는 2%(w/v) 내지 3%(w/v)이며, 본 발명의 조성물에 포함된 성분들의 종류, 량 등에 따라 각각의 혼합물이 모두 포함된 용액 제형이 등장액이 되도록 적절한 함량으로 조절될 수 있다.

또한 본 발명의 조성물에 포함되는 보존제는 이에 한정하지는 않지만, 벤질알코올(benzyl alcohol), 리도카인(lidocaine), 프로카인(procaine) 및 클로로부탄올(Chlorobutanol)로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. 더욱 바람직하게는 벤질알코올 일 수 있다.

벤질알코올은 방향족 알코올류 중의 하나로 무색투명한 액체이며, 특유의 향기와 타는 듯 한 맛이 있어 용해제 및 추출제, 휘발보류제, 식품 착향료 등으로 사용한다. 본 발명에서 지방 분해용 조성물에 포함되는 벤질알코올의 농도는 바람직하게는 0.1%(w/v) 내지 1%(w/v)이다.

안정화제는 인지질 리포좀의 안정성을 높이기 위해서 첨가하는 물질로서, 인지질에 삽입될 수 있는 특성을 지닐 수 있고, 그러한 물질로 스테로이드 또는 스테로이드 유사물질, 스핑코지질 또는 그 유도체 및 이들의 조합을 들 수 있다. 이들 물질을 구체적으로 예를 들자면, 콜레스테롤, β-콜레스테롤, 시스토스테롤, 에르고스테롤, 스티그마스테롤, 스티그마스테롤 아세테이트, 라노스테롤 및 이들의 조합일 수 있다. 가장 바람직하게는 콜레스테롤 일 수 있다.

비이온성 계면활성제(nonionic surfactant)는 수용액 상태에서 이온을 생성하지 않기 때문에, 다른 유형의 계면활성제와 함께 사용할 수 있다. 본 발명의 지방 분해용 조성물에 사용할 수 있는 비온성 계면활성제는 이에 한정하는 않지만, 트윈계 계면활성제(Tween series surfactant) 또는 폴록사머(Poloxamer)일 수 있다.

트윈계 계면활성제는 폴리옥시에틸렌소르비탄 지방산 에스테르로써, 아실 소르비탄에 폴리옥시에틸렌기를 부가함으로써 사용친수성을 높인 것이다. 폴록사머는 산화에틸렌(EO)과 산화프로필렌(PO)의 비이온성 블록 공중합체(block copolymers)이다. 상기 폴록사머는 약제 제형에서 계면활성제, 유화제, 용해제(solubilisation agents) 및 분산제로서 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물을 주사제로 제조하여, 지방 분해 효과를 검증해보았다.

본 발명의 일실시예에서 본 발명의 지방 분해용 조성물을 실험쥐의 뒷발바닥에 투여하여 육안 및 조직학적 검사를 실시한 결과, 2.5% 소듐 디옥시콜린산(Sodium Deoxycholate) 단독제제 또는 리포빈을 투여한 양성대조군과 비교해봤을 때, 부종과 홍반이 발생하지 않았고, 염증 반응의 증거인 neutrophil이 발견되지 않았고(실시예 2 참조), 마우스의 복부 피하지방에 주사한 결과, 리포빈과 비슷한 정도의 지방용해 효과가 있었다. 뿐만 아니라, 리포빈, DC 투여군은 천공이 생길만큼 심한 조직 괴사 및 섬유화가 발생했지만, 본 발명의 포스파티딜콜린 주사제는 조직괴사, 섬유화가 발생하지 않았다(실시예 3 참조).

본 발명의 조성물을 약학적 제제의 형태로 제조하는 경우, 유효성분을 약제학적으로 허용되는 통상적인 담체와 함께 배합하여 투여 목적에 따라, 정제, 경질 또는 연질 캡슐제, 과립제, 츄잉정, 환제, 분말, 엘릭시르, 현탁제, 에멀젼, 용액, 시럽과 경구 투여용 제제 또는 에어로졸, 새세이, 멸균 주사용액 또는 멸균 분말 등과 같은 비경구 투여용 제제의 형태로 제형화할 수 있다. 또한, 비경구 투여를 위한 용액 또는 현탁액 형태의 주사제는 비경구적으로, 예를 들면 피하, 정맥내, 근육내 또는 복강내로 투여될 수 있다. 일반적으로, 주사가능한 용액 또는 현탁액은 물, 염수, 수성 덱스트로스 및 관련된 설탕 용액제, 비휘발성 오일, 에탄올, 글리세린, 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜과 같은 글리콜류 등의 약제학적으로 허용되는 액상 담체 중에 유효량의 활성성분을 균질하게 혼합시켜 제조할 수 있다.

이외에도 필요에 따라 항세균제, 킬레이트제, 완충제, 보존제와 같은 보조제를 포함시킬 수도 있다. 상기 약제학적으로 허용되는 담체로는 약제학적으로 순수하고, 실질적으로 무독성이며, 유효성분의 작용을 저해하지 않는 임의의 모든 보조제를 사용할 수 있다.

주사제는 주약과 기타 첨가제를 주사용 증류수에 용해하고 이 용액을 세균여과기로 여과하여 무균처리한 후 무균상태에서 바이알에 충전한 후 밀봉하는 것으로, 주사제를 제조할 때에는 잔량을 채우기 위해, 물 이외에 주사용수를 사용할 수 있다. 주사용수는 고형주사제의 용해나 수용성 주사제를 희석하기 위하여 만들어진 증류수일 수 있다. 구체예로서, 글루코오스 주사, 자일리톨 주사, D-만니톨 주사, 프룩토스 주사, 생리식염수, 덱스트란 40 주사, 덱스트란 70 주사, 아미노산 주사, 링거액, 락트산-링거액 등을 들 수 있다.

또한 본 발명은 지방 분해용 조성물의 제조방법을 제공한다.

본 발명의 지방 분해용 조성물 제조방법은

(c) 물로 총 부피를 맞추고 교반하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 한다.

상기 지방 분해용 조성물의 제조방법을 단계별로 설명하면 다음과 같다.

(a) 전체 조성물을 기준으로 포스파티딜콜린(Phosphatidyl choline) 1 내지 30%(w/v)를 60 내지 80℃ 온도에서 30분 내지 2시간동안 교반하는 단계;

상기 (a) 단계에서는 포스파티딜콜린를 넣고 60 내지 80℃ 온도로 가온하면서 30분 내지 2시간동안 교반한다. 상기 (a) 단계의 포스파티딜콜린의 성분 및 농도는 상기 조성물에 관한 설명에 기재된 바와 동일하다.

한편 상기 (a)단계는 전체 조성물을 기준으로 0.1 내지 5%(w/v)의 등장화제, 0.01 내지 5%(w/v)의 비이온성 계면활성제, 0.1 내지 5%(w/v)의 안정화제 및 0.1 내지 5%(w/v)의 보존제 중 어느 하나 또는 이들 모두를 추가로 넣고 교반할 수 있다. 상기 등장화제 및 보존제의 성분 및 농도는 상기 조성물에 관한 설명에 기재된 바와 동일하다.

(b) 상기 (a)단계에서 교반한 혼합물에 60 내지 80℃로 가온한 유상용제를 전체 조성물에 대하여 5 내지 12%(w/v)로 혼합하는 단계;

상기 (b) 단계에서는 상기 (a)단계에서 교반한 포스파티딜콜린에 60 내지 80℃로 가온한 유상용제를 혼합하는 단계이다. 유상용제의 성분 및 농도는 상기 조성물에 관한 설명에 기재된 바와 동일하다.

(c) 물로 총 부피를 맞추고 교반하는 단계;

상기 (c) 단계에서는 물로 총 부피를 맞추고 균질하게 혼합하는 단계이다. 이 단계에서 유상용제와 물이 만나 용액이 뿌옇게 변하게 된다.

상기 제조방법은

(d) 상기 (c) 단계에서 교반한 용액을 상온(15 내지 25℃)으로 냉각하여 포스파티딜콜린 입자경이 10 내지 500 nm가 되도록 미세화 하는 단계를 포함할 수 있다.

상기 (d) 단계는 상온으로 냉각시켜 균질화 공정을 통해 포스파티딜콜린 입자경이 10 내지 500 nm가 되도록 미세화하는 단계이다. 상기 입자경은 바람직하게는 50 내지 300 nm이다.

본 발명의 포스파티딜콜린, 유상용제 및 물을 포함하는 지방 분해용 조성물은 부종, 홍반, 조직괴사, 염증을 일으키지 않으면서도 지방을 용해하는데 효과적이다.

도 1은 포스파티딜콜린 농도별 투여 실험군과 리포빈 투여 대조군의 뒷발 두께를 측정한 결과이다.
도 2는 포스파티딜콜린 농도별 투여 실험군과 리포빈 투여 대조군의 뒷발 모양을 시간 별로 4×4cm 축척자 위에서 촬영한 사진이다.
도 3은 포스파티딜콜린 농도별 투여 실험군과 리포빈 투여 대조군의 뒷발 조직을 잘라내어, hematoxylin eosin으로 염색한 후 현미경으로 촬영한 사진이다.(A - PL 2.5% 투여군, B - PL 5% 투여군, C - PL 7.5% 투여군, D - PL 10% 투여군, E - Lipobean 투여, F-DC 2.5% 투여/ 하얀 화살표 - neutrophil 생성 부위)
도 4는 포스파티딜콜린 농도별 투여 실험군 및 대조군들을 희생시킨 후, 복부 부위를 찍은 사진이다.
도 5는 포스파티딜콜린 농도별 투여 실험군 및 대조군들을 희생시킨 후, 복부 부위의 피하지방 조직을 H&E 염색하여 광학현미경으로 찍은 사진이다(검은 화살표 : 지방 용해 부분, 빨간 화살표 : 염증 발생 부분).

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1>

포스파티딜콜린 함유 주사제 조성물의 제조

분석저울로 soybean oil(Sigma-Aldrich Company, St. Louis, MO, USA)을 70±10℃ water bath에서 1시간 가온한다. 동시에 주성분인 phosphatidylcholine 및 glycerin, benzyl alcohol을 분석저울로 달아 주사용수 적량을 채운 유리바이알에 넣는다. 바이알에 magnetic bar을 넣고 stirrer에서 70±10℃으로 가온하면서 800rpm으로 1시간 교반한다. 바이알 중의 수상을 70±10℃, 800rpm으로 교반상태를 유지하면서 가온한 유상을 drop by drop 방식으로 혼합한다. 70±10℃로 가온된 주사용수를 넣어 최종 부피를 10ml로 맞춘다. 이후 같은 조건으로 5분간 교반하여 coarse emulsion 상태로 유화한다. 제조된 유제를 상온으로 냉각한다. Coarse emulsion을 High pressure homogenizer(Nano DeBEE, B.E.E. International. Inc., USA)을 이용하여 10000psi에서 5cycle 시행하여 유제의 입자를 미세화 (유제의 입자경이 50-300 nm)한다. 인지질 주사제 조성물은 2.5%(w/v), 5%, 7.5%, 10%의 농도로 준비하였다.

인지질 주사제 조성물

인지질 농도 %(W/V)			2.5	5	7.5	10
배합목적		성분명	분량 (mg)	분량 (mg)	분량 (mg)	분량 (mg)
1	주성분	Phosphatidylcholine	250.0	500.0	750.0	1000.0
2	유상용제	Soybean oil	1000.0	1000.0	1000.0	1000.0
3	등장화제	Glycerin	225.0	225.0	225.0	225.0
4	보존제	Benzyl alcohol	20.0	20.0	20.0	20.0
5	수상용제	Water for injection	적량	적량	적량	적량
Total			10.0 ml

< 실시예 2>

부종과 염증 여부 측정

<2-1> 발바닥 크기 측정

상기 표 1의 주사제 약물, Lipobean(아미팜에서 구입/양성대조군) 또는 소듐 디옥시콜린산(Sodium Deoxycholate, 이하 DC) 2.5% (식염수를 용매로 사용)를 0.1mL씩 스프라그 돌리의 6주령 수컷(체중 : 170~200g)의 뒷발 발바닥에 주사하였다. 약물 주사한 후, 1,2,3,4 시간 후마다 발바닥의 두께를 캘리퍼로 측정하였으며, 측정자는 실험의 순서나 목적을 모르는 상태(맹검시험)로 시행했다.

두께 측정결과는 아래 [표 2]와 도 1에 표시하였고, 두께 측정 시 찍은 발바닥 사진(4×4 cm 축척자 이용)은 도 2에 표시하였다.

발 두께 측정 결과

	0 h	1 h	2 h	3 h	4 h
PL 2.5%	0.321	0.350	0.332	0.360	0.373
PL 5%	0.310	0.351	0.347	0.402	0.348
PL 7.5%	0.335	0.408	0.339	0.351	0.341
PL 10%	0.325	0.386	0.354	0.365	0.341
Lipobean	0.321	0.579	0.577	0.569	0.622
DC 2.5%	0.324	0.720	0.706	0.682	0.625

도 1 및 표 2에서 PL 투여군의 경우, 뒷발 두께가 리포빈, DC 보다 확연히 얇은 것을 확인할 수 있고, 홍반도 PL 투여군의 경우가 훨씬 덜 나타났다.

<2-2> 조직학적 검사

투약 4시간 후, 쥐들을 희생시켜, 발바닥을 자른 후, 발바닥의 피부를 잘라내어 10% 포르말린 수용액으로 고정시켰다. 이를 hematoxylin eosin 용액에 염색시켜 형태학적 변화를 관찰하였다. 관찰결과는 도 3에 표시하였다.

포스파티딜콜린만 투여한 실험군은 부종, neutrophil(도 3의 하얀 화살표)이 보이지 않았으나, 리포빈 투여군 및 DC 투여군은 부종 및 neutrophil이 보였다.

< 실시예 3>

조직 괴사 및 지방분해 효과

<3-1> 실험 준비

C57BL/6 흰쥐(4주령)에게 12주 동안 고지방식이(Research diet, 60 %kcal lipid)를 섭취하도록 하여 고도 비만 상태로 만든 후, 24시간, 48시간 뒤에 식염수(음성 대조군), 표 1의 주사물질, 리포빈, DC 2.5%를 복부에 0.2mL씩 피하주사 한다. 약물주입이 완료된지 8일 후에, 마우스를 희생시킨다.

<3-2> 외관을 통한 조직 괴사의 판단

희생된 마우스에 피하주사를 한 부위를 육안으로 살펴보았다. 결과는 도 4에 기재하였다. 포스파티딜콜린을 주사한 실험군의 경우, 육안으로 보기에 괴사 또는 종괴가 보이지 않았고, 만져봤을 때에도 딱딱하지 않았다. 그러나 리포빈 투여군에서은 주사 부위에 괴사가 보였고, 만져봤을 때, 심하게 딱딱했다. DC 2.5% 투여군은 피부에 천공이 생길정도로 괴사 정도가 매우 심했고, 해부 결과(사진 미도시) 주변 조직들까지 섬유화가 퍼져있었다.

<3-3> 지방세포 관찰

희생된 마우스의 복부를 절개하여 신속하게 피하지방을 적출하여 4% 포름알데히드(formaldehyde) 용액에 담가 고정하였다. 고정한 다음 수세와 탈수과정을 거친 후 파라핀(paraffin) 용액으로 처리하여 파라핀 블락(paraffin block)을 만들고 4μm두께로 박절하여 헤마토시린(hematoxylin)과 에오신(eosin)으로 염색한 뒤 광학현미경으로 관찰하였다. 결과는 도 5에 표시하였다.

상기 도 5에서 포스파티딜콜린(PC) 2.5% 주사한 실험군은 식염수 대조군과는 거의 차이가 없는 온전한 상태의 지방세포가 관찰되고, 일부에서는 지방조직이 용해(검은 화살표)된 것을 발견할 수 있다. 포스파티딜콜린 5.0% 주사제 투여군은 식염수 대조군과 비교해봤을 때, 지방 용해의 흔적이 곳곳에서 나타났고, 지방 용해양도 PC 2.5% 보다 더 크다. PC 7.5% 투여군의 경우, 지방 용해의 흔적과 더불어 과립구가 모여들어 약간의 염증 반응(빨간 화살표)이 보인다. 리포빈 투여군은 PC 5% 투여군과 비슷한 수준의 지방용해가 관찰되었고, 염증 반응이 다소 보였다. DC 2.5% 투여군은 지방 용해 효과는 거의 관찰되지 않았으나, 염증이 다른 실험군들보다 많이 발생되었다.

식염수 대조군과 PC 주사제 투여군의 지방세포 크기를 측정해보았다. 측정 결과, 아래 표 3에 표시하였다.

지방 세포의 크기

	식염수 대조군	PC 2.5%	PC 5.0%	PC 7.5%
Size ()	116.7±8.9	102.7±5.9	91.9±10.4	95.8±15.2

대체적으로 PC 농도 의존적으로 지방세포의 크기가 줄어드는 것을 알 수 있다. 그러나 7.5% 보다는 5.0% 일때, 최고의 효과를 보인다. 이러한 결과는 7.5%에서는 염증이 발생하는데, 염증이 지방세포 용해 효과에 영향을 미친 것으로 추측된다.

< 제조예 1>

콜레스테롤( 안정화제 )을 첨가한 주사용 조성물의 제조

전체 조성물에 대하여 포스파티딜콜린 10%(w/v), 콜레스테롤 2%(w/v)를 Round bottom flask에서 유기용매인 에탄올에 완전히 용해시킨 후, 감압증류장치로 에타올을 70℃이하의 온도에서 증발시켜, 포스파티딜콜린을 건조시킨다. 제조하고자 하는 부피에 맞추어 적량한 정제수에 Tween계 계면활성제(전체 조성물 대비 1%(w/v))를 가한 후, 이를 건조시킨 포스파티딜콜린에 가하여 조(crude) 리포좀을 형성한다. 조 리포좀을 균질기를 사용하여 10 내지 500 nm의 입자경을 갖도록 조절한다. 콜레스테롤은 포스파티딜콜린 입자들의 안정성을 증대시키는 역할을 해준다.

< 제조예 2>

스테아린산글리세린(유상용제)을 이용한 주사용 조성물의 제조

스테아린산글리세린(10%(w/v))을 60℃에서 융해시켜, 이에 폴록사머(poloxamer) 5%(w/v), 포스파티딜콜린 5%(w/v)을 가한 후, 균질기로 균질화하면서 온도를 실온(20℃)으로 떨어뜨린다. 이후 적량한 정제수를 넣고 균질화하여 입자경이 10 내지 500nm가 되도록 조절한다. 상기 성분들의 함량은 전체 조성물을 기준으로 기재한 것이다.

본 발명의 포스파티딜콜린, 유상용제 및 물로 이루어진 조성물은 부종, 조직 괴사, 염증을 일으키지 않으면서 지방을 용해하는데 효과적이기 때문에, 부작용이 적은 지방 용해제로 사용할 수 있고, 따라서 산업상 이용가능성이 높다.

Claims

전체 조성물을 기준으로
포스파티딜콜린(Phosphatidyl choline) 1 내지 15%(w/v);
유상용제 1 내지 30%(w/v); 및
잔량의 물을 포함하는 지방 분해용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 포스파티딜콜린은 전체 조성물을 기준으로 2 내지 12% (w/v) 포함되는 것을 특징으로 하는 지방 분해용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 유상용제는 식물유, 중쇄중성지방(MCTs), 콜레스테롤, 스테아린산 글리세린으로 이루어진 그룹에서 선택되는 유상용제인 것을 특징으로 하는 지방 분해용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 전체 조성물을 기준으로 0.1 내지 5%(w/v)의 등장화제, 0.01 내지 5%(w/v)의 비이온성 계면활성제, 0.1 내지 5%(w/v)의 안정화제 및 0.1 내지 5%(w/v)의 보존제로 이루어진 그룹에서 선택되는 하나 이상의 물질을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 지방 분해용 조성물.
제3항에 있어서, 상기 보존제는 벤질알코올(benzyl alcohol), 리도카인(lidocaine), 프로카인(procaine) 및 클로로부탄올(Chlorobutanol)로 이루어진 군에서 선택되는 물질인 것을 특징으로 하는 지방 분해용 조성물.
제1항의 조성물을 유효성분으로 포함하는 지방 분해용 주사제.
(a) 전체 조성물을 기준으로 포스파티딜콜린(Phosphatidyl choline) 1 내지 15%(w/v)를 60 내지 80℃ 온도에서 30분 내지 2시간동안 교반하는 단계;
(b) 상기 (a)단계에서 교반한 혼합물에 60 내지 80℃로 가온한 유상용제를 전체 조성물에 대하여 1 내지 30%(w/v)로 혼합하는 단계; 및
(c) 물로 총 부피를 맞추고 교반하는 단계
를 포함하는 지방 분해용 조성물의 제조방법.
제7항에 있어서, 상기 제조방법은
(d) 상기 (c) 단계에서 교반한 용액을 상온(15 내지 25℃)으로 냉각하여 포스파티딜콜린 입자경이 10 내지 500 nm가 되도록 미세화 하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 지방 분해용 조성물의 제조방법.
제7항에 있어서, 상기 (a)단계는 전체 조성물을 기준으로 0.1 내지 5%(w/v)의 등장화제, 0.01 내지 5%(w/v)의 비이온성 계면활성제, 0.1 내지 5%(w/v)의 안정화제 및 0.1 내지 5%(w/v)의 보존제 중 어느 하나 또는 이들 모두를 추가로 넣고 교반하는 것을 특징으로 하는 지방 분해용 조성물 제조방법.