KR20140051249A

KR20140051249A - 3''황산화코어1당쇄에 결합하는 프로브를 사용하는 뮤신1의 분석 방법, 및 유방암의 검출 또는 모니터링 방법

Info

Publication number: KR20140051249A
Application number: KR1020147001128A
Authority: KR
Inventors: 가츠코 야마시타; 히로코 이데오; 유지 히노다
Original assignee: 도오쿄 인스티튜드 오브 테크놀로지; 고쿠리츠다이가쿠호우진 야마구치 다이가쿠
Priority date: 2011-06-16
Filing date: 2012-06-15
Publication date: 2014-04-30
Also published as: CN103748466A; US20140186853A1; JPWO2012173228A1; EP2722670A4; WO2012173228A1; EP2722670A1; CA2850690A1; EP2722670A9

Abstract

본 발명의 목적은, CA15-3의 측정 방법으로는 검출할 수 없는 유방암 유래의 뮤신1도 검출하는 방법을 제공하는 것이다. 상기 과제는, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브와, 피검 시료를 접촉시키는 공정, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브, 또는 뮤신1에 결합하는 뮤신1 결합 프로브와, 피검 시료를 접촉시키는 공정, 및 Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1과 프로브와의 결합체를 검출하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는 Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1을 분석하는 방법에 의하여 해결할 수 있다.

Description

3'황산화코어1당쇄에 결합하는 프로브를 사용하는 뮤신1의 분석 방법, 및 유방암의 검출 또는 모니터링 방법{METHOD FOR ANALYZING MUCIN 1 USING PROBE CAPABLE OF BINDING TO 3'-SULFONATED CORE 1 CARBOHYDRATE CHAIN, AND METHOD FOR DETECTING OR MONITORING BREAST CANCER}

본 발명은, 3'황산화Galβ1-3GalNAc당쇄(糖鎖)(이하, 3'황산화코어1당쇄라 칭하는 경우가 있음)를 갖는 뮤신1을 분석하는 방법; 그 방법을 사용한 유방암의 검출 혹은 모니터링 방법; 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 키트; 및 유방암의 검출 또는 모니터링 키트에 관한 것이다.

유방암은 여성 암의 4위이지만, 30세에서부터 65세까지의 연령층에 한하면, 여성 암에서는 제1 위이다. 특히 최근에는 일본인 여성의 유방암이 늘어나고 있으며, 연간 신규 환자 수는 4만명 이상이라고 한다.

임상 검사 항목인 CA15-3은, 유방암의 마커로서 사용되고 있으며, 유방암의 악성도, 및 진전도의 지표, 및 치료 효과의 모니터링으로서 유용하다(비특허문헌 1). CA15-3은, 인간 유즙(乳汁) 지방구막(脂肪球膜) 위의 당단백질인 MAM-6에 대한 모노클로널 항체(115D8)(비특허문헌 2) 및 유방암 간 전이 조직에 대한 모노클로널 항체(DF3)(비특허문헌 3)를 사용하는 면역 측정법(샌드위치법)에 의하여 검출되고 있다. 이 CA15-3의 면역 측정법에 의하여 검출되고 있는 항원은, 상피 세포 유래의 뮤신1의 세포 외 도메인이다.

그러나, CA15-3은, 유방암의 예후의 추적에 유용하지만, 감도가 낮고, 따라서 전(全) 유방암 환자 중 양성율이 15%로 낮기 때문에, 그 용도가 제한되어 있었다.

「브레스트 캔서(Breast Cancer)」(일본) 2003년, 제10권, p.38-44 「인터내셔널 저널 오브 캔서(International Journal of Cancer)」(미국) 1984년, 제34권, p.197∼206 「하이브리도마(Hybridoma)」(미국) 1984년, 제3권, p.223∼232 「글리코바이올로지(Glycobiology)」(미국) 2002년, 제12권, p.199∼208 「저널 오브 아메리칸 케미컬 소사이어티(Journal of American Chemical Society)」(미국) 2009년, 제131권, p.17102-17109

상기와 같이 CA15-3은, 유방암의 악성도, 및 진전도의 지표, 및 치료 효과의 모니터링의 지표로서 유용하지만, 양성율이 낮다는 문제를 갖고 있었다.

본 발명의 목적은, CA15-3의 측정 방법으로는 검출할 수 없는 유방암 유래의 뮤신1도 검출하는 방법을 제공하는 것이다. 또한, 그 검출 방법을 사용함에 의해, 유방암의 악성도, 및 진전도의 마커, 및 치료 효과의 모니터링 마커를 제공하는 것이다. 또한, CA15-3이 검출할 수 없는 조기의 유방암 환자에 존재하는 뮤신1을 분석하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명자들은, 유방암 세포로부터 분비되는 뮤신1에 대하여, 예의 연구한 결과, 놀랍게도, 유방암 환자의 뮤신1이, 당쇄 항원인 Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄(3'황산화코어1당쇄)를 갖고 있는 것을 찾아내었다. 본 발명자들은, 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1을 인식할 수 있는 프로브를 사용하여, CA15-3의 측정 방법보다도 검출율이 우수한 분석 방법을 찾아내었다. 그리고, 본 발명의 분석 방법을 사용함에 의해, CA15-3의 측정 방법으로는 검출할 수 없는 유방암 환자의 뮤신1을 검출하는 것이 가능한 것을 찾아내었다. 특히, 종래 렉틴을 사용한 ELISA는 렉틴의 당쇄에 대한 어피니티가 낮기 때문에, 감도가 낮은 것이 많았다. 3'황산화코어1당쇄 결합 렉틴을 사용한 본 발명의 분석 방법은, 매우 감도가 높은 것이며, 이 점으로부터도, 본 발명은 놀랄만한 것이다.

본 발명은, 이러한 지견에 의거한 것이다.

즉, 본 발명은,

[1] (A) Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브와, 피검 시료를 접촉시키는 공정,

Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브, 또는 뮤신1에 결합하는 뮤신1 결합 프로브와, 피검 시료를 접촉시키는 공정, 및

Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1과 프로브와의 결합체를 검출하는 공정을 포함하는 것; 또는

(B) Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브와, 피검 시료를 접촉시키는 공정,

Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브, 뮤신1에 결합하는 뮤신1 결합 프로브 또는 뮤신1이 갖는 당쇄에 결합하는 뮤신1당쇄 결합 프로브와, 피검 시료를 접촉시키는 공정, 및

Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1과 프로브와의 결합체를 검출하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는 Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 방법,

[2] Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브와, 피검 시료를 접촉시키는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 방법,

[3] Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브와, 피검 시료를 접촉시키는 공정; 및

Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1과 프로브와의 결합체를 검출하는 공정을 포함하는 [2]에 기재된, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 방법,

[4] 상기 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브가, 3'황산화코어1당쇄 결합 렉틴 혹은 그 당쇄 결합 부위를 갖는 렉틴 단편(斷片), 또는 3'황산화코어1당쇄 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편이며, 상기 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브가, 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편이며, 상기 뮤신1 결합 프로브가, 뮤신1 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편, 또는 뮤신1당쇄 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편이며, 그리고 상기 뮤신1당쇄 결합 프로브가, 뮤신1당쇄 결합 렉틴 혹은 그 당쇄 결합 부위를 갖는 렉틴 단편, 또는 뮤신1당쇄 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편인, [1]∼[3] 중 어느 하나에 기재된 Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 방법,

[5] 상기 3'황산화코어1당쇄 결합 렉틴이, 갈렉틴-1, 갈렉틴-3, 갈렉틴-4, 갈렉틴-6, 갈렉틴-8, 및 갈렉틴-9로 이루어지는 군에서 선택되는, [4]에 기재된 Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 방법,

[6] 상기 갈렉틴-4가, 포유류, 조류, 양서류, 파충류, 또는 어류 유래의 갈렉틴-4인, [5]에 기재된 Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 방법,

[7] [1]∼[6] 중 어느 하나에 기재된 분석 방법에 의해, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1의 양을 분석하는 것을 특징으로 하는, 유방암의 검출 또는 모니터링 방법,

[8] Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브를 포함하는 것을 특징으로 하는, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 키트,

[9] (A) Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브; 및

Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브 또는 뮤신1에 결합하는 뮤신1 결합 프로브, 또는

(B) Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브; 및

뮤신1에 결합하는 뮤신1 결합 프로브, 또는 뮤신1이 갖는 당쇄에 결합하는 뮤신1당쇄 결합 프로브를 포함하는 것을 특징으로 하는 Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 키트,

[10] 상기 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브가, 3'황산화코어1당쇄 결합 렉틴 혹은 그 당쇄 결합 부위를 갖는 렉틴 단편, 또는 3'황산화코어1당쇄 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편이며, 상기 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브가, 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편이며, 상기 뮤신1 결합 프로브가, 뮤신1 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편, 또는 뮤신1당쇄 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편이며, 그리고 상기 뮤신1당쇄 결합 프로브가, 뮤신1당쇄 결합 렉틴 혹은 그 당쇄 결합 부위를 갖는 렉틴 단편, 또는 뮤신1당쇄 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편인, [8] 또는 [9]에 기재된, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R을 갖는 뮤신1의 분석 키트,

[11] 상기 3'황산화코어1당쇄 결합 렉틴이, 갈렉틴-1, 갈렉틴-3, 갈렉틴-4, 갈렉틴-6, 갈렉틴-8 및 갈렉틴-9로 이루어지는 군에서 선택되는, [10]에 기재된 Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R을 갖는 뮤신1의 분석 키트,

[12] 상기 갈렉틴-4가, 포유류, 조류, 양서류, 파충류, 또는 어류 유래의 갈렉틴-4인, [11]에 기재된 Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R을 갖는 뮤신1의 분석 키트,

[13] Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1을 더 포함하는, [8]∼[12] 중 어느 하나에 기재된, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 키트,

[14] [8]∼[13] 중 어느 하나에 기재된, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 키트를 사용하는, 유방암의 검출 또는 모니터링 키트, 및

[15] Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1에 관한 것이다.

또, 본 명세서에 있어서의 상기 「분석」에는, 분석 대상 물질의 양을 정량적 또는 반(半)정량적으로 결정하는 「측정」과, 분석 대상 물질의 존재의 유무를 판정하는 「검출」과의 양쪽이 포함된다.

본 발명의 Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 방법 또는 분석 키트에 따르면, 유방암 환자의 뮤신1을 고수율로 검출할 수 있다. 또한, 본 발명의 분석 방법 또는 분석 키트에 따르면, 유방암 환자의 재발, 또는 전이의 예측을 하는 것이 가능하며, 유방암의 재발 또는 전이 마커로서 사용하는 것이 가능하다.

도 1은 뮤신1의 주요한 3'황산화Galβ1-3GalNAc당쇄를 나타낸 도면.
도 2는 인간, 돼지, 마우스, 래트, 제노푸스(Xenopus), 및 연어의 갈렉틴-4의 아미노산 서열, 및 마우스의 갈렉틴-6의 아미노산 서열의 상동성을 나타낸 도면.
도 3은 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 샌드위치법에 의한 측정에 있어서의 검량선을 나타낸 그래프.
도 4는 재발 혹은 전이한 유방암 환자 및 정상인의 혈청 중의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 측정값, 및 재발한 유방암 환자의 혈청 중의 CA15-3의 측정값을 플로트한 그래프.
도 5는 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 측정값 및 CA15-3의 측정값의 상관을 나타내는 도면.
도 6은 재발한 유방암 환자, 수술 후 5년 이상에서 재발의 지적이 없는 유방암 환자, 및 정상인의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 측정값을 나타내는 도면.
도 7은 스테이지I 및 스테이지Ⅱ의 원발성(原發性) 유방암 환자에 있어서의 CA15-3 및 Gal4/MUC1의 측정값의 상관성을 플로트한 그래프.

[1] Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1

뮤신1은, 약 300KDa 이상의 분자량을 갖는 고도로 글리코실화된 I형막 당단백질이며, 짧은 N말단 영역, 중앙 영역, 막관통 영역, 및 C말단의 세포질 내 영역으로 이루어진다. 상기 중앙 영역은 20개의 아미노산(PDTRPAPGSTAPPAHGVTSA)으로 이루어지는 고유의 반복 서열(tandem repeat)을 포함하고 있다. 뮤신1의 유전자는 다양성이 있으며, 상기 반복 서열을 코드하는 부분의 수가 대략 25에서부터 125까지 변화해 있다. 또한, 뮤신1의 유전자는, 반복 서열의 수 이외에도, 아미노산의 결실(缺失), 삽입, 및 치환이 존재하며, 다양성이 높다. 상기 중앙 영역에 있어서의 반복 서열의 수가 변화하는 영역(variable number of tandem repeats)은, VNTR 영역이라 칭해지며, O형 글리칸을 많이 함유하고 있다. 한편, 중앙 영역의 반복 서열 이외의 막에 가까운 펩티드 부분에는, N형 글리칸 및 O형 글리칸이 존재해 있다.

본 발명의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1은 신규 화합물이며, 3'황산화코어1당쇄 및 20개의 아미노산(PDTRPAPGSTAPPAHGVTSA)으로 이루어지는 고유의 반복 서열을 갖는 한, 한정되는 것이 아니다. 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1에 있어서, 3'황산화코어1당쇄는, 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 VNTR 영역의 O형 글리칸에 많이 함유되어 있다.

N말단 영역, 중앙 영역, 막관통 영역, 및 C말단의 세포질 내 영역을 포함하는 뮤신1 단백질의 아미노산 서열의 1예를 서열 번호 16에 나타내지만, 뮤신1은 다양성을 갖고 있기 때문에, 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 아미노산 서열은, 서열 번호 16으로 표시되는 아미노산 서열로 한정되는 것이 아니다. 상기 반복 서열의 수는 한정되는 것이 아니지만, 바람직하게는 1∼200이며, 보다 바람직하게는 5∼150이고, 보다 바람직하게는 20∼130이고, 가장 바람직하게는 25∼125이다. 또한, 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 N말단 영역의 아미노산 서열, 중앙 영역의 반복의 아미노산 서열 및 반복 이외의 아미노산 서열, 막관통 영역의 아미노산 서열, 및 C말단의 세포질 내 영역의 아미노산 서열에 있어서, 본 발명의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1은, 변이를 포함할 수 있다. 예를 들면, 서열 번호 16으로 표시되는 아미노산 서열에 있어서, 1∼100개의 아미노산이 결실, 치환, 및/또는 부가된 아미노산 서열이어도 된다.

또, 본 발명의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1은, 시알리다아제 처리를 행함에 의해, 후술하는 3'황산화코어1당쇄에 결합하는 렉틴과 반응성이 증가한다. 이 현상은, 뮤신1의 당쇄에 결합해 있는 시알산이 제거됨에 의하여, 입체적으로 마스크되어 있던 3'황산화코어1당쇄가 노출되기 때문이라고 생각된다.

본 발명의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 분자량도, 한정되는 것이 아니지만, 예를 들면 20kD∼1000kD이다. 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1은, 세포막에 결합한 막결합형의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1이어도 되며, 분비형의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1이어도 되고, 또한 그들의 부분 펩티드이어도 된다. 따라서, 유방암 환자의 체액은, 막결합형 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1, 분비형 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1, 및 그들의 부분 펩티드를 함유할 수 있다.

본 발명의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1이 발현해 있는 세포 또는 조직은, 한정되는 것이 아니며, 예를 들면, 유선, 폐, 자궁, 또는 췌장을 들 수 있다. 특히는, 후술하는 실시예에 나타내는 바와 같이, 유방암 세포, 유방암 조직 또는 유방암 유래 세포주(細胞株)에 있어서, 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1이 발현해 있다.

본 발명의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1은, 예를 들면 시료로부터 분리되는 것이다. 구체적으로는, 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1을 함유하는 생체 유래의 시료(예를 들면, 혈청 혹은 혈장 등의 혈액, 또는 유방암 조직), 또는 유방암 유래의 계대(繼代) 세포, 혹은 그 배양 상청 등으로부터 분리할 수 있다. 예를 들면, 상기 시료를 황산암모늄 염석(鹽析), 이온 교환 칼럼 크로마토그래피, 소수성 칼럼 크로마토그래피, 겔여과 칼럼 크로마토그래피, 어피니티 칼럼 크로마토그래피, 투석, 또는 동결 건조 등을 사용하여 정제할 수 있다. 구체적으로는, 3'황산화코어1당쇄에 결합하는 항체, 또는 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1에 결합하는 항체를 사용하여, 어피니티 칼럼을 작성하고, 어피니티 크로마토그래피에 의하여 정제할 수 있다.

본 발명의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1은, 후술하는 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 방법에 있어서, 표준 물질로서 사용할 수 있다. 또한, 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 키트는, 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1을 표준 물질로서 함유할 수 있다.

본 명세서에 있어서, 3'황산화코어1당쇄는, 보다 구체적으로는 「SO₃ ^--3Galβ1→3GalNAcα1→Ser(Thr)」를 의미한다. 뮤신1이 갖는 3'황산화코어1당쇄를 함유하는 당쇄는, 한정되는 것이 아니지만,

식(I)으로 표시되는 3'황산화코어1당쇄,

(이하, 「3'황산화코어1당쇄(I)」라 칭함),

식(Ⅱ)으로 표시되는 3'황산화코어1당쇄,

(이하, 「3'황산화코어1당쇄 구조(Ⅱ)」라 칭함), 및

식(Ⅲ)으로 표시되는 3'황산화코어1당쇄,

(이하, 「3'황산화코어1당쇄 구조(Ⅲ)」라 칭함)

를 들 수 있다.

또, 본 명세서에 있어서, 「코어1당쇄」란, 「Galβ1→3GalNAcα1→R」를 의미한다.

상기 3'황산화코어1당쇄(I), 3'황산화코어1당쇄(Ⅱ) 및 3'황산화코어1당쇄(Ⅲ) 함유 뮤신1은, 정상인의 혈중에는, 거의 존재해 있지 않고, 유방암 환자의 혈중에서 증가해 있는 것이다.

또한, 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 당쇄 중의 3'황산화코어1당쇄(I)의 함량은, 유방암 환자에 따라 다르며, 특히 한정되는 것이 아니지만, 예를 들면 0.1∼99몰%이며, 1∼50몰%이어도 되고, 5∼15몰%이어도 된다. 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 당쇄 중의 3'황산화코어1당쇄(Ⅱ)의 함량도, 유방암 환자에 따라 다르며, 특히 한정되는 것이 아니지만, 예를 들면 0.1∼99몰%이며, 1∼50몰%이어도 되고, 1∼10몰%이어도 된다. 황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 당쇄 중의 3'황산화코어1당쇄(Ⅲ)의 함량도, 유방암 환자에 따라 다르며, 특히 한정되는 것이 아니지만, 예를 들면 0.1∼99몰%이며, 1∼50몰%이어도 되고, 5∼15몰%이어도 된다.

본 발명의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1에는, 3'황산화코어1당쇄(I), 3'황산화코어1당쇄(Ⅱ), 및 3'황산화코어1당쇄(Ⅲ)로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 또는 둘 이상의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1이 함유된다.

본 발명의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1은, 3'황산화코어1당쇄(I), 3'황산화코어1당쇄(Ⅱ) 및 3'황산화코어1당쇄(Ⅲ) 이외의 당쇄를 갖고 있어도 되며, 예를 들면 「Neu5Acα2, 3Galβ1, 3GalNAcα당쇄」, 「Neu5Acα2→3Galβ1→3(Neu5Acα2→6)GalNAcβ→R」, 및 「Neu5Acα2→3Galβ1→3(Neu5Acα2→3Galβ1→4GlcNAcβ1→6)GalNAcβ→R」, 「Neu5Acα2→8Neu5Acα2→3Galβ1→4GlcNAcβ1→3Galβ1→3GalNAc→R」 또는 「Neu5Acα2→8Neu5Acα2→3Galβ1→3GlcNAcβ→R」를 들 수 있다.

[2] Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 방법

본 발명의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 방법의 제1 태양은, (A) Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브와, 피검 시료를 접촉시키는 공정(이하, 접촉 공정(A-a)이라 칭하는 경우가 있음), Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브, 또는 뮤신1에 결합하는 뮤신1 결합 프로브와, 피검 시료를 접촉시키는 공정(이하, 접촉 공정(A-b)이라 칭하는 경우가 있음), 및 Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1과 프로브와의 결합체를 검출하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 방법의 제2 태양은, (B) Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브와, 피검 시료를 접촉시키는 공정(이하, 접촉 공정(B-a)이라 칭하는 경우가 있음), Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브, 뮤신1에 결합하는 뮤신1 결합 프로브 또는 뮤신1이 갖는 당쇄에 결합하는 뮤신1당쇄 결합 프로브와, 피검 시료를 접촉시키는 공정(이하, 접촉 공정(B-b)이라 칭하는 경우가 있음), 및 Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1과 프로브와의 결합체를 검출하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 한다.

또, 상기 검출 공정에 있어서 검출되는 「Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1과 프로브와의 결합체」는, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1과 하나의 프로브와의 결합체이어도 되며, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1과 둘 이상의 프로브와의 결합체이어도 된다.

상기 접촉 공정(A-a)에 있어서 사용하는 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브로서는, 3'황산화코어1당쇄 결합 렉틴, 또는 3'황산화코어1당쇄 결합 항체를 사용할 수 있다. 보다 구체적으로는, 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브는, 3'황산화코어1당쇄 결합 렉틴 혹은 그 당쇄 결합 부위를 갖는 렉틴 단편, 또는 3'황산화코어1당쇄 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편을 사용할 수 있다.

상기 접촉 공정(A-b)에 있어서 사용하는 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브로서는, 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 항체를 들 수 있으며, 구체적으로는 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편을 사용할 수 있다. 또한, 뮤신1 결합 프로브로서는, 뮤신1 펩티드 결합 항체, 또는 뮤신1당쇄 펩티드 결합 항체를 들 수 있다. 구체적으로는 뮤신1 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편, 또는 뮤신1당쇄 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편을 사용할 수 있다.

상기 접촉 공정(B-a)에 있어서 사용하는 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브로서는, 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 항체를 들 수 있으며, 구체적으로는 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편을 사용할 수 있다.

상기 접촉 공정(B-b)에 있어서 사용하는 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브로서는, 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 항체를 들 수 있으며, 구체적으로는 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편을 사용할 수 있다. 또한, 뮤신1 결합 프로브로서는, 뮤신1 펩티드 결합 항체, 또는 뮤신1당쇄 펩티드 결합 항체를 들 수 있다. 구체적으로는 뮤신1 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편, 또는 뮤신1당쇄 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편을 사용할 수 있다. 또한, 뮤신1당쇄 결합 프로브로서는, 뮤신1당쇄 결합 렉틴, 또는 뮤신1당쇄 결합 항체를 들 수 있다. 구체적으로는 뮤신1당쇄 결합 렉틴 혹은 그 당쇄 결합 부위를 갖는 렉틴 단편, 또는 뮤신1당쇄 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편을 사용할 수 있다.

이하, 상세하게 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브, 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브, 뮤신1 결합 프로브, 및 뮤신1당쇄 결합 프로브에 대하여 설명한다.

《3'황산화코어1당쇄 결합 프로브》

3'황산화코어1당쇄 결합 프로브는, 3'황산화코어1당쇄를 인식하는 프로브이다. 즉, 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브는, 3'황산화코어1당쇄만을 에피토프로서 인식하는 프로브이며, 후술하는 3'황산화코어1당쇄 및 뮤신1의 펩티드(아미노산)의 조합을 하나의 에피토프로서 인식하는 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 프로브와는, 인식하는 에피토프가 오버랩해 있지만, 동일하지 않다. 또한, 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브는, 「SO₃ ^--3Galβ1→3GalNAcα1→Ser(Thr)」을 함유하는 당쇄를 인식하는 것이면 한정되는 것이 아니지만, 예를 들면 상기 3'황산화코어1당쇄(I), 3'황산화코어1당쇄(Ⅱ), 또는 3'황산화코어1당쇄(Ⅲ) 중 어느 하나 이상을 인식하는 프로브이면 된다.

(3'황산화코어1당쇄 결합 렉틴)

3'황산화코어1당쇄 결합 렉틴은, 3'황산화코어1당쇄에 결합할 수 있는 렉틴이면, 한정되는 것이 아니지만, 예를 들면 Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄에 어피니티를 갖는 렉틴, 또는 Sulfo-3Galβ1당쇄에 어피니티를 갖는 렉틴을 들 수 있다. 즉, 3'황산화코어1당쇄에 결합할 수 있는 렉틴이면, 그 외의 당쇄에 친화성을 갖는 렉틴도, 본 발명에 사용하는 3'황산화코어1당쇄 결합 렉틴에 포함된다.

Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄에 어피니티를 갖는 렉틴으로서는, 한정되는 것이 아니지만, 갈렉틴-1, 갈렉틴-3, 갈렉틴-4, 갈렉틴-6, 갈렉틴-8 또는 갈렉틴-9를 들 수 있다. 또한, 그들의 갈렉틴의 유래도, 한정되는 것이 아니며, 다양한 동물 유래의 갈렉틴을 사용할 수 있다. 이들 갈렉틴은, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄에 결합하기 위하여 필요한 아미노산 서열이 보존되어 있으며, 뮤신1의 3'황산화코어1당쇄에 결합할 수 있지만, 특히는 갈렉틴-4가 바람직하다. 갈렉틴-4는, 뮤신1의 3'황산화코어1당쇄에의 결합 특이성이 높기 때문이다(비특허문헌 4).

갈렉틴-4의 유래는, 3'황산화코어1당쇄에 결합할 수 있는 한, 한정되는 것이 아니지만, 예를 들면 포유류(예를 들면, 인간, 침팬지, 돼지꼬리원숭이, 코먼마모셋, 돼지, 소, 말, 염소, 양, 개, 고양이, 토끼, 판다, 마우스, 또는 래트), 조류(예를 들면, 닭), 양서류(예를 들면, 제노푸스(Xenopus)), 파충류(예를 들면, 녹색애놀도마뱀), 어류(예를 들면, 연어) 유래의 갈렉틴-4를 들 수 있다. 도 2에 나타내는 바와 같이, 인간(서열 번호 2), 돼지(서열 번호 4), 마우스(서열 번호 6), 및 래트(서열 번호 8) 등 포유류의 갈렉틴-4는, 아미노산 서열의 상동성이 매우 높다. 구체적으로는, 인간과 돼지와의 상동율은 80%, 인간과 래트와의 상동율은 77%, 인간과 마우스와의 상동율은 76%이다. 따라서, 본 발명의 분석 방법에 있어서, 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브로서, 제한 없이 사용할 수 있다. 또한, 인간과 제노푸스(서열 번호 10)와의 상동율은 55%, 및 인간과 연어(서열 번호 12)와의 상동율은 49%이며, 본 발명의 분석 방법에 있어서, 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브로서 사용할 수 있다.

또한, 도 2에 나타낸 마우스의 갈렉틴-6(서열 번호 14)은, 갈렉틴-4의 아미노산 서열과 비교하면, 두 당결합 부위를 잇는 링커 부분이 다르기 때문에, 인간과의 상동율은 70%이지만, 두 당결합 부위의 아미노산 서열의 상동성은 높으며, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄에 결합하기 위하여 필요한 아미노산 서열이 보존되어 있으므로, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄에, 결합할 수 있다.

본 발명의 분석 방법에 사용할 수 있는 3'황산화코어1당쇄에 결합할 수 있는 렉틴으로서는, 구체적으로는,

(1) 서열 번호 2로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드, 서열 번호 4로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드, 서열 번호 6으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드, 서열 번호 8로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드, 서열 번호 10으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드, 서열 번호 12로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드, 및 서열 번호 14로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드로 이루어지는 군에서 선택되는 폴리펩티드,

(2) 서열 번호 2로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드, 서열 번호 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드, 서열 번호 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드, 서열 번호 8로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드, 서열 번호 10으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드, 서열 번호 12로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드, 및 서열 번호 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드로 이루어지는 군에서 선택되는 폴리펩티드로서, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄에 결합하는 폴리펩티드,

(3) 서열 번호 2로 표시되는 아미노산 서열, 서열 번호 4로 표시되는 아미노산 서열, 서열 번호 6으로 표시되는 아미노산 서열, 서열 번호 8로 표시되는 아미노산 서열, 서열 번호 10으로 표시되는 아미노산 서열, 서열 번호 12로 표시되는 아미노산 서열, 및 서열 번호 14로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열에 있어서, 1∼100개의 아미노산(바람직하게는, 1∼50개의 아미노산, 보다 바람직하게는 1∼20개의 아미노산, 보다 바람직하게는 1∼10개의 아미노산, 가장 바람직하게는 1 또는 몇 개의 아미노산)이 치환, 결실, 및/또는 삽입된 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드, 또는 그 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드로서, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄에 결합하는 폴리펩티드,

(4) 서열 번호 2로 표시되는 아미노산 서열, 서열 번호 4로 표시되는 아미노산 서열, 서열 번호 6으로 표시되는 아미노산 서열, 서열 번호 8로 표시되는 아미노산 서열, 서열 번호 10으로 표시되는 아미노산 서열, 서열 번호 12로 표시되는 아미노산 서열, 및 서열 번호 14로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열과의 상동성이 50% 이상인 아미노산 서열(바람직하게는 70% 이상인 아미노산 서열, 보다 바람직하게는 80% 이상인 아미노산 서열, 가장 바람직하게는 90% 이상인 아미노산 서열)로 이루어지는 폴리펩티드, 또는 그 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드로서, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄에 결합하는 폴리펩티드를 들 수 있다.

또한, 3'황산화코어1당쇄 결합 렉틴은, 세포나 조직으로부터 분리 및 정제된 것이어도 되며, 재조합체를 사용하여 유전자 공학적으로 제조된 것이어도 된다. 예를 들면, 후술하는 실시예의 갈렉틴-4는 대장균에 의하여 리콤비넌트체를 사용하여 얻어진 것이며, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄에 결합한다. 또한, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄에 결합할 수 있는 도메인을 포함하는, 렉틴 단편을 유전자 공학적으로 제조할 수도 있다.

또한, 3'황산화코어1당쇄 결합 렉틴으로서, 머쉬룸 렉틴(Agaricus bisporus Agglutinin : ABA)을 들 수 있다. ABA는, 분자량 약64kDa의 머쉬룸 유래의 렉틴이며, 143아미노산(분자량 약16kDa)의 서브유닛 4개로 구성된다. ABA는, 3'황산화코어1당쇄에 결합하지만, 「Galβ1→3GalNAcα1→Ser(Thr)」(코어1당쇄) 및 「Siaα2→3(6)Galβ1→3GalNAcα→Ser(Thr)」에도 결합하지만, 본 발명의 분석 방법에 있어서, 3'황산화코어1당쇄 결합 렉틴으로서 사용할 수 있다.

(3'황산화코어1당쇄 결합 항체)

3'황산화코어1당쇄 결합 항체로서는, 3'황산화코어1당쇄에 결합할 수 있는 항체이면, 한정되는 것이 아니지만, 예를 들면 Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄에 결합하는 항체, 또는 Sulfo-3Galβ1당쇄에 결합하는 항체를 들 수 있다. 상기 3'황산화코어1당쇄에 결합하는 항체는, 3'황산화코어1당쇄와만 결합할 수 있기 때문에, 3'황산화코어1당쇄를 갖는 당단백질, 또는 당지질과 결합할 수 있다.

3'황산화코어1당쇄에 결합하는 항체는, 면역 항원으로서 3'황산화코어1당쇄, 또는 3'황산화코어1당쇄를 갖는 당단백질을 사용하는 것 이외에는, 공지의 방법에 의하여 제작하는 것이 가능하다. 예를 들면, 모노클로널 항체는, Koehler와 Milstein의 방법(Nature 256 : 495-497, 1975)에 따라서, 제작할 수 있다. 또한, 폴리클로널 항체는, 예를 들면, 토끼의 피내(皮內)에, 3'황산화코어1당쇄, 또는 3'황산화코어1당쇄를 갖는 당단백질을 단독 혹은 BSA 또는 KLH 등과 결합시킨 항원으로서, 플로인트(Freund) 완전 아쥬번트 등의 아쥬번트(adjuvant)와 혼합하여 정기적으로 면역한다. 혈중의 항체가(抗體價)가 상승한 시점에서 채혈하고, 그대로 항혈청으로서, 또는 항체를 공지의 방법으로 정제하여 사용할 수 있다.

《3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브》

3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브는, 3'황산화코어1당쇄 및 뮤신1의 펩티드(아미노산)의 조합을 하나의 에피토프로서 인식하는 프로브이다. 즉 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브는, 3'황산화코어1당쇄 및 뮤신1 펩티드의 조합으로 이루어지는 에피토프를 인식하는 프로브이며, 상기한 3'황산화코어1당쇄를 인식하는 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브와는, 인식하는 에피토프가 오버랩해 있지만, 동일하지 않다. 또한, 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브는, 「SO₃ ^--3Galβ1→3GalNAcα1→Ser(Thr)」를 함유하는 당쇄 및 펩티드의 조합을 하나의 에피토프로서 인식하는 것이면 한정되는 것이 아니지만, 예를 들면 상기 3'황산화코어1당쇄(I), 3'황산화코어1당쇄(Ⅱ), 또는 3'황산화코어1당쇄(Ⅲ) 중 어느 하나 이상의 당쇄 및 펩티드의 조합을 하나의 에피토프로서 인식하는 프로브이면 된다.

(3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 항체)

3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 항체는, 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1에 결합하고, 3'황산화코어1당쇄를 갖지 않는 뮤신1에 결합하지 않으며, 그리고 3'황산화코어1당쇄에만은 결합하지 않는 항체이다. 즉, 3'황산화코어1당쇄 및 뮤신1의 펩티드의 조합을 하나의 에피토프로서 인식하는 항체이다. 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 항체로서는, 후술하는 실시예에서 사용한 Sigma사의 1D1 모노클로널 항체를 들 수 있다. 상기 모노클로널 항체는, 인간 유방암 환자 흉수의 뮤신1의 부분 정제물을 면역 항원으로서 사용하여 얻어진 것이며, 뮤신1의 3'황산화코어1당쇄 및 펩티드의 조합으로 이루어지는 에피토프에 결합한다. 또, 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 항체에는, 3'황산화코어1당쇄 및 뮤신1의 펩티드에 강한 친화성을 나타내며, 또한 3'황산화코어1당쇄 이외의 당쇄 및 펩티드의 조합에도 교차 반응을 나타내는 항체가 존재하지만, 그러한 항체도 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 항체에 포함된다.

또한, 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 항체는, 면역 항원으로서 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1을 사용하는 것 이외에는, 공지의 방법에 의하여 제작하는 것이 가능하다. 예를 들면, 모노클로널 항체는, Koehler와 Milstein의 방법(Nature 256 : 495-497, 1975)에 따라서, 제작할 수 있으며, 하이브리도마의 스크리닝에 있어서, 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1에 결합하고, 3'황산화코어1당쇄를 갖지 않는 뮤신1에 결합하지 않으며, 그리고 3'황산화코어1당쇄에만 결합하지 않는 모노클로널 항체를 산생(産生)하는 하이브리도마를 선택함에 의하여, 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1에 결합하는 항체를 취득할 수 있다. 또한, 폴리클로널 항체는, 예를 들면, 토끼의 피내에, 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1을 단독 혹은 BSA 또는 KLH 등과 결합시킨 항원으로서, 플로인트 완전 아쥬번트 등의 아쥬번트와 혼합하여 정기적으로 면역한다. 혈중의 항체가가 상승한 시점에서 채혈하고, 3'황산화코어1당쇄를 갖지 않는 뮤신1에 결합하는 항체, 및 3'황산화코어1당쇄에 결합하는 항체를, 어피니티 칼럼 등으로 흡수함에 의하여, 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1에 결합하는 폴리클로널 항체를 취득할 수 있다.

《뮤신1 결합 프로브》

뮤신1 결합 프로브는, 뮤신1에 결합하는 프로브이지만, 상기 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브, 또는 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브와는 인식하는 에피토프가, 실질적으로 다른 프로브이다. 즉, 뮤신1 결합 프로브의 에피토프는, 상기 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브, 또는 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브의 에피토프와는, 실질적으로 오버랩하지 않는다.

(뮤신1 펩티드 결합 항체, 또는 뮤신1당쇄 펩티드 결합 항체)

뮤신1 결합 프로브는, 구체적으로는 뮤신1 펩티드 결합 항체, 또는 뮤신1당쇄 펩티드 결합 항체이며, 3'황산화코어1당쇄를 갖지 않는 뮤신1 및 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1에 결합할 수 있는 한, 한정되는 것이 아니지만, 예를 들면 3'황산화코어1당쇄를 갖지 않는 뮤신1 및 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1에 결합하며, 또한 3'황산화코어1당쇄에만은 결합하지 않는 항체를 들 수 있다. 즉, 뮤신1의 펩티드를 에피토프로서 인식하는 뮤신1 펩티드 결합 항체, 및 뮤신1의 당쇄 및 펩티드의 조합을 에피토프로서 인식하는 뮤신1당쇄 펩티드 결합 항체가 포함된다.

상기 뮤신1 펩티드 결합 항체, 또는 뮤신1당쇄 펩티드 결합 항체는, 면역 항원으로서 뮤신1을 사용하는 것 이외에는, 공지의 방법에 의하여 제작하는 것이 가능하다. 예를 들면, 모노클로널 항체는, Koehler와 Milstein의 방법(Nature 256 : 495-497, 1975)에 따라서, 제작할 수 있다. 또한, 폴리클로널 항체는, 예를 들면, 토끼의 피내에, 뮤신1을 단독 혹은 BSA 또는 KLH 등과 결합시킨 항원으로서, 플로인트 완전 아쥬번트 등의 아쥬번트와 혼합하여 정기적으로 면역한다. 혈중의 항체가가 상승한 시점에서 채혈하고, 그대로 항혈청으로서, 또는 항체를 공지의 방법으로 정제하여 사용할 수 있다.

또한, 뮤신1 펩티드 결합 항체, 또는 뮤신1당쇄 펩티드 결합 항체는, 종래 수많이 취득되어, 많은 항뮤신1 항체가 시판되고 있으며, 예를 들면 CA15-3의 검출에 사용되고 있는 모노클로널 항체 115D8 또는 모노클로널 항체 DF3을 사용할 수도 있다.

또한, KL-6의 검출에 사용되고 있는 모노클로널 항체 KL-6은, 뮤신1당쇄 펩티드 결합 항체로서, 본 발명의 분석 방법에 사용할 수 있다. KL-6 항체는, 뮤신1의 아미노산 서열 PDTRPAP 및 Neu5Acα2, 3Galβ1, 3GalNAcα당쇄(시알화당쇄)를 인식하는 모노클로널 항체인 것으로 보고되어 있다(비특허문헌 5). 본 발명자들은, KL-6 항체가, 상기한 시알화당쇄에 더하여, Neu5Acα2-3(SO₃ ^--6)Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-3GalNAc당쇄, Neu5Acα2-3Galβ1-3(SO₃ ^--6)GalNAc당쇄, 및 SO₃ ^--6[SO₃ ^--3Galβ1-3GalNAc]당쇄에도 강한 친화성을 나타내는 것을 찾아내었다. 또한, 상기 3'황산화코어1당쇄(I) 및 3'황산화코어1당쇄(Ⅱ)에도 친화성을 나타낸다. 즉, KL-6 항체는, 3'황산화코어1당쇄 이외의 당쇄 및 뮤신1의 펩티드에 강한 친화성을 나타내는 항체이지만, 3'황산화코어1당쇄 및 뮤신1의 펩티드에도 친화성을 나타내는 항체이다. 이러한 항체는, 본 발명의 분석 방법에 있어서는, 편의적으로 뮤신1당쇄 펩티드 결합 항체에 포함된다. 그러나, 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 항체로서, 사용하는 것도 가능하다.

《뮤신1당쇄 결합 프로브》

뮤신1당쇄 결합 프로브는, 뮤신1이 갖는 당쇄에만 결합하는 프로브이지만, 3'황산화코어1당쇄 이외의 당쇄에만 결합하는 프로브이다. 즉, 뮤신1당쇄 결합 프로브의 에피토프는, 상기 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브, 또는 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브의 에피토프와는, 실질적으로 오버랩하지 않지만, 상기 뮤신1 결합 프로브의 에피토프와는, 오버랩해도 된다. 또한, 상기 당쇄를 갖는 뮤신1 이외의 당단백질에도 결합할 수 있기 때문에, 뮤신1에 특이적으로 결합하는 프로브가 아니다.

(뮤신1당쇄 결합 렉틴)

뮤신1당쇄 결합 렉틴은, 뮤신1이 갖는 3'황산화코어1당쇄 이외의 당쇄에 어피니티를 갖는 렉틴이면, 한정되는 것이 아니다. 예를 들면, 뮤신1이 갖는 Neu5Acα2, 3Galβ1, 3GalNAcα당쇄를 인식하는 렉틴을 들 수 있다. 구체적으로는, Jacalin, 또는 머쉬룸 렉틴(ABA)을 들 수 있지만, ABA는, 3'황산화코어1당쇄에 결합할 수도 있기 때문에, 3'황산화코어1당쇄 결합 렉틴으로서 사용하는 것도 가능하며, 뮤신1당쇄 결합 렉틴으로서 사용하는 것도 가능하다. 또한, 뮤신1당쇄 결합 렉틴으로서, Neu5Acα2→3Galβ1→3(Neu5Acα2→6)GalNAcβ→R, 또는 Neu5Acα2→3Galβ1→3(Neu5Acα2→3Galβ1→4GlcNAcβ1→6)GalNAcβ→R을 인식할 수 있는 렉틴을 들 수 있다. 더하여, 「Neu5Acα2→8Neu5Acα2→3Gal(이하, α2,8디시알릴당쇄라 칭하는 경우가 있음)에 결합하는 렉틴을 들 수 있다.

(뮤신1당쇄 결합 항체)

뮤신1당쇄 결합 항체는, 3'황산화코어1당쇄 이외의 뮤신1이 갖는 당쇄에 결합하는 항체이면, 한정되는 것이 아니다. 뮤신1이 갖는 Neu5Acα2, 3Galβ1, 3GalNAcα당쇄, Neu5Acα2→3Galβ1→3(Neu5Acα2→6)GalNAcβ→R, 또는 Neu5Acα2→3Galβ1→3(Neu5Acα2→3Galβ1→4GlcNAcβ1→6)GalNAcβ→R을 인식하는 항체를 들 수 있다. 또한, α2,8디시알릴당쇄인 Neu5Acα2→8Neu5Acα2→3Galβ1→4GlcNAcβ1→3Galβ1→3GalNAc→R에 결합할 수 있는 S2-566 모노클로널 항체, 및 1E6 모노클로널 항체를 들 수 있다.

본 발명의 분석 방법에 있어서 사용하는 프로브로서는, 상기 렉틴의 당쇄 결합 부위를 갖는 렉틴 단편, 또는 상기 항체의 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편을 사용할 수도 있다.

렉틴의 당쇄 결합 부위를 갖는 렉틴 단편은, 예를 들면, 당쇄 결합 부위를 갖는 폴리펩티드를, 유전자 공학적으로 재조합체를 사용하여 제조하는 것이 가능하다.

또한, 항체의 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편로서는, 예를 들면, F(ab')₂, Fab', Fab, 또는 Fv 등을 들 수 있다. 이들 항체 단편은, 예를 들면, 항체를 통상의 방법에 의해 단백질 분해 효소(예를 들면, 펩신 또는 파파인 등)에 의하여 소화(消化)하고, 계속해서, 통상의 방법의 단백질 분리 정제의 방법에 의해 정제함에 의해, 얻을 수 있다.

《샌드위치법》

본 발명의 분석 방법의 제1 태양 및 제2 태양은, 한정되는 것이 아니지만, 구체적으로는 이하와 같이 행할 수 있다.

본 발명의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 방법의 제1 태양은, 상기 접촉 공정(A-a), 접촉 공정(A-b), 및 검출 공정을 포함하는 것이다. 상기 접촉 공정(A-a), 및 접촉 공정(A-b)은, 접촉 공정(A-a), 또는 접촉 공정(A-b)의 어느 것을 먼저 행해도 된다. 따라서, 접촉 공정(A-a), 접촉 공정(A-b) 및 검출 공정을 실시하는 순번으로 하여, 이하의 두 가지 실시태양이 있다.

(1) 접촉 공정(A-a)을 실시하고, 접촉 공정(A-b)을 실시하고, 그리고 검출 공정을 실시한다.

(2) 접촉 공정(A-b)을 실시하고, 접촉 공정(A-a)을 실시하고, 그리고 검출 공정을 실시한다.

또한, 마찬가지로 본 발명의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 방법의 제2 태양도 이하의 두 가지 실시태양이 있다.

(1) 접촉 공정(B-a)을 실시하고, 접촉 공정(B-b)을 실시하고, 그리고 검출 공정을 실시한다.

(2) 접촉 공정(B-b)을 실시하고, 접촉 공정(B-a)을 실시하고, 그리고 검출 공정을 실시한다.

예를 들면, 샌드위치법에 의해 본 발명의 분석 방법의 제1 태양을 행할 경우, 이하의 두 가지 실시태양을 들 수 있다. 또, 제2 태양도 프로브를 치환함에 의해, 마찬가지로 행할 수 있다.

(1) 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브와, 피검 시료를 접촉시키는 공정(a); 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브, 또는 뮤신1 결합 프로브와, 피검 시료를 접촉시키는 공정(b); 및 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1과 프로브와의 결합체를 검출하는 공정을 이 순번으로 행하는 샌드위치법(이하, 샌드위치법(1)이라 칭함).

(2) 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브, 또는 뮤신1 결합 프로브와, 피검 시료를 접촉시키는 공정(b); 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브와, 피검 시료를 접촉시키는 공정(a); 및 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1과 프로브와의 결합체를 검출하는 공정을 이 순번으로 행하는 샌드위치법(이하, 샌드위치법(2)이라 칭함).

상기 샌드위치법은, 예를 들면 이하와 같이 행하는 것이 가능하다.

(i) 일차 반응 공정

마이크로플레이트나 비드 등의 불용성 담체에, 포착 프로브(일차 프로브)를 고상화(固相化)한다. 다음으로, 포착 프로브나 불용성 담체에의 비특이적인 흡착을 방지하기 위하여, 적당한 블로킹제(예를 들면, 소 혈청 알부민이나 젤라틴 등)로 불용성 담체의 블로킹을 행한다. 포착 프로브(일차 프로브)가 고상화된 불용성 담체(마이크로플레이트 또는 비드)에, 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1이 함유되는 피검 시료를 일차 반응액과 함께 가하고, 포착 프로브(일차 프로브)와 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1을 접촉시켜, 결합시킨다. 그 후, 포착 항체에 결합하지 않았던 항원이나 협잡물을 적당한 세정액(예를 들면, 계면활성제를 함유하는 인산 완충액)으로 세정한다.

(ⅱ) 이차 반응 공정

3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1과 결합하는 프로브에 서양 고추냉이 퍼옥시다아제(HRP) 등의 효소를 표지한 표지 프로브(2차 프로브)를 첨가하고, 포착된 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1에 표지 프로브를 결합시킨다. 이 반응에 의해, 포착 프로브-3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1-표지 프로브의 복합체가 불용성 담체(마이크로플레이트 또는 비드) 위에 형성된다.

또한, 2차 항체로서 효소를 표지한 「표지 프로브」 대신에, 비오틴을 결합시킨 「비오틴 표지 프로브」 또는 「비표지 프로브」를 사용하는 것도 가능하다.

(ⅲ) 검출 공정

불용성 담체(마이크로플레이트 또는 비드 등)를 세정액으로 세정하고, 표지 항체의 효소에 대한 발색 기질이나 발광 기질을 첨가하여, 효소와 기질을 반응시킴에 의해 시그널을 검출한다.

또한, 2차 항체를 직접 표지하지 않고, 비표지 프로브를 사용했을 경우에는, 2차 프로브에 결합하는 항체를 표지하여, 시그널을 검출하는 것도 가능하다. 또한, 상기 비오틴 표지 항체를 사용했을 경우에는, 효소 표지 아비딘을 사용하여, 시그널을 검출하는 것도 가능하다.

상기 제1 태양의 샌드위치법(1)의 경우, 포착 프로브(일차 프로브)로서, 3'황산화코어1당쇄 결합 렉틴 혹은 그 당쇄 결합 부위를 갖는 렉틴 단편, 또는 3'황산화코어1당쇄 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편, 또는 그들의 혼합물을 사용하고, 표지 프로브(2차 프로브)로서, 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편, 뮤신1 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편, 뮤신1당쇄 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편, 또는 그들의 혼합물을 사용한다.

또한 상기 제1 태양의 샌드위치법(2)의 경우, 포착 프로브(일차 프로브)로서, 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편, 뮤신1 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편, 뮤신1당쇄 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편, 또는 그들의 혼합물을 사용하고, 표지 프로브(2차 프로브)로서, 3'황산화코어1당쇄 결합 렉틴 혹은 그 당쇄 결합 부위를 갖는 렉틴 단편, 또는 3'황산화코어1당쇄 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편, 또는 그들의 혼합물을 사용한다.

상기 제2 태양의 샌드위치법(1)의 경우, 포착 프로브(일차 프로브)로서, 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편, 또는 그들의 혼합물을 사용하고, 표지 프로브(2차 프로브)로서, 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편, 뮤신1 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편, 뮤신1당쇄 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편, 뮤신1당쇄 결합 렉틴 혹은 그 당쇄 결합 부위를 갖는 렉틴 단편, 뮤신1당쇄 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편, 또는 그들의 혼합물을 사용한다.

또한 상기 제2 태양의 샌드위치법(2)의 경우, 포착 프로브(일차 프로브)로서, 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편, 뮤신1 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편, 뮤신1당쇄 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편, 뮤신1당쇄 결합 렉틴 혹은 그 당쇄 결합 부위를 갖는 렉틴 단편, 뮤신1당쇄 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편, 또는 그들의 혼합물을 사용하고, 표지 프로브(2차 프로브)로서, 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편, 또는 그들의 혼합물을 사용한다.

상기 샌드위치법은, 효소 면역 측정법, 화학 발광 면역 측정법, 전기 화학 발광 면역 측정법, 또는 방사 면역 측정법에 의하여 행할 수 있다. 따라서, 항체를 표지하는 효소로서는, 서양 고추냉이 퍼옥시다아제(HRP), 알칼리 포스파타아제, β-갈락토시다아제, 및 루시페라제 등을 들 수 있다. 또한 효소 이외에도, 표지 물질로서, 아크리디늄 유도체 등의 발광 물질, 유로퓸 등의 형광 물질, 루테늄 착체 등의 전기 화학 발광 물질, I¹²⁵ 등의 방사성 물질 등을 사용할 수 있다. 또한, 표지 물질에 맞춰서 기질이나 발광 유도 물질을 적의 선택할 수 있다. 또한, 본 발명에 있어서의 표지 항체로서, 검출 마커로서 하프텐이나 저분자량의 펩티드, 렉틴 등의 항원 항체 반응의 시그널의 검출에 이용할 수 있는 물질을 결합시킨 항체를 사용할 수 있다.

본 발명의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 방법의 제3 태양은, 제1 태양의 접촉 공정(A-a)을 포함하고, 상기 접촉 공정(A-b) 및 검출 공정을 포함하지 않는 것이다. 구체적으로는, 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브에, 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1을 결합시키고, 그것을 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브로부터 해리시켜서, 회수하는 방법을 들 수 있다. 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브로서, 3'황산화코어1당쇄 결합 렉틴을 사용했을 경우에는 렉틴 어피니티 칼럼을, 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브로서, 3'황산화코어1당쇄 결합 항체를 사용했을 경우에는, 항체 어피니티 칼럼을 사용한다.

상기한 렉틴 어피니티 칼럼 또는 항체 어피니티 칼럼을 사용하여 시료 중의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1을 결합시키고, 그리고 용출함에 의하여, 시료 중의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1을 회수한다. 회수한 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1은, 일반적인 단백 검출법(예를 들면, 겔 전기영동 후의 단백질의 염색, UV미터에 의한 단백질의 검출), 또는 뮤신1 특이적인 검출법(예를 들면, 항뮤신1 항체의 효소 면역 측정법에 의한 검출)에 의해, 검출할 수 있다.

본 발명의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 방법의 제4 태양은, 상기 접촉 공정(A-a), 및 검출 공정을 포함하고, 상기 접촉 공정(A-b)을 포함하지 않는 것이다.

구체적으로는, 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브와, 피검 시료를 접촉시키는 공정(A-a)을 행하고, 다음으로 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1과 상기 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브와의 결합체를 검출하는 공정을 행한다. 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브로서는, 3'황산화코어1당쇄 결합 렉틴, 또는 3'황산화코어1당쇄 결합 항체를 사용할 수 있다.

제4 태양은, 3'황산화코어1당쇄 결합 항체를 사용했을 경우, 예를 들면 라텍스 응집 면역 측정법, 형광 항체법, 방사 면역 측정법, 면역 침강법, 면역조직 염색법, 또는 웨스턴 블롯 등에 의하여 행할 수 있다. 3'황산화코어1당쇄 결합 렉틴을 사용했을 경우, 렉틴 블롯에 의하여 행할 수 있다.

(피검 시료)

본 발명의 분석 방법에 사용하는 피검 시료로서는, 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1을 함유할 가능성이 있는 생체 유래 시료를 들 수 있다. 예를 들면, 오줌, 혈액, 혈청, 혈장, 수액, 타액, 세포, 조직, 혹은 기관, 또는 그들의 조제물(예를 들면, 생검 표본, 특히는, 유방암 환자의 생검 표본) 등을 들 수 있으며, 혈액, 혈청, 혈장, 또는 유선의 생검 표본이 바람직하고, 특히는 혈액, 혈청, 또는 혈장이 바람직하다. 정상인의 혈액, 혈청, 또는 혈장 중에는, 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1은, 거의 존재해 있지 않고, 유방암 환자에 있어서는, 혈액 중에 방출되기 때문에, 유방암을 검출하기 위한 피검 시료로서 적당하기 때문이다.

상기 오줌, 혈액, 혈청, 혈장, 수액, 타액 등의 액성의 시료는, 상기 분석 방법에 있어서, 각각의 분석 방법에 따라서 적당한 완충액에 의해 희석하여 사용할 수 있다. 또한, 세포, 조직, 또는 기관 등의 고형의 시료는, 고형의 시료의 체적의 2∼10배정도의 적당한 완충액으로 용해하여, 현탁액 또는 그 상청을, 상기 분석 방법에 있어서, 그대로, 또는 더 희석하여 사용할 수 있다.

본 명세서에 있어서 「3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1을 함유할 가능성이 있는 생체 유래 시료」란, 뮤신1을 함유하는 피검 시료 및 뮤신1을 함유할 가능성이 있는 피검 시료를 포함한다. 이 이유는, 유방암 또는 그 외의 암의 의혹이 있는 환자 유래의 피검 시료를 분석에 사용하는 경우가 있기 때문이다.

[3] 유방암의 검출 혹은 모니터링 방법

상기 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 방법에 의해, 유방암의 검출 혹은 모니터링을 행할 수 있다.

(유방암의 검출 방법)

상기 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 방법에 의해, 대상(환자)의 시료 중의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 양을 측정하고, 정상인 시료 중의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 양과 비교함에 의해, 상기 대상(환자)이 유방암인지의 여부를 검출 또는 진단할 수 있다.

표 2 및 도 7에 나타내는 바와 같이, 본 발명의 유방암의 검출 방법은, 스테이지I 및 스테이지Ⅱ의 원발성 유방암 환자에 있어서, 종래의 CA15-3의 측정에 의한 검출율과 비교하면, 40% 및 55%의 높은 검출율을 나타낸다.

(유방암의 모니터링 방법)

또한, 상기 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 방법에 의해, 치료를 행하고 있는 유방암 환자의 시료 중의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 양을 측정함에 의해, 유방암 환자의 모니터링(예를 들면, 유방암의 악성도, 유방암의 진전도, 유방암의 전이, 및 유방암 재발의 모니터링)을 행할 수 있다.

표 1에 나타내는 바와 같이, 유방암의 전이 환자에 있어서, 종래의 CA15-3의 측정에 의한 양성율과 비교하면, 매우 높은 양성율을 나타낸다. 따라서, 본 발명의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 방법은, 유방암의 전이의 예측방법, 또는 모니터링 방법으로서 사용할 수 있다.

또한, 도 6에 나타내는 바와 같이, 재발 또는 전이를 일으킨 환자는, 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 측정값이, 5년 이상 재발의 지적이 없는 환자보다도 높았다. 따라서, 발명의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 방법은, 유방암의 재발, 또는 전이의 모니터링 방법으로서 사용할 수 있다.

[4] Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 키트

본 발명의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 키트는, 상기 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 방법에 사용하는 키트이다. 본 발명의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 키트는, 유방암의 검출 혹은 모니터링용 키트로서 사용할 수도 있다.

본 발명의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 키트의 제1 태양은, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브; 및 Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브 또는 뮤신1에 결합하는 뮤신1 결합 프로브를 포함한다.

본 발명의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 키트의 제2 태양은, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브; 및 뮤신1에 결합하는 뮤신1 결합 프로브 또는 뮤신1이 갖는 당쇄에 결합하는 뮤신1당쇄 결합 프로브를 포함한다.

본 발명의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 키트의 제3 태양은, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브를 포함한다.

3'황산화코어1당쇄 결합 프로브로서는, 3'황산화코어1당쇄 결합 렉틴 혹은 그 당쇄 결합 부위를 갖는 렉틴 단편, 또는 3'황산화코어1당쇄 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편을 사용할 수 있다. 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브로서는, 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편을 사용할 수 있다. 뮤신1 결합 프로브로서는, 뮤신1 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편, 또는 뮤신1당쇄 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편을 사용할 수 있다. 뮤신1당쇄 결합 프로브로서는, 뮤신1당쇄 결합 렉틴 혹은 그 당쇄 결합 부위를 갖는 렉틴 단편, 또는 뮤신1당쇄 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편을 사용할 수 있다.

상기 프로브는, 분석 키트의 측정 방법에 따라서, 담체에 결합시켜도 되고, 완충액에 용해시켜도 된다. 예를 들면, 담체로서는 세파로오스, 셀룰로오스, 아가로오스, 덱스트란, 폴리아크릴레이트, 폴리스티렌, 폴리아크릴아미드, 폴리메타크릴아미드, 스티렌과 디비닐벤젠의 코폴리머, 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리카보네이트, 폴리에틸렌옥사이드, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 폴리염화비닐, 폴리메틸아크릴레이트, 폴리스티렌 및 폴리스티렌 코폴리머, 폴리비닐알코올, 폴리아크릴산, 콜라겐, 알긴산칼슘, 라텍스, 폴리설폰, 실리카, 지르코니아, 알루미나, 티타니아, 세라믹스를 들 수 있다. 담체의 형상도 특히 한정되는 것이 아니지만, 입자상의 비드, 플레이트 및 겔 등의 형상의 담체를 사용할 수 있다.

또한, 상기 분석 방법이, 표지화 항체를 사용하는 면역학적 방법(예를 들면, 효소 면역 측정법, 화학 발광 면역 측정법, 형광 항체법, 전기 화학 발광 면역 측정법, 또는 방사 면역 측정법)의 경우에는, 프로브는, 표지 물질로 표지한 표지화 항체 또는 표지화 항체 단편의 형태로 함유할 수 있다. 표지 물질의 구체예로서는, 효소로서 퍼옥시다아제, 알칼리 포스파타아제, β-D-갈락토시다아제, 또는 글루코오스옥시다아제 등을, 형광 물질로서 플루오레세인이소티아네이트 또는 희토류 금속 킬레이트 등을, 방사성 동위체로서 ³H, ¹⁴C, 또는 ¹²⁵I 등을, 그 외, 비오틴, 아비딘, 또는 화학 발광 물질 등을 들 수 있다. 효소 또는 화학 발광 물질 등의 경우에는, 그 자체 단독으로는 측정 가능한 시그널을 유발할 수는 없기 때문에, 각각 대응하는 적당한 기질 등을 선택하여 함유하는 것이 바람직하다.

본 발명의 분석 키트는, 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1을, 표준 물질로서 함유할 수 있다. 표준 물질로서 사용하는 MUC1 뮤신은 YMB-1등 유방암 세포주 배양 상청, 유방암 환자의 흉수, 복수 등의 체액을 원료로 해서 통상의 방법에 의해 정제할 수 있다. 또한, 본 발명의 키트는, 유방암의 검출 혹은 모니터링을 명기한 사용설명서를 포함할 수 있다. 유방암의 검출 혹은 모니터링용인 취지의 기재는, 분석 키트의 용기에 붙여져 있어도 된다.

[실시예]

이하, 실시예에 의하여 본 발명을 구체적으로 설명하지만, 그들은 본 발명의 범위를 한정하는 것이 아니다.

《해석예 1》

본 해석예에서는, 유방암 세포(YMB-1)의 분비 뮤신1에 있어서의 3'황산화코어1당쇄의 해석을 행했다. 유방암 세포(YMB-1)의 분비 뮤신1의 당쇄를, β-엘리미네이션으로 유리하고, NaB³H₄로 환원 표지했다. 얻어진 당쇄를 pH5.4의 고압 여과지 전기영동으로 분획했다. 분획한 각 프랙션을 Bio-Gel P-4 칼럼 크로마토그래피, 각종 렉틴 칼럼 크로마토그래피, 시알리다아제를 함유하는 엑소글리코시다아제 소화에 의하여, 각각의 프랙션에 함유되는 당쇄 구조를 결정했다.

그 결과, 3'황산화코어1당쇄를 함유하는 당쇄로서는, 식(I)

으로 표시되는 3'황산화코어1당쇄(I)가 약 7몰%, 식(Ⅱ)

으로 표시되는 3'황산화코어1당쇄(Ⅱ)가 약 3몰%, 식(Ⅲ)

으로 표시되는 3'황산화코어1당쇄(Ⅲ)가 약 10몰% 함유되어 있었다.

《실시예 1 : 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 분리》

본 실시예에서는, 유방암 세포주로부터 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 분리 및 정제를 행했다.

유방암 유래의 세포주 YMB-1 세포 배양액을 회수하고, 원심분리에 의해 부유하는 세포를 제거 후, 100KDa 커트의 멤브레인으로 농축 회수했다. 회수한 배양액을, PBS로 평형화한 항뮤신1 항체의 어피니티 칼럼에 어플라이하고, 동 완충액으로 세정한 후, 용출 완충액(10mM KH₂PO₄, 3M NaCl, pH2.5) 용출하여, 뮤신1 용액을 얻었다.

또, 항뮤신1의 어피니티 칼럼은, CNBr-Sepharose(GEhealthcare사제)를 사용하고, 메이커가 추천하는 첨부의 프로토콜에 따라, 제작했다.

《실시예 2 : 갈렉틴-4의 조제, 및 갈렉틴-4-HRP의 조제》

본 실시예에서는, 3'황산화코어1당쇄에 결합하는 재조합 인간 갈렉틴-4의 조정을 행했다.

우선, 갈렉틴-4의 ORF를 코드하는 cDNA를, 인간 T-84 결장 상피 cDNA 라이브러리로부터 PCR에 의하여 취득했다. 사용한 프라이머는, 센스 프라이머 : 5'-gctgtcgacATGGCCTATGTCCCCGCA-3'(서열 번호 17), 및 안티센스 프라이머 : 5'-cctaagcttTCTGGACATAGGACAAGG-3'(서열 번호 18)이다. 얻어진 PCR 프래그먼트를, pQE-9 벡터의 SalI 사이트와 HindⅢ 사이트에 편성하여, G4-pQE-9 벡터를 얻었다. G4-pQE-9 벡터로 대장균 M15주를 형질 전환했다. 형질 전환된 대장균을 배양하고, IPTG로 갈렉틴-4의 발현을 유도했다. 얻어진 대장균을, 리소자임에 의해 처리하고, 원심분리에 의해 상청을 얻었다. 얻어진 상청으로부터, Ni-NTA 레진, 아시알로페투인 결합 레진을 사용하여, 갈렉틴-4를 정제했다. 정제한 갈렉틴-4의 농도를 Bio-Rad Protein Assay에 의하여 측정하고, 이하의 실험에 사용했다.

(갈렉틴-4-HRP의 조제)

정제한 갈렉틴-4를, 서양 고추냉이 퍼옥시다아제(HRP)로 표지했다. HRP의 표지는, Peroxidase Labeling Kit-NH2(도진가가쿠겐큐쇼)를 사용하여, 첨부의 프로토콜에 따라서 행하여, 갈렉틴-4-HRP를 얻었다.

《실시예 3 : 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 측정계의 구축》

본 실시예에서는, 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 샌드위치법에 의한 면역학적 분석 방법의 구축을 행했다.

50mM 탄산 완충액(pH9.6)으로 4㎍/㎖로 희석한 항뮤신1 모노클로널 항체(Sigma사) 50㎕를, 96well ELISA plates(코닝사)에 가하고, 4℃, 16시간으로 고상화했다. 표면을 블로킹 시약 N102(니치유사) 20% 함유 PBS로, 25℃, 1.5시간, 블로킹했다. PBS-0.1% Tween-20(PBS-T)에 10% Carbofree blocking solution(Vector사)을 첨가한 희석액으로, 표준 물질로서, 실시예 1에서 얻은 3'황산화코어1당쇄를 갖는 YMB-1 뮤신1 용액을 10∼6000배로 희석하여, 50㎕ 가하고, 25℃, 1.5시간 인큐베이트했다. PBS-T로 3회 세정 후, 2000배 희석한 갈렉틴-4-HRP 50㎕를 가하고, 25℃, 1.5시간 인큐베이트했다. 각 웰을 PBS-T로, 4회 세정하고, 100㎕의 TMB 기질 용액(피아스사)을 가하고, 25℃, 15분간 인큐베이트한 후, 2N 황산 용액으로 반응을 정지 후, Plate CHAMELEON V(하이테크사)로, 450㎚의 흡광도를 측정했다.

얻어진 표준 직선을 도 3에 나타낸다. 또, 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 양은, 상기 YMB-1 뮤신1 용액을, 「에이테스트 KL-6」(에이자이 가부시키가이샤)에 의해 측정하고, 얻어진 유닛수를 기준으로서 산출했다.

《실시예 4 : 유방암 환자 혈청의 측정》

재발 또는 전이한 유방암 환자 혈청 48검체, 또는 정상인 혈청 85검체에 대하여, 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 측정을 행했다.

YMB-1 뮤신1 용액 대신에, 유방암 환자 혈청 48검체, 또는 정상인 혈청 85검체를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 3의 조작을 반복했다. 실시예 3에 있어서 얻어진 표준 직선으로부터, 각각의 검체의 유닛수를 계산했다. 결과를 도 4에 나타낸다. 정상인 혈청의 뮤신1의 평균값은 182±85U/㎖이었다. 한편, 유방암 환자 혈청의 뮤신1의 평균값은, 1082±1145U/㎖이었다. 컷오프값을 350U/㎖로 한 바, 유방암 환자의 양성율은, 92%이었다.

《비교예 1 : CA15-3의 측정》

본 비교예에서는, 실시예 4에 있어서 측정한 유방암 환자 혈청 48검체에 대하여, 유방암 마커인 CA15-3의 측정을 행했다.

CA15-3의 측정은, 「E테스트 「TOSOH」Ⅱ(CA15-3)」(도소 가부시키가이샤)를 사용하여, 첨부의 프로토콜에 따라, 측정했다.

결과를 도 4에 나타낸다. 유방암 환자 혈청 48검체의 양성율은, 52%이었다.

CA15-3의 측정값과, 상기 실시예 4에서 측정한 본 발명의 분석 방법에서의 측정값을 플로트했다(도 5). CA15-3에서 음성이 많은 검체가, 본 발명의 분석 방법에서는, 양성으로 판정할 수 있는 것을 알 수 있다.

《실시예 5 : 유방암 환자의 재발의 예측》

본 실시예에서는, 실시예 4에서 측정한 재발 또는 전이한 유방암 환자 48검체, 및 정상인 혈청 85검체에 더하여, 수술 후 5년 이상에서 재발의 지적이 없는 유방암 환자 24검체를, 실시예 4의 측정 방법으로 측정했다. 결과를 도 6에 나타낸다.

수술 후 5년 이상에서 재발의 지적이 없는 유방암 환자는, 재발 또는 전이한 유방암 환자의 측정값보다도 뚜렷하게 낮으며, 따라서 본 발명의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 방법은, 유방암의 재발, 또는 전이의 유용한 마커로 될 것으로 생각된다.

《실시예 6》

본 실시예에서는, 재발 또는 전이한 유방암 환자 8명의 혈청 중의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1을, 실시예 4의 조작에 따라서 측정했다. 실시예 4에서 측정한 48검체와 본 실시예에서 측정한 8검체를 더한 56검체에 대하여, 유방암의 전이처와 Gal4/MUC1의 양성율의 관계를 표 1에 나타낸다.

《비교예 2》

본 비교예에서는, 재발 또는 전이한 유방암 환자 8명의 혈청 중의 CA15-3을, 비교예 1의 조작에 따라서 측정했다. 비교예 4에서 측정한 48검체와 본 비교예에서 측정한 8검체를 더한 56검체에 대하여, 유방암의 전이처와 CA15-3의 양성율과의 관계를 표 1에 나타낸다.

[표 1]

3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1은, 재발 또는 전이한 유방암 환자의 91%(51/56)에서 양성으로 되었다. 또한, 전이처에 관계없이 높은 양성율을 나타냈다. 한편, CA15-3은, 재발 또는 전이한 유방암 환자의 48%(27/56)에서 양성이며, 양성율은 높지 않았다.

《실시예 7》

본 실시예에서는, 원발성 유방암 환자 54명의 혈청 중의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1을 측정했다.

원발성 유방암 환자 54명의 혈청을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 4의 조작을 반복했다. 스테이지I 및 스테이지Ⅱ의 원발성 유방암 환자의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 양성율을 표 2에 나타낸다. 컷오프값을 350유닛으로 하면, 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 양성율은, 스테이지I에서 40%, 그리고 스테이지Ⅱ에서 55%이었다. 이들의 양성율은, 후술하는 CA15-3의 양성율과 비교하면, 매우 높았다.

《비교예 3》

본 비교예에서는, 원발성 유방암 환자 54명의 혈청 중의 CA15-3을 측정했다.

원발성 유방암 환자 54명의 혈청을 사용한 것을 제외하고는, 비교예 1의 조작을 반복했다. 스테이지I 및 스테이지Ⅱ의 원발성 유방암 환자의 CA15-3의 양성율을 표 2에 나타낸다. CA15-3의 양성율은, 스테이지I에서 4%, 그리고 스테이지Ⅱ에서 10%이었다.

[표 2]

또한, 실시예 7에서 측정한 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1의 측정값과, 본 비교예에서 측정한 CA15-3과의 측정값의 상관을 도 7에 플로트했다. CA15-3에서 음성인 검체이어도, 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1에서는 양성으로 되는 검체가 많이 존재했다.

본 발명의 3'황산화코어1당쇄를 갖는 뮤신1을 분석하는 방법은, 유방암의 검출 혹은 모니터링에 사용할 수 있다. 본 발명의 분석 방법 또는 분석 키트는, 유방암의 재발 또는 전이 마커로서 사용하는 것이 가능하다.

이상, 본 발명을 특정의 태양에 따라 설명했지만, 당업자에게 자명한 변형이나 개량은 본 발명의 범위에 포함된다.

SEQUENCE LISTING <110> TOKYO INSTITUTE OF TECHNOLOGY YAMAGUCHI UNIVERSITY <120> METHOD FOR ANALYZING MUCIN 1 USING PROBE CAPABLE OF BINDING TO 3'-SULFONATED CORE 1 CARBOHYDRATE CHAIN, AND METHOD FOR DETECTING OR MONITORING BREAST CANCER <130> TIT-905 <150> JP 2011-134350 <151> 2011-06-16 <160> 18 <170> PatentIn version 3.1 <210> 1 <211> 972 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 atggcctatg tccccgcacc gggctaccag cccacctaca acccgacgct gccttactac 60 cagcccatcc cgggcgggct caacgtggga atgtctgttt acatccaagg agtggccagc 120 gagcacatga agcggttctt cgtgaacttt gtggttgggc aggatccggg ctcagacgtc 180 gccttccact tcaatccgcg gtttgacggc tgggacaagg tggtcttcaa cacgttgcag 240 ggcgggaagt ggggcagcga ggagaggaag aggagcatgc ccttcaaaaa gggtgccgcc 300 tttgagctgg tcttcatagt cctggctgag cactacaagg tggtggtaaa tggaaatccc 360 ttctatgagt acgggcaccg gcttccccta cagatggtca cccacctgca agtggatggg 420 gatctgcaac ttcaatcaat caacttcatc ggaggccagc ccctccggcc ccagggaccc 480 ccgatgatgc caccttaccc tggtcccgga cattgccatc aacagctgaa cagcctgccc 540 accatggaag gacccccaac cttcaacccg cctgtgccat atttcgggag gctgcaagga 600 gggctcacag ctcgaagaac catcatcatc aagggctatg tgcctcccac aggcaagagc 660 tttgctatca acttcaaggt gggctcctca ggggacatag ctctgcacat taatccccgc 720 atgggcaacg gtaccgtggt ccggaacagc cttctgaatg gctcgtgggg atccgaggag 780 aagaagatca cccacaaccc atttggtccc ggacagttct ttgatctgtc cattcgctgt 840 ggcttggatc gcttcaaggt ttacgccaat ggccagcacc tctttgactt tgcccatcgc 900 ctctcggcct tccagagggt ggacacattg gaaatccagg gtgatgtcac cttgtcctat 960 gtccagatct aa 972 <210> 2 <211> 323 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Ala Tyr Val Pro Ala Pro Gly Tyr Gln Pro Thr Tyr Asn Pro Thr 1 5 10 15 Leu Pro Tyr Tyr Gln Pro Ile Pro Gly Gly Leu Asn Val Gly Met Ser 20 25 30 Val Tyr Ile Gln Gly Val Ala Ser Glu His Met Lys Arg Phe Phe Val 35 40 45 Asn Phe Val Val Gly Gln Asp Pro Gly Ser Asp Val Ala Phe His Phe 50 55 60 Asn Pro Arg Phe Asp Gly Trp Asp Lys Val Val Phe Asn Thr Leu Gln 65 70 75 80 Gly Gly Lys Trp Gly Ser Glu Glu Arg Lys Arg Ser Met Pro Phe Lys 85 90 95 Lys Gly Ala Ala Phe Glu Leu Val Phe Ile Val Leu Ala Glu His Tyr 100 105 110 Lys Val Val Val Asn Gly Asn Pro Phe Tyr Glu Tyr Gly His Arg Leu 115 120 125 Pro Leu Gln Met Val Thr His Leu Gln Val Asp Gly Asp Leu Gln Leu 130 135 140 Gln Ser Ile Asn Phe Ile Gly Gly Gln Pro Leu Arg Pro Gln Gly Pro 145 150 155 160 Pro Met Met Pro Pro Tyr Pro Gly Pro Gly His Cys His Gln Gln Leu 165 170 175 Asn Ser Leu Pro Thr Met Glu Gly Pro Pro Thr Phe Asn Pro Pro Val 180 185 190 Pro Tyr Phe Gly Arg Leu Gln Gly Gly Leu Thr Ala Arg Arg Thr Ile 195 200 205 Ile Ile Lys Gly Tyr Val Pro Pro Thr Gly Lys Ser Phe Ala Ile Asn 210 215 220 Phe Lys Val Gly Ser Ser Gly Asp Ile Ala Leu His Ile Asn Pro Arg 225 230 235 240 Met Gly Asn Gly Thr Val Val Arg Asn Ser Leu Leu Asn Gly Ser Trp 245 250 255 Gly Ser Glu Glu Lys Lys Ile Thr His Asn Pro Phe Gly Pro Gly Gln 260 265 270 Phe Phe Asp Leu Ser Ile Arg Cys Gly Leu Asp Arg Phe Lys Val Tyr 275 280 285 Ala Asn Gly Gln His Leu Phe Asp Phe Ala His Arg Leu Ser Ala Phe 290 295 300 Gln Arg Val Asp Thr Leu Glu Ile Gln Gly Asp Val Thr Leu Ser Tyr 305 310 315 320 Val Gln Ile <210> 3 <211> 972 <212> DNA <213> Sus scrofa <400> 3 atggccttcg tccctgcacc aggctaccag cccacctaca atcccacgct gccctactac 60 aagcccatcc caggcggtct ccgggtcgga atgtccgttt acatccaagg agtggccaac 120 gagcacatga agaggttctt cgtgaacttc gtggtggggc agggcccggg ggcggatgtc 180 gccttccact tcaatcctcg cttcgatggc tgggacaagg tggtcttcaa ctcgcagcag 240 gacggcaagt ggggcaacga ggagaagaag aggagcatgc ccttccgcaa ggcgcccgcc 300 ttcgagctgg tcatcatggt cctgcccgag cactacaagg tggtggtaaa cggtgatccc 360 ttctatgagt ttgggcaccg gatcccagtc cagttggtca cccacctgca agtggatggg 420 gacctgacgc ttcaatcaat caacttcatc ggaggccagc ccgcccccag cccgggaccc 480 atgcctaatc cggggtaccc aggtcctgga aagcacaacc aacagccgtg taacctgcca 540 tgcatggagg gagccccaac cttcaacccg cctgtgccat ataagacgag actgcaaggg 600 ggccttgtgg cccgaagaac catcgtgatc aagggctatg tgcccccctc gggcaagagc 660 cttgtcatca acttcaaggt gggctcctca ggggacgtgg ctttgcacat caacccccgc 720 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tggtcttcaa tacgatgcaa 240 agcggacagt ggggcaagga agagaagaag aagagcatgc ctttccaaaa gggtcaccac 300 ttcgagctgg tgttcatggt catgtctgag cactacaagg tcgtggtaaa cggaactccc 360 ttctacgaat atgggcaccg gttgccccta cagatggtca cccacttgca agtggatggg 420 gacctggaac ttcagtcaat caacttcctt gggggccaac ctgctgcatc ccagtatccg 480 ggaaccatga ctattccagc ttatcctagt gctgggtaca accctccaca gatgaacagc 540 ctgcctgtca tggcgggacc cccgatcttc aatccgcctg tgccatatgt ggggaccctg 600 caggggggcc ttacagcccg aagaaccatc ataatcaagg gatatgtact tcctacagcc 660 aagaacctta tcatcaactt caaggtgggg tcgaccggag acatagcttt tcacatgaac 720 ccccgcatag gtgattgtgt ggttcgcaac agctatatga atggctcttg gggctccgaa 780 gagaggaaga taccctacaa cccgtttggc gctgggcagt tctttgatct gtcaatccgc 840 tgcggcacgg atcgattcaa ggtgtttgcc aacggccagc accttttcga cttctcacat 900 cggttccaag cattccaaag ggtagacatg ctggagatca aaggcgacat caccttgtcc 960 tatgtccaga tctga 975 <210> 8 <211> 324 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <400> 8 Met Ala Tyr Val Pro Ala Pro Gly Tyr Gln Pro Thr Tyr Asn Pro Thr 1 5 10 15 Leu Pro Tyr Lys Arg Pro Ile Pro Gly Gly Leu Ser Val Gly Met Ser 20 25 30 Ile Tyr Ile Gln Gly Ile Ala Lys Asp Asn Met Arg Arg Phe His Val 35 40 45 Asn Phe Ala Val Gly Gln Asp Glu Gly Ala Asp Ile Ala Phe His Phe 50 55 60 Asn Pro Arg Phe Asp Gly Trp Asp Lys Val Val Phe Asn Thr Met Gln 65 70 75 80 Ser Gly Gln Trp Gly Lys Glu Glu Lys Lys Lys Ser Met Pro Phe Gln 85 90 95 Lys Gly His His Phe Glu Leu Val Phe Met Val Met Ser Glu His Tyr 100 105 110 Lys Val Val Val Asn Gly Thr Pro Phe Tyr Glu Tyr Gly His Arg Leu 115 120 125 Pro Leu Gln Met Val Thr His Leu Gln Val Asp Gly Asp Leu Glu Leu 130 135 140 Gln Ser Ile Asn Phe Leu Gly Gly Gln Pro Ala Ala Ser Gln Tyr Pro 145 150 155 160 Gly Thr Met Thr Ile Pro Ala Tyr Pro Ser Ala Gly Tyr Asn Pro Pro 165 170 175 Gln Met Asn Ser Leu Pro Val Met Ala Gly Pro Pro Ile Phe Asn Pro 180 185 190 Pro Val Pro Tyr Val Gly Thr Leu Gln Gly Gly Leu Thr Ala Arg Arg 195 200 205 Thr Ile Ile Ile Lys Gly Tyr Val Leu Pro Thr Ala Lys Asn Leu Ile 210 215 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tgccactgga gcgtgtgaac agtttgcaag 420 tcagtgggga tgtgactgtt cagtccctga ccattgctgg aggtggtggt ggaatgccag 480 cggcccctat gcctgcaccc agtttcccac atccgggggg ggtgatgcca ttaccagttt 540 tcccagctgg caacctacct gtaatgggag gacctgtgta taacccacca gtaccctatt 600 atggctctat ccagggaggc atgtcaccga gaaagacagt gataattaga gggtttattc 660 cagaaggtgc agaaaggttc catataaact ttaaggcagg atcttccaac gatgttgctc 720 tgcattttaa ccctcggttg actgaaaatg tagtggtgag aaacagtcga cttggaggat 780 cctggggaca ggaagaaagg aacctctcgt acaatccatt cagacctgga caatattttg 840 atatttccat acgctgtggg atggatcgct tcacagtttt tgtgaatggg cagcatttct 900 gtgactttgc acacagatat tccatgttcc agatgcttga caggatagaa gttgagggaa 960 atgtggtttt gtctctcgtg cagatctga 989 <210> 10 <211> 327 <212> PRT <213> Xenopus laevis <400> 10 Met Ala Tyr Val Ala Ala Pro Gly Tyr Gln Pro Phe Tyr Asn Pro Ala 1 5 10 15 Ile Pro Phe Arg Thr Pro Ile His Gly Gly Leu Arg Ala Gly Met Ser 20 25 30 Val Tyr Ile Gln Gly Thr Ile Pro Asn His Ile Thr Arg Phe Ala Val 35 40 45 Asn Phe Thr Cys 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gtactccagc 540 atgattccag gagggatgtc tccgaagaag actatcgtca tcagaggcat ggtgcctcta 600 ggagctaaca gtttctctat taacttcatg gtgggcagct cacgagacat agtgttccac 660 ctaaaccctc gtctacagga gagcgtggtg gtgagaaaca gtttgattgg tgggagctgg 720 gacacggagg agagagagag atcagcctta accccttcct ggagggacag tactttgaca 780 tgtctatccg ttgtgggaac cagcagttca aggtgtttgt gaa 823 <210> 12 <211> 273 <212> PRT <213> Oncorhynchus keta <400> 12 Met Phe Val Ala Pro Pro Gly Tyr Gln Pro Val Tyr Asn Pro Ser Ile 1 5 10 15 Pro Tyr Val Gly Pro Ile Tyr Gly Gly Leu Arg Ser Gly Met Ser Val 20 25 30 Tyr Ile Gln Gly Val Ile Pro His Glu Ile Thr Ser Phe Asn Met Asn 35 40 45 Leu Gln Cys Gly Glu Ser Glu Gly Ser Asp Ile Gly Phe His Phe Ser 50 55 60 Pro Arg Phe Asp Asn Trp Asp Lys Val Val Phe Asn Ser Cys Gln Glu 65 70 75 80 Gly Glu Trp Gly Ser Glu Glu Glu Ile His Asn Met Pro Phe Ser Lys 85 90 95 Gly Asp Ala Phe Glu Met Val Ile Ile Ile Lys Gln Glu Gly Tyr Gln 100 105 110 Val Ala Val Asn Gly Gln Asp Leu His Thr Phe Asn Tyr Arg Ile Pro 115 120 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Gly Met Ser 20 25 30 Phe Tyr Ile Gln Gly Thr Ala Lys Glu Asn Met Arg Arg Phe His Val 35 40 45 Asn Phe Ala Val Gly Gln Asp Asp Gly Ala Asp Val Ala Phe His Phe 50 55 60 Asn Pro Arg Phe Asp Gly Trp Asp Lys Val Val Phe Asn Thr Lys Gln 65 70 75 80 Ser Gly Arg Trp Gly Lys Glu Glu Glu Lys Ser Met Pro Phe Gln Lys 85 90 95 Gly Lys His Phe Glu Leu Val Phe Met Val Met Pro Glu His Tyr Lys 100 105 110 Val Val Val Asn Gly Ser Pro Phe Tyr Glu Tyr Gly His Arg Leu Pro 115 120 125 Val Gln Met Val Thr His Leu Gln Val Asp Gly Asp Leu Glu Leu Gln 130 135 140 Ser Ile Asn Phe Phe Gly Val Gln Pro Ala Glu Thr Lys Tyr Pro Ala 145 150 155 160 Met Thr Gly Pro Pro Val Phe Asn Pro Cys Leu Pro Tyr Val Gly Ala 165 170 175 Leu Gln Gly Gly Phe Thr Val Arg Arg Thr Ile Ile Ile Lys Gly Tyr 180 185 190 Val Leu Pro Thr Ala Lys Thr Phe Ala Ile Asn Phe Arg Val Gly Ser 195 200 205 Ser Glu Asp Ile Ala Leu His Ile Asn Pro Arg Ile Gly Asp Cys Leu 210 215 220 Val Arg Asn Ser Tyr Met Asn Gly Ser Trp Gly Thr Glu Glu Arg Met 225 230 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ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 600 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 660 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 720 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 780 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 840 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 900 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 960 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1020 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1080 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1140 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1200 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1260 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1320 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1380 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1440 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1500 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1560 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1620 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1680 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1740 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1800 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1860 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1920 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1980 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 2040 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 2100 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 2160 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 2220 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 2280 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 2340 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 2400 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 2460 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 2520 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 2580 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 2640 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 2700 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 2760 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccatgg tgtcacctcg 2820 gccccggaca acaggcccgc cttgggctcc accgcccctc cagtccacaa tgtcacctcg 2880 gcctcaggct ctgcatcagg ctcagcttct actctggtgc acaacggcac ctctgccagg 2940 gctaccacaa ccccagccag caagagcact ccattctcaa ttcccagcca ccactctgat 3000 actcctacca cccttgccag ccatagcacc aagactgatg ccagtagcac tcaccatagc 3060 tcggtacctc ctctcacctc ctccaatcac agcacttctc cccagttgtc tactggggtc 3120 tctttctttt tcctgtcttt tcacatttca aacctccagt ttaattcctc tctggaagat 3180 cccagcaccg actactacca agagctgcag agagacattt ctgaaatgtt tttgcagatt 3240 tataaacaag ggggttttct gggcctctcc aatattaagt tcaggccagg atctgtggtg 3300 gtacaattga ctctggcctt ccgagaaggt accatcaatg tccacgacgt ggagacacag 3360 ttcaatcagt ataaaacgga agcagcctct cgatataacc tgacgatctc agacgtcagc 3420 gtgagtgatg tgccatttcc tttctctgcc cagtctgggg ctggggtgcc aggctggggc 3480 atcgcgctgc tggtgctggt ctgtgttctg gttgcgctgg ccattgtcta tctcattgcc 3540 ttggctgtct gtcagtgccg ccgaaagaac tacgggcagc tggacatctt tccagcccgg 3600 gatacctacc atcctatgag cgagtacccc acctaccaca cccatgggcg ctatgtgccc 3660 cctagcagta ccgatcgtag cccctatgag aaggtttctg caggtaacgg tggcagcagc 3720 ctctcttaca caaacccagc agtggcagcc gcttctgcca acttgtag 3768 <210> 16 <211> 1255 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Met Thr Pro Gly Thr Gln Ser Pro Phe Phe Leu Leu Leu Leu Leu Thr 1 5 10 15 Val Leu Thr Val Val Thr Gly Ser Gly His Ala Ser Ser 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655 Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala 660 665 670 Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro 675 680 685 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr 690 695 700 Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser 705 710 715 720 Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His 725 730 735 Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala 740 745 750 Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro 755 760 765 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr 770 775 780 Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser 785 790 795 800 Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His 805 810 815 Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala 820 825 830 Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro 835 840 845 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr 850 855 860 Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser 865 870 875 880 Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His 885 890 895 Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala 900 905 910 Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro 915 920 925 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Asn 930 935 940 Arg Pro Ala Leu Gly Ser Thr Ala Pro Pro Val His Asn Val Thr Ser 945 950 955 960 Ala Ser Gly Ser Ala Ser Gly Ser Ala Ser Thr Leu Val His Asn Gly 965 970 975 Thr Ser Ala Arg Ala Thr Thr Thr Pro Ala Ser Lys Ser Thr Pro Phe 980 985 990 Ser Ile Pro Ser His His Ser Asp Thr Pro Thr Thr Leu Ala Ser His 995 1000 1005 Ser Thr Lys Thr Asp Ala Ser Ser Thr His His Ser Ser Val Pro 1010 1015 1020 Pro Leu Thr Ser Ser Asn His Ser Thr Ser Pro Gln Leu Ser Thr 1025 1030 1035 Gly Val Ser Phe Phe Phe Leu Ser Phe His Ile Ser Asn Leu Gln 1040 1045 1050 Phe Asn Ser Ser Leu Glu Asp Pro Ser Thr Asp Tyr Tyr Gln Glu 1055 1060 1065 Leu Gln Arg Asp Ile Ser Glu Met Phe Leu Gln Ile Tyr Lys Gln 1070 1075 1080 Gly Gly Phe Leu Gly Leu Ser Asn Ile Lys Phe Arg Pro Gly Ser 1085 1090 1095 Val Val Val Gln Leu Thr Leu Ala Phe Arg Glu Gly Thr Ile Asn 1100 1105 1110 Val His Asp Val Glu Thr Gln Phe Asn Gln Tyr Lys Thr Glu Ala 1115 1120 1125 Ala Ser Arg Tyr Asn Leu Thr Ile Ser Asp Val Ser Val Ser Asp 1130 1135 1140 Val Pro Phe Pro Phe Ser Ala Gln Ser Gly Ala Gly Val Pro Gly 1145 1150 1155 Trp Gly Ile Ala Leu Leu Val Leu Val Cys Val Leu Val Ala Leu 1160 1165 1170 Ala Ile Val Tyr Leu Ile Ala Leu Ala Val Cys Gln Cys Arg Arg 1175 1180 1185 Lys Asn Tyr Gly Gln Leu Asp Ile Phe Pro Ala Arg Asp Thr Tyr 1190 1195 1200 His Pro Met Ser Glu Tyr Pro Thr Tyr His Thr His Gly Arg Tyr 1205 1210 1215 Val Pro Pro Ser Ser Thr Asp Arg Ser Pro Tyr Glu Lys Val Ser 1220 1225 1230 Ala Gly Asn Gly Gly Ser Ser Leu Ser Tyr Thr Asn Pro Ala Val 1235 1240 1245 Ala Ala Ala Ser Ala Asn Leu 1250 1255 <210> 17 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> primer for human galectin-4 <400> 17 gctgtcgaca tggcctatgt ccccgca 27 <210> 18 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> primer for human galectin-4 <400> 18 cctaagcttt ctggacatag gacaagg 27

Claims

(A) Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄(糖鎖)에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브와, 피검 시료를 접촉시키는 공정,
Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브, 또는 뮤신1에 결합하는 뮤신1 결합 프로브와, 피검 시료를 접촉시키는 공정, 및
Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1과 프로브와의 결합체를 검출하는 공정을 포함하는 것; 또는
(B) Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브와, 피검 시료를 접촉시키는 공정,
Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브, 뮤신1에 결합하는 뮤신1 결합 프로브 또는 뮤신1이 갖는 당쇄에 결합하는 뮤신1당쇄 결합 프로브와, 피검 시료를 접촉시키는 공정, 및
Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1과 프로브와의 결합체를 검출하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는 Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 방법.
Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브와, 피검 시료를 접촉시키는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 방법.
제2항에 있어서,
Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브와, 피검 시료를 접촉시키는 공정; 및
Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1과 프로브와의 결합체를 검출하는 공정을 포함하는, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 방법.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브가, 3'황산화코어1당쇄 결합 렉틴 혹은 그 당쇄 결합 부위를 갖는 렉틴 단편(斷片), 또는 3'황산화코어1당쇄 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편이며, 상기 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브가, 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편이며, 상기 뮤신1 결합 프로브가, 뮤신1 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편, 또는 뮤신1당쇄 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편이며, 그리고 상기 뮤신1당쇄 결합 프로브가, 뮤신1당쇄 결합 렉틴 혹은 그 당쇄 결합 부위를 갖는 렉틴 단편, 또는 뮤신1당쇄 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편인, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 방법.
제4항에 있어서,
상기 3'황산화코어1당쇄 결합 렉틴이, 갈렉틴-1, 갈렉틴-3, 갈렉틴-4, 갈렉틴-6, 갈렉틴-8, 및 갈렉틴-9로 이루어지는 군에서 선택되는, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 방법.
제5항에 있어서,
상기 갈렉틴-4가, 포유류, 조류, 양서류, 파충류, 또는 어류 유래의 갈렉틴-4인, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 기재된 분석 방법에 의해, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1의 양을 분석하는 것을 특징으로 하는, 유방암의 검출 또는 모니터링 방법.
Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브를 포함하는 것을 특징으로 하는, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 키트.
(A) Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브; 및
Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브 또는 뮤신1에 결합하는 뮤신1 결합 프로브, 또는
(B) Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1에 결합하는 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브; 및
뮤신1에 결합하는 뮤신1 결합 프로브, 또는 뮤신1이 갖는 당쇄에 결합하는 뮤신1당쇄 결합 프로브를 포함하는 것을 특징으로 하는 Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 키트.
제8항 또는 제9항에 있어서,
상기 3'황산화코어1당쇄 결합 프로브가, 3'황산화코어1당쇄 결합 렉틴 혹은 그 당쇄 결합 부위를 갖는 렉틴 단편, 또는 3'황산화코어1당쇄 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편이며, 상기 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 프로브가, 3'황산화코어1당쇄 뮤신1 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편이며, 상기 뮤신1 결합 프로브가, 뮤신1 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편, 또는 뮤신1당쇄 펩티드 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편이며, 그리고 상기 뮤신1당쇄 결합 프로브가, 뮤신1당쇄 결합 렉틴 혹은 그 당쇄 결합 부위를 갖는 렉틴 단편, 또는 뮤신1당쇄 결합 항체 혹은 그 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편인, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R을 갖는 뮤신1의 분석 키트.
제10항에 있어서,
상기 3'황산화코어1당쇄 결합 렉틴이, 갈렉틴-1, 갈렉틴-3, 갈렉틴-4, 갈렉틴-6, 갈렉틴-8 및 갈렉틴-9로 이루어지는 군에서 선택되는, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R을 갖는 뮤신1의 분석 키트.
제11항에 있어서,
상기 갈렉틴-4가, 포유류, 조류, 양서류, 파충류, 또는 어류 유래의 갈렉틴-4인, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R을 갖는 뮤신1의 분석 키트.
제8항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1을 더 포함하는, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 키트.
제8항 내지 제13항 중 어느 한 항에 기재된, Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1의 분석 키트를 사용하는, 유방암의 검출 또는 모니터링 키트.
Sulfo-3Galβ1-3GalNAc-R당쇄를 갖는 뮤신1.