KR20120005025A

KR20120005025A - 허혈 재관류 관련 부종 치료방법

Info

Publication number: KR20120005025A
Application number: KR1020117026569A
Authority: KR
Inventors: 토마스 마이클 이건
Original assignee: 더 유니버시티 오브 노쓰 캐롤라이나 엣 채플 힐
Priority date: 2009-04-09
Filing date: 2010-04-09
Publication date: 2012-01-13
Also published as: MX2011010616A; SG175133A1; CN102458113A; EP2416651A1; CA2757998A1; US20120064044A1; BRPI1010516A2; ZA201107815B; AU2010233151A1; EA201101349A1; WO2010118334A1; IL215604A0; JP2012523432A; EP2416651A4

Abstract

본 발명 주제는 허혈 재관류 관련 부종을 방지하거나 감소하는 방법과 조성(composition)에 관한 것입니다.

Description

허혈 재관류 관련 부종 치료방법{METHODS OF TREATING EDEMA RELATED TO ISCHEMIA-REPERFUSION}

약어 목록

℃ = 섭씨 온도

AGP = 아미노알킬그루코사미나이드 포스페이트(aminoalkyl glucosaminide phosphate)

AMs = 페포 대식세포(alveolar macrophages)

ARDS = 성인 호흡기 통증 증후군(Adult Respiratory Distress Syndrome)

BAL = 기관지 세척(bronchoaveolar lavage)

BMT = 골수이식(bone marrow transplant)

β-gal = 베타-갈락토시다제(β-galactosidase)

CO₂ = 이산화탄소

dpi = 인치당 점의 개수(dots per inch)

EBD = 에반스 블루 염료(Evans blue dye)

EDTA = 에틸렌디아민 테트라아세틱 산(ethylenediamine tetraacetic acid)

EGTA = 에틸렌 글리콜 테트라아세틱 산(ethylene glycol tetraacetic acid)

FBS = 치명적 소의 혈청(fetal bovine serum)

FiO₂ = 흡입된 산소의 비율(fraction of inspired oxygen)

Fluc = 반딧불 형광효소(firefly luciferase)

g = 상대 원심력(relative centrifuge force)

Gy = 그레이(gray)

HCl = 염산(hydrochloric acid)

HEPES = N-2-하이드록시에틸파이퍼라진-N'-2-에탄설포닉 산(N-2-hydroyethylpiperazine-N'-2'ethanesulfonic acid)

HMVECs = 인체의 폐 미세혈관 내피 세포 (human pulmonary microvascular endothelial cells)

hr = 시간 (hours)

ICAM-1 = 세포간의 부착 분자-1(intercellular adhesion molecule-1)

IRI = 허혈 재관류 손상(ischemia-reperfusion injury)

LDH = 락테이트 디하이드로지나제(lactate dehydrogenase)

LPS = 리포폴리사카라이드 (lipopolysaccharide)

MAPKs = 미토겐 활성화 단백질 키나제(mitogen activated protein kinase)

㎍ = 마이크로그렘

㎕ = 마이크로리터

㎛ = 마이크론

μM = 마이크로몰러

mg = 밀리그램

min = 분

㎖ = 밀리리터

NF-κB = 핵요소-카파 B (nuclear factor-kappa B)

NHBD = 심장이 뛰지 않는 기증자 (non-heart-beating donor)

nm = 나노미터

O₂ = 산소분자

PAMP = 병원균-관련 분자 패턴(pathogen-associated molecular patterns)

PBS = 포수페이트 완화 살린(phosphate buffered saline)

PEEP = 호기말 양압(positive end-epiratory pressure)

PGN = 펩티도글리칸(peptidoglycan)

PMSF = 페닐메탄설포닐플루오라이드(phenlymethanesulphonylfluoride)

RPMI = 로스웰 파크 메모리얼 연구소(Roswell Park Memorial Insititute)

SDS-PAGE = 나트륨 도데실 설페이트 폴리아크릴아마이드 겔 전기이동(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis)

SIRS = 전신 염증반응증후군(Systematic Inflammatory Rersponse Syndrome)

TBS = 트리스-완화 살린(tris-buffered saline)

TLR2 = 톨 모양 수용체 2(Toll-like Receptor 2)

TLR4 = 톨 모양 수용체 4(Toll-like Receptor 4)

TPCK = L-1-토실아미도-2-페닐에틸 클로로메틸 케톤(L-1-tosylamido-phenylethyl chloromethly ketone)

Tris = 트리스(하이드록시메틸)아미노 메탄(tris(hydroxymethyl)amino methane

W/D = 젖은 무게의 건조된 무게에 대한 비율(wet to dry weight ratio)

급성 호흡부전 증후군(aute iung injury)은 패혈증(sepsis), 전신 염증 반응(systemic inflammatory response), 성인 호흡기 통증 증후군의 특징이다. 급성 호흡부전 증후군의 결과는 병인(etiology)에 무관하게 심장과 관련 없는 폐 관련 부종(non-cardiogenic pulmonary edema)과 가스 교환의 손상을 일으킨다. 급성 호흡부전 증후군에 기인한 폐 관련 부종을 일으키는 역학은 잘 이해되어 있지 않다. IRI(ischemia-reperfusion injury)는 빈번하게 폐 이식(transplant) 이후 즉시 급성 호흡부전의 형태로 발생하는 질병률(morbidity)와 사망률(mortality)를 야기하는 합병증이다.(King et al ., Ann . Thorac . Surg., 69, 1681-1685 (2000)을 참조)

허혈의 인터벌 후의 재관류(reperfusion)는 보충(complement)과 응고(coagulation)의 캐스케이드(cascade)를 포함하는 선천적 면역 시스템의 요소(component)가 관여하는 염증 반응을 야기한다. 조직질실의(parenchymal) 그리고 골수(myeloid) 조직의 세포 모두는 유리기(free radical), 산화 질소(nitric oxide), 프로(pro)와 안티(anti)의 염증성 시토카인(cytokine)을 만들어 낸다.(de Perrot et al., Am . J. Respir . Crit . Care Med., 167(4), 490-511 (2003); deGroot and Rauen, Transplant Proc., 39(2), 481-484); Mollen et al., Shock, 26(5), 430-437 (2006)를 참조)

폐 IRI에 대한 더 많은 이해는 여러 유형의 급성 호흡부전 증후군과 관련할 것이며, 많은 수의 환자뿐만 아니라, 폐 이식(transplant) 환자에게도 도움을 줄 수 있을 것이다. 특히, 이러한 지식은 폐 이외의 장기(organ)에서의 허혈 재관류와 관련된 부종을 갖는 환자에게도 도움이 될 것이다.

공개된 본 주제의 목적은 허혈 재관류와 관련된 부종과 같은 부종을 방지하거나 감소하는 방법과 조성을 제공하는 것이다.

위에서 기술되어 공개된 본 주제 내용의 목적은 공개된 본 주제에 의해 전체적으로 또는 부분적으로 성취되었으며, 다른 목적들은 이하의 최선으로 설명되어 첨부된 예들과 도면과 연관하여 설명함으로써 명확하여 질 것이다.

어떤 실시 예에서, 공개된 본 주제 내용은 조직(tissue)에서 부종을 방지 또는 감소시키는 방법을 제공하며, 그 방법은 화학식 (1)의 화합물의 효과적인 양을 조직(tissue)과 접촉하는 것을 포함하며, 화학식 (1)은 다음과 같다:

,

여기서:

n은 1에서 6 사이의 정수;

X₁은 O(산소) 또는 S(황);

X₂는 O(산소) 또는 S(황);

R₁, R₂, R₃는 각각 C₂-C₁₆ 아실(acyl) 이며, 여기서 R₁, R₂, R₃ 중 적어도 하나는 C₂-C₇ 아실(acyl);

R₄는 H(수소), 하이드록실알킬(hydroxylalkyl), -C(=O)NH₂, -(CH₂)_mC(=O)OH로 이루어지는 그룹에서 선택하고, 여기서 m은 0과 2 사이의 정수이고;

R₅, R₆, R₇은 각각 C₁₀-C₁₂ 알킬 (alkyl) 또는 약학적으로 허용되는 이들의 염이다.

어떤 실시 예에서, n은 1이다. 어떤 실시 예에서 X₁, X₂는 각각 O(산소)이다. 어떤 실시 예에서 R₄는 -C(=O)OH이다. 어떤 실시 예에서, R₁, R₂, R₃는 각각 C₂-C₇ 아실(acyl) 이다.

어떤 실시 예에서, 화학식 (1)의 화합물은: n은 1; X₁은 산소 O; X₂는 산소 O; R₁, R₂, R₃는 각각 -C(=O)(CH₂)₄CH₃; R₄는 -C(=O)OH; R₅, R₆, R₇은 각각 -(CH₂)₁₀CH₃ 또는 약학적으로 허용되는 이들의 염이다.

어떤 실시 예에서, 부종(edema)은 허혈 재관류와 관계가 있다. 어떤 실시 예에서, 허혈 재관류는 심근경색(myocardial infration)과 중풍(stroke)과 관계가 있다. 어떤 실시 예에서, 허혈 재관류는 심장 수술 도중의 심장마비 또는 정형외과의 수술의 결과 생기는 골격근에서의 허혈 재관류와 관계가 있다. 어떤 실시 예에서 허혈 재관류는 장기(organ) 또는 조직(tissue)의 이식(transplant)과 관련이 있다. 어떤 실시 예에서 상기 조직(tissue)의 이식(transplant)은 피부, 근육, 또는 연조직(soft tissue) 이식(transplant)과 관계가 있다. 어떤 실시 예에서, 상기 조직(tissue) 이식(transplant)은 자가 조직(autologous tissue)의 이식(transplant)이다.

어떤 실시 예에서, 상기 화합물의 효과적인 양과 상기 조직(tissue)과의 접촉은 허혈 전, 허혈 도중 또는 허혈의 일정 인터벌 후에 이루어진다.

어떤 실시 예에서, 상기 조직(tissue)은 심장, 간, 신장, 뇌, 작은창자, 큰창자, 췌장, 골격근, 피부, 연조직(soft tissue), 폐 조직(lung tissue)으로 이루어지는 군에서 선택한다. 어떤 실시 예에서, 상기 조직(tissue)은 장기(organ) 기증자로부터 받은 것이다. 어떤 실시 예에서, 상기 조직(tissue)은 폐 이식(transplant) 기증자의 폐 조직(tissue) 이다. 어떤 실시 예에서, 폐 장기(organ) 기증은 사람으로부터 기증받은 것이다. 어떤 실시 예에서, 장기(organ) 기증자는 심장이 뛰지 않는 기증자이다.

어떤 실시 예에서, 상기 화합물은 톨 모양 수용체 2 (Toll-like receptor 2, TLR2) 또는 톨 모양 수용체 4 (Toll-like receptor 4, TLR4)의 모두 또는 그중 하나에 대해 작용제(antagonist)이다. 어떤 실시 예에서, 상기 화합물은 TSR2와 TLR4 모두에 대한 작용제(antagonist)이다.

어떤 실시 예에서, 공개된 본 주제 내용은 부종의 치료가 필여한 주체(subject)에서 부종을 방지 또는 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은: 상기 주체에게 화학식(I)의 화합물 또는 그것의 약학적으로 허용되는 염(salt)dml 효과적인 투여하는 것을 포함(comprise) 한다.

어떤 실시 예에서, 공개된 본 주제 내용은 장기(organ) 또는 조직(tissue) 이식(transplant)에 있어서 허혈 재관류와 관계되는 부종을 방지 또는 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은: 이식(transplant)을 위해 장기(organ) 또는 조직(tissue)를 제공하는 것; 화학식(1)의 화합물 또는 그것의 약학적으로 허용되는 염(salt)을 상기 장기(organ) 또는 조직(tissue)에 접촉하는 것; 상기 이식(transplant)을 필요로 하는 주체(subject)에 처리된 상기의 장기(organ) 또는 조직(tissue)을 이식(transplant)하는 것을 포함하는 방법으로, 상기 화합물로 처리하지 않은 장기(organ) 또는 조직(tissue)을 이용하여 이식(transplant)하는 것에 비해 허혈 재관류와 관계되는 부종을 방지 또는 감소시킨다.

어떤 실시 예에서, 상기 장기(organ)나 조직(tissue)은 심장 또는 심장 조직(tissue), 간 또는 간 조직(tissue), 신장 도는 신장 조직(tissue), 췌장 또는 췌장 조직(tissue), 작은 또는 큰창자의 조직(tissue), 골격근 조직(skeletal muscle tissue), 연조직(soft tissue), 폐 또는 폐 조직(tissue), 뇌 조직(tissue)으로 이루어지는 군에서 선택한다. 어떤 실시 예에서, 장기(organ)나 조직(tissue)는 폐나 페 조직(tissue)이다. 어떤 실시 예에서, 상기 장기(organ) 또는 조직(tissue)은 심장이 뛰지 않는 장기(organ) 기증자로부터 받은 것이다.

어떤 실시 예에서, 상기의 접촉은 폐 조직 기증자의 기도(airway)를 통하거나, 폐 정맥과 페 동맥의 탈체 관류 순환(ex vivo perfusion cicuit) 중 하나를 통해 행하여진다.

어떤 실시 예에서, 상기 조직(tissue)은 피부 조직(tissue), 골격근 조직(skeletal muscle tissue) 또는 연조직(soft tissue)중의 하나이다. 어떤 실시 예에서, 상기 조직 이식(tissue transplant)은 자가 조직 이식(autologous tissue transplant)이다.

어떤 실시 예에서, 상기 화합물은 TLR2 와 TLR4중 하나 또는 모두의 작용제(agonist)이다. 어떤 실시 예에서, 상기 화합물은 TSR2와 TLR4 모두에 대한 작용제(antagonist) 이다.

어떤 실시 예에서, n은 1이다. 어떤 실시 예에서 X₁, X₂는 각각 O(산소)이다. 어떤 실시 예에서 R₄는 -C(=O)OH이다. 어떤 실시 예에서, R₁, R₂, R₃는 각각 C₂-C₇ 아실(acyl) 이다. 어떤 실시 예에서, 화학식 (1)의 화합물은: n은 1; X₁은 산소 O; X₂는 산소 O; R₁, R₂, R₃는 각각 -C(=O)(CH₂)₄CH₃; R₄는 -C(=O)OH; R₅, R₆, R₇은 각각 -(CH₂)₁₀CH₃ 또는 약학적으로 허용되는 이들의 염이다.

어떤 실시 예에서, 공개된 본 주제 내용은 탈체 장기(ex vivo organ) 또는 조직(tissue) 를 처리하기 위한 보존 용액을 제공하며, 그 해결안은 화학식 (1) 또는 약학적으로 허용되는 그것의 염(salt)을 포함한다. 어떤 실시 예에서, 상기 탈체 (ex vivo) 장기(organ) 또는 조직(tissue)은 폐 또는 그것의 일부분이다.

본 발명은 조직 내의 부종을 방지 또는 감소시킬 수 있으며, 상기 부종은 허혈 재관류 관련이 있는 것이며, 상기 허혈 재관류는 심근경색(myocardial infraction) 또는 뇌졸증(stroke)과 관련이 있는 것이거나, 심장외과 수술 (cardiac surgery) 중의 심장마비 (cardioplegia) 또는 정형외과 수술 (orthopedic surgery)의 골격근 (skeletal muscle)의 허혈과 관련 있는 것이거나 장기(organ) 또는 조직(tissue) 이식과 관련이 있다.

도면 1은 재관류 후, 톨 모양 수용체4(Toll-like receptor 4, TLR4)가 충분한 쥐(OuJ)와 TLR4가 결핍된 쥐(HeJ)의 재관류된 폐의 0 분, 15 분, 30 분, 1 시간, 3 시간 후의 (젖은 무게의 건조된 무게에 대한 비율 (W/D)에 의해 측정된) 부종을 나타낸 막대 그래프다. W/D 데이터는 OuJ 쥐의 왼쪽 폐(LL OuJ, 빈 막대)와 오른쪽 폐(RL OuJ, 음영 처리된 막대), HeJ 쥐의 왼쪽 폐(LL HeJ, 어두운 점이 찍힌 빈 막대)와 오른쪽 폐(RL HeJ, 하얀 정사각형이 그려진 음영 처리한 막대)를 보여준다. 콘트롤(control)에 비해 *는 p<0.05, †는 p<0.01이며, n은 그룹당 6이다.
도면 2는 톨 모양 수용체4(Toll-like receptor 4, TLR4)가 충분한 (OuJ)와 TLR4가 결핍된 (HeJ) 쥐를 1시간 동안 하일러 클렘핑(hilar clamping)과 3시간의 재관류 후에 회수하여, 팽창을 고정한(25 cm H₂O) 왼쪽 폐를 보여주는 일련의 사진이다. 위 두 사진의 화살표는, HeJ 쥐(위의 오른쪽 사진)의 폐에 비해 OuJ 쥐(위의 왼쪽 사진)의 폐에서 기관지 주위(peribronchial)와 혈관주위(perivascular)의 공간 사이에서 증가한 부종을 보여준다. 아래 두 사진의 화살표는 HeJ 쥐(아래의 오른쪽 사진)의 폐에 비해 OuJ 쥐(아래의 왼쪽 사진)의 폐에서 더 두꺼운 폐포 벽(alveolar wall)을 보여준다. 위의 사진은 40배 배율(위 사진의 아래 오른쪽의 줄(line)은 2.0 mm를 나타낸다); 아래 사진의 배율은 200배 배율(아래 사진의 아래 오른쪽의 줄(line)은 200 ㎛를 나타낸다)이다. 상기 사진들은 대표적인 네 개의 표본이다.
도면 3은 톨 모양 수용체4(TLR4)가 충분한 (OuJ)와 TLR4가 결핍된 (HeJ) 쥐를 1 시간 동안 하릴러 클렘핑(hilar clamping)과 1 시간의 재관류 후에 회수하여, 팽창을 고정한 왼쪽 폐를 보여주는 일련의 사진이다. 60 min 재관류 후의 젖은 무게의 건조된 무게에 대한 비율 (W/D)이 현저한 차이에도 불구하고, OuJ 쥐의 폐(위의 왼쪽 사진) 또는 HeJ 쥐의 폐(위의 오른쪽 사진)의 기관지주위(peribonchial)와 혈관주위(perivascular)의 체내에 부종이 없고, 두꺼워진 폐포 벽(aveolar wall)도 없다(아래 사진). 사진은 대표적인 네 개의 표본이다. 사진에서 팽창이 고정된 부분은 콘트롤(control) 표본과 동일한 것처럼 보인다(미도시). 위의 사진은 40배 배율(위 사진의 아래 오른쪽의 줄(line)은 2.0 mm를 나타낸다); 아래 사진의 배율은 200배 배율(아래 사진의 아래 오른쪽의 줄(line)은 200 ㎛를 나타낸다)이다.
도면 4는 톨 모양 수용체4(TLR4)가 충분한 (OuJ)쥐와 TLR4가 결핍된 (HeJ) 쥐를 1 시간 동안 하일러 클렘핑(hilar clamping)과 1 시간의 재관류 후에 회수한 왼쪽 폐(빈 막대)와 오른쪽 폐(음영 처리한 막대)에서 에반스 청색 염료 (광학 밀도(opticla density OD)/gm 시료에 의해 측정된)축적을 나타내는 막대 그래프다. OuJ 쥐의 데이터는 그래프에서 왼쪽 한 쌍의 막대로 나타냈고 HeJ 쥐의 데이터는 그래프에서 오른쪽에 한 쌍의 막대로 나타냈다. *는 p<0.05 쌍을 이루지 않은 t 시험 (unpaired t test); ‡는 p<0.05 쌍을 이룬 t 시험(paired t test).
도면 5는 톨 모양 수용체4(TLR4)가 충분한 (OuJ) 쥐(n=6), TLR4가 결핍된 (HeJ) 쥐, MyD88이 결핍된 쥐(n=5), C57BL/6J 쥐(MyD88 결핍 쥐의 배경 유형(background strain); n=6)를 1 시간 동안 하일러 클렘핑(hilar clamping)과 1 시간의 재관류 후에 회수한 오른쪽 폐(빈 막대)와 왼쪽 폐(음영 처리한 막대)의 (젖은 무게의 건조된 무게에 대한 비율 (W/D)에 의해 측정된) 부종을 나타낸 막대 그래프다.
도면 6은 1 시간의 허혈 이후의 0 또는 5분의 재관류 후에 C57BL/6J 쥐 유형에서 배양된 톨 모양 수용체4(TLR4)가 결핍된 쥐의 오른쪽 폐(RL TLR4-/-, 점묘화된 막대)와 왼쪽 폐(LL TLR4-/-, 음영처리 안된 막대)의 (젖은 무게의 건조된 무게에 대한 비율 (W/D)에 의해 측정된) 부종을 나타낸 막대 그래프다. 1 시간의 허혈과 이후의 0 또는 5분의 재관류 후의 배경 유형(background strain) C57BL/6J의 오른쪽 폐(RL BL6, 줄쳐진 막대)와 왼쪽 폐(LL BL6, 어둡게 음영 처리한 막대)의 부종 또한 측정하였다. BL6의 오른쪽 폐와 TLR4-/- 쥐로부터의 오른쪽과 왼쪽의 폐에 비해, *는 p<0.05이며 (터키의 검증(Turkey's post hoc)에 의한 변량분석(ANOVA)), n은 그룹당 6.
도면 7은 1 시간 동안 허혈 상태로 만든 후에 0, 15, 30, 60 또는 180 분간의 재관류 후의 컨트롤(control), 톨 모양의 수용체 4(TLR4) 가 충분한 (OuJ)와 TLR4 결핍 (HeJ)쥐의 왼쪽 폐에서 JNK, ERK, p38, NF-κB의 활성화를 보이는 일련의 웨스턴 블롯팅(Western Blotting) 겔(gel)의 사진이다. HeJ와 OuJ 각각의 유ㅎ혀형(strain)에 대해 n은 4이다. 컨트롤(control)은 gjguf/재관류를 거치지 않은 2 HeJ와 2 OuJ의 폐에서 추출한 단백질이다.
도면 8은 도면 7에 도시된 웨스턴 블롯(Western blot)의 (레이져 스캐닝에 의한 빛의 세기(intensity)가 정량화된) 단백질 농도 데이터에 관한 일련의 막대 그레프이다. 컨트롤(control), HeJ, OuJ 쥐의 폐는 밝은 음영 처리, 어두운 음영 처리, 빈 막대들로 각각 나타냈다. 포스포/토탈(phospho/total) 미토겐(mitogen) 활성화 단백질 키나제(kinase) (mitogen activated protein kinase, MARKs)와 IκBα/β-actin의 각각의 비율을 컨트롤(control)의 평균값으로 나누고, 오차 막대 (평균(mean)±SEM)에 나타난 서로 다른 컨트롤(control)의 변동성(variability)을 고려하여 각각의 컨트롤(control)을 1로 만들어 정규화(normalize) 하였다. p46과 p54 JNK, p44와 p42 ERK는 비슷한 패턴과 p 값을 갖는다. 여러 비교를 위한 Turkey's Honest Significant Difference 통계적 검증을 거친 변량 분석의 컨트롤(Control)에 비해, *는 p<0.05; †는 p<0.01, ‡는 p<0.001이다.
도면 9는 NF-κB의 p65 성분을 위해 면역 염색된(immunostained) 일련의 폐 조직(tissue) 사진이다. 컨트롤(control) 샘플(맨 왼쪽 사진)은 갓 희생된 쥐의 면역 염색된 폐 조직(tissue)이다. 나머지 사진은 이후 60 분 또는 180 분의 재관류를 거친 톨 모양 수용체 4(TLR4)가 충분한 (OuJ) 와 TLR4가 결핍된 (HeJ) 쥐의 오른쪽 (아래 네 개의 사진)과 왼쪽 (위의 네 개의 사진) 폐의 면역 염색된(immunistained) 폐 조직(tissue)을 보여준다. 각 사진의 아래 오른쪽의 줄 (line)은 100㎛를 나타낸다.
도면 10은 골수 이식(transplant) 12주 이후의 키메릭(chimeric) 쥐의 페포 대식세포(alveolar macrophages, AM)에서 (반딧불 발광효소(플럭)/β-갈락토시다세(β-gal) (firefly luciferase (fluc)/β-galactosidase(β-gal))의 활동도로 측정한) NF-κB의 활성화 막대 그래프이다. 상기 AM은 기관지 세척(bronchoalveolar lavage, BAL)과 Ad.NFκBLuc 와 Ad.CMV-LacZ로 감염하여, 포스페이트 완화 살린(phosphate buffered saline, PBS; 빈 막대) 또는 1 ㎍/㎖의 리포폴리사카라이드(lipopolysaccharide, LPS, 어둡게 음영된 막대)에서 배양한다. 관찰된 반딧불 발광효소(fluc)/β-갈락토시다세(β-gal) (firefly luciferase (fluc)/β-galactosidase(β-gal))의 활동도는 키메릭(chimeric) HeJ 유형(P+M+) 또는 키메릭(chimeric) OuJ 유형(P-M+)으로부터 받은 골수의 완전한 교체를 보여준다. P는 조직질실의(parenchymal) 세포, M은 골수에서 유래한 세포, +는 손상 없는 TLR4 (OuJ), -는 기능이 없는(non-functional) TLR4 (HeJ)이다. AM은 컨트롤(control)로 사용하는 것으로 빛을 조사 안 한 HeJ와 OuJ 쥐로부터 회수한 것이었다. 그룹당 실험 n은 4이며, p는 <0.0001이다.
도면 11은 IRI 이후 3 시간이 지난 키메릭(chimeric) 쥐의 왼쪽(빈 막대)과 오른쪽(어둡게 음영 처리한 막대) 폐 조직(tissue)에서 (젖은 무게의 건조된 무게에 대한 비율 (W/D)에 의해 측정된) 부종을 나타낸 막대 그래프다. P는 조직실의(parenchymal) 세포, M은 골수에서 유래한 세포, +는 손상 없는 TLR4 (OuJ), -는 기능이 없는(non-functional) TLR4 (HeJ)이다. Turkey's Honest Significant Difference 통계적 검증을 거친 변량 분석(ANOVA)의 P- 왼쪽 폐의 W/D에 비해, *는 p<0.05; †는 p<0.01이다.
도면 12는 회복된 골수(P-M-, P+M+)를 갖는 키메릭(chimeric) 쥐와 손상되지 않은 HeJ와 OuJ 유형의 왼쪽(빈 막대)과 오른쪽(어둡게 음영 처리된 막대) 폐 조직(tissue)의 젖은 무게의 건조된 무게에 대한 비율 (W/D)을 나타낸 막대 그래프이다.
도면 13은 하일러 클램핑(hilar clamping)을 시작하기 1 시간 전에 정맥 안에 매개체(vehicle)(살린(saline), 그래프의 오른쪽에 있는 막대) 또는 TLR4 경쟁 억제재 CRX-526(살린(saline) 200 ㎕에 10 ㎍ 용해된 것으로, 그래프의 오른쪽에 있는 막대)로 30분 동안 치료한 OuJ 쥐의 오른쪽 폐(어둡게 음영 처리된 막대)와 왼쪽 폐(빈 막대)의 1 시간의 허혈 재관류 손상(IRI) 후의 (젖은 무게의 건조된 무게에 대한 비율 (W/D)에 의해 측정된) 부종을 나타낸 막대 그래프다. N은 그룹당 5이며, 짝 지어진 t 실험(paired t test)의 같은 동물의 오른쪽 폐에 비해 *는 p가 0.0014; 짝이 안 지어진 t 실험(unpaired t test)에 의한 CRX-526 전처리 쥐의 왼쪽 폐에 비해, p는 0.0023.
도면 14는 CRX-526의 0.1, 1, 10, 100 ㎍ 농도(예를 들면, Inhib 0.1, Inhib 1, Ininhib 10, Ininhib 100)의 영향에 의한, 생체 밖(in vitro)에서 NF-κB의 활성 억제를 (반딧불 발광효소(플럭)/β-갈락토시다세(β-갈) (firefly luciferase (fluc)/β-galactosidase(β-gal))을 토대로 하여) 보여주는 그래프다. 인체의 폐 미세혈관 내피 세포(human pulmonary microvascular endothelial cells, HMVEC)를, 포스페이트 완화 살린(phosphate buffered saline, PBS)(빈 막대)으로만 CRX-526 처리 자극을 하여, 10 ng/mL의 리포폴리사카라이드(lipopolysaccharide, LPS)(점이 찍힌 막대), 5 ng/mL LPS(줄쳐진 막대), 또는 0.25 ng/mL의 튜머 네크로시스 요소(tumor necrosis factor, TNF)(어둡게 음영 처리한 막대)로 플럭/β-갈 (fluc/β-gal)을 측정하였다. CRX-526으로 처리하지 않은 HMVEC를 컨트롤(control)로 사용하였다. n은 그룹당 4이고, 변량 분석으로 같은 시점의 다른 값에 대해 *는 p<0.05이다.
도면 15는 1시간의 힐러 폐색(hilar occulusion)과 15, 30 또는 60분의 리퍼퓨젼(reperfusion) 후에 톨 모양 수용체2 가 결핍된 쥐(TLR2-/-)의 (젖은 무게의 건조된 무게에 대한 비율 (W/D)에 의해 측정된) 부종을 나타낸 막대 그래프다. TLR2-/- 쥐의 오른쪽 폐의 부종은 줄친 모양의 막대기로 나타내었지만 TLR2-/- 쥐의 왼쪽 폐의 부종은 연하게 음영 처리한 막대로 나타냈다. 컨트롤(control)로서 사용한 C57BL/6J 배경 쥐 품종의 오른쪽(BL6 RL, 빈 막대)와 왼쪽 폐(BL6 LL, 어둡게 음영 처리한 막대)에서도 부종을 측정했다. 콘트롤(control) 왼쪽 폐에 비하여†는 p<0.01; ‡는 p<0.001.
도면 16은 C57BL/6J 쥐의 왼쪽 폐(BL6, 어둡게 음영 처리한 막대), 톨 모양 수용체4가 결핍된 쥐의 왼쪽 폐(TLR4-/-, 줄쳐진 모양의 막대), 톨 모양의 수용체2가 결핍된 쥐의 왼쪽 폐(TLR2-/-, 점으로 그려진 막대), 1시간 동안의 왼쪽 하일러 클램핑(hilar clamping) 1 시간 전에 시작한 30 분간의 10 ㎍의 CRX-526으로 전치료한 C57BL/6J의 왼쪽 폐(CRX-526, 음영 처리하지 않은 막대)에서, (젖은 무게의 건조된 무게에 대한 비율 (W/D)에 의해 측정된) 부종을 나타낸 그래프다. (Fresh)로 표시한 콘트롤(control) 데이터는 하일러 클램핑(hilar clampin) 없이 동물의 희생 직후의 쥣과(murine)의 폐에서 회수한 것이다. 그래프의 x-축에서 나타난 바와 같이, 폐로부터의 다른 데이터는 1 시간의 왼쪽 하일러 클랭핑(hilar clamping) 후 0, 15, 30, 60 또는 180의 재관류를 거친 폐에서 얻은 것이다. n은 3-6. BL6의 W/D는 다른 품종이나 CRX-526 처리한 쥐보다 현저히 큰 값을 가졌다. *는 p<0.05, †는 p<0.01, ‡는 p<0.001; TLR4-/-와 CRX-526-처리 쥐에 비하여 §는 p<0.01, σ는 p<0.05 (각 시간 지점에서 터키의 검증(Turkey's post hoc)에 의한 변량분석).
도면 17은 C57BL/6J 쥐의 오른쪽 폐(BL6, 어둡게 음영 처리한 막대), 톨 모양 수용체4가 결핍된 쥐의 오른쪽 폐(TLR4-/-, 줄이 그려진 막대), 톨 모양 수용체2가 결핍된 쥐의 오른쪽 폐(TLR2-/-, 점으로 그려진 막대), 1 시간 동안의 왼쪽 하일러 클램핑(hilar clampin) 1 시간 전에 시작한 30 분간의 10 ㎍의 CRX-526으로 전치료한 C57BL/6J의 오른쪽 폐(CRX-526, 음영 처리하지 않은 막대)에서, (젖은 무게의 건조된 무게에 대한 비율 (W/D)에 의해 측정된) 부종을 나타낸 그래프다. (Fresh)로 표시한 콘트롤(control) 데이터는 하일러 클램핑(hilar clampin) 전에 동물의 희생 직후의 쥣과(murine)의 폐에서 회수한 것이다. 그래프의 x-축에서 나타난 바와 같이, 폐로부터의 다른 데이터는 1시간의 왼쪽 하일러 클랭핑(hilar clamping) 후 0, 15, 30, 60 또는 180의 재관류를 거친 폐에서 얻은 것이다. 데이터의 n은 3-6.
도면 18은 CRX-526이 NF-κB 활성화의 영향에 미치는 영향을 톨 모양의 수용체2(TLR2) 리간드(ligand)의 자극을 통해 조절하는 것을 보여준다. 인체의 폐 미세혈관 내피 세포(human pulmonary microvascular endothelial cells)는 재조합된 제일-세대 E1, E3가 없어진 Ad.NF-κB-발광효소(luciferase)와 구성 β-갈락토시다세(galactosidase)벡터로 감염되어 NF-κB가 활성화 되었을 때, 반딧불 발광효소(플럭)/β-갈락토시다세(β-갈) (firefly luciferase (fluc)/β-galactosidase(β-gal))의 비율을 증가시킨다. HMVEC는 감염 48 시간 후, 한 시간 동안 (x-축으로 도시된) 여러 농도의 CRX-526으로 전치료를 하여, 8 시간 동안 TLR2 ligands Pam(3)Cys(25 ㎍/㎖, 어둡게 음영 처리한 막대) 또는 리포타이초익 산(lipoteichoic acid)(LTA; 1 ㎍/㎖, 빈 막대)에 노출한다. 발광효소 루시퍼라제(luciferase)의 활동도는 감염 효율 제어를 위해 β-갈락토시다세(galactosidase)로 정규화 한다. CRX-526은 NF-κB의 활동도를 감소시켰다. 매개체(vehicle)와 비교하여, *는 p<0.05, †는 p<0.01.

이하에서는 공개된 본 주제 내용을 대표적인 실시 예를 보여주는 첨부된 예를 참조하여 설명할 것이다. 그러나, 공개된 본 주제 내용은 다른 형태로 구현할 수 있으며, 여기에 기재한 실시 예로 제한되지 않는다. 상기의 실시 예들은 본 공개가 철저하며 완전하게 하기 위하여 제공한 것이며, 본 분야에 상식적인 지식을 갖는 자에게 상기 실시 예의 범위를 온전하게 전달할 것이다.

특별히 다르게 정의하지 않는 한, 여기서 사용한 모든 기술적이고 과학적 용어는 여기서 설명하는 주제 내용이 속하는 분야에 상식적인 지식을 가진 자가 공통 적으로 이해하는 바와 같은 의미가 있다. 여기서 언급하는 모든 출판물, 특허 출원서, 및 이외의 참조 문헌은 그것들의 전체가 참조로서 포함된 것이다.

명세서와 청구서 전체에 걸쳐, 주어진 화학식이나 이름은 모든 광학적 입체 이성체와 이러한 이성체와 혼합물이 존재하는 라세믹(racemic) 혼합물을 망라한다.

I. 정의

본 분야의 상식적인 지식을 가진 자에게는 다음의 용어들을 잘 이해하는 것으로 믿어지지만, 본 공개 주제 내용의 설명을 용이하게 하기 위해 정의들을 아래에 기재하였다.

장구한 특허의 관례에 따라, 청구항을 포함한 본 출원에서 사용한 용어 "a", "an", "the"는 "하나 또는 그 이상"을 의미한다. 따라서, 예를 들면, "a compound" 또는 "a cell" 등은 복수의 그러한 compound, cell, 등을 의미한다.

"including" "containing" 또는 "characterized by"와 같은 뜻을 갖는 "comprising"이라는 용어는 포괄적이며 확장 가능한 의미를 가지며, 부가적인, 열거하지 않은 요소 또는 방법에서의 단계를 제외하지 않는다. "Comprising"은 청구항 언어에 사용하는 기술적 용어로 기재한 요소는 필수적인 것이지만, 다른 요소들을 첨가하여 여전히 청구항의 권리 범위 안의 구조를 구성하는 것을 뜻한다.

여기에서 사용한 바와 같이, "consisting of"라는 절은 청구항에서 명시하지 않은 모든 요소, 단계, 또는 구성 재료를 제외한다. 청구항의 전제에서 바로 나타나지 않고, 청구항의 본문의 절에서 "consists of"라는 절이 나타나면, 이는 그 절에서만 기재한 요소만으로 제한하며; 전체적으로 다른 요소들은 청구항에서 제외하지 않는다.

여기에서 사용한 바와 같이, "consisting essentially of"라는 절은 청구하는 주제 내용의 기본적이고 신규한 특징을 실질적으로 영향을 미치지 않는 것들을 포함하여, 명시한 재료와 단계로 청구항의 권리 범위를 제한한다.

"comprising", "consisting of", "consisting essentially of"라는 용어에 관하여, 여기서 사용한 위의 세 가지 용어 중 하나를 사용한 곳에서, 공개한 그리고 청구하는 주제 내용은 나머지 두 개의 용어 중 어느 하나의 사용을 포함할 수 있다.

여기서 사용한 "알킬(alkyl)"이라는 용어는, 포괄적인 C1-20, 선형(예; "직선 사슬), 분기(branched), 또는 순환(cyclic), 포화 또는 적어도 부분적으로 그리고 어떤 경우에 완전히 비포화(예; 알케닐(alkenyl)과 알키닐(alkynyl)) 탄화수소 사슬을 의미하며, 예를 들면, 메틸(methy), 에틸(ethyl), 프로필(propyl), 이소프로필(isopropyl), 부틸(buthyl), 이소부틸(isobuthyl), 테르트-부틸(tert-buthyl), 펜틸(penthyl), 헥실(hexyl), 옥틸(octyl), 에테닐(ethenyl), 프로페닐(propenyl), 부테닐(butenyl), 펜테닐(pentenyl), 헥세닐(hexenyl), 옥테닐(octenyl), 부타디에닐(butadienyl), 프로피닐(propynyl), 부티닐(butynyl), 펜티닐(pentynyl), 헥시닐(hexynyl), 헤프티닐(heptynyl), 알레닐(allenyl) 그룹을 포함한다. "분기된(branched)"은 메틸(methyl), 에틸(ethyl) 또는 프로필(propyl)과 같은 낮은 알킬(lower alkyl)그룹이 선형의 알킬(alkyl) 사슬에 부착된 알킬(alkyl) 그룹을 의미한다. "낮은 알킬(lower alkyl)"은 탄소 원자 1에서 6 (예, C₁ _-7 알킬(alkyl)) 즉 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 탄소원자를 갖는 알킬(alkyl) 그룹을 의미한다. "높은 알킬(higher alkyl)"은 탄소 원자 8에서 20, 즉 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 탄소원자를 갖는 알킬(alkyl) 그룹을 의미한다.

알킬(alkyl)그룹은 선택적으로 같을 수도 있고 다를 수도 있는 하나 또는 그 이상의 알킬(alkyl) 그룹의 치환물(대체 알킬(alkyl))로 치환할 수 있다. "알킬(alkyl) 치환물" 이라는 용어는 알킬(alkyl)에 제한하지 않고, 치환된 알킬(alkyl), 할로(halo), 아릴아미노(arylamino), 아실(acyl), 하이드록실(hydroxyl), 아릴록실(aryloxyl), 알콕실(alkoxyl), 알킬치오(alkylthio), 아릴치오(arylthio), 아랄킬옥실(aralkyloxyl), 아랄킬치오(aralkylthio), 카르복실(carboxyl), 알콕시카르보닐(alkoxycarbonyl), 옥소(oxo), 사이클로알킬(cycloalkyl)을 포함한다. 알킬(alkyl) 사슬을 따라, 선택적으로 하나 또는 그 이상의 산소, 황, 또는 치환된 또는 치환되지 않은 질소 원자를 삽입할 수 있으며, 상기의 질소 치환물은 수소, 낮은 알킬(alkyl) (여기서 또한 "알킬아미노알킬(alkylaminoalkyl)" 로 참조된), 또는 아릴(aryl)이다.

따라서, 여기서 사용한 "치환된 알킬(alkyl)"은, 예를 들면, 알킬(alkyl), 치환된 알킬(alkyl), 할로겐(halogen), 아릴(arly), 치환된 아릴(aryl), 알콕실(alkoxyl), 하이드록실(hydroxly), 나이트로(nitro), 아미노(amino), 알킬아미노(alkylamino), 디알킬아미노(dialkylamino), 설페이트(sulfate), 메르카프토(mercapto)를 포함하여, 하나 또는 그 이상의 원자 또는 알킬(alkyl) 그룹이 다른 원자 또는 기능 그룹으로 대체한, 여기서 정의한 "알킬(alkyl)그룹"을 포함한다.

"알케닐(alkenyl)" 이라는 용어는 하나 또는 그 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 포함(comprise)하는 알킬(alkyl)그룹을 의미한다.

여기서 사용되는 "아릴(aryl)" 이라는 용어는, 메틸렌(methylene) 또는 에틸렌(ethylene)의 일부와 같은 것에 제한되지 않고, 서로 융합되거나, 공유 결합하거나, 공통 그룹에 링크(link)된 하나의 방향족 고리(aromatic ring) 또는 다중의 방향족 고리(aromatic ring)일 수 있는 방향족(aromatic) 치환물을 의미한다. 상기의 공통 링크된 그룹은 벤조페논(benzophenone)의 카르보닐(carbonyl), 디페닐에테르(diphenylether)의 산소, 디페닐아민(diphenlyamine)의 질소일 수 있다. "아릴(aryl)" 이라는 용어는 특히 헥테로사이클릭 방향(heterocyclic aromatic) 화합물을 망라한다. 방향족 고리(aromatic ring)는 페닐(phenly), 나프틸(naphtyl), 바이페닐(biphenyl), 다이페닐에테를(diphenylether), 다이페닐아민(diphenylamine), 벤조페논(Benzophenone) 등을 포함한다. 어느 특정한 실시 예에서, "아릴(aryl)" 이라는 용어는 약 5에서 약 10개의 탄소 원자 즉, 5, 6, 7, 8, 9, 10개를 포함(comprise)하는 순환 방향족(cyclic aromatic)이며, 5 그리고 6으로 구성된 탄화수소와 헥테로사이클릭(hecterocyclic) 방향족 고리(aromatic ring)를 포함한다.

아릴(aryl) 그룹은 같거나 다를 수 있는 하나 또는 그 이상의 아릴(aryl) 그룹 치환물("치환된 아릴(aryl)")로 선택적으로 치환될 수 있으며, "아릴(arly) 그룹"은 알킬(alkyl), 치환된 알킬(alkyl), 아릴(aryl), 치환된 아릴(aryl), 아랄킬(aralkyl), 하이드록실(hydroxyl), 알콕실(alkoxyl), 아릴옥실(aryloxyl), 아랄킬옥실(aralkyloxyl), 카르복실(carboyl), 아실(acyl), 할로(halo), 니트로(nitro), 알콕시카르보닐(alkoxycarbonyl), 아릴옥시카르보닐(aryloxycarbonyl), 아랄콕시카르보닐(aralkoxycarbonyl), 아실옥실(acyloxyl), 아실아미노(acylamino), 아로일아미노(aroylamino), 카르바모일(carbamoyl), 알킬카르바모일(alkylcarbamoyl), 디알킬카르바모일(dialkylcarbamoyl), 아릴치오(arylthio), 알킬치오(alkylthio), 알킬렌(alkylene), R' 와 R"가 각각 독립적으로 수소, 알킬(alkyl), 치환된 알킬(alkyl), 아릴(aryl), 치환된 아릴(aryl), 아랄킬(aralkyl) 일 수 있는 -NR'R"를 포함한다.

따라서, 여기서 사용한 "치환된 아릴(aryl)"은, 예를 들면, 알킬(alkyl), 치환된 알킬(alkyl), 할로겐(halogen), 아릴(arly), 치환된 아릴(aryl), 알콕실(alkoxyl), 하이드록실(hydroxly), 나이트로(nitro), 아미노(amino), 알킬아미노(alkylamino), 디알킬아미노(dialkylamino), 설페이트(sulfate), 메르카프토(mercapto)를 포함하여, 하나 또는 그 이상의 원자 또는 아릴(aryl) 그룹의 기능 그룹이 다른 원자 또는 기능 그룹으로 대체한, 여기서 정의한 아릴(aryl) 그룹을 포함한다.

아릴(arly) 그룹의 구체적인 예는 사이클로펜타디에닐(cyclopentadienyl), 페닐(phenyl), 퓨란(furan), 치오펜(thiophene), 파이롤(pyrrole), 피란(pyran), 피리딘(pyridine), 이미다졸(imidazole), 벤지미다졸(benzimidzole), 아이소치아졸(isothiazole), 아이속사졸(isoxazole), 파이라졸(pyrazole), 파이라진(pyrazine), 트라이아진(triazine), 파이리미딘(pyrimidine), 퀴노린(quinoline), 아이소퀴노린(isoquinoline), 인돌(indole), 카르보졸(carbozole) 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

"알킬렌 (alkylene)"은 직선 또는 분기된 2 가의 알리패틱(bivalent aliphatic) 탄화수소 그룹을 의미하며, 1에서 약 20개의 탄소 원자, 즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개의 탄소 원자를 갖는다. 알킬렌(alkylene) 그룹은 직선, 분기 또는 순환 구조이다. 알킬렌(alkylene) 그룹은 또한 선택적으로 비포화되거나, 그리고/또는 하나 또는 그 이상의 "알킬(alkyl) 그룹 치환물"로 치환될 수 있다. 알킬렌(alkylene) 그룹을 따라 선택적으로 하나 또는 그 이상의 산소, 황, 또는 치환 또는 치환되지 않은 (여기서 "알킬아미노알킬(alkylaminoalkyl)"로 참조한) 질소 원자를 삽입할 수 있으며, 여기서, 상기 질소 치환물은 앞에서 설명한 바와 같이 알킬(alkyl)이다. 알킬렌(alkylene) 그룹은 예로서, 메틸렌(methlene) (-CH₂-); 에틸렌(ethylene) (-CH₂-CH₂-); 프로필렌 (propylene) (-(CH₂)₃-); 사이클로헥실렌 (cyclohexylene) (-C₆H₁₀-); -CH=CH-CH=CH-; -CH=CH-CH₂-; -(CH₂)_q-N(R)-(CH₂)_r-을 포함하며; q와 r은 각각 0에서 대략 20 사이의 정수로, 즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20이고, R은 수소 또는 낮은 알킬(alkyl); 메틸렌다이옥실 (methylenedioxyl) (-O-CH₂-O-); 그리고 에틸렌다이옥실 (ethylenedioxyl) (-O-(CH₂)₂-O-)이다. 알킬렌(alkylene) 그룹은 대략 2에서 대략 3의 탄소 원자를 그리고 6에서 20의 탄소를 가질 수 있다.

"하이드록시와 하이드록실(Hydroxy, hydroxy)"은 -OH 그룹을 의미한다.

"하이드록시알킬(hydroxyalkyl)" 이라는 용어는 하이드록시(hydroxy)로 끝나는 알킬(alkyl) 그룹을 의미한다. 어떤 실시 예에서, 상기의 하이드록시알킬(hydroxyalkyl) 그룹은 -(CH₂)_nOH 구조를 갖는다.

"카르복실릭 산(carboxylic acid)" 이라는 용어는 -C(=O)OH의 그룹을 의미한다. "카르복실레이트 (carboxylate)" 라는 용어는 카르복실릭 산(carboxylic acid) 그룹에서 수소가 제거된 음이온을 의미한다. 따라서, "카르복실레이트 (carboxylate)"는 -C(=O)O^-의 그룹을 의미한다. 카르복실레이트(carboxylate)는 양이온과 같이 염(예를 들면 카르복실레이트(carboxylate) 염)을 형성할 수 있다. "알킬렌 카르복실레이트(alkylene carboxylate)" 와 "알킬렌 카르복실릭 산(alkylene carboxylic acid)"이라는 용어는 카르복실릭 산(carboxylic acid) 또는 카르복실레이트(carboxylate) 그룹을 알킬렌(alkylene) 그룹(예를 들면, -(CH₂)_nC(=O)OH와 -(CH₂)_nC(=O)O^-)의 하나의 열린 지점에 부착하여 형성한 일가의(monivalent) 그룹을 의미한다.

여기서 사용한 바와 같이, "아실(acyl)"이라는 용어는 -C(=O)R을 의미하며, 여기서 R은 위에서 정의한 알킬(alkyl) 또는 아릴(aryl) 그룹이다. 어떤 실시 예에서, 상기 아실(acyl) 그룹의 R은 C₁-C₁₆ 알킬(alkyl)이다. 어떤 실시 예에서, 아실(acyl) 부분(moiety)의 알킬(alkyl) 그룹은 알킬(alkyl) 또는 알케닐(alkenyl)의 직선 사슬이다. 어떤 실시 예에서, 상기 아실(acyl) 그룹의 R은 C₁-C₁₆ 직선 사슬 알킬(alkyl)이다.

"포스페이트(phosphate)"라는 용어는 -P(=O)(OH)₂ 그룹을 의미한다. "포스페이트(phosphate)"라는 용어는 포스페이트(phosphate) 그룹에서 하나 또는 그 이상의 수소를 제거하여 형성된 음성의 종(species)을 포함한다.

"치올(thiol)" 이라는 용어는 -S-R의 구조를 갖는 그룹을 의미하며, 여기서 R은 알킬(alkyl), 아실(acyl), 또는 아릴(aryl)이다. "치올(thiol)"이라는 용어는 H-S-R의 구조를 갖는 그룹을 의미하며, 여기서 R은 알킬(alkyl), 아실(acyl), 또는 아릴(aryl)이다.

"아미노(amino)"라는 용어는 -NR₁R₂의 구조를 갖는 그룹을 의미하며, 여기서 R₁과 R₂는 수소, 알킬(alkyl), 아실(acyl), 또는 아릴(aryl)로 이루어진 그룹에서 독립적으로 선택된 것이다.

"카르바모일 (carbamoyl)"은 -C(=O)NH₂의 그룹을 의미한다.

"모노사카라이드(monosaccharide)"라는 용어는 화학 구조 H(CHOH)_nC(=O)(CHOH)_mH의 화학 구조를 갖는 화합물의 열린 사슬 형태에 기초한 화학식 (CH₂O)_m+n의 단위 카르보하이드레이트 모노모(carbohydrate monomer unit)를 의미하며, 여기서 n+m의 합은 2와 8 사이의 정수이다. 따라서, 단위 모노모(monomer unit)는 트리오세스(trioses), 테트로세스(tetroses), 펜토세스(pentoses), 헥소세스(hexoses), 헤프토세스(heptoses), 노노세스(nonoses)와 이들의 혼합물을 포함한다. 상기 모노사카라이드(monosaccharide)는 화학구조가 순환형태 일 수 있다. 따라서, 어떤 실시 예에서, 상기 화합물은 헤미아세탈(hemiacetal) 또는 헤미케탈(hemiketal)을 포함(comprise)할 수 있다. 어떤 실시 예에서, "모노사카라이드(monosaccharide)"는 H(CHOH)_nC(=O)(CHOH)_mH의 화학구조를 갖는 화합물에 기초한 순환된 단위 모노머(monomer unit)를 의미하며, 여기서 n+m은 4 또는 5이다. 따라서, 모노사카라이드(monosaccharide)는, 아라비노세(arabinose), 릭소세(lyxose), 리보세(robose), 크실로세(xylose), 리브로세(ribulose), 크실루로세(xylulose), 알로세(allose), 알트로세(altrose), 갈락토세(galactose), 글루코세(glucose), 글로세(gulose), 이도세(idose), 마노세(mannose), 탈로세(talose), 프룩토세(fructose), 프시코세(psicose), 소르보세(sorbose), 타가토세(tasgatose)와 같은 알도헥소세스(aldohexoses), 알도펜토세스(aldopentoses), 케토헥소세스(ketoheoses), 케토펜토세스(ketopentoses)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

"모노사카라이드 아나로그(monosaccharide analog)"라는 용어는 모노사카라이드(monosaccharide)의 하나 또는 그 이상의 하이드록실(hydroxyl) 그룹이 다른 화학 그룹, 예를 들면 포스페이드(phosphate), 아민(amine), 치올(thiol), 또는 알킬(alkyl) 그룹으로 교체된 모노사카라이드(monosaccharide)를 의미하나, 이에 한정되지는 않는다.

"아미노 슈거(amino sugar)"라는 용어는 모노사카라이드(monosacchride)의 하나 또는 그 이상의 하이드록실(hydroxyl) 그룹이 아민(amine)으로 교체된 모노사카라이드 유사체(monosaccharide analog)를 의미한다. 아미노 슈거(amino suger)의 예는 글루코사민(glucosimine) (예를 들면, 2-디옥시(deoxy)-2-아미노(amino)-α-D-글루코피라노제(glucopyranose))이다.

여기서 화합물에 관련하여 사용한 "프레그먼트(fragment)"라는 용어는 화합물의 구조가 원래 이름 주어진 화합물의 전체보다 적은 원래 이름 주어진 화합물 구조의 임의의 부분을 의미한다. 따라서, 프레그먼트(fragment)는 원래 화합물 보다 작으나 일반적으로 원래 화합물의 일부 또는 모든 생물학적 활동을 보유한다.

"약학적으로 허용되는"은 건전한 의학적 판단의 범위 안에서 합리적인 혜택 대비 위험 비율에 상응하여 과도한 유독성, 염증, 알레지 반응, 또는 다른 문제 없이, 사람이나 동물의 조직(tissue)의 접촉에 적절한 화합물, 재료, 조성 그리고/또는 복용량을 의미한다. 따라서, 어떤 실시 예에서, 공개된 본 화합물, 재료, 조성, 그리고/또는 복용량은 사람이 사용하기에 약학적으로 허용할 만한 것이다.

일반적으로, "감소하는"의 용어는, 예를 들면, 그 경중에 관계없이 현재의 상태, 질병, 혼란, 또는 부상의 증후나 영향을 감소하거나, 완화하여 이전에 존재하는 상태(예를 들면 부종)를 치료하는 방법을 의미하는 것이다.

"방지하는"은 잠재적인 미래의 상태, 질병, 혼란, 부상 또는 이들의 증상이 발생하지 않도록 지키는 것을 의미한다. "방지하는"은 방지하는 행동이 없었다면 발생할 수 있는 효과 보다 미래의 조건 또는 부상이 더 작은 크기와 짧은 지속 기간의 효과를 보이도록 감소시키고 줄이는 방법, 또는 그러한 효과가 전혀 일어나지 않도록하는 방법을 의미 할 수 있다. 따라서, "방지하는"은 의학 그리고 수의학 치료의 예방적 방법을 의미한다.

"리간드 (ligand)"라는 용어는 톨 모양의 수용체 같은 생물학적 수용체를 위한 결합 친화성(binding affinity)를 갖는 화합물을 의미한다. 리간드(ligand)를 수용체에 결합하는 것은 가역적이거나 비가역적일 수 있다. 어떤 경우에는, 리간드(ligand)를 수용체에 결합하는 것은 생물학적 반응 또는 활동(예를 들면 수용체의 활동과 관계하는 생물학적 활동)을 일으킬 수 있다. 수용체에 결합하거나 생물학적 반응을 촉발하는 리간드(ligand)는 "어거니스트(agonist)"로 참조될 수 있다. 수용체에 결합하지만 생물학적 반응 또는 활동을 촉발하지 않거나 방지하는 리간드(ligand)는 "안타고니스트(antagonist)"로 참조될 수 있다. 어거니스트(agonist) 또는 안타고니스트(antagonist)는 수용체와의 결합을 위해 내생의 리간드(ligand)와 경쟁할 수 있다. 어거니스트(agonist)와 안타고니스트(antagonist)는 부분적이거나 완전한 것일 수 있다. 예를 들면, 완전한 어거니스트(agonist)를 수용체에 결합하는 것은 상기 수용체의 내생 리간드(ligand)와 같은 수준의 활동을 생산하는 반면, 부분적인 어거니스트(agonist)의 결합은 그와 같은 수준의 활동의 일부만을 제공한다. 어거나스트(agonist) 또는 안타고니스트(antagonist)의 효험은 예를 들면 EC₅₀(절반의 최대 유효 농도) 또는 IC₅₀(절반의 최대 억제 농도)로 각각 표현할 수 있다.

"부종(edema)은 조직(tissue) 또는 장기(organ) 내부 사이에 유체가 증가하는 것을 의미한다. "부종(edema)"는 또한 폐의 유체가 증가하는 것을 의미할 수 있다. 따라서, 어떤 실시 예에서, 부종은 내피의 삼투성(permeability)이 증가하는 것을 포함하는 상태와 관련될 수 있다. 어떤 실시 예에서, 부종은 허혈 재관류와 관련이 있을 수 있다.

"내피의 삼투성(permeability) 증가"는 혈액 내의 액체 그리고/또는 단백질에 대해 장기(organ) 또는 조직(tissue) 내 혈관의 삼투성(permeability) 증가를 의미하며, 그 결과, 성인 호흡기 통증 증후(Adult Respiratory Distress Syndrome, ARDS), 전신 염증 반응 증후(Systematic Inflammatory Syndrome, SIRS), 다양한 박테리아의 감염과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 다수의 임상의 시나리오를 발생시키는 부종을 초래한다.

"허혈(ischemia)"은 조직이나 장기에 충분하지 못한 피의 흐름을 의미하여, 조직이나 장기가 신진대사로 필요로 하는 요구를 만족시키지 못하는 결과를 초래한다. 허혈 장기나 조직에 대한 재관류는 과도한 양의 반응 산소 종(reactive oxygen species, ROS)과 반응 질소 종(reactive nitrogen species, RNS)의 생산을 초래할 수 있어, 미토콘드리알 옥시데이티브 포스포리레이션(mitochondrial oxidative phosphorylation)의 변화, ATP의 고갈(이는 허혈 도중 그리고 그 결과로 발생함), 세포 내 칼슘 증가, 세포의 기능/온전성의 상실을 초래하는 단백질 키나제스(kinases), 포스파타제스(phosphatases), 프로테아세스(proteases), 리파제스(lipases), 뉴클레아세스(nucleases)의 활성화 같은 일련의 사건을 일으키는 옥시데티브 스트레스(oxidative stress)를 야기한다.

허혈 재관류 손상(IRI)은 허혈 상태에 있는 조직에 혈액 순환을 재개한 후에 생기는 상처를 의미한다(예를 들면, 이식이나 자동 이식과 같이, 수술로 장기를 절제한 후 다시 부착했을 때). 추가의 예, 그러나 이로써 한정되지 않는 예를 든다면, 이러한 상처는 장기의 이식을 위해 혈액의 순환을 멈춘 후 다시 재개한 경우; 관상동맥을 경피경관 관상동맥성형술(percutaneous transluminal coronary angioplasty, PTCA), 스텐트(stent), 또는 심근경색 후의 혈관 우회로 치료한 후; 뇌졸증 환자에게 혈전용해제를 투여한 후 등의 예가 있다. 다른 하나의 예로, 보통 심장마비 솔류션(solution)의 투여를 수반하는 심장 수술을 위해 심장으로 혈액이 흐르는 것을 일시적으로 멈춘 경우이다. 다른 하나의 예는 팔다리에 지혈대가 팽창하여 혈액이 없는 현장에서 정형외과 수술에 의한 팔다리 수술을 위해 팔다리에 혈액이 흐르는 것을 차단하는 경우이다. 이러한 상처는 신장, 간, 폐, 췌장, 골 근육, 연조직(예를 들면, 힘줄, 인대, 근막, 섬유 조직, 지방, 윤활 멤브레인(membrane), 신경, 혈관), 창자, 심장과 뇌에 생길 수 있다. 따라서, 본 공개 주제 내용에 의해 치료해야 할 부종(예를 들면 부종을 감소시키거나 방지하는)은 뇌(cerebral), 망막, 간, 신장, 췌장, 척수, 장간막, 팔다리, 장, 뇌(brain), 심근, 중추 신경계, 피부, 또는 폐 허혈 재관류, 또는 이들의 조합과 관계가 있다. 특히, 허혈 재관류와 관계있는 장기 이식에서의 부종을 치료할 수 있다.

II . 일반적 고려 사항

"톨 모양 수용체" 또는 "TLR"는 양쪽 배양(both embryogenesis)의 역할과 병원체 관련 분자 패턴(pathegon-associated molecular patterns, PAMP)을 인식하는 역할을 포함하는 여러 역할을 수행한다. Sioud et al ., J. Mol . Biol., 364(5), 945-954(2006); Janssens and Beyaert, Clin . Microbiol . Rev., 16(4), 637-646(2003)을 참조. 상기 TLR은 그들의 세포 밖 영역과 Toll/IL1 수용체(TIR)라고 불리는 보존 영역을 포함하는 세포질의 꼬리에 류신(leucine)이 풍부한 반복된 모양(motif)을 포함하는 제1 유형 트랜스멤브레인(transmembrane) 단백질이다. 적어도 10 사람의 TLR 단백질, 톨 모양 수용체 1-10이 확인되었다. TLR은 미생물과 유독한 환경 물질을 감지하여 침입하는 병원균에 대해 초기 선천적인 면역 역할을 수행한다. 이러한 초파리의 톨(Toll) 유전자와 상동(homologues)인 진화론적으로 보존된 수용체는 미생물 병원균(microbial pathogen, PAMP)에 의해 표현되는 매우 높이 보존된 구조적 모양을 인식하고, 예를 들면, dsRNA, 히알루로난(hyaluronan) 프레그먼트, 섬유결합소(fibronectin) 등과 같은 유해한 물질이나 조직 상처에 의한 조직 손상의 생성물을 감지한다. PAMP는 리포폴리사카라이드(lipopolysaccharide, LPS), 펩티도글리칸(peptidoglycan, PGN), 리포페프타이드스(lipopepotides), 플라젤린(flagellin), 세균의 DNA, 이중으로 꼬인 바이러스성 RNA와 같은 다양한 세균 세포벽 성분을 포함한다. 따라서, TLR은 병원성 유기체, 예를 들면, 바이러스, 세균, 기생물질, 곰팡이 그리고 조직 상처로부터 병원성 유기체의 생성물에 대해 반응하는 "선천적 면역" 반응을 생성하여 포유류를 보호한다. TLR은 세포를 파괴하고 TLR과 상호작용할 수 있는 dsRNA 또는 다른 PAMP를 퍼뜨리는 유해한 환경 물질로부터 동물을 보호한다.

선천적 면역 반응은 여러 염증성 시토킨스(cytokines), 케모킨스(chemokines), 동반 자극 분자(co-stimulatory molecules)를 부호화하는 유전자를 증가시키며 항원-구체적인 적응 면역을 개발하는 역할을 한다. PAMP에 의한 TLR의 자극은 MyD88과 IRAK1 과 같은 여러 단백질이 관여하는 신호 캐스캐이드(signaling cascade)를 시작한다. 이러한 신호 캐스케이드는 상기 적응 면역 반응을 지시하는 (TNFα와 IL-1β와 같은) 염증 우호 사이토킨스(cytokines)와 주효 사이토킨스(cytokines)의 분비를 유도하는 전사인자(transcription factor) NF-kB의 활성화를 야기한다. 상기 신호 캐스케이드는 부가적으로 제1 유형 IFN의 생성을 증기시키도록 IRF-3의 경로에 신호를 하고, 통계(Stats)의 활성화 하며, IRF-1 유전자 발현의 증가하고, ISRE's, 인터페론 반응 인자(interferon response factor, IRF)를 활성화할 수 있는 TRIF/TICAM-1과 같은 어댑터(adapter)를 포함한다.

TRL4는 LPS 인식에 필수적인 수용체이다. 더욱이, TLR4은 열쇼크 단백질(HSP60, HSP70), 피브로넥틴(fibronectins)의 영역 A, 하이루론 산(hyaluronic acid)의 올리고삭카라이드스(oligosacchrides), 헤파린 설페이트(heparin sulfate), 피브리노겐(fibrinogen)과 같은 내생의 리간드(endogenous ligand)를 인식하는데 관여한다.

독소 투입 또는 활성화된 보완물의 영향(Parker and Brigham, J, Appl. Physiol., 63(3), 1058-1062 (1987))에 관한 초기 연구에서부터, 두 단계(초기와 후기)를 여러 형태의 급성 호흡 부진 증후군으로 설명해 왔다. Egan et al., J. Surg. Res., 45, 204-214 (1988)을 참조. 본 공개 주제 내용은 폐부종의 초기 단계에서 TLR4와 폐미세혈관 내피 세포의 관련성이 허혈 재관류에 기인함을 함축하는 데이터와 관계가 있다. 특히, 이후의 예에서 설명한 바와 같이, 본 공개 주제 내용은 허혈 재관류에 기인한 부종이 MyD88-/- 쥐에서 발생하였고 허혈 재관류에 기인한 부종이 MARK와 NF-κB의 활성화와 관계없이 발생한다는 것을 지적한다. 이러한 증거는, 쥐의 내피세포에 TRIF 경로가 없다는 것과 함께(Harari et al., Circ . Res., 98(9), 1134-1140 (2006))을 참조), TLR4 조정에 의한 부종은 TLR4 조정에 의한 전사(transcripional) 사건과 독립적으로 일어난다는 것을 암시한다. 본 공개 주제 내용은 TLR4 작용제(antagonist)로 알려진 CRX-526이 IRI의 모델에서 부종을 방지한다는 것을 찾아낸 것과 관련이 있다.

III . 화학식(I)

III .A. 화학식 (I)의 화합물

어떤 실시 예에서, 본 공개 주제 내용은 허혈 재관류와 관련된 부종을 포함하는 부종을 방지 또는 감소시키는 화합물의 사용과 관계가 있다. 어떤 실시 예에서 상기 화합물은 지방질(lipid)이다. 모방물(mimetic)은 모노사카라이드(monosaccharide) 아날로그를 포함한다(comprising). 어떤 실시 예에서 상기 모노사카라이드 아날로그는 아미노 설탕이다. 어떤 실시 예에서, 상기의 아미노 설탕은 글루코사민(glucosamine)이다. 어떤 실시 예에서, 상기 화합물은 아미노알킬 글루코사미나이드 포스페이트(aminoalkyl glucosaminide phophate, AGP) 또는 그것 들의 약학적으로 허용할 수 있는 염이다.

일반적으로, AGP는 인공(화학적으로 합성한) 지방 A 모방물이며, 다음 화학식(I)의 구조를 가질 수 있다:

여기서:

n은 1에서 6 사이의 하나의 정수;

X₁은 O(산소) 또는 S(황);

X₂는 O(산소) 또는 S(황);

R₁, R₂, R₃는 각각 C₂-C₁₆ 아실(acyl);

R₄는 H, 하이드록실알킬(hydroxylalkyl), -C(=O)NH₂, -(CH₂)_mC(=O)OH로 이루어지는 군에서 선택하고, 여기서 m은 0과 2 사이의 정수이고;

어떤 AGP는 TLR4의 작용제로 행동하며, 다른 것들은 TLR4를 억제하는 것으로 보고하고 있다. Stover et al., J. Biol . Chem., 279(6), 4440-4449 (2004)를 참조. 일반적으로, 억제 AGP는 여덟 개보다 적은 수의 탄소를 갖는 이차 아실(acyl) 사슬(즉, R₁, R₂, 또는 R₃)을 적어도 하나 포함한다. 따라서, 어떤 실시 예에서, R₁, R₂, R₃ 중 적어도 하나는 -C(=O)R₈이며, 여기서 R₈은 C₁-C₆ 알킬(alkyl)(즉, R₁, R₂, R₃ 중 적어도 하나는 C₂-C₇ 아실(acyl))이다. 어떤 실시 예에서, R₁, R₂, R₃ 중 적어도 둘은 C₂-C₇ 아실(acyl)이다. 어떤 실시 예에서, R₁, R₂, R₃ 중 적어도 하나는 -C(=O)R₈이며, 여기서 R₈은 C₅ 알킬(alkyl)이다. 어떤 실시 예에서, R₅, R₆, R₇은 각각 C₁₀-C₁₂ 직선 사슬, 완전 포화 알킬(alkyl)이다.

어떤 실시 예에서, 상기 화합물은 CRX-526, 즉 상기 화학식(I)의 화합물로서, n이 1, X₁과 X₂가 각각 O; R₁, R₂, R₃가 각각 -C(=O)(CH₂)₄CH₃; R₄가 -C(=O)OH; R₅, R₆, R₇이 각각 -(CH₂)₁₀CH₃ 또는 약학적으로 허용되는 그들의 염이다

다양한 AGP의 합성 및 활동도는 이전에 설명되었다. Cluff et al., Infection and Immunity, 73(5), 3044-3052 (2005); Stover et al., J. Biol . Chem., 279(6), 4440-4449 (2004); 그리고 위 문서 안의 인용된 참조물을 참조. Johnson et al.의 U. S. Patent No. 6,113,918도 참조.

상기 화학식(I)의 화합물은 탄소 원자가 비대칭적이며, 따라서 거울상체(enantinomer) 또는 부분입체이성질체(diasteromer)로 존재한다. 부분입체이성질체를 이루는 혼합물은 예를 들면 크로매토그래피(chromatography) 그리고/또는 부분 결정화 그 자체의 방법으로 그것들의 물리적 화학적 차이에 근거하여 그들의 개별적인 부분입체이성질체로 분리할 수 있다. 거울상체는 적절한 광학적으로 활성적인 화합물(예를 들면 알코올)과 의 반응으로 거울상체 혼합물을 부분입체이성질체로 변환하여 분리하여, 상기 부분입체이성질체를 분리하고 개별적인 부분입체이성질체를 변환(즉 가수분해)하여 해당 순수 거울상체로 분리할 수 있다. 모든 이러한 부분입체이성질체, 거울상체와 이들의 혼합물을 포함하는 이성질체는 본 공개 주제 내용의 일부로 간주한다.

III .B. 약학적으로 허용하는 염

여기서 사용한 "약학적으로 허용하는 염(pharmaceutically acceptable salt)"이라는 본 공개 주제 내용의(즉 화학식(I)의 화합물) 화합물과 관한 표현은 약학적으로 허용하는 양이온 염을 포함한다. "약학적으로 허용하는 양이온 염"은 알칼리 금속 염(즉, 나트륨, 칼륨) 알칼리 토금속 염(즉, 칼슘, 마그네슘), 알루미늄 염, 암모니움 염, 벤자틴(benzathine)(N,N'-디벤질에틸렌디아민(dibenzylethylenediamine), 촐라인(choline), 에탄올아민(ethanolamine), 디에탄올아민(diethanolamine), 트리에탄올아민(triethanolamine), 에틸렌디아민(ethylenediamine), 메갈루민(megalumine) (N-메틸글루카민(methylglucamine)), 베네타민 (benethamine) (N-벤질페네틸아민(benzylphenethylamine), 에탄올아민(ethanolamine), 디에틸아민(diethylamine), 피퍼라진(piperazine), 트리에탄올아민(triethnolamine) (2-아미노(amino)-2-하이드록시메틸(hydroxymethyl)-1, 3-프로파네디올(propanediol)), 프로케인(procaine) 같은 유기 아민(amine)의 염을 약학적으로 허용하는 양이온 염으로 정의하지만 위의 염으로 제한하지는 않는다. 어떤 실시 예에서 사용한 "약학적으로 허용하는 염"이라는 용어는 사람에게 약학적으로 허용할 수 있는 염을 의미한다.

화학식 (I)의 화합물의 약학적으로 허용하는 염은 상기 화합물의 유리 산(free acid)과 보통 하나 또는 그 이상의 그와 동등한 적절한 염기(base)를 코-용제(co-solvent)에서 반응시켜 손쉽게 준비할 수 있다. 코-용제는 디에틸에테르(diethylether), 디글라임(diglyme), 아세톤(acetone)을 포함하지만 이에 한정하지는 않는다. 염기는 수산화나트륨, 메톡사이드(methoxide) 나트륨, 에톡사이드(ethoxide) 나트륨, 수소화나트륨, 메톡사이트(methoxide) 칼륨, 수산화마그네슘, 수산화칼슘, 벤자틴(benzathine), 콜린(choline), 에탄올아민(ethanolamine), 디에탄올아민(diethanolamine), 피페라진(piperazine), 트리에탄올아민(triethanolamine)을 포함하지만, 이에 한정하지는 않는다. 염은 건조하거나 비-용제(non-solvent)를 첨가하여 농도별로 분리한다. 많은 경우, 염은 산의 용액을 양이온이 다른 염의 용액(예를 들면, 나트륨 또는 칼륨 헥사논산 에틸(ethylhexanoate), 올레산염(oleate) 마그네슘)을 섞은 용액을 앞에 설명한 원하는 양이온 염이 침전하는 코-용제를 이용하여 준비하거나 아니면 농도별로 분리할 수 있다.

IV . 부종을 방지 또는 감소시키는 방법

어떤 실시 예에서, 본 공개 주제 내용은 부종을 치료하는 방법과 관계가 있다. 어떤 실시 예에서, 본 공개 주제 내용은 조직에서 부종을 방지하거나 감소시키는 방법을 제공하며, 그 방법은 효과적인 양의 화학식 (I)의 화합물과 상기 조직을 접촉시키는 것을 포함한다:

여기서:

n은 1에서 6 사이의 하나의 정수;

X₁은 O(산소) 또는 S(황);

X₂는 O(산소) 또는 S(황);

R₁, R₂, R₃는 각각 C₂-C₁₆ 아실(acyl);

어떤 실시 예에서, R₁, R₂, R₃ 중 적어도 하나는 -C(=O)R₈이고, 여기서 R₈은 C₅ 직선 사슬, 완전 포화 알칼(alkyl)이다. 어떤 실시 예에서, R1, R2, R3는 각각 C₂-C₇ 아실(acyl)이다.

어떤 실시 예에서, n이 1이다. 어떤 실시 예에서, X₁, X₂가 각각 O이다. 어떤 실시 예에서, R₄는 -C(=O)OH이다. 어떤 실시 예에서, R₁, R₂, R₃는 각각 C₂-C₁₆ 아실(acyl)이다.

어떤 실시 예에서, 상기 화합물은 CRX-526, 즉, 화학식 (I)의 화합물에서, n이 1이고, X₁, X_2ㄱ가 각각 O; R₁, R₂, R₃가 각각 -C(=O)(CH₂)₄CH₃; R₄는 -C(=O)OH; R₅, R₆, R₇은 각각 -(CH₂)₁₀CH₃, 또는 약학적으로 허용하는 이들의 염이다.

방지 또는 감소할 부종은, 예를 들면, 폐의 부종, 염증, 감염, 트라우마(trauma) (예를 들면, 수술), 독소의 흡입, 순환계 장애, 또는 고공의 노출을 포함하는 여러 원인과 관련이 있다. 어떤 실시 예에서는, 부종은 내피의 삼투성 (permeability) 증가와 관련이 있다. 어떤 실시 예에서, 방지 또는 감소시켜야 할 부종은 (예를 들면, 허혈 재관류의 결과로 또는 이와 관련하여), 장기 이식, 조직 이식(예를 들면, 유방 재구성 같은 플라스틱 수술 과정), 자가이식 (예를 들면, 자가 조직 이식, 피부 이식), 이외의 혈관 접목 또는 봉합(예를 들면, 근육 접목 또는 근육피부판), 폐의 색전제거(폐동맥으로부터 응고한 혈액을 제거하는 것), 또는 폐의 혈전동맥내막절제술(조직화한 혈전과 섬유소를 폐의 맥관 구조로부터 외과 수술적 제거) 동안에 일어나는 허혈 재관류와 관련이 있다. 어떤 실시 예에서, 허혈 재관류는 심근경색 또는 뇌졸증과 관련이 있다. 어떤 실시 예에서, 허혈 재관류는 심장 외과 수술 중의 심장마비(즉, 상행대동맥의 크로스 클램핑에 의한 심장의 관류 중단 때와 같은 의도적인 심장 활동의 중단)와 관련이 있거나, 정형외과적 수술(예를 들면, 외과 분야에서 혈액을 감소시키기 위해 지혈대 또는 다른 도구를 팔다리에 적용하거나 또는 그렇지 않으면 혈액 흐름을 차단할 때)로부터 야기되는 골근육에서의 허혈과 관련이 있다.

어떤 실시 예에서, 조직은 예견되는 허혈 사건(예를 들면, 장기 이식을 위한 조직의 제거, 심장마비, 지혈대의 적용 등) 전에 효과적인 양만큼의 상기 화합물과 접촉하여 허혈 이후의 재관류 동안에 조직(tissue)에 손상을 방지하거나, 감소시킨다. 어떤 실시 예에서는, 조직은 허혈 동안에 상기 화합물과 접촉할 수 있다. 어떤 실시 예에서, 조직은 일정 간격의 허혈 후(예를 들면, 재관류 동안에) 상기 화합물과 접촉할 수 있다. 어떤 실시 예에서, 조직은 허혈 전에, 허혈 도중에, 허혈의 기간이 지난 후, 또는 이들의 조합으로 접촉할 수 있다.

상기의 조직은 피부, 뼈, 골수, 뇌, 연골, 각막, 골격근, 심근, 분문판, 평활근, 혈관, 팔다리와 손발가락, 신장 또는 그의 일부, 간 또는 그의 일부, 심장 또는 그의 일부, 췌장 또는 그의 일부, 창자 또는 그의 일부, 폐 또는 그의 일부를 포함(comprise)할 수 있다. 어떤 실시 예에서, 조직(tissue)은 심장, 간, 뇌, 작은창자, 췌장, 골근육, 피부 폐 조직(tissue)로 이루어지는 그룹에서 선택할 수 있다. 어떤 실시 예에서, 폐 조직은 폐 또는 폐 이식 기증자로부터 제공받은 그의 일부(예를 들면, 폐엽)를 포함하며(compromise), 상기 폐 조직은 폐 이식 수용자에게 이식을 의도로 한 것이다.

이식 관련된 실시 예에서, 기증자 또는 수용자는 사람 또는 사람이 아닌 포유류 일 수 있다. 장기 또는 조직 이식 기증자(예를 들면, 폐 이식 기증자)는 살아있는 것이거나, 살아있지 않은 것(즉, 사체) 일 수 있다. 어떤 실시 예에서, 상기 기증자는 심장이 뛰지 않는 기증자(non-heart-beating doner, NHBD) 일 수 있다. 어떤 실시 예에서, 상기 기증자는 수용자와 같은 개인일 수 있다(즉, 자가 이식).

어떤 실시 예에서, 선택적 정형외과의 수술을 위해 혈액이 없는 지역을 제공하기 위한 지혈대의 팽창의 결과로 간헐적인 허혈이 계속 될 때, 상기 조직은, 골격근, 뼈 그리고 다른 연조직(soft tissue) 일 수 있다. 어떤 실시 예에서, 상기 조직은, 문맥삼분기(門脈三分岐)의 압축에 의해 간으로의 혈액 이동이 막히는 때의 프랭글(Pringle) 조작 하의 간 일 수 있다.

화학식 (I)의 많은 화합물은 TLR4의 작용제로 예상한다. 따라서, 어떤 실시 예에서, 상기 화합물은 TLR4의 작용제일 것이다. 어떤 실시 예에서, 화학식 (I)의 화합물은 TLR2의 작용제이다. 어떤 실시 예에서, 상기 화합물은 TLR4와 TLR2모두의 작용제이다.

어떤 예에서, 본 공개 주제 내용은 부종 치료를 필요로 하는 주체 안의 부종을 방지 또는 감소하는 방법을 제공한다. 어떤 실시 예에서, 상기 방법은 효과적인 양의 화학식 (I)의 화합물 또는 그것의 약학적으로 허용하는 염을 상기 주체 투여하는 것을 포함(comprise)한다. 어떤 실시 예에서, 상기 화합물을 예상되는 허혈 사건 전에, 허혈 도중에, 그리고/또는 간헐적인 허혈 후에 상기 주체에 투여할 수 있다. 상기 화합물은 여러 적절한 경로(즉, 구강으로, 정맥으로, 비경구적(非經口的), 등으로) 투여할 수 있다.

어떤 실시 예에서, 상기 주체는 포유류이다. 어떤 실시 예에서, 상기 주체는 사람이다.

V. 이식 도중 허혈 재관류와 관련된 부종을 방지하거나 감소시키는 방법

어떤 실시 예에서, 본 공개 주제 내용은, 장기나 조직 이식의 주체에서 허혈 재관류와 관련하여 부종을 방지하거나 감소시키는 방법을 제공한다. 상기 방법은: 이식을 위한 장기 또는 조직 제공하기; 화학식 (I)의 화합물 또는 약학적으로 허용하는 그것의 염을 상기 장기나 조직에 접촉하여, 처리된 장기 또는 조직을 제공하기; 상기 처리한 장기 또는 조직을 상기 이식을 필요로 하는 주체에 이식하는 것을 포함(comprise)한다. 여기서, 상기 주체 내의 허혈 재관류와 관련된 부종은, 상기 화합물로 치료하지 않은 장기나 조직을 사용하여 이식을 수행한 주체 내에 허혈 재관류와 관련되는 부종에 비해 방지 또는 감소하였다.

어떤 실시 예에서, 상기 장기나 조직은, 신장 또는 그의 일부, 간 또는 그의 일부, 심장 또는 그의 일부, 망막, 췌장 또는 그의 일부, 창 또는 그의 일부(즉, 작은 또는 큰창자의 조직), 골격근, 피부 조직, 연조직, 근육 조직(골격근 또는 평활근), 뇌 조직, 폐 또는 그의 일부, 그러나 이에 한정하지 않는 그룹으로부터 선택할 수 있다. 어떤 실시 예에서, 상기 장기나 조직은 폐 장기 이식 기증자에 의해 제공된 폐 또는 그의 일부(예를 들면, 폐엽(肺葉))이며, 상기 폐 조직은 폐 이식 수용자에게 이식을 의도로 한 것이다.

장기나 조직의 기증자 또는 수용자는 사람이나 사람이 아닌 포유류일 수 있다. 어떤 실시 예에서, 상기 기증자와 수용자는 같은 종일 수 있다. 어떤 실시 예에서, 상기 기증자와 수용자는 같은 개인일 수 있다. 어떤 실시 예에서, 상기 기증자와 수용자는 다른 종일 수 있다. 따라서, 본 공개 주제 내용은 이종기관이식 절차의 일부로 사용할 수 있다.

상기 폐(또는 다른 장기나 조직) 이식 기증자는 살아 있거나, 살아 있지 않을 수 (즉, 사체) 있다. 어떤 실시 예에서, 기증자는 심장이 뛰지 않는 기증자 (NHBD)일 수 있다.

통상, 폐 이식 기증자는 폐 이식을 받고자하는 수용자와 같은 종이다. 폐 기증자는 보통, 기증자 나이, 흡연 이력, 동맥 혈액의 가스, 가슴 방사선 결과, 기관지경의 결과, 회수 시의 상기 폐의 물리적 검사 같은 의료 관련 정보에 근거하여 선택한다. 본 공개 주제 내용은 폐 이식과 관련된 전형적인 허혈 재관류 관련 부종을 감소 또는 방지할 수 있기 때문에, 어떤 실시 예에서, 기능이 약간 떨어지는 폐 조직은 이식을 고려할 수 있다 (즉, 이식 과정에서는 기능의 상실이 적기 때문이다).

상기 접촉은 여러 적절한 경로(즉, 구강으로, 정맥으로, 비경구적(非經口的), 등으로)를 통하여 상기 화합물을 포함하는 화학식의 투여로 이루어질 수 있다. 상기 방법은 더욱이 기증자로부터 상기의 조직 또는 장기를 제거하는 단계를 포함(comprise)할 수 있다. 따라서, 상기 접촉은 제건 전, 제거 후, 또는 제거 전과 제거 후에 모두 이루어질 수 있다. 상기 방법은 상기 조직과 장기의 냉 또는 온 보존을 포함(comprise) 한다. 상기 접촉은 냉 또는 온 보존 전에, 냉 또는 온 보전 중에, 또는 냉 또는 온 보존 전 또는 보전 중에 모두 이루어질 수 있다. 어떤 실시 예에서, 상기 접촉은 기증자가 상기 화합물을 포함하는 약학적으로 허용하는 조성물을 흡입하여 이루어질 수 있다. NHBF 또는 다른 기증자의 경우, 상기 접촉은 기도(airway)로 수행될 수 있다. 어떤 실시 예에서, 상기 접촉은 상기 화합물을 포함하는 조성물을 탈체(ex vivo) 관류(灌流) 회로의 폐 동맥에 투여하여 이루어지거나, 폐 정맥을 통하여 역행할 수 있다. 어떤 실시 예에서, 상기 접촉은 기증자의 회수 이후, 장기를 관류시키기 위해 사용하는 탈체(ex vivo) 관류(灌流) 회로나 조직체에서 상기 접촉이 이루어질 수 있다. 어떤 실시 예에서, 상기 접촉은, 폐에 살포 그리고 환기를 위한 탈체(ex vivo) 환기/관류(灌流) 회로 또는 조직체에서 이루어질 수 있다.

어떤 실시 예에서, 상기 화학식 (I)의 화합물은 TLR2와 TLR4 중 하나 또는 둘 모두의 작용제이다. 어떤 실시 예에서, 상기 화합물은 TLR2와 TLR4 둘 모두의 작용제이다.

VI . 약학적 조성

여기에서 사용한 것과 같이, '활성 화합물(active compound)"이라는 용어는 화학식 (I)의 화합물과 그것들의 약학적으로 허용되는 염을 의미한다. 상기 활성 화합물은 모든 적절한 접근법을 통해 상기 조직에 접촉할 수 있다. 여기에서 사용하는 "효과적인 양(effective amount)"이라는 용어는 여기서 설명하는 여러 병리학적 상태와 후유증을 억제할 수 있는 활성 화합물 또는 활성 화합물들의 양을 의미한다. "억제하다(inhibit)" 또는 "억제하는(inhibiting)"이라는 용어는, 부종의 위험에 있는 주체 내의 조직(예를 들면, 폐 조직) 손상에 관계되는 또는 유래하는 상태, 하지만 이에 한정되지 않는 병리학적 상태의 진행을 금지, 방지, 처리, 완화, 개선, 정지, 절제, 감소, 늦춤 또는 역전하거나, 병리학적 상태의 고통 강도를 감소시키는 것을 의미한다. 이와 같은 본 공개 주제 내용의 활성 화합물을 투여하는 방법은 적절한 의학적 치료상(급성) 그리고/또는 예방적(방지) 투여 모두를 포함한다.

활성 화합물의 투여 용량과 시기는 물론 치료해야 할 주체, 고통 원인의 고통 정도, 투여 방식, 처방 의사(physician)의 판단에 따른다. 따라서, 주체별 다양성 때문에 아래에 주어진 복용량은 가이드라인이며, 의사가 치료를 성취하기 위해 상기 주체에 적절하다고 생각하는 상기 화합물의 복용량을 적정(滴定)할 수 있다. 원하는 바의 치료 정도를 고려할 때, 의사는 상기 주체의 나이, 기존에 존재하는 질병의 존재, 다른 질병의 존재 같은 여러 요인에 균형을 맞춘다. 약학적 조제물을 아래에 자세히 논의한 바와 같이, 구강, 구강, 정맥, 에어로졸 투여를 위하여 준비할 수 있다.

복용량의 사용이 여기에 설명한 실시 예의 범위 안에 있는, 모든 특정 활성 화합물의 치료 효과적 복용량은, 화합물에 따라 그리고 주체에 따라 다를 수 있으며, 주체의 상태나 배달 경로에 달려있다. 일반적인 제안으로, 염을 사용한 경우들을 포함하여, 활성 화합물을 근거로 모든 무게를 계산하여, 약 0.1~50 ㎎/㎏의 복용량이 치료적 효과를 갖는다. 고 수준에서의 관심사인 독성 효과는 정맥주사의 용량을 낮은 수준으로 제한하며, 염을 사용한 경우들을 포함하여, 활성 화합물을 근거로 모든 무게를 계산하여, 최대 10 ㎎/㎏ 이다. 구강 투여의 경우, 복용량은 약 10 ㎎/㎏에서 약 50 ㎎/㎏이다. 통상, 근육내 주사로 복용량은 0.5 ㎎/㎏에서 5 ㎎/㎏이다. 어떤 실시 예에서, 복용량은 1 μmol/kg에서 50 μmol/kg이거나, 선택적으로, 정맥주사용 또는 구강 투여의 경우 화합물 약 22 μmol/kg에서 약 33 μmol/kg이다.

여기에서 설명한 체내와 체내 분석은 화합물의 활성도를 비교할 수 있는 접근법을 제공한다. 이와 같은 비교의 결과는 부종으로부터 보호를 유발하기 위해 사람을 포함한 포유류의 복용량을 결정하는데 유용하다. 이러한 분석은 화학식 (I)의 화합물과 다른 TLR4 그리고/또는 TLR2 리간드를 포함하는 다른 화합물의 활동도의 비교를 위하여 제공한다. 이러한 비교의 결과는 복용량 수준을 결정하는데 유용하다.

본 공개 방법에 따르면, 여기서 설명한 약학적으로 활성인 화합물은 고체로 또는 액체로 구강을 통해 투여하거나, 용액, 현탁액, 유화액(emulsion) 또는 흡입으로 근육주사나 정맥주사를 통해 투여할 수 있다. 어떤 실시 예에서, 화합물 또는 염은 리포솜의(liposomal)의 현탁액으로 흡입, 정맥주사 또는 근육주사를 통해 투여할 수 있다. 흡입을 통해 투여하는 경우, 활성 화합물이나 염은 다수의 크기가 약 0.5 마이크론에서 약 5 마이크론의, 그리고 선택적으로 약 1 마이크론에서 약 2 마이크론의 고체 입자나 액체 방울 형태일 수 있다. 어떤 실시 예에서, 활성 화합물은 나노파티클 전달 매개체(vehicle)로 투여할 수 있다.

상기의 약학적 조제물은 여기서 설명한 모든 약학적으로 허용하는 운반자(carrier) 안의 활성 화합물 또는 약학적으로 허용하는 그것의 염을 포함(comprise)할 수 있다. 만약 용액이 바람직하다면, 물에 용해되는 화합물 또는 염에 대해, 물을 운반자로서 선택한다. 물에 용해되는 화합물 또는 염에 대해, 글리세롤(glycerol), 프로필렌 글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜(polyethylene glycol) 또는 이들의 혼합물과 같은 유기 매개체(vehicle)가 적당할 수 있다. 후자의 경우, 유기 매개체는 상당한 양의 물을 포함할 수 있다. 위의 두 어느 경우이든, 그 용액은 관련 분야의 알려진 적절한 방식으로 소독할 수 있으며, 통상 0.22 마이크론 필터로 여과한다. 소독 이후, 디파이로제너레이티드(depyrogenerated) 유리 병 같은 적절한 용기에 나누어질 수 있다. 상기의 나눔은 선택적으로 무균성(aseptic) 방법에 의해 이루어진다. 소독된 마개를 상기 병 위에 위치하여, 원한다면, 병 안의 내용물을 냉동건조(lyophilize)할 수 있다.

활성 화합물 또는 그들의 염(예를 들면, 화학식 (I)의 화합물)에, 상기 약학적 조제물은 pH-조절 첨가제 같은 다른 첨가제를 더 포함할 수 있다. 특히, 유효한 pH-조절 첨가제 물질(agent)은, 염산 같은 산, 젖산 나트륨, 초산 나트륨, 인산 나트륨, 구연산 나트륨, 붕산 나트륨, 글루콘산 나트륨 같은 염기 또는 완충제를 포함한다. 더욱이, 상기 조제물은 항균성의 방부제를 포함할 수 있다. 유용한 항균성 방부제로 메틸파라벤(methyparaben), 프로필파라벤(propylparaben), 벤질 알콜(bezyl alcohol)을 포함한다. 상기 항균성 방부제는 통상 상기 조제물이 복수의 복용분의 이용을 위해 제작한 병에 보관할 때 사용한다. 여기서 설명한 상기 약학적 조제물은 관련 분야에서 알려진 기술을 이용하여 동결 건조할 수 있다.

구강을 통한 투여를 위하여, 약학적 조제물은 용액, 현탁액, 정제(tablet), 환약(pill), 캡슐(capsule), 분말 등의 형태를 취할 수 있다. 구연산 나트륨, 탄산칼슘, 인산칼슘 같은 여러 첨가제를 포함하는 정제는 폴리비닐피롤리돈(polyvinylpyrrolidone), 수크로우스(sucrose), 젤라틴, 아카시아(acacia) 같은 결합물(binding agent)과 전분(예로서 감자 또는 타피오카(tapioca) 전분)과 복합 실리케이트(complex silicate) 같은 정제 분해물질과 함께 사용한다. 더욱이, 스테아린산마그네슘, 로릴황산나트륨, 활석 같은 윤활물(lubricating agent)은 정제화 목적으로 종종 매우 유용하다. 비슷한 유형의 고체 조성물은 연성 또는 경성 충전된 젤라틴 캡슐의 충전제로 쓰인다. 이와 관련한 재료는 젖당, 또는 유당, 고분자 무게의 폴리에틸렌 글리콜(polyethylene glycol)을 또한 포함한다. 수용성 현탁액 또는/그리고 엘릭시르스(elixirs)가 구강을 통한 투여에 바람직하면, 본 공개 주제 내용의 화합물은 여러 감미료, 착향료, 착색제, 유화제 그리고/또는 서스펜션화제, 그리고, 물, 에틴올(ethanol), 프로필렌 글리콜(propylene glycol), 글리세린(glycerin)과 이들의 다양한 조합 같은 희석제와 함께 조합할 수 있다. -31

여기서 설명한 주제 내용의 또 다른 실시 예에서, 여기서 설명한 활성 화합물 또는 그것의 염이 봉인된 용기안의 단위 복용분 형태를 포함(comprise)하는, 주사로 주입 가능하고, 안전한 살균의 조제물을 제공한다. 상기 화합물 또는 염은 주체에 주사로 주입하기 적절한 액체의 조제물로 형성하기 위한 약학적으로 허용하는 적절한 운반제로 재구성이 가능한 동결 건조 형태로 제공된다. 상기 화합물 또는 염이 실질적으로 수용성인 경우, 생리학상으로 허용할 수 있는 충분한 양의 유화제를 충분한 양으로 사용하여 상기 화합물 또는 염을 수용성 운반제에서 유화시킬 수 있다. 특별히 유용한 유화제는 포스파티딜콜린(phosphatidyl choline)과 레시틴(lecithin)을 포함한다.

여기의 또 다른 실시 예는 여기에서 공개한 상기 활성 화합물의 리포솜의(liposomal) 조제물을 포함한다. 리포솜(liposomal)의 현탁액을 형성하는 기술은 관련 분야에서 알려진 것이다. 상기 화합물이 수용성 염인 경우, 종래의 리포솜(liposome) 기술을 이용하여, 위와 같은 것을 지방질 수포에 혼합될 수 있다. 이와 같은 경우, 상기 화합물의 물에 대한 용해도에 기인하여, 상기 화합물은 실질적으로 친수성의 중앙 또는 리포솜(liposome)의 코어에 흡수될 수 있다. 사용된 지방층은 모든 종래의 조성일 수 있으며, 콜레스트롤(cholestrol)이거나 콜레스트롤이 없을(cholestrol-free) 수 있다. 상기의 관심 활성 화합물이 물에 불용성인 경우, 또 다시 종래의 리포솜(liposome) 형성 기술을 이용하여, 상기 염을 상기 리포솜(liposome)의 구조를 형성하는 소수성 지방질 이중층 안에 실질적으로 흡수할 수 있다. 어느 경우이든, 표준 초음파분해 그리고 균질화 기술을 이용함에 따라, 생성되는 상기 리포솜(liposome)은 크기가 감소할 수 있다. 여기서 공개한 상기 활성 화합물을 포함하는(comprising) 리포솜의(liposomal) 조제물은 동결 건조되어 동결 건조물을 생성하여, 물과 같은 약학적으로 허용하는 운반제와 같이 리포솜의(liposomal) 현탁액을 재생할 수 있다.

에어로졸로 흡입하여 투여하기 적절한 약학적 조제물을 또한 제공한다. 이 조제물들은 여기서 설명한 원하는 화합물 또는 그의 염, 또는 상기 화합물이나 염의 복수 고체 입자의 용액 또는 현탁액을 포함(comprise)한다. 상기의 원하는 조제물은 작은 챔버에 놓여 분무화할 수 있다. 분무화는 상기 화합물이나 염을 포함하는(comprise) 복수의 액체 방울 또는 고체 입자를 형성하기 위해 압축 공기나 초음파 에너지를 이용하여 성취할 수 있다. 상기 액체 방울 또는 고체 입자는 입자 크기가 약 0.5에서 약 10 마이크론의 범위에 있어야 하며, 선택적으로 약 0,5에서 약 5 마이크론의 범위에 있어야 한다. 상기 고체 입자는 원자화(micronization) 같은 관련 분야에서 알려진 적절한 방식으로 상기 고체 화합물 또는 그것의 염을 가공하여 얻을 수 있다. 선택적으로, 고체 입자나 액채 방울의 크기는 약 1 마이크론에서 약 2 마이크론 일 수 있다. 이와 관련하여, 이러한 목적을 성취하기 위해, 상업적 분무화가 가능하다. 상기 화합물은 그 공개가 그 전체로서 참조되어 통합된 미국 특허 5628984에 기재된 방식으로 호흡가능한 입자의 에어로졸 현탁액을 통해 투여될 수 있다.

에어로졸로 투여가 적절한 상기 약학적 조제물이 액체의 형태인 경우, 상기 조제물은 물을 포함하는(comprise) 운반물 안에 수용성의 활성 화합물을 포함(comprise)할 수 있다. 분무화를 할 때, 원하는 크기 범위에 있는 액체 방울의 형성을 이루기 위해 상기 조제물의 표면 장력을 충분히 낮추는 계면 활성제가 있을 수 있다.

지적한 바와 같이, 물에 용해되는 그리고 물에 용해 안 되는 두 가지 활성 화합물이 제공된다. 여기서 사용한 바와 같이, "물에 용해되는"이라는 용어는 어떤 조성물이든 약 50 ㎎/㎖의 또는 그 이상의 양으로 물에 녹는 것을 의미하기 위해 정의한 것이다. 여기서 사용한 바와 같이, "물에 용해 안 되는"이라는 용어는 어떤 조성물이든 약 20 ㎎/㎖ 보다 적은 용해도를 갖는 것을 의미하기 위해 정의한 것이다. 어떤 실시 예에서, 수용성 화합물 또는 염이 바람직할 수 있으며, 반면 다른 실시 예에서, 물에 불용성 화합물 또는 염이 마찬가지로 바람직할 수 있다.

한 투여 형태에서, 본 공개 주제 내용의 화합물은, 수술 바로 전(예를 들면, 수술전 24 시간 이내, 예로 심장 수술 또는 이식 수술)에, 수술 도중 그리고/또는 후에(예를들면 수술 후 24시간 내에) 허혈의 위험이 있을 때, 투여할 수 있다. 다른 한 투여 형태에서, 활성 화합물은 초기 추가 복용량(예를 들면, 한 회의 주사 또는 투입)과 함께, 수술 전, 도중 그리고 후의 일정한 투여가 잇따르는 수술 전에 투여한다. 상기 활성 화합물은 매일 시간에 따라 투여 할 수 있다.

본 분야에 익숙한 사람은,본 공개를 비추어 볼 때, 일정양의 유효구성 요소와 다양한 약학적 구성을 준비하는 방법은 알려져 있거나, 결정할 수 있다. 약학적 조성을 준비하는 방법의 예로, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easter, Pa., 16th Edition (1980)을 참조. 예를 들면, 본 공개 주제 내용에 따른 약학적 조성물은 0.0001%-95%의 활성 화합물이다. 어떤 경우이든, 투여할 상기 조성물 또는 조제물은 치료할 주체의 질병/상태를 치료하기에 효과적인 양으로 활성 화합물의 정량을 포함할 수 있다.

어떤 실시 예에서, 본 공개 주제 내용의 방법은 체외의 조직 또는 장기 또는 장기 기증자로부터 이식 수용자로 이식되는 조직 또는 장기에서의 허혈 재관류와 관련된 부종을 방지 또는 감소하는데 사용할 수 있다. 체외의 조직이나 장기는 개인 안에 있는 것이 아닌 (탈체(ex vivo)라는 용어로 쓰이는) 조직이나 장기이다. 조직과 장기의 이식을 위해, 그 중간의 그리고 뒤따르는 수용자로의 이식 동안에, 제거된 기증자의 조직과 장기는 수확 중에 허혈 재관류 관련 상태 하에 놓이게 된다. 본 공개 방법은 예를 들면 이식할 조직이나 장기를 유지 보존하기 위해 보조의 용액으로 이식할 조직이나 장기의 기능을 향상하는데 사용할 수 있다. 예를 들면, 상기 방법이나 조성은 이동 중의 이식할 조직이나 장기를 세척하거나 이식 전, 도중 또는 후에 상기 조직이나 장기와 접촉하는 곳에 위치하여 사용할 수 있다. 어떤 실시 예에서, 본 공개 주제 내용의 조제물은 상기 조직이나 장기가 기증자 안에 존재하고 있는 동안에 접촉할 수 있다.

본 공개 주제 내용의 용액은 관류 장치(예를 들면, 체외 관류 회로)에 사용할 수 있다. 여기서 사용하는 관류 장치는 특정 장기를 주입하는데 사용하는 모든 기계적 장치 또는 화합물이나 조성물을 포함하는(comprise) 용액을 체계적으로 순환하는 것이다. 이러한 장치는 하나 또는 그 이상의 저장용기를 가질 수 있다. 상기 장치는 장기, 정맥, 동맥에 삽입할 수 있는 상기 저장용기로부터의 튜브, 카테테르(catheter), 캐뉼라(cannula) 납틀을 포함할 수 있다. 상기 장치는 전기 펌프와 온도, 용액 전달의 부피나 전달 비율을 제어하는 장치들을 갖는 전자기계적 장치일 수 있다. 어떤 실시 예에서, 상기 장치는 특정 임상 상황 (예를 들면, 심폐 바이패스 수술, 신장 이식, 간 이식), 장기의 무게 또는 장기의 크기에 적절한, 온도, 부피 비율을 프로그램하여 하나 또는 그 이상의 용액을 전달할 수 있다. 따라서, 어떤 실시 예에서, 본 공개 주제 내용은 체외의 장기나 조직을 위한 보존 용액에 관한 것이다. 어떤 실시 예에서, 상기 보존 용액은 화학식 (I)의 화합물을 포함(comprise)한다. 어떤 실시 예에서, 상기 화학식 (I)의 화합물은 CRX-526이다. 어떤 실시 예에서, 상기 화합물은 TLR2 와 TLR4 모두에 대해 작용제이다.

VII . 주체

어떤 실시 예에서, 본 공개 주제 내용에서 다루어진 주체는, 비록 "주체(subject)"라는 용어에 포함하도록 의도한 모든 척추동물 종에 대하여 여기서 설명한 방법이 유효한 것으로 이해를 하지만, 바람직하게는 사람이 주체이다. 여기서 설명한 방법은 특히 온혈 척추동물의 허혈 재관류에 관련한, 하지만 이에 한정하지는 않는 그러한 부종을 치료 그리고/또한 방지하는데 특히 유용하다. 따라서, 상기 방법은 포유류나 조류의 치료에 사용할 수 있다. 어떤 실시 예에서, 본 공개 방법의 주제는 장기 이식 수용자이다.

더 구체적으로는, 여기서 제공하는 것은 멸종 위기(예, 시베리아 호랑이), 경제적 중요성(사람의 소비를 위해 농장에서 사육되는 동물), 그리고/또는, 예를 들면 사람 이외의 육식 동물(고양이, 개), 돼지류(돼지, 비육돈, 야생 멧돼지), 되새김 동물(소, 황소, 양, 기린, 사슴, 염소, 들소, 낙타), 말과 같은 사람과의 사회적 중요성(애완용이나 동물원에서 기르는 동물)에 기인하는 포유류와 사람 같은 포유류의 치료이다. 더욱이, 여기에서 제공하는 것은 가금류, 특히 가축화된 가금류, 예를 들면, 사람에게 경제적으로 중요한 칠면조, 닭, 오리, 거위, 기니아 가금류 같은 양계류, 그리고 동물원 또는 애완용으로 기르는 멸종 위기 종의 조류를포함하는 조류의 치료이다. 따라서, 여기서 설명한 방법의 실시 예는 가축화된 돼지류, 되새김 동물, 말, 가금류 등,하지만 이에 한정되지 않는 가축의 치료를 포함한다.

예

다음의 예는 실례가 되는 실시 예를 제공한다. 본 공개와 관련 분야의 통상적 기술 수준에 비추어 볼 때, 통상적 기술을 가진자는 다음의 예들이 예로서 의도한 것이며, 본 공개 주제 내용의 범위를 벗어나지 않은 여러 변화와 개조, 변경하여 이용할 수 있음을 알 수 있을 것이다.

제1 예

일반적 방법

수컷의 C3H/HeJ, C3H/OuJ,TLR-/-, C57BL/6J 쥐는 Jackson Laboratories(Bar Harbor, Maine, United States of America)에서 구매하였고, MyD88-/- 쥐는 Dr. Shizuo Akira(Osaka University,Osaka, Japan)가 제공하였다. Adachi . O., et ai., Immunity, 9, 143-150 (1998)을 참조. 쥐는 병원균이 없는 설비에서 생후 8-10 주 후 무게가 25-30 그램이 되도록 보호하였다. 시약은 달리 명시하지 않는 한 Sigma(St. Louis, Missouri,United States of America)의 것을 사용하였다.

쥣과(科)의 폐 IRI 수술 모델과 장벽 기능의 평가

쥐는 케타민(ketamine)(0.1 ㎎/gm 몸무게)과 크실라진(xylazine)(0.01 ㎎/gm)을 사용하여 복강내의(腹腔內的)(intraperitoneally)로 마취 후, 초기의 투여량의 삼분의 일을 매시간 사용하였다. 기관절개술은 Columbus Instruments Ventilator CIV-101(Columbus Instruments, Columbus, Ohio, United States of America)를 이용하여 기계적 환기(일호흡량(日呼吸量) 0.4 ㎖, 호흡률 120/min, I/E 0.4, PEEP 3 cm H₂O, FiO₂, 1.0)를 하였다. 수화(水和)를 유지하기 위해, 오른쪽 내경정맥(內頸靜脈)에 0.9% 살린(saline) 농도에 2.5% 알부민(albumin)을 주사기 펌프(Medfusion 2010i; Medex,Carlsbad, California, United States of America)로 450 ㎕/hour 주입하기 위해 캐뉼러(cannular)를 삽입하였다. 히팅 패드로 직장의 온도를 모니터하여 유지하였다. 왼쪽 폐의 하일럼(hilum)을 왼쪽 개흉(開胸)을 통해 미세혈관 클램프로 1 시간 동안 막았다. 클램프를 제거하여 재관류를 개시하였다. 동물은 15 분과 3 시간 사이 범위의 간격으로 심장절제술로 희생시켰으며, 양쪽의 폐가 절제되었다. 젤제된 폐의 정점의(apical) 부분이 절제되어 즉시 무게를 측정하고 48 시간 동안 60℃의 오븐에서 건조시켜, 건조된 무게에 대한 젖은 무게의 비(W/D)를 알기 위해 무게를 재측정하였다. 남은 폐 조직은 액체 질소에서 급속 냉동하여 80℃에서 보관하였다. 희생 후 즉시 제거한 폐는 컨트롤(control)로 사용하였다.

에반스 청색 염료(Evans Blue Dye, EBD)에 의한 혈관 밖 알부민(albumin) 분출

혈관 밖 알부민(albumin) 분출은 먼저 언급한 바와 같이 EBD 기술로 평가하였다, Saria et al., J. Neurosci Methods, 8(1), 41-49 (1983)을 참조. 왼쪽 하일럼(hilum)을 막은 후, 30 mg/kg의 EBD가 용해된 250 ㎕의 0.9% 살린(saline) 용액을 오른쪽 내경정맥(內頸靜脈)에 주입하였다. 1 시간의 재관류 이후, 정중흉골절개술을 통해 가슴을 열고, 오른쪽 심신절개술, 페동맥의 18 게이지 안지오-캐테테르 삽입(cannulated with 18 gauge angio-catheter), 오른쪽 심방 부속물을 절단하여 쥐를 안락사 시켰다. 양 폐를 정상 살린(saline)으로 세척하여 혈관내의 EBD를 제거하고 절제하여 무게를 쟀다. 폐 조직은 포름아미드(formamide) (100 mg 폐조직/1 ㎖ 포름아미드(formamide); Roche Diagnostics, Indianapolis, Indiana, United States of America)에 띄워놓고 50℃에서 24 시간 동안 배양하였다. 시편은 원심분리(13,000g × 30분)하고, 50 ㎕ 상청액(上淸液)을 96-웰(well) 플레이트에서 μQuant spectrophotometer (Bio-Tek Instruments, Inc., Winooski, Vermont, United States of America) 620nm 파장에서 색 평가를 했다. 상대광학밀도 값은 시료의 무게로 정규화하였다.

조직학을 위한 팽창의 고정

60 또는 180 분의 IRI(n은 4/유형/그룹) 후, 상온에서 24 시간 25 cm H₂O의 일정한 압력으로 기관(氣管)을 통해 4% 완화 파라포름알데히드(paraformaldehyde)로 폐 막힘물(block)을 팽창-고정한 후, 파라핀에 내장시킨다. 5 마이크론 부분을 헤마톡실린(hematoxylin)과 에오신(eosin)으로 착색한다. 기관(氣管)절개술 이후 즉시 희생된 동물의 폐는 컨트롤(control)로 사용한다.

NF -κB 전좌(轉座)를 위한 면역 염색법

고정 팽창된 폐 조직의 면역조직화학 염색은 토끼 다클론성 p65 항체(ab 31481; Abcam plc, Cambridge, United Kingdom)를 1:100으로 희석하여 사용하여 수행하였다. 시료는 하룻밤을 건조하고, 60℃ 한 시간 동안 구워서 5 ㎛ 길이로 자른다. 잘린 섹션은 파라핀을 제거하여(deparaffinize), 에피토프(epitope) 회수를 6.0 pH Citra Antigen Retrieval Buffer(Dakocytomation, Carpinteria, California, United States of America)로 100℃에서 30 분간 행한다. 배경을 페록시다제(peroxidase) 블록(block), 혈청이 없는 Protein Block과 Avidin/Biotin 블록(block)(Dakocytomation, Carpinteria, California, United State of America)을 사용하여 차단한다. 각 섹션을 제1 항체 p65와 함께 4℃에서 하룻밤 배양했다. 가시화를 위한 DAB 크로마겐(chromagen)(Dakocytomation, Carpinteria, California, United States of America)과 함께 LSAB+ 제1의 항체로 검출을 완성하였다. 어떠한 대비 염색도 적용하지 않았다. 슬라이드(slide)는 병리학적으로 가리워진 시편 그룹에 의해 p65 핵 염색에 대한 점수를, 1+(약함, 약간의 핵 염색이 눈에 띄임), 2+(보통, 약간 염색, 그러나 일관적이지 않음) 또는 3+(실질적으로 모든 핵에 일관적으로 어둡게 염색됨)로 점수를 매겼다.

웨스턴 블로팅과 밀도계측(密度計測)

단백질 농도의 측정과 면역블로팅은 앞서 설명한 것과 같이 수행했다. Wu et al., Respir Res, 6(1), 26 (2005)를 참조. 간략하게 설명하면, 냉동 폐 조직을 10 ㎕/㎎ 얼음 냉각 RIPA 해열 완충제(lysis buffer) (100 mM Tris-HCl pH 8.0, 100 mM NaCl, 5 mM NaF, 2 mM EDTA, 1% NP-40, 1 mM Na₃V₄, 100 μM TPCK, 1 μM 페프스타틴(pepstatin) A, 2 μM 루펩틴(leupeptin), 1mM PMSF, 100 μM 케르세틴(quercetin))에 띄워, Dounce 균일화하고, 용해가 안 된 물질을 제거하기 위해 4℃에서 10 분간 13,200 rpm으로 원심분리했다. 상청액(上淸液)의 단백질 농도는 Coomassie Protein Assay Reagent(Pierce Biotechnology, Rockford, Illinois, United States of America)를 이용하여 결정했다. β-메라캅토에탄올(meracaptoethanol)(5%)을 첨가하고 염료를 추적한 후에, 시료를 변질시키고 이에 상당한 양의 단백질을 SDS-PAGE(10% 트리스-글리신(tris-glycine) 또는 4%-12% 비스-트리스 겔(bis-tris gel); Invitrogen, Carlsbad, California, United States of America)로 실행하여 Immobilon-P 멤브레인(Millipore Corp., Billerica, Massachusetts, UnitedStates of America)에 전달했다. 얼룩을 0.1% Tween-20 과 5% 비지방 건조 우유 분말과 같이 TBS에서 1 시간 차단하여 제1 그리고 그 이후 제2의 항체와 배양한 후, 페록시다제(peroxidase)(Millipore Corp., Bilerica, Massachusetts, United States of America)의 화학 발광 검출을 수반하였다. 인산화 또는 총 JNK에 대한 항체, p38, ERK, IκBα를 Cell Signaling Technology (Beverly, Nassachusetts, united States of America)에서 구매하였다. 막은 Epson Precision 4180 flatbed scanner (Epson America, Inc., Long Beach, California, United States of America)에서 600 dpi 16-비트 그레이 스케일로 스캔하였다. 밀도계측은 METAMORPH® software (MDS Analyticak Technologies, Inc., Sunnyvale, California, United States of America)를 사용하여 수행하였다.

골수 이식 ( Bone Marrow Transplant , BMT )

키메릭 (chimeric)쥐는 이전에 설명한 절차를 이용하는 BMT에 의하여 재생하였다. Schwaller et al., Embo J, 17(18), 5321-5333(1998)을 참조. 수용자 쥐는 12 Gy 치명적 방사선 (Gammacell 40137 Cs γ방사선 소스; Nordion, Ottawa, Canada)에 노출되고 4 시간의 간격을 두고 두 번의 투여(700 cGy와 이후 500cGy)를 하였다. 골수는 기증자 쥐로부터 중간매체 (Rosewell Park Memorial Institute, (RPMI) 완화제 + 10% 소 태아 혈청 + 100 단위의 Heparin + 1M HEPES)와 함께 그들의 대퇴골과 정강이뼈를 세척하여 얻었다. 수확된 골수 세포는 0.2 ㎛ 필터를 통과하여 200 ㎕의 소독 PBS + 10% FBS에 10⁶ 세포의 농도로 열거하여 다시 띄워졌다. 골수 세포는 수용자 쥐가 제2의 γ-방사선에 조사된 후 즉시 후진 궤도로 수용자에게 주입되었다. 수용자 쥐는 소독 미세고립 우리에 12 주간 유지되어 체액(體液)의 재구성을 가능하게 했다.

네 세트의 키메라가 만들어져 조직질실의 세포 (P) 또는 골수의 세포 (M)에 작용하는 TLR4(+)를 갖는 쥐를 생성한다. HeJ 쥐는 OuJ 기증자 (P-M+)으로부터 재구성된 골수를 갖고; OuJ 쥐는 HeJ 쥐 (P+M-)로부터 재구성된 골수를 갖는다. "컨트롤(control)" 키메라는 같은 유형의 (P-M-)와 (P+M+)로부터 골수를 재구성하여 생성된다.

생존 가능성 결정을 위한 세포 배양 실험

삼중으로 수행하는 분리된 실험에서, P35 접시에 융합되어 자라난 HMVEC는 모사된 IRI를 경험했다. 같은 시점에, 세포와 세포 배양 매개물 또는 Ringer의 젖산이 락트산 탈수소 효소 (lactate dehydrogenase,LDH)의 활동도를 CytoTox96 Non-Radioactive Cytotoxicity Assay (Promega, Madison, Wisconsin, United States of America)를 그 제조업자의 지시에 따라 사용하여 평가하였다. 컨트롤(control) 시료를 시간 0 과 24 시간 후에 취하여 실험 모델과 분리하여 세포 생존 능력을 평가하였다. 배양 매개물과 Ringer의 락트산(lactate)을 배경 컨트롤(control)로 사용하여 다른 시료들의 빛 흡수력 수치를 정규화 하였다. 세포 독성을 매개물 LDH 활성도를 총 LDH 활성도(세포 알갱이와 매개물을 합친 것)로 나누어 계산하였다. 생존 능력은 이값의 역수로서 각 시점에서 생존 능력 퍼센트로 표현하였다.

세기관지 ( 細氣管枝 ) 세척( Bronchioalveolar Lavage , BAL )과 페포탐식 세포 ( Alveolar Macrophage , AM ) 세포 배양

HeJ와 OuJ 쥐의 AM은 BMT 120 일 이후 BAL로 수확하였다. 기관(氣管)은 맞춤 18 게이지 케테테르 (Becton Dickinson, Sandy, Utah, United States of America)로 캐뉼러 삽입되었다. BAL은, 미리 가열, 소독, 내독소-, 칼슘-, 마그네슘- 이 없는 0.2 mMEGTA를 갖는 PBS의 4 부분 표본(aliquot) (35 ㎕ × 그램으로 계산한 몸무게)의 느린 기관을 통한 전달(tracheal delivery)에 의해 수행하였다. 세척 유체는 조심스럽게 흡입하여, 각 쥐에게 이 액체를 고이게 하여, 250 g, 5 분 동안 원심분리하였다.

세포는 10% 열-비활성 FBS (Atlanta Biologicals, Lawrenceville, GA), 페니실린(penicillin) G (100 U/mL), 스트렙토마이신(streptomycin) (100 ㎍/mL)을 포함하는 RPMI 1640(Gibco BRL, Rockville, Maryland, United States of America)에 다시 띄웠다. 생존 능력은 트라이판 블루 익스클루션(trypan blue exclusion) 방법에 의하면 일관적으로 95% 보다 크다.

세포는 96-벽의 플레이트에 벽당 20000 개가 도금되었다.

2 시간의 배양 후에, PBS로 플레이트를 닦아서 부착하지 않은 세포를 제거하였다.

부착된 AM은 5% CO₂의 가습 인큐베이터에 있는 37℃의 RPMI 1640에서 배양되었다.

NF -κB 리포터 시험

재조합형, 제일 세대 E1, E3가 삭제된 아데노바이러스 혈청형(adenovirus serotype) 5 벡터를 준비하였고 (Sanlioglu et al., J. Biol . Chem., 276, 30188-30198 (2001)을 참조), HMVEC와 AM은 이전에 상피성의 세포에서 설명한 것 같이 감염되었다. Wu et al., Respair . Res., 6, 26 (2005)를 참조.

통계 분석

모든 데이터는 평균±SEM으로 기록하였다. 그룹들은 STATICA®(StatSoft, Inc., Tulsa, Oklahoma, United States of America)을 사용한 Turkey's post hoc 시험과 함께 변량분석(ANOVA), 또는, 짝지어지거나, 짝이 안지어진 t 시험으로 비교하였다.

제2 예

허혈 관련 폐 부종을 조정하는 TLR4

허혈 재관류에 관련한 폐 부종에 끼치는 TLR4의 영향은 TLR4가 충분한 (OuJ) 쥐와 결핍된 (HeJ) 쥐의 폐에서 허혈 이후의 축적된 유체를 비교하는 연구를 통하여 이루어졌다.

도면 1에 도시된 바와 같이, 1 시간의 하일러(hilar) 클램핑에 의한 허혈이 발생한 왼쪽 폐의 재관류는, 초기에, OuJ 쥐의 왼쪽 폐에서 재관류 15 분 이내에서 3 시간의 재관류까지도 없어지지 않은 확연한 유체 축적 (상승된 W/D가 명시하는 바와 같이)을 유도하였다.

이와 대조적으로, HeJ 쥐는 15, 30분의 재관류 후에는 상당히 감소한 부종을 경험하여 초기 회복의 실례를 보여주었다.

1 시간과 3 시간의 재관류 후에, HeJ 쥐의 W/D는 정상이였다.

더욱이, 도면 2에 도시한 바와 같이, 3 시간 재관류한 OuJ 쥐의 팽창-고정된 왼쪽 폐안의 혈관 주위와 페포 벽의 부종이 HeJ 쥐의 폐안에서 보다 많았다. 그러나, 도면 3에 도시한 바와 같이, 1 시간의 재관류 후에는 다른 유형의 쥐 사이에서는 체내 세포 사이의 부종에는 조직학적으로 차이가 없었다. 가면으로 가리워진 관찰자에 의해, 3 시간의 재관류 후의 4 HeJ 시료와, 1 시간 후의 모든 8 연구 폐 시료는 정상으로 판명되었고, 네 컨트롤(control) 시료 (2 HeJ와 2 OuJ)와 차이가 없었다. 어떠한 어느 한 이론에 구속됨이 없이, 3 시간 재관류 후의 OuJ 폐의 체내 세포 사이의 증가한 부종은 재관류 60 분 후의 팽창 고정에 의해 검출할 수 없었던 급속한 폐포 범람(alveolar flooding)에 기인했던 것으로 상정(想定)하였다. 이러한 가설과 일치되게, OuJ 쥐의 왼쪽 폐는 HeJ 쥐의 왼쪽 폐와 양쪽 유형의 오른쪽 폐에 비해 증가한 EBD 내용물 (알부민(albumin)에 대한 미세혈관 삼투성(permeability) 정도, (Saria et al., J Neurosci Methods, 8(1), 41-49 (1983) 참조))을 가졌다.

도면 4를 보면, W/D의 차이는, HeJ 쥐에 비해 OuJ 쥐에서, 초기에 일어나는 페포 범람(alveolar flooding)과 나중에는 유체가 페포 벽과 간극(間隙)으로 흡수되는 것에 기인 하는 것으로 보인다.

수용체 활성의 TLR4 다운스트림(downstream) 신호는 골수 파생 최초 반응 유전자 88 (myeloid differentiation primary response gene 88, MyD88)과 TIR-영역-어댑터 포함-인터페론 유도-β (TIR-domain-containing adapter-inducing interferon-β, TRIF)를 포함하는 어댑터(adapter) 단백질의 모집을 수반한다. O'Neill et al., Nat Rev Immunol, 7(5), 353-364 (2007)을 참조. TRIF는 쥣과(科)의 내피 세포 ( Harari et al., Circ Res, 98(9), 1134-1140 (2006)을 참조)에 존재하지 않기 때문에, MyD88 신호는 이러한 세포에서 TLR4의 키 어뎁터(key adapter) 다운스트림(downstream)이다. MyD88 결핍 (MyD88-/-) 쥐는 1 시간의 IRI을 겪을 때, MyD88-/-의 배경 유형 쥐인 OuJ 쥐와 C57BL6/J 쥐의 페에서 생기는 부종에 상응하는 부종이 MyD88-/- 쥐에서 생긴다.

따라서, 도면 5를 보면, 허혈 재관류에 기인한 TLR4에 의해 조정되는 폐 부종은 MyD88 어뎁터(adapter)를 통한 다운스트림(downstream)신호에 독립적인 것으로 보인다. 초기 부종이 TLR4에의한 것을 확인하기 위해, TLR4-/- 쥐에서 실험을 반복하여, TLR4-/-쥐의 배경 유형인 C57BL/6J 쥐와 비교하였다. TLR4-/- 쥐는 한 시간의 하일라(hilar) 클램핑과 15, 30, 60 분의 재관류 후에 C57BL/6J 쥐와 비교하여 현저히 적은 부종이 생겼다.

도면 6에 도시한 바와 같이, C57BL/67 쥐에서는 부종이 신속히(재관류 5분 이내에) 나타났으나, TLR4-/- 쥐에서는 나타나지 않았다.

제3 예

폐 IRI에 의한 초기 MAPK와 NF-κB 활성을 조정하는 TLR4

단백질 농도 측정에 의하면, 폐 허혈 후 초기 형성 부종에 대한 역할뿐만 아니라, 염증과 관련한 초기 신호 경로 활성화 조정에 TLR4가 작동하는 것을 보여준다. 도면 7와 8에 도시한 바와 같이, OuL 쥐에서 TLR4의 작동으로, p38의 포스포릴레이션 (phosphorylation) (허혈 도중 관측됨), ERK와 JNK의 초기 포스포릴레이션 (phosphorylation), 재관류 후의 NF-κB의 초기 활성화가 일어났다. 이에 비해, TLR4 결핍 HeJ 쥐는 지연 또는 감소한 p38, ERK, NF-κB, JNK 활성을 보여줬다. 그러나, 어느 정도의 MAPK와 NF-κB의 활성을 HeJ 쥐에서 관측하였으며, 이는 TLR4 외의 다른 활성 경로가 관계함을 암시한다.

도 3에 도시한 바와 같이, NF-κB의 p65 성분에 대한 면역염색법은 컨트롤(control) 쥐(갓 희생한 쥐)의 폐에서 최소의 핵 위치(nuclear localization)를 보인 반면, TLR4 결핍 (HeJ) 쥐(염색이 1-2+ 등급인)에 비해서 60 분간 재관류한 TLS4가 충분한 (OuJ) 쥐로부터의 샘플에서는 현저한 핵 염색 (nuclear staining) (염색이 3+ 등급인)이 관측되었다. 면역염색법의 강도는, 180 분 재관류 OuJ 동물에서 더 많은 p36 염색이 행하여졌음에도 불구하고, 180 분 재관류 HeJ와 OuJ 유형에서 IκBα 수준이 동등하게 나타난 것을 제외하고는, 도면 7와 8에 도시한 IκBα의 악화를 보완하였다. 이는 180 분 재관류 후의 OuJ 쥐에서 IκBα 단백질의 회복을 암시한다. 놀랍게도, p65 염색은 오른쪽과 왼쪽 폐에서 같았으며, 이는 NF-κB가, 오른쪽 폐가 부종이 적음에도, 같은 재관류 시간에 오른쪽(허혈이 안 발생한) 폐에서 같은 정도로 오른쪽(허혈이 없는) 폐가 활성화되었다는 것을 암시한다. 따라서, NF-κB 활성은 부종의 발생과 반드시 관계가 있는 것처럼 보이지 않는다. p38의 활성은 3 시간의 재관류 후에, 정상적인 W/D를 보이면서 HeJ 쥐의 왼쪽 폐에서 나타났다. 얼마나 빨리 생성하느냐를 같이 고려하여, 본 모델의 급성 폐 부종(acute phase pulmonary edema)은 MAPK 또는 NF-κB 활성에 기인하지 않는 것으로 보인다.

제 4예

폐 조직질실의 세포 대 골수 유래 세포의 TLR4

폐 조직질실 대 골수에서 유래한 세포와 특히 폐포 대식세포 (alveolar macrophages, AMs)에 대한 TLR4 기능의 중요성을 결정하기 위해, 각 유형(OuJ와 HeJ)의 쥐에 치명적으로 방사선을 쬐어 골수 이식(bone marrow transplant, BMT)에 의해 골수를 재구성하여 제1 예에서 설명한 것과 같이, 키메릭(chimeric) 쥐를 만들었다.

도면 10에서 도시한 바와 같이, 리포다당류 (lipopolysaccharide, LPS) 자극은 대략 60 배의 루시퍼라제 (luciferase) 활동 증가를 양쪽의 원래 OuJ AM과 키메릭(chimeric) 유형 P-M+에서 회수한 AM, 이는 골수 유래 세포를 발현하는 TLR4를 가진 키메라(chimera)와 조직질실 tpvhfmf 발현하지 않는 TLR4에서 야기하였다. 따라서, 키메릭(chimeric) 동물에서 AM의 교체가 BMT 12 주 후에 사실상 완성한 것으로 나타났다. 방사선 조사한 쥐로부터 회수한 AM은 같은 방식으로 행동하는 같은 유형의 골수로 재구성 하였다.

3 시간의 재관류 후에, P+M- 키메릭(chimeric) 동물은 W/D의 상당한 증가를 보였다. 그러나, 도면 11를 보면, 비록 AM이 작동하는 TLR4 (P-M+)이 가졌으나, W/D는 증가하지 않았다. 따라서, TLR4s의 작동은 골수의 세포 (M)에 존재하는지에 여부에 관계없이, 폐 조직질실의 세포 (P)에 TLR4가 존재할 때 작동할 때, 부종은 분명하였다. 부종의 생성에 작동하는 TLR4가 AM에 충분하지 않은 동안은, P+M+ 동물이 P+M- 동물에 비해 W/D가 약간 높게 관측된 것으로 보아, 폐 조직질실에 작동하는 TLR4와 함께 쥐에서 부종을 확대하는 것은 가능하다. 그러나, 이러한 차이는 통계적으로 의미가 있지는 않았다.

도면 12에서 도시한 바와 같이, 키매릭 컨트롤(chimeric control) (OuJ 안에 OuJ, HeJ 안에 HeJ)은 방사선을 쬐지 않은 유형에 비해 폐 부종을 형성하는데 차이를 보이지 않았고, 허혈 재관류에 의한 부종의 생성에 치명적 방사선을 쪼이는 것이 영향이 없다는 것을 보여준다. 이러한 "콘트롤 키메릭(controlchimeric)"으로부터 AM은 원래 유형으로부터의 AM과 같이 (데이타는 미도시) LPS에 대해 같은 반응을 가졌다.

따라서, 허혈 재관류에 의한 초기 부종의 형성은 폐 조직질실의 세포에 작동하는 TLR4에 원인을 돌릴 수 있고, 그러나, 골수 세포에 작동하는 TLR4는 초기 허혈 재관류 관련 부종에 중요한 영향을 미치는 것은 아니다. 본 공개 데이타는 허혈 재관류 관련 부종은 재관류 후의 증가한 초기 모세혈관 누출에 기인한 것이다.

제5 예

허혈 재관류에 의한 폐 부종을 방지하는 TLR4 의 경쟁적 억제제

왼쪽 하일러 클램핑(hilar clamping) 60분 전에, TLR4의 경쟁적 억제제 CRX-526을 정맥주사로 30 분간(200 ㎕의 살린(saline)에 10㎍)을 OuJ 쥐에 투여하여 1 시간의 허혈 재관류 후의 부종을 방지하였다. 도면 13을 보면, CRX-526 또한 인체의 폐 미세혈관 내피 세포 (human pulmonary microvascular endothelial cells, HMVEC)에서 NF-κB의 활성화를 방지하였다. 도면 14를 보면, TLR4 억제제는 NF-κB의 활성화에 아무런 영향을 끼치지 않는 것으로 보였다.

제6 예

TLR2 와 허혈 재관류

1 시간의 하일러 폐색(hilar occlusion) 후 그리고 C57BL/6J (BL6)배경 유형에서 배양된 TLR2 결핍 (TLR2-/-) 쥐를 재관류하여 W/D를 TLR가 충분한 BL6 쥐의 W/D와 비교하여 TLR2의 작동이 허혈 재관류 관련 부종에 끼치는 영향을 연구하였다. 도면 15에 도시한 바와 같이, TLR2-/- 쥐는 IRI에 기인한 부종을, BL6 쥐보다 후에 생성하였다. TLR2-/- 쥐 왼쪽 폐의 W/D는 15 분의 재관류에서 정상이었던 반면 BL/6 쥐의 W/D는 상승하였다.

더 많은 연구가 TLR4 억제제의 예방 치료의 효과와 비교하여 수행되었다. BL6 쥐는 1 시간 간의 왼쪽 하일러 클램핑 시작 60 분 전에 30 분의 기간으로 CRX-526 (10㎍)을 투여하여 예방 처리하였다. 이러한 쥐는 최대 180 분의 재관류로 거의 부종을 생성하지 않는다. 도면 16와 17을 보면, CRX-526 치료는 TLR4와 TLR2의 결핍이 합쳐진 영향과 비슷한 W/D를, 특히 30분과 60분의 재관류 후에 생성한 것처럼 보인다. 도면 18에서 도시한 바와 같이, 감염된 HMVECdp 대한 연구에서, CRX-526이 TLR2 리간드(ligand)의 자극에 의한 NK-κB의 활성화를 감소시킬 수 있다는 것을 보여 주었다.

모든 것을 종합할 때, 본 공개 데이터는 허혈 재관류 관련 부종의 감소에 끼치는 CRX-526의 영향은 TLR4를 단순히 억제하는 능력 이상인 것에 기인한다는 것을 암시한다.

본 공개 주제 내용의 다양한 세부 사항은 본 공개 주제 내용에 범위에 벗어남이 없이 다양하게 바뀌어 질 수 있다는 것을 이해해야 할 것이다. 더욱이, 앞의 설명은 예의 목적일 뿐이며, 어떠한 제한을 목적으로 하지는 않는다.

Claims

아래 화학식 (I)의 화합물의 효과적인 양으로 조직(tissue)과 접촉하는 것을 포함(comprise) 하며, 상기 화학식 (I)은:

n은 1에서 6 사이의 정수;
X₁은 O(산소) 또는 S(황);
X₂는 O(산소) 또는 S(황);
R₁, R₂, R₃는 각각 C₂-C₁₆ 아실(acyl) 이며, 여기서 R₁, R₂, R₃ 중 적어도 하나는 C₂-C₇ 아실(acyl);
R₄는 H(수소), 하이드록실알킬(hydroxylalkyl), -C(=O)NH₂, -(CH₂)_mC(=O)OH로 이루어지는(consisting) 군에서 선택하고, 여기서 m은 0과 2 사이의 정수이고;
R₅, R₆, R₇은 각각 C₁₀-C₁₂ 알킬 (alkyl) 또는 약학적으로 허용되는 이들의 염인 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 1에 있어서,
n은 1인 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 1에 있어서,
X₁ 과 X₂는 각각 O(산소)인 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 1에 있어서,
R₄는 -C(=O)OH인 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 1에 있어서,
R₁, R₂, R₃는 각각 C₂-C₇ 아실(acyl)인 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 1에 있어서,
화학식 (I)의 화합물은:
n은 1;
X₁은 O(산소);
X₂는 O(산소);
R₁, R₂, R₃는 각각 -C(=O)(CH₂)₄CH₃;
R₄는 -C(=O)OH;
R₅, R₆, R₇은 각각 -(CH₂)₁₀CH₃ 또는 약학적으로 허용되는 이들의 염인 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 1에 있어서,
상기 부종은 허혈 재관류와 관련이 있는 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 7에 있어서,
상기 허혈 재관류는 심근경색(myocardial infraction) 또는 뇌졸증(stroke)과 관련이 있는 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 7에 있어서,
상기 허혈 재관류는 심장외과 수술 (cardiac surgery) 중의 심장마비 (cardioplegia) 또는 정형외과 수술 (orthopedic surgery)의 골격근 (skeletal muscle)의 허혈과 관련 있는 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 7에 있어서,
상기 허혈 재관류는 장기(organ) 또는 조직(tissue) 이식과 관련이 있는 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 10에 있어서,
상기 조직(tissue) 이식은 피부 이식, 근육 이식, 또는 연조직 이식인 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 11에 있어서,
상기 조직(tissue) 이식은 자가 조직 (autologous tissue) 이식인 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 7에 있어서,
상기 화합물의 효과적인 양으로 상기 조직(tissue)과 접촉하는 것은 허혈 전, 허혈 도중 또는 일정 간격의 허혈 후에 발생하는 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 1에 있어서,
상기 조직(tissue)은 심장, 간, 뇌, 작은창자, 큰창자, 췌장, 골격근(skeletal muscle), 피부, 연조직(soft tissue), 폐조직(lung tissue)로 이루어지는 그룹으로부터 선택하는 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 14에 있어서,
상기 조직(tissue)은 장기(organ) 기증자로부터의 것인 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 15에 있어서,
상기 조직(tissue)은 폐조직(lung tissue) 기증자로부터의 것인 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 15에 있어서,
상기 폐 이식 기증자는 사람 폐 이식 기증자인 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 15에 있어서,
상기 장기(organ)기증자는 심장이 뛰지 않는(non-heat beating) 기증자인 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 1에 있어서,
상기 화합물은 톨 모양 수용체 2 (TLR2)와 톨 모양 수용체 4 (TLR4)중 하나 또는 둘 모두의 작용제(antagonist)인 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 19에 있어서,
상기 화합물은 TLR2와 TLR4 모두의 자용제(antagonist)인 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
부종의 치료를 필요로 하는 주체(subject)의 상기 부종을 방지하거나 감소하는 방법에 있어서, 상기 방법은 아래 화학식 (I)의 화합물의 효과적인 양을 상기 주체(subject)에 투여하는 것을 포함(comprise) 하며, 상기 화학식 (I)은:

n은 1에서 6 사이의 정수;
X₁은 O(산소) 또는 S(황);
X₂는 O(산소) 또는 S(황);
R₁, R₂, R₃는 각각 C₂-C₁₆ 아실(acyl) 이며, 여기서 R₁, R₂, R₃ 중 적어도 하나는 C₂-C₇ 아실(acyl);
R₄는 H(수소), 하이드록실알킬(hydroxylalkyl), -C(=O)NH₂, -(CH₂)_mC(=O)OH로 이루어지는(consisting) 군에서 선택하고, 여기서 m은 0과 2 사이의 정수이고;
R₅, R₆, R₇은 각각 C₁₀-C₁₂ 알킬 (alkyl) 또는 약학적으로 허용되는 이들의 염인 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 21에 있어서,
n은 1인 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 21에 있어서,
X₁ 과 X₂는 각각 O(산소)인 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 21에 있어서,
R₄는 -C(=O)OH인 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 21에 있어서,
R₁, R₂, R₃는 각각 C₂-C₇ 아실(acyl)인 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 21에 있어서, 화학식(I)의 화합물은:
n은 1;
X₁은 O(산소);
X₂는 O(산소);
R₁, R₂, R₃는 각각 -C(=O)(CH₂)₄CH₃;
R₄는 -C(=O)OH;
R₅, R₆, R₇은 각각 -(CH₂)₁₀CH₃ 또는 약학적으로 허용되는 이들의 염인 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 21에 있어서,
상기 부종은 허혈 재관류와 관련이 있는 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 27에 있어서,
상기 허혈 재관류는 심근경색(myocardial infraction) 또는 뇌졸증(stroke)과 관련이 있는 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 27에 있어서,
상기 허혈 재관류는 심장외과 수술 (cardiac surgery) 중의 심장마비 (cardioplegia) 또는 정형외과 수술 (orthopedic surgery)의 골격근 (skeletal muscle)의 허혈과 관련 있는 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 27에 있어서,
상기 허혈 재관류는 장기(organ) 또는 조직(tissue) 이식과 관련이 있는 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 30에 있어서,
상기 조직(tissue) 이식은 피부 이식, 근육 이식, 또는 연조직(soft tissue) 이식 중 하나인 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 31에 있어서,
상기 조직(tissue) 이식은 자가 조직 (autologous tissue) 이식인 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 27에 있어서,
상기 화합물의 효과적인 양으로 상기 주체(subject)에 투여하는 것은 허혈 전, 허혈 도중 또는 일정 간격의 허혈 후에 발생하는 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 21에 있어서,
상기 화합물은 톨 모양 수용체 2 (TLR2)와 톨 모양 수용체 4 (TLR4)중 하나 또는 둘 모두의 작용제(antagonist)인 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
청구항 34에 있어서,
상기 화합물은 TLR2와 TLR4 모두의 작용제(antagonist)인 것을 특징으로 하는 조직 내의 부종을 방지 또는 감소하는 방법.
장기(organ)또는 조직(tissue)이 이식되는 주체(subject)에서 허혈 재관류와 관련한 부종을 방지하거나 감소하는 방법에 있어서,
상기 방법은:
이식을 위한 장기(organ) 또는 조직(tissue)를 제공하고;
아래 화학식 (I)의 화합물을 접촉시킴으로써 치료한 장기(organ) 또는 조직(tissue)을 제공하는 것으로, 상기 화학식 (I)은:

n은 1에서 6 사이의 정수;
X₁은 O(산소) 또는 S(황);
X₂는 O(산소) 또는 S(황);
R₁, R₂, R₃는 각각 C₂-C₁₆ 아실(acyl) 이며, 여기서 R₁, R₂, R₃ 중 적어도 하나는 C₂-C₇ 아실(acyl);
R₄는 H(수소), 하이드록실알킬(hydroxylalkyl), -C(=O)NH₂, -(CH₂)_mC(=O)OH로 이루어지는 군에서 선택하고, 여기서 m은 0과 2 사이의 정수이고;
R₅, R₆, R₇은 각각 C₁₀-C₁₂ 알킬 (alkyl) 또는 약학적으로 허용되는 이들의 염; 이며,
상기 치료한 장기(organ) 또는 조직(tissue)을 상기 이식이 필요한 주체(subject)에 이식하는 것으로, 여기서 상기 주체(subject) 내의 허혈 재관류와 관련된 부종이 상기 화합물로 치료하지 않은 장기(organ) 또는 조직(tissue)을 이용하여 이식을 수행한 주체(subject) 내의 허혈 재관류 관련 부종에 비해 방지 또는 감소하는 것을 특징으로 하는 부종 방지 또는 감소 방법.
청구항 36에 있어서,
상기 장기(organ) 또는 조직(tissue)은 심장 또는 심장 조직(tissue), 간 또는 간 조직(tissue), 신장 또는 신장 조직(tissue), 췌장 또는 췌장 조직(tissue), 작은창자 조직(tissue), 큰창자 조직(tissue), 피부 조직(tissue), 골격근(skeletal muscle) 조직(tissue), 연조직(soft tissue), 폐 또는 폐 조직(tissue), 뇌 조직(tissue)으로 이루어진(consisting) 그룹에서 선택한 것을 특징으로 하는 부종 방지 또는 감소 방법.
청구항 37에 있어서,
상기 장기(organ) 또는 조직(tissue)은 폐 또는 폐 조직(tissue)인 것을 특징으로 하는 부종 방지 또는 감소 방법.
청구항 38에 있어서,
상기 접촉은 페 조직(tissue) 기증자의 기도(airway), 폐정맥(pulmonory vein), 탈체(ex vivo) 관류회로 (perfusion circuit)의 폐동맥(pulmonory artery) 중 하나를 통하여 수행하는 것을 특징으로 하는 부종 방지 또는 감소 방법.
청구항 37에 있어서,
상기 조직(tissue)은 피부 조직(tissue), 골격근(skeletal muscle) 조직(tissue), 연조직(soft tissue)인 것을 특징으로 하는 부종 방지 또는 감소 방법.
청구항 40에 있어서,
상기 조직(tissue) 이식은 자가 조직 (autologous tissue) 이식인 것을 특징으로 하는 부종 방지 또는 감소 방법.
청구항 36에 있어서,
상기 장기(organ) 또는 조직(tissue)은 심장이 뛰지 않는(non-heat beating) 기증자로부터인 것을 특징으로 하는 부종 방지 또는 감소 방법.
청구항 36에 있어서,
상기 화합물은 톨 모양 수용체 2 (TLR2)와 톨 모양 수용체 4 (TLR4) 중 하나 또는 둘 모두의 작용제(antagonist)인 것을 특징으로 하는 부종 방지 또는 감소 방법.
청구항 43에 있어서,
상기 화합물은 TLR2와 TLR4 모두의 작용제(antagonist)인 것을 특징으로 하는 부종 방지 또는 감소 방법.
청구항 36에 있어서,
n은 1인 것을 특징으로 하는 부종 방지 또는 감소 방법.
청구항 36에 있어서,
X₁ 과 X₂는 각각 O(산소)인 것을 특징으로 하는 부종 방지 또는 감소 방법.
청구항 36에 있어서,
R₄는 -C(=O)OH인 것을 특징으로 하는 부종 방지 또는 감소 방법.
청구항 36에 있어서,
R₁, R₂, R₃는 각각 C₂-C₇ 아실(acyl)인 것을 특징으로 하는 부종 방지 또는 감소 방법.
청구항 36에 있어서,
상기 화합물은 화학식 (I)의 아미노알킬 글루코사미나이드 포스페이트(aminoalkyl glucosaminide phophate)로서 여기서:
n은 1;
X₁은 O(산소);
X₂는 O(산소);
R₁, R₂, R₃는 각각 -C(=O)(CH₂)₄CH₃;
R₄는 -C(=O)OH;
R₅, R₆, R₇은 각각 -(CH₂)₁₀CH₃ 또는 약학적으로 허용되는 이들의 염인 것을 특징으로 하는 부종 방지 또는 감소 방법.
탈체(ex vivo) 장기(organ) 또는 조직(tissue)을 치료하기 위한 보존 용액으로서, 아래 화학식 (I)의 화합물을 포함(comprise) 하며, 상기 화학식 (I)은:

n은 1에서 6 사이의 정수;
X₁은 O(산소) 또는 S(황);
X₂는 O(산소) 또는 S(황);
R₁, R₂, R₃는 각각 C₂-C₁₆ 아실(acyl) 이며, 여기서 R₁, R₂, R₃ 중 적어도 하나는 C₂-C₇ 아실(acyl);
R₄는 H(수소), 하이드록실알킬(hydroxylalkyl), -C(=O)NH₂, -(CH₂)_mC(=O)OH로 이루어지는(consisting) 군에서 선택하고, 여기서 m은 0과 2 사이의 정수이고;
R₅, R₆, R₇은 각각 C₁₀-C₁₂ 알킬 (alkyl) 또는 약학적으로 허용되는 이들의 염인 것을 특징으로 하는 보존 용액.
청구항 50에 있어서,
n은 1인 것을 특징으로 하는 보존 용액.
청구항 50에 있어서,
X₁ 과 X₂는 각각 O(산소)인 것을 특징으로 하는 보존 용액.
청구항 50에 있어서,
R₄는 -C(=O)OH인 것을 특징으로 하는 보존 용액.
청구항 50에 있어서,
R₁, R₂, R₃는 각각 C₂-C₇ 아실(acyl)인 것을 특징으로 하는 보존 용액.
청구항 50에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은:
n은 1;
X₁은 O(산소);
X₂는 O(산소);
R₁, R₂, R₃는 각각 -C(=O)(CH₂)₄CH₃;
R₄는 -C(=O)OH;
R₅, R₆, R₇은 각각 -(CH₂)₁₀CH₃ 또는 약학적으로 허용되는 이들의 염인 것을 특징으로 하는 보존 용액.
청구항 50에 있어서,
상기 화합물은 톨 모양 수용체 2 (TLR2)와 톨 모양 수용체 4 (TLR4)중 하나 또는 둘 모두의 작용제(antagonist)인 것을 특징으로 하는 보존 용액.
청구항 56에 있어서,
상기 화합물은 TLR2와 TLR4 모두의 작용제(antagonist)인 것을 특징으로 하는 보존 용액.
청구항 50에 있어서,
상기 탈체(ex vivo) 장기(organ) 또는 조직(tissue)는 폐 또는 그것의 일부인 것을 특징으로 하는 보존 용액.