KR20130010483A - 검사액의 응고 특성의 측정을 위한 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 검사액의 점탄성 분석에서 사용하기 위한 진단 조성물 및 상기 조성물을 포함하는 용기(1)에 관한 것이다. 상기 조성물은 하나 이상의 응고 활성제, 및 CaCl2 및 하나 이상의 저해제 및/또는 응고 성분으로부터 선택되는 하나 이상의 추가적인 성분을 포함하며, 여기서 상기 조성물은 모든 성분들이 필수적으로 건조 형태로 존재하고, 특정된 혈액 또는 혈장 샘플의 하나의 단일 점탄성 분석을 수행하는 데 충분한 양으로 존재하며, 여기서 상기 성분들은 물질 혼합물로 존재하는 것이 아니라 공간적으로 분리된 형태로 존재한다. 또한 본 발명은 검사액에 대한 점탄성 분석을 수행하는 방법 및 이러한 방법에서 상기 진단 조성물의 용도에 관한 것이다.

Description

검사액의 응고 특성의 측정을 위한 조성물{COMPOSITION FOR THE DETERMINATION OF COAGULATION CHARACTERISTICS OF A TEST LIQUID}
본 발명은 검사액의 점탄성 분석에서 사용하기 위한 진단 조성물, 및 상기를 포함하는 용기(container)에 관한 것이다. 본 발명은 또한 검사액에 대한 점탄성 분석을 수행하는 방법, 및 이러한 방법에서 상기 진단 조성물의 용도에 관한 것이다.
혈액의 응고(coagulation)는 혈액이 고체 응괴(clots)를 형성하는 동안의 복합적인 과정이다. 이는 지혈작용(손상된 혈관으로부터 혈액 손실의 중지)의 중요한 부분으로서, 이에 의하여 손상된 혈관벽은 혈액 응괴에 의해 덮어져서 출혈(hemorrhage)이 멈추고 상기 손상된 혈관의 치료를 보조한다. 응고 장애는 증가된 출혈 및/또는 혈전증 및 색전증을 초래할 수 있다.
정상적인 개인의 경우, 상처가 혈관 내피 세포를 손상시키는 혈관에 일어난 후 20 초 이내에 응고가 시작된다. 혈소판은 즉시 상처 부위에 지혈마개(haemostatic plug)를 형성한다. 이 과정을 1차 지혈이라 부른다. 응고 인자라 불리는 혈장 성분들이 복합적인 캐스케이드(complex cascade)로 반응하여 혈소판 마개(platelet plug)를 강화시키는 피브린 가닥(fibrin strands)을 형성할 경우 2차 지혈이 이어진다.
상기 2차 지혈의 응고 캐스케이드는 두 개의 경로, 피브린 형성을 초래하는 접촉 활성화 경로(Contact Activation pathway ; 이전에 내인성 경로로 알려짐) 및 조직 인자 경로(Tissue Factor pathway ; 이전에 외인성 경로로 알려짐)를 가진다. 동등하게 중요한 두 개의 경로로 구성되어 있는 상기 응고 캐스케이드가 공통의 경로와 결합된 것으로 종래에 여겨졌다. 혈액 응고의 개시를 위한 1차 경로는 현재 조직 인자 경로인 것으로 알려져 있다. 상기 경로들은 일련의 반응들로서, 여기서, 세린 프로테아제의 지모겐(zymogen) 및 이것의 당단백질 보조인자가 활성화되어 이후 상기 캐스케이드 내에서 다음 반응을 촉매화하는 활성 성분이 된다. 응고 인자들은 상기 활성화된 형태를 표시하기 위하여 첨부된 소문자 'a'와 함께 로마자 I - XIII로써 일반적으로 표시된다.
피브린용해(fibrinolysis)는 상기 피브린 응괴가 붕괴되는 과정이다. 조직 플라즈미노겐 활성인자(Tissue plasminogen activator, tPA) 및 유로키나아제는 플라즈미노겐을 활성 플라즈민으로 전환시켜, 피브린용해를 일으키게 하는 물질이다.
이러한 응고 성분들의 정상의 또는 감소된 기능성의 검사는 환자들의 지혈 장애를 평가하기 위해서 중요하다.
혈액의 응고 특성을 측정하기 위한 여러가지 방법이 알려져 있다. 일부 그러한 디바이스들이 살아있는 피실험자의 정맥 및 동맥 내 혈액 순환(natural flow)을 시뮬레이션하기 위해 시도되고, 반면 다른 측정 기술들이 정적인 혈액 부피에서 수행된다.
적시의 효과적 방식으로 환자의 혈액이 응고하는 능력의 정확한 측정은 특정 수술 및 의학적 절차에 중요하다. 또한, 비정상적 응고(abnormal coagulations)의 빠르고 정확한 검사는 응괴 장애로 고통받는 환자들에게 주어질 적절한 치료와 관련하여 특히 중요하다. 종종 이러한 환자들의 상태는 혈액 성분, 항응고제, 특정 피브린용해제(certain fibrinolytic agents), 항혈전제(anti-platelet agent), 또는 상기 제제들의 역효과를 유도하는 화합물을 투여하는 것이 필요하도록 만든다. 이러한 경우, 상기 치료 용량(treatment dose)은 종래 측정된 응괴 장애의 범위에 적용될 수 있다.
혈액 응괴의 측정은, 예를 들어, (US 5,777,215), (US 6,537,819), 또는 (US 5,777,215)에서 개시된 것과 같이, 다양한 디바이스들에 의하여 제공된다. 이러한 디바이스들은 그것의 구조적 개발을 통하여 상기 응괴의 기계적인 특성을 측정한다. 이러한 시스템들은 혈액 응괴의 형성 및 용해 중에 혈액 응괴의 점탄성 특성을 연속적으로 검사함으로써, 이러한 시스템은 "점탄성 방법" 용어 하에 요약된다.
점탄성 측정은 여러가지 특징적 파라미터들에 대한 정보를 제공하는데, 예를 들어, 응고 활성화와 응괴 개시 사이의 시간 [응괴 시간(clotting time) CT], 응괴 형성의 역학 [응괴 형성 시간(clot formation time) CFT], 응괴의 견고성 [크기 (amplitude) A5-A30 및 최대 응괴 견고성 (maximum clot firmness) MCF], 또는 피브린용해의 정도 [최대 용해(maximum lysis) ML]이다.
많은 참조문헌이 기계적 이동에 근거하여 혈액 응괴 특성의 측정을 위한 기기를 개시한다. 이러한 기기들은 낮은 전단(shear) 환경 하에 즉, 정지 혈액 부피 (static blood volumes)에서 응괴를 유도함으로써 혈액의 점탄성적 특성을 모니터한다. 전단 탄성(shear elasticity)에 있어서 변화의 패턴은 형성된 응괴의 강도 및 안정성뿐만 아니라, 응괴 형성의 동역학의 측정을 가능하게 한다. 상기 응괴의 강도 및 안정성은 "지혈작용"(즉, 비정상적인 출혈의 정지 또는 방지)을 수행하기 위한 상기 응괴의 능력 및 혈액 혈소판-피브린 상호작용의 적절성에 대한 정보를 제공한다. 상기 응괴 형성의 동역학은 주로 응고 인자의 기능성에 대한 정보를 제공한다. 이러한 모든 정보의 분석은 출혈을 예측하거나, 혈전증을 모니터하고 관리하거나, 또는 피브린용해를 모니터하는 데 유용한 결과를 제공한다.
그러나, 상기 응괴 과정은 다양하게 연결된 성분들로 이루어짐으로써, 특이 활성제 및 저해제의 사용이 좀 더 구체적으로 지혈 장애를 검사하기 위하여 추가로 적용된다.
따라서, 점탄성 분석에 사용된 시약은 개시 활성제 (예를 들어, 상기 내인성 또는 상기 외인성 경로의 활성제) 및 선택적으로 하나 이상의 저해제 (예를 들어, 피브린용해 저해제, 헤파린 저해제, 혈소판 저해제) 및/또는 하나 이상의 추가의 응고 캐스케이드의 특이 인자로 이루어진다.
선택적으로 추가 성분들이 첨가될 수 있다:
- 칼슘(CaCl2): 상기 칼슘은 상기 샘플의 재석회화(recalcification)를 위해 첨가된다. 혈액 샘플은 헤파린, EDTA, 시트르산염(citrate)과 같은 여러 가지 상이한 항응고 물질에 의해 응괴가 방지될 수 있다. 일반적으로 기능성 시험은 시트르산염과 함께 항응고된 혈액을 이용하여 수행된다. 시트르산염은 상기 혈액 샘플의 칼슘을 적당하게 착물화시킨다. 칼슘은 상기 응고 과정을 위해 필요하며, 칼슘은 착물(complex) 형성에 관여하고, 대부분의 상기 응고 인자들 (예를 들어, FI, FII, FV, FVII, FVIII, FIX, FX, FXI, FXIII, TF)에 대한 보조인자이다. 따라서, 상기 샘플이 (시트르산염을 포함하는 혈액 튜브를 사용함으로써) 채혈(blood withdrawal) 중에 시트레트화(citrated)된다면, 상기 샘플의 재석회화는 상기 샘플에서 정확한 응고를 확보하기 위해 필요하다.
- 인지질 : 상기 응고 캐스케이드 내에 여러 가지 착물은 인지질-의존적이므로, 추가적인 인지질이 첨가될 수 있다.
- 안정화제 : 생성 시간과 분석 사이에 상기 시약의 안정화를 위함 (예를 들어, 알부민, 젤라틴).
진단 목적에 따라서, 이러한 시약들은 단독으로 또는 조합해서 사용될 수 있다: 예를 들어, 상기 샘플에서 단지 내인성 활성제만을 포함하는 측정은 상기 검사액 중 헤파린의 존재를 검출하기 위해 샘플 중 내인성 활성제와 충분한 양의 헤파린 저해제 (예를 들어, 헤파리나제)를 이용한 측정과 조합될 수 있고; 상기 샘플 중 외인성 활성제 및 혈소판 저해제 (예를 들어, 사이토칼라신 D)의 조합이 상기 검사액 중 혈소판 기여 없이 피브리노겐의 활성(activating)을 측정하기 위해 적용된다.
주문 제작한(customer-made) CaC12 용액과 ReoPro?(abciximab, 아브식시마브) 및 Trasylol?(aprotinin, 아프로티닌)과 같은 약물과 조합된, 프로트롬빈 시간 활성제(prothrombin time activator) Innovin 또는 Recombiplastin?과 같은 다른 검사를 위해 의도된 상업적으로 이용가능한 활성제 시약과의 조합을 근거로 하는 문헌 (ReoPro-modified TEG: Wenker et al.: Thrombelastography, The Internet Journal of Anesthesiology, 2000, Volume 1 Number 3; (http://www.ispub.com/ostialindex.php?xmlFilePath=journals/ijal/ volln3/teg.xml); Ruttmann et al.: Hemodilution Enhanced Coagulation Is Not Due to Platelet Clumping, Anesthesiology 2004; 101: A150; Recombiplastin- and ReoPro-modified TEG:http://www.transfusionguidelines.org.uk/ docs/pdfs/bbt_app-use_teg-sop-example.pdf; TF- and Trasylol-modified TEG: Tanaka et al.: Evaluation of a novel kallikrein inhibitor on hemostatic activation in vitro, Thrombosis Research, Volume 113, Issue 5 , 2004, Pages 333-339)에 점탄성 측정을 위한 시약 개념이 있다. 이것은 저표준화, 많은 피펫팅 단계 및 오차의 많은 요인을 초래한다.
펜타팜(Pentapharm) 사에 의해 판매되는 점탄성 측정을 위한 시약 시스템이 있는데, 이것은 표준화된 시약에 기초하며, 이 시약의 대부분은 액체 형태로 고객에게 제공되고, 표준화된 작동과정들을 사용하여 검사 컵 내로 사용자에 의하여 피펫팅된다. 이것은 적용을 표준화한다; 그러나 이것은 여전히 상기 분석을 위한 여러 번의 피펫팅 단계가 요구된다. 예를 들어, EXTEM 조절 검사와 함께 FIBTEM 검사를 수행하기 위해서, 혈액, CaCl2 용액, 외인성 활성제 및 혈소판 저해제의 피펫팅이 총 8 번의 피펫팅 단계 (하나의 검사 과정 중에 팁의 세 번 교체를 포함)의 수행, 및 사용자에 의해 다뤄져야 하는 3 개의 상이한 시약들에 대한 요구를 야기할 것이다. 이것은 시간이 소비되는 훈련을 요구하는 것이고 오차의 잠재적인 원인이다.
다양한 시약들에 기초된 다른 시약 시스템들이 시장에 있다. 이들 중 일부는 액체이고, 상기 컵 내로 피펫팅되어야 하고 (예를 들어, CaCl2 용액), 일부는 상기 검사 컵 내로 건조되고 (예를 들어, 헤파리나제), 및 일부는 하나의 검사를 위해 의도된 양으로 작은 바이알로 제공된다. 이러한 시약들의 특성은, 각 시약이 여전히 통상적으로 단독으로 제공되어, 하나 초과의 활성 시약을 필요로 하는 검사를 위해 여러 단계가 적어도 요구된다.
따라서, 혈액 또는 혈액 성분의 점탄성 측정을 위한 더 간단한 시약 시스템을 제공하기 위하여 과거에 상당한 노력이 수행되어 왔다:
Figure pct00001
측정 중에 상기 샘플의 용량을 담는 상기 컵 내로 직접 상기 시약들을 건조
Figure pct00002
작동 농도로 상기 시약들의 복합 안정 액체 조합
상기 검사 컵 내로 직접 활성 시약을 건조하는 전략의 하나의 단점은 이러한 컵들은 보통 플라스틱으로 제조되고 가벼워서, 자동화된 시약 분배 라인에서 이들 컵들을 충전하는 것을 더 어렵게 만든다는 점이다. 이것은 수동식 충전 단계를 필요하게 하거나 또는 특별한 장치를 개발하도록 하며, 이것은 둘 다 비용이 든다. 이러한 전략의 다른 단점은 상기 활성 성분 또는 안정화제가, 정확한 측정을 수행하는데 요구되는, 상기 컵 표면 상에 상기 혈액 응괴의 부착(adhesion) 강도를 방해할 것이라는 점이다. 예를 들어, 상기 컵 내로 알부민 용액의 인큐베이션(incubation) 후에 감소된 응괴 부착이 나타났다 (알부민은 시약 중에 모든 종류의 단백질을 안정화하는데 사용되는 일반적인 안정화제다):
Figure pct00003
표 1 : 알부민 용액을 이용한 사전 인큐베이션 유무에 따른 INTEM 측정의 결과
상기 시약의 조작을 간단하게 하기 위한 다른 가능한 전략은 시약들의 작용 농도(working concentration)에서 액상으로 하나의 검사를 위해 필요한 상이한 시약을 조합하는 것이다. 여기서 주요 문제점은 더 긴 기간 동안 함께 머무르는 동안에 상이한 물질들의 상호작용이다. 어떤 성분들은 더 높은 농도에서 액상으로 함께 머무를 때 서로의 안정성에 부정적으로 영향을 끼친다; 예를 들어, CaCl2는 시간이 지남에 따라 액상에서 조직 인자 시약의 안정성을 방해한다.
더욱이, 이러한 조합된 시약들이 정확하게 하나의 검사를 위해 충분한 양으로 제공되어야 할 경우, 다른 문제가 발생할 것이다: 이러한 경우에는, 액체 시약의 아주 작은 분획이 액체 시약이 상기 시약 용기 또는 뚜껑의 일부에 부착될 것이고, 그래서 분석이 수행될 때 검사액과 충분하게 혼합되지 않을 것이다.
상기 언급된 측면을 해결하기 위해 제안된 하나의 전략이 미국 특허 출원 20040071604에서 Kolde 등에 의하여 개시되었다. 상기 출원에서, 점탄성 분석을 위한 컵 시스템이 제시되는데, 여기서 상기 컵의 하부 말단이 여러 개의 시약 챔버들로 나뉘어진다. 이것은 상기 상이한 챔버들 내로 이들을 혼합할 필요 없이 독립적으로 상기 시약들을 위치시키고 그리고 나서 상기 시약들을 냉동-건조하는 것을 가능하게 한다.
그러나, 상기 분리된 시약 챔버들은 매우 작고 또한 상기 시약 충전 라인에 존재하는 진동에 의해 상기 냉동-건조 전에 상기 시약 방울들(reagent drops)이 여전히 혼합될 문제가 있기 때문에, 이러한 용액의 단점은 매우 정확한 피펫팅 공정에 대한 요구를 포함한다는 것이다. 다른 문제점은, 동결건조 과정이 시작되기 전에 실내 조건 하에 상기 공정 중에 작은 시약 방울들의 가능한 대기-건조이다. 다시 말해서, 표준 시약-충전 라인을 사용하여 상기 작은 플라스틱 및 이에 따른 매우 가벼운 것을 자동적으로 조절하는 것의 문제가 존재한다.
일반 실험실(routine lab)에서 대부분 응고 검사법은 활성제를 상기 샘플에 첨가하는 시간부터 피브린 응괴의 첫번째 초기 형성이 검출될 수 있을 때까지(=응괴시간) 시간을 단지 측정하는 것을 이용한다. 이들은 이 시점에서 멈추고 추가 측정은 수행하지 않는다. 이것은, 이러한 방법들에 있어서 상기 측정 세포의 표면에 혈액의 견고한 부착이 반드시 필요하지는 않다는 것을 암시한다. 따라서, 이러한 방법을 이용한 응괴 시간의 평가에 이용할 수 있는 다양한 분석기와 시약들이 점탄성 측정과 연관된 특유의 문제점을 다룰 필요가 없다.
EP 0 972 203 은 공-냉결 건조된(co-lyophilized) 형태로 하나 이상의 응고 단백질, 인지질 및 내인성 응고 활성제를 포함하는, aPTT를 측정하기 위한 시약을 개시한다. 그러나, 여기서 상기 분석을 수행하기 위해 요구되는 모든 성분들은 서로 즉시 접촉(immediate contact)되는 문제가 발생된다. 따라서, 장기간 안정성 또는 비상용성(incompatibilities)에 관한 문제들이 이러한 형태로 물질들을 사용함으로써 일어날 수 있다.
따라서, 본 발명의 목적은, 점탄성 시스템에 있어서 상이한 검사들을 위한 과정을 사용하는 것을 안전하고, 재현성 있으며, 용이하게 하는 진단 조성물을 제공하는 것이다. 본 발명의 추가적인 목적은 혈액 샘플의 하나의 단일 분석에 특별히 적합하고 종래 조성물들에 비해 우수한 시약 안정성을 가지는 진단 조성물을 제공하는 것이다. 본 발명의 또 다른 추가적인 목적은, 신뢰할 수 있고 재현성 있는 결과를 제공하며, 다루기 쉽고, 혈액 샘플의 응고 특성의 측정을 위한 표준화된 시스템을 제공하는 진단 방법을 제공하는 것이다. 본 발명의 추가적인 목적은 향상된 장기간 안정성을 가지는, 상기 종류의 진단 조성물을 제공하는 것이다.
이러한 목적들은 제 1 항의 진단 조성물, 제 20 항의 용기, 제 24 항의 진단 방법, 및 제 32 항의 용도에 의해 달성된다.
바람직한 구현예는 종속항들에서 주어진다.
본 발명의 진단 조성물을 사용함으로써, 상기 검사는 하기와 같이 수행될 수 있다: 샘플(예를 들어, 전혈, 혈장 등)의 정해진 부피가 진단 조성물을 포함하는 용기(1) 내에 직접 첨가된다. 상기 혈액 샘플 중 상기 조성물의 용해 후에, 상기 결과적으로 수득된 혼합물이 상기 용기(1)로부터 측정 장치(4)의 계량컵(2) 내로 피펫팅된다. 그리고 나서 상기 컵(2)은 상기 핀(3)이 상기 검사 컵 내 상기 액체 중에 잠기게 하도록 위치시킨다(도 2 비교).
따라서, 사용자는 수행할 각 검사를 위해 단지 4 번의 피펫팅 단계가 요구되고 (종래 액체 시스템에서 8 번의 단계들까지, 상기 참조), 피펫팅 팁의 교체는 필요하지 않다.
그러므로, 혈액 샘플의 응고 특성의 측정을 위한 본 시스템이 더 쉽게 다뤄질 수 있고, 이에 따라 (잠재적으로 비숙련된)작동자에 의한 동작의 부정확한 라인에 기인될 수 있는 오차 같은 것을 더 적게 할 수 있는 것은 분명하다.
본 발명에 따르면, 상기 성분들은 물질 혼합물로 존재하는 것이 아니라 공간적으로 분리된 형태로 존재한다. 이것은 성분들의 다른 특성을 약화시키지 않고 상기 조성물의 향상된 장기간 안정성을 가능하게 한다.
이로부터 예를 들어, 결과의 더 높은 재현성이 달성됨에 따라 표준화의 정도가 더 높아지는 것과 같은 추가적인 장점이 나타날 수 있다.
본 발명의 추가적인 특징과 장점이 도면을 참조하여 구현예의 상세한 설명으로부터 입증될 것이다.
도면에서:
도 1은 일반적인 혈전-탄성 측정(thrombo-elastometric measurement)을 보여주는 예시도이다.
도 2는 혈전탄성감시 분석을 위한 측정 장치(4)를 나타낸 것이다.
도 3은 종래기술의 측정 장치(4)의 계량컵(2)을 도시한 것이다.
도 4a, 4b, 및 4c는 본 발명의 용기(1)의 세가지 바람직한 구현예의 개략적인 횡단면도이다.
제 1 측면에서, 본 발명은, 하기 성분들 중 적어도 두 개를 포함하며, 검사액의 점탄성 분석에서 사용하기 위한 진단 조성물을 제공한다:
a) 하나 이상의 응고 활성제; 및, 하기로부터 선택된 하나 이상의 성분
b) 상기 검사액의 재석회화를 확보하기 위한 충분한 양의 칼슘염, 바람직 하게 CaCl2; 및/또는
c) 하나 이상의 저해제 및/또는 다른 응고 성분 또는 인자;
상기 성분들은 필수적으로 건조 형태로 존재하고 특정된 검사액의 하나의 단일 점탄성 분석을 수행하는 데 충분한 양으로 존재하며, 여기서 상기 성분들은 물질 혼합물로 존재하는 것이 아니라 공간적으로 분리된 형태로 존재하는 것을 특징으로 한다.
상기 칼슘염은 바람직하게 CaCl2이다.
본 발명에 따른 상기 진단 조성물 또는 반응 혼합물은 당업계에서 본질적으로는 알려진 성분들을 포함한다. 그러나, 상기 종래기술 접근법과 하나의 차이점은 이들 성분들의 혼합물이 필수적으로 건조 형태로 제공된다는 점이다.
본 발명의 명세서에서 "필수적으로(essentially)" 건조는 상태를 의미하며, 여기서 상기 혼합물은 어떠한 액체 또는 습기가 필수적으로 없는, 특히 물이 고갈된 것이다. 그러나, 물 또는 어떤 다른 액체는 상기 혼합물 내에 잔류물(residue)로서 존재할 수 있으나, 상기 전체 조성물의 안정성에 부정적으로 영향을 끼치지 않는 정도만이다. 특히, 상기 상이한 성분들 간의 상호작용이 발생할 수 있어, 상기 안정성에 부정적으로 영향을 끼칠 수 있는 것은 제외되어야만 한다. 10 중량% 까지의 상기 조성물에서 남아있는 액체, 바람직하게 물의 양이 허용될 수 있다.
특정된 검사액, 예를 들어, 혈액 샘플의 하나의 단일 점탄성 분석을 수행하기 위한 충분한 양은, 상기 혈액 샘플의 응고 특성의 최종 분석에서, 예를 들어, 측정 장치(4)의 상기 컵(2)에서 상기 시약의 요구되는 농도를 제공하는, 혼합물에서 모든 성분들의 양이다. 따라서, 액체 중 시약을 용해하기 전 또는 후에 상기 진단 조성물을 추가로 분배할 필요가 없다.
게다가, 이것은, 상기 최종 작동 농도에 이르도록 하는 액체 희석제의 양으로 상기 성분들을 용해하는 것이 아니고, 상기 검사액 (혈액 샘플 등) 그 자체에 상기 물질을 용해시킴으로써 달성된다.
상기 성분들이 물질 혼합물로 존재하는 것이 아니라 공간적으로 분리된 형태로 존재하는 것이 본 발명의 중요한 요소이다. 이것은 안정성 관련 문제를 방지한다.
일 구현예에 있어서, 상기 성분들의 공간적 분리는 별도의 담체 물질 내로 각 성분을 혼입함으로써 구현된다. 이러한 용어는 상기 성분들이 펠렛, 미니정제(minitablet) 등과 같은 공간적으로 분리된 실체(entity)에 각각 혼입된다는 것을 의미한다. 상기 용어 "별도의 담체 물질"은 사용된 상기 물질들이 반드시 화학적으로 상이함을 반드시 의미하지 않는다. 이것은 단지 상기 물질들이 서로 공간적으로 분리된다는 것만을 의미한다.
바람직하게, 상기 담체는 펠렛의 형태를 가진다. 이러한 펠렛들은 종래기술에서 본질적으로는 알려진 방법에 의하여 제조될 수 있다. 그러나, 펠렛을 제조하는 두 방법 중의 하나를 사용하는 것이 바람직하며, 이것은 하기에 간단하게 요약될 것이다:
a) 용액 중 각각의 성분이 적합한 담체 물질과 혼합된 후, 이 혼합물은 스프레이 형태로 전환된다. 상기 혼합물의 액적(droplets)을 포함하는 이러한 스프레이는 액체 질소 내에서 쇼크 냉동(shock frozen)시킨 후 보호 대기(protective atmosphere) 하에서 가온될 것이고 (바이알과 같은) 공기-밀폐 용기 내에 저장된다.
b) 펠렛은 a)에서와 같이 제조되지만, 상기 출발 혼합물은 어떤 성분도 함유하지 않는다. 상기 성분은 용액으로서 제공되고 보호 대기 하에 상기 펠렛 상에 적가되도록 한다. 상기 펠렛 상에서 건조된 후에, 상기 펠렛은 공기-밀폐 용기 내에 포장된다.
바람직한 일 구현예에 있어서, 상기 담체 물질은 적어도 탄수화물, 예를 들어, 사카로오즈, 락토오즈, 또는 셀룰로오즈를 포함한다. 상기 담체 물질은 바람직하게 상기 응괴(clotting) 거동, 상기 응괴 형성 거동, 또는 상기 응괴 용해(clot lysis) 거동에 대하여 현저한 영향을 나타내지 않는다.
상기 언급된 것처럼 상기 응고 활성제는 바람직하게 내인성 및/또는 외인성 활성제이다.
상기 외인성 응고 활성제는 결국 바람직하게 조직 인자(Tissue Factor; TF)이고, 더 바람직하게 지질화된 TF 또는 rTF로부터 선택되는 것이다.
상기 내인성 응고 활성제는 바람직하게 셀라이트, 엘라그산, 셀페이티트, 카올린, 실리카, RNA, 또는 이들의 혼합물로부터 선택되는 것이다.
두 번째 특징으로서, 본 발명에 따른 상기 진단 조성물은 CaCl2와 같은 칼슘염을 선택적으로 포함할 수 있으며, 여기서 CaCl2은 상기 검사액의 약 1 - 100 μmol/ml의 양으로 존재한다. 상기 언급된 것과 같이, 상기 샘플이 이전에 탈석회화된 경우, CaCl2의 양은 상기 검사액, 특히 상기 혈액 샘플의 재석회화를 확보하기 위해 충분해야 한다. 3 - 30 μmol/ml의 양은 이러한 필수요건을 달성하는 데 적합함이 밝혀졌다. 상기 진단 조성물 내 함유되는 CaCl2의 요구되는 양을 좀 더 정확하게 측정하기 위하여, 환자로부터 수집되는 상기 검사액의 정확한 용량(부피)은 채용된 시약을 탈석회화(decalcifying)하는 양과 마찬가지로 또한 잘 알려져야 한다.
본 발명의 진단 조성물은, 예를 들어, 혈소판 저해제, 피브린용해 저해제, 또는 헤파린 저해제 중 하나 이상으로부터 선택되는 하나 이상의 저해제를 선택적으로 함유한다.
이러한 저해제들은, 정확한 진단 요구에 따라 사용되고 조합될 수 있으며, 예를 들어, 상기 혈소판 저해제가 세포골격(cyto-skeleton) 저해제 또는 GPIIb/IIIa 길항제일 수 있다. 마찬가지로, 상기 피브린용해 저해제는, 예를 들어, 아프로티닌, 트라넥사민산, 또는 eaca(epsilon-aminocaproic acid)로부터 선택될 수 있고; 상기 헤파린 저해제는, 예를 들어, 헤파리나제, 프로타민, 또는 프로타민-관련 펩타이드로부터 선택될 수 있고; 및, 상기 응고 요소는, 예를 들어, 하나 이상의 응고 요소 또는 활성화된 응고 요소들, 바람직하게 FXa 또는 FVa 또는 활성화된 단백질 C 또는 FVIIa로부터 선택될 수 있다. 그러나, 이것은 단지 바람직한 선택이고, 필요하다면 추가 저해제가 사용될 수 있다는 것이 주의된다.
바람직한 일 구현예에 있어서, 상기 진단 조성물은 또한 하나 이상의 안정화제를 함유할 수 있으며, 상기 안정화제는 바람직하게 알부민 또는 젤라틴이다.
바람직한 일 구현예에 있어서, 상기 진단 조성물은 또한 하나 이상의 인지질을 함유할 수 있고, 상기 인지질은 포스파티딜세린(phosphatidylserine), 포스파티딜에탄올아민(phosphatidylethanolamine), 및 포스파티딜에탄올콜린 (phosphatidylethanolcholine)과 같은 상이한 인지질의 조성물일 수 있다. 예를 들어, 토끼 뇌로부터 추출된 인지질의 혼합물이 사용될 수 있다.
본 발명의 상기 진단 조성물은 바람직한 구현예에 따라 하기 구성을 가질 수 있다:
Figure pct00004
외인성 활성화 : 외인성 활성제와 안정화제, 및 선택적으로 CaCl2의 조합
Figure pct00005
내인성 활성화 : 내인성 활성제와 안정화제, 및 선택적으로 CaCl2의 조합
Figure pct00006
헤파린에 대한 비감응성 외인성 활성화(extrinsic activation insensitive for heparin) : 외인성 활성제, 헤파린 저해제와 안정화제, 및 선택적으로 CaCl2의 조합
Figure pct00007
헤파린에 대한 비감응성 내인성 활성화(intrinsic activation insensitive for heparin) : 내인성 활성제, 헤파린 저해제와 안정화제, 및 선택적으로 CaCl2의 조합
Figure pct00008
혈소판 활성화 없는 외인성 활성화(extrinsic activation without platelet activation) : 외인성 활성제, 혈소판 저해제와 안정화제, 및 선택적으로 CaCl2의 조합
Figure pct00009
헤파린에 대해 비감응성이고, 혈소판 활성화 없는 외인성 활성화 : 외인성 활성제, 혈소판 저해제, 헤파린 저해제와 안정화제, 및 선택적으로 CaCl2의 조합
Figure pct00010
혈소판 활성화 없는 내인성 활성화(intrinsic activation without platelet activation) : 내인성 활성제, 혈소판 저해제와 안정화제, 및 선택적으로 CaCl2의 조합
Figure pct00011
헤파린에 대해 비감응성이고, 혈소판 활성화 없는 내인성 활성화 : 내인성 활성제, 혈소판 저해제, 헤파린 저해제와 안정화제, 및 선택적으로 CaCl2의 조합
Figure pct00012
피브린용해의 저해를 가지는 외인성 활성화 : 외인성 활성제, 피브린용해 저해제와 안정화제, 및 선택적으로 CaCl2의 조합
Figure pct00013
헤파린에 대해 비감응성이고, 피브린용해의 저해를 가지는 외인성 활성화 : 외인성 활성제, 피브린용해 저해제, 헤파린 저해제와 안정화제, 및 선택적으로 CaCl2의 조합
Figure pct00014
피브린용해의 저해를 가지는 내인성 활성화 : 내인성 활성제, 피브린용해 저해제 및 안정화제, 및 선택적으로 CaCl2의 조합
Figure pct00015
헤파린에 대해 비감응성이고, 피브린용해의 저해를 가지는 내인성 활성화 : 내인성 활성제, 피브린용해 저해제, 헤파린 저해제와 안정화제, 및 선택적으로 CaCl2의 조합
Figure pct00016
추가적 응고 인자를 가지는 외인성 활성화 : 외인성 활성제, 하나의 추가적 응고 인자와 안정화제, 및 선택적으로 CaCl2의 조합
Figure pct00017
헤파린에 대해 비감응성이고, 추가적 응고 인자를 가지는 외인성 활성화 : 외인성 활성제, 하나의 추가적 응고 인자, 헤파린 저해제와 안정화제, 및 선택적으로 CaCl2의 조합
Figure pct00018
추가적 응고 요소를 가지는 내인성 활성화 : 내인성 활성제, 하나의 추가적 응고 인자와 안정화제, 및 선택적으로 CaCl2의 조합
Figure pct00019
헤파린에 대해 비감응성이고, 추가적 응고 요소를 가지는 내인성 활성화 : 내인성 활성제, 하나의 추가적 응고 인자, 헤파린 저해제와 안정화제, 및 선택적으로 CaCl2의 조합
제 2 측면에 있어서, 본 발명은, 상기 정의된 바와 같은 진단 조성물을 포함하는 용기(1)를 제공한다. 상기 용기(1)는 바람직하게 바이알 또는 큐베트의 형태를 가진다.
상기 용기(1)는 채워질 시약 또는 채워질 검사액에 의해 부식되지 않거나 또는 그렇지 않으면 영향을 받지 않는 물질 (예를 들어, 플라스틱 또는 유리)로부터 형성된다.
상기 용기(1)는 원통형 형태일 수 있으나, 그의 형태가 반드시 원통형이어야 하는 것은 아니다. 상기 용기(1)는, 예를 들어, 도 4 에서 나타낸 것처럼, 원뿔형 또는 적어도 부분적으로 원뿔형으로서, 내부 측면 프로파일이 상부 개구부로부터 바닥까지 감소되는 형태일 수 있다. 이것은 보통 적은 양의 액체 시약 혼합물을 더 잘 다룰 수 있도록 한다. 더 작은 지름을 가지는 평평한 바닥 바이알을 사용하는 것이 이러한 문제를 감소시킬 것이나, 이러한 바이알은, 예를 들어, ROTEM 혈전-탄성계(thrombo-elastometer)와 같은 진단 장치와 연결되어 사용되는 표준 피펫팅 장치를 이용하여 다루기에는 너무 좁은 개구부 직경을 가질 것이다 (상기 ROTEM 시스템의 디자인과 어떻게 사용하는지에 관해서는, 공개 문헌 US 5,777,215에 나타나 있으며, 이는 참조문헌으로서 본원에 포함된다).
더욱이, 이러한 작은 바이알은 통상의 자동화된 공정 시스템의 경우 관리하는 것을 더욱 곤란하게 하여 생산 비용을 증가시킬 것이다.
바람직한 일 구현예의 기본적으로 축대칭인(axically symmetrics) 용기(1)의 횡단면이 도 4a에 나타낸다. 그러나, 본 발명은 여기에 제한되지 않고, 또한 U-자형태, 직사각형 형태 등과 같은 형태들이 사용될 수 있음이 명백하게 주의되어야 한다.
상기 언급된 것과 같이, 상기 용기(1)는 시약의 손실 또는 오염물, 수분 등의 유입을 피하기 위하여 뚜껑(lid)(5) 등에 의하여 밀폐 또는 밀봉될 수 있다.
다른 구현예에 있어서, 상기 용기(1)는 상기 점탄성 측정 장치(4)의 계량컵(2)으로서 직접 사용될 수 있는 방식으로 고안된다. 즉, 점탄성 분석은 각각의 용기(1)가 제공되고, 상기 검사액이 상기 용기(1) 내로 첨가되고, 상기 측정이 상기 용기(1)내에서 직접 수행되는 것과 같이 수행될 수 있다. 이러한 경우에는, 상기 용기 내로의 혈액 분배(dispension)만이 액체 전달 단계로 수행되어야 하고, 이것은 수동 피펫, 자동화된 피펫, 자동화된 디스펜서(dispenser) 또는 임의의 다른 액체 전달 장치를 사용함으로써 구현될 수 있다.
이러한 구현예에 있어서, 상기 용기(1)는 두 개의 물질, 예를 들어, 유리 및 플라스틱 또는 유리 및 표면 덮개의 조합에 의해 고안될 수 있다. 이러한 맥락에서, 유리로 제조된 상기 용기의 부분은 상기 플라스틱 부분의 전체적인 밑면을 반드시 고정시켜야 되는 것이 아니고, 도 4c에 따라 제조될 수 있다.
도 4b와 도 4c에 있어서, 본 발명의 다른 구현예가 보여질 수 있다. 상기 용기(1) (예를 들어, 큐베트)는 더 큰 구조, 예를 들어, 유리 물품(article) 내로 통합될 수 있는데, 이것은 몇 가지 기술적 장점을 제공한다: 이러한 셋-업(set-up)은 상기 용기를 위한 홀딩(holding)을 제공할 것이다.
이러한 구현예에 있어서, 상기 유리 표면에 의한 검사액 중 가능한 응고 활성화는 배제되지만, 반면에 플라스틱 물질에 비교해 볼 때 상기 유리 물질의 우수한 밀봉 특성은 여전히 사용된다. 상기 유리 표면에 의한 상기 검사액 중 가능한 응고 활성을 억제하는 유사한 효과는, 상기 유리 표면들이 혈액 또는 혈액 성분과 접촉하고 있는 경우 응고를 활성화시킬 수 없는 하나 이상의 물질의 층을 이용하여 상기 유리 표면 (또는 상기 유리 표면의 적어도 내부 부분)을 커버함으로써 구현될 수 있다.
비교를 위해서, US 2004/0071604에 따른 종래기술 계량컵(2)이 도 3에 도시된다:
용기(1)가 제공되고, 상기 용기(1)는 다양한 분석 과정을 이용하는 분석을 위한 계량 용기 (즉, 계량컵(2)으로서 간주될 수 있음) 및 시약 지지체로서 제공되고, 상기 용기 벽 또는 용기 바닥으로부터 연장되는 하나 이상의 바(bar)에 의해 두 개 이상의 챔버(6a, 6b, 6c)로 나뉘어지는 영역을 가지며, 상기 챔버들은, 액체 또는 고체 시약들이 확산 또는 흘러서 서로 혼합될 수 없도록 배열된다. 상기 용기(1)는 완전하게 또는 부분적으로 채워진 챔버를 이용함으로써 건조용 또는 냉동-건조용으로 사용되고 동시에 물, 시약 용액, 또는 수성상(aqueous phase)으로 존재하는 상기 샘플을 첨가함으로써 상기 건조된 물질을 재-용해한 후에 계량 용기로서 제공된다.
제 3 측면에 있어서, 본 발명은 하기의 단계를 포함하는, 검사액, 바람직하게 혈액 샘플에 대한 점탄성 분석을 수행하는 방법에 관한 것이다:
a) 검사액을 수득하고;
b) 상기에 정의된 바와 같은 용기(1)를 제공하고;
c) 상기 용기(1) 내로 상기 검사액을 첨가함으로써, 상기 용기에 함유된 상기 진단 조성물을 용해시키고;
d) 컵(2) 내로 상기 검사액 및 상기 진단 조성물의 혼합물을 전달하고 점탄성 분석을 수행하기 위해 적합한 장치(4) 내로 위치시키고;
또는
점탄성 분석을 수행하기 위해 적합한 장치(4) 내로 상기 용기(1)를 위치시키고; 및
e) 상기 혼합물의 점탄성 분석을 수행함.
상기 이미 언급된 것처럼, 상기 검사액은 바람직하게 혈액 샘플, 바람직하게 포유류, 더욱 바람직하게 인간 혈액 또는 혈액 성분들의 샘플이다 (예를 들어, 전혈 또는 혈장).
본 발명의 방법 중 단계 c)는 바람직하게 약 1 초 내지 약 60 초, 더 바람직하게 2 초 내지 10 초, 그리고 가장 바람직하게 약 5 초가 소요된다. 이 시간에 이어서, 상기 진단 조성물 및 상기 혈액 샘플의 혼합물은 측정 장치(4)의 상기 계량컵(2)으로 빠르게 전달되어야 한다. 이것은, 상기 용기(1)로부터 상기 혼합물을 수동으로 또는 자동으로 피펫팅하고 및 이에 대하여 상기 장치(4)로, 즉, 상기 장치(4)의 계량컵(2)으로 상기 혼합물을 전달함으로써 단계 d)에서 수행되는 것이다.
다른 방법으로서, 본 발명의 용기(1)가 계량컵(2)이라면, 상기 측정은 상기 용기(1) 내에서 직접 수행된다. 이러한 경우에, 단계 d)는 생략될 수 있다.
상기 장치(4)는 바람직하게 점탄성 측정을 위해 적절한 장치, 예를 들어, (US 5,777,215), (US 6,537,819), 또는 (US 5,777,215)에 개시된 장치이다.
이러한 장치(4)의 하나의 예가 도 2에 보여진다.
컵(2) (큐베트)과 핀(3) 사이의 응괴의 형성 후에, 상기 응괴 자체는 상기 컵(2)에 대하여 상기 핀(3)의 이동에 의해 연장된다. 상기 응괴의 특징적 파라미터의 검사는 상기 응괴에 의한 컵(2)과 핀(3)의 기계적인 커플링에 기초된다. 상기 응괴가 상기 컵(2)과 핀(3) 모두의 표면 상에 부착할 경우에만 상기 검사가 가능하다. 그래서, 컵(2)과 핀(3) 양쪽의 표면에 견고한 부착은 점탄성 분석에 필수적으로 요구된다.
본 발명의 방법은 혈액 샘플의 응고 특성을 측정하기 위해서 혈액 샘플의 이러한 점탄성 분석을 포함하며, 여기서 광범위한 의미에 있어서 이러한 점탄성 분석은 펀치(punch)에 대하여 혈액 샘플을 포함하는 큐베트의 상대적인 움직임을 측정한 것이다. 상기 분석은 바람직하게 상기 응괴 시간, 상기 응괴 형성 시간, 및 피브린용해 효과(fibrinolytic effects)를 포함한 시간에 따른 응괴의 견고성의 측정을 포함한다.
실시에 있어서, 하기의 단계가 수행될 수 있다:
1. 샘플 (예를 들어, 전혈, 혈장)의 정의된 부피가 상기 시약 조성물을 함유하는 바이알 내로 직접 첨가되고; 상기 측정은 상기 샘플의 첨가 순간에 가까운 시간에 시작되어야 한다.
2. 상기 샘플에서 시약 혼합물의 용해 후에(5 초), 상기 시약 샘플 혼합물은 상기 시약 바이알로부터 상기 계량컵(2)으로 피펫팅된다 (상기 바이알이 계량컵(2)으로서 그 자체가 작용한다면 반드시 필요한 것은 아님).
3. 그리고 나서, 상기 컵(2)은, 상기 핀(3)이 상기 검사컵 내에 함유된 액체 내로 침지될 수 있도록 위치되고, 상기 측정은 사용자에 의해 멈출 때까지 계속된다.
그러므로, 상기 사용자는 수행하는 각 검사를 위해 4 번 이하의 피펫팅 단계를 필요로 하고 (액체 시약 시스템의 경우 8 단계까지 요구되는 것과 비교됨) 한 번의 검사를 준비할 때 피펫 팁의 교환이 필요 없다. 이것은, 이러한 검사를 수행하는 사람을 위한 본 발명의 직접적인 이점을 암시한다.
또 다른 측면에 있어서, 본 발명은 검사액, 바람직하게 혈액 샘플의 점탄성 거동을 분석하는 방법에 있어서 상기에 정의된 것과 같은 진단 조성물 또는 용기(1)의 용도에 관한 것이다.
본 발명이 바람직한 구현예들에 따라 설명되었으나, 당업자는 모든 구현예에 있어서 변형이 가능함이 당업자에게 자명하다.
1 용기
2 계량컵
3 핀(pin)
4 측정 장치
5 뚜껑(lid)
6a,b,c 시약 챔버(reagent chambers)

Claims (32)

  1. 하기 성분들 중 적어도 두 개를 포함하며:
    a) 하나 이상의 응고 활성제; 및 하기로부터 선택된 하나 이상의 성분
    b) 상기 검사액의 재석회화(recalcification)를 확보하기 위한 충분한 양 의 칼슘 염, 바람직하게 CaCl2; 및/또는
    c) 하나 이상의 저해제 및/또는 다른 응고 성분 또는 인자(factor);
    상기 성분들은 필수적으로 건조 형태이고 특정된 검사액의 하나의 단일 점탄성 분석을 수행하는 데 충분한 양으로 존재하며,
    여기서 상기 성분들은 물질 혼합물로 존재하는 것이 아니라 공간적으로 분리된 형태로 존재하는 것임을 특징으로 하는,
    검사액의 점탄성 분석에서 사용하기 위한 진단 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 성분들의 공간적 분리는 각 성분을 별도의 담체 물질 내로 혼입함으로써 구현되는 것인, 진단 조성물.
  3. 제 2항에 있어서,
    상기 담체 물질은 적어도 탄수화물, 예를 들어, 사카로오즈(saccharose) 또는 셀룰로오즈를 포함하는 것인, 진단 조성물.
  4. 제 2 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 담체 물질은 응괴(clotting) 거동, 응괴 형성 거동, 또는 응괴 용해 (clot lysis) 거동에 대하여 현저한 영향을 나타내지 않는 것인, 진단 조성물.
  5. 제 1항에 있어서,
    상기 응고 활성제는 내인성 및/또는 외인성 활성제인, 진단 조성물.
  6. 제 5 항에 있어서,
    상기 외인성 응고 활성제는 조직 인자(Tissue Factor, TF)인 것인, 진단 조성물.
  7. 제 6 항에 있어서,
    상기 조직 인자는 지질화된 TF 또는 rTF로부터 선택되는 것인, 진단 조성물.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 내인성 응고 활성제는 셀라이트(celite), 엘라그산(ellagic acid), 설페이티트(sulfatit), 카올린(kaolin), 실리카, RNA, 또는 이들의 혼합물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 진단 조성물.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 저해제는 혈소판(platelet) 저해제, 피브린용해(fibrinolysis) 저해제, 또는 헤파린 저해제 중 하나 이상으로부터 선택되는 것인, 진단 조성물.
  10. 제 9 항에 있어서,
    상기 혈소판 저해제는 세포골격(cyto-skeleton) 저해제 또는 GPIIb/IIIa 길항제인 것인, 진단 조성물.
  11. 제 9 항에 있어서,
    상기 피브린용해 저해제는 아프로티닌(aprotinine), 트라넥사민산(tranexamic acid), 또는 eaca로부터 선택되는 것인, 진단 조성물.
  12. 제 9 항에 있어서,
    상기 헤파린 저해제는 헤파리나제, 프로타민(protamine), 또는 프로타민-관련 펩타이드로부터 선택되는 것인, 진단 조성물.
  13. 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 응고 인자는 하나 이상의 응고 인자들 또는 활성화된 응고 인자들, 바람직하게 FXa 또는 FVa 또는 활성화된 단백질 C 또는 FVIIa로부터 선택되는 것인, 진단 조성물.
  14. 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서,
    CaCl2가 상기 검사액, 바람직하게 혈액 샘플의 약 1 μmol/ml 내지 약 100 μmol/ml의 양으로 존재하는 것인, 진단 조성물.
  15. 제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 건조 형태는 동결건조된 형태인 것인, 진단 조성물.
  16. 제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서,
    안정화제를 추가 포함하는, 진단 조성물.
  17. 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 안정화제는 알부민 또는 젤라틴인 것인, 진단 조성물.
  18. 제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 따른 진단 조성물을 포함하는, 용기(container).
  19. 제 18 항에 있어서,
    상기 용기(1)는 바이알 또는 큐베트의 형태를 가지는 것인, 용기.
  20. 제 19 항에 있어서,
    상기 용기는 내부 측면 프로파일이 개구부부터 바닥까지 감소되는 방식으로 형성되는 것인, 용기.
  21. 제 18 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 용기는 점탄성 측정을 수행하기 위한 장치에 부착될 수 있는 방식으로 형성된 상기 용기의 내부 부분을 가지는 것인, 용기
  22. 제 21 항에 있어서,
    상기 용기는 적어도 두 개의 상이한 물질을 포함하며, 기본적으로 또는 적어도 부분적으로 상기 용기의 외부 형태를 형성하는 하나의 물질은 적절한 커버에 의하여 상기 용기의 기밀한 실링(hermetical sealing)을 가능하게 하며, 상기 검사액을 받는 부분을 기본적으로 커버하는 다른 물질은 응고 캐스케이드(cascade)를 활성화시키지 않고 혈액 또는 혈액 성분의 적절한 점착(adhesion)을 가능하게 하는 것인, 용기.
  23. a) 검사액을 수득하고;
    b) 제 18 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 따른 용기(1)를 제공하고;
    c) 상기 용기(1) 내로 상기 검사액을 첨가함으로써, 상기 용기에 함유된 진단 조성물을 용해시키고;
    d) 선택적으로 점탄성 분석을 수행하기 위해 적합한 장치(4) 내로 상기 검사액 및 상기 진단 조성물의 혼합물을 전달하고;
    또는
    점탄성 분석을 수행하기 위해 적합한 장치(4) 내로 상기 용기(1)를 위치시키고; 및
    e) 상기 혼합물의 점탄성 분석을 수행하는 것
    의 단계를 포함하는, 검사액에 대한 점탄성 분석을 수행하기 위한 방법.
  24. 제 23 항에 있어서,
    상기 검사액은 혈액 샘플, 바람직하게 포유류, 더욱 바람직하게 인간 혈액 샘플인 것인, 방법.
  25. 제 24 항에 있어서,
    상기 혈액 샘플은 전혈(whole blood) 또는 혈장인 것인, 방법.
  26. 제 23 항 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서,
    단계 c) 는 약 1 초 내지 약 60 초, 바람직하게 약 2 초 내지 약 10 초, 더욱 바람직하게 약 5 초 소요되는 것인, 방법.
  27. 제 23 항 내지 제 26 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 혼합물은 상기 용기(1)로부터 상기 혼합물을 수동으로 또는 자동적으로 피펫팅하여 상기 장치(4)로 상기 혼합물을 전달함으로써 단계 d)에서 전달되는 것인, 방법.
  28. 제 23 항 내지 제 27 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 혼합물은 상기 장치(4)의 계량컵(2)에게로 전달되는 것인, 방법.
  29. 제 23 항 내지 제 28 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 장치(4)는 혈전탄성계(thromboelastometer) 또는 혈전탄성그래프(thrombelastograph)인 것인, 방법.
  30. 제 23 항 내지 제 28 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 분석은 상기 응괴 시간, 상기 응괴 형성 시간, 시간에 따른 응괴의 견고성 및/또는 피브린용해의 측정을 포함하는 것인, 방법.
  31. 검사액의 점탄성 거동을 분석하기 위한 방법에서, 제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 따른 진단 조성물 또는 제 18 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 따른 용기의 용도.
  32. 제 31 항에 있어서,
    제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 따른 두 개 이상의 진단 조성물, 또는 제 18 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 따른 두 개 이상의 용기가 상기 동일한 검사액의 점탄성 거동을 분석하기 위해 조합된 방법으로 사용되는 것인, 용도.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20180097611A (ko) * 2015-12-08 2018-08-31 바이오매트리카 인코포레이티드 적혈구 침강 속도의 감소

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8448499B2 (en) 2008-12-23 2013-05-28 C A Casyso Ag Cartridge device for a measuring system for measuring viscoelastic characteristics of a sample liquid, a corresponding measuring system, and a corresponding method
EP2884284A1 (en) 2013-12-12 2015-06-17 C A Casyso AG Dry diagnostic reagent
US9354243B2 (en) * 2014-05-05 2016-05-31 Haemonetics Corporation Methodologies and reagents for detecting fibrinolysis and hyperfibrinolysis in a blood sample using viscoelastic analysis
ES2907190T3 (es) * 2014-07-31 2022-04-22 Haemonetics Corp Detección de la reversión de un anticoagulante mediante pruebas de coagulación por ecarina y factor Xa
US10175225B2 (en) * 2014-09-29 2019-01-08 C A Casyso Ag Blood testing system and method
US10816559B2 (en) 2014-09-29 2020-10-27 Ca Casyso Ag Blood testing system and method
CN107438765B (zh) * 2014-11-14 2022-07-26 科拉医疗保健公司 确定卒中亚型的装置和方法
DK3317422T3 (da) 2015-07-01 2019-10-21 Leyser Lab Gmbh Diagnostisk sæt til viskoelasticitetsanalyse samt anvendelser deraf
ES2842245T3 (es) 2016-04-15 2021-07-13 Enicor Gmbh Punta de pipeta y sus usos y métodos
CN106093440A (zh) * 2016-06-06 2016-11-09 中国人民解放军总医院 一种用于检测人体血液凝集功能的诊断试剂及其制备方法与使用方法
CN106885895B (zh) * 2017-02-27 2019-04-05 常熟常江生物技术有限公司 血小板功能检测方法
US10843185B2 (en) 2017-07-12 2020-11-24 Ca Casyso Gmbh Autoplatelet cartridge device
CN109932512A (zh) * 2019-02-28 2019-06-25 上海原科实业发展有限公司 一种完全抑制血小板功能的纤维蛋白原检测试剂/冻干检测试剂及其制备方法
CN113848332B (zh) * 2021-09-17 2024-04-19 广州徕西姆医学诊断技术有限公司 一种血栓弹力图检测试剂及其制备方法和应用

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4189536A (en) * 1977-11-09 1980-02-19 Hycel, Inc. Reagent systems, enzymatic assays and compositions therefor
DE3044385A1 (de) * 1980-11-25 1982-06-24 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren zur durchfuehrung analytischer bestimmungen und hierfuer geeignetes rotoreinsatzelement
US4755461A (en) * 1986-04-17 1988-07-05 Bio/Data Corporation Tableted blood plasma microconcentrated thromboplastin coagulation reagent
US5447440A (en) * 1993-10-28 1995-09-05 I-Stat Corporation Apparatus for assaying viscosity changes in fluid samples and method of conducting same
JP2857043B2 (ja) * 1993-11-16 1999-02-10 株式会社トクヤマ 血液凝固時間測定乾燥試薬
US5593824A (en) * 1994-09-02 1997-01-14 Pharmacia Biotech, Inc. Biological reagent spheres
EP0734524B1 (de) 1994-10-19 1997-05-21 Alexander Calatzis Vorrichtung zum messen der koagulationseigenschaften von test-flüssigkeiten
AT405692B (de) 1997-03-27 1999-10-25 Immuno Ag Reagens zur bestimmung der aptt
US6019735A (en) * 1997-08-28 2000-02-01 Visco Technologies, Inc. Viscosity measuring apparatus and method of use
CN1085336C (zh) * 1998-06-23 2002-05-22 山东工业大学 一种测量非抗凝血表观粘度的方法及装置
US6225126B1 (en) 1999-02-22 2001-05-01 Haemoscope Corporation Method and apparatus for measuring hemostasis
EP1234614A1 (de) 2001-02-27 2002-08-28 Pentapharm Gmbh Mit Stegen unterteiltes Messgefäss zur Aufnahme von Reagenzien, dessen Herstellung und Verwendung
US7262059B2 (en) * 2003-05-06 2007-08-28 Thrombodyne, Inc. Systems and methods for measuring fluid properties
DE102004009089A1 (de) * 2003-12-17 2005-07-21 Boehringer Ingelheim Microparts Gmbh Verfahren und Vorrichtung zur Bestimmung der Viskosität
US7148067B2 (en) * 2004-08-31 2006-12-12 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Thromboplastin reagents
GB0701821D0 (en) * 2007-02-01 2007-03-14 Pentapharm Ag Diagnostic composition and its use in the determination of coagulation characteristics of a test liquid
EP2040073A1 (en) * 2007-09-20 2009-03-25 Iline Microsystems, S.L. Microfluidic device and method for fluid clotting time determination
GB0805296D0 (en) * 2008-03-20 2008-04-30 Iti Scotland Ltd Uses of reagents in sample collection and cartridge systems

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20180097611A (ko) * 2015-12-08 2018-08-31 바이오매트리카 인코포레이티드 적혈구 침강 속도의 감소

Also Published As

Publication number Publication date
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