KR20120031625A

KR20120031625A - 혼합 식물 추출물

Info

Publication number: KR20120031625A
Application number: KR1020100093102A
Authority: KR
Inventors: 정의수; 윤재웅; 이규란
Original assignee: 정의수
Priority date: 2010-09-27
Filing date: 2010-09-27
Publication date: 2012-04-04
Also published as: KR101224238B1

Abstract

본 발명은 감국, 잎갈나무, 대황, 족도리풀, 신갈나무, 여뀌, 붓순나무, 현호색, 황련 및 후박나무 혼합 식물 추출물 및 그를 포함하는 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명의 추출물 또는 조성물은 항산화, 항염, 항균, 세포증식 촉진, 탈과립화 억제, 피부 가려움증 개선, 알러지 예방 또는 아토피 피부 개선 활성이 우수하다.

Description

혼합 식물 추출물{Extract of mixed plants}

본 발명은 혼합 식물 추출물과 그를 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 바람직하게는 항산화, 항염, 항균, 세포증식 촉진, 탈과립화 억제, 피부 가려움증 개선, 알러지 예방 또는 아토피 피부 개선 활성을 갖는 추출물과 조성물에 관한 것이다.

아토피는 유아기에 주로 발생하여 태열이라고도 하며 주로 각질층내의 세라마이드(ceramides)의 함량이 감소됨에 따라 발생한다. 아토피는 각질층의 수분유지기능이 떨어짐에 따라 피부가 건조되어 각질이 다량 일어나며, 피부장벽(skin barrier) 기능이 저하됨에 따라 정상피부에서는 침입하기 어려운 항원 단백질등 자극유발물질이 각질층 내로 침입하여 피부 알러지 등이 용이하게 발생하여 심한 소양증을 나타낸다. 그러므로 아토피 환자의 90% 이상이 포도상구균에 감염되어 있는데 이 균은 환자가 가려움을 참지 못해 긁어서 생기기도 하지만 최근의 보고에 의하면 이 세균의 외독소가 우리 몸의 면역체계를 자극하여 알레르기를 일으키는 화학물질을 나오게 하여 아토피를 악화시킨다고 한다.

이러한 아토피 피부의 발생 원인은 크게 네 가지로 나뉜다. 그 중 하나의 원인은 유전적 원인이며, 피부보호기능을 담당하는 피부 보호막인 세포막의 인지질과 각질세포간의 결합물질인 세포간 지질을 구성하는 필수 지방산인 감마-리놀레인산(γ-linoleic acid;GLA)이 부족하여 피부 보호막을 단단하게 만들지 못해 피부표면의 수분이 쉽게 소실되어 외부자극에 의해 쉽게 알러지가 발생하는 것이다. 다른 원인은 환경적 원인이며, 현대인의 주거환경이 아파트로 변화하면서 생활환경이 건조해 짐에 따라 피부 수분 보유력 저하 및 피부보호 기능 상실로 인해 적은 자극에도 민감하게 반응하여 알러지가 발생하게 된다. 또 다른 원인은 활성산소에 의한 것이며, 활성산소에 의해 과산화지질이 생성되어 아토피를 유발하게 된다. 또 다른 원인은 세균, 바이러스, 곰팡이 등에 의해 감염되어 발생한다(피부과학, 대한피부과학회 간행위원회, 여문각, 1992).

따라서, 이러한 아토피를 치료하기 위해서는 항균, 보습, 항염 효과가 우수하며, 부작용이 없고 비용이 저렴한 물질의 개발 및 그 물질을 함유하는 사용이 용이한 화장료의 개발이 필수적이다.

한편, 국화(Chrysanthellum indicum L.)는 국화과(Compositae/Asteraceae)의 여러해살이풀이며 꽃을 건조한 것을 감국(甘菊)이라고 한다. 타이완, 중국, 일본, 우리나라 전국 각지에서 흔히 재배한다. 알려진 성분으로는 아피게닌(aprgenin), 아피게트린 등이 함유되어 있다고 알려져 있다[박종희, 이정규 공저, 상용약용식물도감, 신일상사, 89(2000)].

잎갈나무(Larix leptolepis Sieb. Et Zucc cordon)는 소나무과(Pinaceae)의 식물로 일본산, 국내에 가장 많이 재식되어 있는 낙엽성 침엽 교목이다. 성분으로는 아비에트산(abietic acid), 네오아비에트산(neoabietic acid), 디하이드로아비에틱산(Dihydroabietic acid) 등이 함유되어 있다고 알려져 있다[이영노, 원색한국식물도감, 교학사, 20(1998)].

대황(Rheum Palmatum)은 마디풀과(Polygonaceae)의 여러해살이풀로 우리나라 전국 각지에서 약용식물로 많이 재배한다. 뿌리줄기를 대황(大黃)이라고 하며, 완하, 건위, 행어통경(行瘀通經)의 효능이 있고, 실열변비, 세균성하리, 급성복막염, 토혈, 수종, 혈뇨를 치료한다고 알려져 있다. 줄기를 대황경(大黃莖)이라고 하며, 술을 깨게 하고, 해열의 효능이 있고, 대변불통과 장열을 치료한다고 알려져 있다. 성분으로는 센노사이드(sennoside A, B), 에모딘(emodin), 알로에모딘(aloemodin), 피시온(physcion), 크리소파놀(chyrysophanol) 등이 함유되어 있는 것으로 알려져 있다[배기환 , 한국의 약용식물, 교학사, 90(2000)].

족도리풀(Asarum sieboldii Miq.)은 쥐방울덩굴과(Aristolochiaceae)의 여러해살이풀로 전국의 산 숲 속에서 자라며, 일본, 만주에 분포한다. 뿌리가 달린 전초를 세신(細辛)이라 하며, 거풍, 산한 온폐, 화담, 개규(開竅)의 효능이 있고, 외감풍한, 풍냉두통, 축농증, 치통, 음담해역, 류머티즘에 의한 비통을 치료한다고 알려져 있다. 주성분으로 메틸유제놀(methyleugenol), 아사릴케톤(asarylketone), 사프롤(safrole), 시네올(1,8-cineol), 아사리닌(asarinin), 유카본(eucavone) 등이 함유되어 있다고 알려져 있다[배기환 , 한국의 약용식물, 교학사, 167(2000)].

신갈나무(Quercus mongolica Fisch)는 참나무과(Fagaceae)로 중국, 러시아의 원동지방, 시베리아, 몽골, 일본, 우리나라 전국 각지의 깊은 산중 해발 1,800m 이하에 분포한다. 성분으로는 잎과 껍질에 플라보노이드, 타닌질이 있고, 굵은 줄기의 껍질에는 타닌질이 6 ~ 10%, 어린가지의 껍질에는 11 ~ 16%, 때로는 26%까지, 목질부에는 2 ~ 3.5% 정도 함유되어 있다고 알려져 있다. 잎에는 쿠에르시트린이 함유되어 있다고 알려져 있다[이영노, 한국의 고산식물, 교학사, 45(2000), 약초의 성분과 이용, 일월서각, 173(1999)].

여뀌(Persicaria hydropiper L. Spach)는 마디풀과(Polygonaceae)의 한해살이풀로 전국의 냇가 또는 습지에서 자라며, 북반구 온대에 분포한다. 전초를 수료(水蓼)라고 하며, 화습(化濕), 행체(行滯), 거풍, 소종의 효능이 있고, 토사전근(吐瀉轉筋), 수양성하리(水樣性下痢), 이질, 류머티즘, 옹종, 각기, 개선, 타박상을 치료한다고 알려져 있다. 열매를 요실(蓼實)이라고 하며, 온중, 이수, 파어(破瘀), 산결의 효능이 있고, 토사복통, 부종, 창상을 치료한다고 알려져 있다. 성분으로는 전초에 정유가 0.13% 함유되어 있으며, 주성분은 타데오날(폴리고디알)(tadeonal(polygodial)), 이소타데오날(isotadeonal), 컨페르티폴린(confertifolin), 폴리고논(polygonone)으로 알려져 있다. 정유 이외 성분으로는 페르시카린(persicarin), 히페린(hyperin) 등이 함유되어 있다고 알려져 있다[배기환, 한국의 약용식물, 교학사, 83(2000)].

붓순나무(Illicium verum)는 붓순나무과(Illiciaceae)로 제주, 진도, 완도 및 남쪽 섬 산기슭의 물기 있는 곳이나 골짜기에서 자라며, 일본, 중국, 대만에 분포한다. 열매는 위통, 방광통, 흉부통증을 치료하고, 잎과 가지는 피부병을 치료한다고 알려져 있다. 성분으로는 사프롤(safrol), 유제놀(eugenol), 아네톨(anethol), 아니사틴(anisatin), 네오아니사틴(neoanisatin), 슈도아니사틴(pseudoanisatin), 아니스락톤(anislactone A, B), 일리시논(illicinone A, B, C, D) 등이 함유되어 있다고 알려져 있다[배기환 , 한국의 약용식물, 교학사, 117(2000)].

현호색(Corydalis turtschaninovii BESS.)은 양귀비과(Papaveraceae)의 여러해살이풀로 전국의 산과 들에서 자라며, 일본, 만주, 아물, 우수리에 분포한다. 덩이줄기를 현호색(玄胡索)이라 하며, 활혈, 산어, 이기, 진통의 효능 및 심복통, 요슬통, 월경불순, 산후혈훈을 치료한다고 알려져 있다. 성분으로는 베르베린(Berberine), 코리달린(Corydaline), 디엘 테트라히드로콥티신(dl tetrahydrocoptisine) 등이 있다[배기환 , 한국의 약용식물, 교학사, 180(2000)].

황련(Coptis japonica)은 미나리아재비과(Ranunculaceae))의 여러해살이풀로 일본 원산으로 전국에서 재배한다. 뿌리줄기를 황련이라고 하며, 청열사화, 청심제변, 조습, 해독, 살충의 효능이 있고, 유행성열병, 장티푸스, 비만구역, 세균성설사, 복통, 폐결핵, 구토, 비출혈, 하혈, 소갈, 눈충혈, 구내염을 치료한다고 알려져 있다. 성분으로는 알칼로이드 화합물이 많이 함유되어 있고, 주성분인 베르베린(berberine)이 약 7 ~ 10% 정도이고, 이 외에 콥티신(coptisine), 팔마틴(palmatine), 오바크논(obacunone), 오바크락톤(obaculactone) 등이 함유되어 있다고 알려져 있다[배기환 , 한국의 약용식물, 교학사, 137(2000)].

후박나무(Machilus thunbergii S. et Z.)는 녹나무과(Lauraceae)로 남부 해안, 제주도, 울릉도, 남쪽 섬 바닷가 산기슭에서 자라며, 일본, 중국, 만주에 분포한다. 줄기 껍질을 홍남피(紅楠皮)라고 하며, 좌상근, 전근족종, 토사부지를 치료한다고 알려져 있다. 성분으로는 알파, 베타-피넨(α, β-pinene), 퀘르세틴(quercetin), 카테콜(catechol) 등이 함유되어 있다고 알려져 있다[배기환 , 한국의 약용식물, 교학사, 122(2000)].

현재 일반적으로 사용되고 있는 아토피 피부를 치료하는 방법으로는 1) 보습제 사용, 2) 타르제제 사용, 3) triamcinolone이나 fluocinolone와 같은 외용 스테로이드 제제와 경구용 스테로이드 제제 사용, 4) 자외선 치료, 5) clindamycin, dicloxacilline와 같은 항생제 사용, 6) 항소양제 사용, 7) 면역 조절, 면역 억제, 면역 치료제 사용, 8) 식품, 향기, 한방 요법 등이 있다. 그러나 타르제제는 알코올 성분이 있어 냄새가 좋지 않고 건조한 피부를 자극하는 단점이 있고, 스테로이드 제제는 발진, 피부색 변화 고혈압, 백내장 등의 부작용이 심각하며, 자외선 치료는 햇볕의 화상, 가려움증 유발, 색소 침착과 장기간 치료 시에는 피부의 조기 노화와 암의 위험이 높고, 항생제는 주로 내복약으로 사용되는 단점이 있다. 또한, 면역조절, 억제제 등이 최근 가장 많이 사용되고 있으나 수두, 대상포진 등의 바이러스에 감염된 얼굴에 사용해서는 안되는 등의 사용상에 어려움과 수입에 의존하여 비용이 비싼 경우가 대부분이어서 그 사용에 한계가 있다. 또, 식품요법, 한방치료, 기타 향기요법 등은 사용상의 부작용은 없지만 그 효과가 미비한 경우가 많아 근본적인 치료가 되기 어려워 사용상에 그 한계가 있을 수 있다.

따라서, 항산화, 항염, 항균, 세포증식 촉진, 탈과립화 억제, 피부 가려움증 개선, 알러지 예방 또는 아토피 피부 개선 활성을 위한 기술개발이 필요하다.

본 발명이 해결하고자 하는 하나의 기술적 과제는 항산화, 항염, 항균, 세포증식 촉진, 탈과립화 억제, 피부 가려움증 개선, 알러지 예방 또는 아토피 피부 개선 활성 등을 갖는 혼합 식물 추출물을 제공하는 것이다.

본 발명이 해결하고자 하는 또 하나의 기술적 과제는 항산화, 항염, 항균, 세포증식 촉진, 탈과립화 억제, 피부 가려움증 개선, 알러지 예방 또는 아토피 피부 개선 활성 등을 갖는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명은 감국, 잎갈나무, 대황, 족도리풀, 신갈나무, 여뀌, 붓순나무, 현호색, 황련 및 후박나무 혼합 식물 추출물을 제공한다.

상기 감국은 국화과(Compositae/Asteraceae)의 여러해살이풀인 국화(Chrysanthellum indicum L.)로 바람직하게는 국화의 꽃을 건조한 것일 수 있고, 상기 잎갈나무(Larix leptolepis Sieb. Et Zucc cordon)는 소나무과(Pinaceae)의 식물로 낙엽성 침엽 교목으로 바람직하게는 잎갈나무의 잎부분으로, 잔가지를 포함한 잎부분일 수 있고, 대황(Rheum Palmatum)은 마디풀과(Polygonaceae)의 여러해살이풀로 바람직하게는 대황의 뿌리부분일 수 있고, 족도리풀(Asarum sieboldii Miq.)은 쥐방울덩굴과(Aristolochiaceae)의 여러해살이풀로 바람직하게는 전초 부분일 수 있고, 신갈나무(Quercus mongolica Fisch)는 참나무과(Fagaceae)의 나무로 바람직하게는 잎부분으로, 잔가지를 포함한 잎부분일 수 있고, 여뀌(Persicaria hydropiper L. Spach)는 마디풀과(Polygonaceae)의 한해살이풀로 바람직하게는 전초부분일 수 있고, 붓순나무(Illicium verum)는 붓순나무과(Illiciaceae)의 나무로 바람직하게는 열매부분일 수 있고, 현호색(Corydalis turtschaninovii BESS.)은 양귀비과(Papaveraceae)의 여러해살이풀로 바람직하게는 덩이줄기 부분일 수 있고, 황련(Coptis japonica)은 미나리아재비과(Ranunculaceae))의 여러해살이풀로 바람직하게는 뿌리줄기 부분일 수 있고, 후박나무(Machilus thunbergii S. et Z.)는 녹나무과(Lauraceae) 식물로 바람직하게는 잎부분일 수 있으며, 시중에서 판매되거나 자연에서 직접 채취한 것일 수 있다.

상기 혼합 식물은 다양한 비율로 혼합이 가능하나, 바람직하게는 중량비로 감국 : 잎갈나무 : 대황 : 족도리풀 : 신갈나무 : 여뀌 : 붓순나무 : 현호색 : 황련 : 후박나무는 1~10 : 1~10 : 1~10 : 1~10 : 1~10 : 1~10 : 1~10 : 1~10 : 1~10 : 1~10로 혼합된 것일 수 있다. 상기 중량비는 건조 중량비일 수 있다.

상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 무수 또는 함수 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 헥산, 벤젠, 클로로포름, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 또는 부틸렌 글리콜 중에서 선택된 하나 이상의 용매로 추출한 것일 수 있으며, 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 4의 무수 또는 함수알코올 중에서 선택된 하나 이상으로 추출한 것일 수 있다. 상기 추출물은 바람직하게는 1 ~ 7시간, 섭씨 50~100도에서 추출할 수 있다.

상기 추출물은 공지된 추출법을 이용하여 추출될 수 있으며, 구체적으로 상기 추출물은 감국, 잎갈나무, 대황, 족도리풀, 신갈나무, 여뀌, 붓순나무, 현호색, 황련 및 후박나무 각각의 건조물을 세절하여 혼합하고, 그 건조 중량의 1~15배 부피량의 용매를 부가하여 섭씨 4~30도에서 3~20일간 침적시켜 유효성분을 추출한 후, 감압농축기로 농축하여 수득할 수 있다. 또한, 추출시 용매가 증발되는 것을 방지하기 위하여 냉각 콘덴서를 구비한 추출기로 섭씨 30~100도에서 3~48시간 동안 가열 추출하거나, 섭씨 5~30도에서 1~5일간 침적시켜 추출하고, 감압농축기로 농축하여 추출물을 수득하는 것도 가능하다.

본 발명의 추출물은 항산화, 항염, 항균, 세포증식 촉진, 탈과립화 억제, 피부 가려움증 개선, 알러지 예방 또는 아토피 피부 개선 활성을 가질 수 있다.

또한, 본 발명은 본 발명의 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

상기 추출물은 총 조성물 중 0.1중량%~10중량%로 함유될 수 있고, 총 건조중량에 대하여 0.001~5중량%, 바람직하게는 0.01~3중량% 함유될 수 있다.

상기 조성물은 이로써 제한되는 것은 아니나, 화장수, 크림, 에센스 또는 팩 중에서 선택된 제형일 수 있으며, 상기 화장수는 유연화장수 또는 영양화장수이고, 상기 크림은 영양크림 또는 맛사지크림일 수 있다.

상기 조성물은 항산화, 항염, 항균, 세포증식 촉진, 탈과립화 억제, 피부 가려움증 개선, 알러지 예방 또는 아토피 피부 개선용일 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 기타 화장료의 제형 또는 사용목적 등에 따라 화장료에 허용되는 담체 등을 사용할 수 있다.

본 발명의 추출물 또는 조성물은 피부에 도포할 수 있으며, 체중 60kg 성인기준으로 10mg/kg ~ 1,000mg/kg의 범위 내에서 조절할 수 있다.

본 발명의 추출물 또는 조성물은 항산화, 항염, 항균, 세포증식 촉진, 탈과립화 억제, 피부 가려움증 개선, 알러지 예방 또는 아토피 피부 개선 활성이 우수하다.

도 1은 본 발명의 일 실시예 사용에 따른 피부 개선 효과를 확인한 사진이다.

본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 제시한다. 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

이하에서 언급되는 감국, 잎갈나무, 대황, 족도리풀, 신갈나무, 여뀌, 붓순나무, 현호색, 황련 및 후박나무는 대한민국 강원도 원주 및 인근 지역에서 채취하거나 대한민국 서울 경동시장(이케이디엠)에서 구매한 것이며, 별도 언급이 없는 한 용매 등은 대정화학(대한민국), 삼광화학(대한민국)에서 구입한 것이다.

<실시예 1> 혼합 식물 추출물 제조

세절한 건조 감국(꽃), 잎갈나무(잔가지 포함한 잎), 대황(뿌리), 족도리풀(전초), 신갈나무(잔가지 포함한 잎), 여뀌(전초), 붓순나무(열매), 현호색(덩이줄기), 황련(뿌리) 및 후박나무(잎) 각 10g씩(건조중량 기준)을 혼합한 혼합물에 증류수 2kg을 넣고 냉각콘덴서가 달린 추출기에서 섭씨 100도로 5시간 끓여 추출한 후 뜨거울 때 300메쉬 여과지로 여과하고, 오염되지 않도록 밀봉하여 1주일간 실온에서 방치하여 침전물을 여과(에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GF/C 47mm 여과지로 2번 여과)시켰다. 그리고 감압농축기로 섭씨 50도에서 농축한 후 스프레이드라이어(BUCHI사)로 건조시켜 건조 중량 43.2g의 추출물을 제조하였다.

<실시예 2~9> 용매별 혼합 식물 추출물 제조

하기 표 1의 용매를 사용한 것을 제외하고, 실시예 1과 동일한 방법으로 추출하여 실시예 2~9의 추출물을 제조하였다. 수득량을 하기 표 1에 함께 나타내었다.

[표 1]

<실시예 10> 혼합 식물 추출물 함유 화장수 제조

실시예 2와 동일한 방법으로 제조한 추출물을 함유한 화장수(스킨로션)를 하기 표의 함량으로 하기 방법에 의해 제조하였다.

[표 2]

상기 표 중 9번 원료에 2, 3, 4, 7번 원료를 순서대로 투입하고 교반하여 용해물을 제조하였다. 그 후 5번 원료를 섭씨 60도로 가열하여 용해시킨 후, 8번 원료를 투입하여 용해한 후 상기 용해물에 투입하였다. 마지막으로 1, 6번 원료를 상기 용해물에 투입하여 충분히 교반한 후 숙성시켜 화장수를 제조하였다.

<실시예 11> 혼합 식물 추출물 함유 로션 제조

실시예 2와 동일한 방법으로 제조한 추출물을 함유한 영양로션을 하기 표의 함량으로 하기 방법에 의해 제조하였다.

[표 3]

상기 표 중 10, 11, 13, 15번 원료를 혼합 교반하면서 섭씨 80~85도로 가열하여 유화기에 투입하고, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9번 원료를 섭씨 80~85도로 가열하여 유화기에 투입하여 유화시켰다. 유화가 끝나면 12번 원료를 교반기를 이용하여 교반하면서 섭씨 50도까지 냉각한 후 14번 원료를 투입하고 섭씨 35도까지 냉각한 뒤 1번 원료를 투입하여 섭씨 25도까지 냉각한 후 숙성시켜 영양로션을 제조하였다.

<실시예 12> 혼합 식물 추출물 함유 크림 제조

실시예 2와 동일한 방법으로 제조한 추출물을 함유한 영양크림을 하기 표의 함량으로 하기 방법에 의해 제조하였다.

[표 4]

상기 표 중 12, 13, 15, 16, 17번 원료를 혼합교반하면서 섭씨 80~85도로 가열하여 유화기에 투입하고, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11번 원료를 섭씨 80~85도로 가열하여 용해한 후 유화기에 투여한 후 유화시켰다. 유화가 끝난 후 14번 원료를 투입하고 교반기로 교반하며 섭씨 35도까지 냉각한 뒤 1번 원료를 투입하여 섭씨 25도까지 냉각한 후 숙성시켜 영양크림을 제조하였다.

<실시예 13> 혼합 식물 추출물 함유 에센스 제조

실시예 2와 동일한 방법으로 제조한 추출물을 함유한 에센스를 하기 표의 함량으로 하기 방법에 의해 제조하였다.

[표 5]

상기 표에서 2,3,4,4,6번 원료를 일정한 온도에서 균질화하여 비이온계 양친매성 지질을 제조하였다. 상기 비이온계 양친매성 지질과 1, 7, 8, 13번 원료를 혼합하고 일정한 온도에서 균질화하여 마이크로플루다이져(Microfluidics Co. 미국)를 통과시키고, 이어 9번 원료를 섭씨 50~60도로 가온한 후 서서히 첨가하여 균질화한 후 다시 마이크로플로다이져에 다시 통과시켰다. 그 후 , 10, 11, 12, 13번 원료를 투입하여 분산시켜 안정화하고 숙성시켜 에센스를 제조하였다.

<실험예 1> 세포 무독성 및 세포증식 촉진 효과 확인

실시예 2와 동일한 방법으로 제조한 추출물에 대하여 세포 독성 및 세포증식 촉진 효과를 측정하였다.

1-1. 실험방법

코람바이오텍(대한민국, 서울)에서 입수하여 배양하고 있는 세포(파이브로블라스트, 3T3)를 96웰 마이크로플레이트에 5,000세포/웰로 분주하여 30분간 항온조에서 배양하고, 시료를 농도별 각각 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1.0 %(W/V)로 투입하여 72시간 동안 배양하였다. 그리고, 티아졸린 블루(Thiazoline blue)를 투여하고 4시간 동안 추가 배양하였다. 배양액을 모두 버리고 마이크로플레이트의 각 웰에 반응 정지액(acidic isopropanol)을 가하고 5분간 교반한 후, 570nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군은 시료 주입량 만큼 10%우태아혈청(Fetal Bovine Serum, FBS) 배지를 투여하여 세포 성장의 최적 조건으로 동시배양을 하였으며, 대조군의 세포증식을 100%로 하고 시료 투입 실험군의 세포 증식율을 계산하였다.

1-2. 실험결과

세포증식율은 하기 식으로 산출하였고, 그 결과는 하기 표에 나타내었다.

[식 1]

세포증식율(%)=(추출물처리 군 흡광도-대조군 흡광도)/대조군 흡광도X100

[표 6]

상기 표에서 보는 바와 같이, 실시예 2 추출물은 세포 독성을 나타내지 않으며, 농도 의존적으로 세포 증식율을 증가시킴을 알 수 있다. 따라서, 본 발명의추출물에 의해 세포 증식이 촉진됨을 알 수 있다.

<실험예 2> 항산화 효과 확인(자유라디칼 소거 실험)

실시예 2와 동일한 방법으로 제조한 추출물에 대하여 자유라디칼 소거효과를 측정하여 항산화 효과를 확인하고자 하였다.

2-1. 실험방법

DPPH(1,1-디페닐-2피크릴-히드라질)법(Blois. M. S. Nature 181, 1190, 1958)을 사용하여 실험을 수행하였으며, DPPH와 퀘르세틴(Quercetin)은 시그마사(미국)의 것을 사용하였다. 0.2mM DPPH 메탄올 용액 1ml에 2ml의 실시예2 추출물 또는 퀘르세틴(각각 5, 10, 20, 30ppm)의 에탄올 용액을 첨가하고 잘 교반한 후 실온에서 10분간 반응시켰다. 그 후 517nm에서 흡광도를 측정하였으며, 이 때 공시험으로 각 시료 대신 정제수를 사용한 군을 대조군으로 하였다. 상기 퀘르세틴을 처리한 군을 양성대조군으로 하였다.

2-2. 실험결과

하기 식을 이용하여 자유라디칼 소거율을 구하고, 그 결과를 하기 표에 나타내었다.

[식 2]

자유라디칼 소거율(%)=100-(각 시료의 반응 흡광도/대조군의 반응 흡광도)X100

[표 7]

상기 표에서와 같이, 자유라디칼 소거 효과가 알려져 있는 퀘르세틴에 대해서 농도 의존적으로 효과를 나타내는 것으로 부터 실험이 정상적으로 이루어졌음을 알 수 있다. 또한, 실시예 2 추출물은 농도 의존적으로 자유라디칼을 소거시키며, 그 결과 항산화작용을 나타냄을 알 수 있다. 따라서, 본 발명의 추출물에 의해 항산화 작용을 나타냄을 알 수 있다. 또한, 자유라디칼 50% 소거 농도(SC₅₀)를 계산한 결과 실시예 2의 경우 12.52ppm, 퀘르세틴의 경우 9.88ppm이었다. 이와 같은 결과로부터, 자유라디칼 50% 소거 농도(SC₅₀)가 자유라디칼 소거에 양호한 효과를 나타내는 퀘르세틴에 근접하게 나타난 것으로 보아 본 발명의 추출물이 매우 효과적임을 재확인할 수 있다. 또한, 퀘르세틴은 단일 물질로, 추출되거나 합성될 경우 비용면이나 안전성 면에서 본 발명의 추출물이 더욱 효과적임을 알 수 있다.

<실험예 3> 항염증효과 확인(리폭시게나아제 활성 억제 확인 실험)

실시예 2와 동일한 방법으로 제조한 추출물에 대하여 리폭시게나아제 확성 억제 실험을 실시하여 항염증 효과를 확인하고자 하였다.

3-1. 실험방법

TBARS법을 사용하여 하기와 같이 실험하였다. 실험에 사용한 리놀산(Linoleic acid), 리폭시게네이즈(Lipoxygenase), 티오바비툴산(Thiobarbitulic acid) 및 퀘르세틴은 시그마사(미국)의 것을 사용하였다. 1mM의 리놀산 1ml에 실시예 2와 퀘르세틴을 각각 0.05ml(각각 1, 5, 10, 20, 30ppm)를 첨가하고 리폭시게네이즈 0.95ml를 투여 후, 잘 교반하고 섭씨 25도에서 10분간 반응시켰다. 그리고, 트리클로로아세트산(Tricholroacetic acid)을 0.5ml 투여하고 티오바비툴산 1ml 첨가하고 10분간 가열한 후 얼음물에서 2~3분간 냉각시켜 반응을 종결시켰다. 종결된 반응액에 부탄올 2ml를 넣고 4000g로 5분간 원심분리한 후 535nm에서 흡광도를 측정하였다. 이 때 각 시료 대신 정제수를 사용하여 대조군으로 하였다.

3-2. 실험결과

하기 식을 이용하여 리폭시게네이즈 활성억제율을 구하고, 그 결과를 하기 표에 나타내었다.

[식 3]

리폭시게네이즈 활성억제율(%)=100-(각 시료의 반응 흡광도/대조군의 반응 흡광도)X100

표 8]

상기 표에서와 같이, 리폭시게네이즈 활성 억제 효과가 알려져 있는 퀘르세틴에 대해서 농도 의존적으로 효과를 나타내는 것으로 부터 실험이 정상적으로 이루어졌음을 알 수 있다. 또한, 실시예 2 추출물은 농도 의존적으로리폭시게네이즈 활성을 억제하며, 그 결과 항염증 작용을 나타냄을 알 수 있다. 따라서, 본 발명의 추출물에 의해 항염증 작용을 나타냄을 알 수 있다. 또한, 리폭시게네이즈 50% 활성 억제 농도(IC₅₀)를 계산한 결과 실시예 2의 경우 15.69ppm, 퀘르세틴의 경우 16.46ppm이었다. 이와 같은 결과로부터, 리폭시게네이즈 50% 활성 억제 농도(IC₅₀)가 리폭시게네이즈 활성 억제에 양호한 효과를 나타내는 퀘르세틴 보다 뛰어난 것으로 보아 본 발명의 추출물이 매우 효과적임을 알 수 있다.

<실험예 4> 항염증 효과 확인(히아루로니다아제 활성 억제 확인 실험)

실시예 2와 동일한 방법으로 제조한 추출물에 대하여 히아루로니다아제 확성 억제 실험을 실시하여 항염증 효과를 확인하고자 하였다.

4-1. 실험방법

Morgan-Elson법을 응용하여 하기와 같이 실험하였다. 히아루로니다아제(Hyaluronidase)의 최종 효소 활성을 400NF unit/ml, 히알루론산의 최종 농도를 0.4mg/ml로 하고, 활성제인 화합물 Compound 48/80 완충용액(0.1mg/ml)을 사용하여 히아루로니다아제 활성을 측정하였다. 실시예 2의 추출물을 완충용액에 용해하여 시료 용액(각각, 0.5, 1, 3, 5%)으로 하고, 대조군은 시료 용액 대신 녹차 추출물을 사용하였다. 또한, 각각의 공시험으로는 효소용액 대신 완충용액을 사용하였다.

4-2. 실험결과

하기 식을 이용하여 히아루로니다아제 활성억제율을 구하고, 그 결과를 하기 표에 나타내었다.

[식 4]

히아루로니다아제 활성억제율(%)=100-(각 시료의 반응 흡광도/대조군의 반응 흡광도)X100

[표 9]

상기 표에서와 같이, 히아루로니다아제 활성 억제 효과가 알려져 있는 녹차추출물에 대해서 농도 의존적으로 효과를 나타내는 것으로 부터 실험이 정상적으로 이루어졌음을 알 수 있다. 또한, 실시예 2 추출물은 농도 의존적으로 히아루로니다아제 활성을 억제하며, 그 결과 항염증 작용을 나타냄을 알 수 있다. 따라서, 본 발명의 추출물에 의해 항염증 작용을 나타냄을 알 수 있다. 또한, 히아루로니다아제 50% 활성 억제 농도(IC₅₀)를 계산한 결과 실시예 2의 경우 1.19%, 퀘르세틴의 경우 2.47%이었다. 이와 같은 결과로부터, 히아루로니다아제 50% 활성 억제 농도(IC₅₀)가 히아루로니다아제 활성 억제에 양호한 효과를 나타내는 녹차추출물 보다 뛰어난 것으로 보아 본 발명의 추출물이 매우 효과적임을 알 수 있다.

<실험예 5> 탈과립화 억제 효과 확인

실시예 2와 동일한 방법으로 제조한 추출물에 대하여 하기 방법으로 실험하여 면역세포의 탈과립화 효과를 확인하고자 하였다.

실시예 2와 동일한 방법으로 제조한 추출물을 RBL-2H3 세포주(Rat mast cell line; 코람바이오텍, 대한민국)에 처리하여 안티젠에 의한 탈과립화를 억제하는 효과를 확인하였다.

RBL-2H3 세포주를 1% 어린 소 혈청(Fetal bovine serum)과 L-글루타민을 포함하는 둘베코(Dulbeccos)에 의해 수정된 이글(Eagle)의 배지(Dulbeccos' modified Eagle's medium, 이하 DMEM)을 이용하여 섭씨 37도, 5% CO2 인큐베이터에서 배양하며, 고착성을 갖는 세포를 트립신(Trypsin)-EDTA 용액을 사용하여 부유시키고, 이를 분리, 회수하여 실험에 이용하였다.

RBL-2H3 세포주를 활성인자(Dinitrophenol-conjugated human serum albumin (DNP-HSA)-specific Ig E)로 활성화 시킨 후, 활성화된 세포에 안티젠(DNP-HSA) 50ng/ml을 처리하고 실시예 2 추출물을 각각 0, 5, 25, 125μg/ml로 처리하여 60분 동안 배양하였다. 이후 엘리사 리더(ELISA reader)를 이용하여 배지 내로 분비된 베타-헥소사미니다제(hexosaminidase) 양을 측정하였다. 베타-헥소사미니다제 분비 양의 억제는 면역세포의 탈과립화를 억제함을 의미한다. 즉, β-hexosaminidase 분비양이 감소하는 것은 면역세포의 탈과립화가 억제되어짐을 의미하는 것이다. 하기 표의 면역세포 탈과립화 억제율은 하기 식으로 구하였으며, 실시예 2 추출물을 0μg/ml로 처리한 군, 즉 실시예 2 추출물 무처리군을 대조군으로 하였다.

[식 5]

면역세포탈과립화억제율(%)=(대조군 β-hexosaminidase 분비 양-추출물 처리 군 β-hexosaminidase 분비 양)/대조군 β-hexosaminidase 분비 양X100

[표 10]

표에서 확인할 수 있는 바와 같이, 실시예 2 추출물은 농도의존적으로 면역세포 탈과립화를 억제함을 알 수 있다. 또한, 면역세포탈과립화 50% 억제 농도(IC₅₀)를 계산한 결과 34.70μg/ml이었다.

<실험예 6> 항균 효과 확인

실시예 2와 동일한 방법으로 제조한 추출물에 대하여 하기 방법으로 실험하여 항균 효과를 확인하고자 하였다.

실시예 2와 동일한 방법으로 제조한 추출물을 5%함수에탄올(용해시킬 수 있는 최소한의 에탄올 함량)에 용해하여 0.1중량% 농도로 조절하여 항균력 평가의 시료로 사용하였다. 하기 표에 기재된 각각의 병원미생물(한국미생물보존센터,KCCM)을 액체 배양하여 soft agar배지(tryptone 1g, yeast extract 0.5g, NaCl 1g, agar 0.5g, D.W 100mL) 3mL에 혼합한후, LB 평판배지{tryptone 10g, yeast extract 5g, NaCl 10g, agar 15g, D.W(증류수) 1L}에 붓고 상기의 시료를 점적한 paper disk(직경 6mm)를 배지 중앙에 올려놓고 24시간 동안 배양한 후, clear zone의 길이를 재어 생육 억제환을 측정하였으며, 대조군은 희석용매인 D.W로 하였다. 그 결과를 하기 표에 기재하였다.

[표 11]

상기 표에서 보는 바와 같이, 실시예 2의 추출물은 다양한 병원미생물을 억제함을 알 수 있다. 따라서, 본 발명의 추출물은 항균 효과가 있음을 확인하였다.

<실험예 7> 아토피 피부 개선효과 확인

실시예 12와 동일한 방법으로 제조한 크림에 대한 아토피 피부 개선 효과 확인을 위한 임상시험을 실시하였다.

실시예 12의 크림의 아토피 피부의 개선 효과를 평가하기 위해, 아토피성 피부를 가지고 한의원 및 병원에 내원하여 치료받는 소인 30명을 대상으로 다음과 같은 실험을 실시하였다. 시험 시료를 전신에 도포하되, 가능한 시험시료의 효과에 영향을 미칠 수 있는 다른 보습제의 사용은 금지하였다. 시험 시료를 도포한 지 1, 2, 4, 8주 후의 효과를 스코래드 SCORAD:SCORing Atopic Dermatitis) 측정법으로 평가하여 그 결과를 하기 표 에 나타내었다.

1) 판정기준

① 정도 기준(Extent criteria) : 면적 = 피손부위/100

② 강도 기준(intensity criteria)

- 홍반 (1/2/3)

- 부종 (1/2/3)

- 삼출 (1/2/3)

- 피부 벗겨짐 (1/2/3)

- 태선화 정도 (1/2/3)

- 건조 정도 (1/2/3)

③ 주관적 기준

- 가려움 (1-10)

- 불면증 (1-10)

*스코래드 계산 = (정도기준/5) + (강도기준/7) + 주관적기준

하기 표에서 개선율은 하기 식에 의해 계산하였다.

[식 6]

아토피 개선율(%)=((0주차 스코래드값-각 주차의 스코래드 값) /0주차 스코래드값)X100

[표 12]

상기 표에서 보는 바와 같이, 실시예 12의 크림이 아토피 피부 개선 효과가 우수함을 알 수 있다. 특히, 8주 후, 90% 이상의 우수한 개선 효과를 나타내었다.

임상시험 결과 중 일 예를 도 1에 나타내었다. 그 결과 시간 경과에 따라 피부상태가 개선되는 것을 확인할 수 있다.

한편, 보호자가 느끼는 아토피 피부염 완화 효과를 살펴보기 위하여, 실시예 12의 크림(처방예)을 1개월 동안 사용한 후, 사용자의 부모가 하기 표13에 기재된 판정 기준에 따라 피부염의 가려움증, 홍반 변화, 피부 건조증에 대한 만족도와 함께 전반적인 피부염 개선 정도 및 부작용 여부를 평가하도록 하여 그 평균값을 하기 표14에 나타냈다.

[표 13]

[표 14]

상기 표에서 보는 바와 같이, 실시예 12의 크림은 피시험자인 아토피성 피부를 갖는 소아에 대하여 전 항목에서 개선 효과가 있음을 확인할 수 있다.

따라서, 본 발명의 추출물은 아토피성 피부에 효과적임을 알 수 있다.

Claims

감국, 잎갈나무, 대황, 족도리풀, 신갈나무, 여뀌, 붓순나무, 현호색, 황련 및 후박나무 혼합 식물 추출물.
제1항에 있어서, 중량비로 감국 : 잎갈나무 : 대황 : 족도리풀 : 신갈나무 : 여뀌 : 붓순나무 : 현호색 : 황련 : 후박나무는 1~10 : 1~10 : 1~10 : 1~10 : 1~10 : 1~10 : 1~10 : 1~10 : 1~10 : 1~10인 추출물.
제1항에 있어서, 물, 탄소수 1 내지 4의 무수 또는 함수 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 헥산, 벤젠, 클로로포름, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 또는 부틸렌 글리콜 중에서 선택된 하나 이상의 용매로 추출한 추출물.
제3항에 있어서, 상기 용매는 물, 탄소수 1 내지 4의 무수 또는 함수알코올 중에서 선택된 하나 이상인 추출물.
제1항에 있어서, 1 ~ 7 시간 추출한 추출물.
제1항에 있어서, 섭씨 50~100도에서 추출한 추출물.
제1항에 있어서, 항산화, 항염, 항균, 세포증식 촉진, 탈과립화 억제, 피부 가려움증 개선, 알러지 예방 또는 아토피 피부 개선 활성을 갖는 추출물.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 추출물을 함유하는 화장료 조성물.
제8항에 있어서, 상기 추출물은 조성물 중 총 건조중량에 대하여 0.001~5중량% 포함하는 것인 조성물.
제8항에 있어서, 화장수, 크림, 에센스, 또는 팩 중에서 선택된 제형인 조성물.
제8항에 있어서, 항산화, 항염, 항균, 세포증식 촉진, 탈과립화 억제, 피부 가려움증 개선, 알러지 예방 또는 아토피 피부 개선용인 조성물.