KR20120117995A - 강화된 효소 활성을 갖는 효소적 창상 괴사조직제거 조성물 - Google Patents

강화된 효소 활성을 갖는 효소적 창상 괴사조직제거 조성물 Download PDF

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KR20120117995A
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알렉사 조바노빅
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Abstract

본 발명은 강화된 효소 활성을 갖는 국소적 효소 창상 괴사조직제거 조성물에 관한 것이다. 이러한 조성물은 적어도 하나의 단백질분해 효소 및 적어도 하나의 친수성 폴리올을 포함하는 분산상; 및 소수성 기질을 포함하는 연속상을 포함한다.

Description

강화된 효소 활성을 갖는 효소적 창상 괴사조직제거 조성물 {ENZYMATIC WOUND DEBRIDING COMPOSITIONS WITH ENHANCED ENZYMATIC ACTIVITY}
관련 출원의 상호 참조
본 출원은 2009년 12월 8일자 출원된 U.S. 가출원 제61/267,730호의 이익을 주장한다. 상기 출원의 전체 개시내용은 참조로서 본 출원에 통합된다.
발명의 분야
본 발명은 일반적으로 국소적 효소 창상 괴사조직제거 조성물 및 괴사조직제거가 필요한 창상을 치료하기 위한 방법에 관한 것이다.
배경기술
창상(wound)의 회복은 복잡한 과정으로, 대부분 창상 영역 내의 비-생존성(non-viable), 괴사 조직의 존재에 의해 더욱 악화된다. 괴사조직제거는 창상으로부터 비-생존성 조직을 제거함으로써 감염을 예방하거나 감소시키고 회복을 촉진시키기 위한 과정이다. 트립신, 파파인, 브로멜라인, 서브틸리신, 수틸라인스, 및 콜라게나제와 같은 단백질분해 효소를 함유하는 국소 조성물이 효소적 창상 괴사조직제거에 사용되어 왔다. 일반적으로, 치료 기준은 상기 조성물을 하루에 한번 (24시간 마다 한번) 또는 상기 조성물이 고형화된 경우에는 더 자주 괴사조직제거가 필요한 창상에 도포하는 것이다. 많은 단백질분해 효소가 수-기재 조성물 내에서 쉽게 분해되는 경향이 있으므로, 많은 창상 괴사조직제거 조성물은 무수의, 소수성 기질, 예를 들면 US 3,821,364 및 US 6,479,060에 개시되어 있는 페트로라텀, 광물성 오일 및/또는 식물성 오일로 제조되는바, 여기서 상기 문헌은 참조로서 본 명세서에 통합된다. 그러나, 소수성 기질을 기재로 하는 효소적 창상 괴사조직제거 조성물은 일반적으로 창상 베드의 수용액 환경에서 혼화되지 않으므로, 창상 베드와 단백질분해 효소의 접촉이 일반적으로 방해받는다. 일부 다른 조성물은 무수의, 친수성 기질, 예를 들면 US 6,548,556, US 2003/0198631 및 US 2003/0198632에 개시되어 있는 프로필렌 글리콜 또는 폴록사머로 만들어지는바, 여기서 상기 문헌은 참조로서 본 명세서에 통합된다.
본 발명은 강화된 효소 활성을 갖는 국소적 효소 창상 괴사조직제거 조성물에 관한 것이다. 이러한 조성물은 적어도 하나의 단백질분해 효소 및 적어도 하나의 친수성 폴리올을 포함하는 분산상; 및 소수성 기질을 포함하는 연속상을 포함한다. 본 발명의 창상 괴사조직제거 조성물은 종래 기술의 창상 괴사조직제거 조성물 보다 강화된 효소 활성을 가진다.
본 발명의 일 측면에서, 액체 친수성 폴리올 및 적어도 하나의 단백질분해 효소를 포함하는 분산상; 및 소수성 기질을 포함하는 연속상을 포함하는 창상 괴사조직제거 조성물이 개시되는바; 여기서 상기 액체 친수성 폴리올의 양은 액체 친수성 폴리올의 최적량의 ± 10% w/w 이내이다. 예를 들면, 상기 최적량이 약 30% w/w인 경우, 제제의 강화된 효소 활성을 달성하기 위하여 사용될 수 있는 액체 친수성 폴리올의 양은 최종 제제의 약 20% w/w 내지 약 40% w/w 일 것이다. 다른 측면에서, 액체 친수성 폴리올의 양은 액체 친수성 폴리올의 최적량의 ± 9%, 8%, 7%, 또는 6% w/w 이내이다. 여전히 다른 측면에서, 액체 친수성 폴리올의 양은 액체 친수성 폴리올의 최적량의 ± 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 또는 0.1% w/w 이내이다.
(a) 액체 친수성 폴리올 및 적어도 하나의 단백질분해 효소를 포함하는 분산상; 및 (b) 소수성 기질을 포함하는 연속상을 포함하는 조성물에서 "액체 친수성 폴리올의 최적량"은 참조로서 본 절에 통합되는, 본 명세서의 발명의 상세한 설명의 A절에 기술된 방법에 의해 측정될 수 있다.
조성물이 액체 친수성 폴리올의 최적량의 + 10% w/w 이내인지 여부를 측정하기 위한 방법은 참조로서 통합되는, 본 명세서의 발명의 상세한 설명의 B절에 기술되어 있다.
다른 단백질분해 효소를 갖는 조성물을 위한 조성물 내의 액체 친수성 폴리올의 최적량은 달라질 수 있다. 부가적으로, 특정 단백질분해 효소를 갖는 조성물을 위한 액체 친수성 폴리올의 최적량은 조성물의 성분에 따라 달라질 수 있다. 예를 들면, PEG-400 및 페트로라텀을 함유하는 콜라게나제 조성물 내의 액체 친수성 폴리올의 최적량은 PEG-600 및 페트로라텀을 함유하는 콜라게나제 조성물 내의 액체 친수성 폴리올의 최적량과 다르거나, 폴록사머-124 및 페트로라텀를 함유하는 콜라게나제 조성물과 다를 수 있다.
용어 "친수성 폴리올"은 적어도 2개의 히드록실기를 갖는 수-용성, 극성 지방족 알코올을 의미하는 것으로, 중합성 폴리올 (예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜 및 폴록사머)를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
"친수성 폴리올", "폴리에틸렌 글리콜", 또는 "폴록사머"를 설명하는 경우 용어 "액체"는 25℃에서 액체 상태로 존재하는 물질을 의미한다.
"친수성 폴리올", "폴리에틸렌 글리콜", 또는 "폴록사머"을 설명하는 경우 용어 "고체"는 25℃에서 고체 상태로 존재하는 물질을 의미한다.
본 발명의 다른 측면에서, 괴사조직제거가 필요한 창상을 치료하기 위한 방법이 개시되는바, 상기 방법은: 액체 친수성 폴리올, 및 적어도 하나의 단백질분해 효소의 유효한 괴사조직제거 농도를 포함하는 분산상; 및 소수성 기질을 포함하는 연속상을 포함하는 조성물을 창상에 도포하는 단계를 포함하고; 여기서 상기 액체 친수성 폴리올의 양은 최적량의 ± 10% w/w 이내이다. 다른 측면에서, 상기 액체 친수성 폴리올의 양은 최적량의 ± 9%, 8%, 7%, 또는 6% w/w 이내이다. 여전히 다른 측면에서, 상기 액체 친수성 폴리올의 양은 최적량의 ± 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 또는 0.1% w/w 이내이다.
일부 구현예에서, 상기 단백질분해 효소는 메탈로프로테아제, 시스테인 프로테아제, 세린 프로테아제, 또는 아스팔트산 펩티다아제이다. 일반적으로, 메탈로프로테아제, 시스테인 프로테아제 또는 세린 프로테아제를 포함하는 조성물에서 친수성 폴리올의 최적량은 약 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39% w/w 내지 약 40% w/w, 또는 임의의 범위 또는 상기에서 유추가능한 수치량이다. 아스팔트산 펩티다아제를 포함하는 조성물에서 친수성 폴리올의 최적량은 약 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61 %, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67% w/w 내지 약 68% w/w 또는 임의의 범위 또는 상기에서 유추가능한 수치량이다. 일 구현예에서, 상기 메탈로프로테아제는 콜라게나제이다. 다른 구현예에서, 상기 메탈로프로테아제는 콜라게나제이고, 상기 친수성 폴리올의 최적량은 약 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39% w/w 내지 약 40% w/w 또는 임의의 범위 또는 상기에서 유추가능한 수치량이다. 일 구현예에서, 상기 메탈로프로테아제는 설모리신(thermolysin)이다. 다른 구현예에서, 상기 메탈로프로테아제는 설모리신이고, 상기 친수성 폴리올의 최적량은 약 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38% w/w 내지 약 39% w/w 또는 임의의 범위 또는 상기에서 유추가능한 수치량이다. 일 구현예에서, 상기 시스테인 프로테아제는 파파인이다. 다른 구현예에서, 상기 시스테인 프로테아제는 파파인이고, 상기 친수성 폴리올의 최적량은 약 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38% w/w 내지 약 39% w/w 또는 임의의 범위 또는 상기에서 유추가능한 수치량이다. 일 구현예에서, 상기 세린 프로테아제는 트립신이다. 다른 구현예에서, 상기 세린 프로테아제는 트립신이고, 상기 친수성 폴리올의 최적량은 약 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16% 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23% w/w 내지 약 24% w/w 또는 임의의 범위 또는 상기에서 유추가능한 수치량이다. 일 구현예에서, 상기 아스팔트산 펩티다아제는 펩신이다. 다른 구현예에서, 상기 아스팔트산 펩티다아제는 펩틴이고, 상기 친수성 폴리올의 최적량은 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67% w/w 내지 약 68% w/w 또는 임의의 범위 또는 상기에서 유추가능한 수치량이다. 일부 구현예에서, 상기 단백질분해 효소는 분산상에 부유된다. 다른 구현예에서, 상기 단백질분해 효소는 분산상에서 용해된다.
일부 구현예에서, 상기 액체 친수성 폴리올은 액체 폴리에틸렌 글리콜 또는 액체 폴록사머, 또는 그것의 혼합물이다.
본 발명의 일부 구현예에서, 상기 분산상은 상기 조성물을 물리적으로 안정화시키고 상 분리를 경감시키거나 예방하기 위하여 고체 친수성 폴리올을 추가로 포함할 수도 있다. 일부 구현예에서, 상기 고체 친수성 폴리올은 고체 폴록사머, 또는 고체 폴리에틸렌 글리콜, 또는 그것의 혼합물이다.
본 발명의 다양한 구현예에서, 상기 소수성 기질은 페트로라텀, 광물성 오일, 또는 식물성 오일, 또는 그것의 혼합물을 포함한다. 일 구현예에서, 상기 기질은 페트로라텀을 포함한다. 다른 구현예에서, 상기 소수성 기질은 식물성 오일을 포함한다. 여전히 다른 구현예에서, 상기 소수성 기질은 광물성 오일을 포함한다. 추가의 구현예에서, 상기 소수성 기질은 페트로라텀 및 광물성 오일, 페트로라텀 및 식물성 오일, 광물성 오일 및 식물성 오일, 또는 페트로라텀, 광물성 오일, 및 식물성 오일을 포함한다. 여전히 다른 구현예에서, 상기 소수성 기질 식물성 오일을 포함하는 것으로, 여기서 상기 식물성 오일은 캐스터 오일이다.
일 구현예에서, 상기 조성물은 반고체이다. 다른 구현예에서, 상기 조성물은 액체이다. 또 다른 구현예에서, 상기 조성물은 패드, 거즈, 또는 스폰지 상에 함침된다. 일 구현예에서, 상기 조성물은 살균되거나 무수화되거나 또는 살균 및 무수화된다.
상기 조성물은 창상 데브라이더(debrider)를 제조하기에 적합한 임의의 패키지로 포장될 수 있다. 상기 조성물은 다-용도, 단일-용량, 또는 정량화된 용량 패키지로 포장될 수 있다. 비-제한적 예로는 튜브, 병, 단지, 펌프 용기, 압축 용기, 에어로졸 용기, 에어로졸 스프레이 용기, 비-에어로졸 스프레이 용기, 주사기, 파우치, 또는 주머니를 포함한다.
본 발명의 다른 구현예에서, 단백질분해 효소를 포함하는 분산상 및 소수성 기질을 포함하는 연속상을 포함하는 표적 조성물에 첨가하기 위한 액체 친수성 폴리올의 최적량을 측정하는 방법이 개시되는바, 상기 방법은: (1) 분산상 및 연속상을 포함하는 일련의 조성물을 얻는 단계, 여기서 상기 분산상은 액체 친수성 폴리올을 추가로 포함하고, 그리고 여기서 상기 일련의 조성물 내의 각각의 조성물은 동일한 양의 단백질분해 효소 및 다른 양의 액체 친수성 폴리올을 포함하고; (2) 일련의 조성물 내의 각각의 조성물에 대한 효소 활성을 측정하는 단계; (3) 일련의 조성물 중 각각의 조성물 내에 포함된 액체 친수성 폴리올(들)의 양에 대한 효소 활성을 플롯팅하는 그래프 상의 최고점을 측정하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 그래프 상의 최고점은 표적 조성물에 첨가하기 위한 액체 친수성 폴리올의 최적량과 관련이 있다. 일 측면에서, 일련의 조성물의 효소 활성은 본 명세서에 기술된 인-비트로(in-vitro) 인공 괴사딱지(eschar) 실험 모델을 사용함으로써 측정될 수 있다.
본 발명의 추가적 측면에서, 단백질분해 효소를 포함하는 분산상 및 소수성 기질을 포함하는 연속상을 포함하는 표적 조성물 내의 효소 활성을 증가시키는 방법이 개시되는바, 상기 방법은: (1) 분산상 및 연속상을 포함하는 일련의 조성물을 얻는 단계, 여기서 상기 분산상은 액체 친수성 폴리올을 추가로 포함하고, 그리고 여기서 일련의 조성물 내의 각각의 조성물은 동일한 양의 단백질분해 효소 및 다른 양의 액체 친수성 폴리올을 포함하고; (2) 일련의 조성물 내의 각각의 조성물에 대한 효소 활성을 측정하는 단계; (3) 일련의 조성물의 각각의 조성물 내에 포함된 액체 친수성 폴리올(들)의 양에 대한 효소 활성을 플롯팅하는 그래프 상의 최고점을 측정하는 단계, 여기서 상기 그래프 상의 최고점은 표적 조성물에 첨가하기 위한 액체 친수성 폴리올의 최적량과 관련이 있고, 및 (4) 액체 친수성 폴리올의 최적량의 + 10% w/w를 상기 표적 조성물에 첨가하는 단계를 포함하는 것에 의해, 상기 표적 조성물 내의 효소 활성을 증가시킨다. 일 측면에서, 일련의 조성물에 대한 효소 활성은 본 명세서에 기술된 인-비트로 인공 괴사딱지 실험 모델을 사용함으로써 측정될 수 있다.
일련의 조성물 내의 폴리올의 양은 각각의 조성물에 따라 무작위로 또는 사용량에 의해 달라질 수 있다. 일 구현예에서, 일련의 조성물의 각각의 조성물 내의 폴리올의 양은 상기 조성물의 중량 또는 부피를 기준으로, 0%, 0.1%, 0.2%, 0.3%, 0.4%, 0.5%, 0.6%, 0.7%, 0.8%, 0.9%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.1%, 99.2%, 99.3%, 99.4%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 또는 100% 일 수 있다.
용어 "무수(anhydrous)"는 전체 조성물에 대하여 약 5% w/w 미만, 또는 약 3% w/w 미만, 또는 약 1% w/w 미만, 또는 약 0.5% w/w 미만, 또는 약 0.1% w/w 미만, 또는 조성물의 임의의 원료 성분에 존재하는 수화수, 결합수, 또는 전형적인 습도 수준을 셀 수 없는 자유 또는 첨가수의 0%를 함유하는 조성물을 의미한다.
달리 설명되어 있지 않으면, 본 명세서에서 표현된 백분율 수치는 중량 대 중량을 나타낸 것으로, 전체 조성물과 관련되어 있다.
단어 "일(a)" 또는 "일(an)"의 사용은 청구항 및/또는 명세서 내의 용어 "포함하는(comprising)" 또는 "함유하는(containing)"과 함께 사용되는 경우, "하나(one)"을 의미할 수도 있으나, 또한 "일 또는 그 이상(one or more)", "적어도 하나의(at least one)", 및 "일 또는 일 이상의(one or more than one)"의 의미와 일치한다.
본 출원서 전체에서, 용어 "약(about)"은 수치가 수치를 얻는 장치에서 오차의 고유 변수를 포함함을 나타내기 위해 사용되는 것으로, 상기 방법은 수치, 또는 평가된 목적물의 범위 사이에 존재하는 오차를 측정하기 위해 사용된다.
명세서 및 청구항(들)에서 사용된, 단어 "포함하는(comprising)" (및 "포함하다(comprise)" 및 "포함하다(comprises)"와 같은, 포함하는의 임의의 형태), "가지는(having)" (및 "가지다(have)" 및 "가지다(has)"와 같은, 가지는의 임의의 형태), "포함하는(including)" (및 "포함하다(includes)" 및 "포함하다(include)와 같은, 포함하는의 임의의 형태), 또는 "함유하는(containing)" (및 "함유하다(contains)" 및 "함유하다(contain)"와 같은, 함유하는의 임의의 형태)는 포괄적이거나 제한이 없으며 부가적이고, 비인용된 성분들 또는 방법 단계들을 배제하지 않는다.
용어 "치료하는(treating)," "억제하는(inhibiting)," "예방하는(preventing), 또는 "경감시키는(reducing)" 또는 상기 용어들의 임의의 변형은 청구항 및/또는 상세한 설명에서 사용되는 경우, 원하는 결과를 달성하기 위하여 임의의 측정가능한 감소 또는 완전한 억제를 포함한다.
용어 "유효한(effective)"은 상기 용어가 명세서 및/또는 청구항에서 사용되는 경우, 원하거나, 예상하거나, 또는 의도하는 결과를 달성하기에 충분함을 의미한다.
상기 조성물 및 그들의 사용을 위한 방법은 명세서 전체에 개시된 성분 또는 단계를 "포함하거나", "상기로 필수적으로 이루어지거나" 또는 "상기 중 어느 하나로 이루어질 수 있다". 전환하는 문구 "로 필수적으로 이루어지는" 및 하나의 비-제한적 측면에서와 관련하여, 본 명세서에 개시된 조성물 및 방법의 기본적이고 신규한 특징들은 조성물의 강화된 효소 활성을 포함한다.
본 발명의 다른 목적, 특징 및 이점들은 하기의 상세한 설명으로부터 명백할 것이다. 그러나, 본 발명의 정신 및 범위 내에서의 다양한 변형 및 변경이 발명의 상세한 설명으로부터 당해 기술분야에 통상의 지식을 가진 자들에게 명백하기 때문에, 본 발명의 특정 구현예를 나타내고 있는, 발명의 상세한 설명 및 특정 실시예는 예시하기 위하여 제공된 것으로 이해되어야 한다.
도 1은 일련의 조성물 내에 포함된 PEG-400의 백분률 (x-축)에 대한 화이트 페트로라텀 (y-축)을 포함하는 소수성 상에 분산된, 콜라게나제 및 PEG-400을 포함하는 분산상을 포함하는 일련의 조성물의 인-비트로 콜라겐분화 활성(mg/ml)의 플롯이다.
도 2는 일련의 조성물 (x-축) 내에 포함된 PEG-600의 백분율에 대한 화이트 페트로라텀 (y-축)을 포함하는 소수성 상에 분산된, 콜라게나제 및 PEG-600을 포함하는 분산상을 포함하는 일련의 조성물의 인-비트로 콜라겐분해 활성(mg/ml)에 대한 플롯이다.
도 3은 일련의 조성물 내에 포함된 폴록사머-124의 백분율에 대한 (x-축) 화이트 페트로라텀 (y-축)을 포함하는 소수성 상에 분산된, 콜라게나제 및 폴록사머-124를 포함하는 분산상을 포함하는 일련의 조성물의 인-비트로 콜라겐분해 활성(mg/ml)에 대한 플롯이다.
도 4는 일련의 조성물 내에 포함된 PEG-400의 백분율에 대한 (x-축) 화이트 페트로라텀 (y-축)을 포함하는 소수성 상에 분산된, 트립신 및 PEG-400을 포함하는 분산상을 포함하는 일련의 조성물의 인-비트로 콜라겐분해 활성(mg/ml)에 대한 플롯이다.
도 5는 일련의 조성물 내에 포함된 PEG-400의 백분율에 대한 (x-축) 화이트 페트로라텀 (y-축)을 포함하는 소수성 상에 분산된, 파파인 및 PEG-400을 포함하는 분산상을 포함하는 일련의 조성물의 인-비트로 콜라겐분해 활성(mg/ml)에 대한 플롯이다.
도 6은 일련의 조성물 내에 포함된 PEG-400의 백분율에 대한 (x-축) 화이트 페트로라텀 (y-축)을 포함하는 소수성 상에 분산된, 설모리신 및 PEG-400을 포함하는 분산상을 포함하는 일련의 조성물의 인-비트로 콜라겐분해 활성(mg/ml)에 대한 플롯이다.
도 7은 일련의 조성물 내에 포함된 PEG-400의 백분율에 대한 (x-축) 화이트 페트로라텀 (y-축)을 포함하는 소수성 상에 분산된, 펩신 및 PEG-400을 포함하는 분산상을 포함하는 일련의 조성물의 인-비트로 콜라겐분해 활성(mg/ml)에 대한 플롯이다.
도 8은 일련의 조성물 내에 포함된 PEG-400의 백분율에 대한 (x-축) 화이트 페트로라텀 (y-축)을 포함하는 소수성 상에 분산된, 콜라게나제 및 PEG-400을 포함하는 분산상을 포함하는 일련의 콜라게나제의 물리적 방출 (mg)에 대한 플롯이다.
도 9는 물-내-오일 에멀젼 크림과 비교한 화이트 페트로라텀-내-PEG 내의 효소 안정성을 나타낸다.
도 10은 돼지 화상 창상 내에서의 괴사딱지 제거의 괴사조직제서 효능을 나타낸다.
발명의 상세한 설명
본 발명의 일 측면은 향상된 효소 활성을 갖는 국소적 효소 창상 괴사조직제거 조성물을 제공하기 위한 것이다. 상기 조성물은 적어도 하나의 단백질분해 효소 및 친수성 폴리올을 포함하는 분산상; 및 소수성 기질을 포함하는 연속상을 포함한다. 본 발명의 일 측면에서, 상기 친수성 폴리올은 액체 친수성 폴리올이다.
소수성 기질 내의 친수성 폴리올 및 단백질분해 효소의 분산체가 존재하는, 본 발명의 조성물의 효소 활성 (예를 들면, 인 비트로 콜라겐분해)은 단백질분해 효소 및 소수성 기질 조합 만을 기재로 하는 효소 조성물 (즉, 친수성 폴리올과 같은 친수성 상이 없음)의 효소 활성 보다 높을 뿐만 아니라, 단백질분해 효소 및 친수성 기질 조합 만을 기재로 하는 효소 조성물 (즉, 페트로라텀과 같은 소수성 상이 없음) 보다 놀랄 만큼 높다. 효소가 수분의 존재 하에 활성화되기 때문에, 단백질분해 효소 및 친수성 기질 조합 만을 기재로 하는 조성물에서 최고의 효소 활성을 나타낼 것이 예견되는바, 여기서 상기 기재는 수분의 존재시 완전히 혼화되고, 상태는 효소의 방출 및 활성화에 가장 바람직할 것이다. 그러나, 본 발명의 친수성 및 소수성 상의 분산 조성물은 상기 조성물 내의 친수성 폴리올의 0% 초과 및 100% 미만의 양으로 존재하는 친수성 폴리올의 최적량과 관련있는 최고의 효소 활성을 가진다.
예상한 바와 같이, 친수성 운반체 만을 기재로 하는 조성물 내의 물리적 효소 방출은 소수성 운반체 만을 기재로 하는 조성물 내의 효소 방출 보다 더 크고, 또한 본 발명의 조성물 보다 더 크다는 것이 발견되었다. 도 8에서 알 수 있듯이, 효소 방출 프로파일은 일반적으로, 100%를 최고 방출 및 0%를 최저 방출로 하면, 친수성 폴리올 (PEG-400)의 백분률 증가와 함께 증가된다. 그러나, 놀랍게도, 상기 효소 활성은 본 발명의 분산 조성물에 따라 증가한다 (도 1-7 참고). 따라서, 이러한 분산 조성물의 효소 활성 프로파일은 예견되는 물리적 효소 방출 프로파일과 관련이 없다.
본 발명의 조성물은 친수성 폴리올, 및 유효한 괴사조직제거 농도의 적어도 하나의 단백질분해 효소를 포함하는 분산상; 및 소수성 기질을 포함하는 연속상을 포함하는 조성물을 창상에 도표하는 것에 의해 괴사조직제거가 필요한 창상의 치료에 적합한 것으로, 여기서 상기 친수성 폴리올의 양은 친수성 폴리올의 최적량의 ± 10% w/w, 또는 최적량의 ± 9%, 8%, 7%, 또는 6% w/w, 또는 최적량의 ± 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 또는 0.1% w/w 이내이다.
본 발명의 상기의 비-제한적 측면들은 하기의 절에서 더욱 상세히 설명된다.
A. 액체 친수성 폴리올의 최적량을 측정하기 위한 방법
하기의 포로토콜이 일련의 조성물 ("조성물 시리즈"로도 언급됨)을 제조하고, 그 다음 본 발명의 분산체에서 사용될 수 있는 액체 친수성 폴리올의 최적량을 측정하기 위해 사용될 수 있다:
열한 개 (11)의 조성물이 조성물 시리즈를 생성하기 위하여 사용될 수 있다.
일련의 조성물 내의 단백질분해 효소의 양 (% w/w)은 일정하게 유지됨을 주목하여야 한다. 하기의 단계들이 열한개 (11)의 조성물을 제조하기 위하여 사용될 수 있다:
(i) 조성물 시리즈에서 사용될 성분 (즉, 액체 친수성 폴리올, 단백질분해 효소, 및 소수성 기질)을 결정하고 사용될 단백질분해 효소의 양을 선택한다. 예로서, 액체 친수성 폴리올 (예를 들면, PEG 400), 단백질분해 효소 (예를 들면, 콜라게나제 1% w/w), 및 소수성 기질 (예를 들면, 화이트 페트로라텀).
(ii) 조성물 시리즈에서 조성물 1의 경우, 0%의 액체 친수성 폴리올을 사용하고, 선택량의 단백질분해 효소를 사용하고, 그리고 충분한 양의 소수성 기질로 배치가 100% 되도록 만든다. 예로서, 상기 단계 (i)을 참고하면, 조성물 시리즈 내의 조성물 1은: 0 % w/w PEG 400, 99% w/w 화이트 페트로라텀, 및 1 % w/w 콜라게나제을 가질 것이다.
(iii) 조성물 시리즈에서 조성물 2의 경우, 10% w/w의 액체 친수성 폴리올, 및 동일한 양의 단백질분해 효소를 사용하고, 충분한 양의 소수성 기질로 배치가 100% 되도록 만든다. (물리적으로 안정하게 분산된 조성물 시리즈 내의 조성물을 제조하기 위하여, 필요한 경우 액체 친수성 폴리올 대신 고체 친수성 폴리올을 사용하는 것이 가능함을 주목하여야 한다).
(iv) 조성물 시리즈에서 조성물 3의 경우, 20% w/w의 액체 친수성 폴리올, 및 동일한 양의 단백질분해 효소를 사용하고, 충분한 양의 소수성 기질로 배치가 100% 되도록 만든다.
(v) 조성물 시리즈에서 조성물이 4의 경우, 30% w/w의 액체 친수성 폴리올, 및 동일한 양의 단백질분해 효소를 사용하고, 충분한 양의 소수성 기질로 배치가 100% 되도록 만든다.
(vi) 조성물 시리즈에서 조성물 5의 경우, 40% w/w의 액체 친수성 폴리올, 및 동일한 양의 단백질분해 효소를 사용하고, 충분한 양의 소수성 기질로 배치가 100% 되도록 만든다.
(vii) 조성물 시리즈에서 조성물 6의 경우, 50% w/w의 액체 친수성 폴리올, 및 동일한 양의 단백질분해 효소를 사용하고, 충분한 양의 소수성 기질로 배치가 100% 되도록 만든다.
(viii) 조성물 시리즈에서 조성물 7의 경우, 60% w/w의 액체 친수성 폴리올, 및 동일한 양의 단백질분해 효소를 사용하고, 충분한 양의 소수성 기질로 배치가 100% 되도록 만든다.
(ix) 조성물 시리즈에서 조성물 8의 경우, 70% w/w의 액체 친수성 폴리올, 및 동일한 양의 단백질분해 효소를 사용하고, 충분한 양의 소수성 기질로 배치가 100% 되도록 만든다.
(x) 조성물 시리즈에서 조성물 9의 경우, 80% w/w의 액체 친수성 폴리올, 및 동일한 양의 단백질분해 효소를 사용하고, 충분한 양의 소수성 기질로 배치가 100% 되도록 만든다.
(xi) 조성물 시리즈에서 조성물 10의 경우, 90% w/w의 액체 친수성 폴리올, 및 동일한 양의 단백질분해 효소를 사용하고, 충분한 양의 소수성 기질로 배치가 100% 되도록 만든다.
(xii) 조성물 시리즈에서 조성물 11의 경우, 0%의 소수성 기질, 동일한 양의 단백질분해 효소를 사용하고, 충분한 양의 소수성 기질로 배치가 100% 되도록 만든다.
(xiii) 하기의 샘플 수거 시간: 6, 12, 18 및 24 시간 동안 인 비트로 인공 괴사딱지 실험 모델을 사용하는 것에 의해, 본 명세서의 발명의 상세한 설명 부분의 H절 기술된 바와 같이, 조성물 시리즈 내의 11개의 조성물 각각의 효소 활성을 측정한다.
(ivx) 각각의 수거 시간 데이타에 누적하여 조성물 시리즈의 각각의 조성물 내에 존재하는 관련량의 액체 친수성 폴리올(들)에 대한 각각의 조성물의 효소 활성 곡선을 플롯팅한다. 누적 24-시간 데이타 수거 시간에 대한 곡선에서의 최고점은 분산에 사용될 수 있는 액체 친수성 폴리올의 최적량과 관련있다.
또한, 다수의 성분들이 조성물 시리즈 내에 포함되는 경우 (예를 들면, 분산상 내의 폴리올(들) 단백질분해 효소(들), 소수성 기질, 및 부가적 성분들, 및/또는 연속 소수성 상 내의 부가적 성분들), 조성물 시리즈는 (1) 시리즈 내의 각각의 조성물에서 상기 기술된 친수성 폴리올의 양을 다르게하고, (2) 단백질 분해효소의 측정된 양을 사용하고. 그리고 (3) 소수성 기질을 포함하는 소정의 부가적인 성분들로 배치를 100%로 조절하는 것에 의해 형성될 수 있고; 조성물 11을 제외하고는, 여기서 상기 배치는 친수성 폴리올을 포함하는 소정의 부가적인 성분들로 100%까지 조절될 것이다.
B. 조성물이 액체 친수성 폴리올의 최적량의 +/- 10% w/w를 가지는지 여부를 측정하는 방법
(a) 액체 친수성 폴리올 및 적어도 하나의 단백질분해 효소를 포함하는 분산상; 및 (b) 소수성 기질을 포함하는 연속상을 포함하는 조성물 (이하, "관심 조성물"이라 함)이 액체 친수성 폴리올의 최적량의 ± 10% 이내인 경우, 하기의 프로토콜을 사용하는 것에 의해 측정될 수 있다:
단계 1: (i) 액체 친수성 폴리올(들) 및 단백질분해 효소를 포함하는 분산상 및 (ii) 소수성 기질을 포함하는 연속상을 포함하는 관심 조성물을 얻는다.
단계 2: 목적 조성물을 기재로 하는 일련의 조성물 (이하, "조성물 시리즈"라고도 함)을 제조한다. 조성물 시리즈 내의 단백질분해 효소의 양 (% w/w)은 일정하게 유지되는 것으로, 목적 조성물 내에 존재하는 양 (% w/w)과 동일하다. 하기의 단계들이 조성물 시리즈의 제조에 사용될 수 있다:
(i) 목적 조성물 내의 모든 성분들의 양 (% w/w)을 결정하는 단계.
(ii) 목적 조성물 내의 연속상의 전체양 (% w/w)을 측정하는 단계. 예로서, 목적 조성물이 15% w/w 액체 친수성 폴리올 (예를 들면, PEG 400), 1% w/w 단백질분해 효소 (예를 들면, 콜라게나제), 및 84% w/w 소수성 기질 (예를 들면, 화이트 페트로라텀)을 포함하는 경우, 상기 목적 조성물은 84% w/w 연속상 및 16 %w/w 분산상일 것이다.
단계 3: 본 명세서의 A절에 기술되어 있는 방법으로 조성물 시리즈를 제조한다 (예를 들면, 상기는 본 명세서의 A절에 기술되어 있는 방법으로 11개의 조성물을 제조하는 것을 포함할 것이다)
단계 4: 각각의 하기의 샘플 수거 시간: 6, 12, 18 및 24 시간에서 본 명세서의 발명의 상세한 설명 부분 중 H절에 기술되어 있는 인 비트로 인공 괴사딱지 실험 모델을 사용하는 것에 의해 조성물 시리즈 내의 11개의 조성물 각각에 대한 효소 활성을 측정한다.
단계 5: 각각의 데이타 수거 시간에서 누적된 조성물 시리즈의 각각의 조성물에 존재하는 액체 친수성 폴리올(들)의 관련 양에 대한 각각의 조성물의 효소 활성에 대한 곡선을 플롯팅한다. 상기 누적된 24-시간 데이타 수거 시간의 곡선에서의 최고점은 관심 조성물 내의 액체 친수성 폴리올의 최적량과 관련있다.
단계 6: 그것이 관심 조성물 내의 액체 친수성 폴리올의 최적량에 ± 10% w/w 내로 존재하는지 여부를 측정하기 위하여 관심 조성물 내부에 존재하는 액체 친수성 폴리올의 양을 비교한다.
C. 단백질분해 효소
창상 괴사조직제거에 유용한 단백질분해 효소가 본 발명에 적합하다. 단백질분해 효소 (프로테아제)는 단백질의 폴리펩티드 사슬 내에서 아미노산과 함께 링크되는 펩티드 결합을 가수분해함으로써 단백질을 분해한다. 그들은 촉매적 메커니즘을 바탕으로 4개의 주요 그룹: 세린 프로테아제, 시스테인 프로테아제, 메탈로프로테아제, 및 아스팔트산 프로테아제로 분류된다. 일부 프로테아제는 트레오닌 및 글루탐산과 같은, 활성 부위 내의 다른 촉매적 아미노산으로 동정되어 왔으나, 그들은 주요 그룹을 형성하지 않는다.
1. 세린 프로테아제
세린 프로테아제는 펩티드 결합을 공격하는 친핵체로 작용하는 세린 잔기의 히드록시기에 의존한다. 인간에서 발견되는 주요 그룹은 키모트립신-형, 서브틸리신-형, 알파/베타 히드롤라제, 및 시그날 펩티다아제 그룹을 포함한다. 진화론적인 역사에서, 세린 프로테아제는 원래 소화 효소였다. 포유동물에서, 그들은 혈액 응고, 면역 시스텝, 및 염증에서 작용할 수 있도록 유전자 복제에 의해 진화되었다. 이러한 프로테아제는 광범위한 기질 특이성을 가지며 광범위한 pH 범위에서 작용한다. 세린 프로테아제의 비-제한적 예로는 트립신, 키모트립신, 서브틸리신, 수틸라인스, 플라스민, 및 엘라스타제를 포함한다.
2. 시스테인 프로테아제
친핵체가 시스테인 잔기의 술피히드릴기 내의 잘라지기 쉬운 펩티드 결합을 공격하는 펩티다아제가 시스테인 프로테아제로 알려져 있다. 시스테인 프로테아제는 통상적으로 파파야, 파인애플, 및 키위와 같은 과일 내에 존재한다. 시스테인 프로테아제는 넓은 특이성을 가지며 생리적 조건 하에 널리 사용된다. 이 패밀리 중, 파파인이 오랜 시간 동안 창상 괴사조직제거를 위해 광범위하게 사용되어 왔다. 브로멜라인 및 아날라인과 같은, 다른 시스테인 프로테아제도 창상 괴사조직제거에 적용하기 위해 연구되었다. 시스테인 프로테아제의 다른 비-제한적 예로는 칼파인, 카스파세스, 키모파파인, 및 클로스트리파인을 포함한다.
3. 메탈로프로테아제
메탈로프로테아제는 일반적으로 아연을 포함하지만 때로는 코발트, 망간, 니켈 또는 구리와 같은 2가 금속 양이온이 물 분자를 활성화시키는 동안, 펩티드 결합 상의 친핵체에 부착이 물 분자에 의해 매개되는 프로테아제에 속한다. 상기 금속 이온은 활성에 매우 중요하다. 킬레이팅되거나 산화되는, 금속 이온과 반응할 가능성을 갖는 임의의 화합물이 효소 활성에 영향을 미칠 것이다. 이 패밀리 내의 메탈로프로테아제의 비-제한적 예로는 설모리신, 콜라게나제, 매트릭스 메탈로 프로테나제 (matrix metallo proteinases, MMPs), 바실로리신, 디스파제, 비브리오리신, 슈도리신, 스트로메리신, 및 다양한 박테리아 유도 중성 메탈로프로테아제를 포함한다.
4. 아스팔트산 펩티다아제
아스팔트산 펩티다아제는 아스팔트산 잔기들이 활성화된 물 분자의 리간드이기 때문에 붙여진 이름이다. 이 패밀리에 속하는 대부분의 효소에서, 아스팔트산 잔기의 쌍은 함께 촉매적 물 분자를 결합하거나 활성화시키는 역할을 한다. 모든 또는 대부분의 아스팔트산 펩티다아제는 엔도펩티다아제이다. 대부분의 아스팔트산 펩티다아제는 광범위한 특이성을 갖는다. 그러나, 대부분의 아스팔트산 펩테다아제의 적정 pH는 산성 범위 내이다. 아스팔트산 펩티다아제의 비-제한적 예로는 펩신, 키모신, 베타-시크리타제, 플라스멥신, 식물 산 프로테아제 및 레트로바이러스 프로테아제를 포함한다.
5. 콜라게나제
창상 괴사조직제거에 적합한 단백질분해 효소는 메탈로프로테아제 콜라게나제이다. 상기 콜라게나제는 실질적으로 순수하거나 다른 프로테아제의 검출가능한 수준을 함유할 수도 있다.
콜라게나제, 및 본 명세서에서 사용된 용어 "콜라게나제 단위"의 효능 검정법은 24시간 동안 pH 7.2 및 37℃에서 (소 아킬레스건)으로부터의 비변성된 콜라겐의 소화를 바탕으로 한다. 분해된 펩티드 결합의 수는 닌히드린과의 반응에 의해 측정된다. 트립신 소화 조절에 의해 방출된 아미노기는 제외된다. 하나의 네트(net) 콜라게나제 단위는 분당 루신 등가물의 1 나노몰과 동일한 양의 닌히드린 반응성 물질을 용해할 것이다.
본 발명의 조성물 내의 콜라게나제의 양 (효능 또는 농도)는 창상을 괴사조직제거하기에 유용한 수준으로 존재한다. 일반적으로, 조성물 내의 콜라게나제의 효능은 생산품 내에 사용되는 콜라게나제의 활성을 기준으로, 생산품의 그람 당 약 1 내지 약 10,000 콜라게나제로 다양할 수 있다. 다양한 구현예에서, 생산품의 그람 당 콜라게나제 단위로 표현되는, 효능은 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000, 5500, 6000, 6500, 7000, 7500, 8000, 8500, 9000, 9500 내지 약 10000, 또는 임의의 범위 또는 상기에서 유추가능한 수치량이다.
상기 조성물 내의 콜라게나제의 농도는 일반적으로 약 0.001% w/w로부터 약 8% w/w에 이르기까지 다양할 수 있다. 다양한 구현예에서, 중량%로 표현되는, 농도는 약 0.001, 0.002, 0.003, 0.004, 0.005, 0.006, 0.007, 0.008, 0.009, 0.010 0.015, 0.020, 0.025, 0.030, 0.035, 0.040, 0.050, 0.055, 0.060, 0.065, 0.070, 0.075, 0.080, 0.085, 0.090, 0.095, 0.100, 0.125, 0.150, 0.175, 0.20, 0.25, 0.30 ,0.35, 0.40, 0.45, 0.50, 0.55, 0.60, 0.65, 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 내지 약 8 또는 임의의 범위 또는 상기에서 유추가능한 수치량이다.
일 구현예에서, 상기 콜라게나제는 크로스트리디엄 히스토리티컴으로부터 유래되는 것이나, 다른 구현예서는 상기 콜라게나제가 다른 원천으로부터 유래될 수 있다. 적합한 콜라게나제를 생산하는 방법은 US 특허 제3,705,083호; 제3,821,364호; 제5,422,261호; 제5,332,503호; 제5,422,103호; 제5,514,370호; 제5,851,522호; 제5,718,897호; 및 제6,146,626호에 기술되어 있으며, 상기 모든 문헌은 참조로서 본 명세서에 통합된다.
6. 트립신
창상 괴사조직제거에 적합한 다른 단백질분해효소로는 세린 프로테아제 트립신이 있다. 통상적으로, 트립신은 건강한 소 또는 돼지 동물, 또는 소 및 돼지 동물의 췌장으로부터 유래된다. 트립신은 또한 재조합 원천으로부터 유도될 수 있다. 트립신의 약제학적 등급 (USP/NF)은 결정 트립신(Crystallized Trypsin)으로 알려져 있다. 그것은 건조 성분으로 계산된, mg 당 적어도 2500 USP 트립신 단위, 표지된 효능의 적어도 90.0% 및 110.0% 미만으로 함유된다.
트립신의 효능 검정법 뿐만 아니라 USP 트립신 단위의 정의는 참조로서 본 명세서에 통합된 USP 31의 결정 트립신 학술 논문(Official August 1 , 2008)에서 발견된다.
본 발명의 조성물 내의 트립신의 양 (효능 또는 농도)는 창상의 괴사조직제거에 유효한 수준으로 존재한다. 일반적으로, 조성물 내의 트립신의 효능은 생산품의 그람 당 약 90 내지 약 60,000 USP 트립신 단위로 다양할 수 있다. 다양한 구현예에서, 생산품의 그럼 당 USP 트립신 단위로 표현되는, 트립신의 효능은 약 90, 100, 150, 200, 250, 300, 320, 350, 375, 400, 500, 600, 675, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 10000, 20000, 30000, 40000, 50000 내지 약 60000, 또는 임의의 범위 또는 상기에서 유추가능한 수치량이다.
조성물 내의 트립신의 농도는 일반적으로 약 0.0025% w/w에서부터 약 1% w/w에 이르기까지 다양할 수 있다. 다양한 구현예에서, 중량%로 표현되는, 트립신의 농도는 약 0.0025, 0.0050, 0.010, 0.015, 0.020, 0.025, 0.030, 0.035, 0.040, 0.045, 0.050, 0.055, 0.060, 0.065, 0.070, 0.075, 0.080, 0.085, 0.090, 0.095, 0.10, 0.15, 0.20 0.25, 0.30, 0.35, 0.40, 0.45, 0.50, 0.55, 0.60, 0.65, 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95 내지 약 1, 또는 임의의 범위 또는 상기에서 유추가능한 수치량이다.
D. 친수성 폴리올
본 발명의 친수성 폴리올은 적어도 2개의 히드록실기를 갖는, 수용성, 극성 지방족 알코올로서, 중합성 폴리머, 예를 들면 폴리에틸렌 글리콜 및 폴록사머를 포함한다. 본 발명의 일 측면에서, 분산상 내의 친수성 폴리올은 액체 친수성 폴이올이다. 일부 구현예에서, 상기 액체 친수성 폴리올은 액체 폴리에틸렌 그리콜 또는 액체 플록사머, 또는 그것의 혼합물이다. 고체 폴리에틸렌 글리콜 또는 고체 폴록사머와 같은 고체 친수성 폴리올도 물리적으로 안정화된 분산을 형성하기 위하여 본 발명의 분산상에 첨가될 수 있다. 액체 친수성 폴리올의 다른 예로는 프로필렌 글리콜, 부틸렌 글리콜, 펜틸렌 글리콜, 헥실렌 글리콜, 글리세린, 헥실렌 글리콜, 메톡시 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 카보네이트, 및 에톡시디글리콜을 포함하나, 이에 제한되는 것을 아니며, 상기는 또한 분산상에 첨가될 수도 있다.
1. 폴리에틸렌 글리콜
폴리에틸렌 글리콜은 하기의 공식에 의해 표현되는 에틸렌 글리콜과 물의 동종-중합체이다.
H(OCH2CH2)nOH
상기 식에서, n은 옥시에틸렌 기의 평균 수를 나타낸다. 폴리에틸렌 글리콜은 그들의 분자량에 따라 25℃에서 액체이거나 고체일 수 있다.
액체 폴리에틸렌 글리콜의 하기의 적합한 비-제한적 예는 USP 명명법을 사용함으로써 기술된다: 폴리에틸렌 글리콜 200, 폴리에틸렌 글리콜 300, 폴리에틸렌 글리콜 400, 폴리에틸렌 글리콜 500, 및 폴리에틸렌 글리콜 600.
고체 폴리에틸렌 글리콜의 하기의 적합한 비-제한적 예가 USP 명명법을 사용함으로써 기술된다: 폴리에틸렌 글리콜 700, 폴리에틸렌 글리콜 800, 폴리에틸렌 글리콜 900, 폴리에틸렌 글리콜 1000, 폴리에틸렌 글리콜 1100, 폴리에틸렌 글리콜 1200, 폴리에틸렌 글리콜 1300, 폴리에틸렌 글리콜 1400, 폴리에틸렌 글리콜 1450, 폴리에틸렌 글리콜 1500, 폴리에틸렌 글리콜 1600, 폴리에틸렌 글리콜 1700, 폴리에틸렌 글리콜 1800, 폴리에틸렌 글리콜 1900, 폴리에틸렌 글리콜 2000, 폴리에틸렌 글리콜 2100, 폴리에틸렌 글리콜 2200, 폴리에틸렌 글리콜 2300, 폴리에틸렌 글리콜 2400, 폴리에틸렌 글리콜 2500, 폴리에틸렌 글리콜 2600, 폴리에틸렌 글리콜 2700, 폴리에틸렌 글리콜 2800, 폴리에틸렌 글리콜 2900, 폴리에틸렌 글리콜 3000, 폴리에틸렌 글리콜 3250, 폴리에틸렌 글리콜 3350, 폴리에틸렌 글리콜 3750, 폴리에틸렌 글리콜 4000, 폴리에틸렌 글리콜 4250, 폴리에틸렌 글리콜 4500, 폴리에틸렌 글리콜 4750, 폴리에틸렌 글리콜 5000, 폴리에틸렌 글리콜 5500, 폴리에틸렌 글리콜 6000, 폴리에틸렌 글리콜 6500, 폴리에틸렌 글리콜 7000, 폴리에틸렌 글리콜 7500, 및 폴리에틸렌 글리콜 8000.
상기 액체 및 고체 폴리에틸레 글리콜은 CARBOWAX™ 상표를 갖는 DOW Chemical Company 및 LUTROL® E 및 PLURACARE® E 상표를 갖는 BASF Corporation로부터 상업적으로 이용가능하다. 상기 약제학적 등급 (USP/NF) 및 화장품 등급을 갖는 폴리에틸렌 글리콜이 본 발명에 적합하다.
2. 폴록사머
폴록사머는 하기의 공식으로 표현되는 에틸렌 옥사이드와 프로필렌 옥사이드의 합성 블록 공중합체이다:
HO(C2H4O)a(C3H60)b(C2H40)aH
상기 식에서, a 및 b는 반복 단위의 수를 나타낸다. 일반적으로, 특정 플록사머에 따라, a 는 2 내지 150이고, b는 15 내지 70이다. 플록사머는 그들의 분자량에 따라 25℃에서 액체나 고체로 존재할 수 있다.
액체 폴록사머의 하기의 적합한 비-제한적 예들은 CTFA/INCI 명명법을 사용하여 기술된다: 폴록사머 101 , 폴록사머 105, 폴록사머 122, 폴록사머 123, 폴록사머 124, 폴록사머 181, 폴록사머 182, 폴록사머 183, 폴록사머 184, 폴록사머 212, 폴록사머 231, 폴록사머 282, 폴록사머 331, 폴록사머 401, 및 폴록사머 402.
고체 폴록사머의 하기의 적합한 비-제한적 예들은 CTFA/INCI 명명법을 사용하여 기술된다: 폴록사머 108, 폴록사머 188, 폴록사머 217, 폴록사머 237, 폴록사머 238, 폴록사머 288, 폴록사머 338, 폴록사머 407, 폴록사머 185, 폴록사머 215, 폴록사머 234, 폴록사머 235, 폴록사머 284, 폴록사머 333, 폴록사머 334, 폴록사머 335, 및 폴록사머 403.
상기 액체 및 고체 폴록사머는 PLURONIC® 및 LUTROL® 상표를 갖는 BASF Corporation 및 SYNPERONIC® 상표를 갖는 UNIQEMA Corporation로부터 상업적으로 이용가능하다. 약제학적 등급 (USP/NF)의 폴록사머는 폴록사머 124, 폴록사머 188, 폴록사머 237, 폴록사머 338, 및 폴록사머 407이다. 약제학적 등급 및 화장품 등급을 갖는 폴록사머가 본 발명에 적합하다.
E. 소수성 기질
본 발명의 소수성 기질은 식물, 동물, 파라핀성, 및 합성 유래 지방, 버터, 그리즈, 왁스, 용매, 및 오일; 광물성 오일, 식물성 오일, 페트로라텀, 물 불용성 유기 에스테르 및 트리글리세리드, 실리콘, 또는 플루오르화 화합물; 또는 그것의 혼합물을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 일 구현예에서, 소수성 상은 페트로라텀을 포함한다.
식물 유래 물질은 아라치스 (피넛) 오일, 발삼 페루 오일, 칼나우바 왁스, 칸델릴라 왁스, 캐트터 오일, 수소화된 캐스터 오일, 타타오 버터, 오오넛 오일, 콘 오일, 목화씨 오일, 조조바 오일, 마타다미아 씨 오일, 올리브 오일, 오랜지 오일, 오랜지 왁스, 팜 케르넬 오일, 펑지씨 오일, 홍화유, 참깨씨 오일, 시어 버터, 대두 오일, 해바라기씨유, 티 나무 오일, 식물성 오일, 및 수소화된 식물성 오일을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
동물 유래 물질의 비-제한적 예로는 벌꿀왁스, 대구간 오일, 에뮤 오일, 라드, 밍크 오일, 상어 간 오일, 스쿠알렌, 스쿠알렌, 및 양지를 포함한다.
파라핀 물질의 비-제한적 예로는 이소파라핀, 마이크로크리스탈린 왁스, 중광물 오일, 경광물 오일, 오코케리트, 페트로라텀, 및 파라핀을 포함한다.
유리 에스테르 및 트리글리서라이드의 적합한 비-제한적 예로는 C12-15 알킬 벤조에이트, 이소프로필 미리스테이트, 이소프로필 팔미테이트, 중쇄 트리글리서라이드, 트리라우린, 및 트리히드록시 트세아린을 포함한다.
실리콘의 비-제한적 예는 디메티콘 및 시클로메티콘이다. 플루오르화 화합물을 폴리테트라플루오로에틸렌 (PTFE)이다.
1. 페트로라텀
페트로라텀은 페트로리엄으로부터 수득되는 반고체 탄화수소의 정제된 혼합물로서, 어두운 호박색에서부터 밝은 노란색에 이르기까지 색상이 다양하다. 화이트 페트로라텀이 전체적으로 또는 거의 색체가 없는 페트로라텀으로서, 크림색에서부터 스노우 화이트에 이르기까지 색상이 다양하다. 페트로라텀 및 화이트 페트로라텀은 녹는점, 점도, 및 농도가 매우 다양할 수 있다.
다양한 등급이 상표: PENRECO®ULTIMA, PENRECO®SUPER, PENRECO®SNOW, PENRECO®REGENT, PENRECO®LILY, PENRECO®CREAM, PENRECO®ROYAL, PENRECO®BLOND, 및 PENRECO® AMBER를 갖는 PENRECO Corporation로부터 상업적으로 이용가능하다. 다양한 등급의 상표 ALBA®, SUPER WHITE PROTOPET®, SUPER WHITE FONOLINE®, WHITE PROTOPET 1S®, WHITE PROTOPET 2L®, WHITE PROTOPET 3C®, WHITE FONOLINE®, PERFECTA®, YELLOW PROTOPET 2A®, YELLOW FONOLINE®, PROTOLINE®, SONOJELL #4®, SONOJELL #9®, MINERAL JELLY #10®, MINERAL JELLY #14®, MINERAL JELLY #17®, 및 CARNATION TROUGH GREASE®를 갖는 SONNEBORN Corporation로부터 상업적으로 이용가능하다.
페트로라텀 및 화이트 페트로라텀은 화장품 등급 및 약제학적 (USP/NF) 등급으로 이용가능하며, 둘 다 본 발명에 적합하다.
F. 국소 조성물
본 발명의 국소 조성물은 소수성 연속상 내에 친수성 분산상을 포함하는 분산체이다. 상기 분산상은 단백질분해 효소 및 친수성 폴리올을 포함한다. 본 발명의 일 측면에서, 상기 친수성 폴리올은 액체 친수성 폴리올이다. 일부 구현예에서, 상기 액체 친수성 폴리올은 액체 폴리에틸렌 글리콜 또는 액체 플록사머, 또는 그것의 혼합물이다. 상기 연속상은 소수성 기질을 포함한다. 상기 소수성 기질은 페트로라텀이다. 상기 조성물은 창상 괴사조직제거을 위한 창상의 치료에 유용하다.
상기 조성물은 본 명세서에 정의된 무수물로 존재할 수 있다. 상기 조성물은 반고체 또는 액체로 존재할 수 있다. 상기 조성물은 패드, 거즈, 또는 스폰지로 함침될 수 있다. 상기 조성물은 또한 멸균될 수 있다.
상기 조성물은 상기 성질을 갖는 국소 조성물에 적합한 본 발명에서 공지된 부가적인 물질, 예를 들면 흡수제, 탈취제, 계면활성제, 용매, 리올로지 개질제, 필름 형성제, 안정화제, 연화제, 보습제, 보존제, 항균제, 항산화제, 킬레이트제, 방향제, 및 착색제를 포함할 수 있다.
상기 조성물은 또한 상기 성질을 갖는 국소 조성물에 적합한 당해 기술분야에서 알려진 부가적인 약제학적 활성 성분, 예를 들면 항균제, 창상 치료제, 마취제, 외상용 작용제, 및 지혈제를 포함할 수 있다. 외상용 작용제의 비-제한적 예는 발삼 페루이다.
상기 조성물은 창상 괴사조직제거제를 분배하기에 적합한 임의의 패키지 형태로 포장될 수 있다. 상기 조성물은 다-용도, 단일-용량 또는 계량된 용량 패키지로 포장될 수 있다. 비-제한적 예로서 튜브, 병, 단지, 펌프 용기, 압출 용기, 브래더 용기, 에어로졸 용기, 에어로졸 스프레이 용기, 비-에어로졸 스프레이 용기, 주사기, 파우치, 또는 주머니를 포함한다.
G. 제조 방법
본 발명의 조성물은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 알려진 기술 및 방법, 예를 들면 단백질 분해 효소의 일부 또는 모든 이용가능한 친수성 폴리올을 용해하거나 부유하는 것에 의해 제조될 수 있다. 생성된 용액 또는 부유물은 분산체를 형성하기 위하여 소수성 기질과 혼합될 수 있는바, 여기서 상기 소수성 기질은 연속상이 되고, 그리고 상기 친수성 폴리올/효소 기질은 분산상이 된다. 이러한 조성물은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 알려진 제조 기구, 예를 들면 블렌더, 혼합기, 밀, 균질화기, 디스펜서, 용해기 등을 사용함으로써 제조될 수 있다.
H. 인 비트로 인공 괴사딱지 실험 모델
조성물의 효소 활성 강화는 본 명세서에서 참조로 통합되는, 하기의 문헌 및 간행물 "Study on the debridement efficacy of formulated enzymatic wound debriding agents by in vitro assessment using artificial wound eschar and by an in vivo pig model" Shi et. ah, Wound Repair Regen, 2009, 17(6):853에 기술된 인 비트로 인공 괴사딱지 모델을 사용하여 조성물을 실험하는 것에 의해 이루어진다. 소 콜라겐 (타입 I), 소 피브리노겐, 및 엘라스틴을 사용하여 인공 창상 괴사딱지 (AWE) 기질을 제조하였다. 표지된 콜라겐-FITC, 엘라스틴-로다민, 및 피브린-코우마린이 AWE 기질을 생산하기 위한 원료로서 사용된다. 1 그람의 AWE 기질을 제조하기 위하여, 콜라겐-FITC 650 mg 및 엘라스틴-로다민 및 피브린-코마린 각각 100 mg을 50 mL 튜브에서 중량화하고 10 mL 트리스 완충액 살린으로 균질화하였다. 각각의 튜브에서, 15 mg/mL의 트리스 완충액 살린을 사용하여 10 mL의 피브리노겐 용액을 제조하였다. 상기 2개의 용액을 조합하여 완전혼합하였다. 트롬빈 용액 (50 U/mL에서 0.25 mL)을 첨가한 후, 빨리 혼합시키고, 상기 용액을 90 mm 나노반응성 막 여과기를 함유하는 페트리 디쉬에 쏟았다. 트롬빈-유도 피브리노겐 중합체화의 결과로서, 상기 물질은 고체 매트릭스로 염색된 단백질을 응고시키는 것에 의해 막 여과기의 상단에서 연질 시트를 형성하기 시작하였다. 응고된 AWE 기질을 30분 동안 고체화하고 15분 동안 물로 린스함으로써 트롬빈을 제거하였다. AWE 기질을 사용할 제제 내에서 75% 수준 함량까지 더욱 탈수시켰다.
막에 여전히 부착되어 있는 AWE 기질은, 천공기를 사용하여 35 mm의 지름으로 펀치하였다. AWE 기질 펀치는 Franz Diffusion Cell System (Hanson Research, Chatsworth, CA)의 상단 평편면에 놓고, TEFLON® 샘플 홀더는 상단에 두었다. 괴사조직제거 연고 샘플을 샘플 홀더의 중앙에 로딩하고, 임의의 초과량의 샘플을 스크랩하면서 제거하였다. 수용체 세포 내의 용액으로서 콜리게나제, 파파인, 서모리신, 또는 트립신을 함유하는 샘플에서는 7.4의 pH에서 트리스 완충액을 사용하고, 그리고 펩신을 함유하는 샘플에서는 2의 pH에서 소듐 아세테이트 완충액을 사용하였다. 수용체 세포 내의 용액을 하기의 샘플 수거 시간에서 1 mL 증분으로 샘플링하였다: 0, 1, 2, 3, 6, 12, 18 및 24 시간. 일단 종료되면, 상기 샘플들을 485nm (여기 파장) 및 520nm (방출 파장)에서 FITC 염료 형광 측정에 의해 분석함으로써 콜라겐 소화를 (콜라겐분해) 측정하여 mg/ml로 나타내었다.
I. 인-비트로 물리적 효소 방출 실험
상기 조성물로부터의 효소 방출을 PVDF (0.45 마이크론) 필터를 사용하여 Franz 세포 확산 연구법으로 측정하였다. 본 연구는 35℃에서 수행되었고 6시간 동안 지속되었다. 수용체 세포 내의 용액 샘플을 전체 단백질 분석의 대상으로 하였다.
단백질 농도는 동일한 콜라게나제를 참조 표준으로 사용하면서 BCA 검정법 (Peirce)으로 측정하였다. 구체적인 설명을 하기에 기술하였다.
BCA 단백질 검정법은 높은 민감도를 갖는 알칼라인 매질 내의 단백질에 의해 공지된 Cu2 +의 Cu1 +로의 환원법 및 비신코닌산에 의한 구리 양이온 (Cu1 +)의 선택적 발색 검출법을 조합한 것이다. 제1단계는 알칼리성 환경에서 단백질로 구리를 킬레이션함으로써 블루-색체 복합체를형성한다. 뷰렛 반응으로 알려진, 이 반응에서, 3 또는 그 이상의 아미노산 잔기를 함유하는 펩티드가 소듐 포타슘 타르트레이트를 함유하는 알칼리성 환경에서 구리 이온과 색채화된 켈리이트 복합체를 형성한다. 이것은 동일한 복합체가 유기 화합물 뷰렛 (NH2-CO-NH-CO-NH2) 및 구리 이온을 형성하기 때문에 뷰렛 반응으로 알려진 것이다. 뷰렛에서, 과량의 우레아 생성물 및 열은 구리와 반응함으로써 라이트 불루 테트라덴테이트 복합체를 형성한다. 색채 발생 반응의 제2단계에서, BCA는 매우 민감한 선택적 색채 검출 시약으로서 상기 단계1에서 형성된 구리 양이온(Cu1 +)과 반응한다. 일 구리 이온과 BCA의 2분자와 킬레이션함으로써 퍼플-색채 반응 생성물이 형성된다. BCA/구리 복합체는 수-용성으로 단백질 농도가 증가함에 따라 562 nm에서 강한 선형 흡광을 나타낸다. 퍼플 색채는 시그날의 최소한의 손실 (10% 미만)로 550 nm 내지 570 nm 사이의 임의의 파장에서 측정될 수도 있다. 참조로서 본 명세서에 병합된 하기의 참고문헌을 참고하라: Smith, P.K., Krohn, R.I., Hermanson, G.T., Mallia, A.K., Gartner, F.H., Provenzano, M.D., Fujimoto, E.K., Goeke, N.M., Olson, B.J. 및 Klenk, D.C. (1985). 비신코닌산을 이용한 단백질의 측정. Anal. Biochem. 150, 76-85.
실시예
하기의 실시예는 본 발명의 특정의 비-제한적 측면을 입증하기 위해 포함된다. 하기의 실시예에 개시된 기술들은 본 발명의 실시예에서 잘 작용하는 본 출원인에 의해 발견된 기술을 나타내는 것으로 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 이해되어야 한다. 그러나, 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자는, 본 개시내용의 관점에서, 많은 변경이 개시되어 있는 특정 구현예로부터 만들어 질 수 있으며 본 발명의 정신 및 범위를 벗어남이 없이, 동일하거나 유사한 결과를 얻을 수 있음을 이해할 것이다.
실시예 : 페트로라텀 내의 콜라게나제 / PEG 400의 분산
페트로라텀에 분산된 폴리에틸렌 글리콜 400 (PEG-400)의 농도를 달리함으로써 표 1 내의 분산체를 제조되었다.
표 1
Figure pct00001
*PEG-1450를 PEG-400에 첨가함으로써 각각 96% 및 100% 정도의 전체 PEG를 함유하는 반-고체 생성물을 형성하였다.
각각의 분산체의 효소적 괴사조직제거 활성을 상기에 기술된 인-비트로 인공 괴사딱지 모델에 의해 측정하고, 그 결과를 도 1에 나타내었다. 도 1의 결과로부터 알 수 있듯이, 24 시간 곡선을 바탕으로 PEG-400의 최적량은 약 20% w/w PEG-400이다.
실시예 2: 페트로라텀 내의 콜라게나제 / PEG 600 분산체
폴리에틸렌 글리콜 600 (PEG-600)의 농도를 달리함으로써 표 2 내의 분산체를 제조하였다.
표 2
Figure pct00002
각각의 분산체의 효소적 괴사조직제거 활성을 상기 기술된 인-비트로 인공적 괴사딱지 모델에 의해 측정하였다. 그 결과를 도 2에 플롯팅하였다. 도 2의 결과로부터 알 수 있듯이, 24 시간 곡선을 바탕으로 PEG-600의 최적량은 약 30% w/w PEG-600이엇다.
실시예 3 페트로라텀 내의 콜라게나제 / 폴록사머 분산체
페트로라텀에 분산된 폴록사머 124의 농도를 달리함으로써 표 3 내의 분산체를 제조하였다.
표 3
Figure pct00003
폴록사머 407을 폴록사머 124에 첨가함으로써 100% 정도의 전체 폴록사머를 함유하는 반-고체 생성물을 형성하였다.
각각의 분산체의 효소적 괴사조직제거 활성을 상기 기술한 인-비트로 인공적 괴사딱지에 의해 측정하였다. 그 결과를 도 3에 플롯팅하였다. 도 3의 결과로부터 알 수 있듯이, 24시간 곡선을 바탕으로 폴록사머 124의 최적량은 약 30% w/w 폴록사머 124이었다.
실시예 4: 페트로라텀 내의 트립신/ PEG 400 분산체
페트로라텀에 분산된 폴리에틸렌 글리콜 400 (PEG-400)의 농도를 달리함으로써 표 4 내의 분산체를 제조하였다.
표 4
Figure pct00004
*PEG-1450를 PEG-400에 첨가함으로써 97% 정도의 전체 PEG를 함유하는 반-고체 생성물을 형성하였다.
각각의 분산체의 효소적 괴사조직제거 활성을 상기 기술한 인-비트로 인공 괴사딱지 모델에 의해 측정하였다. 그 결과를 도 4에 플롯팅하였다. 도 4로부터 알 수 있듯이, 24 시간 곡선을 바탕으로 PEG-400의 최적량은 약 14% w/w PEG-400 이었다.
실시예 5: 페트로라텀 내의 파파인 / PEG 400 분산체
페트로라텀에 분산된 폴리에틸렌 글리콜 400 (PEG-400)의 농도를 달리함으로써 표 5 내의 분산체를 제조하였다.
표 5
Figure pct00005
*PEG-1450를 *PEG-400에 첨가함으로써 97% 정도의 전체 PEG를 함유하는 반-고체 생성물을 형성하였다.
각각의 분산체의 효소적 괴사조직제거 활성을 상기 기술된 인-비트로 인공 괴사딱지 모델에 의해 측정하였다. 그 결과를 도 5에 플롯팅하였다. 도 5로부터 알 수 있듯이, 24시간 곡선을 바탕으로 PEG-400의 최적량은 약 29% w/w PEG-400이었다.
실시예 6: 페트로라텀 내의 설모리신 / PEG 400 분산체
표 6
Figure pct00006
*PEG-1450를 PEG-400에 첨가함으로써 97% 정도의 전체 PEG를 함유하는 반-고체 생성물을 형성하였다.
각각의 분산체의 효소적 괴사조직제거 활성을 상기 기술한 인-비트로 인공 괴사딱지 모델에 의해 측정하였다. 그 결과를 도 6에 플롯팅하였다. 도 6으로부터 알 수 있듯이, 24 시간 곡선을 바탕으로 PEG-400 의 최적량은 약 29% w/w PEG-400이었다.
실시예 7: 페트로라텀 내의 펩신/ PEG 400 분산체
페트로라텀에 분산된 폴리에틸렌 글리콜 400 (PEG-400)의 농도를 달리함으로써 표 7 내의 분산체를 제조하였다.
표 7
Figure pct00007
*PEG-1450를 PEG-400에 첨가함으로써 전체 약 96%의 PEG를 함유하는 반-고체 생성물을 형성하였다.
각각의 분산체의 효소적 괴사조직제거 활성을 상기 기술한 인-비트로 인공 괴사딱지에 의해 측정하였다. 그 결과를 도 7에 플롯팅하였다. 도 7로부터 알 수 있듯이, 24시간 곡선을 바탕으로 PEG-400의 최적량은 약 58% w/w PEG-400이었다.
실시예 8: 효소의 물리적 방출을 위한 페트로라텀 내의 콜라게나제 / PEG 400 분산체
페트로라텀에 분산된 폴리에틸렌 글리콜 400 (PEG-400)의 농도를 달리하면서 표 8 내의 분산체를 제조하였다.
표 8
Figure pct00008
*PEG-1450를 PEG-400에 첨가함으로써 각각 전체 PEG의 약 83% 및 100%으로 함유하는 반-고체 생성물을 형성하였다.
효소의 물리적 방출을 상기 기술한 인-비트로 물리적 효소 방출 실험으로 측정하였다. 그 결과를 도 8에 플롯팅하였다. 도 8로부터 알 수 있듯이, 콜라게나제의 물리적 방출은 일반적으로 분산체 내의 PEG-400의 농도가 증가함에 따라 100%에서 최고의 방출 및 0% PEG-400에서 최소의 방출로 증가하였다.
본 명세서에 나타낸 결과로부터 알 수 있듯이, 친수성 폴리올의 증가된 농도에 따른 분산체의 물리적 효소 방출 프로파일은 친수성 폴리올의 증가된 농도의에 따른 효소의 효소 활성 프로파일과 관계없다.
실시예 9: 안전성 및 효능 데이타
도 9는 본 발명의 분산체 내의 콜라게나제의 안전성 ("WP 분산체 내의 30% PEG") 및 물-내-오일 에멀전 ("수성 크림")의 안정성을 비교하는 데이타를 제공한다. 이 데이타는 콜라게나제나 수성 크림과 비교할 때 WP 분산체에서 30% PEG에 더 안정함을 입증한다. 표 9-10은 WP 분산체 내의 30% PEG 및 수성 크림 조제물에 대한 설명을 제공한다.
표 9 ( WP 분산체 내의 30% PEG )*
Figure pct00009
* WP 분산체 내의 PEG를 하기와 같이 제조하였다:
(A) 활성상: (1) 9.71 그람의 PEG-600 및 0.2361 그람의 콜라게나제를 45분 동안 실온에서 (20- 25℃) 20분 동안 혼합하였다. (B) 메인상: (1) 102.784 그람의 화이트 페트로라텀, 37.65 그람의 PEG-600, 및 2.27 그람의 폴록사머-407을 균일하게 될 때까지 70℃에서 혼합하였다. (2) 상기 혼합물을 40-45℃까지 냉각시켰다. 첨가된 7.79 그람을의 활성상을 메인상에 첨가한 후 30분 또는 얻어지는 혼합물이 균일하게 될 때까지 교반하였다.
표 10 (수성 크림)*
Figure pct00010
수성크림을 하기와 같이 제조하였다:
(A) 활성상: (1) 0.2 그람의 콜라게나제를 20 그람의 탈이온 수와 혼합하였다. (B) 메인상: (1) 20.36 그람의 화이트 페트로라텀을 4.5 그람의 에멀전화 왁스, 4.5 그람의 Incroquate TMS, 및 19.83의 글리세린 (96%)과 균일하게 될 때까지 70℃에서 혼합하였다. (2) 상기 혼합물을 35-40℃까지 냉각시켰다. 메인상에 첨가한 활성상을 그 다음 30분 또는 균일한 혼합물이 얻어질 때까지 교반하였다.
도 10은 하기의 3 제조물에 본 발명의 분산체의 돼지 화상 창상에서 괴사딱지 제거에 효소 괴사조직제거 효능 ("화이트 페트로라텀-내-PEG-in"-표 11)을 비교하는 데이타를 제공한다: (1) 수성 크림-표 12; (2) SANTYL® ("상품", 콜라게나제 및 화이트 페트로라텀 혼합물); 및 하이드로겔 제조물-표 13. 화상 창상이 돼지에서 생성되었고, 딱딱한 괴사딱지가 몇일 후에 형성되었따. 제조물을 2주 동안 하루에 한번 괴사딱지에 도포하였다. 전체 괴사조직제거된 창상만을 "완전 괴사조직제거"로 계산하였다. 치료 당 전체 20개의 창상이 존재하였다.
표 11 (화이트 페트로라텀 -내- PEG )*
Figure pct00011
화이트 페트로라텀-내-PEG를 하기와 같이 제조하였다:
(A) 활성상: (1) 32.67 그람의 PEG-600 및 1.63 그람의 폴록사머-407를 혼합물이 맑아질 때까지 70℃에서 균질화하였다; (2) 혼합물을 약 35℃까지 냉각시켰다; 그리고 (3) 설모리신을 적어도 30분 동안 혼합하였다. (B) 메인상: (1) 236.52 그람의 화이트 페트로라텀, 30.05 그람의 PEG-600, 및 1.5 그람의 폴록사머-407을 70℃에서 균질화하였다; 및 (2) 혼합물을 약 35℃까지 냉각시켰다. 활성상 (A)를 메인상 (B)에 첨가하고 45분 동안 실온에서 혼합하였다.
표 12 (수성 크림)*
Figure pct00012
* 수성 크림을 하기와 같이 제조하였다: (1) 파파벤을 글리세린와 함께 고온 (>70℃)에서 완충액 내에 용해하였다. (2) 에멀전화 왁스 및 이소프로필 팔미테이트를 첨가하였다; (3) 상기 혼합물을 45분 동안 고온에서 혼합한 후 약 35℃까지 냉각시켰다; (4) 설모리신을 완충액 내에 슬러리로 첨가하였다; (5) 상기 혼합물을 실온까지 (20-25℃) 냉각시켰다.
표 13 ( 하이드로겔 )*
Figure pct00013
*하이드로겔을 하기와 같이 제조하였다: (1) 파라벤 및 프로필렌 글리콜을 70℃에서 물에 용해하였다; (2) HPMC를 실온에서 첨가하였다 (20-25℃); (3) 설모리신을 첨가함으로써 우유 빛의 점성 용액을 형성하였다.

Claims (36)

  1. (a) 액체 친수성 폴리올 및 최소한 하나의 단백질분해 효소를 포함하는 분산상; 및
    (b) 소수성 기질을 포함하는 연속상을 포함하는 창상 괴사조직제거 조성물로,
    상기 액체 친수성 폴리올의 양은 액체 친수성 폴리올의 최적량의 ± 10% w/w 이내인 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 액체 친수성 폴리올의 양은 액체 친수성 폴리올의 최적량의 ± 7% w/w 이내인 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 액체 친수성 폴리올의 양은 액체 친수성 폴리올의 최적량의 ± 5% w/w 이내인 조성물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질분해 효소는 메탈로프로테아제(metalloprotease)인 조성물.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 메탈로프로테아제는 콜라게나제인 조성물.
  6. 제4항에 있어서,
    상기 메탈로프로테아제는 설모리신(thermolysin)인 조성물.
  7. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질분해 효소는 시스테인 프로테아제인 조성물.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 시스테인 프로테아제는 파파인인 조성물.
  9. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질분해 효소는 세린 프로테아제인 조성물.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 세린 프로테아제는 트립신인 조성물.
  11. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질분해 효소는 아스팔트산 펩티다아제(aspartic peptidase)인 조성물.
  12. 제11항에 있어서,
    상기 아스팔트산 펩티다아제는 펩신인 조성물.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 액체 친수성 폴리올은 액체 폴리에틸렌 글리콜, 또는 액체 폴록사머(poloxamer), 또는 그것의 혼합물인 조성물.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질분해 효소는 분산상에 부유되는 조성물.
  15. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질분해 효소는 분산상에서 용해되는 조성물.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 소수성 기질은 페트로락텀(petrolatum)인 조성물.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 분산상은 고체 친수성 폴리올을 추가로 포함하는 조성물.
  18. 제17항에 있어서,
    상기 고체 소수성 폴리올은 고체 폴리에틸렌 글리콜, 또는 고체 폴록사머, 또는 그것의 혼합물인 조성물.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 반고체인 조성물.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 무수물인 조성물.
  21. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 멸균된 조성물.
  22. 액체 친수성 폴리올, 및 유효한 괴사조직제거 농도의 적어도 하나의 단백질분해 효소; 및 소수성 기질을 포함하는 연속상을 포함하는 조성물을 창상에 도포하는 단계를 포함하는, 괴사조직제거가 필요한 창상을 치료하는 방법으로,
    상기 액체 친수성 폴리올의 양은 최적량의 ± 10% w/w 이내인 방법.
  23. 제22항에 있어서,
    상기 조성물은 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 따른 조성물인 방법.
  24. 단백질분해 효소를 포함하는 분산상 및 소수성 기질을 포함하는 연속상을 포함하는 표적 조성물에 첨가하기 위한 액체 친수성 폴리올의 최적량을 측정하는 방법으로, 상기 방법은,
    (1) 분산상 및 연속상을 포함하는 일련의 조성물을 얻는 단계, 상기 분산상은 액체 친수성 폴리올을 추가로 포함하고, 상기 일련의 조성물 내의 각각의 조성물은 동일한 양의 단백질분해 효소 및 상이한 양의 액체 친수성 폴리올을 포함하고;
    (2) 일련의 조성물 내의 각각의 조성물의 효소적 활성을 측정하는 단계;
    (3) 일련의 조성물의 각각의 조성물 내에 포함되는 액체 친수성 폴리올(들)의 양에 대한 효소적 활성을 플롯팅하는 그래프 상의 최고점을 측정하는 단계를 포함하고,
    상기 그래프 상의 최고점은 표적 조성물에 첨가되는 액체 친수성 폴리올의 최적량과 상관관계에 있는 방법.
  25. 제24항에 있어서,
    액체 친수성 폴리올의 최적량의 ± 10%를 상기 표적 조성물에 첨가하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  26. 제24항에 있어서,
    상기 일련의 조성물은 적어도 5개의 조성물을 포함하는 방법.
  27. 제26항에 있어서,
    상기 일련의 조성물 내의 폴리올의 양은 적어도 10% w/w의 증분으로 달라지는 방법.
  28. 제27항에 있어서,
    제1조성물은 10% w/w의 액체 친수성 폴리올을 포함하고, 제2조성물은 30% w/w의 액체 친수성 폴리올을 포함하고, 제3조성물은 50% w/w의 액체 친수성 폴리올을 포함하고, 제4조성물은 70% w/w의 액체 친수성 폴리올을 포함하고, 그리고 제5조성물은 90% w/w의 액체 친수성 폴리올을 포함하는 방법.
  29. 제26항에 있어서,
    제1조성물은 0 내지 30% w/w의 액체 친수성 폴리올을 포함하고, 제2조성물은 10 내지 50% w/w의 액체 친수성 폴리올을 포함하고, 제3조성물은 20 내지 60% w/w의 액체 친수성 폴리올을 포함하고, 제4조성물은 30 내지 80% w/w의 액체 친수성 폴리올을 포함하고, 그리고 제5조성물은 40 내지 100% w/w의 액체 친수성 폴리올을 포함하는 방법.
  30. 제24항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 표적 조성물은 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 따른 조성물인 방법.
  31. 단백질분해 효소를 포함하는 분산상 및 소수성 기질을 포함하는 연속상을 포함하는 표적 조성물 내의 효소 활성을 증가시키는 방법으로, 상기 방법은:
    (1) 분산상 및 연속상을 포함하는 일련의 조성물을 얻는 단계, 상기 연속상은 액체 친수성 폴리올을 추가로 포함하고, 상기 일련의 조성물 내의 각각의 조성물은 동일한 양의 단백질분해 효소 및 상이한 양의 액체 친수성 폴리올을 포함하고;
    (2) 일련의 조성물 내의 각각의 조성물의 효소 활성을 측정하는 단계;
    (3) 일련의 조성물의 각각의 조성물 내에 포함되는 액체 친수성 폴리올(들)의 양에 대한 효소 활성을 플롯팅하는 그래프 상의 최고점을 측정하는 단계, 여기서 상기 그래프 상의 최고점은 표적 조성물에 첨가될 액체 친수성 폴리올의 최적량과 상관관계에 있고, 및
    (4) 액체 친수성 폴리올의 최적량의 10% w/w를 표적 조성물에 첨가하는 단계를 포함하는 것에 의해, 표적 조성물 내의 효소 활성을 증가시키는 방법.
  32. 제31항에 있어서,
    상기 일련의 조성물은 적어도 5개의 조성물을 포함하는 방법.
  33. 제32항에 있어서,
    상기 일련의 조성물 내의 폴리올의 양은 적어도 10% w/w의 증분으로 달라지는 방법.
  34. 제33항에 있어서,
    제1조성물은 10% w/w의 액체 친수성 폴리올을 포함하고, 제2조성물은 30% w/w의 액체 친수성 폴리올을 포함하고, 제3조성물은 50% w/w의 액체 친수성 폴리올을 포함하고, 제4조성물은 70% w/w의 액체 친수성 폴리올을 포함하고, 그리고 제5조성물은 90% w/w의 액체 친수성 폴리올을 포함하는 방법.
  35. 제32항에 있어서,
    제1조성물은 0 내지 30% w/w의 액체 친수성 폴리올을 포함하고, 제2조성물은 10 내지 50% w/w의 액체 친수성 폴리올을 포함하고, 제3조성물은 20 내지 60% w/w의 액체 친수성 폴리올을 포함하고, 제4조성물은 30 내지 80% w/w의 액체 친수성 폴리올을 포함하고, 그리고 제5조성물은 40 내지 100% w/w의 액체 친수성 폴리올을 포함하는 방법.
  36. 제31항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 표적 조성물은 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 따른 조성물인 방법.
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