KR20140027901A - 림프양 조직에 줄기 세포와 조상 세포 결합을 저해하고, 그리고 림프 조직에서 배 중심을 재생하기 위한 조성물과 방법 - Google Patents

림프양 조직에 줄기 세포와 조상 세포 결합을 저해하고, 그리고 림프 조직에서 배 중심을 재생하기 위한 조성물과 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 림프 조직 내에 존재하는 배 중심에 줄기 세포 결합의 차단을 비롯하여, 장기와 조직에 줄기 세포 결합을 저해하는 조성물과 방법에 관계한다. 림프 조직에서 배 중심을 재생하기 위한 조성물과 방법이 개시된다. 조성물 내에 어쥬번트, CD40, CD28과 IL-21 수용체에 대한 효현제, 그리고 CD20에 대한 길항제가 포함된다.

Description

림프양 조직에 줄기 세포와 조상 세포 결합을 저해하고, 그리고 림프 조직에서 배 중심을 재생하기 위한 조성물과 방법{COMPOSITIONS AND METHODS TO INHIBIT STEM CELL AND PROGENITOR CELL BINDING TO LYMPHOID TISSUE AND FOR REGENERATING GERMINAL CENTERS IN LYMPHATIC TISSUES}
관련된 출원에 대한 교차-참조
본 출원은 2010년 8월 18일자 제출된 US 특허가출원 일련 번호 61/374,943; 2011년 2월 10일자 제출된 US 특허가출원 일련 번호 61/441,485; 그리고 2011년 3월 4일자 제출된 US 특허가출원 일련 번호 61,449,372에 우선권을 주장한다. 이들 출원 모두 본 발명에 전체로서 참고문헌으로 편입된다.
발명의 기술 분야
본 발명의 요부 (subject matter)는 장기와 조직에 줄기 세포 결합을 조절하고 림프 조직에서 배 중심을 재생하기 위한 방법과 조성물에 관계한다.
발명의 배경 기술
재생 의약은 손상, 또는 선천성 결손으로 인하여 상실된 조직 또는 장기 기능을 수복하거나 대체하기 위해 살아있는, 기능성 조직을 산출하는 과정이다. 이러한 분야는 기존에 불치의 장기가 스스로를 치유하도록 촉진함으로써 체내에서 손상된 조직과 장기를 재생하는데 유망하다.
조직 또는 장기 기능을 재생하는데 이용되는 한 가지 방법은 병든 장기 또는 조직에 줄기 세포의 전달이다. 하지만 줄기 세포는 심지어 이들 줄기 세포가 손상된 장기의 조직 내로 직접 주사될 때에도, 조직 재생을 위해 표적화된 장기에서 충분히 유지되지 못한다. 인간과 동물에서 이미지화 연구는 전달된 줄기 세포 중에서 대부분이 줄기 세포 주사후 1시간 이내에 비장 내에서 발견될 수 있다는 것을 증명하였다. 동물 연구는 또한, 유도된 심근 경색후 줄기 세포 요법에 앞서 비장의 외과적 제거가 손상된 심장의 기능성 회복을 향상시킨다는 것을 증명하였다 (Blood, Vol 84, No 5: 1482-1491, 1994; NATURE 410: 701-705, 2001). 비장절제술은 또한, 골수 이식후 인간 환자에서 접목을 향상시키는 것으로 밝혀졌다 (Stem Cells Dev 13(l):51-62, 2004; Transplant Proc. 28(2):736-7, 1996; Am J Hematol. 22(3):275-83, 1986). 하지만, 비장절제술은 또한, 외과적 사망률, 패혈증, 그리고 평생 혈전성 합병증과 연관된다 (Blood Rev. 14(3): 121-129, 2000; Leukemia.15(3):465-467, 2001; Pediatr Transplant 13(2): 171-176, 2009).
따라서 비장의 제거 없이 비장 및 기타 림프양 조직에서 줄기 세포의 국지화 (localization)를 예방하는데 이용될 수 있는 방법과 조성물을 개발하는 것이 요구된다.
발명의 상세한 설명
개요
본 발명은 림프양 조직에 줄기 세포의 결합을 저해하기 위한 방법과 조성물을 제시함으로써 이러한 요구를 충족하고, 상기 방법은 림프양 조직, 특히 림프절에서 배 중심 및 비장에서 배 중심에 줄기 세포의 결합을 저해하는 치료제 또는 작용제와 공동으로 개체에 줄기 세포를 투여하는 단계를 포함한다. 용어 '와 공동으로'는 줄기 세포 치료 전후에 함께를 의미한다. '줄기 세포 치료'는 줄기 세포를 개체에 투여하거나, 개체의 내인성 줄기 세포 비축 내로부터 줄기 세포를 동원하거나, 또는 개체의 내인성 줄기 세포 비축으로부터 줄기 세포의 자발적 방출에 의존하는 행위를 의미한다.
가령, 장기 재생을 유도하기 위해 줄기 세포로 치료된 환자는 비록 이들 줄기 세포 치료가 일반적으로, 환자를 장기 손상 이전의 기능성 상태로 복원하지는 못하지만, 줄기 세포 요법 이후에 사망률에서 감소 및 기능에서 향상을 드러냈다. 비장 및 기타 림프관에 줄기 세포 결합에서 감소는 손상된 장기로 유인될 수 있는 순환 줄기 세포의 숫자를 증대시키고, 따라서 환자의 줄기 세포 치료에 의해 유도된 기능성 회복의 정도를 증대시킨다.
림프 조직에 줄기 세포 결합을 저해하는 치료제를 투여함에 있어서, 줄기 세포로 치료 또는 줄기 세포의 동원에 앞서 1 - 14일, 더욱 바람직하게는 3 - 7일, 가장 바람직하게는 3 - 4일 시점에 치료제를 투여하는 것이 바람직하다.
개체의 내인성 줄기 세포 비축으로부터 자발적으로 방출된 줄기 세포와 공동으로, 림프 조직에 줄기 세포 결합을 저해하는 치료제를 투여함에 있어서, 1-60일, 더욱 바람직하게는 1-30일, 그리고 가장 바람직하게는 1-14일의 기간에 걸쳐 치료제를 투여하는 것이 바람직하다.
림프양 조직, 특히 림프양 조직의 배 중심에 줄기 세포 결합을 저해하는 작용제에는 방사선, 화학치료제, 면역억제제 및 CD45에 대한 길항제와 CD26에 대한 길항제가 포함된다. 전혈 또는 골수로부터 단핵 분획물, 또는 전혈 또는 골수로부터 정제된 줄기 세포 내에서 발견되는 줄기 세포는 비장에서 백비수 영역, 더욱 구체적으로 비장을 비롯한 림프 조직의 백비수에서 배 중심, 그리고 이보다 더욱 구체적으로 비장의 백비수에서 활동성 배 중심에 결합한다. CD45, 특히 30-F11 쥐 IgG2b 항-생쥐 항-CD45 단일클론 항체에 의해 확인된 에피토프에 대한 항체는 비장에서 확인된 부위에 줄기 세포 결합을 감소시키고, 더욱 많은 줄기 세포가 표적화된 손상된 장기에 대한 생물학적 분배 (biodistribution)에 가용하도록 만들고, 그리고 조직 재생과 기능성 회복을 증강시킨다.
본 발명의 다른 구체예에서, 림프양 조직에서 활동성 배 중심을 감소시키거나, 파괴하거나 또는 제거하고, 따라서 림프 조직에 줄기 세포 결합의 감소를 결과하는 치료제가 투여된다. 본 발명의 다른 구체예는 비장에 줄기 세포 결합을 감소시키기 위해 비장에서 활동성 배 중심의 숫자를 감소시키고, 따라서 수복이 필요한 손상된 장기에 대한 전달 또는 귀소에 가용한 순환 줄기 세포의 숫자를 증가시키는 방법을 기술한다. 면역 반응을 억제하는 작용제는 비장 및 기타 림프 조직에서 활동성 배 중심의 숫자를 감소시킬 수 있다. 면역 조절제의 일반적 범주에는 퓨린의 합성을 간섭하는 작용제, 대사길항물질, 방사선, 비장에 방사선, 면역억제제, 글루코코르티코이드, 항-베타 아밀로이드 작용제, 항-레서스 인자, 항-TNF 작용제, 항-에오탁신, 항-T 세포 수용체 (TCR) 작용제, 항-인터페론 작용제, 항-인터페론 알파 작용제, 항-인터페론 베타 작용제, 항-인터페론 감마 작용제, 항-TGF 작용제, 항-TGF알파 작용제, 항-TGF 베타 작용제, 항-인테그린 작용제, 항-알파 4 작용제, 항-인터류킨 작용제, 항-인터류킨 1 작용제, 항-인터류킨 2 작용제, 항-인터류킨 4 작용제, 항-인터류킨 5 작용제, 항-인터류킨 6 작용제, 항-인터류킨 12 작용제, 항-인터류킨 13 작용제, 항-인터류킨 23 작용제, 항-IgE 작용제, 항-혈관 부착 단백질 (VAP) 작용제, 항-B7 작용제, 항-혈관 내피 성장 인자 (VEGF) 작용제, 항-BAFF (BLyS) 작용제, 항-CTLA4 작용제, 항-보체 작용제, 항-CD2 작용제, 항-CD3 작용제, 항-CD4 작용제, 항-CD5 작용제, 항-CD20 작용제, 항-CD23 작용제, 항-CD25a 작용제, 항-CD40 작용제, 항-CD154 (CD40L) 작용제, 항-CD62L 작용제, 항-CD80 작용제, 항-CD147 작용제, 항-LFA1 작용제, 항-(CD11a) 작용제, 항-CD18 작용제, 퓨린 합성의 저해제, 피리미딘 합성의 저해제, 항-증식성 작용제, 대사길항물질 작용제, 항-폴산염 작용제, 그리고 항-mTO 작용제가 포함된다.
아데노신 탈아미노효소 결핍 역시 데옥시ATP의 축적을 촉발하는 작용제가 그러한 것처럼, 감소된 활동성 배 중심 형성을 유발할 것이다 (J Immunol 171 : 5562-5570, 2003). 유사하게, CCR7의 발현을 증강시키거나, 또는 이를 활성화시키는 작용제는 감소된 활동성 배 중심 형성을 유발할 것이다.
림프양 조직의 배 중심의 형성을 저해하거나, 또는 배 중심을 파괴하거나 제거하는 화학치료제 역시 이용될 수 있다. 대표적인 실례에는 알킬화 작용제, 대사길항물질, 식물 알칼로이드, 국소이성화효소 저해제, 항종양약 및 삼산화비소가 포함된다.
알킬화 작용제의 실례에는 시스플라틴과 카르보플라틴이 포함되고, 옥살리플라틴 역시 알킬화 작용제이다. 이들은 생물학적으로 중요한 분자에서 아미노, 카르복실, 설피드릴, 그리고 인산염 기와 공유 결합을 형성함으로써 세포 기능을 손상시킨다.
대사길항물질의 실례는 아자티오프린, 메르캅토퓨린, 카페시타빈플루오르우라실이다 - 이들은 DNA의 빌딩 블록 (building block)이 된다. 이들은 상기 물질들이 "S" 기 (세포 주기의) 동안 DNA 내로 함입되는 것을 예방하고, 정상적인 발달과 분열을 중단시킨다. 이들은 또한, RNA 합성에 영향을 준다. 이들 약물은 효능으로 인하여, 가장 폭넓게 이용되는 세포증식억제제이다.
알칼로이드에는 빈카 알칼로이드와 탁산이 포함된다. 빈카 알칼로이드에는 빈크리스틴, 빈블라스틴, 비노렐빈, 그리고 빈데신이 포함된다. 탁산에는 탁솔, 파클리탁셀과 도세탁셀이 포함된다.
국소이성화효소는 DNA의 위상 기하학 (topology)을 유지시키는 필수 효소이다. 타입 I 또는 타입 II 국소이성화효소의 저해는 적절한 DNA 슈퍼코일링 (supercoiling)을 뒤집음으로써 DNA의 전사와 복제 둘 모두를 간섭한다. 일부 타입 I 국소이성화효소 저해제에는 캄포테신, 이리노테칸과 토포테칸이 포함된다. 타입 II 저해제의 실례에는 암사크린, 에토포시드, 에토포시드 인산염, 그리고 테니포시드가 포함된다.
항종양성 작용제에는 닥티노마이신, 독소루비신, 에피루비신, 그리고 블레오마이신이 포함된다.
정의
본 발명의 구체예를 기술하는데 이용된 정의:
본 명세서에서, 용어 효현제는 수용체의 효과(들)를 매개하는데 필수적인 특정한 수용체 또는 하류 신호전달 경로를 활성화시키는 임의의 실체를 의미한다. 효현제에는 항체, 항체 단편, 가용성 리간드, 소형 분자, 환형 펩티드, 가교-연결 작용제가 포함될 수 있지만 이들에 국한되지 않는다.
본 명세서에서, 용어 길항제는 수용체의 상대 구조(들)의 결합, 또는 수용체의 효과(들)를 매개하는데 필수적인 특정한 수용체 또는 하류 신호전달 경로의 활성화를 간섭하는 임의의 실체를 의미한다. 길항제에는 항체, 항체 단편, 가용성 리간드, Fc 융합 수용체, 키메라 수용체, 소형 분자, 환형 펩티드, 펩티드가 포함될 수 있지만 이들에 국한되지 않는다.
본 명세서에서, 용어 저해제는 특정한 리간드 또는 이의 수용체의 표적 효과 (target effect)를 감소시키는 임의의 실체를 의미한다. 저해제는 소형 분자, 안티센스 작용제, siRNA와 microRNA를 비롯한 핵산일 수 있다.
림프 조직, 림프절, 비장 및 배 중심
림프 조직은 다수의 림프구를 내포하는 림프계 내에 망상 결체 조직의 전문화된 형태이다. 이러한 조직 유형은 비장, 흉선, 그리고 편도선뿐만 아니라, 위장관의 점막과 연관되는 내장 노드, 페이에르판과 유미강을 구성한다.
림프절은 겨드랑이와 위/장을 비롯한 신체 전반에 폭넓게 분포되고 림프관에 의해 연결되는 면역계의 소형 공-모양 장기이다. 림프절은 B-세포, T-세포, 그리고 기타 면역 세포의 주둔지이다. 림프절은 신체 전반에서 발견되고, 그리고 외래 입자에 대한 필터 또는 트랩으로서 기능한다. 림프절은 섬유 피막 (fibrous capsule)에 의해 둘러싸이고, 그리고 림프절 내에서 섬유 피막은 신장하여 비주를 형성한다. 림프절의 물질은 외후피 및 문 (hilum)을 제외하고 전반적으로 전자에 의해 둘러싸인 속수질로 분할되고, 여기서 수질은 표면과 직접적으로 접촉한다. 외후피는 소낭으로서 정렬된 B 세포로 주로 구성되고, 이들은 항원으로 공격될 때 배 중심을 발달시킬 수 있고, 그리고 심부 피질은 T 세포로 주로 구성된다. 피질하 지대 (subcortical zone)로서 알려져 있는 지대가 존재하는데, 여기서 T-세포 (또는 주로 적색인 세포)는 수상돌기 세포와 주로 상호작용하고, 그리고 여기서 망상 네트워크 (reticular network)가 밀집한다.
비장은 위와 횡격막 사이에 복부의 왼쪽에 위치하는 복막내 장기이다. 이 장기는 면역계의 주요 조절 부위이다. 이것은 혈관 장기이고, 큰 동맥혈 공급 (arterial blood supply)을 갖는다. 비장에 들어가면, 혈류는 림프구의 큰 덩어리 사이에 놓여 있는 팽창된 혈관, 또는 "정맥동 (sinus)"의 그물 세공 (meshwork)에 들어간다. 정맥동의 벽은 혈액 내에서 죽은 세포와 외래 입자를 집어삼키고 대순환 (general circulation)으로부터 이들을 제거할 수 있는 식세포를 내포한다. 림프절과 유사하게, 비장은 항체의 중요한 공급원이지만, 비장은 림프절보다 훨씬 많이, 적혈구 세포를 파괴함으로써 순환 (circulation)으로부터 비정상적인 또는 정상적으로 노쇠한 ("죽어가는") 적혈구 세포의 제거와 관련된다.
비장은 백비수와 적비수를 모두 내포한다. 비장의 적비수는 순환으로부터 늙은 또는 결함성 적혈구 세포 (RBCs) 및 항체-코팅된 세균 또는 적혈구 세포를 정상적으로 여과하고 제거하는 대식세포를 보유한다. 비장의 백비수는 림프양 구획을 내포하고 면역 감시와 반응에 결정적이다: 이것은 침입 병원체에 대한 항체를 합성하고, 그리고 출혈 또는 감염에 응하여 혈소판과 호중구를 방출한다. 발달 동안, 비장은 조혈 (임신 6주에서)의 첫 번째 위치가 되는 것을 비롯한 복수의 역할을 갖는 것으로 생각된다. 비장은 골수 조혈이 인계받는 발달의 초기 단계 동안 조혈 기능을 상실하는 것으로 오랫동안 생각되었지만, 최근의 연구에서 성체 비장은 줄기 세포 산출, 상이한 계통으로 줄기 세포 분화 및 줄기 세포 저장의 부위로서 확인되었다 (Trends Mol Med 11(6):271-276, 2005;). 하지만, 외인성 줄기 세포가 축적하는 비장 내에 부위 및 외인성 줄기 세포가 비장에 결합하는 분자 기전은 알려져 있지 않다.
비장의 백비수의 동맥주위 림프구집 (PALS)은 주로 T 세포가 군집하는 반면, 림프양 부분은 주로 B 세포가 군집한다. 배 중심 (GC)은 말초 림프 조직에서 림프절 또는 림프 소절 내에, 그리고 비장의 백비수에서 부위이고, 여기서 중심세포로서 알려져 있는 강한 성숙 B 림프구가 급속하게 증식하고, 분화하고, 항체 반응 동안 체세포 초돌연변이 (somatic hypermutation) 및 클래스 전환 (class switch)을 통해 돌연변이된다. 배 중심은 B-세포 체액 면역 반응의 중요한 부분이다. 이들은 T-의존성 항원에 의한 B-세포의 활성화후 역동적으로 발달한다. 조직학적으로, GC는 림프양 조직에서 현미경적으로 구별가능한 부분을 설명한다. 활성화된 B-세포는 원발성 병소 (primary focus)로부터 원발성 소낭 시스템 내로 이동하고, 그리고 소낭 수상돌기 세포 (FDC)의 환경에서 단일클론 확장을 시작한다.
수일간의 확장후, B 세포는 그들의 항체-인코딩 DNA를 돌연변이시키고, 따라서 배 중심에서 다양한 클론을 산출한다. 이것은 체세포 초돌연변이에 기인한 무작위 치환, 결실과 삽입을 수반한다. FDC로부터 일부 미확인 자극 시에, 성숙 B 세포 (중심모세포)는 어두운 지대에서 밝은 지대로 이동하고 그들의 표면에 그들의 항체를 노출하기 시작하고, 이러한 단계에서 중심세포로서 지칭된다. 이들 중심세포는 활성화된 아폽토시스의 단계에 있고, 그리고 항원을 제시하는 FDC로부터 생존 신호에 대해 경쟁한다. 이러한 구조 과정 (rescue process)은 항원에 대한 항체의 친화성에 의존하는 것으로 생각된다. 기능성 B-세포는 이후, 최종 분화 신호를 얻기 위해 보조 T 세포와 상호작용해야 한다. 이것은 또한, 예로써 IgM에서 IgG로 아이소타입 변환 (isotype switching)을 필요로 한다. T 세포와의 상호작용은 자가반응 항체의 산출을 예방하는 것으로 생각된다. B 세포는 항체를 확산시키는 혈장 세포 또는 기억 B 세포가 되고, 이것은 동일한 항원과의 차후 접촉에서 활성화될 것이다. 이들은 또한, 재순환 가설 (recycling hypothesis)에 따라, 증식, 돌연변이와 선별의 전체 과정을 재개할 수도 있다.
비장의 백비수 영역 내에 포함된 B 세포는 특정한 분자 마커로 염색에 의해 확인된, 특정한 구역 내로 더욱 분할될 수 있다. 비장의 번연대는 백비수에서 접경하는 비순환 성숙 B 세포를 내포하고, 백비수와 적비수 사이에 분리를 발생시키고, 그리고 높은 수준의 CD21, IgM, CD24와 CD79a 및 측정가능한 수준의 CD9와 CD22를 발현한다. 외투대는 정상적인 배 중심 소낭을 둘러싸고 CD21, CD23과 CD38을 발현한다. 소낭 지대는 배 중심 내에 포함되고 높은 수준의 IgD와 CD23, 중간 수준의 CD21과 CD24를 발현하고, 그리고 또한, PNA 염색에 의해 확인될 수 있다. 배 중심은 PNA 결합에 의해 최적으로 구별되고 소낭 지대보다 높은 수준의 CD54를 발현한다. 배 중심은 모든 배 중심에서 균일하게 분포하는 것으로 보이는 보조 T 세포의 특수한 집단을 갖는다. 배 중심은 비록 절대적이진 않지만, 전통적으로, T 보조 세포를 필요로 하는 면역 반응과 연관된다. 배 중심은 초가변 유전자 돌연변이가 일어나고 높은 친화성 IgG 생산 B 세포가 산출되는 곳이다. 활동성 배 중심은 실체적인 대식세포 및 CD21 발현 수상돌기 세포를 갖는다. 소낭 중심은 또한, CD45 (B220)의 발현에 의해 확인될 수 있다 [Toxicologic Pathology, 35:366-375, 2007). CD45R follicular centers are found surrounding germinal centers expressing Bcl6 and Bcl2. BioEssays 29: 166-177, 2007; Toxicol Pathol 34(5): 648-655, (2006)].
CD45는 적혈구와 혈장 세포를 제외한 모든 분화된 조혈 세포에서 발견되는, PTPRC (단백질 티로신 포스파타아제, 수용체 타입 C)로서 알려져 있는 통상의 백혈구 항원이다. 이것은 또한, 림프종, B-세포 만성 림프구성 백혈병, 모상 세포 백혈병, 그리고 급성 비-림프구성 백혈병에서 발현된다. 이것은 B-와 T- 세포 항원 수용체 신호전달에서 필수적인 것으로 밝혀졌다. CD45 패밀리는 단일 복합 유전자의 산물인 복합 구성원으로 구성된다. 이 유전자는 34개 엑손을 내포하고, 그리고 일차 전사체의 3개 엑손은 대안으로 스플라이싱되어 최대 8개의 상이한 성숙 mRNA 및 번역후, 8개의 상이한 단백질 산물이 산출된다. 이들 3개 엑손은 RA, RB와 RC 동종형을 산출한다.
CD45 항원의 다양한 동종형이 존재한다. CD45 항원 동종형에는 CD45RA, CD45RB, CD45RC, CD45RAB, CD45RAC, CD45RBC, CD45RO, CD45R (ABC)이 포함된다. CD45RA는 미경험 T 세포에 위치하고, 그리고 CD45RO는 기억 T 세포에 위치한다. CD45는 또한, 고도로 글리코실화된다. CD45R은 가장 긴 단백질이고, 그리고 T 세포로부터 단리될 때 200 kDa에서 이동한다. B 세포는 또한, 더욱 강한 글리코실화를 갖고, 분자량이 220 kDa에 이르고, 따라서 명칭 B220; 220 kDa의 B 세포 동종형을 갖는 CD45R을 발현한다. B220 발현은 B 세포에 한정되지 않고 활성화된 T 세포, 수상돌기 세포의 부분집합 및 기타 항원 제시 세포에서도 발현될 수 있다. 미경험 T 림프구는 큰 CD45 동종형을 발현하고 CD45RA에 대해 통상적으로 양성이다. 활성화된 T 림프구 및 기억 T 림프구는 RA, RB와 RC 엑손을 결여하는, 가장 짧은 CD45 동종형, CD45O를 발현한다. 이러한 가장 짧은 동종형은 T 세포 활성화를 조장한다. CD45의 세포질 도메인은 알려진 가장 큰 것들 중에서 한 가지이고, 그리고 Lck (T 세포에서) 또는 Lyn/Fyn/Lck (B 세포에서)로 불리는 티로신 키나아제 상에서 저해성 인산염 기를 제거하고 이를 활성화시키는 내재성 포스파타아제 활성을 갖는다. CD45는 단위체성 형태 및 이합체성 형태 둘 모두로 존재할 수 있고, 그리고 이합체화는 CD45 포스파타아제 활성을 하향조절할 수도 있다 (Blood vl03 (9):3440-3447, 2004).
CD45는 모든 조혈 세포에서 발현되고 모든 조혈 항원 중에서 가장 폭넓게 발현되는 것이기 때문에, 이식물 및 줄기 세포 재구성의 기타 모델에서 조혈 줄기 세포를 또한 내포하는 세포의 집단을 단리하는데 이용되고 있긴 하지만, 중간엽 줄기 세포는 CD45+ 초기 전구 세포의 집단으로 유래되고, 일반적으로 CD45 음성인 것으로 확인된다 (Stem Cells 28: 140-151, 2010). CD45의 모든 동종형의 완전한 부재는 줄기 세포 체류, 운동성 및 골수에 대한 귀소에 영향을 주고, 그리고 초기 줄기 세포로부터 비장에서 기능성 B 세포의 산출에서 일정한 역할을 하는 것으로 생쥐에서 증명되었다 (J. Exp. Med. 205:2381-2395, 2008). 흥미롭게도, CD45의 모든 동종형을 결여하는 CD45 녹-아웃 (knock-out) 생쥐는 골수에서 감소된 숫자, 하지만 비장 배에서 증가된 숫자의 cKit+Lin- 조혈 조상 세포를 가졌다.
30-F11은 생쥐 기원의 흉선과 비장에 대해 발생된 쥐 단일클론 IgG2b이다. 클론 30-F11은 동종항원 (CD45.1과 CD45.2) 및 CD45의 모든 동종형 둘 모두에 반응한다. 30-F11 및 클론 30-F4는 각각, CD45에 다른 하나에 의한 결합을 차단하는데, 이것은 이들이 CD45 상에서 동일한 또는 중첩하는 에피토프에 결합한다는 것을 지시한다 (J Immunol 127(3):982-986, 1981). 유사하게, 이들 클론 둘 모두 Dennert 등에 의해 기술된 항체와 교차-차단하지만, 항-CD45 항체 55-6.1은 30-F11 또는 30-F4와 교차-차단하지 않는다 (Cell Immunol 53:350-364, 1980).
방사성표지된 30-F11 항체는 생쥐 비장에서 최대 축적 (60%), 하지만 골수에서 단지 20% 축적을 보이고 (Blood 93(2):737-745, 1999), 그리고 생쥐에서 표적화된 조혈 방사를 전달하는데 이용되었다. 30-F11 항체는 Sca1 항원과 공동으로, 생쥐의 근육으로부터 줄기 세포 분획물을 확인하는데 이용되었는데, 그 이유는 CD45가 모든 조혈 세포에서 발현되기 때문이다 (PNAS 99 1341 - 1346, 2002). 방사성표지된 30-F11 및 30-F11의 f(ab)'2 단편은 방사선요법을 전달하기 위한 방법으로서 평가되었다. 30-F11 흡수는 생쥐의 비장에서 가장 극적이고, 액와 림프절 (axillary lymph node)이 그 뒤를 이었다 (Cancer Res 52(5): 1228-34, 1992).
CD45 폴리펩티드는 공개된 절차에 의해 생산될 수 있다. 항-CD45 다중클론과 단일클론 항체를 제조하기 위한 방법은 당분야에 널리 공지되어 있다 (예로써, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition (Cold Spring Harbor, N.Y., 1989); 그리고 Hurrell, J. G. R., Ed., Monoclonal Hybridoma Antibodies: Techniques and Applications (CRC Press, Inc., Boca Raton, Fla., 1982)을 참조하고, 이들은 본 발명에 참조로서 편입된다). 당업자에게 명백한 바와 같이, 다중클론 항체는 다양한 온혈 동물, 예를 들면, 말, 소, 염소, 양, 개, 닭, 토끼, 생쥐, 그리고 쥐로부터 산출될 수 있다. 인간화된 항체의 생산은 널리 공지되어 있다. Riechmann L, Clark M, Waldmann H, Winter G (1988). "Reshaping human antibodies for therapy". Nature 332 (6162): 332:323. .Queen C, Schneider WP, Selick HE, Payne PW, Landolfi NF, Duncan JF, Avdalovic NM, Levitt M, Junghans RP, Waldmann TA. (Dec 1989). "A humanized antibody that binds to the interleukin 2 receptor.". Proc Natl Acad Sci U S A. 86 (24): 10029-33. .Norderhaug L, Olafsen T, Michaelsen TE, Sandlie I. (May 1997). "Versatile vectors for transient and stable expression of recombinant antibody molecules in mammalian cells.". J Immunol Methods 204 (1): 77-87을 참조한다.
림프 조직에 줄기 세포 결합을 예방하기 위한 방법과 작용제
다른 특정한 구체예에서는 분화 45 (CD45) 항원의 클러스터에 대한 길항제의 용액에 비장을 노출시킴으로써 비장에 줄기 세포 결합을 조절하는 방법을 제시한다. CD45 항원에 대한 길항제의 용액은 30-F11 에피토프에 결합하도록 형성되거나 조제될 수 있다. CD45 항원에 대한 길항제의 용액은 손상된 조직 또는 장기에 줄기 세포 전달을 증강시킴으로써 치료적 재생을 촉진하도록 조제될 수 있다. CD45 항원에 대한 항체를 내포하는 용액은 30-F11 에피토프 및 30-F11 에피토프의 인간 등가물에 결합하도록 조제될 수 있다.
본 발명에서는 림프 조직, 예를 들면, 림프절과 비장에 줄기 세포 결합을 감소시키는 방법, 그리고 인간 환자를 치료하기 위한 이들 방법의 용도를 기술한다. 본 발명에서는 순환 줄기 세포가 비장에서 결합하는 비장 내에 특정한 부위, 그리고 이 부위에 줄기 세포 결합을 증가 또는 감소시키는 방법을 기술한다. 새로운 두꺼운 비장 섹션의 면역형광과 조직학적 분석은 실시예 1, 2, 3, 그리고 4에서 확인되는 바와 같이, 생체내에서 또는 탈체에서 투여될 때, 맥관구조에서 순환하는 줄기 세포가 비장에서 활동성 배 중심에 결합한다는 것을 증명하였다. 비장에 줄기 세포 결합의 양을 감소시키는 한 가지 방법은 투여된 줄기 세포가 비장의 활동성 배 중심 상에서 분자 표적에 결합하는 것을 차단하는 작용제를 전달하는 것이다. 본 발명의 이러한 과정에 따라서, 항체 30-F11은 생쥐 CD45 항원에 결합하고 생쥐 비장의 배 중심에 줄기 세포 결합을 차단한다. 30-F11 쥐 IgG2b 항-생쥐 CD45에 동등할 수 있는 항-인간 항-CD45 항체에는 인간 CD45의 에피토프 P를 인식하는 YAML568 (J Nucl Med 47: 1335-1341, 2006; In: Leucocyte Typing III: White Cell Differentiation Antigens pp811-814, 1987; Transplantation 40:538-544, 1985), 항-CD45 클론 HI30, 또는 YTH-24와 YTH-54 항-인간 항-CD45 항체가 포함된다.
본 발명의 다른 구체예는 배 중심에 줄기 세포 결합을 저해하기 위한 CD26에 대한 길항제, 예를 들면, CD26에 대한 항체의 용도이다. CD26이 줄기 세포에 의해 발현되고, 그리고 림프 조직, 특히 림프 조직 내에 배 중심에 부착하는 줄기 세포에 존재하는 항원이기 때문에, 줄기 세포에서 CD26을 차단함으로써, 이들 줄기 세포는 림프 조직에 결합할 수 없다.
배 중심의 형성을 저해 또는 하향-조절하거나, 또는 배 중심을 파괴하거나 제거하는 작용제
본 발명의 다른 구체예는 배 중심의 증식을 저해 또는 하향조절하거나, 또는 배 중심을 파괴하거나 제거함으로써, 림프 조직에 줄기 세포 결합을 저해하는 것이다. 배 중심 (GCs)은 T-의존성 항원에 의한 B-세포의 활성화후 역동적으로 발달한다. B-세포를 활성화시키고, 따라서 배 중심의 증식을 유도하는 T-세포 항원은 B-세포에 존재하는 CD40 수용체에 결합하는 CD40L (일명, CD154)이다. CD40 수용체에 CD40L의 이러한 결합은 B-세포를 활성화시킬 뿐만 아니라 배 중심의 증식을 유도한다. 따라서 본 발명의 다른 구체예는 CD40에 CD40L의 결합을 저해하는 작용제를 개체에 투여하는 것으로 구성된다. 이런 작용제의 실례는 CD40 또는 CD40L에 대한 길항성 항체이다.
배 중심의 발달에 중요한 다른 단백질은 '신호전달 림프구 활성화 분자-연관된 단백질' (SAP)이다. (Hai Qui, et al., Nature, 455: 764-769 (2008). 따라서 SAP에 대한 항체는 배 중심의 형성을 저해하고, 따라서 림프 조직에 줄기 세포 결합을 저해할 것이다.
IL-21은 B 세포-내재성 기전을 통한 배 중심 B 세포 분화와 증식에 중요한 다른 폴리펩티드이다. IL-21 신호전달의 부재는 단백질 항원에 대한 B 세포 반응에 현저한 영향을 주고, 비장과 골수 혈장 세포 형성 및 GC 지속성과 기능을 감소시키고, 그들의 증식, 기억 B 세포로 전이, 그리고 친화성 성숙에 영향을 준다. [Zotos, D., et al. JEM 207: 365-378 (2010)]. 따라서 길항제, 예를 들면, IL-21에 대한 항체를 개체에 투여함으로써, 배 중심은 하향-조절되고 그들의 형성이 저해될 수 있다. 이것은 림프 조직 내에 배 중심의 결여로 인하여, 림프 조직과 비장에 줄기 세포 결합을 저해할 것이다.
화학치료제는 림프절, 페이에르판, 그리고 비장의 백비수를 비롯한 림프양 조직의 배 중심에 줄기 세포 결합을 저해할 수 있다. 또한, 면역 반응을 억제하는 작용제는 비장에서 활동성 배 중심의 숫자를 감소시킬 수 있다. 이런 작용제에는 하기가 포함된다:
가급적 줄기 세포의 투여에 앞서 3-4일 시점에 매일, 3 - 5mg/kg으로 투여되는 아자티오프린 (IMURAN®, Prometheus Laboratories, San Diego, CA). 아자티오프린은 DNA 합성을 위해 요구되는 퓨린 (아데닌과 구아닌)의 합성을 간섭한다. T-세포와 B-세포를 비롯한 고속-성장 세포는 퓨린 합성의 저해에 의해 특히 영향을 받는다.
코르티코스테로이드, 예를 들면, 덱사메타손, 프레드니솔론, 메틸프레드니솔론, 덱사메타손 나트륨 인산염과 베타메타손. 덱사메타손 정제 (Merck) 및 덱사메타손 나트륨 인산염 주사는 줄기 세포로 치료에 앞서 1 - 14일, 더욱 바람직하게는 3 - 7일, 가장 바람직하게는 3 - 4일 시점에 제공될 수 있다. 투여되는 덱사메타손의 총량은 줄기 세포가 림프 조직에 결합할 수 없도록 림프 조직에서 배 중심을 하향-조절하는데 충분한 양이다. 이러한 기간 동안 덱사메타손의 총량은 전체로서 2mg 내지 3g 범위에서 변할 수 있고, 바람직하게는 27mg이다. 덱사메타손의 일일량은 하루 0.75mg 내지 700mg 범위에서 변할 수 있고, 바람직하게는 하루 7mg이다. 덱사메타손은 다른 글루코코르티코이드 스테로이드와 유사하게, 림프 조직에서 배 중심의 형성과 증식을 저해한다.
가급적 줄기 세포의 투여에 앞서 3-4일 시점에 미코페놀산 (Myfortic® 지연 방출 캡슐, Novartis Pharmaceuticals Corporation East Hanover, New Jersey, 음식물 섭취 1시간전 또는 음식물 섭취 2시간후, 공복에서 하루 2회 720 mg 투여 (1440 mg 총 일일량)). 정맥내 주사를 위한 (CellCept® Roche Labs, Nutley, NJ, 미코페놀레이트 모페틸) 정제와 캡슐, 경구 현탁액, 미코페놀레이트 모페틸 염산염), 가급적 줄기 세포의 투여에 앞서 3-4일 시점에 하루 2회 1g IV 투여되거나 또는 하루 2회 1.5g 경구 투여되는 미코페놀산 (MPA)의 2-모르폴리노에틸 에스테르. 이것은 B와 T 림프구의 증식에 이용된 퓨린 합성의 de novo 경로에서 구아닌 모노인산염의 합성 속도를 제어하는 효소인 이노신 모노인산염 탈수소효소를 저해한다. 미코페놀레이트는 강력하고 더욱 오래된 항-증식성 아자티오프린을 대신하여 이용될 수 있다. 이것은 통상적으로, 칼시뉴린 저해제 (시클로스포린 또는 타크롤리무스) 및 프레드니솔론을 또한 포함하는, 면역억제제의 3-화합물 섭생의 일부로서 이용된다.
줄기 세포의 투여에 앞서 3-4일 시점에 3일 동안 하루 100 mg 레플루노미드, Sanofi-Aventis U.S. LLC, Bridgewater, NJ. 레플루노미드는 화학적으로 및 약리학적으로 매우 이질적인 약물들의 DMARD (질환-변경 항-류마티스 약물, disease-modifying antirheumatic drug) 부류에 속하는 피리미딘 합성 저해제이다. 레플루노미드는 디하이드로오로테이트 탈수소효소 (de novo 피리미딘 합성에 관여하는 효소) (약어 DHODH)를 저해하는 면역조절성 약물이다.
가급적 줄기 세포의 투여에 앞서 3-4일 시점에 3일 동안 하루 100 mg 테리플루노미드, 레플루노미드의 활동성 대사산물, Sanofi-Aventis U.S. LLC, Bridgewater, NJ.
메토트렉사트 - 메토트렉사트는 대사길항물질과 항폴산염 약물이다. 이것은 폴산의 대사를 저해함으로써 기능한다. 이것은 가급적 줄기 세포의 투여에 앞서 3-4일 시점에 최대 5일 동안 매일 15 내지 30 mg의 분량으로 경구 또는 근육내 투여된다. Mylan Pharmaceuticals, Morgantown, West Virginia.
면역억제성 마크롤라이드:
타크롤리무스는 가급적 줄기 세포의 투여에 앞서 3-4일 시점에 캡슐 또는 주사 형태, 0.10-0.15 mg/kg/일에서 T-세포에 의한 인터류킨-2 (IL-2) 생산을 감소시킨다 (Astellas Pharma US, Inc. Deerfield, IL).
시클로스포린 - 시클로스포린은 면역적격성 림프구, 특히 T-림프구의 세포질 단백질 시클로필린 (immunophilin)에 결합하는 것으로 생각된다. 가급적 줄기 세포의 투여에 앞서 3-4일 시점에 캡슐, 경구 용액 또는 주사의 형태에서, 그리고 14 - 18 mg/kg/일로 투약되는 Sandimmune® (Novartis Pharmaceuticals Corporation, East Hanover, New Jersey)로서 시판됨.
피메크롤리무스 (Elidel)는 아스코마이신 마크로락탐 (ascomycin macrolactam) 유도체이다. 피메크롤리무스는 마크로필린-12에 결합하고 칼시뉴린을 저해하는 것으로 시험관내에서 밝혀졌다. 따라서 피메크롤리무스는 T-세포로부터 사이토킨의 합성과 방출을 저해함으로써 T-세포 활성화를 저해한다. 피메크롤리무스는 또한, 비만 세포로부터 염증성 사이토킨과 매개자의 방출을 예방한다. 피메크롤리무스는 가급적 줄기 세포 요법에 앞서 최대 6주 동안 국소 1% 크림으로서 이용된다.
구스페리무스는 항종양 항생 스퍼구알린의 유도체이고, 그리고 S와 G2/M 기로 T 세포의 인터류킨-2-촉진된 성숙 및 T 세포의 IFN-감마-분비 Th1 효과기 T 세포로의 분극화를 저해하여, 활성화된 미경험 CD4 T 세포의 성장의 저해를 유발한다. 이것은 연속 21일 동안 0.5mg/kg/일 SC 투여되고, 가급적 줄기 세포의 투여에 앞서 3-4일 시점에 완결된다. Nippon Kayaku Co., Ltd.
가급적 줄기 세포의 투여에 앞서 3-4일 시점에 1Omg/일의 분량으로 경구 투여되는 에베로리무스 (RAD-001). 상품명 조트레스 (USA) 하에 Novartis, East Hanover, NJ.
탈리도미드 탈리도미드는 TNFα의 수준을 감소시킬 수 있다 (THALOMID®, Celgene Corporation, Summit, NJ). 허용되는 용량은 가급적 줄기 세포의 투여에 앞서 3-4일 시점에, 가급적 저녁 식사 1시간후 취침시 100 - 300 mg/일이다.
레날리도미드는 종양 괴사 인자-알파의 저해에서 탈리도미드보다 50,000배 강한 탈리도미드의 유도체이고, 그리고 덜 심각한 유해 약물 반응을 갖는다. Celgene Corporation, Summit, NJ, 줄기 세포의 투여에 앞서 1-21일, 가급적 3-4일 시점에 하루 1회 25 mg 경구.
아나킨라는 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에, 각각 100 mg 단일 분량을 내포하는 주사 농축물로서 전달된 인간 IL-1RA (수용체 길항제에 대한 RA)의 재조합, 비-글리코실화된 이형 Kineret® Biovitrum, Stockholm, Sweden.
인플릭시맙 (상품명 REMICADE®)은 종양 괴사 인자 알파 (TNFα)에 대한 단일클론 항체이다. Centocor Ortho Biotech, Horsham, PA, 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 3 mg/kg 내지 10 mg/kg의 용량으로 정맥내 주입에 의해 투여.
골리무맙 (CNTO 148)은 인간 단일클론 항체이고 상표명 심포니 하에 시판된다. 골리무맙은 TNF-알파를 표적으로 한다. Centocor Ortho Biotech, Horsham, PA, 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 0.5 mls에서 50 mgs의 피하 주사에 의해 투여.
아달리무맙 (HUMIRA, Abbott Laboratories, North Chicago, IL)은 TNF 저해제이고, 아달리무맙은 TNFα에 결합하여 이것이 TNF 수용체를 활성화시키는 것을 예방한다; 아달리무맙은 완전 인간 단일클론 항체로부터 작제되고, 40mg의 아달리무맙을 각각 내포하는 미리 적하된 0.8 mL 주사기와 미리 적하된 펜 장치에 담겨 시판되었다. 줄기 세포 투여에 앞서 배 중심을 하향-조절하기 위해, 적어도 40mg의 아달리무맙이 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-7일 이내에 투여되어야 한다. 바람직하게는, 2회 40mg-분량의 아달리무맙이 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-7일 이내에 투여되어야 한다.
세톨리주맙 페골은 종양 괴사 인자 알파를 지향하는 단일클론 항체이다. 더욱 정확하게는, 이것은 인간화된 TNF 저해제 단일클론 항체의 PEG화된 Fab' 단편이다. 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 200 mg 주사의 2회 피하 주사로서 투여 (UCB Inc., Atlanta, Georgia).
템시롤리무스 (Pfizer Corp.)는 mTOR (라파마이신의 포유동물 표적)의 특정한 저해제이고, 그리고 종양 세포의 증식, 성장, 그리고 생존을 통제하는 단백질의 합성을 간섭한다. 템시롤리무스의 권장량은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 30-60분에 걸쳐 IV 주입되는 25 mg이다.
조타로리무스는 라파마이신의 반-합성 유도체이다, Abbot Laboratories, North Chicago, IL).
바이오리무스 A9 Biosensors International, Singapore.
에쿨리주맙 (상품명 솔리리스)는 보체 단백질 C5를 지향하는 단일클론 항체이다. 이 항체는 C5의 개열을 차단하고 보체-매개된 세포 파괴의 과정을 정지시킨다. 솔리리스는 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 600-mg 분량 또는 900-mg 분량으로 IV 주입에 의해 투여된다. (Alexion Pharmaceuticals Cheshire, CT).
메폴리주맙 (제안된 상품명 보사트리아)은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 750 mg 주입에 의해 투여되는, 인터류킨-5 (IL-5)를 인식하는 인간화된 단일클론 항체이다. GlaxoSmith line, King of Prussia, PA.
오말리주맙 (상품명 졸레어, Genentech / Novartis)은 인간화된 항체이고, 오말리주맙은 인간 면역글로불린 E (IgE)에 선별적으로 결합하는 재조합 DNA-유래된 인간화된 IgG1k 단일클론 항체이다. 졸레어 (오말리주맙) 150 내지 375 mg이 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 SC 투여된다.
네렐리모맙 (BAYX)은 생쥐 항-TNF 항체이고, 그리고 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 10mg/kg으로 투여될 수 있다.
파랄리모맙은 생쥐 항-TNF 항체이고, 그리고 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 10mg/kg으로 투여될 수 있다.
엘실리모맙 (일명, B-E8)은 생쥐 단일클론 항체 및 면역억제성 약물이다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 10mg/kg 분량으로 투여될 수 있다.
레브리키주맙은 IL-13에 특이적으로 결합하도록 설계되는 인간화된 단일클론 항체이고 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 10mg/kg으로 투여될 수 있다. Genentech, South San Francisco, California.
우스테키누맙 (실험명 CNTO 1275, 독점적 상표명 스텔라라, Centocor)은 인간 단일클론 항체이다. 이것은 면역계 및 면역-매개된 염증성 질환을 통제하는 자연 발생 단백질인 인터류킨 12와 인터류킨 23을 지향한다. 90 또는 45 밀리그램의 1개월-이격된 2회 주사, 또는 단일 45 mg 주사, 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 완결됨.
무로모납-CD3 (상품명 오르토클론 OKT3, Janssen-Cilag에 의해 시판됨)은 T 세포의 표면 상에서 막 단백질인 CD3 수용체에서 표적화된 단일클론 항체이다. 이것은 10 내지 14일 동안 단일 일시 정맥내 주사에서 5mg/일 투여된다. 투여는 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 완결되어야 한다. 체중이 30 lb 이하인 어린이는 2.5 mg/일을 복용해야 한다 (Ortho Biotech, aritan, NJ).
오텔릭시주맙은 CD3의 엡실론 사슬을 표적으로 하는 단일클론 항체이다. 이것은 10 내지 14일 동안 단일 일시 정맥내 주사에서 5mg/일 투여된다. 투여는 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 완결되어야 한다. 체중이 30 lb 이하인 어린이는 2.5 mg/일을 복용해야 한다. 상기 항체는 Glaxo SmithKline와의 협력 하에 Tolerx, Inc.에 의해 개발되고 Abbott Laboratories에 의해 제조된다.
테플리주맙은 MGA031과 hOKT3γ1(Ala-Ala)로 알려져 있는 인간화된 Fc-조작된 단일클론 항체이다. 이것은 항-CD3 항체이다. 이것은 10 내지 14일 동안 단일 일시 정맥내 주사에서 5mg/일의 분량으로 본 발명에 따라 투여될 수 있다. 투여는 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 완결되어야 한다. 체중이 30 lb 이하인 어린이는 2.5 mg/일을 복용해야 한다 (Eli Lilly, Indianapolis, IN).
비실리주맙 (임시 상품명 누비온, PDL BioPharma Inc.)은 활성화된 T-세포에서 CD3을 표적으로 하는 인간화된 단일클론 항체이다. 이것은 10 내지 14일 동안 단일 일시 정맥내 주사에서 5mg/일의 분량으로 본 발명에 따라 투여될 수 있다. 투여는 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 완결되어야 한다. 체중이 30 lb 이하인 어린이는 2.5 mg/일을 복용해야 한다.
클레놀릭시맙은 CD4에 대한 단일클론 항체이다. 이것은 10 내지 14일 동안 단일 일시 정맥내 주사에서 5mg/일의 분량으로 본 발명에 따라 투여될 수 있다. 투여는 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 완결되어야 한다.
켈릭시맙은 단백질 CD4를 거쳐 백혈구 세포에 결합하는 단일클론 항체이다. 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 3mg/kg 분량으로 주입 투여된다.
자놀리무맙 (예상된 상품명 HuMax-CD4)은 CD4를 표적으로 하는 인간 단일클론 항체이고 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 20mg/kg/일의 분량으로 투여된다 (Genmab, AJS COPENHAGEN/TenX Biopharma, Inc., Philadelphia, PA).
에팔리주맙 (상품명 랍티바, Genentech, Merck Serono)은 재조합 인간화된 단일클론 항체이다. 에팔리주맙은 림프구 기능-연관된 항원 1의 CD11a 아단위에 결합한다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 20mg/kg 분량으로 피하 주사에 의해 주1회 투여될 수 있다.
rhuMAb로 알려져 있는 에를리주맙은 Roche와의 협력 하에 Genentech에 의해 개발된 재조합 인간화된 단일클론 항체이다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 20mg/kg 분량으로 피하 주사에 의해 주1회 투여될 수 있다. 상기 약물은 혈관에서 성장 인자를 차단함으로써 기능한다. 구체적으로, 에를리주맙은 CD18 및 LFA-1 인테그린을 표적으로 한다.
아푸투주맙은 항-CD20 단일클론 항체이다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 20mg/kg 분량으로 피하 주사에 의해 주1회 투여될 수 있다. (Hoffmann-La Roche Inc.).
오크렐리주맙은 인간화된 항-CD20 단일클론 항체이다. 이것은 성숙 B 림프구를 표적으로 한다. 이것은 Hoffmann-La Roche의 자회사 Genentech, 그리고 Biogen Idee에 의해 개발 중에 있다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 200 mg & 600 mg으로 투약된다.
파스콜리주맙은 항-IL-4 인간화된 단일클론 항체이다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 20mg/kg 분량으로 피하 주사에 의해 주1회 투여될 수 있다.
루밀릭시맙은 CD23을 표적으로 하는 단일클론 항체이다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 50 mg/m2, 450 mg/m2까지, 500 mg/m2까지 투약될 수 있다. 상기 약물은 게잡이 원숭이 (Macaca irus)와 호모 사피엔스 (Homo sapiens)로부터 키메라 항체이다. (Biogen IDEC).
테넬릭시맙은 면역 자극성 단백질 CD40에 결합하는 키메라 단일클론 항체이다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 20mg/kg 분량으로 피하 주사에 의해 주1회 투여될 수 있다.
토랄리주맙 (IDEC 131)은 인간화된 단일클론 항체이다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 20mg/kg 분량으로 피하 주사에 의해 주1회 투여될 수 있다. (IDEC Pharmaceuticals Corporation).
아셀리주맙은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 0.5-mg/kg, 1.0-mg/kg, 그리고 2.0-mg/kg 범위에서 변하는 분량으로 I.V. 주입에 의해 투여되는 항-CD62L이다.
갈릭시맙은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 500mg/m2의 분량으로 IV 투여되는 항-CD80 (Biogen Idee) 단일클론 항체이다. 이것은 게잡이 원숭이 (Macaca irus)와 호모 사피엔스 (Homo sapiens)로부터 키메라 항체이다.
가빌리모맙은 Abgenix에 의해 개발된 생쥐 단일클론 항체 (일명, ABX-CBL)이다. 이것은 항원 CD147에 결합한다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 20mg/kg 분량으로 I.V. 주입에 의해 투여될 수 있다.
BG9588은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 20 mg/kg으로 투여되는 인간화된 항-CD40L이다. CD40 리간드 또는 CD40L로 불리는 CD154에 대한 항체의 투여는 활성화된 T 세포에서 일차적으로 발현되고 분자의 TNF 슈퍼패밀리의 구성원인 단백질이다. 이것은 항원-제시 세포 (APC)에서 CD40에 결합하고, 이것은 표적 세포 유형에 따라 많은 효과를 발생시킨다. 일반적으로, CD40L은 보조자극성 분자의 역할을 수행하고 APC에서 MHC 분자에 의한 T 세포 수용체 자극과 연관하여 APC에서 활성화를 유도한다. 전체적으로, CD40L은 3가지 결합 상대: CD40, α5β1 인테그린 및 αΠbβ3을 갖는다.
CD154 (CD40 리간드)에 결합하고, 따라서 CD40과 CD154 사이에 상호작용을 차단하는 단일클론 항체, (Hu5c8) 5c8은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 20 mg/kg으로 투여된다.
벨리무맙 (등록명 베닐스타, 이전에 LymphoStat-B)은 TNF 패밀리의 B 세포 활성화 인자 (BAFF)로서 알려져 있는 B-림프구 자극물 (BLyS)을 특이적으로 인식하고 이의 생물학적 활성을 저해하는 완전 인간 단일클론 항체이다. (Human Genome Sciences). 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 10mg/kg 분량으로 투여될 수 있다.
이플리무맙 (일명, MDX-010 또는 MDX-101)은 Bristol-Myers Squibb에 의해 개발되는 항-CTLA-4 (세포독성 T-세포 림프구-연관됨) 인간 단일클론 항체이다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 10mg/kg의 특효적 약물로서 투여된다.
트레멜리무맙 (이전에 티실리무맙, CP-675,206)은 Pfizer에 의해 생산된 완전 인간 IgG2 단일클론 항체이다. 이것은 활성화된 T 림프구의 표면 상에서 발현되는 단백질 CTLA-4에 결합한다. 트레멜리무맙은 CTLA-4에 항원-제시 세포 리간드 B7.1과 B7.2의 결합을 차단하여 T-세포 활성화의 B7-CTLA-4-매개된 하향조절의 저해를 유발한다; 차후에, B7.1과 B7.2는 다른 T-세포 표면 수용체 단백질, CD28과 상호작용하여, B7-CTLA-4-매개된 저해에 의한 저항을 받지 않는 B7-CD28-매개된 T-세포 활성화를 유발한다. 트레멜리무맙은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 3 mg/kg, 6 mg/kg, 10 mg/kg, 15mg/kg으로 IV 주입에 의해 투여된다.
베르틸리무맙은 에오탁신-1에 결합하는 인간 단일클론 항체이다. (iCo Therapeutics Inc. Vancouver, B.C.). 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 10mg/kg 분량으로 투여된다.
레르델리무맙 (CAT-152)은 Cambridge Antibody Technology에 의해 개발되고 있는 항-TGF 베타-2이다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 10mg/kg 분량으로 투여될 수 있다.
메텔리무맙 (CAT-192)은 TGF 베타 1을 중화시키는, Cambridge Antibody Technology에 의해 개발된 인간 IgG4 단일클론 항체이다. 본 발명에 따라서, 이것은 가급적 줄기 세포 투여에 앞서 3-4일 시점에 10mg/kg 분량으로 투여될 수 있다. 나탈리주맙은 세포 부착 분자 α4-인테그린에 대한 인간화된 단일클론 항체이다. 이것은 Biogen Idee와 Elan에 의해 티사브리로서 공동-시판되고, 그리고 이전에 안테그렌으로 불렸었다. 나탈리주맙은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 대략 1시간에 걸쳐 300 mg 분량으로 정맥내 주입에 의해 투여된다.
상품명 악테므라와 로악테므라 하에 Hoffmann-La Roche와 Chugai에 의해 개발된 토실리주맙 또는 아틸리주맙은 인터류킨-6 수용체 (IL-6R)에 대한 인간화된 단일클론 항체이다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 8 mg/kg으로 정맥내 주입에 의해 투여될 수 있다.
오둘리모맙은 면역 반응에 관여하는 단백질 림프구 기능-연관된 항원 1의 알파 사슬을 지향하는 생쥐 단일클론 항체이다. 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 10mg/kg의 특효적 약물로서 투여된다.
바실릭시맙 (상품명 시뮬렉트)은 T 세포의 IL-2 수용체의 α 사슬 (CD25)에 대한 키메라 생쥐-인간 단일클론 항체이다. 용량은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 2회 20 mg이다.
다클리주맙 (상품명 제나팍스)은 T 세포의 IL-2 수용체의 알파 아단위에 대한 치료적 인간화된 단일클론 항체이다. Roche Pharmaceuticals, Hoffmann - La Roche Inc, 340 Kingsland Street, Nutley, New Jersey. 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 10mg/kg의 특효적 약물로서 투여된다.
이놀리모맙은 인터류킨-2 수용체의 알파 사슬에 대해 표적화된 생쥐 단일클론 항체이다. OPi (이전에, Orphan Pharma International). 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 10mg/kg의 특효적 약물로서 투여된다.
졸리모맙 아리톡스는 생쥐 단일클론 항체이고, 그리고 리신 단백질의 A 사슬에 연결되는 항-CD5 항체이다 (이것은 상기 약물의 명칭에서 아리톡스에 의해 반영된다). 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 10mg/kg 분량으로 투여될 수 있다.
아토롤리무맙은 레서스 인자를 지향하는 생쥐 단일클론 항체이다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 10mg/kg 분량으로 투여될 수 있다.
세델리주맙은 항-CD4 단일클론 항체이다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 10mg/kg 분량으로 투여될 수 있다.
도를릭시주맙은 키메라/인간화된 단일클론 항체 및 면역억제성 약물이다. 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 10mg/kg 분량의 특효적 약물로서 투여된다.
폰톨리주맙 (상품명 HuZAF)은 항-인터페론 감마 인간화된 단일클론 항체이다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 4.0 mg/kg 또는 10.0 mg/kg으로서 제공된 폰톨리주맙의 I.V. 분량으로 투여될 수 있다. (PDL Biopharma).
갠테네류맙은 항-베타 아밀로이드 단일클론 항체 (Roche)이다. 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 10mg/kg 분량의 특효적 약물로서 투여된다.
고밀릭시맙은 낮은 친화성 IgE 수용체 (FceRII 또는 CD23)를 표적으로 하는 단일클론 항체이다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 10mg/kg 분량으로 투여될 수 있다.
마실리모맙은 T-세포 수용체를 표적으로 하는 생쥐 단일클론 항체이다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 10mg/kg 분량으로 투여될 수 있다.
모롤리무맙은 인간 레서스 인자에 대한 인간 단일클론 항체이다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 10mg/kg 분량으로 투여될 수 있다.
펙셀리주맙은 보체계의 성분 5에 대해 표적화된 단일클론 항체의 단일 사슬 가변 단편이다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 10mg/kg 분량으로 투여될 수 있다.
레슬리주맙은 항-IL-5 인간화된 단일클론 항체이다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 레슬리주맙 3.0 mg/kg의 선호되는 분량으로 주입에 의해 투여될 수 있다. (Ception Therapeutics Inc).
류크어레스트와 Hu23F2G로 알려져 있는 로벨리주맙은 백혈구 세포를 억제하는 항-CD11/CD18 인간화된 단일클론 항체이다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 10mg/kg 분량으로 투여될 수 있다.
시플리주맙 (MEDI-507)은 CD2에 대한 인간 IgG1, 카파를 갖는 항-CD2 단일클론 항체이다. 이 작용제는 강력한 면역조절성 효과를 나타내고, T와 NK 세포의 기능을 선별적으로 억제한다. 시플리주맙은 T 세포와 NK 세포에서 발견되는 특정한 수용체인 CD2에 결합하고, 따라서 CD2+ 세포의 용해, 면역계의 선별성 억제, 그리고 활성화된 T 세포 성장의 제어를 유발하는 숙주 면역 반응을 유인한다. 본 발명에 따라서, 시플리주맙은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 0.04 mg/kg i.v. 및 5 또는 7 mg/kg s.c의 선호되는 분량으로 투여될 수 있다. (Medimmune).
탈리주맙 (TNX-901)은 Tanox, Houston, Texas에 의해 개발되고 있는 인간화된 단일클론 항체이다. 이것은 비만 세포와 호염기구에서 IgE 수용체에 의해 이미 결합된 IgE에 결합 없이, 면역글로불린 E (또는 IgE) 및 특히, IgE-발현 B 림프구를 표적으로 하도록 설계되었다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 10mg/kg 분량으로 투여될 수 있다.
오말리주맙은 Tanox, Novartis, 그리고 Genentech에 의해 개발된 항-IgE 단일클론 항체이다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 10mg/kg 분량으로 투여될 수 있다.
텔리모맙 아리톡스는 생쥐 단일클론 항체이다. 이 항체는 리신 단백질의 A 사슬에 연결된다 (이것은 상기 약물의 명칭에서 아리톡스에 의해 반영된다). 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 10mg/kg 분량으로 투여될 수 있다.
바팔릭시맙은 항-VAP-1 키메라 단일클론 항체이다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 10mg/kg 분량으로 투여될 수 있다.
베팔리모맙은 항-VAPI 생쥐 단일클론 항체이다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 10mg/kg 분량으로 투여될 수 있다.
아바타셉트 (오렌시아로서 시판됨)은 B7에 결합하여 T 세포의 완전한 활성화를 예방할 수 있는 분자인 CTLA-4의 세포외 도메인에 융합된 면역글로불린으로 구성되는 융합 단백질이다. 아바타셉트는 체중에 기초된 특정된 투약 일정에 따라 30-분 정맥내 주입으로서 투여되어야 한다. 용량은 바람직하게는, 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 < 60 kg 경우에 500mg; 60 kg-100 kg의 경우에 750 mg; 그리고 > 100 kg의 경우에 1 그램이어야 한다.
벨라타셉트 (Bristol-Myers-Squibb)는 T-세포 보조자극에 결정적이고, T-세포 활성화의 과정을 선별적으로 차단하는 분자인 CTLA-4의 세포외 도메인에 연결된 인간 IgG1 면역글로불린의 Fc 단편으로 구성되는 융합 단백질이다. 이것은 개발되었다. 이것은 단지 2개 아미노산에 의해 아바타셉트 (Orencia)와 상이하다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 < 60 kg 경우에 500mg; 60 kg-100 kg의 경우에 750 mg; 그리고 > 100 kg의 경우에 1 그램의 선호되는 용량으로, 체중에 기초된 특정된 투약 일정에 따라 30-분 정맥내 주입으로서 투여될 수 있다.
에타네르셉트 (상품명 엔브렐, Amgen, Thousand Oaks, CA)는 TNF 저해제로서 기능함에 의해 종양 괴사 인자 (TNF, 면역계의 일부분)을 간섭함으로써 자가면역 질환을 치료하는 약물이다. 에타네르셉트는 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 25 mg 또는 50 mg의 분량으로 피하 (s.c.) 투여될 수 있다.
페그수네르셉트는 PEG화된 가용성 종양 괴사 인자 수용체이다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 9 mg/kg의 선호되는 용량으로 s.c 투여될 수 있다.
아플리베르셉트는 잠재적 항혈관형성 활성을 갖는 인간 IgG1의 불변 영역 (Fc)에 융합된 인간 혈관 내피 성장 인자 수용체 1 (VEGFR1)과 2 (VEGFR2)의 세포외 도메인의 분절로 구성되는 단백질이고 Sanofi-Aventis와 Regeneron Pharmaceuticals에 의해 공동-개발되고 있다. 항-혈관형성 작용제인 아플리베르셉트 (VEGF Trap)는 모든 형태의 혈관 내피 성장 인자-A (VEGF-A로 불림)에 결합하도록 특이적으로 설계된 융합 단백질이다. 이에 더하여, 아플리베르셉트는 태반 성장 인자 (PLGF)에 결합하고, 이것 역시 종양 혈관형성에 관여하였다. 아플리베르셉트는 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 2 밀리그램/킬로그램 (mg/kg) 또는 4 mg/kg의 선호되는 분량으로 주사 또는 IV 주입에 의해 투여될 수 있다.
알레파셉트는 융합 단백질이다: 이것은 항체의 일부분을 일부 유형의 T 세포의 성장을 차단하는 단백질과 결합시킨다. AMEVIVE® (알레파셉트)는 인간 IgG1의 Fc (힌지, CH2와 CH3 도메인) 부분에 연결된 인간 백혈구 기능 항원-3 (LFA-3)의 세포외 CD2-결합 부분으로 구성되는 면역억제성 이합체성 융합 단백질이다. 선호되는 용량은 바람직하게는, 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 투여된 7.5 mg IV 또는 15 mg IM이다. Astellas Pharma US, Inc. Deerfield, IL 60015.
IL-1 Trap (상품명 알카리스트 하에 시판됨)으로 알려져 있는 릴로나셉트는 인간 인터류킨-1 수용체의 세포외 도메인 및 IL-1h에 결합하고 이를 중화시키는 인간 IgG1의 FC 도메인으로 구성되는 이합체성 융합 단백질이다. 치료는 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 2가지 상이한 부위에서 동일한 일자에 각각 제공된 160 mg의 2회, 2 mL, 피하 주사로서 전달되는 320 mg의 적하 용량 (loading dose)으로 시작되어야 한다. 12세 내지 17세의 소아 환자: 치료는 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 2mL의 최대 단일-주사 용적을 갖는 1회 또는 2회 피하 주사로서 전달되는 320 mg의 최대량까지 4.4 mg/kg의 적하 용량으로 시작되어야 한다. Regeneron에 의해 생산됨.
다세투주맙 (일명, SGN-40 또는 huS2C6으로서 알려짐)은 항-CD40 인간화된 단일클론 항체이다. CD40 항원은 다발성 골수종, 비-호지킨 림프종 및 만성 림프구성 백혈병을 비롯한 대부분의 B-계통 혈액학적 악성종양에서 고도로 발현된다. CD40은 또한, 방광 암, 신장 암과 난소 암을 비롯한 많은 유형의 고형 종양에서, 그리고 면역학적 질환에서 일정한 역할을 하는 세포에서 발견된다. 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 10mg/kg의 선호되는 분량으로 특효적 약물로서 투여된다. Seattle Genetics, Inc.
HCD122는 완전 인간 길항제 항-CD40 단일클론 항체이다. CD40은 CD40 리간드 (CD40L)에 의한 활성화를 통해, 면역 반응에서뿐만 아니라 세포 성장과 생존 신호전달에서 중추적인 역할을 하는 세포-표면 수용체이다. 이것은 일반적으로 과다발현되고 B-세포 악성종양에서 활성화된다. 본 발명에 따라서, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 10mg/kg 분량의 특효적 약물로서 투여될 수 있다. 이것은 XOMA/NOVARTIS ONCOLOGY에 의해 개발되고 있다.
상품명 리툭산과 맙테라 하에 판매되는 리툭시맙 (Genentech, Inc., San Francisco, CA)은 주로 B 세포의 표면 상에서 발견되는 단백질 CD20에 대한 키메라 단일클론 항체이다. 이런 이유로, 이것은 B 세포를 파괴할 수 있다. CD20은 초기 B 전구 세포에서부터 분화에서 후기까지 B 세포에서 폭넓게 발현되지만, 최종 분화된 혈장 세포에서 부재한다. 리툭산은 100 mg (10 mL) 또는 500 mg (50 mL) 1회용 바이알에서 10 mg/mL의 농도로 공급된다. 이것은 50 mg/hr의 속도에서 주입으로서 투여될 수 있다. 주입 독성의 부재에서, 바람직하게는 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 투여된 400 mg/hr의 최대까지 30분마다 50 mg/hr 증분에 의해 주입 속도 증가. 선호되는 권장량은 가급적 줄기 세포 투여에 앞서 3-4일 시점에 투여된 IV 주입으로서 375 mg/m2이다.
리툭시맙은 또한, 인듐-111- (In-111-) 제발린의 투여에 앞서 4시간 이내 및 이트륨-90- (Y-90-) 제발린의 투여에 앞서 4시간 이내에 250 mg/m2의 선호되는 분량으로 리툭시맙을 주입함으로써 Zevalin®의 한 성분으로서 투여될 수 있고, 이것은 줄기 세포 투여에 앞서 7-14일 이내 및 가급적 3-4일 이내에 수행되어야 한다. 리툭산은 또한, 가급적 줄기 세포 투여에 앞서 3-4일 시점에 메토트렉사트와 공동으로 투여될 수 있다. Biogen Idee Inc. 및 Genentech USA, Inc.
상품명 제발린 하에 판매되는 이브리투모맙 티욱세탄은 B-세포를 표적으로 하는 단일클론 항체 방사성면역요법제이다. 이 약물은 방사성 동위원소 (이트륨-90 또는 인듐-111)가 추가되는 킬레이터 티욱세탄과 공동으로 단일클론 생쥐 IgG1 항체 이브리투모맙을 이용한다.
티욱세탄은 탄소 주쇄가 이소티오시아나토벤질과 메틸 기를 내포하는 DTPA의 변형된 이형이다. 아데노신 탈아미노효소 결핍은 또한, 데옥시ATP의 축적을 유인하는 작용제가 그러한 것처럼, 감소된 활동성 배 중심 형성을 유발할 것이다 (J Immunol 171 : 5562-5570, 2003). 유사하게, CCR7의 발현을 증가시키거나 CCR7을 활성화시키는 작용제는 감소된 활동성 배 중심 형성을 유발할 것이다.
줄기 세포: 정의, 단리, 전달 및 치료적 용도
본 발명의 범위 내에 용어 줄기 세포에는 원하는 조직으로 분화할 수 있는 임의의 세포가 포함된다. 이런 세포에는 만능성 줄기 세포, 배아 줄기 세포, 다능성 성체 줄기 세포, 그리고 조상과 전구 세포가 포함된다. "줄기 세포"는 일정한 조건 하에, 오랜 기간 동안, 또는 성체 줄기 세포의 경우에, 생명체의 생존 동안 그 자신을 재생하는 능력을 갖는 배아, 태아, 또는 성체로부터 세포이다. 이것은 또한, 신체의 조직과 장기를 구성하는 전문화된 세포를 발생시킬 수 있다.
"만능성 줄기 세포"는 신체의 모든 세포가 발생하는 3가지 배엽 (germ layer) (중배엽, 내배엽, 그리고 외배엽)으로부터 발달하는 세포 유형을 발생시키는 능력을 갖는다. 인간 만능성 줄기 세포의 공지된 자연 공급원은 생식선의 일부가 되도록 운명지어진 태아 조직으로부터 초기 인간 배아로부터 단리되고 배양된 것들이다.
"배아 줄기 세포"는 배반포로 불리는 초기 (4- 내지 5-일) 배아의 일부인, 내부세포괴 (inner cell mass)로 불리는 일군의 세포로부터 유래된다. 일단 배반포로부터 이전되면, 내부세포괴의 세포는 배아 줄기 세포로 배양될 수 있다.
"성체 줄기 세포"는 분화된 (전문화된) 조직에서 발생하고, 그 자신을 재생하고, 그리고 적절한 조직에 이전될 때 그가 위치하는 조직의 모든 전문화된 세포 유형이 산출되도록 전문화되는 분화되지 않은 (전문화되지 않은) 세포이다. 성체 줄기 세포는 생명체의 일생 동안 그들 자신의 동일한 사본을 만들 수 있다. 이러한 성질은 "자기 재생 (self-renewal)"으로 지칭된다. 성체 줄기 세포는 통상적으로, 분열하여 조상 또는 전구 세포를 산출하고, 이들은 이후, 특징적인 형상과 전문화된 기능, 예를 들면, 근육 세포 수축 또는 신경 세포 신호전달을 갖는 "성숙" 세포 유형으로 분화하거나 발달한다. 성체 줄기 세포의 공급원에는 골수, 혈액, 안구의 각막과 망막, 뇌, 골격근, 치수, 간, 피부, 위장관과 췌장의 내층이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다.
개체에 줄기 세포의 전달 또는 투여는 외인성 줄기 세포의 전달 또는 투여 및 내인성 줄기 세포의 동원뿐만 아니라 자발적으로 방출된 내인성 줄기 세포의 생물학적 이용 효율을 증강시키는 것을 포함한다.
골수로부터 줄기 세포는 가장 많이 연구된 유형의 성체 줄기 세포이다. 현재, 이들은 이식을 거쳐 골수에 다양한 혈액과 면역 성분을 복원하기 위해 임상적으로 이용된다. 현재, 골수에서 발견된 2가지 주요 유형의 줄기 세포가 확인된다: 전형적으로 혈액과 면역 세포를 형성하는 것으로 간주되는 조혈 줄기 세포 (HSC, 또는 CD34+ 세포), 그리고 전형적으로 뼈, 연골, 근육과 지방을 형성하는 것으로 간주되는 기질 (중간엽) 줄기 세포 (MSC). 하지만, 양쪽 유형의 골수-유래된 줄기 세포는 최근에, 동일한 조직을 형성하는 능력에서 광범위한 가소성과 다능성을 드러냈다. 뼈의 수강 내에 위치하는 골수는 성체 인간에서 조혈의 주요 부위이다. 이것은 하루 체중 킬로그램당 약 6 십억 세포를 생산한다. 조혈 활동성 (적색) 골수는 출생후 소년후기까지 퇴행하고, 그 이후 이것은 하부 두개골 척추골 (skull vertebrae), 어깨와 골반대, 늑골, 그리고 흉골에서 집중된다. 지방 세포는 손, 발, 다리와 팔의 뼈에서 조혈 세포를 대체한다 (황골수). 지방은 성체에서 적골수의 공간의 약 50 퍼센트를 점유하게 되고, 그리고 노화함에 따라서 추가의 지방 변성 (fatty metamorphosis)이 천천히 지속된다. 매우 늙은 개체에서, 유점액소 물질로 지방의 젤리 같은 변형 (gelatinous transformation)이 일어날 수 있다 (백골수). 황골수는 용혈성 빈혈과 같은 연장된 수요가 존재하면, 조혈 활동성 골수로 복귀할 수 있다. 따라서 조혈은 적골수의 용적을 증가시키고 조상에서 성숙 세포로의 발달 (통과) 시간을 감소시킴으로써 확대될 수 있다.
골수 기질은 골내막 (endosteum)에서 피질 모세혈관 (cortical capillary)으로부터 기원하고 전신 정맥 순환 (systemic venous circulation)에 들어가는 수집 혈관 (collecting vessel)에서 종결하는 정맥동의 네트워크로 주로 구성된다. 3층성 정맥동 벽 (trilaminar sinus wall)은 내피 세포; 발달되지 않은 얇은 최하부 막, 그리고 지방세포로 전환할 수 있는 섬유아세포인 외막 망상 세포 (adventitial reticular cell)로 구성된다. 내피 및 망상 세포는 조혈 사이토킨의 공급원이다. 조혈은 가시사이 공간 (intersinus space)에서 일어나고, 그리고 자극성과 저해성 사이토킨의 복합 어레이, 세포-대-세포 접촉 및 근위 세포에 대한 세포외 매트릭스 성분의 효과에 의해 제어된다. 이러한 독특한 환경에서, 림프조혈 줄기 세포는 모든 혈액 세포 유형으로 분화한다. 정상 상태 혈액 세포 수준을 유지하기 위해 성숙 세포가 생산되고 방출된다. 이러한 시스템은 혈액 손실, 용혈, 염증, 면역 혈구 감소, 그리고 기타 원인의 결과로써, 추가의 세포에 대한 증가된 요구를 충족할 수 있다.
"조상 또는 전구" 세포는 부분적으로 전문화된다; 이것은 자기 재생하고, 또한 분화된 세포를 발생시킨다. 연구자들은 종종, 줄기 세포가 분열할 때 2개의 새로운 세포 중에서 하나가 종종, 그 자신을 다시 한 번 복제할 수 있는 줄기 세포라는 점에서, 전구 세포/조상 세포를 성체 줄기 세포와 구별한다. 대조적으로, 조상/전구 세포는 분열할 때, 더욱 많은 조상/전구 세포를 형성할 수 있거나, 또는 2개의 전문화된 세포를 형성할 수 있다. 조상/전구 세포는 손상되거나 사멸하는 세포를 대체하고, 따라서 간 또는 뇌와 같은 조직의 완전성 (integrity)과 기능을 유지할 수 있다.
본 발명에 유용한 줄기 세포를 단리하고 배양하기 위한 수단은 널리 공지되어 있다. 제대혈은 조혈 줄기 세포의 풍부한 공급원이다. 제대혈로부터 획득된 줄기 세포 및 골수 또는 말초 혈액으로부터 획득된 줄기 세포는 이식 이용의 경우에 매우 유사한 것으로 나타난다. 태반은 중간엽 줄기 세포에 대한 우수하고 쉽게 이용가능한 공급원이다. 게다가, 중간엽 줄기 세포는 지방 조직과 골수 기질 세포로부터 유래될 수 있는 것으로 밝혀졌고, 그리고 다른 조직에서 존재하는 것으로 추측되었다. 양수와 양막 조직은 줄기 세포의 다른 우수한 공급원이다. 성체 줄기 세포가 유래될 수 있는 장기에서 극적인 정성적 및 정량적 차이가 있긴 하지만, 이들 세포 간에 최초 차이는 상대적으로 무의미하고 그들이 나타내는 유사한 범위의 가소성에 의해 균형 잡힐 수 있다. 가령, 적절한 조건 하에, 조혈과 중간엽 성체 줄기 세포 둘 모두 심장 근육 세포가 될 수 있다. 성체 줄기 세포에 대한 전체 잠재력 범위의 설정 (delineation)이 막 시작되었다. 줄기 세포는 공지된 방법을 이용하여 단리되고 분화될 수 있다. 가령, 생쥐에서, 골수 세포는 생쥐를 희생시키고, 한 쌍의 가위로 다리뼈를 절단하고, 그리고 줄기 세포를 흘려 보냄으로써 단리된다. 줄기 세포는 또한, 골수 세포를 원치 않는 세포, 예를 들면, CD4+와 CD8+ (T 세포), CD45+ (panB 세포), GR-1 (과립구)에 결합하는 항체로 패닝 (panning)함으로써 골수 세포로부터 단리될 수 있다. 이러한 프로토콜의 실례를 위해, Inaba et al., J. Exp. Med. 176: 1693-1702(1992)를 참조한다.
도 1에서는 전혈의 구배 원심분리 (gradient centrifugation)에 기인하는 층의 전형적인 도면 (typical view)을 도시한다. 1은 혈소판을 보여준다; 2는 MNC와 줄기 세포를 갖는 연막층을 보여준다; 3은 Ficoll을 보여준다; 그리고 4는 RBC 펠릿과 줄기 세포를 보여준다.
인간에서, CD34+ 조혈 줄기 세포는 제대혈, 골수, 그리고 동원된 말초 혈액을 비롯한 다양한 공급원으로부터 획득될 수 있다. CD34+ 세포의 정제는 항체 친화성 절차에 의해 달성될 수 있다. CD34+ 세포를 단리하기 위한 친화성 칼럼 단리 절차는 Ho et al., Stem Cells 13 (suppl. 3): 100-105(1995)에 의해 기술된다. 또한, Brenner, Journal of Hematotherapy 2: 7-17 (1993)을 참조한다. 중간엽 줄기 세포를 단리하고, 정제하고, 배양 방식으로 확대하기 위한 방법은 공지되어 있다. MSC에 대한 특이적 항원 역시 공지되어 있다 (U.S. Pat. Nos. 5,486,359와 5,837,539를 참조한다).
줄기 세포는 유사 세포 분열을 통해 그 자신을 재생하고 다양한 범위의 전문화된 세포 유형으로 분화하는 능력으로 특징된다. 줄기 세포는 능력의 범위를 따라서 존재한다. 전능성 줄기 세포는 완전한 생물체의 발달에 필요한 모든 조직을 산출할 수 있는 세포, 예를 들면, 수정란 (fertilized egg)이다. 만능성 줄기 세포는 3가지 배엽 모두에 대한 줄기 세포를 발생시킬 수 있는 세포이고, 여기에는 배아 줄기 세포, 정조 줄기 세포 (Cell. 119(7): 1001-1012, 2009; NATURE 440: 1199-1203, 2006), 또는 4배체 배아 내로 주입될 때, 완전한 생물체 (Stem Cell Rev. 2010)를 발생시킬 수 있지만 태반과 같은 필요한 배외 (extra-embryonic) 조직을 발생시킬 수 없는 유도된 만능성 줄기 세포와 같은 세포가 포함된다. 매우-작은 배아 유사 줄기 세포는 골수, 혈액, 심장 및 3가지 배엽 계통 모두로부터 세포의 세포를 발생시킬 수 있는 성체의 기타 조직 내에서 발견되는 세포이긴 하지만, 이들은 4배체 보완실험 (tetraploid complementation) 분석에서 완전한 생물체를 산출하는 것으로 아직 밝혀지지 않았고, 따라서 이들이 체세포 각인 (somatic imprinting)에 의해 4배체 보완실험 (tetraploid complementation)에서 그들의 활성이 예방되는 진정한 만능성 줄기 세포인지, 또는 이들이 더욱 한정되지만 극히 유연한 다능성 줄기 세포인지가 불명확하다 (DEVELOPMENTAL DYNAMICS 236:3309-3320, 2007). 다능성 줄기 세포는 제한된 계통 내에서 다양한 기능 세포를 발생시킬 수 있는 세포, 예를 들면, 조혈 줄기 세포 (HSC) (J Exp Med. 207(6): 1127-1130, 2010), 지방 줄기 세포 (ASC) (Stem Cells Dev. 2010 [Epub ahead of print]) (6) 또는 중간엽 줄기 세포 (MSC) (StemBook, Cambridge (MA): Harvard Stem Cell Institute; 2008-2009)이다.
줄기 세포는 그들이 분화할 수 있고 그들의 효능에 의해 구별되는 정도에 의해 더욱 특성화될 수 있다. 효능은 줄기 세포의 분화 잠재력 (상이한 세포 유형으로 분화하는 잠재력)을 명시한다.
전능성 (a.k.a omnipotent) 줄기 세포는 배아와 배외 세포 유형으로 분화할 수 있다. 이런 세포는 완전한 생존하는 생물체를 구성할 수 있다. 이들 세포는 난과 정자 세포의 융합으로부터 생산된다. 수정란의 일차 극소수 분열에 의해 생산된 세포 역시 전능성이다.
만능성 줄기 세포, 다시 말하면, 3가지 배엽 중에서 임의의 한 가지로부터 유래된 세포는 전능성 세포의 후손이고 거의 모든 세포로 분화할 수 있다.
다능성 줄기 세포는 다수의 세포의 분화할 수 있지만, 세포의 밀접하게 관련된 패밀리의 세포로만 분화할 수 있다.
제한다능성 줄기 세포는 소수의 세포, 예를 들면, 림프양 또는 골수성 줄기 세포로만 분화할 수 있다.
단능성 세포는 단지 한 가지 세포 유형, 그들 자신만을 생산할 수 있지만, 그들을 비-줄기 세포 (가령, 근육 줄기 세포)로부터 구별시키는 자기 재생의 성질을 갖는다.
2가지 넓은 유형의 포유동물 줄기 세포가 존재한다: 배반포의 내부세포괴로부터 단리되는 배아 줄기 세포, 그리고 성체 조직에서 발견되는 성체 줄기 세포.
성체 줄기 세포는 배아 발달후 신체 전역에서 발견되는 분화되지 않은 세포인데, 이들은 세포 분열에 의해 증식하여 죽어가는 세포를 새로 보충하고 손상된 조직을 재생한다. 또한, 체세포 줄기 세포로서 알려져 있는 이들은 어린 동물과 인간에서뿐만 아니라 성체 동물과 인간에서 발견될 수 있다. 성체 줄기 세포의 유형에는 조혈 줄기 세포, 유방 줄기 세포, 중간엽 세포, 내피 줄기 세포, 신경 줄기 세포, 후각 성체 줄기 세포, 지방-유래된 줄기 세포, 신경관 줄기 세포, 그리고 고환 줄기 세포가 포함된다.
조상 세포는 특정한 유형의 세포로 분화하는 경향을 갖는다. 하지만, 줄기 세포와 대조적으로, 이들은 이미 훨씬 특이적이다: 이들은 그들의 "표적" 세포로 분화하도록 압박된다. 줄기 세포와 조상 세포 사이에 가장 중요한 차이점은 줄기 세포가 무한히 복제할 수 있는 반면, 조상 세포는 단지 제한된 횟수만 분열할 수 있다는 것이다. 정확한 정의에 관한 논쟁은 여전하고, 그리고 개념은 여전히 진화하고 있다.
용어 "조상 세포"와 "줄기 세포"는 때때로 필적한다.
전혈, 골수, 지방 조직, 제대혈, 그리고 기타 조직의 단핵 분획물 내에서 발견되는 줄기 세포뿐만 아니라 이들 단핵 분획물로부터 단리된 줄기 세포는 인간 환자에 이익을 제공하는 것으로 증명되었다. 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)는 둥근 핵을 갖는 임의의 혈액 세포이다. 가령: 림프구, 단핵구 또는 대식세포. 이들 혈액 세포는 감염과 싸우고 침입자에 적응하기 위해 면역계에서 중요한 성분이다. 림프구 집단은 T 세포 (CD4와 CD8 양성 -75%), B 세포 및 NK 세포 (둘이 합쳐 -25%)로 구성된다. PBMC는 종종, 단핵구와 림프구가 혈장의 층 아래에 연막층을 형성하는 혈액의 층을 분리하는 친수성 다당류, Ficoll을 이용하여 전혈로부터 추출된다. 이러한 연막층은 PBMC를 내포한다. 부가적으로, PBMC는 적혈구 세포를 우선적으로 용해시키는 저장성 용해 (hypotonic lysis)를 이용하여 전혈로부터 추출될 수 있다. 이러한 방법은 호중구 및 기타 다형핵 (PMN) 세포를 산출하고, 이들은 획득되는 선천성 면역 방어에서 중요하다. 골수 흡출물의 PBMC 분획물은 심근 경색 이후에 환자를 치료하는데 이용되고, 그리고 이들 환자에서 차후 사망률을 감소시키고 심장 기능을 약간 향상시키는 것으로 밝혀졌다 (Eur Heart J 27:2775-2783, 2006). 사망률이 이들 유형의 치료에 의해 유의미하게 감소되긴 하지만, 심장 기능은 단지 약간 향상된다. 이들 환자에서 핵 이미지화 연구는 관상동맥내 주사된 단핵 분획물 줄기 세포 중에서 대부분, 최대 97%가 심장내에 남아 있지 않지만, 주사후 60 내지 90분 이내에 비장과 간에서 발견될 수 있다는 것을 증명하였다 (Circulation 111:2198-2202, 2005). 다른 이미지화 연구는 유사하게, 전혈, 골수, 지방 조직, 제대혈, 태반, 양수, 그리고 기타 조직의 단핵 분획물 내에서 발견되는 줄기 세포뿐만 아니라 이들 단핵 분획물로부터 단리된 줄기 세포가 많은 상이한 종에서 비장에 축적한다는 것을 증명하였다 (STEM CELLS 24:2279-2283, 2006; J Nucl Med 45:512-518, 2004; J Nucl Med 47: 1212-1219, 2006; J Nuci Med 47: 1295-1301, 2006).
동물 연구는 더욱 많은 숫자의 골수 단핵 세포의 투여가 향상된 심장 수복과 기능성 회복을 유발한다는 것을 증명하였다 (Circulation 114:2163-2169, 2006). 하지만, 임상 환자의 경우에, 이것은 전신 마취 하에 200 mls까지 다량의 골수의 흡출을 필요로 할 것이고, 그리고 이것은 심장 기능이 저하되어 있는 최근의 경색후 환자에게 매우 바람직하지 않은 것으로 간주된다. 연구자들은 또한, 더욱 우수한 장기 표적화와 보존을 획득하기 위해, 그들에 의해 주사되는 줄기 세포를 농축하려 시도하였다. 주사되는 CD34+ 세포의 숫자를 농축하면 관상동맥내 주사후 심장에서 CD34+ 세포가 더욱 많이 축적되긴 하지만, 줄기 세포 전달을 증강시키는 이러한 방법은 최적하인 것으로 생각되는데, 그 이유는 현재, 단핵 세포 분획물 내에 포함된 어떤 특정 줄기 세포가 조직 재생에 필요한 지가 알려져 있지 않기 때문이다 (Circulation 111:2198-2202, 2005). 게다가, 정제된 인간 중간엽 줄기 세포 (MSC)는 인간 제대혈 CD34+ 줄기 세포의 접목을 증대시키는 것으로 밝혀졌다 (Hematology VOL 14 NO 3: 125-132, 2009).
줄기 세포는 자기조직성이거나, 또는 무관한 공여자로부터 유래될 수 있다. 줄기 세포는 골수, 전혈, 제대혈, 지방 조직 또는 기타 공급원으로부터 단핵 세포 분획물 내에 포함되거나, 또는 이들은 CD34, CD133, CD105, CD117, SSEA1-4, 염료 배제 또는 기타 특정한 줄기 세포 항원에 대한 선별에 의해 정제될 수 있다. 줄기 세포는 Ficoll-Hypaque 또는 다른 상업적으로 구입가능한 구배를 이용한 밀도 구배 원심분리 (density gradient centrifugation)에 의해, 전혈, 골수, 제대혈, 지방 조직, 비점막 (olfactory mucosa)으로부터 조직 부스러기, 그리고 단일 세포 현탁액으로 분리될 수 있는 기타 줄기 세포 공급원, 예를 들면, 탯줄 조직으로부터 단리될 수 있다. 줄기 세포는 이런 절차로부터 발생하는 단핵 세포 분획물로부터 회수될 수 있다. 대안으로, 줄기 세포는 밀도 구배 원심분리후 다른 분획물 내에서 발견될 수 있다 (Stem Cells and Development 2011 Bhartiya et. al.). 가령, 제대혈은 PBS에서 1:1 희석되고, Histopaque 1077 (Sigma) 위에 조심스럽게 덮어씌워지고, 그리고 실온에서 30분 동안 1500 rpm에서 원심분리될 수 있다. 도 1에 도시된 바와 같은 결과의 층은 줄기 세포 단리를 위해 더욱 가공될 수 있다. 층 1은 혈소판 층이고, 층 2는 단핵 세포를 내포하는 연막층이고, 층 3은 Ficoll 층이고, 그리고 층 4는 적혈구 세포 펠릿 층이다. 층 1, 2, 그리고 3은 수집되고, FBS가 있거나 없는 적절한 배지, 예를 들면, DMEM F12로 희석되고, 그리고 다시 한 번 원심분리되어 세포 펠릿이 획득될 수 있다. 층 4는 적절한 배지, 예를 들면, DMEM F12로 희석되고 표준 벤치탑 원심분리기에서 실온에서 15분 동안 800 rpm으로 원심분리될 수 있다. 줄기 세포는 주로 층 2 (연막층)와 층 4 (RBC 펠릿)로부터 회수될 수 있다.
줄기 세포는 세포 선별기, 예를 들면, BD로부터 ARIA를 이용하여, 자성 칼럼, 예를 들면, Miltenyi로부터 구입가능한 것들을 이용하여, 자성 비드와 DYNAL 자석 및 당업자에게 공지된 다른 항체/항원 기초된 분리 방법을 이용하여, 그들의 표면 상에서 발현된 특정한 항원에 의해 더욱 특성화되고 단리될 수 있다. 줄기 세포는 또한, 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 다른 세포에 결합하는 그들의 능력에 의해 확인되고 단리될 수 있다.
만능성 줄기 세포는 단계-특이적 배아 항원 (SSEA), 전사 인자 Oct4와 Nanog 및 기타 마커의 발현에 의해 특성화될 수 있다. 조혈 줄기 세포는 CD34, CD133, ckit, Sea1과 같은 마커의 발현에 의해 특성화되고, 그리고 또한, CD45 양성이다. 약어 CD는 항원 패밀리를 지칭하고 "분화의 클러스터"를 의미한다.
조혈 줄기 세포 (HSCs)는 골수성 계통 (단핵구와 대식세포, 호중구, 호염기구, 호산구, 적혈구, 거핵구/혈소판, 수상돌기 세포), 그리고 림프양 계통 (T-세포, B-세포, NK-세포)을 비롯한 모든 혈액 세포 유형을 발생시키는 다능성 줄기 세포이다. 조혈 조직은 장기와 단기 재생 능력을 갖는 세포 및 수임된 다능성, 제한다능성, 그리고 단능성 조상을 내포한다. HSC는 골수성 조직에서 세포의 1:10.000을 구성한다. HSC는 하기 항원을 발현한다: CD34, CD90 (Thy1), CD45, CD41, CD105, CD117 (c-kit), SCF (kit 리간드), Ly6A/E (sca-1), CD127, CD44, CD33, CD38, CD14, CD106, CD84, CD90, Flk-1, CD164, Notch1, CD338 (ABCG2), CD202b, CD184, AC133 (=CD133), 그리고 CXCR4.
중간엽 줄기 세포, 또는 MSC는 골아세포 (osteoblast, bone cell), 연골세포 (chondrocyte, cartilage cell) 및 지방세포 (adipocyte, fat cell)를 비롯한 다양한 세포 유형으로 분화할 수 있는 다능성 줄기 세포이다. 중간엽 줄기 세포는 CD45, CD90, CD105, CD34, CD31, CD29, CD106, CD44, CD51, CD166, Ly6A/E (sca-1), CD117, CD71, CD10, CD49d, CD49e, TNAP, PTP LAR, W5C5 항원, W3D5 항원, W4A5 항원, 그리고 CXCR4의 발현으로 특성화된다.
내피 줄기 세포 (또는 내피 조상 또는 전구 세포)는 다능성 줄기 세포이다. 이들은 골수에서 발견되는 3가지 유형의 줄기 세포 중에서 하나이고 하기 항원을 발현한다: CD45, CD31, CD34, CD105, CD146, CD106, CD54, CD117, CD102, CD120a, CD120b, CD14, CD29, CD49d, CD49e, CD49f, CD62P, CD62L, 그리고 CXCR4.
신경 줄기 세포 (NSCs)는 신경계의 주요 표현형을 발생시키는 자기-재생성 다능성 세포이다. 신경 조상과 줄기 세포는 성체 생쥐 뇌 조직의 부뇌실 지대 - 신경성 구역 중에서 한 가지 -를 비롯한 줄무늬체 조직으로부터, 척수와 같은 비-신경성 구역을 비롯한 성체 뇌의 다양한 구역으로부터, 그리고 인간을 비롯한 다양한 종으로부터 단리된다. NSC는 하기 항원을 발현한다: CD29, CD146, Notch1, Ki67, CD24, CD49f, Vimentin, CD81과 CXCR4. 신경 조상 세포는 하기 항원을 발현한다: 57D2 항원, W4A5 항원과 CXCR4.
예로써, iPS, SCNT, ANT-OAR로부터 배아, 정조, 고환과 만능성 줄기 세포는 하기 항원을 발현한다: CD24, CD9, Nanog, Smad, Runx2, c myc, CD30, GSC, Oct3/4, Sox2, SSEA 1 (CD15), SSEA 4, CD324, CD29, Tra-1-60, Tra-1-81, CD338 (ABCG2), CD49f, FoxD3, Stat3, Hox11, 그리고 CXCR4.
VSEL은 SSEA1, Oct4, Nanog, Rex1 및 기타 만능성 줄기 세포 마커에 대해, 그리고 CD133, CD34, AP, cMet, LIF-R 및 CXCR4에 대해 양성이다 ( J Am Coll Cardiol 53(1): 10-20, 2009; Stem Cell Rev 4:89-99, 2008). 부가적으로, 상이한 마커에 의해 특성화되는 신규한 줄기 세포, 예를 들면, 성체 비장에서 발견되는 Hox11+ 줄기 세포는 일과적으로 확인된다 (Horm Metab Res 40: 137 - 146, 2008). 췌장 섬 세포를 재생할 수 있는 성체 비장 내에 남아있는 태아 줄기 세포가 확인되었지만, 이러한 세포는 비장의 CD45 음성 분획물 내에 존재한다 (Mol Cell Proteomics 4(10): 1459-1470, 2005). Hox11+ 비장 세포는 CD45에 대해 음성이긴 하지만, OCT3/4, SOX2, KLF4, c-MYC와 NANOG를 발현하고, 따라서 이들은 배아 줄기 세포 및 유도된 만능성 줄기 세포 (iPS)에 잠재적으로 동등하다 (Int J Biochem Cell Biol. 2009 Dec 18).
줄기 세포의 치료적 용도
줄기 세포 요법은 많은 질환의 치료를 위해 조사되고 완성된다. 줄기 세포 요법으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환에는 하기가 포함된다: 안구 질환, 신경 질환, GI 질환, 근골격 질환, 대사 질환, 내분비 질환, 혈관 질환, 폐 질환, 심장 질환, 심혈관 질환, 면역 매개된 질환, 자가면역 매개된 질환, 심혈관 질환, 그리고 재생 요법이 도움이 되는 모든 질환. NIH 웹사이트 www.clinicaltrials.gov에 내포된 임상 시험 정보는 3000여 개의 줄기 세포 조사를 열거한다. 평가 중인 질환에는 하기가 포함된다: 맥관염, 내피 조상 세포를 이용한 류마티스성 질환, 결합 조직 질환을 앓는 환자에서 자기조직성 단핵 세포의 이식에 의한 치료적 신혈관형성, 진행성 핵상 마비를 앓는 환자에서 혈액 줄기 세포 동원을 위한 과립구 콜로니 자극 인자의 반복된 투여, 피질기조 퇴행 및 다계통 위축증; 혈액성 악성종양, 백혈병, 림프종, 암, 골화석증, 재생불량성 빈혈과 혈구 감소, 겸상 적혈구병과 지중해빈혈증, 윤부 줄기 세포 결핍, 유방 암, 급성 심근 경색 (US Patent No. 7,862,810 isolating and culturing cardiac stem cells that are c-kit positive를 참조한다), 관상 동맥 질환 (US Patent No. 7,470,538 isolating and administering by infusion into the coronary artery enriched CD133+/CD34+/CXCR4- cells isolated from umbilical cord blood를 참조한다), 말초 혈관 질환, 심부전, 1형 당뇨병 (U.S. Patent Application Publication No. 2011000830, Human Adipose Derived Insulin Making Mesenchymal Stem Cells For Treating Diabetes Mellitus를 참조한다), 2형 당뇨병, 뇌졸중, 척수 손상, 신경모세포종, 다발성 경화증 (U.S. Patent Application Publication No. 20100166712, administering autologous mesenchymal stem cell-derived neural precursors to treat MS를 참조한다), 전신성 경화증, 홍반성 낭창, 만성 상처 치유, 화상, 골절 치유, 연골 치료, CNS 종양, 골관절염, 신부전, 파킨슨병 (U.S. Patent Application Publication No. 20100010087, Methods for Inducing Stem Cell Migration and Specialization with EC-18을 참조한다), 골수종, 당뇨발, 담즙성 간경변, 확장성 심근병증, 빈혈, 색소성 망막염, 크론병, 당뇨병성 신경병증, 비만 세포증, 난소 암, 간질, 중증근무력증, 자가면역 질환, 육아종성 질환, 골괴사, 간부전, PMD 질환, 지질영양이상증, 탈수 질환, 연골 결손, 망막 질환, 홍반성 신염, 알츠하이머병, 외상성 뇌 손상, 육종, 근육염, 고혈당증, 황반 변성, 궤양성 대장염, 근육 변성 등. 이들 줄기 세포 요법에 대한 제한에는 특정한 손상된 장기로 또는 골수와 비장에서 조혈 중심으로 인지에 상관없이, 줄기 세포를 최적으로 전달하고 접목하는 능력 없음이 포함된다.
외인성 줄기 세포의 전달
줄기 세포는 많은 루트에 의해 환자에 전달될 수 있다. 가령, 줄기 세포 생존능을 최적화시키고 세포 응괴를 제거하는 적절한 부형제에서 줄기 세포는 바늘, 카테터 또는 다른 최소 침습성 방법에 의해 정맥내 (intravenous), 동맥내 (intra-arterial), 근육내 (intramuscular), 피내 (intradermal), 피하 (subcutaneous), 복막내 (intraperitoneal), 심막내 (intrapericardial), 안구내 (intraocular), 경혈관 (transvascularly), 심내막 (transendocardially), 심외막 (transepicardially), 경중격 (transeptally), 심장외 (epicardially), 관상정맥 (transcoronary vein)에 의해, 경피 경심근 혈관재생 (percutaneous transmyocardial revascularization)에 의해, 척추강내 (intrathecal), 장기내 (intra-organ), 코내 (intranasal), 심실내 (intraventricle), 또는 경막외내 (intra-epidural) 투여될 수 있다. 줄기 세포는 또한, 주사 부위에서 줄기 세포를 유지하는데 도움이 되도록 설계된 '매트릭스' 혼합물 또는 현탁액 혼합물, 예를 들면, 콜라겐, 피브리노겐, 피브로넥틴, 라미닌, 알기네이트, 아가로즈, 메틸셀룰로오스, 리포좀, 나노입자, 교질입자, 알부민 거품, 지방산, 또는 기타 반-고형 현탁액 제제에서 이들 루트에 의해 투여될 수 있다.
줄기 세포를 전달하는데 이용될 수 있는 카테터 기초된 전달 시스템에는 표준 기구 혈관 성형술 주입 카테터, 경피 관상 동맥 전달 카테터, 오브-더-와이어 기구 (over-the-wire balloon) 카테터의 정지 유동 팽창, Swan Ganz 타입 카테터, Hickman 타입 카테터, Foley 타입 카테터, 중심 정맥 카테터, 피그테일 타입 카테터, SmartPortTM 시스템, 금속-첨단 자석 유도된 카테터, 예를 들면, Stereotaxis Inc 또는 Mitralign에 의해 개발된 Gentle Touch Magnetic Navigation System, Accucinch System, 그리고 장기 내로 직접적으로 주사하는 카테터, 예를 들면, HELIXTM, MyoCathTM, NOGA R-유도된 MyostarTM, StilettoTM, 또는 혈관내 초음파 (IVUS) 유도된 TransAccess Delivery SystemTM, 또는 동맥 루트를 통해 전달하는 카테터, 예를 들면, OpenSailTM, ConcertoTM, Mercator로부터 미량주사기 주입 카테터, 그리고 MaverickTM, 또는 이식가능 장치 요법, 예를 들면, 좌심실 보조 장치 (LVADs), 양심실 보조 장치 (BiVADs), OptimizerTM, US 2009/0299269에서 기술된 바와 같은 세포-전달 카테터가 포함된다.
줄기 세포는 또한, 침습성 외과적 수단을 이용하여 환자에 투여될 수도 있고, 그리고 이후, 장기 내로 직접적으로 주사되거나, 또는 장기에 적용될 수 있다. 장기에 줄기 세포 조성물을 적용하기 위한 용도에는 그 중에서도 특히, 콜라겐 매트릭스, 세포외 매트릭스 조성물, 피브린 또는 기타 세포외 매트릭스 물질로 만들어진 생물중합체 마이크로쓰레드, 세포외 매트릭스와 생물분해성 물질을 내포하는 패치, 피브린 패치, 알기네이트 또는 아가로즈 기초된 패치, 세포외 매트릭스 물질 및 덱스트란과 같은 성분을 포함할 수 있는 생물분해성 생리학적 비활성 물질로 구성된 스카폴드, 장기 특이적 항원 또는 결합 분자로 줄기 세포 코팅, 탈체에서 소화된 장기 공여자 또는 시체 장기로부터 스카폴드 또는 탈세포화된 장기로서 알려져 있는 잔류 세포외 매트릭스, 그리고 콘택트렌즈가 포함된다.
내인성 줄기 세포의 동원
줄기 세포로 환자를 치료하는 다른 방법은 환자 자신의 줄기 세포를 장기, 예를 들면, 골수 밖으로 동원하고, 그리고 순환으로 들어가도록 하는 것을 수반한다. 가령, 치료제, 예를 들면, 뉴포젠 또는 더욱 길게 작용하는 형태, 뉴라스타로서 판매되는 과립구 콜로니 자극 인자 (G-CSF; 필그라스팀), 류킨으로서 판매되는 과립구-대식세포 콜로니 자극 인자 (GM-CFS; 사그라모스팀), Genzyme Corporation에 의해 모조빌/플레릭사포르로서 판매되는 AMD3100은 순환 내에서 줄기 세포 숫자를 증가시킨다. 뉴포젠은 300 또는 480 마이크로그램 필그라스팀을 내포하는 1회용 바이알 또는 1회용 주사기에 담겨 제공된다. 부형제는 아세트산염, 소르비톨, 폴리소르베이트 80, 나트륨 및 주사용수로 구성된다. 뉴포젠은 하루 2회 정맥내 투약, 하루 1회 피하 투약 또는 장기적인 피하 치료로서 임상적으로 이용된다. 뉴포젠은 골수억제성 화학요법을 받는 암 환자에서, 도입 또는 합동 화학요법을 받는 급성 골수성 백혈병을 앓는 환자에서, 골수 이식을 받는 암 환자에서, 심각한 만성 호중구감소증을 앓는 환자에서, 그리고 말초 혈액 조상 세포 수집과 치료를 받는 환자에서 호중구 수의 회복을 가속화시키는데 인가된다. 뉴포젠은 전형적으로, 2 내지 20일 동안 지속되는 치료로 화학요법후 4일 시점부터 시작하여 체중 킬로그램당 3 내지 69 마이크로그램의 일일 기초 (daily basis)에서 투여된다. 뉴포젠에 대한 포장 삽입물에 따라서, G-CSF는 골수 내에서 호중구의 생산을 통제하고, 그리고 호중구 조상 증식, 분화 및 선별된 최종-세포 기능적 활성화 (증강된 식세포 능력, 호흡 폭발과 연관된 세포 대사의 기폭, 항체 의존성 사멸, 그리고 세포 표면 항원과 연관된 일부 기능의 증가된 발현 포함)에 영향을 준다. G-CSF는 또한, 골수 기질에서 CXCL12 발현을 감소시키고 CXCR4 발현을 감소시키는 작용에 의해 줄기 세포를 순환 내로 동원하는 것으로 밝혀졌다: CXCR4의 N 말단의 클리핑 (clipping)을 유도 (1)하고, 골수에서 VCAM 발현을 감소 (2)시킴으로써, G-CSF는 CXCR2에 대한 동계 리간드, CXCL2를 증가시키는 것으로 밝혀졌다. 임상 요법에 대한 인가 이후에, G-CSF는 또한, 순환에서 매우 작은 배아-유사 줄기 세포의 숫자를 증가시키는 것으로 밝혀졌다.
포장 삽입물에 따라서, 류킨은 백혈구성분채집술 (leukapheresis)에 의한 수집을 위한 말초 혈액 내로 조혈 조상 세포의 동원을 위해 처방된다. 동원은 동원 없는 수집과 비교하여, 접목할 수 있는 조상 세포의 증가된 숫자의 수집을 가능하게 한다. 골수제거성 화학요법후, 증가된 숫자의 조상 세포의 이식은 더욱 신속한 접목을 유발할 수 있고, 이것은 지지 치료 (supportive care)에 대한 감소된 필요를 결과할지도 모른다. 골수성 재구성은 말초 혈액 조상 세포 이식 이후에, 류킨의 투여에 의해 더욱 가속화된다. 류킨의 권장된 용량은 24시간 정맥내 주입으로서 투여되거나 하루 1회 피하 투여되는, 하루 신체 표면적 제곱미터당 250 마이크로그램이다. 류킨으로 최적 치료 시간은 명백하게, 순환 내로 줄기 세포 동원의 경우에 5일이다. 류킨은 또한, G-CSF 단독에 반응한 동원이 불량한 환자에서 G-CSF와 공동으로 효과적인 것으로 밝혀졌다.
모보질 (Mobozil)은 화학명 1,1'-[1,4-페닐렌비스 (메틸렌)]-비스-1,4,8,11-테트라아자시클로테트라데칸을 갖는다. 이것은 분자식 C28H54N8을 갖는다. 모보질은 케모킨 수용체 CXCR4의 저해제이고, 그리고 동계 리간드 SDF-1 (CXCL12)의 결합을 차단한다. 모보질은 골수의 기질 및 기타 세포에 의해 발현된 SDF-1 (CXCL12)에 대한 줄기 세포 발현된 CXCR4의 결합을 파괴함으로써, 순환 줄기 세포 숫자를 증가시킨다. 모보질 치료후 최적 동원은 보체 활성화에 의존한다. 모보질의 피하 주사는 비-호지킨 림프종 (NHL) 및 다발성 골수종 (MM)을 앓는 환자에서 수집 및 차후 자기조직성 이식을 위한 말초 혈액에 조혈 줄기 세포를 동원하기 위해, 뉴포젠과 공동으로 이용을 위해 인가된다. 모조빌은 1.2 mL의 20 mg/mL 용액을 내포하는 1회용 바이알로서 판매된다. 환자는 포장 삽입물에서 상술된 바와 같은 하기의 권장된 일정에 따라 모조빌로 치료된다: 환자가 4일 동안 하루 1회 G-CSF를 복용한 이후, 모조빌 치료를 시작한다; 4 연속일까지 모조빌 투약을 반복한다; 0.24 mg/실제 체중 kg에 기초하여 용량을 선택한다; 성분채집 (apheresis)의 개시에 앞서 대략 11시간 시점에, 피하 주사에 의해 투여한다. G-CSF와 모보질의 복합은 G-CSF 단독의 이용보다 순환 내로 더욱 원시성 줄기 세포를 동원하는 것으로 밝혀졌다.
조혈 줄기 세포를 비롯한 줄기 세포를 순환 내로 동원하는 것으로 알려져 있는 다른 작용제에는 간세포 성장 인자 (HGF) 에리트로포이에틴, 부갑상선 호르몬, Flt3-리간드, 줄기 세포 인자 (SCF)가 포함된다. 순환 내로 줄기와 조상 세포의 증가된 동원을 유발하는 것으로 알려져 있거나 유발할 것으로 기대되는 다른 작용제에는 그 중에서도 특히, 줄기 세포 증식을 증가시키는 작용제, 예를 들면, 콜로니 자극 인자, 내인성 G-CSF 생산을 증가시키는 작용제, 예를 들면, Maitake 베타-글루칸, CXCR4 하향-조절 효현제를 비롯하여 SDF-1 또는 CXCR4의 발현을 감소시키는 작용제, SDF-1 또는 CXCR4의 결합 친화성을 감소시키는 작용제, CXCR4의 신호전달을 약화시키는 작용제, 순환으로부터 벗어나는 줄기 세포의 생물축적을 차단하는 작용제, 순환 내로 줄기 세포의 귀환, 예를 들면, 보체 또는 증가하는 혈장 스핑고신-1-인산염의 활성화를 증강시키는 작용제, 골수에서 CXCR2 또는 이의 동계 리간드 CXCL2의 발현을 상향조절하는 작용제, 골수에서 VCAM 발현을 감소시키는 작용제, 예를 들면, 화학치료적 시클로포스파미드, 레티노산 수용체 효현제, VLA-4의 소형 분자 저해제, 예를 들면, BI05192 또는 VLA4의 기타 차단제, 골수 발현된 CXCL12를 분해시키는 금속단백분해효소 또는 카르복시펩티다아제 활성제, 또는 선별된 화학요법 섭생, 또는 케모킨 CXCL2, 그리고 콜로민산에 의한 G-CSF 치료, 후코이단의 섭취에 시클로포스파미드 또는 국소이성화효소 저해제 에토포시드를 추가하는 섭생이 포함된다.
자발적으로 방출된 내인성 줄기 세포
줄기 세포로 환자를 치료하는 다른 방법은 자발적으로 방출된 내인성 줄기 세포가 림프 조직 내에서 격리하는 것을 예방하는 것을 수반한다. 줄기와 조상 세포는 일일 기초에서 혈류 내로 자발적으로 방출된다. 병체결합성 (parabiotic) 생쥐를 이용한 실험은 비장이 줄기와 조상 세포를 순환과 쉽게 교환한다는 것을 증명하였다. 부가적으로, 질환 상태, 예를 들면, 그 중에서도 특히 고콜레스테롤혈증, 심장 마비, STEMI 또는 CAD, 동맥 결찰 또는 일과성 허혈, 적당한 고도에서 체류 (sojourn at moderate altitude), 원발성 부갑상선기능항진증, 그리고 망막 색소 상피 손상은 순환 줄기와 조상 세포의 증가된 수준을 유발하는 것으로 증명되었다. 자발적으로 방출된 또는 질환-유도된 줄기 세포가 림프 조직 내에서 격리하는 것을 예방하는 것은 손상된 조직 또는 장기의 재생에 가용한 더욱 많은 줄기 세포를 만들 것이다.
림프 조직에서 배 중심을 재생하기 위한 조성물과 방법
본 발명은 방사선 또는 화학요법 이후 림프 조직에서 배 중심을 재생하고, 회춘시키고, 그리고 이들의 숫자를 증가시키는 방법과 조성물을 제시함으로써 이러한 요구를 충족시킨다. 본 발명에 따라서 림프 조직에서 배 중심을 회춘시키거나 재생하는 치료제는 면역 활성제, 보조-자극성 분자, 면역 어쥬번트 및 이들의 조합을 포함한다.
본 발명의 한 구체예에서, 림프 조직 내에 배 중심은 어쥬번트의 투여에 의해 재생된다. 이런 어쥬번트의 실례에는 병원체-연관된 분자 패턴, 리포좀, 리포다당류, 항원에 대한 분자 케이지, 세균 세포 벽의 성분, 세포내섭취된 핵산, 예를 들면, 이중-가닥 RNA (dsRNA), 단일-가닥 DNA (ssDNA), 그리고 메틸화되지 않은 CpG 디뉴클레오티드-내포 DNA, 무기 염, 예를 들면, 수산화알루미늄 (명반), 인산알루미늄, 인산칼슘, 수산화알루미늄, 인산알루미늄칼륨, 인산수소알루미늄나트륨, 그리고 수산화알루미늄인산황산염이 포함된다. 다른 어쥬번트에는 수중유 에멀젼 (oil-in-water emulsion), 예를 들면, 스쿠알렌, 몬타니드 ISA720 (스쿠알렌) 또는 ISA 51 (Drakeol), MF59 (Novartis)와 SBAS2가 포함된다. 본 발명에 따라서 이용될 수 있는 어쥬번트의 다른 부류는 미립자 어쥬번트, 예를 들면, 비로솜 (virosome), 사포닌, 그리고 지질 내포 미생물 유도체, 예를 들면, 모노포스포릴 지질 A CpG 모티프, BCG-CWS로 불리는 BCG-기폭된 면역 (미코박테리움 보비스 (Mycobacterium bovis))이다.
리포다당류와 미토겐, 예를 들면, 콘카나발린 A., 세균 세포 벽의 성분, 아키오좀 (archaeosome) (아키온 (archaeon) 메타노브레비박터 스미티 (Methanobrevibacter smithii)의 에테르 글리세롤지질), TLR4 효현제 GLA 글루코피라노실 지질 어쥬번트, LPS와 BCG (Immune Design), TLR2 효현제 BCG, 펩티도글리칸, 그리고 그람 양성 세균, TLR5 효현제 플라젤린, 주혈흡충 알 항원 (SEAs), 리스테리아 모노사이토제네스 (Listeria monocytogenes, LM). 다른 어쥬번트에는 100개까지의 염기, 가장 바람직하게는 20개 염기 길이의 CpG 올리고뉴클레오티드를 비롯한 톨 유사 수용체 효현제와 활성제, TLR1 효현제, 예를 들면, Pam3Cys, TLR2 효현제, 예를 들면, Pam3Cys; TLR3 효현제, 예를 들면, dsRNA와 폴리 I:C, TLR7 효현제, 예를 들면, 이미퀴모드 (R-839)와 레시퀴모드 (R-848)와 같은 이미다졸퀴놀렌, TLR8 효현제, 예를 들면, 레시퀴모드 (R-848); 그리고 TLR9 효현제, 예를 들면, 폴리 I:C와 CpG가 포함된다. 또한, 식물 유도체 어쥬번트, 베타-글루칸, 사포닌 기초된 QS21, 그리고 콘카나발린 A의 이용이 본 발명 내에 포함된다.
본 발명의 다른 구체예는 암 요법, 화학요법을 비롯한 비-골수제거성 요법 또는 골수제거성 요법, 방사선, 그리고 복합 치료를 받는 환자에서 줄기 세포 이식 접목 및 혈액학적 회복을 증강시키기 위해 비장에서 활동성 배 중심의 숫자를 증대시키는 방법으로 구성된다. 증가된 숫자의 활동성 배 중심은 비장에서 증강된 줄기 세포 결합과 접목을 유발하고, 그리고 화학요법 조건 섭생 및 암 치료 이후에, 차후 가속화된 조혈 회복 속도를 유발한다. 암과 백혈병의 치료에 더하여, 비-골수제거성 요법이 I형 당뇨병 (JAMA. 297(14): 1568-1576, 2007), 루푸스 및 다발성 경화증 (www.clinicaltrials.gov)을 비롯한 자가면역 질환의 치료에 이용된다 (Pediatr Clin North Am. 57(1):239-71, 2010). 본 발명에서는 비장 배 중심의 숫자를 증가시키고, 따라서 이식된 줄기 세포 결합, 접목과 증식을 증대시킴으로써, 골수제거성 또는 비-골수제거성 조건을 겪는 암 또는 자가면역 환자에서 조혈 회복을 증강시키는 방법을 제시한다. 가령, 골수제거성 또는 비-골수제거성 조건 섭생 이후에 줄기 세포 치료를 받는 환자는 투여된 줄기 세포 접목 및 조혈 재생에 요구되는 시간 동안 감염과 사망의 위험에 처해 있다. 줄기 세포 접목의 가속화와 증대는 비장에서 줄기 세포 결합에 가용한 배 중심의 숫자를 증가시킴으로써, 이들 환자에서 조혈 회복에 요구되는 시간을 감소시키고, 따라서 감염과 사망의 위험을 줄인다.
줄기 세포는 자기조직성이거나, 또는 무관한 공여자로부터 유래될 수 있다. 줄기 세포는 골수, 전혈, 제대혈, 지방 조직 또는 다른 공급원으로부터 단핵 세포 분획물 내에 포함되거나, 또는 이들은 CD34, CD133, CD105, CD117, SSEA1-4, 염료 배제 또는 기타 특정한 줄기 세포 항원에 대한 선별에 의해 정제될 수 있다.
비장 배 중심은 CD40 수용체를 활성화시키는 치료제에 의해 특이적으로 증가될 수 있다 (Blood.104:4088-4096, 2004; J. Clin. Invest. 112: 1506-1520 2003) (50) (51). 기능성 수용체는 TNFR1 또는 TNFR2 성분과의 CD40 삼합체 또는 다합체이다. CD40 수용체를 활성화시키는 치료제의 실례에는 하기가 포함된다: CD40에 대한 효현성 항체는 CD40 수용체를 활성화시키고, solCD40L의 적절한 입체배열은 CD40 수용체를 활성화시킬 수 있고, 그리고 예로써 AT-hook 전사 인자 AKNA, mRNA 안정성 또는 단백질 안정성을 통해 전사 속도를 변경함으로써 CD40 수용체의 발현을 증가시키는 작용제 역시 증가된 활성과 신호전달을 유발할 수 있다. 대안으로, TRAF와 TTRAP 패밀리의 구성원은 CD40 수용체와 상호작용하고 이의 신호전달을 매개하여, 증강된 활동성 배 중심 숫자를 결과한다. 배 중심 B 세포 시클로-옥시게나아제 2 또는 EP2 수용체를 활성화시키는 작용제는 CD40 수용체 참여 (engagement)를 모사하고 증강된 활동성 배 중심 형성을 유발할 수 있다. 배 중심 형성과 지속성을 활성화시키는 다른 수단에는 CCR7의 저해 또는 상실이 포함된다 (J. Leukoc.Biol. 85: 409-417, 2009). 배 중심 형성과 지속성을 활성화시키는 다른 수단에는 CCR7의 저해 또는 상실이 포함된다 (J. Leukoc.Biol. 85: 409-417, 2009).
다른 구체예에서, 본 발명은 림프 조직에서 배 중심의 재생을 촉진하기 위해 면역자극성 분자를 투여하는 것으로 구성된다. 면역자극성 분자는 항체, 융합 단백질, 가용성 리간드, 소형 분자, 전사 조절제, mRNA 또는 단백질 안정제, 그리고 기타 면역자극성 모이어티이다. 가령, 보조-자극성 CD28 경로는 가용성 B7 단백질 및 항체, 예를 들면, TeGenero 1412 화합물에 의해 활성화될 수 있다.
TGN1412는 T 림프구에서 CD28 수용체의 효현제로서 설계된 인간화된 단일클론 항체인데, 이것은 T 림프구의 생산과 활성화를 촉진한다. Boerhinger Ingelheim이 TGN1412를 제조하였다.
추가의 보조-자극성 분자와 경로에는 OX40/OX40 리간드, 4-1BB/4-1BB 리간드, B7/CD28 패밀리; B7-1/CD80, CD28, B7-2/CD86, CTLA-4, B7-H1/PD-L1, ICOS, B7-H2, PD-1, B7-H3, PD-L2/B7-DC, B7-H4, PDCD6, BTLA, 보조-자극성 TNF 슈퍼패밀리 분자; 4-1BB/TNFRSF9/CD137, 4-1BB 리간드/TNFSF9, BAFF/BLyS/TNFSF13B, BAFF R/TNFRSF13C, CD27/TNFRSF7, CD27 리간드/TNFSF7, CD30/TNFRSF8, CD30 리간드/TNFSF8, CD40/TNFRSF5, CD40 리간드/TNFSF5, GITR/TNFRSF 18, GITR 리간드/TNFSF18, HVEM/TNFRSF14, LIGHT/TNFSF14, OX40/TNFRSF4, OX40 리간드/TNFSF4, 그리고 TACI/TNFRSF13B, SLAM 패밀리; 2B4/CD244/SLAMF4, BLAME/SLAMF8, CD2, CD2F-10/SLAMF9, CD48/SLAMF2, CD58/LFA-3, CD84/SLAMF5, CD229/SLAMF3, CRACC/SLAMF7, NTB-A/SLAMF6, 그리고 SLAM/CD150, 그리고 기타 보조-자극성 분자; CD2, CD53, CD82/Kai-1, CD90/Thy1, CD96, CD160, Ikaros, 인테그린 알파 4/CD49d, 인테그린 알파 4 베타 1, 인테그린 알파 4 베타 7/LPAM-1, LAG-3, LMIR1/CD300A, CRTAM, DAP12, Dectin-1/CLEC7A, DPPIV/CD26, EphB6, TCL1A, TIM-1/KIM-1/HAVCR, TIM-4, TSLP, TSLP R, HLA-DR, 그리고 에프린이 포함된다.
배 중심 재생을 증강시킬 수 있는 다른 작용제는 사이토킨 폭발을 유발하는 것으로 알려져 있는 작용제, 예를 들면, 항-CD20 (리툭시맙)이다.
다른 면역-활성화 작용제에는 효현성 항체를 갖는, IL21 수용체에 대한 효현제가 포함될 수 있다.
전임상적으로 또는 임상적으로 이용되는 다른 어쥬번트에는 하기가 포함된다:
세포내섭취된 핵산, 예를 들면, 이중-가닥 RNA (dsRNA), 단일-가닥 DNA (ssDNA), 그리고 메틸화되지 않은 CpG 디뉴클레오티드-내포 DNA.
아데노바이러스 및 아데노바이러스 성분, 예를 들면, 아데노바이러스 타입 5 (Ad5).
레티노산-유도성 유전자 (RIG)-1-유사 수용체 (RLR)의 효현제와 활성제.
P2X1, P2X4, 또는 P2X7 활성제 또는 효현제.
뉴클레오티드-결합 올리고머화 도메인-유사 수용체 (NLR)의 효현제와 활성제.
Advax, 리포좀, 키토산 마이크로스피어 및 디메틸-디옥틸데실 브롬화암모늄 (DDA).
개발 중인 가장 최근의 인간 어쥬번트는 ISCOMS, QS21, AS02, 그리고 AS04이다.
AS04는 탈아실성 모노포스포릴 지질 A MPL 플러스 알루미늄이다.
CpG 올리고뉴클레오티드는 100개까지의 염기, 가장 바람직하게는 20개 염기 길이를 가질 수 있다.
항-CD3 OKT3은 또한, 림프 조직 내에서 생식 세포의 재생을 유도하기 위해 정맥내 (i.v.) 투여될 수 있다.
본 발명은 또한, 림프 조직 내에서 배 중심을 산출하기 위해 2가지 또는 그 이상의 치료제를 투여하는 것으로 구성된다. 본 발명의 다른 구체예에서, 줄기 세포는 배 중심을 재생하는 치료제와 공동으로 투여된다.
어쥬번트의 투약
알루미늄 칼륨 인산염은 약 0.17 mgs의 용량으로 투여될 수 있다.
인산알루미늄은 약 1.5 mgs의 용량으로 투여될 수 있다.
수산화알루미늄은 약 0.15 mgs 내지 약 0.3 mgs의 용량으로 투여될 수 있다. 알루미늄 염은 일반적으로, 높게는 0.85 mgs의 용량으로 투여될 수 있다.
수산화알루미늄인산염은 약 0.225 mgs의 용량으로 투여될 수 있다.
조합으로서, 수산화알루미늄과 인산알루미늄은 약 0.45 mgs의 합동된 용량으로 투여될 수 있다.
오일 에멀젼의 투약
SBAS-2는 MPL과 QS21의 수중유 에멀젼이다.
수중유 에멀젼, 예를 들면, 몬타니드 ISA720 (스쿠알렌) 또는 ISA 51 (Drakeol).
스쿠알렌은 Novartis에 의해 이용된 MF59 어쥬번트에 담기고, 그리고 어쥬번트 활성을 위한 0.5 내지 1ml 주사를 위해 1.95% 또는 2 백분율 (parts per hundred) 또는 100ml당 4 그램으로 투약된다.
MF59 어쥬번트는 (Lipovant; 4-5% w/v 스쿠알렌, 0.5% w/v Tween 80, 0.5% Span 85, 그리고 선택적으로, 변하는 양의 무라밀 트리펩티드 포스파티딜-에탄올아민 (MTP-PE), 이것은 NOD-LRR로서 알려져 있는 비-TLR 감각 수용체를 활성화시킨다)를 내포한다.
미생물 유도체의 투약
성체의 경우에 바이알당 1 내지 8 X 108 콜로니 형성 단위 (CFU), 어린이의 경우에 절반의 용량으로 투약된 BCG-CWS로 불리는 BCG-기폭된 면역 (미코박테리움 보비스 (Mycobacterium bovis)).
체중 그램당 0.1 내지 500 마이크로그램, 가장 바람직하게는 체중 mg당 38 마이크로그램으로 투약된 아키오좀 (archaeosome) (아키온 (archaeon) 메타노브레비박터 스미티 (Methanobrevibacter smithii)의 에테르 글리세롤지질).
톨 유사 수용체 효현제와 활성제의 투약
체중 20-25그램당 1, 10, 100, 500 마이크로그램으로 투약된 100개까지의 염기, 가장 바람직하게는 20개 염기 길이의 CpG 올리고뉴클레오티드. 바람직한 용량은 체중 20-25mgs당 10 μg이다.
보조-자극성 CD28 경로는 가용성 B7 단백질 및 항체, 예를 들면, TeGenero 1412 화합물에 의해 활성화될 수 있다. TGN1412는 T 림프구에서 CD28 수용체의 효현제로서 설계된 인간화된 단일클론 항체인데, 이것은 T 림프구의 생산과 활성화를 촉진한다. Boerhinger Ingelheim이 TGN1412를 제조하였다. 림프성 배 중심을 재생하기 위한 면역 활성화의 목적으로, TGN1412의 바람직한 용량은 3-6분 주입에 걸쳐 제공된 0.1 mg/체중 kg 이하일 것이다. 배 중심 재생을 위한 TGN1412의 효과량은 O.OO1mgs/kg 내지 0.1 mg/kg, 바람직하게는 0.01 mgs/kg일 것이다.
배 중심 재생을 증강시킬 수 있는 다른 작용제는 사이토킨 폭발을 유발하는 것으로 알려져 있는 작용제, 예를 들면, 50 mg/mm2 또는 150 mg/mm2, 하지만 375 mg/mm2 미만으로 투약된 항-CD20 (리툭시맙); 10 내지 14일 동안 5 mg/일 이하의 바람직한 용량에서 정맥내 (i.v.) 투여된 항-CD3 OKT3; 최대 12주 동안 주당 3회 제공된 2 시간 주입에 걸쳐 30 mgs로 투여된 항-CD52 (CAMPATH) 항체.
추가의 면역-활성화 작용제에는 효현성 항체가 0.001mgs/kg 내지 50mgs/kg, 바람직하게는 0.01 내지 0.1 mgs/kg으로 투약되는, IL21 수용체에 대한 효현제가 포함될 수 있다. 단백질 리간드 효현제는 골수제거성 또는 비-골수제거성 치료후, 최대 28일 동안 0.0001mgs/kg 내지 50 mgs/kg으로 일일 투약될 수 있다. 단백질 리간드 효현제는 일반적으로, 효현제의 분자량과 생물학적 분배에 따라, 항체 치료제의 1/10 용량에서 유용할 것이다.
소형 분자 면역-활성제는 단일 경구 투약에서, 또는 2시간마다, 4-6시간마다 또는 더욱 긴 간격 기간을 포함할 수 있는 특정한 간격에서, 일일 1 mg 내지 1000 mgs 경구 전달될 수 있다.
AS04는 0.5 mgs 인산알루미늄과 공동으로 0.5 ml 용량의 Fendrix (GSK)에서 50 마이크로그램으로 투약된 탈아실성 모노포스포릴 지질 A MPL 플러스 알루미늄이다.
체중 20-25그램당 1, 10, 100, 500 마이크로그램으로 투약된 100개까지의 염기, 가장 바람직하게는 20개 염기 길이의 CpG 올리고뉴클레오티드 + 명반. 바람직한 용량은 체중 20-25mgs당 10 μg이다.
투여
림프 조직 내에서 배 중심의 재생을 유도하는 치료제의 투여는 바늘, 카테터 또는 다른 최소 침습성 방법에 의해, 정맥내, 동맥내, 경구, 근육내, 에어로졸화, 흡입, 피내, 피하, 복막내, 심막내, 안구내, 경혈관, 심내막, 심외막, 경중격, 심장외, 관상정맥에 의해, 경피 경심근 혈관재생에 의해, 척추강내, 장기내, 코내, 심실내, 또는 경막외내 (intra-epidural)를 비롯한 임의의 방법에 의해 달성될 수 있다.
하기 실시예에서는 줄기 세포 결합에 참여하는데 가용한 결합 부위의 숫자를 통제하거나 조절하기 위한 방법과 조성물의 실험 결과를 예시한다.
실시예 1
줄기 세포 농축된 골수 및 전혈 단핵 분획물은 동종이계 생쥐에 투여될 때, 비장의 백비수의 가장자리에서 B 세포 영역에 결합한다.
수컷 129S1/SvlmJ 생쥐로부터 골수와 전혈 단핵 세포 분획물은 Histopaque를 이용하여 단리되고 합동되었다. 이들 세포는 분화된 체세포 세포가 사멸하고, 따라서 단핵 세포 사이에서 줄기 세포 분획물이 농축될 수 있도록 37℃ 5% C02에서 4일 동안 배양되었다. 결과의 세포는 이후, 제조업체의 지시에 따라 CellTracker Orange (CTO Invitrogen)로 표지되었다. 대략 10 백만 개의 표지된 세포는 수용자 한 배 새끼에 안구뒤 (retro-orbital) 주사에 의해 투여되고, 그리고 90분후, 이 생쥐는 방혈되고 혈액 수집되고, 맥관구조는 잔여 적혈구 세포로 씻기고, 그리고 비장이 수확되었다. 비장은 1% PFA에서 하룻밤동안 고정되고, 이후 낮은 용융, 낮은 겔화 온도 아가로즈에서 포매되고 섹션당 200 마이크론 두께로 분할되었다. 비장에 결합하는 MNC 줄기 세포는 면역형광을 이용하여 시각화되었다. 표지된 MNC 내포 줄기 세포 분획물은 비장의 백비수의 가장자리에서 B 세포 영역에 결합하였다. 방혈 동안 수집된 전혈로부터 MNC 분획물의 면역형광 검사는 10 백만 개의 주사된 표지된 세포 중에서 대략 40,000개가 주사후 90분 시점에, 순환에서 계속 발견된다는 것을 증명하였다.
결과와 결론: CTO-표지된 줄기 세포-농축된 MNC 세포는 백비수 영역의 주위에 결합하였다. 세포의 결합은 B 세포 영역에서 조직학적으로 명백하다. 이것은 줄기 세포 농축된 골수 및 전혈 단핵 분획물이 동종이계 생쥐에 투여될 때, 비장의 백비수의 가장자리에서 B 세포 영역에 결합한다는 것을 증명한다.
실시예 2
CD34 +, CD105 +와 CD117 + 정제된 줄기 세포는 표지된 MNC 줄기 세포 내포 분 획물과 동일한 비장 영역에 결합한다.
수컷 생쥐로부터 골수와 전혈 단핵 세포 분획물은 Histopaque를 이용하여 단리되고 합동되었다. CellTracker Green (CTG, Invitrogen)으로 표지된 MNC 세포는 이후, CD34에 대한 비오틴-표지된 항체, ckit 및 CD105와 함께 배양되고 제조업체의 권고에 따라 Miltenyi 자성 분리 칼럼을 이용하여 정제되었다. 단리된 MNC의 일부는 CTO로 별개로 표지되었다. 1 백만 개의 CTO-표지된 MNC는 100-200 마이크론 두께의 새로운 비장 섹션에서 4℃에서 12-18시간 동안 205,000 CTG 표지된 정제된 줄기 세포와 함께 공동-배양되었다. 이들 비장 섹션은 결합되지 않은 세포를 제거하기 위해 철저하게 세척되고, 1% PFA에서 1시간 동안 고정되고, 그리고 이후, 형광 이미지화 (fluorescent imaging)를 위해 습성 장착 (wet mounting)되었다. 결과의 적색 (MNC)과 녹색 (줄기 세포) 결합을 포착하고 오버레이하는데 MetaMorph 소프트웨어가 이용되었다.
결과와 결론: 정제된 줄기 세포 집단은 MNC 분획물과 동일한 비장 영역에 결합하였다. 이것은 CD34+CD105+ 및 CD117+ 정제된 줄기 세포가 표지된 MNC 줄기 세포 내포 분획물과 동일한 비장 영역에 결합한다는 것을 지시한다.
실시예 3
골수와 전혈 단핵 분획물 줄기 세포는 비장의 배 중심에서 PNA 양성 구역에 결합한다.
골수와 전혈 단핵 세포 (MNC)는 Histopaque를 이용하여 성체 생쥐로부터 단리된다. 결과의 단핵 세포는 제조업체의 권고에 따라 세포 추적 염료, 예를 들면, CellTracker Orange, Green 또는 Blue, DiI, 또는 Calcein Orange 또는 Blue로 염색되었다. FITC-표지된 PNA (10 μgs), IgD (10 μgs) 또는 항-CD21 (10 μgs)이 비장의 백비수에서 특정한 B 세포 영역을 확인하는데 이용된다. PNA는 배 중심을 표지하고, IgD는 소낭 지대를 표지하고, 그리고 항-CD21은 번연대와 외투대를 표지한다. FITC-표지된 항-CD3(200 ng 내지 1 μg)이 비장의 백비수에서 T 세포 영역을 확인하는데 이용된다. 철저한 세척후, 결합된 세포와 항체는 1% PFA를 이용하여 비장 섹션에서, 4℃에서 1시간 동안 고정된다. 습성 장착 섹션은 형광에 대하여 검시되고, 그리고 사진은 MetaMorph 소프트웨어를 이용하여 촬영된다.
결과와 결론: CTO-표지된 MNC는 4℃에서 15시간 동안 배양후, 활동성 PNA+ 배 중심에 결합하였다. 어떤 CTO-표지된 MNC 결합도 IgD 또는 항-CD21과 함께 국지화되는 것으로 관찰되지 않았다. 이것은 골수와 전혈 단핵 분획물 줄기 세포가 비장의 배 중심에서 PNA 양성 IgD 음성 CD21 음성 구역에 결합한다는 것을 지시한다.
실시예 4
전혈과 골수 단핵 세포 분획물로부터 단리된 CD34 +, CD105 +, CD117 + 줄기 세포는 비장의 백비수의 PNA + 배 중심에 결합한다.
생쥐 전혈과 골수로부터 단핵 세포 분획물은 합동되고, CTO로 표지되고, 그리고 이후, 비오틴화된 항-CD34, 항-CD117 및 항-CD105와 함께 배양되고, 그 다음 항체 결합된 세포는 제조업체의 지시에 따라 Miltenyi 자성 세포 분리 칼럼을 이용하여 단리되었다. 회수된 CD34+ CD105+ CD117+ 줄기 세포의 숫자는 출발 MNC 분획물의 0.3% 내지 3% 범위에서 변하였다.
결과의 CD34+ CD105+ CD117+ 세포는 새로운 생쥐 비장 섹션에서 10 μgs PNA와 함께 15시간 동안 공동-배양되었다. 양성으로 선별된 세포는 비장 섹션당 100,000개 세포 (A), 비장 섹션당 50,000개 세포 (B), 비장 섹션당 25,000개 세포 (C), 또는 비장 섹션당 10,000개 세포 (D)로 첨가되었다. MNC 배양에서와 유사하게, 정제된 줄기 세포는 비장의 백비수의 PNA 양성 배 중심에 결합하였다. 줄기 세포는 농도-의존성 방식으로 결합하였다. 이들 세포는 배 중심 내에 별개의 적소 (niche)에 결합하고, 그리고 대략 100,000개보다 많은 양의 첨가된 세포는 추가의 적소에 확장보다는 더욱 강한 결합 신호를 유발한다 (실시예 2를 참조한다).
결과와 결론 - 이들 결과는 전혈과 골수 단핵 세포 분획물로부터 단리된 CD34+, CD105+, CD117+ 줄기 세포가 비장의 백비수의 PNA+ 배 중심에 결합한다는 것을 지시한다.
실시예 5
MNC 분획물에서 줄기 세포 결합은 항- CD45 항체에 의해 차단된다.
비장 섹션에 MNC와 줄기 세포의 결합은 쥐 단일클론 IgG2b 항-생쥐 항-CD45 (800 나노그램 내지 4 마이크로그램)에 의해 차단되지만, 항-CD45R (10 마이크로그램) 또는 항-CD3 항체 (1 마이크로그램)에 의해 차단되지 않는다. 30-F11 쥐 항-생쥐 항-CD45 항체 (Santa Cruz Biotechnology) 또는 17A2 항-CD3 항체 (Santa Cruz Biotechnology)는 1:50 또는 1:10 희석되고 250,000개 CTO-표지된 MNC와 함께 1시간 동안 공동-배양되었다. MNC 결합은 결합 적소의 숫자 및 이들 적소의 크기로서 시각적으로 계산되었다. CTO-MNC 대조 새로운 비장 섹션은 섹션당 중간 내지 큰 크기의 3-6개 MNC 결합 적소를 가졌다. 항-CD3 항체는 MNC 결합 적소의 숫자 또는 크기에 영향을 주지 않았다. 1:50 희석에서 항-CD45 30-F11 항체는 MNC 결합 적소의 숫자와 크기 둘 모두를 절반으로 감소시켰다. 1:10 희석에서 항-CD45 30-F11 항체는 새로운 비장 섹션에 CTO-MNC 결합을 완전하게 소멸시켰다.
다른 실험에서, 표지된 MNC는 30-F11 항-CD45 (4 마이크로그램) 또는 PC3/188A 항-CD3 (1 마이크로그램)의 존재에서 비장 섹션에서 1시간 동안 배양되었다 (Santa Cruz Biotechnology).
다른 실험에서, CellTracker Orange (CTO) 표지된 MNC는 CD45R 또는 30-F11 항-CD45에 대한 항체와 함께 4℃에서 15시간 동안 배양되었다. 1:10 희석된 CD45R에 대한 항체 (Miltenyi Biotec) (5 μgs)는 새로운 생쥐 비장 섹션에 CTO-MNC 결합을 차단하지 못하였다. 대조적으로, 1:10에서 30-F11 항-CD45 항체 (Santa Cruz) (4 μgs)는 새로운 비장 섹션에 CTO-표지된 MNC 결합을 감소시켰다. CD45R은 소낭 지대 B 세포에 결합하지만 활동성 배 중심에는 결합하지 못한다.
30-F11 항-CD45와 함께 1:10 공동-배양은 새로운 비장 섹션에 CTO-표지된 MNC 결합을 대략 75% 감소시켰다.
결과와 결론: 이들 데이터는 MNC 분획물에서 줄기 세포의 비장에 대한 결합이 항-CD45 항체에 의해 차단된다는 것을 지시한다.
실시예 6
30-F11 쥐 IgG2b 항-생쥐 항- CD45 항체에 의해 결합된 CD45 에피토프 .
30-F11은 생쥐 CD45 의 모든 동종형에 결합한다.
30-F11 에피토프의 정확한 결합은 맵핑 (mapping)된 적이 없다. 30-F11은 생쥐 비장과 흉선 세포로 면역화에 의해 산출되었다. 생쥐 CD45 동종형 1의 세포외 도메인은 아미노산 24 내지 564로 구성된다. 동종형 2는 아미노산 31 내지 73이 없고, 반면 동종형 3은 아미노산 31 내지 169가 없다. 30-F11이 생쥐 CD45의 모든 동종형에 결합하는 것으로 보고되기 때문에, 결합 에피토프는 따라서, 동종형 1에서 아미노산 170과 564 사이에 있어야 한다. 단백질의 항원성 영역은 SwisProt 웹사이트에서 제공되는 소수성 (Kyte Doolittle)과 접근가능성 알고리즘을 이용하여 예측될 수 있다. 항원성 영역은 낮은 소수성 및 높은 접근가능성 둘 모두의 구역에서 발견될 가능성이 가장 높다. 인간 서열에서 501 내지 521 주변의 아미노산 잔기는 낮은 소수성 예측을 갖는데, 이것은 상기 단백질의 이러한 구역을 잠재적 항원성 부위로서 지시한다. 이러한 영역은 또한, 생쥐에서부터 인간까지 상당히 보존된다. (Okumura M., et al. 1996 Aug 15; 157(4): 1569-75를 참조한다).
실시예 7
면역 어쥬번트는 배 중심 형성을 증강시키고 비장에 단핵 줄기 세포 분획물 결합을 증가시킨다.
활동성 배 중심은 불완전 Freund의 어쥬번트 또는 Ribi를 이용한 의도적 면역화에 의해 정상 생쥐에서 유도되었다. 생쥐는 0일자에 PBS와 1:1 혼합된 0.5mls 불완전 Freund의 어쥬번트 (FIA), 또는 0.5mls RIBI 어쥬번트가 복막내 (IP) 주사되었다. 면역후 7일자 또는 14일자에, 생쥐는 아베르틴 마취에 앞서 30분 동안 100 U 복막내 헤파린으로 헤파린처리되었다. 생쥐는 안구뒤 출혈에 의해 방혈되어 15 ml 원뿔형 튜브에서 200 ㎕ 5U/ml 헤파린에 첨가된 총 1.5 내지 1.8 mls 전혈이 획득되었다. 이후, 복부 대동맥과 대정맥은 절단되고, 그리고 남아있는 혈액은 상승 흉부 대정맥 (ascending thoracic vena cava)을 거쳐 10 mls 5U/mL 헤파린의 느린 압박 주입 (push infusion)에 의해 맥관구조 외부로 완전하게 씻겼다. 비장은 제거되고, 성장 배지에 집어넣어지고, 연한 아가로즈에 차후 포매되고, 그리고 분할되어 200 마이크론 두께의 균일한 섹션이 획득되었다. 흉골과 대퇴골 골수는 Hanks 균형 염 용액으로 뼈로부터 씻기고, 그리고 전혈과 골수 둘 모두에 대한 단핵 줄기 세포 분획물은 Histopaque를 이용하여 단리되고 합동되었다. FITC-표지된 PNA (10 μgs)는 4℃에서 하룻밤동안 배양에 의해 비장 섹션에서 배 중심을 확인하는데 이용되었다. PNA와 함께 하룻밤 배양후, 세척 없이, CTO-표지된 단핵 줄기 세포 분획물은 4℃에서 1시간 동안 이들 섹션에 첨가되었다. 철저한 세척후, 결합된 세포 및 표지된-PNA는 1% PFA를 이용하여 비장 섹션에서 4℃에서 1시간 동안 고정된다. 습성 장착 섹션은 형광에 대하여 검시되고, 그리고 사진은 MetaMorph 소프트웨어를 이용하여 촬영된다.
면역화후 7일 시점에 PNA 결합은 FIA와 RIBI 치료된 생쥐에서 유사하였고, 둘 모두 대조의 결합의 거의 2배이었다. 하지만, FIA 치료된 생쥐는 RIBI 치료된 생쥐보다 건강하였고, 따라서 모든 차후 실험은 FIA로 수행되었다. FIA 치료후 7일자와 14일자를 비교하면, PNA 휘도는 7일자에 더욱 높지만, 14일자 활동성 배 중심은 더욱 단단하게 조직화되고 밀집하는 것으로 보였다. 대조와 비교하여, FIA 면역화는 생쥐의 비장에서 활동성 배 중심의 숫자를 배증한다. 대조 생쥐로부터 단리된 CTO-표지된 단핵 줄기 세포 분획물의 비장에 첨가는 FIA 치료된 생쥐에서 관찰된 증강된 활동성 배 중심 형성이 비장에 훨씬 많은 단핵 줄기 세포 결합 역시 유발한다는 것을 증명하였다. 7일자에 단핵 줄기 세포 결합은 대조 비장에 결합에 비하여 대략 3-5배 증가되고, 반면 단핵 줄기 세포 분획물 결합은 대조 비장에 결합보다 10배까지, 그리고 일부 경우에 10배를 초과하여 증가하였다.
결과와 결론: 이들 데이터는 면역 어쥬번트가 배 중심 형성을 증강시키고 비장에 단핵 줄기 세포 분획물 결합을 증가시킨다는 것을 지시한다.
실시예 8
활동성 배 중심 형성의 저해는 비장에 탈체 줄기 세포 결합을 감소시킨다.
생쥐는 비장 섹션에 줄기 세포 결합의 탈체 분석을 위한 비장과 줄기 세포의 수확에 앞서 7일 시점에 복막내 주사에 의해, 에탄올 (1 분율)과 PBS (9 분율)에 용해된 1 mg 덱사메타손으로 처리되었다. 대조 생쥐는 1ml의 총 부피에서 에탄올 (1 분율)과 PBS (9 분율)로만 처리되었다. 7일자에, 생쥐는 실시예 7에서 상술된 바와 같이 수확되고 처리되었다. 대조 생쥐로부터 단핵 줄기 세포 분획물은 대조와 덱사메타손 처리된 비장 섹션 둘 모두에서 결합 연구에 이용되었다. 7일자에 단핵 줄기 세포 결합은 실험에 앞서 7일 시점에 제공된 덱사메타손으로 단일 1 mg 처리 이후에, 30-40% 감소되었다.
수확에 앞서 7일 시점에 단일 1 mg 덱사메타손 처리는 비장 중량을 평균 22% 감소시키고, 평균 순환 MNC 숫자를 34% 감소시키고, 그리고 PNA 표지된 배 중심을 최대 24% 감소시켰지만, 전혈 또는 골수로부터 MNC 분획물 내에 줄기 세포의 비율은 감소되지 않았고 실제로는, 대조와 비교하여 평균 32% 증가하였다.
결과와 결론: 이들 데이터는 면역억제제가 처리된 생쥐의 비장에서 단핵 세포 분획물 결합 세포의 숫자를 감소시킨다는 것을 지시한다.
실시예 9
활동성 배 중심 형성의 저해는 비장에 생체내 줄기 세포 결합을 감소시킨다.
미경험 대조 생쥐는 아베르틴 마취에 앞서 30분 동안 100 U 복막내 헤파린으로 헤파린처리되었다. 생쥐는 안구뒤 출혈에 의해 방혈되어 15 ml 원뿔형 튜브에서 200 ㎕ 5U/ml 헤파린에 첨가된 총 1.5 내지 1.8 mls 전혈이 획득되었다. 이후, 복부 대동맥과 대정맥은 절단되고, 그리고 남아있는 혈액은 상승 흉부 대정맥 (ascending thoracic vena cava)을 거쳐 10 mls 5U/mL 헤파린의 느린 압박 주입 (push infusion)에 의해 맥관구조 외부로 완전하게 씻겼다. 흉골과 대퇴골 골수는 Hanks 균형 염 용액으로 뼈로부터 씻기고, 그리고 전혈과 골수 둘 모두에 대한 단핵 줄기 세포 분획물은 Histopaque를 이용하여 단리되고 합동되었다. 단핵 줄기 세포 분획물은 성장 배지 (DMEM + 10% FBS)에서 재현탁되고 37℃ 5% C02에서 하룻밤동안 배양되었다. 다음날 아침, 단핵 줄기 세포는 제조업체의 지시에 따라 CellTracker Green (CTG)으로 표지되었다.
CTG로 미경험 대조 단핵 줄기 세포 (MNC)의 염색 직후에, 수용자 생쥐는 7일자에 안구 정맥동 (retroorbital sinus)에 의해 100 uls에서 대략 6M CTG MNC가 각각 주사되었다. 5마리 대조 생쥐는 0일자와 4일자에 100 uls 에탄올과 900 uls PBS의 복막내 주사가 제공되었다; 3마리 생쥐는 0일자와 4일자에 1 mg 덱사메타손으로 ip 처리되었다; 그리고 2마리 생쥐는 0일자, 2일자와 5일자에 1 mg 덱사메타손으로 ip 처리되었다. 1시간후, 이들 생쥐는 안구뒤 출혈에 의해 방혈되었다. 이후 복부 대동맥과 대정맥은 절단되고, 그리고 남아있는 혈액은 상승 흉부 대정맥 (ascending thoracic vena cava)을 거쳐 10 mls 5U/mL 헤파린의 느린 압박 주입 (push infusion)에 의해 맥관구조 외부로 완전하게 씻겼다. 비장은 채취되고 페놀 레드가 없는 RPMI + 1% BSA에서 얼음 위에 유지되었다. 흉골과 대퇴골 골수는 Hanks 균형 염 용액으로 뼈로부터 씻기고, 그리고 전혈과 골수 둘 모두에 대한 단핵 줄기 세포 분획물은 Histopaque를 이용하여 단리되었다.
비장은 단일 세포 현탁액 내로 분리되고, 그리고 비장에서 주사된 MNC CTG 격리 (sequestration)의 정도는 유세포분석법을 이용하여 결정되었다. 덱사메타손 (총 2 mgs)은 비장에서 MNC CTG 총 세포 숫자 축적을 33-43% 감소시켰고, 반면 총 3 mgs 덱사메타손 투약은 비장에서 MNC CTG 총 세포 숫자 축적을 대략 70% 감소시켰다.
결과와 결론: 이들 데이터는 7일 면역억제 치료가 비장에서 격리하는 외부 주사된 MNC 줄기 세포의 숫자를 감소시킨다는 것을 지시한다.
실시예 10
활동성 배 중심 형성의 저해는 비장에 줄기 세포 결합을 감소시킨다.
(예언적)
인간 지원자들은 확립된 임상 프로토콜에 따라, 작용제의 모든 부작용을 제한하거나 완전하게 피하도록 선택된 용량을 이용하여, 상업적으로 구입가능한 일반 면역억제제, 예를 들면, 프레드니손으로 예방적으로 치료되었다. 다른 인간 지원자 군은 5 내지 100 mg/kg의 용량에서 CD40에 대한 길항성 항체, 예를 들면, HCD-122 항-CD40 mAb로 치료된다.
예방적 면역 억제에 앞서 또는 예방적 면역 억제의 최종일에, 자기조직성 줄기 세포는 50 mls 장골능 (iliac crest) 골수로부터 또는 전혈 성분채집 산물로부터 단핵 세포 분획물에서 단리된다. 줄기 세포를 내포하는 결과의 MNC 분획물은 차후 3D-PET 이미자화를 위해 2-[18F]-플루오르-2-데옥시-D-글루코오스 (18F-FDG)로, 또는 차후 SPECT 이미지화를 위해 적절한 핵 이미지화 라벨로 표지된다. 2 내지 10 백만 개 줄기 세포의 표지된 MNC 줄기 세포 내포 분획물은 정맥내 주사되고, 그리고 그들의 생물학적 분배는 투여후 60-90분 및 48시간까지 PET 또는 SPECT 이미지화에 의해 결정된다. MNC 사이에서 줄기 세포는 주사후 90분 이내에 정상 지원자의 비장에서 주로 축적한다. 대조적으로, 면역 억제되고 HCD-122 치료된 지원자는 MNC 줄기 세포 분획물의 감소된 비장 축적을 가진다.
실시예 11
활동성 배 중심 형성의 저해 또는 감소는 생쥐에서 심장에 줄기 세포 전달을 증강시키고 기능성 회복을 촉진한다.
(예언적)
3개월령과 12개월령 PN과 129S1/SvlmJ 생쥐는 항-CD40L mAb (PharMingen) 또는 대조 햄스터 Ig (Pierce, Rockford, IL)가 정맥내 (i.v.; 0, 2, 그리고 4일자에 250 mg/주사) 주사된다. 전혈과 골수 단핵 분획물 줄기 세포는 미경험 한 배 새끼 생쥐로부터 수집되고, 세포 추적자 염료, 예를 들면, CTO로 표지되고, 그리고 이후, 줄기 세포는 비오틴화된 항-CD34, 항-CD105, 항-SSEA1과 항-CD117 항체를 이용하여 Miltenyi 자성 분리 칼럼으로 정제된다. 실험 생쥐는 5일자에 100,000 내지 1M 정제된 줄기 세포가 안구뒤 또는 정맥내 주사된다. 15 내지 24시간후, 생쥐는 방혈되고, 혈액은 수집되고, 맥관구조는 잔여 적혈구 세포가 씻기고, 그리고 비장은 줄기 세포 축적의 형광 이미지화를 위해 수집된다. 줄기 세포 축적은 활동성 PNA+ 배 중심에서 명백한데, 대조 IG 치료된 PN 생쥐는 129S1 생쥐보다 활동성 배 중심의 훨씬 높은 숫자 및 귀결하는 상승된 줄기 세포 결합을 드러낸다. 항-CD40L mAb 치료된 129S1 생쥐는 설사 있다 하더라도, 극소수의 활동성 배 중심을 갖고 줄기 세포 결합이 없거나 미미하다. 항-CD40L mAb 치료된 PN 생쥐는 대조 Ig 치료된 PN 생쥐와 비교하여 감소된 숫자의 활동성 배 중심을 나타내고, 그리고 결과적으로, 줄기 세포 결합에서 대응하는 감소를 나타낸다.
이들 생쥐에서 심장 재생을 조사하기 위하여, 3개월령과 12개월령 PN과 129S1/SvlmJ 생쥐는 항-CD40L mAb (PharMingen) 또는 대조 햄스터 Ig (Pierce, Rockford, IL)가 정맥내 (i.v.; 0, 2, 그리고 4일자에 250 mg/주사) 주사된다. 4일자에, 이들 생쥐는 마취되고, 기저 심장 기능과 용적에 대한 초음파 심장 검진 (echocardiography)이 수행되고, 그리고 이후, 좌심실 자유벽의 대략 70%를 경색시키기 위해 LAD 관상 동맥이 개흉술 (thoracotomy)을 통해 영구적으로 결찰된다.
전혈과 골수 단핵 분획물 줄기 세포는 미경험 한 배 새끼 생쥐로부터 수집되고, 그리고 이들 줄기 세포는 비오틴화된 항-CD34, 항-CD105, 항-SSEA1과 항-CD117 항체를 이용하여 Miltenyi 자성 분리 칼럼으로 정제된다. 실험 생쥐는 LAD의 영구적 결찰후 3일 시점인 7일자에, 100,000 내지 1M 정제된 줄기 세포가 안구뒤 또는 정맥내 주사된다. 14일자, 21일자와 28일자에 생쥐에서 연속 초음파 심장 검진이 수행된다.
줄기 세포 주사가 제공되지 않는 Ig 대조 치료된 생쥐는 유의미한 심장 기능 감퇴, 증가하는 확장 종말기 용적 (end diastolic volume)과 수축 종말기 용적 (end systolic volume) 및 증가된 비-경색 벽 두께를 보이고, 이들 생쥐 중에서 50-100%가 28일자 이전에 심부전으로 폐사한다. 줄기 세포 주사가 제공되는 Ig 대조 치료된 129S1 생쥐는 줄기 세포 주사가 제공되지 않는 것들과 비교하여, 심부전 폐사에서 감소 및 약간 향상된 심장 기능을 보인다. 줄기 세포 주사를 받는 Ig 대조 치료된 PN 생쥐는 129S1 생쥐와 비교하여, 향상된 생존 또는 기능을 보이지 않는다. 대조적으로, 항-CD40L mAb 치료된 줄기 세포 주사된 129S1 생쥐는 생쥐의 모든 다른 군과 비교하여 생존과 심장 기능에서 유의미한 향상을 보이는 반면, 항-CD40L mAb 치료된 줄기 세포 주사된 PN 생쥐는 대조 Ig 치료된 줄기 세포 주사된 PN 생쥐와 비교하여, 향상된 생존과 심장 기능을 갖는다.
실시예 12
활동성 배 중심 형성의 저해 또는 감소는 인간에서 심장에 줄기 세포 전달을 증강시키고 기능성 회복을 촉진한다.
(예언적)
경색의 급성 단계에서 스텐트 이식 (stent implantation)으로 경피 관상 개입에 의해 성공적으로 치료된, 급성 ST-분절 상승 MI를 갖는 환자는 본 연구에 참여할 자격이 있다. 환자는 1일자에 30분 IV 주입에 의해, 5, 10, 20 또는 100mg/kg에서 항-CD40L mAb 레플리주맙으로 치료된다.
MI후 3 내지 15일 시점에, 단핵 세포는 Ficoll-Hypaque (Pharmacia, Uppsala, Sweden)에 의해 50 mL 골수 흡출물로부터 회수된다. 골수 흡출에서부터 최종 산물까지 전체 공정은 우수의약품제조관리기준 (Good Manufacturing Practice) 가이드라인에 따라 수행된다.
심장 기능은 MRI에 의해 추적되고, 그리고 추가의 결과에는 사망, 재발성 MI, 그리고 차후 혈관재생 또는 입원 (악화되지 않는 생존)이 포함된다. 위약 환자와 비교하여, 줄기 세포 치료된 환자는 역사적으로, 55-60%와 대비하여 80%의 악화되지 않는 생존률에서 1년간 감소를 갖는다. 항-CD40L과 줄기 세포 치료된 환자는 줄기 세포 단독 치료된 환자와 비교하여, 향상된 악화되지 않는 생존을 갖는다. 부가적으로, 항-CD40L 줄기 세포 치료된 환자는 줄기 세포 단독 치료된 환자와 비교하여 심실 용적 (ventricular volume)에서 더욱 감소, 그리고 향상된 심장 박출 파라미터를 보인다.
실시예 13
생쥐 비장에서 단핵 분획물 줄기 세포 결합 상대의 확인과 단리
수컷 129S1/SvlmJ 생쥐로부터 골수와 전혈 단핵 세포 분획물은 Histopaque를 이용하여 단리되고, 합동되고, 그리고 제조업체의 지시에 따라 CTO 표지되었다. 비장은 단일 세포 현탁액 내로 분리되고 CTB로 표지되었다. 줄기 세포는 성장 배지에서 7일 동안, 그 이후에 120 ng/ml 줄기 세포 인자 및 25% 말 혈청으로 보충된 FBS가 없는 성장 배지에서 7일 동안 MNC를 배양하고, 그리고 비-부착성 세포를 수확함으로써 획득되었다. 전형적으로, 40%까지의 비-부착성 세포가 CD34, CD105, SSEA1, 및/또는 CD117을 발현한다. 줄기 세포는 CTO로 표지되었다.
CTB-표지된 비장 세포는 CTO-표지된 MNC와 1:1의 비율 (500 ul 부피의 PBS에서 10 백만 개의 CTB-표지된 비장 세포 및 10M MNC), 또는 100:1의 비율 (500 ul 부피의 PBS에서 10 백만 개의 CTB-표지된 비장 세포 및 100,000개의 CTO-표지된 줄기 세포)에서, 37℃ 5% C02에서 로커에서 배양되었다. 분취량은 FL2와 FL9 형광을 포착하는 Beckman Coulter Gallios 유세포 분석기에서 이동 동안 채취되었다. 세포-세포 결합은 분산도 (scattergram)의 오른쪽 위 (UR) 사분면에서 CTB+CTO+ 공동-양성 신호의 시간-의존성 증가로서 명백하다. 배경 UR은 0.15%이었다. 비장 세포와 줄기 세포의 최대 결합은 50분에서 2.6% UR이고, 그리고 비장 세포와 MNC의 최대 결합은 30분에서 5% UR이었다.
결과와 결론: 이들 데이터는 비장에 대한 줄기 세포 결합에 관여하는 비장 세포가 유세포분석법을 이용하여 확인되고 단리될 수 있다는 것을 지시한다.
본 발명의 바람직한 구체예가 예시되고 설명되긴 했지만, 앞서 언급된 바와 같이, 본 발명의 기술적 사상과 범위를 벗어나지 않는 많은 변화가 만들어질 수 있다. 따라서 본 발명의 범위는 바람직한 구체예의 개시에 의해 한정되지 않는다. 그 대신에. 본 발명은 오로지 하기 청구항을 참조하여 결정되어야 한다.

Claims (16)

  1. 림프양 조직에 줄기 세포 결합을 저해하는 방법에 있어서, 상기 림프양 조직에 줄기 세포의 결합을 저해하는 치료제와 공동으로, 줄기 세포를 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  2. 청구항 1에 있어서, 림프양 조직은 비장, 페이에르판 및 림프절로 구성되는 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 청구항 1에 있어서, 치료제는 림프양 조직 내에서 배 중심에 줄기 세포의 결합을 저해하는 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 청구항 3에 있어서, 배 중심은 비장, 페이에르판 및 림프절 조직으로 구성된 군에서 선택되는 림프 조직 내에 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 청구항 3에 있어서, 배 중심은 활동성인 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 청구항 1에 있어서, 치료제는 하기와 같이 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법: 퓨린의 합성을 간섭하는 작용제, 대사길항물질, 비장에 방사선, 화학치료제, 면역억제제, 글루코코르티코이드, 항-베타 아밀로이드 작용제, 항-레서스 인자, 항-TNF 작용제, 항-에오탁신, 항-T 세포 수용체 (TCR) 작용제, 항-인터페론 작용제, 항-인터페론 알파 작용제, 항-인터페론 베타 작용제, 항-인터페론 감마 작용제, 항-TGF 작용제, 항-TGF알파 작용제, 항-TGF 베타 작용제, 항-인테그린 작용제, 항-알파 4 작용제, 항-인터류킨 작용제, 항-인터류킨 1 작용제, 항-인터류킨 2 작용제, 항-인터류킨 4 작용제, 항-인터류킨 5 작용제, 항-인터류킨 6 작용제, 항-인터류킨 12 작용제, 항-인터류킨 13 작용제, 항-인터류킨 23 작용제, 항-IgE 작용제, 항-혈관 부착 단백질 (VAP) 작용제, 항-B7 작용제, 항-혈관 내피 성장 인자 (VEGF) 작용제, 항-BAFF (BLyS) 작용제, 항-CTLA4 작용제, 항-보체 작용제, 항-CD2 작용제, 항-CD3 작용제, 항-CD4 작용제, 항-CD5 작용제, 항-CD20 작용제, 항-CD23 작용제, 항-CD25a 작용제, 항-CD40 작용제, 항-CD154 (CD40L) 작용제, 항-CD62L 작용제, 항-CD80 작용제, 항-CD147 작용제, 항-LFA1 작용제, 항-(CD11a) 작용제, 항-CD18 작용제, 퓨린 합성의 저해제, 피리미딘 합성의 저해제, 항-증식성 작용제, 대사길항물질 작용제, 항-폴산염 작용제, 그리고 항-mTO 작용제.
  7. 청구항 1에 있어서, 치료제는 하기와 같이 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법: 아자티오프린, 미코페놀산, 레플루노미드, 테리플루노미드, 메토트렉사트, 타크롤리무스, 시클로스포린, 피메크롤리무스, 아베티무스, 구스페리무스, 탈리도미드, 레날리도미드, 아나킨라, 시롤리무스, 데포로리무스, 에베로리무스, 템시롤리무스, 조타로리무스, 바이오리무스 A9, 에쿨리주맙, 인플릭시맙, 아달리무맙, 세톨리주맙 페골, 아펠리모맙, 골리무맙, 메폴리주맙, 오말리주맙, 네렐리모맙, 파랄리모맙, 엘실리모맙, 레브리키주맙, 우스테키누맙, 무로모납-CD3, 오텔릭시주맙, 테플리주맙, 비실리주맙, 클레놀릭시맙, 켈릭시맙, 자놀리무맙, 에팔리주맙, 에를리주맙, 아푸투주맙, 오크렐리주맙, 파스콜리주맙, 루밀릭시맙, 테넬릭시맙, 토랄리주맙, 아셀리주맙, 갈릭시맙, 가빌리모맙, 루플리주맙, 벨리무맙, 이플리무맙, 트레멜리무맙, 베르틸리무맙, 레르델리무맙, 메텔리무맙, 나탈리주맙, 토실리주맙, 오둘리모맙, 바실릭시맙, 다클리주맙, 이놀리모맙, 졸리모맙 아리톡스, 아토롤리무맙, 세델리주맙, 도를릭시주맙, 폰톨리주맙, 갠테네류맙, 고밀릭시맙, 마실리모맙, 모롤리무맙, 펙셀리주맙, 레슬리주맙, 로벨리주맙, 시플리주맙, 탈리주맙, 텔리모맙 아리톡스, 바팔릭시맙, 베팔리모맙, 아바타셉트, 벨라타셉트, 에타네르셉트, 페그수네르셉트, 아플리베르셉트, 알레파셉트, 릴로나셉트, 림포톡신 알파와 베타 저해제, 다세투주맙 SGN-40, HCD-12.
  8. 청구항 1에 있어서, 림프양 조직에 줄기 세포의 결합은 CD45 항원을 하향-조절하거나 차단하는 치료제를 투여함으로써 저해되는 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 청구항 1에 있어서, 치료제는 방사선인 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 청구항 1에 있어서, 줄기 세포는 외인성 또는 내인성 줄기 세포인 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 청구항 1에 있어서, 치료제는 화학치료제인 것을 특징으로 하는 방법.
  12. 청구항 1에 있어서, 줄기 세포는 하기와 같이 구성된 군에서 선택되는 질환을 치료하기 위해 투여되는 것을 특징으로 하는 방법: 혈액성 악성종양, 백혈병, 림프종, 암, 골화석증, 재생불량성 빈혈과 혈구 감소, 겸상 적혈구병과 지중해빈혈증, 윤부 줄기 세포 결핍, 유방 암, 급성 심근 경색, 관상 동맥 질환, 말초 혈관 질환, 심부전, 1형 당뇨병, 2형 당뇨병, 뇌졸중, 척수 손상, 신경모세포종, 다발성 경화증, 전신성 경화증, 홍반성 낭창, 만성 상처 치유, 화상, 골절 치유, 연골 치료, CNS 종양, 골관절염, 신부전, 파킨슨병, 골수종, 당뇨발, 담즙성 간경변, 확장성 심근병증, 빈혈, 색소성 망막염, 크론병, 당뇨병성 신경병증, 비만 세포증, 난소 암, 간질, 중증근무력증, 자가면역 질환, 육아종성 질환, 골괴사, 간부전, PMD 질환, 지질영양이상증, 탈수 질환, 연골 결손, 망막 질환, 홍반성 신염, 알츠하이머병, 외상성 뇌 손상, 육종, 근육염, 고혈당증, 황반 변성, 궤양성 대장염, 그리고 근육 변성.
  13. 개체에서 림프 조직에 줄기 세포의 결합을 저해하는 방법에 있어서, 림프 조직 내에 존재하는 배 중심의 형성을 저해하거나, 또는 림프 조직에서 배 중심을 파괴하거나 제거하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  14. 청구항 13에 있어서, 생식 세포의 형성을 저해하거나, 또는 생식 세포의 파괴 또는 제거를 촉진하는 치료제가 개체에 투여되고, 여기서 치료제는 퓨린의 합성을 간섭하는 작용제, 대사길항물질, 방사선, 면역억제제, 글루코코르티코이드, 항-베타 아밀로이드 작용제, 항-레서스 인자, 항-TNF 작용제, 항-에오탁신, 항-T 세포 수용체 (TCR) 작용제, 항-인터페론 작용제, 항-인터페론 알파 작용제, 항-인터페론 베타 작용제, 항-인터페론 감마 작용제, 항-TGF 작용제, 항-TGF알파 작용제, 항-TGF 베타 작용제, 항-인테그린 작용제, 항-알파 4 작용제, 항-인터류킨 작용제, 항-인터류킨 1 작용제, 항-인터류킨 2 작용제, 항-인터류킨 4 작용제, 항-인터류킨 5 작용제, 항-인터류킨 6 작용제, 항-인터류킨 12 작용제, 항-인터류킨 13 작용제, 항-인터류킨 23 작용제, 항-IgE 작용제, 항-혈관 부착 단백질 (VAP) 작용제, 항-B7 작용제, 항-혈관 내피 성장 인자 (VEGF) 작용제, 항-BAFF (BLyS) 작용제, 항-CTLA4 작용제, 항-보체 작용제, 항-CD2 작용제, 항-CD3 작용제, 항-CD4 작용제, 항-CD5 작용제, 항-CD20 작용제, 항-CD23 작용제, 항-CD25a 작용제, 항-CD40 작용제, 항-CD154 (CD40L) 작용제, 항-CD62L 작용제, 항-CD80 작용제, 항-CD147 작용제, 항-LFA1 작용제, 항-(CD11a) 작용제, 항-CD18 작용제, 퓨린 합성의 저해제, 피리미딘 합성의 저해제, 항-증식성 작용제, 대사길항물질 작용제, 항-폴산염 작용제, 그리고 항-mTOR 작용제로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  15. 청구항 13에 있어서, 치료제는 화학치료제인 것을 특징으로 하는 방법.
  16. 림프 조직에서 배 중심을 재생하는 방법에 있어서, 상기 배 중심은 화학 작용제, 생물학적 작용제 또는 방사선에 의해 손상되고, 상기 방법은 배 중심의 재생을 촉진하는 하나 또는 그 이상의 작용제를 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
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