KR20120034724A - 저압 내지 중간압 액체 크로마토그래피의 사용에 의한 방사성추적자의 정제 - Google Patents

저압 내지 중간압 액체 크로마토그래피의 사용에 의한 방사성추적자의 정제 Download PDF

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바이엘 파마 악티엔게젤샤프트
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Abstract

본 발명은 방사성추적자의 생성 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 정지상으로 채워진 용기에의 방사성추적자의 단리에 관한 것이다.

Description

저압 내지 중간압 액체 크로마토그래피의 사용에 의한 방사성추적자의 정제 {USAGE OF LOW TO MEDIUM-PRESSURE LIQUID CHROMATOGRAPHY FOR THE PURIFICATION OF RADIOTRACERS}
발명의 분야
본 발명은 방사성추적자의 생성 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 정지상으로 채워진 용기로 방사성추적자를 단리하는 것에 관한 것이다.
배경
방사성제약의 제조에 있어서, 임상적 관심의 화합물의 성공적인 (방사성-) 합성 및 후속적인 안전한 투여를 위해 부산물, 예를 들면 과량의 전구체를 제거하기 위한 전략이 확립되어야 한다. 이러한 반응은 종종 사용된 방사성표지제의 양에 비해 많은 과량의 비-방사성 유기 전구체를 사용한다. 과량의 전구체는 이어서 방사성표지된 화합물이 진단적 및/또는 치료적 적용을 위해 환자에게 적용될수 있기 전에 반응 혼합물로부터 제거되어야 한다.
임상적 관심의 화합물의 성공적인 (방사성-) 합성 및 후속적인 안전한 투여를 위해 부산물, 예를 들면 과량의 전구체를 제거하기 위한 전략이 확립되어야 한다. 이러한 반응은 종종 사용된 방사성표지제의 양에 비해 많은 과량의 비-방사성 유기 전구체를 사용한다. 과량의 전구체는 이어서 방사성표지된 화합물이 진단적 및/또는 치료적 적용을 위해 환자에게 적용될수 있기 전에 반응 혼합물로부터 제거되어야 한다.
방사성표지된 화합물의 정제는 보통 고체 상 추출 (SPE) 또는 고압 액체-크로마토그래피 (HPLC)를 통해 달성된다. 대부분의 임상적으로 유용한 방사성동위원소의 반감기를 고려하면, 환자에게 투여하기 전에 가능한 빨리 방사성합성 및 정제를 완료하는 것이 바람직하다. 예를 들면, 18F의 반감기는 110분이고, 18F-표지된 표적화 기질은 따라서 임상적 사용 1시간 내에 합성 및 정제된다. 이들 시간 제한에 대해, HPLC 정제는 종종 시간이 많이 소요되고 지루하다. 게다가 이 기술은 전문 장비를 요구하고, 카세트-유형 모듈에 대한 일회용 합성 키트의 일부가 될 수 없다. 이는 다음 합성 전에 HPLC의 정제 및 평형을 요구한다. 그러나, HPLC, 특히 HPLC 컬럼의 동일한 조건은 모든 생성 수행에 대해 보장될 수 없다. 결과적으로, 방법의 일관성은 보장될 수 없다.
기술적 요구 및 시간-소요에 대해, SPE 정제는 부담이 훨씬 적고, SPE 카트리지는 또한 카세트-유형 모듈에 대한 일회용 합성 키트의 일부가 될 수 있다. 그럼에도 불구하고, 방사성표지된 화합물의 정제를 위해 사용되는 카트리지는 보통 20 mg 내지 2 g의 범위의 고체 상 물질을 함유한다. 이 양으로, 모든 부산물의 완전한 제거는 종종 지루하고, 많은 경우에 성취가능하지도 않다.
상기를 고려하면, 당업계에는 최종 방사성표지된 화합물로부터의 원하지 않는 종의 재현가능하고, 빠르고, 효율적인 분리를 제공하는 정제 전략에 대한 필요성이 있다는 것이 명백하다.
본 발명은 다중-수행 HPLC 정제 단계를 사용하는 대신에 정제를 위해 일회용 용기를 적용함으로써 이 기술적 문제를 해결한다.
본 발명의 요약
본 발명은 일반적으로 임의의 종류의 부산물로부터 방사성표지된 화합물을 정제하기 위해 정상 또는 역상 플래쉬 크로마토그래피의 사용에 관한 것이다.
이 플래쉬 크로마토그래피는 고체 상 물질로 채워진 임의의 종류의 일회용 용기에 의해 수행된다. 이들 용기는 배관을 통해 임의의 종류의 씻어내리는 시스템에 연결될 수 있고, 따라서 카세트-유형 모듈 상의 방사성제약에 대한 일회용 합성 키트의 일부가 될 수 있거나 또는 비-카세트-유형 모듈에 속할 수 있다.
본 발명의 설명:
제1 측면에서, 본 발명은
● 전구체 분자를 방사성표지하는 단계, 및
● 용기를 사용하여 과량의 전구체 및 부산물로부터 방사성표지된 추적자를 정제하는 단계를 포함하는, 방사성제약의 생성 방법에 관한 것이다.
임의로, 추가의 화학적 변형이 상기 방법의 일부가 될 수 있다.
방사성추적자의 정제는 액체 크로마토그래피의 단계를 포함하며, 여기서 이 액체 크로마토그래피는 저압 내지 중간압 액체 크로마토그래피이다. 바람직한 실시양태에서, 저압 내지 중간압 액체 크로마토그래피의 압력은 1 내지 20 바 (bar), 보다 바람직하게는 1 내지 10 바, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 5 바이다.
방사성표지된 화합물은
Figure pct00001
의 군에서 선택된 하나 이상의 방사성동위원소를 함유한다.
바람직한 실시양태에서, 방사성표지된 추적자는 양전자-방출-단층촬영을 위해 방사성동위원소를 갖는다.
보다 바람직한 실시양태에서, 방사성동위원소는 18F, 68Ga로 이루어진 군으로부터 선택된다.
방사성추적자는 CNS, 심혈관 또는 종양학적 질환의 영상화를 위해 사용될 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 방사성표지된 추적자는 CNS 장애의 영상화를 위해 사용되며, Aβ 플라크의 검출을 위해 바람직하다. 상기 추적자는 아릴(또는 헤트아릴)비닐 아닐린 유도체, 예를 들면 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]플루오로에톡시)에톡시]에톡시}-페닐)비닐]-N-메틸아닐린, 4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]플루오로에톡시)에톡시]에톡시}피리딘-3-일)비닐]-N-메틸아닐린을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다.
용기는 카트리지, 컬럼 또는 임의의 종류의 실린더이다.
용기는 임의의 종류의 금속, 합금, 플라스틱, 유리, 탄소 또는 그의 혼합물로부터 제조된다.
바람직한 실시양태에서, 용기의 재료는 임의의 종류의 플라스틱, 유리 또는 그의 혼합물의 군으로부터 선택되고, 보다 바람직하게는 USP 클래스 VI 플라스틱으로부터 선택되고, 더욱 더 바람직하게는 의료-등급 폴리에틸렌 또는 폴리프로필렌으로부터 선택된다.
용기는 정지상으로 채워진다.
용기는 추가적 부재, 예를 들면 다공성 프릿, 연결기 및 어댑터를 함유할 수 있지만, 이들로 한정되지는 않는다.
바람직한 실시양태에서, 정지상은 실리카겔, 변형된 실리카겔, 알루미나, 수지, 중합체, 공중합체 또는 그의 혼합물 또는 층을 포함하는 군으로부터 선택된다.
보다 바람직한 실시양태에서, 정지상은 실리카, 알루미나 A, 알루미나 B, 알루미나 N, 마그네슘 실리케이트, 마그네슘 옥시드, 지르코늄 옥시드, C30, C18, tC18, C8, C4, C2, tC2, 아미노 프로필 (NH2), 시아노 프로필 (CN), 디올, 히드록시아파타이트, 셀룰로스, 흑연화 탄소 및 폴리스티렌/디비닐벤젠 중합체 또는 그의 공중합체를 포함하는 군으로부터 선택된다.
10 μg 내지 100 g의 정지상이 용기에 채워진다. 바람직한 실시양태에서, 100 mg 내지 50 g의 정지상이 용기에 채워진다. 보다 바람직한 실시양태에서, 2 g 내지 20 g의 정지상이 용기에 채워진다. 더욱 더 바람직하게는, 3.5 g 내지 10 g의 정지상이 용기에 채워진다.
동일 또는 상이한 정지상으로 채워진 동일 또는 상이한 치수의 하나 이상의 용기는 상기 방법을 위해 사용될 수 있다.
정지상으로 채워진 용기는 배관, 주사기, 바늘, 밸브 또는 추가의 용기에 연결될 수 있다.
정제 방법을 위한 액체 상은 유기 용매, 물, 염, 산, 염기 또는 첨가제의 수용액 및 그의 혼합물의 군으로부터 선택된다. 바람직한 실시양태에서, 액체 상은 펜탄, 헥산, 헵탄, 옥탄, 시클로펜탄, 시클로헥산, 이소옥탄, 톨루엔, p-크실롤, 클로로벤젠, 벤젠, 디에틸에테르, 디이소프로필에테르, tert-부틸 메틸 에테르, 니트로메탄, 클로로포름, 디클로로메탄, 1,2-디클로로에탄, 트리에틸아민, 피리딘, 암모니아, 아세톤, 테트라히드로푸란, 에틸 아세테이트, 메틸 아세테이트, 아세토니트릴, 이소프로판올, 에탄올, 메탄올, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 물, 염수 용액, 완충액 및 그의 혼합물을 포함하는 군으로부터 선택된다.
액체 상은 당업자에게 공지된 방법에 의해 용기를 통해 통과된다. 바람직한 실시양태에서, 액체 상은 펌프, 주사기, 주사기 펌프, 가스 기류, 진공 또는 그의 조합에 의해 용기를 통해 통과된다.
여러 종류의 검출기는 본 방법과 조합될 수 있다. 바람직한 검출기는 UV-검출기, 방사성 검출기, 빛 산란 검출기, 전기전도도 검출기, 굴절 지수 검출기이다.
제2 측면에서, 본 발명은
● 전구체 분자를 방사성표지하는 단계, 및
● 용기를 사용하여 과량의 전구체 및 부산물로부터 방사성표지된 추적자를 정제하는 단계를 포함하는, 방사성제약의 자동화된 생성 방법에 관한 것이다.
임의로, 추가의 화학적 변형이 상기 방법의 일부가 될 수 있다.
방사성추적자의 정제는 액체 크로마토그래피의 단계를 포함하며, 여기서 이 액체 크로마토그래피는 저압 내지 중간압 액체 크로마토그래피이다. 바람직한 실시양태에서, 액체 크로마토그래피의 압력은 1 내지 20 바, 보다 바람직하게는 1 내지 10 바이다.
방사성표지된 화합물은
Figure pct00002
의 군에서 선택된 하나 이상의 방사성동위원소를 함유한다.
바람직한 실시양태에서, 방사성표지된 추적자는 양전자-방출-단층촬영을 위해 방사성동위원소를 갖는다.
보다 바람직한 실시양태에서, 방사성동위원소는 18F, 68Ga로 이루어진 군으로부터 선택된다.
용기는 카트리지, 컬럼 또는 임의의 종류의 실린더이다.
용기는 임의의 종류의 금속, 합금, 플라스틱, 유리, 탄소 또는 그의 혼합물로부터 제조된다.
바람직한 실시양태에서, 용기의 재료는 임의의 종류의 플라스틱, 유리 또는 그의 혼합물의 군으로부터 선택되고, 보다 바람직하게는 USP 클래스 VI 플라스틱으로부터 선택되고, 더욱 더 바람직하게는 의료-등급 폴리에틸렌 또는 폴리프로필렌으로부터 선택된다.
용기는 정지상으로 채워진다.
용기는 추가적 부재, 예를 들면 다공성 프릿, 연결기 및 어댑터를 함유할 수 있지만, 이들로 한정되지는 않는다.
바람직한 실시양태에서, 정지상은 실리카겔, 변형된 실리카겔, 알루미나, 수지, 중합체, 공중합체 또는 그의 혼합물 또는 층을 포함하는 군으로부터 선택된다.
보다 바람직한 실시양태에서, 정지상은 실리카, 알루미나 A, 알루미나 B, 알루미나 N, 마그네슘 실리케이트, 마그네슘 옥시드, 지르코늄 옥시드, C30, C18, tC18, C8, C4, C2, tC2, 아미노 프로필 (NH2), 시아노 프로필 (CN), 디올, 히드록시아파타이트, 셀룰로스, 흑연화 탄소 및 폴리스티렌/디비닐벤젠 중합체 또는 그의 공중합체를 포함하는 군으로부터 선택된다.
10 μg 내지 100 g의 정지상이 용기에 채워진다. 바람직한 실시양태에서, 100 mg 내지 50 g의 정지상이 용기에 채워진다. 보다 바람직한 실시양태에서, 2 g 내지 20 g의 정지상이 용기에 채워진다.
동일 또는 상이한 정지상으로 채워진 동일 또는 상이한 치수의 하나 이상의 용기는 상기 방법을 위해 사용될 수 있다.
정지상으로 채워진 용기는 배관, 주사기, 바늘, 밸브 또는 추가의 용기에 연결될 수 있다.
정제 방법을 위한 액체 상은 유기 용매, 물, 염, 산, 염기 또는 첨가제의 수용액 및 그의 혼합물의 군으로부터 선택된다. 바람직한 실시양태에서, 액체 상은 펜탄, 헥산, 헵탄, 옥탄, 시클로펜탄, 시클로헥산, 이소옥탄, 톨루엔, p-크실롤, 클로로벤젠, 벤젠, 디에틸에테르, 디이소프로필에테르, tert-부틸 메틸 에테르, 니트로메탄, 클로로포름, 디클로로메탄, 1,2-디클로로에탄, 트리에틸아민, 피리딘, 암모니아, 아세톤, 테트라히드로푸란, 에틸 아세테이트, 메틸 아세테이트, 아세토니트릴, 이소프로판올, 에탄올, 메탄올, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 물, 염수 용액, 완충액 및 그의 혼합물을 포함하는 군으로부터 선택된다.
액체 상은 당업자에게 공지된 방법에 의해 용기를 통해 통과된다. 바람직한 실시양태에서, 액체 상은 펌프, 주사기, 주사기 펌프, 가스 기류, 진공 또는 그의 조합에 의해 용기를 통해 통과된다.
여러 종류의 검출기는 본 방법과 조합될 수 있다. 바람직한 검출기는 UV-검출기, 방사성 검출기, 빛 산란 검출기, 전기전도도 검출기, 굴절 지수 검출기이다.
상기 방법은 방사성표지된 추적자의 제조를 위한 자동화된 절차이다.
한 실시양태에서, 정제 방법은 방사성추적자의 자동화된 합성과 조합된 독립적인 자동화된 절차이다.
또다른 실시양태에서, 정제 방법은 방사성추적자의 자동화된 합성에 통합된다. 바람직한 실시양태에서, 방사성추적자의 생성을 위해 합성기가 사용되고, 정제 방법은 합성기 상에서 확립된다. 보다 바람직하게는, 생성 및 정제 방법은 임의의 수동 조작 없이 수행된다.
바람직한 실시양태에서, "중간압 크로마토그래피"에 의한 방사성추적자의 합성 및 정제는 당업자에게 공지된 방사성추적자의 생성을 위한 "카세트 유형 모듈", 예를 들면 GE 트레이서랩 (tracerlab) MX (코인시던스 (Coincidence) FDG), GE 패스트랩 (Fastlab), IBA 신테라 (Synthera) 상에서 수행되지만, 이들로 한정되지는 않는다. 바람직하게는, "중간압 크로마토그래피"를 위한 용기는 일회용 카세트 (또는 키트)의 일부이다.
제3 측면에서, 본 발명은
● 전구체 분자를 방사성표지하는 단계, 및
● 용기를 사용하여 과량의 전구체 및 부산물로부터 방사성표지된 추적자를 정제하는 단계를 포함하는 방사성제약의 생성 방법을 위한 일회용 키트에 관한 것이다.
임의로, 추가의 화학적 변형이 상기 방법의 일부가 될 수 있다.
키트는 방사성추적자의 합성을 위한 재료 및 정제를 위한 용기를 포함하며, 여기서 용기는 상기 기재된 바와 같이 정의된다.
본 발명은 추가로 다음 사항에 관한 것이다:
1. 저압 내지 중간압 액체 크로마토그래피를 사용하는 정제 단계를 포함하며, 정지상으로 채워진 하나 이상의 용기가 사용되는 것인, 방사성추적자의 생성 방법.
2. 상기 1에 있어서, 방사성추적자가 양전자-방출 방사성추적자인 방법.
3. 상기 1 또는 상기 2에 있어서, 정지상이 실리카겔, 변형된 실리카겔, 알루미나, 수지, 중합체, 겔 또는 그의 혼합물 또는 층으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
4. 상기 1 내지 상기 3 중 어느 하나에 있어서, 실리카, 알루미나 A, 알루미나 B, 알루미나 N, 마그네슘 실리케이트, 마그네슘 옥시드, 지르코늄 옥시드, C30, C18, tC18, C8, C4, C2, tC2, 아미노 프로필 (NH2), 시아노 프로필 (CN), 디올, 히드록시아파타이트, 셀룰로스, 흑연화 탄소, 폴리스티렌/디비닐벤젠 중합체, 폴리스티렌/디비닐벤젠 공중합체 또는 그의 혼합물을 포함하는 군으로부터 선택되는 정지상으로 채워진 용기가 사용되는 것인 방법.
5. 상기 1 내지 상기 4 중 어느 하나에 있어서, 용기가 10 μg 내지 100 g의 정지상으로 채워지는 것인 방법.
6. 상기 1 내지 상기 5 중 어느 하나에 있어서, 용기가 2 g 내지 20 g의 정지상으로 채워지는 것인 방법.
7. 상기 1 내지 상기 6 중 어느 하나에 있어서, 액체 크로마토그래피를 위한 용매가 유기 용매, 물, 염, 산 또는 염기 또는 첨가제의 수용액 및 그의 혼합물로이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
8. 상기 1 내지 상기 7 중 어느 하나에 있어서, 용기가 방사성추적자의 자동화된 합성에 통합되는 것인 방법.
9. 저압 내지 중간압 액체 크로마토그래피를 위한 용기를 갖는 방사성추적자의 생성을 위한 키트.
10. 상기 9에 있어서, 방사성추적자의 생성 내에서 1회 사용을 위한 키트.
도면의 설명
도 1: 조질의 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]플루오로에톡시)에톡시]에톡시}-페닐)비닐]-N-메틸아닐린의 중간압 크로마토그래피의 크로마토그램.
도 2: "중간압 크로마토그래피" 후 조 생성물 혼합물 (a, b) 및 정제된 생성물 (c, d)의 분석적 HPLC 크로마토그램 ~(아틀란티스 (Atlantis) T3; 150*4,6 mm ; 3 μm; 머크 워터스 (Merck Waters); 5mM KH2PO4 pH 2.2 중의 40-90% MeCN).
도 3: 트레이서랩 MX 합성의 설치 (그림은 코인시던스 소프트웨어로부터 복사되고 변형되었음).
도 4: 조질의 4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]플루오로에톡시)에톡시]에톡시}피리딘-3-일)비닐]-N-메틸아닐린의 중간압 크로마토그래피의 크로마토그램.
도 5: "중간압 크로마토그래피" 후 조 생성물 혼합물 (a, b) 및 정제된 생성물 (c, d)의 분석적 HPLC 크로마토그램 ~(크로모리스 스피드로드 (Chromolith SpeedRod); 머크 (Merck); 10mM Na2HPO4 pH 7.4 중의 0-95% MeCN).
도 6: 조질의 4-[F-18]플루오로벤질)(트리페닐)포스포늄 브로마이드의 에커트앤지글러 (Eckert&Ziegler) 모듈식 랩 (modular lab) 상의 중간압 크로마토그래피의 크로마토그램, 위: 감마, 아래: UV 신호.
도 7: "중간압 크로마토그래피" 후 조 생성물 혼합물 (a, b) 및 정제된 생성물 (c, d)의 분석적 HPLC 크로마토그램 ~(조르박스 (Zorbax) SB-C18; 아질런트 (Agilent); 0.1M 암모늄 포르미에이트 중의 50% MeCN).
도 8: 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]플루오로에톡시)에톡시]-에톡시}페닐)비닐]-N-메틸아닐린 합성을 위한 트레이서랩 MX의 설치 (코인시던스 FDG 소프트웨어로부터 수득함)
도 9: "정제 카트리지" (샘플을 반응기로부터 채취함)를 통해 통과되기 전의 MX 합성의 조 생성물의 분석적 HPLC; 위: 방사능; 아래: UV 신호 320 nm
도 10: MX 합성 및 카트리지 기반 정제 후 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]플루오로에톡시)에톡시]-에톡시}페닐)비닐]-N-메틸아닐린의 분석적 HPLC; 위: 방사능; 아래: UV 신호 320 nm
실시예 1:
4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]플루오로에톡시)에톡시]에톡시}-페닐)비닐]-N-메틸아닐린의 합성 및 정제
Figure pct00003
[F-18]플루오라이드 (1.0 GBq)를 QMA 카트리지 (셉팍 (SepPak) 라이트, 워터스) 상에 트래핑 (trap) 하였다. 테트라부틸수산화암모늄 용액 (물 및 700 μL 아세토니트릴 중의 300 μL 4% 테트라부틸수산화암모늄)으로의 용출 후, 혼합물을 가벼운 질소 기류하에 120℃에서 건조시켰다. 아세토니트릴의 첨가 후 건조를 반복하였다. 3.5 mg 메실레이트 전구체를 1.8 mL 아세토니트릴 중에 용해시키고, 건조된 잔류물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 110℃에서 10분 동안 가열하였다. 2 mL 1.5M HCl을 첨가하고, 용액을 110℃에서 5분 동안 가열하였다. 1.5 mL 2M NaOH를 첨가하고, 용액을 레디셉 (RediSep), Rf 골드 (Gold) HP C18 카트리지 (5.5 g)를 통해 통과시켰다. 40% 에탄올 및 60% 0.01M 수성 Na2HPO4 (pH 7.4)의 혼합물을 정제용 HPLC 펌프 (크나우어 스마트라인 (Knauer smartline))를 사용하여 10 ml/분으로 카트리지를 통해 통과시켰다. 10분 후, 50% 에탄올 및 50% 0.01M 수성 Na2HPO4 (pH 7.4)의 혼합물을 10 ml/분으로 카트리지를 통해 통과시켰다. 12-13분에서부터 분획을 수집하였다 (도 1).
283 MBq (42% d.c.) 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]플루오로에톡시)에톡시]에톡시}-페닐)비닐]-N-메틸아닐린을 62분의 전체 합성 시간 내에 수득하였다 (도 2).
방사성 및 비-방사성 불순물을 반정제용 HPLC (예를 들면, 조르박스 보너스 (Zorbax Bonus) RP, 아질런트; 0.1M 암모늄 포르미에이트 중의 55% MeCN)으로의 정제 후와 동일한 품질의 추적자를 제공하기 위해 성공적으로 제거하였다.
실시예 2:
트레이서랩 MX 모듈 상에서의 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]플루오로에톡시)에톡시]-에톡시}페닐)비닐]-N-메틸아닐린의 자동화된 합성 및 정제
Figure pct00004
4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]플루오로에톡시)에톡시]-에톡시}페닐)비닐]-N-메틸아닐린의 합성 및 정제를 GE 트레이서랩 MX 모듈 상에서 수행하였다. FDG 합성을 위한 시판되는 카세트를 변형시키고 조립하였다 (도 3):
● 매니폴드 2 및 매니폴드 3 사이의 tC18 카트리지를 튜브로 대체시켰음
● 매니폴드 3에서의 카트리지 (tC18 및 알루미나)를 제거하였음
● 바이알 V1: 8 ml 아세토니트릴
● 바이알 V2: 1.5 mL 아세토니트릴 중의 3.5 mg 메실레이트 전구체
● 바이알 V3: 1.5 mL 2M NaOH 및 7 mL 물
● 바이알 V4: 30 mg 나트륨 아스코르베이트 및 2 mL 1.5M HCl
● 바이알 E: 탄산칼륨/크립토픽스 (kryptofix) (아세토니트릴/물 중)
● S1: 40% EOH, 60% % 0.01M 수성 Na2HPO4 (pH 7.4) - 용매 1
● S2: 50% EOH, 50% % 0.01M 수성 Na2HPO4 (pH 7.4) - 용매 2
● 플래쉬 카트리지: 레디셉, Rf 골드 HP C18 카트리지 (5.5 g)
다음 단계를 포함하는 합성 순서를 개시하였다:
1. QMA 카트리지 (셉팍 라이트, 워터스) 상에서 [F-18]플루오라이드를 트래핑하는 단계
2. E의 혼합물을 사용하여 [F-18]플루오라이드를 반응기에 용출하는 단계
3. 용매를 증발시키는 단계 (V1로부터의 아세토니트릴의 첨가 후 반복함)
4. V2로부터의 전구체 용액을 반응기의 건조된 잔류물에 첨가하는 단계
5. 110℃에서 10분 동안 가열하는 단계
6. 주사기 2에 V4의 산을 전달하는 단계
7. 주사기 2로부터의 산을 주사기 1에 전달하는 단계
8. 주사기 1로부터의 산을 반응기에 전달하는 단계
9. 110℃에서 5분 동안 가열하는 단계
10. V3의 NaOH를 주사기 2에 전달하는 단계
11. 주사기 2로부터의 NaOH를 주사기 1에 전달하는 단계
12. 반응기로부터의 조 생성물을 주사기 1에 전달하는 단계
13. 플래쉬 카트리지 상에서 조 생성물을 트래핑하는 단계
14. 용매 1로 주사기 1 및 매니폴드를 세척하는 단계
15. 주사기 1에 의해 용매 1 (5회 25 mL)로 플래쉬 카트리지를 폐기병으로 씻어내리는 단계
16. 25 mL 용매 2를 주사기 2에 전달하는 단계
17. 주사기 2로부터의 용매 2를 주사기 1에 전달하는 단계
18. 주사기 1에 의해 용매 2로 플래쉬 카트리지를 폐기병으로 씻어내리는 단계
19. 주사기 1에 의해 10 mL 용매 2로 플래쉬 카트리지를 주사기 2에 씻어내리는 단계
20. 주사기 2로부터의 생성물 분획을 생성물 바이알에 이동시키는 단계.
1.6 GBq [F-18]플루오라이드로부터 출발하여 380 MBq (36% d.c.) 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]플루오로에톡시)에톡시]-에톡시}페닐)비닐]-N-메틸아닐린을 합성 및 정제 중에 임의의 수동 조작 없이 전체 65분 내에 수득하였다.
실시예 3:
4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]플루오로에톡시)에톡시]에톡시}피리딘-3-일)비닐]-N-메틸아닐린의 합성 및 정제
Figure pct00005
[F-18]플루오라이드 (1.24 GBq)를 QMA 카트리지 (셉팍 라이트, 워터스) 상에 트래핑하였다. 탄산칼륨/크립토픽스 혼합물 (아세토니트릴/물 중의 5 mg 크립토픽스, 1 mg 탄산칼륨)로의 용출 후, 혼합물을 가벼운 질소 기류하에 120℃에서 건조시켰다. 아세토니트릴 (2 x 1 mL)의 첨가 후 건조를 반복하였다. 4 mg 토실레이트 전구체를 1 mL 아세토니트릴 중에 용해시키고, 건조된 잔류물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 110℃에서 10분 동안 가열하였다. 대략 60℃로 냉각시킨 후, 500 μL 2M HCl을 첨가하고, 용액을 110℃에서 5분 동안 가열하였다. 혼합물을 60℃로 냉각되도록 하였다. 1 mL 1M NaOH 및 2.5 mL를 첨가하고, 용액을 레디셉, Rf 골드 HP C18 카트리지 (5.5 g)를 통해 통과시켰다. 35% 에탄올 및 65% 0.01M 수성 Na2HPO4 (pH 7.4)의 혼합물을 정제용 HPLC 펌프 (크나우어 스마트라인)를 사용하여 10 ml/분으로 카트리지를 통해 통과시켰다. 10분 후, 40% 에탄올 및 60% 0.01M 수성 Na2HPO4 (pH 7.4)의 혼합물을 10 ml/분으로 카트리지를 통해 통과시켰다. 12.6-13.6분에서부터 분획을 수집하였다 (도 4). 337 MBq (44% d.c.) 4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]플루오로에톡시)에톡시]에톡시}피리딘-3-일)비닐]-N-메틸아닐린을 75분의 전체 합성 시간 내에 수득하였다 (도 5).
실시예 4:
에커트앤지글러 모듈식 랩 상에서의 (4-[F-18]플루오로벤질)(트리페닐)포스포늄 브로마이드의 자동화된 합성 및 정제
Figure pct00006
합성 및 정제를 에커트앤지글러 모듈식 랩 상에서 수행하였다.
[F-18]플루오라이드 (4.67 GBq)로부터 출발하여 (4-[F-18]플루오로벤질)(트리페닐)포스포늄 브로마이드를 이전의 기재 (문헌 [Ravert, Journal Labelled Compounds and Radiopharmaceuticals, 2004, 469]; WO2003065882; WO2006121035)와 유사하게 합성하였다.
아세토니트릴을 함유하는 5 mL의 조 생성물 혼합물을 바이오테지 (Biotage) SNAP 카트리지 (HP-Sil, 10 g, 바이오테지)에 전달하였다. 카트리지를 아세토니트릴로 5분/분으로 세척하였다. 10분 후, 카트리지를 아세토니트릴 (5 ml/분) 중의 10% 에탄올로 세척하였다. 27:14분에서 30:07분까지의 분획을 80 mL 물로 채워진 플라스크에 수집하였다 (도 6). 용액을 C18 카트리지 (셉팍 플러스, 워터스)를 통해 통과시켰다. 카트리지를 10 mL 물로 세척하고, 생성물을 2 mL 에탄올로 용출하였다. 118분의 전체 합성 시간 내에 784 MBq (35% d.c.) 4-[F-18]플루오로벤질)(트리페닐)포스포늄 브로마이드를 수득하였다 (도 7).
실시예 5:
GE 트레이서랩 MX 상에서의 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]플루오로에톡시)에톡시]-에톡시}페닐)비닐]-N-메틸아닐린의 합성 및 정제
Figure pct00007
트레이서랩 MX 상에서의 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]플루오로에톡시)에톡시]-에톡시}페닐)비닐]-N-메틸아닐린의 합성 및 정제를 위해, 키트를 조립하였다 (표 1).
Figure pct00008
MX 모듈 상에서의 카세트의 설치는 도 8에 나타난다.
전구체 2c를 합성 순서 중에 "청색 마개 바이알"로부터의 대략 1.8 mL 아세토니트릴을 사용하여 "적색 마개 바이알" 중에 용해시켰다. 플루오라이드 (2.4 GBq)를 MX 모듈에 전달하고, QMA 카트리지 상에 트래핑하였다. 활성을 "용출액 바이알"로부터의 탄산칼륨/크립토픽스 혼합물로 반응기에 용출하였다. 공비 건조 (가열, 진공, 질소 기류 및 "청색 마개 바이알"로부터의 아세토니트릴의 첨가) 후, 아세토니트릴 중의 2c의 용액을 "적색 마개 바이알"로부터 반응기에 전달하였다. 생성된 혼합물을 10분 동안 120℃에서 가열하였다. HCl을 "녹색 마개 바이알"로부터의 주사기를 통해 반응기에 전달하였다. 혼합물을 5분 동안 110℃에서 가열하였다. 탈보호 중에, "용매 가방 1"로부터의 용매 혼합물 1을 좌측 주사기에 의해 "정제 카트리지"를 통해 씻어내렸다. 조 생성물 혼합물을 "2 mL 주사기"로부터의 나트륨 히드록시드/완충제 혼합물과 혼합하고, "용매 가방 1"로부터의 용매 1로 희석하였다. 희석된 조 생성물 혼합물을 "정제 카트리지"를 통해 통과시켰다. 비-방사성 부산물을 제거하기 위해, "용매 가방 1"로부터의 용매 1을 좌측 주사기에 채워넣고, "정제 카트리지"를 통해 폐기병에 씻어내렸다. 이 절차를 6회 반복하였다. "용매 가방 2"로부터의 용매 2를 우측 주사기에 채워넣고, 좌측 주사기에 전달하였다. 용매 2를 "정제 카트리지"를 통해 좌측 주사기에 의해 씻어내렸다. 제1 분획을 폐기병에 이동되도록 하되, 7.5 mL의 분획은 우측 주사기에 자동으로 수집되었다. 최종적으로, 생성물 분획을 생성물 바이알 (제제 기반 1 및 제제 기반 2로 미리-채워짐)에 전달하였다. 770 MBq (32% 부식에 대해 수정되지 않았음) 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]플루오로에톡시)에톡시]-에톡시}페닐)비닐]-N-메틸아닐린을 58분의 전체 제조 시간 내에 수득하였다. 카트리지 기반 정제는 반-정제용 HPLC에 의해 수득된 순도에 유사한 방사성화학적 및 화학적 순수한 생성물을 제공하였다 (도 9, 도 10).

Claims (15)

  1. 저압 내지 중간압 액체 크로마토그래피를 사용하는 정제 단계를 포함하며, 정지상으로 채워진 하나 이상의 일회용 용기가 사용되는 것인, 방사성추적자의 생성 방법.
  2. 제1항에 있어서, 방사성추적자가 양전자-방출 방사성추적자인 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 정지상이 실리카겔, 변형된 실리카겔, 알루미나, 수지, 중합체, 겔 또는 그의 혼합물 또는 층으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 실리카, 알루미나 A, 알루미나 B, 알루미나 N, 마그네슘 실리케이트, 마그네슘 옥시드, 지르코늄 옥시드, C30, C18, tC18, C8, C4, C2, tC2, 아미노 프로필 (NH2), 시아노 프로필 (CN), 디올, 히드록시아파타이트, 셀룰로스, 흑연화 탄소, 폴리스티렌/디비닐벤젠 중합체, 폴리스티렌/디비닐벤젠 공중합체 또는 그의 혼합물을 포함하는 군으로부터 선택되는 정지상으로 채워진 용기가 사용되는 것인 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 용기가 10 μg 내지 100 g의 정지상으로 채워지는 것인 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 용기가 2 g 내지 20 g의 정지상으로 채워지는 것인 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 액체 크로마토그래피를 위한 용매가 유기 용매, 물, 염, 산 또는 염기 또는 첨가제의 수용액 및 그의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 용기가 방사성추적자의 자동화된 합성에 통합되는 것인 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 방사성추적자가 카세트 유형 모듈 상에서 제조되며, 저압 내지 중간압 크로마토그래피가 절차의 일부인 것인 방법.
  10. 제9항에 있어서, 용기가 카세트 상에서 조립되는 것인 방법.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, F-18 표지된 아릴(또는 헤트아릴)비닐 아닐린 유도체의 제조 방법.
  12. 제11항에 있어서, F-18 표지된 아릴(또는 헤트아릴)비닐 아닐린 유도체가 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]플루오로에톡시)에톡시]에톡시}-페닐)비닐]-N-메틸아닐린, 4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]플루오로에톡시)에톡시]에톡시}피리딘-3-일)비닐]-N-메틸아닐린으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  13. ● 친핵성 방사성플루오르화 단계,
    ● 임의로, 보호기 변형 단계,
    ● 저압 내지 중간압 크로마토그래피를 위한 용기 상에 조 생성물을 로딩하는 단계,
    ● 용기로부터 부산물을 용출하는데 적합한 용매 혼합물로 용기를 세척하며, 여기서 용매가 1 내지 10 바에서 용기를 통해 씻어 내려지는 것인 단계,
    ● 용기로부터 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]플루오로에톡시)에톡시]에톡시}-페닐)비닐]-N-메틸아닐린을 용출하는데 적합한 용매 혼합물 2로, 정제된 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]플루오로에톡시)에톡시]에톡시}-페닐)비닐]-N-메틸아닐린을 용기로부터 용출하며, 여기서 용매가 1 내지 10 바에서 용기를 통해 씻어 내려지는 것인 단계를 포함하는, 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]플루오로에톡시)에톡시]에톡시}-페닐)비닐]-N-메틸아닐린의 제조 방법.
  14. 저압 내지 중간압 액체 크로마토그래피를 위한 용기를 갖는, 방사성추적자의 생성을 위한 키트.
  15. 제14항에 있어서, 방사성추적자의 생성 내에서 1회 사용을 위한 키트.
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