KR20140130683A

KR20140130683A - 항바이러스 활성 디히드로퀴나졸린 유도체를 함유하는 제약 제제

Info

Publication number: KR20140130683A
Application number: KR20147023803A
Authority: KR
Inventors: 커스틴 파울루스; 윌프리트 슈왑; 도미니크 그룬더; 피터 판 후게베스트
Original assignee: 아이쿠리스 게엠베하 운트 코. 카게
Priority date: 2012-02-29
Filing date: 2013-02-28
Publication date: 2014-11-11
Also published as: MX2014010364A; WO2013127970A1; EA201400963A1; ME03448B; KR102149561B1; LT2819648T; TN2014000345A1; SG11201405294XA; CA2865203A1; AU2013224947B2; PT2819648T; EP3556350B1; PT3556350T; EP3556350A1; US10603384B2; PL2819648T3; DK3556350T3; LT3556350T; MA35941B1; ZA201405949B

Abstract

본 발명은, {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산을 시클로덱스트린, 리신 및 아르기닌으로부터 선택되는 하나 이상의 부형제와 조합하여 함유하는, 특히 정맥내 투여를 위한 제약 제제, 그의 제조 방법, 질환을 치료 및/또는 예방하기 위한 그의 용도, 특히 바람직하게는 시토메갈로바이러스에 대한 항바이러스제로서의 그의 용도에 관한 것이다.

Description

항바이러스 활성 디히드로퀴나졸린 유도체를 함유하는 제약 제제 {PHARMACEUTICAL PREPARATION CONTAINING AN ANTIVIRALLY ACTIVE DIHYDROQUINAZOLINE DERIVATIVE}

본 발명은 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산 또는 그의 염, 용매화물 또는 염의 용매화물을 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방 방법에 사용되는 조성물의 제조 방법 및 용도 뿐만 아니라, 바이러스 감염을 치료 및/또는 예방하는데 사용하기 위한, 특히 인간 시토메갈로바이러스 (HCMV) 또는 또 다른 대표적인 헤르페스 바이러스과 군에 의한 감염을 치료하는데 사용하기 위한 약물의 제조에 있어서 상기 조성물의 용도에 관한 것이다.

{8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산은, 예를 들어 그의 전체 개시내용이 본원에 참조로 포함된 WO 2004/096778로부터 공지되어 있으며, 항바이러스 활성 물질을 위한, 특히 인간 시토메갈로바이러스에 의해 유발된 감염의 퇴치를 위한 유망한 후보로서 본 출원인에 의해 개발되었다. 그러나, 개발 도중에 물질의 용해도와 관련하여 문제가 발생한다는 것이 발견되었고, 특히 정맥내 투여를 위한 안정한 제제 또는 정맥내 투여에 사용되는 용액을 제조하기 위한 용이 가용성 고체 조성물을 제조하는 것이 복잡하다고 입증되었다.

따라서 본 발명의 목적은, {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산을 함유하고, 장기 안정성을 가지며 저장될 수 있고, 또한 실질적으로 생리학적 pH를 갖는, 특히 정맥내 투여를 위해 사용되는 제약 조성물을 기재하는 것이다.

본 발명의 추가 목적은, 가능한 단순하고 신뢰할 수 있는 방식으로 제조되는, {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산을 함유하고 또한 적절한 시간 기간, 예를 들어 24시간 초과 동안 안정하게 유지되는 정맥내 투여를 위한 제약 조성물을 기재하는 것이다.

본 발명의 범위 내에서, 용어 "안정성"은 제약 조성물의 구성성분의 화학적 안정성 뿐만 아니라, 용액 자체의 안정성을 의미한다고 이해된다. 특히, 본 발명에 따른 조성물은 구성성분의 침전에 대하여 안정하여야 한다.

이와 관련해서, 용어 "안정성"은 본 발명에 따른 제약 조성물이, 이러한 액체 제약 조성물을 HPLC 방법 1-3 중 하나를 사용하여 측정하는 경우, 2℃ 내지 8℃ 또는 25℃ 또는 40℃에서 적어도 2주, 바람직하게는 적어도 3주, 가장 바람직하게는 적어도 6주의 저장 기간 동안 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산을 >90%, 바람직하게는 >95%의 최소 비율로 함유함을 의미한다. 상기 액체 제약 조성물의 안정성이 본 발명의 범위 내에서 적절한 것으로 고려된다.

또한, 용어 "안정성"은 본 발명에 따른 조성물이 2℃ 내지 8℃에서 주입을 위한 0.8-10 mg/ml의 최종 농도로 희석되거나 재구성된 후, 이러한 희석 또는 재구성 후의 액체 제약 조성물을 HPLC 방법 1-3 중 하나를 사용하여 측정하는 경우, 적어도 4시간, 바람직하게는 적어도 6시간, 가장 바람직하게는 적어도 24시간의 저장 기간 동안 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산을 90%, 바람직하게는 적어도 95%의 최소 비율로 함유함을 의미한다. 상기 희석 또는 재구성 후의 제약 조성물의 안정성이 본 발명의 범위 내에서 적절한 것으로 고려된다.

놀랍게도 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산 뿐만 아니라 물을 함유하는, 특히 정맥내 투여를 위해 사용되는 제약 조성물은 시클로덱스트린, 리신 및 아르기닌로부터 선택되는 하나 이상의 부형제를 첨가함으로써 안정화될 수 있다는 것을 발견하였다. 추가로, 이러한 조성물을 동결건조시켜서, 주사 목적을 위한 단순한 방식으로, 예를 들어 물을 첨가함으로써 재구성할 수 있는 안정한 고체 제약 조성물을 수득할 수 있고, 그 결과 차례로, 예를 들어 정맥내 투여를 위한 안정한 제약 조성물을 수득할 수 있다는 것을 발견하였다.

따라서 본 발명의 대상은, 하기 구성성분을 포함하는, 특히 정맥내 투여를 위한 제약 조성물이다:

a) {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산 또는 그의 염, 용매화물 또는 염의 용매화물,

b) 시클로덱스트린, 리신 및 아르기닌으로부터 선택되는 하나 이상의 부형제, 및

c) 물.

또한, 본 발명의 대상은 상기 제약 조성물의 동결건조에 의해 제조된 제약 조성물이다.

본 발명의 범위 내에서, 용어 "염"은 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산의 생리학상 허용되는 염을 의미한다고 이해된다. {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산의 생리학상 허용되는 염은 무기 산, 탄산 및 술폰산의 산 부가염, 예를 들어 염산, 브로민화수소산, 황산, 인산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 톨루엔술폰산, 벤젠술폰산, 나프탈렌디술폰산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 프로피온산, 락트산, 타르타르산, 말산, 시트르산, 푸마르산, 말레산 및 벤조산의 산 부가염을 포함한다.

{8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산의 생리학상 허용되는 염은 또한 일반적 염기의 염, 예를 들어 및 바람직하게는 알칼리 금속 염 (예를 들어 나트륨 및 칼륨 염), 알칼리 토금속 염 (예를 들어 칼슘 및 마그네슘 염), 암모니아 또는 1 내지 16 C-원자를 갖는 유기 아민, 예를 들어 및 바람직하게는 모노에틸아민, 디에틸아민, 트리에틸아민, 에틸디이소프로필아민, 모노에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 디시클로헥실아민, 디메틸아미노에탄올, 2-아미노-2-메틸-1,3-프로판디올, 프로카인, 디벤질아민, N-메틸모르폴린, 에틸렌 디아민 및 N-메틸피페리딘으로부터 유도된 암모늄 염 뿐만 아니라 알칼리성 아미노산의 염을 포함한다.

본 발명의 범위 내에서, 용어 "용매화물"은 용매 분자와의 배위를 통하여 착물을 형성하는 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산의 형태를 의미한다. 수화물은 물과 배위가 일어나는 특수 형태의 용매화물이다.

당업자에게 자명한 것처럼, {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산은 디히드로퀴나졸린 고리에서 4-위치의 탄소에 입체중심을 갖는다. 본 발명의 범위 내에서, 상기 탄소가 S-배위를 갖는 경우 특히 바람직하다.

본 발명에 따른 시클로덱스트린은 임의의 변형 또는 비-변형된 시클로덱스트린이라고 이해된다. 이 경우에, 고리 내 공간의 크기 때문에, β-시클로덱스트린, 특히 변형된 β-시클로덱스트린, 예컨대 히드록시알킬-β-시클로덱스트린, 예를 들어 히드록시메틸-β-시클로덱스트린, 히드록시에틸-β-시클로덱스트린 또는 히드록시프로필-β-시클로덱스트린, 알킬-히드록시알킬-β-시클로덱스트린, 예를 들어 메틸-히드록시프로필-β-시클로덱스트린 또는 에틸-히드록시프로필-시클로덱스트린 또는 술포알킬-시클로덱스트린이 바람직하다.

본 발명의 범위 내에서, 제조 목적을 위해 사용되는 물은 통상 주사에 사용되는 물이다.

본 발명의 범위 내에서, 표현 "포함한다" 또는 "포함하는"은 명백하게 언급된 성분 또는 단계와 함께 비-제한적 열거를 나타내고, 임의의 다른 성분 또는 단계를 배제하지 않는다.

본 발명의 범위 내에서, 표현 "이루어진다" 또는 "이루어진"은 명백하게 언급된 성분 또는 단계 이외에 제한적 열거를 나타내고, 임의의 다른 성분 또는 단계를 배제한다.

본 발명의 범위 내에서, 표현 "실질적으로 이루어진다" 또는 "실질적으로 이루어진"은 부분 제한적 열거를 나타내고, 언급된 성분 및 단계 이외에, 단지 본 발명에 따른 조성물 또는 방법의 특징을 실질적으로 변경하지 않거나 본 발명에 따른 조성물 또는 방법의 특징을 실질적으로 변경하지 않는 양으로 존재하는 다른 성분 및 단계만을 갖는 조성물 또는 방법을 포함한다.

본 발명의 범위 내에서, 조성물 또는 방법이 표현 "포함한다" 또는 "포함하는"을 사용하여 기재되는 경우, 이는 언급된 성분 또는 단계로 이루어지거나 또는 언급된 성분 또는 단계로 실질적으로 이루어진 조성물 또는 방법을 명백하게 포함한다.

본 발명의 범위 내에서, 본 발명에 따른 제약 조성물이 바람직하게는 포스페이트 완충제, 트리스 완충제 및 시트레이트 완충제로부터 선택되는 하나 이상의 완충제를 추가로 포함하는 경우 바람직하다.

특히, 완충제를 첨가함으로써 조성물이 항상 생리학적 pH를 갖도록 보장할 수 있다. 명명된 완충제는 특히 그들이 널리 허용된다는 사실 때문에 바람직하다.

본 발명의 범위 내에서, 본 발명에 따른 제약 조성물이 바람직하게는 글루코스, 수크로스, 락토스, 말토스, 트레할로스, 소르비톨 및 만니톨로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 당을 추가로 포함하는 경우 더 바람직하다.

본 발명에 따른 제약 조성물은 당, 특히 상기에 명백하게 언급된 당 중 하나를 첨가함으로써 다시 유의하게 안정화될 수 있다는 것을 발견하였다. 또한, 당의 첨가는 동결건조에 의한 고체 조성물의 제조 뿐만 아니라 그러한 고체 조성물의 새로운 재구성을 용이하게 하여 특히 정맥내 투여를 위한 제약 조성물을 제조할 수 있다는 것을 발견하였다. 또한, 적어도 하나 이상의 당의 첨가는 용액의 오스몰랄농도를 조정하고 발생할 수 있는 임의의 용혈을 억제하는데 도움이 된다.

본 발명의 범위 내에서, {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산 또는 그의 염, 용매화물 또는 염의 용매화물은 제약 조성물 중에, 조성물 1 ml 당 순수 활성 화합물 1 내지 100 mg, 바람직하게는 2 내지 50 mg, 보다 바람직하게는 2 내지 25 mg, 특히 5 내지 20 mg에 상응하는 양으로 존재하는 것이 더 바람직하다.

용액의 안정성을 위해 및 또한 단순한 저장의 관점에서, {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산의 양은 상기 언급된 범위로 존재하는 경우 유리한 것으로 입증되었다.

본 발명의 범위 내에서, 조성물의 pH가 7.5 내지 8.5의 범위인 것이 더 바람직하다.

상기 언급된 pH 범위는 생리학적 pH 범위 내에 있는 pH이기 때문에 유리한 것으로 입증되었다. 또한, 본 발명에 따른 제약 조성물의 용해도는 약 알칼리성 범위에서, 즉 pH 값 7.0 이하에서보다 7.0 초과의 범위에서 훨씬 더 우수하다는 것이 밝혀졌다.

본 발명의 범위 내에서, 하나 이상의 부형제는 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산의 함량에 대하여 1 내지 5 당량, 바람직하게는 2 내지 5 당량, 보다 바람직하게는 2.5 내지 4.5 당량의 양으로 제약 조성물 중에 존재하는 것이 더 바람직하다.

본 발명의 범위 내에서, 상기 조성물은 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산의 함량에 대하여 1 내지 10 당량, 바람직하게는 2 내지 7 당량, 특히 2.5 내지 5 당량의 시클로덱스트린 및 0 내지 2.0 당량, 바람직하게는 0.5 내지 1.5 당량, 특히 0.75 내지 0.9 당량의 NaOH를 포함하는 것이 더 바람직하다.

본 발명의 범위 내에서, 용어 "당량"은 "몰 당량"을 의미한다고 이해된다.

상기 언급된 범위에서 하한치로 주어진 것보다 더 적은 부형제를 첨가하는 것은 용액의 부적절한 안정화의 원인이 된다는 것을 발견하였다. 상기 언급된 상한치를 초과하는 양의 부형제를 첨가하는 것은 조성물의 안정성의 관점에서 더 유리하지 않다. 다량의 부형제를 첨가하는 것은 또한 활성 물질과의 상호작용으로 이어지므로 조성물의 유효성을 감소시키는 경향이 있을 것이라는 것이 또한 염려된다.

본 발명의 범위 내에서, 조성물 100 ml를 기준으로 하여 하기 구성성분을 포함하는 제약 조성물이 특히 바람직하다:

a) 0.25 - 2.0 g, 바람직하게는 0.5 - 1.25 g의 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산 또는 그의 염, 용매화물 또는 염의 용매화물,

b) 0.25 - 2.5 g, 바람직하게는 0.5 g - 1.5 g의 아르기닌,

c) 1.5 - 9.5 g, 바람직하게는 2.0 - 4.75 g의 글루코스,

d) 0.5 - 4.0 g, 바람직하게는 0.75 - 2.0 g의 NaH₂PO₄, 및

e) 물

(여기서 상기 조성물의 pH는 7.5 내지 8.5, 바람직하게는 7.7 내지 8.0의 범위이다).

또한, 본 발명의 범위 내에서, 조성물 100 ml를 기준으로 하여 하기 구성성분을 포함하는 제약 조성물이 특히 바람직하다:

a) 0.5 - 2.5 g, 바람직하게는 1.0 - 2.0 g의 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산 또는 그의 염, 용매화물 또는 염의 용매화물,

b) 10.0 - 30.0 g, 바람직하게는 12.5 - 22.5 g의 HP-β-시클로덱스트린,

c) 0.0 - 350 mg, 바람직하게는 75 - 225 mg, 특히 100 - 125 mg의 NaOH, 및

d) 물

(여기서 상기 조성물의 pH는 7.5 내지 8.5의 범위이다).

후자의 조성물에서 NaOH는 바람직하게는 대략 0.1M 수용액의 형태로 사용된다.

이런 방식으로 구성된 제약 조성물은 임상적 유효성 및 또한 안정성에 관하여 둘 다 특히 유리하다고 밝혀졌다.

본 발명에 따른 제약 조성물은 일반적으로, 먼저 부형제의 수용액을 제조한 다음, 이 수용액에 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산을 첨가하고, 필요한 경우 기타 첨가제, 예컨대 하나 이상의 당 및/또는 하나 이상의 완충제를 첨가함으로써 제조된다. 모든 구성성분을 첨가한 후, 제약 조성물의 pH를 목적하는 값으로 조정하는데, 산 또는 완충제를 첨가함으로써 pH를 알칼리성 범위의 값으로부터 생리학적 pH 값을 향하여 조정하는 경우, 이러한 조정은 pH 값의 과도한 국소적 감소로 인한 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산의 임의의 침전을 피하기 위해 천천히 및 주의깊게 수행한다는 사실에 특히 주의를 기울인다.

무엇보다도, 개별 용액, 즉 부형제 및 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산을 함유하는 한 용액, 및 다른 부형제, 예컨대 하나 이상의 당 및/또는 하나 이상의 완충제를 함유하는 다른 용액을 제조하고, 다음 단계에서 용액을 목적하는 pH로 조정한 다음 서로 혼합하는 것이 또한 가능하다.

{8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산을 알칼리성 수용액, 예를 들어 알칼리 금속 수산화물 용액, 바람직하게는 NaOH 용액에 적어도 부분적으로 용해시킨 다음, 부형제 뿐만 아니라 필요한 경우 다른 구성성분을 용액에 첨가하고, 필요한 경우 용액을 목적하는 pH 값으로 조정하는 것이 또한 가능하다.

상기 언급된 방법에 의해 수득된 용액을 동결건조시켜 본 발명에 따른 고체 제약 조성물을 수득하는 것이 또한 가능하다.

따라서 본 발명의 대상은 또한 하기 단계를 갖는 본 발명에 따른 제약 조성물의 제조 방법이다:

A) 하나 이상의 부형제를 물에 용해시키는 단계,

B) {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산 또는 그의 염, 용매화물 또는 염의 용매화물을 단계 A)에서 수득된 용액에 첨가하는 단계,

C) 필요한 경우, 하나 이상의 당 및/또는 하나 이상의 완충제를 첨가하는 단계,

D) 제약 조성물을 수득하기 위해 pH를 목적하는 값으로 조정하는 단계, 및

E) 단계 D)에서 수득된 용액을 멸균 여과하고, 적합한 용기 내로 충전하는 단계,

F) 필요한 경우, 단계 E)에서 수득된 용액을 가열 하에 최종 멸균하는 단계.

본 발명의 대상은 또한 하기 단계를 갖는 본 발명에 따른 제약 조성물의 제조 방법이다:

I.) 하나 이상의 부형제를 물의 일부에 용해시키는 단계,

II.) {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산 또는 그의 염, 용매화물 또는 염의 용매화물을 단계 I.)에서 수득된 용액에 첨가하는 단계,

III.) 필요한 경우, 단계 II.)에서 수득된 용액의 pH를 목적하는 값으로 조정하여 제1 용액을 수득하는 단계,

IV.) 하나 이상의 당 및/또는 완충제를 물의 일부에 용해시키는 단계,

V.) 필요한 경우, 단계 IV.)에서 수득된 용액의 pH를 목적하는 값으로 조정하여 제2 용액을 수득하는 단계,

VI.) 제약 조성물을 수득하기 위해 제1 및 제2 용액을 혼합하는 단계, 및

VII.) 단계 VI.)에서 수득된 용액을 멸균 여과하고, 적합한 용기 내로 충전하는 단계,

VIII.) 필요한 경우, 단계 VII.)에서 수득된 용액을 가열 하에 최종 멸균하는 단계.

a.) {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산 또는 염, 용매화물 또는 염의 용매화물을 NaOH 수용액, 바람직하게는 0.1M NaOH 수용액에 첨가하여 용액 또는 현탁액을 생산하는 단계,

b.) 단계 a.)에서 수득된 용액 또는 현탁액에 물을 첨가하는 단계,

c.) 단계 b.)에서 수득된 용액 또는 현탁액에 시클로덱스트린 및 NaCl을 첨가하는 단계,

d.) 단계 c.)에서 수득된 용액을 멸균 여과하고, 적합한 용기 내로 충전하는 단계,

e.) 필요한 경우, 단계 d.)에서 수득된 용액을 가열 하에 최종 멸균하는 단계.

본 발명의 대상은 또한 상기 언급된 방법에 따라 제조된 제약 조성물을 동결건조시키는, 고체 제약 조성물의 제조 방법이다.

본 발명에 따른 제약 조성물을 제조하는데 사용되는 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산 또는 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물은 예를 들어 WO 2006/133822에 공지되어 있고 그에 기재된 방법에 의해 제조될 수 있다.

제조는 특히 하기 화학식 II를 갖는 화합물의 에스테르를 염기로 비누화함으로써 이루어진다.

<화학식 II>

화학식 II를 갖는 화합물은 하기 화학식 III을 갖는 화합물을 염기의 존재 하에 하기 화학식 IV를 갖는 화합물과 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

<화학식 III>

<화학식 IV>

화학식 III을 갖는 화합물은 하기 화학식 V를 갖는 화합물을 염기의 존재 하에 옥시염화인, 삼염화인 또는 오염화인과 반응시킴으로써 제조될 수 있다

<화학식 V>

화학식 V를 갖는 화합물은 하기 화학식 VI을 갖는 화합물을, 제1 단계에서 팔라듐 촉매 및 발연황산의 존재 하에 아크릴산 메틸 에스테르와 반응시키고, 제2 단계에서 염기와 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

<화학식 VI>

화학식 IV 및 VI을 갖는 화합물은 원칙적으로 당업자에게 공지되어 있거나 문헌으로부터 공지된 통상의 방법에 의해 제조될 수 있다.

화학식 II를 갖는 화합물의 에스테르를 비누화하여 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산을 형성하는 것은, 화학식 II를 갖는 화합물을 예를 들어 0.5 내지 10시간 이내, 바람직하게는 1 내지 5시간 이내에 정상 압력에서 18℃ 내지 용매의 환류 온도, 바람직하게는 18 내지 50℃, 보다 바람직하게는 20 내지 30℃의 온도 범위에서 불활성 용매 중 염기와 반응시킴으로써 이루어진다.

염기는, 예를 들어 알칼리 히드록시드, 예컨대 수산화나트륨, 수산화리튬 또는 수산화칼륨, 또는 알칼리 카르보네이트, 예컨대 탄산세슘, 탄산나트륨 또는 탄산칼륨, 또는 알콜레이트, 예컨대 나트륨 또는 칼륨 메탄올레이트 또는 나트륨 또는 칼륨 에탄올레이트이며, 여기서 염기는 수용액으로 존재할 수 있다.

불활성 용매는, 예를 들어 에테르, 예컨대 1,2-디메톡시에탄, 메틸 tert-부틸 에테르 (MTBE), 디옥산, 테트라히드로푸란, 글리콜 디메틸 에테르 또는 디에틸렌 글리콜 디메틸 에테르, 알콜, 예컨대 메탄올, 에탄올, n-프로판올, 이소-프로판올, n-부탄올 또는 tert-부탄올, 또는 물, 또는 용매의 혼합물이다.

물 및 MTBE 중 수산화나트륨이 바람직하다.

염기의 존재 하에 화학식 III을 갖는 화합물과 화학식 IV를 갖는 화합물로부터 화학식 II를 갖는 화합물을 합성하는 것은, 예를 들어 2 내지 48시간 이내, 바람직하게는 4 내지 12시간 이내에 정상 압력에서 40℃ 내지 용매의 환류 온도의 범위, 바람직하게는 용매의 환류 온도에서 불활성 용매 중에 일어난다.

염기는, 예를 들어 아민 염기, 예컨대 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔 (DBU), 1-(3-메톡시페닐)피페라진 또는 트리에틸아민, 또는 다른 염기, 예컨대 칼륨 tert-부틸레이트이다.

불활성 용매는, 예를 들어 클로로벤젠 또는 에테르, 예컨대 1,2-디메톡시에탄, 디옥산, 글리콜 디메틸 에테르 또는 디에틸렌 글리콜 디메틸 에테르이다.

디옥산 중 DBU가 바람직하다.

화학식 V를 갖는 화합물을 화학식 III을 갖는 화합물로 전환시키는 것은, 화학식 V를 갖는 화합물을 예를 들어 1 내지 48시간 이내, 바람직하게는 2 내지 12시간 이내에 정상 압력에서 40℃ 내지 용매의 환류 온도의 범위, 바람직하게는 용매의 환류 온도에서 불활성 용매 중 염기의 존재 하에 옥시염화인, 삼염화인 또는 오염화인과, 바람직하게는 옥시염화인과 반응시킴으로써 이루어진다.

염기는, 예를 들어 아민, 예컨대 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔 (DBU), 피리딘 또는 트리에틸아민, 또는 다른 염기, 예컨대 칼륨 tert-부틸레이트이다.

불활성 용매는, 예를 들어 탄화수소, 예컨대 벤젠, 크실렌, 톨루엔 또는 클로로벤젠이다.

클로로벤젠 중 DBU가 바람직하다.

화학식 VI을 갖는 화합물을 화학식 V를 갖는 화합물로 전환시키는 것은, 화학식 VI을 갖는 화합물을, 제1 단계에서 0℃ 내지 40℃의 온도 범위, 바람직하게는 실온에서 용매 중 팔라듐 촉매 및 발연황산의 존재 하에 아크릴산 메틸 에스테르와 반응시키고, 제2 단계에서 예를 들어 1 내지 48시간 이내, 바람직하게는 2 내지 12시간 이내에 정상 압력에서 40℃ 내지 용매의 환류 온도의 범위, 바람직하게는 용매의 환류 온도에서 불활성 용매 중 염기와 반응시킴으로써 이루어진다.

제1 단계에서 팔라듐 촉매는, 예를 들어 팔라듐(II) 아세테이트, 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 클로라이드, 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0), 비스(트리(o-톨릴)포스핀)팔라듐(II) 클로라이드, 또는 비스(아세토니트릴)디클로로팔라듐 또는 팔라듐(II) 아세테이트와 리간드, 예를 들어 트리스(o-톨릴)포스핀, 트리페닐포스핀 또는 디페닐포스피노 페로센으로부터 제조된 팔라듐 촉매이다.

제1 단계에서 용매는, 예를 들어 유기 산, 예컨대 아세트산 또는 프로피온산이다.

아세트산 중 팔라듐(II) 아세테이트가 바람직하다.

제2 단계에서 염기는, 예를 들어 DBU, 트리에틸아민 또는 디이소프로필에틸아민이다.

제2 단계에서 불활성 용매는, 예를 들어 에테르, 예컨대 1,2-디메톡시에탄, 디옥산, 글리콜 디메틸 에테르 또는 디에틸렌 글리콜 디메틸 에테르, 탄화수소, 예컨대 벤젠, 크실렌 또는 톨루엔, 또는 다른 용매, 예컨대 이소부티로니트릴, 아세토니트릴, 아세톤, 니트로벤젠, 디메틸포름아미드, 디메틸아세트아미드, 디메틸술폭시드 또는 N-메틸피롤리돈이다.

아세톤 중 DBU가 바람직하다.

본 발명에 따른 제약 조성물을 제조하는데 사용되는 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산의 제조는, 예를 들어 하기 합성 다이어그램 1에서 보다 상세하게 기재되어 있다. 이러한 합성 다이어그램은 예에 지나지 않고, 결코 제한적인 것으로 이해되지 않아야 한다.

합성 다이어그램 1

이미 상기에 추가로 언급된 것처럼, {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산은 바람직하게는 S-거울상이성질체의 형태로 사용된다. 이러한 S-거울상이성질체는, 예를 들어 하기 합성 다이어그램 2에서 나타낸 바와 같이 제조될 수 있다.

합성 다이어그램 2

제약 조성물에 함유되는 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산 뿐만 아니라 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물은 대표적인 헤르페스 바이러스과 군 (헤르페스 바이러스), 특히 시토메갈로바이러스 (CMV), 특히 인간 시토메갈로바이러스 (HCMV)에 대하여 항바이러스 효과를 나타낸다. 따라서 본 발명에 따른 제약 조성물은 질환, 특히 바이러스에 의한 감염, 특히 본원에 언급된 바이러스에 의한 감염 및 그에 의해 유발된 감염성 질환의 치료 및/또는 예방 방법에서 사용하기에 적합하다. 용어 "바이러스 감염"은 바이러스에 의한 감염 뿐만 아니라 바이러스에 의한 감염에 의해 유발된 감염성 질환도 의미하는 것으로 이해된다.

본 발명에 따른 제약 조성물은 그의 특성 및 특징으로 인해, 질환, 특히 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방 방법에서 사용하기에 적합한 약물을 제조하는데 사용될 수 있다.

하기 나타낸 영역이 예를 들어 언급될 수 있다:

1) AIDS 환자에서의 HCMV 감염 (망막염, 폐장염, 위장 감염)의 치료 및 예방.

2) 종종 생명을 위협하는 HCMV 폐장염 또는 뇌염 뿐만 아니라 위장 및 전신 HCMV 감염에 걸린 골수 및 기관 이식 환자에서의 시토메갈로바이러스 감염의 치료 및 예방.

3) 신생아 및 유아에서의 HCMV 감염의 치료 및 예방.

4) 임신 여성에서의 급성 HCMV 감염의 치료.

5) 암에 걸려서 암 요법을 받고 있는 면역-억제된 환자에서의 HCMV 감염의 치료.

6) HCMV-매개 종양 진행을 감소시키기 위한 HCMV-양성 암 환자의 치료 (문헌 [J. Cinatl, et al., FEMS Microbiology Reviews 2004, 28, 59-77] 참조).

본 발명에 따른 제약 조성물은 바람직하게는 대표적인 헤르페스 바이러스과 군, 특히 시토메갈로바이러스, 특히 인간 시토메갈로바이러스에 의한 감염의 치료 및/또는 예방 방법에서 사용하기에 적합한 약물을 제조하는데 사용된다.

본 발명에 따른 제약 조성물은 그의 약리학적 특성 및 특징으로 인해, 바이러스 감염, 특히 HCMV 감염의 치료 및/또는 예방 방법에서 그 자체로 사용될 수 있고, 필요한 경우 또한 다른 활성 물질, 특히 항바이러스 물질, 예를 들어 발간시클로비르, 간시클로비르, 발라시클로비르, 아시클로비르, 포스카르넷, 시도포비르 및 관련 유도체와 조합되어 사용될 수 있다.

본 발명의 추가 대상은 질환, 바람직하게는 바이러스 감염, 특히 인간 시토메갈로바이러스 (HCMV) 또는 또 다른 대표적인 헤르페스 바이러스과 군에 의한 감염의 치료 및/또는 예방 방법에 있어서 본 발명에 따른 제약 조성물의 용도이다.

본 발명의 추가 대상은 질환, 특히 상기 언급된 질환의 치료 및/또는 예방 방법에 있어서 본 발명에 따른 제약 조성물의 용도이다.

본 발명의 추가 대상은 질환, 특히 상기 언급된 질환의 치료 및/또는 예방 방법에서 사용되는 약물을 제조하기 위한 본 발명에 따른 제약 조성물의 용도이다.

본 발명의 추가 대상은 항바이러스 유효량의 본 발명에 따른 제약 조성물을 사용하여 질환, 특히 상기 언급된 질환을 치료 및/또는 예방하는 방법이다.

용어 "항바이러스 유효량"은 본 발명에 따른 제약 조성물의 적어도 0.001 mg/kg의 용량을 나타낸다.

일반적으로, 체중 1 kg 당 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산 약 0.001 내지 10 mg, 바람직하게는 0.01 내지 5 mg이 투여되는 방식으로 제약 조성물을 투여하는 것이 유리하다고 입증되었다.

그럼에도 불구하고, 즉 체중, 활성 물질에 대한 개체 반응 및 적용되는 시간과 간격에 따라 상기 언급된 양에서 벗어나는 것이 필요할 수도 있다. 예를 들어, 어떤 경우에서는 상기 언급된 최소량 미만을 이용하는 것이 충분할 수 있는 반면, 다른 경우에서는 상기 언급된 상한치가 초과되어야 한다. 다량 투여하는 경우, 이들을 하루에 걸쳐 수회의 개별 용량으로 분배하는 것이 권고될 수 있다.

본 발명은 지금부터 비-제한적 실시예를 기초로 하여 상세하게 기재될 것이다.

달리 언급되지 않는 한, 하기 시험 및 실시예에서 주어진 백분율은 중량%이고, 부는 중량부이고, 액체 용액의 용매 비, 희석 비 및 농도는 각각의 경우에 부피에 관한 것이다.

약어 목록

ACN 아세토니트릴

API-ES-pos. 대기압 이온화, 전기분무, 양성 (MS에서)

API-ES-neg. 대기압 이온화, 전기분무, 음성 (MS에서)

ca. 약

CI, NH₃ 화학적 이온화 (암모니아 이용)

DBU 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔

DMAP 4-(디메틸아미노)피리딘

DMSO 디메틸 술폭시드

ESTD 외부 표준화

h 시간

HPLC 고압 액체 크로마토그래피

conc. 진한

min. 분

MS 질량 분광분석법

MTBE 메틸 tert-부틸에테르

NMR 핵 자기 공명 분광분석법

R_T 체류 시간 (HPLC에서)

VTS 진공 건조 캐비넷

일반적 HPLC 방법:

방법 1 (HPLC): 기기: 가변적 파장 검출을 수반하는 HP 1050; 칼럼: 페노메넥스 프로디기(Phenomenex Prodigy) ODS (3) 100A, 150 mm x 3 mm, 3 μm; 용리액 A: (1.0 g KH₂PO₄ + 1.0 mL H₃PO₄) / l 물; 용리액 B: 아세토니트릴; 구배: 0분 10% B, 25분 80% B, 35분 80% B; 유량: 0.5 ml/분; 온도: 45℃; UV 검출: 210 nm.

방법 2 (HPLC): 기기: 가변적 파장 검출을 수반하는 HP 1050; 칼럼: 키랄(Chiral) AD-H, 250 mm x 4.6 mm, 5 μm; 용리액 A: n-헵탄 + 0.2% 디에틸아민, 용리액 B: 이소프로판올 + 0.2% 디에틸아민; 구배: 0분 12.5% B, 30분 12.5% B; 유량: 1 ml/분; 온도: 25℃; UV 검출: 250 nm.

방법 3 (HPLC): 기기: 가변적 파장 검출을 수반하는 HP 1050; 칼럼: 키랄 AD-H, 250 mm x 4.6 mm, 5 μm; 용리액 A: n-헵탄 + 0.2% 디에틸아민, 용리액 B: 이소프로판올 + 0.2% 디에틸아민; 구배: 0분 25% B, 15분 25% B; 유량: 1 ml/분; 온도: 30℃; UV 검출: 250 nm.

실시예

A) {8- 플루오로 -2-[4-(3- 메톡시페닐 )피페라진-1-일]-3-[2- 메톡시 -5-( 트리플루오로메틸 ) 페닐 ]-3,4- 디히드로퀴나졸린 -4-일}아세트산의 제조

실시예 1A

N-(2-플루오로페닐)-N'-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]우레아

2-메톡시-5-트리플루오로메틸페닐 이소시아네이트 (78 kg)를 대략 35℃에서 용융시키고, 아세토니트릴 (총 대략 270 l)에 용해시킨 다음, 이어서 2-플루오로아닐린 (39.9 kg)을 첨가하고, 아세토니트릴 (대략 25 l)로 세정하였다. 생성된 투명한 용액을 환류에서 4시간 동안 교반한 다음, 대략 75℃로 냉각시켰다. 이 온도에 도달하면, 용액을 목적하는 최종 생성물의 시드 결정 (200 g)으로 접종하고, 추가 15분 동안 교반한 다음, 3시간에 걸쳐 0℃로 냉각시켰다. 생성된 결정질 생성물을 원심분리에 의해 단리하고, 차가운 아세토니트릴 (대략 13 l를 사용하여 2회)세척하고, 질소 퍼징 하에 VTS 내 45℃에서 건조시켰다 (대략 3.5시간). 그 결과 고체로서 이론치의 85.9%에 상응하는 총 101.5 kg의 N-(2-플루오로페닐)-N'-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]우레아를 수득하였다.

실시예 2A

메틸-(2Z)-3-[3-플루오로-2-({[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]카르바모일}아미노)페닐]아크릴레이트

N-(2-플루오로페닐)-N'-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]우레아 (51 kg)를 질소 분위기 하에 하나의 반응기에서 아세트산 (대략 430 l)에 용해시켰다. 메틸 아크릴레이트 (20.1 kg)를 생성된 용액에 첨가하고, 생성된 현탁액을 추가 사용시까지 교반하였다. 아세트산 (950 l)을 제2 반응기에 넣고, 발연황산 (57 kg)을 조심스럽게 첨가하고, 팔라듐(II) 아세테이트 (7 kg)를 혼합물에 용해시켰다. 이어서, 제1 반응기에서 형성된 현탁액을 대략 2시간에 걸쳐 제2 반응기에 함유된 혼합물에 첨가하고, 반응 혼합물을 96% 질소와 4% 산소의 혼합물로 오버플로우시키고, 생성된 반응 혼합물을 실온에서 대략 18시간 동안 교반하였다. 이어서, 아세트산의 일부 (대략 900 l)를 증류 제거하고, 물 (대략 500 l)을 대략 1시간에 걸쳐 남아있는 반응 혼합물에 첨가하고, 생성된 현탁액을 1시간 동안 교반하였다. 생성된 미립자 물질을 여과해내고, 아세트산과 물 (1:1)의 혼합물로 1회 및 물로 2회 세척하고, 마지막으로 대략 30 밀리바 및 50℃에서 건조시켰다. 그 결과 고체로서 이론치의 65.0%에 상응하는 총 44.8 kg의 메틸-(2Z)-3-[3-플루오로-2-({[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]카르바모일}아미노)페닐]아크릴레이트를 수득하였다.

기기: 가변적 파장 검출을 수반하는 HP 1100; 칼럼: 페노메넥스 프로디기 ODS (3) 100A, 150 mm x 3 mm, 3 μm; 용리액 A: (1.36 g KH₂PO₄ + 0.7 ml H₃PO₄) / l 물; 용리액 B: 아세토니트릴; 구배: 0분 20% B, 40분 45% B, 50분 80% B, 65분 80% B; 유량: 0.5 ml/분; 온도: 55℃; UV 검출: 210 nm.

실시예 3A

{8-플루오로-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로퀴나졸린-4-일} 메틸 아세테이트

실시예 2A의 화합물 (75 kg)을 아세톤 (1600 l)에 현탁시키고, DBU (5.7 kg)를 첨가하였다. 생성된 현탁액을 환류로 가열하고, 환류에서 4시간 동안 교반하였다. 생성된 용액을 55℃의 재킷 온도로 냉각시키고, 규조토를 통해 여과하였다. 용매의 일부 (대략 1125 l)를 증류에 의해 제거하고, 남아있는 잔류물을 2시간 동안 0℃로 냉각시켰다. 생성된 고체를 원심분리에 의해 분리하고, 차가운 아세톤 (대략 15 l)을 사용하여 2회 세척하고, 일정 질량에 대한 질소로 퍼징하면서 감압 하에 45℃에서 밤새 건조시켰다. 그 결과 고체로서 이론치의 84.1%에 상응하는 총 58.3 kg의 {8-플루오로-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로퀴나졸린-4-일} 메틸 아세테이트를 수득하였다.

실시예 4A

(2S,3S)-2,3-비스[(4-메틸벤조일)옥시]숙신산-{(4S)-8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일} 메틸 아세테이트 (1:1 염) 염소화/아미노화/결정화

클로로벤젠 (800 l) 중 {8-플루오로-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로퀴나졸린-4-일} 메틸 아세테이트 (실시예 3A, 129.2 kg)의 용액을 환류로 가열시키고, 공비 건조시켰다. 옥시염화인 (144 kg)을 첨가하고, 반응 혼합물을 환류에서 3시간 동안 교반하였다. 다음에, DBU (95 kg) 및 클로로벤젠 (45 l)을 첨가하고, 환류에서 추가 9시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물을 첨가함으로써 가수분해시키고, 클로로벤젠 (80 l)으로 희석하고, 암모니아 수용액 (25%)으로 중화하였다. 상을 분리하고, 유기 상을 물로 세척하고, 용매를 증류 제거하였다. 남아있는 잔류물을 디옥산 (170 l)에 용해시키고, 3-메톡시페닐피페라진 (66 kg), DBU (52 kg) 및 추가 90 l의 디옥산을 첨가하고, 반응 혼합물을 환류에서 4시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트 (1300 l)를 첨가하고, 물로 1회, 0.2 N HCl로 3회, NaCl 수용액으로 1회 세척하고, 용매를 증류 제거하였다. 생성된 잔류물을 에틸 아세테이트 (800 l)에 용해시키고, 에틸 아세테이트 (600 l) 중 (2S,3S)-2,3-비스[(4-메틸벤조일)옥시]숙신산 (121 kg)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 대략 60분 동안 교반한 다음, (2S,3S)-2,3-비스[(4-메틸벤조일)옥시]숙신산-{(4S)-8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일} 메틸 아세테이트로 접종하고, 실온에서 3일 동안 교반하였다. 이어서, 0 내지 5℃로 냉각시키고, 추가 3시간 동안 교반하였다. 현탁액을 여과하고, 남아있는 고체를 에틸 아세테이트로 배치식으로 재세척하였다. 그 결과, 라세미체와 비교하여 3 단계 (염소화, 아미노화 및 결정화)에서, 고체로서 이론치의 약 46.2%에 상응하는 총 약 141 kg (건조 중량으로 계산)의 염을 수득하였다.

실시예 5A

(2S,3S)-2,3-비스[(4-메틸벤조일)옥시]숙신산-{(4S)-8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일} 메틸 아세테이트 (1:1 염) / 재결정화

(2S,3S)-2,3-비스[(4-메틸벤조일)옥시]숙신산 - (S) {(4S)-8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산 메틸 에스테르 (1:1 염) (141 kg, 건조 중량으로 계산)를 에틸 아세테이트 (1400 l)에 현탁시키고, 환류 온도 (77℃)로 가열함으로써 용해시켰다. 용액을 여과하고, 실온으로 천천히 냉각시켜, 자발적 결정화가 일어났다. 현탁액을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음, 0 내지 5℃로 냉각시키고, 추가 3시간 동안 교반하였다. 현탁액을 여과하고, 남아있는 고체를 차가운 에틸 아세테이트로 재세척하였다. 결정을 약 40℃에서 진공 하에 16시간 동안 건조시켰다. 고체로서 이론치의 93.0%에 상응하는 총 131.2 kg의 염을 수득하였다.

실시예 6A

(S)-{8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-(2-메톡시-5-트리플루오로메틸페닐)-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산

(2S,3S)-2,3-비스[(4-메틸벤조일)옥시]숙신산-{(4S)-8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산 메틸 에스테르 (1:1 염) (30.8 kg), 중탄산나트륨 (16.4 kg) 및 물 (315 l)의 혼합물을 MTBE (160 l)와 혼합하였다. 상을 분리하고, 유기 상을 대략 7%의 중탄산나트륨 수용액 35 l로 처리하였다. 상을 분리하고, 유기 상을 대략 4%의 수산화나트륨 수용액 125 l에 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류 온도로 가열하고, 용액을 증발 건조시킨 다음, 반응기 내용물을 55 내지 60℃에서 추가 5시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 대략 22℃에서 MTBE (160 l) 및 물 (65 l)에 첨가하고, 교반하였다. 상을 분리하고, 유기 상을 대략 6%의 염화나트륨 수용액 (30 l)으로 추출하였다. 합한 수성 상을 물 (25 l) 및 MTBE (160 l)와 혼합하고, pH 값을 대략 1 N의 염산을 이용하여 대략 6.5로 조정하였다. 유기 상을 분리하고, 용매를 증발 건조시키고, 잔류물을 아세톤 (대략 75 l)에 용해시켰다. 용매를 아세톤으로 변경하였다 (각각 대략 130 l로 6회 증류). 이어서, 최종 생성물을 물을 첨가함으로써 침전시키고, 원심분리를 통하여 단리하고, 진공 건조기에서 건조시켰다. 그 결과 무정형 고체로서 이론치의 96.4%에 상응하는 총 16.5 kg의 (S)-{8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-(2-메톡시-5-트리플루오로메틸페닐)-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산을 수득하였다.

B) 본 발명에 따른 제약 조성물의 예시적 실시양태

실시예 1

시클로덱스트린을 사용한 제약 조성물의 제조:

3구 플라스크에서, 히드록시프로필-β-시클로덱스트린 HP5 (클렙토스(Kleptose) HPB, 로켓트(Roquette)) 30.03 g을 주사용수 68.365 g과 혼합하고, 1 M 수산화나트륨 용액 6.6 g을 혼합물에 첨가하였다. 실시예 6A로부터의 화합물 5.005 g을 첨가한 후, 혼합물을 50℃로 가열하고, 투명한 용액이 형성될 때까지 24 시간 동안 교반하였다. 용액을 멸균 여과하고 (세공 직경 0.22 μm), 무균 조건 하에 멸균 20 ml 유리 용기로 옮겼다. 충전된 유리 용기를 주입 플러그 및 플랜지 캡으로 밀봉하였다.

실시예 2

부형제로서 아르기닌을 사용한 제1 제약 조성물의 제조:

제1 원액을 제조하기 위해, L-아르기닌 262.38 mg을 25 ml 부피의 플라스크에서 칭량한 다음, 주사용수 대략 22 ml에 용해시켰다. 실시예 6A로부터의 화합물 504.51 mg을 생성된 아르기닌 용액에 첨가하고, 혼합물을 투명한 용액이 수득될 때까지 대략 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 부피를 주사용수로 가득 채웠다.

제2 원액을 제조하기 위해, 인산이수소나트륨 2수화물 40.05 mg을 50 ml 부피의 플라스크에서 칭량하고, 주사용수 대략 48 ml에 용해시켰다. 혼합물을 투명한 용액이 수득될 때까지 교반하고, 부피를 주사용수로 가득 채웠다.

10 mg/ml의 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산의 농도를 갖는 용액을 제조하기 위해, 제1 원액 12.5 ml를 제2 원액 10 ml와 25 ml 부피의 플라스크에서 혼합하고, pH를 1 M HCl 대략 200 μl로 천천히 및 조심스럽게 조정하였다. 이어서, 부피를 제2 원액으로 가득 채워 최종 pH 7.9인 혼합물을 수득하였다.

이러한 프로토콜을 사용하여, 가변 농도의 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산을 갖는 조성물을 제조할 수 있었고, 단지 사용되는 제1 원액의 양만 변경하여야 한다. 그러나, pH는 너무 많이 변하지 않고 특히 산 범위로 이동하지 않는 것이 중요하다.

그 결과 수득된 용액을 멸균 여과하고 (세공 직경 0.22 μm), 무균 조건 하에 멸균 용기로 옮겼다. 용기를 주입 플러그 및 플랜지 캡으로 밀봉하였다.

실시예 3

부형제로서 아르기닌을 사용한 제2 제약 조성물의 제조:

제1 원액을 제조하기 위해, L-아르기닌 2.1 g을 주사용수 88.8 g에 용해시켰다. 실시예 6A로부터의 화합물 2 g을 생성된 아르기닌 용액에 첨가하고, 혼합물을 투명한 용액이 수득될 때까지 대략 1시간 동안 교반하였다. 생성된 용액의 pH 값을 1 M HCl의 적가에 의해 7.8로 조정하였고, 실시예 6A로부터의 화합물이 침전되지 않도록 HCl을 천천히 첨가하는 것이 중요하다. 이어서, 필요한 경우, 용액의 부피를 100 ml까지 가득 채웠다.

제2 원액을 제조하기 위해, 인산이수소나트륨 2수화물 3.1 g 및 글루코스 8.4 g을 적절한 용기에서 칭량하고, 주사용수 대략 74.5 g에 용해시켰다. 혼합물을 투명한 용액이 수득될 때까지 교반하고, 생성된 용액의 pH를 1 M NaOH를 사용하여 7.8로 조정하였다. 마지막으로, 필요한 경우, 용액의 부피를 100 ml까지 가득 채웠다.

10 mg/ml의 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산의 농도를 갖는 용액을 제조하기 위해, 제1 원액 50.5 g을 제2 원액 53.0 g과 혼합하고, 5분 동안 교반하였다.

이러한 프로토콜을 사용하여, 가변 농도의 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산을 갖는 조성물을 제조할 수 있었고, 단지 사용되는 제1 원액의 양만 변경하여야 한다.

실시예 4

부형제로서 아르기닌을 사용한 제3 제약 조성물의 제조:

제1 원액을 제조하기 위해, L-아르기닌 1.05 g 및 실시예 6A로부터의 화합물 1 g을 100 ml 부피의 플라스크 내 주사용수 대략 50.0 g에 용해시키고, 혼합물을 투명한 용액이 수득될 때까지 교반하였다. 생성된 용액의 pH 값을 0.1 M HCl (대략 43.5 ml)의 적가에 의해 7.8로 조정하였고, 실시예 6A로부터의 화합물이 침전되지 않도록 HCl을 천천히 첨가하는 것이 중요하다. 마지막으로, 용액의 부피를 100 ml까지 가득 채웠다.

제2 원액을 제조하기 위해, 인산이수소나트륨 2수화물 1.56 g 및 글루코스 4.18 g을 100 ml 부피의 플라스크 내 주사용수 대략 80.0 g에 용해시켰다. 혼합물을 투명한 용액이 수득될 때까지 교반하고, 생성된 용액의 pH를 1 M NaOH (대략 9.1 ml)를 사용하여 7.8로 조정하였다. 마지막으로, 용액의 부피를 100 ml까지 가득 채웠다.

5 mg/ml의 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산의 농도를 갖는 용액을 제조하기 위해, 제1 원액 50.24 g을 제2 원액 51.35 g과 혼합하고, 5분 동안 교반하였다.

이러한 프로토콜을 사용하여, 가변 농도의 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산을 제조할 수 있었고, 단지 사용되는 제1 원액의 양만 변경하여야 한다.

실시예 5

부형제로서 아르기닌을 사용한 제4 제약 조성물의 제조:

제1 원액을 제조하기 위해, L-아르기닌 2.11 g을 100 ml 부피의 플라스크에서 실시예 6A로부터의 화합물 2.01 g과 혼합하고, 부피를 주사용수로 가득 채웠다. 이러한 제1 원액의 pH 값은 9.8이었다.

제2 원액을 제조하기 위해, 인산이수소나트륨 2수화물 3.12 g, 글루코스 8.35 g 및 NaCl 0.50 g을 100 ml 부피의 플라스크 내 주사용수 대략 80.0 g에 용해시켰다. 혼합물을 투명한 용액이 수득될 때까지 교반하고, 생성된 용액의 pH를 1 M NaOH (대략 9.7 ml)를 사용하여 6.5로 조정하였다. 마지막으로, 용액의 부피를 100 ml까지 가득 채웠다.

10 mg/ml의 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산의 농도를 갖는 용액을 제조하기 위해, 제1 원액 50.50 g을 제2 원액 52.65 g과 혼합하고, 5분 동안 교반하였다.

이러한 프로토콜을 사용하여, 가변 농도의 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산을 갖는 조성물을 제조할 수 있었고, 단지 사용되는 제1 원액의 양만 달라져야 하거나, pH를 조정할 필요가 있을 수 있다.

실시예 6

부형제로서 리신을 사용한 제약 조성물의 제조:

제1 원액을 제조하기 위해, 리신 217.24 mg을 25 ml 부피의 플라스크에서 칭량한 다음, 주사용수 22 ml에 용해시켰다. 실시예 6A로부터의 화합물 500.71 mg을 생성된 용액에 첨가하고, 혼합물을 투명한 용액이 수득될 때까지 대략 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 생성된 용액의 pH를 1 M HCl 대략 460 μl를 사용하여 pH 8로 조정하였고, 또한 pH 값의 너무 급격한 국소적 감소 및 이와 관련된 실시예 6A로부터의 화합물의 침전을 피하는 것이 중요하다. 이어서, 부피를 주사용수로 가득 채워 제1 원액을 수득하였다.

제2 원액을 제조하기 위해, 인산이수소나트륨 242.01 mg을 50 ml 부피의 플라스크에서 칭량한 다음, 주사용수 대략 48 ml에 용해시켰다. 혼합물을 투명한 용액이 수득될 때까지 교반하였다. 생성된 용액의 pH를 1 M NaOH 대략 1.825 μl를 사용하여 8의 pH 값으로 조정한 다음, 부피를 주사용수로 가득 채웠다.

용액 1 ml 당 5 mg의 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산의 농도를 갖는 용액을 제조하기 위해, 제1 원액 6.5 ml를 25 ml 부피의 플라스크에 채우고, 부피를 제2 원액으로 가득 채워 최종 pH 8인 용액을 수득하였다.

상기 실시예 2에 기재된 바와 같이, 예를 들어 다른 농도의 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산을 갖는 제약 조성물도 제1 원액의 양을 변경함으로써 제조할 수 있다.

생성된 용액을 멸균 여과하고 (세공 직경 0.22 μm), 무균 조건 하에 멸균 용기로 옮겼다.

실시예 7

주입 용액을 제조하도록 재구성될 수 있는 고체 제약 조성물의 제조:

제1 원액을 제조하기 위해, L-아르기닌 261.16 mg을 25 ml 부피의 플라스크에서 칭량한 다음, 주사용수 22 ml에 용해시켰다. 실시예 6A의 화합물 502.45 mg을 생성된 용액에 첨가하고, 혼합물을 투명한 용액이 수득될 때까지 대략 1시간 동안 교반하였다. 이 용액의 pH를 1 M HCl 대략 660 μl를 사용하여 7.8의 값으로 조정하였고, 또한 실시예 6A로부터의 화합물이 침전되지 않는 것이 중요하다. 이어서, 부피를 주사용수로 가득 채웠다.

제2 원액을 제조하기 위해, 인산이수소나트륨 240.05 mg을 50 ml 부피의 플라스크에서 칭량하고, 주사용수 대략 48 ml에 용해시켰다. 혼합물을 투명한 용액이 수득될 때까지 교반하였다. 생성된 용액의 pH를 1 M NaOH 대략 1.850 μl를 사용하여 7.8의 값으로 조정하고, 부피를 주사용수로 가득 채웠다.

10 mg/ml의 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산의 농도를 갖는 용액을 제조하기 위해, 제1 원액 12.5 ml를 25 ml 부피의 플라스크에 넣고, 부피를 제2 원액으로 가득 채워 최종 pH 7.8인 용액을 수득하였다. 투명한 무색 용액 1 ml를 적합한 플러그가 있는 2 ml 유리 용기 각각에 넣고, 엡실론(EPSILON) 2-4 D 동결 건조기 (마르틴 크리스트 게엠베하(Martin Christ GmbH), 독일)에서 동결건조시켜 무색 분말을 수득하였으며, 이는 물 1 ml를 첨가함으로써 정맥내 용도에 적합한 용액으로 용이하게 재구성될 수 있다.

실시예 8

제1 원액을 제조하기 위해, L-아르기닌 210.49 g 및 주사용수 9665.8 g을 혼합하고, 혼합물을 투명한 용액이 수득될 때까지 교반하였다. 생성된 용액을 교반하는 동안, 실시예 6A로부터의 화합물 199.23 g을 조금씩 첨가하고, 혼합물을 투명한 용액이 수득될 때까지 적어도 30분 동안 교반하였다.

제2 원액을 제조하기 위해, 인산이수소나트륨 2수화물 309.19 g, 글루코스 827.47 g, 염화나트륨 49.55 g 및 주사용수 7900.0 g을 투명한 용액이 수득될 때까지 교반하였다. 생성된 용액의 pH를 1 M NaOH를 사용하여 6.55로 조정하고, pH 값을 조정하는데 사용된 NaOH 용액의 양보다 더 적은 주사용수 1418.29 g을 생성된 용액에 첨가하였다.

목적하는 용액을 제조하기 위해, 제2 원액을 제1 원액에 천천히 및 조금씩 부드럽게 교반하면서 첨가하고, 생성된 용액을 멸균 여과하였다. 적합한 플러그가 있는 적절한 멸균 유리 용기를 투명한 무색 용액 15 ml로 각각 채우고, 동결 건조기에서 동결건조시켜 무색 분말을 수득하였다.

그 결과 수득된 동결건조물은, 예를 들어 주사용수 30 ml를 첨가함으로써 재구성될 수 있고, 이어서 생성된 용액은 필요한 경우 주입에 사용하기 위해 추가로 희석될 수 있다.

실시예 9

시클로덱스트린을 사용한 제2 제약 조성물의 제조:

실시예 6A로부터의 화합물 2.00 g을 칭량하고, 0.1 M NaOH 용액 30 g을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 30분 봉안 교반하였다 (실시예 6A로부터의 화합물이 완전히 용해될 필요는 없다). 주사용수 57.7 g 뿐만 아니라 히드록시프로필-β-시클로덱스트린 HP5(클렙토스 HPB, 로켓트) 15.0 g 및 NaCl 0.31 g을 생성된 혼합물에 첨가하고, 투명한 용액이 수득될 때까지 교반하였다. 용액을 멸균 여과하고 (세공 직경 0.22 μm), 무균 조건 하에 멸균 20 ml 유리 용기로 옮겼다. 채워진 유리 용기를 주입 플러그 및 플랜지 캡으로 밀봉하였다. 그 결과 수득된 채워진 유리 용기를 가열-멸균할 수도 있었다.

실시예 10

시클로덱스트린을 사용한 제3 제약 조성물의 제조:

실시예 6A로부터의 화합물 2.00 g을 칭량하고, 0.1 M NaOH 용액 30 g을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 30분 봉안 교반하였다 (실시예 6A로부터의 화합물이 완전히 용해될 필요는 없다). 주사용수 54.8 g 뿐만 아니라 히드록시프로필-β-시클로덱스트린 HP5(클렙토스 HPB, 로켓트) 20.0 g 및 NaCl 0.205 g을 생성된 혼합물에 첨가하고, 투명한 용액이 수득될 때까지 교반하였다. 용액을 멸균 여과하고 (세공 직경 0.22 μm), 무균 조건 하에 멸균 20 ml 유리 용기로 옮겼다. 채워진 유리 용기를 주입 플러그 및 플랜지 캡으로 밀봉하였다. 그 결과 수득된 채워진 유리 용기를 가열-멸균할 수도 있었다.

실시예 11

시클로덱스트린을 사용한 제4 제약 조성물의 제조:

실시예 6A로부터의 화합물 0.5 g을 칭량하고, 0.1 M NaOH 용액 8.75 g을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 30분 봉안 교반하였다 (실시예 6A로부터의 화합물이 완전히 용해될 필요는 없다). 주사용수 12.45 g 뿐만 아니라 2-O-메틸-β-시클로덱스트린 (크리스멥(Crysmeb), 로켓트) 5.0 g을 생성된 혼합물에 첨가하고, 투명한 용액이 수득될 때까지 교반하였다. 용액의 pH 값을 1 M HCl을 사용하여 7.5로 조정하고, 용액을 멸균 여과하고 (세공 직경 0.22 μm), 무균 조건 하에 멸균 20 ml 유리 용기로 옮겼다. 채워진 유리 용기를 주입 플러그 및 플랜지 캡으로 밀봉하였다. 그 결과 수득된 채워진 유리 용기를 가열-멸균할 수도 있었다.

실시예 12

시클로덱스트린을 사용한 제5 제약 조성물의 제조:

실시예 6A로부터의 화합물 0.5 g을 칭량하고, 0.1 M NaOH 용액 13.125 g을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 30분 봉안 교반하였다 (실시예 6A로부터의 화합물이 완전히 용해될 필요는 없다). 주사용수 8.075 g 뿐만 아니라 술포알킬 에테르-β-시클로덱스트린(캅티솔(Captisol), 시덱스 파마슈티칼스 인크.(CyDex Pharmaceuticals Inc.)) 5.0 g을 생성된 혼합물에 첨가하고, 투명한 용액이 수득될 때까지 교반하였다. 용액의 pH 값을 1 M HCl 500 μl를 사용하여 7.5로 조정하고, 용액을 멸균 여과하고 (세공 직경 0.22 μm), 무균 조건 하에 멸균 20 ml 유리 용기로 옮겼다. 채워진 유리 용기를 주입 플러그 및 플랜지 캡으로 밀봉하였다. 그 결과 수득된 채워진 유리 용기를 가열-멸균할 수도 있었다.

분배 전에, 기재된 용액을 등장성 용액, 예를 들어 등장성 주입 용액으로 희석할 수 있었다.

C) 안정성 측정

안정성을 측정하기 위해, 실시예 1 내지 6에서 제조된 용액을 2 내지 8℃, 25℃ 및 40℃에서 2, 3 및 6주 동안 저장하였다. 모든 용액은 적절한 안정성을 갖는 것으로 입증되었다.

또한, 실시예 7에서 제조된 제제로부터 재구성된 용액의 안정성을 2 내지 8℃, 25℃ 및 40℃에서 24시간에 걸쳐 시험하였다. 용액은 24시간의 기간에 걸쳐 모든 조건 하에 안정한 것으로 입증되었다.

D) 고정 제약 조성물에 대한 비교 시험

다른 고체 조성물과 비교하여 실시예 7에서 수득된 고체 제약 조성물의 유리한 특성을 입증하기 위해, 용액에 함유된 고체 물질을 혼합한 다음, 재구성 시험을 수행하였다. 조사된 어떤 경우에서도 투명한 용액을 수득하는 것은 가능하지 않았다.

E) 약리학적 효능의 평가

HCMV (인간 시토메갈로바이러스)의 복제에 대한 본 발명에 따른 조성물의 시험관내 효과는 하기 항바이러스 검정에서 찾아볼 수 있다:

F) HCMV 형광-감소 시험

실시예 8로부터의 용액을 시험에서 추가적 희석 없이 사용하였다. 실시예 6A로부터의 조성물을 디메틸 술폭시드 (DMSO) 중 50 밀리몰 (mM) 용액으로서 사용하였다. 간시클로비르(Ganciclovir)^®, 포스카르넷(Foscarnet)^® 또는 시도포비르(Cidofovir)^®를 참조 조성물로서 사용할 수 있었다. 시험 시작 1일 전, 웰 당 1.5 x 10⁴개의 인간 포피 섬유모세포 (NHDF 세포)를 96-웰 플레이트 (투명한 바닥을 갖는 흑색)의 B2 - G11 웰 내 200 μl의 세포 배양 배지에 시딩하였다. 각 96-웰 플레이트의 가장자리를 따라 존재하는 웰에 단지 200 μl의 배지만을 채워 가장자리 효과를 방지하였다. 시험 당일, 각 96-웰 플레이트의 B2 - G11 웰 내의 세포 배양 배지를 흡입 장치에 의해 진공 제거하고, 100 μl의 바이러스 현탁액으로 대체하였다 (감염 다중도 (MOI): 0.1 - 0.2). 사용된 바이러스는 바이러스 게놈 (HCMV AD 169 RV-HG (문헌 [E. M. Borst, K. Wagner, A. Binz, B. Sodeik, and M. Messerle, 2008, J. Virol . 82:2065-2078.])) 내 녹색 형광 단백질 (GFP)에 대한 발현 카세트를 통합시킨 재조합 HCMV이었다. 37℃ 및 5% CO₂에서 2시간의 인큐베이션 시간 후에, 바이러스 접종물을 흡입 장치에 의해 진공 제거하고, 칼럼 3의 웰을 제외한 모든 웰을 200 μl의 세포 배양 배지로 채웠다. 칼럼 2는 추가로 처리하지 않고, 바이러스 대조군의 역할을 하였다. 칼럼 3의 웰은 이중 분석을 위해 시험 물질의 조성물 또는 용액 300 μl로 각각 채웠다 (후자는 세포 배양 배지에 희석함). 칼럼 3의 각 항바이러스 물질의 농도는 각 예상되는 EC₅₀ 값으로서의 농도의 ~27배이었다. 칼럼 3의 시험 물질을, 각 칼럼으로부터의 100 μl를 그의 각각의 우측 칼럼으로 이동시켜 거기에 이미 존재하는 세포 배양 배지 200 μl와 혼합함으로써, 96-웰 플레이트를 가로질러 1:3의 농도로 8 단계 희석하였다. 이런 방식으로, 3종의 항바이러스 물질을 이중 분석으로 시험하였다. 플레이트를 37℃ 및 5% CO₂에서 7일 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 플레이트 상의 모든 웰을 PBS (포스페이트-완충 염수)로 3회 세척하고, 50 μl의 PBS로 채웠다. 이어서, 96-웰 플레이트의 각 웰의 GFP 강도를 형광 스캐너 (플루오박스(FluoBox); 바이엘 테크놀로지 서비시즈 게엠베하(Bayer Technology Services GmbH); 필터 셋팅: GFP, Ex 480 nm, Em 520 nm)를 사용하여 측정하였다. 그 결과 수득된 측정 값을 항-HCMV의 EC₅₀을 결정하는데 사용할 수 있었다:

EC₅₀ (GFP-RA) = 비처리 바이러스 대조군에 비해 50%만큼 GFP 형광을 감소시키는 물질 농도 (μM).

본 발명에 따른 조성물에 대한 대표적인 시험관내 효능 데이터가 하기 표 1에 나타나 있다:

Claims

a) {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산 또는 그의 염, 용매화물 또는 염의 용매화물,
b) 시클로덱스트린, 리신 및 아르기닌으로부터 선택되는 하나 이상의 부형제, 및
c) 물
을 포함하는, 특히 정맥내 투여를 위한 제약 조성물.
제1항에 있어서, 바람직하게는 포스페이트 완충제, 트리스 완충제 및 시트레이트 완충제로부터 선택되는 하나 이상의 완충제를 추가로 포함하는 제약 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 바람직하게는 글루코스, 수크로스, 락토스, 말토스, 트레할로스, 소르비톨 및 만니톨로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 당을 추가로 포함하는 제약 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산 또는 그의 염, 용매화물 또는 염의 용매화물이 조성물 1 ml 당 순수 활성 화합물 1 내지 100 mg, 바람직하게는 2 내지 50 mg, 보다 바람직하게는 2 내지 25 mg, 특히 5 내지 20 mg에 상응하는 양으로 존재하는 것을 특징으로 하는 제약 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, pH가 7.5 내지 8.5의 범위인 것을 특징으로 하는 제약 조성물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 부형제가 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산의 함량에 대하여 1 내지 5 당량, 바람직하게는 2 내지 5 당량, 보다 바람직하게는 2.5 내지 4.5 당량의 양으로 존재하는 것을 특징으로 하는 제약 조성물.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물 100 ml가
a) 0.2 - 2.0 g, 바람직하게는 0.5 - 1.25 g의 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산 또는 그의 염, 용매화물 또는 염의 용매화물,
b) 0.25 - 2.5 g, 바람직하게는 0.5 - 1.5 g의 아르기닌,
c) 1.5 - 9.5 g, 바람직하게는 2.0 - 4.75 g의 글루코스,
d) 0.6 - 4.0 g, 바람직하게는 0.75 - 2.0 g의 NaH₂PO₄, 및
e) 물
을 포함하며, pH가 7.5 내지 8.5, 바람직하게는 7.7 내지 8.0의 범위인 것을 특징으로 하는 제약 조성물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 부형제가 시클로덱스트린, 바람직하게는 β-시클로덱스트린 및 변형된 β-시클로덱스트린, 특히 히드록시알킬 β-시클로덱스트린, 알킬-히드록시알킬 β-시클로덱스트린 및 술포알킬 시클로덱스트린으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 제약 조성물.
제8항에 있어서, {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산의 함량에 대하여 1 내지 10 당량, 바람직하게는 2 내지 7 당량, 특히 2.5 내지 5 당량의 시클로덱스트린 및 0 내지 2.0 당량, 바람직하게는 0.5 내지 1.5 당량, 특히 0.75 내지 0.9 당량의 NaOH를 함유하는 것을 특징으로 하는 제약 조성물.
제1항 내지 제5항, 제8항 및 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물 100 ml가
a) 0.5 - 2.5 g, 바람직하게는 1.0 - 2.0 g의 {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산 또는 그의 염, 용매화물 또는 염의 용매화물,
b) 10.0 - 30.0 g, 바람직하게는 12.5 - 22.5 g의 HP-β-시클로덱스트린,
c) 0.0 - 350 mg, 바람직하게는 75 - 225 mg, 특히 100 - 125 mg의 NaOH, 및
d) 물
을 포함하며, pH가 7.5 내지 8.5의 범위인 것을 특징으로 하는 제약 조성물.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 제약 조성물을 동결건조함으로써 제조된 고체 제약 조성물.
A) 하나 이상의 부형제를 물에 용해시키는 단계,
B) {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산 또는 그의 염, 용매화물 또는 염의 용매화물을 단계 A)에서 수득된 용액에 첨가하는 단계,
C) 필요한 경우, 하나 이상의 당 및/또는 하나 이상의 완충제를 첨가하는 단계,
D) 제약 조성물을 수득하기 위해 pH를 목적하는 값으로 조정하는 단계, 및
E) 단계 D)에서 수득된 용액을 멸균 여과하고, 적합한 용기 내로 충전하는 단계,
F) 필요한 경우, 단계 E)에서 수득된 용액을 가열 하에 최종 멸균하는 단계
를 사용하여 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 제약 조성물을 제조하는 방법.
I.) 하나 이상의 부형제를 물의 일부에 용해시키는 단계,
II.) {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산 또는 그의 염, 용매화물 또는 염의 용매화물을 단계 I.)에서 수득된 용액에 첨가하는 단계,
III.) 필요한 경우, 단계 II.)에서 수득된 용액의 pH를 목적하는 값으로 조정하여 제1 용액을 수득하는 단계,
IV.) 하나 이상의 당 및/또는 완충제를 물의 일부에 용해시키는 단계,
V.) 필요한 경우, 단계 IV.)에서 수득된 용액의 pH를 목적하는 값으로 조정하여 제2 용액을 수득하는 단계,
VI.) 제약 조성물을 수득하기 위해 제1 및 제2 용액을 혼합하는 단계, 및
VII.) 단계 VI.)에서 수득된 용액을 멸균 여과하고, 적합한 용기 내로 충전하는 단계,
VIII.) 필요한 경우, 단계 VII.)에서 수득된 용액을 가열 하에 최종 멸균하는 단계
를 사용하여 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 제약 조성물을 제조하는 방법.
a.) {8-플루오로-2-[4-(3-메톡시페닐)피페라진-1-일]-3-[2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3,4-디히드로퀴나졸린-4-일}아세트산 또는 염, 용매화물 또는 염의 용매화물을 NaOH 수용액, 바람직하게는 0.1M NaOH 수용액에 첨가하여 용액 또는 현탁액을 생성하는 단계,
b.) 단계 a.)에서 수득된 용액 또는 현탁액에 물을 첨가하는 단계,
c.) 단계 b.)에서 수득된 용액 또는 현탁액에 시클로덱스트린 및 NaCl을 첨가하는 단계,
d.) 단계 c.)에서 수득된 용액을 멸균 여과하고, 적합한 용기 내로 충전하는 단계,
e.) 필요한 경우, 단계 d.)에서 수득된 용액을 가열 하에 최종 멸균하는 단계
를 사용하여 제1항 내지 제5항 및 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 제약 조성물을 제조하는 방법.
제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 따른 방법에 상응하게 제약 조성물을 제조한 다음, 수득된 제약 조성물을 동결건조시켜 고체 제약 조성물을 수득하는 것을 포함하는, 제11항에 따른 고체 제약 조성물을 제조하는 방법.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 질환, 특히 바이러스 감염, 바람직하게는 인간 시토메갈로바이러스 (HCMV) 감염 또는 또 다른 헤르페스 바이러스과 군의 구성원에 의한 감염의 치료 및/또는 예방 방법에서 사용하기 위한 제약 조성물.
질환, 특히 바이러스 감염, 바람직하게는 인간 시토메갈로바이러스 (HCMV) 감염 또는 또 다른 헤르페스 바이러스과 군의 구성원에 의한 감염의 치료 및/또는 예방 방법에 있어서 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 제약 조성물의 용도.
질환, 특히 바이러스 감염, 바람직하게는 인간 시토메갈로바이러스 (HCMV) 감염 또는 또 다른 헤르페스 바이러스과 군의 구성원에 의한 감염의 치료 및/또는 예방용 약물을 제조하기 위한 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 제약 조성물의 용도.
치료를 필요로 하는 인간 또는 동물에게 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 제약 조성물 또는 제12항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따라 제조된 제약 조성물을 투여함으로써 상기 인간 및 동물에서 바이러스 감염, 바람직하게는 인간 시토메갈로바이러스 (HCMV) 감염 또는 또 다른 헤르페스 바이러스과 군의 구성원에 의한 감염을 퇴치하는 방법.