KR20120118612A - 엔로프록사신과 트리메토프림의 동물용 복합 항생제 조성물 및 그를 이용한 동물의 세균감염증 치료 예방 방법 - Google Patents

엔로프록사신과 트리메토프림의 동물용 복합 항생제 조성물 및 그를 이용한 동물의 세균감염증 치료 예방 방법 Download PDF

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박승춘
최명진
황민희
이승진
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황민희
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Abstract

본 발명은 신규 동물용 복합항생제 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 최적 혼합비로 구성된 엔로프록사신과 트리메토프림의 약제학적 유효량을 포함하는 동물용 복합항생제 조성물에 관한 것이다.
본 복합항생제 조성물은 가축 및 어류에서 발생하는 넓은 범위의 세균성 질병에 대한 치료와 예방에 유용하며, 그 적절한 혼합으로 우수한 효과를 유지하면서도 상대적으로 값비싼 엔로프록사신의 함량을 감소시킴으로써 축산농가의 생산원가를 절감하고 약품의 축체 내 잔류도 효율적으로 최소화할 수 있다.

Description

엔로프록사신과 트리메토프림의 동물용 복합 항생제 조성물 및 그를 이용한 동물의 세균감염증 치료 예방 방법{A antibiotics composition for animal comprised of enrofloxacin and trimethoprim and the curing and preventing method of animal bacterial infection using it}
본 발명은 신규 동물용 복합항생제 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 최적 혼합비로 구성된 엔로프록사신(enrofloxacin, 이하 'ENR'이라 한다)과 트리메토프림(trimethoprim, 이하 'TMP'라 한다)의 약제학적 유효량을 포함하는 동물용 복합항생제 조성물에 관한 것이다.
본 복합항생제 조성물은 가축 및 어류에서 발생하는 넓은 범위의 세균성 질병에 대한 치료와 예방에 유용하며, 그 적절한 혼합으로 우수한 효과를 유지하면서도 상대적으로 값비싼 엔로프록사신의 함량을 감소시킴으로써 축산농가의 생산원가를 절감하고 약품의 축체 내 잔류도 효율적으로 최소화할 수 있다.
동물의 세균 감염증 치료에 이용되는 항생제는 모든 항생제의 사용 중 2/3에 해당되며, 주로 사용되는 항생제로는 테트라사이클린계(tetracycline), 마크로라이드계(macrolide), 페니실린계(penicillin), 아미노글리코사이드계(aminoglycoside), 트리메토프림과 설포나마이드(sulphonamide)의 혼합물과 플루오로퀴놀론계(fluoroquinolone) 등이 있다(Schwarz. S et al., Int J. Antimicrob. Ag., 17, 431(2001)).
동물의 감염증에 대한 예방 및 치료의 대부분이 항생제 사용에 의존하고 있으나, 항생제 오남용으로 인한 내성균주의 발현으로 기존 단일 항생제의 사용에 제약을 받고 있는 실정이다. 그 예로, 미국에서는 2005년에 플루오르퀴놀론 저항 균주이자 사람에게 질병을 일으키는 캠필로박터균(Campylobacter)의 발견을 기점으로 엔로프록사신의 조류의 음수 내 첨가를 금지하였다. 또한 축체 내 잔류 문제로 단일 제제의 세균 감염증의 치료에 대한 한계점이 보고되고 있다.
또한 새로운 항생제의 개발에는 많은 시간과 비용이 소요되므로 최근에는 기존의 항생제를 이용한 복합 항생제에 대한 관심이 증가하고 있다. 그에 관한 제품 및 특허출원은 다음과 같다. 동물용 복합항생제의 제품에 대한 예로서, 가축의 소화기 및 호흡기 질병의 예방 및 치료를 위한 설파독신과 타이로신을 복합한 제품인 타이로세틴-F주(삼양애니팜), 클로르테트라사이크린(Chlortetracycline HCL), 설파디아졸(Sulfathiazole) 및 페니실린 G 프로케인(Penicillin G procaine)의 복합 항생제인 다원 CSP 및 린코마이신(Lincomycine)과 스펙티노마이신(Spectinomycine)의 복합 항생제인 다원린스펙(다원) 등이 있다. 또한 동물용 복합항생제에 대한 특허로서, 노르플록사신(norfloxacin)과 타이로신(tylosin)을 이용한 동물용 복합항생제(공개번호 특2000-0066478), 엔로프록사신, 옥시테트라사이클린(Oxytetracycline), 콜리스틴(Colistin) 및 폴리믹신(Polymixin) 등을 이용한 항 병원성 세균 및 내독서 중화능을 갖는 새로운 동물용 복합항생제 조성물(공개번호 특1998-074924) 등이 있다.
그러나 본 발명자들이 본 발명에서 효율적인 조합을 시도한 엔로프록사신과 트리메토프림을 이용한 동물용 복합항생제 조성물에 관한 제품 및 특허는 보고된 바 없다.
본 발명자들이 주목한 물질 중 하나인 ENR은 플루오르퀴놀론계 항생제로서, 세균의 DNA 자이레이스(DNA-gyrase)의 활성을 억제하여 그람 음성균과 그람 양성균에 살균작용을 나타낸다. 소, 돼지, 가금, 토끼, 어류의 소화기, 호흡기 및 요도 감염증의 치료제로 사용되고 있으며, 독일 바이엘사의 Baytril, Baytril Max 등의 제품이 농도에 따라 대동물 및 소동물에 피하주사 및 근육주사로 적용되고 있다(특허번호 U.S. 4670444). ENR 단일제제에 대한 특허로는 동물에 쉽게 적용하기 위한 약제학적 성질이 개선된 향미 물질-함유 약제학적 제제(공개특허 10-2006-0109910), 기호성이 우수한 엔로프록사신 프리믹스 조성물 및 그 제조방법(공개특허 특2001-0094003) 등이 알려져 있다.
또한 본 발명의 주된 요소 중 나머지 하나인 TMP는 세균의 단백질 합성에 중요한 역할을 하는 디히드로엽산환원효소(dihydrofolate reductase)를 억제함으로써 정균작용을 나타낸다. 넓은 범위의 세균에 유효하며, 1973년 FDA에서 설파메톡사졸(sulfamethoxazole)과의 복합제제가 승인되어 널리 사용되고 있다. 주로 트리메토프림:설파메톡사졸의 비율은 1:5로 사용되고 있으며, 이에 대한 인의용 항생제 상품으로는 Bactrim(Roche), Septra(GlaxoWellcome), Sulfatrim(URL) 등이 있다. 동물용 항생제 상품으로는 Tribrissen(Schering-Plough), Uniprim(Macleod) 등이 널리 사용되고 있으며, 동물의 요도 감염, 장염, 호흡기 감염, 이염, 콕시디움증 및 피부 감염에 분말, 알약 또는 주사제로 유효하다.
본 발명의 발명자들은 상기한 바와 같은 상황에서 기존에 사용되어 온 항균물질을 적절한 배합비율로 혼합하여 상승적 항균효과 및 넓은 범위의 세균에의 작용을 기대하는 복합항균제제를 개발하고자 하였고, 그 결과 위에서 설명한 엔로프록사신과 트리메토프림을 이용하여 그 배합 시 상승적 항균작용을 나타내는 점을 실증하는 한편, 그중에서도 최적의 혼합비율을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서 본 발명의 목적은 엔로프록사신과 트리메토프림을 포함하는 동물용 복합항생제 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기 동물용 복합항생제를 이용하는 동물의 세균감염증 치료 또는 예방법을 제공하는 데 있다.
상기와 같은 본 발명은 엔로프록사신(enrofloxacin)과 트리메토프림(trimethoprim)가 혼합된 동물용 복합 항생제 조성물인 것을 특징으로 한다.
이때 엔로프록사신과 트리메토프림의 혼합비는 3:7~7:3의 중량비, 더욱 바람직하게는 3:7의 중량비인 것을 특징으로 한다.
또한 이때 상기 복합항생제 조성물은 사료첨가제, 경구투여제, 주사제 중 어느 하나인 것을 특징으로 한다.
본 발명은 또한 상기 동물용 복합항생제를 이용하여 동물의 세균감염증을 치료하거나 예방하는 방법인 것을 특징으로 한다.
이때 상기 동물은 닭, 돼지, 소, 말, 개, 오리, 산양 및 면양으로 구성된 가축과; 송어, 잉어 및 뱀장어로 구성된 담수어류와; 광어, 우럭, 도미 및 새우로 구성된 해수어류 중에서 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 한다.
본 발명은 항균물질인 ENR과 TMP의 적합한 혼합비율을 포함하는 복합항생제 조성물을 제조함으로써, 경제적이면서도 병원성 균주에 대한 항균활성이 우수한 신규 동물용 복합항생제 조성물을 제공한다. 본 발명에서 동물이란 닭, 돼지, 소, 말, 개, 오리, 산양 및 면양을 포함한 가축 송어, 잉어 및 뱀장어를 포함한 담수어류 그리고 광어, 우럭, 도미 및 새우를 포함한 해수어류 등을 포함한다.
본 발명에서 ENR과 TMP의 혼합비율은 3:7~7:3이 바람직하고, 그중 3:7의 혼합비율이 보다 바람직하다. 본 발명 복합항생제에서 ENR과 TMP의 두 물질 간에 상승작용이 확인되었음에도 불구하고, 혼합 비율이 다를 경우 즉 7:3 이상이면 ENR의 높은 가격으로 인해 비경제적이고 혼합제제의 내성 병원균에 대한 항균효력이 저하되며, 혼합비율이 3:7 미만이면 경제적이기는 하나 항균력이 저하되며 복합항균제의 항균력이 저하되는 문제점이 발생하게 된다. 따라서 적절한 두 항생제의 혼합 비율을 설정하는 것이 매우 중요하다.
본 발명은 상기한 바와 같이 ENR과 TMP을 상기 비율로 혼합하여 제조함으로써 항균범위를 확대하여 ENR과 TMP의 단일 항균제에 저항성이 있는 균주의 출현을 억제할 수 있으므로 복합질병이 발생하였을 때 질병의 예방 및 치료에 우수한 효과를 기대할 수 있다.
ENR의 독성과 관련하여서는 비교적 안전한 것으로 알려져 있으나, 고농도가 주입되었을 경우 개, 고양이 및 말에 있어서 어린동물에 연골 형성 부전을 일으킬 수 있으며, 신장과 간 관련 질병 혹은 경련 유발의 위험성을 가진 동물에서 사용이 금기된다. TMP의 경우, 동물에의 적용에 있어서 대부분 설파계열의 항생제와 복합된 형태로 이용되고 있으며, 이러한 복합항생제의 독성과 관련하여서는 비교적 안전한 것으로 알려져 있으나, 높은 용량을 투여하였을 경우 위장관 질병, 중추 신경계 독성, 안면 부종등을 일으킬 수 있다. 또한 장기간 투여로 개와 고양이에서 결막염이 발생할 수 있다. 특히 말에서 간의 손상, 혈액질환 시에 사용이 금기된다. 따라서 상기한 바와 같이, ENR과 TMP이 일정비율로 복합되어 있는 본 발명의 경우 어린 개 및 신장과 간의 질병을 가진 동물에서의 투여는 독성을 유발할 수 있으므로 신중한 적용이 요구되며, ENR의 경우 근육주사가 통증을 유발하는 경우가 있으므로 정맥투여 혹은 경구투여를 권고한다.
본 발명의 동물용 복합항생제 조성물은 ENR과 TMP을 유효성분으로 포함하며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 동물용 주사제, 산제 및 과립제로 제형화될 수 있다.
본 발명의 복합항생제를 포함하는 동물용 주사제는 약제학적으로 허용 가능한 담체로서 증류수, 올레인산에칠, 에탄올, 프로필렌글리콜, 글리세린 등: 항산화제로서 아스코르브산, 아황산수소나트륨, 피로아황산나트륨, 토고페롤 등: 보존제로서 질산페닐수은, 치메로살, 염화벤잘코늄, 페놀, 크레솔, 파라옥시안식향산메칠, 벤질알코올 등을 이용하여 제조될 수 있다.
한편, 본 발명 복합항생제를 포함하는 동물용 산제 및 과립제는 통상적으로 사용되는 비타민류, 글루코스, 락토스 등의 당류, 전분, 말분, 질석 또는 각종 분말 및 액상효소를 사용량 범위로 함유시켜 제조된다.
본 발명에서 제조된 복합항생제의 투여는 주사제로서 통상적으로 동물에 적용하는 정맥주사, 근육주사 및 피하주사의 방법으로 투여되고, 산제 및 과립제는 음수 및 사료에 혼합하여 투여한다.
투여량은 본 발명에서 정하는 비율로 혼합된 복합항생제로 주사제의 경우에는 질병의 치료목적으로 동물의 체중 kg당 5~100mg(ENR과 TMP의 혼합성분기분)으로 투여되고, 산제 및 과립제를 음수로 투여할 경우에는 음수 1톤에 30g에서부터 2000g(ENR과 TMP의 혼합성분기분)으로 투여된다. 사료에 혼합하여 투여할 경우는 사료 톤당 50g에서부터 2000g(ENR과 TMP의 혼합성분기분)을 동물의 상태를 기준으로 하여 투여한다.
본 발명은 엔로프록사신과 트리메토프림을 포함하는 동물용 복합항생제 조성물을 제공한다. 본 발명의 복합항생제 조성물은 동물, 특히 가축 및 어류의 세균성 질병 치료와 예방에 유용할 뿐만 아니라, 고가의 신규 항균물질을 대체할 수 있어 궁극적으로는 축산농가의 생산원가를 절감시키고 약품의 축체 내 잔류도 효율적으로 최소화하는 효과가 있다.
도 1은 후술하는 실시예 5의 약동학 시험을 위한 시료 준비 및 전처리 과정을 나타낸 도면이다.
본 발명은 엔로프록사신(enrofloxacin, ENR)과 트리메토프림(trimethoprim, TMP)이 적절하게 혼합된 약제학적 유효량을 포함하는 동물용 복합항생제 조성물인 것을 그 특징으로 한다. 또한 상기 동물용 복합항생제를 이용하는 동물의 세균감염증 치료 또는 예방법을 또 다른 특징으로 한다.
본 발명자들은 ENR과 TMP 사이의 상호작용을 구명하고 이들의 다양한 혼합비의 상관관계를 밝히기 위하여, 각종 세균성 질병을 일으키는 닭, 돼지 및 소로부터 분리한 그람양성 및 음성 세균에서의 ENR과 TMP의 최소 억제농도(Minimum Inhibition Concentration, MIC), 최소살균농도(Minimum bactericidal concentration, MBC), 분획별 억제농도(Fractional Inhibitory Concentration, FIC) 및 실시간 균사멸속도(Time kill study)를 측정하였다.
이하 본 발명을 실시예와 함께 상세하게 설명한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1
최소발육억제농도(Minimal inhibitory concentration, MIC)는 broth microdilution 방법을 사용하여 측정하였으며, Escherichia. coli(ATCC 25922), Pasteurella. hemolytica(ATCC55518), Staphylococcus. aureus(ATCC29213), Salmonella. cholerasuis(ATCC 7001) 및 돼지 유래 병원성 세균인 Salmonella. typhimurium을 사용하였다. 대상 균주들은 액체배지에 24시간 계대 배양하여 0.5 맥팔란(MacFarland, 5 X 105 Colony forming unit (CFU)/ml)로 농도를 조절하여 사용하였다. 항생제를 96 well U-bottom microplate를 이용하여 최초 시작농도를 256 μg/ml로 설정한 후 2-배수로 단계별 희석하여 256?0.0156 μg/ml까지 희석한 후 대상균주를 접종하고 24시간 배양한 후 최소발육억제농도를 측정하였다.
최소살균농도(Minimum bactericidal concentration, MBC)는 96 well plate에서 균이 증식하지 않은 최소발육억제농도 이상의 well의 배양액을 한천배지에 접종하여 37℃에서 배양하였다. 최소살균농도는 최초의 접종균수의 99.9%를 사멸하는 최대희석배수의 농도로 정하였다.
표 1은 5개의 균주에 대한 최소발육억제농도와 최소살균농도를 측정한 결과이다.
Figure pat00001

상기 표 1에서 확인할 수 있듯이, 본 발명에 사용된 항생제 조성물인 ENR과 TMP는 5개의 균주에서 각각 0.0156에서 16 μg/ml 그리고 0.0625에서 128 μg/ml의 최소발육억제농도를 나타내었다. 반면, ENR과 TMP의 최소살균농도는 각각 0.0156에서 32 μg/ml 그리고 0.5에서 128 μg/ml로 나타났다. 또한, 돼지에서 분리한 병원성 세균인 S. typhimurium은 높은 최소발육억제농도를 나타냄으로써, ENR과 TMP에 저항성을 가진다는 것을 알 수 있었다.
실시예 2
ENR과 TMP의 병용효과는 체커보오드 법(Checkerboard method)을 이용하여 평가하였다. 대상균주들을 agar plate에서 24 시간 계대 배양하여 0.5 맥팔란(McFarland, 5Ⅹ105 CFU/ml)로 농도를 조절하여 ENR과 TMP이 함유된 96 well plate에 접종하여 37℃에서 24 시간 배양한 수 균주의 성장 여부를 확인하였다.
두 약제의 상호작용은 분획별 억제농도 (Fractional inhibitory concentration index)로 평가하였다. 일반적으로 항균제의 병합 시 FIC≤0.5인 경우 상승작용, 0.5<FIC<1 인 경우 상가작용(additive effect/indeifference), FIC≥2 이상인 경우 길항작용 (antagonism)으로 판정한다. FIC를 구하는 식은 아래와 같다.
Figure pat00002

표 2는 최소발육억제농도(Minimal inhibitory concentration, MIC)에 기초한 ENR과 TMP 사이의 상호작용을 측정한 실험 결과이다.
Figure pat00003

상기 표 2에서 확인할 수 있듯이, ENR과 TMP 사이의 상호작용은 5개의 균주에 대하여 FIC지수 0.5 이상 1 이하로, 상가작용 혹은 부분적 상가작용을 보였다. 특히, 앞서 상기 표 1에서 ENR과 TMP에 저항성을 나타내었던 돼지 유래 병원성 세균인 S. typhimurium 에 대하여 ENR과 TMP 사이에 상승작용을 보여, ENR과 TMP을 이용한 복합항생제가 저항성 균주에 대하여 강력한 항균작용을 나타낼 수 있음을 시사하였다.
실시예 3
ENR과 TMP의 합제에 대한 유효성을 비교하기 위하여 중량 별 복합항생제에 대하여 최소발육억제농도 값을 비교하였다. 각각 ENR 85%+TMP 15%(E85+T15), ENR 70%+TMP 30%(E70+T30), ENR 60%+TMP 40%(E60+T40), ENR 50%+TMP 50%(E50+T50), ENR 40%+TMP 60%(E40+T60), ENR 30%+TMP 70%(E30+T70) 그리고 ENR 15%+TMP 85%(E15+T85)로 혼합하여 각각 혼합제제에 대한 MIC를 상기의 방법으로 측정하였다.
표 3은 ENR과 TMP의 배합비율을 달리하여 최소발육억제농도(Minimal inhibitory concentration, MIC)를 측정한 시험결과이다.
Figure pat00004

상기 표 3 에서 확인할 수 있듯이, E70+T30에서 E30+T70까지의 혼합비율에서의 최소발육억제농도는 동일하였다. 이것은 E15+T85 혼합비율에서의 최소발육억제농도와 비교하여 5개의 균주에 대하여 2 fold 감소를 나타낸 것으로, 우수한 항균활성을 가진다는 것을 알 수 있었다. 반면, E85+T15 혼합비율에서의 최소발육억제농도는 E70+T30에서 E30+T70까지의 혼합비율의 값과 비교하여 볼 때 4개의 균주에 대하여 동일한 값을 나타내었으며, 1개의 균주에 대해서만 2 fold 감소를 나타내었다. 총 7가지의 혼합비율 중 E85+T15 혼합비율이 가장 우수한 항균활성을 나타내었음에도 불구하고, 본 발명은 높은 비율의 ENR에 따른 경제적 문제점, 혼합제제의 내성 병원균에 대한 항균효력이 저하 등을 이유로 E70+T30에서 E30+T70까지의 혼합비율을 적정 혼합비율로 설정하였으며, 그중 값비싼 ENR의 함량이 가장 낮고 높은 항균력을 나타낸 E30+T70을 보다 바람직한 적정 혼합비율로 설정하였다.
실시예 4
ENR과 TMP의 복합항생제(ET37)을 이용하여 실시간으로 균을 죽이는 상호작용을 구명하고자 시험 균주를 agar plate에서 24 시간 계대 배양하여 0.5 맥팔란(McFarland, 5Ⅹ105 CFU/ml)로 농도를 조절하여 50 ml cornical tube에 접종하고 각각의 배합으로 혼합된 항균제 용액을 첨가하여 37℃에서 진탕 배양하였다. 항균용액 첨가 전과 각각 1 배 그리고 2 배의 최소발육억제농도(Minimal inhibitory concentration, MIC)의 항균용액을 첨가 후 0, 3, 6, 9, 12 그리고 24시간째 시료를 채취하여 멸균된 0.1% 아가 생리식염수(agar saline) 용액으로 10 배 단계별 희석법으로 희석한 후 뮐러힌톤 한천배지 (Muller Hinton Agar) 에 50 μl씩 도말하여 24 시간 배양한 후 균수를 측정하였다. 측정시 5 개 이하, 300 개 이상의 집락은 제외하고 측정하였다. 이때, ET37 처리군이 단일 항생제 중 가장 강력한 항균활성을 나타내는 ENR 처리군보다 2 Log 이상의 감소를 나타내었을 때, 상승작용이라 하며, 2 Log 이하의 감소를 나타내었을 때, 상가작용이라 한다.
그래프 1은 E.coli (A)와 S.aureus (B)에서 1 배의 최소발육억제농도에 따른 ENR, TMP과 복합항생제 조성물(ET37)의 실시한 균 사멸 속도를 나타내는 실험결과이다.
Figure pat00005

상기 그래프 1에서 확인할 수 있듯이, E. coli에 대한 균사멸속도시험에서 ET37 병용투여와 ENR의 단독 투여시 1 배의 최소발육억제농도에서 12시간 24시간 배양 후에 균수는 ET37가 함유된 균수에서 각각 1.05와 1.38 CFU/ml의 감소를 나타내어 상가작용을 보였다. S. aureus을 대상으로 같은 실험에서 1 배의 최소발육억제농도의 ET37은 ENR의 단독과 비교시 12시간과 24시간에서 0.1과 1.88 CFU/ml의 감소를 보여 상가작용을 나타내었다.
그래프 2는 E. coli (A)와 S. aureus (B)에서 2배의 최소발육억제농도에 따른 ENR, TMP과 복합항생제 조성물(ET37)의 실시한 균 사멸 속도를 나타내는 실험결과이다.
Figure pat00006

상기 그래프 2에서 확인할 수 있듯이, E. coli에 대한 균사멸속도시험에서 ET37 병용투여와 ENR의 단독투여시 2 배의 최소발육억제농도에서 12시간 24시간 배양 후에 균수는 ET37가 함유된 균수에서 각각 0.0와 0.51 CFU/ml의 감소를 나타내어 상가작용을 보였다. S. aureus을 대상으로 같은 실험에서 2 배의 최소발육억제농도의 ET37은 ENR의 단독과 비교시 12시간과 24시간에서 0.1과 2.18 CFU/ml의 감소를 보여 상가작용 혹은 상승작용을 나타내었다.
실시예 5
랫트에서 ENR과 TMP의 단독투여와 ET37의 복합투여시 약동학적 데이터에 기초하여, 혈장 내 두 항생제의 비율을 측정하고자 하였다. 상기의 목적으로, 랫트에 ET37 (ENR 9 mg/kg + TMP 21 mg/kg), ENR(9 mg/kg) 그리고 TMP(21 mg/kg)을 각각 복강주사하였다. 각 군마다 9-10 주령의 랫트 6마리가 사용되었으며, 항생제 투여 후 0, 0.1, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8 그리고 12시간째에 꼬리 정맥에서 혈액을 채취하였다. 혈장은 5,000 rpm, 10분간 원심분리를 하여 획득하였으며, 시험에 적용하기 전까지 -70 ℃에 보관하였다. 분석에 사용한 HPLC 조건으로 이동상은 아세토니트릴 (acetonitile) : 1% 아세트산이 포함된 0.5% 트리에틸라민 triethylamine) 혼액을 ENR과 TMP에서 각각 11:89와 9:91의 비율로 사용하였으며, 유속은 각각 1.6 ml/분 및 1.5 ml/분이었다. 컬럼은 HP ODS hypersil을 사용하였으며, 검출 파장은 각각 280과 270 nm이었다. 보관 중인 50 μl의 혈장 시료는 실온에 방치하여 녹인 후 50 μl의 20% 트리클로로아세틱 산(trichloroacetic acid)을 첨가하여 전처리하였다. 그 후 상층액 30 μl을 필터링(0.45 μm)을 하여 HPLC 시스템에 주입하여 얻어진 크로마토그램으로부터 피크면적비를 구하여, 미리 작성한 검량선으로부터 혈장 중의 ENR과 TMP의 농도를 구하였다. 도 1은 위에서 설명한 약동학 시험을 위한 시료 준비 및 전처리 과정이다. 도 1의 명시된 시험에 의해 얻어진 결과를 토대로, 약동학 지표-소실반감기(T1 /2 β), 혈중농도곡선하면적(AUC0 -∞, area under the concentration-time curve), 최고농도(Cmax) 등이 계산되었으며, WinNonlin 프로그램의 비-구획 모델 (non-compartment model)과 1-구획 모델을 이용하였다.
아래 그래프 3에서 A는 ENR 단일투여군(ENR, -○-)과 병용투여군 (ET37, -●-)에서의 혈장 내 ENR의 농도를 나타낸 것이며, B는 TMP 단일투여군(TMP, -○-)과 병용투여군 (ET37, -●-)에서의 혈장 내 TMP의 농도를 나타낸 것이다. 그래프 3에서 알 수 있듯이, 항생제 투여 후 15분에서 6시간까지 병용 투여군에서의 혈장 내 ENR의 농도는 ENR 단일투여군보다 높았으며, 혈장 내 TMP의 농도에 관하여서는 항생제 투여 후 6분에서 2시간까지 병용투여군이 TMP 단일투여군에 비해 높았다.
Figure pat00007

아래 표 4는 ENR과 TMP 단독투여군과 병용투여군(ET37)의 약동학적 지표를 나타낸 것이다. 표 4를 바탕으로, 병용투여군에서의 혈장 내 ENR과 TMP의 최고농도(Cmax)에 대한 비율을 계산해 본 결과, 약 1:1.24가 되고, 이것은 ENR 50% +TMP 50% (E50+T50)일 때의 1:1 그리고 ENR 40%+TMP 60% (E40+T60)일 때의 1:1.5 사이의 값이 되므로, 본 ET37은 생체에 투여하였을 경우에도 강력한 상승작용을 나타내는 비율로 작용함을 알 수 있었다.
Figure pat00008

Claims (6)

  1. 엔로프록사신(enrofloxacin)과 트리메토프림(trimethoprim)가 혼합된 것을 특징으로 하는 동물용 복합 항생제 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    엔로프록사신과 트리메토프림의 혼합비는 3:7~7:3의 중량비인 것을 특징으로 하는 동물용 복합항생제 조성물.
  3. 제2항에 있어서,
    엔로프록사신과 트리메토프림의 혼합비는 3:7의 중량비인 것을 특징으로 하는 동물용 복합항생제 조성물.
  4. 제1항 내지 제3항의 어느 한 항에 있어서,
    상기 복합항생제 조성물은 사료첨가제, 경구투여제, 주사제 중 어느 하나인 것을 특징으로 하는 동물용 복합항생제 조성물.
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 동물용 복합항생제를 이용하여 동물의 세균감염증을 치료/예방하는 방법.
  6. 제5항에 있어서,
    상기 동물은 닭, 돼지, 소, 말, 개, 오리, 산양 및 면양으로 구성된 가축과; 송어, 잉어 및 뱀장어로 구성된 담수어류와; 광어, 우럭, 도미 및 새우로 구성된 해수어류 중에서 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 동물의 세균감염증 치료/예방 방법.
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