KR20120131035A - 컬러감자 외피 추출물 또는 이의 활성 분획물을 포함하는 항염 조성물 - Google Patents

컬러감자 외피 추출물 또는 이의 활성 분획물을 포함하는 항염 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR20120131035A
KR20120131035A KR1020110049211A KR20110049211A KR20120131035A KR 20120131035 A KR20120131035 A KR 20120131035A KR 1020110049211 A KR1020110049211 A KR 1020110049211A KR 20110049211 A KR20110049211 A KR 20110049211A KR 20120131035 A KR20120131035 A KR 20120131035A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
extract
fraction
color potato
inflammatory diseases
pharmaceutical composition
Prior art date
Application number
KR1020110049211A
Other languages
English (en)
Other versions
KR101341819B1 (ko
Inventor
남정환
윤영호
홍수영
김수정
진용익
이예진
이경태
Original Assignee
대한민국(관리부서:농촌진흥청장)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 대한민국(관리부서:농촌진흥청장) filed Critical 대한민국(관리부서:농촌진흥청장)
Priority to KR1020110049211A priority Critical patent/KR101341819B1/ko
Publication of KR20120131035A publication Critical patent/KR20120131035A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101341819B1 publication Critical patent/KR101341819B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/81—Solanaceae (Potato family), e.g. tobacco, nightshade, tomato, belladonna, capsicum or jimsonweed
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/324—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on the immune system

Abstract

본 발명은 컬러감자(Color potato) 외피 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 염증 질환 예방 및 치료용 약학 조성물에 관한 것으로서, 다양한 자극에 의해 발현하는 염증 인자의 활성화를 억제하고, 항염증 메카니즘을 중개하는 효소들을 저해하므로 염증성 질환의 예방 및 치료에 탁월한 효과를 기대할 수 있다.

Description

컬러감자 외피 추출물 또는 이의 활성 분획물을 포함하는 항염 조성물 {Anti-inflammatory pharmaceutical composition comprising an extract from colored potato peel and its active fraction}
본 발명은 컬러감자(Color potato) 외피 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 염증 질환 예방 및 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
현대인의 건강을 위협하는 가장 큰 질환은 암이다. 이는 염증 반응으로부터 발현되기도 한다. 염증 반응은 세포의 손상이나 외부적인 감염원에 감염되었을 때 국소 혈관과 체액 중 각종 염증 매개 인자 및 면역세포가 관련되어 효소 활성화 체액침윤, 세포 이동 조직 파괴 등 일련의 복합적 생리반응 즉 부종, 발열, 홍반의 외적 증상을 보인다. 정상적인 경우 염증반응은 감염원을 제거하고 손상된 세포를 재생하여 생체기능 회복작용을 하지만, 항원이 제거되지 않아 염증반응이 지속되면 암으로 발현되기도 한다.
일반적으로 소염제는 시클로옥시제나제(cyclooxygenase; COX)와 같은 효소의 작용을 차단함으로써 약효를 발휘하게 되는데, 위와 혈액에서 발생하는 효소 1형 시클로옥시제나제(COX-1)와 피부, 관절 또는 상처 부위 등에서 생기는 효소 2형 시클로옥시제나제(COX-2)의 활동을 억제함으로써 통증을 경감시키는 역할을 하게된다. COX-1은 보통 위와 혈소판(platelets)에서 발현되며 위의 경우는 산으로 인해 유발되는 손상을 차단하고 혈소판인 경우는 응혈(clotting)에 관여하는 특성을 보이는 반면, COX-2의 경우는 염증 발생 후 생성되는 특성을 보이며, 고통에 대한 감각을 증진시키는 프로스타글란딘 E2(prostaglandin E2; PGE2)의 생성에도 관여한다. COX-2는 염증 발생 부위에서 생성될 뿐만 아니라 척수(spinal cord) 및 뇌를 포함하는 신경세포에서도 발현이 되며, 중추신경계에서도 PGE2가 생성되는데 이 PGE2가 신경세포의 피자극성(excitability)을 증가시키게 되고, 이로 인해 통증 신호 전달과정에 변화가 유도되어 진통 효능을 얻게 된다. 또한 염증으로부터 통증이 유도되는 복잡한 대사 경로를 살펴보면 국소적인 염증이 발생함으로써 인터루킨-1β(interleukin-1β; IL-1β)라는 분자물질이 생성되는데, 이 물질은 신경 세포를 자극해 COX-2의 활성을 유도하게 되고, 해당 유전자가 활성을 나타내면 COX-2 효소가 발현되고 이로부터 PGE2가 생성됨으로써 신경세포가 자극을 받아 통증이 유발된다는 것이다. 이런 일련의 대사 경로 중에서, IL-1β 변환효소(IL-1βconverting enzymes)를 저해함으로써 IL-1β의 생성을 차단하는 약물과 COX-2의 발현을 저해하는 약물이 해당 대사 경로를 차단해서 진통 효과를 나타낸다는 사실을 확인할 수 있다.
이에 본 발명자들은 항염 활성을 나타내는 천연물에 대해 지속적으로 연구한 결과, 식품 제조 가공 시 폐기되어 온 컬러감자(Color potato)의 외피 추출물 또는 이의 용매 분획물이 우수한 항염증 효과를 나타내어 염증과 관련된 질환의 예방 및 치료에 사용될 수 있음을 발견함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서 본 발명의 목적은 컬러감자(Color potato) 외피 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 염증 질환 예방 및 치료용 약학 조성물을 제공하는데 있다.
또한 본 발명의 목적은 상기 컬러감자 외피 분획물의 제조방법을 제공하는데 있다.
마지막으로 본 발명의 목적은 컬러감자(Color potato) 외피 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증 질환 예방 또는 개선용 기능성 식품을 제공하는데 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 컬러감자(Color potato) 외피 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 염증 질환 예방 및 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 (a) 건조 상태의 컬러감자 외피를 세절하고 물, C1 ~ C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 후에 감압농축하여 컬러감자 외피 추출물을 얻는 단계; 및 (b) 상기 추출물을 물에 현탁시킨 후 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트 및 부탄올로 순차적으로 분획하는 단계를 포함하는 컬러감자 외피 분획물의 제조방법을 제공한다.
마지막으로 본 발명은 컬러감자(Color potato) 외피 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증 질환 예방 또는 개선용 기능성 식품을 제공한다.
본 발명의 컬러감자 외피 추출물 또는 이의 분획물은 NF-κB 활성을 저해하여 지질 다당체(Lipopolysaccaride:LPS)로 유도되는 NO(Nitric oxide)와 PGE2(Prostaglandin E2)의 생성 저해에 직접적으로 관여하는 iNOS(Inducible nitric oxide synthase)와 COX-2(Cyclooxygenase-2)와 같은 단백질효소의 발현을 저해함으로서 우수한 항염증 효과를 나타낸다.
도 1은 컬러감자 외피의 박피 부위 및 검체의 규격을 나타내는 도이다.
도 2a는 지질 다당체(lipopolysaccaride; LPS)로 유도된 마우스 대식세포주인 RAW 264.7 세포에서 컬러감자 추출물 및 극성?비극성 용매 분획물의 아질산염(nitrite) 생성에 대한 영향을 나타낸 도이다.
도 2b는 LPS로 유도된 RAW264.7 대식세포에서의 컬러감자 추출물 및 분획물의 프로스타글란딘 E2(prostagladin E2; PGE2 )생성에 대한 영향을 나타낸 도이다.
도 2c는 LPS로 유도된 RAW 264.7 세포에서 컬러감자 분획물을 처리한 유도성 니트릭옥시드 신타제(inducible nitric oxide synthase; iNOS) 효소 및 COX-2(cyclooxygenase-2)효소의 발현 조절을 나타낸 도이다.
이와 같은 본 발명을 더욱 상세하게 설명하면 다음과 같다.
본 발명은 컬러감자(Color potato) 외피 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 염증 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명에서 상기 컬러감자로는 홍영(Hongyoung), 자영(Jayoung), 수미(Superior) 등의 품종을 사용할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며, 당업계에 알려진 컬러감자를 제한 없이 사용할 수 있다.
본 발명의 컬러감자(Color potato) 외피 추출물은 (a) 건조한 컬러감자 외피에 추출 용매를 가하여 추출하는 단계; (b) 단계(a)의 추출물을 여과하는 단계; 및 (c) 단계(b)의 여과한 추출물을 감압농축하여 추출물을 제조하는 단계를 거쳐 수득할 수 있다.
상기 컬러감자 외피는 컬러 감자의 외피 전체를 이용할 수 있고, 바람직하게는 바깥부터 10 mm 까지, 보다 바람직하게는 5 mm 까지의 외피를 사용하는 것이 가장 우수한 항염증 활성을 나타내어 좋다. 하지만 본 발명의 범위가 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 추출 용매는 물, C1 ~ C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매를 사용할 수 있으며, 메탄올 또는 에탄올로 추출하는 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 추출 용매의 양은 컬러감자 외피 건조 중량의 1 내지 30 배로 함이 바람직하고, 10 내지 20 배로 하는 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 추출 시 온도는 10 내지 150 ℃ 인 것이 바람직하며, 20 내지 80 ℃인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 추출 시간은 1 시간 내지 10 일인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
상기 추출물을 제조하는 방법은 초임계추출, 아임계추출, 고온추출, 고압추출 또는 초음파추출법 등의 추출장치를 이용한 방법 또는 XAD 및 HP-20을 포함한 흡착 수지를 이용하는 방법 등 당업계의 통상적인 추출방법을 사용할 수 있으며, 가온하며 환류 추출 또는 상온에서 추출하는 것이 바람직하나, 이에 한정하는 것은 아니다. 상기 추출 회수는 1 회 내지 5 회인 것이 바람직하며, 3 회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 방법에 있어서, 단계 (c)의 감압농축은 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조, 상온건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
한편 컬러감자 외피 추출물의 분획물은 추가적으로 유기용매로 추출하여 얻을 수 있으며, 이때 유기용매는 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 노르말 부탄올인 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 상기 분획물은 컬러감자 외피 추출물을 물에 현탁시킨 후 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트 및 노르말 부탄올로 순차적으로 계통 분획하여 수득한 헥산 분획물, 클로로포름 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 노르말 부탄올 또는 물 분획물 중 어느 하나인 것이 바람직하다. 상기 분획물은 상기 컬러감자 외피 추출물로부터 분획 과정을 1 회 내지 5 회, 바람직하게는 3 회 반복하여 수득할 수 있고, 분획 후 감압 농축하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
상기 컬러감자 외피 추출물 및 분획물은 NF-κB 활성을 저해하여 지질 다당체(Lipopolysaccaride:LPS)로 유도되는 NO(Nitric oxide)와 PGE2(Prostaglandin E2)의 생성 저해에 직접적으로 관여하는 iNOS(Inducible nitric oxide synthase)와 COX-2(Cyclooxygenase-2)와 같은 단백질 효소의 발현을 저해함으로서 우수한 항염증 효과를 나타내어 급성염증질환, 류마티스성 관절염, 위염, 대장염, 신장염, 간염, 암 또는 퇴행성 질환 등과 같은 염증 질환에 우수한 예방 및 치료 효과를 나타낸다.
상기 본 발명의 컬러감자 외피 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 상기 컬러감자 외피 추출물 또는 이의 분획물을 0.1 내지 50 중량%로 포함하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 조성물은 약제의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 상태, 체중, 연령, 성별, 식이, 배설율, 질환의 중증도, 약물형태, 투여시간, 투여방법, 투여경로 및 투여기간 등에 따라 그 범위가 다양하다. 1일 투여량은 본 발명에 따른 추출물, 분획물 또는 화합물을 동결건조하였을 때의 양으로 0.0001 ㎎/㎏ 내지 500 ㎎/㎏, 바람직하게는 0.001 ㎎/㎏ 내지 100 ㎎/㎏ 이며, 필요에 따라 일일 1 회 내지 수회로 나누어 투여할 수 있다.
또한, 본 발명은 컬러감자(Color potato) 외피 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증 질환 예방 또는 개선용 기능성 식품을 제공한다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 드링크제, 육류, 소세지, 빵, 비스켓, 떡, 초콜릿, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명의 컬러감자 외피 추출물 또는 이의 분획물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강기능식품 중의 상기 추출물의 양은 전체 식품 중량의 0.1 내지 90 중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있다.
본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.
상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.
상기 외에 본 발명의 컬러감자 외피 추출물 또는 이의 분획물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 컬러감자 외피 추출물 또는 이의 분획물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 컬러감자 외피 추출물 또는 이의 분획물 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 상세히 설명한다. 단, 하기의 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기의 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 컬러감자 외피의 박피 및 건조
재료: 고령지농업연구센터 시험포장에서 육성된 컬러감자 신품종 2종(홍영, 자영)과 기존품종 1종(수미)을 사용하였다.
박피: 외피를 높이 1 cm, 두께(깊이) 5 mm로 감자의 육질부로부터 박리하였다(도1 참조).
건조: 초저온 동결건조기를 이용 -70 ℃상에서 동결건조를 실시하였다.
실시예 2: 컬러감자 외피의 에탄올 추출물 제조
초저온 동결건조된 컬러감자 외피(홍영, 자영, 수미) 시료 각 100 g을 에탄올 1 리터에 침지하여 상온에서 5 시간 동안 환류 추출하여, 진공여과한 후 상층액을 회수하였다. 이 과정을 3 회 반복 후 감압?농축하여 컬러감자 외피 에탄올 추출물(홍영: 14 g, 자영: 9 g , 수미: 6 g)을 수득하였다.
실시예 3: 용매별 컬러감자 외피의 분획물 제조
상기 실시예 2에서 얻은 컬러감자 외피(홍영: 14 g, 자영: 9 g, 수미: 6 g)에탄올 추출물을 물 0.5 리터에 현탁한 후 핵산(1리터×3), 클로로포름(1리터×3), 에틸아세테이트(1리터×3), 노르말 부탄올(1리터×3)로 각각 용출하여 각각의 분획물을 진공농축하여 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 노르말 부탄올 유기용매 분획 농축물을 수득한 후 평량하였다(표 1 참조).
컬러감자 외피 용매 분획물의 수득량
샘플(Sample) 중량(Weight)(g)
홍영
(Hongyoung)		 자영
(Jayoung)		 수미
(Superior)
헥산 분획물
(Hexane fraction)		 1.15 0.94 0.23
클로로폼 분획물
(Chloroform fraction)		 0.75 0.58 0.08
에틸아세테이트 분획물
(Ethylacetate fraction)		 10.57 4.27 4.38
노르말 부탄올 분획물
(n-buthanol fraction)		 2.27 7.84 10.2
실험예 1: 세포의 배양
RAW 264.7세포를 10% FBS 및 페니실린(penicillin)(100 μg/ml), 스트렙토마이신(streptomycin)(100 U/ml)이 포함된 Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM) 배지에서 37 ℃, 5% CO₂조건을 유지하여 배양하였다.
실험예 2: 세포독성 실험( MTT 독성실험)
독성 정도를 알아보기 위해 MTT(3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸리움 브로마이드 티아졸일 블루,Sigma사, 미국) 시험법으로 측정하였다.
96 웰 플레이트(3072, falcone사, 미국)에 24 시간 배양한 세포에 배지를 제거하고 PBS 완충용액(phosphate buffer saline)으로 세척한 후 각각의 웰에 과산 100 ㎕ 및 여러 농도의 시료 100 ㎕를 첨가하여 45 분간 화수소수 배양한 후 상등액을 제거하고 PBS 완충용액으로 2 번 세척한 후 배지 200 ㎕를 주입하여 다시 24 시간 배양하였다. 배양액 속에 5 ㎎/㎖ MTT시약 50 ㎕을 가하여 4 시간 배양 후 상등액을 제거하고 DMSO(디메칠술폭시드, Sigma사, 미국) 100 ㎕를 첨가한 후 540 nm에서 ELISA리더(Power Wave 340, Bio-TekInstruments사, 미국)로 흡광도를 측정하였다.
실험 결과, 홍영 내심의 클로로폼(Chloroform) 분획물 > 자영 외피의 노르말 부탄올(n-butanol) 분획물 > 수미 외피의 노르말 부탄올(n-butanol) 분획물 순으로 세포독성이 있는 것으로 확인되었다(표 2 참조).
컬러감자껍질 용매 분획물의 세포독성 측정
샘플
(Sample)		 IC50(μg/ml)
품종
(Cultivar)		 내심
(Tuber)		 외피
(Peel)
에탄올 추출물
(Ethanol extract)		 홍영(Hongyoung) >200 >200
자영(Jayoung) >200 >100
수미(Superior) >200 >200
헥산 분획물
(Hexane fraction)		 홍영(Hongyoung) ≒200 >100
자영(Jayoung) >200 >200
수미(Superior) >200 >100
클로로폼 분획물
(Chloroform fraction)		 홍영(Hongyoung) ≒12.5 ≒100
자영(Jayoung) >200 ≒100
수미(Superior) ≒100 ≒100
에틸아세테이트 분획물
(Ethylacetate fraction)		 홍영(Hongyoung) >200 >200
자영(Jayoung) >200 >200
수미(Superior) >200 >200
노르말 부탄올 분획물
(n-buthanol fraction)		 홍영(Hongyoung) >200 ≒100
자영(Jayoung) >200 ≒50
수미(Superior) >200 ≒25
실험예 3: 아질산염( Nitrite ) 및 PGE 2 실험
항염증 효과를 확인하기 위하여, 아질산염(Nitrite) 및 PGE2 실험을 수행하였다. 일산화질소(NO)는 내피 세포, 신경세포, 혈관 평활근 및 간세포에 이르기까지 다양한 종류의 세포들에 의하여 합성되며, 세포내 NOS(Nitric oxide synthase)에 의하여 아미노산인 L-아르기닌으로부터 합성되고, 산화되어 안정적이고 불활성 산화물인 아질산 이온(NO2 -)과 질산이온(NO3-)으로 되며, 염증 발생 시에 NO와 종양 괴사 인자인 TNF-α, IL-1(Interleukin-1) 및 IL-6(Interleukin-6) 등의 많은 사이토카인들이 급격히 생성된다.
NO 합성의 표식인 아질산염 축적량은 그리에스(Griess) 반응에 의한 배양배지에서 측정되었으며, NO의 연구에는 L-아르기닌과 비슷한 NG-모노메틸-L-아르기닌 (NG-monomethyl-L-arginine; NMA)이 사용되었다. 세포 배양 배지 100 ㎕를 5% 인산과 0.1% 나프틸에틸렌디아민-염산에 용해된 동량의 1% 설파닐아미드로 구성된 그리에스 시약 100 ㎕과 혼합하였으며, 10 분 동안 실온에서 배양하였다.
이어서 550 nm에서 마이크로 플레이트 리더(Power Wave 340, Bio-Tekinstruments사, 미국)를 이용하여 흡광도를 측정하였다. 새롭게 만들어진 배양 배지는 모든 실험에서 블랭크로 사용되었으며, 샘플에서 아질산염의 양은 배지에서 새롭게 제조된 아질산나트륨 표준 곡선으로부터 측정하였다. 대식세포배지에서 PGE2정도는 PGE2EIA키트(Amersham pharmacia Biotech사,미국) 사용하여 정량분석하였다.
실험결과, 지질다당체(lipopolysaccharide; LPS, Sigma사, 미국)로 유도된 마우스 대식세포인 RAW 264.7세포(한국세포주은행)에서 자영 외피 클로로폼(Chloroform) 분획물과 노르말 부탄올(n-butanol) 분획물이 NO2 - 생성을 농도 의존적으로 현저히 저해하는 것을 확인할 수 있었으며, 또한 LPS로 유도된 RAW 264.7 세포의 PGE2 생성 결과를 살펴보면 Screening에서 NO 생성 저해 효과가 뛰어난 자영 외피 클로로폼(Chloroform) 분획물, 노르말 부탄올(n-butanol) 분획물을 이용하여 PGE2 생성 저해 효과를 확인 하였다.
도 2에 의하면 LPS에 의해 유의성 있게 증가한 PGE2 생성이 농도 의존적으로 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 하지만 두 분획물 중 자영 외피 클로로폼(Chloroform) 분획물이 세포 독성이 없는 최고 농도인 100 μg/ml의 농도에서 LPS에 의해 유도된 PGE2를 76.68 % 저해하는 효과를 보여 세포 독성이 없는 최고 농도인 50 μg/ml에서 51.43 % 저해한 부탄올(n-butanol) 분획물보다 저해 효과가 더 높은 것을 확인할 수 있었다(표 3, 도 2a 및 도 2b 참조).
RAW 264.7 대식세포에서 Nitric oxide 생성저해효과 측정
샘플
(Sample)		 IC50(μg/ml)
품종
(Cultivar)		 내심
(Tuber)		 외피
(Peel)
에탄올 추출물
(Ethanol extract)		 홍영(Hongyoung) >200 112.48
자영(Jayoung) 177.77 >100
수미(Superior) >200 121.54
헥산 분획물
(Hexane fraction)		 홍영(Hongyoung) >200 >100
자영(Jayoung) 178.25 113.64
수미(Superior) >200 51.55
클로로폼 분획물
(Chloroform fraction)		 홍영(Hongyoung) >10 52.96
자영(Jayoung) 141.04 36.15
수미(Superior) >100 >100
에틸아세테이트 분획물
(Ethylacetate fraction)		 홍영(Hongyoung) >200 >200
자영(Jayoung) >200 >200
수미(Superior) >200 74.58
노르말 부탄올 분획물
(n-buthanol fraction)		 홍영(Hongyoung) 189.18 63.57
자영(Jayoung) >200 23.15
수미(Superior) >200 >200
실험예 4: 웨스턴 블랏 실험( iNOS 및 COX -2 실험)
염증 매개체인 NO와 PGE2에 대한 시린가레시놀의 저해 효과 및 염증을 유발하는 유도성 니트릭 옥시드 신타제(inducible nitric oxide synthase; iNOS)와 COX-2(cyclooxygenase-2) 효소의 조절에 대한 관계를 규명하기 위해, 웨스턴 블럿 분석으로 발현 정도를 검증하였다.
iNOS는 간 세포, 혈관 평활근 세포, 섬유 아세포 또는 마우스의 대식 세포와 같은 세포들에서 면역학적 자극이나 염증성 자극에 의하여 합성되고, 이들 세포에서는 다량의 NO를 생성하게 된다. 세포 단백질들은 대조군과 분획물로 처리된 RAW 264.7 세포들로부터 추출되어졌으며, 세척된 세포 펠렛들은 류펩틴(leupeptin, Sigma사, 미국)과 아프로틴(aprotin, Sigma사, 미국)이 각 5 ㎍/㎖ 함유된 추출 용해액(조성: 50 mM HEPES pH 7.0, 250 mM 염화나트륨, 5 mM EDTA, 0.1% 노니뎃(Nonidet) p-40, 1 mM 페닐메틸설포닐 플루오로라이드(Sigma사, 미국), 0.5 mM 디티오트레이톨 (dithiothreitol, Sigma사, 미국), 5 mM NaF, 0.5 mM 소듐오르소바나데이트(Naorthovanadate))으로 현탁하였으며, 4 ℃에서 15 분 동안 배양하였다. 세포 잔해물은 마이크로 원심분리기로 제거되었으며, 바로 상층부를 냉동하였고, 단백질 농도는 단백질 시험법 시약(Bio-Rad사)에 의해 결정되었다.
40 내지 50 ㎍의 처리 및 비처리된 세포 추출액으로부터 수득한 세포 단백질은 10% SDS-폴리아크릴아미드 젤 전기영동으로 분리한 후에, 니트로셀룰로오스 멤브레인에 옮겼으며, 이 멤브레인은 단일 클론인 항-iNOS(inducible nitric oxide synthase, Santa Cruz Biotechnology사, 미국)와 COX-2(cyclooxygenase-2, Santa Cruz Biotechnology사, 미국) 항체의 1:500 희석액으로 4 시간 동안 배양한 후에 5% 탈지유인 블롯킹 용액을 이용하여 하룻밤 동안 4 ℃에서 배양하였다. 블럿은 PBS 완충용액으로 2 번 정도 세척하였으며, 호스래디쉬 퍼옥시다제-컨쥬게이트된 염소 항마우스 IgG 이차 항체(Santa Cruz Biotechnology사, 미국)의 1:1000 희석액으로 실온에서 1 시간 동안 배양하였다. 블럿은 트윈 20/트리스 완충식염수(TTBS)로 3번 정도 세척하였으며, 화학발광(Amersham Life Science사, 미국)으로 측정하였다.
실험결과, LPS의 자극에 의해 현저하게 유도된 iNOS와 COX-2 단백질 발현량이 50 μg/ml를 처리하였을 때 확연히 저해되는 것을 확인 할 수 있었고, iNOS는 25 μg/ml을 처리하였을 때부터 저해 효과를 보였다(도 2c 참조).

Claims (7)

  1. 컬러감자(Color potato) 외피 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 염증 질환 예방 및 치료용 약학 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 컬러감자는 홍영, 자영 및 수미 중에서 선택된 1 종 이상인 것을 특징으로 하는 염증 질환 예방 및 치료용 약학 조성물.
  3. 제 1 항에 있어서, 상기 추출물은 컬러감자(Color potato) 외피를 물, C1 ~ C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 추출한 것을 특징으로 하는 염증 질환 예방 및 치료용 약학 조성물.
  4. 제 3 항에 있어서, 상기 저급 알코올은 메탄올 또는 에탄올인 것을 특징으로 하는 염증 질환 예방 및 치료용 약학 조성물.
  5. 제 1 항에 있어서, 상기 분획물은 컬러감자 외피 추출물을 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트 및 노르말 부탄올 중에서 선택된 하나 이상의 용매로 분획하여 얻은 분획물인 것을 특징으로 하는 염증 질환 예방 및 치료용 약학 조성물.
  6. (a) 건조 상태의 컬러감자 외피를 세절하고 물, C1 ~ C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 후에 감압농축하여 컬러감자 외피 추출물을 얻는 단계; 및
    (b) 상기 추출물을 물에 현탁시킨 후 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트 및 부탄올로 순차적으로 분획하는 단계
    를 포함하는 것을 특징으로 하는 컬러감자 외피 분획물의 제조방법.
  7. 컬러감자(Color potato) 외피 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증 질환 예방 또는 개선용 기능성 식품.
KR1020110049211A 2011-05-24 2011-05-24 컬러감자 외피 추출물 또는 이의 활성 분획물을 포함하는 항염 조성물 KR101341819B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020110049211A KR101341819B1 (ko) 2011-05-24 2011-05-24 컬러감자 외피 추출물 또는 이의 활성 분획물을 포함하는 항염 조성물

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020110049211A KR101341819B1 (ko) 2011-05-24 2011-05-24 컬러감자 외피 추출물 또는 이의 활성 분획물을 포함하는 항염 조성물

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20120131035A true KR20120131035A (ko) 2012-12-04
KR101341819B1 KR101341819B1 (ko) 2013-12-16

Family

ID=47514983

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020110049211A KR101341819B1 (ko) 2011-05-24 2011-05-24 컬러감자 외피 추출물 또는 이의 활성 분획물을 포함하는 항염 조성물

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101341819B1 (ko)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101507425B1 (ko) * 2013-10-03 2015-03-31 (주)바이오믹스 컬러 감자 추출물 또는 분획물을 포함하는 치매 예방 또는 치료용 조성물
KR102391801B1 (ko) * 2020-12-21 2022-04-28 강원대학교산학협력단 홍감자의 고 기능성 생리활성 복합재 개발

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101507425B1 (ko) * 2013-10-03 2015-03-31 (주)바이오믹스 컬러 감자 추출물 또는 분획물을 포함하는 치매 예방 또는 치료용 조성물
KR102391801B1 (ko) * 2020-12-21 2022-04-28 강원대학교산학협력단 홍감자의 고 기능성 생리활성 복합재 개발

Also Published As

Publication number Publication date
KR101341819B1 (ko) 2013-12-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102182724B1 (ko) 풀무치 추출물을 함유하는 항염증용 조성물
KR20090010504A (ko) 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터분리한 플라보노이드계 화합물을 유효성분으로 함유하는심장순환계 질환의 예방 및 치료용 조성물
KR102334546B1 (ko) 수벌번데기 추출물을 포함하는 항염증 조성물
KR101341819B1 (ko) 컬러감자 외피 추출물 또는 이의 활성 분획물을 포함하는 항염 조성물
KR101509796B1 (ko) 블루베리 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만의 예방 또는 치료용 조성물
KR101942959B1 (ko) 다래 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 당뇨 또는 당뇨합병증 예방 또는 치료용 조성물
KR101503352B1 (ko) 젖버섯아재비 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 노화방지, 피부보호 및 항염증용 조성물
KR20160079269A (ko) 애엽 발효 추출물을 함유하는 항염증 약학적 조성물 및 건강기능식품
KR20150115414A (ko) 오미자 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 포함하는 염증 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물 또는 상처치유용 약학적 조성물
KR20230095471A (ko) 오미자박 발효물을 유효성분으로 포함하는 근력개선용 조성물 및 그의 제조방법
KR101592373B1 (ko) 고장초 추출물을 포함하는 미백 조성물 및 그 제조 방법
KR20180015795A (ko) 짚신나물 분획추출물 및 이를 포함하는 알도오스 환원 효소를 억제용 조성물
KR20040033983A (ko) 항염증 및 항침해수용 활성을 갖는 리리오덴드린을 함유한가시오가피 수피의 추출물 및 이를 함유하는 조성물
KR101525877B1 (ko) 피부 주름 개선 및 피부 노화 방지를 위한 조성물
KR101938055B1 (ko) 개꼬시래기 추출물 또는 분획물을 유효성분으로 함유하는 동맥경화증의 예방 및 치료용 약학 조성물
KR20200089527A (ko) 석창포 및 황칠 혼합 추출물을 포함하는 항염증용 조성물
KR101877413B1 (ko) 지방축적을 억제하는 효과가 있는 왕불류행 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물
KR20200069077A (ko) 셀러리 가수분해물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
KR20130112980A (ko) 크레이스토카릭스 오페르쿠라투스 추출물 및 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 포함하는 동맥경화증의 예방 또는 치료용 조성물
KR100694569B1 (ko) 항염증 활성을 갖는 우묵사스레피 추출물 및 이로 부터분리된 화합물을 함유하는 조성물
KR102600557B1 (ko) 나한송 추출물의 분획물로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물
KR102602269B1 (ko) 시링가레시놀(Syringaresinol)과 레스베라트롤(Resveratrol)을 포함하는 근육 질환 예방 또는 치료용 조성물
KR102236685B1 (ko) 단삼 또는 작약 추출물을 유효성분으로 함유하는 지질대사질환 예방 또는 치료용 조성물
KR101470613B1 (ko) 라티폴린을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR102373119B1 (ko) 고들빼기 추출물의 분획물로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant