KR20140095767A - 피세틴 및 설퍼레틴을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 개선용 조성물 - Google Patents

피세틴 및 설퍼레틴을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 개선용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 피세틴 및 설퍼레틴이 1:9 내지 9:1의 중량부로 혼합된 혼합물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 개선용 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 염증 산물인 일산화질소 생성 저해하고 혈청 내 면역 글로블린 E 농도와 인터류킨-4의 농도를 감소시키며 감마 인터페론을 증가시키고, 알칼리성 포스파타아제의 활성을 유도하여 조골세포의 분화와 미네랄화를 촉진하고 조골 흡수 방지 및 치조골 재생 효과를 가지며, 염증성 사이토카인인 종양괴사인자-α 및 인터류킨-1베타의 발현을 현저히 억제하고 관절염에 의해 유발된 통증을 감소시킴으로써, 아토피 피부염, 치주염, 관절염 등의 염증성 질환의 증상을 개선시킬 수 있어 약학 조성물, 화장료 조성물 등으로 유용하게 이용될 수 있다.

Description

피세틴 및 설퍼레틴을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 개선용 조성물{COMPOSITION FOR AMELIORATING INFLAMMATION DISEASE COMPRISING FISETIN AND SULFURETIN AS EFFECTIVE COMPONENTS}
본 발명은 피세틴 및 설퍼레틴을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 개선용 조성물에 관한 것이다.
염증성 질환이란 세균의 침입에 의해 형성되는 농양의 병리적 상태를 의미한다. 염증은 물리적인 외상, 유해한 화학물질, 미생물에 의한 감염이나 생체 내 대사산물 중의 자극성 물질에 의하여 야기되는 조직손상에 대하여 국소적으로 나타나는 정상적이고 보호적인 생체 내 방어기전의 발현이다. 이러한 염증은 손상조직과 이동하는 세포(migrating cells)로부터 생산되는 다양한 화학매개인자에 의하여 촉발되며, 이들 화학매개인자들은 염증과정의 형태에 따라 다양한 것으로 알려져 있다. 정상적인 경우에 생체는 염증반응을 통하여 발병 요인을 중화시키거나 제거하고 상한 조직을 재생시켜서 정상적인 구조와 기능을 회복시키지만, 그렇지 못한 경우에는 만성 염증과 같은 질병 상태로 진행되기도 한다. 또한, 꽃가루와 같이 무해한 물질이나 천식, 류마티스성 관절염과 같은 자가면역반응에 의해 부적절하게 염증이 촉발되는 경우에는 방어반응 자체가 오히려 조직을 손상시킴으로 염증성 질환 예방 또는 치료용제가 필요하게 된다. 거의 모든 임상질환에서 염증 반응을 관찰할 수 있고, 이들 염증성 질환 중에는 항생제 투여로 원인적 치료가 가능한 세균성 질환도 있지만, 대부분은 그 발병이 자가면역반응에 의한 조직손상에 기인하므로 특이적 치료법이 없는 난치병으로 알려져 있다.
염증성 질환의 일 예로는 아토피 질환을 들 수 있다. 아토피 관련 질환에서 아토피(atopy)란 그리스어인 'a-topos'가 어원으로 '특이한', '이상한','비정상적인 반응'등의 뜻을 가진다. 말 그대로 다양한 원인이 복잡하게 뒤엉켜 발병하고 완화와 재발을 반복한다. 아토피의 질환에는 천식, 결막염, 피부염 등이 있으며 이들 질환은 단독 또는 여러 질환이 동시에 나타날 수 있는데, 일반적으로 아토피 피부염을 포함한 면역과민반응 염증성질환이 그 대표적인 예라 할 수 있다. 아토피 피부염을 포함한 면역과민반응 염증성질환은 영아와 소아에서 가장 흔한 피부 질환 중 하나이며 생후 6개월 동안에 45 %, 생후 12개월 이전에 60 %, 5세 이전에 적어도 85 %의 비율로 시작된다. 보통 어릴 때 잠시 앓는 병이라고 알려져 있으나 환자의 50 %는 두 돌 이내에 그 증상이 없어지지만, 25 %는 청소년기까지 지속되며, 나머지 25 %는 성인이 되어도 없어지지 않고 계속된다(Thomas Bieber, Atopic Dermatitis, The New England Journal of Medicine, 2008, Vol. 358, ISSN 0028-4793, 1483-1494쪽). 이러한 아토피성 피부염의 원인은 아직까지 정확한 원인을 규명하지 못하고 있으나 유전적인 가족력과 음식섭취 등으로 인한 생활 환경의 영향, 결손된 피부층을 통해 유입된 항원 물질에 대한 면역반응에 따른 혈중 IgE 항체의 수준이 증가함으로써 나타나는 복합적 질환으로 알려져 있다(박찬익 외, 황련해독탕이 NC/Nga Mice에서 유발된 아토피 피부염에 미치는 영향, Kor. J. Herbology, 2008년, 23(2)：59-65쪽). 현재까지 알려진 아토피 피부염을 포함한 면역과민반응 염증성질환의 발병 원인은 정확히 밝혀져 있지 않지만 보편적으로 유전적, 면역학적 요인이 관여하는 것으로 추정되며, 기타 환경적, 정신적 요인 등이 악화 요인으로 작용한다는 것이 전문가들의 보편적인 견해이다. 아토피성 피부염의 주증상은 가려움인데, 가려워서 긁게 되면 습진성 병변으로 발전하고 이러한 병변이 진행되면서 다시 더 심한 소양증이 유발되는 일련의 악순환이 반복되게 된다. 또한 아토피 피부염을 포함한 면역과민반응 염증성질환은 난치성 알레르기 질환이라는 특징을 가지고 있고, 아토피 피부염을 포함한 면역과민반응 염증성질환 환자의 80% 이상에서 총 면역 글로블린 E(IgE) 값이 증가되어 있으며, 알레르기 비염 또는 천식을 동반한 경우에는 면역 글로블린 E 값이 수치가 높은 것으로 알려져 있다(Thomas Bieber, Atopic Dermatitis, The New England Journal of Medicine, 2008, Vol. 358, ISSN 0028-4793, 1483-1494쪽). 현재 아토피 피부염을 포함한 면역과민반응 염증성질환에서 가장 널리 사용되는 치료제는 스테로이드제로 알려진 덱사메타손을 사용하고 있으나, 이는 단기 치료에는 효과적일 뿐, 1년 이상 장기 치료 시에는 안정성과 그 효능이 성립되지 않고 피부가 얇아지거나, 피부위축, 상흔, 피부변색 등의 부작용이 발생되는 사례가 보고되는 등 문제점이 나타내고 있다(신길란, 저먼 카모마일, 라벤더, 샌달우드 혼합오일의 아토피 동물모델 NC/Nga mice에 대한 피부염 치료효과, 2009, 대전대학교 학위논문, 13쪽). 이처럼 합성 의약품은 장기간 사용에 문제가 있을 뿐만 아니라 하나의 유효성분으로는 치료가 잘 되지 않아 최근에는 다양한 유효성분과 기능을 지닌 천연물 유래의 추출물에 관심이 고조되고 있는 실정이다(대한민국등록특허 제10-1164390호, 2012.07.03, 3쪽의 [0002] ~[0006] 단락 내지 4쪽의 [0007] ~[0010] 단락).
염증성 질환의 다른 예로는 치주염을 들 수 있다. 연령이 증가함에 따라 선천적, 후천적으로 치조골이 악화될 경우 치주질환이 발병하게 되며, 대표적인 치주질환은 치주염(periodontal inflammation)이나 치조골형성장애(alveolar bone osteodystrophy)이다. 상기 치조골형성장애는 치조골다공증(alveolar bone osteoporosis), 치조골연화증(alveolar bone osteomalacia), 치조골감소증(alveolar bone osteopenia) 등의 형태로 나타나 결국 치아의 손실을 가져온다. 치주질환의 원인은 일반적으로 치구 내의 여러 가지 세균이지만 흡연, 스트레스, 영양불균형, 운동 부족, 당뇨병, 혈액질환 등에 의한 면역력 저하도 원인이 된다. 치주조직에 염증이 생기는 치주염은, 치석이 붙은 잇몸부분에 염증이 있는 초기의 치육염(치은염) 상태에서는 치석을 제거하면 염증이 없어지고 건강한 치육으로 돌아갈 수 있다. 치주질환의 치료방법에는 인위적인 치조골 이식술이나 치조골형성술이 주종을 이루고 있으나, 아직 치주질환을 효과적으로 치료할 수 있는 약물은 개발되어 있지 않으며, 소염진통제 등 개개 증상을 완화시키는 약물에 의존하고 있는 실정이다(대한민국등록특허 제10-0991857호, 2010.10.28, 4쪽, [0003] 단락).
치은염과 치주염은 치은연상과 치은연하에 인접한 치아 표면에 축적된 치태에 서식하는 치태 세균의 활동에 의해 발생한다. 치태 세균의 주요 항원인 lipolysaccharide(LPS)와 내독소(endotoxin)는 치은 조직에서 염증 반응을 일으키고, 이 염증반응을 제거하기 위해서 치은조직 내부에서는 면역세포들에 의한 면역반응이 일어난다. 이와 같은 염증-면역반응 과정에서 다양한 염증매개 인자(inflammatory cytokine)들과 matrix metalloproteases(MMPs)와 같은 기질파괴효소들이 발현되고, 이들의 활동으로 인하여 치은 조직 내부의 세포외기질(extracellular matrix; ECM)의 파괴가 나타난다. 이 반응이 심화되면 치은 조직은 심각한 내부 손상을 입게 되고, 그 결과 치은염, 치주염과 같은 잇몸 질환이 발생하게 된다(김한곤 외, 녹차추출물의 잇몸 질환 원인균에 대한 항염증 효능 연구, J. Soc. Cosmet. Scientists Korea, 2011년, Vol. 37, No. 1, March, 67-73쪽).
염증성 질환의 다른 예로는 관절염을 들 수 있다. 관절염 (arthritis)은 현재 우리나라에서 여성이 45세 이하에서는 2%인데 비해서 45-64세에 해당하는 인구의 30%로 증가하고 65세 이상 인구의 68%라는 보고가 있다(윤종현, 골관절염의 최신지견, 대한내과학회지, 제 82권 제 2호, 170 ~ 174쪽). 이와 같은 관절염은 크게 류마티스성 관절염(rheumatoid arthritis,RA), 골관절염(osteoarthritis, OA), 섬유성근육통(fibromyalgia), 낭창(lupus), 통풍(gout) 그리고, 활액낭염(bursitis) 등을 포함한다. 이 중에서 골관절염은 관절연골의 파괴, 경화증(sclerosis)과 같은 뼈의 변화, 골형성증(osteophytosis), 침범된 관절의 연골하골(subchondral bone)에서 낭종(cyst)을 특징으로 하며, 종종 염증의 증상을 가지고 서서히 진행하는 퇴행적인 질환이다(박혜상, 김준선, 저강도 초음파 치료가 MIA 유발 관절염 쥐에 미치는 효과, The Korean Journal of Sports Medicine, 2009년, 27(1): 27-32쪽). 생체 내 염증반응은 조직의 물리적 손상이나 화학물질 및 외부로부터의 자극 등 여러 가지 감염원에 대한 생체내 방어반응 중 하나이다. 세포내 다양한 염증 조절 인자들은 유도형 일산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthase; iNOS)나 사이클로-옥시제나제 (cyclo-oxygenase-2; COX-2)에 의해 생체 내 대식세포와 같은 염증 세포들이 활성화 되면서 염증 매개인자인 일산화질소(Nitric oxide; NO), 프로스타글란딘(Prostaglandin; PG), 인터류킨-1 베타(Interleukin-1 beta; IL-1β), 종양괴사인자-알파 (Tumor necrosis factor-alpha; TNF-α), 사이토카인(cytokine) 등이 다량 생산 된다(Jun-Ho Son. et.al., Anti-Inflammatory Effect of Ligularia fischeri, Solidago virga-aurea and Aruncus dioicus Complex Extracts in Raw 264.7 Cells, Journal of Life Science, 2011, Vol. 21, No. 5, 678~683쪽). 또한, 염증성 사이토카인(cytokine)인 인터루킨-1(IL-1), 종양괴사인자-α(TNF-α) 등을 유도시키게 되는데 이로 인하여 근육, 건, 인대 등과 같은 조직에도 영향을 끼쳐 심한 통증을 일으킨다(Fernandes J. C. et al., The role of cytokines in osteoarthritis pathophysiology, 2002, 39, 237-246쪽).
이에, 본 발명자들은 천연물 유래 화합물이 아토피 피부염, 치주염, 골관절염 및 류머티스 관절염과 같은 염증성 질환 개선에 효과가 있을 수 있다는 점에 착안하여 예의 연구를 거듭한 결과, 본 발명의 피세틴 및 설퍼레틴을 유효성분으로 포함하는 조성물이 염증성 질환 개선에 효과가 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
대한민국등록특허 제10-1164390호, 2012.07.03, 3쪽의 [0002] ~[0006] 단락 내지 4쪽의 [0007] ~[0010] 단락 대한민국등록특허 제10-0991857호, 2010.10.28, 4쪽, [0003] 단락
Thomas Bieber, Atopic Dermatitis, The New England Journal of Medicine, 2008, Vol. 358, ISSN 0028-4793, 1483-1494쪽 박찬익 외, 황련해독탕이 NC/Nga Mice에서 유발된 아토피 피부염에 미치는 영향, Kor. J. Herbology, 2008년, 23(2)：59-65쪽 신길란, 저먼 카모마일, 라벤더, 샌달우드 혼합오일의 아토피 동물모델 NC/Nga mice에 대한 피부염 치료효과, 2009, 대전대학교 학위논문, 13쪽 김한곤 외, 녹차추출물의 잇몸 질환 원인균에 대한 항염증 효능 연구, J. Soc. Cosmet. Scientists Korea, 2011년, Vol. 37, No. 1, March, 67-73쪽 윤종현, 골관절염의 최신지견, 대한내과학회지, 2012년, 제 82권 제 2호, 170 ~ 174쪽 박혜상, 김준선, 저강도 초음파 치료가 MIA 유발 관절염 쥐에 미치는 효과, The Korean Journal of Sports Medicine, 2009년, 27(1): 27-32쪽 Jun-Ho Son. et.al., Anti-Inflammatory Effect of Ligularia fischeri, Solidago virga-aurea and Aruncus dioicus Complex Extracts in Raw 264.7 Cells, Journal of Life Science, 2011, Vol. 21, No. 5, 678~683쪽 Fernandes J. C. et al., The role of cytokines in osteoarthritis pathophysiology, 2002, 39, 237-246쪽
본 발명의 목적은 피세틴 및 설퍼레틴을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 개선용 조성물을 제공하는 데에 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 하기 화학식 1의 피세틴(Fisetin) 및 하기 화학식 2의 설퍼레틴(sulfuretin)이 1:9 내지 9:1의 중량부로 혼합된 혼합물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 개선용 조성물을 제공한다:
[화학식 1]
Figure pat00001
[화학식 2]
Figure pat00002
바람직하게는 상기 염증성 질환 개선용 조성물은 피세틴 및 설퍼레틴이 1:1 내지 9:1의 중량부로 혼합된 혼합물을 유효성분으로 포함할 수 있다. 보다 바람직하게는 상기 염증성 질환 개선용 조성물은 피세틴 및 설퍼레틴이 9:1의 중량부로 혼합된 혼합물을 유효성분으로 포함할 수 있다.
상기 피세틴 및 설퍼레틴(sulfuretin)이 1:9 내지 9:1의 중량부로 혼합된 혼합물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 개선용 조성물은 옻추출물, 피세틴 및 설퍼레틴을 각각 처리한 경우 보다 상승효과가 있다. 상기 피세틴 및 설퍼레틴이 1:1 내지 9:1의 중량부로 혼합된 혼합물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 개선용 조성물은 옻추출물, 피세틴 및 설퍼레틴을 각각 처리한 경우 보다 상승효과가 크며, 상기 피세틴 및 설퍼레틴이 9:1의 중량부로 혼합된 혼합물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 개선용 조성물의 상승효과가 가장 크다.
상기 피세틴은 폴리페놀의 플라보노이드 그룹에 속하는 독특한 구조를 가지는 플라보놀에 속한다. 피세틴은 아카시아, 대두, 옻 등에 포함된 성분이다.
상기 설퍼레틴은 폴리페놀의 플라보노이드 그룹에 속하는 독특한 구조를 가지는 플라보놀에 속한다. 설퍼레틴은 낭파초, 옻 등에 포함된 성분이다.
상기 피세틴과 설퍼레틴은 옻나무의 추출물에서 분리될 수 있다. 예를 들어, 옻나무의 수피 및/또는 목질 부분의 추출물을 크로마토그래피를 이용하여 분리함으로써 수득할 수 있다.
상기 염증성 질환은 아토피 피부염, 천식, 결막염, 치주염, 골관절염, 퇴행성 관절염, 류머티스성 관절염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위염, 크론병, 대장염, 강직성 척추염, 건염 및 건초염일 수 있다.
상기 조성물은 면역과민반응에 의한 염증상태를 개선시킴으로써, 염증성 질환을 개선시킬 수 있다.
상기 조성물은 염증 산물인 일산화질소 생성 저해하고, 혈청 내 면역 글로블린 E(IgE) 농도와 인터류킨-4(IL-4)의 농도를 감소시키며 감마 인터페론(IFN-γ)을 증가시켜 아토피 피부염을 개선시킬 수 있다.
상기 조성물은 알칼리성 포스파타아제의 활성을 유도하여 조골세포의 분화와 미네랄화를 촉진하고, 치조골 흡수 방지 및 치조골 재생 효과를 가져 치주염을 개선시킬 수 있다.
상기 조성물은 염증성 사이토카인인 종양괴사인자-알파(TNF-α) 및 인터류킨-1베타(IL-1β)의 발현을 억제하고 관절염에 의해 유발된 통증을 감소시켜 골관절염, 퇴행성 관절염 및 류마티스성 관절염과 같은 관절염을 개선시킬 수 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 피세틴 및 설퍼레틴이 1:9 내지 9:1의 중량부로 혼합된 혼합물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 개선용 약학 조성물을 제공한다.
바람직하게는 상기 염증성 질환 개선용 약학 조성물은 피세틴 및 설퍼레틴이 1:1 내지 9:1의 중량부로 혼합된 혼합물을 유효성분으로 포함할 수 있다. 보다 바람직하게는 상기 염증성 질환 개선용 약학 조성물은 피세틴 및 설퍼레틴이 9:1의 중량부로 혼합된 혼합물을 유효성분으로 포함할 수 있다.
본 발명의 염증성 질환 개선용 약학 조성물은 본 발명의 효과를 해치지 않는 범위 안에서 약학적으로 허용 가능한 희석제, 결합제, 붕해제, 윤활제, pH 조절제, 산화방지제, 용해보조제 등의 첨가제를 포함할 수 있다.
희석제는 슈가, 전분, 미결정셀룰로오스, 유당(유당수화물), 포도당, 디-만니톨, 알기네이트, 알칼리토금속류염, 클레이, 폴리에틸렌글리콜, 무수인산수소칼슘, 또는 이들의 혼합물 등을 사용할 수 있으며; 결합제는 전분, 미결정셀룰로오스, 고분산성 실리카, 만니톨, 디-만니톨, 자당, 유당수화물, 폴리에틸렌글리콜, 폴리비닐피롤리돈(포비돈), 폴리비닐피롤리돈 공중합체(코포비돈), 히프로멜로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 천연검, 합성검, 코포비돈, 젤라틴, 또는 이들의 혼합물 등을 사용할 수 있다.
붕해제는 전분글리콘산나트륨, 옥수수전분, 감자전분 또는 전호화전분 등의 전분 또는 변성전분; 벤토나이트, 몬모릴로나이트, 또는 비검(veegum) 등의 클레이; 미결정셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스 또는 카르복시메틸셀룰로오스 등의 셀룰로오스류; 알긴산나트륨 또는 알긴산 등의 알긴류; 크로스카멜로스(croscarmellose)나트륨 등의 가교 셀룰로오스류; 구아검, 잔탄검 등의 검류; 가교 폴리비닐피롤리돈(crospovidone) 등의 가교 중합체; 중탄산나트륨, 시트르산 등의 비등성 제제, 또는 이들의 혼합물을 사용할 수 있다.
윤활제는 탈크, 스테아린산, 스테아린산 마그네슘, 스테아린산 칼슘, 라우릴설페이트나트륨, 수소화식물성오일, 나트륨벤조에이트, 나트륨스테아릴푸마레이트, 글리세릴 베헤네이트, 글리세릴 모노레이트, 글리세릴모노스테아레이트, 글리세릴 팔미토스테아레이트, 콜로이드성 이산화규소 또는 이들의 혼합물 등을 사용할 수 있다.
pH 조절제는 초산, 아디프산, 아스코르빈산, 아스코르빈산 나트륨, 에테르산 나트륨, 사과산, 숙신산, 주석산, 푸마르산, 구연산(시트르산)과 같은 산성화제와 침강 탄산 칼슘, 암모니아수, 메글루민, 탄산 나트륨, 산화 마그네슘, 탄산 마그네슘, 구연산 나트륨, 삼염기칼슘인산염과 같은 염기성화제 등을 사용할 수 있다.
산화방지제는 디부틸 히드록시 톨루엔, 부틸레이티드 히드록시아니솔, 초산 토코페롤, 토코페롤, 프로필 갈레이트, 아황산수소나트륨, 피로아황산나트륨 등을 사용할 수 있다.본 발명의 선방출성 구획에서, 용해보조제는 라우릴황산나트륨, 폴리소르베이트 등의 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테류, 도큐세이트 나트륨, 폴록사머(poloxamer) 등을 사용할 수 있다.
또한, 지연방출성 제제를 만들기 위해 장용성 고분자, 수불용성 중합체, 소수성 화합물, 및 친수성 고분자를 포함할 수 있다.
상기 장용성 고분자는 pH 5 미만의 산성 조건하에서 불용성이거나 또는 안정한 것으로, pH 5 이상인 특정 pH 조건하에서 용해되거나 또는 분해되는 고분자를 말하며, 예를 들어, 히프로멜로오스아세테이트숙시네이트, 히프로멜로오스프탈레이트(히드록시프로필메틸셀룰로오스 프탈레이트), 히드록시메틸에틸셀룰로오스프탈레이트, 셀룰로오스아세테이트프탈레이트, 셀룰로오스아세테이트숙시네이트, 셀룰로오스아세테이트말레이트, 셀룰로오스벤조에이트프탈레이트, 셀룰로오스프로피오네이트프탈레이트, 메틸셀룰로오스프탈레이트, 카르복시메틸에틸셀룰로오스 및 에틸히드록시에틸셀룰로오스프탈레이트, 메틸히드록시에틸셀룰로오스과 같은 장용성 셀룰로오스 유도체; 스티렌-아크릴산 공중합체, 아크릴산메틸-아크릴산 공중합체, 아크릴산메틸메타크릴산 공중합체(예컨대, 아크릴-이즈), 아크릴산부틸-스티렌-아크릴산 공중합체, 및 아크릴산메틸-메타크릴산-아크릴산옥틸공중합체과 같은 상기 장용성 아크릴산계 공중합체; 폴리(메타크릴산 메틸 메타크릴레이트) 공중합체(예컨대, 유드라짓 L, 유드라짓 S, 에보닉, 독일), 폴리 (메타크릴산 에틸아크릴레이트) 공중합체 (예컨대, 유드라짓 L100-55)와 같은 장용성 폴리메타크릴레이트 공중합체; 아세트산비닐-말레인산 무수물 공중합체, 스티렌-말레인산 무수물 공중합체, 스티렌-말레인산모노에스테를 공중합체, 비닐메틸에테르-말레인산 무수물 공중합체, 에틸렌-말레인산 무수물 공중합체, 비닐부틸에테르-말레인산 무수물 공중합체, 아크릴로니트릴-크릴산메틸ㆍ말레인산 무수물 공중합체, 및 아크릴산부틸-스티렌-말레인산 무수물 공중합체와 같은 장용성 말레인산계 공중합체; 및 폴리비닐알콜프탈레이트, 폴리비닐아세탈프탈레이트, 폴리비닐부틸레이트프탈레이트 및 폴리비닐아세트아세탈프탈레이트와 같은 장용성 폴리비닐 유도체가 있다.
상기 수불용성 중합체는 약물의 방출을 제어하는 약제학적으로 허용가능한 물에 용해되지 않는 고분자를 말한다. 예를 들어, 수불용성 중합체는 폴리비닐아세테이트(예컨대, 콜리코트 SR30D), 수불용성 폴리메타크릴레이트 공중합체[예컨대, 폴리(에틸아크릴레이트-메틸 메타크릴레이트) 공중합체(예컨대, 유드라짓 NE30D, 폴리(에틸아크릴레이트-메틸 메타크릴레이트-트리메틸아미노에틸메타크릴레이트)공중합체(예컨대, 유드라짓RSPO)등], 에틸셀룰로오스, 셀룰로오스 에스테르, 셀룰로오스 에테르, 셀룰로오스 아실레이트, 셀룰로오스 디아실레이트, 셀룰로오스 트리아실레이트, 셀룰로오스 아세테이트, 셀룰로오스 디아세테이트 및 셀룰로오스 트리아세테이트 등이 있다.
상기 소수성 화합물은 약물의 방출을 제어하는 약제학적으로 허용가능한 물에 용해되지 않는 물질을 말한다. 예를 들어, 글리세릴 팔미토스테아레이트, 글리세릴 스테아레이트, 글리세릴 비헤네이트, 세틸 팔미테이트, 글리세릴 모노 올레이트 및 스레아린산과 같은 지방산 및 지방산 에스테르류; 세토스테아릴 알코올, 세틸알코올 및 스테아릴알코올과 같은 지방산 알코올류; 카르나우바왁스, 밀납, 및 미결정왁스와 같은 왁스류; 탈크, 침강탄산칼슘, 인산일수소칼슘, 산화아연, 산화티탄, 카올린, 벤토나이트, 몬모릴로나이트 및 비검과 같은 무기질 물질 등이 있다.
상기 친수성 고분자는 약물의 방출을 제어하는 약제학적으로 허용가능한 물에 용해되는 고분자 물질을 말한다. 예를 들어, 덱스트린, 폴리덱스트린, 덱스트란, 펙틴 및 펙틴 유도체, 알긴산염, 폴리갈락투론산, 자일란, 아라비노자일란, 아라비노갈락탄, 전분, 히드록시프로필스타치, 아밀로오스, 및 아밀로펙틴와 같은 당류; 히프로멜로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 메틸셀룰로오스 및 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨과 같은 셀룰로오스 유도체; 구아검, 로커스트 콩 검, 트라가칸타, 카라기난, 아카시아검, 아라비아검, 젤란검, 및 잔탄검과 같은 검류; 젤라틴, 카제인, 및 제인과 같은 단백질; 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 피롤리돈, 및 폴리비닐아세탈디에틸아미노아세테이트과 같은 폴리비닐유도체; 폴리(부틸 메타크릴레이트-(2-디메틸아미노에틸)메타크릴레이트-메틸메타크릴레이트) 공중합체(예컨대, 유드라짓E100, 에보닉, 독일), 폴리(에틸 아크릴레이트-메틸 메타크릴레이드-트리에틸아미노에틸- 메타크릴레이트 클로라이드) 공중합체 (예컨대, 유드라짓 RL, RS, 에보닉, 독일)과 같은 친수성 폴리메타크릴레이트 공중합체; 폴리에틸렌 글리콜, 및 폴리에틸렌 옥사이드와 같은 폴리에틸렌 유도체; 카보머 등이 있다.
이외에도 착색제, 향료 중에서 선택된 다양한 첨가제로서 약학적으로 허용 가능한 첨가제를 선택 사용하여 본 발명의 제제를 제제화할 수 있다.
본 발명에서 첨가제의 범위가 상기 첨가제를 사용하는 것으로 한정되는 것은 아니며, 상기한 첨가제를 선택에 의하여 통상 범위의 용량을 함유하여 제제화할 수 있다.
본 발명에 따른 약제학적 조성물은 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 및 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
본 발명은 또한 본 발명의 피세틴 및 설퍼레틴이 1:9 내지 9:1의 중량부로 혼합된 혼합물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 개선용 약학 조성물을 포유류를 포함하는 대상체에 투여하여 염증성 질환 치료 방법을 제공한다. 본 발명에서 용어, "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 환자에게 본 발명의 염증성 질환 개선용 약학 조성물을 도입하는 것을 의미하며, 본 발명의 염증성 질환 개선용 약학 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 경구 투여, 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 내피 투여, 비내 투여, 폐내투여, 직장내 투여, 강내 투여, 복강내 투여, 경막내 투여될 수 있으며, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 따른 염증성 질환 개선용 약학 조성물은 일일 1회 또는 일정한 시간 간격을 두고 일일 2회 이상 투여될 수 있다.
본 발명의 염증성 질환 개선용 약학 조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다.
본 발명의 염증성 질환 개선용 약학 조성물의 투여량은 본 발명의 염증성 질환 개선용 약학 조성물의 활성, 성별, 투여 시간, 투여 경로, 치료 기간 및 횟수 등에 따라 결정되어야 하는 것으로 이해되어야 하며, 따라서 상기 투여량은 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것이 아니다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 피세틴 및 설퍼레틴이 1:9 내지 9:1의 중량부로 혼합된 혼합물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
바람직하게는 상기 염증성 질환 개선용 화장료 조성물은 피세틴 및 설퍼레틴이 1:1 내지 9:1의 중량부로 혼합된 혼합물을 유효성분으로 포함할 수 있다. 보다 바람직하게는 상기 염증성 질환 개선용 화장료 조성물은 피세틴 및 설퍼레틴이 9:1의 중량부로 혼합된 혼합물을 유효성분으로 포함할 수 있다.
상기 염증성 질환은 아토피 피부염일 수 있다.
본 발명의 염증성 질환 개선용 화장료 조성물은 면역과민반응에 의한 염증상태를 개선 효과가 있으므로, 염증성 질환 개선용 기능성 화장품으로 사용가능하다.
본 발명의 염증성 질환 개선용 화장료 조성물은 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 바디로션, 바디크림, 바디오일, 바디에센스, 메이크업 베이스, 파운데이션, 염모제, 샴푸, 린스 및 바디 세정제 등의 제형을 가질 수 있다.
본 발명에 따른 피세틴 및 설퍼레틴이 1:9 내지 9:1의 중량부로 혼합된 혼합물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 개선용 조성물은 염증 산물인 일산화질소 생성 저해하고 혈청 내 면역 글로블린 E 농도와 인터류킨-4의 농도를 감소시키며 감마 인터페론을 증가시키고, 알칼리성 포스파타아제의 활성을 유도하여 조골세포의 분화와 미네랄화를 촉진하며 조골 흡수 방지 및 치조골 재생 효과를 가지고, 염증성 사이토카인인 종양괴사인자-α 및 인터류킨-1베타의 발현을 현저히 억제하고 관절염에 의해 유발된 통증을 감소시킴으로써, 아토피 피부염, 치주염, 관절염 등의 염증성 질환의 증상을 개선시킬 수 있어 약학 조성물, 화장료 조성물 등으로 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 피세틴의 화학식이다.
도 2는 설퍼레틴의 화학식이다.
도 3은 Raw 264.7 세포주를 이용하여 본 발명에 따른 조성물의 일산화질소(Nitrite)의 생성 억제 효과를 확인한 도이다.
도 4 및 도 5는 각각 아토피 피부염을 포함한 면역과민반응 염증성질환 유발 마우스 모델에서 본 발명에 따른 조성물의 아토피 피부염 개선 효과를 보여주는 피부상태를 보여주는 사진과 피부조직의 조직학적 결과(무처리군)를 보여주는 현미경 사진이다.
도 6은 아토피 피부염을 포함한 면역과민반응 염증성질환 유발 마우스 모델에서 본 발명에 따른 조성물의 혈청 내 IgE 농도 감소 효과를 보여주는 도이다.
도 7 및 8은 각각 아토피 피부염을 포함한 면역과민반응 염증성질환 유발 마우스 모델에서 본 발명에 따른 조성물의 혈청 내 감마 인터페론(IFN-γ) 농도 증가 효과와 혈청 내 인터류킨-4(IL-4)의 농도 감소 효과를 보여주는 도이다.
도 9는 본 발명에 따른 조성물의 조골세포 분화 활성 효과를 보여주는 도이다.
도 10은 본 발명에 따른 조성물의 조골세포 석회화 활성 효과를 보여주는 도이다.
도 11은 본 발명에 따른 조성물의 치조골 흡수 방지 및 치조솔 재생효과를 보여주는 도이다.
도 12 및 13은 본 발명에 따른 조성물의 골관절염 예방 및 치료효과를 보여주는 도이다.
도 14 및 15는 각각 MIA로 관절염을 유발한 랫트에서 본 발명에 따른 조성물의 혈청 내 IL-1β의 농도 감소 효과와 혈청 내 TNF-α의 농도 감소 효과를 보여주는 도이다.
이하, 하기 실시 예에 의해 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 하기 실시 예는 본 발명의 내용을 구체화하기 위한 설명일 뿐 실시 예에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
제조예 1. 피세틴 , 설퍼레틴의 분리 및 염증성 질환 개선용 조성물 제조
본 발명에 의한 피세틴, 설퍼레틴은 옻나무의 수피 및 목질부분 (참옻샘, 횡성, 대한민국) 1kg에 대하여 물 5L를 가하고 120℃에서 3시간 동안 추출하였다. 추출액을 여과한 후 진공 농축한 후 동결건조 하여 43g의 분말을 얻었다. 얻어진 분말을 200ml의 메탄올에 녹인 다음 500ml의 증류수를 첨가하여 메탄올 층을 분리한 다음 에틸 아세테이트 500ml을 첨가하여 에틸 아세테이트 층 25g을 분리했다. 클로로포름 : 메탄올 = 2 : 8 농도를 이용, 실리카 겔(230-400메쉬, 크로마토그래피용, Merck사)을 통한 크로마토그라피 법을 이용하여 5g의 분획물을 얻었다. 그 후, 메탄올 : 물 : 아세트산 = 70 : 29 : 1 농도를 이용, 역상 C18 실리카 겔(40-63㎛, 크로마토그래피용, Merck사)을 이용한 크로마토그라피 법을 이용하여 피세틴과 설퍼레틴이 함유된 분획물을 500mg 얻었다. 얻어진 화합물을 박막크로마토그래피(TLC : 실리카겔(silica gel), 톨루엔(toluene)/에틸 아세테이트(ethyl acetate)/포름산(formic acid) = 68/23/9)와 RP-LC-ESI-MS(reversed phase high performance liquid chromatography/electrospray ionization-mass spectrometry - C18 칼럼(column), 0.1% 포름산에서 10-70% 아세토니트릴(acetonitrile)의 선형농도구배(linear gradient of acetonitrile 10-70% in 0.1% formic acid), 양/음(positive/negative) MS)를 이용하였고, 분석을 위한 표준품으로는 피세틴(Fisetin, Sigma-Aldrich)을 사용하였다. 피세틴은 표준품과 마찬가지로 분자량이 (+)-ESI-MS m/z [M]+ 287 이나 (-)-ESI-MS m/z [M-H]- 285에서 확인하였고, 설퍼레틴은 분자량 (+)-ESI-MS m/z [M]+ 271 이나 (-)-ESI-MS m/z [M-H]- 269에서 확인할 수 있었다. 이를 통해, 구성 성분이 분자식이 C15H10O6 (분자량 286)이며 황색의 결정체를 갖는 피세틴(Fisetin : 3, 3', 4', 7 - Tetrahydroxyflavone) 화합물과, 분자식이 C15H10O5 (분자량 272)이며 진한 오렌지색의 결정체를 갖는 설푸레틴(Sulfuretin : 3', 4', 6' - Trihydroxyaurone) 화합물임을 확인하였고, 구조를 각각 도 1 및 2에 나타내었다. 피세틴과 설퍼레틴은 상업적으로 구입이 가능하다.
분리된 피세틴, 설퍼레틴을 일정량의 중량비(각각 1:1, 1:9, 9:1)로 배합한 혼합물들을 제조하였다.
실시예 1. Raw 264.7 세포주을 통한 NO 생성 억제 효과 확인
뮤린 마크로파지(Murine macrophage) Raw 264.7 세포주(ATCC, Manasaas, USA))를 이용하여, 염증 반응을 유도하는 리포폴리사카라이드(Lipopolysaccharide; LPS, Sigma-Aldrich, St. Louis, U.S.A)와 제조예 1로 제조된 피세틴, 설퍼레틴을 일정량의 중량비(각각 1:1, 1:9, 9:1)로 배합한 혼합물을 10㎍/㎖의 정제수 용매에 대한 농도로 Raw 264.7 세포주에 처리하여, 염증 산물 중의 하나인 일산화질소(NO)의 생성량을 확인하였다. 자극에 의하여 과량 생성된 일산화질소(NO)는 염증성 질환을 초래한다.
리포폴리사카라이드(Lipopolysaccharide, Sigma-Aldrich, St. Louis, U.S.A)를 0.5㎍/㎖의 농도로 24시간 동안 처리하여 생성된 일산화질소(NO)의 양은 그리스 시약(Griess reagent)을 처리한 후 흡광도 측정기(Molecular Devices, Orleans, USA)를 통해 측정하였고, 양성대조군(비교예)으로 덱사메타손(Dexamethasone, 농도는 10㎍/㎖임), 양성대조군(비교예)으로 피세틴, 설퍼레틴 등이 함유된 열수 추출한 옻나무 추출물(농도는 제조예 1.의 방법으로 열수추출한 후 동결 건조한 분말의 동결건조한 분말의 정제수 용매에 대한 농도로 10㎍/㎖임)과 실시예로 제조예 1로 제조된 피세틴, 설퍼레틴을 일정량의 중량비(각각 1:9(배합 1), 1:1(배합 2), 9:1(배합 3))로 배합한 혼합물(각각의 농도는 정제수 용매에 대한 농도로 10㎍/㎖임)들을 정제수 용매에 대한 농도로 0.5㎍/㎖의 농도의 리포폴리사카라이드와 동시 처리하여 일산화질소(Nitrite, NO) 생성이 억제되는지 확인하였다. 무처리군은 아무 시료도 처리하지 않았다. 상기 Raw 264.7 세포주을 통한 NO 생성 억제 효과 확인실험의 결과를 도 3에 나타내었다.
도 3은 Raw 264.7 세포주에 (옻추출물, 덱사메타손, 피세틴, 설퍼레틴, 배합 1(피세틴 : 설퍼레틴 = 1 : 9 중량부), 배합 2(피세틴 : 설퍼레틴 = 1 : 1 중량부) 및 배합 3(피세틴 : 설퍼레틴 = 9 : 1 중량부))와 리포폴리사카라이드(LPS) 처리한 후, 일산화질소(Nitrite)의 생성량(농도)을 확인한 결과이다. 도 3에서 무처리군은 아무 시료도 처리하지 않았을 때의 결과이다.
도 3의 결과로부터 피세틴, 설퍼레틴을 일정량의 중량비로 배합한 혼합물(각각 1:9(배합 1), 1:1(배합 2), 9:1(배합 3))이 강력한 항염 작용을 보인다는 것을 확인할 수 있었다. 즉, 옻추출물, 피세틴, 설퍼레틴을 각각 처리한 것 보다 피세틴, 설퍼레틴을 일정량의 중량비로 배합한 혼합물(각각 1:9(배합 1), 1:1(배합 2), 9:1(배합 3))을 처리하는 것이 항염 작용에 효과적임을 확인할 수 있었다. 특히, 피세틴과 설퍼레틴을 9:1의 중량부로 배합한 혼합물의 항염 작용이 탁월함을 확인할 수 있었다.
실시예 2. 아토피 피부염 마우스 모델 활성 평가
6주령 수컷 NC/Nga 마우스 아토피모델(대한바이오링크, 음성, 대한민국) 34마리를 이용하여 피부 염증 및 아토피염과의 관계를 실험하였다. 마우스는 항온, 항습의 환경이 갖추어진 관행적인(conventional) 일반 사육실 환경에서 사육하였다. 마우스에 트리나이트로클로벤젠(trinitrochlcrobenzene, TNCB)(Sigma-Aldrich, St. Louis, U.S.A)을 5일간 매일 1회씩 0.2% TNCB를 150㎕씩 등 부분에 도포하여 아토피 피부염을 포함한 면역과민반응 염증성질환을 유발한 후(아토피 유발군, 대조군), 유발 익일부터 1일 1회, 2주간 피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물(배합물)을 도포 및 경구 투여하여 아토피 피부염을 포함한 면역과민반응 염증성질환 완화 효과를 확인하였다. 피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물의 아토피 피부염을 포함한 면역과민반응 염증성질환을 유발한 등 부분을 도포 및 경구투여 방법은 피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물을 정제수에 희석하여 최종 200㎎/㎏의 농도가 되도록 조제하여 마우스 10g당 0.1㎖씩 도포 및 경구 투여하였다. 또한, 양성대조군으로 사용한 덱사메타손(Dexamethasone)(Sigma-Aldrich, St. Louis, U.S.A)의 경우도 피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물과 동일한 농도로 제조하여 마우스에 처리하였다. 그리고, 대조군의 경우는 정제수를 동일하게 마우스 체중 10g당 0.1㎖씩 처리(경구투여)하였다. 무처리군은 아토피 비유발군으로 아토피를 유발하지 않고, 아무 처리도 하지 않은 것이다.
상기 피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물의 아토피 피부염을 포함한 면역과민반응 염증성질환 유발 마우스 모델 활성 결과를 도 4에 나타내었다.
도 4는 아토피 피부염을 포함한 면역과민반응 염증성질환 유발 마우스 모델의 베히클(vehicle, 정제수)의 경구투여(대조군), 덱사메타손의 경구투여 및 도포투여, 및 피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물(배합물)의 경구투여 및 도포투여 후의 면역과민반응 염증성질환 유발 마우스 모델의 피부상태와 아토피 피부염을 포함한 면역과민반응 염증성질환 비유발 마우스 모델의 피부상태(무처리군)를 보여주는 사진이다.
도 4에서 나타낸 바와 같이, 아토피 유발군 마우스는 아토피 비유발군 마우스에 비하여 털이 자라나는 시기도 늦고, 염증 회복도 늦었다. 하지만 아토피 피부염을 포함한 면역과민반응 염증성질환 유발 후 피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물(배합물)을 처리한 군은 염증이 유발된 마우스에 정제수를 처리한 군과 양성대조군인 덱사메타손 처리한 군에 비하여 육안적 관찰 결과 회복하는 속도가 빠르고, 털이 자라나는 시기도 앞당겨졌다.
시료 처리를 2주간 진행 후, 아토피 유발 부위의 피부를 해부기를 이용하여 적출한 후 4% PFA(paraformaldehyde)로 고정하였다. 단계별로 에탄올(EtOH)과 자일렌(xylene)으로 탈수 처리한 후 파라핀으로 포매 하였다. 마이크로톰을 이용하여 5㎛ 두께의 절편을 만들어 다시 자일렌으로 파라핀을 제거하였다. 헤마토자일린(Hematoxylin)과 에오신(Eosin) (H&E)으로 염색하여 광학현미경으로 피부 조직의 조직학적 변화를 관찰하였다.
도 5는 아토피 피부염을 포함한 면역과민반응 염증성질환 유발 마우스 모델의 베히클(vehicle, 정제수)의 경구투여(대조군), 덱사메타손의 경구투여 및 도포투여, 및 피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물(배합물)의 경구투여 및 도포투여 후의 면역과민반응 염증성질환 유발 마우스 모델의 피부조직의 조직학적 결과와 아토피 피부염을 포함한 면역과민반응 염증성질환 비유발 마우스 모델의 피부조직의 조직학적 결과(무처리군)를 보여주는 현미경 사진이다.
도 5에서 나타낸 바와 같이, 아토피 유발군 마우스(대조군)는 아토피 비유발군 마우스(무처리군)에 비하여 피부표면의 염증상태가 심하고 형태학적으로 피부장벽이 깨어져 있는 모습을 확인할 수 있다. 하지만 아토피 유발 후 피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물(배합물)을 처리한 군은 피부표면의 염증상태가 아토피 비유발군과 유사하게 보이며, 피부장벽도 깨어져 있지 않은 점으로 보아, 피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물(배합물)은 아토피 피부염을 포함한 면역과민반응 염증성질환이 유발된 마우스에서 대조군인 염증이 유발된 마우스에 정제수를 처리한 군과 양성대조군인 덱사메타손 도포 및 투여 처리한 군에 비하여 더욱 탁월한 효과가 있음을 확인하였다.
실시예 3. 아토피 피부염을 포함한 면역과민반응 염증성질환 마우스 모델에서의 혈청 내 IgE 농도 감소 효과
면역과민반응 염증성질환 마우스 모델에 제조예 1에서 제조된 피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물(배합물)을 처리한 후 아토피 피부염을 포함한 면역과민반응 염증성질환과 관련된 면역 항체인 면역 글로블린E(IgE)의 마우스 혈청 내 농도 감소 효과를 확인하였다.
실시예 2와 실질적으로 동일한 방법으로 아토피 유발군(대조군)을 만들어, 덱사메타손 도포 및 경구 투여, 피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물(배합물)을 도포 및 경구 투여를 수행하였다. 무처리군은 아토피 비유발군으로 아토피를 유발하지 않고, 아무 처리도 하지 않은 것이다.
NC/Nga mouse(대한바이오링크, 음성, 대한민국)의 혈청 내 IgE 농도는 효소면역검사법(enzyme-linked immuno sorbentassay)로 측정하였다. IgE는 NC/Nga mouse에서 채혈한 혈청 1μL (1/50 희석(dilution))와 IgE ELISA kit (IgE ELISA kit, Shibayagi, Gunma, Japan)를 이용하여 희석완충액(Buffer Solution, Shibayagi, Gunma, Japan)49μL를 혼합하여 96 웰 플레이트의 각 웰에 분주하였다. 각각 2 시간 동안 25℃ 실온에서 놓아둔 후 2회 세척 완충용액(Washing Buffer, Shibayagi, Gunma, Japan)으로 세척 후 antibody biotin-IgE conjugated(Biotin-conjugated anti-IgE antibody, Shibayagi, Gunma, Japan를 넣고 2시간 두었다. 다시 2 회 수세 후 완충용액(Washing Buffer, Shibayagi, Gunma, Japan)으로 세척한 후 antibody Avidin-HRP conjugeted(HRP-conjugated avidin, Shibayagi, Gunma, Japan) 100 μL를 처리하고 1 시간 실온에서 놓아둔 후 세척하였다. TMB(tetramethyl-benzidine) 기질(Chromogenic substrate reagent(TMB), Shibayagi, Gunma, Japan)을 100 μL씩 분주하고 암소에서 30 분간 방치 후 100 μL의 stop 용액(Reaction stopper, Shibayagi, Shibayahi, Gunma, Japan)을 처리 후 흡광도 측정기(Microplate Reader, Molecular Devices, Orleans, USA) 450 nm에서 IgE에 대한 흡광도를 측정하였다.
도 6은 아토피 피부염을 포함한 면역과민반응 염증성질환 비유발 마우스 모델(무처리군)의 혈청 내 면역 글로블린 E(IgE)의 농도에 대한 아토피 피부염을 포함한 면역과민반응 염증성질환 유발 마우스 모델의 베히클(vehicle, 정제수)의 경구투여(대조군), 덱사메타손의 경구투여 및 도포투여, 및 피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물(배합물)의 경구투여 및 도포투여 후의 면역과민반응 염증성질환 유발 마우스 모델의 혈청 내 면역 글로블린 E(IgE)의 농도를 백분율로 계산한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 6에서 나타낸 바와 같이, 피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물(배합물)(농도는 10㎍/㎖임)이 아토피 유발을 통해 증가된 혈청 내 IgE 농도를 감소시키는 효과가 있음을 확인하였다.
실시예 4. 면역관련 염증성 사이토카인(Cytokine) 발현량 확인
면역과민반응 염증성질환 마우스 모델에 제조예 1에서 제조된 피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물(배합물)을 처리한 후 아토피 피부염을 포함한 면역과민반응 염증성질환과 관련된 사이토카인인 감마 인터페론(IFN-γ)의 마우스 혈청 내 농도 증가 효과와 인터류킨-4(IL-4)의 마우스 혈청 내 농도 감소 효과를 확인하였다.
실시예 2와 실질적으로 동일한 방법으로 아토피 유발군(대조군)을 만들어, 덱사메타손 도포 및 경구 투여, 피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물(배합물)을 도포 및 경구 투여를 수행하였다. 무처리군은 아토피 비유발군으로 아토피를 유발하지 않고, 아무 처리도 하지 않은 것이다.
염증성 사이토카인인 감마 인터페론(IFN-γ)와 인터류킨-4(IL-4)의 농도는 효소면역검사법(enzyme-linked immuno sorbentassay)로 측정하였다. 염증을 유발한 마우스에서 채혈한 혈청 1μL (1/50 희석(dilution))와 IFN-γ와 IL-4 platinum ELISA kit (eBioscience, San Die해, USA)를 이용하여 희석 완충용액(Sample Diluent, eBioscience, San Diego, USA) 49μL를 혼합하여 96웰 플레이트의 각 웰에 분주하였다. 각각 2 시간 동안 25℃ 실온에서 놓아둔 후 2회 세척 완충용액(Wash Buffer, eBioscience, San Diego, USA)으로 세척 후 antibody biotin conjugated(Biotin-Conjugate, eBioscience, San Diego, USA)를 넣고 2시간 두었다. 다시 2 회 수세 후 완충용액(Wash Buffer, eBioscience, San Diego, USA)으로 세척한 후 antibody Streptavidin-HRP conjugeted(Streptavidin-HRP, eBioscience, San Diego, USA) 100 μL를 처리하고 1 시간 실온에서 놓아둔 후 세척하였다. TMB(tetramethyl-benzidine) 기질을 100 μL씩 분주하고 암소에서 30 분간 방치 후 100 μL의 stop 용액(Stop Solution, eBioscience, San Diego, USA)을 처리 후 흡광도 측정기(Molecular Devices, Orleans, USA) 450 nm에서 IFN-γ 및 IL-4에 대한 흡광도를 측정하였다.
도 7은 아토피 피부염을 포함한 면역과민반응 염증성질환 비유발 마우스 모델(무처리군)의 혈청 내 감마 인터페론(IFN-γ)의 농도에 대한 아토피 피부염을 포함한 면역과민반응 염증성질환 유발 마우스 모델의 베히클(vehicle, 정제수)의 경구투여(대조군), 덱사메타손의 경구투여 및 도포투여, 및 피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물(배합물)의 경구투여 및 도포투여 후의 면역과민반응 염증성질환 유발 마우스 모델의 혈청 내 감마 인터페론(IFN-γ)의 농도를 백분율로 계산한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 8은 아토피 피부염을 포함한 면역과민반응 염증성질환 비유발 마우스 모델(무처리군)의 혈청 내의 인터류킨-4(IL-4)의 농도에 대한 아토피 피부염을 포함한 면역과민반응 염증성질환 유발 마우스 모델의 베히클(vehicle, 정제수)의 경구투여(대조군), 덱사메타론의 경구투여 및 도포투여, 및 피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물(배합물)의 경구투여 및 도포투여 후의 면역과민반응 염증성질환 유발 마우스 모델의 혈청 내 인터류킨-4(IL-4)의 농도를 백분율로 계산한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 7과 도 8에서 나타낸 바와 같이, 피세틴, 설퍼레틴을 피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물(배합물)이 세포성 면역에 관여하는 IFN-γ의 농도를 증가시키고, B세포의 항체 생산을 도와 액성 면역을 유도하는 IL-4의 농도를 감소시키는 효과가 있음을 확인하였다.
실시예 5. 조골세포 분화 활성 효과 확인
조골세포는 Human osteoblast-like MG63 cell(ATCC, Manasaas, USA)을 이용하였고, 분화 활성 측정은 세포내 DNA양을 확인하는 Brad cell proliferation assay 방법(브래드 세포증식분석 방법, Assessment of cell proliferation by 5-bromodeoxyuridine (BrdU) labeling for multicolor flow cytometry. Curr Protoc Cytom. 2007 Apr;Chapter 7:Unit 7.31.)을 이용하여 피세틴, 설퍼레틴을 일정량의 중량비로 배합한 혼합물(배합 1(피세틴 : 설퍼레틴 = 1:9 중량부), 배합 2(피세틴 : 설퍼레틴 = 1:1 중량부) 및 배합 3(피세틴 : 설퍼레틴 = 9:1 중량부))의 혼합비별 조골세포 분화 활성을 확인하였다.
구체적으로 살펴보면, 옻추출물, 독시싸이클린, 피세틴, 설퍼레틴, 배합 1(피세틴 : 설퍼레틴 = 1 : 9 중량부), 배합 2(피세틴 : 설퍼레틴 = 1 : 1 중량부) 및 배합 3(피세틴 : 설퍼레틴 = 9 : 1 중량부)을 각각 정제수로 희석하여 10㎍/㎖의 농도로 Human osteoblast-like MG63 세포주(ATCC, Manasaas, USA)에 처리하고 24시간이 흐른 후 조골세포 분화 활성을 세포내 DNA양을 확인하는 Brad cell proliferation assay 방법을 이용하여 확인하여 도 9에 나타내었다. 도 9에서 무처리군은 아무 시료도 처리하지 않았을 때의 결과이다.
도 9는 무처리군의 조골세포 증식에 대한 옻추출물 처리군, 독시싸이클린 처리군, 피세틴 처리군, 설퍼레틴 처리군, 배합 1(피세틴 : 설퍼레틴 = 1 : 9 중량부) 처리군, 배합 2(피세틴 : 설퍼레틴 = 1 : 1 중량부) 처리군 및 배합 3(피세틴 : 설퍼레틴 = 9 : 1 중량부) 처리군의 조골세포 증식의 백분율을 나타내는 그래프이다.
도 9에서 나타낸 바와 같이, 피세틴, 설퍼레틴을 일정량의 중량비로 배합(각각 1:9(배합 1), 1:1(배합 2), 9:1(배합 3))한 혼합물이 조골세포 분화 활성을 보인다는 것을 확인할 수 있었다. 즉, 옻추출물, 피세틴, 설퍼레틴을 각각 처리한 것 보다 피세틴, 설퍼레틴을 일정량의 중량비로 배합한 혼합물(각각 1:9(배합 1), 1:1(배합 2), 9:1(배합 3))을 처리하는 것이 조골세포 분화 활성에 효과적임을 확인할 수 있었다. 특히, 피세틴과 설퍼레틴을 9:1의 중량부로 배합한 혼합물이 조골세포 분화 활성에 탁월함을 확인할 수 있었다.
실시예 6. 조골세포 석회화 활성 효과 확인
Mouse osteoblst MCT3T3 세포주(ATCC, Manasaas, USA)에서 피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물의 처리에 의한 인산칼슘(calcium phosphate) 침작정도를 확인하는 시험하였다. 조골세포를 50㎍/ml 아스코르브산(ascorbic acid, sigma)과 10mM 베타-글리세로포스페이트(β-glycerophosphate, sigma)이 존재하는 DMEM 배지(PAA. CANADA)을 이용하여 37℃ incubator에서 배양하면서 생체 내에서 뼈가 형성 될 때와 유사하게 골결절(bone nodule)이 형성되면서 인산칼슘이 침착되며 침작되는 정도를 Alizarin red S(sigma) 염색으로 확인하였다. Alizarin red S는 금속이온과 결합하는 성질이 있어 체내의(또는 세포내의) Ca 이온과 결합하여 염색되므로 이를 이용하여 체내의(또는 세포내의) 골세포가 분화되어 무기질을 형성하는 무기화(mineralization)를 확인할 수 있다.
도 10은 Mouse osteoblst MCT3T3 cell 세포주에 옻추출물, 독시싸이클린, 피세틴, 설퍼레틴, 피세틴 및 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물(배합물)을 처리하여 인산칼슘(calcium phosphate) 침작정도를 확인한 결과이다. GM 은 10% FBS 와 1% penicilin-streptomycin 이 포함된 DMEM 배지(PAA. CANADA)를 뜻하며 DM은 GM에 50㎍/㎖ 아스코르브산과 10mM 베타-글리세로포스페이트가 포함된 배지(배지의 종류 및 출처 기재요청)를 의미한다.
도 10의 결과로부터 피세틴, 설퍼레틴을 일정량의 중량비로 배합한 혼합물(피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물)을 처리할 경우 Mouse osteoblst MCT3T3 cell 세포주 내에 인산칼슘이 침착시킬 수 있음을 확인할 수 있었다. 즉, 피세틴, 설퍼레틴을 일정량의 중량비로 배합한 혼합물(피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물)은 조골세포의 석회화 활성을 가짐을 확인할 수 있었다.
실시예 7. 랫트 모델을 이용한 치조골 흡수 방지 및 치조골 재생효과 확인
Sprague-Dawley(대한바이오링크, 음성, 대한민국) 랫트 하악의 제2 대구치에 실크 봉합사를 이용한 결찰을 시행하여 치주염을 유발하였고, 치주염 유발이 확인된 랫트에 양성대조약물(독시싸이클린, 20mg/kg) 및 피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물(배합물, 200mg/kg)을 4주간 투여한 후, 마이크로 CT(Micro Computed Tomography; Micro CT, Inveon™ Simens Medical Solutions USA, Inc.)로 촬영하여 치조골 흡수 방지 및 치조골 재생 효과를 확인하였다.
도 11은 치주염을 유발한 Sprague-Dawley 랫드에 베히클(vehicle, 정제수)의 경구투여(대조군), 독시싸이클린의 경구투여 및 피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물(배합물)의 경구투여 후의 micro CT로 촬영하여 치조골 흡수 방지 및 치조골 재생 효과를 확인한 결과이다.
도 11에서 나타낸 바와 같이, 피세틴, 설퍼레틴을 일정량의 중량비로 배합한 혼합물(피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물)이 양성대조약물에 비해 치조골 흡수 방지 및 치조골 재생에 효과적임을 확인할 수 있었다.
실시예 8. MIA로 관절염을 유발한 랫트 모델에서의 골관절염 예방 및 치료 효능 확인
체중 200g 내외의 수컷 Sprague-Dawley 랫트를 대한바이오링크(대전, 대한민국)에서 구입하여 1주일간 적응시킨 후 사용하였다. 시그마사에서 구입한 MIA(monosodium iodoacetate)를 생리식염수로 60mg/㎖의 농도로 용해한 후, 랫트를 마취시키고 슬관절의 전면을 소독한 후, 관절강내로 MIA 용액 0.05㎖를 주사하여 골관절염을 유발 시켰다. 비유발군은 MIA 용액을 주사하지 않은 정상군으로 유발하기 전 15일 동안 증류수 1㎖를 경구투여 하였다. 음성대조군(무처리군)은 MIA용액을 주사하며 유발을 하기 전 15일 동안 증류수 1㎖를 경구투여 하였다. 양성대조군은 MIA용액을 주사하여 골관절염 유발을 하기 전 15일 동안 라이프리놀(lyprinol, Treatment of knee osteoarthritis with Lyprinolㄾ, lipid extract of the green-lipped mussel-a double-blind placebo-controlled study, Lau, C.S. et.al., Progress in Nutrition 6(1):17-31, 2004) 100mg/kg 농도로 각 개체별로 1㎖씩 경구투여 하였다. 시험군은 MIA 용액을 주사하여 골관절염 유발을 하기 전 15일 동안 피세틴 및 설퍼레틴을 일정량의 중량비로 배합한 혼합물(예. 피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물, 200mg/kg)을 1㎖씩 경구투여 하였다. 시험물질의 투여 전후 또는 전체 투여기간에 걸쳐 골관절염 유발 동물의 행동 패턴을 확인한 후 특정 시점(time point)을 잡아 골관절염 유발 동물의 운동 능력을 평가하기 위하여 보행훈련 및 관절통증 검사기 (Gait system, Clever Sys, gait scan - 장흥 천연자원연구원)를 이용하여 행동 능력을 확인하였다. 구체적으로, 러닝머신과 같이 회전하는 treadmill 위에 Rat을 올려 강제로 걷게 하여 좌우 디딤발의 압력을 treadmill 하부의 중량센서를 이용하여 측정하였다.
도 12 및 13은 MIA 용액을 주사하여 관절염을 유발을 하기 전 라이프리놀을 경구투여하거나 피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물(배합물)의 경구투여한 후의 골관절염 유발 동물의 운동 능력을 확인한 결과이다.
도 12 및 13은 무처리군의 족저압(foot pressure)에 대한 관절염 유발군, 라이프리놀 처리군, 피세틴 및 설퍼레틴을 일정량의 중량비로 배합한 혼합물(배합물) 처리군의 족저압의 백분율을 나타내는 그래프로, 도 12 및 도 13은 각각 우측후족저압(Right rear foot pressure) 및 좌측후족저압(Left rear foot pressure)을 나타낸다.
도 12 및 도 13에서 나타낸 바와 같이, 관절염을 유발한 랫트에 피세틴, 설퍼레틴을 일정량의 중량비로 배합한 혼합물(피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물)을 경구 투여할 경우 관절염을 유발한 대조군과 비교하여 발의 디딤압력의 증가하는 것을 확인할 수 있으며, 이는 관절염으로 인한 통증의 감소되었다는 것을 나타낸다. 따라서, 설퍼레틴을 일정량의 중량비로 배합한 혼합물(피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물)은 관절염에 효과가 있음을 확인할 수 있다.
실시예 9. MIA로 관절염을 유발한 랫트 혈청에서의 염증성 사이토카인(Cytokine) 발현량 확인
IL-1β, TNF-α의 발현 양을 측정하기 위해 Rat-MID™ IL-1β, TNF-α ELISA Kit(Nordic bio Sci., USA)를 구입하여 피세틴, 설퍼레틴을 일정량의 중량비로 배합한 혼합물(예. 피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물, 200mg/kg)을 MIA 로 관절염을 유도하기 전 15일 동안 경구투여 한 랫트의 혈청을 이용해 혈청 내 IL-1β, TNF-α의 함량을 효소면역검사법(enzyme-linked immuno sorbentassay)을 이용하여 확인 하였다.
구체적으로, 실시예 8과 동일한 조건으로 MIA 약물을 이용하여 염증을 유발한 랫트에서 채혈한 혈청 1μL (1/50 희석)와 IL-1β 와 TNF-α platinum ELISA kit (eBioscience, San Die해, USA)를 이용하여 희석 완충용액(Sample Diluent, eBioscience, San Diego, USA) 49μL를 혼합하여 96웰 플레이트의 각 웰에 분주하였다. 각각 2 시간 동안 25℃ 실온에서 놓아둔 후 2회 세척 완충용액(Wash Buffer, eBioscience, San Diego, USA)으로 세척 후 antibody biotin conjugated(Biotin-Conjugate, eBioscience, San Diego, USA)를 넣고 2시간 두었다. 다시 2 회 수세 후 완충용액(Wash Buffer, eBioscience, San Diego, USA)으로 세척한 후 antibody Streptavidin-HRP conjugeted(Streptavidin-HRP, eBioscience, San Diego, USA) 100 μL를 처리하고 1 시간 실온에서 놓아둔 후 세척하였다. TMB(tetramethyl-benzidine) 기질을 100 μL씩 분주하고 암소에서 30 분간 방치 후 100 μL의 stop 용액(Stop Solution, eBioscience, San Diego, USA)을 처리 후 흡광도 측정기(Molecular Devices, Orleans, USA) 450 nm에서 IL-1β 및 TNF-α에 대한 흡광도를 측정하였다.
도 14는 MIA용액을 주사하여 관절염을 유발을 하기 전 라이프리놀의 경구투여하거나 피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물(배합물)의 경구투여한 후의 혈청 내 염증성 사이토카인인 TNF-α의 발현량을 확인한 결과이다. 도 14는 무처리군의 혈청 내 TNF-α 농도에 대한 관절염 유발군, 라이프리놀 처리군 및 피세틴 및 설퍼레틴을 일정량의 중량비로 배합한 혼합물 처리군의 TNF-α 농도의 백분율을 나타내는 그래프이다. 도 14에서 무처리군은 아무 시료도 처리하지 않았을 때의 결과이다.
도 15는 MIA용액을 주사하여 관절염을 유발을 하기 전 라이프리놀의 경구투여하거나 피세틴 및 설퍼레틴을 일정량의 중량비로 배합한 혼합물의 경구투여한 후의 혈청 내 염증성 사이토카인인 IL-1β의 발현량을 확인한 결과이다. 도 15에서 무처리군은 아무 시료도 처리하지 않았을 때의 결과이다. 도 15는 무처리군의 혈청 내 IL-1β 농도에 대한 관절염 유발군, 라이프리놀 처리군 및 피세틴 및 설퍼레틴을 일정량의 중량비로 배합한 혼합물 처리군의 IL-1β 농도의 백분율을 나타내는 그래프이다.
도 14 및 도 15의 결과로부터 피세틴, 설퍼레틴을 일정량의 중량비로 배합한 혼합물(예. 피세틴, 설퍼레틴을 9:1의 중량비로 배합한 혼합물, 200mg/kg)이 염증성 사이토카인인 TNF-α 및 IL-1β의 발현을 현저히 억제하여 골관절염에 우수한 효능이 있는 것을 확인하였다.
제제예 1. 피세틴, 설퍼레틴을 일정량의 중량비로 배합한 혼합물을 포함하는 피부 외용제 제조
1.1. 피세틴, 설퍼레틴을 일정량의 중량비로 배합한 혼합물을 함유한 크림
피세틴, 설퍼레틴을 일정량의 중량비(각각 1:1, 1:9 또는 9:1)로 배합한 혼합물을 함유한 크림의 제조예는 하기 표 1에 나타낸 바와 같다. 수상인 정제수, 트리에탄올아민, 글리콜(1,3-Propanediol)을 70℃로 가열하고 용해시키고, 여기에 유상인 지방산, 유성성분, 유화제 및 방부제를 70℃로 가열하여 용해한 액을 첨가하여 유화시킨다. 유화가 완료된 후 상기 용액을 45℃로 냉각시키고 피세틴, 설퍼레틴을 일정량의 중량비로 배합(각각 1:1, 1:9 또는 9:1)한 혼합물과 향을 첨가하고 분산시킨 다음 30℃로 냉각한다.
[표 1]
Figure pat00003
1.2. 피세틴 , 설퍼레틴을 일정량의 중량비로 배합한 혼합물을 함유한 겔
피세틴, 설퍼레틴을 일정량의 중량비(각각 1:1, 1:9 또는 9:1)로 배합한 혼합물을 함유한 겔의 제조예는 하기 표 2에 나타낸 바와 같다.
[표 2]
Figure pat00004
제제예 2. 피세틴, 설퍼레틴을 일정량의 중량비로 배합한 혼합물을 포함하는 약학 조성물의 제조
피세틴, 설퍼레틴을 일정량의 중량비로 배합한 혼합물은 예를 들어, 피세틴, 설퍼레틴을 1:1, 1:9 또는 9:1로 배합한 혼합물이다.
2.1. 산제의 제조
피세틴, 설퍼레틴을 일정량의 중량비로 배합한 혼합물 30 mg
유당 100 mg
탈크 10 mg
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
2.2. 정제의 제조
피세틴, 설퍼레틴을 일정량의 중량비로 배합한 혼합물 30 mg
옥수수전분 100 mg
유당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
2.3. 캅셀제의 제조
피세틴, 설퍼레틴을 일정량의 중량비로 배합한 혼합물 30 mg
결정성 셀룰로오스 3 mg
락토오스 14.8 mg
마그네슘 스테아레이트 0.2 mg
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
2.4. 주사제의 제조
피세틴, 설퍼레틴을 일정량의 중량비로 배합한 혼합물 30 mg
만니톨 180 mg
주사용 멸균 증류수 2974 mg
Na2HPO4·12H2O 26 mg
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당 (2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.
2.5. 액제의 제조
피세틴, 설퍼레틴을 일정량의 중량비로 배합한 혼합물 30 mg
이성화당 10 g
만니톨 5 g
정제수 적량
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ㎖로 조절한 후 갈색 병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.
본 발명의 단순한 변형 내지 변경은 이 분야의 통상의 지식을 가진 자에 의하여 용이하게 실시될 수 있으며, 이러한 변형이나 변경은 모두 본 발명의 영역에 포함되는 것으로 볼 수 있다.

Claims (10)

  1. 피세틴 및 설퍼레틴이 1:9 내지 9:1의 중량부로 혼합된 혼합물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 개선용 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 염증성 질환은 아토피 피부염, 천식, 결막염, 치주염, 골관절염, 퇴행성 관절염, 류머티스성 관절염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위염, 크론병, 대장염, 강직성 척추염, 건염 및 건초염으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 염증성 질환 개선용 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 면역과민반응에 의한 염증상태를 개선하는 염증성 질환 개선용 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 염증 산물인 일산화질소 생성을 저해하고, 혈청 내 면역 글로블린 E(IgE) 농도와 인터류킨-4(IL-4)의 농도를 감소시키며 감마 인터페론(IFN-γ)을 증가시키는 아토피 피부염 개선용인 염증성 질환 개선용 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 알칼리성 포스파타아제의 활성을 유도하여 조골세포의 분화와 미네랄화를 촉진하고, 치조골 흡수 방지 및 치조골 재생 효과를 갖는 치주염 개선용인 염증성 질환 개선용 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 염증성 사이토카인인 종양괴사인자-알파(TNF-α) 및 인터류킨-1베타(IL-1β)의 발현을 억제하고 관절염에 의해 유발된 통증을 감소시키는 골관절염, 퇴행성 관절염 및 류마티스성 관절염으로 이루어진 군으로부터 선택된 관절염 개선용인 염증성 질환 개선용 조성물.
  7. 피세틴 및 설퍼레틴이 1:9 내지 9:1의 중량부로 혼합된 혼합물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 개선용 약학 조성물.
  8. 피세틴 및 설퍼레틴이 1:9 내지 9:1의 중량부로 혼합된 혼합물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 개선용 화장료 조성물.
  9. 제8항에 있어서, 상기 염증성 질환은 아토피 피부염인 염증성 질환 개선용 화장료 조성물.
  10. 제 9항에 있어서, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 바디로션, 바디크림, 바디오일, 바디에센스, 메이크업 베이스, 파운데이션, 염모제, 샴푸, 린스 및 바디 세정제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 제형을 가지는 염증성 질환 개선용 화장료 조성물.
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