CN116568687A - 杂芳基杂环化合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本文提供了式(I)的杂芳基杂环化合物、包含它们的药物组合物以及它们的制备方法及其用途，其中各变量如说明书中所定义。所述化合物是Btk抑制剂。

Description

杂芳基杂环化合物及其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求2020年9月21日提交的中国申请202010993583.8、2021年2月7日提交的中国申请202110175357.3和2021年9月15日提交的中国申请202111077860.1的优先权；它们的内容通过引用整体并入本文作为参考。
技术领域
本发明涉及杂芳基杂环化合物、包含它们的药物组合物以及它们的制备方法和用途。
背景技术
Bruton酪氨酸激酶(Bruton’s Tyrosine kinase,BTK),属于非受体酪氨酸蛋白Tec家族成员(包括：BTK、LTK、TEC、BMX和TXK等)，除T细胞、NK细胞和分化的浆细胞外，在造血细胞中广泛表达。BTK通过B细胞和髓样细胞中的B细胞抗原受体(BCR)和Fcγ受体(FcγR)在信号传导中起着至关重要的作用，是B细胞发育、激活、信号传导和存活的关键调节剂，可以通过激活细胞周期正向调控因子和分化因子来控制B细胞的发育、分化，也能通过调节促凋亡和抗凋亡蛋白的表达来控制B细胞的存活和增殖。BTK对于B淋巴瘤细胞的迁移黏附等过程也起到重要的作用。此外，BTK在众多其它造血细胞信号途径中起作用，例如，巨噬细胞中Toll样受体(TLR)和细胞因子受体介导的TNF-α产生，肥大细胞中IgE受体(FceRI)的信号传导，B系淋巴样细胞中Fas/ΑΡO-1凋亡信号的抑制，和受胶原刺激的血小板聚集。
人体中，BTK基因突变会导致遗传性免疫缺陷疾病X连锁血球蛋白血症(X-linkedagammaglobulinaemia，XLA)。人XLA患者涉及BTK基因的点突变，与极低的BTK mRNA水平和BTK蛋白表达量有关，因此，BTK激酶活性的缺失会导致成熟B细胞和免疫球蛋白的几乎完全的匮乏，以及应对BCR刺激时持续性钙信号的显著衰减。BTK突变的作用仅限于B细胞群，在XLA患者中未发现其他免疫细胞的显著发育缺陷。在X连锁免疫缺陷(X-linkedimmunodeficiency，xid)小鼠中也发现了BTK基因的自发突变，显示出相似但较不严重的表型。在xid小鼠或突变诱导的BTK基因敲除小鼠中，B细胞分化被部分阻止，血液循环中成熟的B细胞数量减少，并表现出对胶原诱导的关节炎以及葡萄球菌诱发的关节炎模型的抵抗。大量证据显示BTK在类风湿性关节炎(RA)、原发性干燥综合征(pSS)和系统性红斑狼疮(SLE)等自身免疫病患者的外周B细胞中，以及B细胞白血病和淋巴瘤中大量表达。在这些自身免疫性疾病和B细胞相关疾病中已证实存在BCR信号异常激活，对B细胞、BCR信号通路以及BTK的抑制都可在不同程度上减缓疾病的进程。
基于BTK在B细胞发育和功能中的关键作用，BTK被认为是治疗B细胞恶性肿瘤和自身免疫性疾病的潜在靶点。多种BTK抑制剂正被开发用于血液学恶性肿瘤以及自身免疫性疾病的临床研究。小分子BTK抑制剂(例如ibrutinib，acalabrutinib，zanubrutinib，PRN1008，GDC-0853)已经出现了比较有效的治疗效果。例如，不可逆的BTK抑制剂依鲁替尼在临床研究中表现出较高的持久疗效和低毒性，已于2013年被美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于治疗复发性套细胞淋巴瘤(MCL)，于2014年被批准用于慢性淋巴细胞性白血病(CLL)，于2015年被批准用于的巨球蛋白血症(WM)的治疗，于2017年被批准用于复发/顽固性边缘区淋巴瘤(MZL)的治疗。特别是，它在2017年将批准指征扩展至慢性移植物抗宿主病(GVHD)，证明了BTK在治疗慢性自身免疫性疾病中的机理。此外，不可逆的BTK抑制剂acalabrutinib还于2017年获得了成人MCL的批准，并于2019年获得了CLL批准；zanubrutinib于2019年11月获得了FDA的MCL批准；PRN1008正在进行针对天疱疮的3期研究。一些不可逆的BTK抑制剂(tirabrutinib，spebrutinib，evobrutinib)和可逆性BTK抑制剂(GDC-0853，ARQ-531和LOXO-305)正在进行临床前和临床阶段开发。
因此，BTK抑制剂代表着开发用于治疗相关疾病的有吸引力的方法，尤其是治疗自身免疫性疾病、炎性疾病或癌症等。
发明简述
本发明提供了式(I)化合物：
或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中:
X1、X2和X3分别独立地为CH或N；
U和V分别独立地为N或CR9；
Y1和Y2分别独立地为CR10或N；
R1和R2分别独立地选自氢、氘、卤素、-CN、羟基、C1-6烷基、C3-6环烃基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基和C1-6卤代烷基；或者，R1、R2与它们相连的碳原子一起形成3-6元环烃基；
R3为氢、氘、卤素、-CN或C1-6卤代烷基；
R4为氢、卤素、-CN、C1-6烷基、C2-6炔基、-(C1-3烷基)-OH、-(C1-3烷基)-O-(C1-3烷基)、-O-(C1-3烷基)、-CHO、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2或3-羟基-氧杂环丁烷-3-基，其中所述的C1-6烷基或C1-3烷基各自任选地被一个或多个氘或卤素取代；
R5选自氢、C1-6烷基和C3-6环烃基，其中所述的C1-6烷基任选地被一个或多个氘或卤素取代；
Z1、Z2、Z3和Z4分别独立地为CH或N，条件是，Z1、Z2、Z3和Z4中至少有一个为N；
R6和R7分别独立地选自C1-6烷基；
R8为氢、C1-6烷基、C3-6环烃基或4-8元杂环基，其中所述C1-6烷基、C3-6环烃基或4-8元杂环基任选地被一个或多个选自以下的基团取代：氘、卤素、C1-6烷基、三氟甲基、-OH、-NH2、-O-(C1-6烷基)、-NH(C1-6烷基)或-N(C1-6烷基)2；
R9为氢、氘或卤素；
R10为氢、氘、卤素、CN、C1-6烷基或C1-6卤代烷基；
n为0、1或2；条件是，当n为1时，R3不为氢。
上述化合物和本发明在上下文中所公开的活性化合物(包括通式化合物和具体化合物)，以及包括其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，在本文中被称为“本发明的化合物”。
本发明还提供了一种药物组合物，其包含本发明的化合物，并且任选地包含药学上可接受的赋形剂。
本发明还提供了一种体内或体外抑制BTK活性的方法，其包括使有效量的本发明的化合物与BTK接触。
本发明还提供了一种治疗或预防由BTK介导或至少部分由BTK介导的疾病的方法，其包括给需要其的个体施用有效量的本发明的化合物。
本发明还提供了一种治疗或预防自身免疫性疾病、炎性疾病或癌症的方法，其包括给需要其的个体施用有效量的本发明的化合物。
本发明还提供了本发明的化合物在治疗或预防由BTK介导或至少部分由BTK介导的疾病中的用途。
本发明还提供了本发明的化合物在治疗或预防自身免疫性疾病、炎性疾病或癌症中的用途。
本发明还提供了本发明的化合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗或预防由BTK介导或至少部分由BTK介导的疾病。
本发明还提供了本发明的化合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗或预防自身免疫性疾病、炎性疾病或癌症。
本发明还提供了用于体内或体外抑制BTK活性的本发明的化合物。
本发明还提供了用作药物的本发明的化合物。
本发明还提供了用作药物的本发明的化合物，其用于治疗或预防由BTK介导或至少部分由BTK介导的疾病，尤其是用于治疗或预防自身免疫性疾病、炎性疾病或癌症。
本发明还提供了药物组合，其包括本发明的化合物以及至少一种另外的治疗剂，所述治疗剂优选选自：抗炎剂、免疫调节剂或抗肿瘤活性剂，所述的抗肿瘤活性剂包括化疗剂、免疫检查点抑制剂或激动剂、以及靶向治疗剂。
本发明还提供了包括用于治疗或预防由BTK介导或至少部分由BTK介导的疾病的药盒。所述药盒可以包含本发明的药物组合物和使用说明书，所述药物组合物包含本发明的化合物。
附图说明
图1：本发明化合物对抗IgD抗体诱导的小鼠全血中B细胞活化的抑制作用。
图2：本发明化合物对CIA(胶原诱导的关节炎)大鼠关节足容积的影响(后足容积用足容积测量仪测定，数据用均值±标准差表示，各组分别为正常组，溶媒对照组，0.25mg/kg和4mg/kg GDC-0853组，不同剂量的化合物1QD组(正常组：n＝6，其它组：n＝8)。
图3：本发明化合物对ITP(抗小鼠CD41抗体诱导的特发性血小板减少性紫癜)小鼠外周血中血小板水平的影响。采用自动血液分析仪测定血小板水平，数据用均值±标准差表示，各组分别为正常组和造模组(分别是溶媒对照组、40mg/kg PRN1008组以及不同剂量化合物1组)(各组：N＝8)。
发明详述
定义
本申请中所用的下列词语、短语和符号具有如下所述的含义，其所处的上下文中另有说明的除外。
不在两个字母或符号之间的短横(“-”)表示取代基的连接点。例如，-OR3指R3通过氧原子与分子的其余部分连接。
本文所用的术语“烷基”指具有1-18个碳原子(C1-18)、优选1-10个碳原子(C1-10)、特别优选1-6个碳原子(C1-6)、更优选1-4个碳原子(C1-4)或1-3个碳原子(C1-3)的直链或支链饱和烃基。当术语“烷基”带有前缀“C”时表示碳原子的个数。例如，“C1-6烷基”表示具有1-6个碳原子的烷基，“C1-3烷基”表示具有1-3个碳原子的烷基。C1-6烷基的例子包括但不限于甲基、乙基、丙基(例如正丙基、异丙基)、丁基(例如正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基)、戊基(例如正戊基、异戊基、新戊基)、己基等。
本文所用的术语“炔基”指含有一条或多条、例如1、2或3条碳碳三键(C≡C)的具有2-18个碳原子(C2-18)、优选2-10个碳原子(C2-10)、更优选2-6个碳原子(C2-6)、更优选2-4个碳原子(C2-4)的直链或支链的不饱和烃基。当术语“炔基”带有前缀“C”时表示碳原子的个数。例如，“C2-6炔基”表示具有2-6个碳原子的炔基，“C2-4炔基”表示具有2-4个碳原子的炔基。C2-6炔基的例子包括但不限于乙炔基、丙炔基(例如2-丙炔基)和丁炔基(例如2-丁炔基)等。炔基的连接点可以在三键上，也可以不在三键上。
本文所用的术语“卤素”或“卤代”指氟、氯、溴和碘，优选氟、氯和溴，更优选氟和氯。
本文所用的术语“卤代烷基”指其中一个或多个氢原子、例如1、2、3、4或5个氢原子被卤素原子替代的本文所定义的烷基，并且当超过一个氢原子被卤素原子替代时，所述卤素原子可以彼此相同或不同。在一个实施方案中，本文所用的术语“卤代烷基”指其中两个或更多个氢原子、例如2、3、4或5个氢原子被卤素原子替代的本文所定义的烷基，其中所述卤素原子彼此相同。在另一个实施方案中，本文所用的术语“卤代烷基”指其中两个或更多个氢原子、例如2、3、4或5个氢原子被卤素原子替代的本文所定义的烷基，其中所述卤素原子彼此不同。当术语“卤代烷基”带有前缀“C”时表示碳原子的个数。例如“C1-6卤代烷基”表示具有1-6个碳原子的如上文定义的卤代烷基，“C1-4卤代烷基”表示具有1-4个碳原子的如上文定义的卤代烷基。C1-6卤代烷基的例子包括但不限于-CF3、-CHF2、-CH2F、-CH2CF3、-CH(CF3)2等。
本文所用的术语“环烃基”指含有3-12个环碳原子(C3-12)(例如3-8个环碳原子(C3-8)、5-7个环碳原子(C5-7)、4-7个环碳原子(C4-7)或3-6个环碳原子(C3-6))的饱和或部分不饱和的环状烃基；其可以具有一个或多个环，例如1、2或3个，优选具有1个或2个环。当术语“环烃基”带有前缀“C”时表示碳原子的个数。例如，“C3-6环烃基”或“3-6元环烃基”表示具有3-6个环碳原子的环烃基。环烃基可包括稠合的或桥连的环以及螺环。环烃基的环可以是饱和的，其环上也可以含有一条或多条、例如一条或两条双键(即部分不饱和的)，但是其不是完全共轭的，也不是本发明中所定义的“芳基”。C3-6环烃基的例子包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、螺[2.2]戊烷基、环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环戊二烯基、环己烯基等。
本文所用的术语“杂环基”或“杂环”可以互换使用，指：具有3-12个环原子(例如3-8个环原子、4-8个环原子、4-6个环原子或4-5个环原子)的饱和或部分不饱和的环，所述环原子包括一个或多个(例如1、2或3个、优选1或2个)独立地选自N、O和S的杂原子，其余环原子是碳原子；其可以具有一个或多个环，例如1、2或3个，优选具有1个或2个环。其中，N和S可任选地被氧化成各种氧化状态。杂环基的连接点可以在N杂原子上或碳原子上。例如，“4-8元杂环基”表示具有4-8个(4、5、6、7或8个)环原子的杂环基，其包含至少一个、例如1、2或3个、优选1或2个独立地选自N、O和S的杂原子；“4-6元杂环基”表示具有4-6个(4、5或6个)环原子的杂环基，其包含至少一个、优选1或2个独立地选自N、O和S(优选N和O，更优选O)的杂原子，其优选是单环；“4-5元杂环基”表示具有4或5个环原子的杂环基，其包含至少一个、优选1或2个独立地选自N、O和S(优选N和O，更优选O)的杂原子，其为单环。杂环基可包括稠合的或桥连的环以及螺环。杂环基的环可以是饱和的，其环上也可以含有一条或多条、例如一条或两条双键(即部分不饱和的)，但是其不是完全共轭的，也不是本发明中所定义的“杂芳基”。杂环基的例子包括但不限于：4-8元杂环基、4-6元杂环基、4-5元杂环基和4-元杂环基，例如氧杂环丁烷基(例如氧杂环丁烷-3-基)、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、四氢呋喃基、二氧戊环基、四氢吡喃基、吗啉基、硫代吗啉基、哌啶基、哌嗪基、四氢吡啶基、吡嗪基、吡唑烷基和氧杂螺[3.3]庚烷基，优选氧杂环丁烷基(例如氧杂环丁烷-3-基)、氮杂环丁烷基、四氢吡喃基、吗啉基(例如吗啉代)、哌嗪基(例如哌嗪-1-基)、四氢吡啶基(例如1,2,3,6-四氢吡啶基)。
本文所述的术语“-OH”指羟基基团。
本文所用的术语“-CN”指氰基基团。
本文所用的术语“氧代”是指＝O。
式(I)化合物的任何不对称原子(例如碳等)可以以外消旋的或对映异构体富含的形式、例如以(R)-、(S)-或(RS)-构型存在。在一些实施方案中，在(R)-或(S)构型中不对称原子各自具有至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少99％或100％对映异构过量。
本文所用的术语“任选”、“任选的”或“任选地”意指随后描述的事件或情况可以发生或可以不发生，并且该描述包括所述事件或情况发生的情形以及所述事件或情况不发生的情形。例如，“任选地被一个或多个……取代”包括未被取代的和被1、2、3个或更多个所描述的取代基取代。本领域技术人员应当理解，对于含有一个或多个取代基的任意基团而言，所述基团不包括任何在空间上不切实际的、化学上不正确的、合成上不可行的和/或内在不稳定的取代模式。
本文所用的术语“被取代”或“被……取代”意指给定原子或基团上的一个或多个(例如1、2、3或4个)氢原子被一个或多个(例如1、2、3或4个)取代基、优选选自给定的取代基组或基团组的取代基替换，条件是不超过该给定原子的正常化合价，所述取代基可以彼此相同或不同。本文所用的术语“被一个或多个选自……的基团取代”或“被一个或多个……取代”意指给定原子或基团上的一个或多个氢原子独立地被一个或多个选自给定取代基组或基团组的基团替换，其中所述基团可以彼此相同或不同。优选地，“被一个或多个选自……的基团取代”或“被一个或多个……取代”意指给定原子或基团被1、2、3或4个独立地选自给定取代基组或基团组的基团取代，其中所述基团可以彼此相同或不同。在一些实施方案中，当取代基是氧代(即＝O)时，则单个原子上的两个氢原子被替换。任选的取代基可以是各种基团，条件是取代基和/或变量的组合产生化学上正确的且稳定的化合物。化学上正确的且稳定的化合物意味着化合物足够稳定，以至于能从反应混合物中分离出来。优选地，取代基是本申请的实施例化合物中所实施的那些。
除非另有说明，取代基被命名入核心结构中。例如，应当理解，当(环烃基)烷基被列为一种可能的取代基时，其表示该取代基与核心结构的连接点在烷基部分。
本领域技术人员应当理解，一些式(I)化合物可以包含一个或多个手性中心，因此存在两个或更多个立体异构体。这些异构体的外消旋混合物、单个异构体和一种对映异构体富集的混合物，以及当有两个手性中心时的非对映异构体和特定的非对映异构体部分富集的混合物均在本发明的范围内。本领域技术人员还应当理解，本发明包括式(I)化合物的所有单个立体异构体(例如对映异构体)、外消旋混合物或部分拆分的混合物，以及在适当的情况下，包括其单个互变异构体。
外消旋混合物可以以其本身的形式使用或者可以被拆分成它们的单个异构体。通过拆分可以得到立体化学上纯的化合物或者富集一种或多种异构体的混合物。分离异构体的方法是众所周知的(参见Allinger N.L.和Eliel E.L.,"Topics in Stereochemistry"，第6卷，Wiley Interscience，1971)，包括物理方法，例如使用手性吸附剂的色谱法。可以由手性前体制备得到手性形式的单个异构体。或者，可以如下由混合物化学分离得到单个异构体：与手性酸(例如10-樟脑磺酸盐、樟脑酸盐、α-溴樟脑酸盐、酒石酸、二乙酰基酒石酸、苹果酸、吡咯烷酮-5-羧酸等的单个对映异构体)形成非对映异构体盐，将所述的盐分级结晶，然后游离出拆分的碱中的一个或两个，任选地重复这一过程，从而得到一个或两个基本上不包含另一种异构体的异构体，即光学纯度>95％的异构体。或者，可以将外消旋物共价连接到手性化合物(辅助物)上，得到非对映异构体，可通过色谱法或分级结晶法将其分离，之后化学除去手性辅助物，得到纯的对映异构体。
术语“互变异构体”指因分子中某一原子在两个位置迅速移动而产生的官能团异构体。互变异构体之间可以互相转换，例如烯醇式和酮式是典型的互变异构体。
“药学上可接受的盐”，指无毒的、生物学上可耐受的或其他生物学上适合于给予治疗或预防个体的式(I)化合物的游离酸或碱的盐。例如，酸加成盐包括例如衍生自无机酸和有机酸的加成盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、磷酸和硝酸，所述有机酸包括例如对甲苯磺酸、水杨酸、甲磺酸、草酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸等。有关药学上可接受的盐的一般描述参见例如：S.M.Berge等人，“Pharmaceutical Salts”,J.Pharm.Sci.,1977,66:1-19,以及Handbook of Pharmaceutical Salts,Properties,Selection,and Use,Stahl和Wermuth编，Wiley-VCH and VHCA,Zurich,2002。
此外，如果本文所述的化合物是以酸加成盐的形式得到的，其游离碱形式可以通过碱化该酸加成盐的溶液获得。相反地，如果产物是游离碱形式，则其酸加成盐、特别是药学上可接受的酸加成盐可以按照由碱性化合物制备酸加成盐的常规操作通过将游离碱溶于合适的溶剂并且用酸处理该溶液来得到。本领域技术人员无需过多实验即可确定各种可用来制备无毒的药学上可接受的酸加成盐或碱加成盐的合成方法。
术语“氘代化合物”指其中一个或多个氢原子、例如1、2、3、4或5个氢原子被氘原子(D)替代的化合物。
术语“溶剂合物”意指包含化学计量的或非化学计量的溶剂的溶剂加成形式。一些化合物具有在固体状态中网罗固定摩尔比的溶剂分子的倾向，从而形成溶剂合物。如果溶剂是水，则形成的溶剂合物是水合物。当溶剂是乙醇时，则形成的溶剂合物是乙醇合物。水合物是通过一个或多个或少于一个分子的水与一分子所述物质形成的，其中水保留其H2O的分子状态，这样的组合能形成一种或多种水合物，例如半水合物、一水合物和二水合物。
本文所用的术语“基团”和“基”是同义词，用于表示可与其它分子片段连接的官能团或分子片段。
术语“活性成分”用来表示具有生物活性的化学物质。在一些实施方案中，“活性成分”是具有制药用途的化学物质。
本文所用的术语“药物组合”意指通过将两种或更多活性成分混合或合并所得的产品，包括活性成分的固定组合和非固定组合，例如药盒、药物组合物。术语“固定组合”意指两种或更多活性成分(例如本发明的化合物和另外的治疗剂)以单个实体或剂量的形式被同时施用于患者。术语“非固定组合”意指两种或更多活性成分(例如本发明的化合物和另外的治疗剂)以分开的实体被同时、并行或相继施用于患者，其中所述施用在患者体内提供了所述化合物的治疗有效水平。
术语“处置”或“治疗”或“预防”疾病或障碍指给患有所述疾病或障碍、或者具有所述疾病或障碍的症状、或者具有易患所述疾病或障碍的体质的个体施用一种或多种药物物质、特别是本发明的化合物，用以治愈、愈合、缓解、减轻、改变、医治、改善、改进或影响所述疾病或障碍、所述疾病或障碍的症状或者易患所述疾病或障碍的体质。在一些实施方案中，所述疾病或障碍是癌症，例如实体瘤或血液学恶性肿瘤，包括淋巴瘤、白血病及骨髓瘤。在另一些实施方案中，所述疾病或障碍是炎性疾病或自身免疫性疾病。
当涉及化学反应时，术语“处理”、“接触”和“反应”意指在适当的条件下加入或混合两种或更多种试剂，以产生所示的和/或所需的产物。应当理解，产生所示的和/或所需的产物的反应可能不一定直接来自最初加入的两种试剂的组合，即，在混合物中可能存在生成的一个或多个中间体，这些中间体最终导致了所示的和/或所需的产物的形成。
本文所用的术语“有效量”指通常足以对需要治疗或预防由BTK活性介导或至少部分由BTK介导的疾病或障碍的患者产生有益效果的BTK抑制剂的量或剂量。可以通过常规方法(例如建模、剂量递增研究或临床试验)结合常规影响因素(例如给药或施药的方式或途径、药物成分的药代动力学、疾病或障碍的严重程度和病程、个体先前的或正在进行的治疗、个体的健康状况和对药物的反应、以及主治医生的判断)来确定本发明中活性成分的有效量或剂量。
典型的剂量范围是从约0.0001至约200毫克活性成分每千克个体体重每天，例如约为0.001至100毫克/千克/天，或者约为0.01至35毫克/千克/天，或者约为0.1至10毫克/千克，每日一次或分剂量单位服用(例如，每日两次、每日三次、每日四次)。对于70千克的人，合适剂量的示例范围是约0.05至约7克/天，或者约为0.2至约5克/天。一旦患者的疾病或障碍出现改善，可以调整剂量以维持效果。例如，根据症状的变化可以将给药剂量或给药次数或者将给药剂量和给药次数减少至维持所期望的治疗或预防效果的水平。当然，如果症状减轻到了适当的水平，可以停止治疗。然而，对于症状的复发，患者可能需要间歇性长期治疗。
术语“抑制”指生物活动或过程的基线活性的降低。术语“抑制BTK活性”是用于本发明目的的实际药物活性，指相对于不存在本发明的化合物时的BTK活性，对存在本发明的化合物的直接或间接响应导致的BTK活性的降低。活性的降低可以是由本发明的化合物与BTK直接相互作用引起的，或者是由本发明的化合物与一种或多种其它因子相互作用进而影响BTK活性引起的。例如，本发明的化合物可通过直接与BTK结合而降低BTK的活性，可通过直接或间接地影响另一种因子来降低BTK的活性，或者通过直接或间接地减少存在于细胞或机体中的BTK的量来降低BTK的活性。
本文所用的术语“个体”或“患者”指哺乳动物和非哺乳动物。哺乳动物指哺乳类的任何成员，其包括但不限于：人；非人灵长类动物，如黑猩猩及其它猿类和猴类物种；农场动物，如牛、马、绵羊、山羊和猪；家畜，如兔、狗和猫；实验室动物，包括啮齿类动物，如大鼠、小鼠和豚鼠；等。非哺乳动物的例子包括但不限于鸟等。术语“个体”或“患者”并不限定特定的年龄或性别。在一些实施方案中，个体或患者是人。
一般而言，术语“约”在本文中用于将所给出的数值调整至高于或低于该数值20％。
本文所用的未具体定义的技术和科学术语具有本发明所属领域的技术人员通常理解的含义。
本文所有的数值范围应当被理解为公开了在该范围内的每个数值和数值子集，而不论其是否被具体另外公开。例如，提及任何一个数值范围时，应当视为提及了该数值范围内的每一个数值，例如该数值范围内的每一个整数，例如本文中的C1-6表示包括1、2、3、4、5或6个C。本发明涉及落入这些范围的所有值、所有更小的范围以及数值范围的上限或下限。
具体实施方式
实施方案1.式(I)化合物：
或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中：
X1、X2和X3分别独立地为CH或N；
U和V分别独立地为N或CR9；
Y1和Y2分别独立地为CR10或N；
R1和R2分别独立地选自氢、氘、卤素、-CN、羟基、C1-6烷基、3-6元环烃基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基和C1-6卤代烷基；或者，R1、R2与它们相连的碳原子一起形成3-6元环烃基；
R3为氢、氘、卤素、-CN或C1-6卤代烷基；
R4为氢、卤素、-CN、C1-6烷基、C2-6炔基、-(C1-3烷基)-OH、-(C1-3烷基)-O-(C1-3烷基)、-O-(C1-3烷基)、-CHO、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2或3-羟基-氧杂环丁烷-3-基，其中所述的C1-6烷基或C1-3烷基各自任选地被一个或多个氘或卤素取代；
R5选自氢、C1-6烷基和C3-6环烃基，其中所述的C1-6烷基任选地被一个或多个氘或卤素取代；
Z1、Z2、Z3和Z4分别独立地为CH或N，条件是，Z1、Z2、Z3和Z4中至少有一个为N；
R6和R7分别独立地选自C1-6烷基；
R8为氢、C1-6烷基、C3-6环烃基或4-8元杂环基，其中所述C1-6烷基、C3-6环烃基或4-8元杂环基任选地被一个或多个选自以下的基团取代：氘、卤素、C1-6烷基、三氟甲基、-OH、-NH2、-O-(C1-6烷基)、-NH(C1-6烷基)或-N(C1-6烷基)2；
R9为氢、氘或卤素；
R10为氢、氘、卤素、CN、C1-6烷基或C1-6卤代烷基；
n为0、1或2；条件是，当n为1时，R3不为氢。
实施方案2.如实施方案1所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中，R4为C1-6烷基、-(C1-3烷基)-OH、-(C1-3氘代烷基)-OH、-CHO、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3或-C(O)N(CH3)2；
优选地，R4为C1-6烷基、-(C1-3烷基)-OH、-(C1-3氘代烷基)-OH或-CHO。
实施方案3.如实施方案1或2所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中：
X1、X2和X3分别独立地为CH或N；
U和V分别独立地为CR9；
Y1和Y2分别独立地为CR10；
R1和R2分别独立地选自氢、氘、卤素、-CN、羟基、C1-6烷基、C1-6氘代烷基和C1-6卤代烷基；
R3为氢、氘、卤素、-CN或C1-6卤代烷基；
R4为-(C1-3烷基)-OH、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3或-C(O)N(CH3)2，其中所述的C1-3烷基任选地被一个或多个氘取代；
R5选自氢和C1-6烷基，其中所述的C1-6烷基任选地被一个或多个氘取代；
Z1、Z2、Z3和Z4分别独立地为CH或N，条件是，Z1、Z2、Z3和Z4中至少有一个为N；
R6和R7分别独立地选自C1-6烷基；
R8为氢、C1-6烷基、C3-6环烃基或4-8元杂环基，其中所述C1-6烷基、C3-6环烃基或4-8元杂环基任选地被一个或多个选自以下的基团取代：氘、卤素、C1-6烷基、三氟甲基、-OH或-NH2；
R9为氢或氘；
R10为氢或氘；
n为0、1或2；条件是，当n为1时，R3不为氢。
实施方案4.如实施方案1-3中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中：
X1、X2和X3分别独立地为CH或N；
U和V分别独立地为CR9；
Y1和Y2分别独立地为CR10；
R1和R2分别独立地选自氢、氘、卤素、-CN、羟基、C1-6烷基、C1-6氘代烷基和C1-6卤代烷基；
R3为氢、氘、卤素、-CN或C1-6卤代烷基；
R4为-(C1-3烷基)-OH，其中所述的C1-3烷基任选地被一个或多个氘取代；
R5选自C1-6烷基，其中所述的C1-6烷基任选地被一个或多个氘取代；
Z1、Z2、Z3和Z4分别独立地为CH或N，条件是，Z1、Z2、Z3和Z4中至少有一个为N；
R6和R7分别独立地选自C1-6烷基；
R8为氢、C1-6烷基、C3-6环烃基或4-8元杂环基，其中所述C1-6烷基、C3-6环烃基或4-8元杂环基任选地被一个或多个选自以下的基团取代：氘、卤素、C1-6烷基、三氟甲基、-OH或-NH2；
R9为氢或氘；
R10为氢或氘；
n为0、1或2；条件是，当n为1时，R3不为氢。
实施方案5.如实施方案1-4中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中，X1为CH或N，X2为CH，且X3为N。
实施方案6.如实施方案1-5中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中X3为N。
实施方案7.如实施方案1-6中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中X1和X2均为CH。
实施方案8.如实施方案1-7中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中Y1和Y2均为CR10。
实施方案9.如实施方案8所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中，R10为氢。
实施方案10.如实施方案1-9中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中，R1和R2分别独立地选自C1-6烷基；
优选地，R1和R2分别独立地选自C1-3烷基；
更优选地，R1和R2均为甲基。
实施方案11.如实施方案1-10中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中，R3为氢或卤素；
优选地，R3为氢。
实施方案12.如实施方案1-11中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中，优选地，R4为-(C1-3烷基)-OH或-(C1-3氘代烷基)-OH；
优选地，R4为羟基甲基或羟基氘代甲基；
更优选地，R4为羟基甲基。
实施方案13.如实施方案1-12中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中，R3为氢，且R4为-(C1-3烷基)-OH。
实施方案14.如实施方案1-13中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中，U和V均为CH。
实施方案15.如实施方案1-14中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中：R5为C1-6烷基；
优选地，R5为C1-3烷基；
更优选地，R5为甲基。
实施方案16.如实施方案1-15中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中：Z1为N，且Z2、Z3和Z4均为CH。
实施方案17.如实施方案1-16中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中，R6和R7均为甲基。
实施方案18.如实施方案1-17中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中：R8为氢、C1-6烷基、C3-6环烃基或4-8元杂环基，其中所述C1-6烷基、C3-6环烃基或4-5元杂环基任选地被一个或多个选自以下的基团取代：氘、卤素、C1-6烷基、三氟甲基、-OH或-NH2；
优选地，R8为氢、C1-6烷基或4-5元杂环基，其中所述C1-6烷基或4-5元杂环基任选地被一个或多个选自以下的基团取代：氘、卤素、C1-6烷基、三氟甲基、-OH或-NH2；
优选地，R8为4-5元杂环基，任选地被1或2个选自以下的基团取代：氘、卤素、C1-3烷基、三氟甲基、-OH或-NH2；
优选地，R8为4-5元杂环基；
更优选地，R8为4元杂环基。
实施方案19.如实施方案1-18中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中：R8为氧杂环丁烷基或四氢呋喃基。
实施方案20.如实施方案19所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中，R8为
实施方案21.如实施方案1所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，
其选自：
实施方案22.药物组合物，其包含实施方案1-21中任一所述的化合物和/或其药学上可接受的盐，并且任选地包含药学上可接受的赋形剂。
实施方案23.体内或体外抑制BTK活性的方法，其包括使有效量的实施方案1-21中任一所述的化合物和/或其药学上可接受的盐与BTK接触。
实施方案24.实施方案1-21中任一所述的化合物和/或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途，所述药物用于治疗或预防由BTK介导或至少部分由BTK介导的疾病，所述的药物优选用于治疗或预防自身免疫性疾病、炎性疾病或癌症；所述的炎性疾病或自身免疫性疾病优选选自：全身性炎症和局部炎症、关节炎、类风湿关节炎、与免疫抑制相关的炎症、器官移植排斥、变态反应性疾病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、皮炎、哮喘、红斑狼疮、舍格伦综合征、多发性硬化、硬皮病、多发性硬化骨质疏松症、特发性血小板减少性紫癜、自身免疫性溶血性贫血、抗中性粒细胞胞质抗体血管炎、慢性阻塞性肺病、银屑病、干燥综合征、寻常性天胞疮、与肾移植相关的疾病、甲状腺自身免疫病、慢性淋巴性甲状腺炎、甲状腺功能亢进、恶性贫血伴慢性萎缩性胃炎、肺出血肾炎综合征、类天疱疮、原发性胆汁性肝硬变、急性特发性多神经炎，系统性红斑狼疮、混合结缔组织病；所述癌症优选为实体瘤或血液学恶性肿瘤，包括淋巴瘤、白血病及骨髓瘤；
所述的癌症更优选选自B细胞恶性肿瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、大B细胞淋巴瘤(LBCL)、B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、华氏巨球蛋白血症、边缘区淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、非伯基特高度恶性B细胞淋巴瘤、结节外边缘区B细胞淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、淋巴母细胞淋巴瘤、淋巴细胞白血病、髓细胞性白血病、急性髓细胞性白血病(AML)、慢性髓细胞性白血病(CML)、人急性单核细胞白血病、急性淋巴细胞白血病(ALL)、B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)、毛细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病(CLL)(例如高危型CLL)、骨髓增生异常综合征、急性淋巴母细胞性白血病、骨髓瘤(例如多发性骨髓瘤)或移植性抗宿主病。
实施方案25.用于治疗或预防个体的疾病的方法，其包括给需要其的个体施用有效量的实施方案1-21中任一所述的化合物和/或其药学上可接受的盐，所述疾病是由BTK介导或至少部分由BTK介导的疾病；所述疾病优选是自身免疫性疾病、炎性疾病或癌症；所述的炎性疾病或自身免疫性疾病优选选自：全身性炎症和局部炎症、关节炎、类风湿关节炎、与免疫抑制相关的炎症、器官移植排斥、变态反应性疾病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、皮炎、哮喘、红斑狼疮、舍格伦综合征、多发性硬化、硬皮病、多发性硬化骨质疏松症、特发性血小板减少性紫癜、自身免疫性溶血性贫血、抗中性粒细胞胞质抗体血管炎、慢性阻塞性肺病、银屑病、干燥综合征、寻常性天胞疮、与肾移植相关的疾病、甲状腺自身免疫病、慢性淋巴性甲状腺炎、甲状腺功能亢进、恶性贫血伴慢性萎缩性胃炎、肺出血肾炎综合征、类天疱疮、原发性胆汁性肝硬变、急性特发性多神经炎，系统性红斑狼疮、混合结缔组织病；所述癌症优选为实体瘤或血液学恶性肿瘤，包括淋巴瘤、白血病及骨髓瘤；所述的癌症更优选选自B细胞恶性肿瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、大B细胞淋巴瘤(LBCL)、B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、华氏巨球蛋白血症、边缘区淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、非伯基特高度恶性B细胞淋巴瘤、结节外边缘区B细胞淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、淋巴母细胞淋巴瘤、淋巴细胞白血病、髓细胞性白血病、急性髓细胞性白血病(AML)、慢性髓细胞性白血病(CML)、人急性单核细胞白血病、急性淋巴细胞白血病(ALL)、B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)、毛细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病(CLL)(例如高危型CLL)、骨髓增生异常综合征、急性淋巴母细胞性白血病、骨髓瘤(例如多发性骨髓瘤)或移植性抗宿主病。
实施方案26.实施方案1-21中任一所述的化合物和/或其药学上可接受的盐，其用作药物。
实施方案27.实施方案1-21中任一所述的化合物和/或其药学上可接受的盐，其用于治疗或预防由BTK介导或至少部分由BTK介导的疾病，优选用于治疗或预防自身免疫性疾病、炎性疾病或癌症；所述的炎性疾病或自身免疫性疾病优选选自：全身性炎症和局部炎症、关节炎、类风湿关节炎、与免疫抑制相关的炎症、器官移植排斥、变态反应性疾病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、皮炎、哮喘、红斑狼疮、舍格伦综合征、多发性硬化、硬皮病、多发性硬化骨质疏松症、特发性血小板减少性紫癜、自身免疫性溶血性贫血、抗中性粒细胞胞质抗体血管炎、慢性阻塞性肺病、银屑病、干燥综合征、寻常性天胞疮、与肾移植相关的疾病、甲状腺自身免疫病、慢性淋巴性甲状腺炎、甲状腺功能亢进、恶性贫血伴慢性萎缩性胃炎、肺出血肾炎综合征、类天疱疮、原发性胆汁性肝硬变、急性特发性多神经炎，系统性红斑狼疮、混合结缔组织病；所述癌症优选为实体瘤或血液学恶性肿瘤，包括淋巴瘤、白血病及骨髓瘤；所述的癌症更优选选自B细胞恶性肿瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、大B细胞淋巴瘤(LBCL)、B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、华氏巨球蛋白血症、边缘区淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、非伯基特高度恶性B细胞淋巴瘤、结节外边缘区B细胞淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、淋巴母细胞淋巴瘤、淋巴细胞白血病、髓细胞性白血病、急性髓细胞性白血病(AML)、慢性髓细胞性白血病(CML)、人急性单核细胞白血病、急性淋巴细胞白血病(ALL)、B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)、毛细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病(CLL)(例如高危型CLL)、骨髓增生异常综合征、急性淋巴母细胞性白血病、骨髓瘤(例如多发性骨髓瘤)或移植性抗宿主病。
实施方案28.药物组合，其包括实施方案1-21中任一所述的化合物和/或其药学上可接受的盐，以及至少一种另外的治疗剂，所述治疗剂优选选自：抗炎剂、免疫调节剂或抗肿瘤活性剂，所述的抗肿瘤活性剂包括化疗剂、免疫检查点抑制剂或激动剂、以及靶向治疗剂。
本发明所述的各个实施方案(包括下文的实施例)以及各个实施方案中的特征应当被理解为可以任意进行相互组合，这些相互组合得到的各个方案均包括在本发明的范围内，就如同在本文中具体地且逐一地列出了这些相互组合而得到的方案一样，除非上下文清楚地显示并非如此。
通用合成方法
本文所述的式(I)的化合物和/或其药学上可接受的盐可以用商业上可获得的原料、通过本领域已知的方法或本专利申请所公开的方法合成。流程1-2中所示的合成路线举例说明了本发明的化合物的通用合成方法，流程3-6中所示的合成路线举例说明了流程1-2中所用原料1-1的通用合成方法。
流程1：
其中：Hal代表卤素，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、X1、X2、X3、Z1、Z2、Z3、Z4、U、V、Y1、Y2和n如本文中所定义。
如流程1所示，式1-1的化合物在碘化亚铜催化下，与式1-2的二卤芳醛基化合物反应得到式1-3的化合物。碘化亚铜催化的碳-氮偶联反应在合适的条件下进行，所用的溶剂可以选自极性溶剂例如1,4-二氧六环、DMF等，所用的碱可以选自Cs2CO3、Na2CO3、K3PO4等。式1-3在合适条件下，还原得到本发明的式1-4的化合物。所用的还原试剂可以选自硼氢化钠，硼氢化钾，硼氢化锂等，所用的溶剂可以选自极性溶剂甲醇，乙醇或甲醇与二氯甲烷的混合溶剂等。式1-4的化合物上乙酰基得到式1-5的化合物。式1-5的化合物在合适的条件下与联硼酸频那醇酯反应得到式1-6的硼酸或硼酸酯化合物。式1-6的化合物在适当的钯试剂催化下，与式1-7的卤代物通过Suzuki偶联反应得到式1-8的化合物。钯催化的碳-碳偶联反应在合适的条件下进行，所用的溶剂可以选自极性溶剂例如1,4-二氧六环、DMF、THF、或1,4-二氧六环与水的混合溶剂等，所用的碱可以选自Cs2CO3、Na2CO3、K3PO4等，所用的催化剂可以选自Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2、Pd(PPh3)4、Pd(OAc)2等。式1-8的化合物在适当的碱性条件下去乙酰基得到本发明的式(I-1)的化合物。所用的碱可以选自碳酸钾，碳酸钠，氢氧化锂等，所用的溶剂可以选自极性溶剂甲醇，乙醇或甲醇与水的混合溶剂等。
流程2：
如流程2所示，式1-3的化合物在适当的钯试剂催化下，与式2-1的硼酸或硼酸酯通过Suzuki偶联反应得到式2-2的化合物。钯催化的碳-碳偶联反应在合适的条件下进行，所用的溶剂可以选自极性溶剂例如1,4-二氧六环、DMF、THF、或1,4-二氧六环与水的混合溶剂等，所用的碱可以选自Cs2CO3、Na2CO3、K3PO4等，所用的催化剂可以选自Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2、Pd(PPh3)4、Pd(OAc)2等。式2-2的化合物在合适条件下，还原得到本发明的式(I-1)的化合物。所用的还原试剂可以选自硼氢化钠，硼氢化钾，硼氢化锂等，所用的溶剂可以选自极性溶剂甲醇，乙醇或甲醇与二氯甲烷的混合溶剂等。
流程3：
如流程3所示，式3-1的化合物在合适的条件下，与溴乙醛缩二乙醇发生取代反应得到式3-2的化合物。所用的碱可以选自碳酸铯等，所用的溶剂可以选自极性溶剂DMF，1,4-二氧六环等。式3-2的化合物在碱性溶液中水解得到式3-3的化合物。所用的碱可以选自氢氧化锂、碳酸钾，碳酸钠等，所用的溶剂可以选自极性溶剂甲醇，乙醇或甲醇与水的混合溶剂等。式3-3的化合物与HATU及氨水发生缩合反应得到式3-4的化合物。式3-4的化合物在乙酸中关环得到式3-5的化合物。
流程4：
如流程4所示，式3-1的化合物与水合肼发生取代反应得到式4-1的化合物。式4-1的化合物与原甲酸三乙酯在DMF溶液中发生关环反应得到式4-2的化合物。
可以进一步修饰通过上述方法获得的化合物的取代基，从而得到其它的所需化合物。合成化学转化方法可参考例如：R.Larock,Comprehensive Organic Transformations,VCH Publishers(1989)；L.Fieser和M.Fieser,Fieser and Fieser’s Reagents forOrganic Synthesis,John Wiley and Sons(1994)；和L.Paquette编，Encyclopedia ofReagents for Organic Synthesis,John Wiley and Sons(1995)及其后续版本。
在使用前，本发明的化合物可以通过柱色谱、高效液相色谱、结晶或其它适当的方法进行纯化。
药物组合物和用途
本发明的化合物(例如本文中的任何实施例化合物)可单独或者与一种或多种另外的治疗剂联合配制成药物组合物。药物组合物包括：(a)有效量的本发明的化合物；(b)药学上可接受的赋形剂(例如，一种或多种药学上可接受的载体)；和任选的(c)至少一种另外的治疗剂。
药学上可接受的赋形剂指能与组合物中的活性成分相容(在一些实施方案中，能稳定活性成分)并且对所治疗的个体无害的赋形剂。例如，增溶剂如环糊精(其能与本发明的化合物形成特定的、溶解性更强的复合物)可用作药物赋形剂来递送活性成分。其它赋形剂的例子包括胶态二氧化硅、硬脂酸镁、纤维素、十二烷基硫酸钠以及色素如D&C黄色10号(D&C Yellow#10)。合适的药学上可接受的赋形剂在本领域的标准参考书(Remington'sPharmaceutical Sciences,A.Osol)中公开。
包含本发明的化合物的药物组合物可以以各种已知的方式、例如口服、局部、直肠、肠胃外、吸入或植入等方式施用。本文所用的术语“肠胃外”包括皮下、皮内、静脉内、肌内、关节内、动脉内、滑膜内、胸骨内、脊椎内、患处内以及颅内注射或输注。
本文所述的药物组合物被制备成的形式可以是片剂、胶囊、袋装冲剂、糖衣丸、散剂、颗粒剂、含片、粉针剂、液体制剂或栓剂。在一些实施方案中，包含本发明的化合物的药物组合物可被配制成用于静脉滴注、局部给药或口服给药的形式。
口服施用的组合物可以是任何口服可接受的剂型，包括但不限于：片剂、胶囊、乳剂以及水性的混悬剂、分散剂和溶液。常用的片剂载体包括乳糖和玉米淀粉。润滑剂如硬脂酸镁也常加入到片剂中。以胶囊形式口服施用时，有用的稀释剂包括乳糖和干燥玉米淀粉。当以水性混悬剂或乳剂形式口服施用时，可用乳化剂或助悬剂使活性成分混悬或溶解于油相中。若有需要，还可添加某些甜味剂、矫味剂或色素。
在一些实施方案中，本发明的化合物在片剂中的量可以是1、5、10、15、20、25、50、75、80、85、90、95、100、125、150、200、250、300、400和500毫克。在一些实施方案中，本发明的化合物在胶囊中的量可以是1、5、10、15、20、25、50、75、80、85、90、95、100、125、150、200、250、300、400和500毫克。
无菌可注射组合物(如水性或油性混悬剂)可按照本领域已知的技术，使用适合的分散剂或润湿剂(例如吐温80)以及助悬剂来配制。无菌可注射组合物也可以是在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或混悬液，例如在1,3-丁二醇中的溶液。药学上可接受的载体和溶剂尤其可使用的是甘露醇、水、林格氏液和生理盐水。此外，无菌的不易挥发的油例如合成的单或二甘油酯通常用作溶剂或混悬介质。脂肪酸例如油酸及其甘油酯衍生物以及天然的药学上可接受的油例如橄榄油或蓖麻油(尤其是其聚氧乙基化形式)常用作可注射介质。这些油溶液或混悬液也可含有长链的醇类稀释剂或分散剂、或羧甲基纤维素或类似的分散剂。
使用苯甲醇或其它适宜的防腐剂、使用提高生物利用度的吸收促进剂、使用碳氟化合物和/或其它本领域已知的增溶剂或分散剂，可以根据药物制剂领域众所周知的技术制备吸入组合物，也可将其制成在盐水中的溶液。
局部组合物可配制为油、乳膏剂、洗剂、软膏剂等形式。用于组合物的适合载体包括植物油或矿物油、白凡士林(白软石蜡)、支链脂肪或油、动物脂肪和高分子量的醇(即，碳原子数大于12的醇)。在一些实施方案中，药学上可接受的载体是活性成分能溶解于其中的载体。如有需要，组合物还可以包含乳化剂、稳定剂、湿润剂和抗氧化剂，以及赋予其颜色或香味的物质。此外，局部制剂中还可加入透皮渗透促进剂。这类促进剂的例子可见于美国专利No.3,989,816和4,444,762。
乳膏剂可以由矿物油、自乳化蜂蜡和水的混合物配制，将溶解于少量油脂例如杏仁油中的活性成分混合在其中。乳膏剂的一个例子包含以重量计约40份水、约20份蜂蜡、约40份矿物油以及约1份杏仁油。软膏剂可通过将活性成分在植物油例如杏仁油中的溶液与温热的软石蜡混合并将混合物冷却来配制。软膏剂的一个例子包含以重量计约30％杏仁油和约70％白软石蜡。
合适的体外实验可用于评价本发明的化合物抑制BTK活性的效果。可进一步通过体内试验检测本发明的化合物在预防或治疗癌症中的另外的效果。例如，可将本发明的化合物施用给患有癌症的动物(如小鼠模型)，然后评估其治疗效果。如果临床前试验的结果是成功的，还可以预测其对动物例如人的剂量范围和施用途径。
本发明的化合物显示有足够的临床前的实际用途以值得进行临床试验，并预期显示有益的治疗或预防效果，例如，在患有癌症的个体中显示有益的治疗或预防效果。
本文所用的术语“癌症”指以失控或失调的细胞增殖、减少的细胞分化、不恰当的侵入周围组织的能力和/或在其它部位建立新生长灶的能力为特征的细胞障碍。术语“癌症”包括但不限于：实体瘤和血液学恶性肿瘤(例如白血病、淋巴瘤或骨髓瘤)。术语“癌症”包括皮肤、组织、器官、骨骼、软骨、血液和血管的癌症。术语“癌症”既包括原发性癌症，也包括转移性癌症、复发性癌症和顽固性癌症。
实体瘤的非限制性例子包括胰腺癌；膀胱癌；结肠直肠癌；乳腺癌，包括转移性乳腺癌；前列腺癌，包括雄性激素依赖性和非雄性激素依赖性前列腺癌；睾丸癌；肾癌，包括例如转移性肾细胞癌；尿路上皮癌；肝癌；肝细胞癌；肺癌，包括例如非小细胞肺癌(NSCLC)、细支气管肺泡癌(BAC)和肺腺癌；卵巢癌，包括例如进行性上皮癌或原发性腹膜癌；宫颈癌；子宫内膜癌；胃癌；食道癌；头颈癌，包括例如头颈部鳞状细胞癌；皮肤癌，包括例如黑素瘤和基底癌；神经内分泌癌，包括转移性神经内分泌瘤；脑瘤，包括例如神经胶质瘤、间变性少突神经胶质瘤、成人多形性成胶质细胞瘤和成人间变型星形细胞瘤；骨癌；肉瘤，包括例如卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)；肾上腺癌；间皮内膜癌；绒毛膜癌；肌肉癌；结缔组织癌；和甲状腺癌。
血液学恶性肿瘤的非限制性例子包括急性髓细胞性白血病(AML)；慢性髓细胞性白血病(CML)，包括加速期CML和CML急变期(CML-BP)；急性淋巴细胞白血病(ALL)；慢性淋巴细胞白血病(CLL)，包括高危型CLL；人急性单核细胞白血病(M(5))；毛细胞白血病；淋巴细胞白血病；慢性淋巴样白血病；髓细胞性白血病；骨髓增生异常综合征或急性淋巴母细胞性白血病；小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、淋巴母细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤；非霍奇金淋巴瘤(NHL)；滤泡型淋巴瘤；套细胞淋巴瘤(MCL)；B细胞淋巴瘤；T细胞淋巴瘤；弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)；大B细胞淋巴瘤(LBCL)；滤泡性淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、非伯基特高度恶性B细胞淋巴瘤、结节外边缘区B细胞淋巴瘤；多发性骨髓瘤(MM)；华氏巨球蛋白血症；骨髓增生异常综合征(MDS)，包括顽固性贫血(RA)、环状铁粒幼细胞顽固性贫血(RARS)、过量芽细胞顽固性贫血(RAEB)和过量芽细胞顽固性贫血合并急性转化(RAEB-T)；以及骨髓增生综合征(myeloproliferative syndrome)。
在一些实施方案中，血液学恶性肿瘤是复发性或顽固性弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、复发性或顽固性套细胞淋巴瘤、复发性或顽固性滤泡性淋巴瘤、复发性或顽固性CLL、复发性或顽固性SLL、复发性或顽固性多发性骨髓瘤。
本发明的化合物可用来达到有益的治疗或预防效果，例如，在患有癌症的个体中达到有益的治疗或预防效果。
本发明的化合物可用来达到有益的治疗或预防效果，例如，在患有自身免疫性疾病的个体中或在罹患炎性疾病的个体中达到有益的治疗或预防效果。
术语“自身免疫性疾病”指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织或器官损害所引起的疾病或病症。自身免疫性疾病的例子包括但不限于：慢性阻塞性肺病(COPD)、变应性鼻炎、红斑狼疮、重症肌无力、舍格伦综合征、多发性硬化(MS)、硬皮病(又称全身性硬化症)、多发性硬化骨质疏松症、关节炎(例如类风湿性关节炎(RA)、胶原诱导性关节炎)、银屑病、炎性肠病(如溃疡性结肠炎、克罗恩氏病)、哮喘、特发性血小板减少性紫癜、自身免疫性溶血性贫血、抗中性粒细胞胞质抗体血管炎、干燥综合征、寻常性天胞疮、与肾移植相关的疾病以及骨髓增生性疾病，例如骨髓纤维化(myelofibrosis)、真性红细胞增多症/原发性血小板增多症性骨髓纤维化(post-polycythemia vera/essential thrombocytosismyelofibrosis,post-PV/ET myelofibrosis)，甲状腺自身免疫病、慢性淋巴性甲状腺炎、甲状腺功能亢进、恶性贫血伴慢性萎缩性胃炎、肺出血肾炎综合征(goodpasturesyndrome)、类天疱疮、原发性胆汁性肝硬变、急性特发性多神经炎，系统性红斑狼疮、混合结缔组织病等。在一些实施方案中，自身免疫性疾病选自关节炎，例如类风湿性关节炎、胶原诱导性关节炎等。
术语“炎性疾病”或“炎症性病症”指的是导致炎症的病理状态，尤其是由于嗜中性粒细胞趋化引起的。炎性疾病的非限制性例子包括全身性炎症和局部炎症、与免疫抑制相关的炎症、器官移植排斥、变态反应性疾病、炎性皮肤疾病(包括银屑病和特应性皮炎)；系统性硬皮病和硬化症；与炎性肠病(IBD，例如克罗恩病和溃疡性结肠炎)有关的反应；缺血再灌注损伤，包括手术引起组织再灌注损伤、心肌缺血如心肌梗死、心脏骤停、心脏术后再灌注和经皮冠状动脉成形术后冠脉血管的异常收缩反应、卒中和腹主动脉瘤手术组织再灌注损伤；卒中继发脑水肿；颅外伤、失血性休克；窒息；成人呼吸窘迫综合征；急性肺损伤；白塞氏病；皮肌炎；多发性肌炎；多发性硬化(MS)；皮炎；脑膜炎；脑炎；葡萄膜炎；骨关节炎；狼疮性肾炎；自身免疫性疾病如类风湿性关节炎(RA)、舍格林氏综合征(Sjorgen'ssyndrome)、脉管炎；涉及白细胞渗出的疾病；败血症或创伤继发中枢神经系统(CNS)炎性疾病、多器官损伤综合征；酒精性肝炎；细菌性肺炎；抗原-抗体复合物介导的疾病，包括肾小球肾炎；脓血症；结节病；组织/器官移植引起的免疫病理反应；肺部炎症，包括胸膜炎、肺泡炎、脉管炎、肺炎、慢性支气管炎、支气管扩张、弥漫性泛细支气管炎、过敏性肺炎、特发性肺纤维化(IPF)，以及囊性纤维化等。优选的适应症包括，但不限于，慢性炎症、自身免疫性糖尿病、类风湿性关节炎(RA)、类风湿性脊椎炎、痛风性关节炎和其它的关节病症、多发性硬化(MS)、哮喘、系统性红斑狼疮、成人呼吸窘迫综合征、白塞氏病、银屑病、慢性肺部炎性疾病、移植物抗宿主反应、克罗恩病、溃疡性结肠炎、炎性肠病(IBD)、阿尔茨海默氏病和麻痹症(pyresis)，以及任一种与炎症和相关病症有关的疾病。
此外，本发明的化合物(例如本文中的任何实施例化合物)可与另外的治疗剂联合用药，用于治疗本文所述的疾病或病症，例如自身免疫性疾病、炎性疾病或癌症。另外的治疗剂可以与本发明的化合物分开给药，或者可以根据本公开内容将其包含在药物组合物中，例如固定剂量的复方药品。在一些实施方案中，另外的治疗剂是那些已知的或已被发现对治疗由BTK介导或至少部分由BTK介导的疾病有效的成分，例如其它BTK抑制剂或能有效拮抗与该特定疾病相关的其它靶点的化合物。联合用药可用于提高疗效(例如，通过将能增强本发明的化合物的效力或有效性的化合物包含入联合用药中)，降低一种或多种副作用，或者减少所需的本发明的化合物的剂量。
在一些实施方案中，本发明的化合物(例如本文中的任意化合物)可与另外的治疗剂联合用药，例如抗炎剂、免疫调节剂或抗肿瘤活性剂，所述的抗肿瘤活性剂包括化疗剂、免疫检查点抑制剂或激动剂、以及靶向治疗剂。本文使用的术语“抗肿瘤活性剂”指给予患有癌症的对象的、用于治疗癌症目的的任何药剂，化疗剂、免疫检查点抑制剂或激动剂、以及靶向治疗剂等。
抗炎剂、免疫调节剂的非限定性例子包括:免疫抑制剂(例如他克莫司、环孢菌素、雷帕霉素、甲氨蝶呤、环磷酰胺、硫唑嘌呤、巯嘌呤、麦考酚酯或FTY720)、糖皮质激素类(例如泼尼松、醋酸可的松、泼尼松龙、甲泼尼龙、地塞米松、倍他米松、曲安西龙、氢羟强的松龙、倍氯米松、醋酸氟氢可的松、醋酸脱氧皮质酮、醛固酮)、非甾体抗炎药(例如水杨酸盐、芳基烷酸、2-芳基丙酸、N-芳基邻氨基苯甲酸、昔康类、考昔类或硫酰替苯胺)、环氧化酶-2-特异性抑制剂(例如伐地考昔、塞来考昔或罗非考昔)、来氟米特、金硫代葡萄糖、金硫代苹果酸、奥罗力士、柳氮磺吡啶、羟氯喹、米诺环素、TNF-α结合蛋白(例如英夫利昔单抗、依那西普或阿达木单抗)、阿巴西普、阿那白滞素、干扰素、干扰素-Y、白细胞介素-2、白细胞介素-6，白细胞介素-12/23、白细胞介素-17抗体类药物、变态反应疫苗、抗组胺药、抗白三烯药、β-激动剂、茶碱或抗胆碱能类药；JAK3激酶抑制剂，包括所有已知的、但不仅限于：托法替尼(Tofactinib)；IRAK4,RIPK1抑制剂等。
化疗剂的非限定性例子包括拓扑异构酶I抑制剂(例如依立替康、托泊替康、喜树碱及其类似物或代谢物以及阿霉素)；拓扑异构酶II抑制剂(例如依托泊苷、替尼泊苷、米托蒽醌、去甲氧基柔红霉素和道诺霉素)；烷化剂(例如美法仑、苯丁酸氮芥、白消安、噻替派、异环磷酰胺、亚硝基脲氮芥、环己亚硝脲、甲基环己亚硝脲、链脲霉素、氨烯咪胺、甲氨喋呤、丝裂霉素C和环磷酰胺)；DNA嵌入剂(例如顺铂、奥沙利铂和卡波铂)；和自由基产生剂如博来霉素；以及核苷类似物(例如5-氟尿嘧啶、卡培他滨、吉西他滨、氟达拉滨、阿糖胞苷、阿扎胞苷、巯基嘌呤、硫鸟嘌呤、喷司他丁和羟基脲)、紫杉醇、紫杉萜及有关的类似物；长春新碱、长春碱及有关的类似物；镇静剂及有关的类似物(例如CC-5013和CC-4047)。
免疫检查点抑制剂或激动剂的非限定性例子包括PD-1抑制剂，如抗PD-1抗体，例如潘利珠单抗(pembrolizumab)和尼伏单抗(nivolumab)；PD-L1抑制剂，如抗PD-L1抗体，例如阿替珠单抗(atezolizumab)、度伐单抗(durvalumab)和阿维单抗(avelumab)；CTLA-4抑制剂，例如易普利姆玛(ipilimumab)；以及BTLA抑制剂、LAG-3抑制剂、TIM3抑制剂、TIGIT抑制剂、VISTA抑制剂、OX-40激动剂等。
靶向治疗剂包括各种小分子或大分子靶向治疗剂，其非限定性例子包括：蛋白酪氨酸激酶抑制剂(例如甲磺酸伊马替尼和吉非替尼)；蛋白酶体抑制剂(例如硼替佐米)；NF-κB抑制剂，包括IκB激酶抑制剂；PI3Kδ抑制剂；SYK抑制剂；Bcl2抑制剂；与癌症中过度表达的蛋白结合从而下调细胞复制的抗体，例如抗CD20抗体(如利妥昔单抗、替伊莫单抗、托西莫单抗)，抗Her2单抗(曲妥单抗)，抗EGFR抗体(西妥昔单抗)和抗VEGFR抗体(贝伐单抗)；抗血管生成药物，例如来那度胺等；以及其他的蛋白或酶抑制剂，已知这些蛋白或酶在癌症中会被上调、过度表达或激活，并且对它们的抑制能够下调细胞复制。
实施例
下述实施例是对本发明的举例说明，不以任何方式限制本发明。所给出的数据(如，量、温度等)力争保证其准确性，但是本领域技术人员应当理解其会有一些实验误差和偏差。除非另外说明，否则所有份数均是重量份数，温度为摄氏温度，压力为大气压或接近大气压。所有质谱数据均由安捷伦(Agilent)6120和1100测得。所有核磁共振数据均由瓦里安(Varian)400MR测得。除了合成的中间体外，本发明所用的所有试剂和原料均为商业渠道获得。阳性对照GDC-0853(fenebrutinib)购自上海凌凯医药科技有限公司。除试剂外所有化合物的名称均由Chemdraw 16.0生成。
在本申请的任何结构式中，如果任何原子上存在空余化合价，该空余化合价实际上是为了简便没有具体描绘的氢原子。
在本申请中，如果针对一个化合物同时给出了该化合物的名称和结构式，在二者不一致的情况下，以化合物的结构为准，除非上下文表明化合物的结构不正确、而名称正确。
以下实施例中使用的缩写列表：
CD3OD 氘代甲醇
DCM 二氯甲烷
DIEA N,N-二异丙基乙胺
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
DMSO-d6 氘代二甲亚砜
g 克
HATU 2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
HPMC 羟丙基甲基纤维素
L 升
M 摩尔/升
mg 毫克
mL 毫升
mmol 毫摩尔
mol 摩尔
NBS N-溴代丁二酰亚胺
Pd2(dba)3 三(二亚苄基丙酮)二钯
Pd(dppf)Cl2 CH2Cl2 [1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物
Xphos 2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯
Xant-phos 4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽
实施例1化合物的合成
中间体I-1
3-((5-((2S,6S)-2,6-二甲基-4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮
步骤1：(3S,5S)-3,5-二甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
氮气保护下，向5-氟-2-硝基吡啶(4.5g,31.7mmol)和(3S,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(5.0g,23.3mmol)的DMSO(40mL)溶液中加入DIEA(40mL)。将该混合物在120℃反应24小时后冷却至室温，真空减压浓缩，所得残留物用硅胶柱色谱(二氯甲烷/乙酸乙酯)纯化得到目标产物(6.0g,收率77％)。[M+H]+337.1
步骤2：(3S,5S)-4-(6-氨基吡啶-3-基)-3,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
室温下，向(3S,5S)-3,5-二甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(4.5g,13.4mmol)和10％钯-碳(含50％水,3.0g)的甲醇(100mL)混合物中通入氢气，并在40℃反应3小时。反应液过滤，收集滤液，真空减压浓缩得到目标产物(3.9g,收率95％)，直接用于下一步反应。[M+H]+307.2
步骤3：(3S,5S)-4-(6-((5-溴-1-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)氨基)吡啶-3-基)-3,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
氮气保护下，向(3S,5S)-4-(6-氨基吡啶-3-基)-3,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(3.0g,9.8mmol)和3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(2.0g,7.5mmol)的1,4-二氧六环(100mL)溶液中加入Xant-phos(433mg,0.75mmol)，Pd2(dba)3(343mg,0.375mmol)和碳酸铯(4.9g,15.0mmol)。将该混合物在90℃反应12小时后冷却至室温，过滤，收集并浓缩滤液，所得残留物用硅胶柱色谱(甲醇/二氯甲烷)纯化得到目标产物(3.0g,收率81％)。[M+H]+492.1,494.1
步骤4：5-溴-3-((5-((2S,6S)-2,6-二甲基-4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮
向(3S,5S)-4-(6-((5-溴-1-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)氨基)吡啶-3-基)-3,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(3.0g,6.1mmol)的甲醇(15mL)溶液加入浓盐酸(8mL)，并在50℃搅拌30分钟。
真空减压浓缩，向所得残留物的甲醇(30mL)溶液中加入氯化锌(2.5g,18.3mmol)和氰基硼氢化钠(2.3g,36.6mmol)的甲醇(50mL)悬浮液。反应在50℃搅拌4小时，真空减压浓缩，所得残留物用硅胶柱色谱(甲醇/水)纯化得到目标产物(2.0g,收率73％)。[M+H]+448.1,450.1
步骤5：3-((5-((2S,6S)-2,6-二甲基-4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮
氮气保护下，向5-溴-3-((5-((2S,6S)-2,6-二甲基-4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(1.2g,2.68mmol)，联硼酸频那醇酯(1.7g,6.7mmol)的1,4-二氧六环(60mL)溶液中加入Xphos(128mg,0.27mmol)，Pd2(dba)3(247mg,0.27mmol)和乙酸钾(784mg,8.0mmol)。将该混合物在65℃反应6小时后冷却至室温，过滤并收集滤液，真空减压浓缩，所得残留物用硅胶柱色谱(甲醇/二氯甲烷)纯化得到目标化合物(650mg,纯度50％,收率24％)。
[M+H]+496.3
参照中间体I-1的制备步骤，采用相应的原料及试剂，制备了下表中的中间体：
中间体I-3
4-氯-2-(7,7-二甲基-1-氧代-1,6,7,8-四氢-2H-环戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基)烟醛
步骤1：1-(2,2-二乙氧基乙基)-5,5-二甲基-1,4,5,6-四氢环戊二烯并[b]吡咯-2-甲酸乙酯
向5,5-二甲基-1,4,5,6-四氢环戊二烯并[b]吡咯-2-甲酸乙酯(20.0g,96mmol)的DMF(120mL)溶液中加入碳酸铯(80.0g,245mmol)和溴乙醛缩二乙醇(40.0g,203mmol)，在100℃反应16小时。向该反应液中加入水(200mL)，用乙酸乙酯萃取(200mL x2)。收集合并有机相，真空减压浓缩，所得残留物用硅胶柱色谱(石油醚/乙酸乙酯)纯化得到目标产物(31.0g,收率100％)。[M+Na]+324.1
步骤2：1-(2,2-二乙氧基乙基)-5,5-二甲基-1,4,5,6-四氢环戊二烯并[b]吡咯-2-甲酸
向1-(2,2-二乙氧基乙基)-5,5-二甲基-1,4,5,6-四氢环戊二烯并[b]吡咯-2-甲酸乙酯(31.0g,96mmol)的乙醇(150mL)和水(150mL)溶液中加入一水合氢氧化锂(14.2g,338mmol)，在80℃反应12小时。真空减压除去乙醇，冰浴冷却下用浓盐酸调节pH值至5～6，加入水(200mL)，用乙酸乙酯萃取(200mL x3)，收集合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到目标产物(26.7g,收率94％)。[M-H]-294.1
步骤3：1-(2,2-二乙氧基乙基)-5,5-二甲基-1,4,5,6-四氢环戊二烯并[b]吡咯-2-甲酰胺
于0～5℃，氮气保护下，向1-(2,2-二乙氧基乙基)-5,5-二甲基-1,4,5,6-四氢环戊二烯并[b]吡咯-2-甲酸(26.7g,90.5mmol)的DMF(150mL)溶液中加入三乙胺(25mL,181mmol)，再加入HATU(51.6g,136mmol)。在室温反应1小时，将反应液倒入浓氨水(800mL)中并搅拌10分钟，用二氯甲烷萃取(300mL x2)，收集合并有机相，浓缩得到目标产物(26.6g,收率100％)，直接用于下一步反应。
步骤4：7,7-二甲基-7,8-二氢-2H-环戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-1(6H)-酮
将1-(2,2-二乙氧基乙基)-5,5-二甲基-1,4,5,6-四氢环戊二烯并[b]吡咯-2-甲酰胺(26.6g,90.5mmol)溶于乙酸(100mL)中，在100℃反应4小时，真空减压除去乙酸，用氨水调节pH值至8-9，加入水(200mL)，用二氯甲烷萃取(200mL x3)。收集合并有机相，真空减压浓缩，所得残留物用硅胶柱色谱(二氯甲烷/甲醇)纯化得到目标产物(18.3g,收率100％)。[M+H]+203.1。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.21(s,1H),6.98(d,J＝5.6Hz,1H),6.58(s,1H),6.48(t,J＝5.6Hz,1H),2.62-2.60(m,2H),2.47-2.46(m,2H),1.19-1.17(m,6H).
步骤5：4-氯-2-(7,7-二甲基-1-氧代-1,6,7,8-四氢-2H-环戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基)烟醛
氮气保护下，向7,7-二甲基-7,8-二氢-2H-环戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-1(6H)-酮(14.2g,70.2mmol)和2-溴-4-氯烟醛(30.9g,141mmol)的1,4-二氧六环(500mL)溶液中加入碘化亚铜(13.6g,70.2mmol)，4,7-二甲氧基-1,10-菲咯啉(1.18g,49.2mmol)和碳酸铯(68.6g,211mmol)。将该混合物在80℃反应16小时后冷却至室温，过滤并收集滤液，真空减压浓缩，所得残留物用乙醇重结晶得到目标产物(13.8g,收率58％)。[M+H]+342.1。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ10.21(s,1H),8.53-8.43(m,1H),7.40-7.31(m,1H),7.10-7.02(m,1H),6.95(s,1H),6.89-6.81(m,1H),2.68-2.54(m,4H),1.27(s,6H).
中间体I-4
4-氯-2-(10-氟-1-氧代-6,7,8,9-四氢吡嗪并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)烟醛
向3-氟-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(10.5g,13.4mmol)和二氧化铂(1.57g，6.9mmol)的乙酸(210mL)混合物中通入氢气，并在室温下反应8小时。反应液过滤，收集滤液，并用浓氨水调节pH至8。用乙酸乙酯萃取，真空减压浓缩得到3-氟-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(10.5g,收率98％)，直接用于下一步反应。[M+H]+212.0
参照中间体I-3的制备步骤1-5，采用3-氟-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-2-甲酸乙酯和相应的原料及试剂，制备得到目标产物中间体I-4。[M+H]+346.1
中间体I-5
(3-(乙酰氧基甲基)-2-(7,7-二甲基-1-氧代-1,6,7,8-四氢-2H-环戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-d][1,2,4]三嗪-2-基)吡啶-4-基)硼酸
步骤1：5,5-二甲基-1,4,5,6-四氢环戊二烯并[b]吡咯-2-甲酰肼
向5,5-二甲基-1,4,5,6-四氢环戊二烯并[b]吡咯-2-甲酸乙酯(6.50g,31.4mmol)的乙醇(15mL)溶液中加入水合肼水溶液(45mL,36.0mmol)，并在微波反应器中于150℃反应2小时。冷却至室温，过滤，用水洗涤滤饼，收集滤饼，真空干燥得到目标产物(5.60g,收率92％)，直接用于下一步反应。[M+H]+194.1
步骤2：7,7-二甲基-7,8-二氢-2H-环戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-d][1,2,4]三嗪-1(6H)-酮
氮气保护下，向5,5-二甲基-1,4,5,6-四氢环戊二烯并[b]吡咯-2-甲酰肼(5.60g,29.0mmol)的DMF(16mL)溶液中加入原甲酸三乙酯(3.11g,21.0mmol)，并在160℃反应16小时。冷却至室温，过滤，用少量甲醇洗涤滤饼，收集滤饼，真空干燥得到目标产物(3.25g,收率55％)，直接用于下一步反应。[M+H]+204.1
步骤3：4-氯-2-(7,7-二甲基-1-氧代-1,6,7,8-四氢-2H-环戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-d][1,2,4]三嗪-2-基)烟醛
氮气保护下，向7,7-二甲基-7,8-二氢-2H-环戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-d][1,2,4]三嗪-1(6H)-酮(3.25g,16.0mmol)，2-溴-4-氯烟醛的1,4-二氧六环(60mL)溶液中加入碘化亚铜(1.52g,8.0mmol)，4,7-二甲氧基-1,10-菲咯啉(1.35g,5.6mmol)和碳酸铯(10.4g,32.0mmol)。将该混合物在80℃反应4小时后冷却至室温。真空减压浓缩，所得残留物用硅胶柱色谱纯化得到目标产物(3.43g,收率63％)。[M+H]+343.1
步骤4：2-(4-氯-3-(羟甲基)吡啶-2-基)-7,7-二甲基-7,8-二氢-2H-环戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-d][1,2,4]三嗪-1(6H)-酮
于0～5℃，氮气保护下，向4-氯-2-(7,7-二甲基-1-氧代-1,6,7,8-四氢-2H-环戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-d][1,2,4]三嗪-2-基)烟醛(3.43g,10.0mmol)的甲醇(10mL)和二氯甲烷(30mL)溶液中加入硼氢化钠(0.19g,5.0mmol)，并在此温度下反应10分钟。向该反应液中加入饱和氯化铵水溶液(10mL)，用二氯甲烷萃取(80mL x2)。收集合并有机相，真空减压浓缩得到目标产物(3.33g,收率97％)，直接用于下一步反应。[M+H]+345.1
步骤5：乙酸(4-氯-2-(7,7-二甲基-1-氧代-1,6,7,8-四氢-2H-环戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-d][1,2,4]三嗪-2-基)吡啶-3-基)甲基酯
于0～5℃，氮气保护下，向2-(4-氯-3-(羟甲基)吡啶-2-基)-7,7-二甲基-7,8-二氢-2H-环戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-d][1,2,4]三嗪-1(6H)-酮(3.33g,9.7mmol)和三乙胺(3.91g,38.6mmol)的二氯甲烷(60mL)溶液中加入乙酰氯(11.4g,145mmol)，并在此温度下反应1小时。向该反应液中加入水(30mL)和二氯甲烷(80mL)，收集合并有机相，真空减压浓缩，所得残留物用硅胶柱色谱(石油醚/乙酸乙酯)纯化得到目标产物(2.84g,收率76％)。[M+H]+387.1
步骤6：(3-(乙酰氧基甲基)-2-(7,7-二甲基-1-氧代-1,6,7,8-四氢-2H-环戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-d][1,2,4]三嗪-2-基)吡啶-4-基)硼酸
氮气保护下，向乙酸(4-氯-2-(7,7-二甲基-1-氧代-1,6,7,8-四氢-2H-环戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-d][1,2,4]三嗪-2-基)吡啶-3-基)甲基酯(2.84g,7.3mmol)，联硼酸频那醇酯(5.59g,22.0mmol)的1,4-二氧六环(200mL)溶液中加入Xphos(0.35g,0.73mmol)，Pd(dppf)Cl2 CH2Cl2(0.60g,0.73mmol)和乙酸钾(2.16g,22.0mmol)。将该混合物在100℃反应16小时后冷却至室温。将反应液真空减压浓缩，所得残留物用硅胶柱色谱(石油醚/乙酸乙酯)纯化得到目标产物(2.55g,收率88％)。[M+H]+397.1
参照中间体I-5的制备步骤4-6，采用中间体I-3与相应的原料及试剂，制备了下表中的中间体：
化合物1
2-(5-((5-((2S,6S)-2,6-二甲基-4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)-3'-(羟甲基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢-[3,4'-双吡啶]-2'-基)-7,7-二甲基-7,8-二氢-2H-环戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-1(6H)-酮
步骤1：2'-(7,7-二甲基-1-氧代-1,6,7,8-四氢-2H-环戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基)-5-((5-((2S,6S)-2,6-二甲基-4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢-[3,4'-双吡啶]-3'-甲醛
氮气保护下，向中间体I-1(99mg,0.20mmol)和中间体I-3(68mg,0.20mmol)的1,4-二氧六环(3mL)和水(0.2mL)溶液中加入Xphos(9mg,0.02mmol)，Pd(dppf)Cl2 CH2Cl2(16mg,0.02mmol)和碳酸铯(130mg,0.40mmol)。将该混合物在90℃反应2小时后冷却至室温。过滤并收集滤液，真空减压浓缩得到目标产物，直接用于下一步反应。[M+H]+675.3
步骤2：2-(5-((5-((2S,6S)-2,6-二甲基-4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)-3'-(羟甲基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢-[3,4'-双吡啶]-2'-基)-7,7-二甲基-7,8-二氢-2H-环戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-1(6H)-酮
于0～5℃，氮气保护下，向步骤1所得2'-(7,7-二甲基-1-氧代-1,6,7,8-四氢-2H-环戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基)-5-((5-((2S,6S)-2,6-二甲基-4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢-[3,4'-双吡啶]-3'-甲醛的甲醇(0.5mL)和二氯甲烷(5mL)溶液中加入硼氢化钠(7mg,0.20mmol)，在室温反应5分钟。向该反应液中加入水(0.5mL)，真空减压浓缩，所得残留物用硅胶柱色谱(甲醇/水)纯化及薄层色谱(甲醇/二氯甲烷＝1/20)纯化，得到目标产物(74mg,收率55％)。[M+H]+677.4。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ8.74-8.69(m,1H),8.56-8.51(m,1H),7.95-7.91(m,1H),7.60-7.57(m,1H),7.54-7.51(m,1H),7.40-7.36(m,1H),7.23-7.19(m,1H),7.03-7.00(m,1H),6.95-6.90(m,1H),6.80-6.75(m,1H),4.70-4.65(m,2H),4.64-4.57(m,2H),4.56-4.52(m,1H),4.50-4.45(m,1H),3.69(s,3H),3.54-3.46(m,2H),3.46-3.39(m,1H),2.78-2.68(m,2H),2.65-2.58(m,2H),2.57-2.52(m,2H),2.22-2.13(m,2H),1.30-1.26(m,6H),0.98-0.94(m,6H).
参照化合物1的制备步骤，采用相应的中间体和试剂，制备了下表中的化合物：
化合物4
2-(5-((5-((2S,6S)-2,6-二甲基-4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)-3'-(羟甲基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢-[3,4'-双吡啶]-2'-基)-7,7-二甲基-7,8-二氢-2H-环戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-d][1,2,4]三嗪-1(6H)-酮
氮气保护下，向5-溴-3-((5-((2S,6S)-2,6-二甲基-4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(148mg,0.33mmol)(即中间体I-1制备方法步骤4的产物)和中间体I-5(130mg,0.33mmol)的1,4-二氧六环(5.0mL)和水(0.5mL)溶液中加入Xphos(31mg,0.066mmol)，Pd(dppf)Cl2 CH2Cl2(27mg,0.033mmol)和三水合磷酸钾(264mg,0.99mmol)。将该混合物在100℃反应4小时后冷却至室温。将反应液真空减压浓缩，所得残留物用硅胶柱色谱(甲醇/水)纯化。
将所得固体([M+H]+720.3)溶于甲醇(3mL)，并加入碳酸钾(137mg,0.99mmol)，在室温反应2小时。将反应液真空减压浓缩，所得残留物用硅胶柱色谱(甲醇/水)及薄层色谱(甲醇/二氯甲烷＝1/20)纯化得到目标产物(30mg,收率13％)。[M+H]+678.3。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ8.72-8.86(m,1H),8.58-8.52(m,1H),8.43-8.38(m,1H),7.97-7.92(m,1H),7.63-7.58(m,1H),7.53-7.48(m,1H),7.42-7.36(m,1H),7.08-6.99(m,2H),4.70-4.52(m,6H),3.70(s,3H),3.55-3.41(m,3H),2.87-280(m,2H),2.67-2.61(m,2H),2.60-2.51(m,2H),2.24-2.12(m,2H),1.32-1.29(m,6H),1.00-0.94(m,6H).
参照化合物4的制备步骤，采用相应的中间体和试剂，制备了下表中的化合物：
化合物5
2-(5-((5-((2S,6S)-2,6-二甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)-3'-(羟甲基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢-[3,4'-双吡啶]-2'-基)-7,7-二甲基-7,8-二氢-2H-环戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-1(6H)-酮
将化合物5a(500mg,0.69mmol)溶于三氟乙酸(5mL)，并在室温下搅拌30分钟。真空减压浓缩，所得残留物溶于甲醇(5mL)，加入三乙胺(1mL)，再次真空减压浓缩。所得残留物用硅胶柱色谱(甲醇/水)纯化，得到目标产物(340mg,收率79％)。[M+H]+621.4。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.78(s,1H),8.60-8.51(m,1H),8.00(s,1H),7.61-7.56(m,1H),7.56-7.51(m,1H),7.48-7.38(m,1H),7.27-7.18(m,1H),7.09-7.01(m,1H),6.93(s,1H),6.81-6.75(m,1H),4.64-4.58(m,1H),4.53-4.46(m,1H),3.70(s,3H),3.69-3.61(m,2H),3.44-3.37(m,2H),3.11-3.02(m,2H),2.79-2.68(m,2H),2.66-2.56(m,2H),1.30-1.26(m,6H),1.09-0.99(m,6H).
化合物6
2-(3'-(羟甲基)-1-甲基-6-氧代-5-((5-((2S,6S)-2,4,6-三甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1,6-二氢-[3,4'-双吡啶]-2'-基)-7,7-二甲基-7,8-二氢-2H-环戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-1(6H)-酮
向化合物5(200mg,0.32mmol)的甲醇(5mL)溶液中，加入甲醛水溶液(1.2mL)，并在室温下搅拌5分钟。加入硼氢化钠(38mg,1.0mmol)，并在室温下搅拌30分钟。反应液用硅胶柱色谱(甲醇/水)纯化，得到目标产物(78mg,收率38％)。[M+H]+635.3。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.74-8.69(m,1H),8.58-8.51(m,1H),7.97-7.90(m,1H),7.62-7.56(m,1H),7.55-7.50(m,1H),7.41-7.34(m,1H),7.25-7.19(m,1H),7.05-6.99(m,1H),6.93(s,1H),6.81-6.75(m,1H),4.62-4.58(m,1H),4.51-4.46(m,1H),3.70(s,3H),3.53-3.46(m,2H),2.78-2.69(m,2H),2.69-2.58(m,4H),2.36-2.18(m,5H),1.29-1.27(m,6H),0.98-0.90(m,6H).
实施例2生物化学BTK的测定
1.试剂和材料
BTK重组蛋白：Invitrogen，货号PV3363；
激酶试验试剂盒-酪氨酸1肽：Invitrogen,货号PV3190；/>
384孔低法兰黑色平底聚苯乙烯NBS微板，无盖，无灭菌：Corning，货号3575；
96孔聚苯乙烯锥形底部MicroWellTM板，带盖封闭：Thermo ScientificTMNuncTM，货号277143；
Envision多模式读板仪：PerkinElmer；
震板仪：Eppendorf；
TS-2102震荡培养箱：TENSUC；
2.方法
生物化学试验是利用荧光共振能量转移(fluorescence resonanceenergy transfer,FRET)技术，双酶形式及对磷酸化和非磷酸化短肽蛋白裂解敏感性的不同而建立的试验方法。短肽底物两端被标记了两种荧光基团，构成FRET配对组合。在初级反应过程中(酶反应)，酶将ATP上的γ磷酸基转移到短肽底物的一个丝氨酸或苏氨酸残基上。在第二步反应(显色反应)中，一个位点特异性的蛋白酶(显色试剂)识别并切割非磷酸化短肽。磷酸化的短肽可抑制这种切割作用。切割短肽可打乱在短肽上的供体(如香豆素)和受体荧光基团(荧光素)，而磷酸化的短肽则可保持FRET。比率计算方式如下，计算供体荧光基团在400nm激发后向受体发射产生的各自发射信号的比率。发射信号比率＝香豆素发射光(445nm)/荧光素发射光(520纳米)。如果FRET短肽被磷酸化(如无激酶抑制剂)，发射光比率将保持较低水平；如果FRET-短肽是非磷酸化的(如激酶抑制)则发射光比率会比较高。以此来区分不同化合物抑制剂对BTK激酶活性的抑制作用。
参照激酶试验试剂盒-酪氨酸1肽说明书进行实验操作。试剂准备：1.33×激酶缓冲液，将5×激酶缓冲液用水稀释成1.33×激酶缓冲液；酶溶液，将激酶溶解于1.33×激酶缓冲液，最终工作浓度为3.32nM；短肽溶液，将短肽储存液(1mM溶于DMSO)溶解于1.33×激酶缓冲液，最终工作浓度为2μM；Z′-LYTE Tyr01磷酸化短肽溶液，将0.6μl储存液(1mM溶于DMSO)溶解于149.4μl 1.33×激酶缓冲液；ATP溶液，将ATP储存液(10mM水溶液)溶解于1.33×激酶缓冲液，最终工作浓度为32μM；显色溶液，将显色液B溶解于显色缓冲液中，最终工作浓度为1×显色液；4×化合物配置，3倍梯度浓度稀释化合物，最终获得含不同浓度化合物的4％DMSO水溶液，最终工作浓度为3000、1000、333.33、111.11、37.04、12.35、4.12、1.37nM共8个浓度点。
实验具体步骤：本实验设有三个对照组，每组8复孔，分别为C1 100％抑制组(无ATP)，C2 0％抑制组(加ATP)，C3 100％磷酸化组。384孔板每孔加2.5μl梯度稀释化合物，双复孔，C1、C2、C3孔加4％DMSO溶液。之后，除去C3孔，剩下每孔加2.5μl BTK酶溶液，4℃静置30分钟。之后，除去C3孔，每孔加入2.5μl短肽溶液，C3每孔加5μl磷酸化短肽溶液。C1、C3每孔加入2.5μl 1.33×激酶缓冲液，剩下每孔加入2.5μl ATP溶液。瞬时离心，1000rpm震板30秒，瞬时离心。将384板避光放置震荡培养箱中，室温孵育1小时。酶反应完成后，每孔加入5μl显色溶液，瞬时离心，1000rpm震板30秒，瞬时离心。将384板避光放置震荡培养箱中，室温孵育1小时，显色反应完成。
3.检测
显色完成后，将384孔板取出，使用Envision多模式读板仪读板，发射波长为405nm，激发波长460nm/535nm，检测光信号。以每个孔的460nm读值/535nm读值作为每个孔的信号值。
4.计算
以C3的信号值平均值作为100％磷酸化，以C1的信号值平均值作为0％磷酸化，以C2的信号值平均值计算BTK激酶存在下短肽的磷酸化率。根据每孔信号值分别计算出化合物各个浓度的抑制率(％)，使用XL-Fit 5.3软件(ID Business Solutions Limited)中205模型计算，获得IC50值。
磷酸化率计算如下：
磷酸化率(％)＝100-100×[(发射信号比率×F100％)-C100％]/{(C0％-C100％)+[发射信号比率×(F100％-F0％)]}
其中，发射信号比率＝香豆素发射信号(460nm)/荧光素发射信号(535nm)；C100％＝C3的香豆素发射信号平均值；C0％＝C1的香豆素发射信号平均值；F100％＝C3的荧光素发射信号平均值；F0％＝C1的荧光素发射信号平均值。
抑制率计算如下：
抑制率(％)＝100×(C2磷酸化率-检测孔磷酸化率)/C2磷酸化率
5.测试结果
化合物编号 IC50(μM)
1 0.010
2 0.007
3 0.003
4 0.005
5 0.008
6 0.007
实施例3
Ramos细胞中磷酸化BTK的测定
1.试剂和材料
Ramos细胞：Ramos细胞购自美国标准生物品收藏中心ATCC细胞库,采用含有L-谷胺酰胺，1.5g/L碳酸氢钠，2.383g/L HEPES溶液，0.11g/L丙酮酸钠和4.5g/L葡萄糖的PRMI1640培养基，加10％胎牛血清FBS，于5％ CO2、37℃的细胞培养箱中正常培养；
PRMI 1640培养基：GIBCO,货号A10491-01；
胎牛血清(FBS)：GIBCO，货号100100-147；
Hank's平衡盐溶液(HBSS)：GIBCO，货号14025-092；
免疫球蛋白M(IgM)：Jackson Immuno，货号109-006-129；
3％双氧水(3％H2O2)：Sigma，货号88597-100ML-F；
磷酸化BTK HTRF检测试剂盒(BTK phospho-Y223 HTRF kit)：Cisbio，货号63ADK017PEH；
微孔读板仪：Envision，Perkin Elmer；
384孔板CulturPlateTM384：Perkin Elmer，货号6007680
96孔板：Corning，货号3799。
2.方法
用1％FBS的PRMI 1640培养基饥饿Ramos细胞2个小时，将饥饿后Ramos细胞用Hank's平衡盐溶液稀释到5.0x106个细胞/ml，以20μL/孔种到96孔板中，即1.0x105个细胞/孔，于5％CO2、37℃的细胞培养箱中培养。培养1小时后，将待测化合物以Hank's平衡盐溶液4倍梯度稀释至相应浓度，然后将5μL/孔稀释后的不同浓度的待测化合物(待测化合物终浓度为3.0、0.75、0.188、0.047、0.012、0.0029、0.0007和0.00018μM，DMSO终浓度为0.3％，双复孔)或5μL/孔对照液(1.5％DMSO，8复孔)分别加入到20μL/孔细胞培养体系中，共同孵育一个小时，然后再加入5μL/孔以Hank's平衡盐溶液稀释后的人免疫球蛋白M(终浓度为10μg/mL)和双氧水(终浓度为3.3mM)混合液至待测化合物处理孔和抗人免疫球蛋白M对照处理孔，5μL/孔Hank's平衡盐溶液至阴性对照处理孔，于5％CO2、37℃的细胞培养箱中孵育10分钟。
在96孔板的各孔中加入10μL/孔细胞裂解液，混匀于室温裂解30分钟，吸取16μL/孔裂解液加到新的384孔板中，然后加入4μL/孔磷酸化BTK抗体，离心(1000rpm)1分钟，然后震荡1分钟，再离心(1000rpm)1分钟，最后放入恒温保温箱孵育过夜。第二天检测。
3.检测
将恒温保温箱孵育过夜的384孔板取出，使用Envision微孔读板仪，发射波长为320nm，激发波长665nm/615nm处检测光信号。以(每个孔的665nm读值/615nm读值)乘以104作为每个孔的信号值。
4.计算
以加入人免疫球蛋白M(终浓度为10μg/mL)和双氧水(终浓度为3.3mM)混合液但无待测化合物的孔的信号值平均值作为高值，以不加人免疫球蛋白M刺激且无待测化合物的孔的信号值平均值作为低值。根据每孔信号值分别计算出化合物各个浓度的抑制率(％)，然后用XL-Fit 5.3软件(ID Business Solutions Limited)中205模型计算，获得IC50值。
抑制率计算如下：
抑制率(％)＝100％-{(待测化合物处理孔-阴性对照处理孔)/(抗人免疫球蛋白M对照处理孔-阴性对照处理孔)}×100％,其中,
待测化合物处理孔：表示经抗人免疫球蛋白M、双氧水和待测化合物处理的Ramos细胞的信号值。
抗人免疫球蛋白M对照处理孔：表示经抗人免疫球蛋白M、双氧水处理但无待测化合物的Ramos细胞的信号值。
阴性对照处理孔：表示无待测化合物且未经过免疫球蛋白刺激的Ramos细胞的信号值。
5.测试结果
化合物编号 IC50(μM)
1 0.005
2 0.006
3 0.003
4 0.003
5 0.008
6 0.007
实施例4大鼠全血中B细胞活性的测定
1.试剂和材料
雌性Wistar大鼠外周全血；
磷酸缓冲盐溶液PBS:GIBCO，货号C20012500BT；
抗大鼠B220PE抗体(PE anti rat B220):eBioscience，货号12-0460-82；
抗大鼠CD86 FITC抗体(FITC anti rat CD86):eBioscience，货号11-0860-82；
10乘裂解液(10×lysis buffer):BD Biosciences,货号555899；
固定液(IC fixation buffer)：Invitrogen，货号00-8222-49；
96孔U型底板：Nunc，货号163320；
96孔V型底板：Nunc，货号49952；
二甲基亚砜(DMSO):Sigma-Aldrich，货号34869-4L；
抗大鼠免疫球蛋白D(Mouse anti-rat IgD):Bio-rad,货号MCA190；
流式细胞仪:BD FACS Canto II,BD。
2.方法
化合物活性测定时，将采取的大鼠外周全血按照80μL/孔加入96孔板中，于5％CO2、37℃的细胞培养箱中培养。半小时后，将待测化合物以PBS稀释，以3倍梯度稀释至相应浓度，然后将稀释后的不同浓度的待测化合物以10μL/孔加入大鼠全血培养体系中(待测化合物终浓度为1.0、0.33、0.11、0.037、0.012、0.0041、0.0014和0.0005μM，DMSO终浓度为0.3％，双复孔)或者10μL/孔对照液(0.3％DMSO，6复孔)加入相应孔中，细胞培养箱中培养一个小时。然后再加入10μL/孔以PBS稀释后的抗大鼠免疫球蛋白D(终浓度为10μg/mL)至待测化合物处理孔和抗大鼠免疫球蛋白D对照处理孔，或10μL/孔PBS至阴性对照处理孔，混匀，于5％CO2、37℃的细胞培养箱中继续培养，孵育18小时。
第二天，将96孔板取出，每孔加入用PBS稀释的流式抗体混合液(抗大鼠B220PE抗体终浓度为1μg/mL和抗大鼠CD86 FITC抗体终浓度为1μg/mL)，避光孵育30分钟后，各孔中吸取50μL血液加到新配的500μL裂解液中裂解红细胞，震荡20分钟，离心去上清，然后洗涤，固定，上流式细胞仪进行检测。
3.检测
通过流式染色方法测定样品中B细胞的活化。
4.计算
以加入抗大鼠免疫球蛋白D但无待测化合物的孔中活化B细胞比例的平均值作为抗大鼠免疫球蛋白D对照处理孔，以不加免疫球蛋白D刺激且无待测化合物的孔中活化B细胞比例平均值作为阴性对照处理孔。根据每孔B细胞活化比例分别计算出各个浓度的抑制率(％)，然后用XL-Fit 5.3软件(ID Business Solutions Limited)中205模型计算，获得IC50值。
抑制率计算如下：
抑制率(％)＝100％-{(待测化合物处理孔-阴性对照处理孔)/(抗大鼠免疫球蛋白D对照处理孔-阴性对照处理孔)}×100％,其中,
待测化合物处理孔：表示经抗大鼠免疫球蛋白D和待测化合物处理的大鼠全血中的B细胞的活化比例。
抗大鼠免疫球蛋白D对照处理孔：表示经抗大鼠免疫球蛋白D处理但无待测化合物的的大鼠全血中的B细胞的活化比例。
阴性对照处理孔：表示无待测化合物且未经过免疫球蛋白刺激的大鼠全血中的B细胞的活化比例。
经上述测试，本发明的化合物在大鼠全血中抑制B细胞的活化能力较强。其中，化合物1的IC50值为0.001μM。
实施例5肝微粒体稳定性测试
1.实验材料：
雄性CD-1小鼠混合肝微粒体以及雄性SD大鼠混合肝微粒体均购自美国BioreclamationIVT公司。
非那西汀、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PDH)及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)均购自美国Sigma-Aldrich公司。葡萄糖-6-磷酸盐(G-6-P)购自上海利铂化学技术有限公司和Carbosynth China Limit。
2.溶液配制：
10mM待测化合物储备液：称取一定量的待测化合物，采用适量体积的DMSO溶解，配成浓度为10mM的储备液备用。
反应终止液：将适量内标化合物非那西汀溶于乙腈中配成浓度为1000ng/mL的反应终止液，常温备用。
3.实验方法：
将待测化合物储备液用有机溶剂(通常为乙腈、甲醇和水不同比例的混合液，视化合物溶解度而定，如果需要，会加1N的盐酸或者1N的氢氧化钠助溶)稀释到0.1mM(化合物在最终反应体系中的浓度为1μM)且有机溶剂在孵育体系中的浓度比例不超过1％(其中DMSO的比例要求不超过0.1％)。将适量100mM NADP、500mM G-6-P和100Unit/mL G-6-PDH混合并用超纯水稀释(最终体系含1mM NADP、5mM G-6-P和1Unit/mL G-6-PDH)，配好后在37℃水浴中预孵育10分钟后置于冰上备用，作为NADPH再生溶液。将20mg/mL肝微粒体溶液与200mM磷酸盐缓冲液混合，并用超纯水稀释得到含2.5mg/mL肝微粒体(最终反应体系中浓度为0.5mg/mL)和50mM磷酸盐缓冲液的肝微粒体溶液。将稀释好的肝微粒体溶液与0.1mM的化合物溶液混合，加入适量体积100mM的EDTA、300mM的MgCl2溶液、200mM磷酸盐缓冲液(最终体系为3mM MgCl2、1mM EDTA和50mM磷酸盐缓冲液)和水的混合液。最后加入NADPH再生溶液，然后置于37℃水浴中启动反应，反应时间为30分钟，通过加入含内标的冰乙腈反应终止液来终止反应。0分钟样品不在37℃水浴中孵育，另外与30分钟样品不同的是先加含内标的冰乙腈反应终止液，然后加入NADPH再生溶液。加入终止反应内标溶液的样品经涡旋震荡混匀后，于4400rpm离心10分钟，取上清液用50％甲醇稀释十倍后进行LC-MS/MS分析。
4.分析方法：
采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析方法，测定样品中化合物的浓度。以化合物和内标的峰面积比作为指标，与0分钟样品相比，计算孵育30分钟后的剩余化合物百分比，评价化合物的代谢稳定性。
仪器:API4500、API4000或LTQ质谱仪；液相为UHPLC系统(Shimadzu LC-30AD，型号Nexra X2)包括送液单元、柱温箱、检测器和自动进样器；或安捷伦1200双泵系列HPLC和CTC自动进样器。
色谱柱：Waters XSELECT Hss T3 C18(2.5μm,2.1×50mm)或CAPCELLPAK MG(5μm,2.0×50mm)
流动相：
A:含0.1％ FA(甲酸)(含或不含0.1％ACN(乙腈))的水
B:含0.1％ FA(甲酸)的乙腈。
测试结果如下表所示：
化合物编号 RLM* MLM**
GDC-0853 81.0％ 76.3％
1 87.9％ 91.6％
2 85.7％ 92.6％
4 97.4％ 90.9％
5 95.4％ 67.5％
*RLM,rat liver microsomes,大鼠肝微粒体。
**MLM,mouse liver microsomes,小鼠肝微粒体。
实施例6体内BTK靶点抑制作用的药效评价
目的：通过抗-IgD抗体诱导活化小鼠全血中的B细胞，研究本发明化合物在体内对B细胞活化的抑制作用，从而确定本发明化合物的体内BTK靶点抑制作用。
方法：将C57BL/6小鼠(雌性，18-20g，购自上海灵畅生物科技有限公司)按照表1进行分组。
表1体内给药分组信息
各组动物给药后，于设定时间将其置于CO2中麻醉，眼眶内眦取血，肝素抗凝；每组小鼠取90μL全血加入至96孔培养板中，每孔加入抗小鼠IgD抗体(BIO-RAD,货号MCA4693)至终浓度0.01μg/μL(分别为各药物处理组和抗IgD抗体诱导溶媒组)；另取溶媒组小鼠90μL全血加入至该96孔培养板中，每孔加入PBS(磷酸缓冲盐溶液，GIBCO，货号C20012500BT)至终浓度0.01μg/μL(即为溶媒对照组)；将各组混合均匀，于37℃/5％ CO2培养箱中孵育4小时。另取药物处理组小鼠血液离心分离血浆用于血药浓度分析。
在培养后的全血中加入荧光标记抗体Anti-CD19-APC(BD Biosciences，货号550992)和Anti-CD69-PE(BD Biosciences，货号553237)，混合均匀，室温避光孵育30分钟；取50μL样品转移至含380μL新鲜配制裂解液(BD Biosciences，货号555899)的96孔深V型培养板中，震荡，室温避光放置15分钟以去除红细胞；加入400μL流式缓冲液(2％FBS//PBS，FBS：胎牛血清，GIBCO，货号100100-147；PBS：GIBCO，货号C20012500BT)，1200转4℃离心8分钟；去上清，用流式缓冲液清洗细胞团块两次，离心；再用400μL流式缓冲液重悬细胞,用BDFACS LSRFortessa流式细胞仪检测CD19+阳性细胞(B细胞)中CD69+的表达并分析数据。
B细胞活化率的计算：
B细胞活化率＝CD69+CD19+双阳性B细胞百分比/CD19+单阳性B细胞百分比
抑制率的计算：
抑制率＝(抗IgD抗体诱导溶媒组的B细胞活化率百分比-药物处理组的B细胞活化率百分比)/(抗IgD抗体诱导溶媒组的B细胞活化率百分比-溶媒对照组B细胞活化率百分比)×100％
数据均以均值±标准误表示。各药物处理组与抗IgD抗体诱导溶媒组的比较通过Graphpad Prism采用单因素方差分析及Dunnett's检验计算p值，药物处理组之间的比较用非配对t检验(unpaired t test)计算p值。
结果：实验结果如图1及表2所示。
在本实验中，给药16小时以后，GDC-0853 20mg/kg对B细胞活化的抑制率是9％；本发明化合物2在20mg/kg剂量下对B细胞活化的抑制率是43％。本发明化合物1在5mg/kg的剂量下对B细胞活化的抑制率是60％，其与抗IgD抗体诱导溶媒组相比具有统计学显著性差异。
表2体内给药对抗IgD抗体诱导的小鼠全血中的B细胞活化的影响
####表示与溶媒对照组相比,p<0.0001；
*表示与抗IgD抗体诱导溶媒组相比，p<0.05.
实施例7本发明化合物对II型胶原诱导的大鼠关节炎模型的治疗作用
1.研究方法
称取适量牛II型胶原(CII，Chondrex(Redmond，WA，USA)，Cat#20021)溶解于0.1摩尔醋酸(SPGC Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd(Shanghai,P.R.China),Cat#:10000218.)中配制成浓度为6mg/mL的溶液，4℃下搅拌过夜，再加入等体积的弗氏不完全佐剂(Sigma-Aldrich.(St.Louis,MO,USA),Cat#:SLBW0366.),充分乳化，制成CII浓度为3mg/mL的乳剂。
雌性Lewis大鼠购自北京维通利华(Vital River Laboratory AnimalTechnology Co.,Ltd，合格证号20200928Aazz0619000579，初始体重110-130克)，从中随机取出6只为正常组，将剩余大鼠全部免疫造模。在第0天初次免疫，用异氟烷(河北一品制药股份有限公司，Hebei Yipin Pharmaceutical Co.,Ltd.,Lot:C002170601.)将除正常组外大鼠麻醉后，以75％酒精消毒，在其尾根部皮内注射0.2mL乳剂，在第7天二次攻击，同上方法皮内注射0.2mL乳剂。在第10天动物发病后，密切观察动物发病情况。第13天后造模动物的平均足爪容积在1.5-1.7ml之间，把造模动物按照表3随机分组给药。
表3造模给药分组信息
分组后，正常组不给药，其它各组大鼠分别给予对照溶媒、参比物GDC-08530.25mg/kg,4mg/kg以及化合物1各个剂量每天一次口服，持续至实验结束。分组与给药方案见表3。
从免疫后第10天开始测量足爪容积，检测到足容积增长后每天测量左右后足容积(V)。
测量每个动物的左右后肢关节足容积，平均足容积(average paw volume，APV)按以下公式计算：
平均足容积APV＝(Vleft+Vright)/2
药物对平均足容积的作用通过GraphPad以重复方差分析(repeated measureANOVA)并加用Dunnett's多重比较检验作显著性分析，计算p值，###p<0.001与正常组之间有统计学极显著性差异，*p<0.05为与溶媒对照组有统计学显著性差异，**p<0.01为与溶媒对照组有统计学极显著性差异。每个动物给药前的平均关节足容积为基线(或认为100％达到炎症抑制)。每个动物的平均足容积变化(Averaged paw swelling，APS)按以下公式计算，其中APVd1为第1天给药的平均足容积，APVdt为第t天给药的平均足容积：
平均足容积变化APSdt＝(APVdt–APVd1)
平均足容积变化的曲线下面积(Area under the curve，AUC)为梯形法计算的关节评分变化曲线下面积，计算公式为：
AUCAPS＝1/2×(APSd1+APSd2)×(d2-d1)+1/2×(APSd2+APSd3)×(d3-d2)+……+1/2×(APSdn+APSd(n-1))×(dn-dn-1)。
曲线下面积的抑制率(IRAUC)计算公式：
抑制率IRAUC％＝(模型组平均AUCAPS-药物处理组AUCAPS)/(模型组平均AUCAPS-正常组平均AUCAPS)×100％
ED50用XLfit软件根据平均足容积变化的曲线下面积AUC抑制率计算所得，选用模型为“log(inhibitor)vs.response-Variable slope”：
2.结果
Lewis大鼠在牛II型胶原第一次免疫后第10天开始发病，随病程发展后肢足容积逐渐增加，将溶媒对照组与正常组的足容积增长进行比较，其呈统计学显著性差异(###p<0.001)。GDC-0853-0.25mg/kg对大鼠足容积的增长没有改善作用，GDC-0853-4mg/kg与溶媒对照组相比足容积显著减小(p<0.05)。每日一次口服化合物1溶液0.06、0.25和4mg/kg QD剂量依赖性抑制了足爪肿胀，曲线下面积的抑制率(IRAUC)分别为76.2％、83.1％及200.2％；最低有效剂量为0.06mg/kg/天。0.25mg/kg化合物1(曲线下面积的抑制率83.1％)与同剂量的GDC-0853(曲线下面积的抑制率-6.4％)相比，以及4mg/kg化合物1(曲线下面积的抑制率200.2％)与同剂量的GDC-0853(曲线下面积的抑制率144.7％)相比有统计学差异，均能显著提高对足容积肿胀的持续改善(p<0.01,单因素重复方差分析，通过Graphpad检验)。结果见图2。
实施例8本发明化合物对抗CD41抗体诱导的特发性血小板减少性紫癜的治疗作用
1.研究方法
雄性C57BL/6小鼠购自上海灵畅生物科技有限公司(合格证号20180003011079，初始体重18-20克)，按表4随机分组，每组8只小鼠。分别在造模前不同时间按表4所示单次给药：腹腔注射阳性药2000mg/kg IVIg(Rongsheng，Lot#:201604B026)，口服给药40mg/kgPRN1008(rilzabrutinib)，以及不同剂量的化合物1。造模时，每只小鼠腹腔注射200μL溶有2μg抗小鼠CD41抗体(BD，Cat#:553487,Lot#:7026765)的PBS溶液。
表4造模给药分组信息
造模后8小时以及24小时后，取全血置于预装10％citrate-phosphate-dextrose-adenine(CPDA)的离心管中，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司(Shanghai LaboratoryAnimal Research Centre Sino-British SIPPR/B&K Lab Animal Ltd)XT-2000i(SYSMEX)自动血液分析仪检测全血内的血小板水平(PLT)。
外周血中平均血小板水平用Graphpad统计软件以单因素方差分析以及LSD最小显著性差异多重比较检验(One way ANOVA followed by Fisher LSD multiple Comparisontest)统计分析，计算p值，*p<0.05为与溶媒对照组有统计学显著性差异，**p<0.01为与溶媒对照组有统计学极显著性差异，##p<0.01与正常组之间有统计学极显著性差异。
血小板水平的恢复率(Recovery rate，RR)根据以下公式计算:
RR％＝(PLTtreatment–PLTmodel)/(PLTnaive–PLTmodel)×100％.
2.结果
腹腔注射抗小鼠CD41抗体8小时后，检测C57BL/6小鼠外周血中血小板水平，将溶媒对照组和正常组的平均血小板水平进行比较，其呈统计学极显著性差异(##p<0.01)。腹腔注射2g/kg IVIg与溶媒对照组相比血小板水平显著恢复(**p<0.01)，血小板的恢复率为54％，口服40mg/kg PRN1008与溶媒对照组相比，血小板水平有显著恢复(**p<0.01)，血小板的恢复率为40％。单次口服化合物1溶液0.004、0.04，0.4和4mg/kg剂量依赖性地恢复了抗小鼠CD41抗体诱导的血小板的降低，血小板恢复率分别为25％，37％，44％及51％；最低有效剂量为0.04mg/kg。
腹腔注射抗小鼠CD41抗体24小时后，检测C57BL/6小鼠外周血中血小板水平，将溶媒对照组和正常组的平均血小板水平进行比较，其呈统计学极显著性差异(##,p<0.01)。腹腔注射2g/kg IVIg与溶媒对照组相比血小板水平显著恢复(**p<0.01)，血小板的恢复率为53％。口服40mg/kg PRN1008与溶媒对照组相比，平均血小板水平并没有显著恢复，血小板的恢复率为仅有16％。单次口服化合物1溶液0.004、0.04，0.4和4mg/kg剂量依赖性地恢复了抗小鼠CD41抗体诱导的血小板的降低，血小板恢复率分别为5％，21％，29％及29％。结果见图3。

Claims (24)

1.式(I)化合物：
或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中：
X1、X2和X3分别独立地为CH或N；
U和V分别独立地为N或CR9；
Y1和Y2分别独立地为CR10或N；
R1和R2分别独立地选自氢、氘、卤素、-CN、羟基、C1-6烷基、3-6元环烃基、C2-6炔基、C1-6氘代烷基和C1-6卤代烷基；或者，R1、R2与它们相连的碳原子一起形成3-6元环烃基；
R3为氢、氘、卤素、-CN或C1-6卤代烷基；
R4为氢、卤素、-CN、C1-6烷基、C2-6炔基、-(C1-3烷基)-OH、-(C1-3烷基)-O-(C1-3烷基)、-O-(C1-3烷基)、-CHO、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2或3-羟基-氧杂环丁烷-3-基，其中所述的C1-6烷基或C1-3烷基各自任选地被一个或多个氘或卤素取代；
R5选自氢、C1-6烷基和C3-6环烃基，其中所述的C1-6烷基任选地被一个或多个氘或卤素取代；
Z1、Z2、Z3和Z4分别独立地为CH或N，条件是，Z1、Z2、Z3和Z4中至少有一个为N；
R6和R7分别独立地选自C1-6烷基；
R8为氢、C1-6烷基、C3-6环烃基或4-8元杂环基，其中所述C1-6烷基、C3-6环烃基或4-8元杂环基任选地被一个或多个选自以下的基团取代：氘、卤素、C1-6烷基、三氟甲基、-OH、-NH2、-O-(C1-6烷基)、-NH(C1-6烷基)或-N(C1-6烷基)2；
R9为氢、氘或卤素；
R10为氢、氘、卤素、CN、C1-6烷基或C1-6卤代烷基；
n为0、1或2；条件是，当n为1时，R3不为氢。
2.如权利要求1所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中：
X1、X2和X3分别独立地为CH或N；
U和V分别独立地为CR9；
Y1和Y2分别独立地为CR10；
R1和R2分别独立地选自氢、氘、卤素、-CN、羟基、C1-6烷基、C1-6氘代烷基和C1-6卤代烷基；
R3为氢、氘、卤素、-CN或C1-6卤代烷基；
R4为-(C1-3烷基)-OH、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3或-C(O)N(CH3)2，其中所述的C1-3烷基任选地被一个或多个氘取代；
R5选自氢和C1-6烷基，其中所述的C1-6烷基任选地被一个或多个氘取代；Z1、Z2、Z3和Z4分别独立地为CH或N，条件是，Z1、Z2、Z3和Z4中至少有一个为N；
R6和R7分别独立地选自C1-6烷基；
R8为氢、C1-6烷基、C3-6环烃基或4-8元杂环基，其中所述C1-6烷基、C3-6环烃基或4-8元杂环基任选地被一个或多个选自以下的基团取代：氘、卤素、C1-6烷基、三氟甲基、-OH或-NH2；
R9为氢或氘；
R10为氢或氘；
n为0、1或2；条件是，当n为1时，R3不为氢。
3.如权利要求1或2所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中，X3为N。
4.如权利要求1-3中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中，X1和X2均为CH。
5.如权利要求1-4中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中，Y1和Y2均为CR10。
6.如权利要求5所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中，R10为氢。
7.如权利要求1-6中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中，R1和R2分别独立地选自C1-6烷基。
8.如权利要求1-7中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中，R3为氢或卤素。
9.如权利要求1-8中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中，R4为-(C1-3烷基)-OH或-(C1-3氘代烷基)-OH。
10.如权利要求1-9中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中，R3为氢，且R4为-(C1-3烷基)-OH。
11.如权利要求1-10中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中，U和V均为CH。
12.如权利要求1-11中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中，R5为C1-6烷基。
13.如权利要求1-12中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中，Z1为N，且Z2、Z3和Z4均为CH。
14.如权利要求1-13中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中，R6和R7均为甲基。
15.如权利要求1-14中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中，R8为氧杂环丁烷基或四氢呋喃基。
16.如权利要求15所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其中，R8为
17.如权利要求1所述的化合物，或其药学上可接受的盐，或者它们的溶剂合物、外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，其选自：
18.药物组合物，其包含权利要求1-17中任一所述的化合物和/或其药学上可接受的盐，并且任选地包含药学上可接受的赋形剂。
19.体内或体外抑制BTK活性的方法，其包括使有效量的权利要求1-17中任一所述的化合物和/或其药学上可接受的盐与BTK接触。
20.权利要求1-17中任一所述的化合物和/或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途，所述药物用于治疗或预防由BTK介导或至少部分由BTK介导的疾病，所述的药物优选用于治疗或预防自身免疫性疾病、炎性疾病或癌症；所述的炎性疾病或自身免疫性疾病优选选自：全身性炎症和局部炎症、关节炎、类风湿关节炎、与免疫抑制相关的炎症、器官移植排斥、变态反应性疾病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、皮炎、哮喘、红斑狼疮、舍格伦综合征、多发性硬化、硬皮病、多发性硬化骨质疏松症、特发性血小板减少性紫癜、自身免疫性溶血性贫血、抗中性粒细胞胞质抗体血管炎、慢性阻塞性肺病、银屑病、干燥综合征、寻常性天胞疮、与肾移植相关的疾病、甲状腺自身免疫病、慢性淋巴性甲状腺炎、甲状腺功能亢进、恶性贫血伴慢性萎缩性胃炎、肺出血肾炎综合征、类天疱疮、原发性胆汁性肝硬变、急性特发性多神经炎，系统性红斑狼疮、混合结缔组织病；所述癌症优选为实体瘤或血液学恶性肿瘤，包括淋巴瘤、白血病及骨髓瘤；所述的癌症更优选选自B细胞恶性肿瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、大B细胞淋巴瘤(LBCL)、B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、华氏巨球蛋白血症、边缘区淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、非伯基特高度恶性B细胞淋巴瘤、结节外边缘区B细胞淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、淋巴母细胞淋巴瘤、淋巴细胞白血病、髓细胞性白血病、急性髓细胞性白血病(AML)、慢性髓细胞性白血病(CML)、人急性单核细胞白血病、急性淋巴细胞白血病(ALL)、B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)、毛细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病(CLL)(例如高危型CLL)、骨髓增生异常综合征、急性淋巴母细胞性白血病、骨髓瘤(例如多发性骨髓瘤)或移植性抗宿主病。
21.用于治疗或预防个体的疾病的方法，其包括给需要其的个体施用有效量的权利要求1-17中任一所述的化合物和/或其药学上可接受的盐，所述疾病是由BTK介导或至少部分由BTK介导的疾病；所述疾病优选是自身免疫性疾病、炎性疾病或癌症；所述的炎性疾病或自身免疫性疾病优选选自：全身性炎症和局部炎症、关节炎、类风湿关节炎、与免疫抑制相关的炎症、器官移植排斥、变态反应性疾病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、皮炎、哮喘、红斑狼疮、舍格伦综合征、多发性硬化、硬皮病、多发性硬化骨质疏松症、特发性血小板减少性紫癜、自身免疫性溶血性贫血、抗中性粒细胞胞质抗体血管炎、慢性阻塞性肺病、银屑病、干燥综合征、寻常性天胞疮、与肾移植相关的疾病、甲状腺自身免疫病、慢性淋巴性甲状腺炎、甲状腺功能亢进、恶性贫血伴慢性萎缩性胃炎、肺出血肾炎综合征、类天疱疮、原发性胆汁性肝硬变、急性特发性多神经炎，系统性红斑狼疮、混合结缔组织病；所述癌症优选为实体瘤或血液学恶性肿瘤，包括淋巴瘤、白血病及骨髓瘤；所述的癌症更优选选自B细胞恶性肿瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、大B细胞淋巴瘤(LBCL)、B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、华氏巨球蛋白血症、边缘区淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、非伯基特高度恶性B细胞淋巴瘤、结节外边缘区B细胞淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、淋巴母细胞淋巴瘤、淋巴细胞白血病、髓细胞性白血病、急性髓细胞性白血病(AML)、慢性髓细胞性白血病(CML)、人急性单核细胞白血病、急性淋巴细胞白血病(ALL)、B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)、毛细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病(CLL)(例如高危型CLL)、骨髓增生异常综合征、急性淋巴母细胞性白血病、骨髓瘤(例如多发性骨髓瘤)或移植性抗宿主病。
22.权利要求1-17中任一所述的化合物和/或其药学上可接受的盐，其用作药物。
23.权利要求1-17中任一所述的化合物和/或其药学上可接受的盐，其用于治疗或预防由BTK介导或至少部分由BTK介导的疾病，优选用于治疗或预防自身免疫性疾病、炎性疾病或癌症；所述的炎性疾病或自身免疫性疾病优选选自：全身性炎症和局部炎症、关节炎、类风湿关节炎、与免疫抑制相关的炎症、器官移植排斥、变态反应性疾病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、皮炎、哮喘、红斑狼疮、舍格伦综合征、多发性硬化、硬皮病、多发性硬化骨质疏松症、特发性血小板减少性紫癜、自身免疫性溶血性贫血、抗中性粒细胞胞质抗体血管炎、慢性阻塞性肺病、银屑病、干燥综合征、寻常性天胞疮、与肾移植相关的疾病、甲状腺自身免疫病、慢性淋巴性甲状腺炎、甲状腺功能亢进、恶性贫血伴慢性萎缩性胃炎、肺出血肾炎综合征、类天疱疮、原发性胆汁性肝硬变、急性特发性多神经炎，系统性红斑狼疮、混合结缔组织病；所述癌症优选为实体瘤或血液学恶性肿瘤，包括淋巴瘤、白血病及骨髓瘤；所述的癌症更优选选自B细胞恶性肿瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、大B细胞淋巴瘤(LBCL)、B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、华氏巨球蛋白血症、边缘区淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、非伯基特高度恶性B细胞淋巴瘤、结节外边缘区B细胞淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、淋巴母细胞淋巴瘤、淋巴细胞白血病、髓细胞性白血病、急性髓细胞性白血病(AML)、慢性髓细胞性白血病(CML)、人急性单核细胞白血病、急性淋巴细胞白血病(ALL)、B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)、毛细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病(CLL)(例如高危型CLL)、骨髓增生异常综合征、急性淋巴母细胞性白血病、骨髓瘤(例如多发性骨髓瘤)或移植性抗宿主病。
24.药物组合，其包括权利要求1-17中任一所述的化合物和/或其药学上可接受的盐，以及至少一种另外的治疗剂，所述治疗剂优选选自：抗炎剂、免疫调节剂或抗肿瘤活性剂，所述的抗肿瘤活性剂包括化疗剂、免疫检查点抑制剂或激动剂、以及靶向治疗剂。
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL301275A (en) * 2020-09-21 2023-05-01 Hutchison Medipharma Ltd Heterocyclic heteroaryl compounds and their uses
WO2023143491A1 (zh) * 2022-01-28 2023-08-03 和记黄埔医药（上海）有限公司 7,8-二氢-2h-环戊二烯并吡咯并吡嗪酮化合物的合成方法

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2307413B1 (en) 2008-07-15 2015-09-09 F. Hoffmann-La Roche AG Novel phenyl-imidazopyridines and pyridazines
MX2012012975A (es) 2010-05-07 2013-02-26 Genentech Inc Compuestos de piridona y aza-piridona y metodos de uso de los mismos.
UA111756C2 (uk) * 2011-11-03 2016-06-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Сполуки гетероарилпіридону та азапіридону як інгібітори тирозинкінази брутона
TWI553004B (zh) 2011-11-03 2016-10-11 建南德克公司 ８－氟基呔－１（２ｈ）－酮化合物
KR101716011B1 (ko) 2011-11-03 2017-03-13 에프. 호프만-라 로슈 아게 Btk 활성의 억제제인 알킬화된 피페라진 화합물
US8722676B2 (en) * 2011-11-03 2014-05-13 Genentech, Inc. Bicyclic piperazine compounds
RU2014126750A (ru) 2011-12-09 2016-01-27 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Ингибиторы тирозинкиназы брутона
US9326985B2 (en) * 2013-07-03 2016-05-03 Genentech, Inc. Heteroaryl pyridone and aza-pyridone amide compounds
EP3077384B1 (en) 2013-12-05 2017-09-06 F. Hoffmann-La Roche AG Heteroaryl pyridone and aza-pyridone compounds with electrophilic functionality
JP6507234B2 (ja) 2014-10-02 2019-04-24 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ブルトンチロシンキナーゼ（ｂｔｋ）によって介入される障害の処置における使用のためのピラゾールカルボキサミド化合物
AU2015328285B2 (en) * 2014-10-06 2019-07-18 Merck Patent Gmbh Heteroaryl compounds as BTK inhibitors and uses thereof
CN109641892B (zh) 2016-08-16 2021-07-02 默克专利有限公司 用作可逆btk抑制剂的2-氧代-咪唑并吡啶及其用途
TWI673271B (zh) 2016-12-15 2019-10-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 製備btk抑制劑之方法
UY37559A (es) 2017-01-06 2018-05-31 Pharmacyclics Llc Pirazolo[3,4-b]piridina y pirrolo[2,3-b]piridina como inhibidores de la tirosina quinasa de bruton
US11100492B2 (en) 2018-02-19 2021-08-24 Peter Garrett General purpose re-loadable card aggregation implementation
CN110256446B (zh) * 2018-08-01 2021-12-14 上海海雁医药科技有限公司 苯并杂环取代的环戊二烯并[4,5]吡咯并吡嗪-1-酮衍生物及其应用
CN115151535A (zh) * 2020-02-20 2022-10-04 和记黄埔医药（上海）有限公司 杂芳基杂环化合物及其用途
IL301275A (en) * 2020-09-21 2023-05-01 Hutchison Medipharma Ltd Heterocyclic heteroaryl compounds and their uses

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