KR20130094945A

KR20130094945A - Ｉｒ３５３５ 유도체를 유효성분으로 포함하는 모기 기피용 조성물

Info

Publication number: KR20130094945A
Application number: KR1020120016232A
Authority: KR
Inventors: 이삼빈; 이인선; 김배환; 유미희; 박성진; 이진호; 박민주; 김지은; 이지훈
Original assignee: 계명대학교 산학협력단
Priority date: 2012-02-17
Filing date: 2012-02-17
Publication date: 2013-08-27
Also published as: WO2013122304A1; KR101386233B1

Abstract

본 발명은 IR 3535 유도체를 유효성분으로 포함하는 모기 기피용 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 IR 3535 유도체 및 계피 초임계 오일을 유효성분으로 포함하는 모기 기피용 조성물을 제공한다. 본 발명의 조성물은 우수한 방향성 및 지속력을 갖고 있어 현저한 모기 기피 효과를 나타낸다.

Description

ＩＲ３５３５ 유도체를 유효성분으로 포함하는 모기 기피용 조성물{Compositions for Repelling Mosquitoes Comprising IR 3535 Derivative as Active Ingredient}

본 발명은 IR 3535 유도체를 유효성분으로 포함하는 모기 기피용 조성물에 관한 것이다.

모기는 지구상에 약 3,500종이 알려져 있고, 한국에서는 9속 55종이 기록되어 있다. 이러한 모기에 대한 피해는 1974년 아프리카 에티오피아에서 발견된 오스트랄로피테쿠스 유골의 사인이 말라리아라(malaria)라는 추론이 있다. 모기는 일반적으로 교미 후 암컷 성충의 난을 성숙시키기 위하여 동물에서 단백질을 얻기 위한 흡혈 활동을 하게 되며, 흡혈부위에 알레르기의 원인이 되는 타액(saliva)을 분비하게 된다. 이때 모기의 침샘 내 병원성 바이러스 균이 잠복된 경우 사람에게 질병을 매개하게 되는데, 그 대표적인 질병이 뎅기열(dengue hemorrhagic fever), 뇌염(encephalitis), 황열병(yellow fever) 등이다. 말라리아와 뎅기열에 의한 사망 인구는 매년 백만 명 이상으로 1일 기준 3,000명 이상의 사람들이 목숨을 잃고 있으며, 그 중 대부분이 어린 아동인 것으로 보고되고 있다. 오늘날에는 과학의 발달로 인한 환경오염과 지구 온난화로 모기의 출현 기간 및 발생빈도가 더욱 증가하고 있다.

이러한 모기를 생활공간으로부터 방제하기 위하여 이용된 방법 중 하나가 기피제이다. 모기 기피제는 야외에서의 사용이 제한되는 살충제대신 개인의 보호방법으로 이용된다. 주로 에어로졸이나, 액체, 로션의 제형으로 이용되고 있으며, 대표적인 기피성분은 합성 화합물(synthetic compounds)와 천연성분(natural compounds)으로 나눈다. 모기 기피제의 주요 성분으로는 유기인계 및 피레드로이드계 살충제를 사용하고 있으며 세계적으로 가장 널리 사용되는 성분 DEET(N, N-diethyl-m-toluamide)이다. 1964년 미국의 군용보급품으로 사용되어 전 세계적으로 보급되어 사용되고 있다. 하지만, 인체의 서로 다른 부위에 적용했을 때, 시간 경과에 따른 유효 잔존량이 다르고 사람의 피부를 통한 침투율이 높고, 경구독성 때문에 임산부나 어린아이 등에서 아직 안정성이 입증되지 않았다. 이러한 화학적 합성 모기 기피제에 대한 문제점을 보완하기 위해서 천연성분인 식물정유를 이용한 기피제의 연구가 진행되고 있지만 지속성이 짧고, 기피효과를 위해서 많은 양을 첨가해야 되는 문제점이 있다.

본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.

본 발명자들은 인체에 무해하면서 모기에 대해 높은 기피활성을 갖는 모기 기피제를 개발하고자 노력하였다. 그 결과, IR 3535 유도체가 인체에 무해하면서도 우수한 모기 기피 효과를 가짐을 확인함으로써, 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 목적은 모기 기피용 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 목적은 모기 기피용 화장료 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 모기 기피 방법을 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명 및 청구범위에 의해 보다 명확하게 된다.

본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 IR 3535 유도체를 유효성분으로 포함하는 모기 기피용 조성물을 제공한다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 IR 3535 유도체는 하기 화학식 1으로 표시되는 화합물이다.

[화학식 1]

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 IR 3535 유도체는 IR 3535로부터 화학적으로 합성할 수 있다.

IR 3535 유도체의 합성은 당업계에 공지된 다양한 화학적 합성 방법을 이용할 수 있다. 바람직하게는 선구 물질인 IR 3535에 염화아세트산 및 피리딘을 처리하여 반응시키고, 감압여과 한 후 크로마토그래피로 정제하여 수득한다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 IR 3535 유도체는 현저한 모기 기피 효과(표 3)를 나타내며, 피부에 적용하였을 때 피부 자극 또는 피부 감작을 유발시키지 않는다(표 19, 24).

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 모기 기피용 조성물의 총 중량에 대하여 IR 3535 유도체의 함량은 0.1-30 중량%이며, 바람직하게는 0.1-25 중량%이고, 보다 바람직하게는 1-20 중량%이며, 보다 더 바람직하게는 1-15 중량%이고, 가장 바람직하게는 1-10 중량%이다.

본 발명의 다른 일 양태에 따르면, 본 발명은 IR 3535 유도체 및 계피 초임계 오일을 유효성분으로 포함하는 모기 기피용 조성물을 제공한다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 IR 3535 유도체는 상기 화학식 1으로 표시되는 화합물이다.

본 발명의 조성물에 포함되는 계피 초임계 오일은 기본적으로 초임계유체 추출 과정에 따라 제조될 수 있다. 초임계 추출의 원재료인 계피(Cinnamomum verum)를 적합한 크기의 입자 분말 형태가 되도록 파쇄하여 사용한다. 본 발명의 방법에서 사용할 수 있는 초임계 추출용기는 온도와 압력이 조절될 수 있으며, 추출원료와 초임계 유체가 접촉하도록 구성된 용기이면 특별히 한정되지 않는다.

본 발명에서 이용되는 초임계유체는 당업계에서 통상적으로 이용되는 다양한 초임계유체를 포함하며, 바람직하게는 물 또는 이산화탄소를 사용한다.

상기 초임계유체와 함께 사용되는 보조용매는 당업계에서 통상적으로 이용되는 극성 용매를 포함하며, 바람직하게는 알코올, 물, 에틸렌 글라이콜, 폴리에틸렌글라이콜, 프로필렌카보네이트, 포름산, 아세트산, 아세토니트릴, 클로로디프루오로메탄 또는 이의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되며, 보다 바람직하게는 메탄올, 에탄올, 프로판올, 1-헥사놀, 2-메톡시에탄올 및 그의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 알코올이고, 보다 더 바람직하게는 메탄올 또는 에탄올이며, 가장 바람직하게는 에탄올이다.

본 발명의 바람직한 구현 예에 따르면, 상기 초임계 추출에서의 압력은 100-500 bar, 보다 바람직하게는 200-400 bar, 가장 바람직하게는 300-400 bar이다.

본 발명의 다른 바람직한 구현 예에 따르면, 상기 초임계 추출에서의 온도는 10-100℃, 보다 바람직하게는 30℃-70℃, 보다 더 바람직하게는 30-50℃이고, 가장 바람직하게는 30-40℃이다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 모기 기피용 조성물의 총 중량에 대하여 계피 초임계 오일의 함량은 0.1-25 중량%이며, 바람직하게는 0.1-20 중량%이고, 보다 바람직하게는 1-20 중량%이며, 보다 더 바람직하게는 1-15 중량%이고, 가장 바람직하게는 1-10 중량%이다.

본 발명의 다른 일 양태에 따르면, 본 발명은 상기 모기 기피용 조성물의 화장품학적 유효량; 및 화장품학적으로 허용되는 담체를 포함하는 모기 기피용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 상기 모기 기피용 조성물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 다른 일 양태에 따르면, 본 발명은 상기 모기 기피용 화장료 조성물을 피부에 도포하는 것을 특징으로 하는 모기 기피 방법을 제공한다.

본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:

(ⅰ) 본 발명은 IR 3535 유도체를 유효성분으로 포함하는 모기 기피용 조성물을 제공한다.

(ⅱ) 본 발명은 IR 3535 유도체 및 계피 초임계 오일을 유효성분으로 포함하는 모기 기피용 조성물을 제공한다.

(ⅲ) 본 발명의 조성물은 우수한 방향성 및 지속력을 갖고 있어 현저한 모기 기피 효과를 나타낸다.

(ⅳ) 본 발명은 모기 기피용 화장료 조성물을 제공한다.

(v) 본 발명은 모기 기피용 화장료 조성물을 피부에 도포하는 것을 특징으로 하는 모기 기피 방법을 제공한다.

도 1은 시험물질의 모기 기피 효과를 확인하기 위해 제작한 사육장에 대한 모식도이다.
도 2는 본 발명의 IR 3535 유도체(LJH-1-58)의 화학 구조식을 나타낸 그림이다.
도 3은 시험물질에 대한 안점막자극시험에서 시험물질의 점안 및 세척 과정을 나타낸 그림이다.
도 4는 시험물질에 대한 안점막자극시험 결과를 나타낸 그림이다.
도 5는 시험물질에 대한 피부 일차자극시험 시 처치 과정을 나타낸 그림이다.
도 6은 시험물질에 대한 피부 일차자극시험 결과를 나타낸 그림이다.
도 7은 시험물질에 대한 피부 감작성 시험 시 처치 과정을 나타낸 그림이다.
도 8은 시험물질에 대한 피부 감작성 시험 결과를 나타낸 그림이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실시예

재료 및 방법

시험곤충

본 실험에 사용된 모기는 흰줄숲모기(Aedes albopictus)와 빨간집모기(Cx. pipiens pallens)의 유충을 채집 및 분양 받아 누대 사육하였다. 온도 25-28℃, 습도는 75-95％, 광조건은 16:8(L:D)를 유지하면서 10％ 설탕물을 공급하고 흡혈을 위해 SD 랫트(4주령)를 공급하였고, 난괴는 10 X 10 X 10 cm의 작은 상자에 모기종류 별로 구분하여 수거하였고, 매일 증류수를 공급하면서 성장 단계별로 유충을 구별하여 식이(fish diet)를 증가시키면서 공급하였고, 최종으로 성장한 번데기는 매일 건져서 성충 사육장(40 X 30 X 20)(도 1)에서 사육하였다. 성충은 성장주기에 따라 구분하여 교미시켜 흡혈력을 유지하였다.

생물 검정(Arm-in-cage test)

기피 실험은 가로 40, 세로 30, 높이 30 cm 규격의 상자에 천을 연결하여 손에서 팔 일부만을 노출 시키고 나머지 부분은 보호 할 수 있도록 제작하였다. 기피력 평가는 성충 주령 5일 이상의 교미된 암컷 50 마리를 기피실험 상자에 방사하여 실험하였고, 실험 6-8시간 전 10% 설탕물 공급을 중단하여 절식한 후, 실험 하였다. 흰줄숲모기의 경우는 24시간 흡력이 가능한 종이지만 가장 활발한 시간을 관찰하여 오전 10시, 오후 8시에 각각 실험하였고, 야행성인 빨간집모기는 오후 7시 30분에서 10시 30분 사이 암 조건하에서 모기가 인식할 수 없는 파장인 빨간색 조명만을 사용하여 실험하였다. 실험 시 온도는 27±1℃, 상대습도 75±5%, 노출부위는 시료 별로 각각 5분씩 노출하였으며, 노출 부위에 1 mL의 시료를 고르게 도포하였다. 모기는 샘플에 따라 매번 바꾸었으며 3회 반복하여 실험하였고, 대조구로는 24% DEET를 사용하였다. 바이팅 횟수는 5초 이상 랜딩한 모기와 바이팅한 모기를 카운팅 하였다.

3-( 뷰틸아미노 )프로판산 메틸 에스터의 합성

아크릴산 메틸 에스터(2.40 g, 2.73 X 10^-2 moL)를 아세토나이트릴 5 mL에 녹인 후, n-뷰틸아민(1 g, 1.36 X 10^-2 moL)을 넣고 120℃, 70 W의 조건에서 마이크로파(microwave) 반응을 30분 동안 시켰다. 감압증류로 용매를 제거하여 3-(뷰틸아미노)프로판산 메틸 에스터를 수율 96.4％(2.06g)로 얻었다.

3-(N- 뷰틸아세트아미노 ) 프로판산 메틸 에스터의 합성( LJH -1-58)

3-(뷰틸아미노) 프로판산 메틸 에스터(2.06 g, 1.29 X 10^-2 moL)를 디클로로메테인(DCM) 30 mL에 녹인 후, 염화아세트산(1.83 mL, 2.58 X 10^-2 moL), 피리딘 3.21 mL, 3.87 X 10^-2 moL)을 넣고 상온에서 1시간 교반시켰다. 반응물을 감압여과 하여 얻어진 여과액을 물과 5％ 구연산 용액으로 씻어 준 후, DMC층을 무수 황산나트륨으로 처리하여 물을 제거하였다. 용매를 감압증류로 제거한 다음 헥세인과 에틸 아세테이트(1:2)를 이용한 컬럼크로마토그래피로 정제하여 3-(N-뷰틸아세트아미노)프로판산 메틸 에스터(도 2)를 수율 72.3％(1.88 g)로 얻었다.

¹H NMR(CDCl3, 400MHz) : δ 3.70(m, 3H), 3.59(m, 2H), 3.28(m, 2H), 2.62(m, 2H), 2.09(m, 3H), 1.55(m, 2H), 0.95(m, 3H)

¹²C NMR(CDCl3, 400MHz) :δ 176.68, δ 175.37, δ 49.29, δ 48.13, δ46.27, δ 36.37, δ 34.86, δ 24.98, δ23.83, δ17.53

계피 초임계 오일의 제조

초임계 추출에는 초임계 추출 장치 Waters AD-RC 08(Waters CO., Milford, MA, USA)를 사용하였다. 시료를 추출 용기에 300 g을 넣어 이산화탄소(CO₂)유속 : 보조용매유속 = 47.5 g/분 : 2.5 g/분으로 하여 총 유속(이산화탄소유속 + 보조용매유속)은 50 g/분의 속도로 흘려주었고, 보조용매로는 HPLC급 에틸 알코올(JT Baker Co., Phillipsburg, NJ, USA)를 사용하였다. 추출 온도는 35℃, 추출 시간은 120분으로 고정하였으며, 압력을 200, 300, 400 bar로 하여 압력이 다른 3가지 조건에서 추출하였다. 회수된 추출물을 40℃에서 회전진공농축기(EYELA Co., Tokyo, Japan)를 이용하여 농축한 후 실험에 사용하였다.

실험결과

실시예 1 : 모기 기피 실험( Semi - field test )

모기 기피 실험

계피 초임계 추출물의 모기 실험 180 × 60 × 60 ㎝(가로×세로×높이)의 직사각형의 아크릴 상자를 제작하여 칸막이를 이용하여 동일한 크기의 상자 세 개를 각각 나누어 케이지 A, 케이지 B, 케이지 C로 구분하였다(도 1). 케이지 B에는 지름 20 cm의 구멍을 양쪽으로 각각 만들어 케이지 A, 케이지 C로 모기가 이동할 수 있도록 하였다. 케이지 A에는 계피 초임계 추출물, IR 3535, IR 3535 유도체를 혼합하여 배치하고 케이지 C에는 대조구(70% EtOH)를 두고 냄새가 고르게 퍼지도록 약 10분 정도 방치한 다음 케이지 B에 칸막이를 열어 30분 후에 각각의 케이지의 모기의 마리 수를 측정하였다.

LJH -1-58의 모기 기피효과

5, 10% 농도의 LJH-1-58과 24%의 DEET의 빨간집모기에 대한 기피력을 관찰한 결과는 표 1에 나타내었다. 1-2분 경과 후 10%의 LJH-1-58에서 높은 기피력을 보였으며, 4-5분 경과 후까지도 기피력이 지속됨을 확인하였다. 10%의 LJH-1-58과 24% DEET의 기피력이 유사하게 나타난 것으로 보아 LJH-1-58은 DEET를 대체할 수 있는 IR 3535의 새로운 합성물질로 사용가능 할 것이다. 또한 흰줄숲모기에서도 약 90%의 기피력을 보여(표 2) 두 종의 모기 모두에 LJH-1-58의 적용이 가능하다.

IR 3535 유도체(LJH-1-58)의 빨간집모기 기피 효과

농도 (%)	대조군에서 랜딩한 모기 수 (Mean ± S.D)	노출 기간(% Mean±S.D)¹ ⁾
농도 (%)	대조군에서 랜딩한 모기 수 (Mean ± S.D)	0-1분	1-2분	2-3분	3-4분	4-5분
5.0	11.32 ± 3.3	22.2 ± 23.4	59.0 ± 52.4	0.0 ± 0.0	8.3 ± 14.4	37.8 ± 40.2
10.0	8.2 ± 4.7	50.0 ± 70.7	100.0 ± 0.0	93.3 ± 11.5	94.8 ± 9.0	100.0 ± 0.0
DEET² ⁾	16.04 ± 8.4	100.0 ± 0.0	100.0 ± 0.0	100.0 ± 0.0	100.0 ± 0.0	95.2 ± 8.3

¹⁾% 기피 효과 = 100 x (대조군에서 바이팅한 모기 수 - 처리군에서 바이팅한 모기 수) / 대조군에서 바이팅한 모기 수

²⁾24% 디에틸톨루아마이드(DEET)

IR 3535 유도체(LJH-1-58)의 흰줄숲모기 기피 효과

농도 (%)	대조군에서 랜딩한 모기 수 (Mean ± S.D)	노출 기간(% Mean±S.D)
농도 (%)	대조군에서 랜딩한 모기 수 (Mean ± S.D)	0-1분	1-2분	2-3분	3-4분	4-5분
5.0	6.6±4.22	59.6±4.61	9.1±2.64	39.4±1	14.1±2.51	14.1±4.93
10.0	7.3±2.87	95.5±0.58	81.8±0.58	77.1±0.58	90.8±0.58	88±0.58
DEET	16.04 ± 8.4	100.0 ± 0.0	100.0 ± 0.0	100.0 ± 0.0	100.0 ± 0.0	95.2 ± 8.3

LJH -1-58 및 계피 초임계 오일의 모기 기피효과

1, 5, 10% 계피 초임계 오일 및 1% 계피 초임계 오일과 10% IR 3535 혼합물, 1% 계피 초임계 오일과 10% LJH-1-58 혼합물의 방향 기피 실험의 결과는 표 3과 같이 나타났다. 모기를 방사한 후 30분 동안 케이지 B에서 계피 초임계 오일이 있었던 케이지 A로 이동한 모기는 오일의 농도가 증가할수록 20%, 18.75%, 8.57%로 총 마릿수가 감소하였다. 또한 1%의 계피 초임계 오일과 10%의 IR 3535 및 LJH-1-58 각각의 혼합물에 대해 기피활성을 관찰한 결과, 케이지 A로 이동한 모기의 총 마릿수는 IR 3535 혼합물에서 12.9%, LJH-1-58 혼합물에서 7.4%의 수준으로 나타나 계피 초임계 오일과 LJH-1-58의 혼합물이 방향성 및 모기 기피효과에서 아주 우수한 활성을 가짐을 확인하였다.

계피 초임계 오일과 IR 3535 또는 LJH-1-58의 혼합물의 노출 후에 모기 숫자의 변화

샘플	각 케이지에서 모기 숫자의 상대적 비율
샘플	케이지 A(%)	케이지 B(%)	케이지 C(%)
1%¹⁾	20	60	20
5%	18.75	46.63	40.63
10%	8.57	54.14	34.29
1%+IR 3535²⁾	12.9	38.71	25
1%+LJH-1-58³⁾	7.4	55.55	37

¹⁾계피 초임계 오일(400 bar, 35 ℃).

²⁾ 계피 초임계 오일(400 bar, 35 ℃) 1% + 10% IR 3535.

³⁾ 계피 초임계 오일(400 bar, 35 ℃) 1% + 10% LJH-1-58.

실시예 2: 피부 안정성 평가( 단회경구투여독성 시험)

개요

본 시험에서는 기피제(LJH-1-58)를 피부에 적용할 경우 안전한가 여부를 평가하기 위해, 「의약품등의 독성시험기준」(식품의약품안전청 고시 제2009-116호), 「기능성화장품등의 심사에 관한 규정」(식품의약품안전청 고시 제2009-166호) 및 「비임상시험관리기준」에 준하여 단회투여독성, 피부일차자극, 안점막자극, 피부감작성 유발여부에 대해 실험을 실시하였다.

시험계

6주령 ICR 마우스를 입수(효창 사이언스, 한국)하여 7주령에 물질을 투여하였다. 실험에 이용한 동물은 총 18마리(웅성: 9마리, 자성: 9마리)였으며, 일주일간 검역 및 적응기간을 가지며 이 기간 동안 매일 관찰을 실시하여 건강한 동물만을 시험에 사용하였다.

시험방법

동물을 검역, 적응기간 중의 체중을 기초로 하여 선별한 후 군분리 당일의 체중을 기초로 하여 무작위법으로 각 군의 평균체중이 가능한 한 균등하도록 군을 구성하였다. 군당 마릿수는 암수 각 3마리씩으로 할당하여 실험을 실시하였다. 개체식별은 꼬리 표식법으로 하였으며, 케이지당 3마리씩 수용하였다. 투여전일 절식(14-16시간 정도)한 후, 존데를 이용하여 시험물질을 경구투여하였다

시험군의 구성

시험물질	투여량	성별	시험 동물 수	투여경로
용매(PEG-400)	10 ml/kg	웅성	3	경구
용매(PEG-400)	10 ml/kg	자성	3	경구
기피제(LJH-1-58) 50%	10 ml/kg	웅성	3	경구
기피제(LJH-1-58) 50%	10 ml/kg	자성	3	경구
기피제(LJH-1-58) 100%	10 ml/kg	웅성	3	경구
기피제(LJH-1-58) 100%	10 ml/kg	자성	3	경구

관찰 및 검사항목

투여 당일은 투여 후 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간까지는 매시간 마다 관찰하고, 투여 다음날부터 하루에 1회씩 매일 14일간 관찰함을 원칙으로 하였다. 약물에 의한 일반상태의 변화, 중독증상 및 폐사 여부를 관찰하였다. 체중은 투여 직전, 투여 후 1일, 3일, 7일 및 부 검당일 부검 직전(14일)에 측정하였다.

시험결과

기피제 100%를 투여한 군은 투여당일에는 별다른 이상을 보이지 않았지만, 투여 후 1일 경과 후 모두 폐사하였다. 기피제 50% 투여군과 용매투여군은 실험기간 중 특이한 임상증상을 보이거나 사망한 동물이 없었다(표 5-10).

본 시험조건에서 기피제는 단회투여경구독성 시험결과 100% 원액을 10 ml/kg으로 투여할 경우 모두 폐사하였으며, 50% 희석액 10 ml/kg를 투여 한 경우는 모두 생존하였으므로, 본 시험물질의 LD₅₀치는 100% 원액 기준으로 5-10 ml/kg 정도로 추정된다.

시험 결과

재료	투여량	성별	치사율	LD₅₀
용매(PEG-400)	10 ml/Kg	웅성	0/3	기피제 LD₅₀치는 5-10 ml/kg 정도로 추정됨
용매(PEG-400)	10 ml/Kg	자성	0/3
기피제 (LJH-1-58) 50%	10 ml/Kg	웅성	0/3
기피제 (LJH-1-58) 50%	10 ml/Kg	자성	0/3
기피제 (LJH-1-58) 100%	10 ml/Kg	웅성	3/3
기피제 (LJH-1-58) 100%	10 ml/Kg	자성	3/3

시험 물질을 경구 투여한 ICR 마우스의 치사율

재료	성별	투여량	시간			투여 후 일수											치사율
재료	성별	투여량	2	4	6	1	2	3	4	5	6	7	…	…	13	14	치사율
용매(PEG-400)	남	10 ml/kg	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0/3
용매(PEG-400)	여	10 ml/kg	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0/3
기피제(LJH-1-58) 50%	남	10 ml/kg	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0/3
기피제(LJH-1-58) 50%	여	10 ml/kg	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0/3
기피제(LJH-1-58) 100%	남	10 ml/kg	0	0	0	3	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	3/3
기피제(LJH-1-58) 100%	여	10 ml/kg	0	0	0	3	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	3/3

시험 물질을 경구 투여한 ICR 마우스의 체중 변화

재료	성별	투여량	투여 후 일수
재료	성별	투여량	0	1	3	7	14
용매(PEG-400)	남	10 ml/kg	*20.04 ±0.69	21.15 ±0.87	24.53 ±1.24	26.85 ±1.58	30.43 ±1.99
용매(PEG-400)	여	10 ml/kg	19.01 ±0.65	20.45 ±0.74	23.21 ±1.01	25.52 ±1.54	27.25 ±1.85
기피제(LJH-1-58) 50%	남	10 ml/kg	21.07 ±0.61	21.98 ±0.98	25.82 ±1.53	28.01 ±1.16	31.13 ±1.58
기피제(LJH-1-58) 50%	여	10 ml/kg	20.05 ±0.56	20.91 ±0.75	23.95 ±1.45	26. 54 ±1.54	28.85 ±2.00
기피제(LJH-1-58) 100%	남	10 ml/kg	21.47 ±0.66	-	-	-	-
기피제(LJH-1-58) 100%	여	10 ml/kg	20.02 ±0.59	-	-	-	-

* 모든 값들은 표준편차(± S.D.)로 나타냄.

각 그룹당 동물 수는 3마리였음.

PEG-400을 경구 투여한 ICR 마우스(웅성)의 임상적 소견

임상적 소견	시간			투여 후 일수
임상적 소견	2	4	6	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14
동물 개체 수	3	3	3	3	3	3	3	3	3	3	3	3	3	3	3	3	3
징후 없음	3	3	3	3	3	3	3	3	3	3	3	3	3	3	3	3	3
호흡곤란	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
활동성 감소	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
후궁반장	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
통각상실증	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
반사신경	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
타액분비	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
안구 징후	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
심혈관계 징후	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
마비	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
털이 곤두섬	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
체인-스톡스 호흡	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
사망	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0

기피제(LJH-1-58) 50%를 경구 투여한 ICR 마우스(자성)의 임상적 소견

기피제(LJH-1-58) 100%를 경구 투여한 ICR 마우스(웅성)의 임상적 소견

임상적 소견	시간			투여 후 일수
임상적 소견	2	4	6	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14
동물 개체 수	3	3	3	3	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
징후 없음	3	3	0	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
호흡곤란	0	0	0	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
활동성 감소	0	0	3	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
후궁반장	0	0	0	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
통각상실증	0	0	0	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
반사신경	0	0	0	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
타액분비	0	0	0	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
안구 징후	0	0	0	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
심혈관계 징후	0	0	0	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
마비	0	0	0	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
털이 곤두섬	0	0	0	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
체인-스톡스 호흡	0	0	0	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
사망	0	0	0	3	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-

실시예 3: 피부 안정성 평가( 안점막자극시험 )

시험계

3개월령 NZ 흰색 토끼(샘타코 코리아)를 구입하고, 일주일간 검역 및 적응기간을 가지며 이 기간 동안 매일 관찰을 실시하여 건강한 동물만을 시험에 사용하였다.

시험방법

검역 및 적응기간 중의 체중을 기초로 하여, 안검사 후 각막 손상 등 안구에 이상이 없는 동물을 선별한 후, 임상 및 체중증가 등에 이상이 없으며 상태가 양호한 건강한 동물을 군 분리 당일의 체중과 주령을 기초하여 무작위법으로 각 군의 평균체중이 균등하도록 군을 구성하였다. 4마리 중 2마리는 오른쪽 눈에 시험물질을 점안하고, 왼쪽 눈은 무처치 대조안으로 두었으며, 나머지 2마리는 오른쪽 눈은 시험물질 점안 후 세척군, 왼쪽 눈은 대조물질인 PEG-400을 점안하였다(도 3).

시험군의 구성

시험물질	동물수	시험사이트 수 R / L	시험농도(%)	용매
기피제 (LJH-1-58)	2	비세안 (2)/ 무처치 (2)	10	PEG-400
기피제 (LJH-1-58)	2	세안 (2) / PEG-400 (2)	10	PEG-400

시험물질 농도 및 투여량

시험물질은 PEG-400에 희석하여 10% 농도로 안구당 0.1 ml씩 투여하였다. 세척군 안구는 시험물질 점안 30초 후에 미온 생리식염수를 이용하여 충분히 세안하였다.

관찰 및 검사항목

시험기간 동안 매일 일반증상 및 사망여부를 관찰하였다. 적용부위의 관찰

적용부위는 시험물질 점안 후 1 시간, 24 시간, 48 시간, 72 시간째 및 4 일, 7 일째에 관찰을 하였고 안점막 반응의 평가는 의약품등의독성시험 기준의 안구 병변의 등급에 따라 평점으로 평가하였다.

결과의 해석

반응 평가에 의한 결과의 판정은 일반적으로 많이 사용되는 Draize 안자극 구분표를 따랐다.

안자극 결과 판정표

평가	안정성 구분			판정
평가	급성안점막 자극지수^a)	평균안점막 자극지수^b)	7일-개체별 안점막자극지수^c)	판정
무자극	0-1	0(48시간 후)	-	사용가능
사실상 무자극	1-5	≤1(48시간 후)	-	사용가능
최소 자극	5-15	≤5(48시간 후)	-	사용농도조정
경자극	15-30	≤5(4일 후)	-	사용농도조정
중자극	30-60	≤20(7일 후)	≤30(실험한 모든 동물)	사용불가
강자극	60-80	≤40(7일 후)	≤60(실험한 모든 동물)	사용불가
극심한 자극	80-110	-	-	사용불가

^a) A.O.I. (Acute ocular irritation index): 평균안점막 자극지수 가운데 최대값

^b) M.O.I. (Mean ocular irritation index): 총 스코어/실험 동물 수

^c) 7일 I.O.I. (Individual ocular irritation index): 7일째 각 동물의 스코어

시험결과

실험기간 중 특이한 임상증상을 보이거나 사망한 동물은 없었다. 기피제(LJH-1-58) 10%의 비세안군 자극지수(A.O.I)는 2 로 ‘사실상 무자극’을 나타내었으며, 세안군은 0 으로 ‘무자극’을 나타내었다. 용매로 사용된 PEG-400의 자극지수(A.O.I)는 3 으로 ‘사실상 무자극’을 나타내었다. 기피제 10%의 비세안군 자극은 24시간 이후 모두 없어졌으며, 용매인 PEG-400의 발적은 일부 남아 있었으나 48시간 이후에는 모두 회복되었다(도 4).

시험 결과

시험물질	시험농도(%)	자극결과: 평균안점막 자극지수(비세안/세안)				급성안점막 자극지수
시험물질	시험농도(%)	1시간	24시간	48시간	72시간	급성안점막 자극지수
기피제 (LJH-1-58)	10	2/0	0/0	0/0	0/0	2
PEG-400	-	3	2	0	0	3

본 시험 결과, 기피제 10%는 급성안점막 자극지수가 5 이하이므로 안점막 자극을 유발하지 않는 것으로 판단된다. 초기의 약한 자극은 용매로 사용된 PEG-400의 영향일 것으로 추정된다.

기피제(LJH-1-58)의 눈 자극성 시험 결과

기피제(10%)		1시간						24시간
기피제(10%)		비세안군		세안군		PEG-400		비세안군		세안군		PEG-400
반응 / 동물 수		1	2	3	4	5	6	1	2	3	4	5	6
각막	혼탁도(A)	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
	해당면적(B)	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
	스코어: AXBX5	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
홍 채	자극(A)	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
홍 채	스코어: A X 5	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
결막	발적(A)	1	1	0	0	1	1	1	0	0	0	1	0
	부종(B)	0	0	0	0	1	0	0	0	0	0	1	0
	분비물(C)	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
	Score:(A+B+C)X 2	2	2	2	2	2	2	2	0	0	0	0	0
총 스코어		4		0		6		0		0		4
평균 스코어		2		0		3		0		0		2
한방추출물(1%)		48시간						72시간
한방추출물(1%)		비세안군		세안군		PEG-400		비세안군		세안군		PEG-400
반응 / 동물 수		1	2	3	4	5	6	1	2	3	4	5	6
각막	혼탁도(A)	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
	해당면적(B)	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
	스코어: AXBX5	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
홍 채	자극(A)	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
홍 채	스코어: A X 5	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
결막	발적(A)	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
	부종(B)	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
	분비물(C)	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
	스코어:(A+B+C)X 2	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
총 스코어		0		0		0		0		0		0
평균 스코어		0		0		0		0		0		0

실시예 4: 피부 안정성 평가(피부 일차자극시험)

시험계

시험방법

검역 및 적응기간 중의 체중을 기초로 하여, 등 부위 제모 시 피부 상태가 양호한 동물을 시험에 무작위법으로 군을 구성하였다. 4마리 중 2마리는 기피제(LJH-1-58) 10%를, 2마리는 기피제 50%를 도포하였다.

시험군의 구성

시험물질	동물수	시험 사이트 수	시험 농도(%)	용매
기피제 (LJH-1-58) 10%	2	8(비찰과 4, 찰과 4)	10%	PEG-400
기피제 (LJH-1-58) 50%	2	8(비찰과 4, 찰과 4)	50%	PEG-400

시험물질 처치

토끼 등 부위 털을 가로세로 약 10 cm 이상 되도록 제모한 후, 왼쪽은 시험물질 적용부위, 오른쪽은 대조물질 적용부위로 하고, 각 적용부위는 찰과 부위와 비찰과 부위를 두어 실험을 실시하였다. 시험물질은 적절한 농도로 조제하여 각 사이트 당 0.5 ml씩 도포하여, 24시간 폐쇄 첩포 하였다(도 5).

관찰 및 검사항목

일반상태 및 사망여부를 매일 관찰하였으며, 체중은 군분리 시와 72 시간째에 측정하였다. 시험물질 적용부위는 적용 24 시간째와 72 시간째에 관찰을 하며 피부 반응의 평가는「의약품등의독성시험기준」(식품의약품안전청고시 제1999-61호)의 피부반응의 평가기준에 따라 평점으로 평가하였다.

피부반응의 평가기준

홍반과 가피 형성	평점
홍반이 없음	0
아주 경도의 홍반(육안으로 겨우 식별할 정도)	1
명료한 홍반	2
중등도에서 강한 홍반	3
심홍색의 강한 홍반과 가피 형성	4
부종	평점
부종 없음	0
매우 가벼운 부종(육안으로 겨우 식별한 정도)	1
명료한 부종(주위와 명료한 구분이 됨)	2
중등도의 부종(1 mm 정도 부어 올랐을 경우)	3
강한 부종(1 mm 이상 부어 오르고 노출 부위 밖에 까지 확장된 상태)	4

결과의 해석

피부일차자극지수(P.I.I.)는 시험물질 적용 후 24 시간째와 72 시간째의 홍반과 부종 평점에 의하여 산출하였다. 찰과 부위와 비찰과 부위 각각에 홍반 평점의 평균과 부종 평점의 평균을 구하며 24 시간째의 결과와 72 시간째의 결과의 평균값을 피부일차자극지수로하여 피부일차자극 결과 판정표에 의하여 결과를 판정하였다.

피부일차자극 결과 판정표

안전성 구분	피부일차자극 지수(P.I.I.)	판 정
0 - 0.5	무자극(Non irritant)	사용가능
0.6 - 2.0	경자극(Mildly irritant)	사용농도조정
2.1 - 5.0	중자극(Moderately irritant)	사용불가
5.1 이상	강자극(Severely irritant)	사용불가

시험결과

실험기간 중 특이한 임상증상을 보이거나 사망한 동물은 없었다. 기피제 10%의 P.I.I.는 0.13으로 무자극 범위에 해당하므로 사용가능하다. 기피제 50%의 P.I.I.는 0.13으로 무자극 범위에 해당하므로 사용가능하다(표 19-21). 시험물질 및 용매 처치부위 중 찰과 부위에서 24시간째에 일부 약한 홍반이 관찰되었으나, 이는 물리적 자극에 의한 일시적인 자극으로 판단되며, 곧바로 정상으로 회복됨이 관찰되었다(도 6).

시험 결과

시험물질	시험 농도(%)	P.I.I.	판정	비고
기피제 (LJH-1-58)	10	0.13	무자극	사용가능
기피제 (LJH-1-58)	50	0.13	무자극	사용가능

이상의 결과, 본 시험조건에서, 실험기간 중 특이한 임상증상을 보이거나 사망한 동물은 없었으며, 기피제 10% 및 50%는 피부일차자극 측면에서 안전한 원료라 판단된다.

기피제(LJH-1-58) 10%의 일차 자극 시험 결과

실험군	기피제 (10%)								용매(PEG-400)
피부반응	홍반, 가피				부종				홍반, 가피				부종
적용부위	비찰과		찰과		비찰과		찰과		비찰과		찰과		비찰과		찰과
관찰시간	24	72	24	72	24	72	24	72	24	72	24	72	24	72	24	72
1	0	0	1	0	0	0	0	0	0	0	1	0	0	0	0	0
2	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
계	0	0	1	0	0	0	0	0	0	0	1	0	0	0	0	0
평균	0	0	0.5	0	0	0	0	0	0	0	0.5	0	0	0	0	0
평균의 합계	0.5								0.5
P.I.I.	0.13								0.13

기피제(LJH-1-58) 50%의 일차 자극 시험 결과

실험군	기피제 (50%)								용매(PEG-400)
피부반응	홍반, 가피				부종				홍반, 가피				부종
적용부위	비찰과		찰과		비찰과		찰과		비찰과		찰과		비찰과		찰과
관찰시간	24	72	24	72	24	72	24	72	24	72	24	72	24	72	24	72
1	0	0	1	0	0	0	0	0	0	0	1	0	0	0	0	0
2	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
계	0	0	1	0	0	0	0	0	0	0	1	0	0	0	0	0
평균	0	0	0.5	0	0	0	0	0	0	0	0.5	0	0	0	0	0
평균의 합계	0.5								0.5
P.I.I.	0.13								0.13

실시예 5: 기니 피그를 이용한 피부 감작성 시험( GPMT )

시험계

체중 250-300 g의 Hartley albino 기니 피그를 구입(샘타코 코리아)하였다. 일주일간 검역 및 적응기간을 갖고, 이 기간 동안 체중증가 및 일반증상에 이상이 없는 건강한 동물 중 등부분을 제모하였을 때 상태가 양호한 것을 시험에 사용하였다. 검역 및 적응 기간 중 이상이 없는 동물 중 등 부분을 제모하여 피부 상태가 양호한 건강한 동물을 선별한 후, 군 분리 당일의 체중을 기초로 하여 평균 체중이 가능한 균등하도록 군을 구성하였다.

시험방법

인덕션은 시험 실시 4시간 전 등 윗 부위(견갑 상부)를 털을 3 X 3 cm 크기로 제모하여 사용하였고, 챌린지는 시험 실시 24시간 전에 인덕션 부위 아래의 등 부위(dorso-thoracic, lumbar region)의 털을 4 X 6 cm 크기로 제모한 후 시험 당일 전기 면도기로 나머지 털을 제거한 후 사용하였다. 1차 인덕션은 각각의 시험군의 기니픽 견갑간부에 시료, FCA, 시료 + FCA를 2 열로 0.1 ml 씩 피내 주사하였다. 2차 인덕션은 일주일 후 FCA 주사 동일 부위를 제모한 뒤 10% SLS(용매 : 페트로라텀)를 주사부위에 도포하고, 24 시간 후 동일부위에 시험 물질 0.1 ml을 투여한 지름 1.5 X 1.5 cm의 패치 4개에 0.1 ml를 도포하여 48 시간 폐쇄 첩포하였다. 챌린지는 마지막 인덕션 10일 이후, 피부 일차자극이 없는 농도로 마리당 좌우 각 2 사이트 씩 24시간 폐쇄 첩포하여 피부 홍반, 부종을 관찰 하였다(도 7).

시험군 구성

시험군의 구성

재료	동물 수 (웅성/자성)	농도 (%)
		인덕션				챌린지
		피부 내		국소 부위		1^st
		용매	농도	10% SLS	농도	1^st
기피제 (LJH-1-58)	2/2	PEG-400	50	+	50	50%, 10%
DNCB	2/2	아세톤:올리브 오일 = 8:2	0.5	+	1	0.5%, 0.1%
용매 (PEG-400)	2/2	-	-	+	-	기피제 50%, DNCB 0.5%

관찰 및 검사항목

시험 기간 동안 임상증상과 사망여부를 관찰하였다. 시험물질에 대한 챌린지를 실시한 다음, 시험물질 첩포 제거 후 24, 48 시간째에 홍반 및 부종 반응 등의 자극성을 유무를 판단하였다. 필요할 경우에는 전기면도기를 이용하여 제모 한 후 검사하였으며, 제모 했을 경우에는 약 1시간 정도 시간이 지난 다음(2시간 이내) 검사를 실시하였다.

각 구획에서의 반응 평가는 「의약품등의독성시험기준」(식품의약품안전청 고시 제 2005-60호)을 이용하여 판정하였다(표 23). 또한 피부감작성 유발 가능성에 대한 판정은 Kligman의 등급을 따랐다(표 24). 피부감작성 판정 기준표의 등급 I, II는 사용 가능 범위로 하며 등급 III 이상은 사용불가 범위로 하였다.

피부 반응의 평가 기준 의약품등의독성시험기준

스코어	반응
0	무반응
1	홍반이 적용부에 흩어져 나타남
2	중등도의 홍반
3	강한 홍반 및 부종이 나타남

감작성 판정 기준표

감작율(%)	등급	판정	사용 유무
0 - 8	Ⅰ	약한 민감제	사용가능
9 - 28	Ⅱ	순한 민감제	사용가능
29 - 64	Ⅲ	보통 민감제	사용불가
65 - 80	Ⅳ	강한 민감제	사용불가
81 - 100	Ⅴ	극심한 민감제	사용불가

시험결과

시험기간 동안 임상증상 및 체중변화에서 특이한 사항은 관찰되지 않았다. 기피제의 감작성 결과, 10% 및 50% 농도로 야기했을 때 감작성이 0%로 관찰되어 시험물질 사용가능 범위인 “등급 I”에 해당하였다. DNCB군의 0,5% 농도에서 24시간과 48시간에 모두 100%로 Kligman의 감작성 기준표 상의 시험물질 사용불가 범위인 “등급 V”에 해당하였으며, 0.1% 농도에서는 24시간과 48시간에 각각 100%, 75%로 Kligman의 감작성 기준표 상의 시험물질 사용불가 범위인 “등급 V”에 해당하였다. 음성대조군의 경우 용매로 감작시킨 후, 기피제 50% 및 DNCB 0.5%로 야기 시켰을 경우, 모두 자극이 관찰되지 않았다(도 8).

챌린지 결과

재료	농도 (%)	양성반응 (%)		등급	비고
재료	농도 (%)	24시간	48시간	등급	비고
기피제 (LJH-1-58)	50	0 (0/8)	0 (0/8)	I	물질군
기피제 (LJH-1-58)	10	0 (0/8)	0 (0/8)	I	물질군
DNCB	0.5	100 (8/8)	100 (8/8)	V	양성대조군
DNCB	0.1	100 (8/8)	75 (6/8)	V	양성대조군
용매 (염류용액)	기피제 50% DNCB 0.5%	0 (0/8)	0 (0/8) 0 (0/8)	-	음성대조군

시험기간 중 임상증상 및 체중증가 등에 이상 동물은 관찰되지 않았다. 기피제 50 및 10%는 챌린지 결과 양성율이 사용가능 범주로 평가되었다. 양성대조 물질로 사용한 DNCB 0.5 및 0.1%는 높은 감작성을 보였다.

챌린지 후 치사율

재료	성별 (동물 수)	처치 후 일수											치사율 (%)
재료	성별 (동물 수)	1	2	3	--	21	22	23	--	37	38	39	치사율 (%)
기피제 (LJH-1-58)	웅성(2)	0	0	0	--	0	0	0	--	0	0	0	0 (0/2)
기피제 (LJH-1-58)	자성(2)	0	0	0	--	0	0	0	--	0	0	0	0 (0/2)
DNCB	웅성(2)	0	0	0	--	0	0	0	--	0	0	0	0 (0/2)
DNCB	자성(2)	0	0	0	--	0	0	0	--	0	0	0	0 (0/2)
용매 대조군	웅성(2)	0	0	0	--	0	0	0	--	0	0	0	0 (0/2)
용매 대조군	자성(2)	0	0	0	--	0	0	0	--	0	0	0	0 (0/2)

챌린지 결과(그룹 데이터)

재료 & 농도 (%)		24 시간(M/F)				48 시간(M/F)
인덕션	챌린지 농도(M/F)	0	1	2	3	0	1	2	3
기피제 (LJH-1-58)	기피제 10% 기피제 50%	4/4 4/4	- -	- -	- -	4/4 4/4	- -	- -	- -
DNCB (0.5% + 1%)	DNCB 0.5%	-	2/2	2/2	-	-	4/4	-	-
DNCB (0.5% + 1%)	DNCB 0.1%	-	2/2	2/2	-	1/1	3/3	-	-
용매 대조군	기피제 10% DNCB 0.5%	4/4	-	-	-	4/4	-	-	-
용매 대조군	기피제 10% DNCB 0.5%	4/4	-	-	-	4/4	-	-	-

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims

IR 3535 유도체를 유효성분으로 포함하는 모기 기피용 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 IR 3535 유도체는 하기 화학식 1로 표시되는 화합물인 것을 특징으로 하는 모기 기피용 조성물.
[화학식 1]
제 1 항에 있어서, 상기 IR 3535 유도체는 전체 조성물에 대하여 0.1 내지 25 중량％로 포함되는 것을 특징으로 하는 모기 기피용 조성물.
IR 3535 유도체 및 계피 초임계 오일을 유효성분으로 포함하는 모기 기피용 조성물.
제 4 항에 있어서, 상기 IR 3535 유도체는 하기 화학식 1로 표시되는 화합물인 것을 특징으로 하는 모기 기피용 조성물.
[화학식 1]
제 4 항에 있어서, 상기 계피 초임계 오일은 계피를 온도 30-40℃, 압력 200-400 bar에서 초임계 추출하여 수득한 것을 특징으로 하는 모기 기피용 조성물.
제 4 항에 있어서, 상기 IR 3535 유도체는 전체 조성물에 대하여 0.1 내지 25 중량％로 포함되는 것을 특징으로 하는 모기 기피용 조성물.
제 4 항에 있어서, 상기 계피 초임계 오일은 전체 조성물에 대하여 0.1 내지 20 중량％로 포함되는 것을 특징으로 하는 모기 기피용 조성물.
(a) 상기 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항의 조성물의 화장품학적 유효량; 및 (b) 화장품학적으로 허용되는 담체를 포함하는 모기 기피용 화장료 조성물.
상기 제 9 항의 화장료 조성물을 피부에 도포하는 단계를 포함하는 모기 기피 방법.