KR20140091030A - Btk 활성 억제제로서의 8-플루오로프탈라진-1(2h)-온 화합물 - Google Patents

Btk 활성 억제제로서의 8-플루오로프탈라진-1(2h)-온 화합물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 키나제를 억제하고, 면역 장애, 예컨대 Btk 키나제로 매개되는 염증을 억제하는데 유용한 하기 화학식 II의 8-플루오로프탈라진-1(2H)-온 화합물, 이의 입체이성질체, 호변체, 및 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다. 시험관내, 동일 반응계내 및 생체내 진단, 및 포유동물 세포 내의 상기 질환 또는 관련된 병리학적 병태의 치료를 위한 화학식 II의 화합물의 사용 방법이 기술되어 있다:
Figure pct00100
II
상기 식에서, X1, X2, 및 X3 중 1개 또는 2개가 N이다.

Description

BTK 활성 억제제로서의 8-플루오로프탈라진-1(2H)-온 화합물{8-FLUOROPHTHALAZIN-1(2H)-ONE COMPOUNDS AS INHIBITORS OF BTK ACTIVITY}
본 발명은 일반적으로 브루톤 티로신 키나제(Btk)에 의해 매개된 질환, 예컨대 염증, 면역학적 질환 및 암의 치료를 위한 화합물, 더욱 구체적으로 Btk 활성을 억제하는 화합물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 포유동물 세포 또는 관련된 병리학적 병태의 시험관내, 동일 반응계내 및 생체내 진단 또는 치료를 위한 화합물의 사용 방법에 관한 것이다.
관련 출원에 대한 상호 참조
본원은, 2011년 11월 3일자로 출원되고 본원에 이의 전체내용이 참고로서 인용되는 미국 가출원 제61/555,398호를 우선권으로서 주장한다.
인간 효소의 가장 큰 계열인 단백질 키나제는 500개를 훨씬 초과하는 단백질을 포함한다. 브루톤 티로신 키나제(Btk)는 티로신 키나제의 Tec 계열의 구성원이고, 조기 B-세포 발생 및 성숙 B-세포 활성화, 신호전달 및 생존의 조절자이다.
B-세포 수용체(BCR)를 통한 B-세포 신호전달은 광범위한 생물학적 결과를 야기할 수 있고, 이는 또한 B-세포의 발생 단계에 따라 변한다. BCR 신호의 크기 및 지속시간은 정확히 조절되어야 한다. 비정상적인 BCR-매개된 신호전달은 이상조절된 B-세포 활성화 및/또는 다발성 자가면역 및/또는 염증 질환을 야기하는 병원성 자기항체의 형성을 유발할 수 있다. 인간내 Btk의 돌연변이는 X-연결된 무감마글로불린혈증(XLA)을 야기한다. 이러한 질병은 B-세포의 손상된 돌연변이, 감소된 면역글로불린 생산, 약화된 T-세포-독립적인 면역 반응, 및 BCR 자극에 대한 일관된 칼슘 신호의 현저한 경감과 관련된다. 알러지 질환 및/또는 자가면역 질환 및/또는 염증 질환에서의 Btk의 역할에 대한 증거는 Btk-결핍 마우스 모델에서 확립되었다. 예를 들어, 전신 홍반성 낭창(SLE)의 표준 뮤린 전임상 모델에서, Btk 결핍은 질병 진행의 현저한 개선을 야기하는 것으로 나타났다. 또한, Btk 결핍 마우스도 콜라겐-유발된 관절염의 발생에 대한 내성을 가질 수 있고, 포도상구균(Staphylococcus)-유발된 관절염에 덜 걸릴 수 있다. 증거의 큰 부분은 자가면역 및/또는 염증 질환의 발병에서 B-세포의 역할 및 체액 면역 시스템을 지지한다. B-세포를 대폭 감소시키기 위한 단백질-기반 치료제(예컨대, 리툭산(Rituxan))는 다수의 자가면역 및/또는 염증 질환의 치료를 위한 접근법을 나타낸다. B-세포 활성화에서의 Btk의 역할 때문에, Btk의 억제제는 B-세포 매개된 병원 활성(예컨대, 자기항체 생산)의 억제제로서 유용할 수 있다. Btk는 또한 파골세포, 비만세포 및 단핵구에서 발현되고, 이러한 세포의 기능을 위해 중요한 것으로 나타났다. 예를 들어, 마우스에서의 Btk 결핍은 손상된 IgE-매개된 비만세포 활성화(TNF-알파 및 다른 염증성 시토카인 방출의 현저한 감소)와 관련이 있고, 인간에서의 Btk 결핍은 활성화된 단핵구에 의한 상당히 감소된 TNF-알파 생산과 관련이 있다.
따라서, Btk 활성의 억제는 알러지 질환 및/또는 자가면역 및/또는 염증 질환, 예컨대 SLE, 류마티스성 관절염, 다발성 맥관염, 특발성 혈소판 감소성 자반증(ITP), 중증 근무력증, 알러지성 비염 및 천식(문헌[Di Paolo et al (2011) Nature Chem. Biol. 7(1):41-50; Liu et al (2011) Jour. of Pharm. and Exper. Ther. 338(1):154-163])의 치료에 유용할 수 있다. 또한, Btk는 세포자멸에서 중요한 것으로 보고되었고; 이에 따라, Btk 활성의 억제는 암, 및 B-세포 림프종, 백혈병, 및 다른 혈액학적 악성 종양의 치료에 유용할 수 있다. 또한, 파골세포 기능에서의 Btk의 역할에 기인하여, Btk 활성의 억제는 골다공증과 같은 골 질환의 치료에 유용할 수 있다. 특이적인 Btk 억제제가 보고되었다(문헌[Liu (2011) Drug Metab. and Disposition 39(10):1840-1849]; 미국특허 제7,884,108호, 국제특허공개 제2010/056875호; 미국특허 제7,405,295호; 미국특허 제7,393,848호; 국제특허공개 제2006/053121호; 미국특허 제7,947,835호; 미국특허공개 제2008/0139557호; 미국특허 제7,838,523호; 미국특허공개 제2008/0125417호; 미국특허공개 제2011/0118233호; 2011년 8월 31일자로 출원된 국제특허 제PCT/US2011/050034호("PYRIDINONES/PYRAZINONES, METHOD OF MAKING, AND METHOD OF USE THEREOF"); 2011년 8월 31일자로 출원된 국제특허 제PCT/US2011/050013호("PYRIDAZINONES, METHOD OF MAKING, AND METHOD OF USE THEREOF"); 2011년 5월 6일자로 출원된 미국출원 제13/102720호("PYRIDONE AND AZA-PYRIDONE COMPOUNDS AND METHODS OF USE")).
본 발명은 일반적으로, 브루톤 타이로신 키나제(Btk) 조절 활성을 갖는 하기 화학식 I 및 II의 8-플루오로프탈라진-1(2H)-온 화합물 및 이의 입체이성질체, 호변체, 또는 약학적으로 허용가능한 염에 관한 것이다:
Figure pct00001
I
Figure pct00002
II
다양한 치환기들은 본원에서 이후 정의하는 바와 같다.
본 발명의 한 양태는 화학식 I 또는 II의 화합물, 및 약학적으로 허용되는 담체, 활제(glidant), 희석제 또는 부형제를 포함하는 약학 조성물이다. 약학 조성물은 제2 치료제를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 양태는 화학식 I 또는 II의 화합물과 약학적으로 허용되는 담체를 조합함을 포함하는, 약학 조성물의 제조 방법이다.
본 발명은 치료 효과량의 화학식 I 또는 II의 화합물을 면역 질환, 암, 심혈관 질환, 바이러스 감염, 염증, 대사/내분비 기능 장애 및 신경 질환으로부터 선택되고 브루톤 티로신 키나제에 의해 매개되는 질병 또는 질환을 갖는 환자에게 투여함을 포함하는, 질병 또는 질환의 치료 방법을 포함한다.
본 발명은 a) 화학식 I 또는 II의 화합물을 포함하는 제1 약학 조성물; 및 b) 사용 설명서를 포함하는, 브루톤 티로신 키나제에 의해 매개된 병태를 치료하기 위한 키트를 포함한다.
본 발명은 면역 질환, 암, 심혈관 질환, 바이러스 감염, 염증, 대사/내분비 기능 장애 및 신경 질환으로부터 선택되고, 브루톤 티로신 키나제에 의해 매개된 질병 또는 질환을 치료하는데 사용하기 위한 및 약제로서 사용하기 위한 화학식 I 또는 II의 화합물을 포함한다.
본 발명은 면역 질환, 암, 심혈관 질환, 바이러스 감염, 염증, 대사/내분비 기능 장애 및 신경 질환의 치료용 약제로서, 브루톤 티로신 키나제를 매개하는 약제의 제조에 있어서, 화학식 I 또는 II의 화합물의 용도를 포함한다.
본 발명은 화학식 I 또는 II의 화합물의 제조 방법을 포함한다.
도 1은 4-3급-부틸벤조일 클로라이드 101a로 출발하는 6-3급-부틸-8-플루오로-2-(2-(하이드록시메틸)-3-(1-메틸-5-(5-(4-메틸피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)페닐)프탈라진-1(2H)-온 101의 제조를 나타낸다.
도 2는 2,6-다이브로모-4-플루오로벤즈알데하이드 102a로 출발하는 6-3급-부틸-8-플루오로-2-(3-(하이드록시메틸)-4-(1-메틸-5-(5-(4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-2-일)프탈라진-1(2H)-온 102의 제조를 나타낸다.
도 3은 2-브로모-4-클로로니코틴알데하이드 103a로 출발하는 6-3급-부틸-8-플루오로-2-(3-(하이드록시메틸)-4-(1-메틸-5-(5-(4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-2-일)-프탈라진-1(2H)-온 103의 제조를 나타낸다.
도 4는 (3S)-3급-부틸 3-메틸-4-(6-나이트로피리딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 105a로 출발하는 (S)-6-3급-부틸-8-플루오로-2-(3-(하이드록시메틸)-4-(1-메틸-5-(3-메틸-5-(4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-2-일)프탈라진-1(2H)-온 105의 제조를 나타낸다.
도 5는 1-메틸-3-(5-(2-메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)피리딘-2(1H)-온 106a로 출발하는 R-6-3급-부틸-8-플루오로-2-(3-(하이드록시메틸)-4-(1-메틸-5-(5-(2-메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-2-일)프탈라진-1(2H)-온 106의 제조를 나타낸다.
도 6은 3-브로모-5-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소-1,2-다이하이드로프탈라진-2-일)피리딘-4-카브알데하이드 109a로 출발하는 (S)-6-3급-부틸-8-플루오로-2-(4-(하이드록시메틸)-5-(1-메틸-5-(5-(2-메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-3-일)프탈라진-1(2H)-온 109의 제조를 나타낸다.
도 7은 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(5-(5-((2S,5R)-2,5-다이메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)니코틴알데하이드 110a로 출발하는 6-3급-부틸-2-(4-(5-(5-((2S,5R)-2,5-다이메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)-3-(하이드록시메틸)피리딘-2-일)-8-플루오로프탈라진-1(2H)-온 110의 제조를 나타낸다.
도 8은 (S)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(5-(5-(2-에틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)니코틴알데하이드 112a로 출발하는 (S)-6-3급-부틸-2-(4-(5-(5-(2-에틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)-3-(하이드록시메틸)피리딘-2-일)-8-플루오로프탈라진-1(2H)-온 112의 제조를 나타낸다.
이하, 본 발명의 특정 양태가 상세히 언급될 것이고, 이의 예는 수반되는 구조 및 화학식으로 설명된다. 본 발명이 다수의 양태와 함께 기술되지만, 본 발명이 이러한 양태로 제한되는 것이 아님을 이해해야만 한다. 이와는 반대로, 본 발명은 특허청구범위에 의해 정의된 본 발명의 범주에 포함될 수 있는 모든 대안, 변형물 및 등가물을 포함하는 것으로 의도된다. 당해 분야의 숙련자는 본 발명의 실시에 사용될 수 있는, 본원에 기술된 바와 유사하거나 등가인 많은 방법 및 물질을 인식할 것이다. 본 발명은 어떠한 방식으로도 기술된 방법 및 물질을 제한하지 않는다. 통합된 문헌, 특허 및 유사한 자료 중 하나 이상이, 비제한적으로 정의된 용어, 용어 용법, 기재된 기술 등과 상이하거나 모순되는 경우, 본원에 따른다. 달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 분야에서 통상의 기술을 가진 자("당업자")에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기술된 바와 유사하거나 등가의 방법 및 물질이 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 적합한 방법 및 물질은 하기된 바와 같다. 본원에 언급된 모든 공개문헌, 특허출원, 특허 및 다른 참고문헌은 이의 전체내용이 참고로서 통합된다. 본원에 사용된 명명법은, 달리 지시되지 않는 한, IUPAC 분류적 명명법에 기초한다.
정의
치환기의 수를 나타내는 경우, 용어 "하나 이상"은 1개의 치환기부터 가능한 가장 높은 수의 치환까지의 범위(즉, 치환기에 의한 1개의 수소의 대체부터 모든 수소의 대체까지)를 지칭한다. 용어 "치환기"는 모 분자 상의 수소 원자를 대체하는 원자 또는 원자 군을 나타낸다. 용어 "치환된"은 특정 기가 하나 이상 치환기를 갖고 있음을 나타낸다. 이때, 임의의 기는 다수의 치환기를 갖을 수 있고, 가능성 있는 다양한 치환기가 제공되고, 치환기는 독립적으로 선택되고 동일할 필요는 없다. 용어 "비치환된"은 특정 기가 어떠한 치환기도 갖지 않음을 의미한다. 용어 "선택적으로 치환된"은 특정 기가 가능한 치환기의 군으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환기에 의해 치환되거나 치환되지 않음을 의미한다. 치환기의 수를 나타내는 경우, 용어 "하나 이상"은 1개의 치환기부터 가능한 가장 높은 수의 치환까지의 범위(즉, 치환기에 의한 1개의 수소의 대체부터 모든 수소의 대체까지)를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "알킬"은 1 내지 12개의 탄소 원자(C1-C12)로 이루어진 포화 선형 또는 분지쇄 1가 탄화수소 라디칼을 지칭하고, 알킬 라디칼은 선택적으로 하기 기술된 하나 이상 치환기로 독립적으로 치환될 수 있다. 다른 양태에서, 알킬 라디칼은 1 내지 8개의 탄소 원자(C1-C8) 또는 1 내지 6개의 탄소 원자(C1-C6)로 이루어진다. 알킬 기의 예는, 비제한적으로, 메틸(Me, -CH3), 에틸(Et, -CH2CH3), 1-프로필(n-Pr, n-프로필, -CH2CH2CH3), 2-프로필(i-Pr, i-프로필, -CH(CH3)2), 1-부틸(n-Bu, n-부틸, -CH2CH2CH2CH3), 2-메틸-1-프로필(i-Bu, i-부틸, -CH2CH(CH3)2), 2-부틸(s-Bu, s-부틸, -CH(CH3)CH2CH3), 2-메틸-2-프로필(t-Bu, t-부틸, -C(CH3)3), 1-펜틸(n-펜틸, -CH2CH2CH2CH2CH3), 2-펜틸(-CH(CH3)CH2CH2CH3), 3-펜틸(-CH(CH2CH3)2), 2-메틸-2-부틸(-C(CH3)2CH2CH3), 3-메틸-2-부틸(-CH(CH3)CH(CH3)2), 3-메틸-1-부틸(-CH2CH2CH(CH3)2), 2-메틸-1-부틸(-CH2CH(CH3)CH2CH3), 1-헥실(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3), 2-헥실(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3), 3-헥실(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3)), 2-메틸-2-펜틸(-C(CH3)2CH2CH2CH3), 3-메틸-2-펜틸(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3), 4-메틸-2-펜틸(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2), 3-메틸-3-펜틸(-C(CH3)(CH2CH3)2), 2-메틸-3-펜틸(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2), 2,3-다이메틸-2-부틸(-C(CH3)2CH(CH3)2), 3,3-다이메틸-2-부틸(-CH(CH3)C(CH3)3), 1-헵틸, 1-옥틸 등을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "알킬렌"은 1 내지 12개의 탄소 원자(C1-C12)로 이루어진 포화 선형 또는 분지쇄 2가 탄화수소 라디칼을 지칭하고, 알킬렌 라디칼은 선택적으로 하기 기술된 하나 이상의 치환기로 독립적으로 치환될 수 있다. 다른 양태에서, 알킬렌 라디칼은 1 내지 8개의 탄소 원자(C1-C8) 또는 1 내지 6개의 탄소 원자(C1-C6)로 이루어진다. 알킬렌 기의 예는, 비제한적으로, 메틸렌(-CH2-), 에틸렌(-CH2CH2-), 프로필렌(-CH2CH2CH2-) 등을 포함한다.
용어 "알켄일"은 하나 이상의 불포화 부위, 즉 탄소-탄소 sp2 이중 결합을 갖고 2 내지 8개의 탄소 원자(C2-C8)로 이루어진 선형 또는 분지쇄 1가 탄화수소 라디칼을 지칭하고, 알켄일 라디칼은 선택적으로 본원에 기술된 하나 이상 치환기로 독립적으로 치환될 수 있고, "시스" 및 "트랜스" 배향, 또는 다르게는 "E" 및 "Z" 배향을 갖는 라디칼을 포함한다. 예는, 비제한적으로, 에틸렌일 또는 비닐(-CH=CH2), 알릴(-CH2CH=CH2) 등을 포함한다.
용어 "알켄일렌"은 하나 이상의 불포화 부위, 즉 탄소-탄소 sp2 이중 결합을 갖고 2 내지 8개의 탄소 원자(C2-C8)로 이루어진 선형 또는 분지쇄 2가 탄화수소 라디칼을 지칭하고, 알켄일렌 라디칼은 선택적으로 본원에 기술된 하나 이상 치환기로 독립적으로 치환될 수 있고, "시스" 및 "트랜스" 배향, 또는 다르게는 "E" 및 "Z" 배향을 갖는 라디칼을 포함한다. 예는, 비제한적으로, 에틸렌일렌 또는 비닐렌(-CH=CH-), 알릴(-CH2CH=CH-) 등을 포함한다.
용어 "알킨일"은 하나 이상의 불포화 부위, 즉 탄소-탄소 sp 삼중 결합을 갖고 2 내지 8개의 탄소 원자(C2-C8)로 이루어진 선형 또는 분지쇄 1가 탄화수소 라디칼을 지칭하고, 알킨일 라디칼은 선택적으로 본원에 기술된 하나 이상 치환기로 독립적으로 치환될 수 있다. 예는, 비제한적으로, 에틴일(-C≡CH-), 프로핀일(프로파길, -CH2C≡CH-) 등을 포함한다.
용어 "알킨일렌"은 하나 이상의 불포화 부위, 즉 탄소-탄소 sp 삼중 결합을 갖고 2 내지 8개의 탄소 원자(C2-C8)로 이루어진 선형 또는 분지쇄 2가 탄화수소 라디칼을 지칭하고, 알킨일렌 라디칼은 선택적으로 본원에 기술된 하나 이상 치환기로 독립적으로 치환될 수 있다. 예는, 비제한적으로, 에틴일렌(-C≡C-), 프로핀일렌(프로파길렌, -CH2C≡C-) 등을 포함한다.
용어 "카보사이클", "카보사이클릴", "탄소환 고리" 및 "사이클로알킬"은 단환 고리로서 3 내지 12개의 탄소 원자(C3-C12) 또는 이환 고리로서 7 내지 12개의 탄소 원자를 갖는 1가 비-방향족, 포화 또는 부분 불포화 고리를 지칭한다. 7 내지 12개의 원자를 갖는 이환 카보사이클은, 예를 들어, 바이사이클로 [4,5], [5,5], [5,6] 또는 [6,6] 시스템으로서 배열될 수 있고, 9 또는 10개의 고리 원자를 갖는 이환 카보사이클은 바이사이클로 [5,6] 또는 [6,6] 시스템로서, 또는 바이사이클로[2.2.1]헵탄, 바이사이클로[2.2.2]옥탄 및 바이사이클로[3.2.2]노난과 같은 가교 시스템으로서 배열될 수 있다. 스피로 잔기가 또한 이러한 정의의 범주에 포함된다. 단환 카보사이클의 예는, 비제한적으로, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 1-사이클로펜트-1-엔일, 1-사이클로펜트-2-엔일, 1-사이클로펜트-3-엔일, 사이클로헥실, 1-사이클로헥스-1-엔일, 1-사이클로헥스-2-엔일, 1-사이클로헥스-3-엔일, 사이클로헥사다이엔일, 사이클로헵틸, 사이클로옥틸, 사이클로노닐, 사이클로데실, 사이클로운데실, 사이클로도데실 등을 포함한다. 카보사이클릴 기는 선택적으로 본원에 기술된 하나 이상의 치환기로 독립적으로 치환된다.
"아릴"은 모 방향족 고리 시스템의 단일 탄소 원자로부터 하나의 수소 원자를 제거함으로써 유도된, 6 내지 20개의 탄소 원자(C6-C20)로 이루어진 1가 방향족 탄화수소 라디칼을 의미한다. 일부 아릴 기는 예시적인 구조 "Ar"로서 표시된다. 아릴은 포화, 부분 불포화 고리 또는 방향족 탄소환 고리에 융합된 방향족 고리를 포함하는 이환 라디칼을 포함한다. 전형적인 아릴 기는, 비제한적으로, 벤젠(페닐), 치환된 벤젠, 나프탈렌, 안트라센, 바이페닐, 인덴일, 인단일, 1,2-다이하이드로나프탈렌, 1,2,3,4-테트라하이드로나프틸 등으로부터 유도된 라디칼을 포함한다. 아릴 기는 선택적으로 본원에 기술된 하나 이상의 치환기로 독립적으로 치환된다.
"아릴렌"은 모 방향족 고리 시스템의 2개의 탄소 원자로부터 2개의 수소 원자를 제거함으로써 유도된 6 내지 20개의 탄소 원자(C6-C20)로 이루어진 2가 방향족 탄화수소 라디칼을 의미한다. 일부 아릴렌 기는 예시적인 구조 "Ar"로서 표시된다. 아릴렌은 포화, 부분 불포화 고리 또는 방향족 탄소환 고리에 융합된 방향족 고리를 포함하는 이환 라디칼을 포함한다. 전형적인 아릴렌 기는, 비제한적으로, 벤젠(페닐렌), 치환된 벤젠, 나프탈렌, 안트라센, 바이페닐렌, 인덴일렌, 인단일렌, 1,2-다이하이드로나프탈렌, 1,2,3,4-테트라하이드로나프틸 등으로부터 유도된 라디칼을 포함한다. 아릴렌 기는 선택적으로 본원에 기술된 하나 이상 치환기로 치환된다.
용어 "헤테로사이클," "헤테로사이클릴" 및 "헤테로환 고리"는 본원에서 상호교환적으로 사용되고, 하나 이상의 고리 원자가 질소, 산소, 인 및 황으로부터 선택되는 헤테로원자이고, 나머지 고리 원자가 C인 3 내지 약 20개의 고리 원자로 이루어진 포화 또는 부분 불포화(즉, 고리 내에 하나 이상 이중 및/또는 삼중 결합을 가짐) 탄소환 라디칼을 지칭하고, 하나 이상 고리 원자는 선택적으로 하기 기재된 하나 이상 치환기로 독립적으로 치환된다. 헤테로사이클은 3 내지 7개의 고리원(2 내지 6개의 탄소 원자, 및 N, O, P 및 S로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자)을 갖는 단환 또는 7 내지 10개의 고리원(4 내지 9개의 탄소 원자, 및 N, O, P 및 S로부터 선택된 1 내지 6개의 헤테로원자)을 갖는 이환, 예를 들어 바이사이클로 [4,5], [5,5], [5,6] 또는 [6,6] 시스템일 수 있다. 헤테로사이클은 문헌[Paquette, Leo A.; "Principles of Modern Heterocyclic Chemistry" (W.A. Benjamin, New York, 1968)](구체적으로 챕터 1, 3, 4, 6, 7 및 9); 문헌["The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs" (John Wiley & Sons, New York, 1950 to present)](특히 볼륨 13, 14, 16, 19 및 28); 및 문헌[J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566]에 기술되어 있다. "헤테로사이클릴"은 또한 헤테로사이클 라디칼이 포화, 부분 불포화 고리 또는 방향족 탄소환 또는 헤테로환 고리에 융합된 라디칼을 포함한다. 헤테로환 고리는, 비제한적으로, 모폴린-4-일, 피페리딘-1-일, 피페라진일, 피페라진-4-일-2-온, 피페라진-4-일-3-온, 피롤리딘-1-일, 티오모폴린-4-일, S-다이옥소티오모폴린-4-일, 아조칸-1-일, 아제티딘-1-일, 옥타하이드로피리도[1,2-a]피라진-2-일, [1,4]다이아제판-1-일, 피롤리딘일, 테트라하이드로푸란일, 다이하이드로푸란일, 테트라하이드로티엔일, 테트라하이드로피란일, 다이하이드로피란일, 테트라하이드로티오피란일, 피페리디노, 모폴리노, 티오모폴리노, 티옥산일, 피페라진일, 호모피페라진일, 아제티딘일, 옥세탄일, 티에탄일, 호모피페리딘일, 옥세판일, 티에판일, 옥사제핀일, 다이아제핀일, 티아제핀일, 2-피롤린일, 3-피롤린일, 인돌린일, 2H-피란일, 4H-피란일, 다이옥산일, 1,3-다이옥솔란일, 피라졸린일, 다이티안일, 다이티올란일, 다이하이드로피란일, 다이하이드로티엔일, 다이하이드로푸란일, 피라졸리딘일이미다졸린일, 이미다졸리딘일, 3-아자바이사이클로[3.1.0]헥산일, 3-아자바이사이클로[4.1.0]헵탄일, 아자바이사이클로[2.2.2]헥산일, 3H-인돌릴 퀴놀리진일 및 N-피리딜 우레아를 포함한다. 스피로 잔기가 또한 이러한 정의의 범주에 포함된다. 2개의 고리 원자가 옥소(=O) 잔기로 치환된 헤테로환 기의 예는 피리미디노닐 및 1,1-다이옥소-티오모폴린일을 포함한다. 본원의 헤테로사이클 기는 선택적으로 본원에 기술된 하나 이상의 치환기로 독립적으로 치환된다.
용어 "헤테로아릴"은 질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 함유하고 5-, 6- 또는 7-원 고리로 이루어진 1가 방향족 라디칼을 지칭하고, 5 내지 20개의 원자로 이루어진 융합된 고리 시스템(이들중 하나 이상은 방향족임)을 포함한다. 헤테로아릴 기의 예는 피리딘일(예컨대, 2-하이드록시피리딘일), 이미다졸릴, 이미다조피리딘일, 피리미딘일(예컨대, 4-하이드록시피리미딘일), 피라졸릴, 트라이아졸릴, 피라진일, 테트라졸릴, 푸릴, 티엔일, 이속사졸릴, 티아졸릴, 옥사다이아졸릴, 옥사졸릴, 이소티아졸릴, 피롤릴, 퀴놀린일, 이소퀴놀린일, 테트라하이드로이소퀴놀린일, 인돌릴, 벤즈이미다졸릴, 벤조푸란일, 신놀린일, 인다졸릴, 인돌리진일, 프탈라진일, 피리다진일, 트라이아진일, 이소인돌릴, 프테리딘일, 푸린일, 옥사다이아졸릴, 트라이아졸릴, 티아다이아졸릴, 푸라잔일, 벤조푸라잔일, 벤조티오페닐, 벤조티아졸릴, 벤족사졸릴, 퀴나졸린일, 나프티리딘일 및 푸로피리딘일을 포함한다. 헤테로아릴 기는 선택적으로 본원에 기술된 하나 이상의 치환기로 독립적으로 치환된다.
헤테로사이클 또는 헤테로아릴 기는 가능한 위치에서 탄소(탄소-연결된) 또는 질소(질소-연결된) 결합될 수 있다. 예를 들면, 비제한적으로, 탄소 결합된 헤테로사이클 또는 헤테로아릴은 피리딘의 위치 2, 3, 4, 5 또는 6, 피리다진의 위치 3, 4, 5 또는 6, 피리미딘의 위치 2, 4, 5 또는 6, 피라진의 위치 2, 3, 5 또는 6, 푸란, 테트라하이드로푸란, 티오푸란, 티오펜, 피롤 또는 테트라하이드로피롤의 위치 2, 3, 4 또는 5, 옥사졸, 이미다졸 또는 티아졸의 위치 2, 4 또는 5, 이속사졸, 피라졸 또는 이소티아졸의 위치 3, 4 또는 5, 아지리딘의 위치 2 또는 3, 아제티딘의 위치 2, 3 또는 4, 퀴놀린의 위치 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8, 또는 이소퀴놀린의 위치 1, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8에서 결합된다.
예를 들면, 비제한적으로, 질소 결합된 헤테로사이클 또는 헤테로아릴은 아지리딘, 아제티딘, 피롤, 피롤리딘, 2-피롤린, 3-피롤린, 이미다졸, 이미다졸리딘, 2-이미다졸린, 3-이미다졸린, 피라졸, 피라졸린, 2-피라졸린, 3-피라졸린, 피페리딘, 피페라진, 인돌, 인돌린 또는 1H-인다졸의 위치 1, 이소인돌 또는 이소인돌린의 위치 2, 모폴린의 위치 4, 및 카바졸 또는 β-카볼린의 위치 9에서 결합된다.
용어 "치료하다" 및 "치료"는 목적이 원치않는 생리학적인 변화 또는 질환, 예컨대 관절염 또는 암의 발생 또는 확산을 늦추는(줄이는) 것인 치료적 처치를 지칭한다. 본 발명의 목적을 위하여, 이롭거나 바람직한 임상 결과는, 비제한적으로, 검출가능하거나 검출불가능하거나, 증상의 경감, 질병 정도의 약화, 질병의 안정화된 상태(즉, 악화되지 않음), 질병 진행의 지연 또는 감속, 질병 상태의 개선 또는 완화, 및 차도(부분적이든지 전체적이든지)를 포함한다. "치료"는 또한 치료를 받지 않는 경우의 기대 생존에 비해 연장된 생존을 의미한다. 치료를 필요로 하는 자는 병태 또는 질환을 갖는 자를 포함한다.
어구 "치료 효과량"은 (i) 특정 질병, 병태 또는 질환을 치료하거나, (ii) 특정 질병, 병태 또는 질환의 하나 이상의 증상을 약화시키거나 개선하거나 제거하거나, (iii) 본원에 기술된 특정 질병, 병태 또는 질환의 하나 이상의 증상의 발생을 예방하거나 지연하는 본 발명의 화합물의 양을 의미한다. 암의 경우에, 치료 효과량의 약물은 암 세포의 수를 감소시키고/거나; 종양 크기를 감소시키고/거나; 말초 기관으로의 암 세포 침윤을 억제(즉, 어느 정도 늦추고 바람직하게는 중단시킴)하고/거나; 종양 전이를 억제(즉, 어느 정도 늦추고 바람직하게는 중단시킴)하고/거나; 종양 성장을 어느 정도까지 억제하고/거나; 암과 관련된 하나 이상의 증상을 어느 정도까지 완화시킨다. 약물이 성장을 방해하고/거나 존재하는 암 세포를 죽일 수 있는 정도까지, 이는 세포증식 억제성 및/또는 세포독성일 수 있다. 암 요법의 경우, 효능은, 예를 들어, 질병 진행 시간(TTP)을 평가하고/거나 반응률(RR)을 결정함으로써 측정될 수 있다.
본원에 사용된 "염증 질환"은 과도하거나 조절되지 않는 염증 반응이 과도한 염증 증상, 숙주 조직 손상 또는 조직 기능의 손실을 야기하는 임의의 질병, 질환 또는 증상을 지칭할 수 있다. "염증 질환"은 또한 백혈구 및/또는 호중구 주화성의 유입에 의해 매개된 병리학적 상태를 지칭한다.
본원에 사용된 "염증"은 손상 인자(injurious agent) 및 손상 조직을 둘다 파괴하거나, 약화시키거나 분할(격절형성)하는 역할을 하는, 조직의 손상 또는 파괴에 의해 야기된 국소화된 보호 반응을 지칭한다. 염증은 특히 백혈구 및/또는 호중구 주화성의 유입과 관련이 있다. 염증은 병원성 유기체에 의한 감염으로부터, 및 심근경색 또는 뇌졸중에 따른 트라우마 또는 재관류, 외래 항원에 대한 면역 반응 및 자가면역 반응과 같은 비-감염성 수단으로부터 유발될 수 있다. 따라서, 화학식 I 및 II의 화합물에 의한 치료를 잘 받아들이는 염증 질환은 특이적 방어 시스템의 반응 및 비-특이적 방어 시스템의 반응과 관련있는 질환을 포함한다.
"특이적 방어 시스템"은 특이적인 항원의 존재에 반응하는 면역 시스템의 요소를 지칭한다. 특이적 방어 시스템의 반응으로부터 유발되는 염증의 예는 외래 항원에 대한 전통적인 반응, 자가면역 질병, 및 T-세포에 의해 매개된 지연된 유형의 과민성 반응을 포함한다. 만성 염증 질병, 고형 이식 조직 및 기관, 예컨대 신장 및 골수 이식물의 거부, 및 이식편대숙주 질병(GVHD)은 특이적 방어 시스템의 염증 반응의 추가 예이다.
본원에 사용된 용어 "비-특이적 방어 시스템"은 면역 기억(예컨대, 과립구 및 대식세포)을 할 수 없는 백혈구에 의해 매개된 염증 질환을 지칭한다. 비-특이적 방어 시스템의 반응으로부터 적어도 부분적으로 유발된 염증의 예는 성인 (급성) 호흡 곤란 증후군(ARDS) 또는 다발성 기관 손상 증후군; 재관류 손상; 급성 사구체신염; 반응성 관절염; 급성 염증성 요소를 갖는 피부병; 급성 화농성 수막염 또는 다른 중추신경계 염증 질환, 예컨대 뇌졸중; 온열 손상; 염증성 장 질환; 과립구 수혈-관련 증후군; 및 시토카인-유발된 독성과 같은 병태와 관련된 염증을 포함한다.
본원에 사용된 "자가면역 질환"은 조직 손상이 신체 자체의 구성요소에 대한 체액 또는 세포-매개된 반응과 관련된 임의의 군의 질환을 지칭한다.
본원에 사용된 "알러지 질환"은 알러지로부터 유발된 임의의 증상, 조직 손상 또는 조직 기능 손실을 지칭한다. 본원에 사용된 "관절염 질환"은 다양한 병인에 기인하는 관절의 염증성 병변을 특징으로 하는 임의의 질병을 지칭한다. 본원에 사용된 "피부염"은 다양한 병인에 기인하는 피부의 염증을 특징으로 하는 임의의 큰 계열의 피부 질환을 지칭한다. 본원에 사용된 "이식 거부"는 이식된 조직 및 둘러싸는 조직의 기능 손실, 통증, 종창, 백혈구 증가증 및 혈소판 감소증을 특징으로 하는, 이식된 조직, 예컨대 기관 또는 세포(예컨대, 골수)를 지향하는 임의의 면역 반응을 지칭한다. 본 발명의 치료 방법은 염증성 세포 활성화와 관련된 질환의 치료 방법을 포함한다.
"염증성 세포 활성화"는 염증 세포(예컨대, 비제한적으로 단핵구, 대식세포, T 림프구, B 림프구, 과립구(즉, 다형핵 백혈구, 예컨대 호중구, 호염구 및 호산구), 비만세포, 수지상세포, 랑게르한스세포 및 내피세포)에서의 증식성 세포 반응, 가용성 매개체(예컨대, 비제한적으로 시토카인, 산소 라디칼, 효소, 프로스타노이드 또는 혈관작용성 아민)의 생산, 또는 신규하거나 증가된 수의 매개체(예컨대, 비제한적으로, 주요 조직적합성 항원 또는 세포 접착 분자)의 세포 표면 발현의 자극(예컨대, 비제한적으로, 시토카인, 항원 또는 자기항체)에 의한 유도를 지칭한다. 상기 세포 내의 상기 표현형 중 하나 또는 이들의 조합의 활성화가 염증 질환의 개시, 영구화 또는 악화에 공헌할 수 있음은 당업자에게 인정될 것이다.
용어 "NSAID"는 "비-스테로이드성 항염 약물"의 두문자어이고, 항염, 해열(의식을 손상시키지 않으면서 높은 체온을 저하시키고 통증은 완화시킴), 및 보다 높은 투여량에서 항염(염증을 감소시킴) 효과를 갖는 치료제이다. 용어 "비-스테로이드성"은 (광범위한 다른 효과 중에서) 유사한 아이코사노이드-경감 항염 작용을 갖는, 스테로이드로부터의 약물과 구별하기 위해 사용된다. 진통제로서, NSAID는 비-마약성이라는 점에서 특별하다. NSAID는 아스피린, 이부프로펜 및 나프록센을 포함한다. NSAID는 통증 및 염증이 존재하는 급성 또는 만성 병태의 치료를 위해 통상적으로 권고된다. NSAID는 하기 병태의 증상적인 완화를 위해 일반적으로 권고된다: 류마티스성 관절염, 골관절염, 염증성 관절증(예컨대, 강직성 척추염, 건선성 관절염, 라이터 증후군, 급성 통풍, 월경곤란증, 전이 골 통증, 두통 및 편두통, 수술후 통증, 염증 및 조직 손상에 기인한 중등도 내지 경도 통증, 발열, 장폐색 및 신산통. 대부분의 NSAID는 사이클로옥시게나제-1(COX-1) 및 사이클로옥시게나제-2(COX-2) 동종효소를 둘다 억제하는, 효소 사이클로옥시게나제의 비-선택적인 억제제로서 작용한다. 사이클로옥시게나제는 아라키돈산(포스포리파제 A2에 의해 세포성 인지질 이중층으로부터 유래함)으로부터의 프로스타글란딘 및 트롬복산의 형성을 촉진한다. 프로스타글란딘은 (무엇보다도) 염증의 과정에서 메신저 분자로서 작용을 한다. COX-2 억제제는 셀레목십, 에토리콕십, 루미라콕십, 파레콕십, 로페콕십 및 발데콕십을 포함한다.
용어 "암"은 조절되지 않는 세포 성장에 의해 전형적으로 특징지어지는, 포유동물내의 생리학적 병태를 지칭하거나 기술한다. "종양"은 하나 이상 암 세포를 포함한다. 암의 예는, 비제한적으로, 암종, 림프종, 아세포종, 육종, 및 백혈병 또는 림프성 악성 종양을 포함한다. 이러한 암의 더욱 구체적인 예는 편평세포암(예컨대, 상피 편평세포암), 폐암, 예컨대 소세포 폐암, 비-소세포 폐암("NSCLC"), 폐의 선암 및 폐의 편평세포 암종, 복막암, 간세포암, 위 또는 복부의 암, 예컨대 위장암, 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간세포 선종, 유방암, 결장암, 직장암, 대장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 침샘 암종, 신장 또는 신세포의 암, 전립선암, 음문암, 갑상선 암, 간 암종, 항문 암종, 음경 암종 및 두경부암을 포함한다.
"혈액학적 악성 종양"은 혈액, 골수 및 림프절에 영향을 주는 암의 유형이다. 이들 3개가 면역 시스템을 통해 친밀하게 연결되므로, 이들 3개 중 1개에 영향을 주는 질병은 종종 다른 것들에도 또한 영향을 준다: 비록 림프종이 림프절의 질병이지만, 이는 종종 골수로 확산되어 혈액에 영향을 준다. 혈액학적 악성 종양은 악성 신생물("암")이고, 이들은 혈액학 및/또는 종양학의 전문가에 의해 일반적으로 치료된다. 일부 센터에서, "혈액학/종양학"은 내과의 단일한 하위 전문 분야이지만, 다른 곳에서는 이들은 별개의 분과로 간주된다(외과 및 방사선 종양학자가 또한 존재한다). 모든 혈액학적 질환이 악성("암성")은 아니지만; 이러한 다른 혈액 병태가 또한 혈액학자에 의해 관리될 수 있다. 혈액학적 악성 종양은 2개의 주요한 혈액 세포 계통인 골수성 및 림프성 세포주로부터 유래할 수 있다. 골수성 세포주는 통상적으로 과립구, 적혈구, 혈소판, 대식세포 및 비만세포를 생산하고, 림프성 세포주는 B, T, NK 및 혈장 세포를 생산한다. 림프종, 림프성 백혈병 및 골수종은 림프성 세포주로부터 유래하는 반면, 급성 및 만성 골수성 백혈병, 골수이형성 증후군 및 골수증식성 질환은 원래 골수성이다. 백혈병은 급성 림프구성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 단구성 백혈병(AMOL) 및 소 림프구 림프종(SLL)을 포함한다. 림프종은 호지킨 림프종(모든 4개의 아형) 및 비-호지킨 림프종(모든 아형)을 포함한다.
"화학요법제"는 작용 기전에 관계없이 암의 치료에 유용한 화학적인 화합물이다. 화학요법제의 부류는, 비제한적으로, 알킬화제, 대사길항물질, 방추체 억제 식물 알칼로이드, 세포독성/항종양 항생제, 토포이소머라제 억제제, 항체, 감광제 및 키나제 억제제를 포함한다. 화학요법제는 "표적 요법" 및 전통적인 화학요법에 사용되는 화합물을 포함한다. 화학요법제의 예는 에를로티닙(타르세바(TARCEVA: 등록상표), 제넨텍(Genentech)/오에스아이 팜(OSI Pharm.)), 도세탁셀(탁소테레(TAXOTERE: 등록상표), 사노피-아벤티스(Sanofi-Aventis)), 5-FU(플루오로우라실, 5-플루오로우라실, CAS No. 51-21-8), 젬시타빈(젬자르(GEMZAR: 등록상표), 릴리(Lilly)), PD-0325901(CAS 번호 391210-10-9, 화이자(Pfizer)), 시스플라틴(시스-다이아민, 다이클로로플래티늄(II), CAS 번호 15663-27-1), 카보플라틴(CAS 번호 41575-94-4), 파클리탁셀(탁솔(TAXOL: 등록상표), 브리스톨-마이어스 스큅 온콜로지(Bristol-Myers Squibb Oncology), 미국 뉴저지주 프린스톤 소재), 트라스투주맙(허셉틴(HERCEPTIN: 등록상표), 제넨텍), 테모졸로미드(4-메틸-5-옥소-2,3,4,6,8-펜타아자바이사이클로[4.3.0]노나-2,7,9-트라이엔-9-카복스아미드, CAS 번호 85622-93-1, 테모다르(TEMODAR: 등록상표), 테모달(TEMODAL: 등록상표), 쉐링 플라우(Schering Plough)), 타목시펜((Z)-2-[4-(1,2-다이페닐부트-1-엔일)페녹시]-N,N-다이메틸에탄아민, 놀바덱스(NOLVADEX: 등록상표), 이스투발(ISTUBAL: 등록상표), 발로덱스(VALODEX: 등록상표)) 및 독소루비신(아드리아마이신(ADRIAMYCIN: 등록상표)), Akti-1/2, HPPD 및 라파마이신을 포함한다.
화학요법제의 추가 예는 옥살리플라틴(엘록사틴(ELOXATIN: 등록상표), 사노피), 조테조밉(벨케이드(VELCADE: 등록상표), 밀레니움 팜(Millennium Pharm.)), 수텐트(수니티닙(SUNITINIB: 등록상표), SU11248, 화이자), 레트로졸(페마라(FEMARA: 등록상표), 노바티스(Novartis)), 이마티닙 메실레이트(글리벡(GLEEVEC: 등록상표), 노바티스), XL-518(Mek 억제제, 엑셀릭시스(Exelixis), 국제공개 제2007/044515로), ARRY-886(Mek 억제제, AZD6244, 어레이 바이오파마(Array BioPharma), 아스트라제네카(AstraZeneca)), SF-1126(PI3K 억제제, 세마포레 파마슈티컬스(Semafore Pharmaceuticals)), BEZ-235(PI3K 억제제, 노바티스), XL-147(PI3K 억제제, 엑셀릭시스), PTK787/ZK 222584(노바티스), 풀베스트란트(파슬로덱스(FASLODEX: 등록상표), 아스트라제네카), 류코포린(폴린산), 라파마이신(시롤리무스, 라파뮨(RAPAMUNE: 등록상표), 와이어쓰(Wyeth)), 라파티닙(타이커브(TYKERB: 등록상표), GSK572016, 글락소 스미스 클라인(Glaxo Smith Kline)), 로나파닙(사라사르(SARASAR: 상표), SCH 66336, 쉐링 플라우), 소라페닙(넥사바르(NEXAVAR: 등록상표), BAY43-9006, 바이엘 랩스(Bayer Labs)), 게피티닙(이레싸(IRESSA: 등록상표), 아스트라제네카), 이리노테칸(캄프토사르(CAMPTOSAR: 등록상표), CPT-11, 화이자), 티피파닙(자르네스트라(ZARNESTRA(상표), 존슨 앤드 존슨(Johnson & Johnson)), 아브락산(ABRAXANE: 상표)(크레모포-프리(Cremophor-free)), 파클리탁셀의 알부민-조작된 나노입자 제형(아메리칸 파마슈티컬 파트너스(American Pharmaceutical Partners), 미국 일리노이주 샤움버그 소재), 반데타닙(rINN, ZD6474, 작티마(ZACTIMA: 등록상표), 아스트라제네카), 클로람부실, AG1478, AG1571(SU 5271; 수겐(Sugen)), 템시롤리무스(토리셀(TORISEL: 등록상표), 와이어쓰), 파조파닙(글락소 스미스 클라인), 칸포스파미드(텔시타(TELCYTA: 등록상표), 텔릭(Telik)), 티오테파 및 사이클로스포스파미드(사이톡산(CYTOXAN: 등록상표), 네오사르(NEOSAR: 등록상표)); 알킬 설폰에이트, 예컨대 부설판, 임프로설판 및 피포설판; 아지리딘, 예컨대 벤조도파, 카보쿠온, 메투레도파 및 우레도파; 에틸렌이민 및 메틸아멜라민, 예컨대 알트레타민, 트라이에틸렌멜라민, 트라이에틸렌포스포르아미드, 트라이에틸렌티오포스포르아미드 및 트라이메틸로멜라민; 아세토게닌(특히, 불라타신 및 불라타신온); 캄프토테신(예컨대, 합성 유사체 토포테칸); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065(예컨대, 이의 아도젤레신, 카젤레신 및 바이젤레신 합성 유사체); 크립토피신(특히, 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 듀오카마이신(예컨대, 합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1); 엘류테로빈; 판크라티스타틴; 사코딕티인; 스폰지스타틴; 질소 머스타드, 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 클로로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로소우레아, 예컨대 카무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴 및 라님누스틴; 항생제, 예컨대 엔다이인 항생제(예컨대, 칼리케아미신, 칼리케아미신 감마1I, 칼리케아미신 오메가I1(문헌[Angew Chem. Intl. Ed. Engl. (1994) 33:183-186]); 다인미신, 다인미신 A; 비스포스폰에이트, 예컨대 클로드로네이트; 에스퍼라미신; 및 네오카지노스타틴 크로모포어 및 관련 크로모단백질 엔다이인 항생제 크로모포어), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 오트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 타라비신, 카미노마이신, 카지노필린, 크로모하이시니스, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-다이아조-5-옥소-L-로르류신, 모폴리노-독소루비신, 시아노모폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 네모루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 예컨대 미토마이신 C, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포르피로마이신, 푸로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항대사제, 예컨대 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실(5-FU); 엽산 유사제, 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트라이메트렉세이트; 푸린 유사제, 예컨대 플루다라빈, 6-머캡토푸린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사제, 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카모푸르, 시타라빈, 다이데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록스우리딘; 우리딘, 독시플루리딘, 데노시타빈, 플록스우리딘; 안드로겐, 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피온에이트, 에피티오스탄올, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항부신제, 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 엽산 보충제, 예컨대 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코사이드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 다이아지쿠온; 엘포르니틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 갈륨 니트레이트; 하이드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 메이탄시노이드, 예컨대 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로소산트론; 포도필린산; 2-에틸하이드라지드; 프로카바진; PSK(등록상표) 다당류 복합체(제이에이치에스 내츄럴 프로덕츠(JHS Natural Products), 미국 오레곤주 유진 소재); 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트라이아지쿠온; 2,2',2"-트라이클로로트라이에틸아민; 트라이코테센(특히, T-2 톡신, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노사이드("Ara-C"); 사이클로포스파미드; 티오테파; 6-티오구아닌; 머캡토푸린; 메토트렉세이트; 플래티늄 유사제, 예컨대 시스플라틴 및 카보플라틴; 빈블라스틴; 에토포사이드(VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴; 비노렐벤(나벨빈(NAVELBINE: 등록상표)); 노반트론; 테니포사이드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테리니; 카페시타빈(젤로다(XELODA: 등록상표), 로슈(Roche)); 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 다이플루오로메틸로니틴(DMFO); 레티노이드, 예컨대 레티노산; 및 이들 중 어느 하나의 약학적으로 허용되는 염, 산 및 유도체를 포함한다.
(i) 종양에 대한 호르몬 작용을 조절하거나 억제하는 작용을 하는 항호르몬제, 예컨대 항에스트로겐제 및 선택적인 에스트로겐 수용체 조절제(SERM), 예를 들어, 타목시펜(예컨대, 놀바덱스(NOLVADEX: 등록상표); 타목시펜 시트레이트), 라록시펜, 드롤록시펜, 4-하이드록시타목시펜, 트라이옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤 및 파레스톤(FARESTON: 등록상표)(토레미핀 시트레이트); (ii) 부신에서의 에스트로겐 생산을 조절하는 효소 아로마타제를 억제하는 아로마타제 억제제, 예를 들어, 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, 메가제(MEGASE: 등록상표)(메게스트롤 아세테이트), 아로마신(AROMASIN: 등록상표)(엑세메스탄; 화이자), 포메스타니, 파드로졸, 리비저(RIVISOR: 등록상표)(보로졸), 페마라(FEMARA: 등록상표)(레트로졸; 노바티스) 및 아리미덱스(ARIMIDEX: 등록상표)(아나스트로졸; 아스트라제네카); (iii) 항안드로겐제, 예컨대 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤라이드 및 고세렐린; 및 트록사시타빈(1,3-다이옥솔란 뉴클레오시드 시토신 유사제); (iv) 단백질 키나제 억제제, 예컨대 MEK 억제제(국제공개 제2007/044515); (v) 지질 키나제 억제제; (vi) 안티센스 올리고뉴클레오티드, 특히 비정상 세포 증식에 연루된 신호전달 경로에서 유전자의 발현을 억제하는 것, 예를 들어, PKC-알파, Raf 및 H-Ras, 예컨대 오블리머센(제나센스(GENASENSE: 등록상표), 젠타 인코포레이티드(Genta Inc.)); (vii) 리보자임, 예컨대 VEGF 발현 억제제(예컨대, 안지오자임(ANGIOZYME: 등록상표)) 및 HER2 발현 억제제; (viii) 백신, 예컨대 유전자 요법 백신, 예를 들어, 알로벡틴(ALLOVECTIN: 등록상표), 류벡틴(LEUVECTIN: 등록상표) 및 백시드(VAXID: 등록상표); 프로류킨(PROLEUKIN: 등록상표) rIL-2; 토포이소머라제 1 억제제, 예컨대 루르토테칸(LURTOTECAN: 등록상표); 아바렐릭스(ABARELIX: 등록상표) rmRH; (ix) 항혈관형성제, 예컨대 베바시주맙(아바스틴(AVASTIN: 등록상표), 제넨텍); 및 이들 중 어느 하나의 약학적으로 허용되는 염, 산 및 유도체가 또한 "화학요법제"의 정의에 포함된다.
알렘투주맙(캄패스(Campath)), 베바시주맙(아바스틴(AVASTIN: 등록상표), 제넨텍); 세툭시맙(에르비툭스(ERBITUX: 등록상표), 임클론(Imclone)); 파니투무맙(벡티빅스(VECTIBIX: 등록상표), 암젠(Amgen)), 리툭시맙(리툭산(RITUXAN: 등록상표)), 제넨텍/바이오젠 이덱(Biogen Idec)), 페르투주맙(옴니타르그(OMNITARG: 상표), 2C4, 제넨텍), 트라스투주맙(허셉틴(HERCEPTIN: 등록상표), 제넨텍), 토시투모맙(벡스자르(Bexxar), 코릭시아(Corixia)) 및 항체 약물 결합체, 젬투주맙 오조가미신(마일로타르그(MYLOTARG: 등록상표), 와이어쓰)과 같은 치료 항체가 또한 "화학요법제"의 정의에 포함된다.
본 발명의 Btk 억제제와 병용으로 화학요법제로서 치료 잠재력을 갖는 인간화된 단클론성 항체는 알렘투주맙, 아폴리주맙, 아셀리주맙, 아틀리주맙, 바피뉴주맙, 베바시주맙, 비바투주맙 머탄신, 칸투주맙 머탄신, 세델리주맙, 서톨리주맙 페골, 시드푸시투주맙, 시드투주맙, 다클리주맙, 에쿨리주맙, 에탈리주맙, 에르파투주맙, 에를리주맙, 펠비주맙, 폰톨리주맙, 젬투주맙 오조가미신, 이노투주맙 오조가미신, 이필리무맙, 라베투주맙, 린투주맙, 마투주맙, 메폴리주맙, 모타비주맙, 모토비주맙, 나탈리주맙, 니모투주맙, 놀로비주맙, 누마비주맙, 오크렐리주맙, 오말리주맙, 팔리비주맙, 파스콜리주맙, 펙푸시투주맙, 펙투주맙, 퍼투주맙, 펙셀리주맙, 랄리비주맙, 라니비주맙, 레슬리비주맙, 레슬리주맙, 레사이비주맙, 로벨리주맙, 루플리주맙, 시브로투주맙, 시플리주맙, 손투주맙, 타카투주맙 테트라제탄, 타도시주맙, 탈리주맙, 테피바주맙, 토실리주맙, 토랄리주맙, 트라스투주맙, 투코투주맙 셀모류킨, 투쿠시투주맙, 우마비주맙, 우르톡사주맙 및 비실리주맙을 포함한다.
"대사물"은 특정 화합물 또는 이의 염의 신체내 대사를 통해 생산된 생산물이다. 화합물의 대사물은 당업자에게 공지된 통상적인 기술을 사용하여 확인될 수 있고, 이들의 활성은 본원에 기술된 바와 같은 시험을 사용하여 결정된다. 이러한 생산물은, 예를 들어 투여된 화합물의 산화, 환원, 가수분해, 아미드화, 탈아미드화, 에스터화, 탈에스터화, 효소적 분열 등으로부터 생성될 수 있다. 따라서, 본 발명은 본 발명의 화합물의 대사물, 예컨대 본 발명의 화학식 I 또는 II의 화합물을 이의 대사 산물을 생산하기에 충분한 시간 동안 포유동물과 접촉시킴을 포함하는 방법에 의해 생산된 화합물을 포함한다.
용어 "포장 삽입물"은 치료 제품의 사용에 관한 지침, 용법, 투여량, 투여, 사용금지 사유 및/또는 경고에 과한 정보를 함유하는, 치료 제품의 상업적인 포장에 통상적으로 포함되는 설명서를 지칭하는데 사용된다.
용어 "키랄"은 거울상 파트너의 비-중첩가능성의 특성을 갖는 분자를 지칭하는 반면, 용어 "비-키랄"은 거울상 파트너와 중첩가능한 분자를 지칭한다.
용어 "입체 이성질체"는 동일한 화학적 구성을 갖지만, 원자 또는 기의 공간에서의 배열이 상이한 화합물을 지칭한다.
"부분입체 이성질체"는 2개 이상의 키랄 중심을 갖고 이들 분자가 서로 거울상이 아닌 입체 이성질체를 지칭한다. 부분입체 이성질체는 상이한 물리적 특성, 예컨대 융점, 비등점, 스펙트럼 특성 및 반응성을 갖는다. 부분입체 이성질체의 혼합물은 고 용해 분석 과정, 예컨대 전기영동 및 크로마토그래피에 의해 분리될 수 있다.
"거울상 이성질체"는 서로 비-중첩가능성 거울상인 화합물의 입체 이성질체를 지칭한다.
본원에 사용된 입체화학 정의 및 관습은 문헌[S. P. Parker, Ed., McGraw -Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; and Eliel, E. and Wilen, S., "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994]을 따랐다. 본 발명의 화합물은 비대칭 또는 키랄 중심을 함유할 수 있고, 이에 따라 상이한 입체 이성질체 형태로 존재할 수 있다. 본 발명의 화합물의 모든 입체 이성질체 형태, 예컨대, 비제한적으로, 부분입체 이성질체, 거울상 이성질체 및 어트로프 이성질체, 및 라세미 혼합물과 같은 이들의 혼합물이 본 발명의 일부를 구성하는 것으로 의도된다. 많은 유기 화합물은 광학적인 활성 형태로 존재한다. 즉, 이들은 평면-편광의 평면을 회전하는 능력을 갖는다. 광학적 활성 화합물의 기술에서, 접두어 D 및 L, 또는 R 및 S는 이의 키랄 중심 주위의 분자의 절대 배열을 나타내는데 사용된다. 접두어 d 및 l, 또는 (+) 및 (-)는 화합물에 의한 평면-편광의 회전의 기호를 지정하는데 사용되고, 이때 (-) 또는 1은 화합물이 좌선성임을 의미한다. (+) 또는 d의 접두어를 갖는 화합물은 우선성이다. 소정 화학 구조의 경우, 이들의 입체 이성질체는 이들이 서로 거울상인 것을 제외하고는 동일하다. 특정 입체 이성질체는 또한 거울상 이성질체로서 지칭될 수 있고, 이러한 이성질체의 혼합물은 종종 거울상 이성질체 혼합물로 지칭된다. 거울상 이성질체의 50:50 혼합물은 라세미 혼합물 또는 라세미체로서 지칭되고, 화학 반응 또는 공정에서 입체선택성 또는 입체특이성이 없는 경우에 발생할 수 있다. 용어 "라세미 혼합물" 및 "라세미체"는 광학 활성이 전혀 없는 2개의 거울상 이성질체 종의 등몰 혼합물을 지칭한다. 거울상 이성질체는 키랄 분리 방법, 예컨대 초임계 유체 크로마토그래피(SFC)에 의해 라세미 혼합물로부터 분리될 수 있다. 분리된 거울상 이성질체의 키랄 중심에서의 배열의 할당은 잠정적이고 설명의 목적을 위해 표 1 구조에서 도시되는 반면, 입체화학적 결정은, 예컨대 X-선 결정학 데이터를 기다린다.
용어 "호변 이성질체" 또는 "호변 이성질체 형태"는 낮은 에너지 장벽을 통해 상호전환될 수 있는 상이한 에너지의 구조 이성질체를 지칭한다. 예를 들어, 양성자 호변 이성질체(또한, 양성자성 호변 이성질체로서 공지됨)는 양성자의 이동을 통한 상호전환, 예컨대 케토-엔올 및 이민-엔아민 이성질화를 포함한다. 원자가 호변 이성질체는 일부 결합 전자의 재편성에 의한 상호전환을 포함한다.
용어 "약학적으로 허용되는 염"은 생물학적으로 또는 달리 바람직하지 않지 않은 염을 나타낸다. 약학적으로 허용되는 염은 산 및 염기 부가 염을 둘다 포함한다. 어구 "약학적으로 허용되는"은 물질 또는 조성물이 제형을 구성하는 다른 성분 및/또는 치료되는 포유동물과 화학적으로 및/또는 독물학적으로 상용성이어야 함을 나타낸다.
용어 "약학적으로 허용되는 산 부가 염"은 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 탄산, 인산과 같은 무기 산, 및 폼산, 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 글루콘산, 락트산, 피루브산, 옥살산, 말산, 말레산, 말론산, 숙신산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 아스파르트산, 아스코브산, 글루탐산, 안트라닐산, 벤조산, 신남산, 만델산, 에본산, 페닐아세트산, 메탄설폰산 "메실레이트", 에탄설폰산, p-톨루엔설폰산 및 살리실산과 같은 유기 산의 지방족, 지환족, 방향족, 방향지방족, 헤테로환, 카복실 및 설폰 부류로부터 선택되는 유기 산에 의해 형성된 약학적으로 허용되는 염을 나타낸다.
용어 "약학적으로 허용되는 염기 부가 염"은 유기 또는 무기 염기에 의해 형성된 약학적으로 허용되는 염을 나타낸다. 허용되는 무기 염기의 예는 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 마그네슘, 철, 아연, 구리, 망간 및 알루미늄 염을 포함한다. 약학적으로 허용되는 유기 비-독성 염기로부터 유래하는 염은 1차, 2차 및 3차 아민, 천연 발생된 치환된 아민을 비롯한 치환된 아민, 환형 아민 및 염기성 이온 교환 수지, 예컨대 이소프로필아민, 트라이메틸아민, 다이에틸아민, 트라이에틸아민, 트라이프로필아민, 에탄올아민, 2-다이에틸아미노에탄올, 트라이메타민, 다이사이클로헥실아민, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 카페인, 프로케인, 하이드라바민, 콜린, 베테인, 에틸렌다이아민, 글루코사민, 메틸글루카민, 테오브롬, 푸린, 피페라진, 피페리딘, N-에틸피페리딘 및 폴리아민 수지의 염을 포함한다.
"용매화물"은 하나 이상의 용매 분자 및 본 발명의 화합물의 결합체 또는 복합체를 지칭한다. 용매화물을 형성하는 용매의 예는, 비제한적으로, 물, 이소프로판올, 에탄올, 메탄올, DMSO, 에틸아세테이트, 아세트산 및 에탄올아민을 포함한다.
용어 "EC50"은 절반 최대 효과 농도이고, 50%의 생체내 최대 특정 효과를 수득하는데 요구되는 특정 화합물의 혈장 농도를 나타낸다.
용어 "Ki"는 억제 상수이고, 수용체에 대한 특정 억제제의 절대 결합 친화도를 나타낸다. 이는 경쟁 결합 분석에 의해 측정되고, 경쟁 리간드(예컨대, 방사성 리간드)가 전혀 존재하지 않는 경우에 특정 억제제가 수용체의 50%를 점유하는 농도와 같다. Ki 값은 대수적으로 pKi 값(-log Ki)으로 전환될 수 있고, 이때 보다 높은 값은 지수적으로 보다 큰 효능을 나타낸다.
용어 "IC50"은 절반 최대 억제 농도이고, 시험관내 생물학적 방법의 50% 억제를 수득하는데 요구되는 특정 화합물의 농도를 나타낸다. IC50 값은 대수적으로 pIC50 값(-log IC50)으로 전환될 수 있고, 이때 보다 높은 값은 지수적으로 보다 큰 효능을 나타낸다. IC50 값은 절대 값이 아니고, 실험적인 조건, 예컨대 사용된 농도에 따라 변하고, 쳉-프루소프(Cheng-Prusoff) 방정식(문헌[Biochem. Pharmacol. (1973) 22:3099])에 의해 절대 억제 상수(Ki)로 전환될 수 있다. 다른 퍼센트 억제 변수, 예컨대 IC70, IC90 등이 계산될 수 있다.
용어 "이 발명의 화합물", "본 발명의 화합물" 및 "화학식 I의 화합물"은 화학식 I의 화합물 및 이의 입체 이성질체, 기하 이성질체, 호변 이성질체, 용매화물, 대사물, 및 약학적으로 허용되는 염 및 전구약물을 포함한다.
화학식 I 및 II의 화합물을 비롯한 본원에 제공된 임의의 화학식 또는 구조는 또한 이러한 화합물의 수화물, 용매화물 및 다형체, 및 이들의 혼합물을 나타내는 것으로 의도된다.
또한, 화학식 I 및 II의 화합물을 포함하는 본원에 주어진 임의의 화학식 또는 구조는 화합물의 동위원소로 표지된 형태뿐만 아니라 비-표지된 형태를 나타내도록 의도된다. 동위원소로 표지된 화합물은, 하나 이상의 원자가 선택된 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자로 대체되는 것을 제외하고 본원에 주어진 화학식으로 표시된 구조를 갖는다. 본 발명의 화합물에 혼입될 수 있는 동위원소의 예는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 불소 및 염소의 동위원소, 예컨대 비제한적으로 2H(중수소), 3H(삼중수소), 11C, 13C, 14C, 15N, 18F, 31P, 32P, 35S, 36Cl 및 125I 각각을 포함한다. 본 발명의 다양한 동위원소로 표지된 화합물은 방사성 동위원소, 예컨대 3H, 13C 및 14C가 혼입된 화합물을 포함한다. 이러한 동위원소로 표지된 화합물은 대사 연구, 반응 속도 연구, 검출 또는 영상 기술, 예컨대 약물 또는 기질 조직 분배 분석을 비롯한 양전자 방출 단층 촬영술(PET) 또는 단일광자 단층 촬영(SPECT), 또는 환자의 방사성 치료에 유용하다. 본 발명의 중수소 표지되거나 치환된 치료 화합물은 분포, 대사작용 및 배출(ADME)과 관련된 약물 대사작용 및 약동학(DMPK) 특성을 개선시킬 수 있다. 중수소와 같은 무거운 동위원소에 의한 치환은, 예를 들어 증가된 생체내 반감기 또는 감소된 투여량 요건과 같은 보다 큰 대사 안정성으로 인한 특정 치료 이점을 제공할 수 있다. 특히, 18F 표지된 화합물은 PET 또는 SPECT 연구에 특히 바람직할 수 있다. 본 발명의 동위원소 표지 화합물 및 이의 전구 약물은 일반적으로 하기에 기재된 비-동위원소 표지된 시약을 용이하게 수득가능한 동위원소 표지된 시약으로 대체하여 반응식 또는 실시예 및 제조예에 개시된 절차를 수행함으로써 제조될 수 있다. 또한, 무거운 동위원소, 특히 중수소(예컨대, 2H 또는 D)에 의한 치환은 증가된 생체내 반감기, 감소된 투여량 요건 또는 치료 지수의 향상과 같은 보다 큰 대사 안정성으로 인해 생성된 특정한 치료 이점을 제공할 수 있다. 이때 중수소가 화학식 I의 화합물의 치환기로서 고려된다는 것이 이해될 것이다. 무거운 동위원소, 구체적으로 중수소의 농도는 동위원소 풍부 인자(isotopic enrichment factor)로 정의될 수 있다. 본 발명의 화합물에서, 특정한 동위원소로 구체적으로 지칭되지 않은 임의의 원자는 상기 원자의 임의의 안정한 동위원소를 의미한다. 달리 기재되지 않는 한, 위치가 "H" 또는 "수소"로서 구체적으로 지칭될 때, 그 위치는 자연 풍부 동위원소 조성에서 수소를 갖는 것으로 이해된다. 따라서, 본 발명의 화합물에서, 중수소(D)로서 구체적으로 지칭된 임의의 원소는, 예컨대 상기에 주어진 범위에서의 중수소를 나타낸다.
8- 플루오로프탈라진 -1(2H)-온 화합물
본 발명은 화학식 Ia 내지 If, 및 이의 약학적 제형을 비롯하여 하기 화학식 I의 8-플루오로프탈라진-1(2H)-온 화합물 또는 이의 입체이성질체, 호변체, 또는 약학적으로 허용가능한 염을 제공하고, 이는 잠재적으로 Btk 키나제로 매개된 질환, 증상 및/또는 장애의 치료에 유용하다:
Figure pct00003
상기 식에서,
X1은 CR1 또는 N이고;
X2는 CR2 또는 N이고;
X3은 CR3 또는 N이고;
이때 X1, X2, 및 X3 중 1개 또는 2개는 N이고;
R1, R2 및 R3은 H, F, Cl, CN, -CH3, -CH2CH3, -CH2OH, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2CH2OH, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, 및 -OCH2CH2OH로부터 독립적으로 선택되고;
R4는 H, F, Cl, CN, -CH2OH, -CH(CH3)OH, -C(CH3)2OH, -CH(CF3)OH, -CH2F, -CHF2, -CH2CHF2, -CF3, -C(O)NH2, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHC(O)CH3, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OH, -OP(O)(OH)2, 사이클로프로필, 사이클로프로필메틸, 1-하이드록시사이클로프로필, 이미다졸릴, 피라졸릴, 3-하이드록시-옥세탄-3-일, 옥세탄-3-일, 및 아제티딘-1-일로부터 선택되고;
R5는 -CH3, -CH2CH3, -CH2OH, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CN, 및 -CH2CH2OH로부터 선택되거나;
또는 2개의 R5 기가 3-, 4-, 5-, 또는 6-원 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 고리를 형성하거나;
또는 R5 기와 R7 기가 3-, 4-, 5-, 또는 6-원 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 고리를 형성하고;
n이 0, 1, 2, 3, 또는 4이고;
R6은 H, -CH3, -CH2CH3, -CH2CH2OH, -CH2F, -CHF2, -CF3, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, 및 -OCH2CH2OH로부터 선택되고;
R7은 H, -CH3, -S(O)2CH3, 사이클로프로필, 아제티딘-3-일, 옥세탄-3-일, 및 모폴린-4-일로부터 선택되고;
Z1이 CR8 또는 N이고, 이때 R8은 H, F, Cl, -CH3, -CH2CH3, -CH2CH2OH, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, 및 -OCH2CH2OH로부터 선택되고;
Z2가 CR9 또는 N이고, 이때 R9는 H, -CH3, -CH2CH3, 및 -CH2CH2OH로부터 선택되고;
Y1 및 Y2는 CH 및 N으로부터 독립적으로 선택되되, 이때 Y1 및 Y2는 각각 N은 아니다.
화학식 I의 화합물의 예시적인 실시양태는 하기 화학식 Ia 내지 If의 화합물을 포함한다:
Figure pct00004
화학식 I의 화합물의 예시적인 실시양태는 X1이 N이고, X2가 CR2이고, X3가 CR3인 화합물을 포함한다.
화학식 I의 화합물의 예시적인 실시양태는 X1이 CR1이고, X2가 N이고, X3가 CR3인 화합물을 포함한다.
화학식 I의 화합물의 예시적인 실시양태는 X1이 CR1이고, X2가 CR2이고, X3이 N인 화합물을 포함한다.
화학식 I의 화합물의 예시적인 실시양태는 X1 및 X3이 N이거나, X1 및 X2가 N이거나, X2 및 X3이 N인 것으로부터 선택되는 화합물을 포함한다.
화학식 I의 화합물의 예시적인 실시양태는 X2가 CR2이고 R2가 F인 화합물을 포함한다.
화학식 I의 화합물의 예시적인 실시양태는 X1 및 X3이 CH인 화합물을 포함한다.
화학식 I의 화합물의 예시적인 실시양태는 R4가 -CH2OH인 화합물을 포함한다.
화학식 I의 화합물의 예시적인 실시양태는 R5가 -CH3이고, n이 1 또는 2인 화합물을 포함한다.
화학식 I의 화합물의 예시적인 실시양태는 R7이 옥세탄-3-일인 화합물을 포함한다.
화학식 I의 화합물의 예시적인 실시양태는 Y1이 CH인 화합물을 포함한다.
화학식 I의 화합물의 예시적인 실시양태는 Y2가 CH인 화합물을 포함한다.
화학식 I의 화합물의 예시적인 실시양태는 Y1이 N인 화합물을 포함한다.
화학식 I의 화합물의 예시적인 실시양태는 Y2가 N인 화합물을 포함한다.
화학식 I의 화합물의 예시적인 실시양태는 Z1이 CH인 화합물을 포함한다.
화학식 I의 화합물의 예시적인 실시양태는 Z2가 CH인 화합물을 포함한다.
화학식 I의 화합물의 예시적인 실시양태는 Z1이 N인 화합물을 포함한다.
화학식 I의 화합물의 예시적인 실시양태는 Z2가 N인 화합물을 포함한다.
본 발명은 또한 하기 화학식 II의 8-플루오로프탈라진-1(2h)-온 화합물 또는 이의 입체이성질체, 호변체, 또는 약학적으로 허용가능한 염을 제공하고, 이는 잠재적으로 Btk 키나제로 매개된 질병, 증상 및/또는 장애의 치료에 유용하다:
Figure pct00005
상기 식에서,
X1은 CR1 또는 N이고;
X2는 CR2 또는 N이고;
X3은 CR3 또는 N이고;
이때 X1, X2, 및 X3 중 1개 또는 2개는 N이고;
Y1 및 Y2는 CH 및 N으로부터 독립적으로 선택되되, 이때 Y1 및 Y2는 각각 N은 아니고;
R1, R2 및 R3은 H, F, Cl, CN, -CH3, -CH2CH3, -CH2OH, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2CH2OH, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, 및 -OCH2CH2OH로부터 독립적으로 선택되고;
R4는 H, F, Cl, CN, -CH2OH, -CH(CH3)OH, -C(CH3)2OH, -CH(CF3)OH, -CH2F, -CHF2, -CH2CHF2, -CF3, -C(O)NH2, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHC(O)CH3, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OH, -OP(O)(OH)2, 사이클로프로필, 사이클로프로필메틸, 1-하이드록시사이클로프로필, 이미다졸릴, 피라졸릴, 3-하이드록시-옥세탄-3-일, 옥세탄-3-일, 및 아제티딘-1-일로부터 선택되고;
R6은 H, -CH3, -CH2CH3, -CH2CH2OH, -CH2F, -CHF2, -CF3, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, 및 -OCH2CH2OH로부터 선택되고;
R8은 C6-C20 아릴, C3-C12 카보사이클릴, C2-C20 헤테로사이클릴, C1-C20 헤테로아릴, -(C6-C20 아릴)-(C2-C20 헤테로사이클릴), -(C1-C20 헤테로아릴)-(C2-C20 헤테로사이클릴), -(C1-C20 헤테로아릴)-(C2-C20 헤테로사이클릴)-(C2-C20 헤테로사이클릴), -(C1-C20 헤테로아릴)-(C2-C20 헤테로사이클릴)-(C1-C6 알킬), -(C1-C20 헤테로아릴)-(C1-C6 알킬), 및 -(C1-C20 헤테로아릴)-C(=O)-(C2-C20 헤테로사이클릴)로부터 선택되고; 이때 아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴, 및 헤테로아릴은 임의적으로, F, Cl, Br, I, CN, -CH3, -CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -CH(OH)CH(CH3)2, -C(CH3)2CH2OH, -CH2CH2SO2CH3, -CH2OP(O)(OH)2, -C(CH3)2CONH2, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -CH2CH2OCH3, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2CF3, -CH2CHF2, -CH(CH3)CN, -C(CH3)2CN, -CH2CN, -CO2H, -C(O)CH3, -CO2CH3, -CO2C(CH3)3, -COCH(OH)CH3, -C(O)CH2CH3, -C(O)CH(CH3)2, -C(O)NH2, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHC(O)CH3, -N(CH3)COCH3, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, -N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3, -NO2, =O, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OCH3, -OCH2CH2OH, -OCH2CH2N(CH3)2, -OP(O)(OH)2, -S(O)2N(CH3)2, -SCH3, -S(O)2CH3, -S(O)3H, 사이클로프로필, 옥세탄일, 아제티딘일, 1-메틸아제티딘-3-일)옥시, N-메틸-N-옥세탄-3-일아미노, 아제티딘-1-일메틸, 및 모폴리노로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 치환된다.
화학식 II의 화합물의 예시적인 실시양태는 R8이 -(C1-C20 헤테로아릴)-(C2-C20 헤테로사이클릴)인 화합물을 포함한다.
화학식 II의 화합물의 예시적인 실시양태는 R8이 피리딘일인 화합물을 포함한다.
화학식 II의 화합물의 예시적인 실시양태는 R8이 -(피리딘일)-(피페라진일)인 화합물을 포함한다.
화학식 II의 화합물의 예시적인 실시양태는 R8이 C1-C20 헤테로아릴인 화합물을 포함한다.
화학식 II의 화합물의 예시적인 실시양태는 R8이 피리미딘일, 6,7-다이하이드로-4H-티아졸로[5,4-c]피리딘-2-일, 5-(모폴린-4-카보닐)-2-피리딜, 피라졸릴, 티아졸릴, 6,7-다이하이드로-4H-피라졸로[1,5-a]피라진-2-일, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 이미다졸릴, 5-(6,7-다이하이드로-4H-피라졸로[5,1-c][1,4]옥사진-2-일, 1,2,3-트라이아졸릴, 4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진, 피라진일, 및 5,6-다이하이드로-4H-피롤로[1,2-b]피라졸-2-일로부터 선택된 화합물을 포함한다.
화학식 II의 화합물의 예시적인 실시양태는
R8이
Figure pct00006
이고, 이때 R9가 H, -CH3, -CH2OCH3, -CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH2OH, -CH2CH2OCH3, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2CF3, -CH2CHF2, -CH(CH3)CN, -C(CH3)2CN, -CH2CN, -CH2CH2CN, -C(O)CH3, -C(O)CH2CH3, -C(O)CH(CH3)2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OH, 사이클로프로필, 사이클로프로필메틸, 옥세탄일 및 옥세탄일메틸로부터 선택되는 화합물을 포함한다.
화학식 II의 화합물의 예시적인 실시양태는 X1이 N이고, X2가 CR2이고, X3가 CR3인 화합물을 포함한다.
화학식 II의 화합물의 예시적인 실시양태는 X1이 CR1이고, X2가 N이고, X3가 CR3인 화합물을 포함한다.
화학식 II의 화합물의 예시적인 실시양태는 X1이 CR1이고, X2가 CR2이고, X3이 N인 화합물을 포함한다.
화학식 II의 화합물의 예시적인 실시양태는 X1 및 X3이 N이거나, X1 및 X2가 N이거나, X2 및 X3이 N인 것으로부터 선택되는 화합물을 포함한다.
화학식 II의 화합물의 예시적인 실시양태는 X2가 CR2이고 R2가 F인 화합물을 포함한다.
화학식 II의 화합물의 예시적인 실시양태는 X1 및 X3이 CH인 화합물을 포함한다.
화학식 II의 화합물의 예시적인 실시양태는 R4가 -CH2OH인 화합물을 포함한다.
본 발명의 화학식 I 및 II의 화합물은 비키랄 또는 키랄 중심을 함유하므로, 상이한 입체 이성질체 형태로 존재할 수 있다. 비제한적으로, 부분 입체 이성질체, 거울상 이성질체, 어트로프 이성질체뿐만 아니라 이들의 혼합물, 예컨대 라세미 혼합물을 포함하는 본 발명의 화합물의 모든 입체 이성질체가 본 발명의 일부를 형성하는 것으로 의도된다.
또한, 본 발명은 모든 부분입체 이성질체, 예컨대 시스-트랜스(기하) 및 형태 이성질체를 포함한다. 예컨대, 화학식 I의 화합물이 이중 결합 또는 융합된 고리를 포함하는 경우, 시스- 및 트랜스-형태뿐만 아니라 이들의 혼합물도 본 발명의 범위에 포함된다.
본원에 도시된 구조에서, 임의의 특정 키랄 원자의 입체화학이 특정되지 않은 경우, 모든 입체 이성질체가 고려되고, 본 발명의 화합물로서 포함된다. 입체화학이 특정 배열을 나타내는 속이 찬 쐐기선 또는 점선으로 특정된 경우, 그 입체 이성질체는 그렇게 특정되고 정의된다.
본 발명의 화합물은 용매화되지 않은 형태뿐만 아니라 약학적으로 허용가능한 용매, 예컨대 물, 에탄올 등과 함께 용매화된 형태로 존재하고, 본 발명은 용매화된 형태 및 용매화되지 않은 형태 모두를 포함하는 것으로 의도된다.
또한, 본 발명의 화합물은 상이한 호변 이성질체 형태로 존재할 수 있고, 이러한 모든 형태는 본 발명의 범위에 포함된다. 용어 "호변 이성질체" 또는 "호변 이성질체 형태"는 낮은 에너지 장벽을 통해 상호전환 가능한 상이한 에너지의 구조 이성질체를 지칭한다. 예컨대, 양성자 호변 이성질체(또한, 양성자성 호변 이성질체로서 공지됨)는 양성자의 이동, 예컨대 케토-엔올 및 이민-엔아민 이성질화를 통한 상호전환을 포함한다. 원자가 호변 이성질체는 일부 결합 전자의 재편성에 의한 상호전환을 포함한다.
생물학적 평가
효소 활성(또는 다른 생물학적 활성)의 억제제로서의 화학식 I의 화합물의 상대적 효능은, 각각의 화합물이 사전 정의된 정도로 활성을 억제한 때의 농도를 측정한 후, 그 결과를 비교하여 얻을 수 있다. 전형적으로, 바람직한 측정은 생화학 분석에서 50%의 활성을 억제하는 농도, 즉 50% 억제 농도 또는 "IC50"이다. IC50 값의 결정은 당해 분야에 공지된 통상적 기술을 사용하여 이루어질 수 있다. 일반적으로, IC50은 소정 농도 범위의 연구 중인 억제제의 존재 하에 주어진 효소의 활성을 측정하여 결정할 수 있다. 이어서, 실험적으로 수득한 효소 활성 값을 사용된 억제제 농도에 대하여 플로팅한다. 50% 효소 활성(임의의 억제제의 부재 하의 활성과 비교시)을 나타내는 억제제의 농도를 IC50 값으로 한다. 유사하게, 다른 억제 농도는 활성의 적절한 측정을 통하여 정의될 수 있다. 예컨대, 일부 설정에서는 90% 억제 농도, 즉 IC90 등을 측정하는 것이 바람직할 수 있다.
화학식 I의 화합물은 표준 생화학적 Btk 키나제 분석에 대해 시험되었다(실시예 901).
화학식 I의 화합물을 시험하는데 사용될 수 있는 표준 세포성 Btk 키나제 분석을 위한 일반적인 과정은 라모스 세포(Ramos Cell) Btk 분석이다(실시예 902).
표준 세포성 B-세포 증식 분석이 Balb/c 마우스의 비장으로부터 정제된 B-세포에 의해 화학식 I의 화합물을 시험하는데 사용될 수 있다(실시예 903).
표준 T-세포 증식 분석이 Balb/c 마우스의 비장으로부터 정제된 T-세포에 의해 화학식 I의 화합물을 시험하는데 사용될 수 있다(실시예 904).
CD86 억제 분석이 8 내지 16주령 Balb/c 마우스의 비장으로부터 정제된 전체 마우스 비장세포를 사용하여 B-세포 활성의 억제에 관해 화학식 I의 화합물에 대해 수행될 수 있다(실시예 905).
B-ALL 세포 생존 분석이 배양균 내의 생존하는 B-ALL 세포의 수를 측정하기 위하여 화학식 I의 화합물에 대해 수행될 수 있다(실시예 906).
CD69 전혈 분석이 표면 IgM을 염소 F(ab')2 항-인간 IgM과 가교결합시킴으로써 활성화된 인간 전혈 내의 B 림프구에 의한 CD69의 생산을 억제하는 화합물을 능력을 측정하기 위하여 화학식 I의 화합물에 대해 수행될 수 있다(실시예 907). CD69은 림프구 이동 및 시토카인 분비에 관여하는 유형 II C-유형 렉틴이다. CD69 발현은 백혈구 활성화의 가장 빠른 이용가능한 지시자 중 하나를 나타내고, 이의 신속한 유도는 전사적인 활성화를 통해 발생한다(문헌[Vazquez et al (2009) Jour. of Immunology Published October 19, 2009, doi:10.4049/jimmunol.0900839]). 선택적인 Btk 억제제에 의한 항원 수용체의 농도-의존적 억제는 림프구 활성화 마커 CD69의 세포 표면 발현을 유도한다(문헌[Honigberg et al (2010) Proc. Natl. Acad. Sci. 107(29):13075-13080]). 따라서, 선택적인 Btk 억제제에 의한 CD69 억제는 특정 B-세포 질환의 치료 효능과 관련될 수 있다. CD69 Hu 혈액 FACS IC70 값은 표 1 및 2에서 예시적인 화학식 I의 화합물에 대해 제시된다.
화학식 I의 예시적인 화합물의 세포독성 또는 세포분열 활성은 세포 배지에서 증식하는 포유동물 종양 세포주를 평가하고, 화학식 I의 화합물을 첨가하고, 약 6시간 내지 약 5일의 기간 동안 세포를 배양하고, 세포 생존능을 측정함으로써, 측정될 수 있다(실시예 908). 세포-기반 시험관내 분석이 생존능, 즉 증식(IC50), 세포독성(EC50) 및 아폽토시스의 유도(카스파제 활성화)를 측정하는데 사용되고, 혈액학적 악성 종양 및 고형 종양에 대한 임상적인 효능을 예측하는데 유용할 수 있다.
화학식 I의 화합물과 화학요법제의 병용의 시험관내 효능은 실시예 908의 세포 증식 분석; 프로메가 코포레이션(Promega Corp., 미국 위스콘신주 매디슨 소재)에서 상업적으로 이용가능한 셀타이터-글로(CellTiter-Glo: 등록상표) 발광 세포 생존능 분석에 의해 측정될 수 있다. 이러한 동종 분석 방법은 콜레오프테라(Coleoptera) 루시퍼라제의 재조합 발현에 기초하고(미국특허 제5,583,024호; 제5,674,713호; 제5,700,670호), 대사적인 활성 세포의 지시자인, 존재하는 ATP의 정량화에 기초하여 배양균 내의 생존 세포의 수를 측정한다(문헌[Crouch et al (1993) J. Immunol. Meth. 160:81-88]; 미국특허 제6,602,677호). 셀타이터-글로(등록상표) 분석은 96 또는 384-웰 포맷에서 측정되었고, 이는 자동화된 고속 대량 스크리닝(high-throughput screening: HTS)으로 처리가능하도록 한다(문헌[Cree et al (1995) AntiCancer Drugs 6:398-404]). 동종 분석 과정은 혈청-보충된 매질에서 배양된 세포에 단일 시약(셀타이터-글로(등록상표) 시약)을 직접 첨가함을 포함한다. 세포 세척, 매질의 제거 및 다중 피펫팅 단계는 필요하지 않는다. 시스템은 시약을 첨가하고 혼합한 후 10분 내에 384-웰 포맷에서 15 세포/웰만큼 적은 것으로서 검출된다.
동종 "첨가-혼합-측정(add-mix-measure)" 포맷은 세포 용해 및 존재하는 ATP의 양에 비례하는 발광 신호의 발생을 야기한다. ATP의 양은 배양균에 존재하는 세포의 수에 직접적으로 비례한다. 셀타이터-글로(등록상표) 분석은, 세포 유형 및 사용된 매질에 따라, 일반적으로 5시간 초과의 반감기를 갖고 루시퍼라제 반응에 의해 생산된 "글로우-유형(glow-type)" 발광 신호를 발생시킨다. 생존 세포는 상대적인 발광 단위(RLU)로 반영된다. 기질인 딱정벌레 루시페린은 AMP로의 ATP의 동시 전환 및 광자의 발생을 갖는 재조합 반딧불이 루시퍼라제에 의해 산화적으로 탈카복실화된다. 연장된 반감기는 시약 주입기의 사용을 위한 요구를 제거하고, 다수의 플레이트의 연속식 또는 회분식 가공에 유연성을 제공한다. 이러한 세포 증식 분석은 다양한 다중웰 포맷, 예컨대 96 또는 384-웰 포맷으로 사용될 수 있다. 데이터는 광도계 또는 CCD 카메라 영상화 장치에 의해 기록될 수 있다. 발광 출력은 시간에 걸쳐 측정된 상대적인 광 단위(relative light unit: RLU)로서 제공된다.
화학식 I의 예시적인 화합물 및 이의 화학요법제와의 조합의 항-증식성 효능은 특정 혈액학적 종양 세포주에 대한 셀타이터-글로(등록상표) 분석(실시예 908)에 의해 측정된다. EC50 값은 시험된 화합물 및 조합에 대해 확립된다.
표 1 및 2에서의 화학식 I의 예시적인 화합물은 본 발명의 방법에 따라 제조되고 특성화되고 Btk의 억제에 대해 시험되었고, 하기 구조 및 상응하는 명칭을 갖는다(켐드로우 울트라(ChemDraw Ultra) 버젼 9.0.1, 및 켐바이오드로우(ChemBioDraw) 버전 11.0, 캠브리지소프트 코포레이션(CambridgeSoft Corp.), 미국 매사추세츠주 캠브리지 소재). 하나보다 많은 명칭이 화학식 I의 화합물 또는 중간체와 함께 표시되는 경우, 화학식이 화합물을 정의하여야 한다.
표 1.
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
표 2.
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
화학식 I의 화합물의 투여
본 발명의 화합물은 치료해야 하는 증상에 적합한 임의의 경로로 투여될 수 있다. 적당한 경로로는 경구, 비경구(예컨대, 피하, 근육 내, 정맥 내, 동맥 내, 피하 내, 경막 내 및 경막 외), 경피, 직장, 비측, 국부(예컨대, 협측 및 설하), 질, 복강 내, 폐 내 및 비강 내 투여를 포함한다. 국소 면역억제 치료에서, 화합물은 병변 내 투여로 투여할 수 있으며, 예컨대 관류 또는 이식 전에 억제제와 이식편을 접촉시켜 투여할 수 있다. 바람직한 경로는 수혜자의 증상 등에 따라 달라질 수 있음을 알 수 있을 것이다. 화합물이 경구 투여되는 경우에는 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제와 함께 환제, 캡슐, 정제 등으로 조제될 수 있다. 화합물이 비경구 투여되는 경우에는 약학적으로 허용가능한 비경구 비히클과 함께 하기에 기술된 단위 투약 주사성 형태로 조제할 수 있다.
인간 환자를 치료하는 투여량은 화학식 I 또는 II의 화합물 약 10 내지 약 1000 mg의 범위일 수 있다. 일반적인 투여량은 화합물 약 100 내지 약 300 mg일 수 있다. 투여량은 특정 화합물의 흡수, 분포, 대사 및 배출을 비롯한 약동학 및 약력학적 성질에 따라 1일 1회(QID), 1일 2회(BID), 또는 더 자주 투여할 수 있다. 또한, 독성 인자는 투약량 및 투여 섭생에 영향을 미칠 수 있다. 또한, 경구 투여되는 경우, 환제, 캡슐 또는 정제는 특정 시간 기간 동안 매일 또는 더 드물게 투여될 수도 있다. 섭생은 다양한 치료 사이클로 반복될 수 있다.
화학식 I 및 II 의 화합물의 치료 방법
본 발명의 화학식 I 및 II의 화합물은 비정상적 세포 성장으로부터 Btk 키나제와 관련된 기능 또는 거동으로부터 야기된 질병 또는 장애, 예컨대 면역 질환, 심장 혈관 질환, 바이러스성 감염, 염증, 대사/내분비 장애 또는 신경 질환으로 고통받는 인간 또는 동물 환자를 치료하는데 유용하므로, 상기에 정의된 본 발명의 화합물을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법으로 치료될 수 있다. 또한, 암으로 고통받는 인간 또는 동물 환자는 화학식 I의 화합물을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법으로 치료될 수 있다. 이에 의해, 환자의 증상이 개선되거나 완화될 수 있다.
화학식 I 및 II의 화합물은 포유동물 세포, 기관 또는 연관된 병리학적 증상, 예컨대 전신 및 국소 염증, 면역-염증성 질환, 예컨대 류마티스 관절염, 면역 억제, 기관 이식 거부, 알러지, 궤양성 대장염, 크론병, 피부염, 천식, 전신성 홍반성 낭창, 쇼그렌 증후군, 다발성 경화증, 경피증/전신성 경화증, 특발성 혈소판 감소성 자반증(ITP), 항중성구 세포질 항체(ANCA) 혈관염, 만성 폐쇄성 폐질환(COPD), 건선의 시험관 내, 동일 반응계 내 및 생체 내 진단 또는 치료 및 일반적 관절 보호 효과에 유용할 수 있다.
또한, 본 발명의 방법은 관절염 질환, 예컨대 류마티스 관절염, 단일 관절염, 퇴행성 관절염, 통풍성 관절염, 척추염; 베체트병; 패혈증, 패혈성 쇼크, 내독소성 쇼크, 그람 음성 패혈증, 그람 양성 패혈증 및 독성 쇼크 증후군; 패혈증, 외상 또는 출혈에 의한 제 2차 다발성 장기 손상; 안과 장애, 예컨대 알레르기 결막염, 봄철 결막염, 포도막염 및 갑상샘 안병증; 호산구성 육아종; 폐 또는 호흡 장애, 예컨대 천식, 만성 기관지염, 알레르기 비염, ARDS, 만성 폐 염증성 질환(예컨대, 만성 폐쇄성 폐질환), 규폐증, 폐 사르코이드증, 흉막염, 폐포염, 혈관염, 폐기종, 폐렴, 기관지 확장증 및 폐 산소 중독; 심근, 뇌 또는 사지의 재관류 손상; 섬유증, 예컨대 낭포성 섬유증; 켈로이드 형성 또는 흉터 조직 형성; 죽상 동맥 경화증; 자가 면역 질환, 예컨대 전신성 홍반성 낭창(SLE), 자가 면역성 감상샘염, 다발성 경화증, 당뇨병의 일부 형성 및 레이나우드 증후군; 및 이식 거부 장애, 예컨대 GVHD 및 동종 이식편 거부반응; 만성 사구체 신염; 염증성 장 질환, 예컨대 만성 염증성 장 질환(CIBD), 크론병, 궤양성 대장염 및 괴사성 장염; 염증성 피부염, 예컨대 접촉성 피부염, 아토피 피부염, 건선 또는 두드러기; 감염에 의한 발열 및 근육통; 중추 또는 말초 신경계 염증성 질환, 예컨대 뇌수막염, 뇌염 및 미미한 상처에 의한 뇌 또는 척수 손상; 쇼그렌 증후군; 백혈구 누출로 인한 질환; 알코올성 간 질환; 세균성 폐렴; 항원-항체 착체 매개된 질환; 저혈량성 쇼크; 제 1 형 진성 당뇨병; 급성 및 지연성 과민증; 백혈병 조혈 장애 및 전이에 의한 질병 상태; 열 손상; 과립구 유입-관련 증후군; 및 사이토카인-유도된 독성을 치료하는 것을 포함한다.
본 발명의 방법은 또한 유방암, 난소암, 자궁경부암, 전립선암, 고환암, 비뇨생식관암, 식도암, 후두암, 교아종, 신경아세포종, 위암, 피부암, 각화극세포종, 폐암, 표피암, 대세포암, 비-소세포 폐암(NSCLC), 소세포암, 폐 선암, 뼈암, 대장암, 선종, 췌장암, 선암, 갑상선암, 여포성 암종, 미분화된 암종, 갑상선 암종, 정상피종, 흑색종, 육종, 방광암종, 간암종 및 담도암, 신장암종, 췌장암종, 골수 장애, 림프종, 모발 세포암, 구강암, 비-인두암, 인두암, 구순암, 혀암, 구강암, 소장암, 결장-직장암, 대장암, 직장암, 뇌암 및 중추신경계암, 호지킨병, 백혈병, 기관지암, 갑상선암, 간암 및 간내담관암, 간세포암, 위암, 신경교종/교아종, 자궁내막암, 흑색종, 신장 및 신우암, 방광암, 자궁체부암, 자궁경부암, 다발성 골수증, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 림프구 백혈병, 만성 림프구 백혈병(CLL), 골수성 백혈병, 구강 및 인두암, 비-호지킨병, 흑색종, 및 융모선종으로부터 선택된 암을 치료하는 것을 포함한다.
본 발명의 방법은 재관류 손상, 즉 조직 또는 기관이 허혈 후에 재관류를 경험하는 상황으로부터 초래된 손상을 입고 있거나 입을 수 있는 개체를 치료하는 데 유용하다. 용어 "허혈"은 동맥혈의 유입 차단으로 인한 국소적인 조직 빈혈을 지칭한다. 일시적 허혈 후의 재관류는 특징적으로 발병 위치에서 혈관의 내피를 통한 호중구 활성 및 이동을 야기한다. 결국, 활성화된 호중구의 축적은 반응성 산소 대사물질을 생성하고, 이는 연관된 조직 또는 기관의 성분을 손상시킨다. 이러한 "재관류 손상" 현상은 일반적으로 증상, 예컨대 혈관 뇌졸중(전뇌 허혈 및 국소 허혈 포함), 출혈성 쇼크, 심근 허혈 또는 경색, 장기 이식 및 뇌혈관 수축과 관련된다. 예를 들면, 심장이 혈액 공급이 차단된 후 재관류를 시작하는 경우 재관류 손상은 심장 혈관 우회의 말미 또는 심장 마비 중에 일어난다. 이러한 상황에서 Btk 활성의 억제는 재관류 손상량을 감소시킬 수 있을 것으로 기대된다.
약학 배합물
인간을 비롯한 포유동물의 치료에 본 발명의 화합물을 사용하기 위해, 이는 일반적으로 약학 조성물로서의 표준 약학적 관례에 따라 조제된다. 이러한 본 발명의 양태에 따르면, 본 발명의 화합물을 약학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체와 함께 포함하는 약학 조성물이 제공된다.
전형적인 제형은 본 발명의 화합물과 담체, 희석제 또는 부형제를 혼합하여 제조된다. 적당한 담체, 희석제 및 부형제는 당업자에게 공지되어 있고, 탄수화물, 왁스, 수용성 및/또는 팽윤성 중합체, 친수성 또는 소수성 물질, 젤라틴, 오일, 용매, 물 등과 같은 물질을 포함한다. 사용되는 특정 담체, 희석제 또는 부형제는 본 발명의 화합물이 적용되는 수단 및 목적에 따라 달라질 것이다. 용매는 일반적으로 포유동물에게 투여하기에 안전한 것으로 당업자에게 인식된 용매(GRAS)를 기초로 하여 선택한다. 일반적으로, 안전한 용매는 물과 같은 비독성 수성 용매, 및 물에 용해성 또는 혼화성인 다른 비독성 용매이다. 적당한 수성 용매는 물, 에탄올, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜(예컨대, PEG 400, PEG 300) 등, 및 이의 혼합물을 포함한다. 또한, 제형은 완충액, 안정제, 계면활성제, 습윤제, 윤활제, 유화제, 현탁제, 보존제, 항산화제, 불투명화제, 활택제, 가공보조제, 착색제, 감미제, 향미제, 방향제 및 기타 약물(즉, 본 발명의 화합물 또는 이의 약학 조성물)의 우아한 외양을 제공하거나 약학적 산물(즉, 약제)의 제조를 돕는 기타 공지된 첨가제를 하나 이상 포함할 수 있다.
제형은 통상적인 용해 및 혼합 절차를 이용해 제조될 수 있다. 예컨대, 벌크 약물 물질(즉, 본 발명의 화합물 또는 이 화합물의 안정화된 형태(예컨대, 사이클로덱스트린 유도체 또는 다른 공지된 착제를 갖는 착물))은 전술된 하나 이상의 부형제의 존재 하에 적당한 용매에 용해된다. 본 발명의 화합물은 일반적으로 용이하게 조절가능한 약물 투약량을 제공하고 환자의 처방된 요법에 맞는 약학적 투약 형태로 조제된다.
적용하기 위한 약학 조성물(또는 제형)은 약물 투여에 사용되는 방법에 따라 다양한 방식으로 포장될 수 있다. 일반적으로, 분배용 물품은 적당한 형태의 약학 조성물이 담겨 있는 용기를 포함한다. 적당한 용기는 당업자에게 공지되어 있고, 병(플라스틱 및 유리), 항낭, 앰플, 플라스틱 백, 금속 실린더 등과 같은 소재를 포함한다. 또한, 용기는 패키지의 내용물에 부주의한 접근을 방지하기 위해 손댐방지 어셈블리를 포함할 수도 있다. 또한, 용기는 용기의 내용물을 기재한 라벨이 부착된다. 또한, 상기 라벨은 적절한 경고를 포함한다.
본 발명의 화합물의 약학 조성물은 다양한 투여 경로 및 종류로 제조할 수 있다. 예컨대, 목적하는 순도를 갖는 화학식 I 또는 II의 화합물을 경우에 따라 약학적으로 허용가능한 희석제, 담체, 부형제 또는 안정제와 혼합하여(문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences(1980) 16th edition, Osol, A. Ed.]) 동결건조 제형, 밀링된 분말 또는 수용액 형태로 제조할 수 있다. 상온에서 적당한 pH 및 바람직한 정도의 순도에서 생리적으로 허용가능한 담체, 즉 이용되는 투약량 및 농도에서 수혜자에게 비독성인 담체와 혼합하여 제형화할 수 있다. 상기 제형의 pH는 주로 화합물의 특정 용도 및 농도에 따라 달라지지만, 약 3 내지 약 8 범위일 수 있다. pH 5의 아세테이트 완충액 중의 제형이 적합한 실시양태이다.
상기 화합물은 보통 고체 조성물, 동결건조 제형 또는 수성 용액으로 보관될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 좋은 의학적 관례와 일치하는 방식, 즉 투여량, 농도, 스케줄, 과정, 비히클 및 투여 경로로 조제, 용량화 및 투여될 수 있다. 이러한 상황에서 고찰해야 하는 요인으로는 치료받는 특정 장애, 치료받는 특정 포유동물, 각 환자의 임상 증상, 장애의 원인, 제제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 스케줄, 의료업자에게 공지된 기타 요인을 포함한다. 투여되는 화합물의 "치료 효과량"은 이러한 고찰 내용을 따라야하고 과증식성 장애를 예방, 호전 또는 치료하는데 필요한 최소량이다.
일반적 처방으로, 용량 당 비경구 투여되는 억제제의 초기 약학적 유효량은 약 0.01 내지 100 mg/kg 범위, 즉 환자 체중 kg 당 하루에 약 0.1 내지 20 mg이고, 사용되는 화합물의 전형적인 초기 범위는 0.3 내지 15 mg/kg/일이다.
허용가능한 희석제, 담체, 부형제 및 안정제는 이용되는 투약량 및 농도에서 수혜자에게 비독성이고, 예컨대 인산염, 구연산염 및 다른 유기산과 같은 완충액; 아스코르브산 및 메티오닌을 비롯한 항산화제; 보존제(예컨대, 옥타데실다이메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량(약 10개 잔기 미만) 폴리펩타이드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신; 단당류, 이당류 및 다른 탄수화물, 예컨대 글루코오스, 만노오스 또는 덱스트린; 킬레이트제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로오스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염형성 반대이온, 예컨대 나트륨; 금속 착물(예컨대, Zn-단백질 착물); 및/또는 비이온 계면활성제, 예컨대 트윈(TWEENTM, 플루로닉스(PLURONICSTM 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함한다. 활성 약학적 성분은 또한 코아세르베이션 기술 또는 계면 중합 등에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예컨대 각각 하이드록시메틸셀룰로오스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐, 콜로이드성 약물 전달 시스템(예컨대, 리포좀, 알부민 미소구, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐) 또는 마크로에멀젼에 포획될 수 있다. 이러한 기술은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed.(1980)]에 개시되어 있다.
화학식 I 또는 II의 화합물의 지속 방출형 제제가 제조될 수 있다. 지속 방출 제제의 적당한 예로는 매트릭스가 성형 물품 형태, 예컨대 필름 또는 마이크로캡슐인, 화학식 I 또는 II의 화합물을 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함한다. 지속 방출형 매트릭스의 예는 폴리에스터, 하이드로겔(예컨대, 폴리(2-하이드록시에틸-메타크릴레이트) 또는 폴리(비닐 알콜)), 폴리락타이드(미국 특허 3,773,919), L-글루탐산과 감마-에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비-분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 분해성 젖산-글리콜산 공중합체, 예컨대 루프론 디폿(LUPRON DEPOTTM (젖산-글리콜산 공중합체와 류프롤라이드 아세테이트로 구성된 주사성 미소구) 및 폴리-D-(-)-3-하이드록시부티르산을 포함한다.
제형은 본 명세서에서 상술한 투여 경로에 적합한 것을 포함한다. 제형은 단위 투약 형태로 편리하게 제공될 수 있고 약학 분야에 공지된 임의의 방법으로 제조할 수 있다. 기술 및 제형은 일반적으로 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA]에서 찾을 수 있다. 이러한 방법은 하나 이상의 보조 성분을 함유하는 담체와 활성 성분을 회합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제형은 활성 성분과 액체 담체 또는 미분된 고체 담체 또는 이 둘 모두를 균일하게 친밀하게 회합시키고, 그 다음 필요하면 산물을 성형하여 제조한다.
경구 투여에 적합한 화학식 I 또는 II의 화합물의 제형은 소정량의 화학식 I 또는 II의 화합물을 각각 함유하는 환제, 캡슐, 사쉐 또는 정제와 같은 개별 단위로 제조할 수 있다. 압축 정제는 경우에 따라 결합체, 윤활제, 불활성 희석제, 보존제, 계면활성제 또는 분산제와 혼합한, 분말 또는 과립과 같은 자유 유동 형태의 활성 성분을 적당한 기계로 압축하여 제조할 수 있다. 성형 정제는 분말화된 활성 성분을 불활성 액체 희석제로 습윤화시킨 혼합물을 적당한 기계에서 성형하여 제조할 수 있다. 정제는 임의적으로 코팅하거나 스코어링할 수 있고, 임의적으로 활성 성분의 저속 방출 또는 조절 방출을 제공하도록 조제한다. 정제, 트로키, 로젠지, 수성 또는 오일 현탁액, 분산성 분말 또는 과립, 에멀젼, 경질 또는 연질 캡슐, 예컨대 젤라틴 캡슐, 시럽 또는 엘릭시르는 경구용으로 제조할 수 있다. 경구용으로 의도된 화학식 I 또는 II의 화합물의 제형은 약학 조성물의 제조에 대해 당업계에 공지된 임의의 방법에 따라 제조할 수 있고, 이러한 조성물은 감미제, 방향제, 착색제 및 보존제를 비롯한 하나 이상의 제제를 함유하여 맛좋은 제제를 제공할 수 있다. 활성 성분을 함유하는 정제는 이 정제의 제조에 적당한 비독성 약학적으로 허용가능한 부형제와 혼합된 것이 적당하다. 이러한 부형제로는, 예컨대 불활성 희석제, 예컨대 탄산 칼슘 또는 탄산 나트륨, 락토오스, 칼슘 또는 나트륨 포스페이트; 과립화 및 붕해제, 예컨대 옥수수 전분 또는 알긴산; 결합제, 예컨대 전분, 젤라틴 또는 아카시아; 및 윤활제, 예컨대 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 또는 활석일 수 있다. 정제는 비코팅되거나 또는 마이크로캡슐화를 비롯한 공지의 기술로 코팅하여 위장관에서의 붕해 및 흡수를 지연시키고 장기간 동안 지속적인 작용을 제공할 수 있다. 예컨대, 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 다이스테아레이트와 같은 시간 지연 물질을 단독으로 또는 왁스와 함께 사용할 수 있다.
눈 또는 다른 외부 조직, 예컨대 입 및 피부의 치료를 위해, 제형은 활성 성분(들)을 예컨대 0.075 내지 20%w/w의 양으로 함유하는 국부 연고 또는 크림으로 적용되는 것이 바람직할 수 있다. 연고로 조제될 때, 활성 성분은 파라핀계 또는 수혼화성 연고 베이스와 함께 이용될 수 있다. 다르게는, 활성 성분은 수중유 크림 베이스와 함께 크림으로 조제될 수 있다. 필요한 경우, 크림 베이스의 수성 상은 다가 알콜, 즉 하이드록실 기가 2개 이상인 알콜, 예컨대 프로필렌 글리콜, 부탄 1,3-다이올, 만니톨, 소르비톨, 글리세롤 및 폴리에틸렌 글리콜(예컨대, PEG 400) 및 이의 혼합물을 포함할 수 있다. 국부 제형은 피부 또는 다른 환부를 통해 활성 성분의 흡수 또는 침투를 증강시키는 화합물을 적당하게 포함할 수 있다. 이러한 피부 침투 증강제의 예는 다이메틸 설폭사이드 및 관련 유사체를 포함한다. 본 발명의 에멀젼의 오일 상은 지방 또는 오일 또는 지방 및 오일과 함께 하나 이상의 유화제를 함유한 혼합물을 포함하는 공지된 성분으로부터 공지의 방식으로 구성될 수 있다. 상이 단지 유화제만 포함하는 것에 반하여, 하나 이상의 유화제와 지방 또는 오일, 또는 지방 및 오일의 혼합물을 포함하는 것이 바람직하다. 바람직하게는, 친수성 유화제는 안정제로 작용하는 친지성 유화제와 함께 포함되는 것이 바람직하다. 오일 및 지방을 둘다 포함하는 것이 또한 바람직하다. 종합하면, 유화제(들)는 안정제(들)와 함께 또는 안정제 없이 소위 유화 왁스를 구성하고, 오일 및 지방과 함께 왁스는 크림 제형의 오일 분산 상을 형성하는 소위 유화 연고 베이스를 구성한다. 본 발명의 제형에 사용하기에 적합한 유화제 및 에멀젼 안정제는 트윈 60, 스팬(Span 80, 세토스테아릴 알콜, 벤질 알콜, 미리스틸 알콜, 글리세릴 모노-스테아레이트 및 나트륨 라우릴 설페이트를 포함한다.
화학식 I 및 II의 화합물의 수성 현탁액은 수성 현탁액의 제조에 적합한 부형제와 혼합된 활성 물질을 함유한다. 이러한 부형제로는 현탁제, 예컨대 나트륨 카복시메틸셀룰로오스, 크로스카멜로오스, 포비돈, 메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스, 나트륨 알기네이트, 폴리비닐피롤리돈, 검 트라가칸트 및 검 아카시아 및 분산제 또는 습윤제, 예컨대 천연 포스파타이드(예컨대, 레시틴), 지방산과 알킬렌 옥사이드의 축합 산물(예컨대, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트), 장쇄 지방족 알콜과 에틸렌 옥사이드의 축합 산물(예컨대, 헵타데카에틸렌옥시세탄올), 지방산과 헥시톨 무수물 유래의 부분 에스터와 에틸렌 옥사이드의 축합 산물(예컨대, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트)을 포함한다. 수성 현탁액은 또한 하나 이상의 보존제, 예컨대 에틸 또는 n-프로필 p-하이드록시벤조에이트, 하나 이상의 착색제, 하나 이상의 방향제 및 하나 이상의 감미제, 예컨대 수크로오스 또는 사카린을 함유할 수 있다.
화학식 I 및 II의 화합물의 약학 조성물은 멸균 주사성 제제, 예컨대 멸균 주사성 수성 또는 유성 현탁액 형태일 수 있다. 이 현탁액은 앞에서 언급한 적당한 분산제 또는 습윤화제 및 현탁화제를 이용하여 공지된 기술에 따라 제조할 수 있다. 멸균 주사성 제제는 또한 비독성의 비경구 허용가능한 희석제 또는 용매 중의 멸균 주사성 용액 또는 현탁액, 예컨대 1,3-부탄다이올 중의 용액이거나, 또는 동결건조 분말로 제조될 수 있다. 이용될 수 있는 허용가능한 비히클 및 용매 중에는 물, 링거액 및 등장성 염화나트륨 용액이 사용될 수 있다. 또한, 멸균 고정 오일은 통상적으로 용매 또는 현탁 매질로 이용될 수 있다. 이 목적을 위해, 합성 모노글리세라이드 또는 다이글리세라이드를 포함하는 모든 상표의 고정 오일이 이용될 수 있다. 또한, 지방산, 예컨대 올레산이 마찬가지로 주사제의 제조에 이용될 수 있다.
단일 투약 형태를 생산하기 위해 담체 물질과 배합될 수 있는 활성 성분의 양은 치료받는 숙주 및 특정 투여 방식에 따라 달라질 것이다. 예컨대, 인간에게 경구 투여하려는 시간-방출 제형은 약 1 내지 1000 mg의 활성 물질을, 총 조성물의 약 5 내지 약 95%(중량:중량)로 변할 수 있는 적당하고 편리한 양의 담체 물질과 함께 함유할 수 있다. 이 약학 조성물은 투여 시 쉽게 측정가능한 양을 제공하도록 제조할 수 있다. 예컨대, 정맥 내 주입용으로 제조된 수용액은 용액 1 ml당 활성 성분 약 3 내지 500 ㎍을 함유하여 약 30 ml/hr 속도의 적당한 용량이 주입될 수 있다.
비경구 투여에 적합한 제형은 항산화제, 완충액, 세균발육정지제 및 제형을 의도한 수용체의 혈액과 등장성으로 만드는 용질을 함유할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 주사 용액; 및 현탁제 및 증점제를 함유할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 현탁액을 포함한다.
또한, 눈에 국부 투여하기에 적합한 제형은 적당한 담체, 특히 활성 성분의 수성 용매에 활성 성분이 용해 또는 현탁된 점안제를 포함한다. 이러한 제형에서 활성 성분은 약 0.5 내지 20% w/w, 예컨대 약 0.5 내지 10% w/w 농도, 예컨대 약 1.5% w/w의 농도로 존재하는 것이 바람직하다.
입에 국부 투여하기에 적당한 제형은 방향성 베이스, 보통 수크로오스 및 아카시아 또는 트라가칸트에 활성 성분을 함유하는 로젠지; 젤라틴 및 글리세린 또는 수크로오스 및 아카시아와 같은 불활성 베이스 중에 활성 성분을 함유하는 파스틸; 및 적당한 액체 담체에 활성 성분을 함유하는 구강세정제를 포함한다.
직장 투여용 제형은 예컨대 코코아 버터 또는 살리실레이트를 함유하는 적당한 베이스와 함께 좌약으로 제공될 수 있다.
폐내 또는 비측 투여에 적합한 제형은 입자 크기가 예컨대 0.1 내지 500 마이크론 범위(예컨대, 0.5, 1, 30 마이크론, 35 마이크론 등과 같은 마이크론 증분으로 0.1 내지 500 마이크론 범위의 입자 크기를 포함함)이고, 비강을 통한 급속 흡입 또는 폐포낭에 도달하도록 구강을 통한 흡입에 의해 투여된다. 적당한 제형은 활성 성분의 수성 또는 오일 용액을 포함한다. 에어로졸 또는 무수 분말 투여에 적합한 제형은 통상의 방법에 따라 제조할 수 있고, 이하에 기술된 장애를 치료 또는 예방하는데 지금까지 사용된 화합물과 같은 다른 치료제와 함께 전달될 수 있다.
질 투여에 적합한 제형은 활성 성분 외에 당업자에게 적당한 것으로 공지된 담체를 함유하는 페사리, 탐폰, 크림, 젤, 페이스트, 포움 또는 스프레이 제형으로 제공될 수 있다.
이 제형은 단위 용량 또는 다회 용량 용기, 예컨대 밀봉 앰플 및 바이엘에 포장될 수 있고, 사용 직전에 주사를 위해 멸균 액체 담체, 예컨대 물의 첨가만을 필요로 하는 동결건조 상태로 보관될 수 있다. 임시 주사 용액 및 현탁액은 앞서 기술된 종류의 멸균 분말, 과립 및 정제로 제조된다. 바람직한 단위 투약 제형은 위에서 언급한 활성 성분의 1일 용량 또는 단위 1일 분할용량이나 이의 적당한 분획을 함유하는 제형이다.
또한, 본 발명은 위에서 정의한 하나 이상의 활성 성분을 수의용 담체와 함께 함유하는 수의용 조성물을 제공한다. 수의용 담체는 조성물 투여 목적에 유용한 물질이고, 수의학적으로 불활성이거나 허용가능하고 활성 성분과 융화성인 고체, 액체 또는 기체 물질일 수 있다. 이러한 수의용 조성물은 비경구, 경구 또는 임의의 다른 바람직한 경로를 통해 투여될 수 있다.
병용 요법
화학식 I 및 II의 화합물을 단독으로 또는 다른 치료제와 함께 본원에 기재된 질환 또는 장애, 예컨대 염증 또는 과증식 장애(예컨대, 암)를 치료하는데 이용할 수 있다. 특정 실시양태에서, 화학식 I 또는 II의 화합물은 약학적 복합 제형 또는 병용 요법과 같은 용량투여 섭생으로, 항 염증 성질 또는 항-과증식 성질을 갖거나 염증, 면역 반응 장애 또는 과증식 장애(예컨대, 암)를 치료하는데 유용한 제 2 치료 화합물과 함께 추가로 배합된다. 추가의 치료제는 항염제, 면역조정제, 화학 치료제, 세포자살-개선제, 향신경성 요소, 심혈관 질환 치료제, 간질환 치료제, 항 바이러스 치료제, 혈액 장애 치료제, 당뇨병 치료제, 면역결핍 장애 치료제일 수 있다. 제 2 치료제는 NSAID 항염제일 수 있다. 제 2 치료제는 화학 치료제일 수 있다. 약학적 복합 제형 또는 용량투여 섭생의 제 2 화합물은 서로 악영향을 미치지 않도록 화학식 I 또는 II의 화합물에 보충 활성을 나타내는 것이다. 이러한 화합물은 의도한 목적에 효과적인 양으로 함께 적당하게 존재한다. 하나의 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 화학식 I 또는 II의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 호변 이성질체, 용매화물, 대사물질 또는 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구 약물을 화학치료제, 예컨대 NSAID와 함께 포함한다.
병용 요법은 동시 또는 연속 섭생으로 투여될 수 있다. 연속 투여될 때, 복합물은 2회 이상의 투여로 투여될 수 있다. 병용 투여는 별도의 제형 또는 단일 약학 조성물의 공동투여, 및 임의의 순서로의 연속 투여를 포함하고, 이때 두 활성제(또는 모든 활성제)가 각각의 생물학적 활성을 동시에 발휘하는 시간 기간을 두는 것이 바람직하다.
상기 임의의 공동투여 제제의 적당한 투약량은 현재 사용되는 양이고, 새로 동정된 제제 및 다른 치료제 또는 치료의 복합 작용(상승작용)으로 인해 저하될 수 있다.
병용 요법은 "상승작용" 및 "상승 효과"(즉, 화합물을 별도로 사용하여 수득되는 효과의 합보다 활성 성분을 함께 사용할 때 더 큰 효과)를 달성할 수 있다. 상승 효과는 활성 성분이 (1) 공동조제되고 병용의 단위 투약 제형으로 동시에 투여 또는 전달될 때; (2) 별도의 제형으로 교대로 또는 병행해서 전달될 때; 또는 (3) 일부 다른 섭생으로 달성될 수 있다. 교대 요법으로 전달될 때, 상승 효과는 화합물이, 예컨대 다른 주사기로 다른 주입에 의해, 별개의 환제 또는 캡슐로 또는 분리 주입으로 연속해서 투여 또는 전달될 때 달성될 수 있다. 일반적으로, 교대 요법 동안, 각 활성 성분의 유효 투약량은 연속, 즉 계대로 투여되는 반면, 병용 요법에서는 2개 이상의 활성 성분의 유효 투여량이 함께 투여된다.
요법의 특정한 실시양태에서, 화학식 I 또는 II의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 호변 이성질체, 용매화물, 대사물질 또는 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구 약물은 본원에 기재된 바와 같은 다른 치료제, 호르몬제 또는 항체 제제와 조합되기도 하고, 수술 요법 및 방사선요법과 조합될 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 병용 요법은 하나 이상의 화학식 I 또는 II의 화합물, 이의 입체 이성질체, 호변 이성질체, 용매화물, 대사물질 또는 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구 약물의 투여, 및 하나 이상의 다른 암 치료 방법의 이용을 포함한다. 화학식 I 또는 II의 화합물(들) 및 다른 약학적 활성 치료제(들)의 양 및 상대적 투여 타이밍은 바람직한 병용 치료 효과를 달성하도록 선택한다.
화학식 I 및 II 의 화합물의 대사 산물
또한, 본 발명의 범위에는 본원에 기재된 화학식 I 및 II의 생체 내 대사 산물이 포함된다. 이 산물은, 예컨대 투여된 화합물의 산화, 환원, 가수분해, 아마이드화, 탈아마이드화, 에스터화, 탈에스터화, 효소 절단 등으로부터 산출될 수 있다. 따라서, 본 발명은 화학식 I 및 II의 화합물의 대사물질, 예컨대 본 발명의 화합물을 이의 대사 산물을 산출하기에 충분한 시간 동안 포유동물과 접촉시키는 것을 포함하는 방법에 의해 생성되는 화합물을 포함한다.
대사물질은 일반적으로 본 발명의 화합물의 방사능표지된(예컨대, 14C 또는 3H) 동위원소를 제조하는 단계, 이것을 동물, 예컨대 래트, 마우스, 기니아 피그, 원숭이 또는 사람에게 검출가능한 용량(예컨대, 약 0.5 mg/kg 초과)으로 비경구적으로 투여하는 단계, 충분한 시간 동안(예컨대, 약 30초 내지 30시간) 대사가 일어나도록 하는 단계, 및 이의 변환 산물을 소변, 혈액 또는 다른 생물학적 시료로부터 단리하는 단계에 의해 동정된다. 이 산물은 표지되어 있기 때문에 쉽게 단리된다(다른 것은 대사물질에 생존하는 에피토프에 결합할 수 있는 항체를 이용하여 단리한다). 대사물질의 구조는 통상의 방식, 예컨대 MS, LC/MS 또는 NMR 분석으로 측정한다. 일반적으로, 대사물질의 분석은 당업계에 공지된 통상의 약물 대사 연구와 같은 방식으로 수행한다. 대사물질은 생체 내에서 다르게 발견되지 않는 한, 본 발명의 화합물의 치료적 용량에 대한 진단 분석에 유용할 수 있다.
제품
본 발명의 또 다른 실시양태에서, 전술한 질환 및 장애의 치료에 유용한 물질을 함유하는 제조 물품 또는 "키트"가 제공된다. 하나의 실시 양태에서, 이 키트는 화학식 I 및 II의 화합물 또는 이의 입체 이성질체, 호변 이성질체, 용매화물, 대사물질 또는 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구 약물을 함유하는 용기를 포함한다. 키트는 또한 라벨 또는 패키지 동봉물을 용기 위에 또는 용기에 결합시켜 포함한다. "패키지 동봉물"이란 용어는 치료 제품의 상업적 패키지에 통상적으로 포함되는 설명서로서, 이 치료 제품의 사용에 관한 지시, 용법, 투약량, 투여, 금기 및/또는 경고를 포함하는 설명서를 의미하는 것이다. 적당한 용기는, 예컨대 병, 바이알, 주사기, 블리스터 팩 등을 포함한다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 소재로 형성될 수 있다. 용기는 증상의 치료에 효과적인 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 이의 제형을 담고 있을 수 있고 멸균 접근 입구를 보유할 수 있다(예컨대, 용기는 피하 주사 바늘로 찌를 수 있는 스토퍼를 보유한 바이알 또는 정맥 내 용액 백일 수 있다). 조성물 중의 하나 이상의 활성제는 화학식 I 또는 II의 화합물이다. 라벨 또는 패키지 동봉물은 선택한 증상, 예컨대 암을 치료하는데 조성물이 사용된다는 것을 나타낸다. 또한, 라벨 또는 패키지 동봉물은 치료할 환자가 과증식 장애, 신경 변성, 심장 비대, 통증, 편두통 또는 신경외상 질환 또는 사태와 같은 장애를 가진 자임을 나타낼 수 있다. 하나의 실시양태에서, 라벨 또는 패키지 동봉물은 화학식 I 또는 II의 화합물을 함유하는 조성물이 비정상 세포 증식으로부터 초래되는 장애를 치료하는데 사용될 수 있다는 것을 나타낸다. 또한, 라벨 또는 패키지 동봉물은 조성물이 다른 장애를 치료하는데 사용될 수 있음을 나타낼 수도 있다. 다르게는, 또는 추가로, 제조 물품은 약학적으로 허용가능한 완충액, 예컨대 세포발육정지성 주사용수(BWFI), 인산염-완충 식염수, 링거액 및 덱스트로스 용액을 함유하는 제 2 용기를 포함할 수 있다. 또한, 상업적 및 사용자 견지에서 바람직한 다른 재료, 예컨대 다른 완충액, 희석제, 필터, 주사바늘 및 주사기를 포함할 수 있다.
키트는 추가로 화학식 I 또는 II의 화합물의 투여에 대한 안내서, 및 존재하는 경우, 제 2 약학 조성물을 포함할 수 있다. 예컨대, 키트가 화학식 I 또는 II의 화합물을 함유하는 제 1 조성물 및 제 2 약학 조성물을 포함하는 경우, 키트는 추가로 치료가 필요한 환자에게 제 1 및 제 2 약학 조성물을 동시, 연속 또는 분할 투여하는 것에 대한 지침서를 포함할 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 키트는 화학식 I 또는 II의 화합물의 고체 경구 형태, 예컨대 정제 또는 캡슐을 전달하기에 적합하다. 이러한 키트는 다수의 단위 투약량을 포함하는 것이 바람직하다. 이러한 키트는 투약량이 의도한 사용 순서대로 배열되어 있는 카드를 포함할 수 있다. 이러한 카드의 한 예는 "블리스터 팩"이다. 블리스터 팩은 포장 산업에 공지되어 있고 약학적 단위 투약 형태를 포장하는데 널리 사용된다. 필요한 경우, 기억 보조자가 예컨대 수, 문자 또는 다른 표식 형태로 또는 투약량이 투여될 수 있는 치료 스케줄의 날짜를 표시한 달력 동봉물로 구비될 수 있다.
하나의 실시양태에 따르면, 키트는 (a) 화학식 I 또는 II의 화합물이 담겨있는 제 1 용기; 및 임의적으로 (b) 항-과증식 활성이 있는 제 2 화합물을 포함하는 제 2 약학 조성물이 담겨있는 제 2 용기를 포함할 수 있다. 다르게는, 또는 추가로 키트는 약학적으로 허용가능한 완충액, 예컨대 세균발육정지성 주사용수(BWFI), 인산염 완충 식염수, 링거액 및 덱스트로스 용액을 함유하는 제 3 용기를 포함할 수 있다. 추가로, 상업적 및 사용자 견지에서 바람직한, 다른 완충액, 희석제, 필터, 주사바늘 및 주사기를 비롯한 다른 재료를 추가로 포함할 수 있다.
키트가 화학식 I 또는 II의 조성물 및 제 2 치료제를 함유하는 다른 특정한 실시양태에서, 키트는 각 조성물을 담기 위한 용기, 예컨대 분할된 병 또는 분할된 호일 패킷을 포함할 수 있지만, 각 조성물은 미분할된 단일 용기에 담겨있을 수도 있다. 일반적으로, 키트는 각 성분의 투여에 대한 지시를 포함한다. 키트 형태는 각 성분이 상이한 투약 형태(예컨대, 경구 및 비경구)로 투여되는 것이 바람직하거나, 상이한 투약 간격으로 투여될 때, 또는 제형의 각 성분의 역가가 주치의 처방이 필요할 때 특히 유리하다.
화학식 I 및 II 의 화합물의 제조
화학식 I 및 II의 화합물은 화학 업계에 공지된 것과 유사한 공정을 포함하는 합성 경로에 의해, 특히 본 명세서에 있는 설명 및 다른 헤테로사이클에 대해 본원에 참고로서 인용된 문헌(문헌[Comprehensive Heterocyclic Chemistry II, Editors Katritzky and Rees, Elsevier, 1997, e.g. Volume 3]; [Liebigs Annalen der Chemie,(9):1910-16,(1985)]; [Helvetica Chimica Acta, 41:1052-60,(1958)]; [Arzneimittel-Forschung, 40(12):1328-31,(1990)])에 비추어 합성될 수 있다. 출발 물질은 일반적으로 알드리치 케미컬스(Aldrich Chemicals, 위스콘신 밀워키 소재)와 같은 시판원에서 입수할 수 있거나 당업자에게 공지된 방법을 이용해 용이하게 제조할 수 있다(예컨대, 문헌[Louis F. Fieser and Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, v. 1-23, Wiley, N.Y.(1967-2006) ed.], 또는 문헌[Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlin(부록 포함)(또한, 바일슈타인(Beilstein) 온라인 데이터베이스를 통해서도 입수할 수 있음)]에 일반적으로 기술된 방법에 의해 제조될 수 있다.
화학식 I 및 II의 화합물, 필요한 시약 및 중간체 합성에 유용한 합성 화학 변형 및 보호기 방법(보호 및 탈보호)은 당 분야에 공지되어 있고, 예를 들면 문헌[R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers(1989); T. W. Greene and P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed., John Wiley and Sons(1999)] 및 [L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons(1995)] 및 이의 후속 판에 기재된 것을 포함한다.
화학식 I 및 II의 화합물은 단독으로 제조하거나 또는 적어도 2개, 예컨대 5 내지 1000개의 화합물 또는 10 내지 100개의 화합물을 포함하는 화합물 라이브러리로 제조할 수 있다. 화학식 I 및 II의 화합물의 라이브러리는 조합적 "분리 및 혼합(split and mix)" 접근법으로 제조하거나, 또는 용액상 또는 고상 화학을 이용하는 여러 병행 합성법 또는 당업자에게 공지된 절차에 의해 제조할 수 있다. 본 발명의 추가 양태에 따르면 적어도 2개의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 화합물 라이브러리가 제공된다.
도면 및 실시예는 화학식 I 및 II의 화합물을 제조하기 위한 예시적인 방법을 제공한다. 당업자는 다른 합성 경로를 이용해서 화학식 I 및 II의 화합물을 합성할 수 있다는 것을 인식하고 있다. 특정 출발 물질과 시약이 상기 반응식, 일반적 절차 및 실시예에 묘사 및 논의되고 있지만, 다른 출발 물질과 시약으로 대체하여 다양한 유도체 및/또는 반응 조건을 제공할 수도 있다. 또한, 이하에 기술된 방법으로 제조한 다수의 예시적 화합물은 당업자에게 공지된 통상의 화학을 이용하여 본 개시내용에 비추어 추가 변형시킬 수도 있다.
화학식 I의 화합물을 제조하는데 있어서, 중간체의 원위(remote) 작용기(예컨대, 1급 또는 2급 아민)의 보호가 필요할 수 있다. 이러한 보호의 필요는 원위 작용기의 성질 및 제조방법의 조건에 따라 달라질 것이다. 적당한 아미노-보호기는 아세틸, 트라이플루오로아세틸, t-부톡시카본일(BOC), 벤질옥시카본일(CBz) 및 9-플루오렌일메틸렌옥시카본일(Fmoc)을 포함한다. 이러한 보호의 필요는 당업자에 의해 쉽게 결정된다. 보호기 및 이의 사용에 대한 일반적인 설명은 문헌[T.W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991]을 참조한다.
화학식 I 및 II 화합물의 제조에 유용한 실험 절차, 중간체 및 반응제는 2011년 5월 6일에 출원된 US 2012/0010191[발명의 명칭: 피리돈 및 아자-피리돈 화합물 및 사용 방법]에서 찾아볼 수 있으며, 이를 전체적으로 참조로 인용한다.
도 1 내지 8은 실시예 101 내지 112에서 더욱 충분히 기술된, 화학식 I 또는 II의 예시적인 실시양태의 합성을 기술하고, 다른 화학식 I 및 II 화합물의 제조에 유용할 수 있다.
일반적인 제조 절차
일반적인 절차: 스즈키 커플링
Figure pct00019
스즈키 커플링 반응은 화학식 I 및 II 화합물의 고리를 중간체 A-3에 부착하기 위한 탄소-탄소 결합을 형성하는데 유용하다(문헌[Suzuki(1991) Pure Appl. Chem. 63:419-422; Miyaura and Suzuki(1979) Chem. Reviews 95(7):2457-2483; Suzuki(1999) J. Organometal. Chem. 576:147-168]). 스즈키 커플링은 헤테로아릴할로겐화물, 예컨대 B-2 또는 B-4와 보론산, 예컨대 A-1 또는 A-2과의 팔라듐 매개된 교차 커플링 반응이다. 예를 들어, B-2는 약 1.5 당량의 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-바이(1,3,2-다이옥사보롤란)과 배합되고, 물 및 동일한 부피의 아세토나이트릴 중의 1 몰 용액으로서 약 3 당량의 나트륨 카보네이트에 용해될 수 있다. 촉매량, 또는 그 이상의 저가 팔라듐 반응제, 예컨대 비스(트라이페닐포스핀)팔라듐(II) 다이클로라이드를 첨가하였다. 몇몇 경우에 수성 층의 pH를 조정하기 위해 나트륨 카보네이트 대신에 칼륨 아세테이트가 사용될 수 있다. 이후 반응을 약 140-150 ℃로 감압 하에서 마이크로파 반응기(스웨덴 웁살라 소재의 바이오타지 아베(Biotage AB)) 내에서 10 내지 30분 동안 가열할 수 있다. 반응물을 에틸 아세테이트 또는 또 다른 유기 용매로 추출하였다. 유기 층을 증발시킨 후, 보론 에스터 A-1을 실리카 상 또는 역상 HPLC로 정제하였다. 치환기는 정의된 바와 같거나, 또는 이의 보호된 형태 또는 전구체이다. 유사하게, 브롬화물 중간체 B-4가 보론화되어 A-2를 제공할 수 있다.
B-2와 A-2, 또는 A-1과 B-4의 스즈키 커플링은 화학식 I 화합물 또는 중간체 A-3을 제공한다. 보론 에스터(또는 보론산)(1.5 당량) A-1 또는 A-2, 및 팔라듐 촉매 예컨대 비스(트라이페닐포스핀)팔라듐(II) 클로라이드(0.05 당량)를 아세토나이트릴 및 1 M의 나트륨 카보네이트 수성 용액(아세토나이트릴과 동일한 부피) 중의 할로 중간체 B-2 또는 B-4의 혼합물(1 당량)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 약 150 oC로 마이크로파 내에서 약 15분 동안 가열하였다. LC/MS가 반응이 완료되었음을 나타내었다. 물을 혼합물에 첨가하고, 침전 생성물을 여과하고, HPLC로 정제하여 생성물 A-3을 수득하였다. 치환기는 정의된 바와 같거나, 또는 이의 보호된 형태 또는 전구체이다.
다양한 팔라듐 촉매가 스즈키 커플링 단계 중에 사용될 수 있다. 저가의 다양한 Pd(II) 및 Pd(0) 촉매(PdCl2(PPh3)2, Pd(t-Bu)3, PdCl2 dppf CH2Cl2, Pd(PPh3)4, Pd(OAc)/PPh3, Cl2Pd[(Pet3)]2, Pd(DIPHOS)2, Cl2Pd(Bipy), [PdCl(Ph2PCH2PPh2)]2, Cl2Pd[P(o-tol)3]2, Pd2(dba)3/P(o-tol)3, Pd2(dba)/P(푸릴)3, Cl2Pd[P(푸릴)3]2, Cl2Pd(PMePh2)2, Cl2Pd[P(4-F-Ph)3]2, Cl2Pd[P(C6F6)3]2, Cl2Pd[P(2-COOH-Ph)(Ph)2]2, Cl2Pd[P(4-COOH-Ph)(Ph)2]2, 및 캡슐화된 촉매 Pd EnCatT 30, Pd EnCatT TPP30, 및 Pd(II)EnCatTM BINAP30(US 2004/0254066)를 포함)가 스즈키 커플링 반응에 사용될 수 있다.
일반적인 절차: 부흐발트 반응
Figure pct00020
상기 부흐발트 반응은 6-브로모 중간체 B-1을 아민화하는데 유용하다(문헌[Wolf and Buchwald(2004) Org. Synth Coll. Vol. 10:423; Paul et al(1994) Jour. Amer. Chem. Soc. 116:5969-5970]). DMF 중의 할로 중간체 B-1의 용액에 적절한 피페라진일-피리딘일 또는 피페라진일-피리미딘일 아민(200 mol %), Cs2CO3(50 mol%), Pd2(dba)3(5 mol%), 및 4,5-비스(다이페닐포스피노)-9,9-다이메틸잔텐(잔트포스(XantPhos), CAS Reg. 번호 161265-03-8, 10 mol%)을 첨가하였다. 반응을 약 110 ℃로 감압 하에서 마이크로파 반응기(스웨덴 웁살라 소재의 바이오타지 아베) 내에서 약 30분 동안 가열하였다. 생성 혼합물을 진공 농축시켜서 B-2를 수득하였다. 다른 팔라듐 촉매 및 포스핀 리간드가 유용할 수 있다.
Figure pct00021
N-헤테로아릴 아미드 중간체 B-4는 또한 부흐발트 조건 하에서 사이클릭 아미드 중간체(R7), 예컨대 6-3급-부틸-8-플루오로프탈라진-1(2H)-온 101h 및 헤테로아릴 다이 브롬화물 B-3을 이용하여 제조될 수 있다.
분리 방법
화학식 I 및 II의 화합물을 제조하는 방법에서, 반응 산물을 서로 및/또는 출발 물질과 분리하는 것이 유익할 수 있다. 각 단계 또는 일련의 단계들의 원하는 산물은 당업계에 일상적인 기술을 통해 바람직한 균질도로 분리 및/또는 정제된다. 전형적으로, 이러한 분리는 다중상 추출, 용매 또는 용매 혼합물로부터 결정화, 증류, 승화 또는 크로마토그래피를 수반한다. 크로마토그래피는, 예컨대 역상 및 정상상; 크기 배제; 이온 교환; 고압, 중간압 및 저압의 액체 크로마토그래피 방법 및 장치; 소규모 분석; 모의 이동상(SMB) 및 제조용 박층 또는 후막층 크로마토그래피뿐만 아니라 소규모 박층 및 플래쉬 크로마토그래피 기술을 비롯한 임의의 여러 방법을 포함할 수 있다.
다른 부류의 분리 방법은 원하는 산물, 미반응 출발 물질, 반응 부산물 등에 결합하거나 이들을 분리할 수 있도록 선택한 시약으로 혼합물을 처리하는 것을 포함한다. 이러한 시약으로는 활성탄, 분자체, 이온교환 매질 등과 같은 흡착제 또는 흡수제를 포함한다. 다르게는, 염기성 물질인 경우, 시약은 산, 산성 물질인 경우, 염기, 항체와 같은 결합 시약, 결합 단백질, 크라운 에터와 같은 선택적 킬레이트제, 액체/액체 이온 추출 시약(LIX) 등일 수 있다. 적당한 분리 방법의 선택은 관계된 물질의 성질, 예컨대 증류 및 승화 중의 비등점 및 분자량, 크로마토그래피 중의 극성 작용기의 존재 또는 부재, 다중상 추출에서 산성 및 염기성 매질 중의 물질의 안정성 등에 따라 달라진다.
부분 입체 이성질체 혼합물은 크로마토그래피 및/또는 분별 결정과 같은 당업자에게 공지된 방법으로 물리 화학적 차이를 기초로 하여 각 부분 입체 이성질체로 분리할 수 있다. 거울상 이성질체는 거울상 이성질체 혼합물을 적당한 광학 활성 화합물(예컨대, 키랄 알콜 또는 모셔(Mosher)의 산 클로라이드와 같은 키랄 보조제)와 반응시켜 부분 입체 이성질체 혼합물로 변환시키고, 부분 입체 이성질체를 분리한 뒤, 각 부분 입체 이성질체를 상응하는 순수 거울상 이성질체로 변환(예컨대, 가수분해)시켜 분리할 수 있다. 또한, 본 발명의 일부 화합물은 아트로프이성질체(예컨대, 치환된 바이아릴)일 수 있고 본 발명의 일부로 간주된다. 또한, 거울상 이성질체는 키랄 HPLC 컬럼을 이용하여 분리할 수 있다.
단독 입체 이성질체(예컨대, 실질적으로 입체 이성질체가 없는 거울상 이성질체)는 라세미 혼합물을 광학 활성 분할제를 이용한 부분 입체 이성질체의 형성과 같은 방법으로 분할하여 수득할 수 있다(문헌[Eliel, E. and Wilen, S. "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994]; [Lochmuller, C. H., (1975) J. Chromatogr., 113(3):283-302]). 본 발명의 키랄 화합물의 라세미 혼합물은 임의의 적당한 방법으로 분리 및 단리시킬 수 있는데, 그 예로는 (1) 키랄 화합물을 이용한 이온성 부분 입체 이성질체 염의 형성 및 분별결정 또는 다른 방법에 의한 분리, (2) 키랄 유도체화 시약을 이용한 부분 입체 이성질체 화합물의 형성, 부분 입체 이성질체의 분리 및 순수 입체 이성질체로의 변환, 및 (3) 키랄 조건 하에 직접 실질적으로 순수하거나 농축된 입체 이성질체의 분리가 있다(문헌["Drug Stereochemistry, Analytical Methods and Pharmacology", Irving W. Wainer, Ed., Marcel Dekker, Inc., New York (1993)]).
방법 (1) 하에, 부분 입체 이성질체 염은 거울상 이성질적으로 순수한 키랄 염기, 예컨대 브루신, 퀴닌, 에페드린, 스트리크닌, α-메틸-β-페닐에틸아민(암페타민) 등을 카복시산 및 설폰산과 같은 산성 작용기를 보유한 비대칭 화합물과 반응시켜 제조할 수 있다. 부분 입체 이성질체 염은 분별결정 또는 이온 크로마토그래피에 의해 분리 유도될 수 있다. 아미노 화합물의 광학 이성질체 분리의 경우, 키랄 카복시산 또는 설폰산, 예컨대 캠퍼설폰산, 타르타르산, 만델산 또는 젖산의 첨가는 부분 입체 이성질체 염을 형성시킬 수 있다.
다르게는, 방법 (2)에서는 분할할 기질을 키랄 화합물의 하나의 거울상 이성질체와 반응시켜 부분 입체 이성질체 쌍을 형성한다(문헌[E. and Wilen, S. "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., 1994, p. 322]). 부분 입체 이성질체 화합물은, 비대칭 화합물을 거울상 이성질적으로 순수한 키랄 유도체화 시약, 예컨대 멘틸 유도체와 반응시킨 뒤, 이 부분 입체 이성질체를 분리하고 가수분해하여 순수한 또는 농축된 거울상 이성질체를 수득함으로써 형성할 수 있다. 광학 순도를 측정하는 방법은 염기의 존재하에 키랄 에스터, 예컨대 멘틸 에스터, 예컨대 (-) 멘틸 클로로포름에이트를 제조하거나, 또는 라세미 혼합물의 모셔 에스터, 즉 α-메톡시-α-(트라이플루오로메틸)페닐 아세테이트를 제조하고(문헌[Jacob III. J. Org. Chem. (1982) 47:4165]), 두 아트로프 이성질체성 거울상 이성질체 또는 부분 입체 이성질체의 존재에 대해 1H NMR 스펙트럼을 분석하는 것을 포함한다. 아트로프 이성질체 화합물의 안정한 부분 입체 이성질체는 아트로프 이성질체성 나프틸-이소퀴놀린을 분리하는 방법에 따라 정상 및 역상 크로마토그래피로 분리 및 단리할 수 있다(WO 96/15111). 방법 (3)에 의하면, 두 거울상 이성질체의 라세미 혼합물은 키랄 정지상을 이용한 크로마토그래피로 분리할 수 있다(문헌["Chiral Liquid Chromatography" (1989) W. J. Lough, Ed., Chapman and Hall, New York; Okamoto, J. Chromatogr., (1990) 513:375-378]). 농축 또는 정제된 거울상 이성질체는 다른 키랄 분자를 비대칭 탄소 원자와 구별하는데 사용되는 방법, 예컨대 광학 회전 및 원편광 이색성 등으로 구별할 수 있다.
실시예
실시예 101a 4-3급-부틸벤조일 클로라이드 101a
이염화 황(1.5 L) 중의 4-3급-부틸벤조산(1000 g, 5.6 mol)의 혼합물을 3시간 동안 환류시켰다. 혼합물을 이후 진공 농축시키고, 조질(crude) 101a를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다.
실시예 101b 4-3급-부틸-N-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤즈아미드 101b
DCM(200 mL) 중의 101a의 용액을 CH2Cl2(2000 mL) 중의 2-아미노-2-메틸-1-프로판올(1000 g, 10.5 mol)의 용액에 0 내지 10℃에서 적가하였다. 초기 첨가한지 5 분 후에 백색 침전물이 형성되었다. 생성 슬러리를 실온에서 밤새 교반시켰다. 고체를 여과하여 제거하고, CH2Cl2(1000 mL)로 세척하였다. 여액을 회전 증발하여 농축시켜 101b를 밝은 황색 수지로 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다.
실시예 101c 2-(4-3급-부틸-페닐)-4,4-다이메틸-4,5-다이하이드로-옥사졸 101c
티오닐 클로라이드(1.5 L) 중의 101b(1000 g, 조물질)의 혼합물을 1시간 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 500 mL의 교반된 Et2O에 붓고, 이 시간 동안 백색 침전물이 형성되었다. 침전물을 여과하여 수집하고, Et2O로 세척하고, 500 mL의 물 중에 용해시키고, 25 %의 NaOH로 중화시켰다. 황색 수성 용액을 EtOAC(3 × 500 mL)로 추출하고, 합친 유기 상을 500 mL의 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 진공 농축시켜 101c(530 g, 3 단계에 걸쳐 40.8%)를 백색 고체로서 수득하였다. 1HNMR(300 MHz, CDCl3) δ 7.87(d, J = 8.4 Hz, 2 H), 7.41(d, J = 8.4 Hz, 2 H), 4.08(s, 2 H), 1.37(s, 6 H), 1.33(s, 9 H).
실시예 101d 5-3급-부틸-2-(4,4-다이메틸-4,5-다이하이드로-옥사졸-2-일)-벤즈알데하이드 101d
무수 THF(750 mL) 중의 101c(50 g, 0.22 mol)의 용액에 2.4 M의 헥산(225 mL) 중의 n-부틸리튬 용액을 -78℃에서 질소 분위기 하에서 첨가하였다. 투명한 호박색 용액을 -20℃로 가온시키고, 4 시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물이 적-호박색이면서 탁하게 변하였다. 혼합물을 -78℃로 재냉각시키고, 재빨리 교반시킨 후, 온도가 -60℃ 미만으로 조절되는 속도로 72 mL의 DMF를 적가하였다. 첨가 후에, 반응 혼합물을 -78℃에서 15분 동안 교반시킨 후, -20℃에서 1시간 동안 교반시키고, 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 200 mL의 0.5 M 수성 KHSO4로 켄칭하였다. pH가 4~5로 조정될 때까지 KHSO4 용액을 좀 더 첨가하였다. 수성 상을 EtOAc(3 × 500 mL)로 추출하고, 합친 유기 상을 400 mL의 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 진공 농축시켜 101d(35 g, 62%)를 황색 고체로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. LCMS, ESI, m/z 260(M+1)+.
실시예 101e 2-(4-3급-부틸-2-1,3-다이옥시난-2-일-페닐)-4,4-다이메틸-4,5-다이하이드로옥사졸 101e
톨루엔(500 mL) 중의 101d(60 g,0.23 mol), 피리디늄 p-톨루엔설포네이트(4 g,0.02 mol) 및 1,3-프로판다이올(60 mL)의 혼합물을 밤새 가열 환류시키고, LCMS로 반응의 완료가 결정될 때까지 실온으로 냉각시켰다. 반응 혼합물을 200 mL의 50% 수성 NaHCO3, 200 mL의 물, 및 200 mL의 염수로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 진공 농축시켜 잔사를 수득하고, 이를 EtOAc/석유 에터 = 1:5를 용리제로 사용하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 101e(16 g, 21.7%)를 투명한 황색 검으로서 수득하였다. LCMS(ESI) 318(M+H)+. 1HNMR(300 MHz, CDCl3) δ 7.79(s, 1 H), 7.67(d, J = 8.0 Hz, 1 H), 7.36(dd, J = 1.6, 8.4 Hz, 1 H), 6.32(s, 1 H), 4.23(dd, J = 5.2, 11.2 Hz, 2 H), 4.06(s, 2 H), 4.04-3.98(m, 2 H), 2.27-2.21(m, 1 H), 1.48-1.38(m, 1 H), 1.38(s, 6 H), 1.32(s, 9 H).
실시예 101f 2-(4-3급-부틸-2-1,3-다이옥시난-2-일-6-플루오로-페닐)-4,4-다이메틸-4,5-다이하이드로-옥사졸 101f
무수 THF(400 mL) 중의 101e(20 g, 63 mmol)의 용액에 2.4 M의 헥산(65 mL) 중의 n-부틸리튬 용액을 -78℃에서 N2 분위기 하에서 첨가하였다. 진한 적-오렌지 색이 나타날 때까지 투명한 황 용액을 -17℃에서 3시간 동안 교반시켰다. 반응 용액을 -78℃로 재냉각하고, 재빨리 교반시키고, 무수 THF(100 mL) 중의 N-플루오로벤젠설폰이미드(29 g, 92 mmol)의 용액을 10 분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 5분 동안, -20℃에서 30분 동안, 이후 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 150 mL의 50% 수성 NH4Cl로 붓고, 300 mL의 EtOAc로 추출하였다. 분리된 유기 상을 150 mL의 물 및 150 mL의 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 농축시켜서 잔사를 수득하고, 이를 EtOAc/CH2Cl2 =1:5를 용리제로 사용하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 101f(7 g, 33%)를 황색 고체로서 수득하였다. LCMS(ESI) m/z 336(M+H)+. 1HNMR(300 MHz, CDCl3) δ 7.53(d, J = 1.6 Hz, 1 H), 7.08(dd, J = 2.0, 12.0 Hz, 1 H), 5.90(s, 1 H), 4.24(dd, J = 5.2, 10.8 Hz, 2 H), 4.06(s, 2 H), 3.98-3.91(m, 2 H), 2.26-2.19(m, 1 H), 1.45-1.42(m, 1 H), 1.42(s, 6 H), 1.30(s, 9 H).
실시예 101g 5-3급-부틸-7-플루오로-3-메톡시아이소벤조푸란-1(3H)-온 101g
101f(68.8 g, 205.4 mmol), 메탄올(1340 mL) 및 50% 수성 황산(881 mL)의 혼합물을 밤새 환류 교반시켰다. 반응 혼합물을 400 mL의 물에 붓고, DCM(3 × 1000 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 추출물을 400 mL의 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과시키고, 농축 건조시켜 101g(43 g)를 황-백색 고체로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다 LCMS(ESI) m/z 225(M+H)+.
실시예 101h 6-3급-부틸-8-플루오로프탈라진-1(2H)-온 101h
Figure pct00022
빙초산(360 mL) 중 101g(40 g, 168 mmol)의 용액에 하이드라진 1수화물(240 mL)을 0 내지 10℃에서 N2 보호 하에서 첨가하였다. 생성 슬러리를 질소 하에서 50℃에서 1.5 시간 동안 교반시켰다. 교반을 지속하며 반응 혼합물을 300 mL의 물에 부었다. 수성 상을 DCM(2 × 500 mL)으로 추출하고, 합친 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 잔사를 수득하고, 이를 DMC 및 Et2O 중에 재결정함으로써 정제하여 101h(17 g, 2 단계에 걸쳐 37.6%)를 황-백색 고체로서 수득하였다. 1HNMR(300 MHz, CDCl3) δ 8.11(d, J = 2.7 Hz, 1 H), 7.46(m, 2 H), 1.39(s, 9 H). LCMS(ESI) m/z 221(M+H)+.
실시예 101i 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-6-클로로벤즈알데하이드 101i
Figure pct00023
10 mL 환저 플라스크에 6-3급-부틸-8-플루오로-2H-프탈라진-1-온 101h(640 mg, 2.9 mmol), 2-클로로-6-플루오로벤즈알데하이드(506 mg, 3.2 mmol), 및 세슘 카보네이트(488 mg, 1.5 mmol)를 첨가하였다. 플라스크를 진공배기하고, 질소로 3회 역충전시킨 후, 에톡시트라이메틸실란(684 mg, 5.8 mmol) 및 DMF(5 mL)를 반응 플라스크에 첨가하였다. 생성 혼합물을 60℃로 가열하였다. 4 시간의 교반 후에, 용액을 상온으로 냉각시키고, 2 mL의 H2O를 적가하여 반응물을 켄칭하였다. 목적 생성물이 DMF 및 물 혼합물로부터 침전되기 시작하였다. 5℃로 냉각시킨 후, 고체를 여과하여 수집하고, DMF/물(2/1, 2 mL, 6℃로 예비 냉각) 및 H2O(2 mL)로 세척하였다. 필터 케이크를 진공 오븐 내에서 65℃에서 밤새 건조시켜서 519 mg(52%)의 101i를 황색 고체로서 수득하였다. MS: [M+H]+: 359
실시예 101j 6-3급-부틸-2-(3-클로로-2-(하이드록시메틸)페닐)-8-플루오로프탈라진-1(2H)-온 101j
Figure pct00024
2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소-1H-프탈라진-2-일)-6-클로로-벤즈알데하이드 101i(519 mg, 1.4 mmol)를 실온에서 교반시키며 DCM(2 mL)에 용해시킨 후, 1 mL의 iPA를 용액에 첨가하였다. 생성 혼합물을 4℃로 냉각시키고, NaBH4(27 mg, 0.7 mmol)를 일부 첨가하였다. 30분 동안 교반시킨 후, 반응물을 H2O(2 mL)를 첨가함으로써 켄칭하였다. 수성 층을 CH2Cl2(2×5 mL)로 추출하고, 염수로 세척하고 MgSO4 상에서 건조시켰다. 여액을 농축시켜서 잔사를 수득하고, 이를 0-20% EtOAc/CH2Cl2로 용리되는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 101j를 백색 고체(385 mg, 72%)로서 수득하였다. MS: [M+H]+: 361
실시예 101 6-3급-부틸-8-플루오로-2-(2-(하이드록시메틸)-3-(1-메틸-5-(5-(4-메틸피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)페닐)프탈라진-1(2H)-온 101
10 mL 플라스크에 6-3급-부틸-2-(3-클로로-2-하이드록시메틸-페닐)-8-플루오로-2H-프탈라진-1-온 101j(100 mg, 0.27 mmol), 1-메틸-3-[5-(4-메틸-피페라진-1-일)-피리딘-2-일아미노]-5-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]다이옥사보롤란-2-일)-1H-피리딘-2-온(141 mg, 0.33 mmol), PCy3(6 mg), Pd(dba)2(6 mg) 및 K2CO3(112 mg, 0.8 mmol)를 순서대로 첨가하였다. 플라스크를 진공배기하고, 질소로 역충전시켰다. 이 과정을 3회 반복하였다. 이후, 20%의 수성 1,4-다이옥산을 반응 혼합물에 첨가하였다. 생성 혼합물을 조심스럽게 환류하며 90℃로 가열하고, 1.5 시간 동안 질소 분위기 하에서 교반시켰다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 규조토 여과제 패드(셀라이트®)를 통해 여과시키고, 농축시켜 잔사를 수득하고, 이를 분취용-TLC(CH2Cl2 중의 10% MeOH)로 정제하여 101(80 mg, 46%)을 황색 고체로서 수득하였다. MS: [M+H]+624. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 8.53(d, J = 2.0 Hz, 1 H), 8.50(d, J = 1.6 Hz, 1 H), 8.36(s, 1 H), 7.87(d, J = 3.2 Hz, 2 H), 7.73(d, J = 12.8 Hz, 1 H), 7.51(t, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.41(d, J = 3.2 Hz, 1 H), 7.39(d, J = 3.6 Hz, 1 H), 7.35(dd, J = 2.8, 9.2 Hz, 1 H), 7.28(d, J = 2. Hz, 1 H), 7.20(d, J = 9.2 Hz, 1 H), 4.58(t, J = 4.8 Hz, 1 H), 4.36(s, 2 H), 3.58(s, 3 H), 3.04(m, 4 H), 2.44(m, 4H), 2.21(s, 3 H), 1.38(s, 9 H).
실시예 102a 2,6-다이브로모-4-플루오로벤즈알데하이드 102a
Figure pct00025
-35℃로 냉각된, 무수 톨루엔(300 mL) 중의 1,3-다이브로모-5-플루오로-2-요요도벤젠(50 g, 132 mmol)의 용액에 내부 온도를 -25℃ 미만으로 유지시키면서 아이소프로필마그네슘 클로라이드(84 mL, 171 mmol, 다이에틸에터 중의 2.0 M)의 용액을 30 분에 걸쳐 첨가하였다. 투명한 갈색 용액이 수득되었다. 1.5 시간 동안 교반이 지속되었다. 무수 DMF(34 mL, 436 mmol)를 30 분에 걸쳐 첨가하였다. 반응 혼합물의 온도가 -19℃로 증가하였다. 반응 혼합물을 10℃(실온)로 1시간 동안 가온시키고, 이 온도에서 1.5 시간 동안 교반시켰다. 반응물을 포화 수성 NH4Cl(100 mL)로 켄칭하고, 여과시키고, 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에터/에틸 아세테이트로 용리: 50:1 내지 20:1)로 정제하여 102a(20 g, 수율 54%)를 황색 고체로서 수득하였다.
실시예 102b 2-브로모-6-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-플루오로벤즈알데하이드 102b
다이옥산(50 mL) 중의 102a(767 mg, 2.72 mmol), 6-3급-부틸-8-플루오로프탈라진-1(2H)-온 101h(300 mg, 1.36 mmol)의 용액에 KOAc(267 mg, 2.72 mmol), CuI(259 mg, 1.36 mmol), 및 4,7-다이메톡시-1,10-펜안트롤린(327 mg, 1.36 mmol)을 첨가하였다. 30분 동안 생성 혼합물에 질소를 버블링시킨 후, 혼합물을 90℃에서 10시간 동안 교반시켰다. 이를 실온으로 냉각시키고, H2O(100 mL)를 첨가하였다. 수성 층을 분리시키고, 에틸 아세테이트(2 × 200 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(100 mL)로 세척하고, 황산 나트륨 상에서 건조시켰다. 건조제를 여과하여 제거하고, 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 PE/EA(15:1)로 용리되는 플래시 컬럼 상에서 정제하여 102b(172 mg, 30%)를 수득하였다. LCMS: [M+H]+ 421. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 10.20(s, 1 H), 8.20(s, 1 H), 7.49-7.51(m, 3 H), 7.25(m, 1 H), 1.36(s, 9 H).
실시예 102c 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-플루오로-6-(1-메틸-5-(5-(4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)벤즈알데하이드 102c
환저 플라스크를 2-브로모-6-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-플루오로벤즈알데하이드 102b(100 mg, 0.24 mmol), 1-메틸-3-(5-(4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)피리딘-2(1H)-온(131 mg, 0.28 mmol), PdCl2(dppf)(25 mg, 0.03 mmol), K3PO4.3H2O(149 mg, 0.56 mmol), THF(10 mL), 및 H2O(5 mL)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복시킨 후, 혼합물을 70℃에서 6시간 동안 가열하였다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 진공 증발시켰다. 잔사를 1:3 석유/에틸 아세테이트로 용리되는 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 102c를 황색 고체(98 mg, 60%)로서 수득하였다. LCMS: [M+H]+ 682
실시예 102 6-3급-부틸-8-플루오로-2-(3-(하이드록시메틸)-4-(1-메틸-5-(5-(4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-2-일)프탈라진-1(2H)-온 102
2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-플루오로-6-(1-메틸-5-(5-(4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로-피리딘-3-일)벤즈알데하이드 102c(98 mg, 0.14 mmol), NaBH4(17 mg, 0.43), 및 CH3OH(10 mL)의 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 이를 감압하에서 농축시키고, 물(10 mL)을 첨가하였다. 생성 혼합물을 CH2Cl2(10 mL × 2)로 추출하였다. 합친 CH2Cl2 추출물을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 102(45 mg, 46%)를 수득하였다. LCMS: [M+H]+ 684. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 8.52-8.56(m, 2 H), 8.40(s, 1 H), 7.88(d, J=6.0 Hz, 2 H), 7.74-7.77(m, 1 H), 7.34-7.40(m, 3 H), 7.29(d, J=3.0 Hz, 1 H), 7.22(d, J=9.5 Hz, 1 H), 4.54-4.56(m, 2 H), 4.44-4.47(m, 2 H), 4.32(s, 2 H), 3.58(s, 3 H), 3.43(s, 1 H), 3.06-3.08(m, 4 H), 2.36-2.39(m, 5 H), 1.38(s, 9 H).
실시예 103a 2-브로모-4-클로로니코틴알데하이드 103a
-70℃로 냉각된 무수 테트라하이드로푸란(40 mL) 중의 2-브로모-4-클로로피리딘(1.6 g, 8.0 mmol)의 용액에 리튬 다이아이소프로필-아미드의 용액(5.0 mL, 10.0 mmol, 2.0 M)을 5 분에 걸쳐 첨가하고, -70℃에서 또 다른 1 시간 동안 교반시켰다. 무수 DMF(1.3 g)를 3 분에 걸쳐 도입시키고, 혼합물을 또 다른 30분 동안 교반시켰다. 이를 포화 NH4Cl(30 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(20 mL × 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 무수 Mg2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 석유 에터/에틸 아세테이트(20:1)로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 103a을 황색 고체(900 mg, 48%)로서 수득하였다. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 10.21(s, 1H), 8.52(d, J = 5.5 Hz, 1H) , 7.79(d, J = 5.0 Hz, 1H).
실시예 103b 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-클로로니코틴알데하이드 103b
Figure pct00026
다이옥산(50 mL) 중의 2-브로모-4-클로로니코틴알데하이드 103a(446 mg, 2.05 mmol), 6-3급-부틸-8-플루오로프탈라진-1(2H)-온 101h(300 mg, 1.36 mmol)의 용액에 KAcO(267 mg, 2.72 mmol), CuI(259 mg, 1.36 mmol), 및 4,7-다이메톡시-1,10-펜안트롤린(327 mg, 1.36 mmol)을 첨가하였다. 30분 동안 생성 혼합물에 질소를 버블링시킨 후, 혼합물을 90℃에서 10시간 동안 교반시켰다. 이를 실온으로 냉각시키고, H2O(100 mL)를 첨가하였다. 수성 층을 분리시키고, 에틸 아세테이트(2 × 200 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(100 mL)로 세척하고, 황산 나트륨 상에서 건조시켰다. 건조제를 여과하여 제거하고, 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 10:1 PE/EA로 용리되는 플래시 컬럼 상에 정제하여 103b(120 mg, 25%)를 수득하였다. LCMS: [M+H]+ 360. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 10.36(s, 1H), 8.69(d, J=5.5, 1H), 8.28(d, J=2.0, 1H), 7.28-7.56(m, 3H), 1.49(s, 9H)
실시예 103c 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-5-(5-(4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)니코틴알데하이드 103c
103b(100 mg, 0.28 mmol), 1-메틸-3-(5-(4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)피리딘-2(1H)-온(131 mg, 0.28 mmol), PdCl2(dppf)(25 mg, 0.03 mmol), 및 K3PO4.3H2O(149 mg, 0.56 mmol)의 혼합물을 THF(10 mL)/H2O(5 mL) 중에 현탁시켰다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복시킨 후, 혼합물을 70℃에서 6시간 동안 가열하였다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 진공 증발시켰다. 잔사를 1:3 석유/에틸 아세테이트로 용리되는 플래시 컬럼 크로마토그래피 상에서 정제시켜 103c를 황색 고체(150 mg, 60%)로서 수득하였다. LCMS: [M+H]+ 665
실시예 103 6-3급-부틸-8-플루오로-2-(3-(하이드록시메틸)-4-(1-메틸-5-(5-(4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-2-일)-프탈라진-1(2H)-온 103
103c(120 mg, 0.18 mmol), NaBH4(21 mg, 0.54), 및 CH3OH(10 mL)의 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 이후 감압 하에서 농축시키고, 물(10 mL)을 첨가하였다. 생성 혼합물을 CH2Cl2(10 mL × 2)로 추출하였다. 합친 CH2Cl2 추출물을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 103(45 mg, 38%)을 수득하였다. LCMS: [M+H]+ 667. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 8.66-8.68(m, 2H), 8.35(s, 1H), 7.96(d, J=3.0, 1H), 7.81(s, 1H), 7.65(d, J=2.5, 1H), 7.55-7.59(m, 3H), 6.83(d, J=8.5, 1H), 4.71-4.74(m, 4H), 4.51-4.52(m, 2H), 4.07-4.08(m, 1H), 3.73(s, 3H), 3.56(s, 1H), 3.20-3.22(m, 4H), 2.56-2.58(m, 4H), 1.59(s, 9H)
실시예 104a (S)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-플루오로-6-(1-메틸-5-(5-(2-메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)벤즈알데하이드 104a
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 50-mL 단일-목 환저 플라스크를 2-브로모-6-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-플루오로벤즈알데하이드 102b(100 mg, 0.24 mmol), (S)-1-메틸-3-(5-(2-메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)피리딘-2(1H)-온 105f(115 mg, 0.24 mmol), PdCl2(dppf)(22 mg, 0.03 mmol), K3PO4(102 mg, 0.48 mmol), 나트륨 아세테이트(39 mg, 0.48 mmol), THF(15 mL), 및 물(5 mL)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 가열하였다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 40:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 104a를 황색 고체(82 mg, 49%)로서 수득하였다. MS: [M+H]+ 696.3
실시예 104 (S)-6-3급-부틸-8-플루오로-2-(5-플루오로-2-(하이드록시메틸)-3-(1-메틸-5-(5-(2-메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)페닐)프탈라진-1(2H)-온 104
(S)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-플루오로-6-(1-메틸-5-(5-(2-메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)벤즈알데하이드 104a(80 mg, 0.12 mmol), NaBH4(14 mg, 0.36), 및 메탄올(20 mL)의 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 이후 반응 혼합물을 물(10 mL)로 켄칭하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 다이클로로메탄(2 × 30 mL)으로 추출하고, 합친 다이클로로메탄 추출물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 104(46 mg, 55%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS: [M+H]+ 698.3. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) d 8.54(d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.52(d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.42(s, 1H), 7.88(s, 1H), 7.86(d, J = 3.0 Hz, 1H), 7.77-7.74(m, 1H), 7.40-7.34(m, 3H), 7.30(dd, J = 2.5, 9.5 Hz, 1H), 7.23(d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.57-4.54(m, 2H), 4.49-4.45(m, 1H), 4.43-4.40(m, 1H), 4.34-4.29(m, 2H), 3.70-3.65(m, 1H), 3.58(s, 3H), 3.40-3.38(m, 2H), 3.12-3.06(m, 1H), 2.97-2.91(m, 1H), 2.36-2.29(m, 3H), 2.19-2.15(m, 1H), 1.38(s, 9H), 0.93(d, J = 6.5 Hz, 3H).
실시예 105a (3S)-3급-부틸 3-메틸-4-(6-나이트로피리딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 105a
Figure pct00027
DMSO(350 mL) 중의 5-브로모-2-나이트로피리딘(30 g, 148 mmol)의 용액에 K2CO3(14 g, 104 mmol) 및 (3S)-3급-부틸-3-메틸피페라진-1-카복실레이트(10.0 g, 50 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 65℃에서 밤새 교반시킨 후, 실온으로 냉각시킨 후, 물(700 mL)로 부었다. 고체 침전물을 수집하고, 진공 건조시켰다. 이를 추가로 20:1 석유 에터/에틸 아세테이트 및 CH2Cl2로 용리되는 플래시 컬럼 상에서 정제하여 105a를 황색 고체(8.05 g, 50%)로서 수득하였다. LCMS: [M+H]+ 323
실시예 105b (3S)-3급-부틸 4-(6-아미노피리딘-3-일)-3-메틸피페라진-1-카복실레이트 105b
Figure pct00028
500-mL 용기를 질소로 퍼지시키고, 105a(5.8 g, 18 mmol), 탄소 상의 10% 팔라듐(50% 습윤, 2.0 g) 및 에탄올(200 mL)로 충전하였다. 이를 진공배기하고, 수소 가스로 충전하고, 16 시간 동안 실온에서 교반시켰다. 이후 수소를 진공 제거하고, 질소로 대체하였다. 촉매를 셀라이트®패드를 통해 여과하여 제거하고, 여액을 감압 하에서 농축시켜 105b를 갈색 고체(4.9 g, 96%)로서 수득하였다. LCMS: [M+H]+ 293
실시예 105c (3S)-3급-부틸-4-(6-(5-브로모-1-메틸-2-옥소-1,2-다이하이드로피리딘-3-일아미노) 피리딘-3-일)-3-메틸피페라진-1-카복실레이트 105c
Figure pct00029
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 1,4-다이옥산(50 mL), 105b(4.0 g, 13.7 mmol), 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온(5.5 g, 20.8 mmol), 및 세슘 카보네이트(11 g, 35 mmol)로 충전하였다. 30분 동안 생성 혼합물에 질소를 버블링시킨 후, 잔트포스(272 mg, 0.47 mmol) 및 트리스(다이벤질리덴아세톤)다이팔라듐(0)(430 mg, 0.47 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 3시간 동안 환류 가열하였다. 이후 반응물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트(300 mL) 및 물(300 mL)로 분배하고, 여과시켰다. 수성 층을 분리시키고, 에틸 아세테이트(150 mL × 2)로 추출하였다. 유기 층을 합치고, 염수(150 mL)로 세척하고, 황산 나트륨 상에서 건조시켰다. 건조제를 여과하여 제거하고, 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 50:1 CH2Cl2/메탄올로 용리되는 플래시 컬럼 상에서 정제하여 105c를 황색 고체(5.4 g, 83%)로서 수득하였다. LCMS: [M+H]+ 478
실시예 105d (3S)-5-브로모-1-메틸-3-(5-(2-메틸피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)피리딘-2(1H)-온 105d
Figure pct00030
105c(3.1 g, 6.5 mmol) 및 4.0 M HCl/다이옥산(10 mL)의 혼합물을 5시간 동안 실온에서 교반시켰다. 이를 진공 농축시켰다. 잔사를 수성 1.0M NaOH로 염기성화시키고, CH2Cl2로 2회 추출하였다. 합친 유기 층을 물로 세척하고, 감압 하에서 농축시켜 105d를 황색 고체(2.3 g, 95%)로서 수득하였다. LCMS: [M+H]+ 380.
실시예 105e (3S)-5-브로모-1-메틸-3-(5-(2-메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일) 피리딘-2-일아미노)피리딘-2(1H)-온 105e
Figure pct00031
메탄올(125 mL) 중의 105d(2.35 g, 6.2 mmol) 및 옥세탄-3-온(0.49 g, 6.8 mmol), NaBH3CN(4.75 g, 22.5 mmol), 및 아연 클로라이드(3 g, 22.7 mmol)의 혼합물을 5시간 동안 50℃에서 교반시켰다. 혼합물을 물에 첨가하고, CH2Cl2로 3회 추출하였다. 유기 층을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 25:1 CH2Cl2/메탄올로 용리되는 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 105e를 황색 고체(2.6 g, 98%)로서 수득하였다. LCMS: [M+H]+ 434.
실시예 105f (3S)-1-메틸-3-(5-(2-메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)피리딘-2(1H)-온 105f
Figure pct00032
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100 mL 단일-목 환저 플라스크를 105e(1.0 g, 1.0 당량, 2.3 mmol), Pin2B2(1.46 g, 2.50 당량, 5.75 mmol), Pd2(dba)3(105 mg, 0.05 당량, 0.125 mmol), X-Phos(93 mg, 0.1 당량, 0.23 mmol), KOAc(676 mg, 3.0 당량, 6.9 mmol), 및 다이옥산(50 mL)으로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 90℃에서 4시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 생성 잔사를 3:1 석유 에터/에틸 아세테이트(80 mL)로 세척하여 105f를 황색 고체(1.0 g, 90%)로서 수득하였다. MS: [M+H]+ 482.
실시예 105g (S)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-5-(5-(2-메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)니코틴알데하이드 105g
Figure pct00033
환저 플라스크를 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-클로로니코틴알데하이드 103b(100 mg, 0.28 mmol), 105f(135 mg, 0.28 mmol), PdCl2(dppf)(25 mg, 0.03 mmol), K3PO4.3H2O(149 mg, 0.56 mmol), THF(10 mL), 및 H2O(5 mL)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 70℃에서 6시간 동안 가열하였다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 진공 증발시켰다. 잔사를 1:3 석유/에틸 아세테이트로 용리되는 플래시 컬럼 크로마토그래피 상에서 정제하여 105g를 황색 고체(113 mg, 60%)로서 수득하였다. LCMS: [M+H]+ 679
실시예 105 (S)-6-3급-부틸-8-플루오로-2-(3-(하이드록시메틸)-4-(1-메틸-5-(3-메틸-5-(4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-2-일)프탈라진-1(2H)-온 105
105g(100 mg, 0.15 mmol), NaBH4(17 mg, 0.45), 및 CH3OH(10 mL)의 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 CH2Cl2(10 mL × 2)로 추출하였다. 합친 CH2Cl2 추출물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 105(65 mg, 65%)를 수득하였다. LCMS: [M+H]+ 681. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 8.62(d, J=2.0, 1H), 8.53-8.57(m, 1H), 8.42(s, 2H), 7.90(d, J=1.5, 1H), 7.85(d, J=2.0, 1H), 7.76-7.79(m, 1H), 7.52(d, J=5.0, 1H), 7.46(d, J=2.0, 1H), 7.36-7.38(m, 1H), 7.24-7.26(m, 1H), 4.54-4.57(m, 2H), 4.46-4.48(m, 1H), 4.40-4.41(m, 3H), 3.68-3.70(m, 1H), 3.57(s, 3H), 3.37-3.40(m, 1H), 3.09-3.11(m, 1H), 2.93-2.95(m, 1H), 2.52-2.54(m, 2H), 2.32-2.36(m, 2H), 2.18(s, 1H), 1.39(s, 9H), 0.93(d, J=6.0, 3H)
실시예 106a (R)-1-메틸-3-(5-(2-메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)피리딘-2(1H)-온 106a
Figure pct00034
다이옥산(50 mL) 중의 (R)-5-브로모-1-메틸-3-(5-(2-메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)피리딘-2(1H)-온(2.0 g, 4.60 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타-메틸-2,2'-바이(1,3,2-다이옥사보롤란)(3.50 g, 13.80 mmol)의 용액에 PdCl2(dppf)(377.10 mg, 0.46 mmol) 및 KOAc(2.70 g, 27.80 mmol)를 첨가하였다(도 6 참조). 혼합물을 100℃에서 12시간 동안 아르곤 하에서 가열하였다. 혼합물을 여과시키고, 여액을 진공 증발시켰다. 잔사를 CH2Cl2/메탄올(15:1)로 용리되는 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 106a(1.10 g, 49%)를 갈색 고체로서 수득하였다. MS: [M+H]+ 482.3
실시예 106b (R)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-5-(5-(2-메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)니코틴알데하이드 106b
Figure pct00035
아세토나이트릴(30 mL) 중의 106a(260.0 mg, 0.56 mmol), 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-클로로니코틴알데하이드 103b(200.0 mg, 0.56 mmol), PdCl2(dppf)(50.0 mg, 0.056 mmol), NaOAc(90.0 mg, 1.1 mmol), K3PO4(300 mg, 1.1 mmol)의 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 가열하였다. 용매를 진공 제거하였다. 잔사를 CH2Cl2/메탄올(10:1)로 용리되는 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 106b(120 mg, 34%)를 갈색 고체로서 수득하였다. LCMS: [M+H]+ 679.3
실시예 106 (R)-6-3급-부틸-8-플루오로-2-(3-(하이드록시메틸)-4-(1-메틸-5-(5-(2-메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-2-일)프탈라진-1(2H)-온 106
MeOH(10 mL) 중의 106b(90.0 mg, 0.13 mmol)의 용액에 NaBH4(15.0 mg, 0.39 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 이를 진공배기하고, 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 106(7.3 mg, 8%)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS:(M+H)+ 681.4. 1H NMR(500 MHz, DMSO) δ 8.63(d, J=2.5, 1H), 8.57(d, J=5.0, 1H), 8.54(d, J=2.0, 1H), 8.47(s, 1H), 7.91(s, 1H), 7.86(d, J=3.0, 1H), 7.78(d, J=12.5, 1H), 7.53(d, J=5.0, 1H), 7.47(d, J=2.0, 1H), 7.36-7.39(m, 1H), 7.25(d, J=9.5, 1H), 4.90(s, 1H), 4.54-4.58(m, 2H), 4.47(t, J=6.0, 1H), 4.39-4.43(m, 3H), 3.69(s, 1H), 3.61(s, 3H), 3.37-3.42(m, 1H), 3.09-3.11(m, 1H), 2.95(t, J=9.0, 1H), 2.54-2.56(m, 1H), 2.30-2.37(m, 2H), 2.19(t, J=8.0, 1H), 1.39(s, 9H), 0.94-0.93(d, J=6.5, 3H)
실시예 107a (R)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-플루오로-6-(1-메틸-5-(5-(2-메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로-피리딘-3-일)벤즈알데하이드 107a
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 50-mL 단일-목 환저 플라스크를 (R)-1-메틸-3-(5-(2-메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)피리딘-2(1H)-온(173 mg, 1.0 당량, 0.36 mmol), 2-브로모-6-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-플루오로벤즈알데하이드 101i(152 mg, 1.0 당량, 0.36 mmol), K3PO4(152 mg, 2.0 당량, 0.72 mmol), PdCl2(dppf)(26 mg, 0.1 당량, 0.036 mmol), NaOAc(59 mg, 2.0 당량, 0.72 mmol), CH3CN(20 mL), 및 H2O(0.8 mL)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 생성 잔사를 40:1 DCM/EtOH로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 107a를 황색 고체(77 mg, 31%)로서 수득하였다. MS: [M+H]+ 696.3.
실시예 107 (R)-6-3급-부틸-8-플루오로-2-(5-플루오로-2-(하이드록시메틸)-3-(1-메틸-5-(5-(2-메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)페닐)프탈라진-1(2H)-온 107
마그네틱 교반기가 장착된 50-mL 단일-목 환저 플라스크를 107a(77 mg, 1.0 당량, 0.11 mmol), NaBH4(21 mg, 5.0 당량, 0.55 mmol), 및 MeOH(10 mL)로 충전하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시키고, 이후 이를 여과시키고, 여액을 농축시켰다. 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 107(38 mg, 49%)을 수득하였다. MS: [M+H]+ 698.3. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 8.59(d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.29(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.98(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.81(s, 1H), 7.56-7.54(m, 2H), 7.40(s, 1H), 7.31-7.27(m, 2H), 7.11-7.10(m, 1H), 6.81(d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.71-4.62(m, 4H), 4.35(s, 2H), 3.73-3.70(m, 4H), 3.53-3.46(m, 2H), 3.08(t, J = 5.0 Hz, 2H), 2.56-2.46(m, 3H), 2.22-2.18(m, 1H), 1.43(s, 9H), 0.98(d, J = 6.5 Hz, 3H).
실시예 108a 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-6-(5-(5-((2S,5R)-2,5- 다이메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)-4-플루오로벤즈알데하이드 108a
Figure pct00036
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 25-mL 단일-목 환저 플라스크를 2-브로모-6-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4- 플루오로벤즈알데하이드 102b(84 mg, 0.20 mmol), 3-(5-((2S,5R)-2,5-다이메틸-4-(옥세탄-3-일) 피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-1-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)피리딘-2(1H)-온(99 mg, 0.20 mmol), Pd(dppf)Cl2(15 mg, 0.02 mmol), K3PO4(127 mg, 0.6 mmol), 나트륨 아세테이트(49 mg, 0.6 mmol), 아세토나이트릴(5 mL), 및 물(0.5 mL)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 2시간 동안 환류가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 생성 잔사를 30:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 108a를 백색 고체(54 mg, 38%)로서 수득하였다. MS: [M+H]+ 710.3
실시예 108 6-3급-부틸-2-(3-(5-(5-((2S,5R)-2,5-다이메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)-5-플루오로-2-(하이드록시메틸)페닐)-8-플루오로프탈라진-1(2H)-온 108
0℃에서, 메탄올(5 mL) 중의 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-6-(5-(5-((2S,5R)-2,5-다이메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)-4-플루오로벤즈알데하이드 108a(54 mg, 0.076 mmol)의 용액에 나트륨 보로하이드라이드(9.0 mg, 0.23 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 60분 동안 교반시켰다. 이후 이를 물(1.0 mL)로 켄칭하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 108(12 mg, 22 %)을 수득하였다. MS: [M+H]+ 712.3. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 8.63(d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.31(d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.05(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.87(s, 1H), 7.58-7.55(m, 2H), 7.44(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.36(s, 1H), 7.30(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.12(dd, J=2.5, 8.5 Hz, 1H), 6.82(d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.76-4.73(m, 2H), 4.68-4.61(m, 2H), 4.38-4.36(m, 2H), 3.74-3.72(m, 2H), 3.72(s, 3H), 3.22-3.20(m, 1H), 2.94-2.92(m, 1H), 2.74-2.72(m, 2H), 2.50-2.48(m, 1H), 1.98-1.96(m, 1H), 1.45(s, 9H), 0.93-0.91(m, 6H).
실시예 109a 3-브로모-5-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소-1,2-다이하이드로프탈라진-2-일)피리딘 -4-카브알데하이드 109a
Figure pct00037
마그네틱 교반기가 장착된 밀폐된 튜브를 6-3급-부틸-8-플루오로-1,2-다이하이드로프탈라진-1-온 101h(220 mg, 1.0 mmol), 3,5-다이브로모피리딘 -4-카브알데하이드(530 mg, 2.0 mmol), CuI(190 mg, 1.0 mmol), 4,7-다이메톡시-1,10-펜안트롤린(244 mg, 1.0 mmol), Cs2CO3(652 mg, 2.0 mmol) 및 다이옥산(8 mL)으로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 110℃에서 5시간 동안 가열하였다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 진공 증발시켰다. 잔사를 에틸 아세테이트/석유 에터(1:3, V/V)로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 109a(118 mg, 29.3%)를 고체로서 수득하였다. LCMS: [M+H]+ 406
실시예 109b 3-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소-1,2-다이하이드로프탈라진-2-일)-5-[1-메틸-5-({5-[(2S)-2-메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일]피리딘-2-일}아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로-피리딘-3-일]피리딘-4-카브알데하이드 109b
Figure pct00038
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 25 mL 단일-목 환저 플라스크를 109a(118 mg, 0.29 mmol), 1-메틸-3-({5-[(2S)-2-메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일]피리딘-2-일}아미노)-5-(테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)-1,2-다이하이드로피리딘-2-온 105f(140 mg, 0.29 mmol), Pd(dppf)Cl2(24.8 mg, 0.03 mmol), KOAc(58.9 mg, 0.60 mmol), K3PO4ㆍH2O(159.8 mg, 0.60 mmol), 아세토나이트릴(6 mL) 및 물(3 d)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 110℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 이후 실온으로 냉각시키고, 여과시키고, 여액을 진공 증발시켰다. 잔사를 다이클로로메탄/메탄올(20:1, V/V)로 용리되는 분취용-TLC로 정제하여 109b(95 mg, 36%)를 적색 고체로서 수득하였다. MS: [M+H]+ 679
실시예 109 (S)-6-3급-부틸-8-플루오로-2-(4-(하이드록시메틸)-5-(1-메틸-5-(5-(2-메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-3-일)프탈라진-1(2H)-온 109
메탄올(5 mL) 중의 109b(95 mg, 0.106 mmol)의 현탁액에 0℃에서 나트륨 보로하이드라이드(24 mg, 0.636 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 30분 동안 교반시켰다. 이후 반응 혼합물을 물(1.0 mL)로 켄칭하고, 농축시켰다. 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 109(13.5 mg, 18.7 %)를 수득하였다. LCMS: [M+H]+ 681. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 8.76(s, 1H), 8.65(d, J=2.0, 1H), 8.61(s, 1H), 8.32(d, J= 2.5, 1H), 7.96(d, J=3.0, 1H), 7.82(s, 1H), 7.56-7.58(m, 2H), 7.40(d, J=2.0, 1H), 7.28-7.31(m, 1H), 6.81(d, J=9.0, 1H), 4.61-4.70(m, 4H), 4.43(s, 2H), 3.95(s, 1H), 3.72(s, 3H), 3.45-3.53(m, 2H), 3.07(t, J=5.25, 2H), 2.43-2.56(m, 3H), 2.18-2.22(m, 1H), 1.43(s, 9H), 0.99(d, J=6.5, 3H)
실시예 110a 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(5-(5-((2S,5R)-2,5-다이메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)니코틴알데하이드 110a
Figure pct00039
100-mL 단일-목 환저 플라스크를 CH3CN(80 mL) 중의 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-클로로니코틴알데하이드 103b(216 mg, 0.6mmol), 3-(5-((2S,5R)-2,5-다이메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-1-메틸-5-(4,4,5-트라이메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)피리딘-2(1H)-온(360 mg, 0.72 mmol), Pd(dppf)Cl2(30 mg, 0.03 mmol), K3PO4(270 mg, 1.2 mmol), 및 NaOAcㆍH2O(180 mg, 1.2 mmol)로 충전하였다. 시스템을 진공배기하고, N2로 재충전하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 생성 잔사를 25:1의 CH2Cl2/MeOH로 용리되는 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 110a(160 mg, 42%)를 황갈색 고체로서 수득하였다. MS: [M+H]+ 693.3.
실시예 110 6-3급-부틸-2-(4-(5-(5-((2S,5R)-2,5-다이메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)-3-(하이드록시메틸)피리딘-2-일)-8-플루오로프탈라진-1(2H)-온 110
MeOH(30 mL) 중의 110a(100 mg, 0.15 mmol) 및 NaBH4(20 mg, 0.45 mmol)의 혼합물을 30℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 물로 켄칭하고, EtOAc(10 mL × 3)로 추출하였다. 합친 EtOAc 추출물을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 110(80 mg, 80%)을 수득하였다. MS: [M+H]+ 695.3. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 8.72(d, J=2, 1H), 8.67(d, J=5, 1H), 8.35(d, J=2.5, 1H), 8.05(d, J=3, 1H), 7.88(s, 1H), 7.68(d, J=2.5, 1H),7.58-7.55(m, 3H), 7.38-7.36(m, 1H), 6.82(d, J=8.5, 1H), 4.78-4.71(m, 2H), 4.67-4.61(m, 2H), 4.50(s, 2H) , 4.07(t, J=6, 1H), 3.78-3.74(m, 4H), 3.22-3.20(m, 1H) , 2.92(d, J=3, 1H), 2.77-2.71(m, 2H), 2.51-2.48(m, 1H), 1.20-1.95(m, 1H), 1.45(s, 9H), 0.93-0.90(m, 6H)
실시예 111a (S)-3급-부틸 3-에틸-4-(6-나이트로피리딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 111a
Figure pct00040
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 250-mL 단일-목 환저 플라스크를 1,4-다이옥산(50 mL), 5-브로모-2-나이트로피리딘(2.02 g, 10 mmol), (S)-3급-부틸 3-에틸피페라진-1-카복실레이트(2.14 g, 10.0 mmol), Pd2(dba)3(458 mg, 0.50mmol), 잔트포스(576 mg, 1.0 mmol), 및 세슘 카보네이트(6.52 g, 20 mmol)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 밤새 가열하였다. 이후 반응물을 실온으로 냉각시켰다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 3:1 석유 에터/에틸 아세테이트로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 111a(700 mg, 22%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS: [M+H]+ 336
실시예 111b (S)-3급-부틸 4-(6-아미노피리딘-3-일)-3-에틸피페라진-1-카복실레이트 111b
100-mL 단일-목 환저 플라스크를 질소로 퍼지시키고, 111a(0.7 g, 2.08 mmol), 탄소 상의 10% 팔라듐(50% 습윤, 208 mg), 및 메탄올(40 mL)로 충전하였다. 혼합물을 진공배기하고, 수소 가스로 충전하고, 실온에서 6시간 동안 교반시켰다. 이후 수소를 진공배기하고, 질소를 플라스크 내로 충전하였다. 촉매를 셀라이트®패드를 통해 여과하여 제거하고, 여액을 감압 하에서 농축시켜 111b(568 mg, 89%)를 수득하였다. MS: [M+H]+ 306
실시예 111c (S)-3급-부틸 4-(6-(5-브로모-1-메틸-2-옥소-1,2-다이하이드로피리딘-3-일아미노) 피리딘-3-일)-3-에틸피페라진-1-카복실레이트 111c
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 1,4-다이옥산(50 mL), 111b(568 mg, 1.86 mmol), 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온(498 mg, 1.86 mmol), Pd2(dba)3(85 mg, 0.093mmol), 잔트포스(107 mg, 0.186 mmol), 및 세슘 카보네이트(1.198 g, 3.72 mmol)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 6시간 동안 가열하였다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 100:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 111c(502 mg, 55%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS: [M+H]+ 492.
실시예 111d (S)-5-브로모-3-(5-(2-에틸피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-1-메틸 피리딘-2(1H)-온 111d
111c(502 mg, 1.02 mmol), 다이클로로메탄(2 mL), 및 4.0 M HCl/다이옥산(4 mL)의 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반시켰다. 이후 감압 하에서 농축시켜서 조질 111d를 황색 고체(263 mg, 66%)로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS: [M+H]+ 392.
실시예 111e (S)-5-브로모-3-(5-(2-에틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노) -1-메틸피리딘-2(1H)-온 111e
Figure pct00041
메탄올(10 mL) 중의 111d(263 mg, 0.67 mmol), 옥세탄-3-온(96 mg, 1.34 mmol), NaBH3CN(104 mg, 1.68 mmol), 및 아연 클로라이드(227 mg, 1.68 mmol)의 혼합물을 50℃에서 5시간 동안 교반시켰다. 이후 물(10 mL)을 반응물에 첨가하였다. 생성 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 다이클로로메탄으로 3회 추출하였다. 합친 유기 층을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 50:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 111e(203 mg, 68%)를 수득하였다. MS: [M+H]+ 448.
실시예 111f (S)-3-(5-(2-에틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-1-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)피리딘-2(1H)-온 111f
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크에 111e(3219 mg, 7.20 mmol), Pin2B2(9072 mg, 36.0 mmol), Pd2(dba)3(329 mg, 0.36 mmol), X-phos(302 mg, 0.72 mmol), 칼륨 아세테이트(2117 mg, 21.6mmol), 및 다이옥산(50 mL)을 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 60℃에서 16 시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 생성 잔사를 8:1 석유 에터/에틸 아세테이트(80 mL)로 세척하여 111f를 황색 고체(3.0 g, 84%)로서 수득하였다.
실시예 111g (S)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-6-(5-(5-(2-에틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)-4-플루오로벤즈알데하이드 111g
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 25-mL 단일-목 환저 플라스크를 2-브로모-6-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-플루오로벤즈알데하이드 102h(168 mg, 0.40 mmol), 111f(198 mg, 0.40 mmol), Pd(dppf)Cl2(15 mg, 0.02 mmol), K3PO4(170 mg, 0.8 mmol), 나트륨 아세테이트(66 mg, 0.8 mmol), 아세토나이트릴(5 mL), 및 물(0.8 mL)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 2시간 동안 환류가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 생성 잔사를 30:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 111g를 백색 고체(100 mg, 35%)로서 수득하였다. MS: [M+H]+ 710.3
실시예 111 (S)-6-3급-부틸-2-(3-(5-(5-(2-에틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일-아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)-5-플루오로-2-(하이드록시메틸)페닐)-8-플루오로프탈라진-1(2H)-온 111
메탄올(5 mL) 중의 111g(100 mg, 0.14 mmol)의 용액에 0℃에서 나트륨 보로하이드라이드(16.0 mg, 0.42 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 60분 동안 교반시켰다. 이후 이를 물(1.0 mL)로 켄칭하고, 농축시켰다. 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 111(32 mg, 32 %)을 수득하였다. MS: [M+H]+ 712.3. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 8.57(d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.30(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.94(s, 1H), 7.80(s, 1H), 7.58(s, 2H), 7.41(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.31-7.28(m, 2H), 7.12(dd, J = 2.5, 8.5 Hz, 1H), 6.82(d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.73-4.70(m, 4H), 4.37(s, 2H), 3.74-3.72(m, 1H), 3.71(s, 3H), 3.56-3.54(m, 1H), 3.34-3.32(m, 1H), 3.15-3.13(m, 2H), 2.58-2.36(m, 4H), 1.45(s, 9H), 1.44-1.43(m, 2H), 0.83(t, J = 7.5 Hz, 3H).
실시예 112a (S)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(5-(5-(2-에틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)니코틴알데하이드 112a
Figure pct00042
50-mL 환저 플라스크를 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소-프탈라진-2(1H)-일)-4-클로로니코틴알데하이드 103b(150 mg, 0.43 mmol), (S)-3-(5-(2-에틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-1-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)피리딘-2(1H)-온(206 mg, 0.43 mmol), PdCl2(dppf)(33 mg, 0.04 mmol), K3PO4(202 mg, 0.86 mmol), NaOAc(71 mg, 0.86 mmol), 및 CH3CN(10 mL), H2O(2 mL)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 가열하였다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 진공 증발시켰다. 잔사를 1:3 석유/에틸 아세테이트로 용리되는 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 112a를 황색 고체(146 mg, 49%)로서 수득하였다. LCMS: [M+H]+ 693
실시예 112 (S)-6-3급-부틸-2-(4-(5-(5-(2-에틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)-3-(하이드록시메틸)피리딘-2-일)-8-플루오로프탈라진-1(2H)-온 112
112a(140 mg, 0.20 mmol), NaBH4(21 mg, 0.60 mmol) 및 CH3OH(8 mL)의 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 이후 반응 혼합물을 물(10 mL)로 켄칭하고, 혼합물을 CH2Cl2(15 mL × 2)로 추출하였다. 합친 CH2Cl2 추출물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 112(70 mg, 50%)를 수득하였다. LCMS: [M+H]+ 695. 1H NMR(500 MHz, DMSO) δ 8.50-8.60(m, 2H), 8.44(s, 1H), 7.90(d, J=1.5, 1H), 7.82(d, J=3.0, 1H), 7.75-7.78(m, 1H), 7.51-7.53(m, 1H), 7.45(d, J=2.5, 1H), 7.33-7.35(m, 1H), 7.22-7.24(m, 1H), 4.47-4.59(m, 2H), 4.36-4.45(m, 4H), 3.60(s, 3H), 3.46-3.50(m, 1H), 3.38-3.41(m, 3H), 3.14-3.17(m, 1H), 2.96-3.00(m, 1H), 2.60-2.64(m, 1H), 2.50-2.55(m, 1H), 2.14-2.17(m, 1H), 2.06-2.10(m, 1H), 1.66-1.69(m, 1H), 1.39(s, 9H), 1.21-1.28(m, 1H), 0.77-0.80(m, 3H)
실시예 113a 5-브로모-1-메틸-3-(피리미딘-4-일아미노)피리딘-2(1H)-온 113a
Figure pct00043
마그네틱 교반기 및 질소 주입구로 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온(2.00 g, 21.0 mmol), 2-아미노피리미딘(5.61 g, 21.0 mmol), 세슘 카보네이트(13.7 g, 42.1 mmol), DMF(5 mL) 및 1,4-다이옥산(70 mL)으로 충전하였다. 생성 현탁액에 질소를 30분 동안 버블링시킨 후, 잔트포스(1.10 g, 1.89 mmol) 및 트리스(다이벤질리덴아세톤)다이팔라듐(0)(963 mg, 1.05 mmol)을 첨가하였다. 환류 응축기를 플라스크에 부착하고, 반응 혼합물을 100℃에서 4시간 동안 가열하였다. 이후, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 90:10 메틸렌 클로라이드/메탄올(150 mL) 및 물(100 mL)로 용해시키고, 층을 분리시켰다. 수성 층을 90:10 메틸렌 클로라이드/메탄올(50 mL)로 추출하고, 합친 유기 층을 염수로 세척하고, 황산 나트륨 상에서 건조시켰다. 건조제를 여과하여 제거하였다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 생성 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카, 90:10 메틸렌 클로라이드/메탄올)로 정제하여 113a를 58% 수율(3.42 g)로 비정질의 밝은 녹색 고체로서 수득하였다: mp 217-219℃; 1H NMR(500 MHz, CDCl3) d 9.29(s, 1H), 8.77(s, 1H), 8.72(d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.36(d, J = 6.0 Hz, 1H), 7.69(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.37(dd, J = 5.5, 1.0 Hz, 1H), 3.53(s, 3H); MS(ESI+) m/z 281.0(M+H).
실시예 113b 1-메틸-3-(피리미딘-4-일아미노)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)피리딘-2(1H)-온 113b
Figure pct00044
마그네틱 교반기 및 응축기가 장착된 250-mL 단일-목 환저 플라스크를 113a(4.0 g, 14 mmol), X-phos(400 mg, 0.7 mmol), Pd2(dba)3(635 mg, 0.7 mmol), 칼륨 아세테이트(7.3 mg, 28 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-바이(1,3,2-다이옥사보롤란)(10.6 g, 42 mmol), 및 1,4-다이옥산(100 mL)으로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 반응 혼합물을 60℃에서 8시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 생성 잔사를 5:1 석유 에터/에틸 아세테이트로 용리되는 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 113b를 연한 황색 고체(3.8 mg, 82%)로서 수득하였다. MS: [M+H]+ 329.5.
실시예 113c 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-6-옥소-5-(피리미딘-4-일아미노)-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)니코틴알데하이드 113c
환류 응축기가 장착된 100-mL 환저 플라스크에 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-클로로니코틴알데하이드 103b(110 mg, 0.31 mmol), 113b(100 mg, 0.31 mmol), PdCl2(dppf)(25 mg, 0.030 mmol), K3PO4(241 mg, 0.93 mmol), NaAcO(76 mg, 0.93 mmol), 아세토나이트릴(15 mL), 및 물(0.5 mL)을 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 가열하였다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 1:20 메탄올/다이클로로메탄으로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 113c를 적색 고체(80 mg, 51%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 526.3
실시예 113 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[1-메틸-6-옥소-5-(피리미딘-4-일아미노)-3-피리딜]-2-피리딜]프탈라진-1-온 113
113c(80 mg, 0.14 mmol), NaBH4(27 mg, 0.70 mmol), 및 메탄올(10 mL)의 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 물(2 mL)로 켄칭하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 113(57 mg, 71%)을 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 528.3. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 9.26(s, 1H), 8.76(d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.67(s, 1H), 8.59(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.54(d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.31(d, J = 6.0 Hz, 1H), 7.90(d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.79-7.76(m, 1H), 7.69(d, J = 2.0 Hz 1H), 7.54(d, J = 5.0, Hz 1H), 7.34-7.32(m, 1H), 4.94(t, J = 5.0 Hz, 1H), 4.42-4.40(m, 2H), 3.62(s, 3H), 1.39(s, 9H).
실시예 114a 5-브로모-1-메틸-3-(2-메틸피리미딘-4-일아미노)피리딘-2(1H)-온 114a
실시예 113a의 절차에 따라, 2-메틸피리미딘-4-아민(2.0 g, 18.3 mmol) 및 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온(9.6 g, 36 mmol)을 출발 물질로 사용하여 114a를 황색 고체(2.3 g, 43.4%)로서 수득하였다. MS: [M+H]+ 295. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 9.20(s, 1H), 8.78(s, 1H), 8.26(d, J = 4.5 Hz, 1H), 7.68(s, 1H), 7.18(d, J = 4.5 Hz, 1H), 3.59(s, 3H), 2.52(s, 3H).
실시예 114b 1-메틸-3-(2-메틸피리미딘-4-일아미노)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2- 다이옥사보롤란-2-일)피리딘-2(1H)-온 114b
Figure pct00045
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 비스(피나콜라토) 다이보론(689 mg, 2.61 mmol), 1,4-다이옥산(30 mL), 114a(307 mg, 1.04 mmol), Pd2(dba)3(47 mg, 0.050 mmol), X-phos(48 mg, 0.10 mmol), 및 칼륨 아세테이트(305 mg, 3.12 mmol)로 충전하였다. 혼합물을 65℃에서 6시간 동안 가열하였다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 진공 증발시켜서 114b(300 mg, 84%)를 갈색 고체로서 수득하였다. MS: [M+H]+ 342.2
실시예 114c 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-5-(2-메틸피리미딘-4-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)니코틴알데하이드 114c
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 50-mL 단일-목 환저 플라스크를 114b(236 mg, 0.69 mmol), 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-클로로니코틴알데하이드 103b(250 mg, 0.69 mmol), PdCl2(dppf)(29 mg, 0.035 mmol), K3PO4(296 mg, 1.39 mmol), 나트륨 아세테이트(114 mg, 1.39 mmol), 아세토나이트릴(15 mL), 및 물(1 mL)로 충전하였다. 시스템을 진공배기하고, N2로 재충전하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 생성 잔사를 30:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 114c(134 mg, 36%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 540.2.
실시예 114 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[1-메틸-5-[(2-메틸피리미딘-4-일)아미노]-6-옥소-3-피리딜]-2-피리딜]프탈라진-1-온 114
0℃에서, 메탄올(20 mL) 중의 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-5-(2-메틸피리미딘-4-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)니코틴알데하이드 114c(130 mg, 0.24 mmol)의 현탁액에 나트륨 보로하이드라이드(27 mg, 0.72 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 20분 동안 교반시킨 후, 물(10 mL)로 켄칭하였다. 이후 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 다이클로로메탄(3 × 20 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 114(20 mg, 15 %)를 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 542.3. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) 8.97(d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.71(d, J = 5.0 Hz, 1H, 8.36(d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.28(d, J =5.5 Hz, 1H), 8.09-8.06(m, 1H), 7.86(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.60-7.56(m, 3H), 6.61(d, J =6.0 Hz, 1H), 4.54-4.43(m, 2H), 4.16-4.13(m, 1H), 3.75(s, 3H), 2.62(s, 3H), 1.46(s, 9H).
실시예 115a 5-메틸-4,5,6,7-테트라하이드로티아졸로[5,4-c]피리딘-2-아민 115a
Figure pct00046
2-프로판올(80 mL) 중의 1-메틸-4-피페리돈(11.3 g, 100 mmol)의 용액을 50℃로 가열하였다. 이 용액에 2-프로판올(25 mL) 중 시안아미드(4.2 g, 100 mmol)의 용액 및 황 분말(3.2 g, 100 mmol)을 순서대로 첨가하였다. 촉매량의 피롤리딘(1.3 mL)을 첨가한 후, 생성 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 밤새 교반시켰다. 이후 이를 빙수욕에서 10℃ 이하로 냉각시키고, 1시간 동안 동일한 온도에서 교반시켰다. 침전된 결정을 여과하여 수집하고, 2-프로판올(20 mL)로 세척하였다. 습윤 상태의 결정을 진공건조시켜 115a(10 g, 59%)를 수득하였다. MS: [M+H]+ 170. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 6.70(s, 2H), 3.31(s, 2H), 2.61(t, J = 5.5 Hz, 2H), 2.45(m, 2H), 2.33(s, 3H).
실시예 115b 5-브로모-1-메틸-3-(5-메틸-4,5,6,7-테트라하이드로티아졸로[5,4-c]피리딘-2-일아미노)피리딘-2(1H)-온 115b
Figure pct00047
화합물 113a에 기술된 절차에 따라 115a(4.0 g, 23.5 mmol) 및 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온(3.0 g, 17.8 mmol)을 사용하여 출발하여 115b를 황색 고체(2.8 g, 44%)로서 수득하였다. MS: [M+H]+ 357.
실시예 115c 1-메틸-3-(5-메틸-4,5,6,7-테트라하이드로티아졸로[5,4-c]피리딘-2-일아미노)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)피리딘-2(1H)-온 115c
화합물 115b(997 mg, 2.8 mmol)를 다이옥산(50 mL) 중에 용해시킨 후, 비스(피나콜라토)다이보론(3.0 g, 12.0 mmol), Pd2(dba)3(128 mg, 0.14mmol), X-phos(134 mg, 0.28 mmol), 및 칼륨 아세테이트(823 mg, 8.4 mmol)를 첨가하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 65℃에서 2시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 석유 에터(2 × 10 mL)로 세척하여 115c를 황색 고체(968 mg, 86%)로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS-ESI: [M+H]+ 403.2
실시예 115d 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-5-(5-메틸-4,5,6,7-테트라하이드로티아졸로[5,4-c]피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)니코틴알데하이드 115d
환류 응축기를 장착시킨 환저 플라스크를 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-클로로니코틴알데하이드 103b(144 mg, 0.40 mmol), 115c(240 mg, 0.60 mmol), PdCl2(dppf)(20 mg, 0.020 mmol), K3PO4(180 mg, 0.80 mmol), 나트륨 아세테이트 3수화물(120 mg, 0.80 mmol), 및 아세토나이트릴/물(15 mL/1mL)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 25:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 115d를 황색 고체(100 mg, 42%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 600.3
실시예 115 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[1-메틸-5-[(5-메틸-6,7-다이하이드로-4H-티아졸로[5,4-c]피리딘-2-일)아미노]-6-옥소-3-피리딜]-2-피리딜]프탈라진-1-온 115
메탄올(6 mL) 중의 115d(100 mg, 0.15 mmol)의 혼합물에 NaBH4(18 mg, 0.45 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30℃에서 1시간 동안 교반시킨 후, 물(10 mL)로 켄칭하였다. 다이클로로메탄(3 × 30 mL)으로 추출하고, 합친 유기 층을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 115(35 mg, 36%)를 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 602.2. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 8.68(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.42(d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.35(d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.30(s, 1H), 7.77(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.58-7.53(m, 3H), 4.49-4.45(m, 2H), 4.10(bs, 1H), 3.73(s, 3H), 3.58(s, 2H), 2.83-2.79(m, 4H), 2.52(s, 3H), 1.45(s, 9H).
실시예 116a 6-3급-부틸-2-(4-클로로-3-(하이드록시메틸)피리딘-2-일)-8-플루오로프탈라진-1(2H)-온 116a
Figure pct00048
메탄올(30 mL) 중의 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-클로로니코틴알데하이드 103b(2.0 g, 5.5 mmol)의 용액에 NaBH4(700 mg, 16.5 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반시키고, 물(30 mL)로 켄칭하였다. 이후 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 다이클로로메탄(3 × 30mL)으로 추출하였다. 합친 유기 상을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에서 진공배기하여 116a를 백색 고체(1.8 g, 90%)로서 수득하였다. MS: [M+H]+ 362.3.
실시예 116b (2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-클로로피리딘-3-일)메틸 아세테이트 116b
마그네틱 교반기가 장착된 50-mL 단일-목 환저 플라스크를 116a(1.6 g, 4.4 mmol), 아세트산 무수물(10 mL), 및 트라이에틸아민(1 mL)으로 충전하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 30:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 116b를 갈색 고체(1.4 g, 82%)로서 수득하였다. MS: [M+H]+ 404.3.
실시예 116c 3-(아세톡시메틸)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피리딘-4-일보론산 116c
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 116b(1.0 g, 2.5 mmol), Pin2B2(3.2 g, 12.5 mmol), Pd(dppf)Cl2(75 mg, 0.125 mmol), X-phos(75 mg, 0.25 mmol), 칼륨 아세테이트(750 mg, 7.5 mmol), 및 다이옥산(60 mL)으로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 65℃에서 15시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 생성 잔사를 3:1 석유 에터/에틸 아세테이트(10 mL)로 세척하여 116c를 황색 고체(1.0 g, LCMS 순도: 75%)로서 수득하였다. MS: [M+H]+ 414.2.
실시예 116d 6-클로로-2-메틸-4-({5-[(모폴린-4-일)카보닐]피리딘-2-일}아미노)-2,3-다이하이드로피리다진-3-온 116d
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 1,4-다이옥산(40 mL), (6-아미노피리딘-3-일)(모폴리노)메탄온(2.07 g, 10.0 mmol), 4-브로모-6-클로로-2-메틸피리다진-3(2H)-온(3.35 g, 15.0 mmol), Pd2(dba)3(915 mg, 1.0 mmol), 잔트포스(578 mg, 1.0 mmol), 및 세슘 카보네이트(6.52 g, 20 mmol)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 8시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 고체를 다이클로로메탄(2 × 20 mL)으로 세척하였다. 합친 여액을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 농축시켜 116d(2.45 g, 51%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS: [M+H]+ 350.1
실시예 116e (2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-5-(5-(모폴린-4-카보닐)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리다진-3-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 116e
환류 응축기가 장착된 50-mL 환저 플라스크를 116d(175 mg, 0.50 mmol), 3-(아세톡시메틸)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피리딘-4-일보론산 116c(300 mg, 0.75 mmol), Pd(dppf)Cl2(25 mg, 0.025 mmol), K3PO4(220 mg, 1.0 mmol), 나트륨 아세테이트 3수화물(150 mg, 1.0 mmol), 및 아세토나이트릴/물(20/1 mL)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 가열하였다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 25:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 116e를 황색 고체(150 mg, 45%)를 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 683.3
실시예 116 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[1-메틸-5-[[5-(모폴린-4-카보닐)-2-피리딜]아미노]-6-옥소-피리다진-3-일]-2-피리딜]프탈라진-1-온 116
THF/i-프로판올(5/3 mL) 및 물(2 mL) 중의 116e(150 mg, 0.20 mmol) 및 리튬 하이드록사이드(85 mg, 2.0 mmol)의 혼합물을 30℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 감압 하에서 진공배기하고, 잔사를 에틸 아세테이트(3 × 20 mL)로 추출하였다. 합친 에틸 아세테이트 추출물을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 116(80 mg, 80%)을 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 641.3. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 8.78(s, 1H), 8.75(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.47(s, 1H), 8.45(d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.34(d, J = 3.0 Hz, 1H), 7.79(dd, J = 2.0, 8.0 Hz, 1H), 7.64(d, J = 4.5 Hz, 1H), 7.57(s, 1H), 7.52(dd, J = 1.5, 12.5 Hz, 1H), 7.02(d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.57-4.55(m, 2H), 3.94(s, 3H), 3.81-3.75(m, 6H), 1.64-1.62(m, 2H), 1.44(s, 9H).
실시예 117a (S)-3급-부틸 4-(6-(6-클로로-2-메틸-3-옥소-2,3-다이하이드로피리다진-4-일아미노)피리딘-3-일)-3-메틸피페라진-1-카복실레이트 117a
Figure pct00049
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 250-mL 단일-목 환저 플라스크를 (S)-3급-부틸 4-(6-아미노피리딘-3-일)-3-메틸피페라진-1-카복실레이트 105b(2.5 g, 8.5 mmol), 4-브로모-6-클로로-2-메틸피리다진-3(2H)-온(2.2 g, 10.0 mmol), 잔트포스(240 mg, 0.40 mmol), 트리스(다이벤질리덴아세톤)다이팔라듐(0)(360 mg, 0.40 mmol), Cs2CO3(5.5 g, 17 mmol), 및 1,4-다이옥산(100 mL)으로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 2.5 시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 생성 잔사를 다이클로로메탄/메탄올(40:1 내지 30:1)로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 117a를 연한 황색 고체(3.2 g, 86%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 435.1.
실시예 117b (S)-6-클로로-2-메틸-4-(5-(2-메틸피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)피리다진-3(2H)-온 117b
117a(3.0 g, 6.9 mmol) 및 4.0M HCl/에탄올(20 mL)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 이후 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 조질 117b를 황색 고체(2.5 g, 98%)로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS-ESI: [M+H]+ 335.1.
실시예 117c (S)-6-클로로-2-메틸-4-(5-(2-메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)피리다진-3(2H)-온 117c
메탄올(20 mL) 중의 117b(2.3 g, 6.8 mmol), 옥세탄-3-온(1.4 g, 20.0 mmol), NaBH3CN(620 mg, 10 mmol), 및 아연 클로라이드(1.36 g, 10 mmol)의 혼합물을 50℃에서 3시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 물(40 mL)에 첨가하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 다이클로로메탄으로 3회 추출하였다. 합친 유기 층을 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 50:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 117c(2.0 g, 75%)를 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 391.2.
실시예 117d (S)-(2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-5-(5-(2-메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리다진-3-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 117d
Figure pct00050
환류 응축기를 장착시킨 환저 플라스크를 117c(200 mg, 0.50 mmol), 3-(아세톡시메틸)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피리딘-4-일-보론산 116c(300 mg, 0.75 mmol), Pd(dppf)Cl2(25 mg, 0.025 mmol), K3PO4(220 mg, 1.0 mmol), 나트륨 아세테이트 3수화물(150 mg, 1.0 mmol), 및 아세토나이트릴/물(20/1 mL)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 증발시키고, 잔사를 25:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 117d를 황색 고체(110 mg, 42%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 724.4
실시예 117 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[1-메틸-5-[[5-[(2S)-2-메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일]-2-피리딜]아미노]-6-옥소-피리다진-3-일]-2-피리딜]프탈라진-1-온 117
THF/i-프로판올(5/3 mL) 및 물(2 mL) 중의 117d(110 mg, 0.15 mmol) 및 리튬 하이드록사이드(65 mg, 1.5 mmol)의 혼합물을 30℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 감압 하에서 증발시키고, 잔사를 에틸 아세테이트(2 × 20 mL)로 추출하였다. 합친 에틸 아세테이트 추출물을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 117(100 mg, 95%)을 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 682.4. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 8.73(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.60(s, 1H), 8.33(d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.24(s, 1H), 8.07(s, 1H), 7.65(d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.56-7.51(m, 2H), 7.34(s, 1H), 6.96(d, J = 9.0 Hz,1H), 4.73-4.55(m, 5H), 3.92(m, 4H), 3.73-3.74(m, 1H), 3.55-3.53(m, 1H), 3.16-3.15(m, 2H), 2.64-2.39(m, 4H), 1.44(s, 9H), 1.09-1.07(m, 3H).
실시예 118a 5-브로모-1-메틸-3-(5-메틸-1H-피라졸-3-일아미노)피리딘-2(1H)-온 118a
Figure pct00051
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 1,4-다이옥산(15 mL), 5-메틸-1H-피라졸-3-아민(1 g, 10 mmol)(1), 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온(4 g, 15 mmol)(2), 및 세슘 카보네이트(6.4 g, 20 mmol)로 충전하였다. 잔트포스(400 mg, 0.8 mmol) 및 Pd2(dba)3(700 mg, 0.8 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃에서 5시간 동안 가열하였다. 이후 반응물을 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 다이클로로메탄:메탄올(20:1)로 용리되는 플래시 컬럼 상에 정제하여 118a(1.0 g, 35%)를 수득하였다. MS: [M+H]+ 283.
실시예 118b 5-브로모-3-(1-에틸-5-메틸-1H-피라졸-3-일아미노)-1-메틸피리딘-2(1H)- 온 118b
100-mL 환저 플라스크를 118a(800 mg, 2.83 mmol), 브로모에탄(216 mg, 1.98 mmol), K2CO3 (780 mg, 5.66 mmol), 및 DMF(20 mL)로 충전하였다. 혼합물을 85℃에서 밤새 가열하였다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 진공 증발시켰다. 잔사를 1:20 메탄올/다이클로로메탄으로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 118b을 적색 고체(298 mg, 37%)로 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 311.0. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 8.28(s, 1H), 7.99(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.35(d, J = 2.5 Hz, 1H), 5.85(s, 1H), 3.98-3.94(m, 2H), 3.48(s, 3H), 2.19(s, 3H), 1.27(t, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 118c (2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(5-(1-에틸-5-메틸-1H-피라졸-3-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 118c
환류 응축기가 장착된 50-mL 환저 플라스크를 118b(103 mg, 0.33 mmol), 3-(아세톡시메틸)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피리딘-4-일보론산 116c(136 mg, 0.33 mmol), PdCl2(dppf)(27 mg, 0.033 mmol), K3PO4(171 mg, 0.66 mmol), 나트륨 아세테이트(54 mg, 0.66 mmol), 아세토나이트릴(10 mL), 및 물(0.5 mL)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 가열하였다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 진공 농축시켰다. 잔사를 1:20 메탄올/다이클로로메탄으로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 118c를 황색 고체(80 mg, 41%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 600.2
실시예 118 6-3급-부틸-2-[4-[5-[(1-에틸-5-메틸-피라졸-3-일)아미노]-1-메틸-6-옥소-3-피리딜]-3-(하이드록시메틸)-2-피리딜]-8-플루오로-프탈라진-1-온 118
118c(80 mg, 0.13 mmol), 리튬 하이드록사이드(13 mg, 0.53 mmol), THF(6 mL), i-프로판올(4 mL) 및 물(2 mL)의 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 물(5 mL)로 희석시켰다. 이를 이후 다이클로로메탄(2 × 10 mL)으로 추출하였다. 합친 다이클로로메탄 추출물을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 118(20 mg, 26%)을 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 558.3. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 8.56(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.53(d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.10(s, 1H), 8.05(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.90(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.79-7.76(m, 1H), 7.50(d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.40(d, J = 2.5 Hz, 1H), 5.88(s, 1H), 4.92(t, J = 5.0 Hz 1H), 4.46-4.45(m, 2H), 3.91(q, J = 7.5 Hz, 2H), 3.59(s, 3H), 2.19(s, 3H), 1.40(s, 9H), 1.27(t, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 119a 5-브로모-3-(1,5-다이메틸-1H-피라졸-3-일아미노)-1-메틸피리딘-2(1H)-온 119a
Figure pct00052
무수 DMF(10 mL) 중의 5-브로모-1-메틸-3-(5-메틸-1H-피라졸-3-일아미노)피리딘-2(1H)-온 118a(2.8 g, 9.9 mmol)의 용액을 미네랄 오일(0.51 g, 13 mmol) 중의 NaH의 60% 분산액으로 질소 하에서 교반시키면서 처리하였다. 기포 생성이 끝난 후, 반응물을 추가의 30분 동안 교반시켰다. 이때 반응물을 질소 하에서 2시간 동안 교반시키면서 요오도메탄(0.98 g, 7.0 mmol)으로 처리하였다. 물(50 mL)을 천천히 첨가하고, 혼합물을 여과시켰다. 여액을 에틸 아세테이트(3 × 30 mL)로 추출하였다. 합친 추출물을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 3:1 석유 에터/에틸 아세테이트로 용리되는 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 119a(0.70 g, 24%)를 수득하였다. MS: [M+H]+ 297.
실시예 119b (2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(5-(1,5-다이메틸-1H-피라졸-3-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 119b
환류 응축기가 장착된 50-mL 환저 플라스크를 119a(180 mg, 0.50 mmol), 3-(아세톡시메틸)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피리딘-4-일보론산 116c(207 mg, 0.50 mmol), Pd(dppf)Cl2(41 mg, 0.050 mmol), K3PO4(212 mg, 1.0 mmol), 나트륨 아세테이트(82 mg, 1.0 mmol), 물(0.5 mL), 및 아세토나이트릴(10 mL)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 2시간 동안 환류가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 생성 잔사를 30:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 119b를 백색 고체로서 수득하였다(175 mg, 60%). MS-ESI: [M+H]+ 586.4
실시예 119 6-3급-부틸-2-[4-[5-[(1,5-다이메틸피라졸-3-일)아미노]-1-메틸-6-옥소-3-피리딜]-3-(하이드록시메틸)-2-피리딜]-8-플루오로-프탈라진-1-온 119
i-프로판올 /THF(1:1, 4 mL) 및 물(1 mL) 중의 119b(150 mg, 0.26 mmol) 및 리튬 하이드록사이드(61.4 mg, 2.6 mmol)의 혼합물을 30℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 진공배기하고, 잔사를 물(5 mL)로 희석시켰다. 이를 에틸 아세테이트(2 × 10 mL)로 추출하였다. 합친 에틸 아세테이트 추출물을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 119(75.0 mg, 54%)를 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 544.3. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 8.66(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.35(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.97(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.59-7.53(m, 4H), 7.37(s, 1H), 5.74(s, 1H), 4.51(s, 2H), 4.07(s, 1H), 3.72(s, 3H), 3.70(s, 3H), 2.25(s, 3H), 1.46(s, 9H).
실시예 120a 5-브로모-1-메틸-3-(5-메틸티아졸-2-일아미노)피리딘-2(1H)-온 120a
Figure pct00053
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 1,4-다이옥산(50 mL), 5-메틸티아졸-2-아민(2.28 g, 20.0 mmol), 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온(5.34 g, 20.0 mmol) 세슘 카보네이트(13.0 g, 40.0 mmol), 잔트포스(1.16 g, 2.0 mmol), 및 트리스(다이벤질리덴아세톤)다이팔라듐(0)(916 mg, 1.0 mmol)으로 충전하였다. 시스템에 진공/아르곤을 3회 플러싱하고, 5시간 동안 환류 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 고체를 다이클로로메탄(3 × 50 mL)으로 세척하였다. 합친 여액을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 아세토나이트릴(30 mL)로 세척하여 120a(5 g, 조, 83%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 300.1.
실시예 120b 1-메틸-3-(5-메틸티아졸-2-일아미노)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)피리딘-2(1H)-온 120b
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 250-mL 환저 플라스크를 120a(5.0 g, 16.6 mmol), Pin2B2(21.1 g, 83.0 mmol), 트리스(다이벤질리덴아세톤)다이팔라듐(0)(760 mg, 0.83 mmol), x-phos(810 mg, 1.7 mmol), 칼륨 아세테이트(4.9 g, 50 mmol), 및 1,4-다이옥산(80 mL)으로 충전하였다. 반응 혼합물을 진공/아르곤으로 3회 플러슁하고, 65℃에서 3시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 생성 잔사를 석유 에터로 세정하여 120b(20.0 g, 조물질)를 갈색 고체로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS-ESI: [M+H]+ 348.2
실시예 120c 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-5-(5-메틸티아졸-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)니코틴알데하이드 120c
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 25-mL 단일-목 환저 플라스크를 120b(174 mg, 0.50 mmol), 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-클로로니코틴알데하이드 103b(180 mg, 0.50 mmol), K3PO4(212 mg, 1.0 mmol), 나트륨 아세테이트(82 mg, 1.0 mmol), 1,1'-비스(다이페닐포스피노)페로센다이클로로팔라듐(II)(18 mg, 0.025 mmol), 아세토나이트릴(8 mL), 및 물(0.5 mL)로 충전하였다. 반응 혼합물을 진공/아르곤을 3회 플러슁하고, 100℃에서 1시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 LCMS로 분석하여 목적 생성물로 완전히 전환시켰다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 다이클로로메탄(50 mL) 및 물(30 mL)로 희석하였다. 물 층을 다이클로로메탄(2 × 30 mL)으로 희석하였다. 합친 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 어두운 잔사를 다이클로로메탄/메탄올(80:1 내지 30:1)로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 120c(150 mg, 55%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 545.3
실시예 120 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[1-메틸-5-[(5-메틸티아졸-2-일)아미노]-6-옥소-3-피리딜]-2-피리딜]프탈라진-1-온 120
메탄올/다이클로로메탄(3/3 mL) 중의 120c(98 mg, 0.18 mmol)의 용액에 NaBH4(21 mg, 0.55 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반시킨 후, LCMS가 반응이 완전히 종료되었음을 나타내었다. 혼합물을 물(5 mL)로 켄칭하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 다이클로로메탄(3 × 15 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 120(30 mg, 31%)을 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 546.7. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 9.92(s, 1H), 8.58(d, J = 5.5 Hz, 1H), 8.56(d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.54(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.91(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.78(d, J = 13.0 Hz, 1H), 7.56(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.51(d, J = 5.0 Hz, 1H), 6.96(d, J = 1.0 Hz, 1H), 4.91(bs, 1H), 4.42-4.41(m, 2H), 3.60(s, 3H), 2.28(d, J = 1.0 Hz, 3H), 1.40(s, 9H).
실시예 121a (2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-5-(5-메틸-1H-피라졸-3-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 121a
Figure pct00054
환류 응축기가 장착된 50-mL 환저 플라스크를 5-브로모-1-메틸-3-(5-메틸-1H-피라졸-3-일아미노)피리딘-2(1H)-온 118a(142 mg, 0.50 mmol), 3-(아세톡시메틸)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피리딘-4-일보론산 116c(310 mg, 0.75 mmol), Pd(dppf)Cl2(18 mg, 0.025 mmol), K3PO4(212 mg, 1.0 mmol), 나트륨 아세테이트(82 mg, 1.0 mmol), 아세토나이트릴(10 mL), 및 물(0.2 mL)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 가열하였다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 25:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 121a를 갈색 고체(100 mg, 35%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 572.3
실시예 121 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[1-메틸-5-[(5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노]-6-옥소-3-피리딜]-2-피리딜]프탈라진-1-온 121
THF/ i-프로판올(5:3, 8 mL) 및 물(2 mL) 중의 121a(86 mg, 0.15 mmol) 및 리튬 하이드록사이드(36 mg, 1.5 mmol)의 혼합물을 30℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 감압 하에서 증발시키고, 잔사를 물(5 mL)로 희석시켰다. 이후 이를 에틸 아세테이트(2 × 10 mL)로 추출하였다. 합친 에틸 아세테이트 추출물을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 121(24 mg, 30 %)을 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 530.3. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 8.65(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.35(d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.04(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.58-7.53(m, 4H), 7.44(s, 1H), 5.78(s, 1H), 4.51-4.49(m, 2H), 3.73(s, 3H), 2.03(s, 3H), 1.45(s, 9H).
실시예 122a 5-브로모-3-(5-에틸-1H-피라졸-3-일아미노)-1-메틸피리딘-2(1H)-온 122a
Figure pct00055
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 1,4-다이옥산(80 mL), 5-에틸-1H-피라졸-3-아민(3.33 g, 30.0 mmol), 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온(9.6 g, 36 mmol), 및 세슘 카보네이트(19.5 g, 60 mmol)로 충전하였다. 현탁액에 10분 동안 질소를 버블링시킨 후, 잔트포스(1.73 mg, 3.0 mmol) 및 트리스(다이벤질리덴아세톤)다이팔라듐(0)(1.36 mg, 1.5 mmol)을 첨가하였다. 시스템에 진공/아르곤을 3회 플러싱하고, 2시간 동안 환류 가열하였다. 이를 즉시 여과하였다. 고체를 다이옥산(3 × 30 mL)으로 세척하고, 합친 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 석유 에터/에틸 아세테이트(2:1 내지 1:2)로 용리하여 122a(3.8 g, 43%)를 적색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 297.0
실시예 122b 5-브로모-3-(5-에틸-1-메틸-1H-피라졸-3-일아미노)-1-메틸피리딘-2(1H)-온 122b
DMF(10 mL) 중의 122a(598 mg, 2.0 mmol)의 혼합물에 NaH(64 mg, 1.6 mmol)를 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 0.5시간 동안 교반시켰다. 혼합물에 DMF 중의 요오드메탄(227 mg, 1.6 mmol)을 0℃에서 적가하였다. 혼합물을 0.5시간 동안 교반시키고, 물(20 mL)로 켄칭하였다. 이를 이후 다이클로로메탄(3 × 30 mL)으로 추출하였다. 합친 추출물을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 석유 에터/에틸 아세테이트(5:1 내지 2:1)로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 122b(360 mg, 58%)를 밝은 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 311.1
실시예 122c (2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(5-(5-에틸-1-메틸-1H-피라졸-3-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 122c
환류 응축기가 장착된 50-mL 환저 플라스크를 122b(310 mg, 1.0 mmol), 3-(아세톡시메틸)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피리딘-4-일보론산 116c(1.24 g , 3.0 mmol), K3PO4(424 mg, 2.0 mmol), 나트륨 아세테이트(164 mg, 2.0 mmol), 1,1'-비스(다이페닐포스피노)페로센다이클로로팔라듐(II)(73 mg, 0.10 mmol), 아세토나이트릴(10 mL), 및 물(0.5 mL)로 충전하였다. 시스템을 진공/질소로 3회 플러슁하고, 100℃에서 N2 보호 하에서 2.5 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 다이클로로메탄(50 mL) 및 물(50 mL)로 희석시켰다. 수성 층을 분리시키고, 다이클로로메탄(3 × 20 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 어두운 잔사를 60:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 122c(150 mg, 25%)를 황색 오일로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 600.0
실시예 122 6-3급-부틸-2-[4-[5-[(5-에틸-1-메틸-피라졸-3-일)아미노]-1-메틸-6-옥소-3-피리딜]-3-(하이드록시메틸)-2-피리딜]-8-플루오로-프탈라진-1-온 122
THF/ i-프로판올 /물(2.5/1/0.5 mL) 중의 122c(150 mg, 0.25 mmol)의 용액에 리튬 하이드록사이드(70 mg, 2.5 mmol)를 35℃에서 첨가하였다. 반응물을 3시간 동안 교반시킨 후, LCMS가 반응이 완료되었음을 나타내었다. 혼합물을 물(15 mL)에 붓고, 다이클로로메탄(3 × 20 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 고체 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 122(49 mg, 35%)를 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 557.8. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 8.59(d, J = 5.0 Hz,1H), 8.51(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.92(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.88(d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.73(m, 1H), 7.64(d, J = 5.0 Hz,1H), 7.41(d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.92(s, 1H), 4.59(s, 2H), 3.72(s, 3H), 3.68(s, 3H), 2.64(m, 2H), 1.47(s, 9H), 1.27(t, J = 2.5, 3H)
실시예 123a 1-에틸-4-나이트로-1H-피라졸 123a
Figure pct00056
무수 DMF(100 mL) 중의 4-나이트로-1H-피라졸(5.0 g, 44.2 mmol)의 용액에 -25℃에서 질소 하에서 교반시키며 NaH(오일 중 60%)(1.94 g, 48.6 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반시킨 후, 브로모에탄(5.30 g, 48.6 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 질소 하에서 -25℃에서 6시간 동안 교반을 지속하였다. 용액을 에틸 아세테이트(100 mL)로 희석시키고, 물(2 × 50 mL) 및 염수 용액(50 mL)으로 세척하고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조하고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 조질 123a(5.0 g, 80%)를 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS-ESI: [M+H]+ 142.0
실시예 123b 1-에틸-1H-피라졸-4-아민 123b
100-mL 단일-목 환저 플라스크를 수소로 퍼지시키고, 123a(4.5 g, 31.9 mmol), 탄소 상의 10% 팔라듐(10% 습윤, 2.0 g), 및 메탄올(50 mL)로 충전하였다. 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반시켰다. 촉매를 셀라이트® 패드를 통해 여과하여 제거하고, 여액을 감압 하에서 농축시켜 123b(3.3 g, 93%)를 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 112.0
실시예 123c 5-브로모-3-(1-에틸-1H-피라졸-4-일아미노)-1-메틸피라진-2(1H)-온 123c
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 123b(500 mg, 4.5 mmol), 3,5-다이브로모-1-메틸피라진-2(1H)-온(2.40 g, 9.0 mmol), DIP에틸 아세테이트(3 mL), 및 아이소프로판올(50 mL)로 충전하였다. 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시켜서 123c(802 mg, 60%)를 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 298.0
실시예 123d (2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(6-(1-에틸-1H-피라졸-4-일아미노)-4-메틸-5-옥소-4,5-다이하이드로피라진-2-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 123d
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 50-mL 환저 플라스크를 123c(151 mg, 0.51 mmol), 3-(아세톡시메틸)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피리딘-4-일보론산 116c(206 mg, 0.50 mmol), PdCl2(dppf)(22 mg, 0.030 mmol), K3PO4(216 mg, 1.02 mmol), 나트륨 아세테이트(84 mg, 1.02 mmol), 아세토나이트릴(10 mL), 및 물(0.5 mL)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 가열하였다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 1:3 석유/에틸 아세테이트로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 123d를 황색 고체(158 mg, 53%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 587.2
실시예 123 6-3급-부틸-2-[4-[6-[(1-에틸피라졸-4-일)아미노]-4-메틸-5-옥소-피라진-2-일]-3-(하이드록시메틸)-2-피리딜]-8-플루오로-프탈라진-1-온 123
i-프로판올 /THF(1:1, 10 mL) 및 물(3 mL) 중의 123d(152 mg, 0.26 mmol) 및 리튬 하이드록사이드(61 mg, 2.56 mmol)의 혼합물 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 감압 하에서 증발시키고, 잔사를 에틸 아세테이트(2 × 10 mL)로 추출하였다. 합친 에틸 아세테이트 추출물을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 123(55 mg, 39%)을 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 545.2. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 9.72(s, 1H), 8.58(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.54(d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.18(s, 1H), 7.90(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.80-7.75(m, 1H), 7.74(s, 1H), 7.71(d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.51(s, 1H), 4.90(t, J = 5.0 Hz, 1H), 4.61-4.53(m, 2H), 4.09(q, J = 7.5 Hz, 2H), 3.54(s, 3H), 1.41(s, 9H),1.35(t, J = 6.0 Hz, 3H).
실시예 124a (3-나이트로-1H-피라졸-5-일)메탄올 124a
기계 교반기, 첨가 펀넬, 및 질소 주입구가 장착된 3-L의 3-목 환저 플라스크를 질소로 퍼지시키고, 3-나이트로피라졸-5-카복실산(28.0 g, 178 mmol) 및 THF(420 mL)로 충전하고, 빙/아세톤 욕에서 -5℃로 냉각시켰다. 보란-THF 착물 용액(1.0 M, 535 mL, 535 mmol)을 내부 반응 온도가 5℃ 미만으로 유지되도록 첨가하였다. 첨가가 끝난 후에 냉각 배스를 제거하고, 반응물을 실온에서 18시간 동안 교반시켰다. 이후 반응물을 빙/아세톤 욕에서 -5℃로 냉각시키고, 물(70 mL) 및 4N 염산(70 mL)을 첨가하고, 피라졸과의 보란 착물을 분해하기 위해 반응물을 1시간 동안 환류 교반시켰다. 실온으로 냉각시키고, 대략 30 mL의 부피로 감압 하에서 농축시켰다. 에틸 아세테이트(175 mL)를 첨가하고, 혼합물을 15분 동안 교반시켰다. 수성 층을 분리시키고, 에틸 아세테이트(4 × 200 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 포화 수성 나트륨 바이카보네이트(2 × 50 mL), 염수(50 mL)로 세척하고, 나트륨 설페이트 상에서 건조시키고, 건조제를 여과하여 제거하였다, 여액을 감압 하에서 농축시켜 124a를 94% 수율(24.0 g)로 밝은 황색 고체로 수득하였다: 1H NMR(300 MHz, DMSO-d6) δ 13.90(br s, 1H), 6.87(s, 1H), 5.58(t, 1H, J = 5.4 Hz), 4.53(d, 2H, J = 5.1 Hz); MS(ESI+) m/z 144.0(M+H)
실시예 124b (1-(2-브로모에틸)-3-나이트로-1H-피라졸-5-일)메탄올 124b
기계 교반기 및 온도조절기가 장착된 1-L 3-목 환저 플라스크를 질소로 퍼지시키고, 124a(25.0 g, 175 mmol), DMF(250 mL), 및 세슘 카보네이트(70.0 g, 215 mmol)로 충전하고, 104℃에서 5분 동안 가열하였다. 이후 반응 혼합물을 빙/아세톤 욕을 사용하여 0℃로 냉각시키고, 다이브로모에탄(329 g, 1.75 mol)을 적가하였다(발열 없음). 반응물을 0℃에서 1시간 동안, 이후 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 이후 물(400 mL) 중의 KH2PO4(40 g)의 용액을 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반시켰다. 에틸 아세테이트(450 mL)를 첨가하고, 수성 층을 분리시키고, 에틸 아세테이트(2 × 100 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 물(200 mL) 및 염수(200 mL)로 세척하고, 나트륨 설페이트 상에서 건조시키고, 건조제를 여과하여 제거하였다. 여액을 감압 하에서 농축시켜서 86% 수율(37.5 g)의 조질 124b를 오렌지 색 오일로서 수득하였다: 1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 6.85(s, 1H), 4.82(d, 2H, J = 5.4 Hz), 4.66(t, 2H, J = 6.3 Hz), 3.83(t, 2H, J = 6.3 Hz); MS(ESI+) m/z 249.9(M+H).
실시예 124c 1-(2-브로모에틸)-5-(브로모메틸)-3-나이트로-1H-피라졸 124c
마그네틱 교반기, 질소 주입구 및 환류 응축기로 장착된 500-mL 3-목 환저 플라스크를 질소로 퍼지시키고, 124b(37.0 g, 148 mmol) 및 클로로포름(160 mL)으로 충전하였다. 반응물을 빙/아세톤 욕을 사용하여 -5℃로 냉각시키고, 인 트라이브로마이드(40.0 g, 148 mmol)를 적가하였다. 냉각 욕을 제거하고, 반응물을 2시간 동안 환류 교반시켰다. 이후, 혼합물을 -5℃로 냉각시키고, 포화 수성 나트륨 바이카보네이트(250 mL)를 pH가 8.5가 될 때까지 첨가하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(3 × 150 mL)로 추출하고, 합친 유기 층을 포화 수성 나트륨 카보네이트(2 × 50 mL), 염수(75 mL)로 세척하고, 나트륨 설페이트 상에서 건조하고, 건조제를 여과하여 제거하였다. 여액을 감압 하에서 농축시켜서 황색 잔사를 수득하고, 이를 메틸렌 클로라이드(60 mL) 중에 천천히 가열하며 용해시켰다. 헥산(대략 20 mL)을 첨가하고, 용액이 흐려지기 시작했다. 혼합물을 고체 침전물이 형성될 때까지 가열하고, 메틸렌 클로라이드(9 mL)를 첨가하자 용액이 투명해졌다. 용액을 실온으로 냉각시키고, 4 시간 후 생성 결정을 진공 여과시켜 수집하였다. 필터 케이크를 메틸렌 클로라이드:헥산(2 × 20 mL)의 1:2 얼음 냉 혼합물로 세척하여 1-(2-브로모에틸)-5-(브로모메틸)-3-나이트로-1H-피라졸(19.7 g)을 수득하였다. 합친 여과액을 진공배기하고, 절차를 다시 수행하여 추가의 9.70 g의 1-(2-브로모에틸)-5-(브로모-메틸)-3-나이트로-1H-피라졸을 수득하였다. 고체를 합치고, 고진공 하에서 18시간 동안 건조시켜서 57% 수율(26.0 g)의 124c를 백색 결정으로서 수득하였다: mp 95-97℃; 1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 6.93(s, 1H), 4.63(t, 2H, J = 6.0 Hz), 4.54(s, 2H), 3.86(t, 2H, J = 6.0 Hz).
실시예 124d 2-나이트로-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진 124d
마그네틱 교반기가 장착된 250-mL 단일-목 환저 플라스크를 THF(35 mL) 및 수성 암모니아(135 mL, 25-28%) 중의 124c(3.0 g, 9.64 mmol)로 충전하였다. 혼합물을 실온에서 72 시간 동안 질소 하에서 교반시켰다. 반응 혼합물을 이후 감압 하에서 농축시키고, 생성 잔사를 에틸 아세테이트(100 mL) 및 물(100 mL)로 분배하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트(2 × 50 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 10% 칼륨 카보네이트(2 × 100 mL), 염수(200 mL)로 세척하고, 황산 나트륨 상에서 건조시켰다. 건조제를 여과하여 제거하였다, 여액을 감압 하에서 농축시켜 124d를 황색 고체(1.23 g, 76%)로서 수득하였다. MS: [M+H]+ 169
실시예 124e 1-(2-나이트로-6,7-다이하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-5(4H)-일)에탄온 124e
다이클로로메탄(20 mL) 중의 124d(672 mg, 4.0 mmol)의 용액에 아세틸 클로라이드(936 mg, 12.0 mmol) 및 K2CO3(1104 mg, 8.0 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 밤새 교반시켰다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 생성 잔사를 100:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 124e를 백색 고체(500 mg, 60%)로서 수득하였다. MS: [M+H]+ 211.2
실시예 124f 1-(2-아미노-6,7-다이하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-5(4H)-일)에탄온 124f
50-mL 단일-목 환저 플라스크를 질소로 퍼지시키고, 124e(492 mg, 2.34 mmol), 탄소 상의 10% 팔라듐(50% 습윤, 234 mg), 및 메탄올(20 mL)로 충전하였다. 혼합물을 진공배기하고, 수소 가스로 충전하고, 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 이후 수소를 진공배기하고, 질소를 플라스크 내로 충전하였다. 촉매를 셀라이트® 패드를 통해 여과하여 제거하고, 여액을 감압 하에서 농축시켜 124f(380 mg, 80%)를 수득하였다. MS: [M+H]+ 181.1
실시예 124g 3-(5-아세틸-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-일아미노)-5-브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온 124g
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 50-mL 단일-목 환저 플라스크를 124f(270 mg, 1.5 mmol), 1,4-다이옥산(20 mL), Pd2(dba)3(137 mg, 0.15 mmol), 잔트포스(173 mg, 0.30 mmol), 및 세슘 카보네이트(978 mg, 3.0 mmol)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 6시간 동안 가열하였다. 이후 반응물을 실온으로 냉각시켰다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 진공 증발시켰다. 잔사를 50:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 124g(540 mg, 89%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS: [M+H]+ 368.0
실시예 124h 3-(5-아세틸-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-일아미노)-1-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)피리딘-2(1H)-온 124h
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 50-mL 단일-목 환저 플라스크를 124g(365 mg, 1.0 mmol), Pin2B2(1.26 g, 5.0 mmol), Pd2(dba)3(91 mg, 0.10 mmol), X-phos(92 mg, 0.20 mmol), 칼륨 아세테이트(294 mg, 3.0 mmol), 및 다이옥산(10 mL)으로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 50:1 메틸렌 클로라이드/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 124h를 갈색 고체(330 mg, 80%)로서 수득하였다. MS: [M+H]+ 414.2
실시예 124i 4-(5-(5-아세틸-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)니코틴알데하이드 124i
Figure pct00057
실시예 123d에 기술된 바에 따라, 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-클로로니코틴알데하이드 103b(200 mg, 0.57 mmol) 및 124h(343 mg, 0.83 mmol)로부터 출발하여, 124i를 황색 고체(300 mg, 86%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 611.3
실시예 124 2-[4-[5-[(5-아세틸-6,7-다이하이드로-4H-피라졸로[1,5-a]피라진-2-일)아미노]-1-메틸-6-옥소-3-피리딜]-3-(하이드록시메틸)-2-피리딜]-6-3급-부틸-8-플루오로-프탈라진-1-온 124
실시예 120에 기술된 절차에 따라, 124i(200 mg, 0.33 mmol)로부터 출발하여, 124를 백색 고체(54 mg, 27%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 613.3. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6, T=80℃) δ 8.53(d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.47(d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.94-7.92(m, 2H), 7.84(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.67(dd, J = 2.5, 22.0 Hz, 1H), 7.46(d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.34(d, J = 4.0 Hz, 1H), 5.98(s, 1H), 4.63-4.57(m, 3H), 4.44(d, J = 8.0 Hz, 2H), 3.98(bs, 2H), 3.89-3.86(m, 2H), 3.58(s, 3H), 2.08(s, 3H), 1.41(s, 9H).
실시예 125a 5-브로모-1-메틸-3-(5-메틸옥사졸-2-일아미노)피리딘-2(1H)-온 125a
Figure pct00058
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 5-메틸옥사졸-2-아민(276 mg, 2.82 mmol), 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온(753 mg, 2.82 mmol), 트리스-(다이벤질리덴아세톤)다이팔라듐(0)(256 mg, 0.28 mmol), 잔트포스(324 mg, 0.56 mmol), Cs2CO3(1.8 g, 5.64 mmol), 및 1,4-다이옥산(30 mL)으로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 92℃에서 3시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 생성 잔사를 100:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 125a를 백색 고체(702 mg, 88 %)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 284.1.
실시예 125b (2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-5-(5-메틸옥사졸-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 125b
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 50-mL 단일-목 환저 플라스크를 125a(150 mg, 0.53 mmol), 3-(아세톡시메틸)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1- 옥소프탈라진-2(1H)-일)피리딘-4-일보론산 116c(438 mg, 1.06 mmol), Pd(dppf)Cl2(39 mg, 0.053 mmol), K3PO4(225 mg, 1.06 mmol), 나트륨 아세테이트(87 mg, 1.06 mmol), 물(0.5 mL), 및 아세토나이트릴(10 mL)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 90℃에서 1시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 생성 잔사를 다이클로로메탄/메탄올(100:1 내지 50:1)로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 125b를 황색 고체(120 mg, 40 %)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 573.3.
실시예 125 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[1-메틸-5-[(5-메틸옥사졸-2-일)아미노]-6-옥소-3-피리딜]-2-피리딜]프탈라진-1-온 125
i-프로판올 /THF/ 물(2:2:1,10 mL) 중의 125b(114 mg, 0.20 mmol) 및 리튬 하이드록사이드(120 mg, 5.0 mmol)의 혼합물을 35℃에서 30분 동안 교반시켰다. 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 물(5 mL)로 희석시켰다. 생성 혼합물을 다이클로로메탄으로 3회 추출하였다. 합친 유기 층을 이후 감압 하에서 농축시키고, 생성 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 125(52 mg, 49 %)를 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 530.9. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 9.25(s, 1H), 8.57(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.53(d, J = 3.0 Hz, 1H), 8.25(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.90(d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.78(dd, J = 1.0, 13.0 Hz, 1H), 7.61(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.50(d, J = 5.0 Hz, 1H), 6.64(d, J = 1.5 Hz, 1H), 4.92(bs, 1H), 4.40(d, J = 7.0 Hz, 2H), 3.60(s, 3H), 2.22(s, 3H), 1.39(s, 9H).
실시예 126a 3-사이클로프로필-3-옥소프로판나이트릴 126a
THF(3 mL) 중의 아세토나이트릴(0.34 mL, 6.58 mmol)의 용액에 -78℃에서 N2 보호 하에서 리튬 다이-i-프로필아미드(3.3 mL, THF 중 2M, 6.58 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 3시간 동안 교반시켰다. 이후 THF(2 mL) 중의 에틸 사이클로프로판카복실레이트(0.50 g, 4.38 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 실온으로 가온시켰다. 물(2 mL)을 첨가하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 다이클로로메탄(2 mL)을 첨가하고, 2N HCl로 혼합물의 pH를 5로 조정하였다. 이후 이를 다이클로로메탄(5 mL × 2)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 126a를 황색 오일로서 수득하였다, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다.
실시예 126b 3-사이클로프로필-1H-피라졸-5-아민 126b
메탄올(5 mL) 중의 126a(477 mg, 4.38 mmol)의 용액에 하이드라진 수화물(5 mL, 80%)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 75℃에서 15시간 동안 가열하였다. 메탄올을 감압 하에서 제거하고, 잔사를 다이클로로메탄(2 × 8 mL)으로 추출하였다. 합친 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔사를 100:1 다이클로로메탄/ 메탄올로 용리되는 플래시 컬럼으로 정제하여 126b를 황색 오일로서 수득하였다(250 mg, 2단계에 걸쳐 46%). MS: [M+H]+ 124.
실시예 126c 3급-부틸 5-아미노-3-사이클로프로필-1H-피라졸-1-카복실레이트 126c
THF(5 mL) 중의 126b(0.25 g, 2.0 mmol) 및 K2CO3(0.828 g, 6.0 mmol)의 혼합물 에 THF(5 mL) 중 (Boc)2O(0.436g, 2.0 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반시켰다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 6:1 석유 에터/에틸 아세테이트로 용리되는 플래시 컬럼으로 정제하여 126c를 백색 고체(240 mg, 54%)로서 수득하였다. MS: [M-B℃]+ 124.
실시예 126d 5-브로모-3-(3-사이클로프로필-1H-피라졸-5-일아미노)-1-메틸피리딘-2(1H)-온 126d
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 1,4-다이옥산(15 mL), 126c(455 mg, 1.95 mmol), 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온(0.40 g, 1.5 mmol), 및 세슘 카보네이트(1.22 g, 3.75 mmol)로 충전하였다. 30분 동안 생성 혼합물에 질소를 버블링시킨 후, 잔트포스(87 mg, 0.15 mmol) 및 트리스(다이벤질리덴아세톤)다이팔라듐(0)(70 mg, 0.075 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 15시간 동안 환류시켰다. 이후 반응물을 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 에틸 아세테이트(30 mL) 및 물(30 mL)로 분배하였다. 수성 층을 분리시키고, 에틸 아세테이트(2 × 50 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(50 mL)로 세척하고 황산 나트륨 상에서 건조시켰다. 건조제를 여과하여 제거하고, 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 50:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카-겔 컬럼 상에서 정제하여 126d를 황색 고체(320 mg, 70%)로서 수득하였다. MS: [M+H]+ 309. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 11.85(s, 1H), 8.23(s, 1H), 8.02(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.35(d, J = 2.5 Hz, 1H), 5.77(d, J = 2.0 Hz, 1H), 3.46(s, 3H), 1.84-1.82(m, 1H), 0.92-0.90(m, 2H), 0.65-0.64(m, 2H).
실시예 126e 5-(3-사이클로프로필-1H-피라졸-5-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일보론산 126e
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 50-mL 단일-목 환저 플라스크를 126d(205 mg, 0.665 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-바이(1,3,2-다이옥사보롤란)(1.0 g, 4.0 mmol), 다이옥산(16 mL), PdCl2(dppf)(54.3 mg, 0.066 mmol), 및 칼륨 아세테이트(0.39 mg, 4.0 mmol)로 충전하였다. 아르곤을 생성 혼합물로 30분 동안 버블링시킨 후, 105℃에서 4시간 동안 아르곤 분위기 하에서 교반시켰다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 증발시켜서 조질 126e를 수득하고, 이를 추가의 정제없이 사용하였다. MS: [M+H]+ 275.
실시예 126f 5-브로모-3-(5-사이클로프로필-1-메틸-1H-피라졸-3-일아미노)-1-메틸피리딘-2(1H)-온 126f
Figure pct00059
0℃에서, DMF(6 mL) 중의 126e(500 mg, 1.6 mmol)의 용액에 NaH(오일 중 60%)(80 mg, 2.0 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 요오드메탄(213 mg, 1.5 mmol)을 도입시키고, 생성 혼합물을 실온에서 또 다른 2 시간 동안 교반시켰다. 이후 물(10 mL)을 혼합물에 첨가하였다. 생성 현탁액을 여과시키고, 물로 세척하고, 진공 건조시켜 126f를 백색 고체(350 mg, 68%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 323.1.
실시예 126g (2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(5-(5-사이클로프로필-1-메틸-1H-피라졸-3-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 126g
마그네틱 교반기가 장착된 밀폐된 튜브를 126f(200 mg, 0.62 mmol), (2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 116c(268 mg, 0.65 mmol), Pd(dppf)Cl2(18 mg, 0.025mmol), 나트륨 아세테이트(74 mg, 0.90 mmol), K3PO4(191 mg, 0.90 mmol), 및 아세토나이트릴 / 물(5 mL/0.5 mL)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 2.0 시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 10:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 126g(100 mg, 26%)를 갈색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 612.3.
실시예 126 6-3급-부틸-2-[4-[5-[(5-사이클로프로필-1-메틸-피라졸-3-일)아미노]-1-메틸-6-옥소-3-피리딜]-3-(하이드록시메틸)-2-피리딜]-8-플루오로-프탈라진-1-온 126
i-프로판올 /THF(1:1, 4 mL) 및 물(1 mL) 중의 126g(100 mg, 0.16 mmol) 및 리튬 하이드록사이드(72 mg, 3.0 mmol)의 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 역상 콤비플래시로 정제하여 126(32 mg, 35%)을 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 570.3. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 8.63(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.33(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.94(d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.56-7.55(m, 2H), 7.53-7.51(m, 2H), 7.33(s, 1H), 5.53(s, 1H) 4.49-4.48(m, 2H), 4.04-4.02(m, 1H), 3.79(s, 3H), 3.69(s, 3H), 1.69-1.65(m, 1H), 1.43(s, 9H), 0.97-0.94(m, 2H), 0.68-0.65(m, 2H).
실시예 127a 6-클로로-2-메틸-4-(5-메틸-1H-피라졸-3-일아미노)피리다진-3(2H)-온 127a
Figure pct00060
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 1,4-다이옥산(20 mL), 5-에틸-1H-피라졸-3-아민(971 mg, 10.0 mmol), 4-브로모-6-클로로-2-메틸피리다진-3(2H)-온(2.46 g, 11.0 mmol), 및 세슘 카보네이트(6.52 g, 20.0 mmol)로 충전하였다. 현탁액에 질소를 10분 동안 버블링시킨 후, 잔트포스(1.74 g, 3.0 mmol) 및 트리스(다이벤질리덴아세톤)다이팔라듐(0)(1.37 g, 1.5 mmol)을 첨가하였다. 시스템에 진공/아르곤을 3회 플러싱하고, 2시간 동안 환류 가열하였다. 이후 반응 혼합물이 여전히 뜨거울 때까지 이를 즉시 여과시켰다. 고체를 다이옥산(3 × 30 mL)으로 세척하고, 합친 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 6:1 석유 에터/에틸 아세테이트로 용리되는 실리카-겔 크로마토그래피로 정제하여 127a(1.8 g, 75%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 239.9
실시예 127b 6-클로로-4-(1,5-다이메틸-1H-피라졸-3-일아미노)-2-메틸피리다진-3(2H)-온 127b
무수 DMF(10 mL) 중의 127a(480 mg, 2.0 mmol)의 혼합물에 NaH(순도 60%)(64 mg, 1.6 mmol)를 0℃에서 첨가하고, 생성 혼합물을 0.5시간 동안 교반시켰다. 혼합물에 DMF(5 mL) 중의 요오드메탄(227 mg, 1.6 mmol)을 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 추가의 1.5 시간 동안 교반시키고, 물(20 mL)로 켄칭하였다. 이후 이를 다이클로로메탄(3 × 20 mL)으로 추출하고, 합친 유기 층을 감압 하에서 진공배기시켰다. 잔사를 역상 콤비플래시(A: 2 수성 NH4HCO3, B: 아세토나이트릴)로 정제하여 127b(120 mg, 24%)를 밝은 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 254.3
실시예 127c (2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(5-(1,5-다이메틸-1H-피라졸-3-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리다진-3-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 127c
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 50-mL 단일-목 환저 플라스크를 127b(120 mg, 0.47 mmol), (2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 116c(536 mg, 1.3 mmol), Pd(dppf)Cl2(34 mg, 0.047 mmol), K3PO4(199 mg, 0.94 mmol), 나트륨 아세테이트(77 mg, 0.94 mmol), 아세토나이트릴(10 mL), 및 물(0.2 mL)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 생성 잔사를 다이클로로메탄/메탄올(100:1 내지 30:1)로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 127c(180 mg, 65%)를 검정색 오일로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 587.1
실시예 127 6-3급-부틸-2-[4-[5-[(1,5-다이메틸피라졸-3-일)아미노]-1-메틸-6-옥소-피리다진-3-일]-3-(하이드록시메틸)-2-피리딜]-8-플루오로-프탈라진-1-온 127
프로판-2-올(4 mL), 테트라하이드로푸란(4 mL), 및 물(1.0 mL) 중의 127c(176 mg, 0.30 mmol)의 용액에 리튬 하이드록사이드(72 mg, 3.0 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 이를 이후 감압 하에서 증발시키고, 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 127(30 mg, 18%)을 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 544.8. 1H NMR(500 MHz, MeOD) δ 8.66(d, J = 5.0 Hz,1H), 8.51(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.88(s, 1H), 7.88(s, 1H) , 7.76-7.72(m, 2H), 5.97(s, 1H), 4.68(s, 2H), 3.89(s, 3H), 3.75(s, 3H), 2.29(s, 3H), 1.47(s, 9H)
실시예 128a 5-메틸-2-나이트로-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진 128a
마그네틱 교반기 및 질소 주입구로 장착된 1-L 단일-목 환저 플라스크를 THF(350 mL), 124c(10.0 g, 32.2 mmol), THF 중의 2M 메틸아민 용액(113 mL, 225 mmol)으로 충전하고, 실온에서 72 시간 동안 교반시켰다. 이후 반응물을 감압 하에서 농축 건고시키고, 생성 고체를 에틸 아세테이트(75 mL) 및 10% 수성 칼륨 카보네이트(75 mL)의 혼합물로 교반시켰다. 수성 층을 분리시키고, 에틸 아세테이트(2 × 75 mL)로 추출하였다. 합친 유기 추출물을 10%의 수성 칼륨 카보네이트(75 mL) 및 염수(50 mL)로 세척한 후, 황산 나트륨 상에서 건조시켰다. 건조제를 여과하여 제거하였다, 여액을 감압 하에서 농축시켜 128a를 97% 수율(5.70 g)로 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 6.62(s, 1H), 4.28(t, 2H, J = 5.4 Hz), 3.67(s, 2H), 2.95(t, 2H, J = 5.4 Hz), 2.52(s, 3H); MS(ESI+) m/z 183.0(M+H)
실시예 128b 5-메틸-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-아민 128b
500-mL 파르(Parr) 반응기 용기를 질소로 퍼지시키고, 탄소 상의 10% 팔라듐(50% 습윤, 800 mg 건조 중량) 및 에탄올(160 mL) 중의 128a(4.00 g, 2.20 mmol)의 용액으로 충전하였다. 용기를 파르 수소화기로 부착하고, 진공배기하고, 수소 가스로 45 psi의 압력으로 충전하고, 2시간 동안 진탕시켰다. 이후, 수소를 진공배기하고, 질소를 용기 내에 충전시켰다. 셀라이트®521(1.0 g)을 첨가하고, 혼합물을 셀라이트®521의 패드로 여과시켰다. 필터 케이크를 에탄올(2 × 75 mL)로 세척하고, 합친 여액을 감압 하에서 농축 건고시켜 99% 수율의 128b(3.31 g)를 오렌지색 고체로서 수득하였다. 1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 5.34(s, 1H), 3.98(t, 2H, J = 5.4 Hz), 3.52(s, 3H), 2.84(t, 2H, J = 5.7 Hz), 2.45(s, 3H); MS(ESI+) m/z 153.1(M+H)
실시예 128c 5-브로모-1-메틸-3-(5-메틸-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-일아미노) 피리딘-2(1H)-온 128c
마그네틱 교반기가 장착된 밀폐된 튜브를 128b(1.02 g, 6.7 mmol), 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온(2.15 g, 8.1 mmol), Pd2(dba)3(610 mg, 0.67mmol), 2,2-비스(다이페닐포스피노)-1,1-바이나프틸(775 mg, 1.34 mmol), 세슘 카보네이트(4.37 g, 13.6 mmol), 및 1,4-다이옥산(30 mL)으로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 110℃에서 2시간 동안 가열하였다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 진공 증발시켰다. 잔사를 다이클로로메탄/메탄올(15:1, V/V)로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 128c(380 mg, 14%)를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS: [M+H]+ 338
실시예 128d 1-메틸-3-(5-메틸-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-일아미노)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)피리딘-2(1H)-온 128d
마그네틱 교반기 및 응축기로 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 128c(1.0 g, 3 mmol), Pin2B2(3.8 g, 15 mmol), Pd(dppf)Cl2(137 mg, 0.15mmol), X-phos(143 mg, 0.3mmol), 칼륨 아세테이트(88 mg, 9 mmol), 및 1,4-다이옥산(50 mL)으로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 반응 혼합물을 60℃에서 15시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 생성 잔사를 석유 에터로 세척하여 128d를 황색 고체(0.87 g, 75%)로서 수득하였다. MS: [M+H]+ 386
실시예 128e 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-5-(5-메틸-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)니코틴알데하이드 128e
Figure pct00061
환류 응축기가 장착된 25-mL 환저 플라스크에 128d(193 mg, 0.50 mmol), 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-클로로니코틴알데하이드 103b(180 mg, 0.50 mmol), 1,1'-비스(다이페닐포스피노)페로센다이클로로팔라듐(II)(17 mg, 0.025 mmol), K3PO4(212 mg, 1.0 mmol), 나트륨 아세테이트(82 mg, 1.0 mmol), 아세토나이트릴(6 mL), 및 물(0.5 mL)을 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 가열하였다. LCMS로 분석하여 반응 혼합물이 목적 생성물로 완전하게 전환되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 다이클로로메탄(20 mL) 및 물(10 mL)로 희석시켰다. 수성 층을 분리시키고, 다이클로로메탄(3 × 10 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 어두운 잔사를 다이클로로메탄/메탄올(80:1 내지 30:1)로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 128e(190 mg, 65%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 583.3
실시예 128 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[1-메틸-5-[(5-메틸-6,7-다이하이드로-4H-피라졸로[1,5-a]피라진-2-일)아미노]-6-옥소-3-피리딜]-2-피리딜]프탈라진-1-온 128
메탄올/다이클로로메탄(5/5 mL) 중의 128e(158 mg, 0.27 mmol)의 용액에 NaBH4(31 mg, 0.82 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반시킨 후, LCMS가 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응물을 물(10 mL)로 켄칭하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 다이클로로메탄(3 × 20 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 128(95 mg, 60%)을 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 585.3. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 8.66(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.35(d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.00(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.58-7.54(m, 오버랩, 4H), 7.44(s, 1H), 5.70(s, 1H), 4.52-4.39(m, 2H), 4.10-4.09(m, 3H), 3.70(s, 3H), 3.59(s, 2H), 2.88-2.86(m, 2H), 2.47(s, 3H), 1.43(s, 9H).
실시예 129a 5-브로모-1-메틸-3-(5-메틸이속사졸-3-일아미노)피리딘-2(1H)-온 129a
Figure pct00062
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 5-메틸이속사졸-3-아민(1.0 g, 10.2 mmol), 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온(4.09 g, 15.3 mmol), Pd2(dba)3(467 mg, 0.51 mmol), 잔트포스(598 mg, 1.02 mmol), Cs2CO3(6.65 g, 20.4 mmol), 및 다이옥산(50 mL)으로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 반응 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 가열하였다. LCMS로 분석하여 반응 혼합물이 목적 생성물로 완전히 전환되었음을 나타내었다. 혼합물이 여전히 뜨거울 때까지 이를 여과시켰다. 여액을 실온으로 냉각시키고, 생성 침전물을 여과하여 수집하고, 129a(1.6 g, 55%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 284.1
실시예 129b (2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-5-(5-메틸이속사졸-3-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 129b
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 50-mL 단일-목 환저 플라스크를 3-(아세톡시메틸)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피리딘-4-일보론산 116c(438 mg, 1.06 mmol), 129a(150 mg, 0.60 mmol), Pd(dppf)Cl2(19 mg, 0.026 mmol), K3PO4(224 mg, 1.06 mmol), 나트륨 아세테이트(87 mg, 1.06 mmol), 물(5 방울), 및 아세토나이트릴(10 mL)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 반응 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 LCMS로 분석하여 목적 생성물로의 완전한 전환을 나타내었다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시켜서 129b(300 mg, 87%)를 어두운 색 오일로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS-ESI: [M+H]+ 573.3
실시예 129 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[1-메틸-5-[(5-메틸이속사졸-3-일)아미노]-6-옥소-3-피리딜]-2-피리딜]프탈라진-1-온 129
THF(4 mL), i-프로판올(4 mL), 및 물(2 mL) 중의 129b(280 mg, 0.49 mmol)의 용액에 리튬 하이드록사이드(24 mg, 0.98 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 이를 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 129를 백색 고체(85 mg, 33%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 531.3. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 9.03(s, 1H), 8.58(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.54(d, J = 3.0 Hz, 1H), 7.99(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.91(d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.78(dd, J = 1.0, 13.0 Hz, 1H), 7.56(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.51(d, J = 5.0 Hz, 1H), 6.26(s, 1H), 4.92(s, 1H), 4.43(d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.61(s, 3H), 2.32(s, 3H), 1.40(s, 9H).
실시예 130a 5-브로모-1-메틸-3-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일아미노)피리딘-2(1H)-온 130a
Figure pct00063
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 1,4-다이옥산(50 mL), 1-메틸-1H-이미다졸-4-아민(1.1 g, 11.3 mmol), 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온(3.0 g, 11.3 mmol), Pd2(dba)3(1.0 g, 1.13 mmol), 잔트포스(1.3 g, 2.26 mmol), 및 세슘 카보네이트(7.3 g, 22.6 mmol)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 92℃에서 4.5 시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 생성 잔사를 다이클로로메탄/메탄올(100:1 내지 50:1)로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 130a(2.4 g, 76 %)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 283.1
실시예 130b (2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-5-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 130b
마그네틱 교반기로 장착된 50-mL 환저 플라스크를 130a(150 mg, 0.53 mmol), 3-(아세톡시메틸)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피리딘-4-일보론산 116c(438 mg, 1.06 mmol), PdCl2(dppf)(43 mg, 0.053 mmol), K3PO4(225 mg, 1.06 mmol), 나트륨 아세테이트(87 mg, 1.06 mmol), 아세토나이트릴(10 mL), 및 물(0.2 mL)로 충전하였다. 질소를 혼합물로 10분 동안 버블링시킨 후, 환류 응축기를 플라스크에 부착하고, 반응 혼합물을 90℃에서 2.5 시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 증발시키고, 생성 잔사를 다이클로로메탄/메탄올(50:1 내지 20:1)로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 130b를 황색 고체(120 mg, 40%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 572.3.
실시예 130 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[1-메틸-5-[(1-메틸이미다졸-4-일)아미노]-6-옥소-3-피리딜]-2-피리딜]프탈라진-1-온 130
i-프로판올 /THF/물(2:2:1, 10 mL) 중의 130b(100 mg, 0.18 mmol) 및 리튬 하이드록사이드 수화물(189 mg, 4.5 mmol)의 혼합물을 35℃에서 30분 동안 교반시켰다. 혼합물을 감압 하에서 증발시키고, 잔사에 물(5 mL)을 첨가하였다. 이후 이를 다이클로로메탄(3 × 10 mL)으로 추출하였다. 합친 추출물을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 130(41.1 mg, 44.4%)을 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 530.3. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 8.56-8.53(m, 2H), 7.90(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.78(dd, J = 2.0, 12.5 Hz, 1H), 7.61(s, 1H), 7.51(d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.41-7.39(m, 2H), 7.37(d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.97(d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.04-5.02(m, 1H), 4.41-4.39(m, 2H), 3.59(s, 3H), 3.58(s, 3H), 1.39(s, 9H).
실시예 131a 2-나이트로-6,7-다이하이드로-4H-피라졸로[5,1-c][1,4]옥사진 131a
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 250-mL 단일-목 환저 플라스크를 1-(2-브로모에틸)-5-(브로모메틸)-3-나이트로-1H-피라졸 124c(3.00 g, 9.59 mmol) 및 4M 수성 하이드로브롬산(120 mL)으로 충전하고, 생성 혼합물을 24 시간 동안 환류 가열하였다. 이후, 반응 혼합물을 대략 6 mL 부피로 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 2M 수성 나트륨 하이드록사이드(40 mL) 내에서 2시간 동안 교반시켰다. 이후 메틸렌 클로라이드(40 mL)를 첨가하고, 혼합물을 15분 동안 교반시켰다. 수성 층을 분리시키고, 메틸렌 클로라이드(2 × 50 mL)로 추출하였다. 합친 유기 추출물을 염수(100 mL)로 세척하고, 황산 나트륨 상에서 건조시켰다. 건조제를 여과하여 제거하였다. 여액을 감압 하에서 농축시켜 62% 수율(1.01 g)의 131a를 백색 고체로서 수득하였다: mp 110-112℃; 1H NMR(300 MHz, CDCl3) 6.68(s, 1H), 4.87(s, 2H), 4.28(t, 2H, J = 5.4 Hz), 4.20(t, 2H, J = 5.1 Hz); MS(ESI+) m/z 170.0(M+H).
실시예 131b 6,7-다이하이드로-4H-피라졸로[5,1-c][1,4]옥사진-2-아민 131b
500-mL 파르 수소화 용기를 질소로 퍼지시키고, 131a(1.01 g, 5.92 mmol), 탄소 상의 10% 팔라듐(50% 습윤, 125 mg 건조 중량) 및 에탄올(50 mL)로 충전하였다. 용기를 진공배기하고, 수소 가스로 25 psi의 압력으로 충전하고, 2시간 동안 파르 수소화 기구로 진탕시켰다. 이후 수소를 진공배기하고, 질소를 용기에 충전시켰다. 촉매를 셀라이트® 521의 패드를 통해 여과하여 제거하고, 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 생성 잔사를 400 cc의 실리카겔을 사용하고, 메틸렌 클로라이드 중의 3% 메탄올로 용리되는 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 분획을 감압 하에서 농축시킨 후 수집하여 73% 수율(601 mg)의 131b를 황색 고체로서 수득하였다: mp 74-76℃ 1H NMR(300 MHz, CDCl3) d 5.37(s, 1H), 4.72(s, 2H), 4.07(t, 2H, J = 5.1 Hz), 3.98(t, 2H, J = 5.1 Hz), 3.57(br s, 2H); MS(ESI+) m/z 140.4(M+H).
실시예 131c 5-브로모-3-(6,7-다이하이드로-4H-피라졸로[5,1-c][1,4]옥사진-2-일아미노)-1-메틸피리딘-2(1H)-온 131c
마그네틱 교반기, 환류 응축기 및 질소 주입구로 장착된 50-mL 3-목 환저 플라스크를 1,4-다이옥산(20 mL), 131b(600 mg, 4.31 mmol), 3,5-다이브로모-1-메틸 피리딘-2(1H)-온(1.44 g, 5.40 mmol) 및 세슘 카보네이트(3.08 g, 9.48 mmol)로 충전하였다. 30분 동안 생성 혼합물에 질소를 버블링시킨 후 잔트포스(300 mg, 0.52 mmol) 및 트리스(다이벤질리덴아세톤)다이팔라듐(0)(320 mg, 0.35 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 2시간 동안 환류가열하였다. 이후 반응물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트(75 mL) 및 물(75 mL)로 분리시키고, 여과시켰다. 수성 층을 분리시키고, 에틸 아세테이트(2 × 25 mL)로 추출하였다. 유기 층을 합치고, 염수(50 mL)로 세척하고, 황산 나트륨 상에서 건조시켰다. 건조제를 여과하여 제거하고, 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 생성 잔사를 500 cc의 실리카겔을 이용하고 메틸렌 클로라이드 중의 1% 메탄올로 용리되는 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 분획을 감압 하에서 농축시킨 후, 수집하여 31% 수율(433 mg)의 131c를 녹색 고체로서 수득하였다: mp 195-197℃; 1H NMR(300 MHz, CDCl3) 7.92(d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.44(s, 1H), 6.90(d, 1H, J = 2.4 Hz), 5.65(s, 1H), 4.80(s, 2H), 4.13(s, 2H), 3.61(s, 5H); MS(ESI+) m/z 324.9(M+H).
실시예 131d 3-(6,7-다이하이드로-4H-피라졸로[5,1-c][1,4]옥사진-2-일아미노)-1-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)피리딘-2(1H)-온 131d
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 250-mL 환저 플라스크를 131c(1.3 g, 4.0 mmol), 비스(피나콜라토)다이보론(2.03 g, 8.0 mmol), PdCl2(dppf) (439 mg, 0.60 mmol), 칼륨 아세테이트(784 mg, 8.0 mmol), 및 1,4-다이옥산(60 mL)의 혼합물로 충전하였다. 혼합물에 질소를 30분 동안 버블링시킨 후, 이를 15시간 동안 환류 가열하였다. 반응이 끝날 때까지 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 고체를 에틸 아세테이트(100 mL)로 세척하였다. 합친 여액을 감압 하에서 진공제거하고, 잔사를 30:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 131d(446 mg, 30%)를 수득하였다. MS: [M+H]+ 373.
실시예 131e 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(5-(6,7-다이하이드로-4H-피라졸로[5,1-c][1,4]옥사진-2-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)니코틴알데하이드 131e
Figure pct00064
환류 응축기가 장착된 50-mL 환저 플라스크를 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-클로로니코틴알데하이드 103b(216 mg, 1 당량, 0.60 mmol), 131d(446 mg, 2 당량, 1.2 mmol), Pd2(dba)3(55 mg, 0.1 당량, 0.060 mmol), Cy3P(67 mg, 0.4 당량, 0.24 mmol), Cs2CO3(395 mg, 2 당량, 1.2 mmol), 물(0.5 mL), 및 다이옥산(10 mL)으로 충전하였다. 진공/N2 플러슁을 3회 반복한 후, 반응 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 증발시키고, 생성 잔사를 4:1 석유 에터/에틸 아세테이트로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 131e(272 mg, 80%)를 갈색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 569.8
실시예 131 6-3급-부틸-2-[4-[5-(6,7-다이하이드로-4H-피라졸로[5,1-c][1,4]옥사진-2-일아미노)-1-메틸-6-옥소-3-피리딜]-3-(하이드록시메틸)-2-피리딜]-8-플루오로-프탈라진-1-온 131
마그네틱 교반기가 장착된 50-mL 단일-목 환저 플라스크를 131e(220 mg, 1.0 당량, 0.39 mmol), NaBH4(73 mg, 5.0 당량, 1.90 mmol), 및 메탄올(10 mL)로 충전하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시키고, 물(5 mL)로 켄칭하였다. 이후 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 다이클로로메탄(3 × 10 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 131(105 mg, 47%)을 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 571.8. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 8.66(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.35(d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.03(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.59-7.53(m, 4H), 7.48(s, 1H), 5.73(s, 1H), 4.81(s, 2H), 4.51(bs, 2H), 4.12-4.05(m, 오버랩, 5H), 3.73(s, 3H), 1.46(s, 9H).
실시예 132a (R)-(6-아미노피리딘-3-일)(3-메틸모폴리노)메탄온 132a
에탄올(25 mL) 중의 (R)-3-메틸모폴린(2.02 g, 20 mmol)의 용액에 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필) 카보다이이미드(EDCI)(3.33 g, 17.4 mmol), 하이드록시벤조트라이아졸(HOBt)(2.35 g, 17.4 mmol), 및 6-아미노니코틴산(2.0 g, 14.5 mmol)을 첨가하였다. 18시간 동안 실온에서 교반시킨 후, 반응 현탁액을 여과시키고, 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 3:1 에틸 아세테이트/석유 에터로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 132a를 백색 고체(1.6 g, 36%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 222.3.
실시예 132b (R)-5-브로모-1-메틸-3-(5-(3-메틸모폴린-4-카보닐)피리딘-2-일아미노)피리딘-2(1H)-온 132b
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 132a(332 mg, 1.5 mmol), 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온(H-001) (480 mg, 1.8 mmol), 및 세슘 카보네이트(978 mg, 3.0 mmol)로 충전하였다. 현탁액에 질소를 3분 동안 버블링시킨 후, 잔트포스(87 mg, 0.15 mmol) 및 트리스(다이벤질리덴아세톤)다이팔라듐(0)(69 mg, 0.075 mmol)을 첨가하였다. 시스템에 진공/아르곤을 3회 플러싱하고, 2.5시간 동안 환류 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 고체를 다이클로로메탄(2 × 50 mL)으로 세척하고, 합친 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 석유 에터/에틸 아세테이트(2:1 내지 1:2)로 용리하여 132b(430 mg, 70%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 407.3
실시예 132c (R)-1-메틸-5-(5-(3-메틸모폴린-4-카보닐)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일보론산 132c
Figure pct00065
환류 응축기가 장착된 100-mL 환저 플라스크를 132b(580 mg. 1.42 mmol), 비스(피나콜라토)다이보론(1.2 g, 4.5 mmol), Pd2(dba)3(137 mg, 0.15 mmol), X-phos(71 mg, 0.15 mmol), 칼륨 아세테이트(294 mg, 3.0 mmol), 및 1,4-다이옥산(20 mL)으로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 70℃에서 2시간 동안 가열하였다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 석유 에터로 세척하여 132c(500 mg, 94%)를 백색 고체로서 수득하였다, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS-ESI: [M+H]+ 373.1
실시예 132d (R)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-5-(5-(3-메틸모폴린-4-카보닐)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)니코틴알데하이드 132d
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 25-mL 단일-목 환저 플라스크를 132c(260 mg, 0.70 mmol), 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-클로로니코틴-알데하이드103 b(180 mg, 0.50 mmol), K3PO4(297 mg, 1.4 mmol), 나트륨 아세테이트(114 mg, 1.4 mmol), 1,1'-비스(다이페닐포스피노)페로센다이클로로팔라듐(II)(57 mg, 0.070 mmol), 및 아세토나이트릴/물(10/0.2 mL)로 충전하였다. 진공/N2 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 1.5 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 LCMS로 분석하여 목적 생성물로 완전히 전환되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 다이클로로메탄(20 mL) 및 물(20 mL)로 희석시켰다. 수성 층을 분리시키고, 다이클로로메탄(3 × 20 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 어두운 잔사를 60:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 132d(120 mg, 37%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 652.3
실시예 132 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[1-메틸-5-[[5-[(3R)-3-메틸모폴린-4-카보닐]-2-피리딜]아미노]-6-옥소-3-피리딜]-2-피리딜]프탈라진-1-온 132
메탄올/다이클로로메탄(4/4 mL) 중의 132d(120 mg, 0.18 mmol)의 용액에 NaBH4(15 mg, 0.60 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시키고 물(2 mL)로 켄칭하였다. 이를 이후 감압 하에서 증발시키고, 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 132(60 mg, 50%)를 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 654.3. 1H NMR(500 MHz, MeOD-d4) δ 8.94(d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.61(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.51(d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.35(d, J = 2.0 Hz, 1H) 7.88(d, J = 1.5 Hz,
1H), 7.75(d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.72-7.69(m, 1H), 7.65(d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.61(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.13(d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.62-4.58(m, 2H), 4.36-4.31(m, 1H), 3.61-3.84(m, 2H), 3.71-3.67(m, 오버랩, 5H), 3.56-3.47(m, 2H), 1.47(s, 9H), 1.39(d, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 133a 5-(2-메톡시에틸)-2-나이트로-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진 133a
Figure pct00066
아세토나이트릴(10 mL) 중의 2-나이트로-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진 124d(190 mg, 1.13 mmol)의 용액에 K2CO3(311.9 mg, 2.26 mmol) 및 1-브로모-2-메톡시에탄(188.3 mg, 1.36 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 17 시간 동안 마이크로파 조사하에서 가열하였다. 반응 혼합물을 LCMS로 분석하여 목적 생성물로 완전히 전환되었음을 나타내었다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시켜서 133a를 백색 고체로서 수득하였다(230 mg, 90%), 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS-ESI: [M+H]+ 227.0
실시예 133b 5-(2-메톡시에틸)-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-아민 133b
메탄올(10mL) 중의 133a(286 mg, 1.26 mmol)의 용액을 Pd/C(28.6 mg)에 첨가하였다. 시스템을 진공배기한 후, H2로 재충전하였다. 실온에서 2시간 동안 교반시킨 후, 혼합물을 여과하여 없앴다. 여과액을 감압 하에서 농축시켜서 133b를 황색 고체(240 mg, 97%)로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS-ESI: [M+H]+ 197.0
실시예 133c 5-브로모-3-(5-(2-메톡시에틸)-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-일아미노)-1-메틸피리딘-2(1H)-온 133c
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 환저 플라스크를 133b(230 mg, 1.17 mmol), 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온(468.4 mg, 1.76 mmol), Pd2(dba)3(53.5 mg, 0.0585 mmol), 잔트포스(67.6 mg, 0.117 mmol), Cs2CO3(762.8 mg, 2.34 mmol), 및 다이옥산(20 mL)으로 충전하였다. 진공/N2 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 LCMS로 분석하여 목적 생성물로 완전히 전환되었음을 나타내었다. 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 40:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 133c를 어두운 색 고체(380 mg, 85%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 382.2
실시예 133d 3-(5-(2-메톡시에틸)-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-일아미노)-1-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)피리딘-2(1H)-온 133d
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 50-mL 단일-목 환저 플라스크를 133c(330 mg, 0.86 mmol), Pin2B2(329mg, 1.30 mmol), Pd2(dba)3(40 mg, 0.043 mmol), X-phos(41 mg, 0.086 mmol), 칼륨 아세테이트(169 mg, 1.726 mmol), 및 다이옥산(10 mL)으로 충전하였다. 진공/N2 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 70℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 LCMS로 분석하여 목적 생성물로 완전히 전환되었음을 나타내었다. 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 석유 에터로 세척하여 133d를 어두운 색 오일(240 mg, 80%)로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS-ESI: [M+H]+ 348.3
실시예 133e 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(5-(5-(2-메톡시에틸)-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)니코틴알데하이드 133e
환류 응축기가 장착된 25-mL 환저 플라스크를 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-클로로니코틴알데하이드 103b(100 mg, 0.28 mmol), 133d(144.4 mg, 0.42 mmol), Pd(dppf)Cl2(11.3 mg, 0.0139 mmol), K3PO4(117.8 mg, 0.556 mmol), 나트륨 아세테이트(45.6 mg, 0.556 mmol), 아세토나이트릴(10 mL), 및 물(3 방울)로 충전하였다. 진공/N2 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 N2 보호 하에서 가열하였다. 반응 혼합물을 LCMS로 분석하여 목적 생성물로 완전히 전환되었음을 나타내었다. 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 40:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 133e를 황색 고체(140 mg, 80%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 627.3
실시예 133 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[5-[[5-(2-메톡시에틸)-6,7-다이하이드로-4H-피라졸로[1,5-a]피라진-2-일]아미노]-1-메틸-6-옥소-3-피리딜]-2-피리딜]프탈라진-1-온 133
다이클로로메탄(5 mL) 및 메탄올(5 mL) 중의 133e(180 mg, 0.287 mmol)의 용액에 NaBH4(21.7 mg, 0.574 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 1시간 동안 교반시킨 후, 이를 수성 NH4Cl(5 mL)로 켄칭하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 다이클로로메탄(3 × 20 mL)으로 추출하였다 합친 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축시키고, 역상 분취용-HPLC로 정제하여 133(50 mg, 27%)을 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 629.3. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 8.57(d, J = 5.5 Hz, 1H), 8.54(d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.22(s, 1H), 8.04(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.90(d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.78(dd, J = 1.5, 13.5 Hz, 1H), 7.51(d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.39(d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.89(s, 1H), 4.90-4.88(m, 1H), 4.42(s, 2H), 3.92(t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.61(s, 2H), 3.59(s, 3H), 3.50(t, J = 5.0 Hz, 2H), 3.25(s, 3H), 2.90(t, J = 5.5 Hz, 2H), 2.67(t, J = 5.0 Hz, 2H), 1.40(s, 9H).
실시예 134a 2-나이트로-5-(2,2,2-트라이플루오로에틸)-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진 134a
Figure pct00067
마그네틱 교반기가 장착된 밀폐된 튜브를 1-(2-브로모에틸)-5-(브로모메틸)-3-나이트로-1H-피라졸 124c(632 mg, 2.0 mmol), 2,2,2-트라이플루오로에탄아민(594 mg, 6.0 mmol), 및 DMSO(5 mL)로 충전하고, 120℃에서 2시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물(20 mL)로 희석시켰다. 생성 혼합물을 에틸 아세테이트(3 × 20 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 건조시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 50:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 134a(392 mg, 78%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 250.9
실시예 134b 5-(2,2,2-트라이플루오로에틸)-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-아민 134b
에탄올(20 mL) 중의 134a(390 mg, 1.56 mmol)의 용액에 Pd/C(약 200 mg)를 첨가하였다. 반응물을 수소 가스로 충전(벌룬을 통해)하고, 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 셀라이트® 플러그를 통해 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시켜서 134b를 황색 고체(308 mg, 90%)로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS-ESI: [M+H]+ 221.1
실시예 134c 5-브로모-1-메틸-3-(5-(2,2,2-트라이플루오로에틸)-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-일아미노)피리딘-2(1H)-온 134c
환류 응축기가 장착된 100-mL 환저 플라스크를 134b(300 mg, 1.36 mmol), 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온(364 mg, 1.36 mmol), 세슘 카보네이트(887 mg, 2.7 mmol), 및 1,4-다이옥산(20 mL)으로 충전하였다. 현탁액에 질소를 10분 동안 버블링시킨 후, 잔트포스(78 mg, 0.136 mmol) 및 Pd2(dba)3(62 mg, 0.068 mmol)를 첨가하였다. 시스템에 진공/아르곤을 3회 플러싱하고, 5시간 동안 환류 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 고체를 다이클로로메탄(30 mL)으로 세척하였다. 합친 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 고체 잔사를 다이클로로메탄/메탄올(80/1 내지 30/1)로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 134c(420 mg, 76%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 406.0
실시예 134d 1-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)-3-(5-(2,2,2-트라이플루오로-에틸)-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-일아미노)피리딘-2(1H)-온 134d
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 50-mL 단일-목 환저 플라스크를 134c(400 mg, 0.98 mmol), Pin2B2(750 mg, 2.96 mmol), Pd2(dba)3(45 mg, 0.05 mmol), x-phos(48 mg, 0.1 mmol), 칼륨 아세테이트(294 mg, 3.0 mmol), 및 1,4-다이옥산(15 mL)으로 충전하였다. 반응 혼합물을 진공/아르곤으로 3회 플러슁 하고, 65℃에서 3시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 생성 잔사를 석유 에터로 세척하여 134d(400 mg, 90%)를 갈색 고체로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS-ESI: [M+H]+ 453.9
실시예 134e 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-6-옥소-5-(5-(2,2,2-트라이플루오로에틸)-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-일아미노)-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)니코틴알데하이드 134e
환류 응축기가 장착된 25-mL 환저 플라스크를 134d(200 mg, 0.44 mmol), 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-클로로니코틴알데하이드 103b(159 mg, 0.44 mmol), K3PO4(186 mg, 0.88 mmol), 나트륨 아세테이트(72 mg, 0.88 mmol), 1,1'-비스(다이페닐포스피노)페로센다이클로로팔라듐(II)(16 mg, 0.022 mmol), 및 아세토나이트릴/물(8/0.2 mL)로 충전하였다. 진공/N2 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 N2 보호 하에서 가열하였다. 반응 혼합물을 LCMS로 분석하여 목적 생성물로 완전히 전환되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 다이클로로메탄(30 mL) 및 물(15 mL)로 희석시켰다. 물 층을 분리시키고, 다이클로로메탄(2 × 15 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 어두운 잔사를 다이클로로메탄/메탄올(80/1 내지 30/1)로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 134e(128 mg, 45%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 651.3
실시예 134 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[1-메틸-6-옥소-5-[[5-(2,2,2-트라이플루오로에틸)-6,7-다이하이드로-4H-피라졸로[1,5-a]피라진-2-일]아미노]-3-피리딜]-2-피리딜]프탈라진-1-온 134
메탄올/다이클로로메탄(4/4 mL) 중의 134e(110 mg, 0.169 mmol)의 용액에 NaBH4(19 mg, 0.51 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반시킨 후, LCMS가 반응이 완료되었음을 나타내었다. 혼합물을 물(20 mL)로 켄칭하고, 다이클로로메탄(3 × 30 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 134(50 mg, 45%)를 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 653.3. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 8.66(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.35(d, J = 2.5 Hz s, 1H), 8.00(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.59-7.58(m, 1H), 7.56-7.55(m, 1H), 7.53-7.52(m, 2H), 7.45(s, 1H), 5.73(s, 1H), 4.51-4.49(m, 2H), 4.11-4.08(m, 2H), 4.05-4.03(m, 1H), 3.94(s, 2H), 3.73(s, 3H), 3.24-3.18(m, 4H), 1.45(s, 9H).
실시예 135a 5-(2,2-다이플루오로에틸)-2-나이트로-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진 135a
Figure pct00068
마그네틱 교반기가 장착된 밀폐된 튜브를 1-(2-브로모에틸)-5-(브로모메틸)-3-나이트로-1H-피라졸 124c(632 mg, 2.0 mmol), 2,2-다이플루오로에탄아민(486 mg, 6.0 mmol), 및 DMSO(5 mL)로 충전하였다. 이를 120℃에서 2시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물(20 mL)로 희석시켰다. 생성 혼합물을 에틸 아세테이트(3 × 20 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 건조시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 50:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 135a(371 mg, 80%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 233.2
실시예 135b 5-(2,2-다이플루오로에틸)-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-아민 135b
에탄올(20 mL) 중의 135a(370 mg, 1.59 mmol)의 용액에 Pd/C(약 200 mg)를 첨가하였다. 반응물을 수소 가스로 충전(벌룬을 통해)하고, 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 셀라이트® 플러그를 통해 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시켜 135b를 황색 고체(293 mg, 91%)로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS-ESI: [M+H]+ 203.2
실시예 135c 5-브로모-3-(5-(2,2-다이플루오로에틸)-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-일아미노)-1-메틸피리딘-2(1H)-온 135c
환류 응축기가 장착된 50-mL 환저 플라스크를 135b(290 mg, 1.43 mmol), 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온(383 mg, 1.43 mmol), 세슘 카보네이트(932 mg, 2.86 mmol), 및 1,4-다이옥산(20 mL)으로 충전하였다. 현탁액에 질소를 10분 동안 버블링시킨 후, 잔트포스(82 mg, 0.143 mmol) 및 Pd2(dba)3(65 mg, 0.072 mmol)를 첨가하였다. 시스템에 진공/아르곤을 3회 플러싱하고, 5시간 동안 환류 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 고체를 다이클로로메탄(30 mL)으로 세척하였다. 합친 유기 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 다이클로로메탄/메탄올(80/1 내지 30/1)로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 135c(400 mg, 72%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 387.8
실시예 135d 3-(5-(2,2-다이플루오로에틸)-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-일아미노)-1-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)피리딘-2(1H)-온 135d
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 50-mL 단일-목 환저 플라스크를 135c(400 mg, 1.03 mmol), Pin2B2(785 mg, 3.1 mmol), Pd2(dba)3(45 mg, 0.050 mmol), X-phos(48 mg, 0.10 mmol), 칼륨 아세테이트(294 mg, 3.0 mmol), 및 1,4-다이옥산(20 mL)으로 충전하였다. 반응 혼합물을 진공/아르곤으로 3회 플러슁 하고, 65℃에서 3시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 생성 잔사를 석유 에터로 세척하여 135d(412 mg, 92%)를 갈색 고체로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS-ESI: [M+H]+ 436.0
실시예 135e 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(5-(5-(2,2-다이플루오로에틸)-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)니코틴알데하이드 135e
환류 응축기가 장착된 25-mL 환저 플라스크를 135d(200 mg, 0.46 mmol), 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-클로로니코틴알데하이드 103b(166 mg, 0.46 mmol), K3PO4(195 mg, 0.92 mmol), 나트륨 아세테이트(75 mg, 0.92 mmol), 1,1'-비스(다이페닐포스피노)페로센다이클로로팔라듐(II)(17 mg, 0.023 mmol), 및 아세토나이트릴/물(8/0.2 mL)로 충전하였다. 진공/N2 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 LCMS로 분석하여 목적 생성물로 완전히 전환되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 다이클로로메탄(30 mL) 및 물(15 mL)로 희석시켰다. 물 층을 다이클로로메탄(2 × 15 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 어두운 잔사를 다이클로로메탄/메탄올(80/1 내지 30/1)로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 135e(110 mg, 38%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 633.3
실시예 135 6-3급-부틸-2-[4-[5-[[5-(2,2-다이플루오로에틸)-6,7-다이하이드로-4H-피라졸로[1,5-a]피라진-2-일]아미노]-1-메틸-6-옥소-3-피리딜]-3-(하이드록시메틸)-2-피리딜]-8-플루오로-프탈라진-1-온 135
메탄올/다이클로로메탄(4/4 mL) 중의 135e(100 mg, 0.158 mmol)의 용액에 NaBH4(18 mg, 0.475 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반시킨 후, LCMS가 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 물(20 mL)로 켄칭하고, 다이클로로메탄(3 × 20 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(20 mL)로 세척하고 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 135(60 mg, 60%)를 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 635.3. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 8.66(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.35(d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.00(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.59-7.58(m, 1H), 7.56-7.55(m, 1H), 7.53-7.52(m, 2H), 7.45(s, 1H), 6.07-5.83(m, 1H), 5.72(s, 1H), 4.51-4.49(m, 2H), 4.11-4.08(m, 2H), 4.05-4.03(m, 1H), 3.94(s, 2H), 3.73(s, 3H), 3.13-3.10(m, 2H), 3.00-2.94(m, 2H), 1.45(s, 9H).
실시예 136a (S)-(6-아미노피리딘-3-일)(3-메틸모폴리노)메탄온 136a
에탄올(20 mL) 중의 (S)-3-메틸모폴린(1.5 g, 15.0 mmol)의 용액에 EDCI(3.33 g, 17.4 mmol), HOBt(2.35 g, 17.4 mmol), 및 6-아미노니코틴산(2.07 g, 15.0 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 18시간 동안 교반시킨 후, 생성 현탁액을 여과시켰다. 2:1 석유 에터/에틸 아세테이트 내지 에틸 아세테이트 단독으로 용리되는 고체 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 136a(1.0 g, 30%)를 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: 222.3(M+H)+.
실시예 136b (S)-5-브로모-1-메틸-3-(5-(3-메틸모폴린-4-카보닐)피리딘-2-일아미노)피리딘-2(1H)-온 136b
Figure pct00069
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 50-mL 단일-목 환저 플라스크를 136a(222 mg, 1.0 mmol), 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온(320 mg, 1.2 mmol), 세슘 카보네이트(652 mg, 2 mmol), 및 1,4-다이옥산(10 mL)으로 충전하였다. 현탁액에 질소를 10분 동안 버블링시킨 후, 잔트포스(58 mg, 0.10 mmol) 및 트리스(다이벤질리덴아세톤)다이팔라듐(0)(46 mg, 0.050 mmol)을 첨가하였다. 시스템에 진공/아르곤을 3회 플러싱하고, 2.5시간 동안 환류 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 고체를 다이클로로메탄(2 × 30 mL)으로 세척하고, 합친 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 석유 에터/에틸 아세테이트(2:1 내지 1:2)로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 136b(280 mg, 69%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 407.3
실시예 136c (S)-1-메틸-5-(5-(3-메틸모폴린-4-카보닐)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일보론산 136c
환류 응축기가 장착된 100-mL 환저 플라스크를 136b(600 mg, 1.5 mmol), 비스(피나콜라토)다이보론(1.2 g, 4.5 mmol), Pd2(dba)3(137 mg, 0.15 mmol), X-phos(71 mg, 0.15 mmol), 칼륨 아세테이트(294 mg, 3.0 mmol), 및 1,4-다이옥산(20 mL)으로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 70℃에서 2시간 동안 가열하였다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 석유 에터로 세척하여 136c(520 mg, 93%)를 백색 고체로서 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 직접 사용하였다. MS-ESI: [M+H]+ 373.1
실시예 136d (S)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-5-(5-(3-메틸모폴린-4-카보닐)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)니코틴알데하이드 136d
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 136c(260 mg, 0.70 mmol), 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-클로로니코틴알데하이드 103b(180 mg, 0.50 mmol), K3PO4(297 mg, 1.4 mmol), 나트륨 아세테이트(114 mg, 1.4 mmol), 1,1'-비스(다이페닐포스피노) 페로센다이클로로팔라듐(II)(57 mg, 0.07 mmol), 및 아세토나이트릴/물(10/0.2 mL)로 충전하였다. 진공/N2 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 1.5시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 LCMS로 분석하여 목적 생성물로 완전히 전환되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 다이클로로메탄(20 mL) 및 물(10 mL)로 희석시켰다. 수성 층을 분리시키고, 다이클로로메탄(3 × 20 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 어두운 잔사를 60:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 136d(140 mg, 43%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 652.3
실시예 136 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[1-메틸-5-[[5-[(3S)-3-메틸모폴린-4-카보닐]-2-피리딜]아미노]-6-옥소-3-피리딜]-2-피리딜]프탈라진-1-온 136
메탄올/다이클로로메탄(4/4 mL) 중의 136d(140 mg, 0.21 mmol)의 용액에 NaBH4(16 mg, 0.63 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시키고, 물(2 mL)로 켄칭하였다. 이를 이후 감압 하에서 증발시키고, 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 136(40 mg, 28%)을 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H] + 654.3. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 9.00(s, 1H), 8.77(d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.57(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.53(d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.25(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.90(d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.78(d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.65-7.63(m, 1H), 7.59(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.53(d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.37(d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.91-4.89(m, 1H), 4.45-4.39(m, 2H), 4.17-4.13(m, 1H), 3.79-3.67(m, 2H), 3.58-3.53(m, 오버랩, 5H), 3.41-3.36(m, 1H), 3.29-3.25(m, 1H), 1.39(s, 9H), 1.22(d, J =7.5 Hz, 3H).
실시예 138a (S)-3급-부틸 4-(6-(5-클로로-2-메톡시피리딘-3-일아미노)피리딘-3-일)-3-메틸피페라진-1-카복실레이트 138a
Figure pct00070
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 1,4-다이옥산(40 mL), (S)-3급-부틸 4-(6-아미노 피리딘-3-일)-3-메틸피페라진-1-카복실레이트 105b(2.04 g, 7.0 mmol), 3-브로모-5-클로로-2-메톡시피리딘(2.8 g, 12.6 mmol), Pd2(dba)3(640 mg, 0.70 mmol), 잔트포스(404.6 mg, 0.70 mmol), 및 세슘 카보네이트(4.56 g, 14.0 mmol)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 4시간 동안 가열하였다. 이후 반응물을 실온으로 냉각시켰다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 1:3 에틸 아세테이트/석유 에터로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 138a(1.7 g, 57%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 434.2
실시예 138b (S)-5-클로로-3-(5-(2-메틸피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)피리딘-2(1H)-온 138b
다이옥산/HCl(30 mL) 중의 138a(1.0 g, 2.3 mmol)의 용액을 100℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 이를 이후 감압 하에서 증발시켜서 138b(1.48 g, 조물질)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 320.3
실시예 138c (S)-5-클로로-3-(5-(2-메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노) 피리딘-2(1H)-온 138c
Figure pct00071
메탄올(35 mL) 중의 138b(1.0 g, 3.1 mmol)의 용액에 옥세탄-3-온(669.6 mg, 9.3 mmol), NaBH3CN(585.9 mg, 9.3 mmol), 및 ZnCl2(1.26 g, 9.3 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 30℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 감압 하에서 증발시키고, 잔사를 물(20 mL)로 희석시켰다. 이후 이를 다이클로로메탄(3 × 30 mL)으로 추출하였다. 합친 다이클로로메탄 추출물을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 40:1 에틸 아세테이트/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 138c(291 mg, 25%)를 적색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 376.3
실시예 138 (S)-6-3급-부틸-8-플루오로-2-(3-(하이드록시메틸)-4-(5-(5-(2-메틸-4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-2-일) 프탈라진-1(2H)-온 138
마그네틱 교반기가 장착된 밀폐된 튜브를 138c(150 mg, 0.40 mmol), 3-(아세톡시메틸)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1- 옥소프탈라진-2(1H)-일)피리딘-4-일보론산 116c(495.6 mg, 1.2 mmol), Pd2(dba)3(36.6 mg, 0.040 mmol), P(cy)3(44.6 mg, 0.16 mmol), Cs2CO3(391.2 mg, 1.2 mmol), 다이옥산(8 mL), 및 물(0.2 mL)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 120℃에서 4시간 동안 가열하였다. 이후 반응물을 실온으로 냉각시켰다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 40:1 에틸 아세테이트/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 및 추가로 역상 분취용-HPLC로 정제하여 138(48 mg, 18%)을 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 667.3. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 12.05(s, 1H), 8.65(d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.57(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.55(d, J = 3.0 Hz, 1H), 8.44(s, 1H), 7.91(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.87(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.79(dd, J = 1.0 Hz, 13.0 Hz, 1H), 7.54(d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.39(dd, J = 2.5 Hz, 9.0 Hz, 1H), 7.26-7.23(m, 2H), 4.97-4.95(m, 1H), 4.58-4.54(m, 2H), 4.48-4.46(m, 1H), 4.43-4.41(m, 1H), 4.38-4.37(m, 2H), 3.69-3.68(m, 1H), 3.41-3.39(m, 1H), 3.11-3.09(m, 1H), 2.97-2.93(m, 1H), 2.56-2.54(m, 1H), 2.35-2.32(m, 2H), 2.21-2.17(m, 1H), 1.40(s, 9H), 0.94(d, J = 6.5 Hz, 3H),
실시예 139a (3-나이트로-1H-피라졸-5-일)메탄올 139a
Figure pct00072
3-나이트로-1H-피라졸-5-카복실산(4.71 g, 30 mmol), BH3/THF(75 mL, 1 mol/L, 75 mmol)의 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 4M HCl(19 mL, 75 mmol)을 첨가하였다. 이를 70℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 에틸 아세테이트 및 염수(100:100 mL)로 분배하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트(4 × 50 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 석유 에터/에틸 아세테이트로 용리(5:1 내지 1:1)하여 139a(3.5 g, 79%)를 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 144.2
실시예 139b 1-(5-(하이드록시메틸)-3-나이트로-1H-피라졸-1-일)-2-메틸프로판-2-올 139b
밀폐된 튜브를 139a(2.145 g, 15 mmol), Cs2CO3(978 mg, 3.0 mmol), 및 2,2-다이메틸옥시란(15 mL)으로 충전하였다. 혼합물을 70℃에서 3시간 동안 교반시켰다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 석유 에터/에틸 아세테이트(5:1 내지 1:1)로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 139b(1.2 g, 38%)를 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 216.2
실시예 139c 6,6-다이메틸-2-나이트로-6,7-다이하이드로-4H-피라졸로[5,1-c][1,4]옥사진 139c
DMF(10 mL) 중의 139b(1.1 g, 5.1 mmol)의 용액에, NaH(미네랄 오일 중 60 % 현탁액, 246 mg, 6.14 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 생성 현탁액을 30분 동안 교반시킨 후, p-톨루엔설포닐 클로라이드(1169 mg, 6.14 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 밤새 교반시켰다. 실온으로 냉각시킨 후, 포화 암모늄 클로라이드 용액을 첨가하고, 혼합물을 다이클로로메탄으로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 석유 에터/에틸 아세테이트 구배(9:1 내지 2:1)로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 139c(228 mg, 22%)를 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 198.3
실시예 139d 6,6-다이메틸-6,7-다이하이드로-4H-피라졸로[5,1-c][1,4]옥사진-2-아민 139d
50-mL 단일-목 환저 플라스크를 질소로 퍼지시키고, 139c(0.21 g, 1.25 mmol), 탄소 상의 10% 팔라듐(50% 습윤, 125 mg), 및 메탄올(10 mL)로 충전시켰다. 혼합물을 진공배기하고, 수소 가스로 충전하고, 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 이후 수소를 진공배기하고, 질소를 플라스크 내로 충전하였다. 촉매를 셀라이트® 패드를 통해 여과하여 제거하고, 여액을 감압 하에서 농축시켜 139d(167 mg, 93%)를 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 168.1
실시예 139e 5-브로모-3-(6,6-다이메틸-6,7-다이하이드로-4H-피라졸로[5,1-c][1,4]옥사진-2-일아미노)-1-메틸피리딘-2(1H)-온 139e
환류 응축기가 장착된 100-mL 환저 플라스크를 1,4-다이옥산(10 mL), 139d(167 mg, 1.0 mmol), 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온(320 mg, 1.2 mmol), Pd2(dba)3(91 mg, 0.10 mmol), 잔트포스(116 mg, 0.20 mmol), 및 세슘 카보네이트(652 mg, 2.0 mmol)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 가열하였다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 100:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 139e(210 mg, 60%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 352.9
실시예 139f (2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(5-(6,6-다이메틸-6,7-다이하이드로-4H-피라졸로[5,1-c][1,4]옥사진-2-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 139f
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 25-mL 단일-목 환저 플라스크를 139e(177 mg, 0.50 mmol), 3-(아세톡시메틸)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피리딘-4-일보론산 116c(207 mg, 0.50 mmol), Pd(dppf)Cl2(41 mg, 0.050 mmol), 나트륨 아세테이트(82 mg, 1.0 mmol), K3PO4.3수화물(266 mg, 1.0 mmol), 물(6 방울), 및 아세토나이트릴(5 mL)로 충전시켰다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 가열하였다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 50:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 139f(161 mg, 50%)를 갈색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 642.3
실시예 139 6-3급-부틸-2-[4-[5-[(6,6-다이메틸-4,7-다이하이드로피라졸로[5,1-c][1,4]옥사진-2-일)아미노]-1-메틸-6-옥소-3-피리딜]-3-(하이드록시메틸)-2-피리딜]-8-플루오로-프탈라진-1-온 139
i-프로판올/THF(1:1, 4 mL) 및 물(1 mL) 중의 139f(160 mg, 0.25 mmol) 및 리튬 하이드록사이드(60 mg, 2.5 mmol)의 혼합물을 30℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 감압 하에서 증발시키고, 잔사를 물(5 mL)로 희석시켰다. 이후 이를 에틸 아세테이트(3 × 10 mL)로 추출하였다. 합친 에틸 아세테이트 추출물을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 139(60 mg, 40%)를 밝은 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 599.8. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 8.57(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.54(d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.34(s, 1H), 8.08(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.90(d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.79-7.76(m, 1H), 7.51(d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.39(d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.95(s, 1H), 4.92(bs, 1H), 4.73(s, 2H), 4.42(s, 2H), 3.80(s, 2H), 3.60(s, 3H), 1.40(s, 9H), 1.26(s, 6H).
실시예 140a 5-브로모-1-메틸-3-(1-메틸-1H-피라졸-3-일아미노)피리딘-2(1H)-온 140a
Figure pct00073
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 250-mL 단일-목 환저 플라스크를 1,4-다이옥산(100 mL), 1-메틸-1H-피라졸-3-아민(970 mg, 10.0 mmol), 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2-(1H)-온(2.9 g, 11 mmol), 및 세슘 카보네이트(6.5 g, 20.0 mmol)로 충전하였다. 현탁액에 질소를 10분 동안 버블링시킨 후, 트리스(다이벤질리덴아세톤)다이팔라듐(0)(457 mg, 0.50 mmol) 및 잔트포스(587 mg, 1.0 mmol)를 첨가하였다. 시스템에 진공/아르곤을 3회 플러싱하고, 2시간 동안 환류 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 고체를 다이클로로메탄(2 × 50 mL)으로 세척하고, 합친 유기 여액을 농축시켰다. 잔사를 30:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 140a를 황색 고체(900 mg, 32%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 283.1
실시예 140b 1-메틸-3-(1-메틸-1H-피라졸-3-일아미노)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)피리딘-2(1H)-온 140b
환류 응축기가 장착된 100-mL 환저 플라스크를 140a(564 mg, 2.0 mmol), 비스(피나콜라토) 다이보론(1.5 g, 6.0 mmol), Pd2(dba)3(183 mg, 0.20 mmol), X-phos(95 mg, 0.20 mmol), 칼륨 아세테이트(392 mg, 4.0 mmol), 및 1,4-다이옥산(20 mL)으로 충전하였다. 진공 및 아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 70℃에서 2시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 석유 에터로 세척하여 140b(600 mg, 91%)를 갈색 고체로서 수득하고, 이를 추가의 정제없이 사용하였다. MS-ESI: [M+H]+ 331.0
실시예 140c 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-5-(1-메틸-1H-피라졸-3-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)니코틴알데하이드 140c
환류 응축기가 장착된 50-mL 환저 플라스크를 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-클로로니코틴알데하이드 103b(359 mg, 1.0 mmol), 140b(660 mg, 2.0 mmol), K3PO4(424 mg, 2.0 mmol), 1,1'-비스(다이페닐포스피노)페로센다이클로로팔라듐(II)(82 mg, 0.10 mmol), 나트륨 아세테이트(164 mg, 2.0 mmol), 및 아세토나이트릴/물(15/0.2 mL)로 충전하였다. 진공/N2 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 1.5시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 다이클로로메탄(30 mL) 및 물(30 mL)로 희석하였다. 유기 층을 분리시키고, 수성을 다이클로로메탄(3 × 20 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 어두운 잔사를 다이클로로메탄/메탄올(80/1 내지 50/1)로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 140c(280 mg, 53%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 528.1
실시예 140 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[1-메틸-5-[(1-메틸피라졸-3-일)아미노]-6-옥소-3-피리딜]-2-피리딜]프탈라진-1-온 140
THF(5 mL), 프로판-2-올(5 mL), 및 물(2 mL) 중의 140c(270 mg, 0.50 mmol)의 용액에 리튬 하이드록사이드(36 mg, 1.5 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 다이클로로메탄(20 mL) 및 물(10 mL)로 희석시켰다. 유기 층을 분리시키고, 수성 층을 다이클로로메탄(3 × 15 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수로 세척하고 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 140(53 mg, 20%)을 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 530.3. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 8.56(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.53(d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.21(s, 1H), 8.03(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.89(s, 1H), 7.78-7.5(m, 1H), 7.51-7.48(m, 2 H), 7.39(d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.07(d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.91(s, 1H), 4.42(s, 2 H), 3.71(s, 3 H), 3.58(s, 3 H), 1.39(s, 9 H)
실시예 141a 6-클로로-2-메틸-4-(5-메틸이속사졸-3-일아미노)피리다진-3(2H)-온 141a
Figure pct00074
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 1,4-다이옥산(40 mL), 5-메틸이속사졸-3-아민(559 mg, 5.7 mmol), 4-브로모-6-클로로-2-메틸피리다진-3(2H)-온(1.89 g, 8.55 mmol), Pd2(dba)3(521 mg, 0.57 mmol), 잔트포스(329 mg, 0.57 mmol), 및 세슘 카보네이트(3.72 g, 11.4 mmol)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 가열하였다. 이후 혼합물을 80℃로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 실온으로 냉각시켰다. 이후 이를 여과시켜 141a(600 mg, 44%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 241.0
실시예 141b (2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-5-(5-메틸이속사졸-3-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리다진-3-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 141b
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 141a(288 mg, 1.2 mmol), 3-(아세톡시메틸)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소-프탈라진-2(1H)-일)피리딘-4-일보론산 116c(1.49 g, 3.6 mmol), Pd(dppf)Cl2(99 mg, 0.12 mmol), 칼륨 아세테이트(235 mg, 2.4 mmol), K3PO4(523 mg, 2.4 mmol), 아세토나이트릴(20 mL), 및 물(10 방울)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 95℃에서 2시간 동안 가열하였다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 1:1 에틸 아세테이트/석유 에터로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 141b(220 mg, 32%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 574.2
실시예 141 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[1-메틸-5-[(5-메틸이속사졸-3-일)아미노]-6-옥소-피리다진-3-일]-2-피리딜]프탈라진-1-온 141
i-프로판올/THF(1:1, 8 mL) 및 물(1 mL) 중의 141a(117.3 mg, 0.20 mmol) 및 리튬 하이드록사이드 1수화물(84 mg, 2.0 mmol)의 혼합물을 35℃에서 0.5시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 물(10 mL) 및 다이클로로메탄(10 mL)으로 분배시켰다. 수성 상을 다이클로로메탄(3 × 10 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 141(70 mg, 66%)를 연한 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 532.2. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 9.92(s, 1H), 8.65(d, J = 5.5 Hz, 1H), 8.55(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.90(d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.85(s, 1H), 7.80-7.77(m, 1H), 7.62(d, J = 5.0 Hz, 1H), 6.33(s, 1H), 4.85(s, 1H), 4.56-4.53(m, 1H), 4.45-4.42(m, 1H), 3.80(s, 3H), 2.36(s, 3H), 1.40(s, 9H).
실시예 142a 3-브로모-5-요오드피리딘-2-올 142a
마그네틱 교반기로 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 아세토나이트릴(50 mL), TFA(10 mL), 3-브로모피리딘-2-올(4.0 g, 11.56 mmol), N-요오드석신이미드(5.2 g, 11.56 mmol)로 충전하였다. 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 물(100 mL)로 희석하고, 생성 백색 고체를 여과하여 수집하여 142a(6.6 g, 96%)를 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 300
실시예 142b 3-브로모-5-요오드-1-메틸피리딘-2(1H)-온 142b
Figure pct00075
마그네틱 교반기로 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 DMF(50 mL), 142a(6.0 g, 20.0 mmol), CH3I(4.26 g, 30.0 mmol), 및 K2CO3(5.52 g, 40.0 mmol)로 충전하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시키고, 물(200 mL)로 희석하였다. 생성 백색 고체를 여과하여 수집하여 142b(5.97 g, 95%)를 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 314
실시예 142c (4-(5-브로모-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 142c
Figure pct00076
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 50-mL 단일-목 환저 플라스크를 142b, (1.37 g, 4.38 mmol, 1.0 당량), 3-(아세톡시메틸)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피리딘-4-일보론산 116c(2.07 mg, 5.0 mmol), Pd(dppf)Cl2(179 mg, 0.219 mmol, 0.050 당량), 나트륨 아세테이트(718 mg, 8.76 mmol, 2.0 당량), K3PO4(1.86 g, 8.76 mmol, 2.0 당량), 아세토나이트릴(20 mL), 및 물(1 mL)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 30℃에서 2시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 생성 잔사를 100:1 다이클로로메탄/에탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 142c(800 mg, 32%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 555.2. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 8.66(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.56(d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.14(d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.08(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.91(d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.82-7.79(m, 1H), 7.62(d, J = 6.5 Hz, 1H), 5.02(s, 2H), 3.59(s, 3H), 1.78(s, 3H), 1.40(s, 9H).
실시예 142d (2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(5-(1-에틸-1H-피라졸-3-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 142d
Figure pct00077
1-드램 바이알에 건조 1,4-다이옥산(0.2 M) 중의 142c(40 mg, 0.074 mmol), 1-에틸-1H-피라졸-3-아민(1.2 당량), 세슘 카보네이트(1.5 당량), 잔트포스(10 mol%) 및 트리스(다이벤질리덴아세톤) 다이팔라듐(0)(5 mol%)을 첨가하였다. 이후 반응물을 80℃에서 3시간 동안 교반시켰다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 이후 다이클로로메탄(3 mL)으로 희석시키고, 물(2 × 3 mL)로 세척하였다. 유기 층을 마그네슘 설페이트 상에서 건조시키고, 여과시키고, 진공 농축시켰다. 이후 조질 생성물 142d를 다음 단계에서 정제 없이 수행하였다.
실시예 142 6-3급-부틸-2-[4-[5-[(1-에틸피라졸-3-일)아미노]-1-메틸-6-옥소-3-피리딜]-3-(하이드록시메틸)-2-피리딜]-8-플루오로-프탈라진-1-온 142
1 드램 바이알에 4:1 혼합물의 THF 및 물(1 mL) 중의 142d(1 당량)를 첨가하였다. 이후 리튬 하이드록사이드(1.5 당량)를 혼합물에 첨가하고, 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 이후 반응물을 다이클로로메탄(3 mL)으로 희석시키고, 물(2 × 3 mL)로 세척하였다. 유기 층을 수집하고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 농축시켰다. 조물질을 역상 크로마토그래피로 정제하여 142(7.6 mg, 19% 수율)를 수득하였다. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 8.55(s, 1H), 8.52(d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.16(s, 1H), 8.06(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.89(m, 1H), 7.75(dd, J = 13.1, 1.9 Hz, 1H), 7.53(d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.51(d, J = 12.6 Hz, 1H), 7.40(d, J = 2.1 Hz, 1H), 6.07(s, 1H), 4.46(br s 1H), 4.00(q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.60(s, 3H), 3.17(s, 2H), 1.39(s, 9H), 1.34(t, J = 7.2 Hz, 3H). ES-MS m/z 544.3 [M+1].
실시예 143 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[5-[[5-(메톡시메틸)-1-메틸-피라졸-3-일]아미노]-1-메틸-6-옥소-3-피리딜]-2-피리딜]프탈라진-1-온 143
실시예 142의 절차에 따라, 5-(메톡시메틸)-1-메틸-1H-피라졸-3-아민을 1-에틸-1H-피라졸-3-아민 대신 사용하여, 143을 제조하였다(11.2 mg, 54% 수율). 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 8.56(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.53(d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.19(s, 1H), 8.03(d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.89(d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.76(dd, J = 13.2, 1.7 Hz, 1H), 7.50(d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.39(d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.11(s, 1H), 4.43(d, J = 5.4 Hz, 2H), 4.38(s, 2H), 3.66(s, 3H), 3.59(s, 3H), 3.26(s, 3H), 1.39(s, 9H). ES-MS m/z 574.3 [M+1].
실시예 144 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[1-메틸-5-[[1-메틸-5-(피롤리딘-1-카보닐)피라졸-3-일]아미노]-6-옥소-3-피리딜]-2-피리딜]프탈라진-1-온 144
실시예 142의 절차에 따라, (3-아미노-1-메틸-1H-피라졸-5-일)(피롤리딘-1-일)메탄온을 1-에틸-1H-피라졸-3-아민 대신 사용하여, 144를 제조하였다(14.6 mg, 65% 수율). 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 8.59 - 8.50(m, 2H), 8.28(s, 1H), 8.04(d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.89(d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.76(dd, J = 13.1, 1.7 Hz, 1H), 7.51(d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.42(d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.46(s, 1H), 4.87(t, J = 5.1 Hz, 1H), 4.47 - 4.40(m, 2H), 3.79(s, 3H), 3.60(s, 3H), 3.48(dd, J = 19.0, 6.7 Hz, 4H), 1.91 - 1.82(m, 4H), 1.39(s, 9H). ES-MS m/z 627.4 [M+1].
실시예 145 6-3급-부틸-2-[4-[5-[[1-(2,2-다이플루오로에틸)-5-메틸-피라졸-3-일]아미노]-1-메틸-6-옥소-3-피리딜]-3-(하이드록시메틸)-2-피리딜]-8-플루오로-프탈라진-1-온 145
실시예 142의 절차에 따라, 1-(2,2-다이플루오로에틸)-5-메틸-1H-피라졸-3-아민을 1-에틸-1H-피라졸-3-아민 대신 사용하여, 145를 제조하였다(11 mg, 26% 수율). 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 8.55(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.52(d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.20(s, 1H), 8.11(d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.90(d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.75(dd, J = 13.1, 1.8 Hz, 1H), 7.50(d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.42(d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.97(s, 1H), 4.88(t, J = 5.0 Hz, 1H), 4.46 - 4.33(m, 5H), 3.59(s, 3H), 2.21(s, 3H), 1.39(s, 9H). ES-MS m/z 594.3 [M+1].
실시예 146a 에틸 2-(5-(하이드록시메틸)-3-나이트로-1H-피라졸-1-일)아세테이트 146a
마그네틱 교반기로 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 아세토나이트릴(30 mL), (3-나이트로-1H-피라졸-5-일)메탄올(1.43 g, 10.0 mmol), Cs2CO3(490 mg, 1.5 mmol), 및 에틸 2-브로모아세테이트(2.00 g, 12 mmol)로 충전하였다. 혼합물을 40℃에서 5시간 동안 교반시켰다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 30:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 146a(1.65 g, 72%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 229.9
실시예 146b 에틸 2-(5-(클로로메틸)-3-나이트로-1H-피라졸-1-일)아세테이트 146b
0℃로 냉각된 CHCl3(60 mL) 중의 146a(1.50 g, 6.55 mmol)의 혼합물에 SoCl2(2.34 g, 19.6 mmol)를 내부 온도를 5℃ 미만으로 유지하면서 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃로 가온시키고, 3시간 동안 이 온도에서 교반시켰다. 이후 0℃로 냉각시키고, 물로 켄칭하였다. 유기층을 분리시키고, 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 30:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 146b(1.1 g, 68%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 247.9
실시예 146c 5-메틸-2-나이트로-4,5-다이하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-6(7H)-온 146c
다이클로로메탄(30 mL) 중의 146b(1.0 g, 4.0 mmol)의 용액에 CH3NH2의 용액(1.07 g, 12.0 mmol, 메탄올 중 35%)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반시키고, 물(30 mL)로 희석시켰다. 유기층을 분리시키고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 30:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 146c(450 mg, 57%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 196.9
실시예 146d 2-아미노-5-메틸-4,5-다이하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-6(7H)-온 146d
에탄올(30 mL) 중의 146c(450 mg, 2.3 mmol)의 용액에 Pd/C(10%, 400 mg)를 첨가하였다. 반응물을 수소 가스로 충전하고(벌룬을 통해), 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 셀라이트® 플러그를 통해 여과시키고, 여액을 감압 하에서 농축시켜 146d를 황색 고체(320 mg, 84%)로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS-ESI: [M+H]+ 167.1
실시예 146e 2-(5-브로모-1-메틸-2-옥소-1,2-다이하이드로피리딘-3-일아미노)-5-메틸-4,5-다이하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-6(7H)-온 146e
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 환저 플라스크를 146d(300 mg, 1.8 mmol), 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온(482 mg, 1.8 mmol), 세슘 카보네이트(1.17 g, 3.6 mmol), 및 1,4-다이옥산(20 mL)으로 충전하였다. 현탁액에 질소를 10분 동안 버블링시킨 후, 잔트포스(104 mg, 0.18 mmol) 및 트리스(다이벤질리덴아세톤)다이팔라듐(0)(82 mg, 0.090 mmol)을 첨가하였다. 시스템에 진공/아르곤을 3회 플러싱하고, 5시간 동안 환류 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 고체를 다이클로로메탄(2 × 30 mL)으로 세척하였다. 합친 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 다이클로로메탄/메탄올(80/1 내지 30/1)로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 146e(390 mg, 61%)를 황색 고체로서 수득하였다.
실시예 146f (2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-5-(5-메틸-6-옥소-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 146f
Figure pct00078
환류 응축기가 장착된 25-mL 환저 플라스크를 3-(아세톡시메틸)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피리딘-4-일보론산 116c(165mg, 0.40 mmol), 146e(141 mg, 0.40 mmol), K3PO4(170 mg, 0.80 mmol), 나트륨 아세테이트(66 mg, 0.80 mmol), Pd(dppf)Cl2(15 mg, 0.020 mmol), 및 아세토나이트릴/물(8/0.2 mL)로 충전하였다. 혼합물을 진공/질소 플러슁으로 3회 반복하고, 100℃에서 N2 보호 하에서 1시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 LCMS로 분석하여 목적 생성물로 완전히 전환되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 다이클로로메탄(30 mL) 및 물(30 mL)로 희석하였다. 유기층을 분리시키고, 물 층을 다이클로로메탄(2 × 30 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 어두운 잔사를 다이클로로메탄/메탄올(80/1 내지 30/1)로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 146f(115 mg, 45%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 641.4
실시예 146 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[1-메틸-5-[(5-메틸-6-옥소-4,7-다이하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-일)아미노]-6-옥소-3-피리딜]-2-피리딜]프탈라진-1-온 146
THF/ i-프로판올 /물(4/2/2mL) 중의 146f(110 mg, 0.172 mmol)의 용액에 리튬 하이드록사이드(21 mg, 0.86 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 물(10 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(3 × 20 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 146을 백색 고체(45 mg, 44%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 599.2. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 8.57(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.54(d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.41(s, 1H), 8.08(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.91(d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.78(d, J = 13.0 Hz, 1H), 7.51(d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.42(d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.08(s, 1H), 4.91-4.89(m, 1H), 4.62(s, 2H), 4.57(s, 2H), 4.45-4.43(m, 2H), 3.61(s, 3H), 2.98(s, 3H), 1.40(s, 9H).
실시예 147a 1-(6-나이트로피리딘-3-일)아제티딘-3-올 147a
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 아세토나이트릴(50 mL), 5-플루오로-2-나이트로피리딘(1.2 g, 7.9 mmol), K2CO3(2.1 g, 15.8 mmol), 및 아제티딘-3-올 하이드로클로라이드(1.3 g, 11.9 mmol)로 충전하였다. 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 가열하였다. 이후 반응물을 실온으로 냉각시켰다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 다이클로로메탄/메탄올(50:1 내지 20:1)로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 147a(1.1 g, 73%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+196.0.
실시예 147b 1-(6-아미노피리딘-3-일)아제티딘-3-올 147b
100-mL 단일-목 환저 플라스크를 질소로 퍼지시키고, 147a(1.0 g, 5.1 mmol), 탄소 상의 10% 팔라듐(10% 습윤, 100 mg), 및 에탄올(40 mL)로 충전하였다. 혼합물을 진공배기하고, 수소 가스로 충전하고, 실온에서 5시간 동안 교반시켰다. 이후 수소를 진공배기하고, 질소를 플라스크 내로 충전하였다. 촉매를 셀라이트® 패드를 통해 여과하여 제거하고, 여액을 감압 하에서 농축시켜 147b를 황색 고체(792 mg, 85%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 166.1.
실시예 147c 5-브로모-3-(5-(3-하이드록시아제티딘-1-일)피리딘-2-일아미노)-1-메틸피리딘-2(1H)-온 147c
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 147b(792 mg, 4.8 mmol), 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온(1.9 g, 7.2 mmol), 트리스-(다이벤질리덴아세톤)다이팔라듐(0)(440 mg, 0.48 mmol), 잔트포스(555 mg, 0.96 mmol), Cs2CO3(3.1 g, 9.6 mmol), 및 1,4-다이옥산(40 mL)으로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 90℃에서 3.0 시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 생성 잔사를 다이클로로메탄/메탄올(50:1 내지 20:1)로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 147c을 황색 고체(1.5 g, 89%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 351.1
실시예 147d (2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(5-(5-(3-하이드록시아제티딘-1-일)피리딘-2-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 147d
Figure pct00079
환류 응축기가 장착된 100-mL 플라스크를 147c(285 mg, 0.81 mmol), 3-(아세톡시메틸)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피리딘-4-일보론산 116c(669 mg, 1.62 mmol), Pd(dppf)Cl2(66.2 mg, 0.081 mmol), K3PO4(343.4 mg, 1.62 mmol), 나트륨 아세테이트(132.8 mg, 1.62 mmol), 물(0.5 mL), 및 아세토나이트릴(15 mL)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 생성 잔사를 다이클로로메탄/메탄올(50:1 내지 30:1)로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 147d를 갈색 고체(140.0 mg, 27%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 640.3.
실시예 147 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[4-[5-[[5-(3-하이드록시아제티딘-1-일)-2-피리딜]아미노]-1-메틸-6-옥소-3-피리딜]-3-(하이드록시메틸)-2-피리딜]프탈라진-1-온 147
i-프로판올 /THF/물(2:2:1,10 mL) 중의 147d(140 mg, 0.22 mmol) 및 리튬 하이드록사이드(132 mg, 5.5 mmol)의 혼합물 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 물(10 mL)로 희석하였다. 생성 혼합물을 다이클로로메탄으로 3회 추출하였다. 합친 유기 층을 감압 하에서 농축시키고, 생성 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 147(40 mg, 31%)을 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 598.2. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 8.57-8.53(m, 3H), 8.32(s, 1H), 7.90(s, 1H), 7.77(d, J = 13.0 Hz, 1H), 7.51-7.49(m, 2H), 7.43(s, 1H), 7.19(d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.88(dd, J = 3.0, 8.5 Hz, 1H), 5.57-5.56(m, 1H), 4.89-4.87(m, 1H), 4.55-4.52(m, 1H), 4.43-4.41(m, 2H), 4.05-4.02(m, 2H), 3.60(s, 3H), 3.45-3.42(m, 2H), 1.39(s, 9H).
실시예 148a 2-메틸-1-(2-나이트로-6,7-다이하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-5(4H)-일)프로판-1-온 148a
Figure pct00080
다이클로로메탄(10 mL) 중의 2-나이트로-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진 124d(160 mg, 0.952 mmol)의 용액에 트라이에틸아민(197 mg, 1.90 mmol)을 첨가하였다. 실온에서 5분 동안 교반시킨 후, 다이클로로메탄(2 mL) 중의 아이소부티릴 클로라이드(111.0 mg, 1.047 mmol)의 용액을 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 LCMS로 분석하여 목적 생성물로 완전히 전환되었음을 나타내었다. 이후 감압 하에서 농축시켜서 148a를 백색 고체(220 mg, 97%)로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS-ESI: [M+H]+ 239.0
실시예 148b 1-(2-아미노-6,7-다이하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-5(4H)-일)-2-메틸프로판-1-온 148b
메탄올(20 mL) 중의 148a(220 mg, 0.924 mmol)의 용액에 Pd/C(22 mg)를 첨가하였다. 시스템을 진공배기하고, H2로 재충전하였다. 실온에서 2시간 동안 교반시킨 후, 혼합물을 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시켜서 148b를 황색 고체(190 mg, 98%)로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS-ESI: [M+H]+ 209.1
실시예 148c 5-브로모-3-(5-아이소부티릴-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-일아미노-1-메틸피리딘-2(1H)-온 148c
환류 응축기가 장착된 100-mL 환저 플라스크를 148b(190 mg, 0.913 mmol), 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온(365.6 mg, 1.37 mmol), Pd2(dba)3(41.7 mg, 0.0456 mmol), 잔트포스(52.8 mg, 0.0913 mmol), Cs2CO3(595.3 mg, 1.826 mmol), 및 다이옥산(20 mL)으로 충전하였다. 시스템을 진공/질소 플러슁으로 3회 반복하고, 100℃에서 N2 보호 하에서 3시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 LCMS로 분석하여 목적 생성물로 완전히 전환되었음을 나타내었다. 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 아세토나이트릴(2 mL)로 세척하여 148c를 어두운 고체(240 mg, 67%)로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS-ESI: [M+H]+ 394.2
실시예 148d 3-(5-아이소부티릴-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-일아미노)-1-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)피리딘-2(1H)-온 148d
환류 응축기가 장착된 100-mL 환저 플라스크를 148c(220 mg, 0.558 mmol), Pin2B2(212.6 mg, 0.837 mmol), Pd2(dba)3(25.5 mg, 0.0279 mmol), X-Phos(26.6 mg, 0.0558 mmol), 칼륨 아세테이트(109.4 mg, 1.12 mmol), 및 다이옥산(20 mL)으로 충전하였다. 시스템을 진공/질소 플러슁으로 3회 반복하고, 70℃에서 N2 보호 하에서 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 LCMS로 분석하여 목적 생성물로 완전히 전환되었음을 나타내었다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 석유 에터로 세척하여 148d를 어두운 색 오일(200 mg, 81%)로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS-ESI: [M+H]+ 442.4
실시예 148e 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(5-(5-아이소부티릴-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)니코틴알데하이드 148e
환류 응축기가 장착된 100-mL 환저 플라스크를 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-클로로니코틴알데하이드 103b(150 mg, 0.42 mmol), 148d(278 mg, 0.63 mmol), Pd(dppf)Cl2(17.1 mg, 0.021 mmol), K3PO4(178.1 mg, 0.84 mmol), 나트륨 아세테이트(68.9 mg, 0.84 mmol), 아세토나이트릴(15 mL), 및 물(5 방울)로 충전하였다. 시스템을 진공/질소 플러슁으로 3회 반복하고, 100℃에서 N2 보호 하에서 1시간 동안 가열시켰다. 반응 혼합물을 LCMS로 분석하여 목적 생성물로 완전히 전환되었음을 나타내었다. 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 아세토나이트릴(0.5 mL)로 세척하여 148e를 백색 고체(100 mg, 37%)로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS-ESI: [M+H]+ 638.8
실시예 148 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[1-메틸-5-[[5-(2-메틸프로파노일)-6,7-다이하이드로-4H-피라졸로[1,5-a]피라진-2-일]아미노]-6-옥소-3-피리딜]-2-피리딜]프탈라진-1-온 148
다이클로로메탄(5 mL) 및 메탄올(5 mL) 중의 148e(90 mg, 0.141 mmol)의 용액에 NaBH4(10.7 mg, 0.282 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 1시간 동안 교반시킨 후, 반응 혼합물을 수성 NH4Cl로 켄칭하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 다이클로로메탄(3 × 15 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 148(40 mg, 44%)을 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 640.8. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 8.57(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.54(d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.35-8.28(m, 1H), 8.06(s, 1H), 7.90(d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.78(dd, J = 1.0, 13.0 Hz, 1H), 7.51(d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.40(d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.01(s, 1H), 4.90-4.88(m, 1H), 4.78-4.76(m, 1H), 4.64-4.62(m, 1H), 4.42-4.41(m, 2H), 4.03-3.92(m, 4H), 3.59(s, 3H), 3.00-2.96(m, 1H), 1.40(s, 9H), 1.04-1.01(m, 6H).
실시예 149a 1-메틸-4-나이트로-1H-1,2,3-트라이아졸 149a
Figure pct00081
4-나이트로-2H-1,2,3-트라이아졸(2.0 g, 17.5 mmol) 및 THF(10 mL)를 포함하는 100-mL 단일목 환저에 0℃에서 NaH(1.7 g, 35.0 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반시켰다. 아세톤(40 mL) 중의 CH3I(3.68 g, 26.3 mmol, 1.5 당량)의 용액을 첨가하고, 생성 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 이후, 반응을 물(20 mL)로 켄칭하고, 0℃에서 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 다이클로로메탄(100 mL)으로 희석시켰다. 이후 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 6:1 석유 에터/에틸 아세테이트로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 1-메틸-5-나이트로-1H-1,2,3-트라이아졸(1.34 g, 60%)을 백색 고체로서 및 149a(800 mg, 35%)를 연한 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 8.34(s, 1H), 4.26(s, 3H). 1-메틸-5-나이트로-1H-1,2,3-트라이아졸: 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 8.16(s, 1H), 4.31(s, 3H).
실시예 149b 1-메틸-1H-1,2,3-트라이아졸-4-아민 149b
실시예 148b에서의 절차를 따라, 149a(800 mg, 6.25 mmol) 및 탄소 상의 10% 팔라듐(50% 습윤, 160 mg)으로 출발하여, 149b를 황색 고체(600 mg, 98%)로서 수득하였다. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 6.91(s, 1H), 3.97(s, 3H), 3.65(brs, 2H).
실시예 149c 5-브로모-1-메틸-3-(1-메틸-1H-1,2,3-트라이아졸-4-일아미노)피리딘-2(1H)-온 149c
실시예 148c에서의 절차를 따라, 149b(500 mg, 5.10 mmol, 1.0 당량) 및 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온(2.04 g, 7.65 mmol, 1.5 당량)으로 출발하여, 149c를 황색 고체(760 mg, 52%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 283.9.
실시예 149d (2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-5-(1-메틸-1H-1,2,3-트라이아졸-4-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 149d
실시예 147d에서의 절차를 따라, 149c(120 mg, 0.42 mmol, 1 당량) 및 3-(아세톡시메틸)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피리딘-4-일보론산(116c)(485 mg, 1.18 mmol, 2.8 당량)으로부터 출발하여, 149d를 황색 고체(120 mg, 50%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 573.3.
실시예 149 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[1-메틸-5-[(1-메틸트라이아졸-4-일)아미노]-6-옥소-3-피리딜]-2-피리딜]프탈라진-1-온 149
실시예 147에서의 절차를 따라, 149c(90 mg, 0.16 mmol)로부터 출발하여, 149를 백색 고체(32 mg, 38%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 530.8. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 8.65(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.37(d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.69-7.67(m, 3H), 7.60-7.57(m, 2H), 7.50(d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.34(d, J = 1.5 Hz, 1H), 4.53(s, 2H), 4.27(s, 1H), 4.10(s, 3H), 3.74(s, 3H), 1.46(s, 9H).
실시예 150a N-메톡시-N-메틸-3-나이트로-1H-피라졸-5-카복스아미드 150a
Figure pct00082
마그네틱 교반기로 장착된 500-mL 단일-목 환저 플라스크를 3-나이트로-1H-피라졸-5-카복실산(15.7 g, 1.0 당량, 100 mmol), N,O-다이메틸하이드록실아민 하이드로클로라이드(19.5 g, 2.0 당량, 200 mmol), HATU(76.0 g, 2.0 당량, 200 mmol), 트라이에틸아민(40.4 g, 4.0 당량, 400 mmol), 및 다이클로로메탄(300 mL)으로 충전하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성 잔사를 100:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 150a(16.0 g, 80%)를 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 201.1
실시예 150b 3-아미노-N-메톡시-N-메틸-1H-피라졸-5-카복스아미드 150b
250-mL 단일-목 환저 플라스크를 질소로 퍼지시키고, 150a(16.0 g, 1.0 당량, 80.0 mmol), 탄소 상의 10% 팔라듐(50% 습윤, 800 mg), 및 메탄올(100 mL)로 충전하였다. 혼합물을 진공배기하고, 수소 가스로 충전하고, 수소 분위기 하에서 실온에서 밤새 교반시켰다. 이후 수소를 진공배기하고, 질소를 플라스크 내로 충전하였다. 촉매를 셀라이트® 패드를 통해 여과하여 제거하고, 여액을 감압 하에서 농축시켜서 150b(11.0 g, 81%)를 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 171.1
실시예 150c 3-(2,5-다이메틸-1H-피롤-1-일)-N-메톡시-N-메틸-1H-피라졸-5-카복스아미드 150c
마그네틱 교반기 및 딘-스탁 트랩(Dean-Stark trap)으로 장착된 250-mL 환저 플라스크를 150b(11.0 g, 1.0 당량, 64.7 mmol), 헥산-2,5-다이온(11.1 g, 1.5 당량, 97.2 mmol), p-톨루엔설폰산ㆍ1수화물(558 mg, 0.05 당량, 3.24 mmol), 및 톨루엔(100 mL)으로 충전하였다. 반응 혼합물을 밤새 환류시켰다. 생성 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 생성 잔사를 1:2 석유 에터/에틸 아세테이트로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 150c(10.4 g, 65%)를 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 249.0
실시예 150d 1-(3-(2,5-다이메틸-1H-피롤-1-일)-1H-피라졸-5-일)에탄온 150d
마그네틱 교반기로 장착된 250-mL 환저 플라스크를 150c(7.44 g, 1.0 당량, 30.0 mmol) 및 THF(100 mL)로 충전하였다. N2 보호 하에서, MeMgBr(에터 중 3.0 M)(25 mL, 2.5 당량, 75.0 mmol)의 용액을 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반시키고, 포화 NH4Cl 용액(30 mL)으로 켄칭하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 에틸 아세테이트(3 × 50 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 감압 하에서 증발시키고, 잔사를 4:1 석유 에터/에틸 아세테이트로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 150d를 백색 고체(5.40 g, 89%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 204.0. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 6.74(s, 1H), 5.92(s, 2H), 2.61(s, 3H), 2.15(s, 6H).
실시예 150e 1-(1-(2-브로모에틸)-3-(2,5-다이메틸-1H-피롤-1-일)-1H-피라졸-5-일)에탄온 150e
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 250-mL 환저 플라스크를 150d(5.4 g, 1.0 당량, 26.6 mmol), 1,2-다이브로모에탄(20.0 g, 4.0 당량, 106.4 mmol), K2CO3(7.34 g, 2.0 당량, 53.2 mmol), 및 아세토나이트릴(100 mL)로 충전하였다. 반응 혼합물을 5시간 동안 환류시켰다. 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 6:1 석유 에터/에틸 아세테이트로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 150e(7.5 g, 91%)를 무색의 오일로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 309.9
실시예 150f 1-(1-(2-브로모에틸)-3-(2,5-다이메틸-1H-피롤-1-일)-1H-피라졸-5-일)에탄올 150f
마그네틱 교반기로 장착된 100-mL 환저 플라스크를 150e(2.1 g, 1.0 당량, 6.8 mmol), NaBH4(1.29 g, 5.0 당량, 34.0 mmol), 및 메탄올(50 mL)로 충전하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시키고, 물(30 mL)로 켄칭하였다. 이후 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 다이클로로메탄(3 × 50 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 감압 하에서 농축시켜서 조질 150f를 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS-ESI: [M+H]+ 311.9
실시예 150g 2-(2,5-다이메틸-1H-피롤-1-일)-4-메틸-6,7-다이하이드로-4H-피라졸로[5,1-c][1,4]옥사진 150g
환류 응축기가 장착된 100-mL 환저 플라스크를 150f(2.0 g, 1.0 당량, 6.4 mmol), K2CO3(1.77 g, 2.0 당량, 12.8 mmol), 아세토나이트릴(50 mL)로 충전하였다. 반응 혼합물을 밤새 환류시켰다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 4:1 석유 에터/에틸 아세테이트로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 150g(550 mg, 2단계에 걸쳐 37%)를 무색의 오일로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 232.3
실시예 150h 4-메틸-6,7-다이하이드로-4H-피라졸로[5,1-c][1,4]옥사진-2-아민 150h
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 환저 플라스크를 150g(550 mg, 1.0 당량, 2.38 mmol), 하이드록실아민 하이드로클로라이드(827 mg, 5.0 당량, 11.9 mmol), 에탄올(30 mL)로 충전하였다. 혼합물을 2일 동안 환류시켰다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 150h(30 mg, 8%)를 황색 오일로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 154.1. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 5.37(s, 1H), 4.73(q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.26-4.23(m, 1H), 4.08-4.03(m, 1H), 3.91-3.90(m, 1H), 3.90-3.87(m, 1H), 1.65(d, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 150i (2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-5-(4-메틸-6,7-다이하이드로-4H-피라졸로[5,1-c][1,4]옥사진-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 150i
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 25-mL 단일-목 환저 플라스크를 150h(25 mg, 1.0 당량, 0.16 mmol), (4-(5-브로모-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 142c(181 mg, 2.0 당량, 0.32 mmol), Pd2(dba)3(15 mg, 0.1 당량, 0.016 mmol), 잔트포스(19 mg, 0.2 당량, 0.032 mmol), Cs2CO3(105 mg, 2.0 당량, 0.32 mmol), 및 다이옥산(10 mL)으로 충전하였다. 혼합물을 진공/아르곤으로 3회 플러슁 하고, 100℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 생성 잔사를 20:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 150i를 갈색 고체(48 mg, 48%)로서 수득하였다.
실시예 150 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[1-메틸-5-[(4-메틸-6,7-다이하이드로-4H-피라졸로[5,1-c][1,4]옥사진-2-일)아미노]-6-옥소-3-피리딜]-2-피리딜]프탈라진-1-온 150
마그네틱 교반기로 장착된 25-mL 환저 플라스크를 150i(48 mg, 1.0 당량, 0.077 mmol), 리튬 하이드록사이드(9.2 mg, 5.0 당량, 0.38 mmol), i-프로판올 /THF(4/4 mL), 및 물(1 mL)로 충전하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 150을 황색 고체(6.8 mg, 15%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 585.8. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 8.66(d, J = 4.5 Hz, 1H), 8.35(d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.03(d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.59-7.53(m, 4H), 7.47(s, 1H), 5.72(s, 1H), 4.82-4.78(m, 1H), 4.52-4.49(m, 2H), 4.33-4.30(m, 1H), 4.30-4.27(m, 1H), 4.02-3.98(m, 3H), 3.73(s, 3H), 1.54(d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.48(s, 9H).
실시예 151a 에틸 2-(5-(하이드록시메틸)-3-나이트로-1H-피라졸-1-일)아세테이트 151a
Figure pct00083
마그네틱 교반기로 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 아세토나이트릴(30 mL), (3-나이트로-1H-피라졸-5-일)메탄올(1.43 g, 10.0 mmol), Cs2CO3(490 mg, 1.5 mmol), 및 에틸 2-브로모아세테이트(2.00 g, 12 mmol)로 충전하였다. 혼합물을 40℃에서 5시간 동안 교반시켰다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 30:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 151a(1.65 g, 72%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 229.9
실시예 151b 에틸 2-(5-(클로로메틸)-3-나이트로-1H-피라졸-1-일)아세테이트 151b
Figure pct00084
0℃로 냉각된 CHCl3(60 mL) 중의 151a(1.50 g, 6.55 mmol)의 혼합물에 SoCl2(2.34 g, 19.6 mmol)를 내부 온도를 5℃ 미만으로 유지하면서 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃로 3시간 동안 가온시키고, 이 온도에서 교반시켰다. 이를 0℃로 냉각시키고, 물로 켄칭하였다. 유기층을 분리시키고, 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 30:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 151b(1.1 g, 68%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 247.9
실시예 151c 에틸 2-(5-((아이소프로필아미노)메틸)-3-나이트로-1H-피라졸-1-일)아세테이트 151c
151b(500 mg, 2.04 mmol), 프로판-2-아민(180 mg, 3.06 mmol), 및 다이클로로메탄(20 mL)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 감압 하에서 농축시켜서 151c(400 mg, 74%)를 황색 고체로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS-ESI: [M+H]+ 271.1
실시예 151d 5-아이소프로필-2-나이트로-4,5-다이하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-6(7H)-온 151d
151c(400 mg, 1.48 mmol) 및 메탄올(30 mL)의 혼합물을 50℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 물(80 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(3 × 50 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축시켜 151d(300 mg, 90%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 225.3
실시예 151e 2-아미노-5-아이소프로필-4,5-다이하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-6(7H)-온 151e
에탄올(20 mL) 중의 151d(220 mg, 1.0 mmol)의 용액에 Pd/C(10%, 22 mg)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 수소 가스로 충전하고(벌룬을 통해), 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트® 플러그를 통해 여과시키고, 여액을 감압 하에서 농축시켜 151e를 황색 고체(180 mg, 92%)로서 수득하고, 이를 추가의 정제없이 사용하였다. MS-ESI: [M+H]+ 195.3
실시예 151f 2-(5-브로모-1-메틸-2-옥소-1,2-다이하이드로피리딘-3-일아미노)-5-아이소프로필-4,5-다이하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-6(7H)-온 151f
환류 응축기가 장착된 100-mL 환저 플라스크를 151e(200 mg, 1.0 mmol), 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온(268 mg, 1.0 mmol), Pd2(dba)3(50 mg, 0.050 mmol), 잔트포스(58 mg, 0.10 mmol), Cs2CO3(652 mg, 2.0 mmol) 및 1,4-다이옥산(20 mL)으로 충전하였다. 시스템에 진공/아르곤을 3회 플러싱하고, 100℃에서 2시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 고체를 다이클로로메탄(2 × 10 mL)으로 세척하였다. 합친 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 다이클로로메탄/메탄올(80:1 내지 30:1)로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 151f(300 mg, 79%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 380.2
실시예 151g 5-아이소프로필-2-(1-메틸-2-옥소-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)-1,2-다이하이드로피리딘-3-일아미노)-4,5-다이하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-6(7H)-온 151g
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 50-mL 단일-목 환저 플라스크를 151f(200 mg, 0.52 mmol), Pin2B2(330 mg, 1.3 mmol), Pd2(dba)3(25 mg, 0.026 mmol), X-phos(25 mg, 0.052 mmol), 칼륨 아세테이트(150 mg, 1.5 mmol), 및 1,4-다이옥산(10 mL)으로 충전하였다. 혼합물을 진공/아르곤으로 3회 플러슁하고, 65℃에서 4시간 동안 가열하였다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 석유 에터로 세척하여 조질 151g(300 mg, 순도: 50%)를 갈색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 428.2.
실시예 151h 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(5-(5-아이소프로필-6-옥소-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)니코틴알데하이드 151h
환류 응축기가 장착된 25-mL 환저 플라스크를 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소아이소퀴놀린-2(1H)-일)-4-클로로니코틴알데하이드 103b(108 mg, 0.30 mmol), 151g(256 mg, 0.60 mmol), K3PO4(127 mg, 0.60 mmol), 나트륨 아세테이트ㆍ물(82 mg, 0.60 mmol), Pd(dppf)Cl2(12 mg, 0.015 mmol), 물(0.5 mL), 및 아세토나이트릴(8 mL)로 충전하였다. 반응 혼합물을 진공/질소 플러슁으로 3회 반복하고, 80℃에서 N2 보호 하에서 2시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 다이클로로메탄(20 mL) 및 물(10 mL)로 희석하였다. 유기층을 분리시키고, 물 층을 다이클로로메탄(2 × 10 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 어두운 잔사를 다이클로로메탄/메탄올(80:1 내지 30:1)로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 151h(90 mg, 48%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 625.2.
실시예 151 6-3급-부틸-8-플루오로-2-(3-(하이드록시메틸)-4-(5-(5-아이소프로필-6-옥소-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-2-일)프탈라진-1(2H)-온 151
25-mL 단일-목 환저 플라스크를 151h(90 mg, 0.14 mmol), NaBH4(18 mg, 0.42 mmol), 및 메탄올(5 mL)로 충전하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 생성 잔사에 물(10 mL)을 첨가하고, 혼합물을 다이클로로메탄(3 × 15 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 151(50 mg, 55%)을 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 626.8. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 8.67(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.36(d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.02(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.59-7.58(m, 3H), 7.55-7.52(m, 2H), 5.90(s, 1H), 5.07-5.05(m, 1H), 4.74(s, 2H), 4.50-4.47(m, 4H), 4.09-4.06(m, 1H), 3.73(s, 3H), 1.45(s, 9H), 1.26(d, J = 7.0 Hz, 6H).
실시예 152a 3급-부틸 3-아미노-1H-피라졸-1-카복실레이트 152a
1,4-다이옥산(35 mL) 중의 3-아미노피라졸(3.0 g, 36 mmol) 및 트라이에틸아민(7.6 g, 75 mmol)의 혼합물에 (Boc)2O(7.8 g, 36 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 이를 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 3:1 석유 에터/에틸 아세테이트로 용리되는 실리카겔 컬럼으로 정제하여 152a를 백색 고체(3.4 g, 52%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 184.1.
실시예 152b 3-(1H-피라졸-3-일아미노)-5-브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온 152a
Figure pct00085
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 250-mL 단일-목 환저 플라스크를 152a(2.2 g, 12 mmol), 잔트포스(0.69 g, 1.2 mmol), Pd2(dba)3(1.1 g, 1.2 mmol), 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온(6.4 g, 24 mmol), Cs2CO3 (15.6 g, 48 mmol), 및 1,4-다이옥산(50 mL)으로 충전하였다. 질소를 생성 혼합물을 통해 10분 동안 버블링한 후, 이를 105℃에서 15시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 혼합물을 메탄올(8 mL)로 세척하여 152b를 연한 황색 고체(1.2 g, 37%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 269.1.
실시예 152c (4-(5-(1H-피라졸-3-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 152c
마그네틱 교반기가 장착된 밀폐된 튜브를 152b(200 mg, 0.74 mmol), (2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 116c(370 mg, 0.74 mmol), Pd(dppf)Cl2(30 mg, 0.035 mmol), 나트륨 아세테이트(74 mg, 0.90 mmol), K3PO4(191 mg, 0.90 mmol), 및 아세토나이트릴 / 물(5 mL/0.5mL)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 가열하였다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 10:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 152c(100 mg, 25%)를 갈색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 558.3.
실시예 152 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[1-메틸-6-옥소-5-(1H-피라졸-3-일아미노)-3-피리딜]-2-피리딜]프탈라진-1-온 152
THF(8 mL), i-프로판올(8 mL) 및 물(2 mL) 중의 152c(100 mg, 0.18 mmol) 및 리튬 하이드록사이드 수화물(84 mg, 2.0 mmol)의 혼합물을 40℃에서 0.5시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 감압 하에서 증발시키고, 잔사를 물(5 mL)로 희석시켰다. 이후 에틸 아세테이트(2 × 10 mL)로 추출하였다. 합친 추출물을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 152(6.5 mg, 7%)를 연한 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 515.8. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 8.62-8.61(m, 1H), 8.32(s, 1H), 8.04(m, 1H), 7.55-7.53(m, 4H), 7.50-7.49(m, 1H), 7.44(s, 1H), 6.01(s, 1H), 4.49-4.48(m, 2H), 3.71(s, 3H), 1.45(s, 9H).
실시예 153a 6-클로로-2-메틸-4-(5-메틸-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-일아미노)피리다진-3(2H)-온 153a
Figure pct00086
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 1,4-다이옥산(30 mL), 5-메틸-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-아민 128b(1.70 g, 11.2 mmol), 4-브로모-6-클로로-2-메틸피리다진-3(2H)-온(2.68 g, 12.0 mmol), 및 세슘 카보네이트(7.30 g, 22.4 mmol)로 충전하였다. 현탁액에 질소를 30분 동안 버블링시킨 후, 잔트포스(0.59 g, 1.02 mmol) 및 트리스(다이벤질리덴아세톤)다이팔라듐(0)(467 mg, 0.51 mmol)을 첨가하였다. 시스템에 진공/아르곤을 3회 플러싱하고, 90℃에서 2시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 진공 증발시켰다. 잔사를 30:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 153a(1.9 g, 60%)를 갈색 고체로서 수득하였다. LCMS: [M+H]+ 295.1
실시예 153b 1-메틸-5-(5-메틸-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리다진-3-일보론산 153b
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 50-mL 환저 플라스크를 153a(200 mg, 0.68 mmol), 비스(피나콜라토)다이보론(Pin2B2, 863 mg, 3.40 mmol), Pd2(dba)3(55 mg, 0.060 mmol), X-Phos (60 mg, 0.12 mmol), 칼륨 아세테이트(60 mg, 1.36 mmol), 및 1,4-다이옥산(10 mL)으로 충전하였다. 시스템을 진공배기하고, 이후 N2로 재충전하였다. 이를 50℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응이 끝난 후, 혼합물을 여과시키고, 고체를 에틸 아세테이트(10 mL)로 세척하였다. 합친 여액을 감압 하에서 증발시켜 153b를 연한 황색 고체로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 사용하였다. MS-ESI: [M+H]+ 305.1.
실시예 153c 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-5-(5-메틸-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리다진-3-일)니코틴알데하이드 153c
환류 응축기가 장착된 25-mL 환저 플라스크를 153b(200 mg, 0.66 mmol), 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-클로로니코틴알데하이드 103b(240 mg, 0.66 mmol), PdCl2(dppf)(54 mg, 0.066 mmol), K3PO4(250 mg, 1.2 mmol), 나트륨 아세테이트(100 mg, 1.20 mmol), 아세토나이트릴(10 mL), 및 물(0.5 mL)로 충전하였다. 시스템을 진공배기한 후, N2로 재충전하였다. 이를 100℃에서 1시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 20:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카-겔 컬럼 상에서 정제하여 153c를 연한 황색 고체(170 mg, 42%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 584.3.
실시예 153 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[1-메틸-5-[(5-메틸-6,7-다이하이드로-4H-피라졸로[1,5-a]피라진-2-일)아미노]-6-옥소-피리다진-3-일]-2-피리딜]프탈라진-1-온 153
메탄올(5 mL) 중의 153c(170 mg, 0.29 mmol) 및 NaBH4(20 mg, 0.50 mmol)의 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반시켰다. 이후 반응 혼합물을 물(7 mL)로 켄칭하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 다이클로로메탄(2 × 10 mL)으로 추출하였다. 합친 다이클로로메탄 추출물을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 153을 연한 황색 고체(35 mg, 21%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 586.3. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 9.39(s, 1H), 8.63(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.54(d, J = 2.0 Hz 1H), 7.93(s, 1H), 7.90(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.77(dd, J = 1.5, 12.5 Hz, 1H), 7.60-7.59(m, 1H), 6.03(s, 1H), 4.82-4.81(m, 1H), 4.51-4.45(m, 2H), 4.01-3.98(m, 2H), 3.77(s, 3H), 3.62-3.60(m, 2H), 2.90-2.86(m, 2H), 2.42-2.40(m, 3H), 1.34(s, 9H).
실시예 154a 1-메틸-1H-1,2,3-트라이아졸-5-아민 154a
Figure pct00087
50-mL 환저 플라스크를 질소로 퍼지시키고, 실시예 149a로부터의 1-메틸-5-나이트로-1H-1,2,3-트라이아졸(0.78 g, 6.09 mmol), 탄소 상의 10% 팔라듐(50% 습윤, 160 mg), 및 메탄올(20 mL)로 충전하였다. 플라스크를 진공배기하고, 수소 가스로 충전하고, 4시간 동안 실온에서 교반시켰다. 이후 수소를 진공배기하고, 질소를 플라스크 내로 충전하였다. 촉매를 셀라이트® 패드를 통해 여과하여 제거하고, 여액을 감압 하에서 농축시켜 154a(418 mg, 70%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS: [M+H]+ 99.3
실시예 154b 5-브로모-1-메틸-3-(1-메틸-1H-1,2,3-트라이아졸-5-일아미노)피리딘-2(1H)-온 154b
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 1,4-다이옥산(20 mL), 154a(500 mg, 5.10 mmol), 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온(1362 mg, 5.10 mmol), 및 세슘 카보네이트(3.325 g, 10.2 mmol)로 충전하였다. 현탁액에 20분 동안 질소를 버블링시킨 후, 잔트포스(0.59 g, 1.02 mmol) 및 트리스(다이벤질리덴아세톤)다이팔라듐(0)(467 mg, 0.51 mmol)을 첨가하였다. 시스템을 진공/질소 플러슁으로 3회 반복하고, 5시간 동안 환류 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 50:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 154b(220 mg, 15%)를 갈색 고체로서 수득하였다. LCMS: [M+H]+ 284.1
실시예 154c 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-5-(1-메틸-1H-1,2,3-트라이아졸-5-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 154c
환류 응축기가 장착된 25-mL 환저 플라스크를 154b(100 mg, 0.35 mmol), 3-(아세톡시메틸)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피리딘-4-일보론산 116c(174 mg, 0.42 mmol), Pd(dppf)Cl2(29 mg, 0.035 mmol), 나트륨 아세테이트(57 mg, 0.70 mmol,), K3PO4 3수화물(186 mg, 0.70 mmol), 물(6 방울), 및 아세토나이트릴(6 mL)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 가열하였다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 25:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 154c(85 mg, 42%)를 갈색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 573.4
실시예 154 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[1-메틸-5-[(3-메틸트라이아졸-4-일)아미노]-6-옥소-3-피리딜]-2-피리딜]프탈라진-1-온 154
i-프로판올/THF(1:1, 4 mL) 및 물(1 mL) 중의 154c(85 mg, 0.15 mmol) 및 리튬 하이드록사이드(36 mg, 1.5 mmol)의 혼합물을 30℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 감압 하에서 증발시키고, 잔사를 물(5 mL)로 추출하였다. 이후 에틸 아세테이트(2 × 10 mL)로 추출하였다. 합친 에틸 아세테이트 추출물을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 표제 화합물(11 mg, 16%)을 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 531.4. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 8.54-8.53(m, 2H), 8.03(s, 1H), 7.91(d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.80-7.76(m, 1H), 7.75(s, 1H), 7.55(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.52(d, J = 5.0 Hz, 1H), 6.89(d, J = 2.5 Hz, 1H), 5.04(t, J = 5.0 Hz, 1H), 4.34(d, J = 5.0 Hz, 2H), 3.88(s, 3H), 3.63(s, 3H), 1.40(s, 9H).
실시예 155a 2-나이트로-5-(옥세탄-3-일)-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진 155a
Figure pct00088
메탄올(10 mL) 중의 2-나이트로-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진 124d(238 mg, 1.40 mmol), 옥세탄-3-온(252 mg, 3.5 mmol), NaBH3CN(260 mg, 4.2 mmol), 및 아연 클로라이드(567 mg, 4.2 mmol)의 혼합물을 50℃ 6시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 물에 첨가하고, 다이클로로메탄으로 3회 추출하였다. 합친 유기 층을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 50:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 155a(200 mg, 64%)를 수득하였다. MS: [M+H]+ 225.3
실시예 155b 5-(옥세탄-3-일)-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-아민 155b
50-mL 단일-목 환저 플라스크를 질소로 퍼지시키고, 155a(0.20 g, 0.89 mmol), 탄소 상의 10% 팔라듐(50% 습윤, 89 mg), 및 메탄올(10 mL)로 충전하였다. 혼합물을 진공배기하고, 수소 가스로 충전하고, 2시간 동안 실온에서 교반시켰다. 이후 수소를 진공배기하고, 질소를 용기에 충전시켰다. 촉매를 셀라이트® 패드를 통해 여과하여 제거하고, 여액을 감압 하에서 농축시켜 155b(140 mg, 81%)를 수득하였다. MS: [M+H]+ 195.1
실시예 155c 6-클로로-2-메틸-4-(5-(옥세탄-3-일)-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-일 아미노)피리다진-3(2H)-온 155c
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 1,4-다이옥산(25 mL), 155b(640 mg, 3.3 mmol), 4-브로모-6-클로로-2-메틸피리다진-3(2H)-온(1.1 g, 4.95 mmol), Pd2(dba)3(302 mg, 0.33 mmol), 잔트포스(381 mg, 0.66 mmol), 및 세슘 카보네이트(2.15 g, 6.6 mmol)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 가열하였다. 이후 반응물을 실온으로 냉각시켰다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 에틸 아세테이트로 세척하여 155c(754 mg, 68%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 337.3
실시예 155d (2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-5-(5-(옥세탄-3-일)-4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리다진-3-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 155d
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 155c(367mg, 1.1 mmol), 3-(아세톡시메틸)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일) 피리딘-4-일보론산 116c(908.6 mg, 2.2 mmol), Pd2(dba)3(100.6 mg, 0.11 mmol), P(cy)3(122.8 mg, 0.44 mmol), Cs2CO3(717 mg, 2.2 mmol), 다이옥산(20 mL), 및 물(0.5 mL)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 110℃에서 2시간 동안 가열하였다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 35:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 155d(120 mg, 16%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 669.8
실시예 155 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[1-메틸-5-[[5-(옥세탄-3-일)-6,7-다이하이드로-4H-피라졸로[1,5-a]피라진-2-일]아미노]-6-옥소-피리다진-3-일]-2-피리딜]프탈라진-1-온 155
i-프로판올/THF(1:1, 8 mL) 및 물(1 mL) 중의 155d(117 mg, 0.175 mmol) 및 리튬 하이드록사이드ㆍ물(73.5 mg, 1.75 mmol)의 혼합물을 35℃에서 0.5시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 감압 하에서 증발시키고, 잔사를 물(6 mL)로 희석시켰다. 이를 다이클로로메탄(3 × 50 mL)으로 추출하였다. 합친 다이클로로메탄 추출물을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 155(30 mg, 27%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 628.3. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 9.40(s, 1H), 8.64(d, J = 5.5 Hz, 1H), 8.55(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.94(s, 1H), 7.90(d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.79-7.77(m, 1H), 7.61(d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.04(s, 1H), 7.61-7.60(m, 1H), 4.61-4.59(m, 2H), 4.50-4.45(m, 4H), 4.01-3.99(m, 2H), 3.78(s, 3H), 3.69-3.65(m, 1H), 3.54(s, 2H), 2.79-2.76(m, 2H), 1.39(s, 9H).
실시예 156a 5-플루오로-N,N-비스(4-메톡시벤질)피리딘-2-아민 156
Figure pct00089
100-mL 환저 플라스크를 5-플루오로피리딘-2-아민(1.12 g, 10.0 mmol), NaH(288 mg, 12.0 mmol), 및 THF(20 mL)로 25℃에서 충전하였다. 4-메톡시벤질 클로라이드(1.87 g, 12.0 mmol)를 첨가하고, 25℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 이후 감압 하에서 농축시켰다. 물(30 mL)을 잔사에 첨가하고, 생성 혼합물을 다이클로로메탄(3 × 80 mL)으로 추출하였다. 합친 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 1:9 에틸 아세테이트/석유 에터로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 156a(620 mg, 18%)를 황색 액체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 353.0
실시예 156b 2-(6-(비스(4-메톡시벤질)아미노)피리딘-3-일)-2-메틸프로판나이트릴 156b
마그네틱 교반기로 장착된 25mL 밀폐된 튜브를 156a(528 mg, 1.5 mmol), KHMDS(15 mmol, 15 mL, 1mol/L의 THF), 및 아이소부티로나이트릴(1.03 g, 15 mmol)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 85℃에서 8시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 물로 켄칭하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 에틸 아세테이트(3 × 20 mL)로 추출하였다. 합친 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 증발시켜 156b(514 mg, 85%)를 황색 액체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 402.0
실시예 156c 2-(6-아미노피리딘-3-일)-2-메틸프로판나이트릴 156c
CF3COOH(15 mL) 중의 156b(514 mg, 1.28 mmol)의 용액을 60℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 이후 반응물을 실온으로 냉각시켰다. 이를 이후 감압 하에서 증발시키고, 잔사를 석유 에터 및 에틸 아세테이트로 세척하여 156c(600 mg, 조물질)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 162.3
실시예 156d 2-(6-(5-브로모-1-메틸-2-옥소-1,2-다이하이드로피리딘-3-일아미노)피리딘-3-일)-2-메틸프로판나이트릴 156d
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 1,4-다이옥산(35 mL), 156c(483 mg, 3.0 mmol), 3,5-다이브로모-1-메틸 피리딘-2(1H)-온(1.6 g, 6.0 mmol), Pd2(dba)3(274.5 mg, 0.30 mmol), 잔트포스(346.8 mg, 0.60 mmol), 및 세슘 카보네이트(4.59 g, 15 mmol)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 가열하였다. 이후 반응물을 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 1:1 에틸 아세테이트/석유 에터로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 156d(400 mg, 38%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 347.0
실시예 156e (2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(5-(5-(2-시아노프로판-2-일)피리딘-2-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 156e
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 156d(346 mg, 1.0 mmol), 3-(아세톡시메틸)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피리딘-4-일보론산 116c(1.65 g, 4.0 mmol), Pd(dppf)Cl2(82.5 mg, 0.10 mmol), 칼륨 아세테이트(196 mg, 2.0 mmol), K3PO4(424 mg, 2.0 mmol), 아세토나이트릴(15 mL), 및 물(0.5 mL)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 95℃에서 2시간 동안 가열하였다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 10:1 에틸 아세테이트/석유 에터로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 156e(210 mg, 33%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 635.8
실시예 156 2-[6-[[5-[2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소-프탈라진-2-일)-3-(하이드록시메틸)-4-피리딜]-1-메틸-2-옥소-3-피리딜]아미노]-3-피리딜]-2-메틸-프로판나이트릴 156
i-프로판올/THF(1:1, 8 mL) 및 물(2 mL) 중의 156e(191 mg, 0.30 mmol) 및 리튬 하이드록사이드ㆍ물(126 mg, 3.0 mmol)의 혼합물을 35℃에서 0.5시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 감압 하에서 증발시키고, 물(10 mL)로 희석하였다. 이후 이를 다이클로로메탄(3 × 20 mL)으로 추출하였다. 합친 다이클로로메탄 추출물을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 156(30 mg, 17%)을 연한 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 594.3. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 8.83(s, 1H), 8.77(d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.59(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.54(d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.34(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.91(s, 1H), 7.79-7.74(m, 2H), 7.57-7.53(m, 2H), 7.40(d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.92(bs, 1H), 4.43(s, 2H), 3.62(s, 3H), 1.67(s, 6H), 1.39(s, 9H).
실시예 157a (2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-5-(5-메틸아이소티아졸-3-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 157a
Figure pct00090
25-mL 밀폐된 튜브를 (4-(5-브로모-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 142c(155 mg, 0.28 mmol), 4-플루오로-2-(1-옥소-5-메틸아이소티아졸-3-아민 하이드로클로라이드(55 mg, 0.33 mmol), Cs2CO3(183 mg, 0.56 mmol), Pd2(dba)3(27 mg, 0.030 mmol), 잔트포스(35 mg, 0.060 mmol), 및 DMF(10 mL)로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 110℃에서 마이크로파 조사하에서 1시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 20:1 메틸렌 클로라이드/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼으로 정제하여 157a를 황색 고체(64 mg, 39%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 589.2
실시예 157 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[1-메틸-5-[(5-메틸아이소티아졸-3-일)아미노]-6-옥소-3-피리딜]-2-피리딜]프탈라진-1-온 157
THF/i-프로판올/물(4 mL/4 mL/1 mL) 중의 157a(60 mg, 0.10 mmol)의 용액에 리튬 하이드록사이드(24 mg, 1.0 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 물(10 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(3 × 15 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하여 황색 고체를 수득하고, 이를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 157을 황색 고체(27 mg, 50%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 546.7. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 9.28(s, 1H), 8.60-8.54(m, 3H), 7.90(s, 1H), 7.78(d, J = 16.0 Hz, 1H), 7.55-7.50(m, 2H), 7.04(s, 1H), 4.89(t, J = 6.5 Hz, 1H), 4.43-4.41(m, 2H), 3.61(s, 3H), 2.48(s, 3H), 1.40(s, 9H).
실시예 158a 5-브로모-3-(5-에틸이속사졸-3-일아미노)-1-메틸피리딘-2(1H)-온 158a
Figure pct00091
마그네틱 교반기 및 환류 응축기로 장착된 50-mL 단일-목 환저 플라스크를 5-에틸이속사졸-3-아민(250 mg, 2.23 mmol), 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온 (893 mg, 3.35 mmol), Pd2(dba)3(102 mg, 0.112 mmol), 잔트포스(129 mg, 0.223 mmol), Cs2CO3(1.45 g, 4.46 mmol), 및 다이옥산(20 mL)으로 충전하였다. 시스템을 진공/질소 플러슁으로 3회 반복하고, 100℃에서 N2 보호 하에서 3시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 LCMS로 분석하여 목적 생성물로 완전히 전환되었음을 나타내었다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 158a(300 mg, 45%)를 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 297.8
실시예 158b 3-(5-에틸이속사졸-3-일아미노)-1-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)피리딘-2(1H)-온 158b
마그네틱 교반기 및 환류 응축기로 장착된 50-mL 환저 플라스크를 158a(250 mg, 0.839 mmol), Pin2B2(320 mg, 1.26 mmol), Pd2(dba)3(38.4 mg, 0.042 mmol), X-Phos(48.5 mg, 0.0839 mmol), 칼륨 아세테이트(164.4 mg, 1.678 mmol), 및 다이옥산(20 mL)으로 충전하였다. 시스템을 진공/질소 플러슁으로 3회 반복하고, 70℃에서 N2 보호 하에서 2시간 동안 가열시켰다. 반응 혼합물을 LCMS로 분석하여 목적 생성물로 완전히 전환되었음을 나타내었다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 석유 에터로 세척하여 158b(330 mg, 조물질)를 어두운 고체로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS-ESI: [M+H]+ 346.0
실시예 158c 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(5-(5-에틸이속사졸-3-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)니코틴알데하이드 158c
환류 응축기가 장착된 50-mL 환저 플라스크를 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-클로로니코틴알데하이드 103b(160 mg, 0.44 mmol), 158b(228 mg, 0.66 mmol), Pd(dppf)Cl2(18 mg, 0.022 mol), K3PO4(187 mg, 0.88 mmol), 나트륨 아세테이트(72.2 mg, 0.88 mmol), 아세토나이트릴(15 mL), 및 물(5 방울)로 충전하였다. 시스템을 진공/질소 플러슁으로 3회 반복하고, 100℃에서 N2 보호 하에서 1시간 동안 가열시켰다. 반응 혼합물을 LCMS로 분석하여 목적 생성물로 완전히 전환되었음을 나타내었다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 40:1 다이클로로메탄/메탄올로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 158c(210 mg, 88%)를 황색 오일로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 543.3
실시예 158 6-3급-부틸-2-[4-[5-[(5-에틸이속사졸-3-일)아미노]-1-메틸-6-옥소-3-피리딜]-3-(하이드록시메틸)-2-피리딜]-8-플루오로-프탈라진-1-온 158
다이클로로메탄(5 mL) 및 메탄올(5 mL) 중의 158c(190 mg, 0.35 mmol)의 용액에 NaBH4(26.5 mg, 0.70 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시키고, 수성 NH4Cl로 켄칭하였다. 이후 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 다이클로로메탄으로 추출하였다. 합친 추출물을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 158(70 mg, 37%)을 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 545.3. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 9.01(s, 1H), 8.58(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.54(d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.01(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.90(s, 1H), 7.79(d, J = 13 Hz, 1H), 7.57(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.51(d, J = 5.0 Hz, 1H), 6.26(s, 1H), 4.90(s, 1H), 4.44-4.43(m, 2H), 3.61(s, 3H), 2.69-2.65(m, 2H), 1.40(s, 9H), 1.19(t, J = 8.0 Hz, 3H)
실시예 159a 2-(다이플루오로메틸)-4-나이트로-2H-1,2,3-트라이아졸 159a
Figure pct00092
4-나이트로-2H-1,2,3-트라이아졸(500 mg, 4.38 mmol, 1.0 당량), 나트륨 2-클로로-2,2-다이플루오로아세테이트(1310 mg, 8.76 mmol, 2.0 당량), K2CO3(1140 mg, 8.76 mmol, 2.0 당량), 및 아세토나이트릴(20 mL)을 함유하는 100-mL 단일-목 환저 플라스크를 5시간 동안 환류 교반시켰다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 여과시키고, 여액을 감압 하에서 증발시켰다. 잔사를 4:1 석유 에터/에틸 아세테이트로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 159a(350 mg, 48%)를 갈색 액체로서 수득하였다. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 8.38(s, 1H), 7.39(t, J = 57.5 Hz, 1H).
실시예 159b 2-(다이플루오로메틸)-2H-1,2,3-트라이아졸-4-아민 159b
실시예 151e의 절차를 따라, 159a(300 mg, 1.83 mmol) 및 탄소 상의 10% 팔라듐(50% 습윤, 60 mg)으로 출발하여 159b를 황색 액체(200 mg, 81%)로서 수득하였다. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 7.24(s, 1H), 7.14(t, J = 58.5 Hz, 1H), 4.08(brs, 2H).
실시예 159c 5-브로모-3-(2-(다이플루오로메틸)-2H-1,2,3-트라이아졸-4-일아미노)-1-메틸피리딘-2(1H)-온 159c
실시예 151f의 절차를 따라, 159b(170 mg, 1.25 mmol, 1.0 당량) 및 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온(504 g, 1.89 mmol, 1.5 당량)으로 출발하여 159c를 밝은 황색 고체(280 mg, 70%)로서 수득하였다. MS-ESI:[M+H]+ 320.1.
실시예 159d (2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(5-(2-(다이플루오로메틸)-2H-1,2,3-트라이아졸-4-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 159d
실시예 152c의 절차를 따라, 159c(150 mg, 0.46 mmol, 1.0 당량) 및 3-(아세톡시메틸)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피리딘-4-일보론산(116c)(285 mg, 0.69 mmol, 1.5 당량)으로부터 출발하여 159d를 황색 고체(90 mg, 32%)로서 수득하였다. MS-ESI:[M+H]+ 609.3
실시예 159 6-3급-부틸-2-[4-[5-[[2-(다이플루오로메틸)트라이아졸-4-일]아미노]-1-메틸-6-옥소-3-피리딜]-3-(하이드록시메틸)-2-피리딜]-8-플루오로-프탈라진-1-온 159
실시예 152의 절차를 따라, 159d(80 mg, 0.13 mmol)로부터 출발하여 159를 백색 고체(29 mg, 40%)로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 567.3. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 8.70(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.36(d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.15(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.84(s, 1H), 7.74(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.62-7.53(m, 4H), 7.25(t, J = 59.0 Hz, 1H), 4.50(s, 2H), 4.09(t, J = 6.5 Hz, 1H), 3.75(s, 3H), 1.45(s, 9H).
실시예 160a 5-브로모-1-메틸-3-(피라진-2-일아미노)피리딘-2(1H)-온 160a
Figure pct00093
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 250-mL 단일-목 환저 플라스크를 피라진-2-아민(1.0 g, 10 mmol), 3,5-다이브로모-1-메틸피리딘-2(1H)-온(2.7 g, 10 mmol), Pd2(dba)3(460 mg, 0.50 mmol), 잔트포스(600 mg, 1.0 mmol), 세슘 카보네이트(6.52 g, 20 mmol), 및 1,4-다이옥산(150 mL)으로 충전하였다. 진공/아르곤 플러슁을 3회 반복시킨 후, 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 가열하였다. 이후 이를 여과시키고, 여액을 진공 증발시켰다. 잔사를 메탄올로 재결정함으로써 정제하여 160a(1.3 g, 47%)를 밝은 녹색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 281.0.
실시예 160b (2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-6-옥소-5-(피라진-2-일아미노)-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 160b
환류 응축기가 장착된 50-mL 환저 플라스크를 160a(140 mg, 0.50 mmol), 3-(아세톡시메틸)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피리딘-4-일보론산 116c(410 mg, 1.0 mmol), Pd(dppf)Cl2(25 mg, 0.025 mmol), K3PO4(220 mg, 1.0 mmol), 나트륨 아세테이트 3수화물(136 mg, 1.0 mmol), 아세토나이트릴(15 mL), 및 물(0.5 mL)로 충전하였다. 시스템을 진공배기하고, N2로 재충전하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 생성 잔사를 다이클로로메탄/메탄올(100:1 내지 25:1)로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 160b(150 mg, 52%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 570.2.
실시예 160 6-3급-부틸-8-플루오로-2-[3-(하이드록시메틸)-4-[1-메틸-6-옥소-5-(피라진-2-일아미노)-3-피리딜]-2-피리딜]프탈라진-1-온 160
THF/ i-프로판올(4:2, 6 mL) 및 물(2 mL) 중의 160b(120 mg, 0.21 mmol) 및 리튬 하이드록사이드 1수화물(88 mg, 2.1 mmol)의 혼합물을 30℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 감압 하에서 증발시키고, 잔사를 물(10 mL)로 희석시켰다. 이후 에틸 아세테이트(2 × 20 mL)로 추출하였다. 합친 에틸 아세테이트 추출물을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 160(50 mg, 45 %)을 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 527.8. 1H NMR(500 MHz, CHCl3) δ 8.78(d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.71(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.36(d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.31(s, 1H), 8.19(s, 1H), 8.14(s, 1H), 8.05(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.81(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.59(s, 1H), 7.56-7.55(m, 2H)
실시예 161a 1-메틸-3-(5-메틸이속사졸-3-일아미노)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)피리딘-2(1H)-온 161a
Figure pct00094
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 50-mL 환저 플라스크를 5-브로모-1-메틸-3-(5-메틸이속사졸-3-일아미노)피리딘-2(1H)-온 129a(330 mg, 1.16 mmol), Pin2B2(442 mg, 1.74 mmol), Pd2(dba)3(53 mg, 0.058 mmol), X-Phos(55 mg, 0.116 mmol), 칼륨 아세테이트(227 mg, 2.32 mmol), 및 다이옥산(20 mL)으로 충전하였다. 진공/N2 플러슁을 3회 반복한 후, 혼합물을 70℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 LCMS로 분석하여 목적 생성물로 완전히 전환되었음을 나타내었다. 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 석유 에터로 세척하여 161a(300 mg, 78%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 332.3
실시예 161b 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-5-(5-메틸이속사졸-3-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)니코틴알데하이드 161b
환류 응축기가 장착된 100-mL 환저 플라스크를 2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-클로로니코틴알데하이드 103b(390 mg, 1.08 mmol), 161a(537 mg, 1.62 mmol), 세슘 카보네이트(704 mg, 2.16 mmol), 1,4-다이옥산(30 mL), 및 물(3 mL)로 충전하였다. 현탁액에 질소를 10분 동안 버블링시킨 후, Cy3P(121 mg, 0.43 mmol) 및 Pd2(dba)3(99 mg, 0.11 mmol)를 첨가하였다. 시스템을 진공/질소 플러슁으로 3회 반복하고, 3시간 동안 환류 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 고체를 다이클로로메탄(3 × 20 mL)으로 세척하였다. 합친 여액을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 20:1 에틸 아세테이트/석유 에터로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 161b(300 mg, 52%)를 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 528.8
실시예 161c 6-3급-부틸-8-플루오로-2-(3-(하이드록시메틸)-4-(1-메틸-5-(5-메틸이속사졸-3-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-2-일)프탈라진-1(2H)-온 161c
메탄올(10 mL) 중의 161b(300 mg, 0.57 mmol)의 용액에 NaBH4(108 mg, 2.85 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응을 6시간 동안 교반시킨 후, LCMS가 반응이 완료되었음을 나타내었다. 이를 물(10 mL)로 켄칭하고, 감압 하에서 농축시켰다. 생성 잔사를 다이클로로메탄(3 × 20 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 고체 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 석유 에터/에틸 아세테이트(1:20 내지 100% 에틸 아세테이트)로 용리하여 161c(164 mg, 54%)를 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 530.8
실시예 161d 다이벤질(2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-5-(5-메틸이속사졸-3-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-3-일)메틸 포스파이트 161d
아세토나이트릴 중의 161c(100 mg, 0.19 mmol), 다이벤질 다이아이소프로필포스포라미다이트(85 mg, 0.25 mmol), 1H-테트라졸(27 mg, 0.38 mmol)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. LCMS가 아무런 추가의 반응도 나타내지 않았다. 161d를 함유하는 혼합물을 다음 단계에서 추가의 정제 없이 사용하였다. MS-ESI: [M+H]+ 775.3.
실시예 161e 다이벤질(2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(1-메틸-5-(5-메틸이속사졸-3-일아미노)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-3-일)메틸 포스페이트 161e)
아세토나이트릴 중의 161d의 혼합물에 m-클로로퍼벤조산(49 mg, 0.28 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반시키고, 여과시켰다. 여액을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 161e(15 mg, 2단계에 걸쳐 10 %)를 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 791.3
실시예 161 [2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소-프탈라진-2-일)-4-[1-메틸-5-[(5-메틸이속사졸-3-일)아미노]-6-옥소-3-피리딜]-3-피리딜]메틸 다이하이드로젠 포스페이트 161
트라이플루오로아세트산(297 mg, 2.60 mmol) 중의 161e(10 mg, 0.013mmol)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 잔사를 역상 분취용-HPLC로 정제하여 161(6.7 mg, 84%)을 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 611.3. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 9.00(s, 1H), 8.61(m, 1H), 8.50(bs, 1H), 8.02(s, 1H), 7.87-7.72(m, 3H), 7.53(m, 1H), 6.27(s, 1H), 4.61-4.56(m, 2H), 3.46(s, 3H), 2.33(s, 3H), 1.31(s, 9H).
실시예 162a 5,6-다이하이드로-4H-피롤로[1,2-b]피라졸-2-카복실산 162a
Figure pct00095
환류 응축기가 장착된 25-mL 환저 플라스크를 에틸 5,6-다이하이드로-4H-피롤로[1,2-b]피라졸-2-카복실레이트(540 mg, 3.0 mmol), 2N 수성 나트륨 하이드록사이드 용액(3.5 mL), 및 1,4-다이옥산(3.0 mL)으로 충전하였다. 시스템을 65℃에서 2.5 시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 농축 HCl로 pH를 2-3으로 조정하였다. 고체를 여과하여 수집하여 162a(260 mg, 57%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 153.3
실시예 162b 3급-부틸 5,6-다이하이드로-4H-피롤로[1,2-b]피라졸-2-일카바메이트 162b
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 25-mL 단일-목 환저 플라스크를 162a(197.6 mg, 1.3 mmol), 3급-부탄올(5.0 mL), 트라이에틸아민(262.6 mg, 2.6 mmol), 및 DPPA(550 mg, 2.0 mmol)로 충전하였다. 시스템을 진공/질소 플러슁으로 3회 반복하고, 85℃에서 5시간 동안 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 콤비플래시(A: 1% NH4HCO3/물, B: 아세토나이트릴)로 정제하여 162b(45 mg, 15.5%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H-56]+ 168.3
실시예 162c 5,6-다이하이드로-4H-피롤로[1,2-b]피라졸-2-아민 162c
다이클로로메탄(1.5 mL) 중의 162b(45 mg, 0.20 mmol)의 용액에 트라이플루오로아세트산(1 mL)을 실온에서 첨가하였다. 용액을 5시간 동안 교반시켰다. 이후 감압 하에서 농축시켜서 162c를 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS-ESI: [M+H]+ 124.3
실시예 162d (2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-4-(5-(5,6-다이하이드로-4H-피롤로[1,2-b]피라졸-2-일아미노)-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 162d
마그네틱 교반기 및 환류 응축기가 장착된 25-mL 단일-목 환저 플라스크를 (4-(5-브로모-1-메틸-6-옥소-1,6-다이하이드로피리딘-3-일)-2-(6-3급-부틸-8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피리딘-3-일)메틸 아세테이트 142c(166.2 mg, 0.30 mmol), 162c(24.6 mg, 0.20 mmol), 세슘 카보네이트(130 mg, 0.40 mmol), 및 1,4-다이옥산(4.0 mL)으로 충전하였다. 현탁액에 질소를 10분 동안 버블링시킨 후, 잔트포스(23 mg, 0.040 mmol) 및 트리스(다이벤질리덴아세톤)다이팔라듐(0)(14 mg, 0.020 mmol)을 첨가하였다. 시스템을 진공/질소 플러슁으로 3회 반복하고, 2.5시간 동안 환류 가열하였다. 이후 이를 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 고체를 다이클로로메탄(3 × 10 mL)으로 세척하였다. 합친 유기 층을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 다이클로로메탄/메탄올(100:1 내지 50:1)로 용리되는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 162d(50 mg, 42%)를 황색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 598.3
실시예 162 6-3급-부틸-2-[4-[5-(5,6-다이하이드로-4H-피롤로[1,2-b]피라졸-2-일아미노)-1-메틸-6-옥소-3-피리딜]-3-(하이드록시메틸)-2-피리딜]-8-플루오로-프탈라진-1-온 162
THF/i-프로판올 /물(1/1/0.5 ml) 중의 162d(50 mg, 0.080 mmol)의 용액에 리튬 하이드록사이드(19 mg, 0.80 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응물을 2.5 시간 동안 교반시킨 후, LCMS가 반응이 완료되었음을 나타내었다. 이후 혼합물을 물(15 mL)에 붓고, 다이클로로메탄(3 × 20 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 고체 잔사를 역상 분취용-HPLC(A: 1% NH4HCO3/물, B: 아세토나이트릴)로 정제하여 162(15 mg, 33.3%)를 백색 고체로서 수득하였다. MS-ESI: [M+H]+ 556.3. 1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 8.62(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.32(s, 1H), 7.93(d, J = 2.0 Hz,1H), 7.55-7.47(m, 4H), 7.26(s, 1H), 5.74(s, 1H), 4.47(d, J = 4.0 Hz, 2H), 4.07(t, J = 2.0 Hz, 2H), 3.70(s, 3H), 2.87(t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.55-2.52(m, 2H), 1.45(s, 9H).
실시예 901 생화학적 Btk 분석
화학식 I의 화합물을 시험하는데 사용될 수 있는 표준 생화학적 Btk 키나제 분석을 위한 일반적인 과정은 다음과 같다. 1X 세포 신호전달 키나제 완충제(25 mM 트리스(Tris)-HCl, pH 7.5, 5 mM 베타-글리세로포스페이트, 2 mM 다이티오트레이톨, 0.1 mM Na3VO4, 10 mM MgCl2), 0.5 μM 프로메가 PTK 바이오티닐화된 펩티드 기질 2 및 0.01% BSA를 함유하는 마스터 믹스 마이너스 Btk 효소를 제조한다. 1X 세포 신호전달 키나제 완충제, 0.5 μM PTK 바이오티닐화된 펩티드 기질 2, 0.01% BSA 및 100 ng/웰(0.06 mU/웰) Btk 효소를 함유하는 마스터 믹스 플러스 Btk 효소를 제조한다. Btk 효소는 다음과 같이 제조한다: C-말단 V5 및 6x His 태그를 갖는 전장 인간 야생형 Btk(수탁번호 NM-000061)를, 에피토프-태깅된 Btk를 갖는 바큘로바이러스를 제조하기 위하여, pFastBac 벡터로 서브클로닝하였다. 바큘로바이러스의 생성은 공개된 프로토콜 "Bac-to-Bac 바큘로바이러스 발현 시스템"(카탈로그 번호 10359-016 및 10608-016)에 상세히 기록된 인비트로겐(Invitrogen)의 지침에 기초하여 수행된다. 계대배양 3 바이러스가 재조합 Btk 단백질을 과발현하기 위하여 Sf9 세포를 감염시키는데 사용된다. 이어서, Ni-NTA 컬럼을 사용하여 Btk 단백질을 균질하게 정제한다. 최종 단백질 제제의 순도는 민감성 사이프로-루비(Sypro-Ruby) 착색에 기초하여 95% 초과이다. 200 μM ATP의 용액을 물에서 제조하고, 1N NaOH에 의해 pH 7.4로 조정한다. 5% DMSO 중 1.25 μL의 양의 화합물을 96-웰 ½ 면적 코스타(Costar) 폴리스티렌 플레이트로 옮긴다. 화합물을 단독으로, 및 11-점 투여-반응성 곡선(출발 농도는 10 μM; 1:2 희석임)으로 시험한다. 18.75 μL의 양의 마스터 믹스 마이너스 효소(음성 대조군으로서) 및 마스터 믹스 플러스 효소를 96-웰 ½ 면적 코스타 폴리스티렌 플레이트 중의 적절한 웰로 옮긴다. 5 μL의 200 μM ATP를 40 μM의 최종 ATP 농도를 위해 96-웰 ½ 면적 코스타 폴리스티렌 플레이트 중의 상기 혼합물에 첨가한다. 반응물을 1시간 동안 실온에서 항온처리한다. 반응을 30 mM EDTA, 20 nM SA-APC 및 1 nM PT66 Ab를 함유하는 퍼킨 엘머(Perkin Elmer) 1X 검출 완충제에 의해 중단시킨다. 플레이트를 여기 필터 330 nm, 방출 필터 665 nm 및 2차 방출 필터 615 nm를 사용하는 퍼킨 엘머 엔비젼(Perkin Elmer Envision)에 의한 시간-분해 형광에 의해 판독한다. IC50 값을 이어서 계산한다. 다르게는, 란타스크린(Lanthascreen) 분석을 사용하여 인산화된 펩티드 생성물의 정량화를 통해 Btk 활성을 평가한다. 펩티드 상의 플루오레세인과 검출 항체 상의 터븀 사이에 발생하는 형광 공명 에너지 전달(Fluorescence Resonance Energy Transfer: FRET)은 펩티드의 인산화를 감소시키는 Btk 억제제의 첨가에 의해 감소한다. 25 μL의 최종 반응 부피에서, Btk(h)(0.1 ng/25 μL 반응)를 50 mM 헤페스(Hepes) pH 7.5, 10 mM MgCl2, 2 mM MnCl2, 2 mM DTT, 0.2 mM NaVO4, 0.01% BSA 및 0.4 μM 플루오레세인 폴리-GAT와 함께 항온처리한다. ATP를 25 μM(ATP의 Km)까지 첨가함으로써 반응을 개시한다. 실온에서 60분 동안 항온처리한 후, 실온에서 30분 동안 최종 농도의 60 mM EDTA 중 2 nM Tb-PY20 검출 항체를 첨가함으로써, 반응을 중단시킨다. 340 nM 여기, 및 495 nm 및 520 nm에서의 방출을 사용하여 퍼킨 엘머 엔비젼 상에서 검출한다. 예시적인 Btk 억제 IC70 값은 표 1 및 2에 있다.
실시예 902 라모스 세포 Btk 분석
화학식 I의 화합물을 시험하는데 사용될 수 있는 표준 세포성 Btk 키나제 분석을 위한 다른 일반적인 과정은 다음과 같다. 라모스 세포를 시험 화합물의 존재 하에 37℃에서 1시간 동안 0.5 x 107 세포/mL의 밀도로 항온처리한다. 이어서, 10 μg/mL 항-인간 IgM F(ab)2와 함께 37℃에서 5분 동안 항온처리함으로써, 세포를 자극한다. 세포를 펠렛화시키고, 용해시키고, 단백질 분석을 세정된 용해물에 대해 수행한다. 동등한 단백질 양의 각각을 샘플이 항-포스포Btk(Tyr223) 항체(세포 신호전달 기술 번호 3531; 에피토믹스(Epitomics), 카탈로그 번호 2207-1) 또는 포스포Btk(Tyr551) 항체(비디 트랜스덕션 랩스(BD Transduction Labs) 번호 558034)를 각각 사용하는 SDS-PAGE 및 웨스턴 블롯팅을 거치게 하여, 각각의 용해물 중 Btk의 총량을 조절하기 위해, Btk 자가인산화 또는 항-Btk 항체(비디 트랜스덕션 랩스 번호 611116)를 평가한다.
실시예 903 B-세포 증식 분석
화학식 I의 화합물을 시험하는데 사용될 수 있는 표준 세포성 B-세포 증식 분석을 위한 일반적인 과정은 다음과 같다. B-세포를 B-세포 단리 키트(밀텐이 바이오텍(Miltenyi Biotech), 카탈로그 번호 130-090-862)를 사용하여 8 내지 16주령 Balb/c 마우스의 비장으로부터 정제한다. 시험 화합물을 0.25% DMSO에 희석하고, 30분 동안 2.5 x 105 정제된 마우스 비장 B-세포와 함께 항온처리한 후, 10 μg/mL의 항-마우스 IgM 항체(서던 바이오테크놀로지 어쏘시에이트스(Southern Biotechnology Associates) 카탈로그 번호 1022-01)를 100 μL의 최종 부피에 첨가한다. 24시간 항온처리한 후, 1 μCi 3H-티미딘을 첨가하고, 플레이트를 추가로 36시간 항온처리한 후, SPA[3H] 티미딘 흡수 분석 시스템(아머샴 바이오사이언시스(Amersham Biosciences) 번호 RPNQ 0130)에 관한 제조사 프로토콜을 사용하여 수확한다. SPA-비드 기반 형광을 마이크로베타 계수기(월리스 트라이플렉스(Wallace Triplex) 1450, 퍼킨 엘머)에서 계수한다.
실시예 904 T-세포 증식 분석
화학식 I의 화합물을 시험하는데 사용될 수 있는 표준 T-세포 증식 분석을 위한 일반적인 과정은 다음과 같다. T-세포를 팬 T-세포 단리 키트(밀텐이 바이오텍, 카탈로그 번호 130-090-861)를 사용하여 8 내지 16주령의 Balb/c 마우스로부터 정제한다. 시험 화합물을 0.25% DMSO에 희석하고, 항-CD3(BD 번호 553057) 및 항-CD28(BD 번호 553294) 항체 각각 10 μg/mL로 37℃에서 90분 동안 예비코팅된 평평하고 투명한 바닥 플레이트에서 100 μL의 최종 부피로 2.5 x 105 정제된 마우스 비장 T-세포와 함께 항온처리한다. 24시간 항온처리한 후, 1 μCi 3H-티미딘을 첨가하고, 플레이트를 추가로 36시간 항온처리한 후, SPA[3H] 티미딘 흡수 분석 시스템(아머샴 바이오사이언시스 번호 RPNQ 0130)에 관한 제조사 프로토콜을 사용하여 수확한다. SPA-비드 기반 형광을 마이크로베타 계수기(월리스 트라이플렉스 1450, 퍼킨 엘머)에서 계수한다.
실시예 905 CD86 억제 분석
화학식 I의 화합물을 시험하는데 사용될 수 있는 B-세포의 억제에 관한 표준 분석을 위한 일반적인 과정은 다음과 같다. 전체 마우스 비장세포를 적혈구 용해(비디 파민겐(BD Pharmingen) 번호 555899)에 의해 8 내지 16주령 Balb/c 마우스의 비장으로부터 정제한다. 시험 화합물을 0.5% DMSO에서 희석하고 37℃에서 60분 동안 평평한 투명 바닥 플레이트(팔콘(Falcon) 353072)에서 200 μL의 최종 농도로 1.25 x 106 비장세포와 함께 항온처리한다. 이어서, 15 μg/mL IgM(잭슨 이뮤노리서치(Jackson ImmunoResearch) 115-006-020)의 첨가에 의해 세포를 자극하고, 37℃, 5% CO2에서, 24시간 동안 항온처리한다. 24시간 항온처리한 후, 세포를 원뿔 바닥 투명 96-웰 플레이트로 옮기고, 1200 x g x 5분으로 원심분리함으로써 펠렛화시킨다. 세포를 CD16/CD32(비디 파민겐 번호 553142)로 사전차단(preblocking)하고, CD19-FITC(비디 파민겐 번호 553785), CD86-PE(비디 파민겐 번호 553692) 및 7AAD(비디 파민겐 번호 51-68981E)로 삼중 착색한다. 세포를 비디 팍스칼리버(BD FACSCalibur) 상에서 분류하고 CD19+/7AAD- 집단 상에서 게이팅(gating)한다. 게이팅된 집단 상의 CD86 표면 발현의 수준을 시험 화합물 농도에 대해 측정한다.
실시예 906 B-ALL 세포 생존 분석
생존 세포의 수를 측정하기 위하여 XTT 판독을 사용하는 표준 B-ALL(급성 림프구성 백혈병) 세포 생존 연구를 위한 과정은 다음과 같다. 이러한 분석은 배양균에서 B-ALL 세포의 생존을 억제하는 이들의 능력에 관해 화학식 I의 화합물을 시험하는데 사용될 수 있다. 사용될 수 있는 하나의 인간 B-세포 급성 림프구성 백혈병 라인은 SUP-B15(ATCC로부터 입수가능한 인간 Pre-B-세포 ALL 라인)이다.
SUP-B15 pre-B-ALL 세포는 100 μL의 이스코브(Iscove) + 20% FBS에서 5 x 105 세포/mL의 농도로 다중 96-웰 마이크로타이터 플레이트에서 평판배양된다. 이어서, 시험 화합물을 0.4% DMSO의 최종 농도로 첨가한다. 세포를 37℃에서 5% CO2 하에 3일 이하 동안 항온처리한다. 3일 후, 세포를 시험 화합물을 함유하는 신선한 96-웰 플레이트에 1:3으로 나누고, 추가로 3일까지 성장시킨다. 각각 24시간의 기간 후, 50 μL의 XTT 용액을 복제 96-웰 플레이트 중 하나에 첨가하고, 흡광 판독치를 제조사의 지침에 따라 2, 4 및 20시간에 취한다. 이어서, 분석(0.5-1.5)의 선형 범위 내에서 DMSO만으로 처리된 세포에 대해 OD로 취해진 판독치가 취해지고, 화합물 처리된 웰 중 생존 세포의 퍼센트가 DMSO만으로 처리된 세포에 대해 측정된다.
실시예 907 CD69 전혈 분석
인간 혈액을 1주 동안 약물 미복용 및 비흡연 조건을 만족하는 건강한 자원 봉사자로부터 수득하였다. 혈액(8개의 화합물을 시험하기 위해 약 20 mL)을 나트륨 헤파린을 포함한 배큐테이너(Vacutainer: 등록상표)(벡튼, 디킨슨 앤드 캄파니(Becton, Dickinson and Co.)) 관으로 정맥 천자하여 수집하였다.
DMSO 중 10 mM의 화학식 I의 화합물의 용액을 100% DMSO 중에서 1:10 희석하고, 이어서, 10-점 투여량-반응 곡선을 위해 100% DMSO 중에서 3배 계대 희석하였다. 화합물을 PBS 중에서 추가로 1:10 희석하고, 이어서 각각의 화합물의 분취액(5.5 μL)을 96-웰 플레이트(2 mL)에 2회씩 첨가하고, 대조군 및 무-자극 웰로서 PBS 중의 10% DMSO(5.5 μL)를 첨가하였다. 인간 전혈-HWB(100 μL)를 각각의 웰에 첨가하였다. 플레이트를 혼합한 후, 37℃, 5% CO2, 100% 습도에서 30분 동안 배양하였다. 염소 F(ab')2 항-인간 IgM(10 μL의 500 μg/mL 용액, 최종 50 μg/mL)을 혼합하면서 각각의 웰(무-자극 웰 제외)에 첨가하고, 추가 20시간 동안 플레이트를 배양하였다. 20시간 항온처리 말기에, 샘플을 형광 표지된 항체와 함께 30분 동안 37℃, 5% CO2, 100% 습도에서 배양하였다. 보상 조정 및 초기 전압 설정을 위해 유도된 대조군, 미염색군 및 단일 염색군을 포함한다. 이어서, 샘플을 제조자의 지시에 따라 파엠 라이스(PharM Lyse: 상표)(비디 바이오사이언시스 파민겐)로 용해시켰다. 이어서, 샘플을 LSRII 기계 상의 비디 바이오사이언시스 HTS 96 웰 시스템 상에서 실험하는데 적합한 96 플레이트에 옮겼다. 획득된 데이터 및 평균 형광 강도 값은 비디 바이오사이언시스 디바(DIVA) 소프트웨어를 사용하여 수득되었다. 결과는 초기에 FACS 분석 소프트웨어(플로우 조(Flow Jo))로 분석하였다. 시험 화합물에 대한 억제 농도(IC50, IC70, IC90 등)는 항-IgM에 의해 자극된 CD20 포지티브인 CD69 세포의 포지티브 퍼센트(무-자극 백그라운드에 대한 8개의 웰의 평균을 감산한 후의 8개의 대조군 웰의 평균)를 50% 감소시키는 농도로서 정의된다. IC70 값은 비-선형 회귀 곡선 정합을 사용하는 프리즘(Prism) 버전 5에 의해 계산되고, 표 1 및 2에 제시된다.
실시예 908 시험관내 세포 증식 분석
화학식 I의 화합물 효능을 하기 프로토콜을 사용하는 세포 증식 분석에 의해 측정한다(문헌[Mendoza et al (2002) Cancer Res. 62:5485-5488]). 시약 및 프로토콜을 비롯한 셀타이터-글로(등록상표) 발광 세포 생존 분석은 상업적으로 이용가능하다(프로메가 코포레이션, 미국 위스콘신주 매디슨 소재, 테크니컬 불러틴(Technical Bulletin) TB288). 분석은 세포를 도입하고 세포 증식을 억제하는 화합물의 능력을 평가한다. 분석 원리는, 셀타이터-글로 시약의 첨가가 세포 용해, 및 루시퍼라제 반응을 통한 발광 신호의 발생을 야기하는 동종 분석에 존재하는 ATP를 정량화시킴에 의한, 존재하는 생존 세포의 수의 측정에 기초한다. 발광 신호는 존재하는 ATP의 양에 비례한다.
B-세포 림프종 세포주의 패널(BJAB, SUDHL-4, TMD8, OCI-Ly10, OCI-Ly3, WSU-DLCL2)을 정상 성장 매질에서 384-웰 플레이트로 평판배양하고, 연속적으로 희석된 BTK 억제제 또는 DMSO를 단독으로 각각의 웰에 첨가한다. 세포 생존능을 96시간 항온처리한 후 셀타이터-글로(등록상표)(프로메가)에 의해 평가한다. 데이터는 DMSO-처리된 대조군 세포에 대한 BTK 억제제-처리된 세포의 상대적인 세포 생존능으로서 제공될 수 있다. 데이터 포인트는 각각의 투여량 수준에서 4개의 복제물의 평균이다. 오차 막대는 평균으로부터의 SD를 나타낸다.
절차: 1일 - 세포 플레이트(384-웰 블랙, 투명 바닥, 마이크로클리어, 팔콘 번호 353962로부터의 뚜껑을 갖는 TC 플레이트)를 시딩하고, 세포를 수확하고, 3일 분석 동안 384 웰 세포 플레이트로의 웰 당 54 μL 당 1000 세포로 세포를 시딩한다. 세포 배지: RPMI 또는 DMEM 고 글루코스, 10% 소 태아 혈청, 2 mM L-글루타민, P/S. 37℃, 5% CO2에서 항온처리 O/N.
2일 - 세포로 약물을 첨가하고, 화합물을 희석하고(DMSO 플레이트(9개의 포인트에 대해 시리얼 1:2)), 96 웰 플레이트의 2차 컬럼 중 10 mM로 20 μL 화합물을 첨가한다. 프레시젼(Precision)을 사용하여 총 9개의 지점에 대해 플레이트를 통해 시리얼 1:2를 수행한다(10μL + 20μL 100% DMSO). 눈크(Nunc)(카탈로그 번호 249946)로부터의 매질 플레이트 96-웰 원뿔 바닥 폴리프로필렌 플레이트(1:50 희석). 147 μL의 매질을 모든 웰에 첨가한다. DMSO 플레이트 중 각각의 웰로부터의 3 μL의 DMSO + 화합물을 래피드플레이트(Rapidplate)를 사용하여 매질 플레이트 상의 각각의 상응하는 웰로 옮긴다.
세포로 약물을 첨가하고(세포 플레이트(1:10 희석)), 세포(이미 세포 상의 54 μL의 매질)로 6 μL의 매질 + 화합물을 직접적으로 첨가하고, 자주 개방되지 않을 인큐베이터 중에서 37℃, 5% CO2에서 항온처리한다.
5일 - 플레이트를 성장시키고, 셀타이터-글로 완충제를 실온에서 해빙한다. 37℃에서 세포 플레이트를 제거하고, 약 30분 동안 실온으로 평형화시킨다. 셀타이터-글로 완충제를 셀타이터-글로 기질에 첨가한다(병으로부터 병으로). 세포의 각각의 웰로 30 μL 셀타이터-글로 시약(프로메가 카탈로그 번호 G7572)을 첨가한다. 약 30분 동안 플레이트 진탕기 상에 위치시킨다. 애널리스트 HT 플레이트 리더 상에서 발광을 판독한다(웰 당 0.5초).
세포 생존능 분석 및 조합 분석: 세포를 384-웰 플레이트 중에 16시간 동안 1000 내지 2000 세포/웰로 시딩한다. 2일에, 9개의 시리얼 1:2 화합물 희석액을 96 웰 플레이트에서 DMSO 중에서 제조한다. 화합물을 래피드플레이트 로봇(자이마크 코포레이션(Zymark Corp.), 미국 매사추세츠주 홉킨톤 소재)을 사용하여 성장 매질 내로 더욱 희석시킨다. 이어서, 희석된 화합물을 384-웰 세포 플레이트 중 4개의 웰에 첨가하고, 37℃ 및 5% CO2에서 항온처리한다. 4일 후, 생존 세포의 상대적인 수를 제조사의 설명서에 따라 셀타이터-글로(프로메가)를 사용하는 발광에 의해 측정하고, 월락 멀티라벨 리더(Wallac Multilabel Reader)(퍼킨 엘머, 미국 포스터 시티 소재) 상에서 판독한다. EC50 값을 프리즘(등록상표) 4.0 소프트웨어(그래프패드(GraphPad), 미국 샌 디에고 소재)를 사용하여 계산한다. 화학식 I의 화합물 및 화학요법제를 모든 분석에서 동시에 또는 4시간씩 떨어져서(다른 것 전에 하나) 첨가한다.
추가의 예시적인 시험관내 세포 증식 분석은 하기 단계를 포함한다:
1. 매질 내에 약 104개의 세포를 함유하는 100 mL의 분취액의 세포 배양균을 384-웰 불투명-벽 플레이트의 각각의 웰에 넣는다.
2. 매질을 함유하고 세포가 없는 대조군 웰을 준비한다.
3. 화합물을 실험 웰에 첨가하고, 3 내지 5일 동안 항온처리한다.
4. 플레이트를 약 30분 동안 실온으로 평형화시킨다.
5. 각각의 웰에 존재하는 세포 배지의 부피와 동등한 부피의 셀타이터-글로 시약을 첨가한다.
6. 내용물을 오비탈 진탕기 상에서 2분 동안 혼합하여 세포 용해를 유도한다.
7. 플레이트를 실온에서 10분 동안 항온처리하여 발광 신호를 안정화시킨다.
8. 발광을 기록하고, RLU(상대적인 발광 단위)로서 그래프로 보고한다.
상기 발명이 명료한 이해의 목적을 위해 설명 및 예에 의해 다소 상세히 기술되었지만, 명세서 및 실시예가 본 발명의 범주를 제한하는 것으로 간주되어서는 안 된다. 따라서, 모든 적합한 변형물 및 등가물이 하기 특허청구범위에 의해 한정되는 본 발명의 범주에 속하는 것으로 간주될 수 있다. 본원에 인용된 모든 특허 및 과학 문헌의 개시내용은 이의 전체내용을 참고로서 본원에 명시적으로 인용한다.

Claims (35)

  1. 하기 화학식 II로부터 선택된 화합물 또는 이의 입체이성질체(stereoisomer), 호변체(tautomer), 또는 약학적으로 허용가능한 염:
    Figure pct00096

    상기 식에서,
    X1은 CR1 또는 N이고;
    X2는 CR2 또는 N이고;
    X3은 CR3 또는 N이고;
    이때 X1, X2, 및 X3 중 1개 또는 2개는 N이고;
    Y1 및 Y2는 CH 및 N으로부터 독립적으로 선택되되, 이때 Y1 및 Y2는 각각 N은 아니고;
    R1, R2 및 R3은 H, F, Cl, CN, -CH3, -CH2CH3, -CH2OH, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2CH2OH, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, 및 -OCH2CH2OH로부터 독립적으로 선택되고;
    R4는 H, F, Cl, CN, -CH2OH, -CH(CH3)OH, -C(CH3)2OH, -CH(CF3)OH, -CH2F, -CHF2, -CH2CHF2, -CF3, -C(O)NH2, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHC(O)CH3, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OH, -OP(O)(OH)2, 사이클로프로필, 사이클로프로필메틸, 1-하이드록시사이클로프로필, 이미다졸릴, 피라졸릴, 3-하이드록시-옥세탄-3-일, 옥세탄-3-일, 및 아제티딘-1-일로부터 선택되고;
    R6은 H, -CH3, -CH2CH3, -CH2CH2OH, -CH2F, -CHF2, -CF3, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, 및 -OCH2CH2OH로부터 선택되고;
    R8은 C6-C20 아릴, C3-C12 카보사이클릴, C2-C20 헤테로사이클릴, C1-C20 헤테로아릴, -(C6-C20 아릴)-(C2-C20 헤테로사이클릴), -(C1-C20 헤테로아릴)-(C2-C20 헤테로사이클릴), -(C1-C20 헤테로아릴)-(C2-C20 헤테로사이클릴)-(C2-C20 헤테로사이클릴), -(C1-C20 헤테로아릴)-(C2-C20 헤테로사이클릴)-(C1-C6 알킬), -(C1-C20 헤테로아릴)-(C1-C6 알킬), 및 -(C1-C20 헤테로아릴)-C(=O)-(C2-C20 헤테로사이클릴)로부터 선택되고; 이때 아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴, 및 헤테로아릴은 임의적으로, F, Cl, Br, I, CN, -CH3, -CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -CH(OH)CH(CH3)2, -C(CH3)2CH2OH, -CH2CH2SO2CH3, -CH2OP(O)(OH)2, -C(CH3)2CONH2, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -CH2CH2OCH3, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2CF3, -CH2CHF2, -CH(CH3)CN, -C(CH3)2CN, -CH2CN, -CO2H, -C(O)CH3, -CO2CH3, -CO2C(CH3)3, -COCH(OH)CH3, -C(O)CH2CH3, -C(O)CH(CH3)2, -C(O)NH2, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHC(O)CH3, -N(CH3)COCH3, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, -N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3, -NO2, =O, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OCH3, -OCH2CH2OH, -OCH2CH2N(CH3)2, -OP(O)(OH)2, -S(O)2N(CH3)2, -SCH3, -S(O)2CH3, -S(O)3H, 사이클로프로필, 옥세탄일, 아제티딘일, 1-메틸아제티딘-3-일)옥시, N-메틸-N-옥세탄-3-일아미노, 아제티딘-1-일메틸, 및 모폴리노로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 치환된다.
  2. 제 1 항에 있어서,
    R8이 -(C1-C20 헤테로아릴)-(C2-C20 헤테로사이클릴)인, 화합물.
  3. 제 1 항에 있어서,
    R8이 -(C1-C20 헤테로아릴)-(C2-C20 헤테로사이클릴)이고, 이때 헤테로아릴은 임의적으로 피리딘일으로 치환되고, 헤테로사이클릴은 임의적으로 피페라진일로 치환되는, 화합물.
  4. 제 1 항에 있어서,
    R8이 C1-C20 헤테로아릴인, 화합물.
  5. 제 4 항에 있어서,
    R8이 피리미딘일, 6,7-다이하이드로-4H-티아졸로[5,4-c]피리딘-2-일, 5-(모폴린-4-카보닐)-2-피리딜, 피라졸릴, 티아졸릴, 6,7-다이하이드로-4H-피라졸로[1,5-a]피라진-2-일, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 이미다졸릴, 5-(6,7-다이하이드로-4H-피라졸로[5,1-c][1,4]옥사진-2-일, 1,2,3-트라이아졸릴, 4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진, 피라진일, 및 5,6-다이하이드로-4H-피롤로[1,2-b]피라졸-2-일로부터 선택되는, 화합물.
  6. 제 5 항에 있어서,
    R8이
    Figure pct00097
    이고, 이때 R9는 H, -CH3, -CH2OCH3, -CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH2OH, -CH2CH2OCH3, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2CF3, -CH2CHF2, -CH(CH3)CN, -C(CH3)2CN, -CH2CN, -CH2CH2CN, -C(O)CH3, -C(O)CH2CH3, -C(O)CH(CH3)2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OH, 사이클로프로필, 사이클로프로필메틸, 옥세탄일 및 옥세탄일메틸로부터 선택되는, 화합물.
  7. 제 1 항에 있어서,
    X1이 N이고, X2가 CR2이고, X3가 CR3인, 화합물.
  8. 제 1 항에 있어서,
    X1이 CR1이고, X2가 N이고, X3가 CR3인, 화합물.
  9. 제 1 항에 있어서,
    X1이 CR1이고, X2가 CR2이고, X3이 N인, 화합물.
  10. 제 1 항에 있어서,
    X1 및 X3이 N이거나, X1 및 X2가 N이거나, X2 및 X3이 N인 것으로부터 선택되는 화합물.
  11. 제 1 항에 있어서,
    X2가 CR2이고 R2가 F인, 화합물.
  12. 제 11 항에 있어서,
    X1 및 X3이 CH인, 화합물.
  13. 제 1 항에 있어서,
    R4가 -CH2OH인, 화합물.
  14. 제 2 항에 있어서,
    하기 화학식 I로부터 선택된 화합물:
    Figure pct00098

    상기 식에서,
    R5는 -CH3, -CH2CH3, -CH2OH, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CN, 및 -CH2CH2OH로부터 선택되거나;
    또는 2개의 R5 기가 3-, 4-, 5-, 또는 6-원 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 고리를 형성하거나;
    또는 R5 기와 R7 기가 3-, 4-, 5-, 또는 6-원 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 고리를 형성하고;
    n이 0, 1, 2, 3, 또는 4이고;
    R7이 H, -CH3, -S(O)2CH3, 사이클로프로필, 아제티딘-3-일, 옥세탄-3-일, 및 모폴린-4-일로부터 선택되고;
    Z1이 CR8 또는 N이고, 이때 R8은 H, F, Cl, -CH3, -CH2CH3, -CH2CH2OH, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, 및 -OCH2CH2OH로부터 선택되고;
    Z2가 CR9 또는 N이고, 이때 R9는 H, -CH3, -CH2CH3, 및 -CH2CH2OH로부터 선택되고;
    Y1 및 Y2가 독립적으로 CH 및 N로부터 선택되되, 이때 Y1 및 Y2는 각각 N은 아니다.
  15. 제 14 항에 있어서,
    하기 구조를 갖는 화학식 Ia 내지 If로부터 선택되는 화합물:
    Figure pct00099
    .
  16. 제 14 항에 있어서,
    R5가 -CH3이고, n이 1 또는 2인, 화합물.
  17. 제 14 항에 있어서,
    R7이 옥세탄-3-일인, 화합물.
  18. 제 14 항에 있어서,
    Y1이 CH인, 화합물.
  19. 제 14 항에 있어서,
    Y2가 CH인, 화합물.
  20. 제 14 항에 있어서,
    Z1이 CH인, 화합물.
  21. 제 14 항에 있어서,
    Z2가 CH인, 화합물.
  22. 제 1 항에 있어서,
    본원 명세서의 표 1로부터 선택된 화합물.
  23. 제 1 항에 있어서,
    본원 명세서의 표 2로부터 선택된 화합물.
  24. 제 1 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 따른 화합물 및 약학적으로 허용가능한 담체, 활제(glidant), 희석제, 또는 부형제를 포함하는 약학 조성물.
  25. 제 24 항에 있어서,
    치료제를 추가로 포함하는 약학 조성물.
  26. 제 1 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 따른 화합물과 약학적으로 허용가능한 담체를 배합하는 것을 포함하는 약학 조성물의 제조 방법.
  27. 제 24 항에 따른 약학 조성물의 치료적 효과량을, 면역 장애, 암, 심혈관 질환, 바이러스 감염, 염증, 대사/내분비 기능 장애 및 신경 장애로부터 선택되고 브루톤(Bruton's) 타이로신 키나제에 의해 매개되는 질환 및 장애를 가진 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 질환 및 장애의 치료 방법.
  28. 제 27 항에 있어서,
    상기 질환 및 장애가 면역 장애인, 방법.
  29. 제 28 항에 있어서,
    상기 면역 장애가 류마티스 관절염인, 방법.
  30. 제 31 항에 있어서,
    상기 질환 및 장애가 전신 및 국소 염증, 관절염, 면역 억제와 관련된 염증, 기관 이식 거부, 알러지, 궤양성 대장염, 크론병, 피부염, 천식, 전신성 홍반성 낭창, 쇼그렌 증후군, 다발성 경화증, 경피증/전신성 경화증, 특발성 혈소판 감소성 자반증(ITP), 항중성구 세포질 항체(ANCA) 혈관염, 만성 폐쇄성 폐질환(COPD), 건선인, 방법.
  31. 제 27 항에 있어서,
    상기 질환 및 장애가, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 전립선암, 고환암, 비뇨생식관암, 식도암, 후두암, 교아종, 신경아세포종, 위암, 피부암, 각화극세포종, 폐암, 표피암, 대세포암, 비-소세포 폐암(NSCLC), 소세포암, 폐 선암, 뼈암, 대장암, 선종, 췌장암, 선암, 갑상선암, 여포성 암종, 미분화된 암종, 갑상선 암종, 정상피종, 흑색종, 육종, 방광암종, 간암종 및 담도암, 신장암종, 췌장암종, 골수 장애, 림프종, 모발 세포암, 구강암, 비-인두암, 인두암, 구순암, 혀암, 구강암, 소장암, 결장-직장암, 대장암, 직장암, 뇌암 및 중추신경계암, 호지킨병, 백혈병, 기관지암, 갑상선암, 간암 및 간내담관암, 간세포암, 위암, 신경교종/교아종, 자궁내막암, 흑색종, 신장 및 신우암, 방광암, 자궁체부암, 자궁경부암, 다발성 골수증, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 림프구 백혈병, 만성 림프구 백혈병(CLL), 골수성 백혈병, 구강 및 인두암, 비-호지킨병, 흑색종, 및 융모선종으로부터 선택된 암인, 방법.
  32. 제 27 항에 있어서,
    소염제, 면역조절제, 화학 치료제, 세포사멸-증진제, 신경 성장 인자, 심혈관질환 치료제, 간질환 치료제, 항-바이러스제, 혈관 장애 치료제, 당뇨 치료제, 면역결핍 장애 치료제로부터 선택된 추가의 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  33. a) 제 24 항에 따른 약학 조성물; 및
    b) 사용 지시서
    를 포함하는, 브루톤 타이로신 키나제에 의해 매개되는 증상을 치료하기 위한 키트.
  34. 제 24 항에 있어서,
    면역 장애, 암, 심혈관 질환, 바이러스 감염, 염증, 대사/내분비 기능 장애 및 신경 장애로부터 선택되고 브루톤 타이로신 키나제에 의해 매개되는 질환 및 장애를 치료하는데 약제로서 사용하기 위한 약학 조성물.
  35. 제 24 항에 따른 약학 조성물의, 브루톤 타이로신 키나제를 매개하는 면역 장애, 암, 심혈관 질환, 바이러스 감염, 염증, 대사/내분비 기능 장애 및 신경 장애의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서의 용도.
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